Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Роль энтомопатогенных нематод в регуляции численности вредных видов насекомых

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "Роль энтомопатогенных нематод в регуляции численности вредных видов насекомых"

На правах рукописи

Мохамад М.А. Хабиес

г

Роль энтомопатогенных нематод в регуляции численности вредных видов насекомых

Специальность 06.01.1 [-защита растений

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2005

Диссертационная работа выполнена в 2002-2004 гг. на кафедре защиты растений аграрного факультета Российского университета дружбы народов

Научный руководитель:

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Помазков Ю.И.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Н.Д.Романенко, кандидат биологических наук С.Н.Кручина. Ведущая организация: Главный ботанический сад РАН.

Защита состоится « .....»............2006 г. в «.....» час. на заседании

диссертационного совета К 212.203.06 в Российском университете дружбы народов по адресу:

117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.8, корп.2 (аграрный факультет, лекционный зал № 2)

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6.

Автореферат разослан «......»............2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Заец В.Г.

/оШ

1 .Общая характеристика работы

Актуальность исследований. Интенсификация сельскохозяйственного производства с целью получения необходимых продуктов питания для населения земного шара, численность которого постоянно возрастает, создала немало проблем, связанных с охраной окружающей среды. В частности, уровень пестицидной нагрузки на экосистемы при защите собираемого урожая в ряде случаев стал оказывать отрицательное воздействие на полезную энтомофауну, участвующую в естественной регуляции численности вредных видов, и, следовательно, эффективность ее. Более того, у ряда видов возникла резистентность к химическим препаратам. Возросли потери продукции. Это вызвало необходимость повышения дозы препарата и получения их новых форм. Так, например, для борьбы с оранжерейной белокрылкой (Trialeurodes vaporatiorum) пришлось использовать концентрации пиретроидов в 2000 раз больше, чем к моменту их внедрения в производство. Применение новых препаратов, их чередование не всегда радикально исправляло положение. Число вредных видов, приобретающих устойчивость к различным пестицидам, продолжает увеличиваться, особенно среди Двукрылых, Бабочек, Жесткокрылых и Клещей. Поэтому важной задачей в настоящее время является разработка и внедрение в производство приемов активизации естественных механизмов регуляции численности вредных видов и замена в применяемых системах защиты пестицидных обработок биологическими средствами, ограничивающими их развитие (Помазков, Заец, 1998).

Попытки использовать одни виды организмов для подавления или ограничения развития других делались давно.

Нематоды являются широко распространенными обитателями планеты. Они встречаются в почве и донных субстратах пресных водоемов всех материков, населяют океаны до самых предельных глубин, а также приспособились к паразитированию в различных животных и растениях, связаны со многими видами насекомых, и, в меньшей степени, клещей. Эти связи разнообразны, не все еще достаточно изучены и варьируют по уровню от чисто случайных взаимодействий до облигатного паразитизма.

Первые сведения о заболеваниях насекомых, вызванных нематодами, были известны более 350 лет назад (Gaugler, 1988). Наиболее ранние работы по этой проблеме относятся к прошлому столетию. Анализ имеющейся информации свидетельствует о том, что наиболее перспективными для использования в биологической борьбе с вредителями являются нематоды семейств Steinernematidae и Heterorhabditidae (Poinar, 1978, Wouts, 1985). Представители этой группы впервые выделены из личинок пилильщика Capholia abietis в 1923 г. в Германии, в бывшем СССР из гусениц озимой совки в 1926 г. (Кирьянова, Краль, 1969). В 1929 г. В США была описана Steinernema glaseri из японского жука Popillia japónica

(Glaser, 1932). Этот вид при заражении вызывал быструю гибель хозяина. После инвазии большинство особей насекомых - вредителей погибает в пределах 24 - 60 часов. Оценка существующей информации показывает, что паразитические нематоды способны играть важную роль в регуляции численности вредных видов членистоногих. Постепенно наука расширяет свои знания о круге поражаемых ими представителей вредной фауны. Накапливаются сведения об особенностях их биологии и взаимодействия с живыми организмами. Отрабатываются методики по искусственному разведению энтомопатогенных форм, их накоплению, созданию препаративных форм, способных к длительному хранению без утраты своей активности. Однако остаются нерешенными вопросы географического распространения отдельных видов, оценки их эффективности как для местных биотипов, так и для космополитических форм, физиологических рас вредителей. Практически исследования этих группы нематод находится в начальной стадии.

Цели и задачи исследования. Анализ литературных сведений показал, что использование энтомопатогенных препаратов является перспективным с точки зрения эффективности контроля за развитием популяций вредных видов и их экологичности. Однако выбор паразитических видов невелик. Недостаточно изучены условия применения препаратов и их форм в разных климатических зонах В связи с этим, нами были поставлены следующие цели:

определить видовой состав паразитических нематод в Омане; отработать методику их выявления на мертвом, сухом и фиксированном материале;

апробировать методы культивирования нематод в искусственных условиях и оценить их технологичность для массового производства;

дать экономическую оценку применения нематодных биопрепаратов против вредителей.

Научная новизна. Впервые в Султанате Оман (провинции Nejd и Dhofar) на участках под различными культурами проведен мониторинг видового состава энтомопатогенных нематод из отряда Rhabditida. Выявлен новый вид Steinernerna sp п., названный впоследствии S. abbasi. Изучены его биолого-экологические особенности развития. Показана возможность выявления зараженности сухих образцов погибших насекомых энтомопатогенными нематодами.

Практическая значимость. Испытаны и предложены новые перспективные среды для культивирования местной формы S abbasi. Дана оценка различных параметров технологии ее разведения (инвазионная активность против разных видов насекомых, выход с единицы массы субстрата, влияние факторов среды на накопление биоматериала, отношение к пестицидам) и экономической эффективности.

fc «к!; lr 3t

♦ .-к.-. | 4

с» * л ?

Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации докладывались на симпозиумах (г. Пенза, 2003 г.), и «Нетрадиционные растения и перспективы их практического использования» (г. Пущино, 2003 г.), научных конференциях аграрного факультета РУДН (г. Москва, 2003 г. и 2004 г).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 120 страницах и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов и обсуждения, заключения, выводов и приложений. Иллюстративный материал включает 21 таблицу, 14 рисунков. Список использованной литературы содержит 230 источников, в том числе 209 на иностранных языках.

Условия, материалы и методы исследований Работа над темой выполнялась в течение 1993-2005 гг. в лаборатории Agricultural Research Staition (г. Salalah, Султанат Оман) и на кафедре защиты растений РУДН. По ряду разделов исследования проводились совместно с М. Abbas (National Res.Centre, Egypt), S. Elawad (Univesity of Reading, Berkshire), W. Ahmad (Aligarh Muslim University, India) A. Reíd (International Institute of Parasitology, St. Albans), которым автор выражает большую благодарность за практическую помощь и консультации.

Климат Султаната Оман полуаридный с длительными дождями (2-4 дня в неделю, с июня по август) когда влажность воздуха доходит до 90100%. Температура в течение года колеблется в пределах 23 - 32 С° (рис. 1).

(В О.

10 а. а> с

2 р

а О

о о

X *

я ц

CQ

-температура

месяцы

-а— влажность ___воздуха ' j

Рис. 1. Средняя температура (С°) и влажность воздуха (%) в районе г Салалах (2003 - 2004 гг.).

Анализ насекомых и почвенных образцов на содержание в них энтомопатогенных видов нематод проводили в лабораторных условиях в

Омане. Почву отбирали (объем образца 100 г) с сентября 1994 г. по февраль 1999 г. на глубине 13-16 см на плантациях, сходных по агротехнике, pH и физико-химическим показателям. Образцы помещали в пластиковые пакеты для проведения анализов в лаборатории. Одновременно отмечалась температура почвы в момент взятия пробы, возделываемая на участке культура и встречаемые на ней основные вредители. Содержание энтомопатогенных нематод в почвенных пробах определяли с помощью приманок из гусениц Galleria mellonella (Bedding, Akhurst, 1975). Гусениц на зараженность их нематодами просматривали ежедневно. Погибшие экземпляры переносили в чашки Петри с влажной фильтровальной бумагой до проявления визуальных признаков инвазии. Зараженность живых и мертвых особей нематодами определяли под микроскопом после мацерирования их препаровальными иглами в капле воды или 25% растворе Рииджера. Контролировали появление и численность личиночной стадии в расчете на 1 особь Galleria. Продолжительность анализа в зависимости от вида энтомопатогенных нематод составляла 7-11 дней.

Разведение большой вощинной моли (G. mellonella) проводили в лаборатории по методике White (1927) в чашках Петри при температуре 22-26°С. Их использовали в экспериментах по гибридизации и при оценке действия химических препаратов на жизнеспособность и инвазионную активность энтомопатогенных нематод. Повторность 4-х кратная.

При гибридизации инвазионные личинки Steinernema abbasi, S. scapterisci и S. riobravis после стерилизации в 1% растворе хиамина в течение 15 мин. иньецировали (каждого вида попарно) в гусениц G. mellonella. В каждом варианте по 40 повторностей. Длительность анализа составляла 6 дн.

Эффективность нематодных препаратов оценивали в процентах гибели гусениц (в 3-кратной повторности) после опрыскивания суспензией инвазионных личинок нематод (1000-2000 особей/мл). В качестве контроля служила вода. В лабораторных условиях гусениц после обработки их суспензией нематод инкубировали при 23°С в течение 3 дней, затем их расчленяли в 25% растворе Рингера на фильтровальной бумаге в чашках Петри, закрытых пленкой Parafilm (Goude et al., 1995).

Модельные опыты с нематодами ставились в стеклянных лизиметрах по 1000-1500 см3, в каждый из которых помещали гусениц большой вощинной моли - G. mellonella и содержали при 18-26°С и влажности 20-65% (Hubeis, 1995, 1999, 2000).

Изоляция суммарной геномной ДНК из близкородственных видов энтомопатогенных нематод (S. carpocapsae, S. scapterisci и S. riobravis) и нового вида из рода Steinernema проводилась по Ried и Hominick (1992). Выделение фрагментов их профиля из лизатов взрослых самок S. kushidaí и Steinernema sp.n. из Омана для оценки степени полиморфизма выполняли

согласно Joyce et al. (1994). Амплификации подвергали 100 mM очищенной ДНК (или 5 нематодного лизата) с соответствующими добавками и 8 частями Tag полимеразы. Использовался праймер ITS, синтезированный Pharmacia Biotech (Vrain et al., 1992). Продукты амплификации разделяли электрофорезом в 1,5% агарозном геле (Maniatis et al., 1989) при 5 v/см в течение 3,5 час. Окрашивание фрагментов проводилось бромистым этидием (Maniatis et al., 1989).

Анализ вариабельности результатов проводился в SAS-компьютерной программе.

Результаты исследований Нами в течение ряда лет (1994-2003 гг.) проводились поисковые обследования различных посевов и насаждений сельскохозяйственных культур, преимущественно в провинции Nejd (160 км от г. Салалах) и Dhofar Султаната Оман. Из образцов почвенных стадий различных насекомых было выделено более 10 изолятов энтомопатогенных нематод из отряда Rhabditida, некоторые из которых предварительно были идентифицированны как Heterorabditis bacteriophora и Heterorabditis sp., а также выявлен новый вид Steinernema sp.n., предварительно названный нами по месту обнаружения «salalah». Steinernema sp.n. обнаружен в гусеницах G. mellonella, куколках Heliotis zea, Spodoptera littoraíis, a Heterorhabditis bacteriophora в G. mellonella, гусеницах совок - Spodoptera exigua, S. littorallis и личинках фигового долгоносика Batocera rafomaculata (Hubeis, 1995, 1999). Личинки ранее неизвестного вида Steinernema выделены из почвенных проб под люцерной в куколках и личинках Helicoverpa (=Heliothis) armigera, а также S. littoraíis. Наибольший процент поражения почвенных стадий насекомых нематодами отмечен в сентябре и самый низкий - в октябре. В отобранных образцах почвы содержалось: Heterorhabditis sp. - в среднем 46,4%, Heterorhabditis bacteriophora - 27,0% и Steinernema sp.n. - 26,3%.

Анализ образцов показал, что энтомопатогенные нематоды выявлены в 112 образцах из 401 (25,9%). Это свидетельствует о достаточно высоком уровне заселения почвенных стадий насекомых в условиях Султаната Оман представителями двух семейств Heterorhabditidae и Steinernematidae (Shamseldean et al., 1994). Они выявляются в самых различных почвенных биоценозах (табл. 1). При этом зарегистрировано варьирование их по численности в зависимости от выращиваемой культуры. Так, наиболее широкий видовой состав энтомопатогенных нематод и их численность отмечены в почвенных образцах с полей под люцерной и многолетними травами. Следует подчеркнуть, что вид Steinernema sp.n. обнаруживался также в единичных образцах биоценозов кукурузы, бамии и баклажанов. Нематоды выявлялись в течение всего календарного года. Однако в отдельные месяцы некоторые виды в образцах не обнаруживались: под

многолетними травами Н^егогИаЬсКйз ер. в январе, Н. ЬайепорЬога в январе и августе и в мае и июне 81етегпета sp.fi.

Таблица 1

_Частота встречаемости энтомопатогенных нематод_

Культура* Число позитивных образцов/в %

Н^егогИаЬсНйз ер. Н. Ьас1епор1юга 81етегпета 5/5. и.

Люцерна 11,0/9,7 9,0/8,0 24,0/21,4

Кукуруза 17,0/16,9 13/6,6

Баклажаны 19/7,3 11,0/4,2

Редис 15,0/13,3

Капуста 29,0/25,8

Лук 17,0/15,1

Бамия 9,0/6,4

Травы 18/6,5 31,0/27,5 17,0/16,9

Финиковая пальма 22,0/19,6 15,0/13,3

* под томатами заселенных нематодами образцов не выявлено.

Повидимому, это связано с изменениями климатических и экологических параметров, особенностей паразито-хозяинных отношений или является элементом случайного характера. По результатам наших обследований наибольшее количество позитивных образцов приходится на сентябрь-октябрь (5,7%), март-апрель (7,2%), а наименьшее на июль-август (1,7%). Вместе с тем, частота выявления энтомопатогенных нематод в течение года колеблется и в зависимости от их вида. Так, например, в почвенных биоценозах люцерны при минимальном числе позитивных образцов в июле-августе выявляется, тем не менее, до 20% 81ешегпета sp.ii. Аналогичная ситуация складывалась в мае-июне и ноябре-декабре и для гетерорабдитид (17,5%). Таким образом, анализ динамики обнаружения тех или иных видов показывает, что сборы одного срока не могут отражать истинный видовой состав энтомопатогенных нематод в регионе в целом, а также и отдельных видов.

Энтомопатогенные нематоды были обнаружены и при просмотре погибших особей некоторых насекомых вредителей запасов. Однако частота встречаемости инвазионных экземпляров сравнительно не велика и не превышает по отдельным видам 6%.

Семейство 81етегпетайс1ае периодически пополняется новыми видами, постоянно совершенствуя свою систематику. В настоящее время к роду Я1етегпета относят 23 вида (Спиридонов, 2001). Следует отметить, что в нем содержатся и виды, отличающиеся вариабельностью по морфологическим и морфометрическим признакам, затрудняющим проведение объективной дифференциации. Поэтому использование

методов молекулярного анализа (Curran, 1990, Hominick, Reid, 1990) позволяет избежать неточностей при идентификации нематод.

Нами из почвенных биоценозов полей люцерны, где доминирующим вредителем является Helicoverpa armígera, и, в меньшей степени, Spodoptera littoralis, используя технику Bedding и Akhurst (1975), выделен изолят энтомопатогенных нематод, отнесенный к Steinernema. Для идентификации полученного изолята были использованы принятые морфологические и метрические показатели, ПЦР анализ и гибридизация. Как показали измерения выделенной формы Steinernema sp.n, проведенные нами, она типична для рода Steinernema. Постоянные препараты тестируемого вида представлены голотипом самца, 2 паратипами самцов и самок и 2 инвазионных личинок и в качестве стандартных образцов хранятся в настоящее время в коллекции CAB! (Natural History in Britain, Лондон).

По своим таксономическим показателям (табл. 2) он оказался близок S. riobravis, обнаруженному в Техасе (США).

Таблица 2

Сравнительная анатомо-морфологическая характеристика S. abbasi sp.n.

с 4 близкородственными видами Steinernema

Показатель/вид S. сагроса-psae S. kushidai S. scapterisci S. riobravis S. abbasi

Инфекционные ювенильные личинки

L тела 558 (438-650) 589 (564-662) 572 (517-609) 662 (561-701) 541 (496-579)

ЕР 38 (30-60) 46 (42-50) 39 (36-48) 56 (51-64) 48 (46-51)

d 26 (23-28) 41 (38-44) 31 (27-40) 49 (45-55) 53 (51-58)

е 60 (54-66) 92 (89-108) 73 (60-80) 105 (93-111) 86 (79-94)

Самцы

Mucron + - + - -

L спикулы 66 (58-77) 63 (48-72) 83 (72-92) 66,9 (62,575) 65 (57-74)

L сто мы 47 (39-55) 44 (39-60) 65 (59-75) 51 (47,5-56) 45(33-50)

d 41 (27-55) 51 (42-59) 38 (32-44) 71 (60-80) 60 (51-68)

* + есть, - нет, ЕР - длина от экскреторной поры до конца тела, d - соотношение EP/ES (ES - длина пищевода), е - соотношение ЕР/Т1 (Т1 - длина хвоста). Все измерения в цм.

Вместе с тем, при анализе проведенных измерений прослеживаются различия от других близкородственных видов по морфологическим и

морфометрическим характеристикам инвазионных личинок, имаго, в частности, самцов 1 генерации и других стадий.

По результатам проведенных таксономических и биологических исследований в лаборатории защиты растений в г. Салалах (Султанат Омана), совместно с М. Abbas (National Res Centre, Egypt), S. Elawad (Univesity of Reading, Berkshire), W. Ahmad (Aligarh Muslim University, India) A. Reid (International Institute of Parasitology, St. Albans), он был зарегистрирован под видовым названием Steinernema abbasi sprt. Маршрутные обследования показали, что данный вид распространен в Омане повсеместно (Hubeis, 1998).

Между выделенной в Омане новой формой (Steinernema abbasi sp.n.) и близкородственными по морфологии видами - S. riobravis и S. scapterisci проводилась гибридизация в теле G. mellonema (Akhurst, Bedding, 1978) К сожалению, нам не удалось получить для этих целей живую культуру еще одного сходного вида - S. kushidai. Однако его препараты применялись при ПЦР анализе.

Перекрестная гибридизация (табл. 3), проведенная с использованием указанных видов и еще S. carpocapsae, показала выраженную и четкую обособленность S. abbasi. Анализ гусениц G. mellonella, зараженных комбинациями указанных видов нематод с S. abbasi, не выявил случаев (из 40 повторностей) образования гибридных форм Steinernema. Случаи размножения зарегистрированы лишь при внутривидовых специфических скрещиваниях.

Это дало основания считать S. abbasi обособленным видом энтомопатогенных нематод.

Таблица 3

Результаты гибридизации S. abbasi с некоторыми родственными видами Steinernema*

Вид S. carpocapsae S. scapterisci S. riobravis S. abbasi sp.n.

S. carpocapsae + - - -

S. scapterisci - + - -

S. riobravis - - + -

S. abbasi sp.n. - - - +

* + гибриды жизнеспособны, - скрещивание невозможно.

ПЦР анализ. Тотальная геномная ДНК изолировалась по Reid, Hominick (1992). Очищенная ДНК была использована при получении полимеразных РЦР фрагментов (RFLP профиля) для S. riobravis, S. carpocapsae и S. scapterisci. RFLP профиль для тестируемого изолята и S. kushidai был получен из лизата взрослых самок (Joyce et а., 1994). Праймеры, используемые в полимеразной цепной реакции, описаны (Vrain et al., 1992) и синтезированы фирмой Biotex.

ДНК из Steinernema sp п. и других морфологически сходных видов штейнернематид были амплифицированы при использовании праймеров ITS, специфичных для их внутренних участков транскрипции (Elawad et al., 1996). ПЦР продукты каждого вида нематод были подвергнуты действию 17 рестриктаз, выделенных из различных микроорганизмов. Полученные фрагменты сепарировали электрофорезом в агарозном геле. По разогнанным в нем зонам оценивали уровень сходства анализируемых видов нематод. Найдено, что Steinernema sp.n. характеризуется видовой специфичностью. Это показал анализ энзимных профилей. Сходство обнаруживаются у этих нематод лишь по участкам, не отвечающим за узнавание ITS (3 дорожка 6А-Е с энзимом BstOI). Таким образом, сравнительный анализ по отмеченным параметрам выделенного нами вида Steinernema показал, что мы имеем дело с ранее неизвестной и не описанной в литературе формой нематоды (Hubeis, 1997).

Как уже отмечалось, S. abbasi обнаруживался, в почвенных образцах, преимущественно гусеницах Helicoverpa armígera, Spodoptera exigua, S. littorallis, а также G. mellonella, личинках Batocera rafomaculata - видах приуроченных к полуаридным субтропическим и тропическим регионам (количество выпадающих осадков составляет 600-700 мм/год) с песчано-суглинистыми почвами с температурным градиентом в пределах 17-32 С°. Поэтому распространение нового вида энтомопатогенной нематоды кореллирует с ареалами упомянутых вредителей.

Рис 2. Сравнительная динамика численности инвазионных стадий близкородственных нематод из рода 81етегпета при разных температурах.

Анализ сезонной динамики численности их поражений, а также случаи обнаружения нематод в засушливые периоды предполагает, что они способны к вертикальной миграции (восходящей и нисходящей), которая обеспечивает их выживание в неблагоприятное время.

г 200

■ Steinernema; abbasi

□ S. riobravis ¡I

25

30 35 Температура, С

Найдено, что жизненный цикл S. abbasi типичен для рода Steinernema и включает стадию яйца, 4 личиночных стадии и имаго. 3 стадия -инвазионные личинки - способны проникать в тело насекомых, где в контакте и симбиозе со специфическими бактериями формирует, по крайней мере, 2 генерации. Бактериальным симбионтом для вида S. abbasi является Pseudomonas orysihabitans (Elawad, 1998).

Температурный фактор является одним из определяющих и оказывает существенное влияние на характер функционирования нематод, их репродукцию и патогенность. В гусеницах G. mellonella (от яйца до взрослой стадии) нематода развивается в течение 48 ч. при 25°С и 36 ч. при 30°С.

Показано, что личинки S. abbasi spn сохраняет инвазионную активность при более высокой температуре, чем S. riobravis. ЛД50 в G. mellonella для этой нематоды при 35°С превосходит таковой показатель у S. riobravis (рис. 2, 3). Оба указанных вида, как известно (Raulston et al., 1992), адаптированы к полуаридной и субтропической зонам. Найдено, что наибольшую активность в Омане S. abbasi проявляют при 35°С. Инвазионные личинки сохраняли свою жизнеспособность в дистиллированной воде при комнатной температуре около 5 дн., в холодильнике при 5-8°С до 3 мес. Важно отметить, что нематоды проявляли свою активность лишь в условиях высокой влажности и их препараты не выдерживали прямой инсоляции.

- S. abbasi • S. riobravis! 1

10 20 30 Температура, С

40

Рис. 3. Динамика численности близкородственных нематод (S. abbasi и S. riobravis) в личинках G. mellonella при разных температурах.

При изучении эффективности инвазии в зависимости от сроков заражения нами в чашках Петри, куда помещались контрольные и инфицированные насекомые - личинки разных возрастов мучного хрущака использовалась нагрузка 90, 120 и 180 особей/насекомое (рис. 4).

х 200

2 . I £

□ НйегогаЬсййз эр.

В Sfe/neme/7^a га/а/аЛ

□ Н Ьа^епорвога

о

2 3 4 5 6 7 8

дни

Рис.4 Динамика численности инвазионных стадий разных видов нематод в гусеницах в ше11опе!1а после инфицирования (при температуре 25°С и относительной влажности воздуха 75%)

Проведенные ранее исследования указывают на возможность и перспективность использования различных видов насекомых для массового получения активных инвазионных личинок энтомопатогенных нематод. Однако часто рекомендуемые синтетические агаровые среды для вскармливания, например, хлопковой совки и других видов Чешуекрылых, используемых в качестве субстрата, отличаются высокой коммерческой стоимостью, т. к. в их состав входят ряд дефицитных и дорогостоящих компонентов, что делает невыгодным включение их в технологический процесс при производстве нематодных препаратов. В России уже разработаны безагаровые питательные среды, отличающиеся низкой стоимостью, поскольку в их состав входят различные отходы, получаемые при переработке с/х культур (свекловичный жом, солодовые вытяжки, пшеничные отруби, подсолнечный жмых и др.). Однако в некоторых странах Персидского залива, и в том числе Омане, эти отходы приходится закупать извне. Поэтому стоит задача по подбору таких материалов, которые способны заменять указанные компоненты.

В качестве основы при составлении прописей питательных сред были взяты материалы, богатые углеводами: семена, отруби и стержни початков кукурузы, жмых рисовых отрубей. В них добавляли небольшое количество натуральных компонентов, аскорбиновую, бензойную кислоты и автолизат пивных дрожжей. Всего для вскармливания гусениц хлопковой совки использовали 4 состава диет:

- №1 - семена кукурузы, оболочки зерен риса, автолизат пивных дрожжей, бензойная кислота (белок -7,2 г%, углеводы - 65,5 г%, клетчатка - 41,2 г%);

- №2 - отруби кукурузы, жмых рисовых отрубей, автолизат пивных дрожжей, аскорбиновая кислота (белок 25,2 г%, углеводы 87,8 г%, клетчатка 21,5 г%);

- №3 - стержни початков кукурузы, жмых арахиса, автолизат пивных дрожжей, аскорбиновая кислота (белок 42,1 г%, углеводы 70,3 г%, клетчатка 37,5 г%);

- №4 - жмых рисовых отрубей, оболочки зерна риса, автолизат пивных дрожжей, бензойная кислота (белок 18,1 г%, углеводы 65,3 г%, клетчатка 51,6 г%).

Полученные результаты свидетельствуют, что сроки прохождения стадий, цикл развития и, в целом, выживание гусениц хлопковой совки (Н. armígera) на средах различного состава варьируют. Наибольшая масса гусениц отмечена на среде №2 и особенно №3. Очевидно, что состав диеты №3 для вида наиболее сбалансирован по содержанию основных питательных веществ (белков и углеводов) и клетчатки и отвечает биологическим требованиям насекомого. При сравнительно низком содержании белка (пропись №1) и клетчатки (пропись №2) интенсивность развития хлопковой совки падает. Соответственно меняется и выход инвазионных личинок местного изолята S. abbasi и Н. bacteriophora, культивируемых в ее гусеницах (табл. 4). Наиболее высокая продуктивность отмечена на адаптированных средах №3 и №2. Зарегистрированы видовые различия у нематод при использовании в качестве субстрата гусениц хлопковой совки. В целом, Н. bacteriophora на всех средах, кроме №4, была более (почти в 2-3 раза) плодовита. Это отмечалось для других видов и ранее (Cántelo, Nickle, 1992 и др.). Таким образом, очевидно, что их паразитическая активность и плодовитость определяется пищевой приуроченностью. Вместе с тем, показано, что возможность реализации этих жизненных функций зависит от целого ряда абиотических факторов, в которых основную роль играют температура и влажность среды.

Таблица 4

Активность размножения личинок нематод Steinernema sp. в личинках

хлопковой совки при культивации на разных средах

Сре да Steinernema sp./ Н. bacteriophora S Средняя

Повторности

1 2 3

№1 10,0/111,0 13,0/80,0 8,0/114,0 31,0/305,0 10,3/101,6

№2 70,0/150,0 52,0/226,0 47,0/341,0 169,0/717 56,3/239,0

№3 119,0/260,0 130,0/212,0 90,/300,0 339,0/772 113,0/257,3

№4 22,0/63,0 20,0/100,0 15,0/57,0 57/220 19,0/73,30

£ Рх X 221,0/584,0 215,0/618,0 145,0/414,0 X £ =596/2014 /757 Х0= 198,6/ 665 /166,3

55,3/146,0 53,6/159,5 36,2/103,5

^Заражение гусениц путем опрыскивания суспензией нематод в концентрации 300 шт./мл. Учеты проводятся через 7-12 дней после инвазии по числу личинок, шт./гусеница.

Известно, что оптимум развития у различных видов энтомопатогенных нематод и даже изолятов не одинаков (Микульская, Безрученок, 1997, Kaya, 1990, Kung et al, 1991). Проведенная нами оценка репродуктивной способности (табл. 5) 2 видов нематод - местной формы Steinernema sp. и Н. bacteriophora, культивируемых в ее гусеницах.

Таблица 5

Влияние различных температур на скорость развития

нематод H.bacteriophora и Steinernema sp. в личинках хлопковой совки

Среда Темпера тура Число* личинок, Н. bactenophora/Steinernema sp.

1 2 3 Среднее

№1 5 0/0 0/0 0/0 0/0

25 67/15 82/9 60/14 69.6/12,6

30 112/14 130/19 88/6 110/10

№2 5 0/0 0/0 0/0 0/0

25 200/50 215/94 340/20 251.6/54,6

30 260/55 199/67 298/34 252.3/52

№3 5 0/0 0/0 0/0 0/0

25 230/133 330/98 119/122 226.3/117,6

30 189/146 298/120 195/127 227.3/131

№4 5 0/0 0/0 0/0 0/0

25 44/60 96/65 132/30 90.6/51,6

30 61/59 59/70 76/95 65.3/74,6

♦Заражение гусениц путем опрыскивания суспензией нематод в концентрации 300 шт./мл.

Оценка численности Н. ЬааепорИога и др. в личинках хлопковой совки показала, что первый развивается в ней на всех средах в несколько раз активнее, особенно при температурах 25 С°. И лишь при 30 С0 на среде №4 большая продуктивность отмечается для местной формы 81е|'пегпета ер.

В целях повышения эффективности препаратов на основе энтомопатогенных нематод их комбинируют с пестицидами химической природы. В этой связи нами проведена оценка чувствительности инвазионных стадий местной популяции 8. аЬЬав! к новым перспективным их формам, в том числе гербицидам. Предполагалось, что адаптированные системы защиты растений используют именно комплекс химических и биологических средств.

Полученные данные выявляют дифференцированное действие испытуемых препаратов на их жизнеспособность. Так, при контакте с аверсектином после 15 мин. наблюдается 100% гибель нематод. Уровень смертности снижался по мере возрастания степени разведения и, наоборот, увеличивался при длительных экспозициях. К наиболее токсичным

препаратам в отношении энтомопатогенной нематоды S. abbasi, кроме указанного, следует отнести кинимек, и в меньшей степени, гербицид дивиденд. В целом же нематоды оказались достаточно устойчивыми к гербицидам, особенно в концентрациях, рекомендуемых производству. Инвазинные личинки после 3-х кратной промывки дистиллированной водой сохранили свою мобильность и способность к инфицированию G. mellonella. Наши результаты согласуются с известными работами по таким пестицидам, как карбофуран, хлорофос, фонофос, форат и тербуфос. Большинство из них не оказывает летальное действие на S. carpocapsae и S. feltiae в дозах ниже 250 ррт и экспозиции 1-3 дня (Rovesti, Deseo, 1990). Исключение составил вид S. feltiae, 100% смертность личинок которого наблюдали под воздействием 0.01-10 ррт карбофурала (Cordon etal., 1996) и 3 ррт хлоририфоса (Zimmerman et al., 1990). Показано, что на уровне вида нематоды имеют различную чувствительность к пестицидам. Например, S. carpocapsae более вынослив по сравнению с Н. bacteriophora (Rovesti et al., 1990).

Тестирование инвазионной способности личинок нематод проводилось нами исходя из полученных значений экспозиции и концентраций пестицидов, а также параметров выживания после обработки (от 50 до 100%). Результаты испытаний показали (табл.6), что под воздействием хи-

Таблица б

Инфекционность S. abbasi после обработки пестицидами

Препарат К-ция/экспозиция, час. Инфекционность*

Аверсектин 1 5/1.5 22.3

Кинимек 1 8/1.5 17.0

Фундазол 1 1/5.5 29.3

Расер 1 0/0.5 31.3

Фозилад супер 1 0/0.5 30.6

Никосольфорон 1 0/0.5 34.1

Дивидент 1 1/0.5 31.0

Вода контроль 39.6

* среднее число личинок (из 50 использованных для инфицирования) в гусеницах вощинной моли через 3,5 дня. Повторность 4-х кратная.

мических препаратов происходит несущественное по сравнению с контролем снижение инфекционности, наиболее заметное в случаях с кинимеком и аверсектином (57,1 и 49,4% соответственно).

Нематоды успешно развивались до стадии имаго. Таким образом, можно заключить, что сохранение их инвазионной активности на уровне 42,9 -80,6% позволяет использовать энтомопатогенных нематод, их живые препараты в комплексе с химическими соединениями в защите растений против вредителей в целях повышения эффективности.

Выводы

1. В естественных условиях Султаната Оман установлен высокий уровень распространения на почвенных стадиях вредных видов насекомых энтомопатогенных нематод (27,9 - 46,4%). Во всех случаях в трупах доминировали виды 2 родов - Heterorhabditis и Steinernema. Наиболее широкий их видовой состав и численность отмечались на полях, занятых люцерной и многолетними травами.

2. Анализ погибших особей насекомых (фиксированных, сухих и свежесобранных) показал возможность определения их зараженности нематодами, независимо от их состояния. Однако по сухим образцам выявляется значительно меньший процент (не более зараженных 6%) проб.

3. Частота встречаемости энтомопатогенных нематод в условиях Султаната Оман достигает в среднем 30% (112 позитивных образцов из 401 просмотренных). Наилучшими сроками для отбора образцов на зараженность насекомых являются март-апрель и сентябрь-октябрь.

4. Нами выявлен новый для науки вид Steinernema salalah, названный впоследствие Steinernema abbasi, приоритет по которой подтвержден специалистами Natural History in Britain (Лондон, Великобритания).

5. Сравнительное изучение биологических особенностей (условия размножения, чувствительность к градиентам среды - температуре и влажности) показало перспективность выделенного изолята как основы для создания биопрепаратов. Для местного изолята S. abbasi (f. salalah) отмечена сравнительно большая численность и эффективность инвазии по показателю ЛД50(17,9 - 20,3) в пределах 30-35 С0.

6. Найдено, что в качестве альтернативного биологического субстрата для разведения и накопления инвазионных личинок нематод можно использовать гусениц хлопковой совки Helicoverpa armigera.

7. Определены оптимальные нормы расхода инвазионных стадий при инфицировании гусениц хлопковой совки (300 шт./мл) и подобраны среды для ее разведения, основой которых являются сельскохозяйственные и пищевые отходы (стержни початков кукурузы, рисовые отруби и арахисовый жмых).

8. Оценка чувствительности инвазионных стадий местной популяции S. abbasi к новым перспективным формам пестицидов, в том числе гербицидам показала, что они дифференцировано влияют на жизнеспособность вида. Вместе с тем, инвазионные личинки при контакте с ними снижают инфекционность несущественно. Сохранение инвазионной активности на уровне 42,9 - 80,6% позволяет использовать энтомопатогенных нематод, их живые препараты в целях повышения эффективности против вредителей в комплексе с химическими соединениями.

9. Расчеты показывают, что использование биологических нематодных препаратов экономически и экологически более выгодно, чем применение

химических обработок. Биологическая эффективность энтомопатогенных нематод находится в пределах 60 %. Рентабельность от их применения на 80% выше, чем от пестицидов.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Хабиес М. МЛ. Нематоды STEINERNEMA - эффективные паразиты насекомых //Сб. Концепции, практика и перспективы современного земледелия,- М.:РУДН.-2003.- с. 51 - 53.

2. Хабиес М.М.А. Изучение нематод-энтомофагов в районах султаната Омана //Сб. Концепции, практика и перспективы современного

земледелия,- М.:РУДН.-2003.-с. 53-54.

3. Hubeis М. First record of entomopathogenic nematode Heterorhabditis bacteriophora (Heterorhabditidae: Rhabditida) in Oman

//Arabian of organization of Agr.development., 1998, Sept. 11, p.2 J J.

4. Hubeis M. Preliminary studies on entomopathogenic nematode in Nejd area Sultanate of Oman 111 Arab Cong. Of plant prot. 22-26 oct., Amman, Jordan, 2000.-pp. 462-463.

5. Hubeis M. Nematode possessing greater pesticidal qualities discovered //Oman Daily observer, 1997.

6. Hubeis M. Insect-killing plant found in Saialah // Times of Oman, 1997.

7. Hubeis M. New Steinernema nematode species from Oman, as a natural enemy against insects Hi. Sci. Res. Agr. Sci. Sultan Qaboos Univ., v. 3, 1998, p. 117.

8. Hubeis M. Entomopathogenic Nematodes 111 Arab Cong. Plant Prot. Amman, 2000, p. 463.

Мохамад M.A. Хабиес

Роль энтомопатогенных нематод в регуляции численности вредных видов насекомых

Изучена фауна энтомопатогенных нематод Султаната Оман. Выделено 10 перспективных изолятов, паразитирующих на насекомых вредителях. Обнаружен новый их вид Steinernema abbasi var. saialah. Изучена его биология, особенности развития, патогенность в отношении различных стадий насекомых. Подобраны среды для их культивирования на основе промышленных и пищевых отходов в целях массового производства инвазионных стадий нематоды. Показана возможность комплексного применения нематодных препаратов и пестицидов в защите растений от вредителей.

Hubeis М.

Role entomopathogenic nematodes in regulation of number of insects

The fauna entomopathogenic nematodes Sultanat Oman is investigated. 10 perspective isolates, parasiticed on insects the wreckers are allocated. Their new kind Steinernema abbasi is found out. His biology, feature of development,

pathogenicy is investigated concerning various stages of insects. The environments for them cultivate are picked up on the basis of industrial and food wastes with the purposes of mass manufacture invasion of stages nematode. The opportunity of complex application nematodes of preparations and pesticides in protection of plants against the wreckers is shown.

№12 6 3 7

РНБ Русский фонд

2006-4 10569

Подписано в печатьД£^¿ЖТФормат 60x84/16. Тираж 400 экз. Усл. печ. л. / 2£~. Заказ

Типография Издательства РУДН 117923, ГСП-1, г. Москва, ул. Орджоникидзе, д. 3

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мохамад М.А. Хабиес

Введение.

1. Видовой состав паразитических нематод вредных видов насекомых.

1.1. Особенности распространения и уровень естественного заражения вредных видов.И

1.2. Роль паразитических нематод в рехуляции численности вредных видов.

2. Биологические и экологические особенности развития паразитических нематод.

2.1. Факторы, активирующие и лимитирующие деятельность природных популяций нематод.

2.1.1 Круг хозяев.

2.1.2. Роль субстрата и возраста хозяина.

2.1.3. Потенциал устойчивости к абиотическим факторам.

2.1.4. Влияние температуры и влажности.

2.1.5. Роль почвы.

2.1.6. Влияние стрессовых воздействий на жизнеспособность и активность энтомопатогенных нематод.

2.1.7. Инвазионная активность.

3. Функциональная роль бактерий в нематодном комплексе.

3.1. Биология нематодно-бактериального комплекса.

3.2. Внутривидовая конкуренция.

4. Методы культивирования нематод.

4.1. Культивирование in vivo.

4.2. Культивирование in vitro.

5. Энтомопатогенные нематоды как фактор биологической борьбы.

5.1. Нематодные препараты.

5.1.1. Водные суспензии.

5.1.2. Комплексные препараты.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Роль энтомопатогенных нематод в регуляции численности вредных видов насекомых"

Интенсификация сельскохозяйственного производства с целью получения необходимых продуктов питания для населения земного шара, численность которого постоянно возрастает, создала немало проблем, связанных с охраной окружающей среды. В частности, уровень пестицидной нагрузки на местность при защите собираемого урожая в ряде случаев стал оказывать отрицательное воздействие на полезную энтомофауну, участвующую в естественной регуляции численности вредных видов, и, следовательно, эффективность ее. Более того, у ряда видов возникла резистентность к химическим препаратам. Возросли потери продукции. Это вызвало необходимость повышения дозы препарата и получения их новых форм. Так, для борьбы с оранжерейной белокрылкой (Тпа1еигос1е5 уарогайогит) пришлось использовать концентрации пиретроидов в 2000 раз больше, чем к моменту их внедрения в производство. Применение новых препаратов, их чередование не всегда радикально исправляло положение. Число вредных видов, приобретающих устойчивость к различным пестицидам, продолжает увеличиваться, особенно среди Двукрылых, Бабочек, Жесткокрылых и Клещей. Поэтому важной задачей в настоящее время является разработка и внедрение в производство приемов, актививизирующих естественные механизмы регуляции численности вредных видов, и замена в применяемых системах защиты пестицидных обработок биологическими средствами, ограничивающими их развитие (Помазков, Заец, 1998). Попытки использовать одни виды организмов для подавления или ограничения развития других делались давно.

Нематоды являются широко распространенными обитателями планеты. Они встречаются в почве и донных субстратах пресных водоемов всех материков, населяют океаны до самых предельных глубин, а также приспособились к паразитированию в различных животных и растениях, связаны со многими видами насекомых, и, в меньшей степени, клещей. Эти связи разнообразны, не все еще достаточно изучены и варьируют по уровню от чисто случайных взаимодействий до облигатного паразитизма.

Первые сведения о заболеваниях насекомых, вызванных нематодами, были известны более 350 лет назад (Gaugier, 1988). Наиболее ранние работы по этой проблеме относятся к прошлому столетию. Анализ имеющейся информации свидетельствует о том, что наиболее перспективными для использования в биологической борьбе с вредителями являются нематоды семейств Steinernematidae и Heterorhabditidae (Poinar, 1978, Wouts, 1985). Представители этой группы впервые выделены из личинок пилильщика Capholia abietis в 1923 г. в Германии, в бывшем СССР из гусениц озимой совки в 1926 г. (Кирьянова, Краль, 1969). В 1929 г. В США была описана Steinernema glaseri из японского жука Popillia japónica (Glaser, 1932). Этот вид при заражении вызывал быструю гибель хозяина. После инвазии большинство особей насекомых - вредителей погибает в пределах 24 - 60 часов.

Позже выявлены и другие виды штейнернем. Период интенсивного их изучения начался с середины 50-х годов XX столетия (Dutky, Hough, 1955, Nickle, 1977, Poinar, 1979, Reid, 1996). Только для одного вида Heterorhabditis bacteriophora (табл. 1) уже известно около 50 видов насекомых, в которых нематода способна паразитировать (Doucet, 1994).

Таблица 1

Число повреждаемых паразитической нематодой Н. bacteriophora вредных видов насекомых*

Порядок Семейство Вид Стадия личинка нимфа куколка имаго разные

14 57 87 64 5 3 49 10 таблица составлена на основании работ Турьянова, Мифтахова, 1997, Doucet, 1994 и др.

Эти нематоды отмечены и на вредителях шампиньонов (Peters, 1995, Dergham, 1995, Scheepmaker et al., 1997, Jaworska, 1999), муравьях- Solenopsis sp. (Donald et al., 1996). Большинство их видов являются факультативными паразитами и они не поражают теплокровных.

В настоящее время круг представителей вредной энтомофауны (насекомые, клещи), у которых выявлены паразитические виды нематод, постоянно расширяется и насчитывает сотни видов.

Для многих видов энтомопатогенных нематод показано существование конкурентных и хищнических отношений с другими почвенными организмами, ограничивающими их активность к внедрению в жертву (Strong et al., 1999).

Разработка методик массового разведения нематод позволила создать основу для производства биоинсектицидов (Glaser, 1931, Glaser et al., 1940). В последние 20 - 30 лет в США и Западной Европе наблюдается интенсивное формирование научных групп исследователей нематод насекомых. Отмечается активное внедрение на рынок энтомопатогенных нематодных биопестицидов (Агасьева и др., 1990, Pye et al., 1986, Akhurst et al., 1990, Akhurst, 1990, Vanninen, 1990, Zimmerman et al., 1990, Kaya, 1993). Однако до широкого их внедрения в производство еще далеко. Ряд видов нематод, достаточно активно использовавшихся на первых порах для их получения, затем были исключены из-за низкой эффективности (Спиридонов, 2001). В то же время у нематод, как агентов биологической защиты, безусловно, есть будущее, для реализации которого необходимо углубленное изучение особенностей их жизнедеятельности и экологии, а также проблем культивирования, накопления и хранения.

Заключение Диссертация по теме "Защита растений", Мохамад М.А. Хабиес

9. Выводы:

1. В естественных условиях Султаната Оман установлен высокий уровень распространения на почвенных стадиях вредных видов насекомых энтомопатогенных нематод (27,9 — 46,4%). Во всех случаях в трупах доминировали виды 2 родов - Heterorhabditis и Steinernema. Наиболее широкий их видовой состав и численность отмечались на полях, занятых люцерной и многолетними травами.

2. Анализ погибших особей насекомых (фиксированных, сухих и свежесобранных) показал возможность определения их зараженности нематодами, независимо от их состояния. Однако по сухим образцам выявляется значительно меньший процент (не более зараженных 6%) проб.

3. Частота встречаемости энтомопатогенных нематод в условиях Султаната Оман достигает в среднем 30% (112 позитивных образцов из 401 просмотренных). Наилучшими сроками для отбора образцов на зараженность насекомых являются март-апрель и сентябрь-октябрь.

4. Нами выявлен новый для науки вид Steinernema salalah, названный впоследствие Steinernema abbasi, приоритет по которой подтвержден специалистами Natural History in Britain (Лондон, Великобритания).

5. Сравнительное изучение биологических особенностей (условия размножения, чувствительность к градиентам среды - температуре и влажности) показало перспективность выделенного изолята как основы для создания биопрепаратов. Для местного изолята S. abbasi (f. salalah) отмечена сравнительно большая численность и эффективность инвазии по показателю ЛД5о(17,9 - 20,3) в пределах 30-35 С0.

6. Найдено, что в качестве альтернативного биологического субстрата для разведения и накопления инвазионных личинок нематод можно использовать гусениц хлопковой совки - Helicoverpa armígera, Spodoptera exigua и S. littorallis.

7. Определены оптимальные нормы расхода инвазионных стадий при инфицировании гусениц хлопковой совки (300 шт./мл) и подобраны среды для ее разведения, основой которых являются сельскохозяйственные и пищевые отходы (стержни початков кукурузы, рисовые отруби и арахисовый жмых).

8. Оценка чувствительности инвазионных стадий местной популяции

8. аЬЬаБ1 к новым перспективным формам пестицидов, в том числе гербицидам показала, что они дифференцировано влияют на жизнеспособность вида. Вместе с тем, инвазионные личинки при контакте с ними снижают инфекционность несущественно. Сохранение инвазионной активности на уровне 42,9 - 80,6% позволяет использовать энтомопатогенных нематод, их живые препараты в целях повышения эффективности против вредителей в комплексе с химическими соединениями.

9. Расчеты показывают, что использование биологических нематодных препаратов экономически и экологически более выгодно, чем применение химических обработок. Биологическая эффективность энтомопатогенных нематод находится в пределах 60 %. Рентабельность от их применения на 80% выше, чем от пестицидов.

6. Заключение

Оценка существующей информации показывает, что паразитические нематоды способны играть важную роль в регуляции численности вредных видов членистоногих. Постепенно наука расширяет свои знания о круге поражаемых ими представителей вредной фауны. Накапливаются сведения об особенностях их биологии и взаимодействия с живыми организмами. Отрабатываются методики по искусственному разведению энтомопатогенных/ форй, их накоплению, созданию препаративных форм, способных к длительному хранению без утраты своей активности. Однако остаются нерешенными вопросы географического распространения отдельных видов, оценки их эффективности как для местных биотипов, так и для космополитических форм, физиологических рас вредителей. Практически исследования этих группы нематод находится в начальной стадии.

7. Цели и задачи исследования

Анализ литературных сведений показал, что использование энтомопатогенных препаратов является перспективным с точки зрения эффективности контроля за развитием популяций вредных видов и их экологичности. Однако выбор паразитических видов невелик. Недостаточно изучены условия применения препаратов и их форм в разных климатических зонах. В связи с этим, нами были поставлены следующие цели:

- определить видовой состав паразитических нематод в Омане;

- отработать методику их выявления на мертвом, сухом и фиксированном материале;

- апробировать методы культивирования нематод в искусственных условиях и оценить их технологичность для массового производства;

- дать экономическую оценку применения нематодных биопрепаратов против вредителей.

8. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 8.1. Материалы и методы исследований

Работа над темой выполнялась в течение 1994-2002 гг. в лаборатории Agricultural Research Staition (г. Salalah, Султанат Оман) и 2002-2005 гг. на кафедре защиты растений РУДН. По ряду разделов исследования проводились совместно с М. Abbas (National Res.Centre, Egypt), S. Elawad (Univesity of Reading, Berkshire), W. Ahmad (Aligarh Muslim University, India) A. Reid (International Institute of Parasitology, St. Albans), которым автор выражает большую благодарность за практическую помощь и консультации.

Анализ насекомых и почвенных образцов на содержание в них энтомопатогенных видов нематод проводили в лабораторных условиях в Омане. Почву отбирали с сентября 1998 г. по февраль 1999 г. объемом 100 г на глубине 13-16 см на плантациях, сходных по агротехнике, pH и физико-химическим показателям. Образцы помещали в пластиковые пакеты и отправляли в лабораторию. Содержание энтомопатогенных нематод в почвенных пробах определяли с помощью приманок из гусениц Galleria mellonella (Bedding, Akhurst, 1975). Гусениц на зараженность их нематодами просматривали ежедневно. Погибшие экземпляры переносили в чашки Петри с влажной фильтровальной бумагой до проявления визуальных признаков инвазии. Зараженность живых и мертвых особей нематодами определяли под микроскопом после мацерирования их препаровальными иглами в капле воды или 25% растворе Рииджера. Контролировали появление и численность личиночной стадии в расчете на 1 особь G. mellonella. Продолжительность анализа в зависимости от вида энтомопатогенных нематод составляла 7-11 дней. Одновременно отмечалась температура почвы в момент взятия пробы, возделываемая на участке культура и встречаемые на ней основные вредители.

Разведение модельного объекта - большой вощинной моли (Galleria mellonella) проводили в лаборатории по методике White (1927) в чашках Петри при температуре 22-26°С. Гусениц G. mellonella помещали сверху или снизу маленького контейнера, помещенного в чашках Петри с автоклавированным песком, и хранили в лаборатории при температуре 18-20°С и влажности 20-65%. Их использовали в экспериментах по гибридизации и при оценке действия химических препаратов на жизнеспособность и инвазионную активность энтомопатогенных нематод. Повторность 4-х кратная.

При гибридизации инвазионные личинки S. abbasi, S. scapterisci и S. riobravis после стерилизации в 1% растворе хиамина в течение 15 мин. инъецировали (каждого вида попарно) в гусениц G. mellonella. Контроль вода. В каждом варианте по 40 повторностей. Длительность анализа 6 дн.

Эффективность нематодных препаратов оценивали в процентах гибели гусениц (в 3-кратной повторности) после опрыскивания суспензией инвазионных личинок нематод в концентрации 1000-2000 особей/мл. В качестве контроля служила вода. В лабораторных условиях гусениц после обработки их суспензией нематод инкубировали при 23°С в течение 3 дней, затем их расчленяли в 25% растворе Ringera на фильтровальной бумаге в чашках Петри, закрытых пленкой Parafilm (Goude et al., 1995).

Модельные опыты с нематодами ставились в стеклянных лизиметрах по 1000-1500 см3, в каждый из которых помещали гусениц большой вощинной моли - G. mellonella и содержали при 18-26°С и влажности 20-65% (Hubeis, 1995, 1999, 2000).

Изоляция суммарной геномной ДНК из близкородственных видов энтомопатогенных нематод (S. carpocapsae, S. scapterisci и S. riobravis) и нового вида из рода Steinernerna проводилась по Ried и Hominick (1992). Выделение фрагментов их профиля из лизатов взрослых самок S. kushidai и Steinernema sp.n. из Омана для оценки степени полиморфизма выполняли согласно Joyce et al. (1994). Амплификации подвергали 100 mM очищенной ДНК (или 5 fxl нематодного лизата) с соответствующими добавками и 8 частями Tag полимеразы. Использовался праймер ITS, синтезированный Pharmacia Biotech (Vrain et al., 1992). Продукты амплификации разделяли электрофорезом в 1,5% агарозном геле (Магнате е1 а1., 1989) при 5 у/см в течение 3,5 час. Окрашивание фрагментов проводилось бромистым этидием (Машайэ а а1., 1989).

Анализ вариабельности результатов проводился в 8А8-компьютерной программе.

8.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 8.2.1. Распространение энтомопатогенных нематод

Нематодная инфекция встречается довольно часто. Практически каждый вид может быть инвазирован их особями. Так, при анализе сборов, сделанных кафедрой защиты растений РУДН на Кубе, нами выявлена зараженность различных отрядов насекомых (табл. 5).

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Мохамад М.А. Хабиес, Москва

1. Артюховский А. Почвенные мерметиды: систематика, биология, использование //Из-во Воронежского ун-та, 1990. 160 с.

2. Безрученок Н., Микульская Н. Энтомопатогенные нематоды: состояние и перспективы использования в борьбе с вредными насекомыми в Беларуси //Ж. Защита растений, в.25, 2000.- С. 53 59. О 3

3. Васильева-Некрасова С., Метлицкий О. Энтомопатогенные нематоды в защите садов и ягодников от вредителей (в условиях Подмосковья) //В сб. Производство экологически безопасной продукции растениеводства, Пущино, 1997.-С. 101-106.

4. Блинова С. Энтомопатогенные нематоды-паразиты вредителей леса. Семейство рабдитиды //М.: Наука, 1982.-133 с.

5. Веремчук Г. О массовом разведении энтомопатогенного нематодно-бактериального комплекса//Паразитология. Т.6, вып. 4, 1972.- С. 376-380.

6. Данилов Л., Карпова Е., Шиловская Т. Энтомопатогенные нематоды против капустных мух //Ж. Защита растений, 1995, N7.- С.40.

7. Данилов Л., Махоткин А., Зверев А., Махоткина Л. Вредная черепашка и энтомопатогенные нематоды //Ж. Защита и карантин растений, N3, 2000.- С. 46.

8. Кирьянова Е., Кралль Э. Паразитические нематоды растений и меры борьбы с ними.- Л.: Наука, 1969.-443 с.

9. Малахов В. Нематоды: строение, развитие, классификация и филогения //М.: Наука, 1984. 215 с.

10. Микульская Н., Безрученок Н. Перспективы использования

11. Л б.Пушпя М., Агасъева И., Исмашов В. Новые препаративные формы //Ж.

12. AS.Рубцов И. Мерметиды. Классификация, значение, использование //Л.:

13. Наука. 1978. 207 с. ¿19.Слободянюк О. Энтомопатогенные нематоды двукрылых. Отряд

14. Barbercheck M., Kaya H. Effect of host condition and soil texture on host finding by the entomogenous nematodes Heterorhabditis bacteriophora

15. Rhabditida: Heterorhabditidae) and Steinernema carpocapsae (Rhabditida: Steinernematidae) //Environ. Entomol., N20, 1991, pp. 582 589.

16. Bartlett P. Plant quarantine experience of Liriomyza spp. In England and Wales //Liriomyza conf. on leaf-mining flies in cultivated plants, Montpeller, 1993, pp. 23 -30. 31. Beavers J., McCoy C., Kaplan D. Natural enemies of subterranean

17. Diaprepes abbreviatus (Coleoptera: Curculionidae) larvae in Florida //Environ. Entomol., N12, 1983, pp. 840 843.

18. Bedding R. Low cost in vitro mass production of Neoaplectana and Heterorhabditis species (Nematoda) for field control of insect pests //Nematologica, N27, 1981, pp. 109- 114.

19. Bedding R. Large scale production, storage and transport of the insect- parasitic nematodes Neoaplectana spp. and Heterorhabditis //Ann. Appl. Biol.,N104, 1984, pp. 117 120.

20. Bedding R. Logistic and strategies for introducing rentomopathogenic nematode technology into developing countries //Entomopathogenic nematodes in biological control< ed.R.Gaugler et al.,

21. CRC Press, Boca Raton, Florida, 1990, pp.365. <35. Bedding R., Akhurst R. A simple technique for the detection of insectpathogenic nematodes in soil //Nematologica, N21, 1975, pp.109 110.----------

22. A%\Braasch H., Apel K. Zu einem ungewöhnlichen massenauftreten der holzwespe Sirex juvencus an kiefern undihrer parasitierung durch nematoden der gattung Deladenus //Nachr. Blatt, b.49, N3, ss. 57 59.r

23. Cabanillas E., Poinar G. Steinernema riobravis n.sp. (Rhabditida:

24. Steinernematidae) from Texas //Fundam.appl. Nematol. 1994, v.l7.№2.pp. 123131.,

25. Cabanillas E.,Raulston J. Impact of Steinernema riobravis (Rhabditida: Steinernematidae) on the control of Helicoverpa zea in corn //J. of Economic. Entomology. 1995.v.88.pp.58-64.

26. Cantelo W., Nickle W. Susceptibility of prepupae of the Colorado potato beetle to entomopathogenic nematodes //J.of Entomol. Sei., v. 27, N1, 1992, pp. 37 -43.

27. Campbell L., Gaugier R. Mechanisms for exsheathment of entomopathogenic nematodes //Int. J. Parasitol., N21, 1991, pp.219 224.

28. Cordon R., Chippett S., Tilley S. Effect of two carbamates on infective juveniles of Steinernema carpocapsae all strain and S. feltiae umea strain

29. J.Nematology.-v.34.-1996.-pp. 310-317.C53r Cranshaw W., Zimmerman R. Insect parasitic nematodes //Home and Garden, N5573.

30. Dolmans N. Biological control of the black vine weevil (Otiorhynchus sulcatus) with a nematode (Heterorhabditis sp.) //Meded.Fac.Landbouwwet.Rijksuniv.Gent, N48, 1983, pp. 417 420.

31. Environ. Entomol. N25, 1996, pp. 174 178.h

32. Dutky S., Hough W. Note on a parasitic nematode from codling moth larvae Carpocapsa pomonella (Lepidoptera: Olecethcutidae) //Proc.Entomol.Soc. Wash.-v. 57,N5. 1955 .-P. 244.

33. V. Dutky S., Thompson J., Cantwell G. A technique for the mass propogation of the DD-136 nematode //J. Insect Pathol., N6, 1964, pp. 417 422.

34. EpskyN., Capinera S. Quantification of infasion of two strains of Steinernema carpocapsae into three Lepidoptera larvae //J. of Nematology. 1993.

35. Ferguson C., Schroeder P., Shields E. Persistence vertical distribution and activity of entomopathogenic nematodes in alfalfa shout beetle (Coleoptera: Curculionidae) infected fields //Environ. Entomol., N24, 1995, pp. 149- 158.

36. KFinney J., Harding J. Some factors affecting the use of Neoaplectana sp. for mosquito control //Mosq.News, v.41, 1981, pp. 798 799.

37. Forrest J., Spigel Y., Robertson W. A possible role of aphids of potato cyst nematode Globodera rostochiensis in host finding /Nematologica, N34, 1988, pp. 173 181.

38. Fuxa J., Agudelo-Silva F, Richter A. Effect of host age and nematode strain on susceptibility of Spodoptera frugiperda to Steinernema feltiae//J. Nematol, N20, 1988, pp.91 95.

39. Gabanillas H., George O., PoinarJ., RaulstonJ. Steinernema riabravis n.sp. (Rhabditida: Steinernematidae) from Texas //Fundam.

40. Appl. Nematol, v.l7,N2, 1994, pp. 123- 131.7l4. Gaugler R. Biological control potential of neoaplectanid nematodes //J.Nematol. N13, 1981, pp. 241 249.A

41. Gaugler R. Entomogenous nematodes and prospects for genetic improvement //In:Invertebrate Pathology and Cell culture, ed. K.Maramoroch, New York, Academic, 1987, pp. 457 484.

42. Gaugler R. Ecological consideration in the biological control of soil-inhabiting insect pests with entomopathogenic nematodes //Agric. Ecosyst. Environ., v. 24, 1988, pp. 351-360.

43. Gaugler R., Kaplan B., Alvarado J., Montoyo J., Ortega M. Assessment of Bacillus thuringensis serotype 14 and Steinernema feltiae for control of the Simulium vectors of onchocerciasis in Mexico //Entomophaga, N28, 1983,pp. 309-315.V

44. Gaugler R., Kaya H. Entomopathogenic nematodes in biological control //CRC Press, Boca Raton. 1990. 365 p.

45. Gaugler R., LeBeckL., Nakagaki B., Boush G. Orientation of the entomogenous nematode Neoaplectana carpocapsae to carbon dioxide //Environ. Entomol. N9, 1980, pp. 649 652.

46. Gaugler R., Molloy D. Field evalution of nematodes Neoaplectana•^Jcarpocapsae as biological control agent of blackflies (Diptera: Simuliidae) //Mosq. News, v. 41, 1981, pp. 459 464.V

47. Georgis R. Formulation and application technology //See Ref. V.68, 1990, pp. 173 191.

48. Georgis R., Gaugler R. Predictability in biological control using entomopathogenic nematodes //J. Econ. Entomol., N84, 1991, pp. 713 720.

49. Georgis R., Hague N. Nematodes as biological insecticides //Pestic. Outlook,1. N2, 1991, pp.29-32. Pi

50. Georgis R., Mullens B., Meyer J. Survival and movement of insect parasitic nematodes in poultry manure and their infectivity against Musca domestica //J. Nematol., N19,1987, pp. 292 295.

51. Georgis R., Poinar G. Effect of soil texture on the distribution and infectivity of Neoaplectana carpocapsae (Nematoda: Sreinernematidae) //J. NematoL, N15, 1983, pp. 308 311.86: Georgis R., Poinar G. Field effectiveness of entomophilic nematodes

52. Neoaplectana and Heterorhabditis //See Ref., v. 108, 1989, pp. 213 224.ql87 .Gorsuch A. Regulations for the enforcement of the Federal Insecticide,

53. Glaser R. The cultivation of nematode parasitic of an insect //Science, v.73, N3, 1931, pp. 614-615.

54. Glaser R., McCoy E., Girth M. Biology and economic importance of a nematode parasitic in insects //Parasitol.- V.26, N 6, 1940, pp. 479 495.V

55. Glazer I. Survival and efficacy of Steinernema carpocapsae in an exposed enviroment //Biocontrol Sci. and Techn., N2, 1992, pp. 101 107.

56. Glazer I., Navon A. Activity and persistence of entomoparasitic nematodes tested against Heliothis armigera (Lepidoptera: Noctuidae). //J. of econom. Entom.

57. V 83, 1989, pp.1795- 1800.qV

58. Glazer L, Klein M, Navon A., Nakache Y. Comparison of efficacy of entomopathogenic nematodes combined with antidesiccants applied by canopy sprays against three cotton pests (Lepidoptera: Noctuidae) //J.Econ. Entomol., v.85, 1992, pp. 1636- 1641.

59. Glenister C. Beneficial nematodes for biological control of insect pests // Intern. Plant Prop.Soc., v.40, 1991, pp. 543 547.

60. Goude D., Hague N. Control of sciarids in glass and propagation houses with Steinernema feltiae //Brighton Crop Prot. Conf.: Pest and diseases, N3, 1994, pp. 1073 1078.

61. Glazer I. Invasion rate as a measure of infectivitsof steinernematid and heterorabditid nematodes to insects //J. Invert. Pathol., N50, 1992, pp. 90 94.

62. Griffin C., Moore S., Doowns M. Occurrence of insect parasitic nematodes (Steinernematidae, Heterorhabditidae) in the Republic of Ireland //Nematologica, v.37. 1991. pp.92-100.

63. HaraA., Gaugler R., Kaya H., LeBeckL. Natural populations of entomopathogenic nematodes (Rhabditida: Heterorhabditidae, Steinernematidae) from the Hawaiian Islands //Environ. Entomol., N20, 1991, pp. 211 216.

64. Howarth F. Environmental impacts of classical biological control //Ann.Rev.Entomol., N36, 1991, pp. 485-509.u

65. Hubeis M. Entomopathogenic Nematode from Oman //Univ.of Read.,1995, pp. 1-2.1 l(f. Hubeis M. First record of entomopathogenic nematode Heterorhabditis bacteriophora (Heterorhabditidae: Rhabditida) in Oman

66. Arabian of organization of Agr.development., 1998, Sept.l 1, p.211.V1H. Hubeis M. Preliminary studies on entomopathogenic nematode in Nejd area Sultanate of Oman 111 Arab. Cong, of Plant Prot. 22-26 oct., Amman, Jordan, 2000.- pp. 462-463.M

67. Yl.Hubeis M. Nematode possessing greater pesticidal qualities discovered //Oman Daily observer, 1997.aJL

68. Yi.Hubeis M. Insect-killing plant found in Salalah // Times of Oman, 1997.D1 .Hubeis M. New Steinernema nematode species from Oman, as a natural enemy against insects //J. Sei. Res. Agr. Sei. Sultan Qaboos Univ., v. 3, 1998, p.117. &

69. Johnigk S., Ehlers R. Juvenile development and life cycle of Heterorhabditis bacteriophora and H. indica //Nematology, v.l, N3, 1999, pp. 251 -260.

70. Joyce S., Reid A., Hague N. Application of polymerase chain reaction (PCR) methods to identification of entomopathogenic nematodes //In: Proc. Symp.

71. Workshop, St. Patrick's College, Ireland, 1994, DG XII, pp. 178-187.-----

72. Kaya H. Susceptibility of early larval stages of Pseudaletia unipuncta and

73. Spodoptera exigua (Lepidoptera: Noctuidae) to the entomogenous nematode

74. Steinernema feltiae (Rhabditida: Steinernematidae) //J. Invertebr. Pathol., N46, ^ 1985, pp. 58 62.

75. Kaya H. Deseases caused by nematodes //In: Epizootiology of insect diseases, ed. J. Fuxa, New York, 1987, pp. 453 - 470. ^130/) Kaya H. Soil ecology //See Ref., N68, 1990, pp. 93 - 115.

76. Kaya H. Entomopathogenic nematodes in biological control of insects //See Ref^Nll, 1990, pp. 189- 198.

77. Kaya H., Gaugier R. Entomopathogenic nematodes //Ann. Rev. Entomol., 19937 pp. 181 -206.

78. Klein M. Use of Bacillus popilliae in Japanese beetle control //In: Use of pathogens in scarab pest management (ed. T. Jackson et al.), Andover, 1992, pp. 179- 189.

79. Klein M. Biological control of scarabs with entomopathogenic nematodes //In: Nematodes and the biological control of insect pests (ed. R.Bedding et al.), CRISO, Melbourne, Australia, 1993, pp. 49 58.

80. Kondo E. Size-related susceptebility of Spodoptera litura (Lepidoptera: Noctuidae) larvae to entomogenous nematode Steinernema feltiae (DD-13 6) //ApjM. Entomol.Zool., N22, 1987, pp. 560 569.1. AhCf.Kbndo E.

81. Kung S., Gaugier R., Kaya H. Influence of soil pH and oxygen on persistence of Steinernema spp. //J. Nematol., N 22, 1990, pp. 440 445.

82. Pathol., N57, 1991, pp. 242 249. A

83. Liu Jie, LiuNanxin, Xie Ruchuang, Zhang Yiqing, Yin Chunshou. Applications of a Steinernema nematode against peach fruit-borer in apple orchards // Acta Phytoph. Sinica, v. 21, N3, 1994, pp. 221 224.n

84. Macdonald W. Critical factors required by the nematode Steinernema feltiae for the control of the leafminers Liriomyza huidobrensis, L. bryoniae and Chromatomyia syngenesiae //Ann. Appl. Biol., N127, 1935, pp. 329 341.

85. Maniatis T., Fritsch E., Sambrook J. Molecular cloning. A laboratory manual, USA, 1989, v.6, N1-6, pp. 19.

86. Mankau R. Biological control of nematode pests by natural enemies //Ann.

87. Rev. Phytopathol., N18, 1980, pp. 415 440.C141 .Mason J. Taxonomy, infectivity and survival of entomopathogenic nematodes (Heterorhabditidae) //Ph. D.Thesis, Imperial College, London, 1992.

88. Mclnnes D., Tschinkel W. Mermithid nematode parasitism of Solenopsis ants (Himenoptera: Formicidae) of Northern Florida//Ecolog. Popyl. Biol.,v.89,N2, pp. 231 -237.

89. Miller P. Respiration-aerial gas transport //In: The physiology of insects (ed. M.Rockstein), Academic, New York, v. 2, 1964.lis

90. Miller P. The regulation of breathing in insects //Adv. Insect Physiol., v. 3,1966, pp. 279-344.f14h.Moyle P., Kaya H. Dispersal and infectivity of the entomogenous nematode Neoaplectana carpocapsae Weiser (Rhabditida: Steinernematidae) in sand //J.

91. Nematol., N13, 1981, pp. 295 300.•Jl

92. P'oinar G., Jansson H. Infection of Neoaplectana and Heterorhabditis îabditida: Nematoda) with the predatory fimgi, Monacrosporium ellipsosporum and Arthrobotrys oliogospora (Moniliales: Deuteromyces) //Rev. Nematol., N9, 1986, çp. 241 -244.

93. G., KozodiE. Neoaplectana glaseri and N. anomaly: sibling species or parallelism //Revue de Nematologie, N11, 1988, pp. 13 19.rf'flb 1<71. Poinar G., Thomas G. Laboratory guide to insect pathogens andfV^ parasites /N.-Y.: Plenum Press, 1984./ a f----

94. Popiel I., Hominick W. Nematodes as biological control agents:

95. Part II. Adv. Parasitol.v. 31, 1992, pp. 381 -433.1,73" *J Rao Y., Rao P., Varma A., Israel P. Tests with an insect parasitic nematode DD-136 (Nematoda: Steinernematidae) against the rice stem borer

96. Quintela E., McCoy C. Pathogenicity enhancement of Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana to first instars of Diapreres abbreviatus (Coleoptera: Curculionidae) with sublethal doses of imidacloprid //Environ.Entomol., N26, 1997, pp. 1173 1182.

97. Rovesti L., Deseo K. Compatibility of chemical pesticides with the entomopathogenic nematodes Steinernema feltiae Filipjev and S. carpocapsae Weiser (Nematoda: Steinernematidae) //Nematologica, N36, 1990, pp. 237-245.

98. Saringer G. et al. Possibilities of biological control using entomopathogenic nematodes against Leptinotarsadecemlineata and Athalia rosae L. larvae //48 Intern.Symp.on crop protect., PTS I IV

99. UO.Strong D., Whipple A., Denis B. Model selection for a subterranean tropic cascade: root-feeding caterpillars and entomopathogenic nematodes //Ecology, v.80, N8, 1999, p.p. 2750-2761.11

100. Vanninen I. Depletion of endogenous lipid reserves in Steinernema feltiae and Heterorabditis bacteriophora and effect on infectivity //In: Proc. Int. Colloq. Invertebr„Pathol. Microb. Control. 5th, 1990, p.232.

101. Vrain T., WakarchukD., Levesque A., Hamilton R. Intraspecific DNA ^ restriction fragment length polymorphisms in Xiphinema americanum group //Fundang, Appl. Nematol. 1992.-№15.- pp. 563-574.

102. A ^t. Williams E., Macdonald O. Critical factors reguired by the nematode Steinernema feltiae for the control of the leafminers Liriomyza huidobrensis, Liriomyza bryoniae and Chromatomyia syngenesiae //Ann. Appl. Biol, v. 127,1995, pp. 329-341.to I

103. WolfL., Hainsworth F. Temporal pattern of feeding by hummingbirds //Anim. Behav, N25, 1977, pp. 976 988.•201. Womersley C. Dehydration survival and anhydrobiotic potential //See Ref, N68, 1990, pp. 117- 137.

104. WoodringJ., Kaya H. Steinernematid and heterorabditid nematodes: a handbook of techniques //South.Coop.Ser. Bull.Arkans. Agric. Exp. Stn. Favetteville, v. 331, 1988, pp. 869 874.

105. Wouts W. Biology, life cycle and redescription of Neoplectana bibionis Bovien (Nematoda: Steinernematidae) //J.ofNematology, 1980.-№12.-pp.62-72.

106. Wouts W. Nematode parasites of Lepidopterans //Plant and Insect Nem^todp v. 18, 1985, pp. 655 691.

107. Wright R., Agudelo-Silva F., Georgis R. Soil applications of steinernematid and heterorabditid nematodes for control of Colorado potato beetles Leptinotarsa decemlineata //J. Nematology, v. 19, N2, 1987, pp. 201 206.

108. Wu H., Chow Y. Susceptibility of Pieris rapae crucivora (Lepidoptera: Pieridae) to the imported entomogenous nematode Steinernema feltiae //Bull. Inst. Zool. Acad. Sin. (Taipei), N28, 1989, pp. 237 244.

109. Xia Orong, Li Suchun. The lethal effect of entomophagous nematode Taishan 1 on the larvae and pupae of cotton bollworm //J. Plant Ptotect., v. 22, N3,1994, pp. 228-230.1. V <

110. Zhang Maoxin, Liang Guangwen. Studies on the population system control Steinernema carpocapsae (Weiser) against flea beetle Phyllotrata striolata (Fabricius) (Coleoptera: Chrysomelidea) // Acta Phytoph.Sinica, v. 27, N4, 2000, pp. 333 -337.