Разработка технологии получения препарата литических ферментов, расщепляющих клеточные стенки дрожжей и микроскопических грибов, с использованием мутантного штамма Streptomyces griseinus 11-84

Петрова, Наталья Тихоновна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка технологии получения препарата литических ферментов, расщепляющих клеточные стенки дрожжей и микроскопических грибов, с использованием мутантного штамма Streptomyces griseinus 11-84
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Разработка технологии получения препарата литических ферментов, расщепляющих клеточные стенки дрожжей и микроскопических грибов, с использованием мутантного штамма Streptomyces griseinus 11-84"

На правах рукописи

ПЕТРОВА Наталья Тихоновна

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ, РАСЩЕПЛЯЮЩИХ КЛЕТОЧНЫЕ СТЕНКИ ДРОЖЖЕЙ И МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ГРИБОВ, С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МУТАНТНОГО ШТАММА 81гер1отусе8 griseinus 11-84

Специальность 03.00.23 - Биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Москва - 2005

Работа выполнена в Научно-техническом центре «Лекарство и биотехнология»

Научный руководитель: кандидат технических наук,

ПАВЛОВА Наталья Михайловна

Официальные оппоненты: доктор технических наук, профессор

ИВАНОВА Людмила Афанасьевна,

доктор биологических наук, профессор ГРАДОВА Нина Борисовна

Ведущая организация: Открытое акционерное общество «Биотехника».

Защита состоится « _» ^^¿г-^ 2005 г в часов на

заседании диссертационного совета ДМ 212.204.13 в Российском химико-технологическом университете им. Д.И. Менделеева по адресу: 125047, Москва, А-47, Миусская пл., 9

С диссертацией можно ознакомиться в Информационно-библиотечном центре РХТУ им. Д.И. Менделеева.

Автореферат разослан « » 2005г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат технических наук /V/ /¿и&ё^

Шакир И.В.

¿(gW-

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Литические ферменты катализируют биохимические реакции последовательной деградации структурных элементов микробной клеточной стенки. Применение препаратов литических ферментов позволяет интенсифицировать выделение из микробной биомассы многих ценных физиологически активных веществ: ферментов, витаминов, аминокислот и др. Также литические ферменты применяют в технологиях охраны окружающей среды, на этапах утилизации микробной биомассы, являющейся отходом микробиологических производств. Биомасса кормовых дрожжей после ферментативного лизиса клеточных стенок обладает повышенной питательной ценностью, что позволяет более эффективно использовать её в кормопроизводстве, в том числе, в составе заменителей цельного молока для молодняка сельскохозяйственных животных. Кроме того, на основе литических ферментов в последнее время разрабатываются антимикробные лекарственные средства, в том числе для лечения дерматомикозов, которые имеют ряд преимуществ перед химически синтезируемыми фунгицидами.

Особый интерес для создания промышленного производства ферментов представляют термотолерантные микроорганизмы, в том числе акгиномицеты, которые обладают высокими скоростью роста и устойчивостью к изменениям температуры культивирования. Также важно, что термотолерантные культуры часто оказываются более конкурентноспособными по сравнению с мезофильными продуцентами в отношении инфицирующей микрофлоры.

Цель и задачи исследования. Цель диссертационной работы состояла в разработке технологии получения препарата литических ферментов широкого спектра действия на основе полученного мутантного штамма термотолерантного акганомицета Streptomyces griseirtus 11-84 и изучении физико-химических и каталитических свойств препарата.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи: изучение естественной и индуцированной изменчивости акганомицета, изучение физиологических особенностей мутантного штамма Str. griseinus 11-84, полученного методами индуцированной селекции, оптимизация условий культивирования продуцента для направленного биосинтеза литических ферментов, разработка методов выделения литических ферментов и разработка научно-технической документации на получение

препарата, изучение физико-химических свойств, специфичности действия препарата и условий гидролиза клеточных стенок микроорганизмов. Научная новизна.

1. С использованием методов индуцированной селекции получен высокопродуктивный штамм литических ферментов Sir. griseinus 11-84, ферментативная активность которого превышает активность исходной культуры в 2,5 раза. На штамм получено авторское свидетельство №1362012 (1987 г.)

2. Показана индукция факторами питательной среды биосинтеза внеклеточных литических ферментов и установлено, что продукты ферменголиза полисахаридов клеточных стенок дрожжей и микроскопических грибов значительно интенсифицируют биосинтез ферментов.

3. Разработана технология получения очищенного препарата литических ферментов Лизофунгин из культуральной жидкости мутантного штамма Str. griseinus 11-84.

4. Установлены диапазоны pH и температуры, а также активаторы и ингибиторы, влияющие на активность и стабильность литических ферментов в полученном препарате.

5. Установлено, что основными компонентами ферментативного комплекса, обеспечивающего лизис клеточных стенок дрожжей, являются активности ß-глюканазы и протеазы.

6. Определен спектр литического действия препарата на микроорганизмы, показано, что препарат активно разрушает клеточные стенки дрожжей и микроскопических грибов, в том числе патогенных микроорганизмов.

Практическая значимость работы. Разработана технология получения очищенного препарата литических ферментов. Разработана и утверждена нормативно-техническая документация, в том числе опытный технологический регламент на получение препарата Лизофунгин. Технология апробирована в стендовых и опытно-промышленных условиях, получены экспериментальные партии препарата. Доказана его высокая эффективность при разрушении клеточных стенок дрожжей и микроскопических грибов. Показана перспективность применения препарата для лизиса дрожжей и микроскопических грибов, в том числе дерматофитов. Показана эффективность использования ферментолизатов дрожжей для замены молочного белка в составе заменителя цельного молока для молодняка сельскохозяйственных животных.

Апробация работы. Основные положения диссертации докладывались на международных и Российских научно-технических конференциях, симпозиумах и

конгрессах, в том числе на Международной конференции «Биокатализ - 2000» (Москва, 2000 г); II Международной научно-практической конференции (Ялта, 2001 г); I съезде микологов России (Москва, 2002 г); I, II, VI Международных конгрессах «Биотехнология - состояние и перспективы развития» (Москва, 2002, 2003, 2005 г.г.); на заседаниях Ученого совета НТЦ Лекбиотех.

Публикации. По результатам исследований опубликовано 12 печатных работ, а также получено 2 авторских свидетельства СССР, в которых отражены основные положения диссертации.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка литературы и приложений. Материал изложен на 212 страницах, содержит 27 рисунков и 29 таблиц, список литературы включает 280 наименований.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ 1. Материалы и методы исследования

Объектом исследований был штамм Str. griseinus И, полученный из музея НТЦ «Лекбиотех». Естественную и индуцированную изменчивость продуцента изучали по морфологическим признакам и по способности к биосинтезу литических ферментов. В качестве мутагенных факторов использовали нитрозометилмочевину (НММ), ультрафиолет (УФ) и этиленимин (ЭИ). Для установления пределов изменчивости вариантов по уровню литической активности и достоверности различий по этому признаку проводили статистическую обработку данных.

Культуры выращивали глубинным способом при 42 °С в течение 24-30 часов в условиях принудительной аэрации. Литическую активность (ЛА) культуральной жидкости продуцентов определяли турбидиметрическим методом. В качестве субстрата использовали суспензию с оптической плотностью 0,7-0,8 убитых клеток дрожжей Candida utilis

(фирма ICN)-

Отселекционированный мутантный штамм Str. griseinus 11-84 выращивали на комплексных питательных средах, состав которых варьировал в зависимости от целей эксперимента. В качестве индуктора в состав питательной среды вводили дрожжи Candida maltosa (кормовые). Оптимальное соотношение компонентов питательной

среды устанавливали с использованием математических методов планирования эксперимента (Грачев, 1979). Ферментолизаты дрожжей или клеточных стенок получали обработкой 0,5% раствором препарата Лизофунгин при 50 °С в течение 9 часов.

Ферментный комплекс выделяли из культуральной жидкости, используя методы микрофильтрации и ультрафильтрации. Ферменты из концентрата осаждали этиловым спиртом, осадок высушивали на лиофильной сушилке.

В культуральной жидкости и полученных препаратах определяли литическую активность, активность р-глюканазы, протеазы, хитиназы, а-маннаназы. При изучении субстратной специфичности использовалй полисахариды с различным типом связей: ламинарин, глюкан дрожжевой, глюкан ячменный, лихенин, пустулан, Na-карбоксиметилцеллюлозу. Для характеристики ферментного комплекса препарата определяли общепринятыми методами активности ряда сопутствующих ферментов.

Специфичность действия препарата на различные микроорганизмы оценивали по снижению оптической плотности суспензии микроорганизмов, по выживаемости микроорганизмов после обработки препаратом, определяемой высевом проб на агаризованную среду, а также микроскопически контролировали разрушение микробных клеток.

Белок определяли методом Лоури (Lowry et al., 1951), редуцирующие сахара - методом Шомодьи-Нельсона (Somogui, 1952), скорость растворения кислорода - сульфитным методом (Linek et al., 1970) и с помощью датчика с полупроницаемой мембраной, количество биомассы - высушиванием образцов при 105 °С до постоянного веса.

Все определения проводили не менее чем в трех повторностях трех серий экспериментов. В диссертации представлены средние результаты серии экспериментов, обеспечивающие 95% точности по статистическим критериям.

2. Получение мутантного штамма Streptomyces griseinus 11-84 На первой ступени селекции была изучена естественная изменчивость культуры Sír griseinus 11 по морфологическим признакам и по активности внеклеточных литических ферментов. При рассевах на агаризованной среде были выделены три морфологических варианта, различающиеся окраской воздушного мицелия и степенью спорообразования.

Основную часть популяции - 64%, составляет «серый» вариант, обладающий наиболее высокой способностью к биосинтезу литических ферментов (3,7-8,3 ед/мл).

При хранении культуры соотношение морфологических вариантов изменяется в сторону увеличения количества менее активных диссоциантов (рис. 1).

Для получения высокопродуктивных мутантов Sir. griseinus проводили обработку споровой суспензии мутагенами с последовательной сменой мутагенных факторов: нитрозометилмочеви-ны (НММ), ультрафиолета (УФ) и эти-ленимина (ЭИ). В результате многоступенчатого отбора получен активный му-тантный штамм Sir griseinus 11-84, превышающий исходный по уровню литической активности в 2,5 раза (табл. 1).

ШеоИ

|||4оИ I 20|

"серьО"

ТЗэгыЗ"

п тс —г-чг / "бвюеЫГ

0.25 6 12

Ерешхренения, мвс

Рис. 1. Соотношение морфологических вариантов ^п'зетщ- II после хранения в течение 1 недели, 6,12 и 24 месяцев.

Таблица 1.

Изменение литической активности продуцента в процессе селекционного отбора

Этап селекции Вид мутагена Выжива емость, % от исх. Литическая активность, ед/мл(х103) (средняя в популяции) Коэффициент изменчивости, % Увеличение активности, %к контролю

Исходная культура - 100 5,1 28,4 100

1. Естественный отбор 100 6,5 14,5 128

2. НММ 3 8,4 32,0 165

3. НММ 0,003 10,2 38,1 200

УФ 0,001 8,2 21,3 160

НММ+УФ 0,0003 9,1 65,0 179

4. ЭИ 15 12,8 18,1 250

Отселекционированный мутангный штамм Str.griseinus 11-84, продуцент логических ферментов, депонирован в коллекции Центрального музея промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика под регистрационным номером Б-739. На штамм получено авторское свидетельство №1362012 (1987 г). Разработаны способы хранения штамма на агаризованных средах и зерновых субстратах, обеспечивающие сохранение морфологической однородности и биосинтетической способности продуцента.

3. Разработка оптимального состава питательной среды.

С целью изучения влияния углеродсодержащих соединений на биосинтез лити-ческих ферментов мутантным штаммом Str griseinus 11-84 культуру выращивали на

питательных средах, содержащих различные moho-, ди- сахара, амилодекстрины (растворимый крахмал). Среды готовили в двух вариантах: с добавлением и без до-

бавления дрожжей (рис. 2 а, б).

Показано, что у мутантного штамма Str. griseinus 11-84 при культивировании на средах, содержащих дрожжи, происходит индукция биосинтеза литических ферментов. Самая высокая литическая активность в опыте достигнута на среде, содержащей амилодекстрины и дрожжи.

При использовании сред, в состав которых вводили различные полисахариды (дрожжевой глюкан, ламинарин, дрожжевой маннан, хитин) или нативные клетки дрожжей, было установлено, что в зависимости от наличия в среде специфического субстрата меняется не только общая литическая активность, но и состав ферментов ли-тического комплекса. Так, высокая активность ß-глюканазы наблюдалась на средах, содержащих дрожжевой глюкан, ламинарин, а также цельные клетки дрожжей. При этом увеличение активности ß-глюканазы сопровождалось увеличением общей литической активности культуры. Варианты опыта с относительно высокой активностью а-маннаназы и хитиназы имели невысокую общую литическую активность.

В другой серии экспериментов была выяснена роль в индукции биосинтеза литических ферментов продуктов неполной деградации полисахаридов клеточной стенки дрожжей (рис. 3). Опыты, в которых культуру Str. griseinus-11-84 выращивали на средах, содержащих клетки дрожжей, ферментолизат дрожжей, клеточные стенки дрожжей

100

Я 80 I во

i 40

ä 20

о 100

§ <0

\ а)

1 i И

[X Л _ Г _

* в

■к \ i i i i if

* Fl

г Р

□ Среда без дрожжей, IE Среда с дрожжами

Рис. 2. Рост (а) и образование литических ферментов (б) мутантным штаммом Sir griseinus 11-84 при выращивании на средах, содержащих различные источники углерода и дрожжи.

или ферментолизат клеточных стенок, показали, что замена цельных клеток или клеточных стенок дрожжей в питательной среде на их ферментолизаты ускоряло

синтез лизоферментов и повышало уровень литической активности. Проведенные исследования позволили сделать вывод, что синтез лизоферментов мутантным штаммом 51гер1оту-сея griseinus 11-84 имеет инду-цибельный характер, а индуктором являются полисахариды -продукты неполной деградации клеточной стенки.

Следующим этапом исследований было выяснение селективности влияния клеток

10 15 20 25 30 35 40 45 Время, час

Рис. 3. Динамика синтеза литических ферментов при выращивании культуры Str. griseinus 11-84 на средах, содержащих дрожжи (1) и их ферментолизаты (2), клеточные стенки (4) и их ферментолизаты (3) по сравнению с ростом на среде без дрожжей (контроль) (5)

микроорганизмов различных видов, а также грибной биомассы, являющейся отходом производства ферментов. В состав питательной среды вводили высушенную биомассу убитых клеток дрожжей: S. carlsbergensis, S. cerevisiae, С. maltosa, С. utilis, микроскопических грибов: Asp. awamori, Asp. foetidus и Гг. viride; и бактерий: В. subtilis, М. lysodeicticus, М. species, смесь бактериальных культур, выращенных во ВНИИсинтезбелок (Mycobacterium, Pseudobacterium, Brevibacterium, Staphylococcus, Bacillus, Chromobacterium). Данные опытов показали, что индуцирующая способность микроорганизмов зависит от их таксономической принадлежности и различий в структуре клеточной стенки. На среде с дрожжами С. maltosa синтезировался наиболее активный литический комплекс, катализирующий расщепление всех используемых субстратов, в том числе бактериальных клеток. Литическая активность Str. griseinus 11-84, выращенной на средах с биомассой микроскопических грибов, к концу культивирования достигала 80-85% литической активности в опытах с дрожжами С. maltosa. Добавление в среду биомассы бактериальных культур не индуцировало синтез литических ферментов.

Заключающим этапом этой части работы была оптимизация состава для синтеза литических ферментов культурой Str griseinus 11-84 В качестве основной была использована среда с гидролизатом картофельного крахмала, ферментолизатом дрожжей и минеральными солями. Оптимальное количественное соотношение компонентов питательной среды было определено в результате реализации программы дробного факторного эксперимента (ДФЭ 27'3) с последующей оптимизацией процесса по методу Бокса-Уилсона. Применение оптимизированной питательной среды, включающей (%): гидролизат крахмала - 3,8; ферментолизат дрожжей - 1,0; NäN03- 0,5; КН2РО4 - 0,75; СаСОз - 0,1; MgS04 - 0,05; FeS04 - 0,02 повысило активность литических ферментов по сравнению с исходной питательной средой на 55-58% (до 20 - 22 (хЮ3) ед/мл).

4. Разработка рациональных режимов глубинного культивирования Str. griseinus 11-84

Экспериментально было установлено, что максимальное накопление литических ферментов в культуральной жидкости Str. griseinus 11-84 наблюдалось при начальном pH среды 6,0 и использовании в качестве инокулята хорошо развитого мицелия стрептомицета Посевной материал в возрасте 24 часа, выращенный на ферментационной среде до фазы линейного роста, вносили в количестве 2% (рис. 4).

Культивирование вели в условиях интенсивной аэрации (рис. 5, кривая 1). Снижение степени аэрации приводило не только к уменьшению синтеза ферментов, но и удлиняло процесс (рис. 5, кривые 3, 4, 5). Ступенчатый режим аэрации, реализованный при выращивании культуры в стендовых условиях, позволил снизить общий расход подаваемого воздуха, уменьшить пенообразование и сократить срок культивирования до 22-24 часов при сохранении высокого уровня активности лизоферментов.

Исследования по влиянию температуры культивирования показали, что рост биомассы у Str. griseinus 11-84 наблюдался в широком диапазоне температур с максимумом при 37-42 °С (рис. 6), а оптимальной для биосинтеза литических ферментов была температура 42-47 °С, при этом максимальная продуктивность культуры наблюдалась при 42 °С (рис. 7). Проведенные исследования подтверждают термотолерантный характер продуцента.

О 2 4 6 8 10 Доза посевного, %

Рис. 4. Влияние посевного материала на биосинтез литических ферментов культурой Згг.ртзетиз 11-84 на ферментационной среде. Возраст инокулята: 1 - 24 часа роста, 2 -16 часов роста, 3 - 30 часов роста.

ч25

•--20

;§ 15 <в

gfto

г*

л У \

А к

1 щ Г1

0 10 20 30 40 50 Время, час

Рис. 5. Динамика накопления литической активности в культуральной жидкости Str. griseinus 11-84 при скорости растворения кислорода (мг 02/л мин): 1 - 21,2; 2-16,9; 3-13,0; 4-9,2; 5-6,7.

Температура роста, °С

Время, час

Рис. 6. Влияние температуры культивирования на рост Sir. griseinus 11-84.

у о

о <0

£ 5 e о

S <о ¥ «

о а g. ®

26 32 37 42 47 52 Температура, °С Рис. 7. Продуктивность культуры griseiпus 11 -84. после 30 часов роста при разнйх температурах.

Общая активность литических ферментов в процессе культивирования Str. griseinus 11-84 возрастала параллельно увеличению биомассы продуцента. Максимальная скорость биосинтеза литических ферментов наблюдалась в фазе линейного роста продуцента (рис. 8).

Так как литические ферменты - это, как правило, комплексы, состоящие из ß-глюкаиаз, протеаз, хитиназ и других ферментов, был изучен состав ферментов, входящих в литический комплекс Str. griseinus 11-84, в процессе роста культуры. Опыты показали, что динамика накопления общей литической активности, ß-глюканазы и протеазы была одинаковой, тогда как максимальный уровень хитиназы и

а-маннаназы не совпадал с максимумом литической активности. Отмечено, что биосинтез а-маннаназы предшествовал синтезу других ферментов. Это косвенно свидетельствует о последовательности действия ферментов Str. griseinus 11-84 на компоненты клеточных стенок дрожжей, входящих в состав питательной среды, и о важной роли ß-глюканаз и протеаз в составе комплекса (рис. 9).

г 0,35 30

■ 0,3 "о

■0,25 i 20

■0,2

■ 0,15 ■о е §

•0,1 10

о-

■ 0,05

■' I I I—I-

10 20 30

Время, час

Рис. 8. Динамика изменения удельной скорости роста ш, (ч"1) - (1) и удельной скорости биосинтеза литических ферментов Яла (ед ч"1 г'1 (хЮ3) - (2) культуры Str. griseinus 11-84:

Г "

3 N

L 4 5 !-Ж-- S-!

30 40 50 Время, час

Рис. 9. Динамика биосинтеза ферментов литиче-ского комплекса культуры Лг. griseinus 11-84:

1. - литическая активность (ЛА), ед/мл(х 103),

2. - р-ппоканаза (ГлА), ед/мл,

3. - протеаза (ПрА), ед/мл (хЮ"'),

4. - хитиназа (ХА), ед/мл (хЮ'1),

5. - а-маннаназа (МА), ед/мл (хЮ'1).

7. Разработка условий выделения препарата литических ферментов Препарат литических ферментов выделяли из отделенной от биомассы продуцента культурапьной жидкости с использованием методов микро- и ультрафильтрации, осаждения спиртом с последующим высушиванием осадка на лиофильной сушилке. В лабораторных условиях определены основные параметры процесса ультрафильтрации, обеспечивающие высокую производительность и сохранение в концентрате активности всех ферментов, входящих в состав литического комплекса. Проведенные исследования показали, что оптимальное соотношение производительности, селективности и сохранение активности ферментов комплекса в процессе концентрирования обеспечивает полиамидная мембрана марки УПМ-20, при этом средняя производительность составляла 16,2 л/мгчас, а селективность достигала 86% при степени концентрирования 10.

С целью интенсификации процесса ультрафильтрации были изучены условия предварительной очистки культуральной жидкости. Показано, что предварительная очистка на мембране МФЦ с размером пор 0,22 мкм снижала содержание взвешенных веществ, микрофлоры, увеличивала прозрачность фугата и тем самым позволяла увеличить производительность ультрафильтрационных мембран с 16,2 до 26,1 л/м2час.

Таблица 2.

Влияние степени концентрирования на процесс ультрафильтрации литических ферментов.

Параметры Кратность концентрирования

0 (исх.) 3 5 10 15 20

Средняя производительность, л м /час 35,8 28,6 26,1 18,0 9,8

Селективность мембраны - 98 95 87 85 80

Объем, мл 1000,0 330,0 200,0 100,0 67,0 50,0

Белок, мг/мл: 2,5 7,2 10,4 15,4 20,3 24,1

ЛА,% - концентрата - ультрафильтрата, - инактивация - 98 2 0 95 5 0 86 10 4 81 14 5 76 17 7

Литическая активность, ед/мл (хЮ3): 30,0 89,1 142,5 258,0 362,7 456,0

Удельная литическая активность, ед/мг белка (Ю3) 10,7 12,4 13,7 16,8 17,9 18,9

Исследовано влияние рН и степени концентрирования на процесс ультрафильтрации (табл. 2). Показано, что концентрирование культуральной жидкости на мембранах типа УПМ-20 следует проводить в пределах рН 6,0-7,0, оптимальная степень концентрирования - 10. При этом выход ферментов составлял 86%, а удельная активность концентрата увеличивалась в 1,6 раз.

Выделение комплекса литических ферментов из концентрата проводили осаждением этанолом. Показано, что наиболее полное выделение ферментов происходило при концентрации этанола в смеси 80% и рН концентрата 5,0. Выход лигаческой активности при этом составлял 66%, а удельная активность увеличивалась в 2,4 раза. Лиофильно высушенный препарат имел активность 9,1х106 ед/г, содержание белка 245 мг/г.

В результате проведенных исследований была разработана технологическая схема и на ее основе опытный технологический регламент получения препарата Ли-зофунгин. Регламент включал стадии приготовления питательной среды, выращивания посевного материала, выращивания продуцента в ферментере, отделения биомассы, микрофильтрацию культуральной жидкости, ультрафильтрацию ферментного

комплекса, осаждение ферментов спиртом, сушку ферментного препарата (схема приведена в диссертации). По данной схеме проведена отработка технологии в опытных условиях." Наработаны опытные партии препарата, которые были использованы для изучения его физико-химических свойств и безвредности.

6. Изучение свойств препарата.

Изучены физико-химические параметры проявления литического действия препарата. Максимальная литическая активность препарата наблюдалась при температуре 50 °С и рН 7,0 (рис. 10 а, б). Стабильность литического комплекса сохранялась на 80% после 6 часов инкубации при 40 °С и после 1 часа инкубации при 50 °С. Зона рН стабильности литических ферментов находилась в интервале рН 5,0-7,0.

£100 I 80

з 40 с;

20 о

г л а)

/ 1 1 \

/ \

/1 { \

< 1

8 100

80 ■

о во ■

5 40 ■

20 ■

Л , б>

О 10 20 30 40 50 60 70 80 Температура, "С

рН

Рис. 10. Влияние температуры (а) и рН реакционной смеси (б) на литическую активность препарата. Субстрат - суспензия убитых клеток дрожжей С. иИП.г с оптической плотностью 0,7, концентрация препарата 0,05 мг/мл.

При исследовании влияния солей на литическую активность было установлено, что некоторый активирующий и стабилизирущий эффект оказывали ионы К4", Саг+, Ва2+, Ре2+. Внесение металлов в форме сульфатов и хлоридов показало, что некоторое ингибирующее действие имели анионы С1 ~.

Известно, что для ферментативного гидролиза клеточной стенки, имеющей сложный химический состав и строение, необходимо наличие в литическом комплексе ферментов, действующих на различные ей компоненты. В составе клеточной стенки дрожжей и мицелиальных грибов преобладают полисахариды, в основном глюкан, маннан, хитин и целлюлоза. Структурные элементы в виде полисахарид-белковых комплексов обеспечивают ригидность клеточной стенки.

С целью изучения компонентного состава Лизофунгина был исследован спектр его действия на различные субстраты. Результаты, обобщенные в таблице 3, позволили заключить, что в состав препарата входят Р-глюканазы, протеаза, хитина-за, в небольшом количестве целлюлаза, р-глюкозидаза, а-маннаназа (табл. 3).

Таблица 3.

Характеристика комплекса литических ферментов препарата Лизофунгин

Ферменты Субстраты Тип связи Активность, ед/г

Общая литическая активность Суспензия дрожжей Candida utilisi 9,1х106

Р-глкжаназа Ламинарии Глюкан дрожжевой Глюкан ячменный Лихенин Пустулан Р-1,3-Р-1,3-,Р-1,6-Р-1,3-, Р-1,4-Р-1,3-, Р-1,4-Р-1,6- 2300 1070 160 321 0

Р-глюкозидаза п-нитрофенил-P-D- Р-1,4- 6,0

глюкопиранозид п-нитрофенил-a-D- а-1,4- 0

глюкопиранозид

Целлюлаза (АФБ) в т.ч. р-глюканаза Фильтровальная бумага Ыа-карбоксиметилцеллюлоза Р-1,4- 120,0 50,0

а-маннаназа Маннан дрожжевой а-1,2- 17

Протеаза Казеинат Na, рН 7,0 Пептидные 185

Хитиназа Хитин коллоидный Р-1,4- 93

Синтезируемые стрептомицетом Р-глюканазы оказались высокоспецифичны по отношению к полисахаридам, глюкозные остатки которых соединены Р-1,3-, а также Р-1,4—гликозидной связями и практически не действовали на Р-1,6-связи. Анализ продуктов гидролиза дрожжевого глюкана показал наличие, в основном, олигоса-харидов различной молекулярной массы, что предполагает эндогенный характер действия Р-глюканаз (рис. 11).

Рис. 11. Гельхроматография продуктов гидролиза дрожжевого глюкана препаратом Ли-зофунгин на Акрилексе П-2, (1,8x117,5 см) в 0,1 М растворе уксусной кислоты, скорость элюции 40 мл/ч. 1 - продукты гидролиза глюкана, 2 - глюкоза.

D 1

150 200 25О

300 35О У,МП

Активность Р-глюканаз была максимальна при рН реакционной смеси 6,0 и температуре 50 °С. Активность протеазы наблюдалась в тех же температурном и рН диапазонах и была максимальной при рН 7,0 и температуре 50 °С. Под действием ЭДТА в концентрациях 2х10"2 - 5x10"3 M активность протеазы ингибировалась на 80%, что позволило отнести ее к металлозависимым ферментам. Оптимальный рН действия хитиназы 5,5 и температура 45 °С.

Важное значение для биотехнологической и медицинской практики имеет выявленное действие комплекса литических ферментов Str. griseinus 11-84 на различные микроорганизмы. В качестве тест-культур использовали 30 штаммов микроорганизмов различных таксонов как про-, так и эвкариот, представителей следующих родов: дрожжей - Candida, Saccharomyces, Endomycopsis, грибов - Aspergillus Pénicillium, Trichoderma и др., и бактерий - Bacillus, Escherihia, Micrococcus, в том числе дерма-тофитов Candida albicans, Microsporum canis, Trichophyton rubrum, Trichophyton gyp-seum. О логическом действии препарата судили по снижению оптической плотности суспензии живых клеток, а также по выживаемости тест-культур после обработки препаратом с последующим высевом проб на плотные среды. Изучение спектра действия Лизофунгина показало, что препарат активно разрушает клеточные стенки микроскопических грибов и дрожжей, в том числе дерматофитов ( оптическая плотность суспензии клеток снижалась на 70-90%). Бактериальные культуры оказались менее подвержены действию литического комплекса (20-25%). Было отмечено, что чувствительность клеток микроорганизмов зависела от их физиологического возраста. Лизис клеток исследуемых культур в экспоненциальной фазе роста был в среднем на 1520% выше, чем клеток, взятых из стационарной фазы. Было также обнаружено действие Лизофунгина на споры некоторых грибов (например, представителей рода Aspergillus, Trichoderma), которые лизировались после обработки препаратом до 23% в зависимости от вида.

7. Области применения препарата

Применение литических ферментов для гидролиза клеточных стенок микроорганизмов, и в частности дрожжей и микроскопических грибов, позволяет получать ферментолизаты, питательная ценность и усваиваемость которых значительно выше

вследствие гидролиза их клеточных стенок. Белковые продукты, полученные путем ферментативного гидролиза клеточных стенок дрожжей, могут рассматриваться как эффективные заменители традиционных пищевых белков животного происхождения в микробиологической и пищевой промышленностях, сельском хозяйстве, а также в качестве сырья для получения белковых изолятов, пептонов и гидролизатов высокой степени очистки.

Был разработан технологический процесс получения ферментолизатов кормовых и осадочных винных дрожжей с использованием препарата литических ферментов Str. griseinus 11-84. Опытные партии полученных ферментолизатов использовали для частичной замены молочного белка в заменителях цельного молока (ЗЦМ) для молодняка сельскохозяйственных животных. Научно-хозяйственные опыты показали, что ЗЦМ с ферментолизатами дрожжей обеспечивает рост телят в молочный период их развития на уровне ЗЦМ на основе молочного белка (А. с. №1688824, 1991 г.).

Разработан способ ферментолиза хлебопекарных дрожжей препаратом Лизо-фунгин для получения биологически активной добавки (БАД) и показано, что в фер-ментолизатах дрожжей количество аминного азота увеличивается в 2 раза, количество растворимых углеводов в 20-23 раза при падении массы сухих клеток вдвое. Полученные результаты показали эффективность применения препарата Лизофунгин в переработке дрожжевой биомассы.

Проведенные совместно с Московским заводом шампанских вин исследования по лизису нативных винных дрожжей показали, что внесение лизированных дрожжей в виноматериалы (шампанского, столовых вин) интенсифицирует окислительно-восстановительные реакции, обуславливающие развитие вкуса и букета вина, и ускоряет процесс его созревания (Кишковский, Коновалов и др., а.с. №1253130,1985 г.).

ВЫВОДЫ

1. С использованием методов индуцированной селекции получен высокопродуктивный штамм литических ферментов Str. griseinus 11-84, литическая активность которого превышает активность исходной культуры в 2,5 раза. На штамм получено авторское свидетельство №1362012 (1987 г.). Разработаны условия поддержания и хранения штамма-продуцента на агаризованных и сыпучих зерновых средах, позволяю-

щие при хранении культуры снизить процент выщепляющихся морфологических вариантов с низкой ферментативной активностью.

2. Показан индуцибельный характер биосинтеза литических ферментов. В качестве индуцирующих факторов при культивировании Str griseinus 11-84 могут быть использованы интактные клетки дрожжей либо их ферментолизаты. Установлено, что интенсивный синтез литических ферментов осуществляется в фазе линейного роста стрегггомицета.

3. Оптимизированы состав питательной среды и условия биосинтеза литических ферментов (температура 42 °С, pH 6,0, интенсивная аэрация), что позволило повысить их активность в культуральной жидкости на 55-58%.

4. Разработана технология получения препарата литических ферментов с использованием мембранных методов выделения и очистки ферментного комплекса. Составлена и утверждена научно-техническая документация на производство препарата Лизофунгин.

5 Изучен компонентный состав Лизофунгина и показано, что доминирующими являются ß-глюканазы, протеаза, а также в небольшом количестве присутствуют хи-тиназа, целлюлаза, а-маннаназа и глюкозидаза.

6. При исследовании субстратной специфичности ß-глюканаз показано, что наиболее активно они разрушают полисахариды с ß-1,3- и ß-1,4- гликозидными связями в глюканах и не действуют на ß-1,6- связи. Основными конечными продуктами гидролиза дрожжевого глюкана являются олигосахариды.

7. Изучен спектр действия препарата на микроорганизмы различных таксономических групп и показано, что препарат разрушает клеточные стенки дрожжей и микроскопических грибов и в меньшей степени бактерий.

8 Разработан способ получения ферментолизатов кормовых дрожжей и на их основе - заменителя молока для животных. Способ защищен авторским свидетельством СССР (A.c. 1688824, 1991 г).

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1). Воротило С.П., Коновалов С.А., Калунянц К.А., Белогорцев Ю.А., Петрова ЛИ., Петрова Н.Т., Павлова Е.А., Кюдулас И.И., Анченко O.E., Лауцюс В., Юргулис А. Штамм Streptomyces griseinus - продуцент дрожжелитических ферментов. // А. с. № 1362012. - 1987 г.

2). Петрова Н.Т., Воротило С.П., Павлова Н.М., Павлова Е.А. Естественная и индуцированная изменчивость продуцента литических ферментов. // В сб.: «Достижения промышленной энзимологии», ВНИИСЭНТИ. - М., 1988. - С. 13-21.

3). Воротило С.П, Петрова Н.Т., Павлова Н.М., Павлова Е.А., Орлова Т.В. Разрушение клеточных стенок дрожжей ферментным препаратом литического действия. // В сб. «Достижения промышленной энзимологии», ВНИИСЭНТИ-М., 1988.-С. 109-114.

4). Нестеренко Е.А., Петрова Н.Т., Воротило С.П., Павлова Е.А. Концентрирование литических ферментов с использованием ультрафильтрации. // В сб.: «Биотехнология медицине и народному хозяйству», ВНИИСЭНТИ. - М., 1990. - С. 25-28.

5). Воротило С.П., Петрова Н.Т., Павлова Е.А., Нестеренко Е.А., Павлова Н.М., Полякова И .Я., Лещенко В.М. Получение лизированных дрожжей и изучение возможности замены ими обезжиренного молока в составе заменителей цельного молока (ЗЦМ). // «Ферменты-народному хозяйству». Тезисы докл. Всесоюзн. научно-пракг. конф. -Черновцы, УССР, 12-16 ноября 1990 - С. 10.

6). Воротило С.П., Павлова Е.А., Петрова Н.Т., Турин A.A., Абушев P.A. Утилизация отходов винодельческой промышленности. // «Химические превращения пищевых полимеров». Тезисы докл. Всесоюзн. конф., Светлогорск, 21-23 апреля 1991. - С. 145.

7). Воротило С.П., Коновалов С.А., Павлова Н.М., Павлова Е.А., Петрова Н.Т., Павленко В.Ф., Смекалов H.A., Станкявичус Г.П., Лагодюк П.З., Шах Е.С. Заменитель цельного молока для молодняка сельскохозяйственых животных. // А. с. № 1688824,1991 г.

8). Павлова Н.М., Нестеренко Е.А., Петрова Н.Т., Воротило С.П. Комплекс литических ферментов и их использование в медицине. // «Биокатализ 2000». Тезисы докл. Международного конгресса, 10-15 июня 2000 г. - С. 135.

9). Петрова Н.Т., Нестеренко Е.А., Павлова Н.М., Бравова Г.Б., Ларина Л.Н. Перспективы использования дрожжелитических ферментов. // «Качество, безопасность и экология пищевых продуктов и производств. Процессы в агроиндустрии». Тезисы докл. 11 Международн. научно-пракг. конф. - Ялта, 21-25 мая 2001 г. - С. 54-55.

10). Петрова Н.Т., Павлова Н.М., Шишкова Э.А., Ларина Л.Н., Бравова Г.Б. Оптимизация биосинтеза литических ферментов термотолерантного актиномицета Str. griseinus 11-84. II Биотехнология. - 2002 - № 1. - С. 28-35.

11). Петрова Н.Т , Нестеренко Е.А., Павлова Е.А., Шишкова Э.А., Бравова Г.Б. Получение и характеристика литических ферментов препарата Лизофунгин. // Биотехнология.-2002.-№1. - С. 78-88.

12). Петрова Н.Т., Нестеренко Е.А., Павлова Н.М., Шишкова Э.А., Бравова Г.Б. Лизофунгин - ферментный препарат миколитического действия. Н «Современная микология в России». - Тезисы докл. Первого съезда микологов России. - Москва, 2002 г. - С. 239.

13). Петрова Н.Т., Ларина Л.Н., Павлова Н.М., Полетаева O.A. Биосинтез литических ферментов термотолерантным акгиномицетом. // «Биотехнология - состояние и перспективы развития». - Тезисы докл. 1 Междунар. контр. - Москва, 14-18 октября 2002 г. - С. 228.

14). Петрова Н.Т., Нестеренко Е.А., Павлова Н.М., Шишкова Э.А., Бравова TS. Получение очищенного препарата литических ферментов и перспективы его использования. // В сб.: «Микробные биокатализаторы и перспективы развития ферментных технологий в перерабатывающих отраслях АПК». - Москва, Пгацепромиздат, 2004. - С. 120-123.

Служба миожительноП техники ГУ РОНЦ им. Н Н. Елохииа РАМН

Подписано о печать 20 . 04 . 05 Заказ № 22 7 Тираж 100 экз

-J

л *

f »

i «

РНБ Русский фонд

2005-4 45883

19 МДи 2005

Ш о

* У

Содержание диссертации, кандидата технических наук, Петрова, Наталья Тихоновна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ферментативный лизис микробной клеточной стенки.

2. Микроорганизмы - продуценты литических ферментов.

3. Пути увеличения биосинтеза литических ферментов.

3.1. Получение активных штаммов-продуцентов.

3.2. Метаболическая регуляция биосинтеза литических ферментов.

3.3. Влияние состава питательной среды на биосинтез ферментов.

3.4. Влияние условий культивирования на биосинтез литических ферментов актиномицетами.

4. Способы получения препаратов литических ферментов.

5. Области применения литических ферментов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Методы получения штамма-продуцента литических ферментов.

2. Питательные среды.

3. Математические методы планирования эксперимента.

4. Методы выращивания культуры.

5. Получение препарата литических ферментов.

5.1. Мембранные методы очистки и концентрирования.

5.2. Выделение препарата из концентрата.

5.3. Сушка препарата.

6. Методы, использованные при определении свойств препарата.

6.1. Методы определения активности ферментов.

6.2. Изучение некоторых свойств препарата Лизофунгин.

6.2.1. Определение оптимальных условий действия литических ферментов.

6.2.2. Определение действия препарата на микроорганизмы.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 1. Получение мутантного штамма.

1.1. Естественная изменчивость продуцента.

1.2. Получение мутантного штамма Б1гер1отусе8 griseinus 11-84.

1.3. Сравнительная характеристика исходного и мутантного штаммов.

Глава 2. Разработка оптимального состава питательной среды.

2.1. Влияние специфических субстратов на биосинтез литических ферментов 87 мутантным штаммом Str. griseinus 11-84.

2.2. Влияние биомассы микроорганизмов в питательной среде на биосин- 93 тез литических ферментов

2.3. Оптимизация состава питательной среды с использованием методов математического планирования эксперимента.

Глава 3. Разработка рациональных режимов глубинного культивирования

Str. griseinus 11-84.

3.1. Влияние посевного материала на биосинтез литических ферментов.

3.1.1. Отработка условий поддержания штамма в активном состоянии.

3.1.2. Исследование влияния количества и возраста мицелиальной посев- 106 ной культуры на биосинтез литических ферментов.

3.1.3. Хранение культуры на сыпучих зерновых субстратах.

3.2. Влияние начального pH среды на биосинтез литических ферментов.

3.3. Влияние температуры культивирования.

3.4. Зависимость образования литических ферментов от аэрирования пи- 113 тательной среды.

3.5. Динамика биосинтеза ферментов литического комплекса.

Глава 4. Разработка условий выделения препарата литических ферментов

4.1. Изучение стабильности литических ферментов в фугате культураль- 124 ной жидкости.

4.2. Изучение процесса очистки и концентрирования литических фермен- 126 тов методом ультрафильтрации.

4.2.1. Выбор улырафильтрационных мембран.

4.2.2. Влияние предварительной очистки культуральной жидкости на 129 скорость ультрафильтрации.

4.2.3. Влияние рН фугата на процесс ультрафильтрации.

4.2.4. Исследование оптимальной степени концентрирования фугата 132 культуральной жидкости.

4.3. Разработка условий осаждения комплекса литических ферментов из 135 концентрата и получение препарата.

4.3.1. Влияние рН концентрата на осаждение литических ферментов.

4.3.2. Влияние концентрации этанола на литическую активность препарата

4.4. Испытание технологии получения препарата.

4.5. Описание технологической схемы получения препарата Лизофунгин.

Глава 5. Изучение некоторых свойств препарата.

5.1. Оптимальные условия действия препарата.

5.2. Влияния солей некоторых металлов на литическую активность препарата.

5.3. Характеристика ферментного комплекса препарата Лизофунгин.

5.4. Изучение спектра действия Лизофунгина на микроорганизмы.

Глава 6. Области применения препарата.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка технологии получения препарата литических ферментов, расщепляющих клеточные стенки дрожжей и микроскопических грибов, с использованием мутантного штамма Streptomyces griseinus 11-84"

Проблема лизиса клеточных стенок микроорганизмов различных таксономических групп с целью повышения их питательной ценности и получения в недеградированном виде биологически активных веществ, содержащихся в протоплазме микробных клеток, является актуальной и имеющей народохозяйственное значение.

Для разрушения микробной биомассы известны различные физические и биохимические способы. Ферментативный способ разрушения клеточных стенок, в отличие от физико-химических способов, позволяет осуществлять контролируемое воздействие на клетки и извлекать из них целевые продукты.

Среди ферментов, продуцируемых микроорганизмами, особое место занимают литические ферменты, катализирующие биохимические реакции последовательной деградации структурных элементов микробной клеточной стенки.

Применение препаратов литических ферментов позволяет интенсифицировать выделение из микробной биомассы многих ценных физиологически активных веществ: ферментов, витаминов, аминокислот и др. Известно, что клеточная стенка кормовых дрожжей препятствует усвоению цитоплазматических веществ клетки при скармливании ее животным. Биомасса кормовых дрожжей после ферментативного лизиса клеточных стенок обладает повышенной питательной ценностью,, что дает возможность более эффективно использовать её в кормопроизводстве, в том числе в составе заменителей цельного молока для молодняка сельскохозяйственных животных.

Также литические ферменты могут быть использованы в технологиях охраны окружающей среды, на этапах утилизации микробной биомассы, являющейся отходом микробиологических производств.

Кроме того, на основе литических ферментов в последнее время разрабатываются антимикробные лекарственные средства, в том числе для лечения дерматомикозов, которые имеют ряд преимуществ перед химически синтезируемыми фунгицидами. Получены положительные результаты при использовании их для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных. Применение литических ферментов перспективно при борьбе со стафилококковой инфекцией, при лечении кариеса зубов.

Особый интерес для создания промышленного производства ферментов представляют термотолерантные микроорганизмы, в том числе актиномицеты-продуценты литических ферментов, которые обладают высокой скоростью роста и устойчивостью к изменениям температуры культивирования. Также важно, что термотолерантные культуры часто оказываются более конкурентноспособными по сравнению с мезофильными продуцентами в отношении инфицирующей микрофлоры.

Несмотря на большой интерес, проявляемый к проблеме ферментативного лизиса микроорганизмов, промышленное производство препаратов литических ферментов в России отсутствует. Поэтому изучение условий биосинтеза литических ферментов термотолерантным актиномицетом Str. griseinus 11-84 и разработка технологии получения ферментного препарата литического действия для использования в различных отраслях народного хозяйства и медицине, является актуальной и перспективной.

Цель и задачи исследования. Основная цель диссертационной работы состояла в разработке технологии получения препарата литических ферментов широкого спектра действия на основе полученного мутантного штамма термотолерантного актиномицета Streptomyces griseinus 11-84, а также в изучении физико-химических и каталитических свойств препарата.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- изучение естественной и индуцированной изменчивости актиномицета,

- изучение физиологических особенностей мутантного штамма Str. griseinus

11-84, полученного методами индуцированной селекции,

- оптимизация условий культивирования продуцента для направленного биосинтеза литических ферментов,

- разработка методов выделения литических ферментов и разработка научно-технической документации на получение препарата,

- изучение физико-химических свойств, специфичности действия препарата и условий гидролиза клеточных стенок микроорганизмов.

Научная новизна.

1. С использованием методов индуцированной селекции получен высокопродуктивный штамм литических ферментов Str. griseinus 11-84, ферментативная активность которого превышает активность исходной культуры в 2,5 раза. На штамм получено авторское свидетельство №1362012 (1987 г.)

2. Показана индукция факторами питательной среды биосинтеза внеклеточных литических ферментов и установлено, что продукты ферментолиза полисахаридов клеточных стенок дрожжей и микроскопических грибов значительно интенсифицируют биосинтез ферментов.

Апробация работы. Основные положения диссертации докладывались на международных и Российских научно-технических конференциях, симпозиумах и конгрессах, в том числе на Международной конференции «Биокатализ - 2000» (Москва, 2000 г); II Международной научно-практической конференции (Ялта, 2001 г); I съезде микологов России (Москва, 2002 г); I, II, VI Международных конгрессах «Биотехнология -состояние и перспективы развития» (Москва, 2002, 2003, 2005 г.г.); на заседаниях Ученого совета НТЦ Лекбиотех.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Петрова, Наталья Тихоновна

ВЫВОДЫ

2. Показан индуцибельный характер биосинтеза литических ферментов. В качестве индуцирующих факторов при культивировании Str. griseinus 11-84 могут быть использованы интактные клетки дрожжей либо их ферментолизаты. Установлено, что интенсивный синтез литических ферментов осуществляется в фазе линейного роста стрептомицета.

5. Изучен компонентный состав Лизофунгина и показано, что доминирующими являются ß-глюканазы, протеаза, а также в небольшом количестве присутствуют хитиназа, целлюлаза, а-маннаназа и глюкозидаза.

8. Разработан способ получения ферментолизатов кормовых дрожжей и на их основе - заменителя молока для животных. Способ защищен авторским свидетельством СССР (A.c. 1688824, 1991 г).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата технических наук, Петрова, Наталья Тихоновна, Москва

1. Абрамочкин Г.В. и др. Способ получения вещества, обладающего лити-ческим действием. // Патент России №.1692144.- 1995.-Бюл. №33.

2. Авиженис В.Ю. Создание технологии производства новых ферментных препаратов для сельского хозяйства и пищевой промышленности // Автореф. дисс. . докт. техн. наук. М., 1992. - 72 с.

3. Айтхожина H.A., Файн М.Э., Никитина Е.Т. Стимуляция и ингибирова-ние вторичного роста микроорганизмов металлами // Прикл. биохим. и микро-биол. 1993. - Т. 29, вып.2. - С. 292-297.

4. Актуганов Г.Э., Мелентьев А.И., Корпела Т.К. Комплекс литических ферментов штамма Bacillus sp. X-b. // Тез. докл. Междунар. конф. «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий». Саранск, 12-15 сентября 2001 г. С. 62-64.

5. Актуганов Г.Э., Мелентьев А.И., Усанов Н.Г. Особенности продукции комплекса хитинолитических ферментов в периодической культуре Bacillus sp. 739 И Биотехнология. 2001. - № 3. - С. 25-33.

6. Алейников И.Н. Переработка клеточной биомассы: новые подходы. // Тез. докл. Междунар. конф. «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий». — Саранск, 12-15 сентября 2001 г. С. 64-65.

7. Алиханян С.А. Селекция промышленных микроорганизмов. // М.: Наука, 1968.-С. 136.

8. Аре Р.Ю., Виестур У.Е. Получение микробных метаболитов. М.: ОНТИТЭИмикробиопром, 1979. - 72 с.

9. Афанасьева В.П., Гриднева Т.В., Заборина O.E., Бурд Г.И. Глюкозная ка-таболитная репрессия биосинтеза глюкоамилазы у дрожжей Endomycopsis fibu-ligera II Прикл. биохим. и микробиол. 1978. - Т. 14, № 6. - С. 878-884.

10. Ахвледиани З.Г. Разработка промышленной технологии микробного препарата пектинэстеразы // Автореф. дисс. . канд. техн. наук. -М., 1991.

11. Ашмарин И.П. Молекулярная биология. М.: Медицина, 1977. - 360 с.

12. Бабенко Ю.С. Лизорецифин новый ферментный препарат и сфера егоприменения //Регуляция микробного метаболизма: Тез. докл. Всесоюзн. конф. — Пущино, 1989. -С. 37.

13. Бабенко Ю.С., Кукушкина Н.В., Гниломедова Л.Е., Черногор Н.П. Применение комплекса литических ферментов Actinomyces recifensis var. lyticus 2435 для гидролиза биомассы и стимуляции роста микроорганизмов // Микро-биол.-1989. Т. 51, № 6. - С. 34-39.

14. Бабенко Ю.С., Соколова И.Е., Гниломедова JI.E. Лизорецифин новый препарат литических ферментов для химиотерапии стафилококковых инфекций //Тез. докл. Всес. конф., 22-24 окт., 1991. Ч. 1. -М., 1991. - С. 10.

15. Безбородое A.M. Биохимические основы микробиологического синтеза. — М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984. — 304 с.

16. Безбородов A.M., Астапович Н.И. Секреция ферментов у микроорганизмов. М.: Наука, 1984. - 70 с.

17. Безбородов A.M., Родионова H.A., Тиунова H.A. а-гликаназы микроорганизмов // Прикл. биохим. микробиол. 1982. - Т. XVI11, вып.6. - С. 806-815.

18. Безрукова И.П., Палков М.А. Влияние характеристик посевного материала на направленность вторичного синтеза продуцентов новобиоцина и микогеп-тина // Антибиотики и химиотерапия. 1992. - Т. 37, № 10. - С. 24-26.

19. Белецкая О.П., Панин А.Л., Кулаев И.С. Изменение спектра эндоглюканаз в процессе роста гриба Aspergillus tereus Н Прикл. биохим. микробиол. -1987. -Т.ХХ111,вып.2.-С. 173-178.

20. Белов А.П., Каменев A.C. Роль компонентов клеточной стенки дрожжей рода Candida в морфологии клетки // Микробиология. 1986. - Вып. 3. - С. 25-35.

21. Белянина В.Ф., Кузменок М.А., Золотова М.А., Коченова М.М., Максимова Т.Н. Изучение способа приготовления посевного материала продуцента стрептомицина // Биотехнология. 1994. - № 6. - С. 3-5.

22. Бизюлявичус Г.-А. С., Кислухина О.В. Литические ферменты в ветеринарии. //Ветеринария-1988.-12, 97.-С. 56-59.

23. Билай Т.И. Термофильные грибы и их ферментативные свойства.-Киев: Наукова думка, 1985.-172 с.

24. Бовина Е.В., Дерябин В.В., Ланге A.B., Яроцкий С.В. Структура маннана дрожжей Candida maltosa II Прикл. биохим. микробиол. —1986. -Т. 22, вып. 5. С. 679-683.

25. Боррис Р. Клонирование и экспрессия генов ß-глюканазы Bacillus в Bacillus subtilis //Биотехнология. 1985. — № 6. - С. 25-28.

26. Быков В.А., Калунянц К.А. Биокатализаторы в решении продовольственной программы // Технология органических веществ: Итоги науки и техники. -1984.-Т. 8.-181 с.

27. Веса B.C. Биоспецифическая хроматография протеаз // Прикл биохим. микробиол.- 1980.- Т. XVI, вып. 5.- С. 629-651.

28. Виноградов И.В., Жарикова В.П., Ремизова О.И. Наружное применение гризеофульвина при дерматомикозах. // Клиника, патогенез и терапия кожных и венерических заболеваний. Горький, 1976.-С. 52-56.

29. Вишневецкий С.А., Армуш М.З., Образцова А.Я., Лауринавичус К.С., Акименко В.К. Влияние pH, температуры и кислорода воздуха на литическую активность препарата из клеток Methanobacterium wolfei II Микробиология. -1992. Т. 61, вып. 4. - С. 634-637.

30. Воротило С.П. Биосинтез литических ферментов термотолерантным штаммом и изучение их свойств. // Автореф. .канд дисс. 1974. 20 с.

31. Воротило С.П., Коновалов С.А. Максимов В.И. Муколитические ферменты термотолерантного штамма Actinomyces sp // Прикл. биохим. микробиол. -1972.-№9.-С. 671.

32. Воротило С.П., Коновалов С.А., Павлова Н.М., Павлова Е.А., Петрова Н.Т., Павленко В.Ф., Смекалов H.A., Станкявичус Г.П., Лагодюк П.З., Шах Е.С. Заменитель цельного молока для молодняка сельскохозяйственых животных. // А. с. № 1688824, 1991 г.

33. Генетика и селекция микроорганизмов. Новосибирск: Наука, Сибирскоеотделение. 1975. - 149 с.

34. Гендина С.Б., Павлова Н.М., Коновалов С.А., Калунянц К.А. Штамм микроскопического гриба Aspergillus foetidus М-45 — продуцент пектолитических ферментов // А.С. СССР, № 538022. 1976. -Бюл. № 45.

35. Глемжа А.А. Использование афинной хроматографии в очистке микробных гидролаз //Прикл. биохим. микробиол. -1982. Т. XVI11, вып.6. - С. 792-805.

36. Головина И. Г. Литические ферменты микроорганизмов // Успехи микробиол. 1972.-№ 8. - С. 108.

37. Голубцова В.М., Ермакова В.П. Получение и регенерация протопластов Aspergillus niger v. Tiegh продуцента лимонной кислоты //Микол. фитопатол. -1991.-Т. 25, № 2. - С. 135-140.

38. Готтшалк Г. Метаболизм бактерий. — М.: Мир, 1982. 310 с.

39. Грачев Ю.П. Математические методы планирования экспериментов. — М.: Пищевая промышленность, 1979.

40. Грачева И.М., Грачев Ю.П., Мосичев М.С. и др. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов. -М.: Легкая и пищевая пром-тъ. 1982.-240 с.

41. Дерканосова Л.И., Коновалов С.А., Воротило С.П. Синтез муколитиче-ских ферментов термофильными штаммами микроорганизмов // Прикл биохим. микробиол.-1975.-Т. 11,№ 1.-С. 5-8.

42. Джангалина Н.К. Индуцированная изменчивость Actinomyces griseus — продуцента антибиотика гризина. // Автореф. дисс—канд. биол. наук. -Алма-Ата, 1980.-24 с.

43. Дислер Е.Н. Подавление внеклеточной протеолитической активности Streptomyces roseoflavus var. roseofungini некоторыми факторами среды // Прикл. биохим. микробиол. 1982. - Т. 18, № 3. - С. 391.

44. Дорохов В.В., Черемнова Т.А., Югова Л.В. Влияние условий культивирования на биосинтез а-галактозидазы // Достижения промышленной энзимологии.-М.: Изд. ВНИИСЭНТИ., 1988.-С. 31-35.

45. Дужак А.Б., Салганик Р.И., Старостина В.К. Способ получения комплексного ферментного препарата, содержащего а-1,3-глюканазу и хитиназу// Патент России № 204148. 1995 - Бюл. № 23.

46. Дытнерский Ю.И. Баромембранные процессы. М.: Химия, 1986. - 272 с.

47. Егоров Н.С. Практикум по микробиологии.-М.: МГУ, 1976. С. 61.

48. Егоров Н.С., Выберных С.Н., Лория Ж.К., Фишингер 3. Репрессия синтеза экзо-протеазы Bacillus licheniformis //Микробиология. 1983. — Т. 52, № 6. - С. 941-944.

49. Егоров Н.С., Лория Ж.К., Брюкнер Б. Регуляция синтеза внеклеточных протеолитических ферментов у микроорганизмов // Успехи микробиологии. -М., 1977.-Т. 12.-С. 42-56. .

50. Ежов В.А., Троицкая Л.В., Рухлова Л.П., Кулаев И.С., Северин А.И., Абрамоч-кин Г.В., Комарова Г.В., Синявина О.С., Жбанова В.Н. Способ выделения комплекса литических ферментов // Патент СССР № 1755581.- 1995. Бюл. № 23.

51. Ежова А.Ю., Шишкова Э.А., Бравова Г.Б., Нестеренко Е.А. Использование мембранной технологии для концентрирования и очистки ферментных растворов пектинлиазы // Биотехнология. 2001. - № 5. — С. 45-50.

52. Ездаков Н.В. Применение ферментных препаратов в животноводстве. -М., Колос.- 1975.

53. Емцева Т.В., Коновалов С.А. Литические ферменты, синтезируемые Bacillus subtilis 12 //Прикл. биохим. микробиол. -1976. Т. XI1, вып. 5. - С. 681-686.

54. Жакоб Ф., Моно Ж. Регуляторные механизмы клетки. М.: Мир, 1964.

55. Жданов Ю.Н., Дорофеенко Г.Н., Корольченко Г.А. и др. Практикум по биохимии углеводов. -М.: Высшая школа- 1973.- С. 179-180.

56. Жиганова Л.П., Лапчинская O.A., Синягина О.П., Орловский В.И. Мутагенез у Streptomyces cremeus subsp. nebramycini для повышения продукции ап-рамицина при биосинтезе многокомпонентного антибиотического комплекса // Биотехнология. -1986. № 4. - С. 7-11.

57. Жукова P.A., Коммунарская А.Д., Пронина М.И., Терешина И.М., Журавлева Н.П., Шабин М.Н. Методы селекции продуцентов антибиотиков и ферменtob Л.: Медицина, 1978. - С. 39-49.

58. Зайкина И.В., Тиунова H.A., Кобзева Н.Я., Безбородов A.M. Изучение свойств экзо-1,3-р-глюканаз Geotrichum candidum Зс. II Прикл. биохим. и био-технол .-1985 .-Т.21, №4.-С.461-466.

59. Захаров И.А., Ковальцова C.B., Кожина Т.Н., Федорова И.В., Яровой Б.Ф. Мутационный процесс у грибов. Л. : Наука, 1980. - С. 287.

60. Захарова Н.Я., Павлова И.Н. Литические ферменты микроорганизмов. -Киев: Наукова думка, 1985.

61. Захарова И.Я., Косенко Л.В. Методы изучения микробных полисахаридов. -Киев: Наукова думка, 1982, 192 с.

62. Зигель М., Кобзева НЛ. Получение протопластов и локализация рибонуклеа-зы, а-1,3-глюканазы и глюкозоизомеразы в мицелии гриба Pénicillium brevi-compactum I ! Прикл. биохим. микробиол. 1980. - T. 16, вып. 2. - С. 245-248.

63. Иванова Л.А. Получение и применение протеиназы актиномицета Sîrep-îomyces acidoresistans 1403 I ! Автореф. дисс. . канд. техн. наук. Воронеж, 1984.-20 с.

64. Иванова И.С. Разработка технологии биологически активной добавки к пище в виде белково-углеводного концентрата из биомассы хлебопекарных дрожжей. // Автореф. дисс. . канд. техн. наук. Москва, 2003. - 28 с.

65. Ильина A.B., Варламов В.П., Тихонов В.Е., Ямсков И.А., Даванков В.А. Выделение высокоочищенной хитиназы Streptomyces kurssanovii на модифицированном хитине // Биотехнология. 1993. - № 2. - С. 25-28.

66. Имшенецкий A.A. Микробиологические процессы при высоких температурах. М.-Л.: Изд-во АН СССР, 1944.

67. Иоффе М.Л., Максимова Г.Н., Цыганкова Н.В., Жучков В.Н. Исследование биологического действия денуклеинизированного продукта, полученного из паприна //Биотехнология. -1990. № 6. - С. 70-72.

68. Калакуцкий J1.B., Никитина Е.Т. К анализу явлений "естественной" изменчивости у актиномицетов. // Успехи микробиологии. — 1976. — Т. 11. С. 67-100.

69. Калунянц К.А., Голгер Л.И., Балашов В.Е. Оборудование микробиологических производств. М.: Агропромиздат, 1987. - 398 с.

70. Калебина Т.С., Ермакова С.А., Кулаев И.С. Дрожжелитическая активность культуральной жидкости Bacillus brevis // Микробиол. — 1985. -Т. 54, вып.З. С. 402-405.

71. Калунянц К.А., Ездаков Н.В., Пивняк И.Г. Применение продуктов микробиологического синтеза в животноводстве. Вып.1. — М.: Колос, 1980.

72. Квасников Е.И., Исакова Д.М. Физиология термотолерантных микроорганизмов. -М.: Наука, 1978.

73. Квасников Е.И., Исакова Д.М., Елисеева Г.С., Лойко З.И. Закономерности роста и метаболизма термотолерантных микроорганизмов на средах с углеводами и углеводородами // Прикл. биохим. микробиол. 1977. -Т. 13, вып. 6.-С. 881.

74. Килочек Т.П. Биосинтез литических ферментов штаммом Streptomyces ге-cifensis var. lyticus 2435 и некоторые аспекты его регуляции // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Днепропетровск, 1988. — 16 с.

75. Килочек Т.П., Бабенко Ю.С. Исследование роста, биохимических процессов и биосинтеза литических ферментов Streptomyces recifensis var. lyticus // Биотехнология. 1992.-№ 2.-С. 10-13.

76. Кислухина O.B. Разработка технологии ферментативного лизиса микроорганизмов. // Автореф. дисс. .докт. техн. наук.- М., 1981 — 46 с.

77. Кислухина О.В., Калунянц К.А., Аленова Д.Ж. Ферментативный лизис микроорганизмов.-Алма-Ата: Рауан, 1990.

78. Кишковский З.Н., Коновалов С.А., Воротило С.П., Кособлудская Н.С., Павлова Е.А., Тохмахчи Н.С., Каталевец И.С. Способ производства вин. А. с. №1253129.- 1986 г.

79. Коваленко Э.А., Павлова И.Н. Некоторые биологические свойства а-маннаназы Rhodococcus erythopolis I/ Микробиология. 1986. - T. 55, вып. 1. - С. 81-85.

80. Коновалов G.А., Воротило С.П. Способ получения литических ферментов. // A.c. СССР №432189.-1974.

81. Коновалов С.А., Воротило С.П. Исследование литических ферментов и перспективы их использования // Прикл. биохим. микробиол. -1977. Т. 13, вып. 6.-С. 819-828.

82. Коновалов С.А., Котов В.Б. Селекция микроорганизмов продуцентов ферментов. - М., 1970. - С. 31-51.

83. Коссиор JI.A., Шаронова Н.Б., Блинов Н.П. Особенности ферментативного лизиса клеток штамма Ayreobasidium pullulans (D. By.) Arnaud — продуцента аубазидана // Микол. фитопатол. 1992. - Т. 26, № 3.

84. Кудряшова O.A., Юрлова H.A. Изучение естественной изменчивости Aureobasidium pullulans, штамм 11 — продуцента экзополисахарида // Микробиология. 1997. - Т. 66, № 3 - С. 354-357.

85. Кудухашвили П.Г., Гуриелидзе М.А., Патарая Д.Т. Исследование литиче-ской активности актиномицетов, выделенных из разных почв Грузии // Прикл. биохим. микробиол.-2001.-Т. 37, №3.-С. 289-291.

86. Кузнецов В.Д., Шмакова З.Ф., Брико Н.И. Способ получения эндо-N-ацетилмурамидазы и комплекса лизирующих ферментов // Патент СССР № 17812966. Опубл. 15.12.92. - Бюл. № 46.

87. Кузнецов В.Д., Шмакова З.Ф., Брико Н.И. Влияние питательных сред на состав комплекса литических ферментов Streptomyces levons // Микробиол. -1993. Т.62, вып. 3. - С. 470-476.

88. Куплетская М.Б., Авсюк И.В., Головкина Г.П., Григорян А.Н., Егоров Н.С. Использование ферментативного гидролизата дрожжей рода Candida для выращивания бактерий при получении аминокислот // Прикл. биохим. микро-биол.- 1981.-T. XVII, вып. З.-С. 389-399.

89. Лаврикова В.В., Крашенинникова Т.К., Юдина Т.Г. и др. Влияние аэрации на развитие и биологическую активность Bacillus thuringiensis ssp. kurstaki шт. z-52. Рук. деп. в НПО Медбиоэкономика. М., 1991. - 15 с.

90. Лавровский С.Н., Левашова Г.Ф., Трошкина Д.М. Способ получения ли-зостафина // Патент России № 2143489. 1999. - Бюл. № 36.

91. Латов В.К., Бабаян Т.Л., Гордиенко C.B., Коган A.C., Цыряпкин В.А., Беликов В.М. Комплексная переработка дрожжевой биомассы // Биотехнология. -1990. — № 3. С.14-18.

92. Логинова Л.Г., Головачева P.C., Головина И.Г., Егорова Л.А., Позмогова И.Н., Хохлова Ю.М. Современные представления о термофилии микроорганизмов. М. : Наука.- 1973.

93. Логинова Л.Г., Усайте И.А., Серегина Л.М. Непигментированный акти-номицет Thermoactinomyces vulgaris продуцент протеолитических ферментов. // Прикл. биохим. микробиол. - 1980. - T. XVI, вып. 1. - С. 24-28.

94. Маркович H.A., Кононова Г.Л., Литические ферменты Trichoderma и их роль при защите растений от грибных болезней (обзор) // Прикл. биохим. мик-робиол. 2003. - Т. 39, № 4. - С. 389-400.

95. Марченкова Т.В. Исследование влияния условий развития на гетерогенность микробной популяции //Автореф дисс. канд. биол. наук. — Пущино, 1986.

96. Мелентьев А.И., Усанов Н.Г., Логинов О.Н. Патент РФ № 1743019. -Опубл. 23.03.93.

97. Могутов М.А., Пушкарская Т.А., Великодворская Г.А. Генетическая инженерия целлюлаз: современное состояние проблемы // Биотехнология. -1990. — № 5. С. 3-11.

98. Молчанов А.П., Соколов А.К. Получение посевного материала в производстве лизина // Биотехнология. — 1985. № 6. - С. 106-110.

99. Морозова Е.С. Генетика и селекция продуцентов целлюлаз. //В кн.: «Проблемы биоконверсии растительного сырья». -М., Изд-во «Наука».-1986.-С. 59-98.

100. Мосичев М.С., Складнев A.A., Котов В.Б. Общая технология микробиологических производств. М.: Легкая и пищевая пром-ть, 1982. - 264 с.

101. Нестеренко Е.А., Петрова Н.Т., Павлова Н.М., Шишкова Э.А., Бравова Г.Б. Лизофунгин ферментный препарат миколитического действия. // «Современная микология в России». — Тезисы докл. Первого съезда микологов России. - Москва, 2002 г. - С. 239.

102. Нигматуллин P.P., Брык М.Т., Вовнянко Е.К. Мембранные очистка и концентрирование инвертазы из дрожжей Saccharomyces cerevisiae II Биотехнология. 1993. - Т. 5. - С. 26-31.

103. Никулина Г.И. Обзор методов колориметрического определения фосфора по образованию «молибденовой сини». М.: Наука - 1945.- С. 33-35.

104. Нуцубидзе H.H., Клесов A.A. Получение и слияние грибных протопластов // Биотехнология. 1990. - № 3. - С. 49-56.

105. Образцова И.Н., Зверева Е.А., Нуцубидзе Н.Н. Ферментный комплекс высшего базидиального гриба Pleurotus salignus, получение и регенерация протопластов // Тез. докл. всесоюзн. конф. — Черновцы, 1991. —Т. 1. С. 193.

106. Овчарова А.К. Протеолитические ферменты термофильного акгиномицета Micromonospora vulgaris шт.42//Автореф. дисс. канд. биол. наук. -М., 1968. -37 с.

107. Олейничук С.Т., Шевченко В.И., Левандовский Л.В., Смельянчик Т.К. Применение микрофильтрации для выделения продуктов в биотехнологических процессах // Мембранные технологии в медицине и биотехнологии: Тез. докл. Всес.конф.-М., 1991.-С. 11-12.

108. Орещенко Л.И., Шишкова Э.А., Григорьев Е.Ф., Карташова С.Е., Удовенко Л.В. Использование асбесто-целлюлозных пластин для очистки и стерильной фильтрации ферментных растворов // Биотехнология. 1986. - № 2. - С. 92-96.

109. Осадчая А.И., Кудрявцев В.А., Сафронова Л.А. Влияние микроэлементов на накопление биомассы и экзополисахаридов штаммами Bacillus subtilis II Микробиол. ж. 2000. - Т. 62, № 1. - С. 20-29.

110. Павлова И.Н. Биосинтез маннаназы некоторыми почвенными микроорганизмами // Прикл. биохим. микробиол. 1980. - Т. XVI, вып. 5. - С. 694-698.

111. Павлова И.Н., Тиньянова Н.З. Выделение и характеристика микроорганизмов с маннаназной активностью // Прикл. биохим. микробиол. — 1980. Т. XVI, вып. 4.-С. 578-583.

112. Панкратов А.Я., Иванова Л.А. Влияние источника углерода и азотного питания на рост и биосинтез протеолитических ферментов глубинной культурой Actinomyces acidoresistans 1403 //Микробиологич. пром-ть, ОНТИТЭИ мик-робиопром, НТРС, 1983. -№ 4. - С. 6.

113. Патарая Д.Т., Цикеридзе Л.Г., Воротило С.П., Нуцубидзе Н.Н. Способность образовывать литические ферменты различными Actinomycetales // Прикл. биохим. микробиол. 1987. - T. XXI11, вып. 2. - С. 169-172.

114. Петрова JIJL, Подсухина Г.М., Селезнева А.А. Применение ультрафильтрационного метода для выделения холестериноксидазы микробного происхождения // Прикл. биохим. микробиол. 1979. - T. XV, вып. 6. - С. 878-892.

115. Плешков В.Н. Практикум по биохимии растений М. : Колос, -1976.- С. 106,119.

116. Покровский А.А. Медико-биологические исследования углеводородных дрожжей. М.: Наука, 1972. - С. 103-109.

117. Полякова И.Я. Влияние противогрибковых препаратов на морфологию популяции патогенных грибов (экспериментальное исследование). // Авторе-фер. дисс. . .канд. мед. наук. -1984 20 с.

118. Порфирьева, О.В., Юсупова Д.В., Зоткина H.JL, Соколова Р.Б., Габдрах-манова JI.A. Хитинолитический комплекс Serratia marcescens и особенности его биосинтеза. //Микробиологи.я.-1997.-Т. 66, №3.-С. 347-353

119. Прокофьева-Бельговская А.А. Строение и развитие актиномицетов. M., 1963.

120. Расулундзатуву М.З. Биосинтез и исследование протеолитического комплекса Streptomycesfulvovirides ВКМАс-161 II Автореф дисс. . канд. техн. наук.-Воронеж, 1989.

121. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. «PJIC-2002». Москва, 2001.- 1072 с.

122. Родионова Г.С., Дусург-Заде Д.Л., Бравичева Р.Н., Осипова В.Г., Бокова В.П. Влияние температуры на накопление биомассы дрожжами при культивировании на среде с н-парафинами // Микробиол. пром-ть. 1971. - № 6А. - С. 19.

123. Русинов С.Ф. Направленная селекция высокопродуктивных штаммов Pénicillium chrysogenum. II Прикл. биохим. и микробиол.-1994.-Т. 30, №6.-С.884-888.

124. Рухлядева А.П., Гордеева М.Г. Метод определения активности амилоли-тических ферментов // Ферм, и спирт, пром-ть. 1966. - № 1. — С. 9-11.

125. Савченков С.Н., Мосин В.А. Белковые продукты из дрожжей, их состав и биологическая ценность // Труды НПО Биотехнология. — 1988. Вып. 1. - С. 52-57.

126. Санникова В.М., Бондарь И.В., Стужук Г.М. Определение времени наступления физиологической зрелости посевного материала Blakeslea trispora — продуцента p-каротина // Биотехнология. 1985. - № 5. - С. 107-110.

127. Саркисова М.А. Применение УФ-облучения для получения мутантов у спорыньи // Микол. фитопатол. 1987. - Т. 21, вып. 3. - С. 254-259.

128. Северин А.И., Таусон Е.Л., Степная О.А., Кулаев И.С. Исследование специфичности гидролиза клеточных стенок S. aureus 209Р литическим препаратом Pseudomonas lytica. //Прикл. биохим. и микробиол.-1988.-Т. 24, В.2.-С. 187-191.

129. Середенко Е.А., Гарбузов А.В. Оценка уровня изменчивости признака ан-тибиотикообразования у Streptomyces fradiae продуцента тилозина // Биотехнология. - 1985.-№ 3. - С. 64-67.

130. Скворцова М.М., Сергеева А.В., Лазарева В.В., Лазарев И.Т., Самойлович О.В., Вагина О.Ю., Сарнова И.П. Влияние механического перемешивания на биосинтез хлортетрациклина в промышленных ферментерах // Биотехнология. 1987. - Т. 3, № 2. - С. 244-248.

131. Соседов О.Н., Коновалов С.А., Нахапетян Л.А. Р-1,3-глюканазы из Actinomyces griseinus 11.// «Химия и биохимия углеводов». Тезисы докл. VI1 Все-союзн. конф. — Пущино, 1982. — С.22.

132. Старостина Н.Г., Кононова С.В., Ратнер Е.Н., Циоменко А.Б. Новые дрожжелитические препараты из актиномицетных культур // Биосинтез и деградация микробных полимеров. Фундаментальные и прикладные аспекты: Тезисы докл. конф. Пущино, 1995. - С. 50.

133. Стеблюк П.Л. К комбинированному действию антибиотиков и некоторых ферментов на микробы. // Материалы итоговой научной конференции.-Киев, 1970.-С. 39-40.

134. Стент Г., Калиндар Р. Молекулярная генетика. М.: Мир, 1981.

135. Стояченко И.А., Варламов В.П. Очистка и некоторые свойства хитиназ из

136. Streptomyces kurssanovii II Биотехнология. — 1993. № 2. — С. 29-36.

137. Стрельникова Л.И., Цаплина И.А., Логинова Л.Г., Калунянц К.А. Некоторые закономерности синтеза нейтральной протеазы Bacillus subtilis И Прик. биохим. микробиол. 1979. - T. XV, вып. 4. - С. 533-538.

138. Супермутагены.— М.: Наука, 1966.

139. Таусон Е.Л., Северин А.И., Кулаев И.С. Некоторые физико-химические свойства литического препарата, продуцируемого культурой Pseudomonas lytica II Прикл. биохим. микробиол. -1986. T. XXI1, вып. 6. — С. 750-758.

140. Тиунова H.A. «ß-глюканазы и хитиназы микроорганизмов». // Автореф. дисс . .докт. биол. наук. — Москва, 1987. 28 с.

141. Тиунова H.A., Фениксова Р.В., Кобзева H.H., Кузнецова В.Д., Костычева Л.И., Родионова H.A., Итомленските И.В., Пириева Д.Е. Гидролитические ферменты микроорганизмов // Прикл. биохим. микробиол. — 1971. № 76. — С. 456.

142. ТУ 9231-010-00479563-99. Целлюлаза Г 20Х.

143. ТУ 9291-034-34588571-2001. Мультиэнзимная композиция МЭК-СХ-3.

144. Тубольцев А.К., Дудник Н.В., Строгов С.Е., Фаустов B.C. Экспериментальная оптимизация состава питательной среды на основе сернокислотного гидролизата казеина // Биотехнология. 1986. - № 4. - С. 96-101.

145. Уонг Д., Кооней Ч., Дейман А. и др. Ферментация и технология ферментов. М.: Легкая и пищевая пром-сть, 1983. - 336 с.

146. Уотсон Дж. Молекулярная биология гена. М.: Мир, 1978.

147. Усайте И.А., Яковлева М.В. Изменение состава популяции в процессе хранения продуцента протеазы Str. vulgaris в лиофильно высушенном состоянии // Прикл. биохим. микробиол. 1980. -№ 6. - С. 925-930.

148. Фатеева Л.И., Голубкова Л.С., Поляк М.С. Терапевтические свойства новых лекарственных препаратов террилитина.// Всесоюзная научно-практическая конференция, г. Черновцы. Тезисы докл.- 1990.- С.117.

149. Федоренко Б.Н. Ферменты и мембраны: научные основы взаимодействия. Монография. М., 2002. - 195 с.

150. Феоктистова Н.В., Знаменская Л.В., Лещинская И.Б. Влияние ионов металлов на синтез внеклеточных ферментов спорообразующими бактериями. // Биол. науки. 1992. - № 2 - С. 18-24.

151. Феофилова Е.П. Клеточная стенка грибов. — М.: Наука, 1983. 247 с.

152. Феофилова Е.П; Прогресс в области экспериментальной микологии как основа для создания современных биотехнологий. // Микробилогия.-1997.-Т.66, №3.-С.302-309.

153. Халмурадов А.Г., Саттарова Р.С., Кононова Э.В. Выделение Р-1,3-глюканазы из гриба Verticillium dahliae и некоторые её свойства // Биохимия. -1996.-Т. 61, вып.4. С. 643-647.

154. Хесин Р.Б. Непостоянство генома. — М.: Наука, 1985. С. 72.

155. Цаплина И.А., Миллер Ю.М. Изучение кислородного режима в процессе развития термофильной бактерии Bacillus brevis — продуцента протеазы // Микробиол. 1972. - Т. XL1, вып. 6.-С. 1013-1017.

156. Черкасова Г.В., Лихогрудова Л.Е. Оптимизационный многокритериальный выбор питательных сред для культивирования продуцентов целлюлаз. // Биотехнология.-1985.-№4.-С.53-57.

157. Шеклаков Н.Д., Полякова И.Я., Гришина O.E. Противогрибковая активность лизофунгина in vitro. II Вопросы микологии. Вып. 17.-Горышй, 1981 .-С. 173-179.

158. Шерашов С.Г., Иоффе М.Л., Кошелева Н.И., Трыкина Т.А. Исследование действия изолята пищевого белка микробного синтеза на лабораторных животных // Биотехнология. 1985. - № 5. - С. 86-92.

159. Ширшова Г.А., Лысенко С.Е. Изучение естественной изменчивости Strep-tomyces lavendulae продуцента протеолитических ферментов // Микробиология. - 1991. - Т. 60, вып. 6.-С. 79-82.

160. Шкидченко А.Н. Пороговые концентрации кислорода при культивировании микроорганизмов // Прикл. биохим. и микробиол. -1978. Т. X1V, вып. 2. - С. 208-210.

161. Шкляр Б.Х. Ферментативный лизис дрожжей. — Минск: Наука и техника.- 1977,- 192 с.

162. Шкляр Б.Х., Шукан. Оболочка дрожжевой клетки как индуктор ферментов, вызывающих ее лизис. //Прикл. биохим. и микробиол.- 1975.-Т. XI, вып. 3.- С.ЗЗ 1-335.

163. Штрейблова. Архитектоника клеточных стенок дрожжей // Известия АН СССР. Сер. биол. 1977. - № 3 - С. 410-419.

164. Шурыгина А .Я., Злищева Э.И., Роженко Т.Г., Воротило С.П. Применение препарата литических ферментов для разрушения клеточных стенок микроорганизмов с целью выделения из них ДНК. // Прикл биохим. и микробиол. — 1979.-Т. 15, в.5 С.699-701.

165. Щекина Е.В., Григорьева С.П., Полумиенко А.Л. Получение клеточных лизатов дрожжей с целью выделения крупных фрагментов митохондриальной ДНК. // Прикл биохим. и микробиол. 1983 - Т. 19, в. 2.- С. 240-243.

166. Эль-Регистан Г.И., Бабаян Т.Л. Явление автолиза у микроорганизмов. // Обзорная информация. Москва: ЦБНТИ Минмедбиопрома СССР.- 1987-В.2.-С. 52.

167. Югова Л.В., Черемнова Т.А., Чернова Г.А., Кузнецова Т.А. Зависимость биосинтеза грибной ß-галактозидазы от газового массообмена // Биотехнология медицине и народному хозяйству. - М.: ВНИИСЭНТИ, 1990. - Т. 2. - С. 5-9.

168. Юркевич В.В., Зуева Е.С. Белки среды как факторы регуляции синтезасекретируемой протеиназы // Биохимия. 1982. - Т. 47, № 10. - С. 1670.

169. Юркевич В.В., Шурыгииа H.H. Механизм влияния крахмала на биосинтез а-амилазы Aspergillus oryzae //Прикл. биохим. микробиол. -1972. — Т.8, № 6. — С. 515-519.

170. Юсупова Д.В, Порфирьева О.В., Соколова Р.Б., Петухова Е.В. Особенности синтеза внеклеточной хитиназы Serratia macerans II Биол. науки. 1992. -№2.-С. 51-57.

171. Яковлева М.Б. О литической активности ферментов Thermoactinomyces vulgaris //Термофильные микроорганизмы в практике н/х. — М., 1985.

172. Яковлева М.Б., Усайте И.А. Влияние посевного материала и условий культивирования на протеолитическую активность Thermoactinomyces vulgaris РА11 4а И Прикл. биохим. микробиол.-1981. Т. XVII, вып. 1.-С. 96-101.

173. Antimycotic pharmaceutical compositions containing enzymes. // Patent specification 1542.848. -1979 (127).

174. Bien Malgozzata, Witkowska Danuta. Orrzymywanie mutantow Trichoderma viride M 4-4 z podwyzszonaaktywno'scia celulolitycz na przy uzyciu etylenoiminy // Zesz. nauk. AR Wroclawiu. Technol. zyw. 1991. - V.6. - P. 219-227.

175. Biziulevichius G.A, Arestov I.G. Safety of lysosubtilin per os in mice, rabbits and calves // Vet Res. 1997. - V.28, № 4. - P. 385-395.

176. Bohdziewicz J., Bodzek M. Ultrafiltracja metoda wspomagajaca procesy bio-chemiszne // Wiad. Chem. 1990. - V. 44, № 5-6. - P. 411-436.

177. Brito N, Falcon M.A., Carnicero A., Gutierrez-Navarro A.M., Mansito T.B. Purification and peptidase activity of a bacteriolytic extracellular enzyme from Pseudomonas aeruginosa II Res Microbiol. 1989. - V. 140, № 2. - P. 125-137.

178. Caldentey J., Bamford D.H. The lytic enzyme of the Pseudomonas phage phi 6. Purification and biochemical characterization // Biochim Biophys Acta. — 1992. — Sep. 4; V. 1159, № 1. P. 44-50.

179. Chet I. Innovative Approaches to Plant Disease Control / Ed. Chet I.N.Y. Wiley.- 1987.-P. 137-160.

180. Cohen-Kupiec R., Broglie K.E., Friesem D., Broglie R.M., Chet I. Molecular characterization of a novel beta-l,3-exoglucanase related to mycoparasitism of Trichoderma harzianum II Gene. 1999. - V. 226, № 2. - P. 147-154.

181. Ed. Kreger-van Rij N.J.W. The Yeasts. A Taxonomic stady // Amsterdam: Elsevier. 1984. - P. 1082.

182. El-Sayed El-S.A., Errat S.M., Ghaly M.F., Mansour M., El-Bohey M.A. Purification and characterization of two chitinases from Streptomyces albovinaceus S-22 // Wirld J. Microbiol. Biotechnol. -2000. -V. 16, №1. P. 87-89.

183. Dedynkhina E.G., Eroshin V.K. Essential metal ions in the control it microbial metabolism // Process Biochem. 1991. - V. 26, № 1 - P.31-37.

184. De La Cruz.J., Rey M., M.Lora J., Hidalgo-Gallero A., Domínguez F., Pintor-Toro J.A., Llobell A., Benites T. Carbon source control on p-glucanase, citobiase and chitinase from Trichoderma harzianum II Arch. Microbiol. 1993. —V. 159. - P. 316-322.

185. Dermastia M., Komel R. Release and regeneration of protoplasts from Coch-liobolus lunatus II Period, biol. 1991. - V. 93, № 3. - P. 411-415.

186. Desnuelle P. The Enzymes / Ed. Rud V. 4, № 1. - P. 128.

187. Doi K., Doi A., Ozaki T. Heterogeneity of the lytic activity for yearst cell wall observedamong the component of Arthrobacter glucanase // Ibid. — 1973. V. 78, № 3. P. 667-670.

188. Ettler P. The determination of optimal inoculum quality for submerse fermentation process // Collect. Crechosl. Chem. Commun. 1992. - V.57, № 2. - P. 303-308.

189. Ferreira N.E., Jose U.C. Purification and characterization of an endo-a-glucanase from Trichoderma harzianum//Can. J.Microbiol.- 1996.— V.42,№ 10-P. 1039-1044.

190. Frede C., Christ D., Lammler C. Streptolytic activities of a lytic enzyme from Staphylococcus hyicus II Zentralbl Bakteriol. 1989. -V. 271, № 1. - P. 54-60.

191. Fuchs R., Rice P., Cameron G.N. Molecular biological databases present and future. //Trends Biotechnol. - 1992. -V. 10, № 1-2. - P. 2237-2239.

192. Gacto M., Vicente-Soler J., Cansado J., Villa T.G. Characterization of an extracellular enzyme system produced by Micromonospora chalcea with lytic activity on yeast cells II J. Appl. Microbiol. 2000. - V. 88, № 6. - P. 961.

193. Gerbaux V., Meistermann E., Cottereau P., Barriere C., Cuinier C., Berger J.I., Villa A. Use of Iysozyme in ehology. 1999. -V. 38, № 4. - P. 22.

194. Glazebrook M.A., Vining L.C., White R.L. Growth morphology of Streptomy-ces akiyoshiensis in submerged: Influence of pH, inoculum and nutrients // Can. J. Microbiol. 1992. - V. 38, № 2. - P. 98-103.

195. Guilloux-Benatier M., Puech B., Feuillat M. Influence of exogenous glucanase activity on the yeast macromolecules in wine // Vitis: Viticulat. Enol. Absir. 1999. -V. 38, №4.-P. 28.

196. Haran.S., H. Schickler, A. Oppenheim, I. Chet, Differential expression of Trichoderma harzianum chitinases during mycoparasitism II Phytopathology. — 1996. -V. 86:-P. 980-985.

197. Jacob F., Monod J. Genetic regulatory mechanisms in the synthesis of proteins //J. Mol. Biol. 1961. - V. 3. - P. 318.

198. Kalebina T.S., Rudenskaya G.N., Selyakh I.O., Khodova O.M., Chestakhina G.G., Stepanov V.M., Kulaev I.S. Serine proteinase from Bacillus brevis: lytic action on intact yeast cells // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1988. - V. 28. -P. 531-536.

199. Karuo Saeki, Junko Iwatta, Yasuo Watanabe, Youichi Tamai, Naboru Ishii, Kenyaro Kodama. Идентификация штамма, использующего маннан клеточной стенки дрожжей. // Эхимэ дайгаку ногакубу кис = Mem. Coll. Agr. Ehime. Univ-1992.-36,№2.-P.485-495.

200. Kim S.Y., Ohk S.H., Bai D.H., Yu J.H. Purification and properties of bacteriolytic enzymes from Bacillus licheniformis YS-1005 against Streptococcus mutan //. Biosci. Biotechnol. Biochem. 1999. -V. 63, № 1. - P. 73-77.

201. Kitamura K., Kaneko Т., Yamamoto Y. Lysis of viable yeast cells by enzymes of Ar-throbacter luteus. 111. Purification and properties of an enzyme zymolyase, which lyses viable yeast cells // J. Gen. Appl. Microbiol. 1974. - V. 20, №.6. - P. 323-344.

202. Kitamura K., Yamamoto Y. Purification and properties of an enzyme zymolyase, which lyses viable yeast cells // Arch. Biochem. Biophys. — 1972. T. 153, v.2. -P. 403-406.

203. Kitamura K., Kaneko Т., Yamomoto Y. Lysis of viable yeast cells by enzymes of Arthrobacter luteus 1. Isolation of lytic strain and studies on its lytic activity // J. Gen. Appl. Microbiol.-1972.-V. 18.-P. 57-71.

204. Latzko F., Zich Т., Hampel W. P-1,3-Glucanases. Enhanced formation by Arthrobacter И Lebensm. Biotechnol. 1993. - № 1. - P. 11-12.

205. Lipke.P., R.Ovalle. Yeast cell walls: new structures, newchallenges // J. Bacterid.-1998.-V. 180.-P. 3735-3740.

206. Ljubinka V. Aminopeptidases of the genus Streptomyce. -1999. V. 3 7, № 1. - P. 29-37.

207. Loginova L.I., Usaite I.A. Conditions favouring active protease biosynthesis in the thermotolerant culture of Thermoactinomyces vulgaris PA 11 4a // Acad. Wiss. DDR. Abt. Nath., Naturwiss., Techn. 1981. - № 3. - P. 325.

208. Lorito.M., G.E.Harman, C.K.Hayes, R.M.Brodway, A.Tronsmo, S.L.Wo, A.di Pietro. Chitinolytic enzymes produced by Trichoderma harzianum: antifungal activity of purified endochitinase and chitobiosidase // Phytopathol. 1993. -V. 83.-P. 302-307.

209. Magazanic B. Catabolite repression //Cold. Spring Harbor Symp. Quant. Biol. -1961.-V.26.-P. 249-256.

210. Mansour F.A., Mohamedin A.H. Enzymes of Candida albicans cell wall lytic system prodaced by Streptomyces thermodiastaticus // Acta microbial, immunol. hund. 2001. - V. 48, № 1.-P. 53-65.

211. Mendoza N.S., Cubol F.S., Paerio E.G., Joson J.M. Isolation and characterization of a mannolytic bacterium.//Philipp. J. Sci. 1992.-V. 121, №2.-P. 101-108.

212. Menzel K.-D., Schulz V., Riesenbthg D. Verfahren zur steuerung des wachstums von acrob-submersen mikroorganismen-kulturen // Патент ГДР №295867.- 1991.

213. Molano J., Bowers В., Cabib E. Distribution of chitin in the yeast cell wall

214. J. Cell Biol. 1980. - V. 85, № 2. - P. 199-212.

215. Okazaki Katsuichiro, Kato Fumitomo, Watanabe Norihiko, Yasuda Setsuko, Masui Yoshihiro, Hayakawa Shigeru. Очистка и свойства двух хитиназ из Streptomyces sp. J-13-3IIBiosci., Biotechnol. andBiochem.- 1995.-V. 59, №8.-P. 1586-1587.

216. Popper L., Knorr D. Nicht-thermische Inaktivierung von Microorganismen duren an-timikrobielle Enzymsysteme//Bioengineering. 1993.-V. 9, № l.-P. 27-30,33-34.

217. Porto A.I.F., Campos-Takaki G.M., Lima Filho J.I. Effects of culture conditions on protease production by Streptomyces clavuligerus growing on soy bean flour medium // Appl. Biochem. Biotechnol. 1996. - V. 60, № 2. - P. 115-122.

218. Phae C.G., Shoda M., Kubota H. Suppressive Effect of Bacillus subtilis and It's Products on Phytopathogenic Microorganisms // J. Ferm. Bioeng. 1990. — V.69, № 1. - P. 1 -7.

219. Phaff H. J. Enzymatic yeast cell wall degradation // Advances in Chemistry Series. 1977. - V. 160. - P. 244-282.

220. Qadri S.M.Hussain, Williams R.P. Glucose repression of prodigiosin biosynthesis // Abstrs 79-th Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol., Los Angeles, Calif., 1979.- Washington, D.C., 1979. P. 109.

221. Reetarani S. P., Vandana G., Mukund V. D. Chitinolytic enzymes: an exploration // Enzym. Microbial.Technol. 2000. - V. 26. - P. 473-483.

222. Reissbrodt R., Paul P. Verfahren zur Herstellung von Lysostaphin. Pat. №4033752. -1992.- №9.

223. Romaguera A., Menge U., Breves R., Diekmann H. Chitinases of Streptomyces olivaceoviridis and significance of processing for multiplicity. // J. Bacteriol. — 1992.- V. 174, № 11. P. 3450-3454.

224. Ruiz-Herrera J. Fungal cell wall: structure, synthesis and assembly // CRC Press. Boca Raton. Fla. 1992.

225. Sadana I.C., Shewale I.W., Deshpande M.V. High cellobiase and xylanase production by Sclerotium rolfsii UV-8 mutant in submer gen culture // Appl. Environm. Microbiol. 1980. - V.39. - P. 935-936.

226. Sandhu D.K., Sidhu M.S. Production of P-glucosidase by Trichoderma harzia-num IIXI11 Intern. Congr. Microbiol.: Programm and Abstr. Boston (USA), 1982. -P. 162.

227. Sandhu D.K., Sidhu M.S. Introduction, localization and glucose represcion of d-glucosidase in Trichoderma longibrachiatum II J. Basis Microbiol. 1985. -V. 25, №9.-P. 591-596.

228. Saunders J.R. Antigenic variation in infectious diaseases // Oxford. Washington, D. C., 1986.-P. 57-76.

229. Selitrennikoff C.P. Antifungal Proteins //Appl. Env. Microb. 2001 - P. 2883-2894.

230. Sen S., Abraham T.K., Chakrabarty S.L. Improvement of Cellulolutic Activity of a Thermophilic Fungus // Und Intern. Symp. Bioconversion and Biochem. Eng., March, 1980. Delhi (India), 1980. - P. 13.

231. Sietsma J.Y., Wosten H.A.B., Wessels J.G.H. Cell wall growth and protein secretion in fungi. // Can. J. Bot.-l995.-73.-P.388-395.

232. Strominger J., Chuysen J.M. Mechanisms of enzymatic bacteriolysis cell walls of bacteria are solubilized by action of either specific carbohydrases or specific peptidases//Science. 1967. - V. 156.-P. 213.

233. Sugimoto H. Lysis of yeast cell wall by enzymes from Streptomyces II Agr. Biol. Chem.- 1967.-V. 31.-P. 1111.

234. Tabata S, Terui G. Studies on microbial enzymes active in hydrolyzing yeast cell wall. 1. Isolation of strain and culture conditions for enzyme formation // J. Ferm. Technol. 1962. - V. 40. - P. 366.

235. Tagava K., Okazaki K. Isolation and Some Cultural Conditions of Streptomyces Species Which Produce Enzymes Lysing Aspergillus niger Cell Wall // J. Ferm. Bioeng. 1991. - V. 71, № 4. - P. 230-236.

236. Tavares F, Sellstedt A. A simple, rapid and non-destructive procedure to extract cell wall-associated proteins from Frankia II J Microbiol Methods. 2000. -V. 39, №2.-P. 171-178.

237. Tooru I., Akifumi S., Iruru H.,Takehsi S. Скрининг микроорганизмов в компосте на способность продуцировать хитиназу и модель действия этих хитиназ // Mem. Coll. Agr. Ehime Univ. 1991 - V. 36, № 1. - P. 255-263.

238. Van Loon L.C. Patogénesis- related proteins // Plant Mol. Biol. 1985. -V. 116.-P. 111-116.

239. Vazquez-Garciduenas S., Lei-Morales C.A. Herera-Estrella A. Analysis of the (3-1,3-glucanolitic system of the bioconrol agent Trichoderma harzianumll Appl. Environ. Microbiol. -1998. V. 64, № 4. - P. 1442-1446.

240. Vinogradova K.A, Kirillova N.P, Polin A.N. Bacteriolytic enzymes produced by ac-tinomycetes. I. The physicochemical properties of the enzymes and the spectrum of their lytic action // Nauchnye Doki Vyss Shkoly Biol Nauki. 1988. - V.8. - P. 12-26.

241. Vinogradova K.A, Kirillova N.P, Polin A.N. Bacteriolytic enzymes produced by actinomycetes. II. Biosynthesis and areas of practical application // Nauchny.Doki Vyss Shkoly Biol Nauki. 1989. - V.2. - P. 5-16.

242. Vranska M., Biely P., Kratky Z. Enzymes of the yeast lytic sysrem produced by Artrobacter GJM-1 bacterium and their role in the lysis of the yeast cell wals H Z. Allg. Microbiol. B. 1977. - V. 17, №. 6. - P. 465-480.

243. West Thomas P., Reed-Hamer Beth. Influens of vitamins and mineral salts upon pullulan synthesis byAuerobasidiwnpullulansIIMicrobios.-1992.-V. 71,№287.-P. 115-123.

244. Whitaker A. Actinomycetes in submerged culture // Appl. Biochem. Biotech-nol. 1992. - V. 32-P. 23-35.

245. Witkowska Danuta, Stempniewiez Regina, Maj Agnieszka. Lytic enzymes of

246. Trichoderma and its utilization in yeast protoplast formation. // Polish Journal of Food and Nutzition Sxiences.-l999.-V.8/49, №2.-P. 245-252.

247. Wu H., Shimoi H., Ito K. Purification and Characterization of 3-1,6-Glucanase of Streptomyces rochei Application in the Study of Yeast Cell Wall Proteins // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2002. - V. 66, № 11. - P. 2515-2519.

248. Yamada Т., Nishida Y., Hisamathu M., Akaki M. Stady on yeast lytic enzyme from fungi //Bull. Fac. Bioresour., Mie Univ. 1991, № 5. - P. 133-139.

249. Yasuo A. Analysis of chitinolytic enzyme genes of a mycoparasitic bacterium Flexibacter sp. FL824A IIJRCAS Newslett. Inc. Collab. -1999. -№ 18. P. 5.

250. Yukikaru Y., Yukari O., Kenji N., Tsuyoshi M., Makoto K., Hideyuki M. Isolation, identification and effect of oxygen supply on cultivation of chitin and chitosan degrading bacterium. // Biosci., Biotechnol. and Biochem.-l 992.-56, № 8.-P. 1325-1326.

251. Zhernosekova I.V., Kilochek T.P. The effect of glucose on the biosynthesis of extracellular enzymes by Streptomyces recifensis var. lyticus 2435 and its mutants // Mikrobiol. Z. 2000. - V. 62, № 2. - P. 19-26.

252. Zlotnik H., Fernandez M.P., Bowers В., Cabib E. Saccharomyces cerevisiae mannoproteins from an external cell wall layer that determines wall porosity // J. Bacteriol. 1984. - V. 159, №3.-P. 1018-1026.

253. Zinkevichiute I.A., Shpokene A.P., Kuznetsov V.D., Andriushkevichiute R.A., Palubinskas V.I. Isolation and various properties of the lytic enzyme preparation from Streptomyces griseus //Antibiot Khimioter. 1988. - V. 33, № 2. - P. 94-96.199

Информация о работе

Петрова, Наталья Тихоновна
кандидата технических наук
Москва, 2005
ВАК 03.00.23

Диссертация

Разработка технологии получения препарата литических ферментов, расщепляющих клеточные стенки дрожжей и микроскопических грибов, с использованием мутантного штамма Streptomyces griseinus 11-84 - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы