Сократительные свойства гладких мышц бронхов при формировании гиперреактивности воздухоносных путей

Дьякова, Елена Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сократительные свойства гладких мышц бронхов при формировании гиперреактивности воздухоносных путей
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Сократительные свойства гладких мышц бронхов при формировании гиперреактивности воздухоносных путей"

На правах рукописи

ДЬЯКОВА ЕЛЕНА ЮРЬЕВНА

СОКРАТИТЕЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ГЛАДКИХ МЫШЦ БРОНХОВ ПРИ ФОРМИРОВАНИИ ГИПЕРРЕАКТИВНОСТИ ВОЗДУХОНОСНЫХ ПУТЕЙ

03.00.13 — физиология 03.00.02 - биофизика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ТОМСК 2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации», г. Томск

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

доктор медицинских наук,

профессор Капилевич Леонид Владимирович

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук,

профессор Барбараш Нина Алексеевна

доктор биологических наук,

профессор Евдокимов Евгений Васильевич

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

ГУ НИИ физиологии СО РАМН, г. Новосибирск

Защита состоится 05 часов на заседании

диссертационного совета Д 208.096.01 при Сибирском государственном медицинском университете (634050 г. Томск, Московский тракт, 2).

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Сибирского государственного медицинского университета (г. Томск, проспект Ленина, 107).

Автореферат разослан "с13" 04_2004 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

Суханова Г.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования.

Изучение механизмов регуляции электрических и сократительных свойств гладких мышц (ГМ) внутренних органов, выяснение патогенеза заболеваний и разработка способов коррекции функциональных расстройств является актуальной проблемой современной физиологии и медицины [Баскаков М.Б., Медведев М.А., 1987; Капилевич Л.В. и др., 1994], Особое значение названная проблема имеет для системы дыхания. Значительная часть заболеваний респираторной системы связана с нарушением регуляторных механизмов гладкомышечных клеток стенки воздухоносных путей [Абросимов В.Н., 1990; SatoY.etal., 1998].

Перспективным путем выяснения этих механизмов является моделирование дисфункции респираторного тракта у экспериментальных животных [Елисеева Е.В., 1997; Tohda Y. et al., 2002]. Экспериментальные модели используются для изучения различных аспектов патогенеза и апробации новых способов лечения. В модельных экспериментах изучались активность тканевых и, сывороточных ферментов, гормональный и иммунный статус, морфологические изменения тканей [Ющик Л.В. и др., 1986; Morse В. et al., 2002]. Однако в доступной литературе мы не обнаружили исследований сократительных свойств гладких мышц бронхов в условиях формирования гиперреактивности воздухоносных путей у животных, хотя именно нарушение тонуса и реактивности бронхов является конечным патогенетическим звеном многих бронхолегочных заболеваний, в том числе бронхиальной астмы.

Ранее была продемонстрирована ассоциация полиморфизма С-703Т гена

интерлейкина 5 с атопической бронхиальной астмой [Пузырев В.П., Огородова

Л.М. и др., 2000]. Роль интерлейкина .5 в процессе развития эозинофилии в

дыхательных путях была подтверждена с использованием моноклональных

антител к интерлейкину 5 [Hitoshi Y., 1991; Egan R.W. et al., 1999]. Исследования

на трансгенных животных (нокаут-мышах по генам интерлейкина 5, растворимого

рецептора интерлейкина 5 и животных с гиперэкспрессией этих генов) также

подтверждают гипотезу о том, что интерлейкин 5 является одним из ключевых

цитокинов, участвующих в развитии атопического воспаления при бронхиальной

астме [Nishinakamura R. et al., 1996]. Интерлейкин 5 принимает непосредственное

участие в развитии основных проявлений астмы, так как его гиперпродукция

связана с эозинофилией в дыхательных путях и повышенной секрецией

эозинофилами биологически активных веществ, которые стимулируют

сокращение гладкой мускулатуры бронхов, секрецию слизи, вызывают

альтерацию эпителия дыхательных путей, дегрануляцию тучных клеток и

базофилов. Результатом чего является повреждение окружающих тканей [Coeffier

Е. et al, 1994; Wardlaw A.J., 1995]. ------1

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ I I БИБЛИОТЕКА I

! ¡¡гзцтт

Исследования с использованием моноклональных антител к интерлейкину 5 и рецептору интерлейкина 5 показали, что анти-интерлейкин -5 терапия, помимо редукции эозинофильного воспаления, может приводить к снижению гиперреактивности дыхательных путей при астме и улучшать функцию легких. Однако в исследованиях на морских свинках с экспериментальной бронхиальной астмой было отмечено, что для угнетения гиперреактивности дыхательных путей необходимы более высокие дозы препаратов моноклональных антител к интерлейкину 5, чем для блокирования эозинофильного воспаления [Нйс^Ы У., 1991; ЕШспС.Ь.ег а1., 1995].

Данные 8аМ 8. й а1. (1999) и Накспагесп Н. й а1. (1999) позволяют предположить, что интерлейкин 5 может непосредственно продуцироваться эпителиальными клетками воздухоносных путей и оказывать влияние на гладкие мышцы бронхов. Все это делает интерлейкин 5 перспективной терапевтической мишенью для селективного уменьшения тканевого воспаления, без иммунносупрессивных последствий, связанных с регулярным применением таких препаратов, как стероиды.

Все изложенное обуславливает актуальность и научную новизну настоящего исследования.

Цель работы:

Изучить сократительные свойства гладких мышц воздухоносных путей морских свинок в условиях сенсибилизации овальбумином и при воздействии интерлейкина 5.

Задачи:

1. Исследовать особенности гистаминергических, адренергических и холинергических сократительных реакций гладких мышц воздухоносных путей морских свинок при сенсибилизации овальбумином.

2. Изучить влияние бронхиального эпителия на характер гистаминергических, адренергических и холинергических сократительных реакций гладких мышц воздухоносных путей у морских свинок при сенсибилизации овальбумином.

3. Исследовать влияние интерлейкина 5 и рекомбинантного рецептора интерлейкина 5 на сократительные реакции гладких мышц бронхов морских свинок в условиях формировании гиперреактивности воздухоносных путей.

4. Методом математического моделирования исследовать кинетические параметры сократительных реакций гладких мышц воздухоносных путей в условиях формирования бронхиальной гиперреактивности.

Положения, выносимые на защиту:

1. Сенсибилизация овальбумином морских свинок приводит к формированию гиперреактивности воздухоносных путей, которая проявляется в усилении сократительных реакций на холинэргические и гистаминергические воздействия. Адрснергические сократительные реакции сегментов воздухоносных путей сенсибилизированных животных зависят от предсокращающего фактора: в условиях предсокращения гистамином адренергическая реактивность не изменяется, а при предсокращении гиперкалиевым раствором Кребса- угнетается.

2. В условиях формирования гиперреактивности воздухоносных путей эпителий утрачивает способность модулировать сократительные реакции гладких мышц бронхов, которая у интактных животных проявляется в угнетении сократительных реакций на гистаминергические воздействия, потенциации - на холинергические и уменьшении степени расслабления на адренергические воздействия.

3. Инкубация гладкомышечных сегментов воздухоносных путей с интерлейкином 5 потенцирует сократительные реакции на гистаминергические воздействия, уменьшает степень расслабления на адренергические воздействия как у интактных, так и у сенсибилизированных овальбумином животных. Рекомбинантный рецептор интерлейкина 5 (растворимая фракция) дозозависимо угнетает эффект интерлейкина 5, а инкубация с рецептором сегментов сенсибилизированных (но не интактных) животных подавляет гистаминергические сократительные реакции.

4. Увеличение максимального сокращения и сродства рецептора к лиганду отмечается после удаления респираторного эпителия, а так же в условиях формирования сенсибилизации при сохраненном эпителиальном слое и при инкубации сегментов с интерлейкином 5. Снижение максимальной амплитуды сокращения и сродства рецептора к лиганду отмечается при инкубации сегментов сенсибилизированных животных с а-субъединицей рецептора интерлейкина 5.

Научная новизна:

Показано, что при сенсибилизации овальбумином морских свинок формируется гиперреактивность воздухоносных путей, которая проявляется в повышении сократительных реакций на холинэргические и гистаминергических воздействия.

Впервые показано, что предсокращающие факторы способны модулировать адренергические сократительные реакций деэпителизированных сегментов воздухоносных путей сенсибилизированных животных: в условиях предсокращения гистамином адренергическая реактивность не изменялась, а использование гиперкалиевого раствора Кребса в качестве предсокращающего фактора угнетало адренергическое расслабление сегментов.

Показано, что влияние эпителия на адренергические реакции интактных животных зависит от характера предсокращающих факторов: потенциация при предсокращении гистамином и угнетение при предсокращении гиперкалиевым раствором Кребса. В условиях формирования гиперреактивности респираторный эпителий утрачивает способность модулировать сократительные реакции гладких мышц воздухоносных путей, которая у интактных животных проявляется угнетением сократительных реакций на гистаминергические воздействия и потенцированием их на холинергические воздействия.

Показано, что при инкубации гладкомышечных сегментов воздухоносных путей с интерлейкином 5 усиливаются сократительные реакции на гистаминергические воздействия, уменьшается степень расслабления на адренергические воздействия как у интактных, так и у сенсибилизированных животных.

Впервые показано, что растворимая субъединица рекомбинантного рецептора интерлейкина 5 дозозависимо снижает эффект экзогенного интерлейкина 5, а инкубация с рецептором сегментов сенсибилизированных (но не интактных) животных подавляет гистаминергические сократительные реакции.

С помощью метода математического моделирования показано, что сократительные реакции гладких мышц воздухоносных путей могут быть описаны системой кинетических уравнений обратимой химической реакции между лигандом и мембранным рецептором, сопровождающейся образованием комплекса лиганд-рецептор. Увеличение максимальной амплитуды ответа и сродства лиганда к рецептору отмечается после удаления респираторного эпителия, в условиях формирования сенсибилизации при условии сохранности эпителиального слоя и при инкубации с интерлейкином 5 независимо от сохранности эпителия. Снижение максимальной амплитуды сокращения и сродства лиганда к рецептору отмечается при инкубации сегментов сенсибилизированных животных с а-субъединицей рецептора интерлейкина 5.

Научно-практическая значимость:

Результаты исследования вносят вклад в развитие фундаментальных представлений о механизмах локальной и дистантной регуляции сократительной активности гладкомышечных органов в условиях нормы и патологии. Полученные результаты позволяют определить перспективные направления поиска новых способов фармакологической коррекции расстройств респираторной системы. Разработанный способ оценки гиперреактивности воздухоносных путей у экспериментальных животных используется в Центральной научно-исследовательской лаборатории СибГМУ.

преподавании: курсов «Биофизика органов дыхания», «Биофизика гладких мышц», «Биофизика рецепции», «Внутриклеточные сигнальные системы». Модель бронхиальной астмы используется в научных исследованиях лаборатории биохимии ЦНИЛ Сибирского государственного медицинского университета,

Апробация работы. Основные результаты диссертации обсуждены на: на Пироговской научной конференции студентов - Томск 2000, Втором конгрессе молодых учёных и специалистов «Научная молодёжь на пороге XXI века» - Томск 2001, на Пироговской научной конференции студентов - Томск 2001, на Конференции, посвященной 150-летию член.-корр., профессора А.С. Догеля -Томск СГМУ 2002, Ш Международном конгрессе молодых учёных и специалистов «Науки о человеке» - Томск 2002, IV Съезде физиологов Сибири с международным участием - Новосибирск 2002, 12 Национальном Конгрессе по болезням органов дыхания - Москва 2002, , IV Международном конгрессе молодых учёных и специалистов «Науки о человеке» - Томск 2003, на Всероссийской научно-практической конференции «Электронные средства и системы управления» - Томск 2003, на четвертой международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке».—Москва 2003г.

Основные результаты диссертации опубликованы в 22 печатных работах.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах

машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», описания собственных результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 38 рисунками. Список литературы содержит 189 источников, из них 65 отечественных и 124 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Объектом исследования служили изолированные кольцевые гладкомышечные сегменты бронхов половозрелых морских свинок - самцов. Животные экспериментальной группы сенсибилизировались трехкратными подкожными инъекциями 0,1 мл на 100 г. массы тела животного 0,25% раствора овальбумина в физиологическом растворе (промежуток между инъекциями 3-4 дня). На 21 день животные подвергались ингаляционному воздействию аэрозоля того же раствора. Животные контрольной группы (интактные) подвергались воздействию физиологического раствора по аналогичной схеме.

Методика исследования: механическое напряжение (МН) кольцевых гладкомышечных сегментов бронхов регистрировали механотроном 6МХ1Б в условиях, близких к изометрическим, при температуре 37 °С в аэрируемом растворе Кребса. Исследования проводились на сегментах с сохраненным эпителием (интактных) и на деэпителизированных сегментах, при этом эпителий

удалялся механически, вращением деревянного шпателя в просвете сегмента в течение 1 минуты.

Перед началом исследования сегменты тестировались воздействием гиперкалиевого раствора Кребса (40 мМ), амплитуда ответа на который принималась за 100%. Величины сократительных ответов на тестирующие растворы оценивались в % от амплитуды этого контрольного сокращения.

Для изучения влияния интерлейкина 5 и рецептора интерлейкина 5 деэпителизированные сегменты инкубировались в течение 18 часов в термостате при температуре 25°С в среде RPMI-1640 с добавлением интерлейкина в концентрации 0,1 мкг/мл и/или а-субъединицы рецептора интерлейкина 5 в концентрациях 0,1; 0,5 и 1 мкг/мл.

Анализ данных проводился при помощи программы Statistica 6.0 for Windows фирмы Statsoft. Полученные данные представлены в виде «среднее ± ошибка среднего» (Х±т). Проверку на нормальность проводили с использованием критерия Колмогорова-Смирнова. Для оценки достоверности различий парных выборок использовались U критерий Манна Уитни и Т-критерий Вилкоксона.

Используемые растворы:

Раствор Кребса следующего состава (в мМ): NaCl - 120,4; КС1 - 5,9; СаС12 -2,5; MgCl2 - 1,2; глюкозы - 11,5; трис(оксиметил)-аминометана- 15,5; рН = 7,36+0,01.

Модифицированные растворы Кребса: Гиперкалиевые растворы с концентрацией КС1 40, 60, 80, 100 и 120 мМ.

Тестирующие растворы готовились на основе раствора Кребса и его модификаций с добавлением соответствующих реактивов.

Используемые реактивы: пилокарпин, гистамин, сальбутамол (все производства России), овальбумин (ICN Biomedicals, Inc., США), рекомбинантный человеческий интерлейкин 5 (Biosourœ International, Inc., США), рецептор интерлейкина 5 (R&D Systems Inc., США).

Методика расчета кинетических характеристик: Нелинейное оценивание изменений механического напряжения гладкомышечных сегментов проводилось с помощью программы Statistica 6.0 for Windows фирмы Statsoft методом Rosenbrock and quasi-Newton.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Морфологические изменения в стенке воздухоносных путей морских свинок при формировании гиперрсактивности бронхов

При морфологическом исследовании сегментов бронхов определялась слизистая, собственная пластинка слизистой, волокнисто-хрящевая оболочка. Среди эпителиальных клеток преобладали эпителиоциты с признаками

дистрофии: у них отсутствовали реснички на апикальной стороне, наблюдались грубая зернистость в цитоплазме, глыбчатость хроматина, пикноз ядра. Базальная мембрана извита и местами утолщена. В собственной пластинке слизистой оболочки - отек, скопление отечной жидкости отмечается под базальной мембраной и периваскулярно. В клеточном инфильтрате пластинки слизистой оболочки определялись дегранулированные эозинофилы и тучные клетки, которые локализовались, преимущественно, под базальной мембраной. Зоны локализации клеточного инфильтрата сочетались с эксфолиацией бронхиального эпителия в просвет бронха. Мышечные волокна бронхиальной стенки гипертрофированны.

В целом, гистологическая картина бронхов у морских свинок после сенсибилизации овальбумином во многом сходна с таковой у больных атопической бронхиальной астмой [Васильев П.Н. и др., 1974; Непомнящих Г.И., 1997]. Это дает основание рассматривать полученные далее результаты и в аспекте анализа механизмов патогенеза данного заболевания.

2. Исследование гистаминергических сократительных реакций гладких мышц бронхов морских свинок в условиях формирования гиперреактивности воздухоносных путей

В предварительной серии экспериментов была определена концентрация гиперкалиевого раствора Кребса, вызывающего полумаксимальное сокращение сегментов бронхов. Она оказалась равна 40 мМ КС1.

В первой серии экспериментов изучалось влияние гистамина в концентрациях 0,1 нМ - 100 мкМ на сократительную активность интактных сегментов бронхов морских свинок контрольной группы. Все сегменты отвечали на воздействие гистамина в концентрациях 0,01 мкМ - 100 мкМ дозозависимым сокращением (рис. 1). Максимальная амплитуда сокращения сегментов на гистамин в концентрации 100 мкМ составила 40,96±2,44 % от контрольного сокращения на гиперкалиевый раствор Кребса (n=15). Гистамин вызывает сокращение гладких мышц (ГМ), взаимодействуя со специфическими гистаминовыми рецепторами плазмолеммы. Происходит инициация рецептор-управляемого входа Cai+ в ГМ, освобождае€а2яиз внутриклеточных депо и активируется фосфолипаза С [Ходоров Б.И. и др., 1976; Black J. et al., 1986].

Деэпителизированные сегменты животных контрольной также отвечали дозозависимым сокращением на гистамин в концентрациях 0,01 мкМ - 100 мкМ (рис. 1). Максимальная амплитуда сокращения на гистамин в концентрации 100 мкМ была выше, амплитуды сокращения интактных сегментов и составила 53,65±1,82 % (р<0,05, п=9). Различия в сократительных реакциях деэпителизированных и интактных сегментов могут объясняться тем, что при действии гистамина эпителий способен вырабатывать релаксирующие факторы,

такие как, например, оксид азота, и тем самым уменьшать амплитуду контрактильных реакций [Капилсвич Л.В., 2001; Анфиногенова Я.Д., 1997]. Поэтому при удалении эпителия амплитуда сокращений гладких мышц повышается.

Рис. 1. Зависимость механического напряжения (МН) интактных (сплошная линия) и деэпителн-зированных (пунктирная линия) гладкомышсчных сегментов бронхов морских свинок контрольной группы от концентрации гистамина. По оси ординат - механическое напряжение в процентах от амплитуды контрольного сокращения на

гиперкалиевый раствор Кребса (МН, %). По оси абсцисс - десятичный логарифм концентрации гистамина (Lg С). * - достоверность различий в амплитудах сократительных реакций сегментов с сохраненным эпителием и без эпителия.

В следующей серии экспериментов изучались сократительные реакции на воздействие гистамина интактных сегментов сенсибилизированных морских свинок (экспериментальной группы). Все исследуемые сегменты отвечали сокращением на воздействие гистамина в концентрациях 0,1 мкМ - 100 мкМ, максимальная амплитуда сокращения на концентрацию 100 мкМ составила 73,36±6,32 % (n=13). При этом на концентрации гистамина 10 и 100 мкМ, амплитуда сокращения сегментов животных экспериментальной группы была достоверно выше амплитуды сокращения сегментов животных контрольной группы (несенсибилизированных) (р<0,05). Известно, что в условиях сенсибилизации овальбумином на бронхах повышена экспрессия рецепторов гистамина первого типа [Richard W.C. et al., 1999]. Этим можно объяснить более выраженное сократительное действие гистамина на гладкие мышцы бронхов, полученных от животных экспериментальной группы.

Дсэпителизированные сегменты воздухоносных путей

сенсибилизированных морских свинок также отвечали дозозависимым сокращением на воздействие гистамина в концентрациях 0,1 мкМ - 100 мкМ. Максимальная амплитуда сокращения сегментов на гистамин в концентрации 100 мкМ составила 89,74±7,49 % (n=18) (рис. 2). Таким образом, амплитуда сокращения сегментов без эпителия, выделенных от сенсибилизированных животных, была достоверно выше амплитуды сокращения деэпителизированных сегментов животных контрольной группы на концентрации гистамина 10 мкМ (р<0,05) и 100 мкМ (р<0,05) (рис. 2). Этот факт также может объясняться

Ml "Л

увеличением количества рецепторов к гистамину на мембране ГМ воздухоносных путей в условиях сенсибилизации [ Richard W.C. et al., 1999].

Гистаминергические сократительные реакции интактных и деэпителизированных сегментов сенсибилизированных морских свинок не различались по амплитуде. По-видимому, при сенсибилизации овальбумином эпителий повреждается в первую очередь (об этом свидетельствуют результаты морфологических исследований), и снижается продукция релаксирующих факторов [Busse W.W., Sedgwick J.B., 1992, Zou J et al., 2002].

Рис. 2. Зависимость механического напряжения (МН) гладкомышеч-ных сегментов бронхов интактных (сплошная линия) и сенсибилизированных (пунктирная линия) морских свинок от концентрации гистамина (эпителий удалён). * - достоверность различий в амплитудах сократительных реакций сегментов интактных и сенсибилизированных морских свинок. Остальные обозначения — см. рис. 1.

2. Исследование адрснергических сократительных реакций гладких мышц бронхов морских свинок в условиях формирования гиперреактивности

воздухоносных путей Сальбутамол, агонист ß2-адрснорецепторов, в концентрациях 0,01 нМ — 10 мкМ вызывал дозозависимое снижение механического напряжения интактных сегментов животных контрольной группы, предварительно предсокращенных гиперкалиевым раствором Кребса (рис. 3). Максимальная величина расслабления на концентрацию сальбутамола 10 мкМ в контрольной группе достигала 81,42+2,66 % от амплитуды предсокращения (n=14). Стимуляции Рг-адренорецепторов гладких мышц воздухоносных путей активирует аденилатциклазу, что приводит к повышению содержания внутриклеточного цАМФ, который посредством активации кальций - зависимой калиевой проводимости способствует реполяризации мембраны, а за счет влияния на кальциевые насосы плазмолеммы и саркоплазматического ретикулума и фосфорилирования киназы легких цепей миозина - расслаблению ГМ [Helmerich E.J., Pfeuffer Т., 1985, Scheid C.R., Honeyman T.W., Fay F.S., 1979].

При изучении воздействия сальбутамола на деэпитслизированные сегменты морских свинок контрольной группы, предсокращенные гиперкалиевым раствором Кребса, было выявлено дозозависимое расслабление всех сегментов на концентрации 0,01 нМ - 10 мкМ, максимальная амплитуда расслабления составила 59,59±3,05 % от амплитуды предсокращения (п=11). При этом степень расслабления гладких мышц на воздействие сальбутамола в концентрациях 1 мкМ (р<0,05) и 10 мкМ была достоверно больше у деэпителизированных сегментов (р<0,05) (рис. 3). Таким образом, удаление эпителия потенцировало расслабление сегментов бронхов морских свинок контрольной группы. Можно предположить, что катехоламины на фоне предсокращения гиперкалиевым раствором Кребса модулируют влияние эпителия либо за счет угнетения выработки релаксирующих факторов, либо - усиления продукции констрикторных, на роль которых претендуют простагландины, лейкотриены [Ndukwu J.M. et а1., 1994, Moffatt J.D. а а!., 2004].

Рис. З. Зависимость механического напряжения (МН) интактных (сплошная линия) и деэпителизи-рованных (пунктирная линия) гладкомышечных сегментов бронхов морских свинок контрольной группы, предсокращенных гиперкалиевым раствором Кребса, от концентрации сальбутамола. По оси ординат - механическое напряжение в процентах от амплитуды предсокращения на гиперкалиевый раствор Кребса (МН, %). По оси абсцисс - десятичный логарифм концетрации сальбутамола

* - достоверность различий в амплитудах ответных реакций сегментов с сохраненным эпителием и без Интактные сегменты сенсибилизированйЖто®8лъбумином морских свинок, предсокращенные гиперкалиевым раствором Кребса, отвечали дозозависимым расслаблением на воздействие сальбутамола в концентрациях 0,01 нМ - 10 мкМ, максимальная величина расслабления на концентрацию 10 мкМ достигала 70,42±2,06 % от амплитуды предсокращения (п=8). На концентрации сальбутамола 1 мкМ и 10 мкМ степень расслабления интактных сегментов экспериментальной группы была достоверно больше, чем интактных сегментов животных контрольной группы (р<0,05).

Деэпителизированные сегменты сенсибилизированных морских свинок,

предсокращенные гиперкалиевым раствором Кребса, также отвечали дозозависимым расслаблением на воздействие сальбутамола в концентрациях 0,1 нМ — 10 мкМ. Максимальное расслабление на воздействие сальбутамола в концентрации 10 мкМ составило 77,99±3,41 % от амплитуды предсокращения (n=14) (рис. 4). Достоверной разницы в реакциях расслабления на воздействие сальбутамола интактных и деэпителизированных сегментов сенсибилизированных животных выявлено не было. Отсутствие различий в величинах расслабления интактных и деэпителизированных сегментов экспериментальной группы на действие сальбутамола может объясняться тем, что такие изхменения эпителия при сенсибилизации как десквамация, гиперплазия бокаловидных клеток и отек приводят к необратимым повреждениям и потере эпителием способности выделять не только релаксирующие факторы, но также и констрикторные [Fahy J.V. et al., 2000, Fahy J.V., 2001].

При сравнении амплитуд расслабления деэпителизированных сегментов контрольной и экспериментальной групп, предсокращенных гиперкалиевым раствором Кребса, было обнаружено достоверно более сильное расслабление сегментов животных контрольной группы на концентрации сальбутамола 1 мкМ (р<0,05) и 10 мкМ (р<0,05) (рис. 4). Полученные результаты косвенно подтверждают данные ауторадиографических исследований, свидетельствующие об уменьшении количества Р-адренорецепторов как в эпителии, так и в гладких мышцах при сенсибилизации животных [Mu J.Y., Bi S., 1989].

®т

РИС. 4. Зависимость механи-

ческого напряжения (МП) де-

эпителизированных гладкомы-

шечных сегментов бронхов

морских свинок контрольной

(сплошная линия) и экспери-

ментальной (пунктирная ли-

гиперкалиевым раствором Кре-

бса, от концентрации сальбу-

тамола.

По оси ординат - механическое напряжение в процентах от амплитуды предсокращения на

иевыи раствор Кребса

Till, /V).

о оси абсцисс - десятичный

Щ, -11 -1С -9 -8 -7 -6

-5 мола (Lg С).

IgC логарифм концентрации сальбута-

* - достоверность различий в ампли гудах ответных реакций сегментов интактных и сенсибилизированных морских свинок.

В следующей серии экспериментов при изучении воздействия сальбутамола на механическое напряжение гладкомышечных сегментов в качестве предсокращающего фактора был использован гистамин. При этом у животных контрольной группы величина расслабления в ответ на воздействие сальбутамола была выше у сегментов с сохраненным эпителием. В сегментах сенсибилизированных животных эпителий не оказывал модулирующего влияния на адренергические реакции гладких мышц. По-видимому, при сенсибилизации эпителиальный слой утрачивает способность продуцировать релаксирующие факторы [Капилевич Л.В., 2001; Анфиногенова Я.Д., 1997].

3. Исследование холинэргических сократительных реакций гладких мышц бронхов морских свинок в условиях формирования гиперрсактивности

воздухоносных путей

В первой серии экспериментов было изучено влияние пилокарпина, агониста М2-, М3-холинорецепторов, на интактные сегменты контрольной группы. Пилокарпин вызывал дозозависимос сокращение всех интактных сегментов в концентрации 0,1 нМ — 100 мкМ. Максимум амплитуды сокращения наблюдался на 100 мкМ пилокарпина и составил 69,87+2,54 % (п=12). При действии пилокарпина на деэпителизированные сегменты контрольной группы также наблюдалось дозозависимое сокращение всех сегментов в ответ на концентрации агониста 0,1 нМ - 100 мкМ. При этом максимальная амплитуда сокращения при действии 100 мкМ пилокарпина была достоверно меньше, чем у интактных сегментов и составила 43,27+3,24 % (п=18, р<0,001).

В следующей серии экспериментов было исследовано влияние пилокарпина на интактные сегменты сенсибилизированных морских свинок. Все исследуемые сегменты отвечали сокращением, максимальная амплитуда составила 58,54+1,36 % (п=9) на концентрацию пилокарпина 100 мкМ. Достоверной разницы между амплитудами сократительных реакций интактных сегментов контрольной и экспериментальной группами выявлено не было. Увеличение механического напряжения также наблюдалось при воздействии пилокарпина на деэпителизированные сегменты сенсибилизированных морских свинок. Максимум сокращения наблюдался на 100 мкМ пилокарпина, амплитуда равнялась 74,46+3,71 % (п=13). Достоверных различий между амплитудами сокращения интактных и деэпителизированных сегментов экспериментальной группы выявлено не было.

Стимуляция М2-холинорецепторов приводит к подавлению активности аденилатциклазы, вероятно это связано с оккупацией М2-холинорецепторв сарколеммы, сопряженных с аденилатциклазой посредством в1-бслка [Сергеев П.В., 1987]. Воздействие на М3-холинорецпторы сопровождается повышением

внутриклеточной концентрации Са2\ Эти процессы приводят к развитию сокращения. Увеличение амплитуды сократительных реакций изолированных гладких мышц воздухоносных путей на воздействие пилокарпина после сенсибилизации может объясняться повышением количества холинорецепторов [ Tohda Y. et al., 2002].

Снижение сократительной активности ГМ после удаления эпителия позволяет предположить, что при холинергической стимуляции либо угнетается продукция релаксирующих факторов респираторным эпителием, либо усиливается выработка констрикторных факторов [Ndukwu J.M. et al., 1994, Moffatt J.D. et al., 2004]. В условиях сенсибилизации способность эпителия модулировать сократительные реакции гладких мышц на холинергические воздействия утрачивается.

4. Влияние интерлейкииа 5 и рецептора интерлейкина 5 на сократительные реакции гладких мышц бронхов морских свинок в условиях формировании пшерреактивности воздухоносных путей

При изучении непосредственного влияния интерлейкина 5 (ИЛ-5) на сократительные реакции сегментов было установлено, что ИЛ-5 не оказывал влияние на механическое напряжение сегментов.

Инкубация с ИЛ-5 приводила к существенному увеличению амплитуды сократительных реакций деэпитслизированных сегментов бронхов на воздействие гистамина как у сенсибилизированных животных, так и у животных контрольной группы. Было выявлено повышение амплитуды сокращения на воздействие гистамина в концентрации 10 и 100 мкМ как в контрольной (р<0,05, п=13), так и в экспериментальной группах (р<0,05, n=9) (рис. 5).

При воздействии сальбутамола на инкубированные с ИЛ-5 деэпителизированные сегменты, предсокращенные гиперкалиевым раствором Кребса, наблюдалось уменьшение степени расслабления как сегментов животных контрольной группы, так и сенсибилизированных животных.

Поскольку инкубация сегментов с ИЛ-5 приводит к столь значительному изменению их реактивности на гистамин и сальбутамол, то можно предположить, что ИЛ-5 оказывает влияние на функциональное состояние ГМ. Действие данного цитокина может опосредоваться через рецепторный комплекс [ Takaki S., 1999, Takatsu К., 1992]. Рецепторы к ИЛ-5 обнаружены в гладкомышечных клетках воздухоносных путей [Bi Y., Yang Z., Wang С, 1998, Wang Y.X. et al., 2004]. По-видимому, взаимодействуя с рецепторами мембраны гладкомышечных клеток, ИЛ-5 способен модулировать сократительные свойства ГМ. Это может объяснять феномен ИЛ-5-опосредованной бронхиальной гиперреактивности при отсутствии эозинофильного повреждения тканей [Bi Y. et al., 1999].

Для проверки рецептор-специфичности описанной выше способности ИЛ-5 потенцировать гиперреактивность бронхов, в следующей серии экспериментов было проведено одновременное инкубирование сегментов в среде с добавлением ИЛ-5 и а-субъединицей рецептора данного цитокина в концентрациях 0,1; 0,5 и 1 мкг/мл. И в контрольной и в экспериментальной группах добавление в среду с ИЛ-5 его рецептора приводило к достоверному снижению амплитуды сократительных реакций на гистамин по сравнению с амплитудами сокращения при инкубации только с ИЛ-5. При этом величина снижения сокращения зависела от концентрации рецептора.

Рис. 5. Зависимость механического напряжения (МН) гладкомышечных сегментов бронхов интактных (А) и сенсибилизированных (В) морских свинок от концентрации гистамина.

Сплошнаялиния-деэпителизированные сегменты.

Пунктирнаялиния - деэпителизированные сегменты, инкубированные с ИЛ-5.

По оси ординат - механическое напряжение в процентах от амплитуды контрольного сокращения на гиперкалиевый раствор Кребса (МН, %).

По оси абсцисс - десятичный логарифм концентрации гистамина (^ С).

* - достоверность различий в амплитудах сократительных реакций неинкубированных сегментов и инкубированных с ИЛ-5.

Проведенные эксперименты с добавлением в среду при инкубации одновременно а-субъединицы рецептора ИЛ-5 и самого ИЛ-5 свидетельствуют о способности рецептора связывать экзогенный ИЛ-5, устраняя его действие, направленное на повышение реактивности гладких мышц воздухоносных путей на воздействие гистамина.

В следующей серии экспериментов было изучено влияние рецептора ИЛ-5 на сократительные реакции сегментов, не предобработанных ИЛ-5. Инкубация гладкомышечных сегментов только с а-субъединицей рецептора ИЛ-5 приводила

к снижению гистаминертрических сократительных реакций только сегментов сенсибилизированных животных. Сократительные реакции на гистамин сегментов животных контрольной группы при инкубации с рецептором ИЛ-5 не изменялись (рис. 6). Полученные данные позволяют предположить, что в условиях сенсибилизации повышается содержание в ткани эндогенного ИЛ-5 и при инкубации с рецептором последний способен связывать эндогенный интерлейкин, выполняя роль своеобразной «ловушки».

А В

Рис. 6. Зависимость механического напряжения (МН) гладкомышечных сегментов бронхов интактных (А) и сенсибилизированных (В) морских свинок от концентрации гисгамина.

Сплошнаялиния -деэпигелизированные сегменты.

Пунктирная линия — деэпигелизированные сегменты, инкубированные с рецептором ИЛ-5 в концентрации 1 мкг/мл.

По оси ординат - механическое напряжение в процентах от амплитуды контрольного сокращения на гиперкалиевый раствор Кребса (МН, %)

По оси абсцисс - десятичный логарифм концентрации гистамина (^ С) * - достоверность различии в амплитудах сократительных реакций нсинкубированных сегментов и инкубированных с рецептором ИЛ-5.

5. Кинетическая модель сократительных реакций гладких мышц

воздухоносных путей Для количественного описания взаимодействия физиологически активных соединений с рецепторами мембран широко используется кинетическая теория взаимодействия лигандов с рецепторами [Ariense E.J., 1964; Говырин В.А., 1994]. Математическое выражение этой теории было предложено Кларком [ Clark A.J, 1926]. С помощью этого уравнения по имеющимся экспериментальным данным можно определить кинетические параметры, описывающие определенную сократительную реакцию, такие как максимальный эффект реакции

отражающий количество рецепторов, и константу диссоциации лиганд-рецепторного комплекса (К¿Д отражающую сродство рецептора к медиатору. Степень соответствия данного уравнения экспериментальным данным выражается величиной R (квадрат смешанной корреляции), соответствие считается достоверным, если R > 0,99.

При оценке взаимодействия гистамина с рецепторами гладкомышечных клеток было выявлено, что количество рецепторов и сродство рецепторов к гистамину повышаются: при сенсибилизации, при удалении эпителия и при инкубации сегментов с ИЛ-5.

Инкубация сегментов экспериментальной группы с а-субъединицей ИЛ-5 снижает величину сократительного ответа на воздействие гистамина и сродство гистамина к рецептору.

Заключение

В современной физиологии и медицине много внимания уделяется изучению механизмов регуляции электрических и сократительных свойств гладких мышц внутренних органов. Исследование этих свойств помогает раскрыть глубинные механизмы патогенеза заболеваний и разработать новые способы коррекции патологических состояний [Баскаков М.Б., Медведев М.А., 1987; Капилевич Л.В. и др., 1994]. Особое значение такие исследования имеют для системы дыхания, так как значительная часть заболеваний респираторной системы связана с нарушением регуляторных механизмов гладкомышечных клеток стенки воздухоносных путей [Абросимов В.Н., 1990; Sato Y. Et al., 1998].

Перспективным путем выяснения упомянутых механизмов является моделирование дисфункции респираторного тракта у экспериментальных животных [Елисеева Е.В., 1997; Tohda Y. et al., 2002]. В данном исследовании моделью дисфункции респираторного тракта явились сенсибилизация морских свинок овальбумином и инкубация гладкомышечных сегментов с интерлейкином 5.

Гистологическая картина бронхов у морских свинок после сенсибилизации овальбумином во многом аналогична таковой у людей больных атопической бронхиальной астмой (БА) [Васильев П.Н. и др., 1974, Непомнящих Г.И., 1997]. Полученные данные позволяют провести определенные параллели между гиперреактивностью воздухоносных путей морских свинок при сенсибилизации овальбумином и гиперреактивностью бронхов у больных бронхиальной астмой.

увеличение максимальной амплитуды сокращения сегментов сенсибилизированных животных может свидетельствовать об увеличении в них количества рецепторов к гистамину. Это может объяснить более выраженное действие гистамина на гладкие мышцы бронхов, полученных от животных экспериментальной группы.

Увеличение амплитуды сократительных реакций изолированных гладких мышц воздухоносных путей на холинергические воздействия при сенсибилизации может также объясняться повышением количества М3-холинорецепторов [Tohda Y. et al., 2002], стимуляция которых ведет к входу Са2+ в клетку и развитию сокращения.

Уменьшение степени расслабления гладкомышечных сегментов сенсибилизированных животных при действии Р2-адреномиметика, вероятно, связано с уменьшением количества Р2-адренорецепторов [Mu J.Y., Bi S., 1989].

Было выявлено, что функции эпителия интактных животных при адреиергических воздействиях зависят от иредсокращающего фактора. Если предсокращение проводится гиперкалиевым раствором Кребса, то эпителий снижает степень расслабления, по-видимому, выделяя констрикторные факторы, на роль которых претендуют ацетилхолин, простаиоиды и пептидсодержащие лейкотриены С4 И Е4 [Moffatt J.D., Cocks Т.М., Page СР., 2004, Ndukwu J.M. et al., 1994]. При предсокращении гистамином эпителий вовлекается в реакции расслабления, усиливая их, видимо, выделяя релаксирующий фактор, возможно, NO [Ellis J.L., Conanan N., 1994]. При гистаминергических воздействиях эпителий интактных морских свинок снижает амплитуду контрактильных реакций, а при холинергических воздействиях - повышает ее.

При сенсибилизации происходит нарушение целостности эпителиального пласта, возникают необратимые органические изменения стенки воздухоносных путей, это ведет к дефициту нитроксидергической бронхорелаксации, потере эпителием эндокринных функций [Сепиашвили Р.И. и др., 2003, Zou J. et al., 2002]. Эпителий утрачивает способность модулировать ответные реакции гладких мышц на различные воздействия. Таким образом, это может быть причиной отсутствия различий между сократительными реакциями сегментов с эпителием и без эпителия у сенсибилизированных морских свинок.

Выявленное увеличение сократительных реакций гладких мышц бронхов на воздействие гистамина у животных обеих групп при инкубации сегментов с ИЛ-5 может развиваться за счет взаимодействия данного интерлейкина со своими рецепторами в гладкомышечных клетках. ИЛ-5 - индуцированное развитие гиперреактивности гладких мышц бронхов может играть определенную роль в механизмах развития бронхиальной астмы. При этом инкубация гладкомышечных сегментов с данным цитокином, возможно, посредством тех же механизмов

подавляет дилятационныс реакции на сальбутамол, что может обуславливать снижение чувствительности воздухоносных путей к катехоламинам при БА.

Наблюдаемое уменьшение сократительных реакций гладкомышечных сегментов при их инкубации с рецептором ИЛ-5 может свидетельствовать о способности растворимого рецептора связывать как экзогенный интсрлейкин, добавленный в среду при инкубации, так и эндогенный, продуцируемый клеточными элементами стенки воздухоносных путей сенсибилизированных животных.

Полученные результаты, на наш взгляд, позволяют обсудить перспективу использования растворимой формы я-субъединицы рецептора ИЛ-5 для блокирования действия этого интерлейкина на клетки, устраняя эффекты, опосредованные им. Такой подход может лечь в основу принципиально нового, патогенетически обоснованного способа коррекции бронхоспастических состояний.

Выявленные кинетические характеристики показали, что, реактивность на гистамин и сродство рецепторов к гистамину выше у сегментов экспериментальной группы, чем у сегментов контрольной группы. При удалении эпителия увеличивается максимальный эффект и сродство рецептора к медиатору в обеих группах животных.

Инкубация с ИЛ-5 повышает максимальную амплитуду сократительных реакций и сродство рецепторов к действующему медиатору - гистамину, как в контрольной группе, так и в экспериментальной. При инкубировании сегментов животных экспериментальной группы с а-субъединицей рецептора ИЛ-5 снижаются сократительные реакции на воздействие гистамина и сродство рецепторов к гистамину.

Выводы

1. Сенсибилизация овальбумином морских свинок приводит к формированию гипсрреактивиости воздухоносных путей, которая проявляется в увеличении амплитуды сократительных реакций на холииэргические и гистаминергические воздействия.

2. Характер адренергических сократительных реакций сегментов воздухоносных путей сенсибилизированных животных зависит от предсокращающего фактора: в условиях предсокращения гистамином адренергическая реактивность не изменялась, а предсокращение гиперкалиевым раствором Кребса угнетало адренергическое расслабление сегментов.

3. Респираторный эпителий угнетает сократительные реакции сегментов воздухоносных путей интактных животных на гистаминергические воздействия, потенцирует сократительные реакции на холинергические воздействия. Влияние эпителия на адренергические реакции зависит от прсдсокращающего фактора: они потенцировались при предсокращении гистамином и угнетались при предсокращении гиперкалиевым раствором Кребса. В условиях формирования гиперреактивности эпителий утрачивает способность модулировать ответные реакции гладких мышц воздухоносных путей.

4. Инкубация гладкомышечных сегментов воздухоносных путей с интерлейкином 5 потенцирует сократительные реакции на гистаминергические воздействия, уменьшает степень расслабления на адренергические воздействия как у интактных, так и у сенсибилизированных животных. Рекомбинантный рецептор интерлейкина 5 (растворимая фракция) дозозависимо нейтрализует эффект экзогенного интерлейкина 5, а инкубация с рецептором сегментов сенсибилизированных (но не интактных) животных угнетает гистаминергические сократительные реакции.

5. Кинетические параметры сократительных реакций гладких мышц бронхов, моделируемые на основе системы уравнений обратимой химической реакции между лигандом и мембранным рецептором, изменяются в условиях формирования гиперреактивности воздухоносных путей: максимальная амплитуда ответа и сродство рецепторов к гистамину увеличиваются после удаления респираторного эпителия, в условиях формирования сенсибилизации при условии сохранности эпителиального слоя и при инкубации с интерлейкином 5; и снижаются при инкубации сегментов сенсибилизированных животных с а-субъединицей рецептора интерлейкина 5.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гистаминергическая регуляция гладких мышц легочных сосудов. //Сборник трудов Конференции СНО СГМУ. Томск, 2000. - С. 66. (Соавт. Носарев А.В.)

2. Исследование механизмов гистамин-индуцированного сокращения гладких мышц сосудов круга кровообращения кролика. // Вестник СГМУ: ежеквартальное периодическое издание СМУ. -Томск, 2000. -N2 (Спец. вып.). -С. 126-127. (Соавт. Носарев А.В.)

3. Изучение механизмов адренэргической регуляции сосудов малого круга кровообращения. // Сборник трудов Конференции СНО СГМУ. - Томск, 2001, С. 199-200. (Соавт. Федоров Д.А.)

4. Роль эндотелия в регуляции гистаминэргических сократительных реакций гладких мышц легочной артерии кролика. // Вестник Российского государственного медицинского университета. - №2 (17), 2001, С. 133. (Соавт. Федоров Д.А.)

5. Адренэргическая регуляция гладких мышц легочных сосудов. //«Науки о человеке» - Материалы второго конгресса молодых учёных и специалистов «Научная молодежь на пороге XXI века». Томск, 17-18 мая 2001, С. 79. (Соавт. Носарев А.В.)

6. Особенности гистаминэргической регуляции гладких мышц легочных артерий кролика. //Бюлл. экспер. биол. и мед.-2001.-Т.132,Ш.-С. 142-144. (Соавт. Капилевич Л.В., Анфиногенова Я.Д., Баскаков М.Б., Носарев А.В., Медведев М.А.).

7. Морфофункциональная характеристика сосудистой стенки легочной аргерии кролика. //Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии под редакцией профессора С.В. Логвинова. - Томск: СГМУ, 2002.- с. 128 (сборник научных трудов, посвященный 150-лстия член.-корр., профессора А.С. Догеля. (Соавт. Капилевич Л.В., Баскаков М.Б., Фролов В.Н., Носарев А.В., Михуля Е.П., Анфиногенова Я.Д.)

8. Особенности регуляции тонуса гладких мышц легочной артерии кролика. //Материалы третьего международного конгресса молодых учёных и специалистов - «Науки о человеке». Томск, 16-17 мая 2002, С. 186. (Соавт. Носарев А.В.)

9. Особенности регуляции гладких мышц сосудистой стенки легочной артерии кролика. //Рос.Физ.ж.им.Сеченова-2002-Т.83,№,-С.452-458 (Соавт. Капилевич Л.В., Носарев А.В., Баскаков. М.Б., Анфиногенова Я.Д., Фролов В.Н., Медведев М.А.)

10. Особенности регуляции гладких мышц сосудистой стенки легочной артерии кролика. //Сб. тез. докл. мат. IV Съезда физиологов Сибири с межд. участием, Новосибирск, 2002- С.109.(Соавт. Капилевич Л.В., Носарев А.В., Баскаков М.Б., Анфиногенова Я.Д.)

11. Особенности адренэргической регуляции гладких мышц легочных артерий кролика. //Бюлл. экспер. биол. и мед.-2002.-Т.133,Ш.-С.47-50. (Соавт.

Капилевич Л.В., Анфиногенова Я.Д., Баскаков М.Б., Носарев А.В., Медведев М.Л.).

12. Особенности регуляции гладких мышц сосудистой стенки легочной артерии кролика. //Пульмонология, (12 нац. конгресс по болезням морг, дыхания) Москва, 2002- С. 143. (Соавт. Капилевич Л.В., Носарев Л.В., Анфиногенова Я.Д., Баскаков М.Б.)

13. Сократительные реакции гладких мышц воздухоносных путей при бронхиальной астме в эксперименте. // Бюллетень Сибирской медицины.- 2003. -Том2, №1. - С. 35-38. (Соавт. Капилевич Л.В., Носарев А.В., Сазонов А.Э., Геренг Е.А.)

14. Регуляция сократительной активности гладких мышц воздухоносных путей при модельной бронхиальной астме. // Сборник статей по материалам IV конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке». Томск, 15-16 мая 2003 г. С. 151-152. (Соавт. Носарев А.В., Высоких Е.В.)

15. Сократительные реакции гладких мышц воздухоносных путей при экспериментальной бронхиальной астме. // Вестник Российского государственного медицинского университета,- №2 (28), 2003, С. 164.

16. Исследование роли циклических нуклеотидов в регуляции механического напряжения сегментов легочных артерий кролика. // Сборник статей IV конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке», Томск, 15-16 мая, 2003 г. с. 167-168. (Соавт. Носарев А.В., Султанова А.Н.)

17. Влияние интерлейкииа-5 на сократительную активность гладкомышечных препаратов бронхов морских свинок. // Сборник статей по материалам IV конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке». Томск, 15-16 мая 2003 г. С. 161-162. (Соавт. Лсщёва И.С., Копьева А.П., Сазонов А.Э.)

18. Особенности регуляции гладких мышц дыхательного тракта при экспериментальной бронхиальной астме. // Научные труды 4-ой международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке». - Москва 23-25 мая 2003 г. С. 220-221.

19. Роль циклических нуклеотидов в регуляции тонуса легочных артерий кролика. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2003, Т.135, № 6, с. 714718. (Соавт. Капилевич Л.В., Носарев А.В., Баскаков М.Б.)

20. Морфологические особенности и механизмы регуляции тонуса стенки легочных артерий. // Пульмонология, 2003, Т. 13, №4, С. 51-57. (Соавт. Капилевич Л.В., Носарев А.В., Фролов В.Н., Баскаков М.Б., Анфиногенова Я.Д., Медведев М.А.)

21. Изменение сократительной активности гладких мышц воздухоносных путей при действии интсрлейкина-5. // Вестник Российского государственного медицинского университета,- №3 (34), 2004, С. 159-160. (Соавт. Зайцева Т.Н.)

22. Влияние блокаторов фосфодиэстеразы на механическое напряжение гладких мышц легочной артерии. // Вестник Российского государственного медицинского университета.- №3 (34), 2004, С. 174. (Соавт. Носарев А.В.)

Подписано в печать 23.04.2004 г Тираж 100 экз. Усл.печ.листов 1,0. Печать на ризографе. Отпечатано в лаборатории оперативной полиграфии СибГМУ 634050, г. Томск, Московский тракт, 2, тел. 53-04-08 Заказ № 450__Тираж 100 экземпляров

- 8 4 9 î

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Дьякова, Елена Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Физиологические особенности гладких мышц воздухоносных путей.

1.2. Экспериментальные модели в изучении механизмов развития бронхоспастических состояний.

1.2.1. Способы моделирования бронхоспастических состояний у экспериментальных животных.

1.2.2. Патоморфология легких при моделировании бронхоспастических состояний у животных.

1.2.3. Иммунологическая характеристика экспериментальной бронхиальной астмы.

1.2.4. Метаболические расстройства при моделировании бронхиальной астмы в эксперименте.

1.2.5. Оценка бронхоконстрикторных и бронхолитических эффектов фармакопрепаратов на экспериментальных моделях.

1.3. Роль интерлейкина 5 в патогенезе бронхиальной астмы.

ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследования.

2.2. Методика исследования.

2.3. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА III РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Морфологические изменения в стенке воздухоносных путей морских свинок при формировании гиперреактивности бронхов.

3.2. Особенности сократительных реакций гладких мышц воздухоносных путей в условиях формирования гиперреактивности

3.2.1. Исследование особенностей гистаминергической регуляции сократительных реакций гладких мышц воздухоносных путей морских свинок в условиях формирования гиперреактивности.

3.2.2. Исследование особенностей адренергической регуляции сократительных реакций гладких мышц воздухоносных путей морских свинок в условиях формирования гиперреактивности.

3.2.3. Исследование особенностей холинэргической регуляции сократительных реакций гладких мышц воздухоносных путей морских свинок в условиях формирования гиперреактивности.

3.3. Влияние интерлейкина 5 на соьсратительные реакции гладких мышц воздухоносных путей морских свинок в условиях формировании гиперреактивности.

3.4. Влияние рекомбинантного рецептора интерлейкина 5 на сократительные реакции гладких мышц воздухоносных путей морских свинок в условиях формирования гиперреактивности.

3.5. Кинетическая модель сократительных реакций гладких мышц воздухоносных путей.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сократительные свойства гладких мышц бронхов при формировании гиперреактивности воздухоносных путей"

Актуальность исследования:

Изучение механизмов регуляции электрических и сократительных свойств гладких мышц (ГМ) внутренних органов, выяснение патогенеза заболеваний и разработка способов коррекции функциональных расстройств является актуальной проблемой современной физиологии и медицины [9, 31]. Особое значение названная проблема имеет для системы дыхания. Значительная часть заболеваний респираторной системы связана с нарушением регуляторных механизмов гладкомышечных клеток стенки воздухоносных путей [1, 81, 154].

Перспективным путем выяснения этих механизмов является моделирование дисфункции респираторного тракта у экспериментальных животных [27, 99, 169]. Экспериментальные модели используются для изучения различных аспектов патогенеза и апробации новых способов лечения. В модельных экспериментах изучались активность тканевых и сывороточных ферментов, гормональный и иммунный статус, морфологические изменения тканей [6, 63, 131]. Однако в доступной литературе мы не обнаружили исследований сократительных свойств гладких мышц бронхов в условиях формирования гиперреактивности воздухоносных путей у животных, хотя именно нарушение тонуса и реактивности бронхов является конечным патогенетическим звеном многих бронхолегочных заболеваний, в том числе бронхиальной астмы.

Ранее была продемонстрирована ассоциация полиморфизма С-703Т гена интерлейкина 5 с атопической бронхиальной астмой [43]. Роль интерлейкина 5 в процессе развития эозинофилии в дыхательных путях была подтверждена с использованием моноклональных антител к интерлейкину 5 [89, 90, 106]. Исследования на трансгенных животных (нокаут-мышах по генам интерлейкина 5, растворимого рецептора интерлейкина 5 и животных с гиперэкспрессией этих генов) также подтверждают гипотезу о том, что интерлейкин 5 является одним из ключевых цитокинов, участвующих в развитии атопического воспаления при бронхиальной астме [85, 106, 138]. Интерлейкин 5 принимает непосредственное участие в развитии основных проявлений астмы, так как его гиперпродукция связана с эозинофилией в дыхательных путях и повышенной секрецией эозинофилами биологически активных веществ, которые стимулируют сокращение гладкой мускулатуры бронхов, секрецию слизи, вызывают альтерацию эпителия дыхательных путей, дегрануляцию тучных клеток и базофилов. Результатом чего является повреждение окружающих тканей [80, 178].

Исследования с использованием моноклональных антител к интерлейкину 5 и рецептору интерлейкина 5 показали, что анти-интерлейкин 5 терапия, помимо редукции эозинофильного воспаления, может приводить к снижению гиперреактивности дыхательных путей при астме и улучшать функцию легких. Однако в исследованиях на морских свинках с экспериментальной бронхиальной астмой было отмечено, что для угнетения гиперреактивности дыхательных путей необходимы более высокие дозы препаратов моноклональных антител к интерлейкину 5, чем для блокирования эозинофильного воспаления [90, 106].

Данные 8аЫ Б. е! а1 и Накопагвоп Н. е! а1 [101, 152] позволяют предположить, что интерлейкин 5 может непосредственно продуцироваться эпителиальными клетками воздухоносных путей и оказывать влияние на гладкие мышцы бронхов. Все это делает интерлейкин 5 перспективной терапевтической мишенью для селективного уменьшения тканевого воспаления, без иммунносупрессивных последствий, связанных с регулярным применением таких препаратов, как стероиды.

Все изложенное обуславливает актуальность и научную новизну настоящего исследования.

Цель работы:

Задачи:

Научная новизна:

Впервые показано, что предсокращающие факторы способны модулировать адренергические сократительные реакции деэпителизированных сегментов воздухоносных путей сенсибилизированных 7 животных: в условиях предсокращения гистамином адренергическая реактивность не изменялась, а использование гиперкалиевого раствора Кребса в качестве предсокращающего фактора угнетало адренергическое расслабление сегментов.

Научно-практическая значимость:

Результаты исследования внедрены в педагогический процесс на кафедре нормальной физиологии СибГМУ при преподавании курса «Физиология системы дыхания» и на кафедре биофизики и функциональной диагностики СибГМУ при преподавании курсов «Биофизика органов дыхания», «Биофизика гладких мышц», «Биофизика рецепции», «Внутриклеточные сигнальные системы». Модель бронхиальной астмы используется в научных исследованиях лаборатории биохимии ЦНИЛ Сибирского государственного медицинского университета.

Апробация работы. Основные результаты диссертации обсуждены: на Пироговской научной конференции студентов - Томск 2000, Втором конгрессе молодых учёных и специалистов «Научная молодёжь на пороге XXI века» - Томск 2001, на Пироговской научной конференции студентов -Томск 2001, на Конференции, посвященной 150-летию член.-корр., профессора A.C. Догеля - Томск СГМУ 2002, III Международном конгрессе молодых учёных и специалистов «Науки о человеке» - Томск 2002, IV Съезде физиологов Сибири с международным участием - Новосибирск 2002, 12 Национальном Конгрессе по болезням органов дыхания - Москва 2002, , IV Международном конгрессе молодых учёных и специалистов «Науки о человеке» - Томск 2003, на Всероссийской научно-практической конференции «Электронные средства и системы управления» - Томск 2003, на четвертой международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке».-Москва 2003г.

Основные результаты диссертации опубликованы в 22 печатных работах.

Положения, выносимые на защиту:

1. Сенсибилизация овальбумином морских свинок приводит к формированию гиперреактивности воздухоносных путей, которая проявляется в усилении сократительных реакций на холинэргические и гистаминергические воздействия. Адренергические сократительные реакции сегментов воздухоносных путей сенсибилизированных животных зависят от предсокращающего фактора: в условиях предсокращения гистамином адренергическая реактивность не изменяется, а при предсокращении гиперкалиевым раствором Кребса- угнетается.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», описания собственных результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 38 рисунками. Список литературы содержит 189 источников, из них 65 отечественных и 124 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Дьякова, Елена Юрьевна

ВЫВОДЫ

1. Сенсибилизация овальбумином морских свинок приводит к формированию гиперреактивности воздухоносных путей, которая проявляется в увеличении амплитуды сократительных реакций на холинэргические и гистаминергические воздействия.

3. Респираторный эпителий угнетает сократительные реакции сегментов воздухоносных путей интактных животных на гистаминергические воздействия, потенцирует сократительные реакции на холинергические воздействия. Влияние эпителия на адренергические реакции зависит от предсокращающего фактора: они потенцировались при предсокращении гистамином и угнетались при предсокращении гиперкалиевым раствором Кребса. В условиях формирования гиперреактивности эпителий утрачивает способность модулировать ответные реакции гладких мышц воздухоносных путей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В современной физиологии и медицине много внимания уделяется изучению механизмов регуляции электрических и сократительных свойств гладких мышц внутренних органов. Исследование этих свойств помогает раскрыть глубинные механизмы патогенеза заболеваний и разработать новые способы коррекции патологических состояний [9, 31]. Особое значение такие исследования имеют для системы дыхания, так как значительная часть заболеваний респираторной системы связана с нарушением регуляторных механизмов гладкомышечных клеток стенки воздухоносных путей [1, 81, 154].

Перспективным путем выяснения упомянутых механизмов является моделирование дисфункции респираторного тракта у экспериментальных животных [27, 99, 169]. В данном исследовании моделью дисфункции респираторного тракта явились сенсибилизация морских свинок овальбумином и инкубация гладкомышечных сегментов с интерлейкином 5.

Гистологическая картина бронхов у морских свинок после сенсибилизации овальбумином во многом аналогична таковой у людей больных атопической бронхиальной астмой (БА) [16, 37]. Полученные данные позволяют провести определенные параллели между гиперреактивностью воздухоносных путей морских свинок при сенсибилизации овальбумином и гиперреактивностью бронхов у больных бронхиальной астмой.

В основе острых аллергических реакций, например, бронхоспазма, лежит гиперчувствительность немедленного типа. Ее опосредуют биологически активные вещества, которые высвобождаются тучными клетками при взаимодействии аллергена с ^Е на поверхности клеток: гистамин, триптаза и др. [54]. При БА в бронхах повышена экспрессия рецепторов гистамина первого типа [148 Выявленное в данной работе увеличение максимальной амплитуды сокращения сегментов сенсибилизированных животных может свидетельствовать об увеличении в них количества рецепторов к гистамину. Это может объяснить более выраженное действие гистамина на гладкие мышцы бронхов, полученных от животных экспериментальной группы.

Увеличение амплитуды сократительных реакций изолированных гладких мышц воздухоносных путей на холинергические воздействия при сенсибилизации может также объясняться повышением количества М3-холинорецепторов [169], стимуляция которых ведет к входу Са~ в клетку и развитию сокращения.

Уменьшение степени расслабления гладкомышечных сегментов сенсибилизированных животных при действии р2-адреномиметика, вероятно, связано с уменьшением количества (32-адренорецепторов [133].

Было выявлено, что функции эпителия интактных животных при адренергических воздействиях зависят от предсокращающего фактора. Если предсокращение проводится гиперкалиевым раствором Кребса, то эпителий снижает степень расслабления, по-видимому, выделяя констрикторные факторы, на роль которых претендуют ацетилхолин, простаноиды и пептидсодержащие лейкотриены С4 и Е4 [130, 135]. При предсокращении гистамином эпителий вовлекается в реакции расслабления, усиливая их, видимо, выделяя релаксирующий фактор, возможно, N0 [91]. При гистаминергических воздействиях эпителий интактных морских свинок снижает амплитуду контрактильных реакций, а при холинергических воздействиях - повышает ее.

При сенсибилизации происходит нарушение целостности эпителиального пласта, возникают необратимые органические изменения стенки воздухоносных путей, это ведет к дефициту нитроксидергической бронхорелаксации, потере эпителием эндокринных функций [48, 75], потерей эпителием эндокринных функций [75, 189]. Эпителий утрачивает способность модулировать ответные реакции гладких мышц на различные воздействия. Таким образом, это может быть причиной отсутствия различий между сократительными реакциями сегментов с эпителием и без эпителия у сенсибилизированных морских свинок.

Выявленное увеличение сократительных реакций гладких мышц бронхов на воздействие гистамина у животных обеих групп при инкубации сегментов с ИЛ-5 может развиваться за счет взаимодействия данного интерлейкина со своими рецепторами в гладкомышечных клетках. ИЛ-5 -индуцированное развитие гиперреактивности гладких мышц бронхов может играть определенную роль в механизмах развития бронхиальной астмы. При этом инкубация гладкомышечных сегментов с данным цитокином, возможно, посредством тех же механизмов подавляет дилятационные реакции на сальбутамол, что может обуславливать снижение чувствительности воздухоносных путей к катехоламинам при БА.

Наблюдаемое уменьшение сократительных реакций гладкомышечных сегментов при их инкубации с рецептором ИЛ-5 может свидетельствовать о способности растворимого рецептора связывать как экзогенный интерлейкин, добавленный в среду при инкубации, так и эндогенный, продуцируемый клеточными элементами стенки воздухоносных путей сенсибилизированных животных.

Полученные результаты, на наш взгляд, позволяют обсудить перспективу использования растворимой формы а-субъединицы рецептора ИЛ-5 для блокирования действия этого интерлейкина на клетки, устраняя эффекты, опосредованные им. Такой подход может лечь в основу принципиально нового, патогенетически обоснованного способа коррекции бронхоспастических состояний.

121 рецептора к медиатору в обеих группах животных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Дьякова, Елена Юрьевна, Томск

1. Абросимов В.Н. Нарушения регуляции дыхания / В.Н. Абросимов. М., Медицина. - 1990. - 245 с.

2. Абуева P.M. Функциональное состояние холинэргических и адренергических рецепторов у лиц с предастмой и факторами риска развития бронхиальной астмы: Дисс. . канд. мед. наук / P.M. Абуева. М., 1989.- 133 с.

3. Анатомия человека: В 2 т. / Под ред. М.Р. Сапина. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1993. - 544 е.: ил. - Т. 1.

4. Анфиногенова Я. Д. Особенности эпителий-зависимых сократительных реакций гладких мышц в различных отделах респираторного тракта: Автореф. дис. . канд. мед. наук / Я.Д. Анфиногенова. Томск, 1997. - 21 с.

5. Базанов Г.А. Некоторые показатели крови кроликов при сенсибилизации / Г.А. Базанов, В.В. Смирнов, Т.Д. Табакова // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. Львов, 1986. - С. 17-18.

6. Баскаков М.Б. Кальмодулин в механизмах регуляции сократительной функции гладкой мускулатуры / М.Б. Баскаков, М.А. Медведев.// Бюлл. СО РАМН. 1984. - № 4. - С. 83 - 88.

7. Баскаков М.Б. Механизмы регуляции функций гладких мышц вторичными посредниками / М.Б. Баскаков, М.А. Медведев, Л.В. Капилевич и др. Томск, 1996.-154с.

8. Баскаков М.Б. Роль вторичных мессенджеров и Na/H-обмена в регуляции электрической и сократительной активности гладких мышц / М.Б. Баскаков, М.А. Медведев // Томск, 1987. С. 128 - 151.

9. Башмаков Ю.К. Общее содержание фосфолипидов в тканях и крови при сенсибилизации / Ю.К. Башмаков // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. Львов, 1986. - С. 15-16.

10. Башмаков Ю.К. Показатели обмена общих липидов при сенсибилизации / Ю.К. Башмаков, И.В. Головацкий // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. Львов, 1986. - С. 14-15.

11. Бойков А.К. Ультраструктура компонентов эпителия трахео-бронхиального дерева / А.К. Бойков, С.П. Бойкова, Л.Б. Тарасова // Архив патологии. 1989. - Т. 51, № 2, С. 85 - 89.

12. Бронхиальная астма. Сборник научных трудов / Под ред. Г.Б. Федосеева. М.: Медицина. - 1989. - 125 с.

13. Брусиловский Е.С. Экспериментальное воспроизведение бронхиальной астмы с применением пневмоцитотоксической сыворотки / Е.С. Брусиловский // Цитотоксины в современной медицине. Киев, 1966. — С. 155- 162.

14. Бурый A.A. Содержание глутатиона в ткани легких в кинетике сенсибилизации / A.A. Бурый // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. Львов, 1986. - С. 10-11.

15. Васильев П.Н. К морфологии дыхательных путей при бронхиальной астме / П.Н. Васильев, В.П. Быкова, В.П Довжик и др. //Архив патологии. 1974. - T.XXXVI, вып. 2.-С. 22-25.

16. Волков В.Т. Бронхиальная астма / В.Т. Волков, А.К. Стрелис. -Томск, 1996.-568 с.

17. Волхонская Т.Б. Выбор метода эфферентной терапии в лечении больных бронхиальной астмой / Т.Б. Волхонская, М.А. Колпаков // Бюллетень сибирского отделения РАМН. 2000. - №2. - С. 45-48.

18. Воробьева Т.В. Исследование бронхоспазмолитической эффективности препарата Витурид в условиях аллергического бронхоспазма / Т.В. Воробьева // Астма. 2003. Т.4, №1. - С. 68.

19. Галактионов В.Г. Иммунология: Учеб. для вузов / В.Г. Галактионов.- М.: МГУ, 1998.- 480с.

20. Герасин В.А. Бронхофиброскопическая оценка воспалительных изменений и гиперреактивности бронхов у больных бронхиальной астмой / В.А. Герасин, Г.Ф. Паламарчук, А.П. Кизела // Терапевт, архив. 1994. - С. 15-19.

21. Гланц С. Медико-биологическая статистика: Пер. с англ. / С. Гланц // М.: "Практика", 1999. 459 с.

22. Говырин В.А. Лиганд-рецепторные взаимодействия в молекулярной физиологии / В.А. Говырин, Б.С. Жоров. Спб.: Наука, 1994. -240с.

23. Григорян Л.Т. Содержание 6-кето-ПГ Б.ф, тромбоксана и ПГ Б2ф в крови больных бронхиальной астмой / Л.Т. Григорян, Т.А. Червинская // Клинич. медицина. 1993. - Т. 71, № 5. - С. 24 - 27.

24. Дьячук Г.И. Возможные пути регуляции кальциевого обмена / Г.И. Дьячук // Физиол.журн.СССР.- 1991.- Т.77, № 11,- С. 117-125.

25. Елисеева Е.В. Реакция нитроксидсинтазы и тучных клеток органов дыхания при действии адренергических веществ при бронхиальной астме: Автореф. дис. . канд. мед. наук/Е.В. Елисеева. Владивосток, 1997. -26 с.

26. Зашихин А.Л. Развитие и ультраструктура нейромышечных контактов гладкой мышечной ткани бронхов / А.Л. Зашихин// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1989, Т. 97, № 7. - С. 58 - 63.

27. Иммунология: В 3 т. / Под ред. У. Пол. М.: Мир. - 1989. - Т. 2. - 362 с.

28. Капилевич JI.В. Механизмы, обеспечивающие резистентность гладких мышц трахеи крысы к гистамину / Л.В. Капилевич, М.Б. Баскаков, М.А. Медведев и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1995. - N 9. - С. 283 - 285.

29. Капилевич Л.В. Эпителий-зависимая регуляция тонуса бронхов / Л.В. Капилевич, М.Б. Баскаков, М.А. Медведев и др. // Матер. Всерос. конф., Сыктывкар, 6-8 июля 1994. Сыктывкар, 1994. - С. 82 - 85.

30. Ковалишин В.И. Электронномикроскопическое исследование кожи при модели бронхиальной астмы / В.И. Ковалишин, В.А. Иванцов, -Л.В. Ющик // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. Львов, 1986.- С. 28-29.

31. Крутецкая З.И. Метаболизм фосфоинозитидов и формирование кальциевого сигнала в клетках / З.И. Крутецкая, O.E. Лебедев // Цитология. -1992. Т. 34, № 10.-С. 26-45.

32. Левицкий Д.О. Кальций и биологические мембраны / Д.О. ^ Левицкий М.: Высш. школа, 1990. - 124 с.

33. Митина Т.В. Показатели основного обмена при модели бронхиальной астмы и ее терапии церулоплазмином / Т.В. Митина, М.С. Регеда // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. Львов, 1986. - С. 35-36.

34. Михельсон М.Я. Ацетилхолин. О молекулярном механизме действия / М.Я. Михельсон, Э.В. Зеймаль. Л.: Наука, 1970. - 279с.

35. Непомнящих Г.И. Морфогенез и прижизненная патоморфологическая диагностика хронических патологических процессов в легких / Г.И. Непомнящих, Л.М. Непомнящих // Пульмонология. 1997. -№2. -С. 7-16.

36. Непомнящих Г.И. Патологическая анатомия и ультраструктура бронхов при хронических воспалительных заболеваниях легких / Г.И. Непомнящих. Новосибирск: Наука. - 1980. - 292 с.

37. Орлов С.Н. Кальмодулин / С.Н. Орлов // Итоги науки и техники. -М., 1987.-209 с.

38. Орлов С.Н. Са-насос плазматической мембраны / С.Н. Орлов // Кальций регулятор метаболизма. - Томск, 1987. - С. 74 - 96.

39. Орлов С.Н. Участие кальмодулина в регуляции электрического потенциала плазматической мембраны внутриклеточным кальцием / С.Н. Орлов, Г.М. Кравцов // Биохимия. 1983. - Т. 48, № 9. - С. 1447 - 1455.

40. Полтораков А.П. Кинетические модели одиночного мышечного сокращения / А.П. Полтораков, В.М. Чибрикин, JI.A. Пирузян // Биофизика.- 1978. Т. 23, № 1. - С. 105-109.

41. Пузырев В.П. Наследуемость уровня общего интерлейкина-5 и полиморфизм С-703Т гена IL-5 у больных бронхиальной астмой / В.П. Пузырев, М.Б. Фрейдин, JI.M. Огородова, О.С. Кобякова // Бюл. эксп. биол. и мед. Приложение 1. 2000. - С.-50-52.

42. Расмуссен Г. Циркуляция кальция и внутриклеточная передача сигнала / Г. Расмуссен // В мире науки. 1989. - № 12. - С. 36 - 43.

43. Регеда М.С. Влияние церулоплазмина на содержание в крови катехоламинов при модельном процессе бронхиальной астмы /М.С. Регеда // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. Львов, 1986. - С. 36.

44. Реутов В.П. Физиологическое значение гуанилатциклазы и роль окиси азота и нитросоединений в регуляции активности этого фермента /

45. B.П. Реутов, С.Н. Орлов // Физиология человека. 1993. - Т. 19, N 1. - С. 124- 137.

46. Саркисов Д.С. Воспроизведение болезней человека в эксперименте / Д.С. Саркисов, П.И. Ремезов. Москва, - 1960. - 780 с.

47. Сепиашвили Р.И. Роль оксида азота при бронхиальной астме / Р.И. Сепиашвили, М.Г. Шубич, В.Б. Карпюк // Астма. 2003. - Т. 4, № 1.1. C. 39.

48. Сергеев П.В. Рецепторы физиологически активных веществ / П.В. Сергеев, Н.Л. Шимановский М.: Медицина. - 1987. - 400 с.

49. Синопальников А.И. (32-агонисты: роль и место в лечении бронхиальной астмы / А.И. Синопальников, И.Л. Клячкина // Русский мед. журнал. -2002. -Т. 10, № 5 (149). С. 236-241.

50. Скок В.И., Шуба М.Ф. Нервномышечная физиология. Л., 1986.224с.

51. Соловьев А.И. цАМФ-зависимый механизм расслабления сосудистых гладких мышц при гипоксии, не связанной со снижением концентрации Са в миоплазме / А.И. Соловьев // Докл. АН СССР. 1985. -Т. 285, №5. - С. 1252 - 1255.

52. Тепперман Дж. Физиология обмена веществ и эндокринной системы: Пер. с англ. / Дж. Тепперман, X. Тепперман.- М.: Мир, 1989. 656 с.

53. Тузлукова Е.Б. Антигистаминные препараты / Е.Б. Тузлукова, Н.И. Ильина, Л.В. Лусс // Русский мед. журнал. 2002. - Т. 10, № 5 (149). -С. 269 - 272.

54. Федин А.Н. Действие адренергических веществ на гладкие мышцы трахеи крысы / А.Н. Федин, А. Д. Ноздрачев, Г. И. Рыбаков и др. // Физиол. ж. 1993. - Т. 79, № 11. - С. 59-63.

55. Чучалин А.Г. Бронхиальная астма и астмоподобные состояния / А.Г. Чучалин // Русский медицинский журнал. 2002. - Т. 10, №5(149). - С 232-235.

56. Чучалин А.Г. Гиперреактивность при заболеваниях органов дыхания / А.Г. Чучалин // Российский медицинский журнал. 2002,- Т.10, №23. - С. 5 - 10.

57. Шуба M. Ф. Механизмы возбуждения и сокращения гладких мышц мозговых сосудов / М.Ф. Шуба, Н. И. Гокина. Киев: Наукова думка, 1991.- 129 с.

58. Шуба М.Ф. Мембранные механизмы возбуждения гладкомышечных клеток / М.Ф. Шуба, В.А. Бурый // Физиол.журн. 1984. -Т. 30, № 5. - С. 545 - 559.

59. Ющик J1.B. Активность некоторых ферментов кожи морских свинок при модельном процессе бронхиальной астмы / Л.В. Ющик // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. Львов, 1986. - С. 27-28.

60. Ющик Л.В. Активность некоторых ферментов ткани легких морских свинок при модельном процессе бронхиальной астмы / Л.В. Ющик // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. Львов, 1986. — С. 26 -27.

61. Ющик Л.В. Активность ферментов в ткани гипоталамуса и надпочечников при модельном процессе бронхиальной астмы / Л.В. Ющик, В.А. Иванцов, С.Е. Холин // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. -Львов, 1986.-С. 31-32.

62. Ющик Л.В. Некоторые показатели функционального состояния кожи при модельном процессе бронхиальной астмы / Л.В. Ющик // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. Львов, 1986. - С. 25-26.

63. Ющик Л.В. Ферментативная активность сыворотки крови морских свинок при модельном процессе бронхиальной астмы / Л.В. Ющик // Проблемы патологии.в эксперименте и клинике. Львов, 1986. - С. 30-31.

64. Algara-Suarez P. 8Br-cGMP mediates relaxation of tracheal smooth muscle through PKA / P. Algara-Suarez, R. Espinosa-Tanguma // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004. - Vol. 6, N 2. - P. 597 - 601.

65. Alioua A. PKG-1 a phosphorylates the a-subunit and upregulates reconstituted GK Ca channels from tracheal smooth muscle / A. Alioua, J.P. Huggins, E. Rousseau // Amer. J. Physil. 1995. - 268, № 6, - P. 1057 - 1063.

66. Ariense E.J. Molecular pharmacology: the mode of action of biologically active compounds / E.J. Ariense Vol. 1, N.Y.-L., 1964. 503 p.

67. Azuma C. Cloning of cDNA for human T cell replacing factor (interleukin-5) and comparison with the murine homologue / C. Azuma // Nucleic Acids Research. 1986. -N 14. - P. 9149-9158.

68. Barnes P.J. Beta-adrenergic receptors and their regulation / P.J. Barnes // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1995. - Vol. 152. - P. 838 - 860.

69. Bi Y. Correlation of eosinophil apoptosis with interleukin 5 mRNA expression in lung tissues of asthmatic guinea pigs / Y. Bi, Z. Yang, C. Wang // Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi. 1999. - N 4. - P. 228-230.

70. Black J. The calcium dependents of histamine, carbochol and potassium chloride induced contraction in human airways in vitro / J. Black, C. Armound, P. Jonson et al. // Eur. J. Pharmacol. - 1986. - V. 25. - P. 159 - 168.

71. Bowerfind W.M. Double-stranded RNA causes airway hyperreactivity and neuronal M2 muscarinic receptor dysfunction / W.M. Bowerfind, A.D. Fryer, D.B. Jacoby // J. Appl. Physiol. 2002. - Vol. 92, N 4.-P. 1417-1422.

72. Brottman G.M. Effect of eosinophil peroxidase on airway epithelial permeability in the guinea pig / G.M. Brottman, W.E. Regelmann, A. Slungaard et al. // Pediatr. Pulmonol. 1996. - Vol. 21, N 3. - P. 159-166.

73. Busse W.W. Eosinophils in asthma / W.W. Busse, J.B. Sedgwick // Ann. Allergy. 1992. - P. 286-290.

74. Cakici J. Epithelium dependent responses of serotonin in coaxial bioassay system / J. Cakici, B. Tunctan, N.Abacioglu et al. // Eur. J. Pharmacol. -1993.-V. 236, N1.-P. 97- 105.

75. Chandrasekharappa S.C. A long-range restriction map of the interleukin-4 and interleukin-5 linkage group on chromosome 5 / S.C. Chandrasekharappa//Genomics. 1990.-N6.-P. 94-99.

76. Cheung W.J. Calmodulin: its potential role in cell proliferation and heavy metal toxity / W.J. Cheung // Federat. Proc. 1984. - V. 4. - P. 2995 - 2999.

77. Clark A.J. The reaction between acetylcholine and atropine / A.J. Clark 11 J. Physiol. (London). 1926. - Vol. 61. - P. 530-546.

78. Coeffier E. Role of IL-5 in enhanced migration of eosinofils from airways of immunized guinea pigs / E. Coeffier, D. Joseph, B.B.Vargaftig // Br. J. Pharmacol. 1994. - Vol. 113.- P. 749-756.

79. Cohn L.A. Interactions between airway epithelium and mediators of inflammation / L.A. Cohn, K.B. Adler // Exp. Lung. Res. 1992. - Vol. 18, N 3. -P. 299 - 322.

80. Corrigan C.J. T cells and eosinophils in the pathogenesis of asthma / C.J. Corrigan, A.B. Kay // Immunol. Today. 1992. - P. 501-507.

81. Croxton T.L. Expression of dihydropyridine resistance differs in porcine bronchial and tracheal smooth muscles / T.L. Croxton, C. Fleming, C.A. Hirshman // Amer. J. Physiol. 1994. - Vol. 267, N 2, Pt 1. - P. 106 - 112.

82. Daffoncio L. b-adrenoceptor reactivity after epithelium removal in guinea pig trachea in vitro / L. Daffoncio, A. Hernandes, E. Martinotti, C. Omini // Pharmac. Res. 1990. - V. 22, № 1, - P. 49.

83. Dent L.A. Eosinophilia in transgenic mice expressing interleukin 5 / L.A. Dent// Journal of Experimental Medicine. 1990. - N 172. - P. 1425-1431.

84. Devos R. Amino acid sequence analysis of a mouse interleukin 5 receptor protein reveals homology with a mouse interleukin 3 receptor protein / R. Devos // European Journal of Immunology. -1991.-N21.-P. 1315-1317.

85. Diego A. H-7, a protein kinase inhibitor, inhibits spontaneous to ne and spasmogenic responses in normal and sensitized guinea pig trachea / A. Diego, J. Cortijo, V. Villagrasa et al. // Gen. Pharmacol. 1995. - Vol. 26, N 8. -P. 1747 - 1755.

86. Downes H. Comparison of drug responses in vivo and in vitro in airways of dogs with and without airway hyperresponsiveness / H. Downes // J. Pharmacol, exp. Ther. 1986. - Vol. 237, N 1. - P. 214 - 219.

87. Egan R.W. Effect of Sch 55700, a humanized monoclonal antibody to human interleukin-5, on eosinophilic responses and bronchial hyperreactivity /133

88. R.W. Egan, D. Athwal, M.W. Bodmer, et al. // Arzneimittelforschung. 1999. -P. 85 - 90.

89. Fahy J.V. Airway inflammation and remodeling in asthma / J.V. Fahy, D.B. Corry, H.A. Boushey // Curr. Opi.n Pulm. Med. 2000. - N 6. - P. 15 -20.

90. Fahy J.V. Remodeling of the airway epithelium in asthma / J.V. Fahy // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2001. -N 15. - P. 46 - 51.

91. Foster P.S. IL-5 deficiency abolishes eosinophilia, airway hyperreactivity, and lung damage in a mouse asthma model / P.S. Foster, S.P. Hogan, A.J. Ramsay et al. // J. Exp. Med.-1996.-Vol. 183. P. 195 - 201.

92. Gan L.L. Trachea relaxing effects and beta2-selectivity of SPFF, a newly developed bronchodilating agent, in guinea pigs and rabbits / L.L. Gan, M.W. Wang, M.S. Cheng // Biol. Pharm. Bull. 2003. - N 3. - P. 323 - 328.

93. Gao J. Productors of cyclooxygenase mediate the responses of the guinea pig trachea to hydrogen peroxide / J. Gao, P.M. Vanhoutt // J. Appl. Physiol. 1993. - Vol. 74, N 5. - P. 2105 - 2111.

94. Gosal D. Nitric oxide synthase isoforms and peripheral chemoreceptor stimulation in conscous rats / D. Gosal, E. Gosal, Y.M. Gosal et al. // NeuroReport. 1996. - Vol. 7, N 6. - P. 1145 - 1148.

95. Greenfeder S. Th2 cytokines and asthma—the role of interleukin-5 in allergic eosinophilic disease / S. Greenfeder, S.P. Umland, F.M. Cuss et al. // Respir. Res. 2001. - P. 71 -79.

96. Gulbenkian A.R. IL-5 medulates eosinophil accumulation in allergic guinea pig lung / A.R. Gulbenkian, R.W. Egan, X. Fernander et al. // Am. Rev. Respir. Dis.-1992.-Vol. 146. P. 263 - 266.

97. Haczku A. CD23 exhibits negative regulatory effects on allergic sensitization and airway hyperresponsiveness / A. Haczku, K. Takeda, E. Hamelmann et al. //Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000.- Vol. 161, N 3, P. 952960.

98. Hakonarson H. Autocrine interaction between IL-5 and IL-lß mediates altered responsiveness of atopic asthmatic sensitized airway smooth muscle / H. Hakonarson, N. Masken, C. Carter et al. // J. Clin. Invest. 1999. - P. 657-667.

99. Hardman J.G. Cyclic nucleotides and smooth muscle contraction / J.G. Hardman // Smooth muscle. An Assement of current knowledge. Austin. Univ. Texas Press, 1981. - P. 249 - 252.

100. Helmerich E.J. Regulation of signal transduction by b-adrenergic hormone receptors / E.J. Helmerich, T. Pfeuffer // Tip. Rev. 1985. - V. 4. - P. 439-443.

101. Hirota K. Effects of three different L-type Ca2+ entry blockers on airway constriction induced by muscarinic receptor stimulation / K. Hirota, E. Hashiba, H. Yoshioka et al. // Br. J. Anaesth. 2003. - Vol. 90, N 5. - P. 671 -675.

102. Hisada T. Properties of membrane currents in isolated smooth muscle cells from guinea pig trachea / T. Hisada, Y. Kurachi, T. Sigimoto // Pflug. Arch -1990.-V. 416.-P. 151-161.

103. Hitoshi Y. In vivo administration of antibody to murine IL5 receptor inhibits eosinophilia of IL5 transgenic mice / Y. Hitoshi // International Immunology. 1991.-N3.-P. 135- 139.

104. Huang C.Y. Mechanisms activation of cyclic nucleotide phosphodiesterase / C.Y. Huang, V. Chan, P. B. Chock et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1981. - Vol. 78. - P. 871 - 874.

105. Huston D.P. Interleukin-5: a therapeutic target in asthma / D.P. Huston // International Journal on Immunorehabilitation. 1997. - N 7. - P. 7-12.

106. Ichinose M. Histamine H3-receptors inhibit cholinergic neurotransmission in guinea pig airways / M. Ichinose, C.D. Stretton, J.C. Schwartz et al. // Br. J. Pharmacol. 1989. - Vol. 97, N 1. - P. 13 - 15.

107. Imaizumi Y. The effect of tetraethylammonium chloride on potassium permeability in the smooth muscle cell membrane of canine trachea / Y. Imaizumi, M. Waanabe // J. Physiol. 1981. - V. 316. - P. 33 - 46.

108. Ingvast-Zarsson G. Relaxant effect of theophylline and clenbuterol on tracheal smooth muscle from horse and rat in vitro / G. Ingvast-Zarsson // J. Vet. J. Pharmacol, and Ther. 1991. - Vol. 14, N 3. - P. 310 - 316.

109. Ito Y. The roles of stored calcium in contractions of cat tracheal smooth muscle produced by electrical stimulation, acetylcholine and high K+ / Y. Ito // Br. J. Pharm. 1984. - Vol. 29. - P. 667 - 676.

110. Jacob C.O. Mapping of the interleukin 5 receptor gene to human chromosome 3 p25-p26 and to mouse chromosome 6 close to the raf-1 locus with polymorphic tandem repeat sequences / C.O. Jacob // Mamrn. Genome. 1993. -N4.-P. 435-439.

111. Jeffrey R.C. Early phase bronchoconstriction in the mouse requires allergen-specific IgG / R.C. Jeffrey, G. Cieslewicz, M. Borchers et al. // The Journal of Immunology. 2002. - Vol. 168, P. 4050-4054.

112. Jonson M. Mechanisms of action b2-adrenoceptor agonists / M. Jonson, R. Coleman // Asthma and Rhinitis. 1995. - P. 1278 - 1308.

113. Karaki H. Calcium release in smooth muscle / H. Karaki, G.B. Weiss // Gastroenterology. 1984. - V. 87. - P. 960 - 970.

114. Katoh S. Maintenance of CD5+ B cells at an early developmental stage by interleukin-5: evidence from immunoglobulin gene usage in interleukin-5 transgenic mice / S. Katoh // DNA and Cell Biology. 1993. - N 12. - P. 481491.

115. Kohno S. Tonus of smooth muscles of isolated airway in siti / S. Kohno, K. Ohata // Folia pharmacol. Japon. 1993. - Vol. 102, N 1. - P. 1 - 10.

116. Korosec L. The role of respiratory epithelium and mast cell histamine in the reactivity of the mouse isolated trachea / L. Korosec, F. Erjavec // Acta physiol. Scand. 1992. - Vol. 146, N 608, Suppl. - P. 119.

117. Krishnakumar S. Non-adrenergic non-cholinergic excitatory innervation in the airways: role of neurokinin-2 receptors / S. Krishnakumar, E.P. Holmes, R.M. Moore et al. // Auton. Autacoid. Pharmacol. 2002. - N 4. - P. 215-224.1.

118. Kume H. Regulation of Ca" dependent K -channel activity in tracheal myocytes by phosphorylation / H. Kume, A. Takai, H. Tomita // Nature. 1989. -N 341. - P. 152- 154.

119. Langer G.A. Calcium at the sarcolemma / G.A. Langer // J. Mol. Cell. Cardiol. 1984. - V. 16. - P. 147- 153.

120. Liedike C.M. arAdrenergic signaling in human airway epithelial cells involves inositol lipid and phosphate metabolism / C.M. Liedike // Amer. J. Physiol. 1992 - 262, N 2, Pt 1. - P. 183 - 191.

121. Lin C.C. Bronchoconstriction and eosinophil recruitment in guinea pig lungs after platelet activating factor administration / C.C. Lin, C.Y. Lin //J. Asthma. 1997. - N 2. - P. 153-160.

122. Maggi C.A. Potent contractile effect of endothelin in isolated guinea pig airways / C.A. Maggi, R. Patacchini, S. Giuliani et al. // Eur. J. Pharmacol. -1989.-Vol. 160.-P. 179- 182.

123. McCaig DJ. Alteration of electrophysiological properties of airway smooth muscle from sensitized guinea pigs / D.J. McCaig, J.F. Souhrada // Respir. Physiol.- 1980.-P. 49-60.

124. McKenzie A.N. Structure-function analysis of interleukin-5 utilizing mouse/human chimerical molecules / A.N. McKenzie // EMBO Journal 10. -1991.-P. 1191-1193.

125. Moffat J.D. The non-adrenergic, non-cholinergic innervation of guinea pig extrapulmonary airways / J.D. Moffat, J.R. VcLian, B. Dumsdey // Proc. Austral. Physiol, and Pharmacol. Soc. 1995. - Vol. 26, N 1. - P. 90.

126. Moffatt J.D. Role of the epithelium and acetylcholine in mediating the contraction to 5-hydroxytryptamine in the mouse isolated trachea / J.D. Moffatt, T.M. Cocks, C.P. Page // Br. J. Pharmacol. 2004. - Vol. 141, N 7. -P. 1159-1166.

127. Morse B. Effects of IL-13 on airway responses in the guinea pig / B. Morse, J.P. Sypek, D.D. Donaldson et al. // Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 2002. - Vol. 282, N 1. - P. 44-49.

128. Mrwa U. cAMP-dependent inhibition of smooth muscle actomyosyne / U. Mrwa, M. Troschka, J.C. Ruegg // FEBS Lett. 1979. - Vol. 107. - P. 371 -373.

129. Mu J.Y. The distribution of beta-adrenergic receptors in guinea pig lungs and their changes in experimental allergic asthma / J.Y. Mu, S. Bi // Sei. China B. 1989. - N 10. - P. 1208-1214.

130. Nabe T. Leukocyte kinesis in blood, bronchoalveoli and nasal cavities during late asthmatic responses in guinea-pigs / T. Nabe, N. Shinoda, K. Yamashita et al. // Eur. Respir. J. 1998. - N 3. - P. 636-642.

131. Ndukwu J.M. Immune sensitization augments epithelium dependent spontaneous tone in guinea pig trachealis / J.M. Ndukwu, J. Solway, K. Arbeiter et al. // Amer. J. Pfysiol. 1994. - № 5, Pt 1. - P. 2485 - 2492.

132. Nevala R. Comparison of the effects of nitric oxide donors and the ß2-agonist salbutamol on the rat bronchial muscle in vitro / R. Nevala, K. Vaali, A. Peitola et al. // Hum. and Exp. Toxicol.-1995. Vol. 14, № 10. - P. 832 - 840.

133. Nijkamp F.P. Nitric oxide and bronchial hyperresponsiveness / F.P. Nijkamp, G. Folkers // Arch. int. pharmacodyn. et ther. 1995. - 329, N 1. - P. 81 -96.

134. Nishinakamura R. Hematopoiesis in mice lacking the entire granulocyte-macrophage colony-stimulating factor/interleukin-3/interleukin-5 functions / R. Nishinakamura // Blood. 1996. - Vol. 88, N 7. - P. 2458-2464.

135. Ohrui T. Histamine N-metyltranspferase controls the contractile response of guinea pig trachea of histamine / T. Ohrui, K. Yamauchi, K. Sckizawa // J. Pharmacol, and Exp. Ther. 1992. - Vol. 261, N 3,- P. 1268 - 1272.

136. Oosterhout A.J. Effect of anti-IL-5 and IL-5 on airway hyperreactivity and eosinofils in guinea-pig. / A.J. Oosterhout, A.R. Lodenius, H.F. Savelkoul et al. // Am. Rev. Respir. Dis.-1993.-Vol. 147.- P. 548-552.

137. Park S. Activation of tracheal smooth muscle contraction: synergism between Ca" and activators of protein kinase C / S. Park, H. Rasmussen // Physiol. Sei. 1985. - Vol. 82. - P. 8835 - 8839.

138. Pauwels R.A. Cytokine manipulation in animal models of asthma / R.A. Pauwels, G.J. Brusselle, J.C. Kips // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1997. -Vol.156, N4.-P. 78-81.

139. Pfueffer T. Catalytic unit adenilatcyclase: purification and identification of affinity crosslinking / T. Pfueffer, R.M. Dreher, H. Metzger // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1985. - Vol. 82. - P. 3086 - 3090.

140. Prie S. Synthesis of eicosanoids by isolated tracheocytes / S. Prie, M. Kaghni, J. Laporte et al. // Amer. J. Physiol. 1991. - Vol. 260, N 1. - P. 349 -355.

141. Qi H. The relationship between interleukin-8 and airway hyperresponsiveness in guinea pigs / H. Qi, K. Lu, W. Wang //Chin. Med. J. (Engl.). 1999. - N 11. - P. 985-987.

142. Ramos T. Interleukin 5 is a differentiation factor for cytotoxic T lymphocytes / T. Ramos // Immunology Letters. 1989. - N 21. - 277-284.

143. Richard W.C. Antigen-induced hyperreactivity to histamine: role of the vagus nerves and eosinophils / W.C. Richard, M.E. Christopher, L.Y. Bethany et al. // Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 1999. - Vol. 276, N 5. - P. 709714.

144. Roux E. Role of sarcoplasmic reticulum and mitochondria in Ca(2+) removal in airway myocytes / E. Roux, M. Marhl // Biophys. J. 2004. - Vol. 86, N4.-P. 2583-2595

145. Sadeghi H. G. Guinea pig tracheal responsiveness in vitro role of nitric oxide/cyclic GMP pathway / H.G. Sadeghi, G. Folkerts, P. Henricks et al. // Parm. World and Sci. 1993. - Vol. 15, N 6, Sappl. J. - P. 10.

146. Salvi S. Interleukin-5 production by human airway epithelial cells / S. Salvi, A. Semper, A. Blomberg et al.// Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1999. -Vol. 20.-P. 984-991.

147. Sanderson C.J. Molecular and cellular biology of eosinophil differentiation factor (interleukin-5) and its effect on human and mouse B cells / C.J. Sanderson et al. // Immunological Reviews. 1988. -N 102. P. 29-50.

148. Sato Y. Histopathological and immunohistochemical studies on experimental asthmatic model induced by aerosolized ovalbumin inhalation in guinea pigs / Y. Sato, T. Kishi, T. Umemura // J. Toxicol. Sci. 1998. - N 1. - P. 69-75.

149. Scheid C.R. Mechanism of b-adrenergic relaxation of smooth muscle / C.R. Scheid, T.W. Honeyman, F.S. Fay // Nature. 1979. - V. 277. - P. 32 - 36.

150. Schramm C.M. Mechanisms of protein kinase C regulation of airway contractility / C.M. Schramm, M.M. Grunstein // J. Appl. Physiol. 1989. - Vol. 66,N4.-P. 1935- 1941. •

151. Shahid M. Cyclic nucleotide phosphodiesterase izoenzyme activities in human peripheral bronchi / M. Shahid, A.J. Pfilpott, J. Boer et al. // Brit. J. Pharmacol. 1992. - N 105. - P. 1.

152. Shi H.-Z. Effect of inhaled interleukin-5 on airway hyperreactivity and eosinophilia in asthmatics / H.-Z. Shi, Ch.-Q. Xiao, D. Zhong et al. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1998. - Vol. 157, N 1. - P. 204 - 209.

153. Springall D.R. Nitric oxide synthase in asthmatic human lung / D.R. Springall, Q.A. Hamid, L.K. Buttery et al. // J. Pathol. 1993. - V. 169. - Sappl. -P. 153.

154. Sugimoto Y. Effects of apafant on PAF-induced downregulation of beta-adrenoceptors in guinea pigs / Y. Sugimoto, Y. Nakayama, H. Kishida et al. // Methods Find. Exp. Clin. Pharmacol. 1997. - Vol. 19, N 8. - P. 547-52.

155. Swain S.L. Evidence for two distinct classes of murine B-cell growth factors with activities in different functional assays / S.L. Swain, M. Howard, J. Kappler et al. // J. Exp. Med. 1983. - P. 822-835.

156. Takaki S. Identification of the second subunit of the murine interleukin-5 receptor: interleukin-3 receptor-like protein AIC2B is a component141of the high affinity interleukin-5 receptor / S. Takaki et al. // EMBO Journal 10. -1991.-P. 2833-2838.

157. Takaki S. Molecular cloning and expression of the murine interleukin-5 receptor / S. Takaki et al. // EMBO Journal. 1999. - N 4. - P. 4367-4374.

158. Takatsu K. Interleukin-5 / K. Takatsu // Current Opinion in Immunology. 1992. - N 4. - P. 299-306.

159. Tavernier J. A human high affinity interleukin-5 receptor (IL5R) is composed of an IL5-specific alpha chain and a beta chain shared with the receptor for GM-CSF / J. Tavernier // Cell. 1991. - N 66. - P. 1175-1184.

160. Tohda Y. Role of muscarinic acetylcholine receptors in a guinea pig model of asthma // Y. Tohda, R. Haraguchi, M. Itoh et al. // Int. Immunopharmacol. 2002. -Vol. 2,N ll.-P. 1521-1527.

161. Tominaga A. Transgenic mice expressing a B cell growht and differentiation factor gene (IL-5) develop eosinophilia and autoantibody production / A. Tominaga, S. Takaki, N. Koyama, S. Katoh et al. // J. Exp. Med.-1991.-Vol. 173.-P. 429-437.

162. Torphy Th. Differential effects of methacholine and leukotriene D on cyclic nucleotide content and isoproterinol-induced relaxation in the opossum trachea / Th. Torphy // J. Pharmacol, exp. Ther. 1986. - Vol. 237, N 1. - P. 332 -340.

163. Tuypens T. Organization and chromosomal localization of the human interleukin 5 receptor alpha-chain gene / T. Tuypens // European Cytokine Network. 1992. -N 3. - P. 451-459.

164. Van Leeuwen B.H. Molecular organization of the cytokine gene cluster involving the human IL3, IL4, IL5, and GM-CSF genes on human chromosome 5 / B.H. Van Leeuwen // Blood. 1989. - N 73. - P. 1142-1148.

165. Van Oosterhout A.J. Effect of anti-IL-5 and IL-5 on airway hyperreactivity and eosinofils in guinea pig / A.J. Van Oosterhout, A.R. Lodenius, H.F. Savelkoul et al // Am. Rev. Respir. Dis. 1993. - Vol.147.- P. 548-552.

166. Walsh D.A. Regional substance P binding in guinea pig and human lungs / D.A. Walsh, M.Salmon, J. Wharton // Neuropeptides. 1993. - Vol. 24, N 4.-P. 192.

167. Wang Y.X. FKBP12.6 and cADPR regulation of Ca2+ release in smooth muscle cells / Y.X. Wang, Y.M. Zheng, Q.B. Mei et al. // Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 2004. - Vol. 286, N 3. - P. 538 - 546.

168. Wardlaw A.J. Eosinophils: biology and role in disease / A.J. Wardlaw, R. Moqbel, A. B. Kay // Adv. Immunol.-1995.- Vol.60.- P. 151-266.

169. Watanabe K. Calmodulin activated CN phosphodiesterase, microtubes and vinica alkaloids / K. Watanabe, W. West // Federat. Proc. 1982. -Vol. 41.-P. 2292-2299.

170. Wegner C.D. Intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) in the pathogenesis of asthma / C.D. Wegner, R.M. Gundel, P. Reilly et al. // Science. -1990. P. 456-459.

171. Wiklund C.U. Interactions of volatile anesthetics with cholinergic, tachykinin, and leukotriene mechanisms in isolated guinea pig bronchial smoothmuscle / C.U. Wiklund, U. Lindsten, S. Lim // Anesth. Analg. 2002. - N 6. - P. 1650-1655.

172. Wu S.-J. Randomization of the receptor a-chain recruitment epitope reveals a functional interleukin-5 with charge depletion in the CD loop / S.-J. Wu J. Li, P. Tsui // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274, N 16. - P. 20479-20488.

173. Xie Q.M. Effects of cyclosporine A by aerosol on airway hyperresponsiveness and inflammation in guinea pigs / Q.M. Xie, J.Q. Chen, W.H. Shen et al. // Acta. Pharmacol. Sin. 2002. - Vol. 23, N 3. - P. 243-247.

174. Yamaguchi H. Isoproterinol increases peripheral Ca . and decreases inner [Ca2+] in single airway smooth muscle cells / H. Yamaguchi, I. Kajita, J. M. Madison // Amer. J. Physiol. 1995. - Vol. 268, N 3, Pt 1. - P. 771 -779.

175. Yamaguchi S. Time course study for antigen-induced airway hyperreactivity and the effect of soluble IL-5 receptor / S. Yamaguchi, H. Nagai, H. Tanaka et al. // Life Sci. 1994. - Vol.54. - P. 471-475.

176. Yang Z.W. Use of star volume to measure the size of the alveolar space in the asthmatic guinea-pig lung / Yang Z.W., Y.H. Qin, S.R Su // Respirology. 2002. - N 7. - P. 117-121.

177. Zou J. Microarray profile of differentially expressed genes in a monkey model of allergic asthma /J. Zou, S. Young, F. Zhu et al. // BioMed Central Ltd Genome Biol. 2002. - N3. - P. 1-13.

Информация о работе

Дьякова, Елена Юрьевна
кандидата медицинских наук
Томск, 2004
ВАК 03.00.13

Диссертация

Сократительные свойства гладких мышц бронхов при формировании гиперреактивности воздухоносных путей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы