Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль фосфорилирования и дефосфорилирования белков в регуляции нейросекреции

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Роль фосфорилирования и дефосфорилирования белков в регуляции нейросекреции"

'< - Г' "

МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА. ОРДЕНА ОКТЯБРЬСКОЙ РЕВОЛЮЦИИ И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Имени.Н.В.ЛОМОНОСОВА

БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

На правах рукописи

ГУБИН АЛЕКСАНДР НИКОЛАЕВИЧ

УДК 5Т7.12г.б1г.43

РОЛЬ ФОСФОРИЛЙРОВАНИЯ И ДЕФОСФОРИЛИРОВАНИЯ БЕЛКОВ В РЕГУЛЯЦИИ НЕИРОСЕКРЕНИИ

( 03.00.04 - бИОХИНИЯ)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1991

/

Работа выполнена на кафедре биохимии Биологического Факульт та Московского государственном университета им.М.В.ЛонокосоЕа.

Научный руководитель:

доктор химических наук.

профессор Е.С.Северин

ОФиниаяь кке оппоненты:

доктор биологических наук

Н.Б.Нестерова

кандидат биологических наук

А.В.Воротников

Ведущая организания: Институт биоорганической хин]

на заседании специализированного ученого совета Д. 053.05.32 п: Московском государственнок университете ин.М.В.Ломоносова по а расу: йосква, 217899. Ленинские горы." НГУ. Биологический факул тет.

С диссертапией можно ознакомиться в библиотеке Виологическо Факультета ИГУ.

Зашита состоится

ин.Л.м.Шемякина 23- О 1991 г. в часов в ауд.^

г. в

Автореферат разослан

1991 г.

Ученый секретарь

специализированного совета

кандидат биологических наук

характеристика работы

Актуальность проблемы, в настоящее время проблемы, связанные с изучением происходящая в мозге процессов, стоят исключительно остро. Это связано с тем. что на современного' человека обрушиваются огромные обьемы новой информации, динамичное- развитие об-оества предъявляет к человеку повышенные требования. Часто это приводит к стрессам, к различным нарушениям в сфере мозговой деятельности. крайне важными поэтому представляются исследования, которые позволят глубже понять законы, по который функционирует головной мозг. Лучшее понимание того, как работает мозг, может привести к созданию новых методов оказания помоши при нарушениях . деятельности мозга. облегчить поиск новых лекарств. За последние годы достигнуты впечатляошие успекн в области физиологии мозга, разработаны новые подходи, позволяющие решать сложнейшие задачи, которые ставит перед учеными головной мозг. Исследования в области биохимии нозга. проясняющие тонкие механизмы жизнедеятельности клеток иозга - нейронов, очень сложны и поэтом? остается множество невыясненных вопросов. В тон числе проблемы, связанные с регуляцией нейросекредин остаются тайной за семью печатями. Лишь в последние несколько лет ученые приступили к расшифровке молекулярный маханизнов этих процессов. Естественно, ка этом пути встречается немало трудностей, но обшие черты начинают проясняться. Плодотворен такой подход, когда изучаются те компоненты !в частности, белки) нервных окончаний, которые присутствуют у всех организмов, стояния на различных ступенях эволюционной лестницы.

- г -

Эти консервативные компоненты, как правило, выполняет саные важные функции и поэтому не подвергаются изменениям в процессе эволюционного развития.

Новые открытия, позволявшие более глубоко понять процессы, связанные с иеяросекрепией были сделаны в в течение последних лет. но аля получения полной и адекватной картины необходимы дальнейшие исследования и новые подходы.

цель работы состояла 1) в выделении и характеристике некоторые иейрональныг белков, принимавших участие в нейросекрепии и ее регуляции. £) в исследовании роли ФосФорилирования определенных иейроспеаиФических белков, в частности синапсина I. в осуществлении нейросекрепии. 3) в исследовании процессов деФосФорилирования белков в регуляции секреции иейротрансниттероа

научная новизна, из нозга человека впервые выделены нейроспе-циФический белок нейромодулин и кальций, кальнодулин-зависимая протеинфосфатаза осальнийнейрин). Показано, что неяроспецифический белок из мозга человека синапсин I является субстратом протеинкк-назы с из иозга человека. Установлено, что протеинкиназа с фосфо-рилирует синапсин I по участку, расположенному в коллагена-за-чувствительном домене молекулы. этот участок отличется от того, который фосфорилирует кальций, кальиодулин-зависимая протеинкиназа II. Обнаружен новый эффект воздействия специфического ФосФорилирования синапсина I протеинкиназоя II на стабильность нолекулы синапсина I. Синапсин I, ФосФорилированный протеинкияа-зой С и цАНФ-зависиной протеинкиназоя остается стабильным, в то Ерекя как синапсин I. ФосФорилированный протеинкиназоя И. в аналогичных условиях подвергается наградами.

Впервые установлено, что нейромодулин из иозга человека обладает способностью связывать кальмодулин в отсутствие ионов кальция. Протеинкиназа С ФосФорилирует нейромодулин из иозга человека, что приводит к потере его способности связывать кальмодулин. Калышпнейрин из мозга «человека деФосФорилирует нейромодулин из нозга человека, восстанавливая его способность связывать кальмодулин. Нейромодулин. таким образок, регулирует концентрацию свободного кальмодулика в нервной окончании.

практическое значение работы, представленные методики позволяют в предельно короткий срок получить гомогенные белки из нозга: кальмодулин, прогеинкиназг II, кальыийнейрин. Результаты работы углубляют представления о механизмах нейросекрепии и ее регуляции и открываат новые возможности целенаправленного воздействия на ряд биологических процессов, связанных с секрепиев нейротрансниттеров в норне и патологии.

Апробация. Результаты исследования были доложены на Всесоюзном симпозиуме по кимии белка /Тбилиси, 1990/, на семинаре Научного центра прикладной молекулярной диагностики и лечения нз СССР /1990/, на п-н Всесоюзном симпозиуме по теоретическим и прикладным аспектан в молекулярной биология /Самарканд. 5991/. на IV Симпозиуме СССР-ФРГ по репепторам и ионным каналам /Носква. 1991/, на 6-м симпозиуме чрг-ссср по цептидан и белкан /Ааген, 1991, на семинаре кафедры биохимии биологического Факультета НГУ /1991/.

Публикации. Результаты исследования изложены в б печатных работая.

Обьен работа. Диссертационная работа состоит из ЕЕедения, об-

- ч -

зора литературы, описания методов исследования, обсуждения результатов. выводов и списка цитируемой литературы из 1 наименований. Работа изложена на страницах наиинописного текста, содержит рисунков и таблицу.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

/

Выделение нейрональных белков и их роль в нейросекрепии.

основные биохимические процессы, лежащие в основе функционирования клеток мозга - нейронов, были открыты лить в последние годы. Ученые смогли сделать значительные шаги к пониманию того, как происходит нейросекрепия.

Нейросекреция - это процесс высвобождения из нервных окончаний нейронов низкомолекулярных соединений (нейротрансмиггеров). которые хранятся в особых образованиях-синаптических везикулах. Стимуляция нервного окончания приводит к деполяризации пресинап-тической мембраны, вследствие чего ионы кальция движутся внутрь нервного окончания. Увеличение концентрации внутриклеточного кадьиия является необходимым этапом для .запуска особых механиз-нов, которые приводят к тому, что везикулы сливаются с пресинап-тической мембраной и происходит нейросекрепия.

До настоящего ЕРемени существовали следующие представления о последовательности процессов, которые приводят к секреции нейрст-рансмитеров: ионы калымя активируют спёциФическую протеинкиназг ii, которая в свои очередь ФосФорилирует нейроспецифическии белок синапсин I. Синапснн I способен связываться с синаптическими вг-

зикулами и одновременно с иитоскелетом. закрепляя таким образом везикулу на некоторой расстоянии от пресинаптической мембраны. ФосФорилирование синапсина I специфической протеинкиназои ослабляет его взаимодействие с везикулой, вследствие чего освобожденная везикула секретируёт свое содержимое.

Таким образом, процесс нейросекрении можно условно разделить на три этапа:

1. клетка находится в состоянии покоя и везикула находится в связанном состоянии:

г. активация специфической протеинкиназы и ФосФорилирование синапсина I: 3. неиросекреция.

Из всего вышеизложенного ясно, что одним из основных участников секреции является синапсин I. Поэтому изучение его свойств, как мы полагаем, является очень важный для понннания сложных процессов. которые происходят при нейросекредии. Синапсин i ранее был выделен из нозга быка и крысы и интенсивно исследован. Выяснилось. что он состоит из двух очень схожих белков, синапсина 1а и синапсина а> с мг Эб.ооо и зо.ооо. соответственно. Синапсин I является хорошин субстратом по крайней мере для трех протеинкиназ и может Фсоорилироваться по нескольким участкам, один сериновый остаток (участок 1) молекулы фосфорилируется пАНФ-зависимой про-теинкиназой и' кальций, кальнодулин-зависиной протеинкиназой. этот фрагмент молекулы синапсина имеет глобулярную Форму и устойчив к действию коллагеназы. другой фрагмент молекулы имеет злонгирован-ную Форму и чувствителен к действию коллагеназы. Здесь на-

- б -

холятся два других серияовых остатка (участки 2 и 3), которые фосфорилируются кальция, кальнодулин-зависиной протеинкиказой II. Для этих трех протеинкиназ синапсин I является одним из наиболее эффективных субстратов.

Синапсин I присутствует только в нейронах и ассоциирован со всеми типами кадык синаптических везику'я во всех нервных окончаниях в центральной и периферической нервных системах. Синапсин I составляет примерно ьг. общего белка присутствующего в высокоо-чишенных синаптических везикулах. синапсин ассоциирован с цитоп-лазматической поверхностью синаптическик везикул. На синаптических везикулах есть специфические и высоко аффинные места связывания для синапсина I. Домен синапсина, содержащий участки фосфори-лирования 2 и 3, участвует в регуляции связывания белка с синап-тическими везикулами, другой домен синапсина связывается с компонентами пито скелета, таким образом, синапсин I образует ноет между синаптическими везикулами и элементами дитоскелета.

Синапсин широко представлен в нейронах, но отсутствует в тканях ненервного происхождения, включая даже те. которые несут секреторные функции. Поэтону. исходя из его свойств, можно утверждать, что функции синапсина I непосредственным образом связаны с нейросекрецией.

Важная роль синапсина в регуляции секрекдии трансмиттеров была доказана с помощью пряных экспериментов. Было показано, что фосфорилирование синапсина протеинкиназой II является необходимым этапом, предшествующим неяросекреаии. Связано ли фосфорилирование синапсина кАМФ-зависимой протеинкиназой*и протеинкиназой I с нейросекрецией не установлено.

таким образом эти исследования позволили установить прямую связь между ФосФорилированием определенных белков, присутствующих в нервной окончании и нейросекреаией. Процессы эти очень сложные и поэтому остается множество невыясненных аспектов, связанных с нейросекреиией и с регуляторными механизмами, задействованными в ней.

нас интересовало, каким образом ФосФорилирование и дефосфори-лирование влияет на функциональные свойства определенных нейрос-пепиФических белков и в конечной итоге на секремда нейротрансмит-теров.

Работа состояла из двух этапов: I. выделение специфических белков из нервной ткани: I. ФосФорилирования и дефосфорилирования нейроспенифических белков и влияние этих процессов на свойства белков.

ыделение нейрональннх белков.

Для того, чтобы приступить в исследованиям, посвяшеннын роли процессов ФосФорилирования в регуляпии нейросекрепии. необходимо было выделить ряд белков, основных участников этих событий:

Выли счяшены до гомогенного состояния следующие белки из нервной ткани: кальмодулин - активатор кальмодулин-зависиных Ферментов. кальций, кальмодулин-зависиная протеиюсиназа II, Фернент. присутствующий только в нервной ткани .кальций. ФосФолипид-зави-симая протеинкиназа С. нейроспепиФический белок синапсин I, ней-ромодулин и кальпий. кальмодулин-зависиная протеинФосФатаза-каль-пийнейрин. Причем два последних белка были выделены впервые.

- в -

ТАБЛИЦА ВЫДЕЛЕННЫХ БЕЛКОВ

белок источник примечани!

1. КАЛЬНОДУЛИН •мозг человека

2. КАЛЫШИ.КАЛЬМОДУЛНН-ЗАВИСИИАЯ ПРОТЕИНОНАЗА II - НОЗГ КРЫСЫ

3. ПРОТЕИНКИНАЗА С ■ нозг человека

4. СИНАЛСИН I нозг человека

5. НЕИРОНОДУЛИН мозг человека выделен впервые

б. КАЛЬШШНЕВРНН мозг человека выделен впервые

Нейронодулин - присутствует только в нервной ткани, имеет молекулярный вес по данным электрофореза около 50000 и обладает способностью связывать кальнодулин. каяьдийнеярин состоит из двух субь-единин - каталитической (бюоо) и регудяторной (19000). эта протеинФосФатаза неФосФорилирует ряд нейроспеиифических белков, в том числе нейронодулин.

XI. Влияние процессов ФосФорилирования и деФосФорилирования белков на. регуляцию нейросекредии.

Основное внимание в нашей работе мы посвятили' изучению свойств нейроспепифического белка синапсина I. Это связано с тем, что. как было отмечено, синалсин играет существенную роль в регу-

ляцик секреции нейротрансмиттеров. Но конкретный молекулярный механизм посредством которого ФосФорилирование синапсина. I приводит к секреции нейротрансмиттеров Есе еше остается неизвестным.

Ранее в нашей лаборатории было обнаружено, что протеинкиназа С способна ФосФорилировать синапсин I. Так. как это было выяснено впервые, мы предприняли попытку выяснить какой участок молекулы синапсина подвергается модификации протеинкиназой с. для этого мы предварительно ФосФорилировали синапсин I протеинкиназой с в присутствии меченной АТФ, а затем использовали метод ограниченного протеолиза белков в геле (в присутствии коллагеназы) и авторадиографию. Нам удалось показать, что протеинкиназа С ФосФорилирует синапсин I по коллагеназа-чувствительному домену (Рис.1). Как уже упоминалось, протеинкиназа IX ФосФорилирует этот же фрагмент молекулы синапсина.

Поэтому, чтобы выяснить совпадают ли участки фосфорилирова-ния синапсина протеинкиназой с и протеинкиназой II мы сравнили авторадиограммы пептидных карт ФосФо-синапсияа. ФосФорилированно-го треня Различными киназами. Видно, что участок ФосФорилирования синапсина протеинкиназой с отличен от участка ФосФорилирования синапсина цАНФ-зависиной протеинкиназой. Это и можно было предвидеть, так как эти киназы модифицируют молекулу синапсина по разным доменам, Но авторадиогранны пептидных карт синапсина. ФосФо-рилированного ■ протеинкиназой С и протеинкиназой II также не совпадают (Рис.2).

Таким образом, установлено, что протеинкиназа С ФосФорилирует молекулу синапсина по участку, расположенному в коллагеназа-чувствительном донене нолекулы. Важно подчеркнуть, что этот учас-

ток отличен от того, по которому синапсин ФосФорилирует протеин-киназа II.

коллагеназа-устойчивый , домен

а'

б'

РИС.1 ПРОТЕИНКИНАЗА С ФОСФОРИ/1И-РУЕТ СИНАПСИН I ПО К0/1ЛАГЕНА-ЗА-ЧУВСТВИТЕЛЬНОНУ ДОИЕНУ. а) контрольные образец ( окраска кумасси); а*) авторадиогранна контрольного образца: б) синапсин I, обработанный коллагеиазой (окраска кумасси); б') авторадиогранна синапсина I. обработанного коллагеназой.

на следующем этапе нашей работы ны исследовали влияние ФосФорилирования синапсина I этими тремя протеинкинаэами на его свойства. Используя несколько модифицированный метод ограниченного протеолиза белков в геле по Кливленду, мы установили, что Фос-Форилирозание синапсина I протеинкиназой II приводит к таким изменениям его свойств, что происходит санодеградакия молекулы синапсина I. в отличие от метода Кливленда в данном эксперименте мы не добавляли к образцам никаких протеаз. на авторадиограмме, полученной с этого геля, мы обнаружили Фрагменты синапсина I с молекулярными весами примерно 35 и 18 кДа. эти же фрагненты видны и на геле, окрашенном Кунасси. Нефосфорилированный синапсин I и синапсин I. фосфорилированный вАКФ-зависимой протеинкиназой и протеинкиназой с не деградировал в аналогичных условиях, также

9

*

- и -

РИС.2 АВТОРАДИОГРАНМЫ ПЕПТИДНЫХ КАРТ СИНАПСИНА I, ФОСФОРИЛИРО-ВАННОГО РАЗЛИЧНЫМИ ОНАЗАНИ.

а) синапсин X, ФосФорилированный протеинкиназой С;

б) синапсин I, ФосФорилированный пАМФ-зависимой протеинкиназой;

в) синапсин I. ФосФорилированный кальций, кальмодулин -зависимой протеинкиназой II.

как и синапсин I, к которому добавили протеинкиназу п и кальмо-дулик, но исключили АТФ,

Таким образом, обнаруженный нами эффект самодеградации си-напсина является специфическим процессом, поскольку характерен только для синапсина. ФосФорилированного очишенной кальдий, каль-модулин-зависииой протеинкиназой и.

Обнаруженный нами эффект интересен тем, что: а) деградация молекулы белка зависит от модификации этой молекулы фосфатной группировкой;

б! кодификации должен подвергаться строго определенный участок молекулы белка;

в) деградация синапсина, ФосФорилированного протеинкиназой xi позволяет объяснить, каким образом .реализуются его функпии в процессе нейросекрепии,

Теперь можно говорить о четырех этапах, которые осуществляются при нейросекреяии:

1. клетка находится в состоянии покоя и везикула находится в связанной состоянии;

г. активадия протеинкиназы II и ФосФорилирование синапсина I;

3. санодеградачия синапсина I:

4. нейросекреция.

Таким образом, открыто новое свойство синапсина подвергаться деградации при специфическом ФосФорилировании его определенной протеинкиназой. Это свойство может, быть связано с реализацией функций синапсина в регуляции нейросекревии.

В этих ■ процессах, о которых было сказано выше, прининают участке синапсин и протеинкиназа IX, которая является кальиодулин

РИС.3 СЛНОДЕГРАДАШЯ СИНАПСИНА I. ФОСФОРЙЛИРОВАННОГО КАЛЬЦИЯ. КАЛЬ-НОДУЛИН- ЗАВИСИНОИ ПРОТЕИНКИНАЗОЙ

Ц

Авторадиограима синапсина I. фосфорилированного а» протеинкиназой с; 6) дАИО-зависимой протеинкиназой; в> кальций, кадьноду-лиа-зависиной протеинкиназой II.

-зависимым Фернентои. но кальмодулин. активатор кальнодулин-зави-синых Ферментов, как установлено, существует в нервной окончании в связанной виде, в том случае, когда окончание находится в состоянии покоя, в нервном окончании обнаружен ряд белков < наесез. неяромодулин, вхскб. нейрогранин). которые относят к семье нейро-модулина (РисЛ). Все эти белки обладают очень похожими свойствами:

1. связывают кальмодулин в отсутствие кальпия:

2. фосфорилируются протеинкиназой С, при этом блокируется способность связывать кальмодулин;

3. деФосФорилируются кальций, кальмолулин-зависиной протеин-ФосФатазой.

В то же вреня это индивидуальные белки, поэтому они могут осуществлять свои функции, находясь в различных компартнентах нервного окончания, где существуют отличаюшиеся условия.

ны сделали попытку более полно изучить свойства одного белка из этого сеиенстЕа. Для этого мы выделили из нозга человека ней-

роиодулин и, используя сшлваюпик реагент и антитела против неяро-кодулина. показали, что в отсутствие кальция он связывается с кальнодулином. в среде, содержащей кальций этого не наблюдалось.

ФосФорилирование нейроиодулкна протеинкиназок с приводило к тону, что кальмодулин не связывался с нейронодулинои даже в отсутствие кальция (Рис.51, мы определили кажущуюся константу Фос-Форилирования неяромодулина протеинкиназой с - она оказалась равна 0.16 мкн. калышякейрин деФосФорилнровая ФосФо-нейронодулин с константой приблизительно равной 1 мкн.

Таким образом, можно констатировать, что нейромодулин из мозга человека обладает способностью связывать кальмодулин в отсутствие кальция. ФосФорилирование протеинкиназой С лишает его этой способности. Кальаийнэкрин дефосфорилирует нейромодулин, вследствие чего дефосфо-нейромодулин вновь способен связывать кальмодулин.

' -»- HARCKS

i

i— нейромодулин

РИС,4 БЕЛКИ СЕНЕИСТВА НЕЯРОМОДУЛИНА

; 1. Авторадиогранна белков, фосфо-

| рилированных протеинкиназой с; а

iHv •*- SICKS Авторадиограмма ФосФоридированных

Щ *- нейрогракин 6еяков посяе инкубааии с кальпий-нейрином.

•ч

1 г

изученные свойства неяромодулина позволяют утверждать, что концентрация свободного кальмодулина в нейроне регулируется посредством фосфорилирования и дефосфорилирования нейромодулина.

комплекс нейромодулин-кальмодулин .

иейромодулин '

рис.5 связывание неиронодулина с кальнодулйнок. окраска антителами против нейронодуяина из мозга бы-

ч

ка: а) в отсутствие кальция: б) в присутствии кальция; в)' в отсутствие кальдия (нейромодулии. предварительно ФосФорилированный про___________теинкиназой С).

а б в

. В заключение, основываясь на литературных данных, и данных полученных нами, ны попытались представить последовательность событий, происходящих в нервной окончании после его стимуляции, эти события представлены на схеме.

После деполяризации нейрона и вызванного этин увеличения концентрации кальция в пресинаптической области, происходит активация кальций. ФосФолипид-зависимоя протеинкиназы с. протеинкина-за с ФосФорилирует неиромодулин, деФосФо-Форна которого связывает кальнодулин в отсутствие кальция, свободный кальмодулин в свою очередь активирует ряд калькодулин-зависиных Ферментов, в частности -кальций, кальмодулин-зависиную протеинкиназу И и кальций, кальнодулин-зависиную протеинФосФатазу (кальпийнейрин).

Протеинкинаэа ii фосфорилирует сикапсик i. который привязывает везикулу к питоскелету. это приводит к тону, что ФосФо-синапсин I подвергается санодеградации. Вследствие этого синаптическая везикула приобретает возможность двигаться в сторону пресинаптической мембраны, сливается с ней !?■ в конечной итоге освобождает

нейротрансмиттеры в синаптическую шель, то есть происходит процесс нейросекрекреаии. После этого концентрация кальция в нервном окончании уменьшается, протеинкиназа С перестает активно функционировать, кальпийнейрин деФосФорилирует неиронодулин и это приводит к тону, что кальмодулин связывается с дефосфо-ней-ронодулинон, прекращая таким образом активировать кальмоду-лин-зависимые Ферменты.

ГИПОТЕТИЧЕСКАЯ СХЕМА НЕИРОСЕКРЕШМ, СВЯЗАННАЯ С КАЛЬЦИИ, КАЛЬНОДУЛИН-ЭАВИСИНЫМ ПУТЕМ РЕГУЛЯЦИИ КЛЕТОЧНЫХ ПРОЦЕССОВ

ВЫВОДЫ

1. Выделен и охарактеризован ряд нейрональных белков: кальмоду-лин, пр'отеинкйназа II. протеинкиназа с. синапсин I. нейромодулин. кальпийиейрин.

г. Установлено. что протеинкиназа с из нозга человека ФосФорили-ргет молекулу синапсина I из нозга человека по участку, расположенном^ в коллагеназа-чувствительном домене молекулы. Этот участок отличен от того, по которому протеинкиназа II ФосФорилирует синапсин I.

3. открыто новое свойство синапсина I из "мозга человека подвергаться деградации при специфическом фосфорилировании его кальция, кальмодудин-зависиной протеинкиназой II. Это свойство может объяснить роль синапсина I в регуляции нейросекреции.

4. Нейромодулин из нозга человека обладает способностью связываться с кальмодулином из нозга человека в остутствие кальния. таким образок, в нейроне, находящемся в покое, кальмодулин ассоциирован с неиромодулинон и неспособен активировать свои белки-мишени.

5. ФосФорилирование нейронодулина протеинкиназой С лишает его способности связываться с кальмодулином. Константа ФосФорилирова-ния нейронодулина протеинкиназой С равна о.1б нкм.

6. Халышйнеирин из мозга человека деФосФорилнрует нейромодулин из мозга человека с константой около 1 мкМ. ДеФосФорилирование нейронодулина кальиийнеярином восстанавливает его способность связываться с кальмодулином.

список печатных работ по тене диссертации

1. Северин С.Е., Губин А.Н. Некоторые свойства сияапсина I из мозга человека.//Тезисы Всесоюзного симпозиума по химии''белка. -Тбилиси. 1990 г.- С.133.

г. губин А.Н.. северян С.Е. Самодеградация синаисина 1, Фос-Форилированного кальций, кальмодулин-зависимой протеинкиназоа II. //Тезисы Il-го Всесоюзного симпозиума по теоретическим и прикладным аспектам в молекулярной биологии. - Самарканд, 1991 г.- с.5в.

з. severm s.E., MosKviuna E.L., GuMn А.к. and Klseiev v.i. ca -dependent phosphorylation of srnapsm I as a possible regulatory mechanism of neurosecretion.// Advances in enzyme regulation. - 1991. v.3l, p.351-361.

4. Gubin a.h., severln s.E. srnapsm i phosphorrlated ьу ca, caimoduim-dependent protein Kinase ii is able to seif-desrade. // FEBS lett.,1991. V.289. P.11-I2.

5. s.E.severm, A.N.Gubin. E;L.MosKvitma, o.k.tusupov. Regulation of neurosecretion by cellular protein Kinases.// Abstracts of iv ussr-frg symposium "Eeceptors and ion channels". - Koscow, 1991. P.31. '

6. S.E.Severm, A.H.Gubln "Phosphorylation and dephosphoryiation of neuronal proteins - Pivotal route m neurosecretion".// Abstracts of 8th frg-ussk Symposium of peptides and 'proteins- Aahen, 1991, p.38.