Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Состояние аденилатциклазной системы печени при ее хронических заболеваниях

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Состояние аденилатциклазной системы печени при ее хронических заболеваниях"

МШЕСТЕРСГОО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МВДИЦШСКОЙ ПРОШШШНОСТИ г " О Д РОССИИ

ИНСТИТУТ ПИТАНИЯ РАШ

2 5 СЕН 1335

На правах рукописи

ВАРВАНША Гит Григорьевна

УДК 616.36:612.018;612.4

СОСТОЯНИЕ ЛДШШАТЦИКЛАЗНОЙ СИСТЕМЫ ПЕЧШН ПРИ Е£ ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

(03.00.04 - Вмхиыия)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 1995

Работа выполнена в лаборатории горкомов шщеваритель-иого тракта Цзнтрального научно-исследовательского института гастроэнтерологии.

Научные руководители: академик Российское А!31, доктор медицинских наук, профессор А.С.Логинов, доктор биологических наук Р.А.Высоцкая

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук«профессор Н.Г.Богданов,

доктор медицинских наук Т.Д.Черкасова.

Ведущая организация - ¿псковский медицинский институт шдгня H.À. Семашсо.

Защита состоится U (Mi, s 1995г. в /'/'часов

на заседании Специализированного Совета Д 001.02.01 при Институте питания РАМН ( Москва, 109240, Устьинский пр.,д.2/14)

С диссертацией можно ознакомиться в бноблнотеке Института питания РАМН.

Автореферат разослан "/3 " ( ¿гС/чг1,199Ьу.

Учоный секретарь специализированного совета кандидат кедицкнскнх. наук

В.М. Еминченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Исследование аденилатцнклазной системы, играющей существенную роль в регуляции важнейших биохимических и физиологических процессов в организма, в том числе и функций органов пищеварения, является одной из важных проблем современной биологии и медицины.Учитывая особую значимость печени в обмене веществ и широкую распространенность ее заболеваний (А.С. Логинов и др.,1994), а также в связи с недостаточной изученностью патогенетических механизмов хронических болезней этого органа, представляется весьма актуальной разработка мало исследованного вопроса о значении аденилатцнклазной системы в функциях печени у человека при ее физиологическом и патологических состояниях. В последнее время в экспериментальных исследованиях установлено, что циклические нуклеотиды, преаще всего образуемый аденилатциклазой циклический аденоэинмонофосфат (цАМФ), активно участвуют в контролируемых печенью биохимических процессах - регуляции клеточного метаболизма, реализации гормональных воздействий на обмен липидов и углеводов, синтезе белка, а также модулируют клеточный рост и дифференцировку (Н.А.Федоров и др.,1990; М.Б.Нестерова и др.,1992;

Е.Sutherland et al ,1988).Имеются немногочисленные и к тому же противоречивые данные об изменении активности аденилатциклазы и уровней циклических нуклеотидов в ткани печени при ее хроническом экспериментальном поражении (к.Wong; E.Kisilevsky ,1984;

M.Saito ,1992).

Аденилатциклазная система играет ключевую роль в механизме действия простагландинов (ПГ) и желудочно-кишечных гормонов, активно участвующих в регуляции функций печени (Р.А.Высоцкая и др., 1992; М. Garrity et al, 1987).При этом цАДО является основным меди-

атором эффектов как iff', так и гастроинтестинальных гормонов (включая панкреатические) ( N.Bergasa ,1992; V.Hruly I993;F.Irvine et al 1993). Известно также, что у больных с хроническими заболеваниями печени наблюдаются значительные метаболические и гормональные расстройства, усугубляющие течение болезни, биохимические механизмы которых окончательно не расшифрованы. В связи с этим целесообразным является изучение роли циклических нуклеотидов во взаимосвязи с ПГ и панкреатическими гормонами в механизмах развития нарушений обмена веществ при заболеваниях печени.

Таким образом, исследование аденилатцикдазной системы печени при ее хронических поражениях является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования. Основная цель настоящего исследования заключалась в изучении состояния аденилатциклазной системы печени у человека в норме и при ее хронических заболеваниях, а также роли этой системы в патогенезе данных болезней. Шли поставлены следующие конкретные задачи:

1. Исследовать активность аденилатциклазы в ткани печени у больных с ее жировой дистрофией, хроническим гепатитом и циррозом различной этиологии и тяжести болезни; изучить некоторые биохимические механизмы возможных нарушений этой активности.

2. Определить содержание циклических нуклеотидов - цАЫФ и цГ*й в печени и плазме крови этих больных.

3. С помощью исследования некоторых сторон метаболизма ли-пицов в печени, содержания ПГ Е,А и F2dB печени и плазме крови, а также секреции панкреатических гормонов выяснить участие циклических нуклеотидов в развитии метаболических нарушений при хронических поражениях печени.

Научная новизна работы. Впервые в клинических исследованиях проведено изучение состояния аденилатциклазной системы печени в норые и у больных с хроническими заболеваниями этого органа. Получены новые данные о достоверном снижении активности аденилатцик-лазы в ткани печени при ее патологии, выраженность которого зависит от тяжести болезни и коррелирует с уменьшением содержания цАМ$ в печени и плазме крови, сдвигами в соотношении цАМФ/цГМФ, что свидетельствует о важной роли аденилатциклазной системы в патогенетических механизмах хронических болезней, печени.

Установлено, что одними из важных причин изменений в активности аденилатциклазы является повышенный уровень инсулина и глю-кагона в крови больных хроническим гепатитом и циррозом, а также нарушение чувствительности этого фермента к воздействию панкреатических гормонов (in vitro ).

Получены доказательства сопряженности указанных сдвигов в печени со снижением в ней содержания простагландинов Е, А и и уменьшением активности липолитических ферментов (триглицеридной липазы и трибутириназы), указывающие на участие аденилатциклазной системы в механизмах развития нарушений лклидного обмена при хронических заболеваниях печени.

Научно-практическая значимость работы. Проведенные исследования расширили современные представления о физиологической роли циклических нуклеотидов и их взаимосвязи с простагландинами и панкреатическими гормонами у человека.

Установлена корреляция между снижением активности аденилатциклазы в плазматической мембране клеток печени, уменьшением содержания цАМФ в печени и плазме крови и степенью тяжести болезни.

что указывает на диагностическую ценность их определения при данной патологии. Выявлены новые аспекты значения аденилатциклаз-ной системы в развитии хронических болезней печени.

Показано, что изменения в соотношении уровней инсулина и С-псптида в крови являются критерием метаболизма инсулина печенью и слуаат ценным диагностическим тестом наличия ее поражения.

Результаты исследований внедрены при проведении Всесоюзной школы на ВДНХ СССР для врачей - биохимиков и научных сотрудников "Современные радионуклидные методы в гастроэнтерологии".

Основные положения работы, выносимые на защиту.

1. Регулирующее влияние аденилатциклазной системы в функционировании печени, ее важная роль в патогенезе хронических заболеваний этого органа.

2. Особенности нарушений в активности аденилатциклазы и содержании циклических нуклеотидов (цАл& и цГий) в печени при хронических гепатитах и циррозах различной этиологии и степени тяжести.

3. Сопряженность изменений в состоянии аденилатциклазной системы со сдвигами в синтезе ПГ и секреции панкреатических гормонов. Ключевое значение этих нарушений в расстройствах метаболизма веществ у больных с хроническими заболеваниями печени.

Апробация работы. Материалы диссертации дологены и обсуждены на Всесоюзном симпозиуме "Роль циклических нуклеотидов и вторичных посредников в регуляции ферментативных реакций" (Петрозаводск, 19.88), ¡Международной конференции "Лазер и медицина" (Ташкент, 1989), Республиканской научно-практической конференции по лазерной хирургии и медицинской практике (Казань, 1989), Плену-

мо Всероссийского общества гастроэнтерологов (Ростов-на-Дону, 1991), симпозиуме стран СНГ "Цути передачи внеклеточного сигнала" (Звенигород, 1993), У1 симпозиуме по биохимии липидов стран СНГ с участием зарубежных ученых (С-Петербург, 1994), ежегодных научных сессиях ЦНИИГастроэнтерслогии (1988 - 1995).

Публикации. Материалы диссертации отражены в 7 работах, опубликованных в отечественных изданиях.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из: введения, обзора литературы (4 главы), описания материалов и методов исследования, изложения результатов собственных исследований и их обсуждения (4 главы), общего заключения, выводов, списка литературы. Работа изложена на 123 стр. машинописного текста, содержит 13 рисунков и 12 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика больных и материалов исследования. Исследования проведены у 280 больных с хроническими заболеваниями печени, проходивших клиническое обследование и лечение в отделении хронических заболеваний печени гепато-панкреато-иммунологического отдела Центрального научно-исследовательского института гастроэнтерологии (руководитель - академик РАМН, профессор А.С.Логинов). Диагноз был установлен на основании комплексного обследования больных, включающего клинико-биохимические и морфологические исследования, а также данные рентгенологического, радиоизотопного, эндоскопического и эхографического исследований. Пункция печени для установления диагноза проводилась старшим научным сотрудником данного отделения В.Д.Ткачевым. Обследованные больные были рас-

пределены на группы в зависимости от формы заболевания в соответствии с общепринятой классификацией (табл. I).

Таблица I.

Характеристика обследованных больных

Диагноз Количество обследованных Возраст

всего мужчин женщин

Жировая дистрофия печени 31 18 13 21-56

Хронический гепатит

вирусный В 137 75 62 18-66

персистирущий 8 6 2 25-49

Цирроз печени

первичный билиарный 33 18 15 40-64

алкогольный 35 25 10 34-66

вирусный В 36 20 16 36-62

всего 280 162 118

Исследования проводили в плазме крови и ткани печени. Контрольная группа включала лиц, проходивших обследование в ЦНИИГаст-роэнтерологии, без патологии органов пищеварения, у которых по данным морфологических исследований печень не была изменена ( 12 чел.). В случае проведения исследований в крови контролем служили образцы, полученные от здоровых доноров ( 42 чел.).

Особое внимание при этом было обращено на этиологию заболевания, прежде всего, значение вируса гепатита В и хронического потребления алкоголя в изменениях аденилатцихлазной и простаглан-диновой систем, а также секреции панкреатических гормонов, в связи с чем были выделены соответствующие группы больных с вирусный и алкогольным поражением печени.

Клинические исследования были дополнены экспериментальными на 50 белых крысах.

Радиоиимунные методы определения циклических нуклеотидов, простагдаодинов, панкреатических гормонов

Определение циклических нуклеотидов, простагландинов и панкреатических гормонов проводили путем радиоиммунного анализа (РИА) с использованием готовых наборов реактивов, согласно приданной инструкции.

Радиошшунологические методы являются высокочувствительными и специфичными; они обладают хорошей воспроизводимостью и позволяют осуществить обработку одновременно большого количества образцов. Все это делает их удобными и адекватными для применения в научных и клинических исследованиях.

При определении цАМ$ и цГ:<№ в крови и тканях применяли наборы фирмы "Amershaa" (Англия), а также Института изотопов (ЧССР), с предварительной экстракцией.

При исследовании ПГ Е, А и Fg^применяли наборы фирмы "Clinical Assays" (СМ); перед радиоиммунным анализом ПГ также экстрагировали по методу B.Jaife (1974).

Определение содержания в сыворотке крови иммуноре активних инсулина и С-пелтида, а в плазме крови - глюкагона проводили с использованием стандартных наборов реактивов (соответственно): ■Инсулин - кит", "Риа - мат", "С-пептид" ( "Byk-Mallncrodt" , 8РГ) и "Глюкагои - кит" ( "Cambridge Huclear" , США).

Радиоизотопный метод определения активности аденил атци кл азы

Определение активности аденилатциклазы (Кф 4.6.I.I.) в плазматических мембранах клеток печени проводили радиоизотошшм методом В.А.Ткачука и соавт. (1981),основанном на измерении счета ра-32

диактивности цАМФ - Р 3,5 КШ, образующегося при ферментативном

- 8 -

32

расщеплении субстрата Р-АТФ ( "АаогвЬаа" , Англия) за I минуту инкубации 1г белка. Активность аденилатциклазы определяли в следующей среде: 50ыМ трис-НС£ рН 7.5, 30®С, ЁыМ креатинфосфат, 0.2 иг/ил креатинкиназы, О.ХмЫ ГТй. Реакцию начинали добавлением 10-50 мкг белка. Время инкубации-20 мин при ЗО^С.

Определение содержания общего белка в общих гоыогенатах и плазматических мембранах клеток печени проводили по методу Лоури.

Радиоактивность определяли на кидкостно-сцинтилляционном счетчике "¿¿арк - 2", США.

Методы определения активности ферментов

Активность липолитических ферментов - липазы и трибутирина-зы (КФ 3.1.3.1.) определяли по методу A.Tietz (1969). Активность фермента выражали в международных единицах (в сыворотке крови -мИоль/л/шш, печени - мй>ль/кг/мин).

Результаты исследований обрабатывали статистически с применением ¿'-критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУВДШИЕ

I. Состояние аденилатциклазной системы печени при ее хронических заболеваниях

В результате проведенных исследований установлено достоверное снижение активности аденилатциклазы с печени у большинства (12%) обследованных больных с ее хроническими заболеваниями, степень которого зависела в основном от тяжести патологического процесса и была наиболее существенной при циррозе, особенно алкогольной и вирусной этиологии. Так, при хроническом вирусном активном гепатите В

активность данного фермента в печени снижалась в 1,5 раза Ср< 0,05), а при алкогольном и циррозе - в 4,6 и 4,1 ра-

за (р<0,01) соответственно (табл.2).

Таблица 2

Активность аденилатциклазы в печени у больных с ее

хроническими заболеваниями (в ныоль/ыг белка/мин)

( Л ±т )

Группа больных Активность аденилатциклазы

Контрольная 18,60+0,70

Хронический персистирующий

гепатит 14,14+0,50

Хронический активный

гепатит вирусный В 12,82+0,83*

Жировая дистрофия печени 13,90+0,96

Первичный билиарный

цирроз печени 4,94+0,

Активный цирроз печени

алкогольный 4,07+0,25**

Цирроз печени НВ^А^ 4,51+0,69**

х - р<0,05 ; хн - р<0,01 по сравнению с контролен

Вместе с тем, следует отметить, что у части больных, преимущественно с хроническим персистирующим гепатитом и жировой дистрофией, активность аденилатциклазы не изменялась (у 10%) или даже несколько возрастала (у 12^ больных).

Содержание образующегося под воздействием этого мембранно-связанного фермента циклического аденозиныонофосфата (цАМФ) так-яе было сниженным в печени и плазме крови обследованных больных ( табл.3).

Таблица 3

Содержание циклических нуклеотидов в ткани печени

при ее хронических заболеваниях (шоль/мг белка)

1М +т)

-1-!-1-

Группа больных | цкШ I цГйФ | цАМ$/цГЙЗ

Контрольная 13,65+0,Ш 8,08+0,69 1,69+0,42

Жировая дистрофия 8,93^0,54к 9,81+0,96 0,91+0,20 печени

Хронический 9,76+0,85е 10,90+0,44 0,89+0,36 порсистирущий гепатит

Хронический активный 8,32+0,45?* 10,49+0,61 0,79+0,16 гепатит вирусный В

Цирроз печени 7,02+0,32^ 11,63+1,76 0,60+0,12

к - р< 0,05; гщ - р<0,01

Следует полагать, что выявленное нами снижение уровня цА® и пзчзни обусловлено прежде всего падением уровня активности в ной аденилатциклаэы. Уменьшение ео содержания цААЙ в плазме крови при хронических поражениях печени является, главным образом, отражением подобных изменений в ткани атого органа. Возможным объясненной нарушений в образовании и содерзании цАМ$ является такие изменение количества клеток, продуцирующих эти вещества, вследствие их поврегцдения в патологически измененной печени (развитие фиброза, нокроза и др.). Сопряленность изменений в образовании цАМФ б печени и плазма крови со степенью «шести и глубиной поражения этого органа позволили сделать вывод о вагзном значении цикличес-

- II -

ких нуклеотидов в патогенезе его хронических заболевания.

Содержание цГ«4 в печени и плазме крови обследованных большее, напротив, несколько возрастало (в сродней от при хроническом активном гепатите, до 50$ - при циррозе), однако это повышенно оказалось недостоверным из-за значительных индивидуальна различий ( от 5 до 15 рмоль/л в плазма крови). Бри этой коэффициент соотношения цАИ<£/цГАЙ был заметно сшосенкш (табл.3), что является отражением значительных нарушений в активности циклао-нщ систем в печени при ее патологии. Отпечен параллелизм в снижении данного козф&щненга со степенью тяяеетн а глубины поражения печени (наиболее выраженным оно было при циррозе), что позволяет рекомендовать использование этого коэффициента для уточнения диагноза и тяжести поражения этого органа.

Полупенные результаты следует рассматривать тахсг.е как проявление изменений биохимических механизмов печени прл ее адаптации к патологическоиу состоянию и считать прогностически неблагоприятный!! признаками сдвигов в метаболизме циклических нуклеотидов, что иожэт явиться ваянии фактором патогенеза хронических заболеваний печени.

' Известно, что у больных с хроническими заболеваниями печени наблюдаются значительные ыети5олические и гормональные растройст-ва, усугубляющие течение болезни, биохимические механизмы которых окончательно не расшифрованы. В частности, печень - это основной орган метаболизма панкреатических гормонов, а ее клетки являются специфическими клетками-мишенями данных горюнов. При отом адени-латциклазная система опосредует гормональные воздействия. Показано, что в норме инсулин является ингибитором аденилатциклазы в печени , а глюкагон, наоборот,ее стимулятором ( м.с^Ъага , 1992).

- 12 -

До настоящего времени особенности воздействий инсулина и глюкагона на активность аденилатциклазы в печени у человека в норме и при ее патологии практически не изучены, несмотря на их очевидную важность.

В исследованиях in vitro нами показано, что при отсутствии существенных морфологических изменений в печени (т.е. практически

с

в норме) инсулин (10 Ю ингибирует активность аденилатциклазы вдвое (рис.1). При хроническом активном гепатите чувствительность фермента к ингибирующему эффекту инсулина сохранялась: его уровень снижался в 2,3 раза. В то же время при первичном билиарном циррозе печени активность аденилатциклазы под влиянием инсулина изменялась незначительно: реакция фермента на этот гормон была отчетливо снижена и практически не проявлялась. В противоположность инсулину глвкагон (10~^М) активировал сденилатциклазу в нормальной печени, однако степень этой активации была значительно (на

нике при хроническом активном гепатите и самой низкой - пра циррозе.

Таким образом, проведенные исследования позволили выявить изменение чувствительности аденмлатциклазной системы печени к гормональным воздействиям при ее хронических заболеваниях, что по-видимому, обусловлено как нарушением рецепторного ответа в связи с повреждением мембран клеток печени, так и недостаточностью ЛИ, субстрата аденилатциклазы.

Под влиянием комплексного лечения больных хроническим активным гепатитом, включающего метаболическую терапии (препарат "эс-сенциалэ", глюкозу, липоевую кислоту, витамины группы В и др.) npsj положительной клинической динамике наблюдалась определенная нормализация содержания цАлй и цГай в плазме крови, сочетающаяся

%

200 --

*

12 3 12 3

Рис. I АКТИВНОСТЬ АДЕНИЛАТЦИКЛАЗЫ В ПЕЧЕНИ БОЛЬНЫХ С ЕЕ ХРОНИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ПРИ ИНКУБАЦИИ С ИНСУЛИНОМ (А) И ГЛЮКАГОНОМ (Б).

1 - контроль, 2 - хронический активный гепатит, 3 - первичный билиарный цирроз печени.

* - р < 0.05 относительно базальной активности.

с повышением в ней уровня ПГ и стабилизацией липидного обмена, что свидетельствует о целесообразности применения патогенетической терапии, сс.чоэалиой на коррекции метаболических нарушений, при этих заболеваниях.

Это хорошо коррелирует с появившимися в последнее время в литературе данными о протектшшшс эффектах синтетических проно-воднше цАМФ при экспериментальном поражении печени CCf», которое заключалось в значительном снижении активности трансашшаз, уменьшении воспалительных процессов, нормализации липидного обмена ( М. Salto « 1992).

Ц АМФ - зависимая сигналпроводящая клеточная система имеет в своем составе три типа белков: рецептор, ГТФ-связывахщие белки и каталитическую субъединицу аденилатциклазы ( Н.А.&гдоров , 1990). Повреждение любого из компонентов этой системы или их сопряжения при патологии печени может обусловливать изменения уровня цАМ>5, а следовательно, нарупение фушщчонального состояния этого органа. Следует полагать, что в ткани печени в результате развития поражения, по-видимому, происходит не только нарушение сопряжения гормональных рецепторов с нуклеотидсвязывающим белком фермента, но и изменение характера взаимодействия рогуляторного и каталитического компонентов аденилатциклазного комплекса.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о существенных нарушениях в аденилатциклазной системе печени при ее поражении, что может явиться одним из важных звеньев молекулярных механизмов этой патологии.

2. Простагландины' печени и крови при хронических гепатитах и циррозах

Учитывая вастое значение аденилатциклазной системы в метаболизме липидов, нарушениями которого нередко сопровождаются хронические заболевания печени (М.Н.Маркова, 1982), а также ключевую роль ц АШ в механизме действия биологически активных веществ липидной природы простагландинов (ПГ) и регуляции их синтеза в пэ-чени ( Соэз J. еъ а1. ,1992; КекиЛе А. еъ а1. ,1993) пред-

ставлял интерес исследовать возможную взаимосвязь изменений в состоянии аденилатциклазной системы у обследованных больных с образованием ПГ.

В результате проведенных радиоиммунологических исследований установлено значительное снижение эндогенного биосинтеза ПГ в печени при ее хронических заболеваниях, проявлением которого явилось 1,5-3 кратное уменьшение содержания ПГ Е, и ткани этого органа у большинства (до 87%) обследованных больных с мировой дистрофией печени, хроническим активным вирусным гепатитом и циррозом - первичным билиарным, вируспим и алкогольным (рис. 2), а такяе уровня ПГ Е, А « Г^в плазме крови. Степень выраженности этих изменений зависела от тяжести патологии (наиболее существенная - при циррозе) и природы заболевания (наличие вируса или алкоголя в его этиологии усугубляло эти нарупзния ).

Следует отметить, что у больных циррозом печени, осложненным отечно-асцитичесшш синдромом, снижение концентрации ПГ Е, А и Г плазме крови было более значительным, чем при циррозе без асцита (соответственно 0,34+0,15; 0,38+0,16; 0,12+0,07 по сравнению с 0,49+0,12; 0,47+0,11; 0,21+0,07 нг/мл).Сопряженность указанных сдвигов в образовании ПГ со степенью тяжести и глубиной

поражения печени позволили сделать'вывод о важной значении ИТ в патогенезе ее хронических заболеваний.

Наш показано также, что одним из биохимических механизмов нарушений биосинтеза ПГ при данной патологии является уменьшение (в 1,5-2 раза) в ткани печени и крови уровня активности липолитичоских ферментов (трибутириназы и триглицеридной липазы), регулирующих липвдный обмен и способствующих образованию субстратов синтеза ПГ, поскольку его интенсивность зависит от степени гидролиза эфирносвязанных липидов ( У.На^уо , 1987). Так, при хроническом вирусном гепатите В, первичном билиарном и алкогольном циррозах активность триглицеридной липазы снижалась соответственно до 16,32+0,61;14,50+0,13 и 10,30+0,64 мМоль/кг/мин по сравнению с 21^60+1,35 в контроле Ср<0,01).

нг/г

. I ПГЕ

ПШа

к

.•V

Ж

} I

ХгГ-ц .

V. ' .Щ

Рис. 2 СОДЕРЖАНИЕ [1РОСТЛГЛЛНДИНОВ В ПЕЧЕНИ ВОЛЬНЫХ С ЕВ ХРОНИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ.

1 • контролц 2 - жиро»»* дистрофия печени, 3 > хромичесхнй »стзиний геп»тот вирусный, 4 • «ггиишА цирроз печени »ирусный, 5 • первичный Ьили»ркий цирроз печени, 6 - »лкигслышй цирроз печени, 7 - цирроз печени с гипертензией.

к - р<0,05 по сравнению с контролем

- 17 -

Изучение взаимосвязи между ПГ и липидным обменом показало также, что ПГЕ в условиях in vitro ингибирует активность три-глицеридной липазы в нормальной печени. Вместе с тем, при хроническом активном гепатите и циррозе это ингибирование проявляется в значительно меньшей степени, что в конечном итоге может способствовать накоплению липидов в печени при ее поражении. Эти данные являются новым доказательством включения ПГ в механизмы развития нарушений липидного обмена при хронических заболеваниях печени, а также косвенно подтверждают появившееся в последнее время в литературе мнение о цитопротективных эффектах ПГ в печени ( V.Mirtsou et al , 1994; Ononis son et al 1992). ■

Таким образом, полученные результаты указывают на сопряженность изменений в аденилатциклазной системе печени со снижением в ней синтеза ПГ и активности липолитических ферментов при хронических заболеваниях этого органа, что согласуется с имеющимся в литература мнением о взаимозависимости уровней цАМФ и ПГ в клетке (С.Д. Варфоломеев, А.Т.Мевх, 1985) и свидетельствует об участии аденилатциклазной системы в развитии нарушений синтеза ПГ и метаболических расстройств при патологии печени.

3. Панкреатические гормоны при хронических заболеваниях печени 5

Тесная взаимосвязь мелду циклическими нуклеотидами и панкреатическими гормонами в осуществлении углеводного обмена ( L.

Kietaann et al , 1992), нарушения которого нередко наблюдаются у больных с хроническими заболеваниями печени (А.С. Логиков, 1994), предопределили целесообразность исследования эндокринной функции поджелудочной железы во взаимосвязи с состоянием адени-

латциклазной системы при данной патологии.

Исследование в крови больных с хроническими заболеваниями печени иьшунореактивных инсулина, С-пептида и глюкагона, как показателей гормональной активности подделудочной железы, позволило выявить нарушения ее эндокринного аппарата, степень которых зависела от тяжести, длительности и этиологии заболевания ( до 0,20+0,02 и 0,32+0,05 нмоль/л (р< 0,01) при хроническом активном гепатите В и алкогольном циррозе по сравнению с 0,12+0,03 в контроле). Следует превде всего отметить значительную гиперинсулине-мию и определенную гиперглюкагонемию, характерные для подавляющего большинства (99$) обследованных больных, фи этом наиболее высокое содержание инсулина в крови отмечено при алкогольных поражениях печени. В то же время уровень С-пептида, образующегося в эквимолярных количествах с инсулином из проинсулина в -клетках поджелудочной железы, в крови больных с патологией печени был снижен.

Таким образом, несмотря на повышенное содержание в крови инсулина, исследование С-пептида позволило выявить снижение функции £ -клеток при хронических заболеваниях печена. &го связано с тем, что уровень инсулина в периферической крови зависит от функционального состояния печени, которая в норма ыотаболизирует более половины присутствующего в портальной крови инсулина ( к. СбгпоИ > 1382). При патологии же печени его катаболизм в гепа-тоцитах понижается, что н является одной из важных причин развития гиперинсулинемии. Вместе с тем, уровень С-пептида в крови, в отличив от инсулина, не зависит от функционального состояния печени, поскольку он метаболизируется лишь в почках и,следовательно , отражает истинную секрецию инсулина и С-пептида

- 19 -

£ - клетками поджелудочной железы ( К.Вегз1пз ^ а^ 1987).

Нарушения в секреции панкреатических гормонов были подтверждены нами и при проведении теста на толерантность к глюкозе. На рисунке 3 четко видны более выраженные и продолжительные по сравнению с нормой гиперинсулинемия и гиперглюкагонемия у обследованных больных в ответ на гипергликемию после введения глюкозы, что свидетельствует о нарушении гормональной функции не только^-, но и £ -клеток поджелудочной железы, особенно при алкогольных поражениях печени.

Тесная взаимосвязь панкреатических гормонов с метаболическими процессами в организме указывает на то, что нарушение секреции этих гормонов может привести к существенным растройстваи и способствует хронизации болезни.

мМоль/д

нМолъ/я

ГЛЮКОЗА

А. • С-ПЕПТИД

'/ "Ж • Я г--

вг/д

о

1.9

О 30 £0 90 120

ГЛКЖАГОН

...........

"О .....о...

-о----

О 10 60 90 130

Рис. 3 ИЗМЕНЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ВНУТРЕННЕЙ СЕКРЕЦИИ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В КРОВИ БОЛЬНЫХ С АЛКОГОЛЬНОЙ ЖИРОВОЙ ДИСТРОФИЕЙ ПЕЧЕНИ НА

■юне перорального глюкотсталЕмггного теста

1 - коктэсйк. 2 - алипигшм жисоеи дыстфсхЬм пгчснм.

- 20 -

Таким образом, при рассмотрении биохимических механизмов наблюдающихся изменений в состоянии аденилатциклазной системы следует учитывать тот факт, что у больных с хроническими заболеваниями печени (как хроническим активным гепатитом, так и циррозами различной этиологии) характерной является выраженная гилер-инсулинемия Св 2 - 4 раза выше нормы), в то время как уровень глюкагона в крови повышается незначительно.

.Установленная нами сопряженность изменений в образовании циклических нуклеотцдов со степенью тяжести поражения печени и развитием гормональных и метаболических расстройств свидетельствует о важной роли аденилатциклазной системы в патогенезе хронических заболеваний печени.

ВЫВОДЫ

1. Установлено выраженное снижение активности аденилатцик-лазы в плазматических мембранах клеток печени у больных с ее хроническими заболеваниями (жировая дистрофия, хронический гепатит, цирроз), степень которого зависела от тяжести болезни (наиболее выраженное при циррозе).

2. Содержание цАШ в печени и плазме крови достоверно умень-вается при данной патологии, а цГМФ - несколько возрастает. Показано, что коэффициент соотношения цАМ£/цГШ> в плазме крови целесообразно использовать для уточнения диагноза и тяжести поражения печени.

3. Доказано, что одной из важных причин изменений в аденилатциклазной системе является повышенный уровень инсулина и глюкагона в крови обследованных больных.

4. Показано изменение чувствительности аденилатцяклазы пе-

чени к воздействию инсулина и глюкагона в условиях in vitro при хроническом активном гепатите и циррозе.

5. Выявлена сопряженность нарушений в образовании циклических нуклеотидов в печени при ее патологии со снижением в ней синтеза биологически активных веществ липидной природы - простаглон-дшов Е, А и F а также уиеньпением активности л «политических ферментов (триглицеридной липазы и трибутириназы), что указывает на участие аденилатциклазной системы в механизмах развития нару-ЕЭ1ШЙ липидного обмена при данной патологии.

6. Под влиянием комплексного лечения больных хроническим активным гепатитом, включающего метаболическую терапии (препарат "эссенциале", глюкозу, липоевую кислоту, витамины группы В и др.) при положительной клинической динамике наблюдалась определенная нормализация содержания цМ2 и цГМФ в плазме крови, сочетающаяся

с повыиением в ней уровня ЕГ и стабилизацией липидного обмена, что свидетельствует о целесообразности применения патогенетической терапии, основанной на коррекции метаболических нарушений при этих заболеваниях.

7. В экспериментальных исследованиях выявлена тесная взаимосвязь меяду сдвигами в уровне цАМФ и триглицеридов в регенерирующей печени крыс с хронической алкогольной интоксикацией, что является одним из важных механизмов стимулирования липогенеза в этом органе при его патологии.

8. Установленная сопряженность изменений в состоянии аденилатциклазной системы со степенью тяжести порагения печени и развитием гормональных и метаболических расстройств свидетельствует о важной роли аденилатциклазной системы в патогенезе хронических заболеваний печени.

Выражаю глубокую благодарность научным руководителям академику РАШ, доктору медицинских наук, профессору Логинову Анатолию Сергеевичу и доктору биологических наук Высоцкой Розе Андреевне за научные консультации при выполнении настоящей работы.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Активность аденилатциклазной системы печени при хронических гепатитах// Сб.тр. ЦНИИГастроэнтерологии: Хронический гепатит. - и!.,1988, - C.I6-2I (совместно с А.С.Догиновым, P.A. Высоцкой, С.В.Соколовой, В.Д.Ткачевым).

2. Взаимосвязь аденилатциклазной системы и простагландинов в слизистой оболочке желудка при язвенной болезни//Всесоюзный симпозиум "Роль циклических нуклеотидов и вторичных посредников

в регуляции ферментативных процессов", 6-й:Материалы.-Петре заводск, I988.-C.I34 (совместно с А.С.Логиновым, Р.А.Высоцкой, Е.В.Ткаченко, С.В.Соколовой).

3. Значение простагландинов слизистой оболочки желудка в патогенезе язвенных поражений при циррозе печени// Пленум Всероссийского общества гастроэнтерологов: Материалы. - Ростов-на-Дону, I99I.-C.33-34( совместно с Р.А.Высоцкой, З.Д.Ковдашовой, 0.0. Груюетской).

4. Энпростил в лечении язвенной болезни двенадцатиперстной кишки и "гепатогенных" язв// Пленум Всероссийского общества гастроэнтерологов: Материалы.- Ростов-на-Дону, 1991,- C.I65-I67. (совместно с З.Д.Ковдашовой, Р.А.Высоцкой, Г.Н.Соколовой).

5. Простагландины слизистой оболочки желудка при циррозе печени// Вопр.мед.химии - I992.-M.- С.26-28 (совместно с Р.А.Высоцкой, А.С.Логиновым, З.Д.Кондашовой, А.С.Кузнецовым, О.О.Грушецкой).

6. Влияние панкреатических гормонов на активность аденилатциклазы в печени при ее хронических заболеваниях//Симпозиуы стрел СНГ "Пути передачи внеклеточного сигнала":Материалы.-Звенигород, I993.-C.75. (совместно с Р.А.Высоцкой, А.С.Логиновым, О.И. Печковской).

7. Простагландины при хронических заболеваниях печени//У1 симпозиум по биохимии липидов стран СНГ с участием зарубежных ученых. -Материалы.-С.-Петербург,1994.-С.28 (совместно с Р.А.Высоцкой, А.С.Логиновым, Е.В.Ткаченко, З.Д.Кондашовой, 0.0.Гру-шецкой, О.И.Шчковской).

8. Роль циклических нуклеотидов в патогенезе хронических заболеваний печени^/ Балл.эксп.биол.мед. (принято в печать) (совместно с А.С.Логиновым, Р.А.Высоцкой).

•II.1-*"t95r»__Сбъа.г 1,5гг. _ Tag. I'jQ Sqk. 419

Тзп. PîXîi, Ордчонляглдзе, 3