Репарация миокарда крыс в онтогенезе

Большакова, Галина Борисовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Репарация миокарда крыс в онтогенезе
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Репарация миокарда крыс в онтогенезе"

На правах рукописи

БОЛЬШАКОВА Галина Борисовна

РЕПАРАЦИЯ МИОКАРДА КРЫС В ОНТОГЕНЕЗЕ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

- 8 ОКТ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва - 2009

003479107

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте морфологии человека РАМН

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Бабаева Анна Георгиев! Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Болтовская Марина Николаев!

доктор медицинских наук, профессор Буравков Сергей Валентинови

доктор медицинских наук, профессор Черняев Андрей Львови

Ведущее учреждение: Российский университет дружбы народов

Защита диссертации состоится «_29_» октября_2009 года в 14 часов

на заседании диссертационного совета (Д 001.004.01) Учреждения Российскс академии медицинских наук Научно-исследовательского институ морфологии человека РАМН по адресу: 117418 Москва, ул. Цюрупы, д.З

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российскс академии медицинских наук Научно-исследовательского институ морфологии человека РАМН

Автореферат разослан «_» сентября_2009 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Л.П.Михайлова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Развитие и регенерация миокарда представляют интерес для представителей различных специальностей, включая цитологов, гистологов, анатомов, физиологов, молекулярных биологов, поскольку изучение процессов пролиферации и гибели клеток сердца, дистрофических и фиброзных изменений миокарда актуально для решения проблем восстановительных процессов в медицине и биологии (Epstein J.A, Buck С.А.; Rothenberg В.М., Korn A., 2005), в том числе и в быстро развивающейся фетальной кардиохирургии (Huhta J. et al., 2004; Pavlovic M. et al., 2008).

Восстановление органов в пренаталыюм периоде сравнительно мало изучено. Между тем изучение механизмов, обеспечивающих полноценное заживление ран, поможет подойти к решению проблемы безрубцового заживления в клинике и обосновать патогенетическое лечение фиброзно-пролиферативных процессов, в частности при сердечно-сосудистых заболеваниях, являющихся ведущей причиной заболеваемости и смертности (Colwell et al., 2003; Wynn Т., 2007) .

вблизи области повреждения и интенсивнее реакция соединительной ткани — инфильтрация, образование рубца. У взрослых млекопитающих повреждение заживает рубцом, новообразование мышечной ткани практически отсутствует (Большакова Г.Б., 1980). Таким образом, возможность вызвать активную пролиферацию кардиомиоцитов выше в пренатальном периоде, когда они еще не утратили способности к пролиферации, и их пролиферативный пул еще велик: в компактном миокарде желудочков 15-дневного плода крысы он составляет 70—80% (Румянцев П.П., 1982).

Сведения о репарации миокарда плодов млекопитающих немногочисленны. И. И. Малышев (1986) свидетельствовал о возможности заполнения дефекта миокарда 20—24-суточных плодов кроликов новообразованной мышечной тканью. Данные о существовании очагов некроза и/или рубцевания миокарда у плодов и недоношенных детей (Валькович Э.И. и др., 1986; Kamath M.V. et al., 1986), частота возникновения которых достигает 43% среди мертворожденных недоношенных и умерших в течение первого месяца жизни детей (De Sa D.J., 1979) и 25% у недоношенных детей, страдающих от эпизодов гипоксии (Kamath M.V. et al., 1986), вынуждают к осторожности в суждении о регенерационной способности миокарда. Сердца поздних плодов крыс в органной культуре также не были способны к полноценному заживлению (Blewett C.J. et al., 1997). В целом можно утверждать, что полные доказательные данные о регенерационной способности миокарда в эмбриональном периоде отсутствуют.

Для более обоснованных суждений о репаративной способности миокарда и понимания динамических взаимодействий клеток сердца необходимо использование воспроизводимой экспериментальной модели с соблюдением стандартных условий повреждения и с объективной количественной оценкой изменений. Высокие технологии и последние достижения компьютерной техники дают возможность дать репрезентативную, статистически обоснованную характеристику морфологических процессов, сопровождающих повреждение и последующую регенерацию.

Цель исследования - охарактеризовать морфогенез восстановления миокарда, поврежденного в пренатальном онтогенезе, и оценить вклад в репарацию его мышечного и соединительнотканного компонентов.

Задачи:

1. Изучить репарацию миокарда крыс после повреждения, нанесенного в пренатальном онтогенезе.

2. Разработать воспроизводимую модель повреждения сердца в фетальном периоде и методические основы исследования регенерацнонных процессов миокарда.

3. Провести исследование основных морфологических компонентов области повреждения и выявить особенности их взаимосвязей, определяющие исход репарации на разных этапах онтогенеза.

4. Дать характеристику немышечных клеток сердца в пренатальном периоде на модели травматического повреждения миокарда.

5. Оценить пролиферацию кардиомиоцитов левого желудочка после повреждения (травма сердца у плодов и взрослых крыс).

6. Исследовать происхождение клеток Аничкова и их участие в репарации миокарда.

7. Оценить степень зрелости миокардиального рубца после фетальной травмы.

Научная новизна

Разработана оригинальная воспроизводимая модель механической травмы левого желудочка сердца, наносимой в пренатальном онтогенезе, при которой область повреждения локализуется в верхней трети левого желудочка и занимает около 20% объема миокарда.

На основе количественного морфологического исследования миокарда крыс, поврежденного в различные сроки пренатального онтогенеза, впервые

показано, что у плодов способность к восстановлению миокарда ниже, чем у взрослых животных.

Оценка динамики изменений основных компонентов области повреждения в фетальном миокарде показала, что ее характерной особенностью является длительное сохранение некротизированной ткани и расширение области повреждения за счет пересокращенных кардиомиоцитов перинекротической области.

С помощью электронно-микроскопического и иммуногистохимического методов впервые описана динамика изменений немышечных клеток сердца плода крыс в норме и после повреждения. На протяжении нормального пренатального онтогенеза немышечные клетки представлены в основном эндотелиоцитами. После травмы, нанесенной плодам крыс, воспалительная реакция слабо выражена и представлена малодифференцированными клетками. Вплоть до 10 суток после операции происходит увеличение доли фибробластов. Макрофагальная инфильтрация, усиливающаяся на 5-е сутки после операции и идущая на убыль к 10-м суткам, вновь возрастает на 30-е сутки.

Исследование пролиферации кардиомиоцитов левого желудочка сердца плодов показало, что возрастание индекса патологических митозов (метафаз и анафаз) и увеличение процентной доли метафаз соответствует прогрессирующему снижению пролиферативной способности кардиомиоцитов. Травма миокарда, нанесенная в фетальный период, стимулирует митотическую активность только желудочковых кардиомиоцитов, отдаленных от места повреждения, и только на десятые сутки после ее нанесения. Судя по снижению индекса патологических митозов и уменьшению доли метафаз в этой группе, стимуляция является истинной. Тем не менее пролиферация кардиомиоцитов не вносит существенного вклада в репарацию миокарда плодов.

С помощью методов авторадиографии установлено, что конфигурацию хроматина, характерную для клеток Аничкова, через 20 часов после митоза могут приобретать ядра различных типов клеток, независимо от их тканевой принадлежности и участия в процессах репарации.

Выявлено, что эндотелиоциты сердца плода принимают участие в элиминации поврежденной ткани, отграничивая погибшие клетки.

Соединительная ткань рубца после фетальной травмы состоит из более тонких, чем у взрослых, и менее упорядоченно расположенных коллагеновых волокон, что свидетельствует о его меньшей зрелости.

Научно-практическая значимость

Результаты проведенного исследования теоретически обосновывают возможность разработки новых методов стимуляции кардиомиоцитов, а также модуляции развития соединительной ткани и фиброзирования в миокарде в норме и при патологии.

Данные о возрастных закономерностях репарации миокарда следует учитывать при обосновании хирургических операций на сердце в том или ином возрасте.

Экспериментальный материал, полученный при проведении данного исследования, может быть использован в процессе преподавания в вузах медицинского и биологического профиля по специальностям гистология, эмбриология, анатомия и патологическая анатомия.

Оригинальная модель повреждения сердца в пренатальном возрасте может быть использована в научно-исследовательских разработках.

Основные положения, выносимые на защиту

Способность сердца плода крыс к репарации слабее, чем у взрослых особей.

Для заживления повреждения, нанесенного в пренатальном периоде, характерно длительное персистирование некротических масс и расширение области повреждения за счет перинекротических пересокращенных кардиомиоцитов.

Немышечные клетки сердца плода крыс представлены в основном эндотелиоцитами. Воспалительный инфильтрат миокарда в пренатальном

онтогенезе состоит из малодифференцированных клеток, не способных к полному удалению некротизированной ткани и развитию полноценной воспалительной реакции.

После травмы миокарда, нанесенной в пренатальном периоде, митотическая активность кардиомиоцитов левого желудочка превышает контрольные показатели только на десятые сутки после ее нанесения вдали от места повреждения. Высокая пролиферативная способность фетальных кардиомиоцитов не способна обеспечить полноценное восстановление миокарда, поврежденного в пренатальном периоде.

Клетки Аничкова происходят от предшественников различной тканевой принадлежности. Характерная конфигурация хроматина появляется через 20 часов после митоза.

После повреждения фетального миокарда неполноценный рубец, в отличие от рубца взрослых животных, представлен более тонкими и менее упорядоченными коллагеновыми волокнами, характеризующими незрелость новообразованной соединительной ткани.

Внедрение

Результаты исследования по репарации фетального миокарда используются при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедре клеточной биологии и гистологии биологического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова и кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии Московского государственного медико-стоматологического университета.

Степень личного вклада автора в результаты исследования

Автор непосредственно участвовал в проведении всех экспериментальных исследований, самостоятельно проводил сбор, обработку и анализ полученного экспериментального материала, самостоятельно сформулировал основные положения диссертации.

Апробация работы

Результаты исследований и основные положения работы доложены и обсуждены на конференции «Актуальные вопросы современной гистопатологии» (г. Москва, 1980), на III Всесоюзной конференции по патологии клетки (г. Москва, 1982), на VII Всесоюзной конференции по регенерации и клеточному делению, (г. Москва, 1985), на конференции «Актуальные вопросы современной гистопатологии» (г. Москва, 1986), на IV зональной межвузовской конференции по регенерации органов и тканей животных и ее стимуляции (Ереван, 1986), на конференции «Актуальные вопросы современной гистопатологии» (г. Москва, 1987), на конференции «Актуальные вопросы современной гистопатологии» (г. Москва, 1988), на конференции «Ультраструктурные основы патологии органов и тканей» (г. Тбилиси, 1989), на конференции «Актуальные вопросы современной гистопатологии» (г. Москва, 1990), на конференции «Актуальные проблемы общей и частной патологии» (г. Москва, 1999), на конференциях «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии» (г. Москва, 2004, 2006, 2008), на межлабораторной конференции НИИМЧ РАМН (июнь, 2009).

Публикации

Основные положения диссертации отражены в 23 публикациях, из них - в 1 монографии и 7 статьях в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, общей характеристики материала и методов исследования, главы собственных исследований и их обсуждения, состоящей из 12 подразделов, заключения, выводов и списка литературы.

Объем диссертации составляет 312 страниц машинописного текста и включает 36 таблиц и 51 рисунок. Список литературы включает 309 источников, из которых 105 отечественных и 204 зарубежных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Всего в работе были использованы 341 плод белых нелинейных крыс в возрасте 16, 17, 18, 19 и 21 суток внутриутробного развития, 54 новорожденных животных, 47 крысят в возрасте 5-8 суток и 52 взрослых самца. Плоды получали у самок с датированной беременностью.

Методы исследования

Методика повреждения миокарда и ее воспроизводимость были предварительно отработаны на 200 плодах и новорожденных животных. Оперирование и вывод животных из эксперимента осуществляли под эфирным наркозом. При работе с экспериментальными животными руководствовались приказом Минздрава СССР № 755 от 12.08.1977 г. На проведение эксперимента получено разрешение биоэтической комиссии ГУ НИИ морфологии человека РАМН (протокол № 4 от 12.03.2007).

Для получения стандартного повреждения миокарда плодов крысе вскрывали брюшную полость. Не разрезая матку, делали прокол сердца хирургической прямой иглой диаметром 0,7 мм и разрывали миокард. Новорожденным животным также наносили травму миокарда иглой большего размера, не повреждая грудную клетку. Группы сравнения составили интактные одновозрастные и взрослые животные. Взрослым крысам массой 300—350 г вскрывали грудную клетку и несколько раз надрезали сердце скальпелем, предварительно отработав методику повреждения так, чтобы получить травму такого относительного объема, как и в первой группе (около 20%).

Животных усыпляли эфиром на 1,2, 3, 4, 5, 7, 10, 30-е сутки после операции. Далее проводили обычную гистологичеркую обработку сердца. Продольные срезы сердца делали на 12 — 15 уровнях. При резке блок

располагали так, чтобы на срез попадало все сердце в продольном сечении, т.е. хорошо были видны оба предсердия с ушками и оба желудочка. Парафиновые срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином с докраской эозином и пикрофуксином, по Маллори, железным гематоксилином по Гейденгайну, молибденовым гематоксилином Гельда с докраской пикрофуксином. Для дифференцирования мышечных и соединительнотканных клеток ставили ШИК-реакцию с предварительной обработкой срезов амилазой.

С целью объективизации оценки размеров повреждения, а также состава области повреждения проводили морфометрический анализ (Автандилов Г.Г. и др., 1981). Препарат исследовали с помощью окулярной квадратной тест-решетки с 289 точками при суммарном увеличении 27,75Х. На 10 срезах каждого сердца просчитывали число узлов решетки, попавших в область повреждения и на весь срез, затем высчитывали суммарную и средние площади области повреждения, некротизированной и рубцовой ткани в квадратных миллиметрах, а также относительный объем области повреждения. Область повреждения исследовали методом «полей» с помощью сетки из 4 узлов, свободно передвигаемой по всей области на нескольких срезах (100 тест-точек на сердце) при общем увеличении светового микроскопа 1350Х. Выделяли основные элементы учета, отражающие морфологические изменения в посттравматический период: некротизированная ткань, клетки, мигрирующие в область повреждения, просвет кровеносных сосудов, коллагеновые волокна (окрашенные пикросириусом или пикрофуксином в ярко-красный цвет), кардиомиоциты вокруг очага повреждения. Затем определяли объемную плотность каждого из элементов.

Для проведения электронно-микроскопического исследования брали кусочки поврежденной ткани объемом 1 мм3 из верхней трети левого желудочка на 3, 5, 10, 30-е сутки после травмы сердца плодов, а также миокард из той же области у интактных 21-суточных плодов, 5-суточных крысят и 25-суточных крыс (2—3 животных на срок). Кусочки фиксировали 1—2 ч в 2,5%-ном глутаровом альдегиде, затем дофиксировали в 1%-ном 0б04,

дегидратировали и заливали в эпон-аралдитную смесь. Срезы получали на ультратоме LKB, окрашивали по Рейнольдсу и просматривали под электронным микроскопом JEM-100 В. Клеточный состав области повреждения определяли на электронограммах неповторяющихся срезов при конечном увеличении 6000Х. Во избежание ошибок, связанных с подсчетом фрагментов клеток, учитывали только срезы, содержащие ядро. Результаты выражали в процентах.

Для иммуногистохимического исследования были ичпользованы сердца плодов крыс, оперированных в возрасте 16 суток, на сроках 2 и 5 суток после операции (по 2 сердца); у взрослых животных - через 2 и 5 суток после операции (по 2 сердца); у интактного 21-суточного плода (2 сердца).

Материал фиксировали в 10% забуференном формалине, заливали в парафин, готовили серийные срезы толщиной 4 мкм на предметных стеклах Menzel-Glaser® Polysine™, которые затем депарафинировали по стандартной схеме. Исследование проводили непрямым иммунопероксидазным методом. Использовали следующие первичные антитела (Abeam): для идентификации макрофагов - CD-68 (крысиные, клон ED-1, разведение 1:100); для оценки пролиферативного пула - Ki-67 (кроличьи, разведение 1:100); для определения эндотелиоцитов - CD-31 (крысиные, клон SC-1506, разведение 1:50). С целью демаскирования антигенов стекла со срезами нагревали в течение 30 минут на водяной бане в 0,01 М в цитратном буфере (pH 6,0). Активность эндогенной пероксидазы блокировали 3% раствором перекиси водорода, неспецифическую адсорбцию первичных антител - 30-минутной инкубацией с нормальной телячьей сывороткой. Инкубацию с первичными антителами проводили при комнатной температуре в течение 40мин. После каждый процедуры срезы промывали в Трис-HCl буфере - 0,05 М (pH 7,6). Для визуализации реакции использовали систему детекции UltraVision TL-015-HD (LabVision), срезы докрашивали гематоксилином Караччи. Контроль иммуноокрашивания осуществляли исключением вторичных антител.

Митотическую активность кардиомиоцитов оценивали, подсчитывали митозы в компактном миокарде левого желудочка: в кардиомиоцитах вокруг области повреждения и в отдалении от нее (у контроля в интактном миокарде), причем учитывали фазу митоза. Отдельно подсчитывали патологические метафазы и анафазы - рассеивание хромосом, их склеивание, трехгрупповая и полая метафазы, отставание хромосом в метакинезе, хромосомные и хроматидные мосты, асимметричные митозы (Алов И.А., 1972).

Для характеристики пролиферации в каждой группе определяли следующие параметры: митотический индекс (МИ), выраженный в промилле (%о), соотношение между фазами митоза, а также процентное отношение патологических метафаз к общему количеству метафаз.

Клеточную кинетику миокарда и, в частности, клеток Аничкова изучали с помощью методов авторадиографии (Епифанова О.И., 1969; Епифанова О.И. и соавт., 1977). 44 крысятам в возрасте 7-8 сут внутрибрюшинно вводили 3Н-тимидин удельной активности 1,3 Ки/ммолъ 1530 ТБк/моль в дозе 0,5 мкКи на 1г массы и через 2, 4, 6, 9, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48 часов животных декапитировали. Сердца подвергали обычной гистологической обработке. Депарафинированные срезы толщиной 5-7 мкм покрывали эмульсией типа "М", после 6-недельной экспозиции проявляли амидоловым проявителем и окрашивали гематоксилином. Так как, согласно данным литературы (Kunz J., 1979), параметры митотических циклов кардиомиоцитов и клеток соединительной ткани одинаковы, при подсчетах клетки не разделяли на мышечные и соединительнотканные. Подсчитывали зерна серебра над мечеными ядрами клеток Аничкова, а также над ядрами клеток, делящихся впервые после введения тимидина (спустя 9 ч после инъекции), учитывая отдельно стадии митоза до кариокинеза и после него (профаза-метафаза и анафаза-телофаза). На каждом сроке исследования определяли количество меченых митозов и количество меченых клеток Аничкова в процентах на 100— 200 клеток. Ввиду самоабсорбции излучения препаратом подсчеты проводили в верхнем слое среза.

Количество ДНК в ядрах клеток Аничкова определяли цитофотометрически на диссоциированных клетках (Коган М.Е. и др., 1976), окрашенных по Фельгену . Измерение оптической плотности ядер проводили на сканирующем микроспектрофотометре 5ЕМ-3 фирмы «Opton» (ФРГ). Диплоидным контролем служили лимфоциты на мазках крови тех же животных.

Динамику изменения содержания коллагена исследовали в миокарде 16-суточных плодов и взрослых через 7, 8, 10, 16, 30 и 40 суток после операции на срезах толщиной 4 мкм, окрашенных пикросириусом красным, позволяющим наиболее точно визуализировать коллаген, поскольку в поляризованном свете цвет коллагеновых волокон зависит от толщины фибрилл, а именно: фибриллы более высокой морфологической зрелости выявляются в спектре от оранжевого до светло- красного, а более тонкие фибриллы- зеленые (Junqueira L. С. U .et al., 1987).

На случайно выбранных срезах в области рубца делали 10 цифровых снимков при объективе х40 в поляризованном свете, используя камеру AxioCam HRc микроскопа Axioplan 2 (Carl Zeiss, Германия), и обрабатывали их с помощью пакета «Анализ» программы Adobe Photoshop CS3 Extended (Adobe Systems, Inc.). Инструментом «Волшебная палочка» выделяли окрашенные в красный или зеленый цвет коллагеновые волокна и определяли количество размер выделенной площади в условных единицах (пикселях). Долю коллагеновых волокон вычисляли как отношение площади коллагена к их общей площади поля зрения и представляли в процентном отношении.

Для исследования ориентации фибрилл были выбраны группы 16-суточных плодов и взрослых крыс на 7, 10 и 30 сутки после механической травмы сердца Исследовали срезы от 5 сердец в каждой группе, окрашенные пикросириусом красным. Чтобы измерить ориентацию пучка волокон, измеряли угол ориентации пучка коллагеновых волокон по отношению к оси раневого канала. На каждую группу делали 170, измерений. Данные по ориентации наносили на круговую гистограмму и анализировали, используя

статистику угловых измерений (Мардиа К., 1978). С помощью программы StatistiXL version 1.8. определяли круговое среднее направление, круговую дисперсию, круговое стандартное отклонение, средний результирующий вектор (длина результирующего вектора / количество наблюдений).

В группах определяли среднее арифметическое и стандартное отклонение по формуле для долей. Границы 95%-ных доверительных интервалов для долей рассчитывали с помощью ф-критерия (Урбах В.Ю., 1975; Юнкеров В.И., Григорьев С.Г., 2002). Сравнение двух выборочных долей проводили с помощью z-критерия, который является более мощным, чем критерий хи-квадрат и точный критерий Фишера (Williams J.L. et al., 1997).

Поскольку в большинстве групп признаки не имели нормального распределения, при сравнении средних групповых количественных признаков параметрических и непараметрических данных применяли соответственно критерий Стьюдента и критерий Маниа-Уитни. Сравнение средних значений количественных признаков в нескольких группах проводили с помощью критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони и критерия Данна. Оценка интенсивности корреляционной связи проводилась с помощью коэффициента корреляции Спирмена.

С целью визуализации корреляций между признаками, выявления структуры данных и нахождения как можно меньшего числа скрытых общих факторов, точно описывающих наблюдаемые связи между составляющими область повреждения миокарда использовали компонентный и факторный анализ. Выделение факторов было проведено с использованием метода главных компонент, метод вращения - Варимакс нормализованный (Калинина В.Н., Соловьев В.И., 2003). Сравнение соотношений фаз митозов проводили с помощью критерия хи-квадрат. Данные были проанализированы с помощью программ Statistica 6.0 (StatSoft, Inc.), Microsoft® Excel 2003 и Sigma Stat 3.5 (Systat Software, Inc.). При статистическом анализе результатов был выбран 5%-ный уровень значимости.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

Доказательства воспроизводимости

Для данной экспериментальной модели необходимо было доказат воспроизводимость как метода повреждения миокарда, так и определения: 1 размера повреждения, 2) состава очага повреждения, 3) результатов измерений.

Через сутки после травмы относительный объем повреждения составил ; 16-суточных плодов 21,5±4,8% (среднее ± стандартное отклонение), у взрослы: животных — 18,6±2,1%. Различия оказались недостоверными (р = 0,410] Относительный объем некротизированной ткани по отношению к всему сердц; у плодов на этом сроке (11,7±2,3%) также не различался в обеих группа: (11,3±3,1% у взрослых) при р = 0,792. Полученные данные указывают н стандартизованный метод травмирования миокарда и хорошую воспроизводимость определения размера повреждения.

Воспроизводимость определения состава очага повреждения в пределах одной группы выявляли, разбив группу «оперированные 16-суточные плоды через 5 сут после травмы» (и = 8) на две подгруппы и сравнивая относительный объем различных элементов области повреждения с помощью критерия у\ Полученная величина %2 = 7,18 при р = 0,127 свидетельствует о постоянстве состава области повреждения при данном способе травмирования и его определения.

Для оценки воспроизводимости результатов измерений препараты группы «плоды через 7 сут после травмы» (п = 7) просчитывали дважды и проводили попарное сравнение результатов с помощью критерия у\ Различия были недостоверными (%2 = 2,07 при р = 0,724).

Таким образом, разработанная модель травмы миокарда обеспечивает получение воспроизводимых результатов, позволяющих судить об изменении площади и относительного объема области повреждения и составляющих ее

элементов в процессе репарации и сравнивать ход заживления в сердце плодов и взрослых животных.

Сравнительные морфологические особенности области повреждения у плодов и взрослых на разных сроках после травмы

У взрослых животных происходит типичная репарация повреждения миокарда, при которой сменяются фазы альтерации, реактивного воспаления и рубцевания ткани. В обширном очаге коагуляционного некроза на 2-е сутки появляются полинуклеары, которые из-за нарушения кровообращения образуют лейкоцитарный вал.

В краевой зоне повреждения уже на вторые сутки после повреждения появляются очаги патологической контракции (коагуляционный миоцитолиз). Макрофаги уничтожают поврежденную ткань, остающиеся сарколеммные футляры образуют «альвеолярную» структуру. Инфильтрат представлен мононуклеарами типа лимфоцитов. Такого рода картина типична для коагуляционного миоцитолизиса (ТигП1агг1 Е. й а1., 2005; Б.Н. й а1., 2008).

На 4-е сутки в области повреждения появляются макрофаги с желто-бурой зернистостью, быстро уничтожающие некротические массы. Резорбция макрофагами некротизированной ткани заканчивалась в течение недели. Мышечные волокна, претерпевшие некроз, уже на 4-5 сутки замещаются соединительной тканью. На 4-е сутки появляются волокна коллагена, к 7 сутками образуется плотный рубец.

В поврежденном миокарде плодов вплоть до рождения обнаруживали обширные поля гибели клеток.

На 3-е и 5-е сутки после травмы гибнущие кардиомиоциты образовывали значительные скопления, что свидетельствует о замедленном или нарушенном фагоцитозе. В эту область мигрировали фибробласты, синтезирующие коллаген. На ранних сроках после операции (3-5 суток) нами были замечены маргинация хроматина кардиомиоцитов, лизис миофибрилл, вакуолизация эндоплазматического ретикулума, разрушение крист митохондрий, образование аутофагосом, сегментарные контрактуры.

Мы наблюдали коагуляционный некроз лишь с 5 суток после операции. Для него характерны разрывы мембран кардиомиоцитов, контрактуры миофибрилл, аморфный осадок в митохондриях. С 5 суток на периферии повреждения можно также наблюдать кардиомиоциты со множественными вакуолями, являющимися характерными признаками миоцитолизиса

В сердце плода крайне слабо выражена воспалительная реакция, что, несомненно, связано с замедленной резорбцией некротических масс. Полностью отсутствовала лейкоцитарная и гранулоцитарная инфильтрация.

Начиная с 5-х суток после травмы в сердце наблюдали дополнительные очаги некроза и рубцевания в субэндокарде, окруженные сверхсокращенными кардиомиоцитами.

После рождения в поврежденном миокарде плодов наблюдаются те же изменения, что и у взрослых животных. На 10-е сутки в поврежденном миокарде нередко сохранен раневой канал и сформирован рыхлый рубец, окруженный кардиомиоцитами с контрактурными повреждениями, следствием которых нередко является миоцитолизис, что позволяет сделать предположение о расширении области некроза.

На 30-е сутки после травмы ни в одном сердце не наблюдали заполнения дефекта мышечной тканью. В области повреждения сохранялся раневой канал, присутствует некротизированная ткань, активно функционируют макрофаги, т.е. репаративные процессы были десинхронизированы, что, вероятно, является следствием нарушения межтканевых взаимодействий в эмбриогенезе, когда механизмы регуляции воспаления и репарации еще несовершенны.

Дипамнка морфометрических характеристик миокарда в разных

группах

С течением времени состав области повреждения претерпевает изменения, динамика которых определяется возрастом, в котором была нанесена травма.

На 1-е сутки после травмы по объемной плотности некроза относительно области повреждения можно выделить две подгруппы, в пределах которых она

достоверно не различается - 16-суточных, 17-суточных, 18-суточных и взрослых крыс (52-61 %) и 19-суточных, 21-суточных и новорожденных крыс (69-74%). Вплоть до 4-х суток у всех животных этот показатель колеблется в указанном диапазоне, за исключением кратковременного резкого снижения до 34,6 ±2,1 % у 21-суточных крыс на 3-е постоперационные сутки .

Наиболее резкие различия наблюдали между группами взрослых крыс и 16-суточных плодов (Рис. 1). Так, на 5-е сутки у взрослых крыс объемная плотность некроза резко уменьшается до 9,75 ± 1,5 %, снижаясь к 30-м суткам до 0, у 16-суточных плодов к 10-м суткам она снижается до 41,1 ± 1,6 %, а к 30-м суткам возрастает до 67,7 ± 1,9 %. В группе новорожденных крыс этот показатель занимает промежуточное положение, колеблясь от 5 до 10 суток между 39 и 49 %.

Абсолютная площадь некротизированной ткани у 16-суточных плодов возрастает от 0,4 ± 0,1 кв.мм на 1-е сутки до 2,1 ± 0,1 кв.мм на 30-е сутки, абсолютная площадь области повреждения на 30-е сутки операции (3,1 ±0,1 кв.мм) достигает величины площади среза всего сердца плода через 1 сут после операции (3,82 ± 0,14 кв.мм,/?=0,1).

Накопление коллагена в области повреждения начинается у взрослых животных на 4-е сутки после травмы (7,4 ± 1,2%). Его объемная плотность резко возрастает, составляя на 5-е сутки 44,8 ± 2,5% , на остальных сроках колеблясь в пределах 60-65%. У 16-суточных плодов объемная плотность коллагена постепенно нарастает от 1,5 ± 0,4% на 5-е сутки до 16,1 ± 1,5% на 30-е сутки после операции.

В группе новорожденных крыс этот показатель так же, как и предыдущий, занимает промежуточное положение, колеблясь на сроках от 5 до 10 суток между 13 и 26 %. По исследованным показателям эта группа статистически значимо отличается от групп оперированных взрослых животных и 16-суточных плодов. По-видимому, функциональное созревание систем, обеспечивающих образование полноценного рубца, происходит в

время после

взрослые операции, сут ПЛ°ДЬ|

Рис. 1. Динамика изменения состава области повреждения в сердце 16-суточных плодов и взрослых крыс.

постнатальном периоде (Colwell A.S. et al., 2005; Mescher A.L., Neff A.W., 2005).Относительный объем области повреждения к 4-м суткам уменьшался до 3,0±0,3 %, а к 30-м сут до 1,0+0,1 %.

В сердце 16-суточных плодов абсолютная площадь повреждения в первую неделю после травмы достоверно не изменяется (на 5-е сутки р = 0,058, на 7-е сутки р = 0,051), а затем увеличивается за счет расширения области некроза, которая составляет на 1-е сутки 0,44 ± 0,05 кв.мм, а на 30-е 2,12 ± 0,11 кв.мм, то есть увеличивается почти в пять раз. На 30-е сутки после травмы доля некротизированной ткани в сердцах плодов, травмированных на 16-сутки (67,7 ± 1,9%), статистически значимо не отличается от таковой у взрослых на 1-е сутки после травмы (61,0 ± 1,8), несмотря на существенную разницу в размерах сердец животных обеих групп, оцениваемую по площади продольных срезов (р = 0,072).

Объемная плотность клеток, мигрирующих в область повреждения, составляет во всех в период с 1 по 10 сутки от 15 до 39%, однако следует иметь в виду, что здесь мы имеем дело не только с количественными различиями, но и природой мигрирующих клеток. Так, у взрослых животных это типичный воспалительный инфильтрат, а у 16-суточных плодов -базофильные веретеновидные клетки, идентификация которых может быть выполнена методами электронной микроскопии и иммуногистохимии .

Объемная плотность сосудов достоверно не различается у 16-суточных плодов, новорожденных и взрослых и постепенно снижается примерно от 16% до 6%, кроме 4-х суток, когда в группе взрослых спад происходит раньше, чем в остальных группах.

Корреляционный анализ позволил выявить связи между составляющими области повреждения, специфические для различных возрастных групп.

У оперированных взрослых животных корреляция между абсолютной

площадью некротизированной ткани и площадью области повреждения

отрицательна (г = -0,62). С увеличением срока после операции в этой группе

положительно коррелирует доля коллагеновых волокон (коэффициент корреляции г = 0,91) и отрицательно - доля некротизированной ткани (г = -0,84). Между долями некротизированной ткани и коллагеновых волокон коэффициент корреляции составляет -0,87. Эти данные свидетельствуют о быстром замещении поврежденной ткани рубцом.

У 16-суточных плодов, напротив, выявлена сильная положительная корреляционная связь между абсолютной площадью некротизированной ткани и площадью области повреждения (г = 0,98). Следовательно, после травмы, нанесенной 16-суточным плодам, область повреждения расширяется за счет увеличения количества некротизированной ткани. Корреляция между сроком после операции и долей коллагеновых волокон также сильная и достоверно не отличается от таковой во взрослой группе (г = 0,91, р = 0,4), корреляция с долей некроза слабее (г = -0,36) и достоверно меньше, чем у взрослых ( р = 0,002). О том, что замещение некротизированной ткани рубцом происходит медленнее, свидетельствует и более слабая корреляционная связь между долями некротизированной ткани и коллагеновых волокон (г = -0,45), также статистически значимо отличающаяся от предыдущей группы (р = 0,002).

Клеточный состав соединительной ткани нормального и

поврежденного миокарда

Функционирование сердца определяется динамическим

взаимодействием клеток различных типов и межклеточного вещества,

существенно различающихся на разных этапах кардиогенеза.

Клеточный состав области повреждения взрослого сердца резко

изменяется в течение первой недели после травмы миокарда. Доля

лимфоцитов наиболее велика на 2-е сутки (4,4±0,9%), затем она резко

уменьшается. Доля сегментоядерных лейкоцитов достоверно возрастает на 4-

е сутки после операции до 45,4 ± 2,2% и уменьшается на 7-е сутки до 2,4 ±

0,7%, доля макрофагов убывает с 4 по 7-е сутки с 39,2 ± 2,2% до 18,2±1,7%,

доля юных фибробластов постоянно нарастает от 4-х к 7-м суткам, достигая

70,0 ± 2,0%, зрелые фиброблаеты появляются на 4-е сутки после операции, и их доля возрастает на 7-е сутки до 5,2 ± 1,0%. Таким образом, в поврежденном взрослом сердце можно наблюдать картину типичного реактивного воспаления.

Клеточные элементы пренатального миокарда не отличаются разнообразием и вплоть до рождения представлены почти исключительно кардиомиоцитами и эндотелиоцитами.

В интактном миокарде 21-суточных плодов крыс количество кардиомиоцитов составляет 66,7 ± 1,8% от общего числа клеток, 5-суточных крысят - 53,0 ±2,3% (различия достоверны при р < 0,001), 25-дневных крысы - 50,2 ± 3,2% (различия с предыдущим сроком недостоверны), стало быть, количество немышечных клеток достигает на этих сроках соответственно 33,3 ± 1,8%, 47,0 ± 2,3% и 49,8 ± 3,2%. В постнатальном периоде в составе немышечных клеток статистически значимо возрастают доли эндотелиоцитов, фибробластов, макрофагов и перицитов. В течение первого месяца после рождения клеточный состав миокарда остается постоянным. По сравнению с интактным одновозрастным контролем на 5-е сутки после операции достоверно возрастает доля фибробластов и макрофагов и, вероятно, вследствие этого уменьшается доля эндотелиоцитов. На 10-е сутки доля фибробластов продолжает возрастать, достигая 20,1±2,8 %. Через 30 суток после операции обращает на себя внимание значительное увеличение доли макрофагов (р < 0,001) в области повреждения (Рис. 2).

После травмы вплоть до 10 суток после операции происходит усиленное по сравнению с контролем увеличение доли фибробластов. Макрофагальная инфильтрация, усиливающаяся на 5-е сутки после операции и идущая на убыль к 10-м суткам, вновь возрастает на 30-е сутки, что может свидетельствовать о хронизации воспаления.

Заживление как пренаталыюм, так и в постнатальном онтогенезе в большой мере определяется характером воспалительного процесса (Redd

■

5post/10 10 int

25post30 25 int

Рис.2. Динамика клеточного состава воспалительного инфильтрата в поврежденном сердце 16-суточного плода. Серые участки - доля эндотелиоцитов, светлые - макрофагов, заштрихованные - фибробластов, черные - перицитов.

По оси ординат - возраст / срок после операции в сутках и исследуемая зона сердца.

f- фетальный период, post - постнатальный период, int - интактные.

М.Е. et al., 2004; Stramer В.M. et al., 2007), следовательно, нарушение нормального процесса репарации обусловлено изменением характера межклеточных взаимодействий в травмированном пренатальном миокарде. В частности, фетальные кардиальные фибробласты в норме взаимодействуют с кардиомиоцитами, регулируя их пролиферацию (Ieda M. et al., 2009), в свою очередь, их пролиферация и синтез коллагена регулируется эндотелиальными клетками (Kuruvilla L. et al., 2007). Фибробласты, появившиеся в поврежденном плодном миокарде, могли принадлежать к другой клеточной популяции, тогда как по данным литературы, фибробласты разных популяций различаются по способности к репарации и взаимодействию с другими клетками сердца (Sorrell J.M., Caplan A.I., 2004; Wang H.J. et al, 2004).

О роли эидотелиоцитов в элиминации погибших клеток

В интактном сердце плода крысы присутствовали зоны физиологической гибели клеток, которые морфологически не отличались от поврежденного миокарда. В данном случае элиминация погибших клеток несомненно происходила, хотя макрофаги в сердце на этом сроке отсутствовали. После травмы миокарда тяжи эндотелиальных клеток, иммуногистохимически определенных как CD-31-положительные и CD-68-отрицательные, нередко разрастались вокруг поврежденных клеток: кардиомиоцитов и зндотелиоцитов. Подобное же обрастание поврежденных эидотелиоцитов было замечено и на 30-е сутки после операции, т. е. у взрослых животных.

По данным литературы, в пренатальном периоде фагоцитоз нередко осуществляется мезенхимальными клетками, на которых отсутствуют рецепторы макрофагов (Wood W. et al., 2000; Komohara Y. et al., 2005). Врастание эндотелия эндокарда в миокард и изоляция групп миоцитов являются частыми событиями кардиогенеза, сопутствующими разделению тканей, и определяющими течение таких процессов, как формирование вторичного межпредсердного отверстия, разрыв дорсального мезокардия, развитие сухожильных хорд. (Markwald R.R., Bernanke D.H., 1981; Morse D.E., 1981; Noble Ch.W. et al., 1983). Вероятно, вследствие присоединения разрастаний эндотелия к циркуляции фрагменты погибших клеток, неоднократно описанные в просвете капилляров (Вихерт A.M. и др., 1984; Кияк Ю.Г., 1985), могут элиминироваться из миокарда. В постнатальном онтогенезе также существует неспецифический фагоцитоз, осуществляемый различными типами клеток, в том числе и эндотелиоцитами, которые связываются с погибшими клетками с помощью лектинов (Gregory C.D., Devitt А., 2004).

Таким образом, эндотелий плода принимает участие в удалении погибших клеток, изолируя их и способствуя удалению с кровотоком. В поврежденном сердце плода эндотелий полностью не обеспечивает элими-

нацию погибших клеток, однако в ходе нормального развития сердца таким способом, вероятно, достигается удаление клеток при их физиологической гибели, что является процессом, «дублирующим» макрофагальный фагоцитоз (Wood W. et al., 2000).

Количественная и качественная оценка пролиферации компактного миокарда левого желудочка в норме и повреждения сердца у 16-суточных плодов крыс

На всех исследованных сроках нормального пренатапьного развития кардиомиоциты статистически значимо не различались по уровню пролиферативной активности. После рождения митотический индекс

16f/0 17f/1 19f/3 21f/5 2post/7 5 post/10

Рис. 3. Митотическая активность кардиомиоцитов после травмы левого желудочка, нанесенной в возрасте 16 суток пренатального развития.

Серые столбики - кардиомиоциты вокруг очага повреждения, светлые - вдали от очага повреждения, заштрихованные - кардиомиоциты интактного одновозрастного контроля.

По оси абсцисс - возраст / срок после операции, по оси ординат -митотический индекс в промилле, f - фетальный период, post -постнатальный период.

Полоски погрешностей - доверительные интервалы.

контр j пери i вдали | контр 16f/0 17Í/1

пери вдали | контр : пери ¡ вдали | контр 19f/3 21Í/5

пери I вдали | контр пери t вдали, контр 2 post/7 ! 5 post/10

Рис. 4. Процентное соотношение фаз митозов в после травмы миокарда.

По оси ординат - возраст / срок после операции в сутках и исследуемая зона сердца.

Черные части столбиков - процент профаз, серые - метафаз, светлые -анафаз, пестрые - телофаз.

уменьшается (Рис. 3). Это согласуется с ранее полученными данными (Румянцев П.П., Соколовская И.Л., 1965; Большакова Г.Б., 1980; Soonpaa М.Н., Field L.J., 1998; Ahuja P. et al., 2007) об угасании пролиферации кардиомиоцитов, наиболее ярко выраженном после рождения.

В период постнатального онтогенеза сердечной мышцы относительная продолжительность фаз митоза ядер кардиомиоцитов варьирует, отражая индивидуальные изменения характера митотической активности. Тем не менее с возрастом не было выявлено статистически значимой тенденции к увеличению количества метафаз и уменьшению количества анафаз и телофаз, что является показателем стабильном времени прохождения митоза кардиомиоцитами на данном этапе развития (Рис. 4).

Однако характер митотической активности все же не остается неизменным. На прогрессирующую дезорганизацию митотического аппарата, сопровождающую угасание пролиферации, указывает возрастное увеличение количества патологических метафаз и анафаз. На пятые сутки после операции они составляют около 70% от всех анафаз и телофаз. (Рис. 5).

На первые сутки после травмы наблюдается резкое торможение

100,00 -

90,00 1

80,00 -!

50,00

20,00 -

40,00 -

60,00 -

70,00 Т

30,00

10,00 -

0,00

19»3

9»3 2Н/5 2рови7 5розУ10

возраст/ срок после операции, сут

Рис. 5. Доля патологических метафаз и анафаз кардиомиоцитов на различных сроках после травмы левого желудочка.

По оси абсцисс - возраст / срок после операции в сутках, по оси ординат -доля патологических митозов в процентах.

митотической активности всех желудочковых кардиомиоцитов. Аналогичное подавление пролиферации происходило также во всех отделах сердца крысят, поврежденного на разных сроках постнатального развития (Большакова Г.Б., 1980). На третьи сутки оно сменяется достоверным увеличением пролиферации, достигающим контрольных показателей. На пятые сутки митотический индекс в околораневой области статистически значимо меньше показателей отдаленного миокарда и контроля, которые все еще не различаются между собой.

После рождения митотическая активность во всех исследуемых областях поврежденного сердца достоверно снижается. На седьмые сутки после операции (вторые сутки после рождения) митотические индексы в околораневой и отдаленных областях не различаются между собой и не отличаются от контрольных показателей, и только на десятые сутки после операции (пятые сутки после рождения) митотический индекс в области, отдаленной от места повреждения, статистически значимо превышает таковой в перинекротической области и в интактном миокарде (Рис. 3).

Таким образом, травма миокарда, нанесенная в фетальный период, стимулирует митотическую активность только желудочковых кардиомиоцитов, отдаленных от места повреждения, и только на десятые сутки после ее нанесения. Следует отметить, что вследствие постоянного расширения области некроза в перинекротическую область вовлекаются все новые клетки, так что речь идет о стимуляции пролиферации постнатальных кардиомиоцитов.

На первые сутки после травмы происходит резкое увеличение доли профаз и метафаз по сравнению с контролем, свидетельствующее о возобновлении пролиферации после ее временного угнетения, вызванного послеоперационным стрессом (Рис.4). На третьи сутки доля профаз как в перитравматической, так и в отдаленной области миокарда превышает контрольные значения, возможно, являясь признаком дальнейшего усиления пролиферации. На пятые, седьмые и десятые сутки после травмы увеличивается доля метафаз, что может свидетельствовать об удлинении времени их прохождения и нарастающем торможении пролиферации, характерном для постнатальных кардиомиоцитов крыс .

Таким образом, митозы, возникающие после повреждения сердца 16-суточных плодов, по соотношению фаз не отличаются от таковых в контрольных группах. Отсутствуют различия с контролем и по величине индекса патологических метафаз и телофаз и их доли (Рис.5 ), что, возможно, обусловлено большой вариабельностью этих показателей. Лишь на 10 сутки

в области, отдаленной от повреждения, доля патологических митозов статистически значимо снижена по сравнению с контролем, что свидетельствует о частичной нормализации протекания митозов.

Ядра Аничкова как маркер постмитотических клеток

Клетки Аничкова, или "миоциты Аничкова", обращают на себя внимание необычным расположением сконденсированного хроматина, похожего на гусеницу при продольном срезе ядра или на глаз совы при поперечном срезе . Их ультраструктура свидетельствует о нормальном состоянии органелл (Pienaar J.G., Price Н.М., 1967), описано включение в ядра 3Н-тимидиновой метки (Румянцев П.П., 1982).

Поскольку эти клетки часто находили в очагах повреждения миокарда, возникла мысль об их участии в регенерации в роли «миоцитов» (Anitschkow, 1928), впоследствии признанная несостоятельной.

Вообще говоря, клеток Аничкова как отдельного типа не существует, так как характерные ядра встречаются в различных клетках различных органов (Wood Т.А. et al., 1975; Kobayashi Т.К. et al., 1992). Они скорее отражают функциональное состояние клетки, поэтому правильнее было бы употреблять термин "ядра Аничкова".

По нашим наблюдениям над нормальным и поврежденным миокардом крыс, появление клеток Аничкова тесно связано с очагами пролиферации клеток сердца, точнее, областями, где повышенная митотическая активность, отмеченная в течение нескольких дней, снижается. Например, в процессе нормального постнатального онтогенеза сердца крыс скопления клеток Аничкова можно обнаружить на 3-й сутки жизни в компактном миокарде обоих желудочков, на 5—8-е сутки в трабекулярном миокарде, на 21—28-е сутки в субэпикардиальной зоне левого желудочка, т. е. в тех зонах сердца, где, по ранее полученным нами

данным (Большакова Г.Б., 1980), происходит снижение митотического индекса кардиомиоцитов.

Опыты со включением 3Н-тимидиновой метки в миокарде интакгных 7-8-суточных крысят показали, что полученная нами кривая меченых митозов с максимумом приблизительно на 10-й час после введения 3Н-тимидина в основном совпала с приведенными в работе (Kunz J., 1979) кривыми, сходными для мышечных и соединительнотканных клеток, что дало нам возможность не учитывать тканевую принадлежность клеток Аничкова. Количество меченых клеток Аничкова нарастает медленно и достигает максимума через 30 ч после введения меченого тимидина, следовательно, во время включения изотопа будущие клетки Аничкова внешне не отличаются от прочих клеток сердца (Рис. 6).

Рис. 6. Кривые меченых митозов (черные кружки) и меченых клеток Аничкова (белые кружки). По оси абсцисс - время после введения тимидина (в ч), по оси ординат - количество меченых клеток (в %).

Интенсивность мечения клеток Аничкова (количество зерен серебра над ядром 4,0±0,1) сходно с таковой у клеток, впервые после введения тимидина прошедших митоз, т. е. анафаз и телофаз через 9 ч после инъекции изотопа. Более точным доказательством того, что предшественники клеток

140 290 440 590

ИШНЩдЛд

2с

III

Рис. 7. Доказательство постмитотической природы клеток Аничкова, а - количество зерен серебра над профазами и метафазами (I), анафазами и телофазами (II) -(9 ч после введения тимидина, клетками Аничкова (III); по оси абсцисс - количество зерен, по оси ординат - число ядер, б - содержание ДНК в клетках Аничкова; по оси абсцисс - оптическая плотность (в усл. ед.), по оси ординат - количество ядер.

Аничкова после удвоения количества ДНК проходят митоз, являются результаты цитофотометрического исследования, свидетельствующие о том, что большинство клеток Аничкова диплоидны (Рис. 7).

Характерное расположение хроматина в виде зубчатой полосы, очевидно, появляется примерно через 20 ч после завершения митоза будущей клеткой Аничкова (разница во времени между пиками меченых митозов и меченых клеток Аничкова). Предстоит выяснить причины этого явления и дальнейшую судьбу клеток, хотя можно предположить, что появление клеток Аничкова связано не с началом пролиферации, а скорее с выходом из нее.

Оценка степени зрелости рубца путем измерения упорядоченности расположения коллагеновых волокон

О зрелости рубцовой ткани можно судить по упорядоченности волокон коллагена, так как она может в значительной степени обусловливать механические свойства рубца (Whittaker Р., 1989; Soo С. et al., 2003). Возрастные особенности образования рубца очень мало изучены, хотя для понимания функционирования сердца и разработки методов коррекции необходимо количественное исследование архитектоники коллагена в возрастном аспекте (Joyce Е.М. et al., 2009).

плоды

взрослые

7 14 30

Рис. 8. Круговая гистограмма направлений волокон коллагена в рубце миокарда, травмированного у плодов крыс и взрослых животных.

Уже на седьмые сутки после травмирования миокарда взрослых крыс волокна коллагена располагаются вдоль раневого канала. Хотя на протяжении всего срока наблюдения круговые средние направления достоверно не различаются, по уменьшению дисперсии и увеличению

среднего вектора можно судить о возрастающей упорядоченности расположения волокон коллагена в рубце (Рис. 8).

На седьмые сутки после травмирования миокарда плодов крыс немногочисленные волокна коллагена хаотично располагаются в раневом канале. Как и в случае травмы сердца взрослых крыс, на протяжении всего срока наблюдения круговые средние направления достоверно не различаются, но по большей дисперсии и незначительному увеличению среднего вектора можно судить о меньшей степени упорядоченности расположения волокон коллагена в рубце (Рис. 8 ).

Оценка толщины коллагеповых волокон в поврежденном миокарде

На срезах, окрашенных пикросириусом красным, исследовали в поляризованном свете цвет коллагеповых волокон, поскольку он зависит от толщины фибрилл (.Гшщиета Ь.С.и. е1 а1., 1987), а именно: более толстые фибриллы коллагена (более высокой морфологической зрелости) выявляются в спектре от оранжевого до светло- красного, а более тонкие - зеленые.

На 5-е сутки после операции у взрослых крыс доля зеленых (тонких) волокон составляет 14,50 ± 0,05% от площади рубца, что типично для ранней стадии восстановительного процесса. Затем происходит быстрое увеличение доли оранжевых и красных (более толстых) волокон, межгрупповые различия на сроках от 7 до 30 суток достоверны (р < 0,001). На 30-е сутки после травмы практически весь коллаген рубца представлен красными волокнами, составляющими 99,20 ± 0,01% от общего количества. Аналогичные данные были получены при исследовании постинфарктного рубца взрослых собак через 6 недель после лигирования венечной артерии (\Vhittalcer Р., 1989).

В отличие от взрослых животных, у плодов крыс в рубце преобладают более тонкие волокна коллагена, окрашенные в зеленый цвет.

По мере увеличения срока после операции происходит возрастание доли более толстых волокон, но более медленно, чем у взрослых животных., хотя различия на сроках от 7 до 16 суток достоверны (р < 0,001). Через 10 дней после операции она достигает 81,90 ± 0,08 % и статистически значимо не изменяется через месяц (р = 0,114), составляя 82,40 ± 0,05 % .

Таким образом, при заживлении травмы взрослого миокарда происходит быстрое нарастание массы волокон коллагена 1 типа и упорядочивание их расположения, что обеспечивает формирование прочного рубца. После травмы миокарда у плодов рубец представлен более тонкими волокнами, менее упорядоченно расположенными, что свидетельствует о меньшей зрелости и механической прочности рубцовой ткани.

Полученные данные свидетельствуют о своеобразии заживления повреждения, нанесенного фетальному сердцу. Оно характеризуется размножением кардиомиоцитов, не приводящем, однако, к заполнению области дефекта, замедлением резорбции некротических масс и отсутствием полноценного рубцевания. Скорее всего, нерезорбированные некротические массы являются стимулом к новому запуску воспалительной реакции. В таких случаях существующее равновесие между восстановительными и деструктивными процессами сдвигается к деструкции, и вышедшая из-под контроля воспалительная реакция становится самоподдерживающейся, что является причиной появления незаживающих ран (Menke N.B. et al., 2007). В процессе репарации при недостаточном развитии центральными механизмов и отсутствии некоторых звеньев регуляции происходит формирование патологической грануляционной ткани с повторными волнами склероза, некротизирования и воспаления (Шехтер А.Б. и др., 1984). Для полноценного "заживления необходимо осуществление сложных кооперативных межклеточных взаимодействий, на которые, вероятно, малодифференцированная соединительная ткань плода после нанесения обширной травмы миокарда не способна.

На основании полученных данных можно заключить, что у плодов крыс способность к восстановлению миокарда ниже, чем у взрослых животных

Выводы

1. Способность миокарда к репарации в значительной степени определяется возрастом, в котором было нанесено повреждение. У плодов способность к восстановлению миокарда ниже, чем у взрослых животных.

2. Особенностью пренатального кардиогенеза крыс является то, что вплоть до рождения немышечные клетки представлены в основном эндотелиоцитами, что документировано данными электронно-микроскопического и иммуногистохимического исследования. В постнатальном периоде в составе немышечных клеток статистически значимо возрастают доли фибробластов, макрофагов и перицитов. В течение первого месяца после рождения клеточный состав миокарда остается постоянным.

3. Разработана оригинальная воспроизводимая модель механической травмы левого желудочка сердца крыс, нанесенной в пренаталыюм онтогенезе, при которой область повреждения локализуется в верхней трети левого желудочка и занимает около 20% объема миокарда.

4. Характерными особенностями процесса репарации плодного миокарда являются длительная персистенция некротизированной ткани и расширение зоны повреждения за счет пересокращенных кардиомиоцитов перинекротической области при отсутствии полноценной воспалительной реакции. В исходе зона повреждения представлена сохранившимся раневым каналом, некротизированной и рубцовой тканью.

5. Посттравматический воспалительный инфильтрат в сердце плодов крыс представлен малочисленными и малодифференцированными макрофагами и фибробластами. Полностью отсутствует лейкоцитарная инфильтрация. Вплоть до 10 суток после операции у плодов происходит

увеличение доли фибробластов. Макрофагальная инфильтрация, усиливающаяся на 5-е сутки после операции и идущая на убыль к 10-м суткам, вновь возрастает на 30-е сутки, что расценивается как признак хронизации воспаления.

6. Прогрессирующее снижение пролиферативной способности кардиомиоцитов в процессе онтогенеза сопровождается возрастанием индекса патологических митозов (метафаз и анафаз) и увеличением процентной доли метафаз.

7. Травма миокарда, нанесенная в фетальный период, стимулирует митотическую активность только желудочковых кардиомиоцитов, отдаленных от места повреждения, и только на десятые сутки после ее нанесения. Судя по снижению индекса патологических митозов и уменьшению доли метафаз в этой группе, стимуляция является истинной.

8. Посттравматическая пролиферация кардиомиоцитов не сопровождается заполнением дефекта миокарда плодов мышечной тканью и не оказывает существенного влияния на ход репарации, которая протекает по типу субституции.

9. Конфигурацию хроматина, характерную для клеток Аничкова, через 20 часов после митоза могут приобретать ядра различных типов клеток, независимо от их тканевой принадлежности и участия в процессах репарации. Это дает основание постулировать многообразие источников происхождения клеток Аничкова.

10. Эндотелиоциты сердца плода как в процессе нормального пренатального онтогенеза, так и после травматического повреждения принимают участие в элиминации погибших клеток.

11. Рубец после фетальной травмы, в отличие от рубца взрослых животных, является неполноценным и состоит из более тонких и менее упорядоченно расположенных коллагеновых волокон, характеризующих незрелость новообразованной соединительной ткани.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Большакова Г.Б. О происхождении клеток Аничкова. //В сб.: Материалы по актуальным вопросам современной гистопатологии,-Москва,1980 . - С. 135.

2. Большакова Г.Б. Клетки Аничкова - маркеры пролиферации.//В сб.: Материалы III Всес. конф. по патологии клетки. - Москва,1982 . - С. 66.

3. Большакова Г.Б. Особенности появления клеток Аничкова в миокарде.// Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 1984 . - Т. 97 . - N°. 3 . - С. 358360.

4. Большакова Г.Б. Особенности заживления миокарда эмбрионов крыс.//В сб.: Материалы VII Всесоюзной конф. по регенерации и клеточному делению.- Москва, 1985 . - С. 17.

5. Большакова Г.Б. Количественная характеристика заживления обширного некроза в сердце эмбрионов крыс. //В сб.: Материалы по актуальным вопросам современной гистопатологии. - Москва, 1986 . - С. 48.

6. Большакова Г.Б. Особенности посттравматической репарации сердца эмбрионов крыс. // В сб.: Тезисы докладов IV зональной межвузовской конф. по регенерации органов и тканей животных и ее стимуляции. - Ереван, 1986 . -С. 90-91.

7. Большакова Г.Б. Особенности заживления миокарда новорожденных крысят. //В сб.: Материалы по актуальным вопросам современной гистопатологии,- Москва, 1987 . - С. 61.

8. Большакова Г.Б. Деструктивные и восстановительные процессы в поврежденном миокарде плодов крыс. //В сб.: Материалы по актуальным вопросам современной гистопатологии. - Москва, 1988 . - С. 81.

9. Большакова Г.Б. Ультраструктура некроза в поврежденном сердце плодов крыс. // В сб.: Ультраструктурные основы патологии органов и тканей. -Тбилиси: Мецниереба, 1989 . - С. 40-42 .

10. Большакова Г.Б. Способность к восстановлению миокарда плодов крыс. //Онтогенез, 1990 .-Т. 21, №4.- С. 409-415 .

11. Большакова Г.Б. Соединительная ткань развивающегося сердца. В сб.: Материалы по актуальным вопросам современной гистопатологии.-Москва, 1990.-С. 43.

13. Большакова Г.Б. Элиминация погибших клеток в миокарде плода крысы // Архив анат., гистол. и эмбриол,- 1991. - Т. 101, № 9-10. - С. 60-64. 14. Большакова Г.Б. Нарушения репарации миокарда у плодов крыс.// В сб.: Доклады МОИГТ, сер. Общая биология. - Москва: Наука, 1991 . - С. 95-96.

15. Большакова Г.Б. Межтканевые взаимоотношения в развитии сердца. Москва: Наука, 1991 . - 88 с.

16. Большакова Г.Б., Бычков A.B. Трехмерная компьютерная реконструкция сердца. // В сб.: Актуальные проблемы общей и частной патологии. Москва, 1999 . - С. 74-75.

17. Большакова Г.Б. Морфометрические характеристики репарации миокарда крыс В кн.: Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии. - Москва, 2004 . - С. 93-94.

18. Большакова Г.Б. Основные структурные характеристики регенерации миокарда в возрастном аспекте. // В сб.: Актуальные проблемы морфогенеза в норме и патологии. - Москва, 2006 . - С. 119.

20. Большакова Г.Б. Особенности пролиферации кардиомиоцитов в пренатальном онтогенезе в норме и после травмы.// В сб. «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии». - Москва: МДВ, 2008.- С. 15-17.

21. Большакова Г.Б. Пролиферация кардиомиоцитов у плодов крыс в норме и после повреждения сердца. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.- 2008 . -Т. 145.-Ж 4 . - С. 471-474.

22. Большакова Г.Б. Молекулярные механизмы репарации в пренатальном периоде.// Арх. патол -, 2008. - Т. № 6 . - С. 53-56.

23. Большакова Г.Б. Структурные характеристики репарации миокарда в возрастном аспекте. - Российский медико-биологический вестник имени академика И.П.Павлова.- 2009 . - Ns. 2 . - С. 27-32.

24. Большакова Г.Б. Ориентация и состав коллагеновых волокон в рубце после травмы миокарда у плодов крыс. - Российский медико-биологический вестник имени академика И.П.Павлова.- 2009 . - №. 3 . - С. 2228.

*Курсивом выделены работы, опубликованные в журналах, входящих в список ВАК РФ

Соискатель:

Г.Б.Большакова

Подписано в печать 14.09.09 Формат 60x84/16. Бумага офсетная.

_Заказ № 683 Тираж 100 экз._

Отпечатано на УМТ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН 115478, Москва, Каширское ш., 24

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Большакова, Галина Борисовна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Морфологическая характеристика реакции миокарда на повреждение.

1.2. Особенности воспаления.в фетальном периоде1.

1.3. Немышечные клетки сердца.

1.4. Пролиферация кардиомиоцитов в норме и при повреждении миокарда крыс на разных этапах онтогенеза.

1.5. Клетки Аничкова в миокарде.

1.6. Характеристика рубца в сердце молодых и зрелых крыс.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ. И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Доказательства воспроизводимости.

3.2. Сравнительные морфологические особенности области повреждения у плодов и взрослых на разных сроках после травмы.

3 .3. Динамика морфометрических характеристик миокарда в разных группах.

3.4. Статистический анализ изменений морфометрических характеристик миокарда в зависимости от срока после повреждения и выявление наиболее значимых факторов, влияющих на репарацию миокарда.

3.5. Морфологические характеристики немышечных клеток плода

3.6. Клеточный состав соединительной ткани поврежденного миокарда.

3.7. О роли эндотелиоцитов в элиминации погибших клеток.

3.8. Количественная и качественная оценка пролиферации компактного миокарда левого желудочка у крыс в раннем онтогенезе

3.9. Количественная и качественная оценка пролиферации в околотравматической зоне после повреждения сердца у 16-суточных плодов крыс.

3.10. Ядра Аничкова как маркер постмитотических клеток.

3.11. Оценка степени зрелости рубца путем измерения упорядоченности расположения коллагеновых волокон.

3.12. Оценка толщины коллагеновых волокон в поврежденном миокарде.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Репарация миокарда крыс в онтогенезе"

Актуальность проблемы

Развитие и регенерация миокарда представляют интерес для представителей различных специальностей, включая цитологов, гистологов, анатомов, физиологов, молекулярных биологов, поскольку изучение процессов пролиферации и гибели клеток сердца, дистрофических и фиброзных изменений миокарда актуально для решения проблем различных направлений медицины и биологии (Epstein J.A., Buck С.А., 2000; Rothenberg В.М., Korn A., 2005), в том числе и быстро развивающейся фетальной кардиохирургии (Гусева О.И. ,2001; Huhta J. et al., 2004; Pavlovic M. et al., 2008).

Восстановление органов в пренатальном периоде сравнительно мало изучено. Между тем изучение механизмов, обеспечивающих полноценное заживление ран, поможет воспроизвести безрубцовое заживление в клинике и приблизиться к лечению фиброзно-пролиферативных заболеваний, в том числе 5 и сердечно-сосудистых заболеваний, являющихся ведущей причиной заболеваемости и смертности (Colwell A.S. et al., 2003; Wynn T.A., 2007).

Несмотря на то, что регенерация миокарда изучается уже более ста лет, до настоящего времени нет данных, дающих полное представление о соотношении в регенерационном процессе пролиферации кардиомиоцитов и замещении очага повреждения рубцовой тканью. Динамика и исход репаративных процессов в миокарде обусловлены изменениями соотношений 5 основных компонентов очага некроза: собственно некротизированной ткани, воспалительного инфильтрата, рубцующейся ткани и новообразованных кардиомиоцитов. Мышечный и соединительнотканный компоненты миокарда в зависимости от возраста животного вносят разный вклад в его репарацию. Так, при повреждении сердца 1—30-суточных крыс было установлено, что чем старше животное, тем меньше митотическая активность кардиомиоцитов вблизи области повреждения и интенсивнее реакция соединительной ткани — инфильтрация, образование рубца. У взрослых млекопитающих повреждение заживает рубцом, новообразование мышечной ткани практически отсутствует (Большакова Г.Б., 1980). Таким образом, возможность вызвать активную пролиферацию кардиомиоцитов выше в пренатальном периоде, когда они еще не утратили способности к пролиферации, и их пролиферативный пул еще велик: в компактном миокарде желудочков 15-дневного плода крысы он составляет 70—80% (Румянцев П.П., 1982).

Сведения о репарации миокарда плодов млекопитающих немногочисленны. И. И. Малышев (1975, 1977, 1986) свидетельствовал о возможности заполнения дефекта миокарда 20—24-суточных плодов кроликов новообразованной мышечной тканью. Были описаны очаги некроза и/или рубцевания миокарда у плодов и недоношенных детей (Валькович Э.И. и др., 1986; Kamath M.V. et al., 1986). Частота возникновения подобных очагов достигает 43% среди мертворожденных недоношенных и умерших в течение первого месяца жизни детей (De Sa D.J., 1979) и 25% у недоношенных детей, страдающих от эпизодов гипоксии (Kamath M.V. et al., 1986). Эти данные вынуждают к осторожности в суждении о регенерационной способности миокарда. Сердца поздних плодов крыс в органной культуре также не были способны к полноценному заживлению (Blewett C.J. et al., 1997). В целом можно утверждать, что полные доказательные данные о регенерационной способности миокарда в эмбриональном периоде отсутствуют.

Для более обоснованных суждений о репаративной способности I миокарда и понимания динамических взаимодействий клеток сердца необходимо использование воспроизводимой экспериментальной модели с соблюдением стандартных условий повреждения и с объективной количественной оценкой изменений. Высокие технологии и последние достижения компьютерной техники дают возможность дать репрезентативную, статистически обоснованную характеристику морфологических процессов, сопровождающих повреждение и последующую регенерацию.

Цель исследования — охарактеризовать морфогенез восстановления миокарда, поврежденного в пренатальном онтогенезе, и оценить вклад в репарацию его мышечного и соединительнотканного компонентов.

Задачи:

1. Изучить репарацию миокарда крыс после повреждения, нанесенного в пренатальном онтогенезе.

2. Разработать воспроизводимую модель повреждения сердца в фетальном периоде и методические основы исследования регенерационных процессов миокарда.

6. Исследовать происхождение клеток Аничкова и их участие в репарации миокарда.

7. Оценить степень зрелости миокардиального рубца после фетальной травмы.

Научная новизна

На основе количественного морфологического исследования миокарда крыс, поврежденного в различные сроки пренатального онтогенеза, впервые показано, что у плодов способность к восстановлению миокарда ниже, чем у взрослых животных.

С помощью методов авторадиографии установлено, что конфигурацию хроматина, характерную для клеток Аничкова, через 20 часов после митоза

5. могут приобретать ядра различных типов клеток, независимо от их тканевой принадлежности и участия в процессах репарации.

Научно-практическая значимость

Основные положения, выносимые на защиту

Способность сердца плода крыс к репарации слабее, чем у взрослых 1 особей.

Для заживления повреждения, нанесенного в пренатальном периоде,

1 •!

I; характерно длительное персистирование некротических масс и расширение i области повреждения за счет перинекротических пересокращенных кардиомиоцитов. i

Немышечные клетки сердца плода крыс представлены в основном эндотелиоцитами. Воспалительный инфильтрат миокарда в пренатальном онтогенезе состоит из малодифференцированных клеток, не способных к полному удалению некротизированной ткани и развитию полноценной воспалительной реакции.

После травмы миокарда, нанесенной в пренатальном периоде, митотическая активность кардиомиоцитов левого желудочка превышает контрольные показатели только на десятые сутки после ее нанесения вдали от места повреждения. Высокая пролиферативная способность фетальных j кардиомиоцитов не способна обеспечить полноценное восстановление t I миокарда, поврежденного в пренатальном периоде.

Внедрение

Результаты исследования по репарации фетального миокарда используются при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедре клеточной биологии и гистологии биологического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова и кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии Московского государственного медикоЕ стоматологического университета.

Степень личного вклада автора в результаты исследования

Апробация работы

Результаты исследований и основные положения работы доложены и обсуждены на конференции «Актуальные вопросы современной гистопатологии» (г. Москва, 1980), на III Всесоюзной конференции по патологии клетки (г. Москва, 1982), на VII Всесоюзной конференции по регенерации и клеточному делению (г. Москва, 1985), на конференции «Актуальные вопросы современной гистопатологии» (г. Москва, 1986), на IV зональной межвузовской конференции по регенерации органов и тканей животных и ее стимуляции (Ереван, 1986), на конференции «Актуальные вопросы современной гистопатологии» (г. Москва, 1987), на конференции «Актуальные вопросы современной гистопатологии» (г. Москва, 1988), на конференции «Ультраструктурные основы патологии органов и тканей» (г. Тбилиси, 1989), на конференции «Актуальные вопросы современной гистопатологии» (г. Москва, 1990), на конференции «Актуальные проблемы общей и частной патологии» (г. Москва, 1999), на конференциях «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии» (г. Москва, 2004, 2006, 2008), на межлабораторной конференции НИИМЧ РАМН (июнь, 2009).

Публикации

Структура и объем диссертации

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Большакова, Галина Борисовна

выводы

3. Разработана оригинальная воспроизводимая модель механической травмы левого желудочка сердца крыс, нанесенной в пренатальном онтогенезе, при которой область повреждения локализуется в верхней трети левого желудочка и занимает около 20% объема миокарда.

4. Характерными особенностями процесса репарации плодного миокарда являются длительная персистенция некротизированной ткани и расширение зоны повреждения за счет пересокращенных кардиомиоцитов перинекротической области при отсутствий полноценной воспалительной реакции. В исходе зона повреждения представлена сохранившимся раневым каналом, некротизированной и рубцовой тканью.

5. Посттравматический воспалительный инфильтрат в сердце плодов" крыс представлен малочисленными и малодифференцированными макрофагами и фибробластами. Полностью отсутствует лейкоцитарная инфильтрация. Вплоть до 10 суток после операции у плодов происходит увеличение доли фибробластов. Макрофагальная инфильтрация, усиливающаяся на 5-е сутки после операции и идущая на убыль к 10-м суткам, вновь возрастает на 30-е сутки, что расценивается как признак хронизации воспаления.

11. Рубец после фетальной травмы, в отличие от рубца взрослых животных, является неполноценным и состоит из более тонких и менее упорядочение расположенных коллагеновых волокон, характеризующих незрелость новообразованной соединительной ткани.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

До настоящего времени отсутствовали достоверные количественные данные о- способности плодного- миокарда к репарации. Для изучения этой проблемы была разработана экспериментальная модель повреждения фетального и взрослого сердец крыс, для которых была доказана их воспроизводимость. Были прооперированы плоды в возрасте 16-21 суток, новорожденные животные и взрослые самцы. Представлялось важным рассмотреть заживление с различных сторон, рассмотрев, различные компоненты миокарда: поврежденные и пролиферирующие кардиомиоциты, клеточные элементы соединительной ткани, коллагеновые волокна, оценить их вклад в репарацию и сравнить ход заживления у животных различного возраста. Для количественной оценки хода заживления проводили морфометрическое исследование, в котором анализировали изменения объемной плотности некротизированной ткани, клеток, мигрирующих в область повреждения, кровеносных сосудов, коллагеновых волокон, кардиомиоцитов вокруг очага повреждения через 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10 и 30 суток после операции. В результате был сделан вывод о длительном персистировании некротических масс в сердце крыс, поврежденном в возрасте 16 суток, и о расширении области повреждения за счет перинекротических пересокращенных кардиомиоцитов. Таким образом, заживление повреждения не было полноценным, как в коже ранних плодов млекопитающих, область некроза через 30 суток после операции увеличивалась почти в пять раз. Своеобразие процессов гибели клеток при экспериментальном некрозе миокарда у плодов крыс отражает особенности их метаболизма и межклеточных взаимодействий, требующие дальнейшего углубленного изучения. Прежде всего обращает на себя внимание замедленная резорбция некротических масс, свидетельствуящая о функциональной неспособности плодных макрофагов к осуществлению фагоцитоза.

Заживление - это сложный процесс инвазии, трансформации и апоптоза клеток различных типов, который в норме жестко регулируется. В пренатальном периоде все регуляторные системы организма находятся в стадии становления, поэтому осуществление сложных межклеточных взаимодействий и запуск каскада реакций, обеспечивающих процессы воспаления и репарации, вряд ли возможно.

В течение всего - процесса воспаления происходит смена клеточных коопераций, осуществляется трансформация клеток и сосудов, направленная на образование регенеративного пролиферата и завершающаяся дифференцировкой клеток и репарацией. При этом вряд ли можно точно сказать, где кончается собственно пролиферативная фаза воспаления, а где начинается репаративная регенерация. Важно другое: циклической воспалительной реакцией «руководят» рождающиеся в альтерации медиаторные системы воспаления (плазменные и клеточные). Они определяют сопряжение альтерации, сосудистой реакции и фагоцитоза. Взаимодействие клеток ' воспалительного инфильтрата (макрофаг-лимфоцит)? включает иммунную систему защиты. Клеточные кооперации- и экстрацеллюлярный матрикс, взаимодействуя- приводят к активации фибробластов, замещению тканевых дефектов соединительной тканью. Система медиаторов «работает» на рецепторных связях. Она последовательно «втягивает» в процесс не только главнейшие плазматические системы (калликреин-кининовая, свертывающая и противосвертывающая, система комплемента) , но и все, клеточные5, системы* защиты организма5 (системам полиморфно-ядерного лейкоцита, моноцитарно-фагоцитарная, иммунная, система фибробласта и? коллагена) (Серов В.В., Пауков B.C., 1995). При недостаточном развитии этих механизмов и отсутствии некоторых звеньев регуляции- гомеостатическая защитная? реакция превращается в патологическую; происходит формирование патологической грануляционной-; ткани: с повторными1 волнами, склероза, некротизированйя и воспаления (Шехтер А.Б. и др., 1984; Шехтер А.Б., Серов В.В., 1991; ). Скорее всего, нерезорбированные некротические массы являются стимулом к новому запуску воспалительной реакции. В таких случаях существующее равновесие между восстановительными: и деструктивными процессами сдвигается; к деструкции, и вышедшая из-под контроля воспалительная реакция становится самоподдерживающейся^ что*является причиной появления незаживающих ран (Menke N.B. et al., 2007). Так как регенерация обычно не начинается до тех пор, пока некротический материал не будет фагоцитирован, (Лиознер Л.Д:, 1982;

Карлсон Б.М, 1986), отсутствие полноценного фагоцитоза может быть t фактором, вызывающим рассинхронизацию репаративных процессов.

Фетаиьные фибробласты способны к синтезу коллагена, но отсутсвие конструктивных взаимодействий с клеткамт воспалительного инфильтрата и прежде всего с макрофагами не дает им полноценно осуществить не только эту функцию, но и другие, еще менее изученные. Судя по накопившимся сведениям о других сторонах метаболической активности фибробластов, они участвуют и в регуляции работы сердца. Показано, что фибробласты сердца отвечают на механическую стимуляцию изменением ионных токов. Полагают, что они могут играть роль в качестве субстрата для механоэлектрической обратной связи в нормальных и патологических состояниях (Камкин А.Г. и др, 2003а, б).

Существует мнение, что воздействуя на некоторые. звенья патологического процесса, можно надеяться на улучшение его результатов. Так, оценивая возможности использования цитокинов для стимуляции неоангиогенеза и регенерации сердца, авторы полагают, что наиболее перспективными препаратами для стимуляции неоангиогенеза и регенерации сердца у пациентов с инфарктом миокарда являются VEGF, Г-КСФ и эритропоэтин (Маслов JI.H, Сазонова С.И, 2006).

Уровень пролиферации кардиомиоцитов в пренатальном периоде достаточно высок, однако заполнения дефекта мышечной тканью не происходит. Возможно, это также является следствием еще не установившихся 4 межклеточных взаимодействий кардиомиоцитов с макрофагами, фибробластами и эндотелиоцитами, регулирующими их деятельность во взрослом сердце.

Митотический индекс по сравнению с интактным контролем был повышен только вдали от травмы на десятые сутки после операции. С возрастом во всех группах, кроме вышеупомянутой, увеличивалась доля патологических метафаз. Klinge О. (1970) отмечал присутствие в миокарде нетипичных «сжатых» метафаз. Он установил, что число нормальных митозов кардиомиоцитов уменьшалось от 70-80% у новорожденных крыс до 20-30% у 3-4-недельных животных, причем количество аномальных телофаз превышало 90%. Незавершенный (ацитокинетический) митоз приводит к образованию полиплоидных кардиомиоцитов (Бродский В.Я., Урываева И.В., 1981). Усиление синтеза ДНК в клетках предсердия и ушка крыс после инфаркта левого желудочка и полиплоидизация ядер кардиомиоцитов на периферии экспериментального инфаркта у взрослых крыс могут рассматриваться как компенсаторная реакция в связи с увеличением функциональной нагрузки на миоциты (Автандилов Г.Г., Бабаев В.Р., 1977; Бабаев В.Р., 1977; Бабаев В.Р., Казанцева И.А., 1978; Кассем A.M., 1977; Палавинскене Н.-В.В., 1979; Арефьева и др., 1985).

Прекращение митотической активности кардиомиоцитов и начало их полиплоидизации являются генетически запрограммированными событиями и г находятся в прямой зависимости от возраста животного (Бродский В.Я.,

Урываева;И:В:, 1981;:Бродский В:Яг. и-др, 1985, 1988). Установлено, что времят перехода от пролиферации к гипертрофии у человека, в период новорожденное™ является «критическим1 окном» в? развитии сердца^ (Анатская О.В. и др., 2009); Так как- пролиферация после травмы может быть стимулирована только в тех отделах, где она происходит в норме (Большакова' Г.Б, 1980); то замедленный? фагоцитоз в сердце плода лишает кардиомиоциты возможности полностью проявить свои» пролиферативные потенции.

Дополнительную информацию о пролиферативной активности- клеток миокарда может дать изучение клеток Аничкова: Опыты со включением 3Н-тимидиновой метки в сердце: йнтактных 7-8-суточных; крысят; показали, что ядра Аничкова' появляются в клетках, за 20 ч до приобретения характерного» распределения: хроматина прошедшими митоз, т. е. представляют собой маркеры пролиферациш клетки (Большакова- Г.Б;, 1984). Судя по сильно; выраженной конденсации хроматина, можно; предположить, что этот митоз я является для клетки последним, и ядра Аничкова, таким- образом, указывают на выход из пролиферации и будущую гибель.

Количественное исследование архитектоники коллагена сердца'в норме и патологии необходимо для понимания его функционирования и разработки методов коррекции'заживления (JoyceE.M. et al, 2009).

Коллаген5 играет, жизненно важную роль в защите компонентов миокарда. Основную массу сердечного коллагена составляют два основных подтипа^ Г и III. Исследования показали, что ненормальное накопление коллагена, приводящее к нарушению качества или количества фиброзного матрикса сердца, влияет на функцию желудочка (Salih С. et al., 2004). О зрелости рубцовой ткани можно судить по упорядоченности волокон коллагена, так как она может в значительной степени обусловливать механические свойства рубца. (Whittaker Р., 1989; Holmes et al., 1997) и обеспечивать биомеханическую эффективность органа в целом.

При любом данном давлении заполнения растяжимость камеры сердца зависит от эластичности миокарда в пассивном состоянии. В свою очередь, в соответствии с законом Франка-Старлинга от степени.- растяжения мышцы зависит начальная длина саркомеров, а следовательно, и характеристика выброса сердца. Известно также, что коронарная перфузия осуществляется в основном в диастолу. Поэтому изменение диастолической жесткости миокарда в патологии может существенно сказываться на насосных характеристиках сердца и его коронарном кровотоке.

При инфаркте и экспериментальных повреждениях миокарда наблюдается лизис соединительной ткани. Параллельно исчезновению коллагена идет падение диастолической жесткости, что приводит к разрывам в участках повреждения. Прямая связь между содержанием коллагена и диастолической жесткостью часто отсутствует. Это в первую очередь относится к патологическим состояниям. Ясно, что необходимо иметь в виду не только количество, но и типы коллагенов, размер волокон и их пространственную ориентацию (Изаков В.Я. и др., 2000).

В данном исследовании изучали влияние возраста на состояние соединительной ткани и изменение композиции изоформ коллагена, составляющих рубцовую ткань миокарда.

При заживлении травмы взрослого миокарда происходит быстрое нарастание массы волокон коллагена I типа и упорядочивание их расположения, что обеспечивает формирование прочного рубца. После травмы миокарда у плодов рубец представлен более тонкими волокнами, менее упорядоченно расположенными, что свидетельствует о меньшей зрелости и меньшей механической прочности рубцовой ткани и, следовательно, о неполноценной репарации.

На основании полученных данных можно заключить, что у плодов крыс способность к восстановлению миокарда ниже, чем у взрослых животных.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Большакова, Галина Борисовна, Москва

1. Абаев Ю. К. Воспалительные заболевания новорожденных. Ростов н/Д: Феникс, 2006. 256 с.

2. Автандилов Г. Г., Яблучанский Н. И., Губенко В. Г. Системная стереометрия в изучении патологического процесса. М.: Медицина, 1981. 190 с.

3. Автандилов Г. Г. Медицинская морфометрия. Руководство. — М.: Медицина, 1990.—384 с.

4. Автандилов Г.Г., Бабаев В.Р. Динамика содежания ДНК в ядрах мышечных клеток сердца крысы при экспериментальном инфаркте миокарда/// Бюл. экспер.биол.мед. 1977. - №3. - С. 366-368.

5. Алов И.А. Цитофизиология и патология митоза. М.: Медицина, 1972. 264 с.

6. Алов И.А., Абрамсон Е.Н. Митотическая активность при мышечной работе

7. Арефьева A.M., Большакова Г. Б., Бродский В.Я. Изменение классов плоидности миоцитов левого предсердия после перевязки у крыс левой коронарной артерии // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1985. - Т. 100, №11 -С.608-611.

8. Ахабадзе JI.B. Исследование репаративных возможностей сердечной мышцы у молодых млекопитающих // Докл. АН СССР. 1966. - Т. 170, № 2. -С. 478-481.

9. Ахабадзе JI.B., Ныммик В.В. Об утрате регенерационной способности миокарда в постнатальный период у млекопитающих // Докл. АН СССР. -1967. Т.177, № 6. - С. 1485-1488.

10. Ахабадзе JI.B., Оленина Н.Г. Синтез ДНК в миокарде новорожденных крысят в период постнатального гистогенеза и после травмы // Кровообращение 1972. - Т.5, №3. - С.50-55.

11. Ахабадзе JI.B. Радиоавтографический и цитохимический анализы' роста миоцитов и регенерации миокарда крысы // Онтогенез. 1974. - Т. 5, №2. -С.163-171.

12. Бабаев В.Р. Авторадиографическое изучение синтеза ДНК при экспериментальном инфаркте миокарда у крыс // Бюл. экспер. биол. мед. -1977. Т.83, №5. - С. 612-615.

13. Бабаев В.Р., Казанцева И.А. Активация синтеза ДНК в'клетках предсердия и ушка крыс при инфаркте левого желудочка // Бюл. экспер.биол.мед. 1978. -№4.-С. 481-484.

14. Бадин М.И. Эпителиальные клетки типа «миоцитов» Аничкова в щитовидной железе // Арх. анат., гистол. эмбриол. 1967. - Т.53, № 12. - С. 102-103.

15. Большакова Г.Б. Митотическая активность различных зонтравмированного миокарда в раннем постнатальном онтогенезе. В сб.1

16. Материалы по актуальным вопросам современной гистопатологии. М., 1978.с.44-46.

17. Болыпакова Г.Б. Особенности появления клеток Аничкова в миокарде // Бюл. эксперим. биол. и мед. — 1984. — № 3. — С. 358 360.

18. Бродский В. Я., Делоне Г. В., Цирекидзе Н. Н. (Brodsky V. Y., Delone G. V., Tsirekidze N. N.). Genome multiplication in cardiomyocytes of fast- and slow-growing mice//Cell Different. — 1985.— V. 17, N3.— P. 175-181.

19. Бродский В. Я., Карлсон Б. М., Арефьева А. М., Васильева И. A. (Brodsky V. Y., Carlson В. М., Arefieva А. М., Vacilieva I. A.). Polyploidization oftransplanted cardiac myocytes 11 Cell Different, and Develop. — 1988. — V. 25. — P. 177—184.

20. Бродский В .Я, Урываева И.В. Клеточная полиплоидия. Пролиферация и дифференцировка. М.: Наука. 1981. - 259 с.

21. Валькович Э. И, Молчанова В. В, Давыдова М. К. и др. Изменения миокарда у плодов и новорожденных детей в условиях гипоксии // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. — 1986. — Т. 90, № 3. — С. 35— 39.

22. Вихерт A.M., Цыпленкова В.Г. и Велишева Л.С. Тонкая структура миокарда человека при внезапной сердечной смерти. В кн.: Внезапная смерть. Вильнюс. — Мокслас, 1984. — С. 86—95.

23. Галанкин В.Н. Некоторые вопросы регенерации и гипертрофии миокарда. Дисс. докт. М, 1974.

24. Галанкин В.Н, Втюрин Б.В. О путях структурной компенсации в поврежденном миокарде новорожденных крысят // Бюл. эксперим. биол. мед.- 1974.-Т.77, №5.-С. 110-113.

25. ЗО'.Галанкин В.Н. К вопросу о митотическом делении мышечных клеток сердца // Арх.пат. 1975. - Т.37, №2. - С. 37-44.

26. Гасанов А. Г. Внеклеточный матрикс миокарда при патологии сердца у детей // Российский педиатрический журнал. — 2008. — N 6. — С. 37-40.

27. Гасанов А.Г., Бершова Т.В. Роль изменений матриксных металлопротеиназ в сердечно-сосудистых заболеваниях. // Биомед. хим. — 2009. Т.55, Т2. - С. 155-168.

28. Епифанова О.И, Терских B.B., Захаров А.Ф. Радиоавтография. М.: 1977. 246 с.

29. Ерохина И.Л. (а) Пролиферация и синтез ДНК на ранних стадиях развития миокарда. Цитология, 1968. — Т. 10, №2, — С. 162-172.

30. Ерохина И.Л.(б) Динамика пролиферации клеточных элементов дифференцирующегося миокарда мыши // Цитология. — 1968. — Т. 10, №11.— С.1391— 1409.

31. Жамгарян А.Г., Миракян В.О. Влияние высотной гипоксии на пролиферативную активность клеточных элементов правого желудочка сердца крысят // Кровообращение. 1977. - Т. 10, №6. - С.3-8.

32. Изаков В.Я., Мархасин B.C., Ясников Г.П. и др. Введение в биомеханику пассивного миокарда/ М.: Наука. 2000. - 208 с.

33. Казанцева И.А. Патология митоза в опухолях человека. — Новосибирск: Наука, 1981. — 144 с.

34. Кактурский JI.B. Внезапная сердечная смерть (клиническая морфология). — М.: Медицина для всех, 2000. 127 с.

35. Калинина В. Н., Соловьев В. И. Введение в многомерный статистический анализ: Учебное пособие / ГУУ. М., 2003. - 66 с.

36. Карлсон Б.М. Регенерация. М.: Наука. 1986. - 296 с.

37. Камкин А., Киселева И., Изенберг Г. и др. Сердечные фибробласты и механизм механоэлектрической обратной связи в здоровом и больном сердце // Прог. биофиз. мол. биол. 2003а. - Т.82, Т 1-3. - С. 111-120.

38. Камкин А.Г., Ярыгин В.Н., Киселева И.С. Механоэлектрическая обратная связь в сердце / М.: Натюрморт. 20036. - 352 с.

39. Карр Я. Макрофаги. Обзор ультраструктуры и функции. М.: Медицина. -1978.- 189 с.

40. Кассем A.M. Некоторые вопосы дистантной реактивации размножения клеток в миокарде крыс. Канд. дис. - JI. - 1977. - 189 с.

41. Кауфман О.Я. Гладкая мышечная ткань // Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций. М.: Медицина, 1987. — С. 131— 153

42. Кияк Ю.Г. Морфофункциональная классификация кровеносных капилляров миокарда при инфаркте. // Ультраструктурные основы патологии сердца и сосудов. Тбилиси, Мецниереба, 1985. — С. 119—120.

43. Коган М.Е., Белов JI.H., Леонтьева Т.А. Определение количества клеток в различных органах и тканях после щелочной диссоциации. // Арх. патол., 1976. — Т.38, №1, с. 77— 80.

44. Козлов В.А., Твердохлеб И.В., Шпонька И.С., Мишалов В.Д. Морфология развивающегося сердца (структура, ультраструктура, метаболизм) / Днепропетровск, 1995.- 220 с.

45. Лиознер Л. Д. Регенерация и развитие. М.: Наука, 1982.- 166 с.

46. Луговская С.А. Структура и функции моноцитов и макрофагов // Клиническая лабораторная диагностика. 1997. - Т9. - С.10-16.

47. Макогон А.В., Вараксин Н.А., Рябичева Т.Г. и др. Диагностика синдрома воспалительного ответа у плода // Цитокины и воспаление. 2007. - № 4. -С. 9-15

48. Малышев И.И. Восстановительные процессы в миокарде плодов кролика после механической травмы // Бюл. экспер. биол. мед. 1975. — Т.80, №11. - С. 111-113.

49. Малышев И.И. О регенерации миокарда плодов и новорожденных кроликов. //Арх. пат. 1977а. — Т.39, №1— С.53— 58.

50. Малышев И.И. Ультраструктура миокарда плодов кроликов после его механической травмы // Арх. пат. 19776. — Т.39, №12— С.40— 45.

51. Малышев И.И. Митотическая активность миокарда в раннем онтогенезе у кроликов после небольшой механической травмы // Бюл. экспер. биол. мед. 1984. - Т.97, №6. - С.734-736.

52. Малышев И. И. Способность миокарда и нервной ткани головного мозга кtрегенерации после механической травмы в различные периоды раннего онтогенеза у кроликов: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М:: НИИ морфологии человека АМН СССР. 1986. — 24 с.

53. Мардиа К. Статистический анализ угловых наблюдений. М.: Наука. — 1978. — 240с.

54. Маслов Л.Н., Рябов В.В., Сазонова С.И. Регенерация миокарда // Успехи физиологических наук. 2004. - Т.35, ТЗ. - С.50-60.

55. Маслов Л.Н., Сазонова С.И. Использование цитокинов для стимуляции неоангиогенеза и регенерации сердца // Эксп. клин, фармакол. 2006. - Т.69, № 5. — С.70-76.

56. Мельникова Н.П, Тимошин С.С, Цыганков В.И. и др. Влияние введения динорфина крысам в период новорожденности наморфогенез сердца // Бюлл. эксп. биол. и мед.- 2000, № 6.- С.623-625.

57. Мельникова Н.П, Тимошин С.С. Влияние эндотелина-1 и предсердного натрийуретического пептида-П на морфогенез сердца белых крыс // Бюлл. эксп. биол. и мед.- 2002, № 7.- С. 101-103.

58. Мельникова Н.П, Тимошин С.С, Животова Е.Ю. Изменение процессов синтеза ДНК и морфометрических параметров миокарда белых крыс при • введении ангиотензина-И//Бюлл. эксп. биол. и мед.- 2003, № 3.- С. 287-290

59. Мельникова Н.П, Тимошин С.С, Пеллиниеми Л.И и др. Процессы апоптоза, пролиферации и синтеза белка в кардиомиоцитах новорожденных белых крыс при введении эндотелина-1 // Бюлл. эксп. биол. и мед.- 2004, № 6.- С. 687-689.

60. Мельникова Н. П. Участие регуляторных пептидов в морфогенезе миокарда белых крыс // Автореферат дисс. докт. мед. наук. Владивосток, 2005. - 40 с.

61. Миронов В.А, Сенатова Д.С. Реактивность сосудистого эндотелия // Сосудистый эндотелий. Киев: Здоров'я, 1986. — С. 183—200.

62. Митин К.С. Электронно-микроскопический анализ изменений сердца при инфаркте. М.: Медицина. 1974. — 203с.

63. Непомнящих Л.М., Лушникова Е.Л. и Колесникова Л.В. Морфометрический и стереологический анализ миокарда (Тканевая и ультраструктурная организация). Новосибирск, Изд-во АМН СССР, 1984. -167 с.

64. Непомнящих Л.М. Морфогенез и ультраструктурные основы общепатологических процессов в сердце. Комплексное1 патологоанатомическое и экспериментальное исследование. Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М.: НИИ морфологии человека АМН СССР. 1986. — 40 с.

65. Л.М. Непомнящих, Е.Л. Лушникова, Д.Е.Семенов. Паренхиматозно-стромальные отношения в миокарде: регенераторно-пластическая недостаточность кардиомиоцитов и развитие диффузного кардиосклероза // Бюлл. экспер. биол. мед. 2001. - Т. 132, Т7, С. 103-109.

66. Непомнящих Л.М., Лушникова Е.Л., Семенов Д.Е. и др. Паренхиматозно-стромальные отношения в миокарде: альтеративная недостаточность кардиомиоцитов и морфогенез очагового кардиосклероза // Бюл. экспер.биол. 2002. - Т. 134, № 8. - С. 219-226.

67. Палавинскене Н.-В.В. Морфофункциональные и восстановительные особенности миокарда кроликов в возрастном аспекте/ Автореф. дис. канд. биол. наук. М.: 1979. 24 с.

68. Поливода С.Н., Черепок А.А. Ремоделирование желудочков сердца и крупных сосудов у пациентов с гипертонической болезнью //Ukrainian Journal of Cardiology. — '2002. Vol. 2. - P. 14—17.

69. Румянцев П.П. К вопросу о природе «миоцитов» // Арх. анат., гистол. эмбриол. 1957. - Т.34, № 1. - С. 50-55.

70. Румянцев П.П., Соколовская И.Л. Синтез ДНК и кинетика пролиферации ядер в ходе дифференцировки мышцы сердца. // В кн.: Исследование клеточных циклов и метаболизма нуклеиновых кислот при дифференцировке клеток. Л.: 1964. — С. 71—82.

71. Румянцев П.П. (Rumyantsev Р.Р:) DNA synthesis and nuclear division in the embryonal histogenesis of myocardium (• autoradiographic study) // Fed. Proc. Transl. 1965. - Vol.24, suppl. - P. 899-902.

72. Румянцев П.П. (Rumyantsev P.P.) Interrelations of the proliferation and differentiation processes during cardiact myogenesis and regeneration. // Int. Rev. Cytol.-1977.-Vol.51.-P. 186-273.

73. Румянцев П.П. Синтез ДНК и митотическое деление миоцитов желудочков, предсердий и проводящей системы сердца при развитии миокарда млекопитающих // Цитология. 1978. - Т.20, №2. - С.132-141ю

74. Румянцев П.П, Борисов A. (Rumyantsev PP, Borisov A.) DNA synthesis in myocytes from different myocardial compartments of young rats in norm, after experimental infarction and in vitro // Biomed Biochim Acta. 1987. - Vol.46. -P.S610-S615.

75. Румянцев П. П. Кардиомиоциты в процессах репродукции, дифференцировки и регенерации. Л.: Наука, 1982. 288 с.

76. Семенова JI. А, Целлариус Ю. Г. Ультраструктура мышечных клеток сердца при очаговых метаболических повреждениях. - Новосибирск: Наука, Сиб. отд-ние, 1978.- 143 с.

77. Серов В. В, Шехтер А. Б. Соединительная ткань. М.: Медицина, 1981. — 312 с.

78. Серов В.В, Пауков В.С.(ред.) Воспаление: Руководство для врачей / М.: Медицина, 1995. 640 с.

79. Сидорова В.Ф., Большакова Г.Б. Пролиферация миоцитов левого предсердия и желудочка после различного рода повреждений миокарда у взрослых крыс // Бюлл. эксперим. биол. и мед. — 1976. Т.82, №8. - С.998-1002.

80. Сидорова В.Ф., Большакова Г.Б. Рост и восстановление миокарда крыс в постнатальном онтогенезе // В сб. Материалы по актуальным вопросам современной гистопатологии. М. — 1977. — С.95— 97.

81. Сидорова В.Ф., Большакова Г.Б. Митотическая активность кардиомиоцитов при росте миокарда и его повреждении в однодневном возрасте у крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. — 1980. Т.89, №4. — С. 475—477.

82. Урбах В. Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1975. - 295 с.

83. Форбс М.С., Сперелакис Н. Ультраструктура миокарда млекопитающих // Физиология и патофизиология сердца: Пер. с англ. М.: Медицина, 1988. — Т.2 — С. 15-66.

84. Фрейдлин И.С. Система мононуклеарных фагоцитов. М.: Медицина, 1984. — 272 с.

85. Хехт А. Введение в экспериментальные основы современной патологии сердечной мышцы. М.'.Медицина. 1975. — 504с.

86. Целлариус Ю.Г., Семенова JI.A., Непомнящих JI.M. и др. Некоторые фундаментальные проблемы гистопатологии миокарда // Бюллетень СО АМН СССР, 1982. — N3. — С. 3 14.

87. Швецова Е.В., Роговая О.С., Ткаченко С.Б. и др. Контрактильная способность фибробластов различного происхождения в модели живого эквивалента дермы // Известия Российской академии наук. Сер.биологическая. 2008. - N2. - С. 169-172.

88. Шевченко Н.А. Реактивные изменения эндотелия яремных вен // ДАН СССР.-1952.— Т. 83, Вып. 3. — С. 473—476.

89. Шехтер А.Б., Берченко Г.Н., Николаев А.В. Макрофагально-фибробластическое взаимодействие и его возможная роль в регуляции метаболизма коллагена при заживлении ран // Бюл. экспер.биол.мед. 1977. -№3. - С. 627-629.

90. Шехтер А.Б., Берченко Г.Н., Николаев А. В. Грануляционная ткань: воспаление и регенерация //Архив патологии. 1984. — Т. 46, Вып. 2. — С. 20—28.

91. Шехтер А.Б., Серов В.В. Воспаление, адаптивная регенерация и дисрегенерация (анализ межклеточных взаимодействий) // Арх. патологии. -1991.-Т. 53-№7. -С. 7-14.

92. Шпонька И.С. Морфологический и информационный анализ развития межтканевых отношений в миокарде на этапах раннего онтогенеза // Прикладная анатомия сердца / Под ред. В.А.Козлова. Днепропетровск, 1996а,- 173 с.

93. Шпонька И.С. Гистогенетические процессы в развивающемся миокарде млекопитающих/ Днепропетровск: «Пороги», 19966. - 228с.

94. Юнкеров В.И., Григорьев С.Г. Математико-статистическая обработка данных медицинский исследований. Санкт-Петербург: 2002. — 267с.

95. Ahuja P., Sdek P., MacLellan W.R. Cardiac myocyte cell cycle control in development, disease, and regeneration // Physiol. Rev.— 2007. Vol.87— P.521-544.

96. Aller M.A., Arias J.L., Nava M.P., Arias J. Posttraumatic inflammation is a complex response based on the pathological expression of the nervous, immune, and endocrine functional systems // Exper. Biol. Med. — 2004. Vol.229. -P.170-181.

97. Alvarez O.M. Pharmacological and environmental modulation of wound healing // Connective tissue disease: molecular pathology of the extracellular matrix. — 1987. — P. 367-384.

98. Anitschkow N. Uber die Rtickbildungsvorgange bei der experimentellen Atherosklerose // Verh. Dtsch. Ges. Pathol // 1928. Vol.43. - P.473-478.

99. Baroldi G. Different types of myocardial necrosis in coronary heart disease: a pathophysiologic review of their functional significance // Am. Heart J. 1975 . -Vol.89, N 6. - P.742-752.

100. Baroldi G., Mittleman R.E., Parolini M. et al. Myocardial contraction bands. Definition, quantification and significance in forensic pathology // Int. J. Legal Med. 2001. - Vol.115, N3. -P.142-151.

101. Baroldi G., Silver M.D., Parolini M., et al. Myofiberbreak-up: a marker of ventricular fibrillation in sudden cardiac death // Int. J. Cardiol. 2005. -Vol.100, N3.-P.435-441.

102. Baudino T.A., Carver W., Giles W., Borg Т.К. Cardiac fibroblasts: friend or foe? // Am. J. Physio.l Heart Circ. Physiol. 2006. — Vol.291, N3. - P.H1015-1026.

103. Bauer J. et al. Phagocytic activity of macrophages and microglial cells during the course of acute and chronic relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis // J.Neurosci. Res. 1994. - Vol.38. - P.365-375.

104. Beanes S.R., Hu F.Y., Soo C., Dang C.M. et al. Confocal microscopic analysis of scarless repair in the fetal rat: defining the transition //Plast. Reconstr. Surg. -2002. Vol.109, N 1. -P. 60-70.

105. Beltrami A.P., Barlucchi L., Torella D. et al. Adult cardiac stem cells are multipotent and support myocardial regeneration // Cell. 2003. - Vol. 114. - P. 763-776.

106. Beltrami A.P., Urbanek K., Kajstura J., et al. Evidence that human cardiac myocytes divide after myocardial infarction // N. Engl. J. Med. — 2001. -Vol.344.-P. 1750-1757.

107. Berry C.L. Myocardial infarction in neonate // Brit. Heart. J. 1970. — Vol.32 — P.412-415.

108. Birk D.E, Trelstad R.L. Metazoan mesenchyme partitions extracellular space during matrix morphogenesis 11 Biology of invertebrate and lower vertebrate collagens/Ed. A.Bairati, R.Garrone. — 1985. — P.l03-114.

109. Blewett С J., Cilley R.E, Ehrlich H.P. et al. Regenerative healing of incisional wounds in murine fetal lungs'maintained in organ culture // J. Pediatr. Surg. — 1995. Vol. 30, N 7. - P. 945-948.

110. Blewett C.J, Cilley R.E, Ehrlich H.P. et al. Regenerative healing of incisional wounds in midgestational murine hearts in organ culture // J. Thorac. Cardiovasc. Surg.- 1997.- Vol. 113,N5.-P. 880-885.

111. Bolick D.R, Hackel D.B, Reimer K.A. Quantitative analysis of myocardial infarct structure in patients with ventricular tachycardia // Circulation. 1986. -Vol.74, 6.-P. 1266-1279.

112. Bronstein P, Sage H. Structurally distinct collagen types // Ann. Rev. Biochem. — 1980. Vol.49. - P.957-1003.

113. Brower G.L, Gardner J.D, Forman M.F. et al. The relationship between myocardial extracellular matrix remodeling and ventricular function // Eur. J.Cardiothorac. Surg. — 2006. Vol.30. - P.604- 610.

114. Bujak M, Dobaczewski M, Chatila K. et al. Interleukin-1 receptor type I signaling critically regulates infarct healing and cardiac remodeling // Am. J. Pathol.- 2008. Vol.173, P.57-67.

115. Burlew, B.S., Weber, K.T. Connective Tissue And The Heart. Cardiology Clinics: W.B. Saunders Company, Philadelphia. 2000. - Vol. 18, N3.-P. 435-442.

116. Carter R., Sykes V., banning D. Scarless fetal mouse wound healing may initiate apoptosis through caspase 7 and cleavage of PARP // Surg. Res. 2009. -Vol.156, N1. — P.74-79.

117. Cass D.L., Bullard K.M., Sylvester K.G. et al. Wound size and gestational age modulate scar formation in fetal wound repair // J. Pediatr. Surg. 1997. - Vol. 32,N3.-P. 411-415.

118. Chen J., Song S.-K., Wei L.,et al. Remodeling of cardiac fiber structure after infarction in rats quantified with diffusion tensor MRI // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. — 2003. Vol.285. - P.H946-H954.

119. Chen W., Fu X., Ge S., Sun T. et al. Ontogeny of expression of transforming growth factor-beta and its receptors and their possible relationship with scarlesshealing in human fetal skin // Wound Repair Regen. — 2005. — Vol. 13, N 1. i1. P. 68-75.

120. Cleuljens J. P., Verluyten M. J., Smiths J. F., Daemen M. J. Collagen remodeling after myocardial infarction in the rat heart I I Am. J. Pathol. 1995. — Vol.47, N2.-P. 325-338.

121. Clubb F.J., Bishop S.P. Formation of binucleated myocardial cells in the neonatal rat: an index for growth hypertrophy // Lab. Invest. 1984. - Vol.50. -P.571-577.

122. Colwell A.S., Longaker M.T., Lorenz H.P Fetal wound healing // Front Biosci. — 2003. Vol. 1, N 8. - P. 1240 - 1248.

123. Colwell A.S., Longaker M.T., Lorenz H.P. Mammalian fetal organ regeneration// Adv. Biochem. Eng. Biotechnol — 2005.— N93.— P. 83-100

124. Cowin A.J., Brosnan M.P., Holmes T.M., Ferguson M.W. Endogenous inflammatory response to dermal wound healing in the fetal and adult mouse // Dev. Dyn. 1998. - Vol. 212, N 3. - P. 385-393.

125. Cuttle L., Nataatmadja M., Fraser J.F. et al. Collagen in the scarless fetal skin wound: detection with picrosirius-polarization // Wound Repair Regen. 2005. — Vol. 13, N2.-P. 198-204.

126. Dang C.M., Beanes S.R., Lee H. et al. Scarless fetal wounds are associated with an increased matrix metalloproteinase-to-tissue-derived inhibitor of metalloproteinase ratio // Plast. Reconstr. Surg. 2003. - Vol. Ill, N 7. - P. 2273-2285.

127. De Bakker J.M., van Capelle F.J., Janse M.J., et al. Reentry as a cause of ventricular tachycardia in patients with chronic ischemic, heart disease:electrophysiologic and anatomic correlation // Circulation. 1988 . -Vol.77, N3. -P.589-606.

128. De Sa D.J. Coronary arterial lesions and myocardial necrosis in stillbirths and infants// Arch. Dis. Child. 1979. - V. 54. - P. 918—930.141. de Souza R.R. Aging of myocardial collagen // Biogerontology. 2002. -Vol.3, N6. - P.325-335.

129. Debessa C., Maifrino L., de Souza R. Age related changes of the collagen network of the human heart // Mechanisms of Aging and Development. 2001. -Vol.45.-P.203-212.

130. Deten A., Holzl A., Leicht M. et al. Changes in extracellular matrix and in transforming growth factor beta isoforms after coronary artery ligation in rats // J. Mol. Cell Cardiol. 2001. - Vol.33. - P.l 191-1207.

131. Deguchi J.-O., Aikawa E., Libby P. et al. Matrix Metalloproteinase-13/Collagenase-3 Deletion Promotes Collagen Accumulation and Organization in Mouse Atherosclerotic Plaques //Circulation. 2005. - Vol.112. - P.2708-2715.

132. Diglio C.A., Grammas P., Giacomelli F., Wiener J. Rat heart-derived endothelial and smooth muscle cells cultures: isolation, cloning and chracterisation // Tissue and Cell. 1988. Vol.20, N 4 - P. 477-492.

133. Dixon J.B. Inflammation in the foetal and neonatal rat: the local reactions to skin burns // J. Pathol .Bacterid. -1960. — Vol.80. P.73-82.

134. Dobaczewski M, Bujak M, Zymek P. et al. Extracellular matrix remodeling in canine and mouse myocardial infarcts// Cell Tissue Res.- 2006. -Vol.324. P.475-488.

135. Donnelly W.H, Bucciarelli R.L. W.H, Nelson RM. Ischemic papillary muscle necrosis in stressed newborn infants /Я Pediatr. 1980. - Vol.96, N2. - P.295-300.

136. Drew A.F, Liu H, Davidson J.M, Cynthia C. Daugherty C.C. et al. Wound-healing defects in mice lacking fibrinogen // Blood. 2001. - Vol. 97. — No. 12, P. 3691-3698.

137. Dunlay S.M., Weston S.A, Redfield M.M. et al. Tumor necrosis factor-alpha and mortality in heart failure: a community study // Circulation.- 2008. Vol.l 18. - P.625-631.

138. Dusek J, Rona G, Kalin D.S. Healing of experimental myocardial injury in newborn rats // Arch. Pathol. 1971. — Vol.91. — P.426-433.

139. Edwards G.M, Said J.W, Block M.L. et al. Myocytolysis (vacuolar degeneration) of myocardium: immunohistochemical evidence of viability // Hum. Pathol. 1984. - Vol.15, N8. - P. 753-756.

140. Eghbali M, Blumenfeld O.O, Seifter S, et al. Localization of types I, III and IV collagen mRNAs in rat heart cells by in situ hybridization // J. Mol. Cell. Cardiol. 1989. - Vol.21, N1. - P.103-113.

141. Eghbali M., Czaja M.J. Leydel M. et al. Collagen chain mRNAs in isolated heart cells from young and adult rats // I. bid. 1988. Vol. 20, N 3. -P. 267-276.

142. Eppenberger H.M., Perriard J.-C., Rosenberg U.B., Strehler E.E. The Mr . 165,000 M-protein myomesin: a specific protein of cross-striated muscle cells // J.

143. Cell Biol. 1981. - Vol. 89, N 2. - P. 185-193.

144. Epstein J.A., Buck C.A. Transcriptional regulation of cardiac development: implications for congenital heart disease and DiGeorge syndrome // Pediatr Res. -2000. Vol. 48. - No. 6 — P. 717-24.

145. Ertl G., Frantz S. Healing after myocardial infarction // Cardiovasc. Res. -2005: Vol.66, N1. - P.22-32.

146. Factor S.M., Sonnenblick E.H. The pathogenesis of clinical and experimental congestive cardiomyopathies: recent concepts// Prog. Cardiovasc Dis. 1985. — Vol. 27, N 6. - P.395-420.

147. Favara B.E., Moores H. Anitschkow nuclear structure: a study of pediatric hearts//Pediatr Pathol. 1987.-Vol.7, N2.-P.l 51-164.

148. Ferguson M.W., O'Kane S. Scar-free healing: from embryonic mechanisms to adult therapeutic intervention // Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. — 2004. — Vol. 359.-P. 839-850.

149. Filip D.A., Radu A., Simionescu M. Interstitial cells of the heart valves possess characteristics similar to smooth muscle cells // Circ. Res. 1986. - Vol. 59, N 1. — P. 50-70.

150. Fishbein M.C., Maclean D., Maroko P.R. The histopathologic evolution of myocardial infarction // Chest. 1978. - Vol.73. - N6. - P.843-849.

151. Fraccarollo D., Galuppo P., Schraut S., Kneitz S., van Rooijen N., Ertl G. et al. Immediate mineralocorticoid receptor blockade improves myocardial infarct healing by modulation of the inflammatory response//Hypertension. — 2008. -Vol.51. -P.905-914.

152. Frangogiannis N.G. The mechanistic basis of infarct healing// Antioxid. Redox Signal. 2006. - Vol.8. - P.1907-1939.

153. Frangogiannis N.G.The immune system and cardiac repair // Pharmacol Res. -2008.-Vol.58, N2.-P.88-111.

154. Frantz S., Bauersachs J., Kelly R.A. Innate immunity and the heart.// Curr. Pharm. Des.- 2005. Vol.11, P. 1279-1290.

155. Frantz S., Ertl G., Bauersachs J. Toll-like receptor signaling in the ischemic heart // Front. Biosci. 2008. - Vol.13. - P.5772-5779.

156. Frantz S., Bauersachs J., Ertl G. Post-infarct remodelling: contribution of wound healing and inflammation // Cardiovasc Res. 2009. - Vol. 81, N 3. - P. 474-481.

157. Giugliano G.R., Giugliano R.P., Gibson C.M. et al. Meta-analysis of corticosteroid treatment in acute myocardial infarction // Am. J. Cardiol.- 2003. -Vol.91. -P.1055-1059.

158. Goldman H, Bromage T.G, Thomas D, et al. Preferred collagen fiber orientation in the human mid-shaft femur // The Anatomical Record Part A. -2003. — Vol.272a. P.434-445.

159. Greenberg B, Zannad F, Pitt B. Role of aldosterone blockade for treatment of heart failure and post-acute myocardial infarction // Am. J. Cardiol. 2006. -Vol.97. - P.34F-40F.

160. Gregory C.D, Devitt A, The macrophage and the apoptotic cell: an innate immune interaction viewed simplistically? // Immunology. — 2004. — Vol. 113, N1, — P.1-14.

161. Gross W.O. Fibroblast-myocyte interactions in vitro cardiomyogenesis // Exp.Cell Res. 1982. - Vol.142, N 2. - P.341-356.

162. Gruber B, Esterly J.R. Ontogeny of the inflammatory response in the fetal rat // Biol. Neonate. 1980. - Vol. 37, N 3-4. - P.159-164.

163. Grunwald J, Fingerle J, Hammerle H. et al. Cytocontractile structures and proteins of smooth muscle cells during the formation of experimental lesions // Exp. and Mol. Pathol. 1987. - Vol. 46, N 1. - P. 78-88.

164. Harris A.K. Cell motility and the problem of anatomical homeostasis // J.Cell Sci. Suppl. 1987. — Vol.88, N8. — P.121-140.

165. Heeneman S, Cleutjens, J. P, FaberM. J. et al. The dynamic extracellular matrix: intervention strategies during heart failure and atherosclerosis // J.Pathol. -2003. Vol.200.-P. 516-525.

166. Hill H. R. Biochemical, structural, and functional abnormalities of polymorphonuclear leucocytes in the neonate // Pediatr. Res. 1987. — V. 22. — N4.— P. 375—382.

167. Hillman N.H., Moss T.J., Nitsos I. et al. Toll-like receptors and agonist responses in the developing fetal sheep lung // Pediatr. Res. 2008. - Vol.63, N4. -P.388-393.

168. Holmes J. W., Nufiez J.A., Covell J.W. Functional implications of myocardial scar structure // Am. J. Physiol. 1997. - Vol.272. - P. H2123-H2130.

169. Hopkinson-Woolley J.,Hughes D.GordonS. et al. Macrophage recruitment during limb development and wound healing in the embryonic and foetal mouse // J. CellSci. 1994. - Vol.107. - N 5. - S.l 159-1167.

170. Huhta J., Quintero R.A., Suh E., Bader R. Advances in fetal cardiac intervention// Curr Opin Pediatr. 2004. - Vol. 16, N 5. - P.487-493.

171. Hurley J.V. Inflammation and repair in the mammalian fetus: a reappraisal // Microsurgery. 1994. - Vol. 15, N 11. - P. 811-816.

172. Ieda M., Tsuchihashi Т., Ivey K.N. et al. Cardiac fibroblasts regulatemyocardial proliferation through betal integrin signaling // Dev. Cell. — 2009.-Vol.16, N2. P.233-244.

173. Ihara S., Motobayashi Y., Nagao E., Kistler A. Ontogenetic transition of wound healing pattern in rat skin occurring at the fetal stage. // Development. — 1990.— Vol. 110.-P. 671-680.

174. Jones С.A., Holloway J.A., Warner J.O. Phenotype of fetal monocytesand В lymphocytes during the third trimester of pregnancy // J Reprod Immunol. -2002. Vol.56, N1-2. -P.45-60.

175. Joyce E.M., Liao J., Schoen F.J., Mayer J.E. et al. Functional collagen fiber architecture of the pulmonary heart valve cusp // Ann. Thorac. Surg. 2009. — Vol.87, N4.-P. 1240-1249.

176. Jugdutt B.I., Amy R.W.M. Healing after myocardial infarction in the dog: Changes in infarct hydroxyproline and topography//JACC.— 1986.— N7. — P. 91-102.

177. Junqueira L.C., Bignolas G., Brentani RR. Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections // Histochem J. 1979. - Vol. 11, N4. - P.447-455.

178. Kajstura J., Leri A., Finato N. et al. Myocyte proliferation in end-stage cardiac failure in humans // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. — Vol.95. - P.8801-8805.

179. Kalden J.R. What is inflammation? // Europ. Heart J. 1987. - V. 8. — Suppl.- P. 1—5.

180. Kamath M.V., Way R.C., Ghista D.N. et al. Detection of myocardial scars in neonatal infants from computerized echocardiographic texture analysis // Engineering in Medicine. 1986. Vol. 15. - N. 3 - P. 137- 141.

181. Kang J.O., Sucov H.M. Convergent proliferative response and divergent morphogenic pathways induced by epicardial and endocardial signaling in fetal heart development // Mech. Dev. 2005. - Vol.122, N1. - P.57-65.

182. Kasten F.H. Functional capacity of neonatal mammalian myocardial cells during aging in tissue culture // Adv. Exp. Med. Biol. — 1975. — N 53— P. 389420.

183. Katz A.M. Evidence that human cardiac myocytes divide after myocardial infarction//N. Engl. J.Med. — 2001. — Vol. 345,N 15— P.l 130.

184. Klebe R.J., Caldwell H., Milam S. Cell transmit spatial information by orienting collagen fibers//Matrix. 1989.— Vol.9, N6.— P.451-458.

185. Klinge O. Disturbances of karyokinesis and its relation to the nuclear pattern // Beitr Pathol. 1975. - Vol.155, N1. - P.79-83.

186. Klinge O. Karyokinese und Kemmuster im Herzmuskel wachsender Ratten // Virchows Arch В Cell Pathol. 1970. - Vol.6, N3. - P.208-219.

187. Klinge O. Reactive nuclear changes in experimental heart infarct in the rat. With a contribution to the genesis of myocytes // Frankf. Z. Pathol. — 1967. -Vol.77,N2.-P. 185-206.

188. Klinge O., Siepmann H. Zur Entwicklung des Kerrmiustels im Herzmuskel-wachsender Ratten // 1970 . Vol.57, N7. - P.359-360.

189. Klinge O., Stocker E. Die DNS-Synthese im Rattenherzen als Function des Lebensalters. Autoradiographische Untersuchungen mit 3H-Thymidin // Experientia. 1968. - Vol.24, N 2. - P. 167-168.

190. Kobayashi Т.К., Tsubota К., Ugajin Y., Hasegawa T. Presence of bar-shaped nuclear chromatin in cell samples from the conjunctiva // Acta Cytol. -1992.— Vol.36, N2.-P.163-166.

191. Komohara Y., Terasaki Y., Kaikita K., Suzuki H., Kodama Т., Takeya M. Clearance of apoptotic cells is not impaired in mouse embryos deficient in class A scavenger receptor types I and II (CD204) // Dev Dyn. — 2005. — Vol. 232, N1.— P.67-74.

192. Kunz J. Studies on the duration of the DNA synthesis in the myocardium of young rats //Acta histochem. 1979. — V. 63. - P. 99—107.

193. Kunz J., Keim V., Fuhrmann J. Die Proliferation von Muskelzellen und Bindegewebezellen des Rattenherzens waehrend des postnatalen Wachstums // Exp. Path. 1972. - Bd.6. - N 5-6. - S. 270-277.

194. Kurland G., Cheung A. T. W., Miller M. E. et al. The ontogeny of pulmonary defenses: alveolar macrophage function in neonatal and juvenile rhesus monkeys // Pediatr. Res. — 1988. — V. 23. — N 3 — P. 293—297.

195. Kuruc N., Franke W.W. Transient coexpression of desmin and cytokeratins 8 and 18 in developing myocardial cells of some vertebrate species // Differentiation. -1988. Vol. 38, N 3. - P. 177-193.

196. Kuruvilla L, Nair R.R, Umashankar P.R, Lai A.V, Kartha C.C. Endocardial endothelial cells stimulate proliferation and collagen synthesis of cardiac fibroblasts // Cell Biochem Biophys. — 2007. — Vol.47, N1— P. 65-72.

197. Legato M.J. Cellular mechanisms of normal growth in mammalian heart. I. Quantitative and qualitative features of ventricular architecture in the dog from birth to five months of age //Circ. Res. 1979. — Vol.44. — P.250-263.

198. Levy O, Martin S, Eichenwald E. et al. Impaired innate immunity in the newborn: newborn neutrophils are deficient in bactericidal/permeability-increasing protein // Pediatrics. 1999. - Vol.104, N 6. - P.1327-1333.

199. Li F, Wang X, Capasso J.M, Gerdes A.M. Rapid transition of cardiac myocytes from hyperplasia to hypertrophy during postnatal development// J. Mol. Cell Cardiol. 1996. - Vol.28. - P.1737-1746.

200. Li J, Chen J, Kirsner R // Clin Dermatol. 2007. - Vol.25, N 1. - P. 9-18.

201. Liechty K.W, Adzick N.S, Crombleholme T.M. Diminished interleukin 6 (IL-6) production during scarless human fetal wound repair // Cytokine. 2000. — Vol. 12,N6.-P. 671-676.

202. Li S., Van Den Diepstraten C, D'Souza S.J. et al. Vascular smooth muscle cells orchestrate the assembly of type I collagen via 2131 integrin, RhoA, and fibronectin polymerization // Am. J. Path. 2003. - Vol.163. - P. 1045-1056.

203. Lindner J. Zur Entwicklung und Alterung von Binde- und Stutzgeweben // Anat. Anz. — 1981. — Bd.150, N 1. — S.61-98.

204. Loftis M.J., Sexton D., Carver W. Effects of collagen density on cardiac fibroblast behavior and gene expression. // J .Cell Physiol. . 2003. - Vol.196, N3. -P.504-511.

205. Lorenz H.P., Lin R.Y., Longaker M.T. et al. The fetal fibroblast: the effector cell of scarless fetal skin repair // Plast. Reconstr. Surg. 1995. - Vol. 96, N 6. — P.1251-1259.

206. Magovern J.H., Moore G.W., Hutchins G.M. Development of the atrioventricular region in the human embrio // Anat. Rec. -1986. Vol. 215, N 2. -P. 2683-2691.

207. Marino T.A., Haldar S., Williamson E.C. et al. Proliferating cell nuclear antigen in developing and adult rat cardiac muscle cells // Circ Res. — 1991. -Vol.69. -P.1353-1360.

208. Markwald R.R. and Bernanke D.H. Structural analysis of 6-diazo-5'-oxo-L-norleucine effects upon early cushion tissue morphogenesis. In: Mechanisms of cardiac morphogenesis and teratogenesis. Ed1, by T/Pexieder, N.-Y., Raven Press, 1981, P. 237—251.

209. Mariathasan S., Monack D.M. Inflammasome adaptors and sensors: intracellular regulators of infection and inflammation // Nat. Rev. Immunol. -2007, Vol.7,N1. -P. 31-40.

210. Martin P., D'Souza D., Martin J. et al. Wound healing in the PU. 1 null mouse-tissue repair is not dependent on inflammatory cells // Curr Biol. 2003. — Vol. 13, N13.-P. 1122-1128.

211. Mast В.A., Albanese C.T., Kapadia S. Tissue repair in, the fetal-intestinal- tract occurs with adhesions, fibrosis, and neovascularization // Ann. Plast .Surg. — 1998. Vol. 41, N 2. - P. 140-144.

212. Mayes P., Bishop J., Laurent G. Age-Related Changes in the Proportion of Type I and III Collagen // Mechanisms of Aging and Development. 1987. -Vol.45, P.203-212.

213. McCallion R.L., Ferguson, M. W. Fetal wound healing and the development of anti-scarring therapies for adult wound healing // In: The molecular and cellular biology of wound repair, 2nd edn (ed. R. A. F. Clarke): 1996. — P. 561-600.

214. Medugorac I. Collagen Type Distribution in the Mammalian Left Ventricle During Growth and Aging // Research in Experimental Medicine. 1982. -Vol.180, — P.255-262.

215. Menke N.B., Ward K.R., Witten T.M., Bonchev D.G., Diegelmann R.F. Impaired wound healing // Clin Dermatol. — 2007. — Vol. 25, N1, — P. 19-25.

216. Mescher A.L., Neff A.W. Regenerative capacity and the developing immune system//Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. — 2005. Vol. 93, — P.' 39-66.

217. Meuli M., Lorenz H.P., Hedrick M.H. et al. Scar formation in the fetal alimentary tract // J. Pediatr Surg. 1995. — Vol. 30, N 3. - P. 392-395.

218. Molina C.P., Schnadig VJ. Anitschkow nuclear changes in postmortem pericardial scrapings// Acta Cytol. 2001. - Vol.45, N2. - P. 197-200.

219. Moser В., Loetscher P. Lymphocyte traffic control by chemokines // Nat. Immunol.- 2001. Vol.2. - P. 123-128.

220. Morioka Y., Naito M., Sato T. et al Immunophenotypic and ultrastructural heterogeneity of macrophage differentiation in bone marrow and fetal hematopoiesis of mouse in vitro and in vivo // J. Leukoc. Biol. 1994. -Vol.55.-P.642-651.

221. Morse D.E. Formation of foramina secunda in the chick // Mechanisms of cardiac morphogenesis and teratogenesis. Ed. by T.Pexieder, N.-Y., Raven Press, 1981.-P. 15-25.

222. Murphy G.E., Becker C.G. Occurrence of caterpillar nuclei within normal immature and normal appearing and altered mature heart muscle cells and the evolution of Anitschkow cells from the latter // Am. J. Pathol. 1966. — Vol.48, N 6. - P.931-57.

223. Nag A.C. Study of non-muscle cells in the adult mammalian heart: a fine structural analysis and distribution // Cytobios. 1980. - Vol. 28, N 103. - P. 4161.

224. Nahrendorf M., Swirski F.K., Aikawa E. et al. The healing myocardium sequentially mobilizes two monocyte subsets with divergent and complementary functions //J. Exp. Med.-2007. Vol.204.-P. 3037-3047.

225. Nag A.C., Carey T.R., Cheng M. DNA synthesis in rat heart cells after injury and the regeneration of myocardia // Tissue Cell. 1983. - Vol. 15. - P.597-613.

226. Naik-Mathuria В., Gay A.N., Zhu X. et al. Age-dependent recruitment of neutrophils by fetal endothelial cells: implications in scarless wound healing // J. Pediatr Surg. 2007. — Vol. 42, N 1. - P. 166-171.

227. Nishimaki S., Sato M., An H., Shima Y. et al. Comparison of markersfor fetal inflammatory response syndrome: fetal blood interleukin-6 and neonatal urinary beta(2)-microglobulin // J. Obstet .Gynaecol. Res. 2009. - Vol.35, N3. -P.472-476.

228. Noble Ch.W., Hamlett W.C, Mc Cann P., Morse D.E. Morphogenesis of chordae tendineae in the avian embryo. Micron, 1983.— V. 14, N 1— P. 97— 98.

229. Nolte S.V., Xu W., Rennekampff H.O. et al. Diversity of fibroblasts--a review on implications for skin tissue engineering // Cells Tissues Organs. 2008. -Vol.187, 3.-P.165-176.

230. Opalenik S.R, Davidson J.M. Fibroblast differentiation of bone marrow-derived cells during wound repair // FASEB J. 2005. - Vol.11. - P.1561-1563.

231. Overy H.R., Priest R.E. Mitotic cell division in postnatal cardiac growth // Lab. Invest.— 1966.-Vol.15. — P.1100-1103.

232. Pan Z.G., Wang X.N., Li Y.W., Zhang H.Y, Archard L.C. Detection of herpes simplex virus type 1 in rheumatic valvular tissue // Chin Med J (Engl). — 2005. — Vol. 118, N5 —370-376.

233. Pasumarthi K.B.S., Field L.J. Cardiomyocyte Cell Cycle Regulation // Circulation Research. 2002. - Vol.90. - P. 1044.

234. Pavlovic M., Acharya G., Huhta J.C. Controversies of fetal cardiac intervention// Early Hum Dev.- 2008. Vol.84, N 3. - P.149-153.

235. Peled Z.M., Phelps E.D., Updike D.L. et al. Matrix metalloproteinasesand the ontogeny of scarless repair: the other side of the wound healing balance// Plastic Reconstr. Surg. — 2002. Vol. 110. - P. 801-811.

236. Pexieder T. Rasterelektronenmikroskopishe Beobachtungen der Oberflache dersr

237. Herzbulbuswulste der Huhnerembiyonen // Verh. Anat. Ges. 1981. - Vol. 70. - P. 747-754.

238. Pfeffer J.M., Pfeffer M.A., Fletcher P.J., Braunwald E. Progressive ventricular remodeling in rat with myocardial infarction // Am. J. Physiol. 1991. - Vol.260. -P.H1406-H1414.

239. Phillips M.I., Kagiyama S. Angiotensin II as a pro-inflammatory mediator// Curr. Opin. Investig. Drugs. 2002. - Vol. 3. - P.569-577.

240. Pienaar J.G., Price H.M. Ultrastructure and origin of the Anitschkow cell // Am. J. Pathol. 1967. - Vol.51, N6. - P. 1063-1091.

241. Porter G.A, Bankston P.W. Myocardial capillaries in the fetal and the neonatal rat: A morphometric analysis of the maturing myocardial capillary bed // Amer. J. Anat. — 1987. — Vol.179, N2. — P.108-115.

242. Redd M.J, Cooper L, Wood W. et al. Wound healing and inflammation: embryos reveal the way to perfect repair // Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. 2004. -Vol. 359.-P. 777-784.

243. Reimers H.F. Die Heilung operativer Herzwunden // Frankf .Z. Pathol. 1962. -Vol.72.-P.l 92-208.

244. Riad A, Jager S, Sobirey M. et al. Toll-like receptor-4 modulates survival by induction of left ventricular remodeling after myocardial infarction in mice // J. Immunol.- 2008. Vol.180. - P. 6954-6961.

245. Richart R, Benirschke K. Myocardial infarction in perinatal period: report of two cases in newborn infants // J. Pediat. 1959. — Vol.55. — No.6. — P.414-431.

246. Robinson T.F, Factor S.M, Sonnenblick E.H. The heart as a suction pump. // Sci. Am. — 1986, Vol.254.-P.84-91.

247. Robledo M. Myocardial regeneration in young rat // Amer. J. Pathol. 1956. — Vol.32. — P.1215-1239.

248. Rosenkranz S. TGF-betal and angiotensin networking in cardiac remodeling// Cardiovasc. Res. 2004. - Vol.63. - P.423-432.

249. Rosenthal E. Stent implantation for aortic coarctation: the treatment of choice in adults? // J. Am. Col.l Cardiol. 2001. — Vol.38, N5. - P. 1524-1527.

250. Rothenberg B.M., Korn A. The opportunities and challenges posed by the rapid growth of diagnostic imaging // J .Am. Coll. Radiol. — 2005. — Vol. 2,N 5-P. 407-410.

251. Rowlatt U. Intrauterine wound healing in a 20 week human fetus // Virchows Arch. A Pathol. Anat. Histol. 1979. — Vol. 381, N 3. - P. 353-61.

252. Salih C., McCarthy K.P., Ho S.Y. The fibrous matrix of ventricular myocardium in hypoplastic left heart syndrome: a quantitative and qualitative analysis // Ann .Thorac. Surg. 2004. - Vol. 77. - No. 1. - P. 36-40.

253. Sarkar A., Mitra S., Mehta S. et al. Monocyte derived microvesicles deliver a cell death message via encapsulated caspase-1 // PLoS One. 2009. - Vol.25, N4. - P.9.

254. Sasaki R., Morishita Т., Yamagata S. Autoradiographic studies on heart muscle cells in normal rats // Tohoku J Exp Med. 1970. - Vol. 100. - P. 1-13.

255. Sasaki R., Watanabe Y., Morishita Т., Yamagata S. Estimation of the cell number of the heart muscules in normal rats // Tohoku J. Exp. Med. 1968. - Vol. 95.-P. 177-184.

256. Satoh F., Tsutsumi Y. Anitschkow cells in the human heart // Pathol Int. -1999. Vol.49, N1. - P.85-87.

257. Schiebler Т.Н., Wolff H.H. Elektronmikrockopische Untersuchungenam Herzmuskel der Ratte warend der Entwicklung I I Z. Zellforsch. — 1966. — Bd. 69. — S. 22-40.

258. Schor S.L., Schor A.M. Foetal-to-adult transitions in fibroblast phenotype: their possible relevance to the pathogenesis of cancer // J. Cell Sci. — Suppl. 1987.— N2.— P.165-180.

259. Schwartz L.W., Osburn В.J. An ontogenic study of the acute inflammatory reaction in the fetal rhesus monkey. I. Cellular response to bacterial and nonbacterial irritants // Lab. Invest. 1974. - Vol.31, # 5-6. - P.441-453.

260. Shafig S.A., Gorycky M.A., Mauro A. Mitosis during postnatal growth in sceletal and cardiac muscle of the rat // J. Anat. — 1968. — Vol.103, N1. — P.135-141. :

261. Smith P.G., Liu M. Impaired cutaneous wound healing after sensory denervation in developing rats: effects on cell proliferation and apoptosis // Cell Tissue Res. 2002. - Vol.307, N 3. - P. 281- 291.

262. Somasundaram K., Prathap К. K. Intra-uterine healing of skin wounds in rabbit foetuses //J.Pathol. 1970. - Vol. 100. - P.81.

263. Soo C., Beanes S.R., Hu F.Y. et al. Ontogenetic transition in fetal wound transforming growth factor-beta regulation correlates with collagen organization. // Am. J. Pathol. — 2003. — Vol. 163, N 6. P. 2459-2476.

264. Soonpaa M.H., Field L.J. Survey of studies examining mammalian cardiomyocyte DNA synthesis // Circ Res. — 1998. — Vol. 83, N1 P. 15-26.

265. Soonpaa M.H., Kim K.K., Pajak L., Franklin M., Field .LJ. Cardiomyocyte DNA synthesis and binucleation during murine' development// Am. J. Physiol.- 1996. Vol.271. P. H2183-H2189.

266. Sorokin S.P., McNelly N.A., Hoyt R.F. Early development of macrophages inintact and organ cultured hearts of rat embryos // Anat. Rec. 1994. - Vol.239,i1. N3. -P.306-314.

267. Sorokin S.P., Hoyt R.F. Pure population of nonmonocyte derived macrophages arising in organ cultures of embryonic rat lungs // Anat. Rec. 1987. - Vol.217, N1. -P.35-52.

268. Sorrell J.M., Caplan A.I. Fibroblast heterogeneity: more than skin deep // J.Cell. Sci. Vol.l 17, Pt 5.— P.667-75

269. Stehbens W.E., Zuccollo J.M. Anitschkow myocytes or cardiac histiocytes in human hearts // Pathology. — 1999. — Vol. 31 ,N 2— P.98-101.

270. Stramer B.M., Mori R., Martin P. The inflammation-fibrosis link? A Jekyll and Hyde role for blood cells during wound repair // J. Invest. Dermatol. 2007. — Vol. 127,N5.-P. 1009-1017.

271. Sun Y., Kiani M.F., . Postlethwaite A.E. et al. Infarct scar as living tissue // Basic Res. Cardiol. 2002. - Vol. 97. - P.343 - 347.

272. Szendroi M., Vajta G., Kovacs L., Schaff Z., Lapis K. Polarization colours of collagen fibres: a sign of collagen production activity in fibrotic processes // Acta Morphologica Hungarica. — 1984. — N 32 — P.47-55.

273. Tam S.K., Gu W., Mahdavi V., Nadal-Ginard B. Cardiac myocyte terminal differentiation. Potential for cardiac regeneration // Ann N Y Acad Sci. -1995. -Vol.27. Vol.752. - P.72-79.

274. Taylor I.M. Some early effects of retinoid acid on the young hamster heart // Mechanisms of cardiac morphogenesis and teratogenesis. Ed. T. Pexieder. N.Y.: Raven press. 1981.-P. 151-161.

275. Tower Т., Tranquillo R.T. Alignment maps of tissues: I. Microscopic elliptical polarimetry // Biophys. J. — 2001.— Vol. 81, N5.— P. 2954-2963.

276. Van Beneden, K., A. De Creus, V. Debacker et al. Murine fetal natural killer cells are functionally and structurally distinct from adult natural killer cells // J. Leukocyte Biol. 1999. - Vol.66. - P.62.

277. Vracko R., Thorning D., Frederickson R.G. et al. Myocyte reactions atthe borders of injured and healing rat myocardium// Lab Invest. — 1988. — Vol. 59, N 1. — P.104-114.

278. Wang H. J., Pieper J., Schotel R., van Blitterswijk C. et al. Stimulation of skin repair is dependent on fibroblast source and presence of extracellular matrix // Tissue Eng. 2004. - Vol.10.-N7-8.-P. 1054-1064.

279. Watanabe Т., Barker, T.A., and Berk, B.C. Angiotensin II and the endothelium: diverse signals and effects //Hypertension. — 2005. Vol.45. -P.163-169.

280. Weber K.T. Cardioreparation in hypertensive heart disease. Hypertension. -2001. Vol. 38, N3.-P. 588.

281. Wei S., Chow L.T., Shum I.O. et al. Left and right ventricular collagen type I/III ratios and remodeling post-myocardial infarction // J. Card. Fail. — 1999. -Vol.5.-P.l 17-112.

282. Whittaker P., Boughner D.R., Kloner R.A. Analysis of healing after myocardial infarction using polarized light microscopy. // Am J Pathol. 1989. -Vol. 134.-No.4.-P. 879-893

283. Wilkinson P. C. Leucocyte locomotion: behavioural mechanisms for accumulation // J. Cell Sci. — 1987. — Suppl. 8. — P. 103—119.

284. Williams J.L. et al. Low power, type II errors, and other statistical problems in recent cardiovascular research // Am J Physiol. — 1997. — Vol.273. — P.H487-H493.

285. Wood Т.A, de Witt S.H, Chu E.W. et al. Anitschkow nuclear changes observed in oral smears // Acta cytol. — 1975. — Vol. 19, N 5. — P.434-437.

286. Wood W, Turmaine M, Weber R, et al. Mesenchymal cells engulf and clear apoptotic footplate cells in macrophageless PU.l null mouse embryos // Development. -2000. Vol.127, N24. - P.5245-5252.

287. Wynn T.A. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis // J. Pathol. 2008. -Vol.214, N2.-P. 199-210.

288. Wynn T.A. Common and unique mechanisms regulate fibrosis in various fibroproliferative diseases // J. Clin. Invest. 2007. - Vol.117 , N3. - P. 524-529.

289. Yi S.H, Ren L, Yang T.T, Liu L, Wang H, Liu Q. Myocardial lesions after long-term administration of methamphetamine in rats // Chin. Me.d Sci J. — 2008 . Vol.23, N4. - P.239-243.

290. Yost C.C, Cody M.J, Harris E.S. et al. Impaired neutrophil extracellular trap (NET) formation: a novel innate immune deficiency of human neonates // Blood. 2009. - Vol.113, N 25. - P.6419-6427.

291. Zak F.G. The extracardial Anitschkow cells // Anat. Rec. — 1947. — Vol.98, N1.— P.25-30.

Информация о работе

Большакова, Галина Борисовна
доктора биологических наук
Москва, 2009
ВАК 03.00.25

Диссертация

Репарация миокарда крыс в онтогенезе - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы