Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Содержание и аминокислотный состав белка протеолипидов разных органов при постнатальном развитии крысы

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Содержание и аминокислотный состав белка протеолипидов разных органов при постнатальном развитии крысы"

л ■<' 0

'АКАДЕМИЯ НАУК АРМЯНСКОЙ ССР ИНСТИТУТ БИОХИМИИ

На правах рукописи

КИРАКОСЯН ЛАУРА ГРИГОРЬЕВНА

УДК 577.112.866:591.3

СОДЕРЖАНИЕ И АМИНОКИСЛОТНЫЙ СОСТАВ БЕДКА ПРОТЕОДШВДОЗ РАЗНЫХ ОРГАНОВ ПРИ ГОСТНАТАЛЫЮМ РАЗВИТИИ КРЫСЫ

03.00.04 - БИОХИМИЯ

Автореферат

диссертации на соискание ученой стецвни кандидата биологических наук

Ереван - 1987

Работа выполнена в Институте биохимии АН Армянской ССР (директор - академик АН Арм.ССР А.А.Галоян).

Научный руководитель: кандидат медицинских наук,

ведущий научный сотрудник К.Г.Манукян

Официальные оппоненты: член-корр. АН Арм.ССР,

доктор биологических наук, профессор К.Г.Карагезян

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Р.М.Срашонян

Ведущая организация: кафедра биохимии Ереванского медицинского института.

Защита состоится "Z6" 1988 г. в часов

на заседании специализированного совета Д 005.15.01 при Институте биохимии АН Арм.ССР (375044, Ереван-44, ул.П.Севака, 5/1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биохимии АН Арм.ССР. '

Автореферат разослан "23 п ^J/l Jt 1987 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор биологических наук,

профессор А.А.СИМОНЯН

\ 0ЩАЛ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБ0ТЫ

(__Актуальность теш. Для выяснения принципов организации

клеточных мембран и "механизмов их функционирования з норме г цри патологиях большое значение имеет изучение мембранных белков и липопротеинов, с которыми связана основная часть активных функций в мембране. Исследование этих соединений упирается в значительной степени в трудности их выделения и очистки. -

Одними из относительно хорошо изученных в настоящее время -мембранных лшгопротеинов являюгся:протеолтщды (ПЛ). Это гидрофобные белково-липидные комплексы, растворимые в органических растворителях (poloh, lees, 195i), белковый компонент которых обладает свойствами-типичных "внутренних" мембранных белков Lees et al., 1979; Манукян, 1979). ПЛ входят в состав мембранных образований многих животных, растительных и микробных клеток (Folch-Pi.Stoffyn, 1972; Lees et al., 1979; Shlesinger, ' 1981). Особенно характерны omi для нервной ткани и главным образом белого вещества шзга, где локализованы в основном в миелине, составляя 30-50$ общего белка миелина, выделенного-из головного мозга млекопитанцих (Mehl, Halaría, 1970; Манукян и др., 1976; Boggs, Mosoarello, 1978 ). Полагает, что ПЛ комплексы принимают активное участие в формировании и поддержании уникальной мультиламеллярной структуры миелина ( bees et al , 1979; Stoffel et al. ,1983,1985; Brown et al.,l985>B небольших количествах IUI в нервной ткани обнаружены также в митохондриях, микросомах, синаптических мембранах ( Lapetina et al., 1968; Манукян И др., 1977, 1980; Bizzozего et al.,1982 ), где могут участвовать в процессах ионного транспорта ( Fisher, sapir-stein, 1986 ).

В других органах и тканях ПЛ локализованы главным образом В митохондриях ( Murakami et al.,1963; Kadenbach, Hadvary, 1973). Будучи компонентами митохондриальных мембран, они участвуют, по-видимому, в основных функциях этих органелл: образует протонпроводящую ( Lees et al., 1979; Blondin, 1979; Hoppe, Sebald,1984), а также фосфатсвязывашцую ( Guerin, napias, 1978; Blondin, 1979; Зайцева, Яхнин, 1984) части F0 фрагмента митохондриальной OS -АТРазы, входят в состав цитохром-оксвдаз-ного комплекса ( yu, Yu, 1977). В небольших количествах ПЛ присутствуют также в других мембранных образованиях, имепцих спе-

циализированные функции: связаны с Ка+, К+-АТРазой, образуя катион-избирательные каналы в почках ( Porbush et ai.,1978; Tosteston,Sapiratein,i98i ), входят в состав Са^+-АТРазы сар-коплазматического ретикулуда мышц, где, как полагают, способствуют транспорту Са2+ ( Racker, Eytan, 1975 ).

Таким образом, ПЛ являются важными составляющими клеточных мембран разных тканей и органов, где в зависимости от локализации могут выполнять различные функции. Однако имевдиеся в литературе данные относительно количественного содержания 1Ш в различных органах малочисленны и разноречивы.

Для более глубокого понимания роли 1Ш комплексов в структуре и функциях мембранных образований клеток большое значение имеет также исследование вопросов образования и накопления ПЛ в разных органах и тканях, изменений в структуре и составе их белкового и липидного компонента в ходе онтогенеза. Изучение процессов формирования мембранных структур в ходе индивидуального развития организмов является одним из важных аспектов мембрано-логии.

Известные в литературе данные относительно количественных сдвигов белка ПЛ, а также изменения его аминокислотного состава в ходе онтогенеза малочисленны и касаются только головного мозга. ДД. других: органов вообще не. исследовались.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось подробное изучение распределения ПЛ в различных органах зрелой крысы и шявление закономерностей изменения содержания и аминокислотного состава белка ПЛ в разных отделах ЦНС и других органах этого незрелороадапцегося животного в ходе постнатально-го развития.

Б связи с этим были поставлены следупцие задачи: I) с помощью различных методов исследования изучить содержание белка П1 .в трех разных отделах ЦНЙ - головной мозг без продолговатого, продолговатый, спинной мозг и других органах - сердце, печень, почка (корковый, мозговой слой), надпочечники, гладкая мышца (матка), скелетные мьлпцы (смешанные, белые, красные) зрелой крысы; 2) изучить количественные сдвиги в содержании белка Ш и общего белка"в разных отделах ЦНС (головной мозг без продолговатого, продолговатый, спинной мозг) и других органах (сердце, печень, почка, скелетная мышца) крысы в ходе постна-

тального развития (I, 10, 20, 30, 40, 90, 120-180 и 540-дневные крысы); 3) исследовать аминокислотный состав очищенных ЕЛ, выделенных из головного мозга и сердца крыс разного возраста (I, 10, 20, 30 и 120-180-дневные).

Научная новизна и практическое значение т&боты. В работе впервые с применением разных методов исследования подробно изучено содержание белка III в различных органах. Получены данные относительно его концентрации в корковом и мозговом слое почек, надпочечниках, белой и красной скелетных мышцах и т.д. Показано, что в разных отделах ЦНС содержание ПЛ коррелирует с количеством миелинизированных волокон, а в других органах - с интенсивностью окислительного обмена и плотностью митохондрий, будучи соответственно выше в сердце и почках.

Полученные в работе данные относительно содержания белка ЕЯ в различных органах дополняют представления о широте распространения этих соединений в организме животных-и указывают на важность исследования роли этих комплексов в норме и при патологиях в клеточных мембранах таких функционально активных органов, как сердце и почки, которые после мозга наиболее богаты EI.

Впервые исследовано изменение содержания белка ПИ в разных отделах ЦНС и других органах крысы в ходе индивидуального развития. Показано, что во всех изученных органах содержание белка ПЛ с возрастом повышается, однако степень и сроки изменений различны в зависимости от специфики развития данного органа, различной локализации и роли 1Ш в мембранных структурах разных тканей. Наибольшие сдвиги в ходе постнатального развития претерпевает содержание белка ПЛ в ЩС, затем в сердечной мышце и почках. Изменение концентрации ЕЯ в разных отделах ЦНС в основном совпадает с ходом миелинизации, тогда как в других органах коррелирует главным образом с процессами созревания митохондрий и становления их функции.

Впервые изучен аминокислотный состав ПЛ сердечной щншхн в ходе индивидуального развития. Получены также данные относительно изменения аминокислотного состава ПЛ мозга с возрастом. Показано, что на фоне общего сходства (богатство неполярными аминокислотами и относительная бедность кислыми и основными) содержание некоторых аминокислот в белке ПЛ мозга и в меньшей степени сердца претерпевает определенные сдвиги в ходе постнатального развития. Но основные аминокислотные характеристики белка ПЛ,

оцраделявдие его физико-химические свойства, поддерживаются на довольно постоянном уровне. Последний, по-видимому, необходим для обеспечения функций Ш в мембранах в разные возрастные периоды.

Сопоставление установленных в настоящем исследовании закономерностей изменения концентрации ПЛ в разных органах в ходе развития с известными данными об их биохимическом и морфо-функ-циональном созревании, а также сравнение между собой различных органов должно способствовать пониманию роли этих важных соединений в функциях мембран и их связи с процессами становления различных клеточных систем в ходе онтогенеза. Представленные в работе данные относительно содержания и аминокислотного состава белка ПЛ в норме будут иметь значение при исследовании патологических изменений компонентов мембран разных органов при различных заболеваниях и дефектах развития, в частности связанных с недостаточностью миелина, и поисках путей их лечения. Накапливается все больше фактов, свидетельствулцих о том, что нарушения обмена ПЛ комплексов играют важную роль в этиологии и патогенезе демиелинизируицих заболеваний генетического, аллергического И вирусного происхождения С УозШшига et а1. ,1985;Епс1оЬ et . а1., 1986 ). Некоторые из этих форм поражения ЦНС сопровождаются нарушением синтеза апопротеина ПЛ комплексов, либо нарушением встраивания этих комплексов в миелиновую мембрану ( сат-ра^оп1 et а1.,Х985; Коерреп et а1., 1987).

Публикации и апгобадия работы. Основное содержание диссертационной работы изложено в 10 печатных работах. Материалы диссертации были доложены на УП Всесоюзном совещании по эволвдион-ной физиологии, посвященном памяти академика Л.А.Орбели (Ленинград, 1977); Всесоюзной конференции "Эволюционная биохимия и происхождение жизни" (Ереван, 1978); Закавказской конференции геронтологов и гериатров (Ереван, 1980); Всесоюзном симпозиуме „"Развивающийся мозг" (Тбилиси, 1984). Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета Института биохимии АН Арм.ССР.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей Метода и результаты исследований с обсуждениями, заключения и выводов. Работа изложена на 145 страницах машинописного текста и содержит ¡87 рисунков и 14 таблиц. Библиография включает 235 наименований,в том числе 51 отечественных и 184

иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проводили на I, 10, 20, 30, 40, 90, 120-180 и 540-дневных белых крысах, которые находились на стационарном пищевом рационе вивария. Животных мгновенно обезглавливали, извлекали головной и спинной мозг, серже, печень, почки, скелетные мнтптт (сметанные-мышцы бедра). Продолговатый мозг отделяли от головного. В дальнейшем изложении термином "головной" мозг мы условно обозначили головной мозг без продолговатого. У 120180-дневных крыс (зрелые) в опыт брали также надпочечники, матку, разные типы скелетных мышц: белые - большая поясничная (psoas major), красные - камбаловидная (m.soleus). в некоторых опытах отделяли корковый слой почек от мозгового.

Все органические растворители (хлороформ, метанол, этиловый спирт, диэтиловый эфир), использовавшиеся в работе, были дважды перегнаны. Применяли обезвоженный диэтиловый эфир и абсолютный этиловый спирт.

Для определения сухой массы размельченную кашицу тканей высушивали при температуре 105-110° до постоянного веса. Общий белок определяли согласно bowry et al., (1951) в модификации Hess, Levin, (1967). Липидные экстракты различных органов получали и отмывали методами Polch et al., (1957) и lees (1966). Содержание белка Ш1 в промытых липидннх экстрактах определяли параллельно двумя методами: по Hess, Levin (1967) и Less, Pax-man (1972). Поскольку в наших условиях результаты определения белка ПЛ в различных органах двумя указанными методами довольно хорошо совпадали, эти данные раздельно не приводятся.

С целью выяснить, насколько определяемые величины содержания белка ПЛ могут быть завышены за ' счет присутствия липидов, была исследована окраска, развиваицаяся при добавлении некоторых липидов и ненасыщенных жирных кислот. Оказалось, что добавление холестерина, различных фосфолипидов и ненасыщенных жирных кислот - олеиновой и линоленовой к сывороточному альбумину (реактивы фирмы sigma, США) не оказывало существенного влияния на определяемое содержание белка в применявшихся условиях эксперимента.

Наряду с прямым определением белка ПЛ в липидных экстрактах различных органов, в отдельной серии опытов производили денатурацию этих комплексов с помощью трикалийцитрата по методу Webster, Polch (1961) и определяли количество денатурированного материала. Дяя более полного осаждения процедуру денатурации повторяли три раза. Отмытые от липидов осадки белка ПЛ высушивали сначала под вакуумом, затем в термостате при 105° до постоянной массы.

Аминокислотный состав ПЛ головного мозга и сердца определяли у I, 10, 20, 30 и 120-180-дневных крыс. ПЛ выделяли из про— мытых липидных экстрактов ткани методом эмульгирования-центрифугирования (Манукян и др., 1972) с той разницей, что опускали последнее центрифугирование при 200 g , так как выяснилось, что при этом теряется часть ПЛ. В части опытов применяли осаждение четырехкратным объемом смеси спирт:эфир 1:1 при -20°С (Eichberg, 1968). Полученные в результате неочищенные ПЛ промывали для удаления липидов 4 раза при 23°С 600-800 кратным объемом смеси спирт-эфир 1:1. Очищенные таким образом 1Ш содержали 90-95$ белка и 10-5$ липидов. Очищенные ПЛ (ОПЛ) в количестве 2,0-8,0 мг подвергали кислотному гидролизу в эвакуированных ампулах с 2,0 мл 6N HCl при ПО0 в течение 24 час. Аминокислотный состав образцов определяли на автоматическом анализаторе типа ликвимат фирмы Labotron. Поправку не потери в результате гидролиза и присутствующий серинфосфатид не вводили. Применявшаяся методика не давала возможности определять пролин. Содержание этой аминокислоты определяли отдельно по методу Blumen-krantz (1978).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Содержание белка протеолипидов в разных отделах ЦНС и других органах зрелой крысы

Имеющиеся в литературе данные относительно содержания ПЛ в разных органах малочисленны и разноречивы (Foich-Pi, Lees, 1951; Wolfgrem,1967; Lees, 1968 ). О содержании ПЛ судили большей частью по количеству белка, выпадающего в осадок из липидных экстрактов после денатурации этих комплексов, которая могла быть неполной. В связи с этим мы изучили содержание белка ПЛ в разных отделах ЦНС и других органах крысы. Концентрацию

белка ПЛ определяли как после их денатурации, так и непосредственно в промытых липидных экстрактах мозга и других органов. Параллельно исследовали также количество общего белка.

В табл.1 представлены данные по содержанию белка ПЛ в различных органах зрелой крысы. Из табл. видно, что содержание белка 1Ш высокое в богатых проводниковыми структурами, и следовательно миелином, отделах мозга - продолговатом и спинном мозгу, в "головном" - оно в 2,0-2,5 раза ниже. Из других изученных органов наиболее богато ПЛ сердце, где концентрация белка ПЛ лишь несколько ниже, чем в "головном" мозгу, затем почки, в корковом слое которых ПЛ в 1,25 раза больше, чем в мозговом (P<ß,00I). В печени содержание белка ПЛ в 2,0 в надпочечниках в 4,0, а в мышце матки в 7,0 раз ниже, чем в сердце. Из скелетных мышц сравнительно высоким уровнем белка ПЛ характеризуется красная мышца, где его содержание такое же, как в гладкой мышце (матка) и почти вдвое выше, чем в белой. Смешанная мышца занимает промежуточное положение.

Количество белка ПЛ, определенное после денатурации трика-лийцитратом, почти во всех органах было на 20-30$ ниже, чем определенное непосредственно в липидных экстрактах (табл.1).

Белок ПЛ составлял значительный процент общего белка ткани только в ЦНС и, особенно, в продолговатом и спинном мозгу -11,8-13,5$ (табл.1). В других органах на долю протеолипидных белков приходилзя лишь небольшой процент суммарных белков - от 2,4% в сердечной мышце до 0,28$ - в скелетной.

Как уже отмечалось, хотя ПЛ обнаружены почти во всех cyór клеточных образованиях нервной ткани, основная масса их сосредоточена в миелине, на долго которого приходится около 70$ всех ПЛ общего гомогената головного мозга крысы. В связи с этим содержание ПЛ в разных отделах ЦНС в основном определяется тем, сколько миелинизированных волокон они содержат, причем высокое содержание ПЛ характерно именно для миелина ЦНС. В других органах ПЛ сосредоточены главным образом в митохондриях, хотя в небольших количествах входят также и в состав других мембранных структур со специализированной функцией. Сопоставление полученных нами данных с известными в литературе об относительной плотности митохондрий и у 1вне окислительного обмена разных органов ( suda et al.,1977 ) доказывает, что концентрация белка ПЛ выше в органах с выраженными аэробным метаболизмом, характеризую-

Таблица I

Содержание белка ПЛ а липидных экстрактах разных ' отделов нервной системы и других органов крыс

> Белок ЕЛ

ОРГАН Суммированы данные, полученные методами Вт, ХлгЛа И Ьна, Рахшвп После денатурации трикалийцитраток

кг/г влажной кассы иг/100мг сухой массы мг/100мг общего белка кг/г влажной кассы

Отдел ЦНС

«головной" мозг 5,45 ♦ 0,06 2,50 4,78 4,25 + 0,23

(66) (6)

продолговатый мозг 12,16 + 0,25 4,40 11,83 10,15 + 1,26

(24) (4;

сшшной козг 12,29 + 0,27 4,09 13,46 8,99 + 0,86

(35) (4)

Сердце 4,35 + 0,08 1,99 2,38 3,37 + 0,16

(28) СО

Почва;

целая 2,88 + 0,04 1,38 1,79 2,26 + 0,21

(14) (4)

корковый слов 2,70 + 0,02 1,49

(36)

козговоВ слой 2,18 + 0,03 _ 1,76

(34)

Печень 2,08 + 0,04 0,74 1,10 1,66 + 0,02

(24) (3)

Надпочечник! 1,11 + 0,03 _ 0,87

(20)

Мака 0,64 + 0,03 0,44

(10)

Скелетная мывца:

красная (камбаловидная) 0,64 + 0,02 0,36

(26)

смешанная (двуглавая 0,52 + 0,01 0,23 0,28 0,48 ♦ 0,05

ныаца бедра) (28) (3)

белая (большая пояснич- 0,33 + 0,01 0,19

ная) 1 (45)

щихся высокой плотностью хорошо развитых, богатых цистами митохондрий, обеспечивалцих выполнение функций, требупцих больших энергетических затрат. К таким относятся сердце, затем почки, особенно их корковой слой (Наточин, 1976). Гладкая и скелетная мышцы относятся к тканям с низкой плотностью митохондрий,в соответствий с чем и содержание белка ШГ в них очень низкое. Интересно, что в красных мышцах, характеризующихся более высокой скоростью окислительного обмена, содер ;ие белка ПЛ почти

вдвое выше., чем в белых, где преобладает гликолиз С вазэ et а1., 1970).

2. Количественные изменения белка протеолипидов в разных отделах ЦНС и других органах красы в ходе постнатального развития

Количественные сдвиги белка ПЛ в онтогенезе изучали в трех отделах ЦНС крысы: "головном", продолговатом и спинном мозгу, а также в ряде других структурно и функционально различных органов: сердце, почки, печень, скелетная мышца, где ПЛ имеют в определенной степени отличную от нервной системы локализацию'и функцию. Параллельно изучали также содержание общего белка.

Сроки исследований были шбраны нами в соответствии с известными данными литературы о морфо-функциональном и биохимическом созревании нервной системы и других органов крысы.

Разные отделы ЦНС. Результаты проведенных исследований показали, что 1Ш присутствуют в небольших количествах уже в мозгу новорожденных крыс (табл.2), что не удалось выявить другим авторам. Концентрация белка ПЛ во всех трех изученных отделах ЦНС заметно возрастала в течение первых 10-дней после роздения (в 1,5-2,0 раза) (табл.2, рис.1), пока миелинизация еще не началась, что было связано, по-видимому, с накоплением их в мембранных образованиях, отличных от миелина, а также в предмиелиновых структурах. Однако уровень ПЛ в ЦНС оставался все еще очень низким. Он резко увеличивался (в 3,3-4,4 раза) в период от Ю- до 30-дня постнатальной жизни, когда начинался.и активно протекал процесс миелинизации. В этом промежутке отмечалась наибольшая скорость накопления ПЛ во всех трех отделах ЦНС, затем она снижалась. Однако у 30-дневных крыс содержание белка Ш все еще составляло меньше половины взрослого уровня, возрастало в 2,0-2,1 раза во всех изученных отделах мозга в течение последущих двух месяцев и продолжало медленно повышаться и в дальнейшем. Со дня рождения до достижения зрелого возраста (120-180-дневные) содержание белка ПЛ в "головном" мозгу увеличивалось в 11,8, продолговатом - в 19,9, спинном - в 15,6 раза.

На всех' изученных стадиях развития концентрация белка ПЛ в филогенетически'более древних отделах - продолговатом и спинном мозгу была выше, чем в "головнбм" (табл.2). Однако кривые изме-

Таблица 2

Содержание белка III в разных отделах ЦНС и в других органах крыс разного возраста (в мг/г влажной массы)

Возраст Отдел ЦНС Другие органы

(дни) "Головной" Продолго- Спинной Сердце Почка Печень Скелетная

мозг ватый мозг мозг • мышца

I 0,46+0,01 0,61^0,02 0,79±0,07 1,36±0,07 0,86±0,07 1,2410,06 0,4510,03

(19) (8) (9) (9) (8) (14) (Ю)

10 0,70±0,03 2,27±0,08 1,28±0,05 3,04±0,14 1,28±0,03 1,5910,04 0,6010,03

(12) (8) (9) (6) (II) (10) (10)

20 1,52±0,04 2,74±0,18 3,42±0,И 3,18±0,П 1,7910,06 1,6010,07 0,6510,01

(17) (9) (Ю) (16) (II) (14) (19)

30 2,28±Р,05 4,90^0,24 5,59^0,32 3,69^0,07 2,22^0,06 1,6910,07 0,7510,02

(13) (7) (7) (6) (6) (9) (13)

40 2,70±0,Ю 6,37±0,36 5,96±0,20 3,58±0,14 2,14±0,13 1,6610,66 0,59+0,03

(16) (7) (13) СИ) (Ю) (12) (9)

90 4,84±0,08 10,20^0,22 II ,30^0,22 3,94±0,14 2,62±0,06 2,0810,04 0,59+0,02

(18) (16) (II) (21) (20) (20) (15)

120-180 5,45±0,06 12,16^0,25 12,2910,27 4,35±0,08 2,8810,04 2,0810,04 0,5210,01

(66) (24) (35) (28) (14) (24) (28)

540 6,62^0,06 13,54^0,42 13,26^0,30 4,29±0,07 3,0010,04 2,2010,05 0,5110,02

(56) (20) (44) (38) (27) (36) (22)

*

Рис. Содержание белка Ш1 в разных отделах ЦНС (рис.1) и других органах (рис.2) 1фыс разного возраста в % от

содержания у 120-180-дневных.-о "головной" мозг,

---х продолговатый мозг,---л спинной мозг;

---« сердце,---■ почка,'-о печень;

----& скелетная мыпшд.

нения содержания ПЛ в разных отделах ЦНС в процессе развития в общем были очень сходны (рис.1).

При расчете на сухую массу ткани закономерности изменения концентрации белка ПЛ в разных отделах ЦНС с возрастом полностью сохранялись, но сдвиги были менее выражены.

Результаты навпк исследований, свидетельствулцие о длительном накоплении ПЛ в мозгу крысы, коррелируют с данными литературы, согласно которым типичная белковая картина миелина с преобладанием трех главных миелиновых белков - ПЛ и двух основных белков устанавливается в переднем мозгу крысы к 20-му дню после рождения (7faelmeia,lJeuho£f, 1974). В этот же день отмечается максимальная скорость накопления миелина - 3,5 мг миелина на мозг в день ( MoreIi et ai.,i972 ).Однако в этом возрасте мозг крысы имеет все еще только 15% того количества миелина, которое достигается К 425-му дню ( Horton, Poduslo, 1973 ). В ходе раннего постнатального развития (первые три недели после-

рождения) в мозгу крысы имеют место также интенсивные процессы синаптогенеза (Боголепов, 1975; Abdel-Latif et al.,1970; Waehneia,îfeuhoff ,1974 ) и митохондриогенеза (Gregson, Williams, 1969), происходит интенсификация окислительных и энергетических процессов для обеспечения растущей функциональной активности этого органа ( Milstein et al.,196§Априкян, 1972; Пи-гарева, 1972; Прохорова и др., 1979). Очевидно, что сдвиги в содержании белка ПЛ в мозгу, особенно, в течение первых 30-дней после рождения, обусловлены наряду с миелинизацией накоплением Шив других субклеточных образованиях нервной ткани (в частности, в митохондриях). Однако в связи с высокой концентрацией белка ПЛ в миелине и бурным накоплением их в ходе мие-линизации основной профиль изменения общего содержания этих соединений в мозгу после Ю-дня постнатальной жизни определяется главным образом развитием процесса миелинизации.

Наши данные показывают, что с возрастом резко увеличивается и содержание белка ПЛ в общих белках мозга (в 11-14 раз), причем это повышение продолжается и после достижения зрелого возраста (рис.3). Таким образом, Ш1 относятся к числу поздно созреванцих белковых компонентов нервной ткани, накопление которых в ходе развития совпадает с процессами морфо-функциональ-ного созревания ЦНС крысы.

Cemme. Содержание белка ПЛ в сердце, как и в мозгу, повышалось с возрастом (табл.2, рис.2). Одаако, в отличие от исследованных отделов ЦНС, оно было сравнительно высоким уже у новорожденных крыс, у которых сердце и печень являлись органами с наиболее высоким содержанием белка ПЛ на г влажной массы. Основные сдвиги в содержании белка ПЛ в сердце приходились на перше 10 дней после рождения (рис.2). За это время оно увеличивалось в 2,2 раза, достигая 70$ от содержания у зрелых крыс. В этом промежутке наблюдалась наибольшая скорость отложения ПЛ в сердечной мышце при расчете прироста за каждый день, после чего она снижалась. В течение второй декада постнатальной жизни концентрация ПЛ. в сердце почти не менялась, затем снова несколько повышалась к 30-дням после рождения и продолжала медленно нарастать до 120-180-дневного возраста, увеличиваясь к этому сроку в 3,2 раза по сравнению с 1-дневными. При расчете на сухую массу ткани ход изменения содержания белка ПЛ в сердечной мышце в онтогенезе в основном сохранялся, но сдвиги бы-

Л"

/

Возраст (дни)

1 « 20 30 40 90 120-Ю0 5«)

5o3pociTt (дни)

Рис.3. Рис.4.

Рис.3, 4. Содержание белка ПЛ в разных отделах ЦНС и других органах в ходе гостнатального развития (в мг/ЮО мг общего белка). I - "головной" мозг; 2 - продолговатый мозг; 3 - спинной мозг; 4 - сердце; 5 - почка; 6 - печень; 7 - скелетная мышца.

ли менее выражены. Перше десять дней после рождения являлись критическим периодом повышения белка ПЛ и в отношении к общему белку миокарда (рис.4).

Выявленные нами сроки накопления Ш1 в сердечной мышце коррелируют с данными литературы, свидетельствующими о быстром морфологическом и биохимическом созревании миокарда крысы ( Claucomb,1975,1976; Novak et al., 1972 ) и совершенствовании структуры и функций его клеточных элементов, в частности митохондрий ( sordahl,i972; wood, 1975; Озернюк, 1978; Геворкян, 1979), в первые 2г4 недели после рождения. В этом периоде повышается содержание митохондриального белка и плотность митохондрий (Глаголева, 1968), в них увеличивается количество 1фист, возрастает активность дыхательных ферментов (Хехт, 1975), меняются спектральные характеристики митохондриальных цитохромов (Sordabl et al., 1972).

Почка. Содержание белка ПЛ в почке, будучи относительно низким у новорожденной крысы, повышалось постепенно и равномер-

- 14 -

но в течение всего первого месяца постнатальной жизни (табл. 2, рис.2). Скорость отложения ПЛ в почке (при расчете на каждый день) в течение первых трех декад постнатальной жизни была почти одинаковой, будучи несколько более высокой во второй декаде. К 30-дшо после рождения концентрация белка 1Ш в почке возрастала в 2,5 раза, достигая Т?% взрослого уровня, после чего продолжала медленно нарастать до 4-6 месяцев постнатальной жизни и дальше (рис.2), увеличиваясь в 3,4 раза по сравнению с 1-дневными крысами. При расчете на сухую массу ткани кривая изменения белка ПЛ в почке полностью сохранялась, но сдвиги были несколько менее выражены. С возрастом повышалось также содержание белка ПЛ в отношении к общему белку почки (рис.4). Оно возрастало в основном в течение первых сорока дней постнатальной жизни (в 1,8 раз).

Сопоставление с данными литературы (Наточин, 1976; Дтгауга и др., 1981) показывает, что кривые изменения содержания белка ПЛ в почках в ходе постнатального развития обусловлены, по-видимому, в основном спецификой развития почечных митохондрий, хотя необходимо учесть и определенную долю изменений за счет минорных ПЛ, входящих в состав гга+,к+-АТРазы плазматических мембран и связанных с работой ионных насосов. Показано, что в течение первых двух декад постнатальной жизни резко увеличивается скорость потребления кислорода в корковом слое почек (В1окег>зш.г1еу, 1971; Дяоуга и др., 1981), происходит созревание почечных митохондрий, которые приобретают характерное расположение перпендикулярно основанию клетки и ее базальной части (Длоуга и др., 1981), повышается активность как окислительных ферментов ( вгаЪооуа а1., 1971 ), так и ряда других, важных для функционирования почки, в частности иа+,к+-АТРазы ( Ю.е1пшап е* а1., 1977; Дпоуга и др., 1981).

Печень. По сравнению с мозгом и почками, печень достигает большей степени зрелости к моменту рождения. Это находит отражение и в относительно более высоком содержании общего белка и особенно белка ПЛ в печени новорожденных крыс (табл. 2). Наибольшая скорость накопления ПЛ в печени, как и в сердце, наблюдается в течение первой декады постнатальной жизни (рис.2), что, по-видимому, в значительной степени связано с быстрым созреванием митохондрий и окислительного метаболизма печеночных клеток в этом периоде. Из преимущественно гликоли-

ической ткани, какой является зародышевая печень, она за не-колько дней после рождения превращается в орган с более выра-енным аэробным метаболизмом, с соответственным возрастанием онцентрации митохондриальной АТР, интенсивности дыхания, содер-анш митохондриальных цитохромов, активности окислительных фер-ентов и других показателей (Jakovcic et al., 1971; Hallman, :975; wood,1975; Pollak, 1980 ). За первые 10 дней после рож-ения содержание белка ПЛ в печени увеличивается в 1,3 паза, остигая 76$ от содержания у взрослых животных. После 10-дня остнатальной жизни скорость отложения ГШ в печени замедляет-я. Их концентрация почти не меняется до 40-дня, затем снова есколько нарастает до 90-дня (в 1,25 раза). С момента родце-ия до достижения зрелого возраста содержание белка ПЛ в пече-и увеличивается в 1,7-1,8 раз. При расчете на сухую массу тка-и описанные закономерности полностью сохраняются, только сдви-и гораздо менее выражены. Содержание белка ПЛ в общих белках ечени также нарастает в основном в течение первых 10-дней остнатальной жизни (рис.4). Сроки накопления ПЛ в печени кры-ы в ходе постнатального развития в основном совпадает со сро-ами морфологического и функционального созревания митохондрий повышения интенсивности окислительного обмена в этом органе.

Скелетная мышца. В скелетной мышце, характеризующейся низ-им уровнем содержания ПЛ, ход изменения этих соединений в про-ессе постнатального развития заметно отличается от других ор-анов. Наибольшая скорость накопления ПЛ в скелетной мышце от-:ечается, как и в сердечной, в период от I до 10-дня постна-альной жизни, затем в третью декаду после рождения (рис.2). I течение первых 10-дней содержание белка ПЛ в скелетной мыш-,е увеличивается в 1,33 раза и продолжает повышаться до 30 дней, взрастая почти в 1,7 раз по сравнению с новорожденными и до-тигая к этому сроку максимальных величин, которые составляют 44% от содержания у зрелых (табл.2). От 30-го к 40-дню после ождения содержание белка ПЛ в скелетной мышце в расчете на лажную массу ткани довольно резко снижается (почти в 1,3 раза).

120-180-дневных крыс оно всего в 1,16 раза выше, чем у ново-ожденных. При расчете на сухую массу ткани и на общий белок рис.4) содержание белка ПЛ в скелетной мышце заметно понижает-я, тогда как в других органах оно возрастает.

Созревание мышечной системы крысы (особенно мышц конечное-

тей) происходит в основном в течение первых 2-4-недель после рождения параллельно со становлением их двигательной функции (Bubowitg,i965; Engel,Karpati, 1968 ). К этому времени относятся и основные сдвиги в содержании ПЛ, которые определяются, по-видимому, несколькими факторами в зависимости от локализации и функции этих белков в различных мембранных образованиях мышечной ткани. Наряду с минорными ПЛ, входящими в состав Са^+-АТРазы саркошшматического ретикулума (Haclennan et al., 1973) или принимающими возможное участие в процессах рецепции нейромедиаторов (Taylor,1978), - основные закономерности изменения концентрации ЕЯ в скелетной мышце в ходе онтогенеза определяются, вероятно, как и в других органах, сроками созревания митохондрий и соответственно окислительного обмена. Об этом свидетельствует заметное повышение концентрации белка Ш1 в скелетной мышце в течение первых десяти дней после рождения, которое совпадает с быстрым созреванием в этом периоде окислительных процессов, приводящим к увеличению степени сопряжения окисления и фосфорилирования (Скулачев и др., 1964).

Результаты проведенных исследований показывают, что содержание белка ПЛ во всех изученных органах повышается в ходе постнатзльного развития, но степень и сроки изменений в общем различны, хотя имеются и черты сходства. Найденные сдвиги обусловлены, с одной стороны, спецификой развития разных органов, " с другой - ролью и локализацией ПЛ в мембранных структурах разных тканей. Сопоставление■кривых изменения концентрации белка ПЛ в различных органах с их морфо-функциональным и биохимическим созреванием показывает, что в нервной системе изменение концентрации ПЛ в основном совпадает с ходом миелинизадии, тогда как в других органах накопление ПЛ связано главным образом с процессами созревания митохондрий и становления их функции. Имеется сходство между сердцем, печенью и скелетной мышцей в том отношении, что наибольшая скорость накопления белка ПЛ отмечается в течение первых Ю-дней после рождения. По-видимому, этот срок отражает какие-то общие этапы накопления ПЛ в ми-тохондриальных' мембранах различных тканей.

3. Изменение аминокислотного состава протеолипидов головного мозга и сердца крысы в ходе постнатального развития

В связи с тем, что наряду с резким увеличением концентрации белка ПЛ в целом мозгу в ходе постнатального развития, существенно меняется также белковый состав этих комплексов (lerner et al.,1974; Campagnoni et al., 1976; Степанян, 1985), представляло интерес исследовать аминокислотный состав белкового компонента ПЛ, выделенных из мозга крыс на разных стадиях развития. Имепциеся в литературе данные относительно изменения аминокислотного состава ПЛ мозга малочисленны и разноречивы (Greaney,l96l; Prenaky, Moser,1967 ). Работ относительно изменения аминокислотного состава белка ПЛ других органов в процессе развития нам встретить не удалось. Поэтому, наряду с мозгом, исследовали также изменение аминокислотного состава ПЛ сердца.

Головной мозг. В табл.3 представлены данные по изменению аминокислотного состава ПЛ головного мозга крысы с возрастом. Содержание каждой аминокислоты приводится в молях на 100 моль аминокислот, найденных в гидролизате (М$). Исследования показали, что ОПЛ, выделенные из мозга крыс разного возраста, в общем сходны по аминокислотному составу, для которого характерно преобладание неполярных аминокислот и относительная бедность кислыми и основными аминокислотами. На фоне общего сходства содержание некоторых аминокислот претерпевало определенные сдвиги в ходе постнатального развития. По мере развития в белке ПЛ мозга несколько снижалось содержание гистидина и аргинина (на 11$ и 18$ соответственно), а также глутаминовой и аспа-рагиновой кислот (на 18$ и 31$ соответственно), а концентрация лизина, наоборот, заметно повышалась (на 55$). Из неполярных аминокислот в белке ПЛ мозга с возрастом несколько уменьшалось содержание валина, лейцина и глицина (в ,среднем на 18$). Содержание пролина и тирозина, наоборот, заметно повышалось (на 90$ и 72$ соответственно)..

С целью характеристики физико-химических свойств белкового компонента ПЛ мозга на разных стадиях постнатального развития были применены коэффициенты и расчеты, предложенные различными авторами для характеристики мембранных белков. Согласно

Таблица 3

Аминокислотный состав 01Ш, выделенных из головного мозга крыс разного возраста,в Н/% (средаее из 2-х определений)

Аминокислота Возраст (дни)

I 10 20 30 120-180

Аргинин 3,58*0,01 2,77+0,32 2,30*0,01 2,62+0,17 2,92*0,24

Гистццкн 2,42+0,05 2,35*0,01 2,17*0,04 1,98*0,01 2,16*0,00

Лизин 2,54+0,63 2,17*0,03 2,37*0,56 3,82*0,35 3,94*0,15

Аспара-гиновая 6,91+0,30 6,67+0,17 6,19*0,45 6,09*0,11 4,78*0,18

Глутами-новая 7,16+0,02 6,72*0,23 7,06*0,13 5,99*0,13 5,86*0,23

Полуцис-тин _

Метионин - - - 2,63*0,50 2,23*0,39

Серин 7,60*0,45 6,92*2,05 8,34*1,30 8,76*0,18 7,94*0,89

Треонин 6,42*0,25 5,63*0,62 7,29*0,62 7,93*0,88 7,45*0,04

Пролин 3,70*0,09 5,40*1,06 5,89*1,20 6,45+0,49 7,01*0,23

Глицин 12,84*0,58 13,01*0,05 10,88*0,67 10,10*0,39 10,53*0,13

Алании 11,74+0,29 11,20*0,14 11,32*0,57 I0,05¿,70 11,02*0,12

Валин 5,85*0,10 5,06*0,77 5,26*0,46 5,63*0,37 4,84*p,37

Лейцин 12,64*0,23 12,74*1,20 11,36+0,45 12,31*0,88 10,26*0,11

Изолей-цин 6,12*0,13 8,08¿0,I4 8,00*0,21 6,12*0,53 6,49*0,58

Тирозин 3,36*0,03 3,72*0,51 3,94*0,04 3,40*0,48 5,77*0,67

Фенилала-нин 7,12*0,15 7,56*0,11 7,64*0,27 6,12*0,02 6,80*0,18

Barrantes (1973) аминокислоты были разделены на 6 групп и вычислена их суша в каждой группе: I - основные, 2 - кислые, 3 -общие заряженные, 4 - гидрофильные, 5 - гидрофобные, 6 - аполяр-кце.

Расчеты показали, что в процессе развития в белке ПЛ мозга уменьшается содержание заряженных аминокислот (главным образом кис,дых), в связи с чем несколько понижается отношение общих за-ряяенних аминокислот к гидрофобным и аполярным, причем этот сдвиг имеет место в основном в период от I- до Ю-дня после рождения. Соответственно в том же промежутке несколько снижается коэффициент полярности белка ГШ, рассчитанный по wanderkooi,

зара1сИ (1972), а относительная гидрофобность, рассчитанная по АЪодег1п (1971), наоборот, возрастает (табл.4).

Таблица 4

Коэффициент полярности и относительная гидрофобность белка ПЛ из головного мозга и сердца крыс разного возраста

Возраст (дни) Коэффициент полярности в процентах Относительная гидрофобность в относительных единицах

мозг сердце мозг сердце

I 36,50 34,84 127,01 142,04

10 34,16 35,90 144,84 142,77

20 34,22 33,58 138,28 136,52

30 34,61 34,92 134,29 144,98

120-180 34,43 31,77 137,67 143,59

Выявленные изменения содержания некоторых аминокислот можно объяснить, с одной стороны, накоплением в разные сроки онтогенеза ПЛ различных субклеточных образований, несколько отличающихся по своему аминокислотному составу (Мавукян и др., 1987); с другой - изменением гетерогенного белкового состава ПЛ разных субклеточных частиц (Манукян, Степанян, 1978; Lees et al.,1979; Bizzozero, 1982 ) в процессе развития. На ранних стадиях пост-натального онтогенеза аминокислотный состав белка ПЛ мозга ближе к аминокислотному составу белка ПЛ митохондрий, а после 10-дневного возраста, когда начинается и активно идет миелиниза-ция, приобретает черты, присущие белку ПЛ миелина. Этому периоду соответствует и изменение белкового состава ГШ мозга, в котором согласно данным ряда авторов, на ранних стадиях развития присутствуют в основном низкомолекулярные компоненты с Mr -1317 кДа, а между 13- и 21-ым днями резко возрастает содержание более высокомолекулярных: белка ПЛ с Мг —25-28 кДа и белка ДМ-20 с Мг-20-22 кДа, которые доминируют после 20-дневного возраста ( Lerner et al.,1974; C3mpagnoni, 1976; Степанян,1985).

Сердце. Содержание большинства аминокислот в белке ПЛ сердечной мышцы, где также преобладали неполярные аминокислоты,мало изменялось в ходе•постнатального развития (табл.5). Однако часть из них претерпевала некоторые сдвиги. С возрастом в белке ПЛ сердца несколько снижалось содержание аргинина (на 12%)

и глутаминовой кислоты (на 18$), а концентрация лизина и особенно гистидина, наоборот, повышалась - на 13% и 24,65? соответственно. Из неполярных аминокислот в белке БД сердца с возрастом заметно уменьшалась концентрация валина, тирозина и в меньшей степени аланина (на 36$, 31$ и 15$ соответственно), а концентрация пролина, наоборот, резко возрастала (на 127$).

Таблица 5

Аминокислотный состав ОПЛ, выделенных из сердца крыс разного возраста,в М/$ (среднее из 2-х определений)

Амино- штл ТТЛП1 о Возраст (дни)

кислота I . 10 20 30 120-180

Аргкган 2,76 2,76^,62 2,42*0,29 2,38^0,08 2,43^0,04

Гистидин 1,99 2,06*0,25 1,93*0,25 1,94*0,03 2,48*0,47

Лизин 3,18 3,12*0,17 2,93*0,00 3,36*0,38 3,60*0,69

Аспара-гиновая 6,69 7,00*1,17 6,4С(±0,13 6,33*0,30 6,10*0,75

Глутами-новая 5,95 6,30*0,30 5,70*0,38 4,97*0,13 4,88*0,63

Подуцистин - - - ■ - -

Метионин - - - 4,52^0, II 3,56^0,09

Серин 8,42 7,88*0,11 8,20*0,52 7,60*0,52 7,45*0,36

Треонин 7,35 7,82*0,04 7,68*Р,29 8,00*0,36 6,83*0,50

Пролин 4,76 3,24*0,54 8,87*Р,71 7,99*0,27 10,82*0,81

Глицин 10,57 11,28*1,08 Ю,08*Р,46 10,84*1,39 9,87*0,59

Алании 10,99 10,38^,28 10,56*0,47 9,33*0,34 9,37*0,12

Балин 4,86 4,64*0,56 3,98*0,37 3,48*0,70 3,11*0,25

Лейцин 13,39 13,30*0,35 11,92*0,80 11,8440,39 12,78*2,33

Изолейцин 8,27 9,02*0,35 8,27*0,29 7,96^0,56 7,84*0,20

Тирозин 4,19 4,40*0,11 4,39*0,03 3,45*1,05 2,89*0,74

Фенил-аланин 6,63 6,80*0,40 6,67*0,03 6,01*1,14 5,99*0,20

Общие характеристики аминокислотного состава белка ПЛ сердца и вычисленные на их основании коэффициенты изменялись в том же направлении, что и мозговые (табл.4).

Следует отметить, что в сердечной мышце распределение ПЛ менее гетерогенно, чем в мозгу. Они локализованы здесь главным образом в митохондриях. Однако сами митохондриальные ПЛ состоят

- 21 -

з высокомолекулярного ( Mr- 34 кДа) и низкомолекулярного ( мг-Э-12 кДа) компонентов ( Folch-pi,Sakura,i976 ). Низкомолеку-ярный компонент в свою очередь включает по крайней мере три злка i, ß, отличапцихся по аминокислотному составу и функ-ии (Blondín,1979). Изменением соотношения этих компонентов ходе постнатального развития и могут быть обусловлены некото-ые сдвиги в аминокислотном составе 1Ш сердца. С другой сторо-ы, как и в мозгу, накопление в разные сроки Ш, входящих в остав других субклеточных частиц, в частности, саркоплазмати-еского ретикулума также может играть определенную роль.

При сравнении аминокислотного состава белка ПЛ мозга и ердца оказалось, что на фоне общего сходства у всех изученных озрастных групп имеются отличия, которые увеличиваются по мее развития. У зрелых крыс ПЛ сердца по сравнению с мозговыми арактеризуются несколько более высоким содержанием аспараги-овой кислоты, метионина, пролша, лейцина, изолейцина и более изким глутаминовой кислоты, глицина, аланина, валина и особен-

0 тирозина (табл.З, 5). Белок ПЛ сердечной мышцы по своим ос-овным аминокислотным показателям несколько более гидрофобен, :ем мозга (табл.4).

Результат^ проведенных исследований показывают, что в хо-;е постнатального развития основные аминокислотные характерис-ики белка ПЛ мозга и сердца, определялцие его физико-химичес-:ие свойства, сохраняются на довольно постоянном уровне. Последуй, по-видимому, необходим для поддержания функции этих белков

1 мембранах в разные возрастные периоды.

ВЫВОДЫ

I. С помощью трех разных методов определения изучено содержание белка ПЛ в различных органах белой 1фысы. Показано, что iHo выше в богатых проводниковыми структурами отделах ЦНС зре-гой крысы - продолговатом и спинном мозгу и ниже в "головном". 1з других органов наиболее богато ПЛ сердце, где их содержание шшь несколько ниже,.чем в "головном" мозгу, почки - в корковом яое которых ПЛ несколько больше, чем в мозговом, печень, иад-ючечники, матка. В скелетных мышцах ПЛ мало, но в красных -здвое больше, чем в.белых. В разных отделах ЦНС концентрация 1Л коррелирует главным образом с количеством вделинизировашшх

волокон, а в других органах - с интенсивностью окислительного обмена и плотностью митохондрий.

2. Во всех изученных органах содержание белка 1Ш повышалось в ходе постнатального развития крысы, но степень и сроки изменений были в общем различны, хотя имелись и черты сходства.

3. Наибольшие сдвиги в ходе онтогенеза претерпевало содержание белка 1Ш в разных отделах ЦНС, где оно было очень низким в день рождения и повышалось в 12-20 раз в процессе развития. Концентрация белка ПЛ в "головном", продолговатом и спинном мозгу несколько увеличивалась с I- до Ю-дня постнатальной жизни и резко возрастала в течение последующих 20-30 дней, когда начинался и активно шел процесс миелинизации. Однако к 40-дням после рождения содержание белка ПЛ. достигало только половины взрослого уровня, увеличивалось еще в 2,0-2,2 раза к 90-дню и продолжало медленно повышаться и в дальнейшем.

4. В сердце основные сдвиги приходились на первые 10 дней постнатальной жизни, в течение которых содержание белка ПЛ увеличивалось в 2,2 раза, достигая 70% от содержания у зрелых крыс. Оно продолжало медленно нарастать вплоть до 120-180-дней после рождения, увеличиваясь к этому времени в 3,2 раза по сравнению

с новорожденными.

5. В почках содержание белка ПЛ повышалось постепенно и равномерно в течение всего первого месяца постнатальной жизни, увеличиваясь в 2,5 раза к 30-дням после рождения, и продолжало медленно повышаться и в дальнейшем. У 120-180-дневных крыс оно было в 3,4 раза выше, чем у новорожденных.

6. Меньшие сдвиги претерпевало содержание белка ПЛ в печени, где оно было довольно высоким уже у новорожденных крыс и повышалось всего в 1,7-1,8 раз в процессе развития. Основные изменения, как и в сердце, цриходились на первую декаду постнатальной жизни, в течение которой концентрация белка ПЛ возрастала в 1,3 раза, держалась на этом уровне до 40-дня, затем снова повышалась до 90-дня.

7. В отличие от остальных органов в скелетной мышце содержание белка ПЛ у новорожденных крыс было лишь в 1,16 раз ниже, чем у зрелых. Оно заметно увеличивалось в течение первых 30-дней постнатальной жизни (в 1,7 раз), достигая 144$ взрослого уровня, затем довольно резко снижалось. Наибольшая скорость накопления ПЛ в скелетной мышце, как и в сердце и печени, отмеча-

- 23 -

:ась в течение першх 10-дней тооле рождения.

8. Концентрация белка ПЛ в суммарных белках разных орга-юв изменялась также по-разноэду в ходе постнатального разви-'ия. Повышаясь резко в разных отделах ЦНС (в 11-14 раз), в юныпей степени в почках и сердце (в 2,4-2,1 раза), она мало вменялась в печени, а в скелетной мышце, наоборот, резко сни-салась (в 2,2 раза).

9. Сопоставление кривых изменения концентрации белка ПЛ

5 различных органах с их морфо-функциональным и биохимическим ¡озреванием показало, что в разных отделах ЦНС изменение кон- • дентрации ПЛ в основном совпадает с ходом миелинизации, тогда сак в других органах коррелирует главным образом с процессами ¡озревания митохондрий и становления их функции.

10. На фоне общего сходства (богатство неполярными аминокислотами и относительная бедность кислыми и основными) содер-кание некоторых аминокислот в белке ПЛ мозга и в меньшей степе-т сердца претерпевало определенные сдвиги в ходе постнатального развитии. Различия в аминокислотном составе белка ПЛ этих звух органов увеличивались с возрастом. На более ранних стадиях развития аминокислотный состав белка ПЛ головного мозга был 5лиже к белку ПЛ сердца и митохондрий мозга, а после начала лиелинизации приобретал черты, свойственные белку ПЛ миелина.

11. Рассчитанные исходя из аминокислотного состава основ-яые аминокислотные характеристики белка ПЛ как мозга, так и сердца, определявдие их физико-химические свойства, поддерживались на довольно постоянном уровне на всем протяжении развития. 3 возрастом несколько повышалась гидрофобность белка ПЛ как мозга, так и сердца.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТШЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Манукян К.Г., Киракосян Л.Г., Левонян К.Л., Захарян В.Н. Количественные изменения белка протеолипидов в разных отделах нервной системы и в сердце белых крыс в онтогенезе. - Сб. Вопр. биохимии мозга, изд. АН Арм.ССР, 1974, 9, с.109-121.

2. Манукян К.Г., Киракосян Л.Г. Протеолишщы разных отделов нервной системы и некоторых других органов белых крыс в онтогенезе. - Тез. докл. УП совещ. по эвол. физиол., посвящ. памяти акад. Л.А.Орбели, Ленинград, 1977.

3. Киракосян Л.Г. Количественные сдвиги белка протеолипидов в разных отделах нервной системы и других органах белых крыс в ходе онтогенеза. - Тез. Всесоюзн. конф. Эволюционная биохимия и происхождение жизни. Ереван, 1978, с.109.

4. Киракосян Л.Г. Содержание белка протеолипидов в нервной системе и других органах белых крыс разного возраста. - Тез. 1У Закавказской конф. геронтологов и гериатров. 1980, с.90-91.

5. Киракосян Л.Г. Количественные изменения белка протеолипидов в разных отделах нервной системы и других органах 1фыс в ходе онтогенеза. Биолог, ж. Армении, 1981, т.34, ib 5, с.538-539, депон.

6. Кщзакосян Л.Г., Манукян К.Г., Левонян К.Л. Содержание белка протеолшщдов в разных отделах нервной системы и других органах белых крыс. Биолог, ж. Армении, 1981, т.34, & 8,

с.789-794.

7. Манукян К.Г., Степанян A.A., Арутюнян Д.Л., Киракосян Л.Г. Аминокислотный состав очищенных протеолипидов из разных субклеточных образований мозга крысы. Биолог, ж. Армении, 1981, т.34, № 8, с.878-880.

8. К1факосян Л.Г., Манукян К.Г. Аминокислотный состав протеолипидов головного мозга и сердца крыс разного возраста. - Ж. экспер. и клин, медицины, 1982, т.22, В 3, с.209-213.

9. Киракосян Л.Г., Манукян К.Г., Степанян A.A. Содержание и аминокислотный состав белка протеолипидов мозга крысы в ходе постнаталъного развития. - Тез. Всесоюзн. симп. Развивающийся мозг, Тбилиси, 1984, с.81.

10. Manuklan К.Н., Kirakosian L.G. Proteolipids in developing rat Brain. - Neurochemical Hesearch,I985,v.I0, N II, p.1533 - 1545.

Бувага 60 х т/16, ± п/ж,ВФ-085?* Подпиоано я печати il.ia. ii з г

Отдел оперативной ИолЮрафи ереванского медицинского инотитута, Ерейан - Кирова 2