Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка технологии получения препарата авермонмек и оценка его эффективности против паразитозов животных Монголии

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Разработка технологии получения препарата авермонмек и оценка его эффективности против паразитозов животных Монголии"

003474930

На правах рукописи

Бямбаа Бурэнбаатар

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА АВЕРМОНМЕК И ОЦЕНКА ЕГО ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВ ПАРАЗИТОЗОВ ЖИВОТНЫХ МОНГОЛИИ

03.00.23 - биотехнология 03.00.19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2009

003474930

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего професионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМиБ) и в Институте ветеринарной медицины Монголии.

Научные руководители: член-корр РАСХН, доктор биологических наук, профессор Девришов Давуд Абдулсемедович; академик РАСХН, доктор ветеринарных наук, профессор Василевич Федор Иванович.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Мирзаев Миканль Нурбагандович; доктор ветеринарных наук, профессор Архипов Иван Алексеевич.

Ведущая организация:

ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГУ «ВГНКИ»).

Защита диссертации состоится 30 июня 2009 г. в 12.00 часов на заседании дессертационного совета Д.220.042.01 в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина» (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23. Тел. (495) 37793-83).

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина».

Автореферат разослан » мая 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, профессор

Т.Н. Грязнева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В Монголии исторически сложилось традиционное пастбищное животноводство и успешно решаются проблемы увеличения поголовья скота, лечения животных при инфекционных и незаразных болезнях, их профилактики с учетом природно-климатических особенностей страны. Однако, несмотря на достигнутые успехи в области ветеринарии в борьбе с различными болезнями, паразитарные заболевания все ещё широко распространены и причиняют стране большой экономический ущерб.

Монголия занимает одно из ведущих мест в мире по количеству домашних животных -общая численность скота на 1 января 2009 года составляет 42 миллиона голов, на одного человека приходится 30 голов.

Для неуклонного роста поголовья сельскохозяйственных животных и дальнейшего повышения их продуктивности, важное значение имеет разработка технологии получения новых высокоэффективных лекарственных противопаразитарных препаратов.

Среди различных лекарственных средств, применяемых против паразитозов животных, ведущее место занимают препараты авермектинового ряда, обладающие более широким спектром действия, чем известные химические аналоги.

Ранее во многих странах мира широко применялся Ивомек, созданный учеными фирмы MSD Agvet (W.Campbell, V.Benz, 1984; W. Campbell, M.Easterbrook, 1985; J.Knox, K.Marbu-ry и др., 1989) и содержащий в качестве действующего вещества (ДВ) комплекс химически модифицированных авермектинов В,а и В,Ь-ивермектин.

Ивермектин является действующим веществом большинства зарубежных противопаразитарных препаратов, таких как Ивомек плюс, Ивомек премикс, Баймек, Пандекс, Ивомек пурон Цевамек, Ивидус, Ивосит, Эквалан и др.

Абамектин, моксидектин и клозантел используются в качестве действующего начала некоторых зарубежных противопаразитарных препаратов широкого спектра действия, таких как Дуотин, Цидектин, Флукивер и др.

Работы по созданию Российской (Советской) технологии биосинтеза авермектинов были начаты в конце 80-ых годов 20 века учеными НПО Биотехнология, МГП Бифидум и успешно завершились созданием препаратов Аверсект-1, Ниацид, Аверсект-2 (Мосин В.А., Дриняев В.А., Мирзаев М.Н. (1992,1994); Мирзаев М.Н., Девришов Д.А. и др. (1995).

В Монголии до настоящего времени разработка технологии получения высокоэффективных противопаразитарных препаратов широкого спектра действия на основе авермектинов или ивермектинов не проводилась.

Поэтому, исследования, направленные на создание новых для Монголии форм и композиций авермектиносодержащих препаратов широкого спектра действия, являются актуальными.

Цель и задачи работы. Целью работы является разработка технологии получения нового для Монголии противопаразитарного препарата в форме инъекции и изучение основных параметров его безопасности и эффективности.

3

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Оптимизировать компонентный состав препарата, содержащий авермектин, ивермек-тин и другие ингредиенты.

2. Изучить острую и хроническую токсичность препарата.

3. Изучить действие препарата на основные иммунобиологические показатели организма животных.

4. Установить эффективность препарата против паразитов животных.

5. Испытать препарат в производственных условиях.

6. Разработать нормативно-технические документы на препарат.

Научная новизна. Впервые разработана технология получения нового противопарази-тарного препарата не имеющего аналогов в Монголии, в форме инъекции на основе авермектина или ивермектина, этилового спирта, профилен гликола, глицеролформала и твина. Состав препарата обладает растворительными, каталитическими, молекулярно-ситовыми, противобактерицидными, наполнительными и укрепляющими свойствами.

Установлено, что препарат Авермонмек содержат такие активные вещества, как авермектин или ивермеюгин и обладает высокоэффективным действием против экто- и эндопаразитов домашних животных.

Установлено, что авермонмек относится к малотоксичным веществам. ЬО50 препарата составляет 46,783 мг/кг по действующему веществу.

Показано, что Авермонмек не оказывает отрицательного воздействия на иммунобиологический статус животных, не обладает гепатотоксическим действием.

Выявленная практическая значимость созданного препарата Авермонмек позволила рекомендовать его для широкомасштабного производства и внедрения в ветеринарную практику Монголии.

Практическая ценность работы. Для профилактики и лечения паразитозов домашних животных предложен новый препарат, содержащий в качестве действующего вещества авермектин или ивермектин. Результаты работы вошли в нормативно-технические документации (Государственный стандарт на производство препарата Авермонмек, Инструкция по проверке и контролю инъекционного раствора препарата Авермонмек и Наставления по применению препарата Авермонмек в ветеринарной практике Монголии) утвержденные уполномоченными государственными органами контроля и стандартизации.

Личный вклад соискателя. Представленная диссертационная работа является результатом семилетных научных исследований соискателя. Автору принадлежат организация и непосредственное осуществление исследований, анализ и теоретическое обобщение результатов, разработка нормативнотехнических документов на препарат Авермонмек-инъекционный.

Апробация. Результаты диссертационной работы доложены и обсуждены в форме научного отчёта и докладов на заседаниях Учёного совета Института ветеринарной медицины Монголии в 2001 и 2005 г, на научно-производственной конференции молодых

учёных (г. Улаанбаатар, 2008) и международной конференции "Актуальные проблемы АПК в Монголии, Сибири и Казахстане" (Новосибирск, 2008).

Публикации. По теме дессертации опубликовано 14 работ, в т.ч. 3 статьи в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа итожена на 156 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные иследования, обсуждение результатов, выводы, сведения о практическом использовании результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (223 источника, в т.ч. 62 иностранных автора), приложения. Иллюстрационный материал диссертации включает 28 рисунков и 28 таблиц.

Положения и результаты, выносимые на защиту.

1. Технология получения нового противопаразитарного препарата на основе авермекти-на или ивермектина, этилового спирта, пропиленгликола, глицеролформала и твина.

2. Данные по изучению токсикологической и иммунобиологической характеристики препарата.

3. Результаты апробации препарата в лабораторных и производственных условиях.

Материалы и методы исследований

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» в период с 2001 по 2008 гг. Отдельные эксперименты проводились также в научно-исследовательской лаборатории арахнологии, энтомологии и протозологии Института ветеринарной медицины Монголии. Опыты по изучению уровня заболеваемости и оценки эффективности препарата при лечении паразитозов животных проводили в хозяйствах Булганского и Убур-Хангайского аймаков Монголии. Эпизоотологические и клинико-диагностические исследования проводили с использованием современных методов и аналитического оборудования и приборов.

Натуральный авермектин и ивермектин с известным количеством ДВ, а также другие ингредиенты препарата (этиловый спирт, глицерол формал, пропиленгликоль) получали из сертифицированных фирм Китая и США.

При исследовании параметров токсичности препарата опыты проводили на животных-аналогах - беспородных белых мышах массой 16-25 г., крысах массой 110-120 г. и кроликах массой 2,2-2,7 кг. Токсическое действие препарата оценивали известными методами.

При изучении действия препарата на иммунобиологические показатели организма животных оценивали такие параметры гомеосгаза, как бактерицидная активность сыворотки (способность задерживать рост тесг-культуры в жидкой среде), активность лизоцима (способность фермента лизировать тест-культуру Micrococcus lysodekticus). Изучали динамику изменений количества Т- и В-лимфоцитов в крови подопытных животных. В качестве контроля брали эквивалентное количество животных-аналогов, которым препарат не применяли.

При изучении действия препарата на гематологические и биохимические параметры крови были использованы общеизвестные методы с применением гемометра Сали, камеры Горяева, анализатора ELAN-6160.

Противопаразитарная эффективность препарата оценивалась путем учета количества паразитов, их яиц и личинок в фекалиях до и после лечения известными методами гельминтоскопии; количество эктопаразитов подсчитывали до и после обработки препаратом Авермонмек на единицу площади кожного покрова животных.

Производственные испытания препарата проводили на крупном рогатом скоте и овцах.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты эпизоотологических исследований паразитозов в Монголии

Для оценки распространенности паразитарных заболеваний в хозяйствах Булганского и Убур-Хангайского аймаков были проведены исследования проб фекалий и соскобов кожи, а также подсчёт эктопаразитов животных в период 2002-2005 гг. Параллельно проводился анализ данных Главного Ветеринарного Управления Монголии, ежегодно фиксировавшего динамику паразитозов по хозяйствам всех провинций. По результатам исследований установлено, что в Монголии наиболее распространенным паразитозом крупного рогатого скота является гиподерматоз, коровьи вши и нематодоз. Экстенсивность инвазии в период 2002-2005 гг. находилась примерно на одном уровне. Также, во всех регионах установлена высокая инвазированносгь мелкого рогатого скота псороптозом, диктиокаулезом и нематодозом. При этом, у 80% животных обнаруживали как экто- так и эндопаразитов.

По полученным данным, наиболее инвазированными по гиподерматозу крупного рогатого скота являются хозяйства Батулзийского, Уянгского, Зуунбаян-улаанского, Хархоринского и Хужиртского сомонов, а в хозяйствах Арвайхээрского, Баян-ундурского, Богдского, Баруунбаян-уланского, Гучин-Усского и Тугругского сомонов Убур-Хангайского аймака животные поражены гиподерматозом в меньшей степени, но превалирует нематодоз. В хозяйствах Убур-Хангайского аймака широко распространены чесоточные клещи, коровьи вши, диктиокаулез. Среди обследованного поголовья овец отмечали высокую (80-100%) пораженность чесоточными клещами и гельминтозами.

Таким образом, в Монголии отмечается высокий уровень заболеваемости крупного и мелкого рогатого скота паразитозами.

Технология получения нового противопаразитарного препарата Авермонмек на основе ивермектина (и/или авермектина)

Препарат Авермонмек на основе ДВ авермектина или ивермектина содержит полный комплекс натуральных, т.е. негидрированных авермектинов, представленных комплексом из 2-х компонентов В1а и Bib, или химически модифицированных гидрированных авермектинов В1а и Bib. Для установления подлинности полученных субстанций ДВ из сертифициронных фирм Китая и США использовали метод хроматографии (ВЭЖХ). По результатам хроматографии было установлено соответствие ДВ требованиям по содержанию фракции В1а и Bib и их соотношений. Химическая чистота была на уровне

6

92,7%-99,3% по содержанию ДВ. Полученное из Китая ДВ содержало на 6-7% меньше активного вещества чем из США (98-99%).

Подбор ингридиентов и оптимизация рецептуры препарата Для получения готовой лекарственной формы препарата Авермонмек были проверены различные ингредиенты, разрешенные для применения в фармакологии. В качестве ингредиентов использовали этиловый спирт, пропиленгликоль, глицерол формал, этилацетат и ДВ авермектин или ивермектин (рис. 1).

1*-, 5%

Sales

х Ивермектин

* Глицеролформал Этиловый спирт

* Пропиленгликоль+твмн

Рис. 1. Процентное содержание ингридиентов в препарате Авермонмек

Состав вышеназванных ингредиентов обеспечивает получение стабильного ДВ и удобен при применении как лекарственного средства для мелких и крупных животных. В процессе получения лекарственного средства были оптимизицированы способы внесения ДВ авермектин или ивермектин в инъекционный раствор.

В процессе проверки эффективности лекарственного средства препараты вводили подкожно в различных дозах от 0,01 до 0,03 мл/кг массы тела. Наиболее оптимальной дозой являлись 0,02 мл 1%-го раствора на 10 кг массы животного. Повторное применение препарата зависит от характера заболевания и может быть использовано с интервалом в 14 дней.

Оптимизация последовательности операций при изготовлении препарата Авермонмек Консистенция готовых лекарственных препаратов является важнейшим показателем, определяющим многие качественные их характеристики. При изготовлении препаратов в форме инъекционного раствора важно, чтобы они не выпадали в осадок при хранении, не содержали посторонней микрофлоры, не обладали токсичностью, а действующее вещество было распределено равномерно по всему объему. Для приготовления готовых лекарственных средств в форме инъекционного раствора нами была разработана технология и создана производственная база, оснащенная современным оборудованием (рис. 2).

Лаборатория подготовки компонентов противопа-разитарного препарата

Лаборатория предварительного контроля, определение .<■ концентрации' в препарате

1

Лаборатория химического и биологического контроля готовой лекарственной формы

Рис. 2. Производственно-технологическая линия препарата Авермонмек

Технологический процесс произвоства авермонмека во многих странах имеет общие принципы, при этом имеются существенные различия в конмпонентном составе и последовательности их внесения.

Для ускорении процесса за счет повышения скорости растворения используемых субстанций, в аппарате поддерживалась температура 40-41°С. После полного растворения субстанций раствор выдерживали при температуре в пределах 30-35°С при постоянном перемешивании в течение 20-30 минут и вносили пропиленгликоль, затем стабилизатор и пролонгатор и охлаждали до 20-25°С. Полученный раствор проверяли на химический состав и активность.

Готовый по составу ингредиентов препарат фильтровали через стерилизующий филитр и далее проводили дозированный розлив и фасовку.

Преимущества предлагаемой технологической цепочки заключаются в том, что аппаратурная схема может функционировать в непрерывном последовательном режиме. При необходимости выпуска небольших партий препарата технологическая линия работает циклично.

Результаты экспериментальных исследований препарата Авермонмек Срок хранения и стабильность препарата

Наряду с эффективностью, одним из важнейших параметров лекарственных средств является их стабильность в течение длительного периода хранения в условиях, которые могут обеспечить на производстве определяющие коммерческие качества препарата.

В связи с тем, что нами были разработаны технологические параметры и компонентный состав препарата Авермонмек, отличающийся от имеющихся аналогов, производимых за рубежном, были проведены исследования стабильности полученного 1%-ного раствора ДВ при температурных режимах от минус 20"С до плюс 30°С, характерных для Монголии, и воездействию которых может подергнуться препарат в процессе транспортировки, хранения и на момент применения.

При кратковременном (до 7-10 час) воздействии низких температур препарат независимо от ДВ, входящих в его состав, не терял свои физические, химические и фармакологические свойства. Воздействие высокой температуры (+30°С) в течение 30 дней также не влияло на физические свойства и терапевтическую активность препарата.

Таким образом, температурные перепады не влиляют на физические и фармакологические свойства Авермонмека.

С целью опредения сроков и условий хранения были проведены исследования опытных серий препарата на 6, 12, 18, 24, 30, 36 месяцы хранения при различных температурных режимах (5-7°С, 10-15°С и 20-25°С). В табл. 1 представлены данные о стабильности и активности препарата в течение срока хранения.

Таблица 1. Параметры стабильности препарата авермонмек при длительном хранении

Параметр Через 6 мес. хранения Через 12 мес. хранения

5-ТС 10-15°С 20-25°С 5-ТС 10-15"С 20-25°С

1 2 3 4 5 6 7

Внешний вид Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв.

Запах Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв.

Удельный вес при 20"С 1.085 г/см5 1.070 г/см3 1.070 г/см3 1.085 г/см3 1.070 г/см3 1.070 г/см3

РН 6.1 5.9 6.0 6.1 5.9 6.0

Вязкость 32 мПа 31 мПа 31 мПа 32 мПа 31 мПа 31 мПа

Стерильность Стерил. Стерил. Стерил. Стерил. Стерил. Стерил.

Содержание ДВ 1.01% 1.02% 1.02% 1.01% 1.02% 1.02%

Параметр Через 18 мес. хранения Через 24 мес. хранения

5-7°С 10-15°С 20-254: 5-7°С 10-15°С 20-25°С

Внешний вид Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв.

Запах Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв.

Удельный вес при 20°С 1.085 г/см' 1.070 г/см' 1.070 г/см3 1.085 г/см3 1.070 г/см3 1.070 г/см3

РН 6.1 5.9 6.0 6.1 5.9 6.0

1 2 3 4 5 6 7

Вязкость 32 мПа 31 мПа 31 мПа 32 мПа 31 мПа 31 мПа

Стерильность Стерил. Стерил. Стерил. Стерил. Стерил. Стерил.

Содержание ДВ 1.01% 1.01% 1.02% 1.00% 1.01% 1.01%

Параметр Через 30 мес. хранения Через 36 мес. хранения

5-7°С 10-15°С 20-25-С 5-7°С 10-154: 20-25°С

Внешний вид Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв.

Запах Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв.

Удельный вес при 20"С 1.085 г/см' 1.070 г/см3 1.070 г/см3 1.080 г/см3 1.070 г/см5 1.070 г/см3

РН 6.1 5.9 6.0 6.1 6.0 6.1

Вязкость 32 мПа 31 мПа 31 мПа 32 мПа 30 мПа 31 мПа

Стерильность Стерил. Стерил. Стерил. Стерил. Стерил. Стерил.

Содержание ДВ 1.00% 1.01% 1.02% 1.00% 1.01% 1.01%

Как видно из таблицы 1, исходные характеристики препарата Авермонмек с действующим началом авермектина или ивермектина при хранении в течение 3-х лет не претерпевают существенных изменений, т.е. препарат Авермонмек отличается высокой стабильностью при хранении без доступа света.

Токсикологические параметры препарата

Острая токсичность. Токсичность оценивали на белых беспородных мышах, получавших различную дозу препарата. Как показывают полученные данные, доза препаратов по ДВ ниже 4 мг/кг малотоксична для мышей, а при введении препарата в дозе 90 мг/кг наблюдается 100%-ная гибель животных. Среднесмертельная доза по ДВ составляет 46,783 и 45.823 мг/кг массы животных.

Интоксикация у мышей проявлялась признаками угнетённого состояния, мышечного тремора, судорог, что характерно для отравления авермектинами из-за их нейротоксичес-кого действия.

Из полученных результатов следует, что лекарственное средство Авермонмек можно относится к IV классу малотоксичных веществ.

Хроническая токсичность. Изучение хронической токсичности препарата проводилось на беспородных белых крысах массой 110-120 гр. Первой опытной группе из б животных вводили подкожно препарат Авермонмек с действующим началом авермектин с интервалом 14 дней в дозе 40 мкг/кг в течение 3-х месяцев. Второй группе из б животных вводили препарат подкожно с интервалом 14 дней 6 раз по 20 мкг/кг по ДВ. Третьей опытной группе из 6 животных вводили подкожно препарат Авермонмек с действующим началом

ивермектин с интервалом 14 дней в течение 3-х месецев в дозе 40 мкг/кг по ДВ. Четвертой группе из 6 животных вводили подкожно препарат с интервалом 14 дней в течение 3-х месяцев по 20 мкг/кг по ДВ. Контрольные 6 животных ежедневно получали компоненты препарата без ДВ.

В течение 3-х месяцев наблюдений не было отмечено негативного воздействия Авермонмека на физиологическое состояние животных. По внешним признакам и по массе тела опытные и контрольные животные также существенно не отличались. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что Авермонмек при длительном применении не вызывает интоксикации у животных и не обладает кумулятивными свойствами.

Общая и местная реактивность организма животных на введение Авермонмека. Местное раздражающее и кожно-резорбтивное действие препарата Авермонмек изучали с использованием 6 кроликов и б морских свинок методом накожных аппликаций и втирании, одно-кратном и многократном нанесении препарата в виде инъекционного раствора. Препарат наносили на участки кожи площадью бхб см в дозе 2 мл.

Авермонмек не вызывал гиперемии, отека, зуда на месте аппликации, у животных не было выявлено признаков токсикоза. Общее состояние животных оставалось без изменений. При втирании в кожу раствор Авермонмека, а также раствор без ДВ вызывал кратковременную гиперемелю.

Таким образом, препарат Авермонмек не обладает кожно-резорбтивными свойствами при многократном нанесении на кожу животных.

Изучение аллергизируюших свойств. Для изучения аллергизируюгцих свойств препарата Авермонмек опыты проводили на 8 головах морских свинкок. Опытным животным двукратно, с интервалом 24 часа вводили внутрь инъекционный раствор препарата Авермонмек в дозе 200 мкг/кг по ДВ.

Аллергизирующие свойства оценивали по реакции непрямой дегрануляции тучных клеток. Количество дегранулированных клеток на фоне применения Авермонмека были в пределах 6,8-9,4%, что соответствует физиологической норме.

Таким образом, препарат Авермонмек не обладает аллергизирующими свойствами.

Действие препарата Авермонмек на иммунобиологические показатели организма животных

Введение в организм животных чужеродных веществ вызывает определенные сдивиги в иммунной системе. В связи с этим предварительное тестирование новых лекарственных средств на показатели резистентности является обязательным условием в Монголии.

Показатели клеточного и гуморального иммунитета. Оценку влияния Авермонмека на Ти В - клеточное звено иммунитета изучали на беспородных белых мышах массой 18-20 г, В опыте было исследовано 60 мышей, которых разделили на 3 группы. Первой группе вводили препарат с действующим началом авермектин в дозе 200 мкг/кг по ДВ, второй группе - препарат с действующим началом ивермектин 200 мкг/кг по ДВ, контрольной группе вводили препарат без ДВ.

При изучении динамики ауто- РОК интактных животных установлено достоверное повышение их числа на седьмые сутки и дальнейшее снижение до физиологической нормы к 28 дню.

Сравнительный анализ данных, полученных при изучении динамики изменения количества В- лимфоцитов в крови мышей, показал, что препарат Авермонмек не оказывает существенного влияния на В- клеточное звено иммунитета. Незначительное снижение относительного количества В- лимфоцитов отмечали на 2-14 день опыта: для первой группы мышей - до 18,1± 0,34 % и для второй группы мышей - до 18,2±0,34. Нормализация показателей отмечалась к 28 суткам.

Динамику иммунного ответа животных на тимус-зависимый антиген на фоне введения препарата Авермонмек изучали на 60 беспородных белых мышах, разделенных на 3 группы.

За 24 часа до начала опыта животных трёх групп иммунизировали введением внутрибрюшинно 0,3 мл суспензии эритроцитов барана, в количестве 2,0 х 10' клеток/мкл.

Результаты опыта показывают, что у контрольных животных титры гемагглютининов несколько повышаются к 14-28 суткам опыта и составляют 7,4±0,3 и 7,1±0,4 соответственно, а препарат Авермонмек практически не влияет на антителообразование.

Таким образом, препарат Авермонмек в терапевтической дозе не оказывает угнетающего или стимулирующего действия на иммунную систему белых мышей.

Действие препарата на показатели естественной резистентности. Бактерицидную активность сыворотки крови и содержание лизоцима контролировали до применения препарата, через 7,14 и 28 сутки после начала эксперимента (табл. 2).

Таблица 2. Влияние препарата Авермонмек на показатели естественной резистентности

лабораторных мышей

Сроки Бактерицидная активность % Содержание лизоцима мкг/мл

Контроль 1 опытная группа 2 опытная группа Контроль 1 опытная группа 2 опытная группа

До опыта 3.76+0,64 3,09+0,76 3,11 ±0,74 412,6±23,40 494,4±45,6 483,6±52,4

7 4,12±0,52 3,92±0,59 3,88±0,60 409,5±35,72 532,3±64,2 527,3+62,4

14 4,09±0,33 4,31±0,30 4,27±0,28 431,0±42,77 498,1 ±46,3 476,2±45,2

28 3,43±0,43 4,33±0,36 4,36±0,32 436,4±44,20 454,7±51,4 448,1 ±47,3

Данные таблицы показывают некоторое повышение содержания лизоцима в сыворотке крови подопытных животных на 7-14 сутки после начала введения препарата, но к 28 суткам эти показатели в опыте и контроле практически выравниваются.

Таким образом, препарат Авермонмек в терапевтической дозе не оказывает угнетающего или стимулирующего действия на иммунную систему белых мышей.

Действие препарата Авермонмек на гематологические ибиохимические показатели крови животных

Изучение влияния препарата на гематологические показатели проводили на 3 группах подопытных животных (кролики, овцы). При этом контролировали содержание гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов и лейкограмму.

Биохимические показатели сыворотки крови оценивали по таким параметрам, как общий белок, глюкоза, билирубин, холестерин, триглицериды.

Анализ полученных результатов показывает, что гематологические и показатели крови кроликов, которые получали терапевтические дозы препарата, находятся в пределах физиологической нормы. В лейкограмме отмечается относительный лимфоцитоз без существенных колебаний количества лейкоцитов, что связано с раздржающим действием компонентов, входящих в состав препарата, т.к. аналогичные изменения отмечаются и у контрольных животных.

У животных при применении авермонмека существенных сдвигов в биохимических показателях также не обнаружено. Выявлена некоторая тенденция повышения общего белка, мочевины. Активность аминотрансфераз сыворотки крови подопытных животных, содержание белка, билирубина и мочевины в сыворотке крови овец монгольской породы находились в пределах физиологической нормы.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют об отсутствии токсического воздействия препарата Авермонмек на печень животных.

Остаточное количество ДВ Авермонмек в органах и тканях опытных животных

Исследования по выявлению остаточных количеств препарата Авермонмек проверяли на 18 кроликах. Животным вводили подкожно двойную терапевтическую дозу препарата Авермонмек с действующим началом авермектин - 9 голов и ивермектин - 9 голов в дозе 400 мкг/кг и через 3, 7 и 28 суток проводили убой по 3 головы из первой и второй группы для исследовательских целей. Установлено, что на 3 сутки после применения препарата Авермонмек "авермектины" обнаруживаются в сыворотке крови, мышечной ткани, печени. На 7 день обнаруживались лишь следы препарата, а на 28 суток ДВ препарата в организме животных не обнаруживаются.

Безвредность препарата

Изучение безвредности препарата Авермонмек в возрастающих дозах была изучена в опытах на кроликах в дозах 400, 800,1600 мкн/кг и на овцах - 600, 1200, 1800 мгк/кг. За животными вели наблюдения в течение 7 суток. Результатами клинических наблюдений каких-либо отклонений в поведении и симптомов заболевания у животных не наблюдали. При выборочном убое животных патологоанатомических изменений в паранхиматозных органах не было выявлено.

Таким образом, препарат Авермонмек не оказывает патологического воздействия на организм животных в терапевтической дозе, а также в 8 раз превышающей терапевтическую, что указывает на его безвредность и хорошую переносимость животными.

Изучение противопаразитарной эффективности Авермонмек Эффективность препарата Авермонмек при лечении паразитозов овец

Для проверки противопаразитарной эффективности препарата Авермонмек были проведены производственные испытания на овецах, коровах и телятах, спонтанно зараженных гельминтами, вшами и чесоточными клещами.

Перед обработкой животных препаратом в лабораторных условиях проводились копроскопические и другие анализы отобранных проб. Диагностическими данными установлено, что овцы были заражены нематодами - СЫеЛара, Соорепа, ЫепШойегеНа, ТпЬо51го1ц»у1и$, НаетопсЬш, КетаШсЦпк, СЬаЬегйа, ВиповЮтит и др.), вщами (Ь. pedalis, Ь. оуШиз) и псороптозом (Р.оу1$8 Р.Ьоув).

Овцам препарат Авермонмек вводили подкожно, согласно разработанному наставлению, в дозе 1,0 мл на 50 кг живой массы при лечении овец зараженных гельмин-тозами, вщами и псороптозом. Противопаразитарную эффективность препарата оценивали спустя 20 суток после его применения на основе гельминтоовоскопических анализов, а также внешнего осмотра животных (табл. 3).

Таблица 3. Эффективность препарата Авермонмек при лечении паразитозов овец

Группа животных Количество животных Кол-во выздоровевших Эффективность, %

Овцы, пораженные псороптозом, опыт 80 80 100

Овцы, пораженные псороптозом, контроль 20 0 0

Овцы, пораженные вшами 60 60 100

Овцы, пораженные гельминтами, однократная обработка 281 278 99,8

Овцы, пораженные вшами и гельминтами, двукратная обработка 4 4 100

Овцы, пораженные вшами и гельминтами, контроль 20 0 0

Из данных, представленных в табл. 3, видно, что препарат Авермонмек обладает высокой антипаразитарной активностью. Количество овец, полностью освободившихся от паразитов после применения препарата Авермонмек, было высоким, т.е. экстенс-эффектив-ность Авермонмека находится в пределах 99,8-100%.

В исследованных 281 пробах фекалий от животных, обработанных препаратом Авермонмек, яйца гельминтов не обнаружены. В 20 пробах фекалий, взятых у овец контрольной группы содержались яйца гельминтов, т.е. инвазированность составила 100%.

Эффективность препарата против эктопаразитов, а именно, против вшей и псороптозе также была высокой. После однократного применения препарата Авермонмек из 281 подопытных овец полностью освободились от паразитов 278 голов, а после двукратной обработки выздоровели все животные. При этом у 20 овец контрольной группы выявляли вши и псороптоз, т.е. их инвазированность составила 100%.

Таким образом, препарат Авермонмек обладает высокой противопаразитарной эффективностью. Клинические наблюдения за подопытными животными показывают, что поведение их не отличается от характерной физиологической нормы.

Эффективность препарата Авермонмек против эктопаразитов крупного рогатого скота

Производственные опыты по определению эффективности препарата против гиподерма-тоза и чесоточных клещей у крупного рогатого скота (КРС) проводили в хозяйствах Хужирт, Хархорин, Зуун Баянулаан сомонов Убур-Хангайского и Дашинчилэн сомона Булганского аймаков. Всего в опытах было использовано 1482 животных (табл. 4).

Таблица 4. Эффективность препарата Авермонмек инъекционный при лечении КРС

Группа животных Кол-во больных животных Выздоровело Эффективность, %

КРС, пораженные псороптозом, опыт 51 51 100

КРС, пораженные псороптозом, контроль 10 0 0

КРС, пораженные гиподерматозом, однократная обработка 1410 1398 99,7

КРС, пораженные гиподерматозом, двукратная обработка 12 12 100

КРС, пораженные гиподерматозом, контроль 10 0 0

Эффективность препарата Авермонмек против эктопаразитов коров, а именно, против псороптоза была 100%-ой, а против гиподерматоза - на уровне 99,7-100%,

Таким образом, препарат авермонмек обладает высокой противоиаразитарной эффективностью при эктораразитозах КРС.

Экономическая эффективность препарата

Экономическую эффективность Авермонмека определяли при паразитозах овец и КРС.

Авермонмек применяли в трех хозяйствах Хужирт сомона Убур-Хангайского и двух хозяйствах Дашинчилэн сомона Булганского аймаков против паразитов овец.

У овец, подвергнутых лечению препаратом Авермонмек, живая масса на 10-15% была выше, чем у контрольных животных при одинаковых условиях содержания и кормления.

Затраты на обработку 1 головы, включая трудозатраты и стоимость препарата, составили 80 туг. На каждое животное можно получить 2,6 доллара дополнительной прибыли.

Результаты изучения экономической эффективности препарата Авермонмек на взрослом КРС (283) и телятах (68) в хозяйствах Хужирт сомона Убур-Хангайского аймака представлены в таблице 5.

Таблица 5. Экономическая эффективности Авермонмека при лечении КРС

Название хозяйства Кол-во животных, обработанных Авермонмеком Кол-во животных в опытах Живой вес до опыта, осенью в среднем, кг Живой вес после опыта, весной в среднем, кг Разница живого веса, кг

Хужирт сомон Уб Ф-Хангайского аймака

1. Лувсан 283 30(++) 199,5 201,5 +2,0=(5)

30 192,0 199,1 +7,1

2. Дамдин 68 30(+) 83,5 85,0 +1,5(12,8)

30 73,1 86,4 +13,3

Примечание: 30(++) - количество КРС, обработанных препаратом Авермонмек; 30(+) -количество телят, обработанных препаратом Авермонмек; 30 - количество животных,

необработанных препаратом Авермонмек; (5) и (12,8) - разница живого веса между опытной и контрольной группах животных.

Из представленных данных видно, что разница живого веса у опытной группы КРС выше на 5.0 кг, а у опытной группы телят выше на 12.8 кг, чем в контрольной группе.

Затраты на обработку 1 головы, включая стоймость препарата, составили 330 туг.

В Монголии 1 кг говядина стоит 3500 туг-ЗЗО туг=3170 туг.

В опытах в первой группе 283 голов КРС х 5 кг=1415 кг/мясо, и так, 1415 кг/мясо х 3170 туг=4.485.550 туг. т.е 3737,9 ам. долларовой прибыли. В опытах во второй группе 68 голов двухгодычных телят 12.8 кг/мясо=870кг/мясо и так, 870 кг/мясо 3170 туг = 2.757.900 туг., т.е чистый прибыль = 2.998.2 ам. долларов.

Таким образом, из приведенных выше расчетов видно, что использование препарата Авермонмек инъекционный экономически эффективно, и его можно рекомендовать для широкомасштабного внедрения в ветеринарную практику Монголии.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что гельминтозы и эктопаразитозы являются наиболее распространенным в Монголии. Уровень зараженности составляет 4,1-70%. Наиболее распространенными паразитозами являются: у крупного рогатого скота - гиподерматоз (27,9-68,9%), у мелкого рогатого скота - псороптоз (4,5-10,0%), диктиокаулез ( 4,1-15,8%), нематодоз (12,0-70,0%), вши (6,5-29,0%).

2. Разработан компонентный состав препарата Авермонмек и создана аппаратурно-технологическая линия по его промышленному производству. Разработана нормативная документация на препарат Авермонмек, утвержденная государственной организацией Монголии по сертификации и контролью новых лекарственных средств.

3. Авермонмек инъекционный относится к IV классу опасности, т.к. LDS0 в пересчете на действующее вещество для белых мышей составляет около 46,783 мг/кг живой массы.

4. Препарат Авермонмек инъекционный не обладает кумулятивным действием, при инъекции с интервалом 14 дней в терапевтической дозе 200 мкг/кг в течение 3-х мес. белым крысам признаков интоксикации не отмечается.

5. Препарат стабилен при хранении, при f плюс 5° - плюс 20°С срок хранения 2 года с пролонгацией на 6-12 месяцев при соответствии требования нормативных документов.

6. Авермонмек инъекционный хорошо переносится животными, не оказывает отрицательного воздействия на гематологические и биохимические показатели крови животных. Установлено, что к 5-7 суткам после применения препарата наблюдается достоверное изменение содержания Т- и В-лимфоцитов в крови животных. Параметры клеточного иммунитета приходят в норму к 28 суткам.

7. В результате широких производственных испытаний в хозяйствах Булганского и Убур-хангайского аймаков Монголии установлено, что препарат обладает высокой эффективностью (99,6-100%) против экто-и эндопаразитов (гиподерматоз, вши, гельминты, чесоточные клещи) домашних животных.

Практическое использование результатов исследований 15

Результаты исследований использованы при разработке нормативно-технических документов на препарат Авермонмек инъекционный (наставление по применению препарата в ветеринарной практике Монголии, Инструкция по проверке и контролю препарата Авермонмек инъекционный и Госстандарт по производству и контролю препарата Авермонмек инъекционный).

Препарат внедрен в ветеринарную практику Монголии.

Рекомендации по использованию научных выводов

Новый препарат Авермонмек инъекционный на основе авермектин или ивермектин, не имеющий аналогов в Монголии, рекомендован для профилактики и лечения паразитозов домашных животных.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Бурэнбаатар Б. Хонины паразиттах евчний эсрэг Авермонмек бэлдмэлийн идэвхийг судласан дун / Бурэнбаатар Б., Бямбаа Б. //Мал эмнэлгийн хурээлэнгийн бутээл.- 2006.-Хуудас 14-16.

2. Бурэнбаатар Б. Токсикологические параметры препарата Авермонмек инъекционный /Бурэнбаатар Б., Бямбаа Б. //Актуальные проблемы АПК в Монголии, Сибири и Казахстане: Сб. науч. тр.- Новосибирск: НГУ,- 2008.- С. 47.

3. Бурэнбаатар Б. Местное раздражающие, кожно резорбтивное действие аллергизиру-юших свойств препарата Авермонмек-инъекционный / Бурэнбаатар Б., Бямбаа Б. //Актуальные проблемы АПК в Монголии, Сибири и Казахстане: Сб. науч. тр.- Новосибирск: НГУ,-2008.- С. 48.

4. Бурэнбаатар Б. Авермонмек бэлдмэлийн ундсэн узуулэлтийн судалгаа /Бурэнбаатар Б., Бямбаа Б. 11ХААШУМ,- 2008,- № 2 (01).- Хуудас 7.

5. Бурэнбаатар Б. Изучение основных показателей препарата Авермонмек /Бурэнбаатар Б., Бямбаа Б. //Бюлетень совета сельскохозяйственной науки (Монгольская академия наук).- 2008.- №2 (01).- С 7.

6. Бурэнбаатар Б. Действие препарата Авермонмек на иммунобиологические показатели организма животных /Бурэнбаатар Б., Бямбаа Б. //Бюлетень совета сельскохозяйственной науки (Монгольская академия наук).- 2008.- № 2 (01).- С. 36.

7. Бурэнбаатар, Б. Амьтны биеийн иммунобиологийн узУ¥лэлтПДэД Авермонмек тарилгын бэлдмэлийн узуулэх нвлвв / Бурэнбаатар Б. Бямбаа Б. //ХААШУМ.- 2008.- № 2 (01).-Хуудас 36.

8. Некоторые показатели клеточно-гуморального иммунного ответа у экспериментальных кроликов на раздражение гастрофилиным антигеном /Бурэнбаатар Б., Батсух 3., Батцэцэг Г. др. //Ветеринарная медицина.- 2009.- № 1-2,- С. 39-40.

9. Бурэнбаатар Б. Изучение противопаразитарной эффективности препарата Авермонмек /Бурэнбаатар Б. //Ветеринарная медицина,- 2009,- № 1-2.- С. 61-62.

10. Бурэнбаатар Б. Эпизоотология наиболее распространенных паразитозов Булганском и Убур-Хангайском аймаках (провинциях) Монголии /Бурэнбаатар Б. //Ветеринарная медицина,-2009,-№ 1-2,- С. 83-84.

11. Бурэнбаатар Б. Авермонмек бэлдмэлийн хадгалалт ба тогтворжилт /Бурэнбаатар Б., Бямбаа Б. //ХААШУМ.- 2009.- № 1 (01).- Хуудас 15.

12. Бурэнбаатар Б. Сохранность и стабильность препарата Авермонмек /Бурэнбаатар Б., Бямбаа Б. //Бюлетень совета сельскохозяйственной науки (Монгольская академия наук).-2009.- №2 (01).- С. 15.

13. Бурэнбаатар Б. Авермонмек бэлдмэлийг олгох уед амьтны биеийн хэсэг газрын болон еренхий хариу урвал /Бурэнбаатар Б., Бямбаа Б. //ХААШУМ,- 2009.- № 1 (02).-Хуудас31.

14. Бурэнбаатар Б. Общая и местная реактивность организма животных на введение Авермонмек /Бурэнбаатар Б., Бямбаа Б. //Бюлетень совета сельскохозяйственной науки (Монгольская академия наук).- 2009.- № 1 (02).- С. 31.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 01.06.2009 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,0 Печать авторефератов: 730-47-74,778-45-60