Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Разработка средств лечения и реабилитации животных при отравлении парами аммиака

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Разработка средств лечения и реабилитации животных при отравлении парами аммиака"

На правде рукописи

СОФРОНОВА АНАСТАСИЯ ВЛАДИМИРОВНА

РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ЛЕЧЕНИЯ И РЕАБИЛИТАЦИИ ЖИВОТНЫХ ПРИ ОТРАВЛЕНИИ ПАРАМИ АММИАКА

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

г 4 с;;г г-:п

Казань-2013

005535793

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ») г. Казань.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Асланов Рашид Михайлович

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор, заместитель заведующего отделом

биологической безопасности ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» Макаев Харис Нурутдинович.

доктор биологических наук, доцент кафедры ВСЭ Казанской государственной академии ветеринарной медицины им.Н.Э.Баумана Папуниди Эллада Константиновна

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное

образовательное учреждение высшего профессионального образования «Башкирский государственный аграрный университет» (ФГБОУ ВПО «БГАУ»)

Защита состоится « НЛХМрА 2013 года в Ю.йСкасоъ на заседании диссертационного совета Д 220.012.01 при ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (420075, г. Казань, Научный городок - 2, ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»),

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань).

Электронный вариант автореферата и текст объявления о защите размещен на сайте организации: www.vnivi.ru.

Автореферат разослан «

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук Степанов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. На фоне значительного ухудшения экологической обстановки в Российской Федерации создана федеральная целевая программа «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации 2009-2013 годы».

Для предотвращения чрезвычайных ситуаций, в результате воздействия опасных химических факторов, в том числе и аммиака, в Российской Федерации функционирует единая государственная система химической и биологической безопасности (Гольдфарб Ю.Ю., Простакишин Г.П., Остапенко Ю.Н., 2008;. Литвинов Н.Н и др., 2008).

Подавляющее большинство объектов, использующих в своем производстве аммиак начали эксплуатироваться более, чем 40 лет назад, при нормативных сроках эксплуатации до 15 лет. В этой связи, большая часть химико-технологического оборудования, как морально, так и физически устарело (Иванов A.B., 2006; Курляндский Б.А., 2008). Кроме того, большое количество промышленных предприятий используют в процессе производства аммиак в жидкой и газообразной форме. Поэтому возможность ~ возникновения чрезвычайных ситуаций, связанных с авариями на производствах, а также при перевозке сильнодействующих ядовитых веществ, автомобильным или железнодорожным транспортом, не исключена, с последующими массовыми отравлениями населения и сельскохозяйственных животных, находящихся в зоне катастроф. В настоящее время имеются единичные изыскания в направлении лечебно-профилактических мер при отравлении животных аммиаком (Папуниди К.Х, Тремасов М.Я., 2008; Маланьев A.B., 2010). Поэтому, изучение влияния паров аммиака на клинико-физиологическое состояние животных, а также использование отечественных дешевых лечебно-профилактических средств при отравлении аммиаком является актуальной задачей (Асланов P.M. и др., 2009).

Работа выполнена в соответствии с темой НИР ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»-«Разработка средств и методов групповой профилактики и лечения животных от отравлений парами аммиака» по заданию «Токсикологическая безопасность» (№ гос. регистрации 01200202602).

Цель и задачи исследования. Разработка лечебно-профилактических средств при отравлении животных парами аммиака и изучение их влияния на организм. В этой связи перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Провести скрининг средств профилактики и лечения животных от отравлений ларами аммиака.

2. Определить обезвреживающую и лечебную эффективность препаратов РАН-2 и «Янтарос плюс» на животных.

3. Изучить влияние отобранных лечебно-профилактических средств на организм животных на фоне отравления их парами аммиака

4. Провести ветеринарно-санитарную оценку и биологическую полноценность мяса животных при отравлении их парами аммиака с применением лечебно-профилактических средств.

Научная новизна. Впервые разработаны эффективные лечебно-дегазирующие средства для защиты животных от отравлений парами аммиака. Изучены клинические, морфо-биохимические показатели крови, отравленных парами аммиака животных и после применения предлагаемых лечебно -профилактических средств. Дана ветеринарно-санитарная оценка мяса животных, пораженных парами аммиака при использовании лечебно-профилактических средств. На препарат РАН-2 подана заявка на патент.

Практическая ценность работы. Экспериментально обоснованы схемы применения лечебно-профилактических средств при отравлении животных парами аммиака. По результатам исследований разработано «Методическое пособие по защите животных от отравлений парами аммиака», утвержденное Отделением ветеринарной медицины Российской Академии Сельскохозяйственных Наук (Москва, 2012).

Основные положения выносимые на защиту:

1. Средства для лечения животных от отравлений парами аммиака;

2. Положительное влияние РАН-2 и «Янтарос плюс» при отравлении животных парами аммиака;

3. Морфо-биохимические и иммунологические показатели крови при затравке животных парами аммиака на фоне применения лечебно-профилактических средств;

4. Органолептические и физико-химические показатели мяса при лечении их от отравлений парами аммиака.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях ежегодных ученых советов ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (Казань, 2010-2012 гг.); в материалах международной научно-практической конференции «Биотехнологии в решении экологических проблем природы, общества и человека в Евразии: взгляд молодых ученых и специалистов» (2013).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано 6 научных работ, в том числе 5 в изданиях, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа содержит 32 таблицы. Список литературы включает 287 библиографических источников, в т.ч. 35-зарубежных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные исследования выполнены в лаборатории фармакологии и токсикологии СДЯВ ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в период с 2010 по 2013гг.

В опытах были использованы: 47 белых крыс живой массой 180-200 г, 12 кур кросса «Родонит», живой массой 1,7-2,3 кг, 58 кроликов массой 2,5-3,0 кг, 25 овец породы «Прекос», массой 25-30 кг. Животных подбирали по принципу

аналогов с учетом возраста, пола и массы тела. В опытный период поддерживали одинаковые условия кормления и содержания опытных и контрольных животных.

Для проведения экспериментов в герметичную камеру, помещали животных, наливали в испаритель аммиак, а в. стаканы аэрозольного генератора САГ-1- дегазирующее средство 100-150 мл, рассчитав необходимую дозу в миллиграммах на литр воздуха камеры. Испаряли аммиак с использованием вентилятора для равномерного распределения паров, после чего генерировали дегазирующее средство для нейтрализации паров аммиака.

Контроль концентрации паров аммиака в камере проводили каждые 10 минут, до конца опыта, для количественного определения аммиака использовали универсальный газоанализатор-УГ-2. Для повышения точности анализа был использован газожидкостный хроматограф «Кристалл 5000.2», которым выборочно определяли концентрацию аммиака в камере. Принцип работы хроматографа основан на газохроматографическом разделении смеси аммиака и воздуха на хроматографической колонке с последующей регистрацией их детектором по теплопроводности (ДТП). Определение содержания аммиака проводится по методу абсолютной калибровки. Концентрацию паров аммиака в пробе компьютер определяет автоматически, сразу после анализа по калибровочному графику. За результат анализа принимают среднее арифметическое из 2-х определений. Анализ показал, что показатели УГ-2 и хроматографа «Кристалл» совпадали.

Для лечения животных, выживших после отравления парами аммиака, применяли препарат «Янтарос плюс», вводя его в корм в дозе 25 мг/кг.

В ходе экспериментов изучали клиническое состояние животных, потребление корма и воды, температуру тела, количество дыхательных движений, регистрировали продолжительность жизни, изучали патологоанатомическое состояние внутренних органов. У животных опытной и контрольной групп до опыта и на 1,3,5,10,15,20,30,40-е сут брали кровь для иммунологических, морфологических и биохимических исследований: у кроликов-из ушной, у птиц-из подкрыльцовой, у овец-из яремной вены.

Исследования крови, включающие определение количества эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина, проводили с помощью автоматического гематологического анализатора MYTHIC-18. Биохимический анализ сыворотки крови на содержание мочевины, глюкозы, холестерина, щелочной фосфатазы, AJ1T и ACT осуществляли, используя биохимический анализатор «Микролаб-300».

Определение содержания общего белка в сыворотке крови проводили на рефрактометре RL-3.

Фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови определяли по З.Е.Матусис и С.И.Пылаевой (1972) в модификации Е.А.Олейниковой и др. (1975), объектом фагоцитоза служила однодневная культура Staphylococcus Aureus. НСТ-тест-реакция восстановления нитросинего тетрозоля, учет которой проводился по количеству нейтрофилов с отложениями диформаина в контроле-спонтанно активированные, а в опыте- при применении стимулятора вакцины

S.marcescens, уровень T и B-лимфоцитов определяли методом иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител ИКО-90 против CD-4 и ИКО-12 против CD-22. Циркулирующие иммунные комплексы определяли методом преципитации с 3,5% раствором полиэтиленгликоля. Количественное определение иммуноглобулинов в сыворотке крови проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле (по Мангини, 1965), в модификации

0.Н.Грызловой и др. (1976), (Фримель Г.Ф, 1987; Гажеева Т.П. и др., 2001).

Послеубойную ветеринарно-санитарную экспертизу мяса убитых животных

проводили согласно требованиям «Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарная экспертиза мяса и мясопродуктов» (1988). Отбор проб для физико-химических, органолептических и микробиологических исследований проводили в стерильную посуду-ГОСТ 7269-79 ; ГОСТ Р 51447-99 и ГОСТ Р 51448-99. Микробную обсемененность мышц определяли по ГОСТ 50474-93 и ГОСТ Р 50480-93. Органолептические исследования (внешний вид, запах, консистенция, степень обескровливания), биохимические исследования по ГОСТ 7269-79 и ГОСТ Р 51478-99. Биологическую полноценность мяса * подопытных животных проводили согласно рекомендациям на крысятах-отъемышах, которым в течение 28 суток вволю давали вареный фарш подопытных овец (Беленький Н.Г., 1976).

Для профилактики и лечения отравлений парами аммиака использовали препараты из соединений разных классов-органические кислоты, окислители, антиоксиданты. Опыты проводили по следующей схеме: в один стакан САГА наливали известный дегазатор РИА-1 (разработан в отделе токсикологии ФГБУ «ФЦТРБ ВНИВИ»), в другой испытуемые препараты. Аэрозоли начинали генерировать одновременно с испарением аммиака, затем по 2 мин. каждые 15 мин, 8 раз.

Статистическую обработку полученных данных проводили на персональном компьютере с использованием программ Microsoft Excel с применением критерия достоверности t по Стьюденту. Различия между показателями считали достоверными при р<0,05.

1 З.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

п 3 J Поиск дегазирующих средств при отравлении животных - ' л "* парами аммиака

Для защйты жиЁотных от отравления смертельными дозами паров аммиака в отделе токсикологии ФГБУ « ФЦТРБ-ВНИВИ» был разработан дегазатор РИА-

1, представляющий собой 20% водный раствор лимонной кислоты.

Однако, несмотря на то, что препарат спасает всех животных, некоторое количество аммиака успевает попадать в организм и вызывает негативные последствия, которые надолго снижают иммунитет и продуктивные качества животных. Для их' устранения, т.е. в целях усиления эффективности этого дегазатора была проведена серия экспериментов, при добавлении к нему других веществ.

В опытах было использовано 47 белых крыс, живой массой 180-200 г. Эффективность дегазирующих препаратов определяли по клиническим

признакам,, тяжести интоксикации, продолжительности жизни и смертности животных. В качестве контроля использовали водопроводную воду. Для нейтрализации паров аммиака был использован 20% водный раствор лимонной кислоты, т.е. препарат РИА-1, а для лечения-вещества из соединений разных классов (органические кислоты, окислители, антиоксиданты).

В результате проведенных экспериментов, для усиления эффективности лимонной кислоты был отобран препарат, условно названный РАН-1. Совместное применение 20% водного раствора лимонной кислоты и РАН-1 спасало всех животных при 100% смертности контрольных, не защищенных. Кроме того, практически отсутствуют клинические признаки отравления парами аммиака. Разработанный комплекс 20% раствора лимонной кислоты и РАН-1 получил условное название РАН-2. Однако сохранность дегазирующей способности комплекса РАН-1 и лимонной кислоты при хранении не известна.

3.2 Определение стабильности раствора композиции РАН-2 при

длительном хранении Были проведены опыты на кроликах. 20% водный раствор лимонной кислоты и РАН-1 хранили при комнатной температуре 18-22°С, в закрытой стеклянной посуде. Эффективность РАН-2 проверяли через 1, 30, 180 и 360 суток. Предварительно поместив в герметичную камеру животных, начинали генерировать этот дегазирующий раствор одновременно с испарением аммиака в дозе 16,3 мг/л (ЛДюо), а затем продолжали создавать аэрозоль испытуемого раствора по 2 мин каждые 15 мин 8 раз.

Проведенные эксперименты показали, что раствор РАН-2 при хранении до 180-ти сут полностью сохранял свою эффективность, через 360 сут эффективность незначительно снижалась.

3.3 Определение оптимальной дозы РАН-2, для профилактики

ингаляционного отравления парами аммиака Исследования проводили на 12 кроликах, породы «Серый великан» массой 2,5-3,0 кг, разделенных на 3 группы по 4 животных в каждой.

Первую группу кроликов затравили парами аммиака, в абсолютносмертельной дозе-16,3 мг/л, без использования средств защиты. Все кролики пали с характерными признаками интоксикации.

Во второй группе, одновременно с испарением аммиака, генерировали аэрозоль РИА-1 (150 мл) по 2 мин. через каждые 15 мин, 8-и кратно.

Клиническая картина отравления аммиаком у кроликов при использовании данной схемы проявлялась через 20-30 мин в виде беспокойства, через 40-60 мин животные начинали беспорядочно передвигаться по камере, в этот период, у кроликов учащалось дыхание, появлялись легкие хрипы. Дальнейшего развития клинических признаков отравления в течение опыта не наблюдалось. Через 6-7 ч животные начинали принимать корм и воду. Гибели кроликов не наблюдалось. В третьей группе, одновременно с испарением аммиака, генерировали аэрозоль РАН-2 (200мл) по 2 мин через каждые 15 мин, 8-и кратно. Через 30-40 мин у кроликов отмечали некоторое беспокойство, с последующим учащением дыхания,

которые Происходили спустя 60 минут. Других признаков интоксикации наблюдалось. Все животные выживали.

Таким образом, проведенные эксперименты показали, что и РИА-1 и РАН-2 обладают высокими дегазирующими свойствами. Однако, признаки интоксикации у кроликов, защищенных РАН-2 менее выражены, что говорит о том, что его составляющие не только обеззараживают пары аммиака, но и положительно влияют на организм отравленных животных, т.е.проявляют лечебные свойства. В этой связи, для дальнейших экспериментов, в качестве лечебно-дегазирующего комплекса, мы использовали композицию РАН-2.

3.4 Изучение влияния РАН-2 на морфологические и биохимические показатели крови

При разработке новых средств лечения и профилактики животных важно изучить их влияние на организм животных. С этой целью были проведены эксперименты на 4 кроликах породы «Серый великан» массой 2,5-3,0 кг и на 3 овцах породы «Прекос» массой 20-30 кг. Генерирование аэрозоля РАН-2 в дозе 200 мл проводили в герметичной камере по 2 мин через каждые 15 мин 8 раз. Через стекло в камере наблюдали за животными. В течение всего эксперимента и после него каких-либо клинических изменений выявлено не было, визуально животные не отличались от биологического контроля.

Исследования крови проводили до опыта (исходные значения) и на 1, 5, и

10-е сут после генерирования аэрозоля РАН-2.

По полученным нами данным, можно заключить, что нахождение животных в аэрозоле РАН-2 в течение 120 мин, не изменяет морфологические и биохимические показатели крови, т.к показатели их были близки к исходным данным и достоверных изменений не регистрировалось, т.е. эта композиция не оказывает негативного воздействия на организм животных.

3.5 Эффективность РАН-2 при отравлении парами аммиака разных видов животных 3.5.1 Опыты на курах

Исследование эффективности РАН-2 проводили на курах кросса «Родонит», живой массой 1,7-2,3 кг. разделенных по принципу аналогов на 3 группы по 4 птицы в каждой. Кур контрольной группы затравляли парами аммиака в абсолютносмертельной дозе-13,0 мг/л. Птицы опытной труппы получали аналогичную дозу паров аммиака с использованием РАН-2. Животные третьей группы являлись биологическим контролем, т.е находились аналогичное время в герметичной камере без паров аммиака и дегазатора. Наблюдение за птицеи вели в течение 15 суток.

Первые признаки интоксикации у отравленных кур контрольной группы (без дегазации) в виде резкого движения головы в разные стороны и протирания клюва об пол проявлялись, в среднем, через 4-8 мин от начала испарения аммиака. В дальнейшем, через 20-30 мин, куры начинали дышать через приоткрытый клюв, делая при этом частые глотательные движения, закрывали глаза затем отмечалась синюшность гребешка, начиналось беспорядочное передвижение по камере. Через 32-40 мин у кур отмечались саливация, хрипы,

атаксия. Гибель птиц на фоне судорог и бронхоспазма наступала в: течение 2 ч от начала испарения аммиака.

В эксперименте с группой опытных птиц, затравленных парами аммиака с последующим применением для дегазации РАН-2, клиническая картина отравления птиц проявлялась через 40-50 мин в виде беспокойства. Дальнейшее проявление клинических признаков интоксикации в течение опыта не наблюдалось. Через 5-6 ч после окончания эксперимента птицы начинали принимать корм и воду. Перьевой покров был чистым, невзъерошенным, перья плотно прилегали к телу, гибели кур не отмечалось.,

Общее состояние кур группы биологического контроля в течение всего периода исследования не изменялось. Птица данной группы адекватно реагировали на внешние раздражители, хорошо поедала корм и пила воду.

Анализ внутренних органов, погибших от паров птиц показал синюшность слизистых оболочек, в трахеи и альвеолах рудиментов легких обнаруживалась пенистая жидкость. Печень кровенаполнена, темного цвета, несколько увеличена, желчный пузырь увеличен. Сердце увеличено в объеме, наблюдаются отдельные мелкоточечные кровоизлияния. Сосуды почек кровенаполнены. Селезенка несколько увеличена. Железистый желудок и кишечник без видимых изменений. Патоморфологическая картина внутренних органов кур, отравленных аналогичной дозой паров аммиака с использованием РАН-2, в сравнении с картиной внутренних органов группы биологического контроля были идентичны.

При исследовании крови опытных кур, через 1,3,5,7 и 10 сут каких-либо существенных отклонений в морфологических показателях, а также при подсчете лейкоформулы от исходных значений выявлено не было, а те отклонения, которые были выявлены в процессе работы, были в пределах физиологических норм.

3.5.2 Опыты на кроликах

Исследования проводили на кроликах породы «Серый великан» массой 2,73,2 кг, которые были разделены по принципу аналогов на 3 группы.

Кроликов контрольной группы (3 головы) подвергали затравке парами аммиака в абсолютносмертельной дозе - 16,3 мг/л, опытных животных (6 голов)-аналогичной дозой паров аммиака на фоне применения РАН-2 в качестве лечебно-дегазирующего средства. Третья группа (3 головы) являлась биологическим контролем.

Клинические признаки отравления парами аммиака проявлялись у кроликов контрольной группы через 5-7 мин в виде учащения дыхания. В результате раздражения верхних дыхательных путей и роговицы глаз изо рта и носа выделялась пенистая жидкость, иногда с примесью крови. В дальнейшем, клинические признаки интоксикации усиливались и спустя 30-35 мин проявлялись атаксия, тремор, саливация, спустя 1,5-2 ч кролики погибали при наличии судорог.

При затравке парами аммиака группы опытных кроликов, в герметичной камере одновременно генерировали аэрозоль лечебно-дегазирующего комплекса РАН-2 и наблюдали за поведением животных. Спустя 35-40 мин животные

начинали вести себя беспокойно, часто чихая, через 10-15 мин после этого клиника отравления проявлялась некоторым нарушением движения и учащением дыхания. Все эти нарушения отмечались в течение 3-4 ч с начала опыта, а спустя 5^6 ч поведение кроликов нормализовалось, они охотно принимали корм и воду.

Общее состояние кроликов группы биологического контроля в течение всего срока исследования было хорошим.

В морфо-биохимической картине крови опытных животных, спустя сутки и последующие дни после опыта, все исследуемые показатели несколько изменялись, однако достоверности не наблюдалось и они были в пределах физиологических величин. Показатели общего белка и его фракций несколько отличались от исходных данных, особенно в 1-е сут после опыта, однако достоверности в этих отклонениях не отмечалась.

При вскрытии погибших кроликов, отравленных аммиаком в дозе 16,3 мг/л, отмечалась синюшность слизистых оболочек. Печень была несколько увеличена в объеме, темно-коричневого цвета с мелкоточечными кровоизлияниями, желчный пузырь растянут. Сердце увеличено в объеме, неравномерно окрашено с точечными кровоизлияниями. Легкие гиперемированы, отмечался очаговый ателектаз, из альвеол при надавливании выделялась пенистая жидкость. В почках сосуды расширены и кровенаполнены, на разрезе граница слоев сохранена. Селезенка не увеличена в размере дряблой консистенции. В желудке и кишечнике видимых изменений не обнаружено. Патоморфологическая картина внутренних органов кроликов, которые находились в герметичной камере, в которой испаряли аммиак в дозе 16,3 мг/л с последующей дегазацией РАН-2, кроме незначительного ателектаза некоторых участков легких, в сравнении с внутренними органами животных группы биологического контроля, других изменений отмечено не было.

3.5.3 Опыты на овцах

Эксперименты по затравке парами аммиака с последующей дегазацией препаратом РАН-2 проводили на 13 овцах породы «Прекос», массой 25-30кг. Животные были разделены на 3 группы: 1 группа (3 овцы)-затравка парами аммиака в абсолютносмертельной дозе-10,9 мг/кг; 2 группа (5 овец)-затравка парами аммиака в дозе 10,9 мг/кг с последующей дегазацией аэрозолем РАН-2 и 3 группа (5 овец)-биологический контроль.

Опыты проводили аналогично таковым с кроликами. У овец первой группы клинические признаки отравления парами аммиака проявились спустя 7-10 мин с момента его испарения в герметичной камере, в начале животные проявляли беспокойство1 с; постоянным облизыванием, затем отмечалось нарушение координации движения и бронхоспазм, после чего обильная саливация и судороги, все эти проявления наблюдались в течение 60-80 мин смерть наступала, в основном после 1,5 ч с начала опыта.

У животных второй группы некоторое беспокойство и учащенное дыхание проявлялись в первые 30-40 мин, других видимых отклонений от нормы клинических проявлений отмечено не было. Спустя 2-2,5 ч после извлечения их из герметичной камеры животных адекватно реагировали на внешние

раздражители, активно принимали корм и воду. Клиническая картина овец биологического контроля соответствовала доопытному периоду. Через 1-й сут после опыта 2-е овцы из 2-ой группы и 2-е интактные были убиты для изучения качества и биологической полноценности мяса. Результаты исследований представлены в п.3.5.3.1.

Морфо-биохимические исследования крови свидетельствуют, что у овец 2-ой группы в количестве эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина и СОЭ, достоверных отклонений от исходных данных не выявлено.' При подсчете лейкограммы наблюдалась достоверность в уменьшении количества палочкоядерных нейтрофилов через 1-й сут после опыта, в последующие сроки эти изменения приближались к исходным значениям. Все остальные показатели лейко'формулы имели некоторые отклонения в сторону снижения или увеличения, однако достоверности, в течение 15-и сут исследования, не наблюдалось. Содержание общего белка, альбуминов, а-глобулинов, р-глобулинов и у-глобулинов оставались в пределах физиологических колебаний. Активность щелочной фосфатазы достоверно увеличивалась на 1-е сут на 18,0%, с восстановлением на 3-й сут эксперимента. Отмечалось" незначительное увеличение содержания глюкозы на 1-е сутки. На 3-й сут наблюдалось снижение уровня глюкозы на 2,5%, а на 5-е сут-на 5%, с последующим восстановлением показателя на 7-е сут опыта. Активность фермента аланинаминотрансферазы на 3-и сут увеличилась на 7,3%, с последующим восстановлением показателя на 10-е сут эксперимента. Активность аспартатаминотрансферазы также повышалась на 1-е и 3-й сут, соответственно, с восстановлением до фоновых значений на 5-е сут опыта. На 1-е сут - на 4,8- %. На 3-й сут-на 6%.

При анализе патологоанатомической картины павших овец, отравленных парами аммиака в абсолютносмертельной дозе, отмечается наличие пенистой жидкости в трахеи и носовых ходах, сердце несколько увеличено в объеме,''на поверхности миокарда кровоизлияния. Края печени тупЬ1е, что говорит о ее увеличении, цвет темно-коричневый, желчный пузырь растянут густой желчью. Легкие местами гиперемированы с очагами ателектаза, при надавливании из альвеол выделяется пенистая жидкость. Сосуды почек кровенаполнены, несколько увеличены в разрезе, граница коркового и мозгового слоя "Четко просматривается. Селезенка без видимых изменений. В желудке, тонком и толстом отделах кишечника каких-либо патоморфологических отклонений от нормы не отмечено.

При использовании аналогичных доз паров аммиака, но с применением дегазатора РАН-2 видимых изменений, в исследуемых органах не отмечено, за исключением наличия небольшого количества пенистой жидкости в альвеолах легких при надавливании.

3.5.3.1 Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса овец на фоне применения РАН-2 при отравлении парами аммиака Исследования мяса были проведены через 24 ч после убоя овец (см.п.3.5.3). Мясо хранили в холодильнике при температуре 0-4 °С с оптимальной влажностью.

Результаты проведенных исследований показали, что мясо животных второй группы (с использованием лечебно-дегазирующего препарата РАН-2) по своим органолептическим, микробиологическим и физико-химическим показателям соответствует доброкачественному мясу, не отличается от мяса интактных животных и соответствует требованиям «Правил ветеринарно-санитарной экспертизы» и ГОСТов.

3.5.3.2 Биологическая оценка мяса овец, подвергшихся отравлению парами аммиака в абсолютносмертелъной дозе на фоне использования

РАН-2

Биологическую оценку мяса подопытных овец проводили согласно рекомендациям (Беленький Н.Г,1973). Для этого 20-и крысятам-отьемышам, разделенным на 2-е группы по 10 животных в каждой, в течение 28-и дней к основному рациону вволю добавляли вареный фарш из мяса опытных и интактных животных. До опыта крысята получали только овёс и комбикорм. Крысята первой группы получали фарш из мяса овец, отравленных парами аммиака, с применением РАН-2. Второй группе крысят задавали мясо интактных животных. Воду животным задавали вволю. Предполагалось установить влияние препарата РАН-2 на общий прирост и массу внутренних органов. Взвешивание крысят проводили на 1,3,7,10,14,21 и 28-е сутки. По истечению этого времени крысята были убиты, у них взяты некоторые внутренние органы и определена их масса.

Исходные значения средней живой массы крысят первой группы-40,0±1,78 г, в конце эксперимента-84,8±5,12 г, что на 212,0% выше фоновых значений. Исходная средняя живая масса животных второй группы, получавших фарш интактных животных была равна 40,7±1,66 г, на конец эксперимента масса крысят достигла 87,9±6,25 г, что больше на 216,0% в сравнении с фоновыми показателями. При взвешивании крысят, получавших фарш овец, отравленных парами аммиака с применением лечебно-дегазирующего комплекса РАН-2, достоверного отличия от массы животных, получавших фарш интактных овец не наблюдалось.

В течение всего периода опыта общее состояние крысят обеих групп было в пределах физиологических норм, т.е. они были подвижны, адекватно реагировали на внешние раздражители, охотно принимали корм и воду.

При патологоанатомическом исследовании внутренних органов крысят после 28-дневного скармливания им мяса овец, каких-либо видимых изменений, как в первой, так и во второй группе, не отмечено. Для определения развития внутренних органов крыс, по окончании эксперимента, были отделены и взвешены печень, почки, селезенка и весь кишечник.

Результаты показали, что отличия в весе внутренних органов обеих групп крысят незначительны, достоверности веса исследуемых органов не просматривается.

Вышесказанное позволяет сделать вывод, что мясо опытных овец по биологической ценности не отличается от мяса интактных животных.

3.6 Отбор средств лечения отравлений животных парами аммиака и изучение их влияния на организм 3.6.1 Эффективность препарата «Янтарос плюс» при отравлении кроликов парами аммиака и его влияние на организм

Даже незначительные дозы СДЯВ, и в частности паров аммиака, попадая в организм, вызывают отрицательные изменения в организме, что способствует снижению иммунитета организма и повышает риск возникновения заболеваний, а также резко снижает продуктивность животных. Поэтому важной задачей является разработка средств для лечения животных, отравленных парами аммиака.

На основании анализа литературных данных, учитывая широту положительного влияния на организм, в качестве средства лечения отравлений парами аммиака нами был выбран препарат «Янтарос плюс». Данный препарат состоит из янтарной кислоты, глюконата кальция, неорганических солей железа, меди, марганца, кобальта и цинка (Иванов А.В., Папуниди К.Х.,1998; Хисамов Р.Р.,2001).

Исследования проводили на кроликах породы «Серый великан», массой 2,53,0 кг. Десять кроликов затравили парами аммиака в специально оборудованной герметичной камере, объемом 2,Зм3, в дозе 7,9 мг/л. Через 10-15 мин появились первые признаки интоксикации в виде беспокойства, чихания. В этот период наблюдалось частое мочеиспускание, дефекация. В дальнейшем, через 50-60 мин у двух кроликов развилась атаксия, затруднялось дыхание через открытый рот. В течение 2 ч они пали. Остальных восемь выживших кроликов разделили поровну на 2 группы. Животным 1 группы сразу начинали с кормом задавать «Янтарос плюс» в дозе 25 мг/кг в течение 40 суток. Кроликов 2 группы не лечили, они служили контролем затравки. В 3 группу отобрали аналогичных четырех интактных животных для биологического контроля. У всех животных до и после опыта, через 1,3,7,10,15,20,30 и 40 сут брали кровь для иммунологических и морфо-биохимических исследований.

У кроликов, отравленных парами аммиака и леченных «Янтарос плюс» снижение количества эритроцитов наблюдалось в течение 10-и сут опыта на 1020%, а затем с 15-х по 40-е сут наблюдений эти изменения были незначительны по сравнению с исходными данными или даже несколько выше их. Количество лейкоцитов также снижалось на достоверную величину в течение первой недели после опыта, а начиная с 10-х сут и до конца наблюдений их количество нивелировалось с исходными данными или увеличивалось, но не на достоверную величину. Количество гемоглобина достоверно снижалось до 20% и это просматривалось до 10-и дневного срока, после чего эти изменения были не достоверны. Скорость оседания эритроцитов снижалась до 28% и в течение 7-и сут и в этом наблюдалась достоверность, а начиная с 10-х сут после опыта этот показатель начал увеличиваться, а уже к 15-и дневному сроку соответствовал исходным значениям. Количество альбуминов, в течение первых 3-х дней эксперимента, достоверно снижалось, после чего их процентное соотношение увеличивалось.

Количество общего белка достоверно снижалось в течение 7-и сут, а в последующем приходило в норму. Содержание глюкозы было достоверно уменьшено в .течение первых 3-х сут на 16,4% и 18%, а в последующие дни приближалось1 к норме или было несколько выше исходных данных. Показания холестерина уменьшились на достоверные величины в течение 3-х дней- на 48% и 52,3%, соответственно, а в последующие дни исследований соответствовали ¿данным исходных величин. Достоверное увеличение активности щелочной ; фосфатазы в сыворотке крови наблюдалось в первые три дня, затем она была несколько выше, но не достоверно, в сравнении с фоновыми данными, а к 30-40-м суткам соответствовала исходным значениям. Ферментативная активность аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы достоверно повышалась в течение 10-и суток, после чего эти показания приходили в норму.

В 1-е сут опыта наблюдалось достоверное снижение Т-лимфоцитов на 7,2%, 3-й-10,9%, а снижение В-лимфоцитов на-3,6%,-4,4%, соответственно, затем эти ■ показатели были не достоверны. Фагоцитарная активность нейтрофилов в сравнении с фоновыми данными в 1-е сут исследования достоверно снизилась на 8,5%, З-и-8,9%, после чего достоверности не отмечалось. Фагоцитарный индекс достоверно снизился в 1-е сут исследования на 25,3%, З-и-27,8%, а уже на 7-е сут снижение этого показателя было не достоверно. Фагоцитарное число достоверно снизилось в 1-е сут исследования на 14,2%, 3-и-16,3%, 7-е-7,0%. Фагоцитарная емкость достоверно снизилась в 1-е сут исследования на 44,7%, З-и-44,6%, 7-е 27,9%. Активность лизоцима достоверно снизилась в 1-е сут исследования на 10,7%, 3-й 12,0% и 7-е 7,8% и, начиная с 10-х сут исследований эти три последние показатели приближались к исходным данным.

Таким образом, отравление кроликов парами аммиака в дозе в дозе 7,9 мг/л с последующим скармливанием «Янтарос плюс» способствует более быстрому восстановлению изучаемых отдельных показателей иммунитета, которые, в отличие от не леченных животных нормализуются в основном на 3-7-е сут исследования, а не к 15-20 дню.

Из вышеприведенного можно заключить, что скармливание кроликам, отравленных парами аммиака, препарата «Янтарос плюс» положительно влияет на морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови, поскольку их нормализация наступает намного быстрее, чем у нелеченных животных.

3.6.2 Эффективность препарата «Янтарос плюс» при отравлении овец

парами аммиака

Шесть овец затравили парами аммиака в дозе 6,0 мг/л. В течении двух часов у животных наблюдали беспокойство, кашель, дефекацию и небольшой тремор. Однако, все овцы выжили. После затравки животных разделили на 2 группы по 3 головы в каждой. Овцы 1 группы служили контролем затравки. В 3 группу отобрали аналогичных интактных животных (биологический контроль). Овцам 2 группы сразу после опыта, в качестве лечебного средства, начали задавать с кормом препарат «Янтарос плюс», из расчета 25 мг/кг. Для изучения влияния на

организм паров аммиака и эффективности лечения препаратом «Янтарос плюс» у овец в течении 40 сут брали кровь для анализов.

-Результаты морфологических исследований крови затравленных овец представлены в таблице 1.

Таблица 1- Морфологические показатели крови овец, затравленных парами

аммиака

Показатель Срок исследования, сут

Фон 1 3 5 7 10 15 20 30 40

Эритроциты, 10% ! 10,9 ±0,37 8,0 ±0,43* 8,2 ±0,29* 8,2 ±0,33* 8,6 ±0,27* 8,7 ±0,31* 9,1 ±0,27* 10,7 ±0,31 11,0 ±0,27 11,1 ±0,21

Лейкоциты, Ю'/л 12,7 ±0,27 10,0 ±0,19* 10,1 ±0,13* 10,9 ±0,31* п,о ±0,29* 11,0 ±0,35 12,0 ±0,37 12,2 ±0,27 12,7 ±0,19 12,4 ±0,21

Гемоглобин, г/л 117,3 ±3,95 100,5 ±2,07 102,1 ±2,17 102,7 ±2,93 105,1 ±1,93* 109,7 ±2,27* 107,9 ±3,19* 122,1. ±2,73 117,2 ±3,05 119,7 ±2,83

СОЭ, мм/ч 1,35 ±0,11 1,03 ±0,09 1,0 ±0,10* 1,0 ±0,13* 1,02 ±0,11* 1,28 ±1,12 1,30 ±0,11 1,32 ±0,17 1,33 ±0,11 1,33 ±0,12

Альбумины, % 46,2 ±2,75 38,7 ±1,93* 37,3 ±1,77* 39,1 ±1,91* 40,9 ±2,45* 45,9 ±2,11 45,7 ±2,07 46,0 ±1,87 46,6 ±2,37 46,4 ±2,09

Примечание: *-р<0,05

Данные таблицы указывают на достоверное снижение количества эритроцитов и лейкоцитов до 15 и 7-х сут после опыта, соответственно. Гемоглобин и скорость оседания эритроцитов тоже снижались, гемоглобин до 15-х, а СОЭ-Ю-х суток. В эти сроки данные изменения были достоверны, в последующие дни наблюдений эти показатели не имели достоверных снижений и к 30-40-м суткам соответствовали исходным данным. Достоверность в снижении альбуминов отмечалась до 10-х сут исследований, после чего эти отклонения нивелировались и соответствовали фоновым данным.

Результаты биохимических исследований сыворотки крови овец представлены в таблице 2.

Таблица 2- Биохимические показатели сыворотки крови овец, затравленных

парами аммиака

Показатель Срок исследования, сут

Фон 1 3 7 10 15 20 30 40

Общий белок, г/л 76,9 ±2,17 56,7 ±2,91* 58,8 ±2,53* 60,7 ±2,07* 63,3 ±2,77* 62,7 ±2,05* 73,8 ±2,73 75,5 ±3,23 79,1 ±3,05

Глюкоза, ммоль/л 3,6 ±0,21 2,8 ±0,23* 2,9 ±0,17* 2,8 ±0,21 3,0 ±0,17* 3,8 ±0,31 3,6 ±0,21 3,9 ±0,19 3,8 ±0,21

Мочевииа, ммоль/л 2,9 ±0,11 4,0 ±0,13* 4,9 ±0,19* 4,0 ±0,21* 3,7 ±0,20* 3,3 ±0,21 3,0 ±0,19 3,0 ±0,23 2,9 ±0,31

Холестерин, г/л 0,49 ±0,17 1,22 ±0,21* 1,31 ±0,11* 1,14 ±0,14* 0,69 ±0,21 0,53 ±0,19 0,49 ±0,23 0,43 ±0,17 0,47 ±0,13

ЩФ, Е/л 141,3 ±4,17 197,7 ±5,07* 182,9 ±3,29* 174,3 ±4,35* 170,7 ±3,07* 151,0 ±4,32 149,7 ±2,91 147,3 ±3,77 139,9 ±4,23

АЛТ, Е/л 8,3 ±0,75 15,9 ±0,97* 16,3 ±0,71* 14,0 ±0,79* 12,7 ±0,81* 12,3 ±0,79* 9,9 ±0,47 8,2 ±0,81 8,4 ±0,43

ACT, Е/л 69,6 ±2,73 93,5 ±3,17* 97,1 ±2,13* 92,9 ±3,25* 94,1 ±4,12* 84,7 ±2,75 78,8 ±3,45 74,3 ±2,15 72,1 ±3,77

Примечание: *-р<0,05

Из данных таблицы видно, что количество общего белка в сыворотке крови достоверно снижается до 15-го дня исследований, на 30 и 40-е сут этот показатель соответствовал исходным значениям. Количество глюкозы до 10-х сут достоверно снижалось, в среднем на 20%, а начиная с 15-х сут приближалось к доопытным величинам. Количество мочевины достоверно увеличивалось на протяжении 10-и сут исследований, после чего возрастало и к 20-м сут приближалось к исходным значениям. Количество холестерина увеличилось до 7-х сут более, чем на 60%, к 10-м сут резко понижалось и к 20-м сут исследований соответствовало фоновым показателям. Активность щелочной фосфатазы значительно повышалась и достоверность этого изменения наблюдалась до 10-х сут, после чего она начинала снижаться и соответствовала исходным данным. Ферментативная активность сыворотки крови опытных овец увеличивалась, так аланинаминотрансфераза до 15-х сут была достоверно выше исходных значений, а аспартатаминотрансфераза-до 10-х сут исследований, после чего их значения снижались и к концу исследований они соответствовали фону.

Результаты морфологических исследований крови овец, затравленных парами аммиака, с лечением «Янтарос плюс» представлены в таблице 3.

Таблица З-Морфологические показатели крови овец, затравленных парами аммиака, с лечение «Янтарос плюс»

Показатель Срок исследования, сут

Фон 1 3 5 7 10 15 20 30 40

Эритроциты, 10'7л 9,8 ±0,43 7,3 ±0,57* 8,0 ±0,39* 8,1 ±0,33* 8,2 ±0,27* 9,4 ±0,33 9,9 ±0,47 9,8 ±0,31 . 9,5 ±0,41 9,9 ±0,33

Лейкоциты, Ю'/л 11,3 ±0,65 9,1 ±0,47* 9,0 ±0,53* 9,2 ±0,39* 10,8 ±0,37 11,1 ±0,29 11,0 ±0,41 11,1 ±0,33 11,4 ±0,27 11,1 ±0,31

Гемоглобин, г/л 112,9 ±3,51 97,7 ±2,97* 101,6 ±3,03* 100,3 ±2,77* 106,1 ±3,47 111,7 ±2,97 114,3 ±2,17 114,1 ±2,73 112,9 ±3,07 115,1 ±2,97

СОЭ, мм/ч 1,27 ±0,08 0,93 ±0,07* 0,95 ±0,08* 1,01 ±0,07* 1.15 ±0,12 1,21 ±0,11 1,25 ±0,10 1,23-±0,11 1,28 ±0,12 1,29 ±0,11

Альбумины, % 47,1 ±2,15 40,3 ±1,97» 40,5 ±2,01* 43,2 ±1,85 47,1 ±2,37 49,4 ±1,83 49,0 ±1,77 48,2 ±1,93 49,2 ±2,13 49,0 ±2,07

Примечание: *-р<0,05

У овец, затравленных парами аммиака и леченных «Янтарос плюс» количество эритроцитов и лейкоцитов достоверно снижалось, соответственно, на 7 и 5-е сут исследований. Количество гемоглобина и скорость оседания эритроцитов изменялись в сторону снижения, и достоверность их наблюдалась, до 5-х сут наблюдений, у обоих показателей. Достоверность в снижении альбуминов отмечалась только на 1-е и 3-й сут после опыта. Спустя указанные сроки все изменения были не достоверны и уже на 7-10-е сут приближались к исходным значениям.

Результаты биохимических исследований сыворотки крови, затравленных овец с лечением «Янтарос плюс», представлены в таблице 4.

Таблица 4-Биохимические показатели сыворотки крови овец, затравленных парами аммиака, с лечением «Янтарос плюс»

Показатель Срок исследования, сут

Фон 1 3 7 10 15 20 30 40

Общий белок, г/л 88,1 ±3,31 60,3 ±2,87* 64,7 ±3,17* 73,9 ±3,27* 66,1 ±2,83 64,5 ±3,12 68,0 ±4,17 66,6 ±3,74 65,1 ±2,83

Глюкоза, м моль/л 3,0 ±0,23 2,1 ±0,17* 2,0 ±0,12* 2,8 ±0,27 2,9 ±0,31 3,2 ±0,21 3,4 ±0,33 3,2 ±0,29 3,1 ±0,21

Мочевина, ммоль/л 2,7 ±0,19 4,1 ±0,12* 4,3 ±0,17* 3,2 ±0,21 3,2 ±0,21 2,6 ±0,11 2,4 ±0,29 2,8 ±0,13 2,9 ±0,13

Холестерин, г/л 0,47 ±0,17 1,17 ±0,11* 1,20 ±0,13* 0,61 ±0,11 0,54 ±0,13 0,42 ±0,17 0,46 ±0,13 0,44 ±0,11 0,45 ±0,10 "

ЩФ, Е/л 149,3 ±9,07 205,1 ±7,47* 193,3 ±8,67* 161,1 ±9,01 155,4 ±8,21 153,7 ±9,17 150,7 ±8,11 143,9 ±8,77 147,7 ±7,03

AJIT, Е/л 7,1 ±0,67 13,3 ±0,51* 14,7 ±0,79* 12,7 ±0,87* 9,1 ±0,93 8,4 ±0,81 8,0 ±0,47 7,2 ±0,87 7,4 ±0,71

ACT, Е/л 70,1 ±3,97 90,7 ±2,97* 91,1 ±3,17* 80,0 ±3,07 77,3 ±2,33 79,7 ±4,05 73,9 ±3,77 " 74,6 ±3,55 72,9 ±3,27

Примечание: *-р<0,05

Из данных таблицы видно, что количество общего белка достоверно снижается до 7-х сут, а количество глюкозы-до 3-х сут с начала опыта, после этих сроков данные показатели начинают увеличиваться и в последующем приближаются к исходным величинам. Количество мочевины, холестерина и щелочной фосфатазы увеличивают свои.показатели, причем достоверно до 3-х сут с начала опыта, в последующие сроки эти показатели снижались и их изменения были не достоверны уже через неделю. Аланин-и аспартатаминотрансферазы достоверно увеличивают свои значения соответственно до 7-х и 3-х сут, после чего их изменения были не достоверны.

Наблюдалось достоверное снижение Т и В-лимфоцитов в 1 -е сут опыта на 7,5 и 3,7%, З-и-11,1 и 4,7%, 5-е-5,7 и 2,8%, 7-е-5,3 и 2,4% соответственно, в последующие сроки они нивелировались. Фагоцитарная активность нейтрофилов достоверно снизилась по сравнению с фоновыми данными в 1-е сут исследования на 6,4%, З-и-7,1%, 5-е-5,6% и начиная с 7-х сут исследований достоверности не отмечалось. Фагоцитарный индекс достоверно снизился в 1-е сут исследования на 26,5%, З-и-29,9%, 5-е-20,2%, после чего изменения были не достоверны. Фагоцитарное число достоверно снизилось в 1-е сут исследования на 16,2%, 3-и-18,7%, 5-е-10,4%, затем этот показатель стал увеличиваться и после пятых суток достоверности, в сравнении с исходными показателями, не было. Фагоцитарная емкость достоверно снизилась в 1-е сут исследования на 40,7%, 3-и-34,8%, 5-е-32,1%, и к седьмому дню исследований различия с исходными данными были не достоверны. Активность лизоцима достоверно снизилась в 1-е сутки исследования на 10,1%, З-и-10,9%, 5-е-8,7% и 7-е-7,4%, соответственно.

Нормализация изучаемых показателей крови овец, отравленных парами аммиака, при применении в качестве лечебного средства «Янтарос плюс»^, приходила в норму через 5-7 дней, а без лечения не раньше, чем через 15-20 дней с момента отравления.

■ Таким образом, проведенные эксперименты показали, что лечение препаратом «Янтарос плюс» при отравлении животных парами аммиака положительно влияет на морфо-биохимические и иммунологические показатели крови.

При ветеринарно-санитарной экспертизе мяса овец, отравленных парами аммиак, с последующим лечением препаратом «Янтарос плюс» были выявлены результаты качества мяса идентичные таковым при использовании дегазирующего средства РАН-2, т.е оно соответствовало всем требованиям ГОСТ.

4.ВЫВОДЫ

1.В результате целенаправленного скрининга разработано новое высокоэффективное дегазирующе-лечебное средство РАН-2. Применение его аэрозоля, из расчета не менее 90 мл/м3, способствует дезактивации 90-95% абсолютносмертельных доз паров аммиака и обеспечивает 100% выживаемость кур, кроликов и овец.

2. Содержание животных в герметичной камере с аэрозолем РАН-2 (90 мл/м3) в течение 2х часов, не оказывает отрицательного влияния на морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови кур, кроликов и овец.

3. Применение препарата «Янтарос плюс» в дозе 25 мг/кг живой массы для реабилитации животных, отравленных парами аммиака, способствует нормализации количества эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, холестерина, мочевины, глюкозы, СОЭ, активности щелочной фосфатазы, аланин-и аспартатаминотрансфераз, Т-и-В лимфоцитов, фагоцитарной и лизоцимной активности, уже через 5-7 дней, а в контрольной группе животных эти показатели восстанавливались через 15-20 суток.

4.При использовании РАН-2 и «Янтарос плюс», на фоне отравления животных парами аммиака, мясо соответствует требованиям «Правил ветеринарно-санитарной экспертизы» и ГОСТов, как доброкачественное и как показала биопроба его можно использовать без ограничений.

5.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1.В качестве дегазирующего средства при отравлении животных парами аммиака рекомендуется использовать дегазирующее средство РАН-2, в виде аэрозоля, не менее, чем 90 мл/м3.

2.Для лечения животных от отравлений парами аммиака рекомендуется использовать препарат «Янтарос плюс» в дозе 25 мг/кг живой массы.

3.Результаты исследований использованы при составлении Методического пособия по защите животных от отравлений парами аммиака, утв. Академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, академиком РАСХН А.М.Смирновым 15.05.12

6.СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Софронова, А.В. Разработка средств защиты животных от отравлений сильнодействующими ядовитыми веществами / В.Г.Софронов, А.В.Маланьев, Е.Г.Губеева, А В.Софронова // Ученые записки КГАВМ.-2010.-Т.200. - С.197-201.

2.Софронова, A.B. Биологическая полноценность мяса животных при .правлении парами аммиака с применением дегазатора /А.В.Маланьев, Р.М.Асланов, В.Г.Софронов, A.B. Софронова И Ученые записки КГАВМ.-2010.-7.204. - С.148-151.

3.Софронова, A.B. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса животных при отравлении парами аммиака с применением дегазатора / А.В.Маланьев, Р.М.Асланов, ИВ.Софронов, А.В.Софронова // Ученые записки КГАВМ.-2010.-Т.204.-С.152-155.

4.Софронова, A.B. Видовая чувствительность животных к парам аммиака //А.В.Софронова, А.В.Маланьев, Р.М.Асланов // Ученые записки КГАВМ.-2011.-Т.208. - С.202-205.

5.Софронова, A.B. Биологическая полноценность мяса животных, подвергшихся отравлению парами аммиака на фоне использования дегазирующе-лечебного препарата РАН-2 //А.В.Софронова, А.В.Маланьев // Биотехнологии в решении экологических проблем природы, общества и человека в Евразии: взгляд молодых ученых и специалистов: материалы международной научно-практической конференции. - Казань,2013.-С.125-126.

6.Софронова, A.B. Показатели иммунитета кроликов, отравленных парами аммиака, с лечением препаратом «Янтрос плюс» // А.В.Софронова // Ветеринарный врач. - Казань, 2013.-№3.-С.17-19.

7.Софронова, A.B. Методическое пособие по защите животных от отравлений парами аммиака /А.В.Иванов, Р.М.Асланов, МЛ.Тремасов, К.Х.Папуниди, А.В.Маланьев, А.В.Софронова.- М.,2012.-13с.

Подписано к печати / /О. /3. Заказ ЬУ Тираж/¿£?экз. Бумага офсетная

Формат 60x84/16 Усл.-печ. л. /.О Печать RISO

Центр информационных технологий КГАВМ 420074, Казань, Сибирский тракт, 35.

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Софронова, Анастасия Владимировна, Казань

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ «ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЙ, РАДИАЦИОННОЙ И

БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ»

На правах рукописи

04201364253

СОФРОНОВА АНАСТАСИЯ ВЛАДИМИРОВНА

РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ЛЕЧЕНИЯ И РЕАБИЛИТАЦИИ ЖИВОТНЫХ ПРИ ОТРАВЛЕНИИ ПАРАМИ АММИАКА

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук,

профессор

Асланов Р.М.

Казань - 2013

АД

АЛТ

АСТ

АТФ

АХОВ

АХЭ

ВОЗ

ДТП

ЛДюо

ЛД50

мпд охп пдк

РИА-1

САГ-1

СДЯВ

СОЭ

УГ-2

ЦВД

ЩФ

ФА

ФИ

ФЦ

ФЕ

-артериальное давление -аланинаминотрансфераза -аспартатаминотрансфераза -аденозинтрифосфорная кислота -аварийное хиически-опасное вещество -ацетилхолинэстераза -Всемирная организация здравоохранения -детектор по теплопроводности

-смертельная доза, вызывающая гибель всех животных

-смертельная доза, вызывающая гибель 50% животных

-максимально переносимая доза

-очаг химического поражения

-предельно-допустимая концентрация

-лимонная кислота

-струйный аэрозольный генератор

-сильнодействующее ядовитое вещество

-скорость оседания эритроцитов

-универсальный газоанализатор

-центральное венозное давление

-щелочная фосфатаза

-фагоцитарная активность

-фагоцитарный индекс

-фагоцитарное число

-фагоцитарная емкость

СОДЕРЖАНИЕ

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ..................................................5

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ..................................................................................................8

2.1 Краткая характеристика аммиака..............................................................................8

2.2 Влияние аммиака на организм....................................................................................11

2.3 Алгоритм действия при авариях................................................................................14

2.4 Лечение при отравлении аммиаком........................................................................18

2.5 Характеристика янтарной кислоты и препарата «Янтарос 19 плюс».........................................................................

3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ............................................................24

3.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ........................................24

3.2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ..........................28

3.2.1 Поиск средств для профилактики отравлений животных

парами аммиака........................................................................................................................28

3.2.2 Определение стабильности растворов РАН-2 при длительном хранении..........................................................................................................................................29

3.2.3 Определение оптимальной дозы РАН-2, для профилактики ингаляционного отравления парами аммиака........................................................30

3.2.4 Эффективность РАН-2 при отравлении парами аммиака

разных видов животных..................................................................................................33

3.2.4.1 Опыты на курах........................................................................................................................33

3.2.4.2 Опыты на кроликах................................................................................................................37

3.2.4.3 Опыты на овцах........................................................................................................................42

3.2.4.3.1 Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса овец на фоне

применения РАН-2 при отравлении парами аммиака............................48

3.2.5 Биологическая оценка мяса овец, подвергшихся воздействию

РАН-2 при отравлении парами аммиака

49

3.2.6 Отбор средств лечения отравлений животных парами аммиака

и изучение их влияния на организм........................................................................51

3.2.6.1 Эффективность препарата « Янтарос плюс» при отравлении кроликов парами аммиака и его влияние на организм..........................51

3.2.6.2 Эффективность препарата «Янтарос плюс» при отравлении

овец парами аммиака............................................................................................................65

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ..................79

5 ВЫВОДЫ......................................................................................................................................87

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ............................................................88

7 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ............................89

8 ПРИЛОЖЕНИЕ......................................................................................................................128

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. На фоне значительного ухудшения экологической обстановки в Российской Федерации создана федеральная целевая программа «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации на 2009-2013 годы».

Для предотвращения чрезвычайных ситуаций, в результате воздействия опасных химических факторов, в том числе и аммиака, в Российской Федерации функционирует единая государственная система химической и биологической безопасности (Гольдфарб Ю.Ю., Простакишин Г.П., Остапенко Ю.Н., 2008; Литвинов H.H. и др., 2008).

Подавляющее большинство объектов, использующих в своем производстве аммиак начали эксплуатироваться более, чем 40 лет назад, при нормативных сроках эксплуатации до 15 лет. В этой связи, большая часть химико-технологического оборудования, как морально, так и физически устарело (Иванов A.B., 2006; Курляндский Б.А., 2008). Кроме того, большое количество промышленных предприятий используют в процессе производства аммиак в жидкой и газообразной форме. Поэтому возможность возникновения чрезвычайных ситуаций, связанных с авариями на производствах, а также при перевозке сильнодействующих ядовитых веществ, автомобильным или железнодорожным транспортом, не исключена, с последующими массовыми отравлениями населения и сельскохозяйственных животных, находящихся в зоне катастроф. В настоящее время имеются единичные изыскания в направлении лечебно-профилактических мер при отравлении животных аммиаком (Папуниди К.Х., Тремасов М.Я., 2008; Маланьев A.B., 2010). Поэтому, изучение влияния паров аммиака на клинико-физиологическое состояние животных, а также использование отечественных дешевых лечебно-профилактических средств при отравлении аммиаком является актуальной задачей (Асланов P.M. и др., 2009).

Работа выполнена в соответствии с темой НИР ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» -«Разработка средств и методов групповой профилактики и лечения животных от отравлений парами аммиака» по заданию «Токсикологическая безопасность» (№ гос. регистрации 01200202602).

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлась разработка лечебно-профилактических средств при отравлении животных парами аммиака и изучение их влияния на организм.

Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:

» Провести скрининг средств профилактики и лечения животных от отравлений парами аммиака.

® Определить обезвреживающую и лечебную эффективность препаратов РАН-2 и «Янтарос плюс» на животных.

® Изучить влияние отобранных лечебно-профилактических средств на организм животных на фоне отравления их парами аммиака

® Провести ветеринарно-санитарную оценку и биологическую полноценность мяса животных при отравлении их парами аммиака с применением лечебно-профилактических средств.

Научная новизна. Впервые разработаны эффективные лечебно-дегазирующие средства для защиты животных от отравлений парами аммиака.

Изучены клинические, морфо-биохимические показатели крови, отравленных парами аммиака животных и после применения предлагаемых лечебно-профилактических средств.

Дана ветеринарно-санитарная оценка мяса животных, пораженных парами аммиака при использовании лечебно-профилактических средств. На препарат РАН-2 подана заявка на патент.

Практическая ценность работы. Экспериментально обоснованы схемы применения лечебно-профилактических средств при отравлении животных парами аммиака. По результатам исследований разработано «Методическое пособие по защите животных от отравлений парами аммиака», утвержденное

Отделением ветеринарной медицины Российской Академии Сельскохозяйственных Наук (Москва, 2012)

Основные положения, выносимые на защиту:

• Средства для лечения животных от отравлений парами аммиака.

• Положительное влияние РАН-2 и «Янтарос плюс» при отравлении животных парами аммиака.

® Морфо-биохимические и иммунологические показатели крови при затравке животных парами аммиака на фоне применения лечебно-профилактических средств.

• Органолептические и физико-химические показатели мяса, при лечении их от отравлений парами аммиака.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях ежегодных ученых советов ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (Казань, 2010-2012 гг.); в материалах международной научно-практической конференции «Биотехнологии в решении экологических проблем природы, общества и человека в Евразии: взгляд молодых ученых и специалистов» (2013).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано 6 научных работ, в том числе 5 в изданиях, рекомендованных ВАК, в которых отображено основное содержание диссертации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа содержит 32 таблицы. Список литературы включает 287 библиографических источников, в т.ч. 35 - зарубежных авторов.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Краткая характеристика аммиака

Аммиак (.NH3) - бесцветный газ, обладающий удушливым, резким и проницательным запахом нашатырного спирта, едкий на вкус; температура плавления - 80° С, температура кипения - 33,4° С, очень хорошо растворяется в воде, намного больше, чем другие газы; а именно при 20°С один объем воды поглощает около 700 объемов аммиака; хорошо растворяется в спирте и ряде других органических растворителей (Бова A.A., Горохов С.С., 2005). Аммиак легче воздуха, а образующееся облако воздушно-аммиачной смеси тяжелее окружающего воздуха. Масса 1 л аммиака составляет 0,708 г, а плотность при температуре 0°С-0,7714 г/м3 (плотность воздуха-1,2928 г/л). При выходе в атмосферу дымит. На воздухе быстро переходит в карбонат аммония. Горит в кислороде с образованием воды и азота. При обычном давлении затвердевает при температуре -77,7°С. В присутствии катализаторов окисляется до окиси азота (Бова A.A., Горохов С.С., Яблонский В.Н., 2000). Его молекулярный вес- 17,03. Концентрированный раствор содержит 25% NH 3 и имеет плотность 0,91 г/см'. С повышением температуры растворимость аммиака уменьшается, поэтому он выделяется при нагревании из концентрированного раствора, чем иногда пользуются в лабораториях для получения небольших количеств аммиака, синтезируя его из азота и водорода. В природе образуется при разложении азотсодержащих органических соединений, под действием уреазоактивных анаэробных бактерий. Аммиак легко сжижается при охлаждении до - 33,3°С или при комнатной температуре при повышении давления примерно до 10 атм. В атмосферном воздухе аммиак встречается в десятых и сотых долях. Водные растворы аммиака обладают уникальным среди всех щелочей свойством: их плотность снижается с увеличением концентрации раствора (от 0,99 г/см для 1%-ного раствора до 0,73 г/см3 для 70%-ного). Аммиак химически активен и вступает

во взаимодействие со многими веществами. В чистом кислороде он сгорает бледно-желтым пламенем, превращаясь, в основном, в азот и воду (Bacon C.W., 1986).

Резкий запах аммиака известен человеку с доисторических времен, так как этот газ образуется в значительных количествах при гниении, разложении и сухой перегонке органических соединений, содержащих азот, например мочевины или белков. Аммиак распространяется в животноводческих помещениях равномерно, но больше всего его находят вблизи пола, где источником образования служат моча и навозная жижа (Бова A.A., Денещук Ю.С., 1995).

Впервые аммиак был получен в 1774 английским химиком Джозефом Пристли. Он нагревал нашатырь (хлорид аммония) с гашеной известью (гидроксид кальция). Выделявшийся аммиак Пристли собирал над ртутью (Хомченко Г.П., 1971).

Концентрация аммиака с воздухом по объему от 15 до 28% взрывоопасна, на что указывают A.B. Гринина (1990); Д. Бартон, У. Олис (1982). Во многих реакциях аммиак является комплексообразователем, имея в наличии неподеленную электронную пару (Ю.Ю.Лурье,1989)

Основными источниками выделения аммиака в окружающую среду являются азотнотуковые комбинаты, предприятия по производству азотной кислоты и солей аммония, холодильные установки, коксохимические заводы и животноводческие фермы. В районах техногенного загрязнения концентрации аммиака в атмосферном воздухе достигают величин 0,015-0,057 мг/м3, в «чистых» районах - 0,003-0,005 мг/м3 (Рашевская A.M., 1973).

Огромные количества аммиака используются для получения азотной кислоты, которая идет на производство удобрений и множества других продуктов, азотсодержащих солей, синильной кислоты, диазотипных светокопировальных материалов (Владимирова В.А.,1995). Аммиачную воду применяют непосредственно в виде удобрения, а иногда поля поливают из цистерн непосредственно жидким аммиаком. Если исходить из экономических соображений, то азот данного вида удобрения считается самым дешевым (Лазарев

Н.В., 1977; Лурье Ю.Ю., 1989). Наиболее высокий эффект от использования аммиака достигается в момент внесения в почву осенью. Это связано с тем, что удобрение не вымывается атмосферными осадками. Водный раствор аммиака, внося в почву можно применять под все хозяйственные культуры. Это отличное удобрение для свеклы, овощных и зерновых культур, картофеля. Для увеличения урожайности данное удобрение является наиболее оптимальным вариантом (Рашевская A.M., 1973). Из аммиака получают различные соли аммония, мочевину, уротропин.

Большая теплота испарения жидкого аммиака позволяет использовать это вещество в качестве хладагента в различных холодильных установках, т.к. испаряясь, жидкий аммиак очень сильно охлаждается. Аммиак используется также для получения синтетических волокон, например, нейлона и капрона. В легкой промышленности он используется при очистке и крашении хлопка, шерсти и шелка. В нефтехимической промышленности аммиак применяют для нейтрализации кислотных отходов, а в производстве природного каучука он помогает сохранить латекс в процессе его перевозки от плантации до завода. Также он используется при производстве соды по методу Сольве. В сталелитейной промышленности аммиак используют для азотирования -насыщения поверхностных слоев стали азотом, что значительно увеличивает ее твердость (Абрамова В.Ф. и др., 1986; Сайфутдинов Д.С., Арифджанов З.К., 1988; Angus K.W., 1986; Huang Luyi, Chen Hua, 1990).

Аммиак водный, технический марки А находит различное применение в промышленности (в частности, в целлюлозно-бумажном и гидролизном производстве), в химической промышленности для получения химически чистых веществ, в качестве реактива в аналитической химии. Что касается промышленной сферы, то тут аммиак водный 25% используется в производстве различных красителей, марганца и т.д. Кроме того, его используют в строительстве в качестве противоморозной добавки, так как аммиак водный технический не вызывает коррозии арматуры (Заугольников С.Д. и др., 1978; Измеров Н.Ф. и др., 1977).

Аммиак широко используется как дезинфицирующее и дезинвазирующее средство при обработке помещений, а также навоза при содержании животных на глубокой, несменяемой подстилке (Абрамова В.Ф. и др., 1986; Сайфутдинов Д.С., Арифджанов З.К., 1988; Angus K.W, 1986; Huang Luyi, Chen Hua, 1990; Bacon C.W.,1986). Для повышения усвояемости грубых кормов их обрабатывают аммиаком, этот же прием используют и при выращивании цыплят-бройлеров, обрабатывая аммиаком зерно кукурузы, получая при этом лучшие привесы (Lakshmirajam S. et al, 1984; Rao P.V., 1985;.Mahalingam R.J et al., 1989; 1990).

По данным Т.Е. Помыткиной (2010) аммиак может оказывать неблагоприятное воздействие на состояние здоровья работников крупных химических предприятий, в частности на желудочно-кишечный тракт. Распространенность язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки среди длительно работающих в контакте с азотистыми соединениями достоверно выше (на 54%), чем на производстве, где работники не имели контакта с данными соединениями.

2.2 Влияние аммиака на организм

По данным ВОЗ, в промышленности и сельском хозяйстве в настоящее время используется около 60 тысяч химических соединений, причем ежегодно их число увеличивается на 200 - 1000 новых веществ. Более 100 из них относятся к числу сильнодействующих ядовитых веществ (СДЯВ) (Лазарев Н.В., 1977; Coon R.A., 1970).

За последние десятилетия общее число аварий увеличилось, они сопровождались химическим загрязнением среды и жертвами. Только за последние 5-7 лет в мире зарегистрировано множество аварий с утечкой СДЯВ, в том числе аммиака (Бова А.А., Денещук Ю.С., 1995; Авдохин В.П., 1989; Миргородский В.Н., 2000). Даже сравнительно небольшие концентрации (выше ПДК) аммиака в воздухе городов приводят к большой заболеваемости у

населения органов дыхания, нервной системы, а также к развитию врожденных аномалий (Лецис Т.А. и др., 1999).

Аммиак- судорожный яд, действуя на ткани подобно едким щелоча�