Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка технологии дрожжевых лечебно-профилактических продуктов на базе растительного сырья

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Разработка технологии дрожжевых лечебно-профилактических продуктов на базе растительного сырья"

тз с л

На правах рукописи УДК: 663.14:613.26(043.3)

О®

Ерофеев Павел Юрьевич

Разработка технологии дрожжевых лечебно-профилактических продуктов на базе растительного сырья

Специальность 03.00.23 - «Биотехнология»

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата технических наук

Москва 1999

Работа выполнена в Московском Государственном Университете Пищевых

Производств.

Научный руководитель: доктор технических наук,

профессор Борисенко Е.Г.

Официальные оппоненты: доктор технических наук, член-корр.

РИА и МИА, академик МАИ профессор Винаров А.Ю., кандидат биологических наук, акад. РАМТН Бравова Г.Б.

Ведущая организация: ООО ВОИ «Биоин»

Защита состоится 24 2000г. в ч. на заседании Диссе{

тационного совета К.063.51.04 Московского Государственного Университет Пищевых Производств по адресу: 125080, Москва, Волоколамское шоссе, 11

Просим вас принять участие в заседании Диссертационного совета ил прислать отзыв в двух экземплярах с печатью учреждения по вышеуказанн« му адресу.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГУ 1111.

Автореферат разослан Ъ? 2000г.

Учёный секретарь

Диссертационного совета к.т.н., доц. Тихомирова О.И.

К О /О /^Л

Общая характеристика работы

Актуальность теми

В результате ухудшения экономической ситуации в России и странах СНГ гачительная часть населения лишена полноценного питания и профессионального едицинского обслуживания, что в совокупности с неблагоприятной экологической санитарно-гигиенической обстановкой во многих регионах ведёт к росту заболе-1емости, снижению продолжительности жизни, ухудшению генофонда. Как извест-э, одной из защитных систем высшего организма является его микробиоценоз, режде всего желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Нормальное функционирование *шечной микрофлоры играет огромную роль в поддержании здоровья человека, днако в настоящее время до 95% городского населения России имеет те или иные фушения этой микрофлоры. Поэтому сейчас уделяется большое внимание разра-этке таких перспективных средств профилактики и лечения заболеваний ЖКТ, как эобиотики и пробиотические продукты. Пробиотики - это живые микроорганизмы га ферментированные (культивированные) ими продукты, которые оказывают бла->тпорный эффект на симбиотическую микрофлору человека и животных. Примене-1е пробиотиков во многих случаях альтернативно лечению антибиотиками, ввиду )вышения резистентности возбудителей различных инфекций к последним. Не вы-лвая грубых нарушений в микробной экосистеме ЖКТ, пробиотики корректируют : в сторону нормализации.

Наиболее распространёнными пробиотиками в нашей стране стали препараты, »держащие в качестве действующего начала живые культуры бифидо- и лактобак-:рий как типичных представителей нормальной микрофлоры кишечника. Однако :альный терапевтический эффект от применения этих средств зачастую меньше кидаемого из-за того, что вносимые извне штаммы не приспособлены к существо-иию в особых, всегда специфических условиях каждого организма и плохо засе-пот кишечник по причине генетической неадекватности. Вместе с тем имеется дос-точно фактических данных, свидетельствующих о наличии пробиотических

свойств у дрожжей родов Saccharomyces, Candida и др. Хорошо зарекомендовал себ, препарат кормового и пищевого достоинства «Рекицен» на базе отрубей, подвергае мых твердофазной ферментации специально отселекционированным штаммом вин пых дрожжей. Пробиотические препараты дрожжевой природы, обладая сорбцион ными свойствами, при попадании в кишечник выводят оттуда токсины и клетки па тогенных и условно-патогенных микробов. Кроме того, клеточные стенки дрожжей содержащие полимеры глюкозы и маннозы, обладают выраженным лакто- и бифи догенным эффектом. Таким образом, терапевтический эффект применения дрожжс вых пробиотшсов заключается в восстановлении собственных штаммов полезно: микрофлоры. Это позволяет успешно лечить заболевания ЖКТ различной степей тяжести, избегая применения антибиотиков и химиопрепаратов. Вместе с те\ дрожжевая биоконверсия растительного сырья приводит к обогащетпо его незаме нимыми аминокислотами, витаминами, органическими кислотами, ферментами другими полезными веществами.

Производство из ферментированных дрожжами растительных субстратов лс чебно-профилактических препаратов и продуктов, доступных для ежедневного пс требления (т.н. парафармацевтиков), например оздоровительного хлеба, будет спс собствовать профилактике различных заболеваний пищеварительной системы, удо! летворению потребности населения в полноценном белке, витаминах, повышенш иммунитета и, как следствие, укреплению здоровья жителей России.

Цель и задачи исследования

Целью настоящих исследований явилась разработка технологии производств дрожжевых лечебно-профилактических препаратов и парафармацевтических прс дукгов для всех групп населения.

В соответствии с поставленной целью были определены основные задачи: => выделить из натурального сырья штаммы дрожжей-продуцентов биомассы на не гидролизованных растительных субстратах;

испытать различные субстраты в качестве основы питательных сред для глубинной и твердофазной дрожжевой ферментации и выбрать из этих субстратов наиболее перспективные;

выяснить закономерности роста дрожжей на выбранных субстратах, определить возможные пути ведения дрожжевой ферментации и варианты технологического процесса при производстве на пищевых и перерабатывающих предприятиях разного профиля;

определить возможные способы оптимизации процесса ферментации и снижения себестоимости готовых лечебно-профилактических дрожжевых продуктов; разработать комплекс документации, необходимой для производства лечебно-профилактических продуктов, наработать опытные партии; проанализировать полученные продукты на содержание основных биоактивных компонентов, проверить физиологическое действие, провести клинические испытания.

Научная новизна разработана методика выделения из натурального винодельческого сырья дрожжей-продуцентов биомассы;

показана возможность использования отселекционированных штаммов для получения ферментированных продуктов на базе различных зерновых и плодоовощных субстратов;

определены общие закономерности роста используемых дрожжей на простых и комплексных питательных средах;

разработаны методы оптимального ведения процессов глубинной и твердофазной ферментации;

установлена возможность обогащения применяемых растительных субстратов дрожжевым белком, богатым незаменимыми аминокислотами; доказано пробиотическое действие и выраженная клиническая эффективность получаемых продуктов.

Практическая значимость

=> разработаны технологическая и аппаратурная схемы производства биоактивно] добавки (БАД) «Фервитал» с использованием стандартного оборудования, рас считаны основные экономические показатели выпуска данной продукции; => определены варианты проведения ферментации растительных субстратов, откры вающие возможность производства дрожжевых лечебно-профилактических про дуктов в условиях различных предприятий в зависимости от их профиля, имею щегося сырья, технического оснащения и т.д.; => осуществлены опытные выпечки хлебобулочных изделий с введением в качеств

компонентов разработанных препаратов; => созданы предпосылки для производства различных парафармацевтических про дуктов под маркой «Фервитал» на базе зерна, картофеля, плодоовощных и други субстратов.

Апробация и публикации

Согласно разработанным техническим условиям было организовано производ ство БАД «Фервитал» (Регистрационное удостоверение Минздрава РС №000624.Р.643.12.98) на мощностях АО «Хлебозавод №12» (г.Москва). Проведет клинические испытания получаемого препарата. Основные результаты работы док ладывались на международном симпозиуме «Экология человека: пищевые техноло гии и продукты на пороге XXI века», (г.Пятигорск, 1997), международной научно технической конференции «Ресурсосберегающие технологии пищевых производств (г.Санкт-Петербург, 1998), международной научно-практической конференци «Индустрия продуктов здорового питания - третье тысячелетие» (Московский госу дарственный университет пищевых производств, 1999) и научно-технической кон ференции «Молодые учёные - пищевым и перерабатывающим отраслям АПК: (МГУПП, 1999). По материалам диссертации опубликовано 6 работ, в которых от ражены её основные положения и перспективы дальнейших исследований.

Структура и объём диссертации

Данная диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экс-шментальной части, выводов, технологической и экономической частей, списка юльзованной литературы и приложения.

Работа изложена на 145 стр. машинописного текста, проиллюстрированного таблицами и 25 рисунками. Список литературы включает 140 наименований ра- на русском и английском языках.

Содержание работы

Введение

Во введении обоснована актуальность темы и определены основные задачи ледования.

1. Обзор литература

В литературном обзоре представлены данные о составе и физиологических акциях микробиоценозов желудочно-кишечного тракта человека и животных, >бщён мировой опыт по использованию пробиотических продуктов и применению >жжей в их изготовлении. Также приведены сведения о дрожжевой биоконверсии тительных субстратов. Уделено внимание выбору наиболее подходящего сырья [ ферментации дрожжами, технологическим аспектам их культивирования. Рас-прена информация о микрофлоре винодельческого сырья как возможного источ-са для селекции дрожжей-продуцентов биомассы.

2. Экспериментальная часть

2.1. Материалы и методы исследований

Дрожжи БассЬаготусез \irii Т8, по номенклатуре Всероссийской Коллекции эмышленных Микроорганизмов БассЬагошусез сеге^ае (\агн) ВКПМ У-511, поены из коллекции проф., д.т.н. Борисенко Е.Г. Для выделения новых штаммов 1жжей-продуцентов биомассы на негидролизованных растительных субстратах

использовалась четырёхэтапная селекция дрожжей из натурального винодельческо сырья по оригинальной методике. Начальный отбор проводился из виноградно сусла с мякотью, разбавленного водой, затем жидкая культура переносилась на с руби. На двух заключительных этапах выделялись чистые культуры дрожжей и пр верялся их рост на крахмалосодержащем сырье.

Для приготовления питательных сред применялись свежеприготовленные рг бавленные в 2 раза соки с мякотью из ягод, фруктов, овощей и корнеплодов, а таю зерновые автолизаты и экстракты, где использовался свежий недроблёный солод б отделения ростков. Зёрна проращивались при комнатной температуре тонким сло< на влажной ткани в течение 3 суток.

Для получения зернового автолизата солод подвергался автолизу на водян< бане при гидромодуле 2:1 с последующим отделением жидкой фазы фильтрование Режим автолиза был заимствован из технологии приготовления пивного сусла представлял собой слегка упрощённый настойный способ затирания (четыре пау: но 30 мин.).

Для получения зернового экстракта солод помещали в холодную воду, нагр вали до кипения и варили 5мин. при гидромодуле 2:1 с последующим отделенш жидкости.

Чистые культуры дрожжей хранились в пробирках на скошенном сусло-ага при 4°С. Смыв с них использовали как посевной материал при засеве неболыш объёмов жидких питательных сред. В качестве посевного материала для болыш объёмов питательных сред и как контроль в экспериментах использовалась культу на 6%-ной суспензии пшеничных отрубей в воде.

Жидкие питательные среды стерилизовались при 0,4...0,5 ати 15...30 мин., i засев сред производился с соблюдением правил асептики. Норма засева - 5%. В к честве разрыхлителя при твёрдофазной ферментации использовались нестерилып крупные пшеничные отруби, их засев производился смешиванием с глубинный культурами до оптимальной влажности (50...55%).

Культивирование дрожжей в глубинной культуре вели 18 ч. в качалочных колах:

а) на круговых лабораторных качалках при 180...220об/мин.; или б) в стационарных условиях в термостате.

На твёрдой фазе культивирование проводили в течение 24 ч. в термостате в ачалочных колбах при высоте слоя 2-Зсм или в чашках Петри.

При культивировании в ферментаторах малой емкости использовались аппара-ы «АЫйех» и «Биостат» ёмкостью по 10дм3 (рабочий объём 5дм3 и 7дм3 соответствию) с лопастными многоярусными мешалками, кольцеобразными барботёрами и зтоматическим регулированием рН путём подтитровки раствором N11)0^ Про-элжительность ферментации равнялась 21 ч.

Температуру, при которой производилось выращивание дрожжей в глубинных твердофазных культурах, во всех без исключения опытах поддерживали равной )±2°С.

Лечебно-профилактический зерновой препарат получали следующим образом: лросшую твердофазную культуру дрожжей стерилизовали в автоклаве, высушива-1 в течение 120 мин. при 85°С в сушильной камере, а затем измельчали на шаровой гльнице.

Для анализа химического состава исходного сырья и получаемых продуктов шменялись общепринятые методы или их модификации. Контроль эффективности )ста дрожжей осуществляли путем прямого подсчета дрожжевых клеток в камере зряева. Определение аминокислотного состава проводили на автоматическом аиа-гзаторе 1л;тцгт1 III фирмы ЬаЬойтга методом ионообменной хроматографии. Расчёт нательной ценности белков проводили по методу аминокислотного скора согласно :комендациям ФАО/ВОЗ.

Результаты лабораторных исследований являются средними не менее чем трёх жторностей. Для нахождения зависимостей применялся регрессионный анализ, мфики, описывающие экспериментальные данные, имеют Я-квадратаг 1 ее кое зна-лие не меньше 0,97.

2.2. Результаты исследований и их обсуждение

2.2.1. Выделение дрожжей - продуцентов биомассы на растительнь субстратах

Предыдущие исследования по получению дрожжевых пробиотических прею ратов, проведенные со пггаммом ЗассЬаготусся \чш Т8, показали, что он плохо пер носит перемешивание при твердофазном культивировании. Это вынуждает уме!; шать высоту слоя пористого субстрата для исключения перирева и, таким образо увеличивать производстве иные площади. По этой причине нами была проведены г этапная селекция и апробация продуцентов биомассы на растительных субстратг потенциально способных заменить штамм 8. уш Т8 при изготовлении ферментир ванных лечебно-профилактических продуктов. Дрожжи выделялись из натурально сырья - винограда.

Таблица 1: Результаты заключительных этапов селекции

№ штамма Морфология Концентрация,

клеток х109 кл./г

1 (сер. колонии) крупн. овальн. 2Д

1' (бел. колонии) мелк. кругл. 5,6(1)

2 срсдн. кругл. 2,7

3 мелк. кругл. 5,3 (II)

4 крупн. кругл. 2,1

5 (без аскосиор) крупн. кругл. 0,8

5' (с аскоспорами) крупн. кругл. 0,9

6 крупн. овальн. 1,5

7 мелк. овальн. 5,0 (Ш)

8 мелк. овальн. 2,0

9 средн. кругл. 6,6 (IV)

Контроль (Б. \тш Т8) мелк. вытянут. 7,0

Так как в зависимости от эколого-географических условий, сорта винограда, тепени его зрелости и повреждённости ягод состав дрожжевой флоры может изме-[яться, было взято 48 образцов винограда различных сортов из разных регионов ми-1а. Селекция завершилась выбором 4 штаммов, показавших близкие к контролю по-:азатели продуктивности на негидролизованном растительном субстрате (табл. 1). 'езультат говорит о возможности выделения большого количества новых штаммов [рожжей-суперпродуцентов биомассы. В качестве модельного штамма для даль-[ейших исследований нами был выбран Б. \тт Т8, так как он уже исследован на ¡езопасность и получил разрешение на использование.

2.2.2. Выбор сырья

В этой серии опытов были сравнены среды на основе соков и автолизатов. Кидкие питательные среды инкубировались на качалке, а затем проводилась стадия вёрдофазной ферментации. Результаты подсчёта клеток представлены на рис. 1.

Глуб.

Рожь Картофель Томат Огурец Морковь Отруби Виноград Яблоко

(контроль)

Компоненты среды

Рис. 1: Рост дрожжей Б. у™Т8 на жидких и плотных питательных средах, содержащих различные растительные субстраты

Видно, что наихудшие результаты получились при использовании материала содержащих повышенное количество низкомолекулярных углеводов и органически кислот. Из литературных данных известно, что эти факторы ингибируют рост дроя жей штамма Б. уш Т8. Хорошие результаты показали огуречный, томатный и мо{ ковный соки, которые могут использоваться как компоненты сред для получени дрожжевых пробиотических продуктов. Самый большой выход клеток на обеих ст; диях ферментации обеспечили крахмалосодержащие материалы - ржаной солод картофельный сок. В дальнейшем со всеми испытанными субстратами проводилис исследования, направленные на увеличение выхода клеток Б. \тш Т8.

2.2.3. Выбор режима ферментации плодоовощного сырья

Была предложена технология одностадийной твердофазной ферментации ш тательных сред. При этом отруби, увлажняемые соком, смешанным с посевным м< териалом, выполняют роль буфера кислотности. Результаты двух серий экспериме! тов позволяют утверждать, что при таком способе повышается выход культуры. Ж локи и виноград всё-таки снижают выход по сравнению с контролем, а томаты, особенно морковь, стимулируют рост клеток.

Полученные твердофазные культуры после высушивания могут использовап ся для производства оздоровительных мюсли, сухих завтраков и суповых основ. Бь ло выяснено, что добавление небольшой порции смеси зеленных культур (укроп; петрушки и сельдерея) при одностадийной твёрдофазной ферментации сред, соде! жащих овощи, ингибирует рост дрожжей (табл. 2). Таким образом, зелень лучше дс бавлять в продукт уже после ферментации.

Таблица 2: Результаты измерения концентрации клеток в средах, содержащих овощные и зеленные культуры (х109 кл./г)

№ Компонент Т/ф культура Т/ф культура + зелень

1. Томат 4,9 3,4

2. Тыква 4,2 2,7

3. Морковь 5,3 3,5

4. Кабачок 4,4 2,6

5. Контроль 2,5 2,0

Эксперименты по нахождению оптимального способа получения жидких кар-офелесодержащих питательных сред позволили определить, что для этого можно спользовать пюре, получаемое из очищенного или неочищенного картофеля путём арки при гидромодуле 3:1. Это соответствует концентрации СВ 6%. Среда должна ыть простерилизована и может ферментироваться на качалке или в стационаре тоследнее при условии малой обсеменённости отрубей посторонней микрофлорой), ыло выяснено, что пенообразовапие, наблюдаемое при ферментации картофельно-э пюре в качалочных колбах, не является существенным негативным фактором па-ения продуктивности и не требует введения пеногасителя. По сравнению с контро-ем на отрубях, картофель показал более высокую продуктивность (в среднем ,7х109 кл./см3 против 1,1х109 кл./см3 в глубинной культуре и 4,6х109 кл./г против ,4x109 кл./г в твёрдофазной).

Был сделан вывод, что картофель является перспективным сырьём для фер-ентации дрожжами Б. мт Т8 и может быть оправдано его использование в произ-одстве лечебно-профилактических продуктов: сухого шоре, чипсов, суповых кон-ентратов и т.п. или кормов на тех предприятиях, где образуются отходы его пере-аботки. Для приготовления суповых концентратов, кроме картофеля, должны быть спользованы овощные добавки, поэтому была предпринята попытка ферментиро-ать комплексные субстраты. Стерильная культура на картофельном пюре смешива-ась с измельчёнными овощами в соотношении 1:1 и доводилась до рабочей влаж-ости отрубями.

Таблица 3: Результаты ферментации твердофазных сред, содержащих

картофель и овощи

№ Добавка Выход, х109 кл./г

1. Морковь 6,6

2. Свёкла 4,3

3. Кабачок 3,0

4. Смесь 5,0

5. Контроль 2,7

Данные из табл. 3 позволяют говорить о возможности успешной ферментаци комплексных растительных субстратов. Однако овощи и корнеплоды всё же устуш ют по экономическим соображениям такому доступному сырью, как пшеница рожь. Поэтому основные усилия в работе были направлены на оптимизацию технс логического процесса на зерновых субстратах.

2.2.4. Оптимизация параметров культивирования на зерновом сырье

Для нахождения оптимального способа приготовления жидких питательны сред на базе ржаного солода проводился его автолиз с увеличением числа стади (пауз затирания) от 1 до 4. Параллельно велась одностадийная экстракци (заваривание) проросшего зерна. Полученные автолизаты/экстракт направлялись н глубинную и твердофазную ферментацию.

ЕЗГлуб. культура

□ Т/ф культура

За вар. 1 ст. 2 ст. 3 ст.

Стадии автолиза

4 ст. Контроль

Рис. 2: Продуктивность глубинной/твёрдофазной культур при заваривании солода и его автолизе с различной длительностью

Из рис. 2 можно сделать вывод, что по выходу клеток среда на основе зава-1енного в течение 15 мин. солода стоит на одной позиции со средой из автолизиро-анного в течение 115 мин. пророщенного зерна. При этом аппаратурное оформле-[ие для проведения экстракции, несомненно, дешевле. В последующих эксперимен-ах для приготовления жидких питательных сред применялось заваривание. Было 'пределено, что при этом оптимальный гидромодуль равен 2:1 ...2,5:1. Это соответ-твует содержанию солода в воде при заваривании 14...17% (по СВ).

Изучалось влияние наличия плотной фазы в глубинной культуре на рост ;рожжей Б. уш Т8. При этом также использовались хлебопекарные дрожжи Бас-ЬаготусеБ сегеу1з1ае расы Французская 3. В варианте среды «экстракт + солод» ис-ользовалась раздельная стерилизация компонентов для исключения дополнитель-ого перехода питательных веществ из плотной в жидкую фазу во время термообра-отки.

(контроль)

Варианты сред

Рис. 3: Влияние плотной фазы в глубинных культурах на выход дрожжей

Из приведённых на рис. 3 результатов можно сделать несколько выводов. Во первых, присутствие плотной фазы в экстракте увеличивает выход глубинной 1 твердофазной культур (в 2,5 и 1,4 раза соответственно). Это справедливо как в сл> чае со штаммом Б. уш Т8, так и в случае с пекарскими дрожжами 5. сегечтаае Фр.2 Очевидно, клетки нуждаются в наличии частиц, к которым можно прикрепиться и н поверхности плотного носителя заметно усиливается пролиферация. Это хорошо сс относится с литературными данными о том, что естественной формой существовг ния в природе любых микроорганизмов является иммобилизованное состояние. Вс вторых, применяемый нами штамм дрожжей Б. таи Т8 обеспечивает выход клеток единицы объёма глубинной культуры в 3...6 раз больше традиционного штамма хл< бопекарных дрожжей.

На основе информации, полученной из двух последних блоков эксперимеиш можно максимально интенсифицировать процесс по времени и по продуктивносл Конечно, выбор способа глубинной ферментации на производстве (гомогенно ил гетерогенно) будет зависеть от особенностей имеющегося оборудования. Волыни достоинством гетерогенной ферментации явилась возможность исключить заварив; ние в дальнейших опытах, т.к. при автоклавировании солода практически повторяв ся режим термообработки при заваривании.

Рожь как сырьё для приготовления питательных сред была сравнена с другим зерновыми культурами. Для этого были выбраны пшеница и кинуа (СЬепороЛи qшnoa) - перспективная культура из Перу, похожая на просо, богатая белком (14°Л крахмалом (40%) и минеральными веществами. Из зёрен приготавливался солс примерно одинаковой степени прорастания (по развитости корневой системы Пшеница и рожь прорастали трое суток, а кинуа - одни сутки. Половина пророща ных зёрен подверглась одностадийной экстракции (15 мин.) при гидромодуле 2: затем они отделялись от жидкости и помещались в холодильник. Для гетерогеннь сред заваривание не применялось, смесь солода с водой (1:4) сразу помещалась в а токлав. На рис. 4 представлены данные по конечным концентрациям клеток в гл бинных культурах.

Пшеница Рожь Кинуа

Рис. 4: Сравнение зерновых культур и способов культивирования в глубинной

культуре в. уЫ Т8

'не. 5: Динамика роста дрожжей 8. уЫ Т8 на твердофазных средах, содержащих отруби и различные виды зерна

Из рис. 4 видно, что рожь немного уступает другим злакам, а также то, что рименённый метод приготовления жидких питательных сред на базе зернового сы-

рья при минимальных затратах времени обеспечивает максимальное накоплени биомассы.

Полученные графики нарастания концентрации клеток на твердофазных ср« дах, содержащих отруби и оставшееся после заваривания зерно (рис. 5) демонстр* руют примерно одинаковое протекание лагфазы, длящейся около 8 ч., и экспоненщ альной фазы роста, продолжающейся 12-14 ч. После 22-24 ч. культивирования нач! нается прекращение роста - наступает стационарная фаза, и это значение можн считать наилучшей продолжительностью твердофазной ферментации. Из трёх испь танных зерновых культур наилучшим образом зарекомендовала себя кинуа, немног хуже - пшеница и рожь. Определяющим моментом является себестоимость получа* мых продуктов, и в таком случае предпочтительнее использовать рожь.

Зависимость выхода клеток в клеток в глубинной и твердофазной культурах с соотношения солода и воды представлена на рис. 6.

О 2,5 5 7,5 10 15

Концентрация СВ в жидкой среде, %

Рис. 6: Зависимость выхода клеток в глубинной/твердофазной культурах от концентрации СВ в глубинной гетерогенной среде

Графики показывают, что максимальный выход наблюдается, когда солс вносится в количестве 10-12% по СВ, что соответствует гидромодулю 4:1 - 3 (вода:влажный солод).

Зависимость продуктивности дрожжевых культур от длительности солодора-зния (рис. 7) свидетельствует о том, что временной оптимум лежит в районе 3 су-

к.

глубинной/твердофазной культур дрожжей

Зависимость выхода дрожжей в твердофазных культурах от вида посевного гериала и засевной дозы представлена на рис. 8.

Посевная доза, х10® кл./г

Рис. 8: Влияние дозы жидкого посевного материала на выход твердофазной

культуры Б. уЫ Т8

Выход культуры с увеличением засевной дозы постепенно повышается до о ределённого предела (около 6,5x109 кл./г), который соответствует дозам качалочно: посевного материала примерно 4,3x108 кл./г, а стационарного - около 4,9x107 кл./ Дальнейшее увеличение засевной дозы не приводит к увеличению выхода. Раци налыюе использование посевного материала путём его разведения может дать суш ственную экономию.

С целью нахождения предпочтительных способов производственного культ вирования изучался рост дрожжей Б. \оги Т8 в ферментаторах малой емкости. Т пичный график изменения рН и концентрации клеток во время инкубирования пр ведён на рис. 9. Он показывает незначительное нарастание дрожжевой биомассы быстрое разрушение клеток. К 19...21 ч. выращивания на зерновом автолизате ш суспензии отрубей их концентрация снижалось до значений, соответствующим п севным дозам или роста вообще не наблюдалась. Снижение интенсивности перем шивания (от 1000 до 200 мин"1) и аэрации (от 1 до 0,4 мин'1), а также отделен] плотной фазы не приводили к позитивным результатам. Очевидно, клетки дрожж» Б. \тш Т8 легко травмируются даже при слабых механических воздействиях, полн стью исключить которые невозможно из-за необходимости в газо- и массообмене.

Время от начала засева, час.

Рис. 9: Изменение концентрации клеток и рН во время культивирования

На основании данных, полученных в ходе проведения опытов, мы пришли к ыводу, что основным способом производственного культивирования штамма рожжей Б. \тга Т8 является твердофазная ферментация.

2.2.5. Получение конечных продуктов и их характеристика

Высушенная и измельчённая твердофазная культура представляет собой по-ошок тёмно- или светло-коричневого цвета с хлебным вкусом и запахом. Такой родукт получил название биоактивной добавки (БАД) «Фервитал» и содержит око-о 1хЮ10 кл./г. Также возможно создание серии препаратов путём фракционирова-ия неизмельчённого сухого продукта при помощи механическою перетирания и истемы сит с уменьшающимися ячейками. Таким образом мы получили 5 фракций, равнительная характеристика которых приведена в табл. 4.

Таблица 4: Характеристика фракций конечного продукта

№ Название фракции Размер фракции, мм Содерж. клеток, х109 кл./г Соотн. продуктов, % Назначение

1. Шрот >2,5 7,0 76,2 кормовой

2. Крупная крупка 1,5-2,5 13,6 12,1 «Фервитал»

3. Мелкая крупка 1-1,5 15,2

4. Крупная мучка 0,5-1 20,0 11,7 «Супер-Фервитал»

5. Мелкая мучка <0,5 22,4

Как видно из таблицы, были получены 3 продукта с разными концентрациями иеток: один кормового и два пищевого достоинств. Продукт из фракций №2 и 3 -Iалогичен БАД «Фервитал» по составу и дисперсности, а по концентрации дрож-ей превосходит её. Продукт из двух самых мелких фракций, названый нами 2упер-Фервитал», содержащий рекордно высокое количество клеток, может ис-эльзоваться для приготовления быстродействующих препаратов при сильных ин-жсикациях.

На рис. 10 представлена классификация основных действующих компонентов АД «Фервитал», получаемой согласно разработанным ТУ 9118-003-46812619-98 на осковском хлебозаводе №12.

Рис. 10: Основные компоненты БАД «Фервитал»

Нами был осуществлён контроль содержания протеиногенных аминокислот в «Фервитале» в сравнении с другими продуктами растительного происхождения.

Таблица 5: Сравнение некоторых высокобелковых продуктов и добавок на основе отрубей (по уровню незаменимых аминокислот)

А/к-та / скор, % Отруби Амарант Соя Белк. концентрат из отрубей Фервитал

1. Валин 84 76 122 95 110

2. Изолейдин 72 90 132 87 143

3. Лейцин 90 81 111 105 106

4. Лизин 84 91 111 104 95

5. Метионин 97 137 89 н/д 166

+цистеин

6. Треонин 93 137 101 100 115

7. Фенилаланин 118 80 130 151 198

-Игирозин

8. Триптофан 87 н/д 131 н/д 140

Из табл. 5 видно, что по сравнению с одним из исходных компонентом - пшеничными отрубями, «Фервитал» намного более насыщен эссенциальными амино-

[слотами. Можно сделать вывод, что дрожжевая биоконверсия такого распростра-нного и дешёвого сырья, каким является рожь и пшеница, может служить выгод-|й альтернативой применению белковых добавок на основе сои, амаранта и полу-нных с привлечением методов химической экстракции.

Результаты исследований, проведённых в Центре Токсико-Гигиенических Ис-едований Федерального Управления Охраны РФ, Центральном НИИ Стоматоло-и, Московском областном НИИ Акушерства и Гинекологии, Московской Город-ой Поликлинике №38 и др. учреждениях, показывают, что БАД "Фервитал" имеет ко выраженное антитоксическое и лактобифидогенное действие. На рис. 11 пред-авлены результаты использования «Фервитала» в 70М Центральном Военном авиа-юнном госпитале г.Москвы при лечении хронических болезней совместно с тра-щионной терапией.

Исчезновение болевого синдрома, дни

9 - ■ 1.1 ■.]-

8 □ Фервитал

7__□ Контроль _ . _

о — к- ,, ,1—,——_!——,————,—--—,

Гепатит Гастрит Колит Панкреатит

Рис. 11: Эффект от применения БАД «Фервитал» при терапии заболеваний

ЖКТ

«Фервитал» можно принимать отдельно или во время приёма пищи. Возможно 5 введение в традиционные продукты с целью придания им лечебно-офилактических свойств. Была разработана рецептура хлеба «Фервитал» с добав-яием 15% произведённой добавки к массе муки и проведены опытные выпечки,

□ Фервитал

□ Контроль

которые продемонстрировали хорошие вкусовые и органолептические свойства п лученных изделий. Табл. 6 содержит результаты измерения основных показатеж по сравнению с контролем, в качестве которого использовался хлеб с добавление 15% пшеничных отрубей.

Таблица 6: Показатели качества хлебобулочных изделий «Фервитал»

Показатели

№ Вариант Уд. объём, Порис- Влажность, Кислотность, АН, АН, АН,

мл/100г тость, % % О общ. упр. пласт.

1. «Фервитал» 390 74 43 3,5 87,5 62,3 22,8

2. Контроль 482 81 44 3,0 94,8 71,6 23,2

3. Технологическая часть

В данном разделе диссертации приведены технологическая и аппаратурн схемы производства БЛД «Фервитал», спецификация к аппаратурной схеме и опис ние производственного процесса.

4. Экономическая часть

В этом разделе представлены экономическое обоснование выпуска данн( продукции, анализ структуры производственного процесса, расчёт материальных з трат на выпуск 1000 кг БАД «Фервитал» и калькуляция себестоимости продукта.

Выводы

I. Микробиоценозы винограда и винодельческого сырья представляют значитсл ный интерес как источник дрожжевых культур-продуцентов биомассы на твё дофазных растительных субстратах.

II. В качестве компонентов питательных сред для выращивания этих дрожжей м гут быть использованы различные растительные субстраты пищевого и корм вого достоинства.

I. По эффективности дрожжевой биоконверсии и по экономическим показателям наиболее целесообразными субстратами могут быть признаны различные виды зерна и продукты его переработки. }. Осолаживание зерна является эффективным методом повышения продуктивности дрожжей на зерновых субстратах.

Глубинное культивирование дрожжей на гомогенных и особенно гетерогенных питательных средах может быть использовано для получения посевной культуры.

I. Основным типом производственного культивирования является твердофазная ферментация.

I. Полученные твердофазные дрожжевые культуры могут быть компонентами пищевых или кормовых продуктов и использоватся как самостоятельные препараты.

И.Дрожжевая ферментация приводит к улучшению аминокислотного состава полученных продуктов и придаёт им выраженные лечебно-профилактические свойства.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

>орисенко Е.Г., Ерофеев П.Ю., Юрченко A.B., Пименов C.B., Бажан Ю.А. Хлебо-ючные изделия как лечебно-профилактические продукты // Тезисы докладов V кдународного симпозиума «Экология человека: пищевые технологии и продукты пороге XXI века», Москва-Пятигорск, 1997, с.59-61.

!рофеев П.Ю., Борисенко Е.Г. Зерновые продукты лечебно-профилактического начеты. И Тезисы докладов международной научно-технической конференции сурсосберегающие технологии пищевых производств», С.-Пб., 1998, с.151-152. ¡орисенко Е.Г., Ерофеев П.Ю. Дрожжевые пробиотики в регулировании микроценозов желудочно-кишечного тракта. // Тезисы докладов международной науч-ирактической конференции «Индустрия продуктов здорового питания - третье ячелетие», М., 1999, ч.Н, с.78-79.

4. Ерофеев П.Ю., Борисенко Е.Г. «Фервитал» - ферментированные жизнестимул рующие продукты из растительного сырья. // Труды III международного симлозиуг «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования», Мосга Пущино, 1999, т.Ш, с.413-415.

5. Борисенко Е.Г., Ерофеев П.Ю. «Фервитал» - новый бслково-витаминный препар или нечто большее? // «Здесь и сейчас», М., октябрь 1999, с.95.

6. Ерофеев П.Ю., Борисенко Е.Г. Ферментированные лечебно-профилактическ продукты на базе растительного сырья. // Тезисы докладов научно-технической ко ференции «Молодые ученые - пищевым и перерабатывающим отраслям АГ (технологические аспекты производства)», М., 1999, с.63.

According to the available scientific data major part of russian people has faced t problem of increasing number of gastrointestinal diseases. Biotherapy of the diseases witl new group of the preparations called probiotics seems very perspective. In this thesis e demonstrated a possibility of utilizing in-deptii and solid-phase fermentation of raw vegei ble materials with specially selected strain of yeast to produce a new probiotic. Due to bi logical conversion of grain, vegetables and fruit the product is filled with necessary amir and organic acids, vitamins, specific polysaccharides of cells' membranes and other valual components thus having the healing and preventive effect. Investigated are different ways making the fermentation to produce cheaper product and its chemical composition. A bro range of beneficial properties of the product is proved by clinical tests in many state ins tutes and clinics. The tests showed quick normalization of the micrbiocenosis of the gasti intestinal tract when taking in combination with traditional medicines or alone.

Summary

Содержание диссертации, кандидата технических наук, Ерофеев, Павел Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. роль микрофлоры ЖКТ в поддержании гомеостаза человека и животных

1.2. пробиотики.

1.3. применение дрожжей в изготовлении пробиотических продуктов----------.

1.4. дрожжи в производстве обогащённых белком пищевых продуктов и кормов.

1.5. возможные субстраты и особенности культивирования дрожжей при получении пробиотических продуктов.

1.6. винодельческое сырьё как источник дрожжей-продуцентов биомассы

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. материалы и методы исследований.

2.1.1. Материалы.

2.1.1.1. Штаммы дрожжей, применявшиеся в работе.

2.1.1.2. Сырьё, применявшееся в работе.

2.1.2. Методы.

2.1.2.1. Методы селекции продуцентов биомассы.

2.1.2.2. Методы получения питательных сред.

2.1.2.2.1. Метод получения зернового автолизата:.

2.1.2.2.2. Метод получения зернового экстракта:.

2.1.2.3. Метод получения посевного материала.

2.1.2.4. Метод обработки питательных сред перед засевом.

2.1.2.5. Метод засева.

2.1.2.6. Методы культивирования микроорганизмов.

2.1.2.7. Методы получения готовых продуктов.

2.1.2.7.1. Методы получения сухих лечебно-профилактических добавок.

2.1.2.7.2. Метод приготовления хлеба «Фервитал».

2.1.2.7.3. Метод приготовления зернового (безмучного) хлеба.

2.1.2.8. Методы исследований.

2.1.2.9. Методы математической обработки результатов исследований.

2.2. результаты исследований и их обсуждение.

2.2.1. выделение дрожжей - продуцентов биомассы на растительных субстратах

2.2.1.1. 1ьй этап селекции.

2.2.1.2. 2ой этап селекции.

2.2.1.3. зш этап селекции.

2.2.1.4. 4^ этап селекции.

2.2.1.5. краткая культурально-морфологическая характеристика полученных штаммов

2.2.2. Выбор сырья

2.2.3. оптимизация параметров культивирования в. увч1т8 на сокосодержащих средах.

2.2.3.1. Одностадийная ферментация на средах, содержащих соки без пульпы.

2.2.3.2. Одностадийная ферментация на средах, содержащих соки с пульпой.

2.2.4. Оптимизация параметров культивирования в. упга т8 на средах, содержащих картофель.

2.2.4.1. Выбор режима обработки сырья и культивирования.

2.2.4.2. Создание безотходного способа приготовления питательной среды из картофельного пюре.

2.2.4.3. улучшение безотходного способа приготовления питательной среды из картофельного пюре.

2.2.4.4. уточнение оптимального гидромодуля и необходимости добавления пеногасителя.

2.2.5. использование комплексных растительных субстратов.

2.2.5.1. получение суповых добавок, содержащих овощи.

2.2.5.2. получение суповых добавок, содержащих овощи и зелень.

2.2.5.3. получение мюсли, содержащих морковь, овсяные хлопья и орехи.

2.2.6. оптимизация параметров культивирования б. vin1 т8 на зерновом сырье

2.2.6.1. выбор оптимальной степени автолиза.

2.2.6.2. испытание различных экстрагентов.

2.2.6.3. влияние концентрации ржаного солода при одностадийной экстракции на выход культуры Б. ум Т8.

2.2.6.4. сравнение способов ферментации жидких питательных сред.

2.2.6.5. влияние плотной фазы в глубинных культурах б. сеяеу181ае фр.з и б. уш1т8 на выход дрожжей.

2.2.6.6. Сравнение различных зерновых культур и способов ферментации в глубинных средах.

2.2.6.7. изучение динамики роста дрожжей Б. ум Т8 на твердофазной среде.

2.2.6.8. сравнение продуктивности б. умт8 и хлебопекарных дрожжей.,.

2.2.6.9. Нахождение оптимального количества пророщенного зерна в жидкой гетерогенной среде.

2.2.6.10. Влияние срока проращивания зерна ржи на выход культуры S. vnsnT8.

2.2.6.11. Влияние измельчения зерна пшеницы на выход культуры S. vnsn Т8.

2.2.6.12. Влияние вида и дозы посевного материала на выход культуры S. vm Т8.

2.2.7. выбор условий производственного культивирования.

2.2.7.1. Выращивание в ферментаторах малой ёмкости.

2.2.7.1.1. Выращивание в ферментаторе «Авштех» на гетерогенном зерновом экстракте.

2.2.7.1.2. Выращивание в ферментаторе «Abietex» на суспензии отрубей.

2.2.7.1.3. Выращивание в ферментаторе «Авштех» на гомогенном экстракте.

2.2.7.1.4. Выращивание в ферментаторе «Биостат» на суспензии отрубей.

2.2.7.2. Нахождение альтернативных способов ТФФ.

2.2.7.2.1. Использование заваренного шелушёного зерна.

2.2.7.2.2. Использование замоченного шелушёного зерна.

2.2.7.2.3. выбор отсушивающего компонента и времени ферментации.

2.2.7.3. Концепция оптимального культивирования.

2.2.8. производство дрожжевых лечебно-профилактических продуктов

2.2.8.1. Получение Б АД «Фервитал».

2.2.8.2. Выпечка хлеба «Фервитал».

2.2.8.3. Выпечка хлеба «Фервитал тонус».

2.2.9. Характеристика конечного продукта

2.2.9.1. Классификация основных действующих компонентов БАД «Фервитал».

2.2.9.2. Исследование аминокислотного состава «Фервитала».

3. ВЫВОДЫ.

4. ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ.

4.1. технологическая схема.

4.2. Аппаратурная схема.

4.3. Спецификация к аппаратурной схеме.

4.2. Описание производственного процесса.

4.2.1. требуемое сырьё и материалы:.

4.2.2. получение посевного материала на качалочных колбах и в инокуляторе.

4.2.3. подготовка питательной среды для посевного аппарата и растильной камеры

4.2.4. Получение готового дрожжевого препарата.

5. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ.

5.1. экономическое обоснование освоения выпуска данной продукции.

5.2. Структура производственного процесса.

5.3. Анализ структуры производственного процесса.

5.4. Расчёт материальных затрат на выпуск 1000 кг БАД «Фервитал».

5.5. Калькуляция себестоимости продукции.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка технологии дрожжевых лечебно-профилактических продуктов на базе растительного сырья"

В результате ухудшения экономической ситуации в России и странах СНГ значительная часть населения лишена полноценного питания и профессионального медицинского обслуживания, что в совокупности с неблагоприятной экологической и санитарно-гигиенической обстановкой во многих регионах ведёт к росту заболеваемости, снижению продолжительности жизни, ухудшению генофонда. Как известно, одной из защитных систем высшего организма является его микробиоценоз, прежде всего желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Нормальное функционирование кишечной микрофлоры играет огромную роль в поддержании здоровья человека. Однако в настоящее время до 95% городского населения России имеет те или иные нарушения этой микрофлоры [40]. Поэтому сейчас уделяется большое внимание разработке таких перспективных средств профилактики и лечения заболеваний ЖКТ, как пробиотики и пробиотические продукты. Пробиотики - это живые микроорганизмы или ферментированные (культивированные) ими продукты, которые оказывают благотворный эффект на здоровье человека и животных, в большей степени реализующийся в ЖКТ [34]. Применение пробиотиков во многих случаях альтернативно лечению антибиотиками, ввиду повышения резистентности возбудителей различных инфекций к последним [33]. Не вызывая грубых нарушений в микробной экосистеме ЖКТ, пробиотики корректируют её в сторону нормализации.

Наиболее распространёнными пробиотиками в нашей стране стали препараты, содержащие в качестве действующего начала живые культуры бифидо- и лактобактерий как типичных представителей нормальной микрофлоры кишечника [35]. Однако реальный терапевтический эффект от применения этих средств зачастую меньше ожидаемого из-за того, что вносимые извне штаммы плохо приспособлены к существованию в особых, всегда специфических условиях каждого организма, плохо заселяют кишечник организма по причине генетической неадекватности [33,44]. Вместе с тем имеется достаточно фактических данных, свидетельствующих о наличии пробиотиче-ских свойств у дрожжей родов Saccharomyces, Candida и др. [36,37,46]. Хорошо зарекомендовал себя препарат кормового и пищевого достоинства «Рекицен» на базе отрубей, подвергаемых твердофазной ферментации специально отселекционированным штаммом винных дрожжей [4,38]. Пробиоти-ческие препараты дрожжевой природы, обладая сорбционными свойствами, при попадании в кишечник выводят оттуда токсины и клетки патогенных и условно-патогенных микробов [29]. Кроме того, клеточные стенки дрожжей, содержащие полимеры глюкозы и маннозы, обладают выраженным бифидо-генным эффектом [34]. Таким образом, терапевтический эффект применения дрожжевых пробиотиков заключается в восстановлении собственных штаммов полезной микрофлоры. Это позволяет успешно лечить заболевания ЖКТ различной степени тяжести, избегая применения антибиотиков и химиопре-паратов. Вместе с тем, дрожжевая биоконверсия растительного сырья должна приводить к обогащению его незаменимыми аминокислотами, витаминами, органическими кислотами, ферментами и другими полезными веществами.

Производство из ферментированных дрожжами растительных субстратов лечебно-профилактических препаратов и продуктов, доступных для ежедневного потребления (т.н. парафармацевтиков), например оздоровительного хлеба, будет способствовать профилактике различных заболеваний пищеварительной системы, удовлетворению потребности населения в полноценном белке, пищевых волокнах, микроэлементах, витаминах и др. компонентах, повышению иммунитета и, как следствие, укреплению здоровья жителей России.

Цель и задачи исследования

Целью настоящих исследований явилась разработка технологии производства дрожжевых лечебно-профилактических препаратов и парафармацев-тических продуктов для всех групп населения.

В соответствии с поставленной целью были определены основные задачи: выделить из натурального сырья штаммы дрожжей-продуцентов биомассы на негидролизованных растительных субстратах; => испытать различные субстраты в качестве основы питательных сред для глубинной и твердофазной дрожжевой ферментации и выбрать из этих субстратов наиболее перспективные; => выяснить закономерности роста дрожжей на выбранных субстратах, определить возможные пути ведения дрожжевой ферментации и варианты технологического процесса при производстве на пищевых и перерабатывающих предприятиях разного профиля; => определить возможные способы оптимизации процесса ферментации и снижения себестоимости готовых лечебно-профилактических дрожжевых продуктов; разработать комплекс документации, необходимой для производства лечебно-профилактических продуктов, наработать опытные партии; => проанализировать полученные продукты на содержание основных биоактивных компонентов, проверить физиологическое действие, провести клинические испытания.

Научная новизна разработана методика выделения из натурального винодельческого сырья дрожжей-продуцентов биомассы; => показана возможность использования отселекционированных штаммов для получения ферментированных продуктов на базе различных зерновых и плодоовощных субстратов; => определены общие закономерности роста используемых дрожжей на простых и комплексных питательных средах; => разработаны методы оптимального ведения процессов глубинной и твердофазной ферментации; установлена возможность обогащения применяемых растительных субстратов дрожжевым белком, богатым незаменимыми аминокислотами; доказано пробиотическое действие и выраженная клиническая эффективность получаемых продуктов.

Практическая значимость разработаны технологическая и аппаратурная схемы производства биоактивной добавки (БАД) «Фервитал» с использованием стандартного оборудования, рассчитаны основные экономические показатели выпуска данной продукции; определены варианты проведения ферментации растительных субстратов, открывающие возможность производства дрожжевых лечебно-профилактических продуктов в условиях различных предприятий в зависимости от их профиля, имеющегося сырья, технического оснащения и т.д.; осуществлены опытные выпечки хлебобулочных изделий с введением в качестве компонентов разработанных препаратов; => созданы предпосылки для производства различных парафармацевтиче-ских продуктов под маркой «Фервитал» на базе зерна, картофеля, плодоовощных и других субстратов.

Апробация и публикации

Согласно разработанным техническим условиям было организовано производство БАД «Фервитал» (Регистрационное удостоверение Минздрава РФ №000624.Р.643.12.98) на мощностях АО «Хлебозавод №12» (г.Москва). Проведены клинические испытания получаемого препарата. Основные результаты работы докладывались на международном симпозиуме «Экология человека: пищевые технологии и продукты на пороге XXI века», (г.Пятигорск, 1997), международной научно-технической конференции «Ресурсосберегающие технологии пищевых производств» (г.Санкт-Петербург, 1998), международной научно-практической конференции

10

Индустрия продуктов здорового питания - третье тысячелетие» (Московский государственный университет пищевых производств, 1999) и научно-технической конференции «Молодые учёные - пищевым и перерабатывающим отраслям АПК» (МГУПП, 1999). По материалам диссертации опубликовано 6 работ, в которых отражены её основные положения и перспективы дальнейших исследований.

Структура и объём диссертации

Данная диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, технологической и экономической частей, списка использованной литературы и приложения.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата технических наук, Ерофеев, Павел Юрьевич, Москва

1. Бабьева И.П., Чернов И.Ю. Биология дрожжей. // М.: Московский Университет, 1992.- 128 с.s

2. Бекер М.Е., Лиепинын Г.К., Райпулис Е.П. Биотехнология. // М.: Агро-промиздат, 1990. -334 с.

3. Борисенко Е.Г. Разработка комплексной технологии белковых препаратов на основе нетрадиционного сырья и дрожжей: Дисс. . док.тех.наук. // М., 1990. -471 с.

4. Борисенко H.A. Разработка технологии ферментированных продуктов на основе зерна ржи: Дисс. канд.тех.наук. // М., 1996. -200 с.

5. Веселов А .Я. Современные представления о нормальной микрофлоре пищеварительного тракта взрослого человека и изменения её в норме и при некоторых заболеваниях органов пищеварения // Лабораторное дело, 1988. -№4 -с. 3-11.

6. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов. // М.: Агропромиздат, 1987. -335 с.

7. Зунг Н.К. Разработка технологии получения дрожжевых лечебно-профилактических препаратов на твёрдых растительных субстратах: Дисс. . канд.тех.наук. //М., 1996. -200 с.

8. Казаков Е.Д., Кретович В.Л. Биохимия зерна и продуктов его переработки. //М.: Агропромиздат, 1989. -368с.

9. Пробиотики вместо антибиотиков. // Комбикормовая промышленность. -1994. -№2. с. 18-23.

10. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды: Пер. с анг. // М.: Мир, 1987.-411с.

11. Сафонов Г.А., Калинина Т.А., Романова В.П. Пробиотики как фактор, стабилизирующий здоровье животных. // Ветеринария. 1992. -№ 7-8, с. 3-4.

12. Технология переработки зерна. (Мукомольное, крупяное и комбикормовое производство), под ред. КуприцаЯ.Н., М., 1965. -484с.

13. Товароведение зерна и продуктов его переработки, 2 изд., М., 1971. -352с.

14. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора человека и некоторые вопросы микроэкологической токсикологии. // Антибиотики и мед. биотехнология. // М.: 1987. т.32. - №3. - с.164-170.

15. Молодинашвили Д.А. Подбор разных видов дрожжей для комплексного использования с целью повышения качества вин. Автореф. дисс. канд.тех.наук. // Тбилиси, 1980. -24с.

16. Саенко Н.Ф. Дикие дрожжи и дрожжеподобные грибки в винодельческом производстве. // Обмен передовым техническим опытом. // М.: Пищепро-миздат, 1956. -56с.

17. Саенко Н.Ф., Мальцева М.А. Технологические требования к микроорганизмам, применяемым в виноделии. // М.: Пищевая промышленность, 1975. -34с.

18. Hirsch J.G. Host resistance to infectious disease // Bacterial and mycotic infections of man (4th edition), Rockefeller Institute, N.Y., 1965, pp. 170-178.

19. Carman R.J., Van Tassell R.L., Wilkins T.D. The normal intestinal microflora: ecology, variability and stability // Veterinary and Human Toxicology, Vol. 35, Suppl. 1,1993, pp. 11-14.

20. Gorbach S.L. Perturbation of intestinal microflora // Veterinary and Human Toxicology, Vol. 35, Suppl. 1,1993, pp. 15-22.

21. Fleet G.H. Yeasts in dairy products // The journal of applied bacteriology, Vol. 68,1990, pp. 199-211.

22. Fuller R. Probiotics in man and animals // The journal of applied bacteriology, Vol. 66, 1989, pp. 365-378.

23. Gadd J. MOS a gut feeling on dredging out the nasties // Pig farming, #11, 1994, pp. 21-23.

24. Таппоск G.W. The normal microflora: new concepts in health promotion // Microbiological sciences, Vol. 5, #1,1988, pp. 4-8.

25. Stewart C.S., Chesson A. Making sense of probiotics // Pig veterinary journal, Vol.31,1993, pp. 11-29.

26. Williams P.E.V. A feed compounders perspective of probiotics // Arkansas nutritional conference, 1992, pp. 51 -61.

27. Суржик О. «Пробиотики Украины»: болеть или не болеть? // Киев: «Зеркало недели», 1999, №5, с.36-38.

28. Шевелева С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса. // М.: «Вопросы питания», 1999, №2, с.32-40.

29. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том I: Микрофлора человека и животных и ее функции. // М.: Грантъ, 1998. -288с.

30. Probiotic additives //Belgian CCMNews, 1996, #2, pp. 150-153.

31. FulIer R., Gibson G.R. Scandinavian Journal of Gastroenterology, 1997, #32; Suppl.22, pp.28-31.

32. Xa H.T.T. Разработка технологии дрожжевых ферментированных продуктов на основе рисовой мучки: Дисс. . канд.тех.наук. // М., 1996. -121с.

33. Агеева Н.М., Гугучкина Т.И. Применение препаратов винных дрожжей для детоксикации соков и вин. // Тезисы докладов V Международного симпозиума «Экология человека: пищевые технологии и продукты на пороге XXI века», Москва-Пятигорск, 1997, с.22-24.

34. Ещё раз о «Пище XXI века». // М.: «Центр plus», 1999, №27, с. 12.

35. Roberts А.К., Harzer G., Drazer B.S., Hill M.J. The effect of diet on the bacterial flora of the infant gut // Microecological Therapy, 1984, vol.14, pp. 1219.

36. Смирнов B.B. Антибиотики и/или пробиотики: размышления и факты. // Киев: «Ллкування та Дiaгнocтикa», 1998, №2, с.8.

37. Берестов А., Горская Е.М., Николаев Н.Н. Обольщение. О биодобавках. // М.: Русский Хронограф, 1999. -112с.

38. Алешкин В.А., Бабин В.Н., Даванков В.А., Домарадский И.В., Дубинин А.В., Кондракова О.А. На пороге XXI века: симбиотики новая веха в истории борьбы за выживание человека. // Харьков: «Провизор», 1998, №23, с.28-32.

39. Thompson J.P. Product Total Flora Support. Questions & Answers. // Interchange Inc., 1997. -212p.

40. Tannock G.W. et al. Probiotics: A Critical Review. // Horizon Scientific Press, 1999. -370p.

41. Gissen A.S. Off Probiotics, Prebiotics & Synbiotics. // VRP's Inc. Vit. Res. Prod. Newsletters, Sept. 1995. -p.56-66.

42. Куваева И.Б., Кузнецова Г.Г. Антагонистическая активность микробных популяций защитной флоры и её связи с характеристикой микробиоценоза и факторами питания. // М.: «Вопросы питания», 1993, №3, с.46-50.

43. Chaitov L., Trenev N. Probiotics. // Thorsons Publishing Group, Northamptonshire, 1990. -320p.

44. Коршунов B.M. Проблема регуляции микрофлоры кишечника. // Журнал микробиологии, 1995, №3, с.48-55.

45. Марьин В.А. Бифидогенные молочные продукты без бифидобактерий. // Тезисы докладов Международной научно-практической конференции «Индустрия продуктов здорового питания третье тысячелетие», М., 1999, ч.П, с.85-86.

46. Сайтов М.М., Никитенко В.И., Есипов В.К., Писецкий С.Н. О роли дис-бактериоза в развитии хирургической инфекции. // Вестник Росс. Акад. Мед. Наук, М., 1997, №3, с.17-19.

47. Бухарин О.В., Валышев А.В. Факторы персистенции кишечной микрофлоры при дисбиозе. // Вестник Рос. Акад. Мед. Наук, М., 1997, №3, с.19-21.

48. Скурихин И.М., Нечаев А.П. Всё о пище с точки зрения химика. // М.: Высшая школа, 1991. -288с.

49. Колпакова В.В. Научные основы технологии получения и применения белковых продуктов из пшеничных отрубей: Дисс. док.тех.наук. // М., 1997. -498с.

50. Пучкова Л.И. Лабораторный практикум по технологии хлебопекарного производства. // М.: Лёгкая и пищевая промышленность, 1982. -231с.

51. Мудрецова-Висс К.А. Микробиология. // М.: Экономика, 1985. -256с.

52. Уайт А. и др. Основы биохимии: пер. с англ. // М.: Мир, 1981.

53. Berry D.R. Biology of yeast. // Edward Arnold, 1982. -96p.

54. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том II: Социально-экологические и клинические последствия дисбаланса микробной экологии человека и животных. // М.: Грантъ, 1998. -414с.

55. Борисенко Е.Г. Молекулярная генетика. Текст лекций. // М.: МГАПП, 1996. -55с.

56. Пащенко Л.П. Биогидролизаты из муки амаранта в технологии булочных изделий. // Труды III Международного симпозиума «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования», Москва-Пущино, 1999, т.1, с.119-121.

57. Вербина Н.М., Каптерева Ю.В. Микробиология пищевых производств. // М.: Агропромиздат, 1988. -256с.

58. Удалова Э.В. Ферментативная обработка зерновых субстратов. // Тезисы докладов Международной научно-технической конференции «Ресурсосберегающие технологии пищевых производств», С.-Пб., 1998, с.153-154.

59. Доронин А.Ф., Панфилова И.А. и др. Целебные сухие зерновые завтраки. // Тезисы докладов Международной научно-практической конференции «Индустрия продуктов здорового питания третье тысячелетие», М., 1999, ч.П, с.61.

60. Манаков М.Н., Победимский Д.Г. Теоретические основы технологии микробиологических производств. -М.: Агропромиздат, 1990. -272с.

61. Розанцев Э.Г. Совершенствование технологии выделения белков из отрубей. // Сб. материалов всесоюзной конференции по пищевой химии, М., 1991, с.8-14.

62. Грачева И.М., Иванова Л.А., Кантере В.М. Технология микробных белковых препаратов, аминокислот и биоэнергия. // М.: Колос, 1992. -383с.

63. Войно Л.И., Саловарова В.П. Общая микробиология (прокариоты и эука-риоты продуценты биологически активных веществ). // М.: МТИПП, 1984. -99с.

64. Щерба В.В., Бабицкая В.Г., Кустина A.M. Биоконверсия лигнинцеллюлоз-ного комплекса соломы в условиях глубинного культивирования // Передовой производственный опыт в мед. промышленности, рекомендованный для внедрения. М., 1992, вып.З, с.11-14.

65. Совершенствование технологического процесса производства новых видов продуктов и добавок. // Использование вторичного сырья и пищевых ресурсов: Тез. докл. всесоюзн. научно-тех. конф. Киев, 1991. -216с.

66. Агеева Н.М., Толмачев В.А. и др. Снижение токсического действия этанола с помощью пищевых добавок. // Тезисы докладов V Международного симпозиума «Экология человека: пищевые технологии и продукты на пороге XXI века», Москва-Пятигорск, 1997, с.24-25.

67. Чахова О.В. Гнотобиология о микрофлоре организма хозяина и антибио-тикотерапии. // Антибиотики и медицинская биология, 1987, т.32, №3, с.170-173.

68. Шесть миллиардов ещё не предел. // М.: «Новая газета», 1999, №230, с.1.

69. Parker R.B. Probiotics, the other half of the antibiotics story. // Animal Nuts and Health. -1987, vol.29, #1, pp.4-8.

70. Александров E.H., Сгаднев Б.Ф., Кауфман Г.М. Переработка отходов различных отраслей народного хозяйства микробиологическими методами. -М.: ОНТИТЭИ Микробиопрома, 1992. -55с.

71. Алексин М.М. Энтеробифидум и лактобактерин в профилактике диарей-ных болезней телят. // Учён. зап. Витебск, вет. инст-та. Витебск, 1993, т.30, с.12-14.

72. Алтухов Н.М. Дисбактериоз кишечника при диарее у новорождённых телят. // Ветеринария, 1993, №8, с.45-48.

73. Ануфриева Э.Н. Конверсия опилок в белково-углеводные кормовые препараты в процессе твёрдофазной ферментации высшими грибами. // Труды ком. НЦ УРО Российской АН, 1992, №125, с.51-59.

74. Борисенко C.B. Разработка технологии производства белковых добавок и изучение возможности их рационального использования в кормлении сельскохозяйственных животных: дисс. . канд. тех. наук. -М., 1991. -140с.

75. Сегунда Б.К.Л. Биохимическая характеристика культуры кинуа (Chenopodium quinoa) и её промышленное использование. // Автореф. дисс. . канд. тех. наук. -М., 1999. -25с.

76. Вартанян Г.Г. Факторы патогенности бактерий, выделенных при диареях новорождённых телят. //Автореф. дисс. канд. вет. наук. -М., 1992. -23с.

77. Павлоцкая Л.Ф., Дуденко Н.В., Эйдельман М.М. Физиология питания. // М.: Высш. шк., 1989. -368с.

78. Грачев Ю.П. Математические методы планирования эксперимента. // М.: Пищ. пром-ть, 1979. -198с.

79. Жаманов М.Б., Сорокин В.П. Продуктивность свиней при включении в рацион корма из «клеточных оболочек» дрожжей. // Бюлл. ВНИИ Животноводства, 1995, №11, с.28-30.

80. Василенко О.В., Донскова C.B. и др. Экономика пищевой промышленности. //М.: Агропромиздат, 1989. -398с.

81. Ибрагимов В.В., Ургуев K.P., Мусаеве М.Н. Лечение желудочно-кишечных болезней новорождённых телят. // Морфофункциональные показатели продуктивности животных: Сб. науч. тр. Ставроп. СХИ. -Ставрополь, 1993, с.57-59.

82. Исметулова Ф.М., Воронин Е.С. Микробный индекс здоровых телят и с острыми кишечными заболеваниями. // Актуальные вопросы инфекции и инвазионных болезней животных. -М., 1993, с. 118.

83. Ковальская Л.П., Мелькина М.Г. и др. Общая технология пищевых продуктов. -М.: Колос, 1993, с.232-233.Ю5.Капуспаева К.М. Смешанные культуры микроорганизмов для кормопроизводства: Автореф. дисс. канд. биол. наук. -Алматы, 1993. -25с.

84. Минская Ю.И. Влияние дрожжей на состояние печени при некоторых заболеваниях желудочно-кишечного тракта и желчных путей. // Сб. трудов Курского Мед. Инст-та. -Курск, 1995, вып.2, с. 136-138.

85. Богуславский В.М. и др. Микрорганизмы в кормопроизводстве. // Сб. статей АН Респ. Молдова, Отд. микробиологии. -Кишинев, 1994, с.56-59.

86. Сизенко Е.И. Основные направления фундаментальных и прикладных исследований в пищевой и перерабатывающих отраслях. // Тез. докл. Межд. конф. «Научно-технический прогресс в перерабатывающих отраслях АПК». -М.: 1995, с.4-7.

87. Способ профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных. Патент SU 1805965 A3; Кл. А61К 35/72 / Борисенко Е.Г, Самойленко И.И., Василевич Л.Н. и др. Опубл. 30.03.93. Бюл. №12.

88. Ставцева JI.Я., Фёдорова М.К., Павлов Г.Б. Бактериальная микрофлора кишечника больных диреей телят и поросят. // Вестник сельскохозяйственной науки, -М., 1992, №5-6, с. 149.

89. Столетний О.В., Коротченко О.Д., Буренков П.Т. Влияние кормовой лечебно-профилактической добавки на перевариваемость и использование питательных веществ рациона кур. // Резервы повышения продуктивности животных в Приморье. -Уссурийск, 1992, с.36-38.

90. Фёдорова С.А., Белоглазова Л.К. и др. Сравнительная характеристика биологической ценности продуктов переработки пшеницы. // Изв. ВУЗов. Пищ. технол. -Краснодар, 1992, с.5.

91. Шлегель Г. Общая микробиология: Пер. с нем. -М.: Мир, 1987. -567с.

92. Шубина Л.А. Биологические препараты с живыми бифидобактериями для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний. // Сб. трудов НИИСХ ЦРНЗ: Интенсивные технологии производства. -М., 1989, с.128.

93. Щерба В.В., Бабицкая В.Г., Кустина A.M. Биоконверсия лигнинцеллю-лозного комплекса соломы в условиях глубинного культивирования. // Передовой производственный опыт в мед. пром-ти, рекомендованный для внедрения. -М., 1992, вып.З, с. 11-14.

94. Dzinba Е. The effect of conditions on batch and continuous fermentation by reduced pressure on yeast S. cerevisiae. // Zeszyty nayk. akad. rol. we Wroclawie/ Rozprawa habilitacyjna #116.0867 -1427. -Wroclaw, 1993, p.77.

95. Кантере В.М., Мосичев М.С. и др. Основы проектирования предприятий микробиологической промышленности. -М.: Агропромиздат, 1990, -304с.

96. Быков В.А. Расчёт процессов микробиологических производств. // Киев: Наукова думка, 1991. -663с.

97. Лихачёва Е.И., Азии Д.Л. Об использовании овощных порошков в качестве пищевых добавок. // Тезисы докладов V Международного симпозиума «Экология человека: пищевые технологии и продукты на пороге XXI века», Москва-Пятигорск, 1997, с. 150-151.

98. Мартыненко Н.С., Конова Н.И., Абакумова Т.Н. Новые хлебные изделия профилактического назначения. // Тезисы докладов V Международного симпозиума «Экология человека: пищевые технологии и продукты на пороге XXI века», Москва-Пятигорск, 1997, с.158-159.

99. Мохначев И.Г., Гранатова В.П. Оценка комплексообразующих свойств биологических объектов. // Тезисы докладов V Международного симпозиума «Экология человека: пищевые технологии и продукты на пороге XXI века», Москва-Пятигорск, 1997, с.167-169.

100. Требования безопасности и охраны окружающей Среды

101. Уровни шума и вибраций на рабочих местах не должны превышать значений ПДУ поГОСТ 12.1.003-83 и ГОСТ 12.1.012-90.

102. Запыленность воздуха в рабочих помещениях (при измельчении сухарей и зерна) не должна превышать ПДУ по ГОСТ 12.1.005-88.

103. Ведение технологического процесса должно осуществляться согласно ГОСТа123.002-75.

104. Технологическое оборудование должно соответствовать требованиям ГОСТ122.003-91.

105. Контроль предельно допустимых выбросов в атмосферу должен осуществляться в соответствии с СанПиН 4946-89 и ГОСТ 17.2.3.02-78.

106. Сточные воды должны соответствовать требованиям СанПиН 4630-88 регламентов производства, утвержденных в установленном порядке и при необходимости подвергаться очистке.

107. Охрана почвы от загрязнения бытовыми и промышленными отходами должна осуществляться в соответствии с СанПиН 42-120-4690-88.

108. Уровни шума, вибрации, запыленность воздуха в рабочих помещениях, а также показатели чистоты атмосферного воздуха, сточных вод и почвы определяется в порядке государственного надзора санитарно эпидемиологическими службами.3. Правила приемки

109. Биологически активную добавку «Фервитал» принимают партиями. Определение партии и методы отбора проб по ГОСТ 15113.0-77.Биологически активная добавка «Фервитал» должна подвергаться следующим испытаниям:- приемо-сдаточным;- периодическим.

110. Отбор и подготовку проб по ГОСТ 15113.0-77.

111. Органолептические показатели биологически активной добавки по п.п. 1.1.З.1., 1.1.3.4. проверяются по ГОСТ 27558-87.

112. Содержание влаги по п. 1.1.4.1. оценивается в соответствии с ГОСТ 21094-75.

113. Методы определения адсорбционной активности по п. 1.1.4.2. по ГОСТ 4453-74

114. Кислотность по болтушке по п. 1.1.4.3. в соответствии с ГОСТ 17493-87

115. Массовая доля металломагнитных примесей по ГОСТ 20239-74

116. Зараженность вредителями хлебных запасов по ГОСТ 27559-97.

117. Содержание токсичных элементов определяют по ГОСТ 26927-86, ГОСТ 2693086, ГОСТ 26931-86, ГОСТ 26932-86, ГОСТ 16933-86, ГОСТ 26934-86,микотоксинов и пестицидов по методам, утвержденным Минздравом СССР от 01.08.89 № 5061 (раздел 4 с. 42-43).

118. Отбор проб, подготовку и их анализ по микробиологическим показателям проводят в соответствии с ГОСТ 26972-86.

119. Транспортирование и хранение

120. Транспортирование и хранение биологически активной добавки «Фервитал» осуществляют по ГОСТ 26791-87.

121. Биологически активная добавка «Фервитал» транспортируется всеми видами транспорта в крытых транспортных средствах в соответствии с правилами перевозок грузов, действующих для данного вида транспорта.

122. Не допускается транспортирование биологически активной добавки «Фервитал» совместно с химикатами и резко пахнущими продуктами и материалами.

123. При перевозке, погрузке и выгрузке биологически активная добавка «Фервитал» должна быть предохранена от воздействия атмосферных осадков.

124. Изготовитель должен гарантировать соответствие выпускаемого продукта требованиям настоящих технических условий, при соблюдении условий хранения и транспортирования.