Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сорбционные аспекты ресурсосбережения в технологии производства гепарина

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Ганем Аль Мусанна

Введение

1. Литературный обзор

1.1 Гепарин. Строение, свойства 11 1.1.1. Молекулярная масса и макро макромолекулярные свойства

1.2 Сырьевые источники выделения гепарина

1.3 Способы выделения гепарина из сырья

2. Результаты и их обсуждение

2.1 Исходные материалы и методы определения концентрации гепарина

2.2 Модификация методик определения ГП

2.3 Исследование регенерации ациойита AM, используемого для сорбции гепарина " ? : '"

2.4 Исследование равновесия сорбции гепарина на гранульном сорбенте AM

2.5 Сравнительные кинетические исследования сорбции и элюции гепарина на гранульном анионите AM

2.5.1 Исследование сорбции ГП на анионите AM в динамическом режиме

2.5.2 Исследование элюции ГП с гранульного анионитауШ"

2.6 Сорбция и десорбция гепарина на высокопроницаемых сорбентах на основе нетканого материала 71 2.6.1 Исследование равновесия сорбции гепарина на нетканом материале АС

3. Экспериментальная часть

3.1 Характеристика исходных продуктов

3.2 Определение концентрации гепарина в растворе

3.3 Определение сорбционной емкости гранульного анионита

AM и нетканого материала АС по гепарину

3.4 Методики восстановления емкости гранульного полимерного сорбента AM

3.5 Изотерма сорбции гепарина на НМ или на гранульном сорбенте AM

3.6 Определение влияния концентрации хлорида натрия на сорбцию гепарина и определение зарядности комплекса гепарина

3.7 Исследование кинетики сорбции гепарина на гранульном анионите AM

3.8 Исследование динамики сорбции гепарина на анионите AM

3.9 Исследование элюции гепарина с гранульного анионита AM

Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сорбционные аспекты ресурсосбережения в технологии производства гепарина"

Актуальность проблемы. Проблема комплексного и рационального использования сырья является одной из основных проблем экоразвития. Обеспечение высоких технико-экономических показателей и качества выпускаемой продукции - интенсификация и оптимизация технологии, переход на воспроизводимое биологическое сырье, более полное использование сырьевых продуктов, снижение потерь по стадиям целевого продукта - являются основными и актуальными задачами на современном этапе.

Одним из путей экономии сырья и материалов и снижения на этой основе материалоемкости производства является замена дефицитного пищевого сырья на менее дефицитное.

В структуре ассортимента товарной продукции эндокринных заводов одно из ведущих мест занимает гепарин (26%). Замена для производства гепарина пищевого сырья- легких крупного рогатого скота на слизистую оболочку тонкого кишечника свиней (мукозу) позволяет высвободить 7 тыс.тонн легких ежегодно, что способствует увеличению ассортимента относительно недорогих продуктов питания и заметно увеличивает выпуск гепарина.

Основные проблемы использования сложного биологического сырья в большой степени могут быть решены в сфере интенсификации сорбционных процессов на стадии сорбции и десорбции (концентрирования высокомолекулярного препарата) и изучения равновесия, кинетики и динамики этих процессов для их оптимизации.

Высокомолекулярный кислый мукополисахарид- гепарин является необходимым для практической медицины препаратом благодаря своей высокой антикоагулянтной активности. Важные аспекты технологии его получения, связанные со стадией сорбционного концентрирования высокомолекулярного соединения требуют серьезного рассмотрения и доработки.

Современные технологии производства гепарина базируются на экстракции предварительно обработанного щелочным раствором соли (рН 89) биологического сырья, сорбционном выделении неочищенного гепарина-сырца, ферментативной обработке, и очистке от балластных веществ [1].

Как было показано в ряде работ, выделение гепарина наиболее перспективно осуществлять способом сорбционного концентрирования на гранульных анионитах [2-3]. Применение твердофазных сорбентов с группами четвертичных аммониевых оснований- высокоосновных анионитов позволило выделять гепарин из любых экстрактов и различных сырьевых источников. Данная работа и посвящена различным аспектам сорбционного извлечения гепарина из нативного экстракта мукозы.

Интерес представляют две стадии сорбционного концентрирования -сорбция и десорбция гепарина, именно они являются основными, определяющими эффективность всего процесса производства гепарина из биологически воспроизводимого сырья, каковым является, в данном случае, выстилка слизистой желудка и кишечника свиньи и крупного рогатого скота. Интенсификация этих стадий позволяет сократить весь производственный цикл, повысить степень извлечения и снизить безвозвратные потери гепарина на стадии извлечения. Проблема сорбционного концентрирования высокомолекулярных биологически активных веществ из технологических растворов, обычно содержащих целую гамму высокомолекулярных соединений близкого строения, значительно осложняется отравлением сорбента, забиванием пор и снижением эффективности элюирования даже для макропористых сорбентов. Это приводит к необходимости периодически полностью заменять сорбент, отработавший в процессе на свежий. При этом отработанный сорбент подлежит захоронению как потенциальный источник интенсивного дурного запаха гниющего белка.

На стадии элюирования заряженной гепарином (ГП) сорбционной анионитовой колонны, балластные белки, сопутствующие гепарину, не полностью элюируются с анионита в принятом на производстве режиме "бедной" солевой регенерации. Это приводит к ухудшению равновесных кинетических и динамических характеристик сорбента в колонне уже после второй-третьей стадии извлечения. До настоящего времени, исследованиями регенерации отработанного анионита было показано, что наибольшей эффективностью обладают растворы серной кислоты при повышенной температуре. Проблема же полного восстановления емкости отработанного сорбента остается нерешенной, как и вопрос улучшения равновесных и кинетических свойств многократно используемого сорбционного материала.

Эколого- экономический анализ сорбционной технологии ГП.

Эколого- экономический анализ производства гепарина по различным технологиям был проведен по ценам продукта отечественных и зарубежных фирм. Цена товарного гепарина (ГП) значительно превосходит стоимость большинства органических и неорганических препаратов, концентрируемых или выделяемых сорбционными методами.

К сожалению, корректный экономический анализ отечественной технологии весьма затрудняется резко изменившимся масштабом цен 19902000гг. Так, стоимость готового препарата на московском эндокринном заводе составляла 60000 USD за 1 кг ( активность 120 ед/мг, 1990 г). В настоящее время стоимость ГП фирмы "SIGMA" составляет 30000-35000 USD за 1 кг ( активность 160 ед/мг).

Основными критическими местами отечественной технологии производства субстанции ГП являются:

1. Образование больших количеств отработанного в сорбционных колоннах анионита АМ-п, "отравленного" балластными веществами, в основном белковой природы, содержащимися в технологическом растворе водного экстракта мукозы.

2. Значительное увеличение объема сточных вод на стадии элюирования и регенерации, содержащих 2,5-3 н хлористый натрий с большим количеством дурно пахнущих остатков белка и олигопептидов.

После 10-15 операций сорбции происходит заполнение пор анионита с резкой потерей емкости до 50-70 %. Эта емкость не может быть восстановлена даже после специальной регенерации серной кислотой и сорбент подлежит замене на свежий анионит. При этом из- за наличия в сорбенте легко деградирующих, дурно пахнущих белков гниющей биомассы, он подлежит специальному захоронению.

1) При общем объеме загрузки анионита на производстве 2-Зм3 (5 колонн по 500 л) при стоимости анионита AM 3000-4000 USD за товарную тонну («1м) этот вид расходного сырья и отходов является доминирующим в аспектах ресурсосбережения и условий захоронения.

2) Применение "отравленного" анионита приводит к резкому снижению кинетических и динамических показателей на стадии сорбции, снижению степени извлечения и съема ГП с единицы объема колонки. Кроме этого из-за ухудшения кинетики диффузии имеет место снижение концентрации и чистоты ГП на стадии элюирования, а также значительно возрастает удельный расход сырья на единицу активности выделяемого товарного ГП.

3) Значительное (в 1,5-2 раза) возрастание объема сточных вод на стадии элюирования (элюат- 2,5 н NaCf) и кислых вод после специальной (полной) регенерации 2 н H2S04. Все эти воды содержат способные к гниению малотоксичные балластные белки, которые являются источником интенсивного неприятного запаха гниющей биомассы.

Таким образом, можно сформулировать основные наиболее острые технические и ресурсосберегающие проблемы производства ГП.

Наличие в процессе "отравленного" анионита с низкими сорбционными равновесными и кинетическими характеристиками, существенно снижающими практически все технико-экономические показатели процесса: качество и концентрацию выходного раствора ГП для последующего высаждения; съем ГП с единицы объема колонки. Кроме этого наблюдается увеличение безвозвратных потерь ГП за счет снижения степени извлечения и большие величины проскока/77 на стадии сорбционного концентрирования.

В качестве альтернативных технических решений, разработка которых необходима для интенсификации и оптимизации выбранного процесса, на наш взгляд можно выделить следующие:

1 .-Разработка способа регенерации отработанного в процессе сорбента с полным восстановлением или частичным улучшением его кинетических и динамических характеристик.

2.-Разработка способа доизвлечения гепарина и его низкомолекулярных аналогов из концентрированного раствора хлористого натрия, т.е. выбор более эффективных по кинетическим и динамическим характеристикам сорбентов.

Пель работы. Разработка научно-технических решений, направленных на увеличение эффективности сорбции и элюции высокомолекулярного сорбата гепарина- восстановление емкости отработанного при извлечении гепарина сорбента, улучшение равновесных, кинетических и динамических характеристик многократно используемого сорбционного материала. В соответствие с поставленной задачей, исследования проводились по следующим направлениям :

-сравнительные исследования с оценкой равновесных, кинетических и динамических параметров и эффективности модифицирированных и новых сорбционных материалов на различных технологических стадиях ионообменного извлечения гепарина из солевых растворов.

-исследование регенерации анионита используемого для сорбции гепарина, различными химическими реагентами;

-исследование регенерации анионита используемого для сорбции гепарина с предварительной обработкой в ультразвуковом поле;

-использование новых высокопроницаемых материалов для концентрирования гепарина. Научная новизна.

- впервые проведено сравнительное систематическое исследование равновесия и кинетики сорбции гепарина на различных ионообменных сорбентах. Найдены адекватные модели, описывающие равновесие и кинетику обмена, получены основные равновесные и кинетические параметры для моделирования процесса;

- впервые проведено сравнение на количественном уровне параметров равновесия и кинетики исходного и предварительно обработанного в ультразвуковом поле гранульного анионита. Показана возможность значительного улучшения равновесных (в 2,5 раза) и кинетических (в 1,5 раза) параметров сорбции гепарина на предварительно озвученных анионитах;

- кинетическими исследованиями сорбции гепарина показано, что для практически отработанного анионита с низкой остаточной емкостью, однократная предварительная обработка ультразвуком в оптимальных условиях полностью восстанавливает утраченную сорбционную способность анионита, способствует увеличению коэффициентов диффузии и скорости процессов, лимитирующихся внутренней диффузией;

- исследованием в динамическом режиме десорбции гепарина с гранульного анионита AM, предварительно обработанного ультразвуком, показано еще большее снижение потерь гепарина, чем при сорбции на свежем анионите;

- по основным сорбционным параметрам впервые показано преимущество сорбента на основе нетканого материала при концентрировании гепарина из солевых растворов, что позволяет значительно снизить потери гепарина за счет полноты извлечения и снижения проскоковых концентраций.

Практическая значимость.

- разработан способ восстановления сорбционных равновесных и кинетических характеристик отработанного анионита AM с целью возвращения его в технологический цикл, на 15-20 % сокращены расходы на захоронение отработанного анионита; предварительная однократная обработка гранульного анионита ультразвуком позволяет отказаться от жестких условий регенерации анионита серной кислотой, сократить объемы промывных и сточных вод, значительно уменьшить (в 1,5-2 раза) объем десорбирующего раствора, сократить на 20 % потери гепарина при осаждении в маточном растворе, улучшить кинетические и динамические характеристики сорбента;

- показано, что использование анионообменников на основе нетканых материалов по сравнению с гранульными анионитами обеспечивает еще более существенное улучшение кинетических, механических и равновесных показателей сорбента. Это позволяет на стадиях сорбции и десорбции сократить производственный цикл и снизить безвозвратные потери гепарина;

- модифицированные аналитические методики определения гепарина в растворе хлористого натрия, предложенные в настоящей работе, могут быть рекомендованы для тестирования товарного гепарина и оценки потерь гепарина на производстве с различными солевыми растворами.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертации и результаты работы изложены в двух тезисах докладов и одной статьи; результаты исследований докладывались на "МКХТ-99"и "МКХТ-2000" международных конференциях РХТУ по "Химии и химической технологии".

Результаты исследований положены в основу аналитической методики восстановления обменной емкости анионита по гепарину и рекомендованы к использованию на московском и курганском эндокринных заводах.

Модифицированные аналитические методики определения гепарина в растворе были опробованы для тестирования товарного гепарина и использованы для оценки уровня гепаринизации изделий типа волоконной почки. 8

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения; 3-х глав, содержащих обзор литературы, описание эксперимента, обсуждение полученных результатов; общих выводов и списка литературы. Работа изложена на страницах 125, включает 30 рисунков, 30 таблиц., библиография 119наимен.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Ганем Аль Мусанна

Выводы.

1. Проведены сравнительные комплексные исследования равновесия, кинетики и динамики различных анионообменных материалов, применимых для эффективной концентрации гепарина из мукозного сырья.

2. Изучены возможности ресурсосбережения и снижения объема сточных вод в технологии получения гепарина и определены два основных направления повышения ее эффективности: предварительная обработка сорбента ультразвуком и использование высокопроницаемых нетканых материалов с ионогенными группами в качестве альтернативных сорбентов.

3. Разработана и статистически оценена модифицированная методика определения малых концентрация ГП на фоне различных концентраций NaCl, превосходящая ранее разработанную по чувствительности и более широкому диапазону определяемых содержаний ГП.

4. Показано, что предварительная однократная обработка анионита ультразвуком в оптимальном режиме в отличие от ряда известных и исследованных нами впервые химических детергентов позволяет полностью регенерировать рабочую сорбционную емкость анионита, который ранее должен был выводиться из процесса и шел на уничтожение или специальное захоронение.

5. Сравнительными исследованиями равновесия, кинетики и динамики процесса доказано, что предварительная однократная обработка отравленного анионита ультразвуком значительно улучшает равновесные и кинетические характеристики анионита на стадиях сорбции и элюции. Максимальная емкость по гепарину увеличивается в 2,7ч- 3,6 раза; коэффициенты диффузии увеличиваются от 3,3.10"9 см2/с до 1,3.10"8 см2/с. При этом рекомендованные ранее и предложенные в работе способы химической регенерации не позволили достичь кратности увеличения емкости сорбента более, чем в 1,4 раза.

6. Найдены адекватные модели для описания равновесия, кинетики и динамики сорбции гепарина и найдены детерминирующие параметры ряда

118 стадий для равновесных и кинетических процессов, необходимые для моделирования и оптимизации стадии сорбции.

7. Впервые показана возможность эффективного применения нетканых материалов с анионогенными группами для извлечения гепарина из солевых растворов различной концентрации. Причем, использование ионообменников на основе нетканых материалов даже по сравнению с УЗ- обработанными гранульными анионитами обеспечивает еще более эффективное улучшение кинетических, динамических и равновесных показателей сорбентов на стадии сорбции.

8. Сравнительный анализ параметров сорбционного равновесия при извлечении гепарина из растворов хлорида натрия анионитами с группами четвертичного аммониевого основания показал, что коэффициенты распределения по гепарину на нетканом материале значительно превышают коэффициенты распределения, полученные на гранульном сорбенте, что позволяет снизить потери гепарина за счет полноты извлечения и снижения проскоковых концентраций.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Ганем Аль Мусанна, Москва

1. Кожевникова И.В, Волковинская Л.П., Соколова JI.B. и сб. /Способыполучения гепарина. Обзорная информация "Химико-фармацевтическая промышленность". -М.: 1977. №11. -25с.

2. Валуев Л.И./Итоги пауки и техники. Серия химия и технология высокомолек. соедин. 1981. Т. 16. с. 168.-211.

3. Горчаков В.Д., Сергиенко В.И., Владимиров В.Г.Селективные гемосорбекты. М. "Медицина" 1989.-223с.

4. Brimacombe J.S., Webber J.M. Mucopolysacharides. Amsterdam. 1964.92 p.

5. Стейси M., Баркер C.A. Углеводы живых тканей.М., 1965.-250c.

6. Ehrlich J.E., Stivala S.S.// J. Jharm Sci., 1973,v. 62., p . 517-544.

7. Kiss J. / Thrombos. Diathes. Haemorrh. (stuttg.). 1974. Bd 33. S. 20-25.

8. Jaques L.B. //Charged React Polym., 1975., v.2, p. 145-161.

9. Kiss Y. In: Chemistry and clinical Usage. Ed. V.V. Rarrar D.P. Thomas.1.ndon, 1976, p.3-20.

10. Jaques L.B.-In: Progress in Medical Chemistry. Ed.G.P. Ellis, G.B. West.1.ndon. 1967.v.5.p. 139-198.

11. Ferrari L., Boffi. C. // Farmaco, ed. Prat., 1975.V. 30., p.461-477.

12. Jaques L.B. // Gen. Pharmcol., 1975., v.6,p. 235-245.

13. Hilting Т., Lindahl U. Occurrence and biosynthesis of (3-glucuronidic linkages in heparin. // J. Biol. Chem., 1971, vol.246, № 17,p.5442-5447.

14. Ehrlich J., Stivala S. Chemistry and pharmacology of heparin. // J. of Pharm.

15. Science, 1973, vol. 62, № 4, p. 517-544.

16. Андреенко Г.В. Фибринолиз. M., "Медицина", 1967,с. 90.

17. Линевич Л.И.// Успехи биологической науки, 1963. № 5.с. 231-238.

18. Shen L.L., Barlow G.H., Holleman W.H.// Thrombos. Res., 1978,№13.c.671-679.

19. Jeanloz R.W., // Adv. Exp. Med.Biol. 1975,v, 52.c3-16.

20. Danishefsky Т., Steiner H., Bella A., TriedLander A. //J. Boil. Chem.,1969,v.244, p.1741-1754.

21. Cifonelli Y.A., King Y.// Carbohid. Res, 1972,v.21, p 173-186.

22. Ульянов A.M., Лепина Л.А.//Успехи соврем. Биол., 1977,т.83, с. 69-85.

23. Fracassini A., White C.Y., Hunter I.С.// FEBS lett., 1973, v.32, p.l 16-118.

24. Horner A.A.// Y.Biol. Chem., 1971,v.246, p. 231-239.

25. Yaun L., Stivala S.S. //Adv. Exp. Med. Biol, 1975,v.52, p.39-49.

26. Perlin A.S. In: International symposium on macromolecules. Proceeding. Ed. E.B.Mano. New York. 1975. P.337-348.

27. Perlin A.S. / Fed. Proc., 1977, v. 36, p. 106-109.

28. Silva V.T., Dietrich С.Р.Ш. //Biol. Chem., 1975, v. 250, p. 6841-6846.

29. Cifonelli I.A. // Advanc. Exp. Med. Biol., 1975, v. 52, p. 95-103.

30. Cifonelli I.A., King J. // Biochim. Biophys. Acta, 1973, v. 320, p. 331-340.

31. Kotoku Т., Iosizawa Z., Yamauchi F. // Arch. Biochem., 1967, v. 120, p.553.562.

32. Foster A.B., Martlew E.E., Stacey M. // Chem. Industr., 1953. p. 899-905.

33. Stivala S.S., Liberti P.A. // Arch. Biochem., 1967, v. 122, p. 40-54.

34. Horton D., Lust E.K. // Carbohyd. Res. 1973, v. 30, p. 349-358.

35. Horner A.A. Macromolecular heparin from rat skin. // I. Biol. Chem.,1971.vol. 246, №1, p. 231-239.

36. Yuan L., Stivala S.S. // Biopolymers, 1972, v.l 1, p. 2097-2090.

37. Laurent T.C. // Arch. Biochem., 1961, v. 92, p. 224-231.

38. Stivala S.S., Ehrlich I. // Polymer, 1974, v. 15, p. 179-204.

39. Yuan L. //1. Polym. Sci. Pt C. Polymer. Symp., 1974, № 45, p. 175-184.

40. Lasker S.E., Stivala S.S.// Arch. Biochem., 1966, v. 115, p. 360-372.

41. Liberti P.A., Stivala S.S. //., 1967, v. 119, p. 510-518.

42. Johnson E.A., Mulloy B. // Carbohyd. Res., 1976, v. 51, p. 119-127.

43. Stivala S.S. // Fed. Proc., 1977, v. 36, p. 83-88.

44. Horner A.A. // J. Biol. Chem. 1971, v. 246, p. 231-239.

45. Meyer K.H., Pirone R.P., Odier M.E. // Helv. Chem. Acta. ,1952, v. 35, p.574.579.

46. Wolfrom M.L., Mc Neely W.H. I I J. Am. Chem. Soc., 1953, v. 75, p. 15191523.

47. Pulver R., // Chemotherapia (Basel), 1961, v. 3., p. 388-414.

48. Laurent T.C. // Arch. Biochem., 1961, v. 92, p. 224-231.

49. Barlow G.H., Sanderson N.D. // Ibid., 1961, v.84, p. 518-525.

50. Braswell E. // Biochim. Biophys. Acta, 1968, v. 158, p. 103.

51. Liberti P.A., Stivala S.S. // Polymer Letters, 1966, v. 4, p. 137-145.

52. Yuan L., Dougherty T.J., Stivala S.S. // J. Polym. Sci. Pt A2, 1972, v. 10, p.171.182.

53. Layes В., Stivala S.S. //Biopolymers. 1973. v. 12. p. 127-143.

54. Lindahl U. Attempted isolation of a heparin proteoglycan from bovine livercapsule.// Biosem.J., 1970 , vol. 116, No 1 , p. 27-34.

55. Ogren S., Lindahl U. Metabolism of macromolecular heparin in murine neoplastic mast cells. // Adv. Exp. Med. Biol., 1975 , vol. 52 , p.79-83.

56. Yansson L., Ogren S., Lindahl U. macromolecular properties and endgroupanalysis of heparin isolated from bovine liver capsule .// Biosem. J., 1975, vol. 145, No 1 , p. 53-62.

57. Serafini Fracassini A., Durward J.J., Crawford J. The morphology ofheparin protein macromolecule and its organization in the mast cell granule. // J. Ultrastatict. Res., 1969, vol. 28 , p. 131-140.

58. США. Пат. 2571679. Процесс получения очищенного гепарина.

59. Ogren S., lindahl U. Degradation of Heparin in mouse mastocytoma tissue .

60. Biochem. J. ,1971, vol. 125, No 4, p. 1111-1129.

61. Yurt R. W., Leid R.W., Austen R.F., Silbert J.E. Native heparin from ratperitoneal mast cells .// J. Biol. Chem., 1977 , vol. 252, No 2, p. 518-521 .

62. Ogren S., Lindahl U. Metabolism of macromolecular heparin in murine neoplastic mast cells .// Biochem. J., 1976, vol. 154, p. 605-611 .

63. США. Пат. 2377016. Получения гепарина.

64. США. Пат. 2410084. Выделения гепарина.

65. Дания. Пат. 78173. Метод выделения гепарина.

66. США. Пат. 2797184. Процесс выделения гепарина.

67. США. Пат. 2884358. Процесс получения сырца гепарина.

68. ФРГ. Пат.1156938. Способ получения гепарина.

69. США. Пат. 3016331. Очистка гепарина.

70. США. Пат. 3262854. Метод выделения гепарина.

71. США. Пат. 2623001. Получения гепарина.

72. США. Пат. 3451996. Метод получения гепарина.

73. США. Пат. 3342683. Гепарин из ткани кита и метод его получения.

74. Англия. Пат. 889648. Новый процесс получения гепарина.

75. США. Пат. 3817831. Способ получения гепариновой соли щелочногометалла.

76. Barlow G. Н., Coen L. J., Mozen М.М. A biological, chemical and physicalcomparison of heparin from different mammalian species/ // Biochim. Biophys. Acta, 1964, vol. 83, p. 272-277.

77. Cifonelli J. A., King J. Structural studies on heparins with unusually high Nacetylglucosamine contents. // Biochim. Biophys. Acta, 1973, vol. 320, p. 331-340.

78. Silverglade A. Biological equivalence of beef lung and hog mucosal heparins. // Current therap. Res., 1975, vol. 18, № 1, p. 91-103.

79. Charles A. F., Scott D. A. Studies on heparin . // J. Biol. Chem., 1933, vol.102, p. 425.

80. ПНР. Пат. 61042. Способ получения натриевой соли гепарина из легкихкрупного рогатого скота.

81. СРР. Пат. 57733. Способ получения гепарина.

82. Япония. Пат. 31589. Способ очистки гепарина, выделенного из органовкита.

83. ЧССР. Пат. 91903. Способ получения гепарина из говяжьих легких.

84. СРР. Пат. 43428. Способ получения гепарина.

85. ВНР. Пат. 149391. Способ получения гепарина.

86. ФРГ. Пат. 1253868. Способ получения гепарина.

87. Jaques L. В., Bell H. Y. In: Method of Biochemical Analysis. V. Glick,1.terscience, New York, 1959, vol. VI1, p. 253.

88. ЧССР. Пат. 129931. Способ выделения сырця гепарина.

89. Англия. Пат. 1221784. Осаждение гепарина из водного раствора.

90. ФРГ. Пат. 1228241. Способ Очистки и выделения гепарина.

91. США. Пат. 3135660. Метод очистки сульфированных углеводовокислителями.

92. Pallotta A.G., Koppanyi Т. // J. Pharmacol. Exp. Ther., 1960, v. 128, p. 318327.

93. Бычков C.M. Новые данные о гепарине /обзор/.// Вопр. мед. химии, 1981,т. 27, №6, с. 726-735.

94. Лукина И.В. Ионообменное выделение и концентрирование природногобиологическиактивного полимера-хондроитинсульфата. Дисс.канд. хим. наук. -М., 1991 (МХТИ им. Д.И. Менделеева).

95. Полуэктов К.В. Сорбция ионов хрома(У1) на модифицированных ионитах: Автореф. канд. дисс. М., 1994. 32с.

96. Зверев М.П. //Экология и промышленность России. 1977. № 4 С. 35-38.

97. Панов В.П., Овсепян A.M. Физико-химическое изучение гепарина. Обзор. // Химико-фармацевт. журнал., 1979. № 12. с. 72-86.

98. Степаненко Б.Н. Химия и биохимия углеводов (полисахариды). М.,1978, с. 163-168.

99. Мебус Хельмут. Модификация гепарином полимерных поверхностей,контактирующих с кровью. Дисс.канд. хим.наук.-М., 1985 ( МХТИ им. Д. И. Менделеева ).

100. Альберт А., Сержент Е. Константы ионизации кислот и оснований. М.:

101. Из-во "Химия". 1964.- 177 с.

102. Ohkuta S., Furnhata Т. Interaction of heparin with positively charged substancea. //proc. Jap. Acat., 1970, v. 46, № 8, p. 884-892.

103. Jooyahdel J.S., Moore F. Polyanions and their complexes. Binding affinitiesof inorganic ions to heparin // J. Chem. Soc. 1974. v. 11. p. 1468-1471.

104. Lawton J.B., Phillips G.O. Mechanism of dye binding to chemically different sites. // J. chem. Soc., 1977. v .11.№ 1, p. 38-43.

105. Доерффель К. Статистика в аналитической химии. М.: Миф, 1969,с.133.138 и 141-145.

106. Овсепян A.M., Кобяков В.В., Панов В.П. Анализ гепарина и хондроитинсульфатов методом ИК- спектроскопии в растворах ДгО. // Химико-фармацевт. журнал. 1979. № 9. с. 109-114.

107. Самсонов Г.В., Тростянская Е.Б., Елькин Г.Э. Ионный обмен: Сорбцияорганических веществ. Л.: Наука, 1969, 335с.

108. Сенявин М.М. Ионный обмен в технологии и в анализе неорганических веществ. М: химия. 1980. с. 13-22.

109. Лейкин Ю.А., Черкасова Т.А., Максимова Г.В., Саруханов Р.Г.// журнал прикладной химии., 1996. т.69. вып. 8. с 1388-1390.

110. Саруханов Р.Г., Васильева И.Л., Пучков В.В.//Электронная техника. Сер.2. Полупроводниковые приборы. 1986. вып.1 (181). С.3-4.

111. Ультразвуковая технология /Под ред. Б.А. Аграната. М.: Металлургия. 1974. - 503с.

112. Пучков В.В., Саруханов Р.Г., Евграфова Г.А. // Электронная техника.

113. Сер. 2. 1987. вып. 5 (190) С. 17-22.

114. Лейкин Ю.А., Черкасова Т.А., Максимова Т.В., Саруханов Р.Г.// Журнал физич. химии. 1995. т.69. № 10. С. 1824-1826.

115. Знаменский Ю.П. // Журнал, физ. химии. 1993. т. 67. № 9. С. 1924.

116. Кокотов Ю.А., Пасечник В.А. Равновесие и кинетика ионного обмена.1. Л: "Химия". 1970.-337с.

117. Елькин Г.Э., Яскович Г.А., Воробьева В.Я., Самсонов Г.В. // Химикофармацевт. журн., 1976. № 1. С.22-26.

118. Дельмон. Б. Кинетика гетерогенных реакции, М.: "Мир", 1972. 554с.

119. Шемякин Ф.М., Степин В.В. Ионообменный хроматографический анализ металлов. М.: Изд-во "Металлургия". 1970. 393с.125

120. Лейкин Ю.А., Гладков С. Ю., Черкасова Т.А., Способы описания сорбционного равновесия на комплексообразующих ионитах. -Труды /МХТИ им. Д.И. Менделеева, серия " Экстракция и ионный обмен", Вып. 89,1975. С. 83-94.

121. П.Венецианов Е.В., Волков Б.И., Иоффе В.П. и др. Некоторые задачи динамики сорбции в области линейной изотермы при внешнедиффузионной кинетике. //Заводская лаборатория. 1971. №5. С.513.

122. Самсонов Г.В., Елькин Г.Э., Коломейцев О.П., Азанова В.В. Влияние толщины поверхностного сорбирующего слоя на скорость диффузии органического иона. В кн.: иониты и ионный обмен. JL, Наука. 1975. С.108-114.

123. Гельферих Ф. Иониты . М.: Изд-во ин.лит. 1962. 490 с.