Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Реакции отдельных тканевых структур слизистой оболочки десны крысы на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения инфракрасного диапазона

ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Реакции отдельных тканевых структур слизистой оболочки десны крысы на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения инфракрасного диапазона"

На правах рукописи

40эи<

Гиниатуллина Елена Равильевна

РЕАКЦИИ ОТДЕЛЬНЫХ ТКАНЕВЫХ СТРУКТУР СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ДЕСНЫ КРЫСЫ НА ВОЗДЕЙСТВИЕ НИЗКОИНТЕНСИВНОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ ИНФРАКРАСНОГО ДИАПАЗОНА

03.03.01 - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 3 ИЮН 2011

Курган-2011

4850715

Областное государственное учреждение здравоохранения Центр организации специализированной медицинской помощи «Челябинский государственный институт лазерной хирургии» Министерства Здравоохранения Челябинской области

Научный руководитель:

доктор медицинских наук

Головнева Елена Станиславовна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Сашенков Сергей Львович

ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава»

доктор медицинских наук, профессор

Быков Евгений Витальевич ГОУ ВПО «Южно-Уральский государственный университет Федерального агентства по образованию»

Ведущая организация: Институт иммунологии и физиологии Уральского отделения Российской Академии наук, г. Екатеринбург

ор

Защита состоится «30 » июяя 2011 г. в «У"» часов на заседании диссертационного совета ДМ 208.079.01. при Федеральном государственном учреждении «Российский научный центр «Восстановительная травматология и ортопедия» им. академика Г. А. Илизарова» (640014, г. Курган, ул. М. Ульяновой, 6).

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке ФГУ «РНЦ «ВТО» им. акад. Г.А. Илизарова» (640014, г. Курган, ул. М. Ульяновой, 6)

Автореферат разослан « Я ?» ^л&Л. 2011 года. Ученый секретарь

диссертационного . , - .

совета, д.м.н., профессор I '-"* Дьячков А.Н.

Общая характеристика работы Актуальность проблемы. На протяжении многих десятилетий проблема заболеваний пародонта в связи с их широким распространением сохраняет свою актуальность. Несмотря на большой арсенал используемых лечебных и профилактических средств, частота патологии пародонта не снижается (Ушакова Г.Б., 2002; Прохончуков А.А. и др., 2003; Петинов К.В., 2005; Кречина Е.К. и др., 2009).

В наши дни одним из широко распространенных методов лечения стоматологических заболеваний является лазерная терапия с использованием различных видов НИЛИ (Амирханян А..Н., Москвин C.B., 2008; Antunes H.S. et al. 2008; AbramoffM.M. et al., 2008; Lai S.M. L. et al., 2009). При лазерной терапии в стоматологии применяют излучение как красного (630, 660 нм), так и инфракрасного (890, 970 нм) диапазонов спектра (Рабинович И.М. и др., 1998; Воропаева М.И. и др., 2002; Москвин C.B., 2008; Амирханян А..Н., Москвин C.B., 2008; Макеева И.М. и др., 2009; GutknechtN. et al., 2004).

В настоящее время принято считать, что применение инфракрасного лазерного излучения в клинической практике определяется широким спектром его действия. Глубоко проникая в ткани, инфракрасное излучение при низких мощностях не вызывает структурных изменений, но приводит к активизации физиологических процессов как в условиях нормы, так патологии (Петрищев Н.Н. и др., 2005; Demir T. et al., 2010).

При воздействии НИЛИ на различные ткани и органы остаются до конца не изученной роль тех или иных клеточных элементов и других структур. В то же время показано, что лазерное излучение при воздействии на различные ткани вызывает усиление микроциркуляции и повышение функциональной активности тучных клеток, которая выражается в их дегрануляции с выделением большого количества цитокинов, факторов

роста, медиаторов, участвующих в активизации клеток мироокружения, хемотаксиса, ангиогенеза, матриксных металлопротеиназ (Соловьева Л.М., 1999; Астахова JI.B., Гиниатуллин Р.У., 2001; Головнева Е.С., 2001; Виноградов А.Б., 2004; Кравченко Т.Г., 2008).

Однако, в доступной литературе мы не нашли работ, направленных на исследование воздействия инфракрасного НИЛИ с длиной волны 890 нм и 970 нм на функциональную активность тучных клеток, желатиназ и кровеносных сосудов в слизистой оболочке десны здоровых крыс, хотя указанные длины волн лазерного излучения применяются в стоматологической практике при лечении заболеваний полости рта. Цель работы — изучить ответные реакции отдельных тканевых структур и желатиназ слизистой оболочки десны здоровых крыс на воздействие различных режимов НИЛИ инфракрасного диапазона. Задачи исследования:

1. Изучить функциональное состояние ТК, реакцию кровеносных сосудов и активность желатиназ в тканях слизистой оболочки десны после воздействия НИЛИ с длиной волны 890 нм, мощностью 25 мВт.

2. Исследовать функциональное состояние ТК, реакцию кровеносных сосудов и активность желатиназ в тканях слизистой оболочки десны после воздействия НИЛИ с длиной волны 970 нм, мощностью 0,5 Вт.

3. Дать сравнительную оценку воздействия использованных режимов НИЛИ инфракрасного спектра на слизистую оболочку десны.

Научная новизна работы

Впервые проведено гистологическое, зимографическое и количественное исследование в динамике реакций отдельных структурных элементов в тканях слизистой оболочки десны здоровых крыс на воздействие различных режимов НИЛИ инфракрасного спектра

Показано, что однократное воздействие НИЛИ с различной длиной волны и мощностью на слизистую оболочку десны животных оказывает в

разные сроки опытов выраженное стимулирующее влияние на функцию тучных клеток, активность желатиназ и реакцию кровеносных сосудов по сравнению с контрольной группой.

Установлено, что однократное воздействие НИЛИ с длиной волны 970 нм и мощностью 0,5 Вт на слизистую оболочку десны крыс вызывает в ближайшие сроки опытов более выраженную ответную реакцию со стороны исследованных показателей, причем с активной сосудистой реакцией и в отдаленные сроки наблюдения по сравнению с действием НИЛИ с длиной волны 890 нм и мощностью 25 мВт.

Теоретическая значимость работы заключается в расширении наших представлений об особенностях ответных реакций организма на воздействие различных режимов НИЛИ инфракрасного диапазона. Практическая значимость работы. Результаты исследований могут использоваться при разработке новых методов лазерной терапии заболеваний слизистой оболочки полости рта в эксперименте и клинике. Внедрение результатов исследования

Результаты диссертационной работы используются в научно-исследовательской деятельности ОГУЗ ЦОСМП «Челябинский государственный институт лазерной хирургии» при разработке новых технологий лазерной терапии различных заболеваний, в учебном процессе на кафедре нормальной физиологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» при чтении курса лекций на тему «Механизмы адаптации организма».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Однократное воздействие НИЛИ ИК-спектра с различной длиной волны и мощностью на слизистую оболочку десны животных оказывает в ранние сроки опытов выраженное симулирующее влияние на функцию

тучных клеток, активность желатиназ и реакцию кровеносных сосудов по сравнению с контрольной группой.

2. Однократное воздействие НИЛИ с длиной волны 970 нм, мощностью 0,5 Вт на слизистую оболочку десны животных вызывает в ближайшие сроки опытов более выраженную ответную реакцию со стороны исследованных структур, причем с активной сосудистой реакцией и в отдаленные сроки наблюдения по сравнению с действием НИЛИ с длиной волны 890 нм, мощностью 25 мВт.

Апробации работы. Основные положения работы представлены на международной научно-практической конференции «Физиологические механизмы адаптации человека» (Тюмень, 2010), доложены и обсуждены на совместном заседании сотрудников ОГУЗ ЦОСМП «Челябинский государственный институт лазерной хирургии» и кафедры нормальной физиологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» ( Челябинск, 2011).

Публикации. По результатам диссертации опубликовано б научных работ, в том числе 4 публикации - в журналах, входящих в перечень ВАК Минобразования и науки РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 81 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы, описывающей материалы и методы исследований, глав результатов собственных исследований, главы обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Библиографический указатель включает 63 отечественных и 95 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 5 таблицами, 23 рисунками, из них 22 микро фотографии.

Содержание работы Материалы п методы исследования. Нами проведено экспериментальное исследование на 55 лабораторных половозрелых крысах обоего пола массой 210-250 г. Животные содержались в условиях вивария регламентируемых приказом МЗ СССР №1179 от 10.10.1983 г. Опыты проводили в соответствии с приказами МЗ СССР №755 от 12.09.77 г. и №701 от 27.07.1978г. об обеспечении принципов гуманного обращения с животными. Все животные были разделены на 3 группы (табл. 1).

Таблица 1

Распределение животных по экспериментальным группам.

Параметры лазерного Сроки иссле- Методы

Номер воздействия (тип лазера, Кол-во исследования

группы длина волны, мощность, животн. слизистой

экспозиция, режимы) оболочки десны

1 АЛТ «Улей -2КМ» 1мин 5 Микроскопия,

(Россия), 890 нм, 25 мВт, 1 сутки 5 морфометрия,

30 сек, непрерывный, 3 сутки 5 зимография

контактный 5 сутки 7 сутки 5 5

2 «ИРЭ-Полюс» (Россия), 1мин 5 Микроскопия,

970 нм, 0,5 Вт, 30 сек, 1 сутки 5 морфометрия,

непрерывный, 3 сутки 5 зимография

дистанционный 5 сутки 7 сутки 5 5

3 Облучение не - 5 Микроскопия,

(контр.) проводилось морфометрия, зимография

Итого 55

Методика лазерного воздействия па слизистую оболочку деспы

крысы. Все эксперименты проводили под внутримышечным введением Золетила (2 мг/кг веса животного). Животные 1-й и 2-й серий опытов укладывались на стол в положении на спине, передние и задние конечности фиксировались растяжками к специальным держалкам. Затем, оттягивая пинцетом вниз нижнюю губу с обеих сторон, проводили облучение

слизистой оболочки десны в области нижних моляров с обеих сторон: в непрерывном контактном режиме с длиной волны 890 им, мощностью 25 мВт по 30 сек (у крыс 1-й серии); в непрерывном дистанционном режиме с длиной волпы 970 нм, мощностью 0,5 Вт по 30 сек (у крыс 2-й серии опытов).

При этом важно отметить, что использованные нами параметры лазерного воздействия на слизистую оболочку десны (длина волны, мощность, экспозиция, режимы), применяются при лечении больных в стоматологической практике (Амирханян А.Н., Москвин C.B., 2008; Макеева И.М. и др. 2009; Кречина Е.К. и др., 2009; Muccini J.A. et al., 1998).

У животных 3-й группы (контроль) лазерное облучение не проводилось. Животных 1-й и 2-й серий опытов исследовали через 1 мин, на 1, 3, 5, 7-е сутки после лазерного воздействия. Указанные сроки считаются достаточными для проявления прямых эффектов низкоинтенсивной лазерной терапии (Hawkins D., Abrahams H., 2007).

Методы исследования тканей слизистой оболочки деспы у крыс. Животным 1-й и 2-й групп в указанные выше сроки исследования, а также /срысам контрольной серии под внутримышечным наркозом Золетилом (2мг/кг веса животного) проводили биопсию слизистой оболочки десны в области нижних моляров с обеих сторон. Взятие биоптатов осуществлялось с помощью специального биопсийного форцепта, снабженного щипцами (фирма «Karl Storz, Germany 26173 DH»), При этом диаметр полученного биоптата составлял до 0,3 см. Один из биоптатов использовался для микроскопических, другой - для зимографических исследований.

Методика морфофупкциопальпой оценки тучных клеток. Биоптаты слизистой оболочки десны фиксировались в 10% нейтральном растворе формалина, обезвоживались в спиртах возрастающей крепости, заливались в парафин. С парафиновых блоков готовились 6 серийных срезов, которые окрашивались толуидиновым синим (pH 2,0), дающим

метахроматичсское окрашивание кислых гликозаминогликанов, содержащихся в гранулах тучных клеток (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996).

Гистологические препараты исследовались под световым микроскопом (фирма «Leica DMRXA», Germany). С помощью компьютеризированной системы анализа цветового изображения и программы «ДиаМорф Cito_W» подсчитывали общее количество тучных клеток в срезе при х50, затем количество делилось на площадь среза в мм2. Дегрануляция тучных клеток изучалась под масляной иммерсией при хЮОО. В препаратах подсчитывалось соотношение количества дегранулировавших тучных клеток к их общему числу (индекс дегрануляции; ИД=Д/(Д+Н), где Д - количество дегранулированных тучных клеток, Н - количество недегранулированных тучных клеток.) в 10 полях зрения в областях лазерного воздействия и в биоптатах слизистой оболочки десны крыс контрольной группы. Выделялись следующие формы дегранулированных тучных клеток: 1) не де гранулированные; 2) 1 степень - слабо-дегранулированные, 1-2 гранулы за пределами клетки; 3) 2 степень -выраженная дегрануляция, количество выделившихся гранул до 10; 4) 3 степень - более десяти выделившихся гранул, тотальная дегрануляция (Головнева Е.С., 2001; Синцов Д.Л. и др., 2007).

Методика морфофупкциопальпой оцепкп сосудистого русла слпзпстоп оболочки десны крысы. Биоптаты слизистой оболочки десны фиксировались в 10% нейтральном растворе формалина, обезвоживались в спиртах возрастающей крепости, заливались в парафин. Из парафиновых блоков готовились 6 серийных срезов. Гистологические препараты окрашивались гематоксилином и эозином для обзорной микроскопии. При этом особое внимание обращали на сосуды гемомикроциркуляторнош русла, которые изучали при увеличении х400. С помощью компьютеризированной программы анализа светового изображения и программы «ДиаМорф CitoW» в 10 полях зрения подсчитывалась доля

площади (в %) препарата, занятая сосудами, а также измерялся диаметр сосудов.

Методика примой зимографип матриксных металлопротенназ слизистой оболочкп десны в агарозном геле с внедренным субстратом.

Приготовление пробы: биоптаты слизистой оболочки десны с помощью пинцета помещали в микропробирку-гомогеиизатор, взвешивали на электронных весах и добавляли равное по массе количество гомогенизирующего буфера, приготовленного по общепринятой методике (Tyagi S. et al, 1996): 20мМ СаС12; 150mM NaCl; 0,01% Triton X-100; 50 mM Tris-Cl (pH 6,8). Препарат гомогенизировали и использовали для дальнейшего исследования. ■

Приготовление геля: на водяной бане готовился 1% раствор агарозы (ICN) на кальциевом буфере (20 шМ СаС12; 150 mM NaCl; 50тМ Tris-Cl, рН 7,4) с добавлегагем 0,2% желатина. После полного растворения гель заливали в «сэндвич» из стекол, ширина зазора между которыми (1мм) была ограничена пластиковыми спейсерами. По периметру «сэндвич» герметизировался клейкой лентой.

Процедура зимографии: через 0,5 часа после застывания гель осторожно снимали со стекол, помещали в чашку Петри и при помощи автоматической пипетки наносили пробы гомогенизата слизистой оболочки десны по 10 мкл. Чашку Петри закрывали и помещали в термостат при температуре 37°С на 16 часов.

Фиксация полученных зимограмм осуществлялась в 20% уксусной кислоте в течение 30 мин, окрашивание геля производилось Coomassie Brilliant Blue R-250 (40% метилового спирта,7% уксусной кислоты, 15% изопропанола, 0,1% Coomassie Brilliant Blue).

Затем проводилась отмывка окрашенного геля в 7% уксусной кислоте. После отмывки гель сканировался в стандартных условиях в проходящем

свете, и на сканированных изображениях определяли яркость области лизиса с помощью программы анализа изображений «Imagescope М».

Лазерное оборудование и инструменты. В качестве источников лазерного излучения использовали диодный лазер "ИРЭ-Полюс" (Россия) с длиной волны 970 нм и диодный лазер АЛТ «Улей-2КМ» (Россия) с длиной волны 890 нм. Доставку лазерного излучения с длиной волны 970 нм к объекту осуществляли с помощью кварц-кварцевого моноволоконнош световода диаметром 600 мкм. Доставка лазерного излучения с длиной волны 890 нм производилась с помощью головки излучателя. Выходную мощность на торце световода и головки излучателя контролировали измерителем мощности лазерного излучения Gentec ТРМ-300-СЕ (Canada).

Методы статистической обработки результатов. Статистическую обработку полученных данных проводили на персональном компьютере с помощью лицензионного пакета прикладных программ Statistica 6.0 (StatSoft Inc, США) (Реброва О.Ю., 2002). Применялись методы вариационной статистики: определение среднего арифметического, среднего квадратичного отклонения, стандартной ошибки среднего арифметического. Статистическая значимость различий сравниваемых признаков в группах проводилась с помощью непараметрического U-теста Манпа-Уитни. Различия считались статистически значимыми при уровне р<0,05, что соответствует 95% вероятности безошибочного прогноза. Для изучения взаимосвязи между изучаемыми параметрами использовался корреляционный анализ. Рассчитывали коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Степень корреляции считалась сильной при величине коэффициента корреляции от 0,8 до 1,0, средней - от 0,5 до 0,8, слабой - от 0 до 0,5 (Глапц С., 1998; Автандилов Г.Г., 2002).

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты наших экспериментов показали, что на ранних сроках после однократного воздействия НИЛИ в непрерывном контактном режиме

с дайной волны 890 нм, мощностью 25 мВт, экспозицией 30 сек на слизистую оболочку десны, в облученных тканях развиваются ответные реакции, выражающиеся в достоверном увеличении числа, степени и индекса дегрануляции ТК, в увеличении диаметра кровеносных сосудов и занимаемой ими площади, в повышении активности желатиназ по сравнению с контрольной группой (табл.2).

На разных сроках наблюдения после воздействия НИЛИ (длина волны 890 нм) на СОД нами выявлены средние и сильные положительные корреляционные связи между числом ТК, ТК с разной степенью дегрануляции, индексом дегрануляции ТК и диаметром, площадью, занимаемой кровеносными сосудами, и активностью желатиназ. При этом коэффициент корреляции (г) между указанными показателями колебался от 0,69 до 0,85 (р<0,05).

Результаты исследований свидетельствуют, что в ранние сроки после однократного воздействия НИЛИ с длиной волны 970 нм, мощностью 0,5 Вт, экспозицией 30 сек на слизистую оболочку десны, в обученных тканях развиваются ответные реакции, характеризующиеся значительным увеличением числа, степени и индекса дегрануляции ТК, увеличением диаметра кровеносных сосудов и занимаемой ими площади, повышением активности желатиназ по сравнению с контрольной группой (табл. 3).

При вычислении коэффициента корреляции Спирмена на разных сроках эксперимента после воздействия НИЛИ с длиной волны 970 нм на СОД нами выявлены средние и сильные положительные связи между показателями ТК (количество, число с разной степенью дегрануляции, индекс дегрануляции) и кровеносных сосудов (диаметр, занимаемая площадь) и активностью желатиназ. При этом коэффициент корреляции (г) между исследованными показателями составлял от 0,68 до 0,81 (р<0,05).

Таблица 2. Количественная характеристика ТК, кровеносных сосудов и активности желатиназ в тканях слизистой оболочки десны после лазерного облучения (М ±т)

Исследованный показатель Контроль (п-5) Сроки наблюдения

1 мин (п =5) 1 сутки (п =5) 3 сутки (п =5) 5 сутки (п =5) 7 сутки (п =5)

Общее содержание ТК, мм2 130,6 ± 0,97 160,6 ± 1,91* 129,6 ± 1,12** 121 ± 1,04*'** 107 ±2,21*** 91,6 ± 2,03***

Недегранулированные ТК, мм1 81,8 ±0,58 90 ± 1,58* 81,8 ±0,63** 79,4 ± 1,02 80,8 ± 1,01 72 ± 0,70*'**

Дегранулированные ТК, мм2 53 ± 0,74 69,8 ± 0,96* 53,2 ± 0,66** 40,6 ± 1,51*'** 26 ± 0,70*'** 20,8 ± 0,66*'**

Степень дегрануляции ТК, %:

1-я 40,6 ± 1,50 30,4 ±2,01* 31,8 ±0,58* 24,2 ± 0,58*'** 37 ± 0,63** 46,2 ± 0,79*'**

2-я 31,8 ±0,67 29,4 ± 0,74* 30,2 ± 0,74 50,2 ± 1,31*'** 36,6 ±0,86*'** 29 ±1,58**

3-я 29 ±0,40 41,4 ± 1,28* 40 ±0,40 25,4 ±0,51** 25,7 ± 0,51 24,2 ±0,58*'**

Индекс дегрануляции ТК, % 38,6 ±0,51 43,8 ± 1,58* 38,2 ± 0,66* 33,2 ± 1,11*'** 27,4 ±0,51*'** 22,4 ±0,51*'**

Диаметр сосудов, мкм 23,3 ± 0,3 30,4 ± 0,40* 24,1 ± 0,4** 20,2 ± 0,68*'** 19,4 ±0,51* 16,6 ±0,51*'**

Площадь, занимаемая 24,1 ±0,4 29,3 ± 0,60* 20,2 ± 0,66*-** 18,4 ±0,51* 18,6 ±0,51* 18,7 ±0,31*

сосудами, %

Активность жслатиназ, усл. ед. 145,6 ± 1,16 154,0 ±3,43* 152,4 ±2,33* 158,6 ±2,03* 142,0 ±2,12** 141,0 ±2,12

Примечание: п - число животных;

* - Р < 0,05 по сравнению с контролем;

** - Р < 0,05 по сравнению с предыдущим сроком наблюдения.

Таблица 3. Количественная характеристика ТК, кровеносных сосудов и активности желатиназ слизистой оболочки десны

после лазерного облучения (М ±ш)

Исследованный показатель Контроль (п=5) Сроки наблюдения

1 мин (п =5) 1 сутки (п =5) 3 сутки (п -=5) 5 сутки (п =5) 7 сутки (п =5)

Общее содержание ТК, мм2 130,6 ±0,97 193,6 ±2,06* 171,2 ±1,46*'** 121,8 ± 1,42*'** 100,4 ±1,46*'** 91,6 ±2,03*'**

Недегранулироваиные ТК, мм2 81,8 ±0,58 49 ± 3,08* 61,4 ±1,59*'** 81,8 ± 1,65** 71,5 ±0,56*'** 69,6 ± 1,02*

Дегранулированные ТК, мм2 53 ± 0,74 114,8 ±1,39* 111,2 ± 1,46*'** 40,8 ± 0,86*'** 31,8 ±0,58*'** 22,4 ± 0,51*'**

Степень дегрануляции ТК, %:

1-я 40,6 ± 1,50 14,4 ±0,51* 18,4 ± 0,51*'** 37,6 ± 1,26*'** 50,1 ± 1,23*'** 60 ± 1,51*'**

2-я 31,8 ±0,67 41,2 ± 1,59* 45Д ± 0,58*'** 37,4 ± 1,18*'** 33,2 ± 1,24** 25,4 ±1,22*'**

3-я 29 ± 0,40 44,6 ± 1,02* 36,2 ± 0,28*'** 25,2 ±0,40** 16,6 ±0,91*'** 14,2 ±0,58*

Индекс дегрануляции ТК, % 38,6 ±0,51 73 ± 1,34* 64,7 ± 1,25*'** 33,3 ± 1,32*'** 30,4 ± 0,64* 22 ±0,44*'**

Диаметр сосудов, мкм 23,3 ± 0,3 35,3 ± 0,3* 30 ± ОД*'** 24,2 ±0,49** 23,9 ±0,8 21,6 ±2,03

Площадь, занимаемая 24,1 ±0,4 36,1 ±0,3* 28,8 ±0,5*'** 21,3 ±0,86*'** 21,4 ±0,51* 21,2 ±0,37*

сосудами, %

Активность желатиназ, усл. ед. 145,6 ± 1,16 161,8 ± 1,95* 157,0 ±2,07* 158,4 ±0,74* 152,6 ±2,24** 145,6 ± 2,24"

Примечание: п - число животных;

* - Р < 0,05 по сравнению с контролем;

** - Р < 0,05 по сравнению с предыдущим сроком наблюдения.

Таким образом, выявленные нами корреляционные связи между числом ТК, ТК с разной степенью дегрануляции, индексом дегрануляцпи ТК и реакцией кровеносных сосудов (диаметром и занимаемой площадью) и активностью желатиназ на разных сроках опытов после воздействия на слизистую оболочку десны НИЛИ с различной длиной волны и мощностью вполне закономерны. Это обусловлено тем, что одпим из медиаторов, содержащихся в гранулах ТК, является гистамин, который, действуя через Н-1 рецепторы, способствует расширению капилляров, артериол и венул (Серов В.В., Шсхтер А.Б., 1981; Шевцова Е.Ю., 2004; Wu N., Baldwin А., 1992). Кроме того, желатиназы тучных клеток способны активировать ангиотензин I, превращая его в ангиотензин II. За счет этого механизма может резко изменяться диаметр сосудов в ответ на различные воздействия (Быков В.Л., 1999).

Результаты собственного исследования свидетельствуют о повышении функциональной активности тучных клеток и содружественной реакции кровеносных сосудов в слизистой оболочке десны после воздействия на нее НИЛИ с длинами волн 890 нм, мощностью 25 мВт и 970 нм, мощностью 0,5 Вт, что согласуется с данными литературы. В единичных работах показано, что излучение красных и инфракрасных лазеров усиливает дегрануляцшо тучных клеток и увеличивает диаметр сосудов в слизистой оболочке десны человека по сравнению с контрольной группой (Silveira L.B. et al., 2008). Наряду с этим, при воспалении в слизистой оболочке полости рта человека лечение с помощью излучения диодного лазера (длина волны 670 нм, мощность 5 мВт, экспозиция 4 мин) приводит к значительному увеличению индекса дегрануляции тучных клеток по сравнению с контролем ( Sawasaki J. et al., 2009). Установлено также, что терапия хронического пародонтита с помощью НИЛИ с длиной волны 890 нм способствует нормализации параметров микроциркуляции в тканях десны, по данным лазерной допплеровской флоуриметрии (Кречина E.H. и др., 2009).

Следует отметить, что выявленное нами уменьшение количества тучных клеток в тканях слизистой оболочки десны через трое суток после лазерного воздействия с разной длиной волны и мощностью согласуется с данными литературы. Так, О.С. Арташян (2006) и В.Г. Климин (2006) отмечали в те же сроки снижение числа тучных клеток в костном мозге с одновременным увеличением их содержания в других органах (печени, надпочечниках, желудочно-кишечном тракте) после физиологического стресса у животных, что позволяет рассматривать лазерное облучение как один из видов физиологического стресса.

Данные собственного исследования согласуются с литературными сведениями о последовательности развития биологических эффектов в ответ на действие НИЛИ (АмирханяН А.Н., Москвин C.B., 2008): поглощение энергии фотона внутриклеточными компонентами локальный нагрев тканей —> изменение концентрации Са2+ в тканях —» стимуляция Са2+ зависимых адаптационных реакций: повышение синтеза и активности ферментов, активация метаболизма клеток и повышение их функциональной активности, активизация микроциркуляции и других реакций.

Результаты нашей экспериментальной работы показали, что в ранние сроки (через 1 мин, на 1 сутки) после воздействия НИЛИ с длиной волны 970 им и мощностью 0,5 Вт на слизистую оболочку десны отмечалось более значительное содержание тучных клеток, их недегранулированных и деграНулированных форм, тучных клеток со второй и третьей степенями дегрануляции, достоверное увеличение диаметра кровеносных сосудов и занимаемой ими площади, а также существенное повышение активности желатиназ на пятые сутки опытов по сравнению с аналогичными показателями после действия НИЛИ с длиной волны 890 ими и мощностью 25 мВт (табл. 4,5). На остальных сроках опытов (3, 5, 7-е сутки) число тучных клеток с первой степенью дегрануляции увеличивалось, а диаметр кровеносных сосудов и занимаемая ими площадь были также достоверно

выше после действия НИЛИ с длиной волны 970 нм и мощностью 0,5 Вт. Выявленные нами существенные различия в эффектах воздействия НИЛИ с различной длиной волны и мощностью можно объяснить следующими данными. Известно, что чем больше длина волны и мощность лазерного излучения, тем глубже оно проникает в облучаемые ткали и, следовательно, активация физиологических процессов будет более выраженная (Амирханян А.Н., Москвин C.B., 2008).

Так, например, на культуре клеток нормальных остеобластов было показано стимулирующее влияние па них лазерного излучешм с длиной волны 830 нм, а лазерное воздействие с длинами волн 670 и 780 нм такого влияния не оказывали (Renno A.C. et al., 2007). В другой работе (Seifi M. et al., 2007) было установлено, что лазерное излучение с длиной волны 850 им в эксперименте уменьшало подвижность зубов, а лазерная терапия с длиной волны 630 нм не оказывала такого воздействия.

Таким образом, в наших опытах более существенное влияние на активизацию тучных клеток и реакцию кровеносных сосудов, на повышение активности желагиназ в слизистой оболочке десны крысы оказывало НИЛИ с большей длиной волны и мощностью (970 нм, 0,5 Вт соответственно).

Следует подчеркнуть, что изученные нами ответные реакции со стороны тучных клеток, кровеносных сосудов и желатиназ, развивающиеся в слизистой оболочке десны на разных сроках опытов после воздействия НИЛИ инфракрасного диапазона различной длины волны и мощности, вероятно, и лежат в основе его эффективного применения в клинике при лечении заболеваний слизистой оболочки полости рта.

Таблица 4. Количественная характеристика ТК в слизистой оболочке десны после воздействия различных параметров НИЛ11 инфракрасного диапазона (М ±т)

Исследованный показатель Длина волны, мощность Сроки наблюдения

Í мин 1 сутки 3 сутки 5 сутки 7 сутки

Общее содержите ТК, мм2 890 нм, 25 мВт 970 нм, 0,5 Вт 160,6 ±1,91 193,8 ±2,06* 129,6 ± 1,12 171,2 ±1,46* 121 ± 1,04 121,8 ± 1,42 107 ±2,21 100,4 ± 1,46 91,6 ± 2,03 91,6 ±2,03

Недегранулированные ТК, мм2 890 нм, 25 мВт 970 нм, 0,5 Вт 90 ± 1,58 49 ±3,08* . 81,8 ±0,63 61,4 ± 1,59* 79,4 ± 1,02 81,8 ± 1,65 80,8 ± 1,01 71,5 ± 0,56 72 ±0,70 69,6 ± 1,02

Дегранулированные ТК, мм2 890 нм, 25 мВт 970 нм, 0,5 Вт 69,8 ±0,96 144,8 ± 139* 53,2 ±0,66 111,2 ± 1,46* 40,6 ± 1,51 40,8 ± 0,86 26 ±0,70 31,8 ±0,58* .20,8 ±0,66 22,4 ± 0,51

Степень дегрануляции ТК, %, 1-я 890 нм, 25 мВт 970 нм, 0,5 Вт 30,4 ±2,01 14,4 ±0,51* 31,8 ±0,58 18,4 ±0,51* 24,2 ± 0,58 37,6 ±1,26* 37 ±0,63 50,1 ± 1,23* 46,2 ±0,79 60 ±1,51*

2-я 890 нм, 25 мВт 970 нм, 0,5 Вт 29,4 ±0,74* 41,2± 1,59* 30,2 ±0,74 45,2 ±0,58* 50,2 ±1,31 37,4 ± 1,18* 36,6 ± 0,86 33,2 ± 1,24 29 ±1,58 25,4 ± 1,22*

3-я 890 нм, 25 мВт 970 нм, 0,5 Вт 41,4 ± 1,28 44,6 ± 1,02 40 ± 0,40 36,2 ± 0,28* 25,4 ±0,51 25,2 ± 0,40 25,7 ±0,51 16,6 ±0,91* 24,2 ±0,58 14,2 ± 0,58*

Индекс дегрануляции ТК, % 890 нм, 25 мВт 970 нм, 0,5 Вт 43,8± 1,58 73 ± 1,34* 38,2 ±0,66 64,7 ± 1,25* 33.2 ±1,11 33.3 ± 1,32 27,4 ±0,51 30,4 ±0,64 22,4 ±0,51 22 ± 0,44

Примечание: * - р< 0,05 - по сравнению с.действием БИЛИ с длиной волны 890 нм и мощностью 25 мВт.

Таблица 5. Количественная характеристика показателей кровеносных сосудов и активности желатиназ в слизистой оболочке десны после воздействия различных параметров Ш1ЛП инфракрасного диапазона (М ±т)

Исследованный показатель Длина ванны, мощность Сроки наблюдения

1 мин 1 сутки 3 сутки 5 сутки 7 сутки

Диаметр сосудов, мкм 890 нм, 25 мВт 970 нм, 0,5 Вт 30,4 ±0,40 35,3 ± 0,3* 24,1 ±0,4 30 ± 0.2* 20,2 ±0,68 24.2 ± 0,49* 19,4 ±0,51 23,9 ±0,8* 16,6 ±0,51 21,6 ± 2,03*

Площадь, занимаемая сосудами, % 890 нм, 25 мВт 970 нм, 0,5 Вт 29,3 ±0,60 36,1 ±0,3* 20,2 ± 0,66 28.8 ±0,5* 18,4 ±0,51 21,3 ±0,86* 18,6 ±0,51 21,4 ±0,51* 18,7 ±0,31 21,2 ± 0,37*

Активность желатиназ, усл. ед. 890 нм, 25 мВт 970 нм, 0,5 Вт 154,0 ±3,43 161,8 ± 1,95 152,4 ±2,33 157,0 ±2,07 158,6 ± 2,03 158,4 ± 0,74 142,0 ±2,12 152,6 ± 2,24* 141,0 ±2,12 145,6 ±2,24

Примечание: * - р< 0,05 - по сравнению с действием НИЛ И с длиной волны 890 нм и мощностью 25 мВт.

Выводы

1. Через 1 минуту после однократного воздействия НИЛИ с длиной волны 890 нм, мощностью 25 мВт и экспозицией 30 сек в непрерывном контактном режиме на слизистую оболочку десны животных в облученных тканях регистрировались ответные реакции, характеризующиеся достоверным увеличением числа, степени и индекса дегрануляции тучных клеток, увеличением диаметра кровеносных сосудов и занимаемой ими площади, повышением активности желатиназ по сравнению с контрольной группой. Указанные показатели на 1-е сутки опыта, в основном, не отличались, а с 3-х до 7-х суток - снижались по отношению к контролю.

2. Через 1 минуту и на 1-е сутки после однократного воздействия НИЛИ с длиной волны 970 нм, мощностью 0,5 Вт и экспозицией 30 сек в непрерывном, дистанционном режиме на слизистую оболочку десны животных, в обученных тканях развивались ответные реакции: значительно увеличивались количество, степень и индекс дегрануляции тучных клеток, диаметр кровеносных сосудов и занимаемая ими площадь, повышалась активность желатиназ по сравнению с контрольной группой. С 3-х до 7-х суток опытов отмечалось снижение исследованных показателей по отношению к контролю.

3. В разные сроки после воздействия НИЛИ с длиной волны 970 нм и мощностью 0,5 Вт на ткани пародонта животных отмечалось более значительное увеличение числа, степени и индекса дегрануляции тучных клеток, повышение активности желатиназ на 5-е сутки, а показатели диаметра кровеносных сосудов и занимаемой ими площади были достоверно выше не только через 1 минуту и на 1-е сутки, но и на 3, 5, 7-е сутки опытов по сравнению с аналогичными показателями после действия НИЛИ с длиной волны 890 нм и мощностью 25 мВт.

4. Наличие прямой достоверной корреляционной связи между показателями тучных клеток, желатиназ и кровеносных сосудов свидетельствует о развитии взаимосвязанных ответных реакций в тканях слизистой оболочки десны на разных сроках опытов на воздействие НИЛИ инфракрасного диапазона.

5. Выявленные нами изменения функционального состояния тучных клеток, кровеносных сосудов и активности желатиназ являются проявлением процессов адаптации тканей слизистой оболочки десны на воздействие физиологического стресса - НИЛИ инфракрасного диапазона.

Практические рекомендации

1. Результаты диссертационного исследования рекомендуется использовать при разработке и обосновании эффективности новых методов лазерной терапии заболеваний слизистой оболочки полости рта в условиях эксперимента и апробации в клинической практике.

2. Результаты выполненной работы могут использоваться в учебном процессе на кафедрах нормальной физиологии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Гиниатуллина Е.Р. Сравнительная оценка воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения с длиной волны 890 нм и 970 нм на ткани слизистой оболочки десны крысы / Е.Р. Гиниатуллина, Е.С. Головнева, Р.У. Гиниатуллин, Т.Г. Кравченко // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2010. - №2 (30). - С.65-67.

2. Гиниатуллина Е.Р. Приспособительные реакции отдельных тканевых структур слизистой оболочки десны крысы на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения с длиной волны 970 нм / Е.Р. Гиниатуллина, Е.С. Головнева, Р.У. Гиниатуллин, Т.Г. Кравченко // Лазерная медицина. - 2010. - №3. - С.29-32.

3. Гиниатуллина Е.Р. Динамика реакций тучных клеток и кровеносных сосудов в слизистой оболочке десны крысы на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения инфракрасного диапазона / Е.Р. Гиниатуллина // Актуальные вопросы хирургии: сборник науч.-практ. работ / Под ред. проф. В.Н. Бордуновского. — Челябинск: изд-во ООО «Пирс», 2010.-Вып.8.-С. 193-195.

4. Гиниатуллина Е.Р. Адаптационные реакции желатиназ и кровеносных сосудов в тканях слизистой оболочки десны крысы на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения / Е.Р. Гиниатуллина, Е.С. Головнева, Р.У. Гиниатуллин, Т.Г. Кравченко // Материалы международной научно-практической конференции «Физиологические механизмы адаптации человека». - Тюмень, 2010. - С.110-112.

5. Гиниатуллина Е.Р. Динамика активности желатиназ и реакций кровеносных сосудов в тканях слизистой оболочки десны крысы после воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения инфракрасного диапазона / Е.Р. Гиниатуллина, Е.С. Головнева, Р.У. Гиниатуллин, Т.Г. Кравченко // Вестник Южно-Уральского государственного университета. - Челябинск, 2011. - № 7 (224). - Вып. 26. - С. 98-100.

6. Гиниатуллина Е.Р. Приспособительные реакции отдельных тканевых структур слизистой оболочки десны крысы на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения с длиной волны 890 нм / Е.Р. Гиниатуллина, Е.С. Головнева, Р.У. Гиниатуллин, Т.Г. Кравченко // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2011. - Том 151, № 3. - С. 295-297.

Список сокращений: ИК - инфракрасный;

НИЛИ - низкоинтенсивное лазерное излучение; СОД - слизистая оболочка десны; ТК — тучные клетки.

На правах рукописи

Гиниатуллина Елена Равильевна РЕАКЦИИ ОТДЕЛЬНЫХ ТКАНЕВЫХ СТРУКТУР СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ДЕСНЫ КРЫСЫ НА ВОЗДЕЙСТВИЕ НИЗКОИНТЕНСИВНОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ ИНФРАКРАСНОГО ДИАПАЗОНА

03.03.01 - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курган-2011

Подписано в печать 19.05.2011. Формат 60x84 1/16. Отпечатано на «RISO». Уч.-изд. л. 1,00 Тираж 100 экз. Заказ 552 Отпечатано с файла заказчика в типографии СтандАРТ (ИП Ериклинцева Е.В.), св-во 002839968 ИМНС РФ по Калининскому р-ну г. Челябинска,

454076, Челябинск, ул. Гоголя, 26, т/ф. 268-17-13, E-mail: wp74@list.ru

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Гиниатуллина, Елена Равильевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Реакции различных тканевых структур на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения (обзор литературы)

1.1. Механизмы терапевтического действия низкоинтенсивного лазерного излучения

1.2. Применение низкоинтенсивного лазерного излучения в стоматологии

1.3. Тучные клетки: физиологическая роль, особенности реакции на лазерное облучение

Глава 2. Материалы и методы исследования

Глава 3. Реакции отдельных тканевых структур и желатиназ слизистой оболочки десны крысы на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения с длиной волны 890 нм и мощностью 25 мВт

Глава 4. Реакции отдельных тканевых структур и желатиназ слизистой оболочки десны крысы на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения с длиной волны 970 нм и мощностью 0,5 Вт

Глава 5. Сравнительная оценка воздействия различных параметров низкоинтенсивного лазерного излучения инфракрасного диапазона на ткани слизистой оболочки десны крысы

Глава 6. Обсуждение результатов собственного исследования и заключение

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Реакции отдельных тканевых структур слизистой оболочки десны крысы на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения инфракрасного диапазона"

На протяжении многих десятилетий проблема заболеваний пародонта в связи с их широким распространением сохраняет свою актуальность. Несмотря на большой арсенал используемых лечебных и профилактических средств, частота патологии пародонта не снижается (Ушакова Г.Б., 2002; Прохончуков А.А. и др., 2003; Петинов К.В., 2005; Кречина Е.К. и др., 2009).

В наши дни одним из широко распространенных методов лечения стоматологических заболеваний является лазерная терапия с использованием различных видов НИЛИ (Амирханян А.Н., Москвин C.B., 2008; Antunes H.S. et al. 2008; Abramoff M.M. et al., 2008; Lai S.M. L. et al., 2009). При лазерной терапии в стоматологии применяют излучение как красного (630, 660 нм), так и инфракрасного (890, 970 нм) диапазонов спектра (Рабинович И.М. и др., 1998; Воропаева М.И. и др., 2002; Москвин C.B., 2008; Амирханян А.Н., Москвин C.B., 2008; Макеева И.М. и др., 2009; Gutknecht N. et al., 2004). Однако, лазер с длиной волны 970 нм повышенной мощности до сих пор не применялся для воздействия на слизистую оболочку десны, а использовался лишь для обработки корневых каналов зубов. Можно предполагать, что использование этого типа лазера в не повреждающем слизистую режиме будет более эффективным по сравнению с традиционной низкоинтенсивной лазерной терапией благодаря достижению большей поглощенной дозы облучения на глубине ткани (Кравченко Т.Г., 2009; Макеева И.М. и др., 2009).

В настоящее время принято считать, что применение инфракрасного лазерного излучения в клинической практике определяется его влиянием на клеточный цикл, синтез биологически активных веществ, а также процессы местной и рефлекторной регуляции функциональной активности тканей. Инфракрасное излучение при низких мощностях не вызывает структурных изменений, но приводит к активизации физиологических процессов как в условиях нормы, так и патологии (Петрищев H.H. и др., 2005; Demir Т. et al., 2010). При этом важно подчеркнуть, что как бы значительно ни отличалась интенсивность тканевых реакций в норме и при патологии, биологическая сущность, механизмы и качественные особенности их во всех случаях остаются сходными (Саркисов Д.С. и др., 1983).

При воздействии НИЛИ на слизистую десны остаётся до конца не изученной роль тех или иных клеточных элементов и других структур. В то же время показано, что лазерное излучение определенных параметров при воздействии на различные ткани вызывает усиление микроциркуляции и повышение функциональной активности тучных клеток, которая выражается в их дегрануляции с выделением большого количества цитокинов, факторов роста, медиаторов, участвующих в активизации клеток мироокружения, хемотаксиса, ангиогенеза, матриксных металлопротеиназ (Соловьева Л.М., 1999; Астахова Л.В., Гиниатуллин Р.У., 2001; Головнева Е.С., 2001; Виноградов А.Б., 2004; Кравченко Т.Г., 2008).

Однако, в доступной литературе мы не нашли работ, направленных на сравнительное исследование воздействия инфракрасного НИЛИ с длиной волны 890 нм и 970 нм на функциональную активность тучных клеток, желатиназ и кровеносных сосудов в слизистой оболочке десны крыс, хотя указанные длины волн лазерного излучения применяются в стоматологической практике при лечении заболеваний полости рта.

Цель работы — изучить ответные реакции отдельных тканевых структур и желатиназ слизистой оболочки десны здоровых крыс на воздействие различных режимов НИЛИ инфракрасного диапазона. Задачи исследования:

1. Изучить функциональное состояние ТК, реакцию кровеносных сосудов и активность желатиназ в тканях слизистой оболочки десны после воздействия НИЛИ с длиной волны 890 нм, мощностью 25 мВт.

2. Исследовать функциональное состояние ТК, реакцию кровеносных сосудов и активность желатиназ в тканях слизистой оболочки десны после воздействия НИЛИ с длиной волны 970 нм, мощностью 0,5 Вт.

3. Дать сравнительную оценку воздействия использованных режимов НИЛИ инфракрасного спектра на слизистую оболочку десны.

Научная новизна работы

Впервые проведено сравнительное гистологическое, зимографическое и количественное исследование в динамике реакции отдельных структурных элементов в тканях слизистой оболочки десны здоровых крыс на воздействие НИЛИ с длиной волны 890 и 970 нм.

Показано, что однократное воздействие НИЛИ с различной длиной волны и мощностью на слизистую оболочку десны животных оказывает в разные сроки опытов выраженное стимулирующее влияние на функцию тучных клеток, активность желатиназ и реакцию кровеносных сосудов по сравнению с контрольной группой.

Установлено, что однократное воздействие НИЛИ с длиной волны 970 нм и мощностью 0,5 Вт на слизистую оболочку десны крыс вызывает в ближайшие сроки опытов более выраженную ответную реакцию со стороны исследованных показателей, причем с активной сосудистой реакцией и в отдаленные сроки наблюдения по сравнению с действием НИЛИ с длиной волны 890 нм и мощностью 25 мВт.

Теоретическая значимость работы заключается в расширении наших представлений об особенностях ответных реакций организма на воздействие различных режимов НИЛИ инфракрасного диапазона.

Практическая значимость работы. Результаты исследований могут использоваться при разработке новых методов лазерной терапии заболеваний слизистой оболочки полости рта в эксперименте и клинике.

Внедрение результатов исследования

Результаты диссертационной работы используются в научно-исследовательской деятельности ОГУЗ ЦОСМП «Челябинский государственный институт лазерной хирургии» при разработке новых технологий лазерной терапии различных заболеваний, в учебном процессе на кафедре нормальной физиологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» при чтении курса лекций на тему «Механизмы адаптации организма».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Однократное воздействие НИЛИ ИК-спектра с различной длиной волны и мощностью на слизистую оболочку десны животных оказывает в ранние сроки опытов выраженное стимулирующее влияние на функцию тучных клеток, активность желатиназ и реакцию кровеносных сосудов по сравнению с контрольной группой.

2. Однократное воздействие НИЛИ с длиной волны 970 нм, мощностью 0,5 Вт на слизистую оболочку десны животных вызывает в ближайшие сроки опытов более выраженную ответную реакцию со стороны исследованных структур, причем с активной сосудистой реакцией и в отдаленные сроки наблюдения по сравнению с действием НИЛИ с длиной волны 890 нм, мощностью 25 мВт.

Апробация работы

Основные положения работы представлены на международной научно-практической конференции «Физиологические механизмы адаптации человека» (Тюмень, 2010), доложены и обсуждены на совместном заседании сотрудников ОГУЗ ЦОСМП «Челябинский государственный институт лазерной хирургии» и кафедры нормальной физиологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (Челябинск, 2011).

Публикации

По результатам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 4 публикации - в журналах, входящих в перечень ВАК Минобразования и науки РФ.

Структура диссертации

Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы, описывающей материалы и методы исследований, глав результатов собственных исследований, главы обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Библиографический указатель включает 68 отечественных и 134 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 31 рисунком.