Разработка иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных

Исхаков, Гали Мухамедович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных"

На правах рукописи

ИСХАКОВ ГАЛИ МУХАМЕДОВИЧ

РАЗРАБОТКА ИММУНОГЛОБУЛИНА ПРОТИВ ХЛАМИДИОЗА ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ

03.00.07. - микробиология

16.00.03. - ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань - 2004

Работа выполнена в Казанской государственной академии ветеринарной медицины, Республиканском центре по профилактике и борьбе со СПИДом, Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Равилов Рустам Хамитович.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Гаффаров Харис Зарипович,

кандидат ветеринарных наук, доцент Сибгатуллин Рафаэль Сагидуллович.

Ведущее учреждение: Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия

Ж ¿МУ/ 2004 го» ^

Защита состоится _/__ 2004 года в НУ часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (г. Казань). 420075, Республика Татарстан, г. Казань, Научный городок-2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (г. Казань).

Автореферат разослан 1 у_2004 года

Ученый секретарь диссертационного

Степанов В.И.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Разрабатывая оптимальные противоэпизоотические мероприятия при той или иной болезни, необходимо придерживаться концепции "управляемых инфекций", в которой ведущим принципом является создание биологического равновесия между паразитом и хозяином. Весьма актуальна в этом отношении разработка специфических средств профилактики и лечения инфекционных заболеваний плотоядных животных, таких как чума, парво-вироз, хламидиоз и другие (Беляков В.Д. с соавт., 1987; Димов С.К. с соавт., 1996; Константинов А.П., 1996; Куприянова А.В., Равилов Р.Х., 2003 и другие).

Хламидиоз - широко распространенное заболевание человека, птиц и животных. Заболевание представляет постоянную угрозу спорадических заболеваний для людей, профессионально не занятых в сельском хозяйстве (Терских И.И., 1979; Бортничук В.А., 1991; Обухов И.Л., 1994).

Многие вопросы эпизоотологии, этиологии, симптоматики, патогенеза, диагностики, лечения и профилактики хламидиоза плотоядных животных остаются нерешенными и требуют детального изучения.

Перспективным направлением в терапии хламидийных инфекций является применение лечебных сывороток (Хазипов Н.З., Равилов А.З., 1984; Хамаде-ев Р.Х. с соавт, 1985 и другие).

В последнее время исследователи уделяют все больше внимания проблеме организации лечебно-профилактических мероприятий при заразных болезнях мелких домашних животных. Основной упор при этом делается на поиск вакцин и рациональных схем их применения, обеспечивающим иммунную защиту восприимчивых животных. Специфическим средствам воздействия на возбудителя, с целью его нейтрализации, уделяется гораздо меньше внимания.

Для пассивной иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных болезней животных применяют сыворотки и глобулиновые препараты. При этом главным образом разрабатываются гипериммунные сыворотки. Однако известно, что эта группа биопрепаратов, кроме положительного эффекта, имеет серьезные недостатки, связанные, прежде всего, с наличием большого количества балластных веществ, вызывающих побочное действие на организм, проявляющееся аллергическими реакциями. В этом аспекте наиболее перспективно использование иммуноглобулинов (Куприянова А.В., Равилов Р.Х., 2003).

В настоящее время разработаны, выпускаются и применяются специфические лечебные препараты при инфекционных заболеваниях мелких домашних животных: чуме плотоядных, парво- и аденовирозах собак, панлейкопении, калицивирозе и инфекционном ринотрахеите кошек (Непоклонова И.В., Васильев А.В., 1985; Константинов А.П., 1996; Родина В.П. с соавт., 2002).

К началу исследований в нашей стране не выпускались биопрепараты для пассивной иммунопрофилактики и иммунотерапии при хламидиозе мелких домашних животных.

Цель и задачи исследований. Цель исследований - разработать специфический иммуноглобулин против хламидиоза

его лечебную эффективность.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

- провести клинико-эпизоотологические и лабораторные исследования подозрительных по заболеванию хламидиозом собак и кошек в г. Казани;

- подобрать рациональную схему гипериммунизации животных-доноров с целью получения сывороток с высоким уровнем специфических антител;

- провести лабораторные исследования сывороточных полуфабрикатов;

- отработать технологический регламент производства и контроля биопрепарата;

- провести исследования полученных глобулинов в лабораторных условиях;

- испытать разработанный препарат на спонтанно больных хламидиозом плотоядных животных (собаках и кошках).

Научная новизна. Впервые разработан специфический иммуноглобулин против хламидиоза плотоядных животных. Отработан технологический регламент его производства и контроля.

Разработана рациональная схема иммунизации быков-продуцентов хла-мидийным антигеном.

С использованием компьютерной программы Image Master 1D Gel Analysis v 3.0. проведен анализ электрофореграмм сывороток крови доноров, иммунизированных хламидийным антигеном.

Полученный биопрепарат протестирован в лабораторных условиях.

С использованием разработанного препарата проведено лечение спонтанно зараженных хламидиями мелких домашних животных.

Практическая ценность. Разработан специфический иммуноглобулин против хламидиоза плотоядных животных.

Установлена возможность использования указанного биопрепарата для лечения хламидиоза у собак и кошек.

Результаты проведенных исследований вошли в следующие нормативно-технические документы:

- во "Временную инструкцию по изготовлению и контролю специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных", утвержденную ректором КГАВМ 26 июня 2003 г.;

- в 'Технические условия на специфический иммуноглобулин против хламидиоза плотоядных животных", утвержденные ректором КГАВМ 26 июня 2003 г.;

- во "Временное наставление по применению специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных", утвержденное ГУВ Каб-мина РТ 26 июня 2003 г.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:

- ежегодных итоговых заседаниях ученых советов Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана (1999-2003 гг.).

- Международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета (Казань, 2000 г.).

- научно-практических конференциях по проблемам ветеринарии и зоотехнии

(Казань, 2001-03 гг.).

- научно-практической конференции "Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных" (Киров, 2001 г.).

- научно-практических конференциях "Актуальные вопросы ветеринарной медицины домашних животных" (Екатеринбург, 2001 и 2003 гг.).

- X и XII Московских международных ветеринарных конгрессах (2002 и 2004 гг.).

- IV Региональной научно-практической конференции "Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития" (Саратов, 2004 г.).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 11 научных работ. Разработаны нормативно-технические документы на биопрепарат: наставление, инструкция и технические условия.

Основные положения диссертации, выдвигаемые для защиты:

- результаты клинико-эпизоотологических и лабораторных исследований поголовья домашних плотоядных в отношении хламидийных инфекций;

- оценка эффективности подобранной схемы гипериммунизации быков продуцентов хламидийным антигеном;

- разработка специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных;

- результаты лечения спонтанно больных хламидиозом собак и кошек с использованием разработанного биопрепарата.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах компьютерного текста (текстовый редактор "Microsoft Word 2000", стиль "Times New Roman", размер шрифта 14 pt, интервал полуторный) и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований (3 главы), обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и указатель литературы (всего 252 источника, в том числе 92 иностранных и 10 ссылок на сайты Internet). Диссертация иллюстрирована 31 таблицей и 29 рисунками. Прилагаются разработанные нормативно-технические и другие документы, подтверждающие результаты исследований, их научно-практическую ценность.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы

Эпизоотологическое обследование проводили среди поголовья домашних животных (кошек и собак) г. Казани. При этом была использована ветеринарная учетная документация районных ветеринарных клиник, частных ветеринарных клиник и кабинетов, частнопрактикующих ветеринарных врачей г. Казани. Для оценки эпизоотической ситуации учитывали: условия кормления и содержания животных, результаты щенения и окота самок, сохранность щенков и котят в первые дни посте рождения, благополучие по инфекционным болезням, возможные источники хламидийной инфекции и пути ее передачи, результаты лабораторных исследований патологического материала и сывороток крови кошек и собак.

В работе были использованы 5 штаммов хламидий ("250" - возбудитель хламидиоза коров, "БЛ-84" - лисиц, "ПП-87" - песцов, "КС-93" - собак, "КК-98" - кошек), 3600 развивающихся куриных эмбрионов; 20 быков-продуцентов; 120 белых мышей массой 10-25 г, 18 морских свинок массой 150-350 г; 6 кроликов живой массой 2,5 кг, 25 взрослых собак; 34 взрослые кошки.

Индикацию возбудителя в пробах патологического материала осуществляли при помощи РИФ и ПНР. Реакцию иммунофлуоресценции выполняли в непрямом варианте. Полимеразную цепную реакцию проводили общепринятыми методами с использованием специфичных для Chi. psittaci олигонуклеотид-ных праймеров, сконструированных R.G. Hewinson с соавт. (1997). ПЦР были проведены к.б.н. Вафиным P.P., который любезно предоставил нам данные для анализа. В качестве серологических тестов использовали РСК и ИФА, которые выполняли общепринятыми методами.

В разработке специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных принимали участие сотрудники лаборатории контроля и индикации возбудителей вирусных и хламидийных инфекций в объектах ветеринарного надзора ВНИВИ профессор Р.Х. Хамадеев и к.в.н. В.В. Евстифеев, лаборатории культивирования и диагностики инфекционных болезней Республиканского центра по профилактике и борьбе со СПИДом (г. Казань) к.б.н. В.В. Герасимов и к.б.н. К.С. Хаертынов.

В качестве исходного сырья для изготовления антигена использовали желточные оболочки павших куриных эмбрионов, инфицированных производственными штаммами хламидий. От клеточного дебриса освобождались дифференциальным и градиентным центрифугированием.

Готовый для иммунизации антиген тестировали на стерильность путем посева на питательные общепринятые среды (МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и среду Сабуро), а также на инфекционность путем контрольного заражения белых мышей.

При подборе схемы гипериммунизации были испытаны две схемы введения антигенов. Обе схемы предполагали "грундировку" животных-продуцентов за 45 дней до начала собственно гипериммунизации. По первой схеме интервалы между 2-ым и последующими введениями антигенов составляли 7-8 дней, по второй - 14-15 дней.

В сыворотках быков-продуцентов в процессе их гипериммунизации по разным схемам определяли титры специфических антител, динамику количества общего белка и концентрации глобулинов. Диск-электрофорез сывороток проводили в линейном градиенте (5-10% концентрации) ПААГ по методу Laemly, без детергента.

Электрофоретической разгонке и компьютерному анализу подвергли сыворотки крови 4 быков-продуцентов во время второй серии опытов: двух быков (№№ 1585 и 1517), иммунизированных по первой схеме; двух быков (№№ 1547 и 1570), иммунизированных по второй схеме.

Для выделения иммуноглобулина из гипериммунной сыворотки применялась одна из модификаций метода, основанного на фракционировании сыво-

роточных белков с помощью сульфата аммония при комнатной температуре (трехкратно).

Контроль безвредности иммуноглобулина осуществляли на клинически здоровых лабораторных животных путем введения биопрепарата 3 морским свинкам и 10 белым мышам. Пирогенность препарата определяли на кроликах общепринятым методом. Терапевтическую эффективность биопрепарата изучали на белых мышах, которых вначале подвергали контрольному внутрибрю-шинному заражению вирулентной культурой хламидий штамма "250". 10 зараженных белых мышей служили контролем инфекционных свойств культуры хламидий. Было проведено по три серии опытов.

Испытания терапевтической эффективности препарата на собак и кошках проводились на животных, содержащихся в домашних условиях, владельцы которых обращались за ветеринарной помощью в клиники г. Казани.

Всего лечению было подвергнуто 39 животных с различными симптомами, которым лабораторными методами был поставлен диагноз: "хламидиоз". 26 животных из числа вышеназванных были подвергнуты специфической терапии с использованием разработанного нами глобулина против хламидиоза плотоядных животных.

Статистическую достоверность полученных данных определяли по методу Стьюдента. Статистическую обработку результатов серологических исследований проводили по методике описанной Т.С. Сайдуллиным (1981).

2.2. Результаты собственных исследований

2.2.1. Степень распространения хламидийных инфекций среди поголовья домашних плотоядных животных

Анализ эпизоотической ситуации среди домашних плотоядных в г. Казани в отношении хламидийных инфекций проводился по данным журналов амбулаторного приема собак и кошек в Лечебно-консультативном центре Казанской академии ветеринарной медицины, районных и частных ветеринарных клиниках, по результатам опроса ветеринарных специалистов этих клиник, а также собаководческих клубов и клубов любителей кошек г. Казани, кинологов и ветспециалистов питомника по разведению служебных собак МВД Республики Татарстан.

Эпизоотологическими исследованиями было установлено, что домашние плотоядные с клиническими признаками, характерными для хламидийной инфекции (заболевание мочеполовой сферы, аборты, бесплодие, мертворожденные, рождение слабого нежизнеспособного молодняка, конъюнктивиты, атипичное течение заболеваний органов дыхания и пищеварения, поражение центральной нервной системы и др.), этиология которых остается невыясненной, составляют от 10 до 20% от общего числа собак и кошек, владельцы которых обращаются в ветеринарные клиники.

Установлено, что чаще всего среди симптомов, которые могут вызвать подозрение ветеринарного врача на наличие у больного животного хламидий-

ной инфекции, у собак встречается патологическое течение беременности не установленной этиологии, а у кошек — конъюнктивиты.

Заболевания молодняка с клинической картиной хламидиоза чаще всего наблюдали у новорожденных, а также у щенков и котят первых 3-5 дней жизни. Наибольшее число абортов, случаев бесплодия, мертворождений и других патологий плодоношения приходилось на самок с первой беременностью.

Среди кошек конъюнктивитом, в основном, болели длинношерстные породы. При этом в начале заболевания появлялись серозные истечения, как правило, из одного глаза. Второй глаз поражался через 10-12 дней. Продолжительность заболевания колебалась от 2 недель до нескольких месяцев. Вследствие осложнения хламидийного конъюнктивита секундарной бактериальной микрофлорой истечения из глаз приобретали гнойный характер. Хронический конъюнктивит приводил к появлению язв и даже перфорации роговицы. У собак не замечено зависимости частоты встречаемости вышеуказанных поражений от породы.

Анализируя распределение случаев заболевания собак и кошек по месяцам года, установлено, что чаще всего хламидиоз регистрируется в апреле-мае и сентябре-октябре. Весеннее увеличение заболеваемости вероятнее всего связано с сезонной активизацией половых функций у плотоядных животных (половой контакт), а осеннее повышение заболеваемости вероятно связано с тем, что в летнее время чаще проводятся выставки собак и кошек, владельцы со своими питомцами выезжают на дачи, что в свою очередь приводит к увеличению контактов между источниками возбудителя инфекции и восприимчивыми животными.

В результате эпизоотологического обследования нами установлено, что для кормления домашних плотоядных не редко реализуются боенские отходы и мясо вынуждено убитых или павших животных, которые поступают из неблагополучных по хламидиозу хозяйств и не проходят достаточной ветеринарно-санитарной и бактериологической экспертизы.

Производители, после скрещивания с которыми у самок наблюдали патологическое течение беременности невыясненной природы, нередко вновь используются для производства потомства.

Кроме того, нами были проведены разведочные серологические исследования (в РСК и ИФА) собак и кошек, подозрительных по заболеванию хлами-диозом (таблица 1).

1. Результаты исследования сывороток крови собак и кошек на хламидиоз

Вид животных Число проб Реагировало в РСК Реагировало в ИФА

положительно сомнительно

кол-во % кол-во % кол-во %

Собаки 144 11 7,6 9 6,3 46 31,9

Кошки 238 13 5,5 18 7,6 71 29,8

ВСЕГО 382 24 63 27 7,1 117 30,6

Данные таблицы свидетельствуют, что из 382 исследованных сывороток крови, полученных от подозрительных по заболеванию хламидиозом домашних плотоядных, в РСК с хламидийным антигеном реагировала 51 (13,4%) проба. В ИФА из 382 проб сывороток крови с хламидийным антигеном реагировало 117 (30,6%) проб.

От подозрительных по заболеванию хламидиозом собак и кошек мы брали клинический материал (мазки-отпечатки и соскобы со слизистых оболочек глаз, влагалища, уретры и препуция, абортированные плоды и плодные оболочки) и исследовали их люминесцентными (РИФ) и молекулярно-генетическими (ПЦР) методами.

В РИФ было исследовано 74 пробы, в 43 (58,1%) случаях выявлялось специфическое внутриклеточное свечение хламидийного антигена. Часть проб, которые были уже исследованы в РИФ, подвергли тестированию на хламидиоз методом полимеразной цепной реакции. В ПЦР было исследовано 18 проб. При этом хламидии были обнаружены у 11 (64,5%) животных подозрительных по заболеванию хламидиозом. Возбудитель чаще всего обнаруживался в мазках-отпечатках с конъюнктивы (кошки) и в абортированных плодах (собаки).

2.2.2. Разработка специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных

Хламидиосодержащий материал, который мы использовали для получения антигена, представлял собой желточные оболочки павших после заражения хламидиями куриных эмбрионов. Для инактивации возбудителя отобранные желточные оболочки инкубировали в водяной бане при 60°С в течение 60 минут. Биомассу гомогенизировали, взвешивали и готовили 10%-ную исходную суспензию

Содержание белка в препарате для иммунизации составляло 20 г/л. Готовый для иммунизации антиген оказался стерилен в результате посева на общепринятые питательные среды (МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и среду Сабуро). При исследовании инфекционности суспензии хламидий путем контрольного заражения развивающихся куриных эмбрионов и белых мышей было установлено, что антиген не обладает инфекционностью, т.е. не вызывает гибель зараженных КЭ и заболевания у лабораторных животных.

Специфическую хламидийную сыворотку получали на клинически здоровых серонегативных быках. В каждую группу по принципу аналогов было отобрано по 5 быков-продуцентов. Было проведено две серии опытов по гипериммунизации доноров.

Были испытаны две схемы введения антигенов. Обе схемы предполагали "грундировку" животных-продуцентов за 45 дней до начала собственно гипериммунизации. По первой схеме интервалы между 2-ым и последующими введениями антигенов составляли 7-8 дней (I группа животных), по второй - 14-15 дней (II группа животных). Доза первого введения эмульсии антигена в обеих схемах составила 5 мл, на каждом последующем этапе гипериммунизации дозу антигена увеличивали на 5 мл.

Нарастание титра антител в сыворотке крови доноров контролировали в РСК. Нашими исследованиями установлено, что при введении хламидийных антигенов быкам-продуцентам с интервалом 14-15 дней (по второй схеме) наблюдается достоверно (Р<0,05) более активный иммунный ответ по сравнению с иммунизацией по укороченной схеме.

Данные изучения специфической активности сывороток крови иммунизированных животных представлены в таблице 2.

2. Результаты гипериммунизации продуцентов по разным схемам

Таким образом, в результате этих исследований была разработана эффективная схема гипериммунизации быков-продуцентов хламидийным антигеном, которая представлена в таблице 3.

3. Эффективная схема гипериммунизации быков хламидийным антигеном

Этаяы иммунизации Дни иммунизации Доза антигена (мл) Состав инъекционной дозы Способ введения

"Группировка" 1-ЫЙ 5 АГ+ПАФ ПОДКОЖНО

I 45-ыЙ 10 АГ+НАФ внутримышечно

II 60-ый 15 АГ+НАФ внутримышечно

III 75-ый 20 АГ+НАФ внутрим ышечно

IV 90-ый 25 АГ+НАФ внутримышечно

Обозначения: АГ-антиген, ПАФ-полный адъювант Фрейнда, НАФ-неполный адъювант Фрейнда.

Пробное крововзятие проводили через 20 дней после последнего, предусмотренного схемой, введения антигена- Кровь получали по закрытой системе от зафиксированных животных. Осветленную сыворотку отсасывали в бутыль, консервировали азидом натрия в конечной концентрации 0,1% и помещали в холодильную камеру.

Все полученные иммунные хламидийные сыворотки, обладающие бактериологической стерильностью, сводили в одну серию. Всего было получено две серии препарата. Через сутки проверяли стерильность серий (I и II) консервированной сыворотки и ее активность в РСК. Полученный полуфабрикат использовали для изготовления иммуноглобулина.

Наряду с определением титров специфических антител, мы провели сравнительное исследование динамики увеличения количества общего белка в сыворотке крови быков-продуцентов двух групп в процессе их гипериммунизации

по разным схемам. Результаты измерений указанного показателя представлены в таблице 4.

4. Содержание общего белка в сыворотке крови быков-продуцентов в процессе гипериммунизации

Групны животных Концентрация белка, (г/л)

после грундировки после I этапа после II этапа после Шэтапа после IV этапа

I группа 68,4±2,3 72,3±1,9 74,б±2,4 77,2+2,8 80,912,8

II группа 67,9±2,2 74,611,8 76,712,3 82,212,6 84,511,9

Данные таблицы показывают тенденцию роста количества общего белка в сыворотке крови животных-доноров в процессе иммунизации. При этом темпы роста анализируемого показателя во II группе были несколько выше (р>0,05), чем во I группе животных.

Для анализа динамики иммуноглобулинов в сыворотках крови иммунизированных быков-продуцентов мы провели электрофоретическую разгонку макромолекул в полиакриламидном геле.

Кровь для электрофоретических исследований брали во время "грунди-ровки", при первой, второй, третей и четвертой иммунизациях, а также во время пробного крововзятия (через 20 дней после последней иммунизации), т.е. до иммунизации, через 45 дней после "грундировки", соответственно через 7 и 14 дней (при иммунизации животных по I или II схемам) после первой, второй и третьей иммунизаций, а также через 20 дней после четвертой иммунизации, всего по 6 раз от каждого быка-продуцента.

Данные свидетельствуют, что процентное содержание глобулиновой фракции в сыворотке крови быков стабильно растет и к IV этапу иммунизации достигает максимальных значений у всех животных. У доноров №№ 1585 и 1517, которых иммунизировали по первой схеме, значение указанного показателя повысилось за время иммунизации соответственно на 7,06 и 8,51%; у доноров №№ 1547 и 1570, иммунизированных по второй схеме - соответственно на 11,46 и 10,51%. Следовательно, у животных, иммунизированных по второй (рациональной) схеме, рост доли глобулинов в сыворотке крови в ходе гипериммунизации происходил достоверно выше, чем у быков, иммунизированных по первой схеме.

Для выделения иммуноглобулина мы применяли одну из модификаций метода, основанного на фракционировании сывороточных белков с помощью сульфата аммония при комнатной температуре. После диализа концентрацию иммуноглобулина доводили до

При диск-электрофорезе иммуноглобулина в линейном градиенте (5-10% концентрации) ПААГ была подтверждена высокая степень чистоты иммуноглобулина от других сывороточных белков. Результаты компьютерной обработки электрофореграммы препарата представлены на рисунке 2 в таблице 5.

О 10 20 за 40 50 во 70 во 90 100

тш

Рис. 2. Электрофореграмма и денситограмма специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных (серия № II)

5. Электрофоретический профиль специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных (серия № II)

№№ фракций 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

% содержание | г» «Ч ГГ) 64,21 о\ о\ "Э. чо 0,34 0,34 0,22 0,30 оо Г"; »—» 0,66 1,07 0,45 0,82 0,65 0,76 0,49 0,16 0,44 0,31

Как видно из рисунка и таблицы, глобулины в электрофоретическом профиле готового препарата представлены фракциями №№ 1-4 и составляют 88,78% от общего количества белка в пробе.

Вышесказанное свидетельствует об эффективности использованного метода осаждения иммуноглобулинов и высокой степени чистоты разработанного специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных.

При определении рН раствора иммуноглобулина, восстановленного из лиофильно высушенного состояния, установлено, что он составлял 7,0-7,5.

При определении безвредности иммуноглобулина у свинок, которым вводили препарат, во всех трех сериях опытов не было ни реакций в месте введения, ни падения в весе. За мышами наблюдали в течение 10 дней, за это время мыши оставались клинически здоровыми.

При проведении испытания на пирогенность ни у одного из трех клинически подопытных кроликов температура не повышалась более чем на один

градус. Опыт был проведен с тем же результатом еще на двух группах кроликов (по 3 животных в каждой группе).

Реактогенность препарата была испытана на здоровых серонегативных в отношении хламидиоза собаках и кошках, которые содержались в стационаре кафедры патологии мелких животных и оперативной хирургии. Из животных были сформированы четыре группы: две группы собак и две - кошек (по 5 животных в каждой).

Одной группе собак и одной группе кошек специфический иммуноглобулин против хламидиоза плотоядных животных наносили при помощи пипетки на конъюнктиву (одного глаза) в количестве 3-4 капли на одно животное.

Другим группам собак и кошек специфический иммуноглобулин против хламидиоза плотоядных животных вводили внутримышечно в области бедра в дозе 0,2 мл на кг массы животного.

За подопытными животными вели наблюдение в течение 10 дней, обращая внимание на клиническое состояние и температуру тела животных. В результате было установлено, что препарат не вызывает изменения клинического состояния и повышения температуры опытных животных.

Лечебную эффективность препарата в лабораторных условиях испытывали на экспериментально зараженных хламидиями белых мышах. 30 лабораторных животных внутрибрюшинно заражали вирулентной культурой хламидий штамма "250".

Специфический иммуноглобулин против хламидиоза плотоядных животных вводили 20 инфицированным белым мышам, начиная с 4 дня после заражения, трехкратно с интервалом 24 часа подкожно (10 голов) и внутримышечно (10 голов) в дозе 0,01 мл на одно животное. Контролем служили 10 зараженных белых мышей. Все контрольные животные после заражения пали.

Введение специфического иммуноглобулина против хламидиоза на 53,3% снижала гибель белых мышей при контрольном заражении вирулентным штаммом хламидий.

2.23. Испытание специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных в производственных условиях

Испытания терапевтической эффективности препарата проводились на собак и кошках, содержащихся в домашних условиях, владельцы которых обращались за ветеринарной помощью в клиники г. Казани.

В случае установления диагноза лабораторными методами животным назначали лечение, которое включало: этиотропную, патогенетическую и симптоматическую терапию.

В качестве этиотропных средств животным назначали антибиотики: макролиды, фторхинолоны и тетрациклины. При конъюнктивитах наряду с общей антибиотикотерапией местно применяли тетрациклиновую или эритромициновую глазную мазь 3-6 раз в сутки.

Патогенетическая терапия включала применение: пробиотиков (Бифи-думбактерин, Лактобактерин, Ацилак, Линекс и др.), иммуностимуляторов (Т-активин, Тимоген, Миелопид, Иммунофан и др.), десенсибилизирующих пре-

паратов (Дибазол, Тавегил, Супрастин и др.), интерферона, гепатопротекторов (Карсил, Эссенциале форте и др.), витаминов (особенно витамин Е, поливитамины).

В качестве симптоматической терапии животным промывали слизистые оболочки глаз, носа и половых органов антисептическими растворами: фуро-циллина, перманганата калия, риванола и т.п.

Всего лечению было подвергнуто 39 животных с различными симптомами, которым лабораторными методами был поставлен диагноз: "хламидиоз".

26 животных из числа вышеназванных были подвергнуты специфической терапии с использованием разработанного нами глобулина против хламидиоза плотоядных животных. Специфический иммуноглобулин против хламидиоза плотоядных животных вводили больным собакам и кошкам из расчета 0,2 мл/кг массы. Препарат вводили внутримышечно в области бедра один раз в сутки пять дней подряд.

Применение специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных при лечении хламидийных инфекций у собак на 22,2% повышало эффективность терапевтических мероприятий. Применение глобулина при лечении хламидийных инфекций у кошек повышало этот показатель на 11,0%.

Назначая собакам и кошкам, больным хламидиозом, разработанный препарат, нам удалось вылечить на 15,4% животных больше, чем, используя традиционные схемы лечения заболевания.

ВЫВОДЫ

1. Клинико-эпизоотологическими исследованиями установлено значительное распространение хламидиоза среди мелких домашних животных в г. Казани:

- выявлены основные закономерности возникновения и особенности проявления, потенциальные источники возбудителя инфекции и механизмы передачи при хламидиозе домашних плотоядных животных;

- симптомы, характерные для хламидийных инфекции, встречаются у 1020% от общего числа собак и кошек, владельцы которых обращаются к ветеринарным специалистам;

- в РСК и ИФА с хламидийным антигеном в диагностических титрах реагируют соответственно 13,4 и 30,69% сывороток крови, полученных от подозрительных по заболеванию хламидиозом домашних плотоядных животных;

- при исследовании в РИФ и ПЦР клинических материалов, полученных от подозрительных по заболеванию хламидиозом собак и кошек, соответственно в 62,5 и 64,5% случаях выявляется возбудитель.

2. Подобрана рациональная схема иммунизации быков-продуцентов хлами-дийным антигеном и доказана ее эффективность:

- при четырехкратном (с предварительной "грундировкой" за 45 дней) введении быкам-продуцентам хламидийных антигенов с интервалом 14-15 дней наблюдается достоверно (Р<0,05) более активный иммунный ответ по

сравнению с иммунизацией с интервалом 7-8 дней (в РСК титры антител в среднем по группам животных составляли соответственно 1:480 и 1:176, в ИФА-1:3840 и 1:1120);

- увеличение количества общего белка в сыворотках крови доноров, иммунизированных по рациональной схеме, в процессе иммунизации было достоверно больше;

- у быков-продуцентов, которых иммунизировали по укороченной схеме, процентное содержание глобулинов повысилось за время иммунизации на 7,06-8,51%, по рациональной схеме-на 11,46-10,51%.

3. Отработан технологический регламент производства и контроля биопрепарата. Тестирование специфического иммуноглобулина против хламидиоза в лабораторных условиях показало, что по растворимости, стерильности, степени чистоты, рН, безвредности, пирогенности и реактогенности он соответствует требованиям, предъявляемым к этой группе препаратов.

4. Парентеральное введение биопрепарата на 53,3% снижала гибель белых мышей при контрольном заражении вирулентным штаммом хламидий.

5. Использование специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных для лечения больных хламидиозом собак и кошек в условиях ветеринарных клиник показало, что биопрепарат обеспечивает выздоровление на 15,4% животных больше, чем при использовании традиционных схем лечения заболевания.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. На основе проведенных исследований разработан и предложен для внедрения в ветеринарную практику специфический иммуноглобулин против хламидиоза плотоядных животных в качестве средства для иммунотерапии заболевших животных.

2. Подготовлены нормативно-технические документы на препарат:

- "Временная инструкция по изготовлению и контролю специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных", согласованная с директором ВНИВИ (г. Казань) и утвержденная ректором КГАВМ 26 июня 2003 г.;

- "Технические условия на изготовление специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных", согласованные с директором ВНИВИ (г. Казань) и начальником Главного Управления Ветеринарии Кабинета министров РТ, утвержденные ректором КГАВМ 26 июня 2003 г.;

- "Временное наставление по применению специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных", согласованное с директором ВНИВИ и ректором КГАВМ, утвержденное начальником Главного Управления Ветеринарии Кабинета Министров РТ 26 июня 2003 г.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО

1. Шамсутдинова Н.В., Исхаков Г.М. Смешанное инфицирование собак возбудителями чумы плотоядных и хламидиоза. // Матер. Междун. науч. конф., посвящ. 70-летию образования зооинженерного факультета - Казань, 2000. -С. 213-214.

2. Исхаков Г.М. Схема иммунизации животных-продуцентов хламидийным антигеном. // Матер. науч.-произв. коиф. по актуал. пробл. ветерин. и зоотехн. -Казань,2001.-4.1.-С. 38-41.

3. Исхаков Г.М., Равилов Р.Х. Разработка глобулинового препарата для иммунотерапии хламидиоза мелких домашних животных. // Матер, науч.-практич. конф. "Актуал. пробл. биол. и вет. мед. мелких дом. жив.". - Киров, 2001. -С.82-85.

4. Исхаков Г.М., Равилов Р.Х., Герасимов В.В. Иммуноглобулин против хла-мидиоза мелких домашних животных. // Сб. статей "Актуал. вопр. вет. мед. мелких дом. жив.". - Екатеринбург, 2001. - С. 99-101.

5. Исхаков Г.М., Равилов Р.Х., Герасимов В.В. Специфический препарат для иммунотерапии хламидийной инфекции у мелких домашних животных. // Матер. X Московского междунар. ветерин. конгресса. - М., 2002. - С. 107108.

6. Исхаков Г.М., Равилов Р.Х., Герасимов В.В. Разработка биопрепарата против хламидиоза мелких домашних животных. / Ученые записки КГАВМ. -Казань, 2002.-С. 57-62.

7. Исхаков Г.М., Куприянова А.В., Равилов Р.Х. Локальная специфическая иммунотерапия при хламидийном конъюнктивите кошек. // Матер. Всероссийской науч.-произв. конф. по актуал. пробл. ветерин. и зоотехн. - Казань: КГАВМ, 2002. - Ч. 2. - С. 163-165.

8. Исхаков Г.М., Хаертынов К.С. Динамика специфических антител в сыворотке крови быков-доноров при гипериммунизации хламидийным антигеном Матер. Междунар. науч.-произв. конф. по актуал. пробл. Агропр. комплекса - Казань: КГАВМ, 2003. - Ч. 1. - С. 64-66.

9. Исхаков Г.М. Глобулин против хламидиоза собак и кошек. // Сб. статей "Актуал. вопр. вет. мед. мелких дом. жив.". - Екатеринбург, 2003. - С. 48-50.

10.Исхаков Г.М., Равилов Р.Х. Биопрепарат для иммунотерапии хламидиоза мелких домашних животных. // Матер. IV регион. науч.-практ. конф. "Вет. медицина. Совр. пробл. и пресп. разв." - Саратов, 2004. - С. 58-60.

11.Исхаков Г.М., Равилов Р.Х., Куприянова А.В., Герасимов В.В. Иммуноглобулин против хламидиоза мелких домашних животных. // Матер. XII Меж-дунар. московского конгресса по болезням мелких домашних животных. -М., 2004.-С. 5-7.

Подписано в печать 21.05.04 г. Заказ № 45. Формат 60x84,1/16. Усл. п. л. 1,0. Офсетный участок ВНИВИ (г. Казань)

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Исхаков, Гали Мухамедович

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Некоторые иммунобиологические свойства возбудителя хламидиоза

1.1.1. Химический состав хламидий

1.1.2. Антигенная структура и иммуногенность хламидий

1.2. Индикация хламидийных антител

1.3. Хламидиоз домашних плотоядных животных (собак и кошек).

1.4. Лечение хламидиоза.

1.4.1. Чувствительность хламидий к антимикробным препаратам

1.4.2. Неспецифическая терапия хламидиоза мелких домашних животных

1.4.3. Специфическая терапия хламидиоза мелких домашних животных

1.5. Получение глобулиновых лечебных биопрепаратов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Эпизоотологическое обследование.

2.2. Штаммы хламидий.

2.3. Опытные животные.

2.4. Сыворотки и патологический материал.

2.5. Индикация возбудителя в патологическом материале.

2.6. Серологические реакции.

2.7. Разработка специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных.

2.7.1. Изготовление антигена для иммунизации

2.7.2. Гипериммунизация животных-продуцентов, взятие крови и получение сыворотки

2.7.3. Электрофоретический анализ сывороток крови быков

2.7.4. Изготовление иммуноглобулина

2.8. Контроль глобулина в лабораторных и производственных условиях.

2.9. Статистическая обработка результатов исследований.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Степень распространения хламидийных инфекций среди поголовья домашних плотоядных животных.

3.2. Разработка специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных.

3.2.1. Изготовление хламидийного антигена для иммунизации

3.2.2. Подбор животных и выбор схемы иммунизации

3.2.3. Динамика количества общего белка в сыворотках крови быков-продуцентов в процессе гипериммунизации

3.2.4. Электрофоретический анализ гипериммунных сывороток

3.2.5. Получение иммуноглобулина из гипериммунного сывороточного полуфабриката

3.2.6. Тестирование полученного биопрепарата в лабораторных условиях

3.3. Испытание специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных в производственных условиях.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

5. ВЫВОДЫ

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 115 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных"

Хламидиоз - широко распространенное заболевание человека, птиц и животных, ответственное за широкий круг патологии органов и тканей (40, 54, 68, 108, 146, 148, 160, 202, 208 и другие). Заболевание наносит значительный экономический ущерб животноводству и представляет угрозу здоровью людей. Больные животные часто становятся источником инфекции для работников сельского хозяйства и перерабатывающих производств.

В то же время распространенность возбудителей хламидиозов в природе среди домашних и диких животных, а также птиц представляет постоянную угрозу спорадических заболеваний для людей, профессионально не занятых в сельском хозяйстве (9, 70, 106,249).

Исследованиями Равилова Р.Х. (86), Шамсутдиновой Н.В. (132) доказано значительное распространение хламидийных инфекций среди плотоядных животных, в том числе и среди домашних собак и кошек. Тем не менее, многие вопросы эпизоотологии, этиологии, симптоматики, патогенеза* диагностики, лечения и профилактики хламидиозов клеточных и домашних плотоядных остаются нерешенными и требуют детального изучения.

В последнее время исследователи уделяют все больше внимания проблеме организации лечебно-профилактических мероприятий при заразных болезнях мелких домашних животных. Основной упор при этом делается на поиск вакцин и рациональных схем их применения, обеспечивающим иммунную защиту восприимчивых животных. Разработаны и внедрены в ветеринарную практику протективные биопрепараты при хламидийных инфекциях крупного и мелкого рогатого скота, свиней и птиц (40, 105, 114, 123, 148, 204, 209, 214 и другие).

Специфическим средствам воздействия на возбудителя, с целью его нейтрализации, уделяется гораздо меньше внимания. Для пассивной иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных болезней животных применяют сыворотки и глобулиновые препараты. При этом главным образом разрабатываются гипериммунные сыворотки. Однако известно, что эта группа биопрепаратов, кроме положительного эффекта, имеет серьезные недостатки, связанные, прежде всего, с наличием большого количества балластных веществ, вызывающих побочное действие на организм, проявляющееся аллергическими реакциями. В этом аспекте наиболее перспективно использование иммуноглобулинов (53,243).

В настоящее время разработаны, выпускаются и применяются специфические лечебные препараты при следующих инфекционных заболеваниях мелких домашних животных: чуме плотоядных, парво- и аденовирозах собак, пан-лейкопении, калицивирозе и инфекционном ринотрахеите кошек (49,65, 98).

Перспективным направлением в терапии хламидийных инфекций является применение лечебных сывороток. Обычно используют полиспецифические гипериммунные или сыворотки реконвалесцентов, которые сочетают в себе антитела против вирусных, микоплазменных и хламидийных антигенов, т.к. эти заболевания часто встречаются в виде смешанных инфекций (116, 129, 243 и другие).

Цель и задачи исследований. Цель исследований — разработать специфический иммуноглобулин против хламидиоза плотоядных животных и изучить его лечебную эффективность.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

- провести лабораторные исследования сывороточных полуфабрикатов;

- отработать технологический регламент производства и контроля биопрепарата;

- провести исследования полученных глобулинов в лабораторных условиях;

- испытать разработанный препарат на спонтанно больных хламидиозом плотоядных животных (собаках и кошках).

Разработана рациональная схема иммунизации быков-продуцентов хла-мидийным антигеном.

С использованием компьютерной программы Image Master: ID Gel Analysis v 3.O. проведен анализ электрофореграмм сывороток крови доноров, иммунизированных хламидийным антигеном.

Полученный биопрепарат протестирован в лабораторных условиях. С использованием разработанного препарата проведено лечение спонтанно зараженных хламидиями мелких домашних животных.

Практическая ценность. Разработан специфический иммуноглобулин против хламидиоза плотоядных животных.

Установлена возможность использования указанного биопрепарата для лечения хламидиоза у собак и кошек.

Результаты проведенных исследований вошли в следующие нормативно-технические документы:

- в "Технические условия на специфический иммуноглобулин против хламидиоза плотоядных животных", утвержденные ректором КГАВМ 26 июня 2003 г.;

- во "Временное наставление по применению специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных", утвержденное начальником ГУВ Кабмина РТ 26 июня 2003 г.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:

- ежегодных итоговых заседаниях ученых советов Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана (1999-2003 гг.),

- научно-практических конференциях по проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2001-03 гг.).

- X и XII Московских международных ветеринарных конгрессах (2002 и 2004 гг.).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 11 научных работ. Разработаны нормативно-технические документы на биопрепараты: одно наставление, одна инструкция и одни технические условия.

Основные положения диссертации, выдвигаемые для защиты:

- оценка эффективности подобранной схемы гипериммунизации быков продуцентов хламидийным антигеном;

- разработка специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных;

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Исхаков, Гали Мухамедович

Результаты исследования подозрительных по хламидиозу домашних плотоядных животных (собак и кошек) в ПЦР и РИФ представлены на рисунке 3.1.

Корреляция результатов ПЦР и РИФ составила 83,3% (сумма секторов I и IV), из них 9 проб в обоих тестах были положительны (сектор IV), а 6 - отрицательны (сектор I). 1 проба была положительна в РИФ и отрицательна в ПЦР (сектор II), 2 пробы отрицательны в РИФ и положительны в ПЦР (сектор III). При этом следует указать, что небольшая выборка анализируемых образцов (п=18) не дает возможность делать достаточно обоснованные выводы, но определенную закономерность установить можно. пцр

III IV

I II ++ +++ ++++ риф

Рис. 3.1 Результаты исследования подозрительных по заболеванию хламидио-зом домашних плотоядных животных (собак и кошек) в ПЦР и РИФ

I) ПЦР -/ РИФ - = 6 (33,3%);

II) ПЦР -/ РИФ + = 1 (5,6%);

III) ПЦР + / РИФ - = 2 (ПД%);

IV) ПЦР + / РИФ + = 9 (50,0%).

Резюмируя вышеизложенное следует указать, что заболевание домашних плотоядных животных в городе Казани имеет достаточно высокую степень распространения и, учитывая тесный контакт хозяев со своими питомцами и опасность хламидиоза для человека, усилия исследователей должны быть направлены на разработку эффективных средств диагностики, лечения и профилактики хламидиоза собак и кошек.

3.2. Разработка специфического иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных

3.2.1. Изготовление хламидийного антигена для иммунизации

Хламидиосодержащий материал, который мы использовали для получения антигена, представлял собой массу 200-300 желточных оболочек павших после заражения хламидиями КЭ, помещенных в стерильные пол-литровые флаконы.

Для инактивации возбудителя отобранные желточные оболочки инкубировали в водяной бане при 60°С в течение 60 минут. Все операции с исходной и концентрированной биомассами хламидий выполняли в стерильных условиях. При работе использовали стерильные растворы и инструменты.

Биомассу гомогенизировали стеклянными гомогенизаторами, взвешивали и готовили 10%-ную исходную суспензию.

От клеточного дебриса освобождались дифференциальным и градиентным центрифугированием по схеме:

I этап (3 раза): Приготовление 10%-ной суспензии инфицированных желточных мешков КЭ на 0,2М ФБ (рН 7,2-7,4), содержащем 0,1% азида натрия; центрифугирование взвеси при 2000g в течение 20 минут; осаждение надосадка при 45000g в течение 60 минут, гомогенизирование осадка в 0,2 М ФБ (рН 7,2-7,4);

II этап: Гомогенизация осадка, полученного после 3-го цикла I этапа, наслаивание его на 30%-ный раствор сахарозы на 0,01М ФБ (рН 7,2-7,4) и "продавливливание" через 30%-ную сахарозную "подушку" при 4500(^ в течение 60 мин.

III этап: Гомогенизация осадка, наслоение его на ступенчатый градиент сахарозы (30,45, 60%) и центрифугирование при 45000§ в течение 120 мин.

IV этап: Сбор фракций, содержащих хламидии путем прокола стенки центрифужного стакана и разбавление полученной взвеси в 10-кратном объеме 0,2 М ФБ (рН 7,2-7,4).

V этап: Отмывка хламидий от сахарозы путем осаждения при 45000§ в течение

60 мин, гомогенизация осадка в 0,15 М растворе ИаС1 (рН 7,2-7,4), содержащем 0,1% азида натрия.

VI этап: Стандартизация полученной взвеси по оптической плотности (ОП).

Определение концентрации хламидий в полуфабрикате проводили на ФЭК 56М-У4-1М. По данным Хамадеева Р.Х. (114) оптимальной оптической плотностью взвеси возбудителя, обеспечивающей достаточную иммуноген-ность антигена, является коэффициент поглощения на указанном ФЭКе, равный 2,1-2,2 единиц, при использовании зеленого светофильтра № 6 (длина волны 540 нм) и рабочей длине измерительной кюветы 10 мм.

Гомогенность взвеси контролировали путем световой микроскопии в иммерсионной системе. Взвесь микроорганизмов, которая была использована в дальнейшей работе была гомогенной, практически не содержала конгломератов.

Стерильные в отношении неспецифической бактериальной и грибковой микрофлоры, не вызывающие гибель КЭ и белых мышей суспензии, использовали для иммунизации животных-доноров.

3.2.2. Подбор животных и выбор схемы иммунизации

Специфическую хламидийную сыворотку получали на клинически здоровых серонегативных быках. Для этого у подобранных животных брали кровь и исследовали ее в РСК с хламидийным антигеном. При получении отрицательного результата у исследованных животных, их использовали для иммунизации.

Известно, что значительное влияние на уровень антителогенеза при гипериммунизации оказывают специфическая чистота, концентрация и доза антигена, а также схема его введения.

Изыскивая оптимальную схему гипериммунизации быков, мы руководствовались общепринятыми положениями, касающимися методов введения антигенов, их дозировки, количества инъекций и интервалов между ними.

При подборе схемы гипериммунизации мы изучали зависимость иммунного ответа от интервалов между введениями антигенов. Были испытаны две схемы введения антигенов. В каждую группу по принципу аналогов было отобрано по 5 быков-продуцентов. Было проведено две серии опытов по гипериммунизации доноров.

Обе схемы предполагали "грундировку" животных-продуцентов за 45 дней до начала собственно гипериммунизации. По первой схеме интервалы между 2-ым и последующими введениями антигенов составляли 7-8 дней (I группа животных), по второй - 14-15 дней (II группа животных). Доза первого введения эмульсии антигена в обеих схемах составила 5 мл, на каждом последующем этапе гипериммунизации дозу антигена увеличивали на 5 мл.

В процессе иммунизации уделяли особое внимание состоянию здоровья продуцентов. Ежедневно проводили клинический осмотр с измерением температуры тела животных.

Эффективность лечебно-профилактической сыворотки определяется ее специфической активностью, следовательно, высокий титр хламидийных антител будет косвенно свидетельствовать о терапевтической эффективности биопрепарата, изготовленного из этой сыворотки. Нарастание титра антител в сыворотке крови доноров контролировали в РСК.

Нашими исследованиями установлено, что при введении хламидийных антигенов быкам-продуцентам с интервалом 14-15 дней (по второй схеме) наблюдается достоверно (Р<0,05) более активный иммунный ответ по сравнению с иммунизацией по укороченной схеме.

Данные изучения специфической активности сывороток крови иммунизированных животных представлены в таблице 3.2.

3.2. Результаты гипериммунизации продуцентов по разным схемам

Интервал введения антигена (дни) Титры хламидийных антител при пробном крововзятии в РСК вИФА

7-8 1:176±34,6 1:1120±165,7

14-15 1:480±67,8 1:3840±218,3

Пробное крововзятие проводили через 20 дней после последнего, предусмотренного схемой, введения антигена (на 110 день иммунизации). Титр ком-плементсвязывающих антител должен был быть не ниже 1:40.

3.3. Эффективная схема гипериммунизации быков хламидийным антигеном

Этапы иммунизации Дни иммунизации Доза антигена (мл) Состав инъекционной дозы Способ введения

Грундировка" 1-ый 5 АГ+ПАФ подкожно

I 45-ый 10 АГ+НАФ внутримышечно

II 60-ый 15 АГ+НАФ внутримышечно

III 75-ый 20 АГ+НАФ внутримышечно

IV 90-ый 25 АГ+НАФ внутримышечно

Обозначения: АГ-антиген, ПАФ-полный адъювант Фрейнда, НАФ-неполный адъювант Фрейнда.

Все полученные иммунные хламидийные сыворотки, обладающие бактериологической стерильностью, сводили в одну серию. Всего было получено две серии препарата. Через сутки проверяли стерильность серий (I и И) консервированной сыворотки и ее активность в РСК.

Полученный полуфабрикат использовали для изготовления иммуноглобулина.

3.2.3. Динамика количества общего белка в сыворотках крови быков-продуцентов в процессе гипериммунизации

На этом этапе работы мы проводили количественную и качественную оценку изменений иммуноглобулинового профиля сывороток крови быков-продуцентов, подвергнутых гипериммунизации хламидийным антигеном.

Результаты измерений указанного показателя представлены в таблице 3.4 и на рисунке 3.2.

3.4. Содержание общего белка в сыворотке крови быков-продуцентов в процессе гипериммунизации

Группы животных Концентрация белка, (г/л) после грундировки после I этапа после II этапа после III этапа после IV этапа

I группа 68,4±2,3 72,3±1,9 74,6±2,4 77,2±2,8 80,9±2,8

II группа 67,9±2,2 74,6±1,8 76,7±2,3 82,2±2,6 84,5±1,9

Г/л

Этапы иммунизации I группа ■ II группа

Рис. 3.2 Динамика изменения содержания белка в сыворотке крови быков-продуцентов

Данные таблицы и рисунка показывают тенденцию роста количества общего белка в сыворотке крови животных-доноров в процессе иммунизации. При этом темпы роста анализируемого показателя во II группе были несколько выше (р>0,05), чем во I группе животных. Однако полученные результаты не позволяли нам в полной мере оценить влияние интервала между введениями антигена при иммунизации на характер иммунобиологической перестройки животных. Поэтому мы провели изучение динамики содержания глобулинов в исследуемых сыворотках в процессе гипериммунизации.

3.2.4. Электрофоретический анализ гипериммунных сывороток

Сканирование электрофореграмм выполняли на сканере Sharp (Япония). Анализ результатов сканирования проводили с использованием специализированной компьютерной программы Image Master ID Gel Analysis v 3.0.

Электрофоретической разгонке и компьютерному анализу подвергли сыворотки крови 4 быков-продуцентов во время второй серии опытов:

- двух быков (№№ 1585 и 1517), иммунизированных по первой схеме;

- двух быков (№№ 1547 и 1570), иммунизированных по второй схеме.

Денситограммы электрофореза сывороток крови быков продуцентов в полиакриламидном геле и результаты анализа этих денситограмм представлены на рисунках 3.5-3.28 и в таблицах 3.3-3.26.

Ьапе Яерог!: бык № 1585 (до иммун.) l.tif, Ьапе 8 шт в] I -П I II I II 11) I II II 11111 III II III! III I II ИШ. II

Рис. 3.3 Электрофореграмма и деиситограмма сыворотки крови быка № 1585, иммунизированного по I схеме (до иммунизации)

3.5. Электрофоретический профиль сыворотки крови быка № 1585, иммунизированного по I схеме (до иммунизации) фракций 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 содержание

О •ч V© 3,27 3,43 15,76 4,79 9,90 3,12 СП чо *—Н 1,23 2,26 3,18 5,43 1,96 2,51 2,86 2,52 7,92 14,49 7,68

Как видно из рисунка и таблицы, глобулины в электрофоретическом профиле сыворотки крови быка № 1585 до иммунизации представлены фракциями №№ 1-6, что составляет (43,21%) от общего количества белка в пробе.

Ьапе ЯероЛ: бык № 1585 (грунд.) 2.tif, Ьапе 9 тт

I I ! 1111 И I- I I 1Н11Н1 МИН II .1 II

Рис. 3.4 Электрофореграмма и деиситограмма сыворотки крови быка № 1585, иммунизированного по I схеме (через 45 дней после "грундировки")

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Исхаков, Гали Мухамедович, Казань

1. Азнабаев М.Т., Мальханов В.В. Аденовирусные и хламидийные заболевания глаз / АН Респ. Башкортостан, Уфим. НИИ глаз, болезней. Уфа, 1995. - 112с.

2. Ахмедов A.M. Белки сыворотки крови при инфекционных болезнях животных. М., "Колос". - 1984. - 168с.

3. Байтурина O.IIL Материалы к серологической диагностике вирусного аборта овец в хозяйствах юга Казахстана / Труды Алма-Атинского зоове-тинститута. 1969. - № 16. - С.48-53.

4. Барбарова Л.А., Евстифеев В.В., Хамадеев Р.Х. Эффективность РСК и РНГА при серологической диагностике хламидиоза лошадей. // Метер. межд. науч.-практ. конф.: "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". 2003. - С. 120-122.

5. Белов А.Д., Данилов Е.П., Дукур И.И. и др. Болезни собак. М.: Агропромиздат, 1990. - 368с.

6. Белоусов В.И., Пономарев A.B., Сусский Е.В. Лабораторная диагностика хламидиоза. // Метер. межд. науч.-практ. конф.: "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". 2003. - С. 163-167.

7. Беляков В.Д., Голубев Д.Б., Каминский Г.Д., Тец В.В. Саморегуляция паразитарных систем. Л., 1987.

8. Бортничук В.А. Хламидиоз свиней. Киев: Урожай, 1991. - 192с.

9. Вафин P.P., Равилов Р.Х., Фаизов Т.Х. Индикация и идентификация хла-мидий методом полимеразной цепной реакцией. / Ученые записки КГАВМ. Казань, 2003. - Т. 174. - С.51-59.

10. Вафин P.P., Равилов Р.Х., Фаизов Т.Х. Фенольно-детергентный метод выделения ДНК хламидий. / Ученые записки КГАВМ. Казань, 2003. -Т. 174.-С.59-66.

11. Вафин P.P., Равилов Р.Х. Молекулярно-генетическая диагностика хлами-диоза мелких домашних животных. // Матер. XI Московского междунар. ветерин. конгресса. М., 2003. - С. 12.

12. Вустина У.Д., Воробьёва В.Я. Источники инфекции клеточных пушных зверей / Экспресс-информация Казахского НИИНТИ. Алма-Ата, 1979. -С.1-10.

13. Гаффаров Х.З. Диагностика и специфическая профилактика респиратор-но-кишечных болезней у телят (обзор иностранной литературы) // Ж. Ветеринария. 1983. - № 4. - С. 73-76.

14. Гаффаров Х.З., Хамадеев Р.Х., Шафикова P.A. и др. Итоги широкого производственного испытания диагностикума хламидийного аборта овец / Болезни овец и меры борьбы с ними: Тез. докл. Всесоюз. конф. Чита, 1980. - С.33-36.

15. Гаффаров Х.З., Хамадеев Р.Х., Равилов Р.Х. Современные методы диагностики хламидиозов животных и птиц // Ж. Ветеринарный врач. №3. -2000.-С. 40-52.

16. Герасимов В.В., Равилов Р.Х., Гумеров В.Г., Уразов Н.Г., Хаертынов К.С. Специфический гамма-глобулин против чумы плотоядных (технические условия). / Утверждены ГУВ Кабмина РТ 28.02.94.

17. Герасимов В.В., Равилов Р.Х., Шамсутдинова Н.В Применение ИФА для диагностики инфекционных болезней мелких домашних животных. / Матер. Междун. науч. конф., посвящ. 70-летию образования зооинженерно-го факультета Казань, 2000. - С. 159-160.

18. Глазкова Л.К., Герасимова Н.М. Состояние факторов неспецифической защиты организма женщин при хламидиозе. / Вестник дерматологии и венерологии. №1. - 1998. - С. 7-10.

19. Горовиц Э.С., Тимашева O.A., Петров В.Ф., Карпунина Т.И. Диагностика хламидийных инфекций человека и животных // ЖМЭИ. 1998. - № 2. -С.72-75.

20. Гранитов В.М. Хламидиозы. 2000. - 192с.

21. Гуненков В.В., Шарабрин О.И., Коромыслов И.Г. Диагностика иммуно-ферментным методом короновирусной инфекции крупного рогатого скота // Вестн. с/х науки. 1985. - № 11. - С. 122-124.

22. Диагностика, лечение и профилактика заболеваний, передаваемых половым путем: Методич. матер. / Под ред. Борисенко К.К. и др. М.: Асс. "Сенам". - 1997.

23. Домейка М.А. ELISA для индикации антител и антигена хламидий энтерита и пневмоний телят // Бюлл. ВНИИ экспер. вет. 1985. - № 58. - С.58-61.

24. Евстифеев В.В., Хамадеев Р.Х., Хусаинов Ф.М., Равилов А.З. Выявление хламидийных антител и антигенов в РНГА / Матер. Междунар. науч. конф., поев. 125-летию академии. Казань, 1998. - 4.1. - С.37-38.

25. Егоров A.M., Сазыкин Ю.О. Хламидии. Молекулярная организация клетки и некоторые особенности патогенеза инфекций. // Ж. Антибиотики и химиотерапия. 2000. - №4. - С. 3-5.

26. Ефимова M.A. Смешанные формы инфекционной диареи новорожденных телят их профилактика и иммунотерапия. Дис. . канд. вет. наук. - Казань, 1999. -215с.

27. Звягин И.В. Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов. Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация. - № 7. - М., 1978. - С. 3-18.

28. Здродовский П.Ф. Фактор времени в динамике иммунитета и условия эффективности повторных прививок. // Архив биол. наук. 1937. - Т.48^ -№1-2.-С. 90-98.

29. Ильинский Ю.А. Орнитоз. Клиника, диагностика, лечение. М., Медицина.- 1974.

30. Инфекционная патология животных. Том V. Хламидиозы. / Под ред. Самуйленко А.Я., Сюрина В.Н. и Воронина Е.С. М.: ВНИИТИБП, 2003. -207с.

31. Казанцев A.A. Орнитоз. Л., Медицина. - 1973.

32. Караваев Ю.Д. Агглютинирующая активность штаммов возбудителя, выделенных при массовых абортах овец // Бюлл. ВИЭВ. 1972. - № 14. С.62-63.

33. Караваев Ю.Д. Изучение комплементсвязывающей активности различных штаммов возбудителя аборта овец / Профилактика и меры борьбы с болезнями овец: Тез. докл. науч. совещания. М., 1973. - С.162-164.

34. Караваев Ю.Д. Хламидиозный аборт овец (этиология, диагностика, специфическая профилактика): Автореф. дис. . докт. вет. наук. М., 1987. -39с.

35. Караваев Ю.Д., Дзиова H.H., Крюков H.H. Сравнительное изучение чувствительности РСК и микроагглютинации при диагностике энзоотического аборта овец // Бюлл. ВИЭВ. -1971. Ч. II. - С.77-78.

36. Караваев Ю.Д., Налетов Н.И. Вакцинопрофилактика хламидиозного аборта овец / Тр. ВИЭВ. 1981. - № 53. - С.95-102.

37. Караваев Ю.Д., Налетов Н.И., Калугина И. Хламидиозы меры борьбы и профилактики // Ветеринарная газета. - 1993. - № 26. - С.4.

38. Кисина В.И. О тактике терапии урогенитального хламидиоза. // Вестник дерматологии и венерологии. №3. - 1998. - С. 12-16.

39. Ковалев В.Л., Андреева Р.Х., Степанова С.Н. Дикие животные резервен-ты возбудителей хламидиозов / Вопросы природ, очаговости болезней. -1978. - № 9. - С.138-143.

40. Ковалев В.Л., Андреева Р.Х. Экспериментальный хламидиоз собак / Тр. Тадж НИВИ. Душанбе, 1979. - Т. 9. - С.9-14.

41. Колкова Н.И., Мартынова В.Р. К вопросам диагностики хламидийных инфекций// Ж. Клин. Лаб. диагн. 1998. - № 2. - С.20-21.

42. Колюбина Ю.В., Кубанова A.A., Капитанов А.Б., Гнедой С.Н. Диагностика урогенитальной хламидийной инфекции методом полимеразной цепной реакции. // Ж. Проблемы репродукции. №1. - 1998. - С.44-45.

43. Константинов А.П. Современный механизм искусственной регуляции па-разито-хозяинных отношений при чуме плотоядных // Тез. докл. 1-ой науч. конф. Новосиб. отд. Паразитол. общест. РАН. Новосибирск, 1996. С. 48-50.

44. Кравченко Т.Ф. Серологическая диагностика при хламидиозе свиней / Матер. Всесоюзн. конф.: Эпизоотол., эпидемиол., средства диагн., терапии и спец. профил. инф. бол., общих для чел. и жив. Львов, 1988. -С.114-115.

45. Кротов С.А. и др. Хламидиозы: эпидемиологическая характеристика возбудителя, методы лабораторной диагностики, лечение генетального хла-мидиоза. 1997. - С. 20-21.

46. Кряжева С.С., Минакова М.Э., Купцов В.И., Поздняков В.И., Курицин

47. B.П. Опыт диагностики и лечения урогенитального хламидиоза в амбулаторных условиях / Тез. докл. 7 Рос. съезда дерматол. и венерологов. Казань, 1996.-С.И5-116.

48. Куприянова A.B., Равилов Р.Х. Лечение хламидийного конъюнктивита у кошек. // Матер. XI Московского междунар. ветерин. конгресса. М., 2003.-С. 13.

49. Курбанов H.A., Попова О.М., Терских И.И., Гизатуллин Х.Г. Возбудители группы ОЛТ в этиологии абортов коров // Ветеринария. 1973. - № 7.1. C.36-39.

50. Люлькова Л.С., Еремец В.И., Ямникова С.С. Тест-системы ИФА для диагностики хламидиоза овец и крупного рогатого скота. // Метер. межд. науч.-практ. конф.: "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". 2003. -С.113-118.

51. Магзянов Ф.З. Разработка противоэпизоотических мероприятий при хла-мидиозе свиней: Автореф. дис. канд. вет. наук. Казань, 1998.

52. Матвеев JI.B. Болезни собак и кошек. Н. Новгород, 1997. - 400с.

53. Медицинская микробиология / Под редакцией Покровского В.И., Поздее-ва O.K. М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999.

54. Медицинская микробиология 7 Под редакцией Покровского В.И. — М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. 768с.

55. Митрофанов П.М. Меры борьбы с хламидиозом крупного рогатого скота // Ветеринария. 1980. - № 10. - С.33-34.

56. Мникова Л.А., Авилов A.C., Гоголев М.М. Применение иммунофермент-ного анализа в диагностике ротавирусной инфекции крупного рогатого скота // Бюлл. ВНИИ экспер. вет. 1985. - № 58. - С.26-29.

57. Муравьева Т.В. Применение метода флуоресцирующих антител для диагностики некоторых вирусных заболеваний глаз (трахома, паратрахома, герпес). Автореф. дисканд. мед. наук. М., 1968. - 22с.

58. Непоклонова И.В., Васильев A.B. ИФА для выявления вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и антител к нему. // Бюлл. ВНИИ экспер. вет. 1985. - № 58. - С.30-35.

59. Непоклонова И.В., Ткачев A.B., Лунина H.A. Панлейкопения кошек: диагностика и лечение. // Матер. X Московского междунар. ветерин. конгресса. М., 2002. - С. 95-96.

60. Николаева A.B. Об энзоотической пневмонии свиней, вызываемой вирусом из группы орнитоза лимфогранулемы - трахомы / Вирусные болезни сельскохозяйственных животных: Матер. I Межвузовской вет. вирусол. конф. - М., 1970. - с.227-228.

61. Носов И.И. Аборты овец вирусной этиологии / Тез. докл. научн. конф. по малоизученным в СССР забол. с/х жив. М., 1965. - С. 17.

62. Носов И.И. Аборты овец вирусной этиологии / Малоизученные забол. с/х жив. М.: Колос, 1967. - С.104.

63. Обухов И.Л. Хламидиоз кошек. Приложение к журналу "Новости звероводства". М.,1994. - 92 с.

64. Обухов И.Л. Обнаружение Chi. psittaci при конъюнктивитах у собак. / Сб. науч. тр. Всерос. ГНИИ контроля стандартизации и сертификации вет. препаратов. 1996. - Т.57. - С.45-51.

65. Обухов И.А. Хламидийные инфекции животных и птиц. // Ветеринария. -1996.-№ 10. С.19-26.

66. Обухов И.Л. Полимеразная цепная реакция высокочувствительный метод определения возбудителя хламидиоза у птиц и сельскохозяйственных животных. // Тез. докл. Всеросс. науч. конф.: Инф. бол. молод, с.-х. жив. -М., 1996. - С.10-12.

67. Обухов И.Л. Диагностика хламидийной инфекции у кошек. // Ветеринария. 1997. - №5. - С.49-50.

68. Обухов И.Л, Груздев К.Н., Панин А.Н. Использование полимеразной цепной реакции в практических ветеринарных лабораториях. // Ветеринария. 1997. - №2. - С.24-27.

69. Панин А.Н., Обухов И.Л., Шипулин Г.А., Груздев К.Н. Правила проведения работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции. // Ветеринария. 1997. - № 7. - С. 19-21.

70. Плахотная Г.А., Ильина И.Н. Микоплазная и хламидийная инфекция уро-генитального тракта: Вопросы диагностики и лечения. // Клинич. фармакология и терапия. 1996. - N4. - С. 34-39.

71. Поляков В.Ф. Динамика белков крови при экспериментальной инфекционной анемии лошадей. / Труды ВИЭВ. Т.27. - М., 1961.

72. Попов В.Л., Бескина С.Р., Шаткин А.А. Электронно-микроскопическое определение локализации группоспецифического антигена гальпровий (хламидий) прямым и ммунопероксидазным методом // ЖМЭИ. 1976. -№ 12. - С.70-73.

73. Попов В.Л. Цикл развития и клеточный цикл и хламидий / Хламидии (гальпровии) и хламидиозы. М., 1982. - С. 16-17.

74. Попов В.Л., Бескина С.Р., Панкратова В.Н. Иммунологические методы диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных / XXII Всемирный вет. конгр.: Резюме (доклады и сообщения). М., 1979. - Т.З. — С.53-57.

75. Попович Г.Г. Антигенные свойства хламидий разного происхождения // Ж. Микробиол. 1978. - № 1. - С.69-72.

76. Попович Г.Г. Оценка серологических методов диагностики хламидиозов // Ж. Микробиол. 1981. - Т.43. - № 2. - С. 188-192.

77. Равилов А.З., Коннов Н.М., Хамадеев Р.Х. и др. Использование сывороток крови реконвалесцентов при респираторных заболеваний телят и ягнят на комплексах / Инф. болезни с/ животных: Сб. науч. тр. Новосибирск, 1983. - С.35-42.

78. Равилов Р.Х. Хламидиоз плотоядных животных (этиология, диагностика, профилактика и меры борьбы): Автореф. дисс. . докт. вет. наук. Казань, 1999.-28с.

79. Равилов Р.Х. Хламидиоз пушных зверей, собак и кошек. / Матер. VIII междун. конгресса по вет. мед. мелких домашних животных. М., 2000. -С. 214-216.

80. Равилов Р.Х. Мероприятия по диагностике, профилактике и лечению хламидиоза домашних плотоядных. / Матер. Междун. науч. конф., по-свящ. 70-летию образования зооинженерного факультета Казань, 2000. -С. 205-207.

81. Равилов Р.Х. Инфекции мелких домашних животных: проблемы их контроля. / Матер, науч.-произв. конф. по актуал. пробл. ветерин. и зоотехн. -Казань, 2001. Ч. 1. - С. 220-222.

82. Равилов Р.Х. Контроль инфекционных болезней мелких домашних животных. / Матер, науч.-практич. конф. "Актуал. пробл. биол. и вет. мед. мелких дом. жив.". Киров, 2001. - С. 72-74.

83. Равилов Р.Х. Лечение собак и кошек, больных хламидиозом. // Матер, науч.-практич. конф. "Актуал. пробл. биол. и вет. мед. мелких дом. жив.". — Киров, 2001.-С. 74-76.

84. Равилов Р.Х. Диагностика, профилактика и лечение хламидиоза собак и кошек. / Ученые записки КГАВМ. Казань, 2002. - С. 49-57.

85. Равилов Р.Х. Хламидиоз плотоядных животных. Казань: "Алма-Лит", 2003.- 130с.

86. Равилов Р.Х., Садриев А.Р. Хламидиоз собак и кошек. // Материалы юбилейной научной конференции, посвящ. 70-летию НИИ микробиологии МО РФ. Киров, 1998. - С.417-418.

87. Равилов Р.Х., Садриев А.Р. Лечение домашних плотоядных, больных хламидиозом. // Тезисы докл. 2-й регион, конф. "Актуал. пробл. вет. мед. мелких дом. жив. на Сев. Кавказе." Персиановский, 1999. - С.49-50.

88. Ремезов А.П., Неверов В.А., Семенов Н.В. Хламидийные инфекции (клиника, диагностика, лечение). С.-Петербург, 1995. - 43с.

89. Ременцова М.М., Постричева О.В., Рыбалко С.И. Антропозоонозы в звероводческих хозяйствах. Алма-Ата: Наука, 1983.

90. Родина В.П., Бушукина О.С., Сардаева М.П., Рыгалин С.Н. Сравнительные методы лечения парвавирусного энтерита. // Матер. Всероссийскойнауч.-произв. конф. по актуал. пробл. ветерин. и зоотехн. Казань: КГАВМ, 2002. - Ч. 2. - С. 177-180.

91. Рытик П.Г., Бойко В.И., Лямшев В.В., Смирнова Е.И. Выявление орни-тозной инфекции при помощи прямой и ингибиторной реакции связывания комплемента // Здравоохранение Белоруссии. Минск, 1968. - № 2. -С.60-62.

92. Садриев А.Р. Иммунохимический анализ и геноидентификация хламидий. Дисс. канд. биол. наук. Казань, 1999. - 137с.

93. Сайдуллин Т.С. Статистическая обработка результатов серологических исследований // Ветеринария. 1981. - № 7. - С.62-64.

94. Седов Н.К. Получение иммуноспецифических препаратов против псевдомоноза норок. / Сб. науч. тр. ВГНКИ. 1994. - Т.55. - С.95-101.

95. Сельков С.А., Хохлов П.П. Новый способ вьщеления и очистки эстроген-связывающего глобулина из ретроплацентарной сыворотки // Вопросы медицинской химии. № 6. - 1999.

96. Сисягин П.Н.; Реджепова Г.Р.; Зоткин Г.В.; Панитков М.А. Меры борьбы с респираторными болезнями телят. / "Профилактика и лечение заболеваний круп, рогатого скота в условиях Нечерноземья". Горький, 1990. -С. 19-22.

97. Терских И.И. Орнитоз в СССР: Автореф. дис. . докт. мед. наук. М., 1957.

98. Терских И.И. Орнитоз и другие хламидийные инфекции. М.: Медицина, 1979.

99. Терских И.И., Громыко А.И. Вопросы патогенеза и механизм заражения при орнитозе // Вопр. мед. вирусол. Вып.Х. - 1964. - С.71-76.

100. Терских И.И., Курбанов И.А. Об этиологии аборта коров / Акт. вопр. вет. вирусол. М., 1967. - С.28.

101. Тертышник В.И., Настенко В.Д., Антонов B.C. Некоторые биохимические и иммунологические изменения в организме подсвинков при экспериментальном лептоспирозе. / МСХ УССР. Ветеринария. - Вып. 7. -1985.

102. Умнова Н.С., Желудков М.М., Павлова И.П., Шаханина K.JI. Выявление антигенов возбудителя бруцеллеза иммуноферментным методом // Ж. микробиол., эпидем. и иммунобиол. 1987. - № 9. - С.103-107.

103. Фарзалиев И.А., Бабаев Я.Ю. Изменение белковых фракций сыворотки крови овец при экспериментальном инфекционном полиартрите. / Известия АН Азерб. ССР. №5. - 1963.

104. Хаертынов К.С., Герасимов В.В. Антиген для иммуноферментной диагностики вирусных, бактериальных и протозойных инфекций животных и человека. / Ученые записки КГАВМ. Казань, 2003. - Т. 174. - С.66-70.

105. Хазипов Н.З., Тюрикова Р.П., Нуруллин A.A. Метод твердофазного анализа для выявления туберкулезных микобактерий в суспензиях / Диагн., профилакт. и методы борьбы с туберкулезом животных. Казань, 1985. -С.98-101.

106. Хамадеев Р.Х. Хламидиозы рогатого скота и свиней. Автореф. дис. . докт.вет.наук. Казань, 1991. - 40с.

107. Хамадеев Р.Х., Шарафутдинова К.Н., Васлянина В.И. и др. Этиология и специфические меры борьбы с пневмоэнтеритами ягнят / Диагностика, профилактика и меры борьбы с туберкулезом: Сб. науч. тр. КВИ. Казань, 1985. - С.70-73.

108. Хамадеев Р.Х., Равилов А.З., Хусаинов Ф.М. Итоги производственных испытаний вакцины против хламидиоза крупного рогатого скота / Тез.докл. науч. практ. конф. по проблемам ветер, и животновод. Казань, 1994. - С.26-27.

109. Хамадеев Р.Х., Хусаинов Ф.М., Равилов А.З. Разработка и испытание полиштаммовой вакцины против хламидиоза крупного рогатого скота / Тез. докл. науч.-практ. конф. по проблемам ветер, и животноводства. -Казань, 1994. С.28-29.

110. Хамадеев Р.Х., Хусаинов Ф.М., Равилов А.З. Разработка инактивирован-ной эмульсионной вакцины против хламидиоза свиней // Вирусн. болезни с/х животных. Владимир, 1995. - С. 151.

111. Хамадеев Р.Х., Гумеров В.Г., Угрюмова B.C. и др. Разработка ассоциированной вакцины против парагриппа-3, ИРТ и хламидиоза крупного рогатого скота / Тез. докл. респ. науч.-практ. конф. по актуальным вопр. вете-рин. и зоотехнии. Казань, 1996. - С.53.

112. Хамадеев Р.Х., Хусаинов Ф.М. Оценка эффективности полиштаммовой вакцины против хламидиоза крупного рогатого скота в производственных условиях / Тез. докл. респ. науч.-произв. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. Казань, 1996. - С.51.

113. Хамадеев Р.Х., Хусаинов Ф.М., Равилов А.З. Вакцина против хламидиоза крупного рогатого скота // Ветеринария. 1996. - № 6. - С.22-24.

114. Хамадеев Р.Х., Хусаинов Ф.М., Равилов А.З., Магзянов Ф.З., Евстифеев В.В. Профилактика хламидиоза в условиях промышленного свиноводства / Матер. Межд. науч .конф., посвящ.125-летию Казанской вет. академии. -Казань, 1998. 4.1. - С.99-100.

115. Хамадеев Р.Х., Герасимов В.В., Равилов Р.Х., Шамсутдинова Н.В. Тест-система для серологической диагностики хламидиоза у собак и кошек. // Матер. X Московского междун. вет. конгресса. М., 2002. - С. 106-107.

116. Хламидиоз (клиника, диагностика, лечение): Методические рекомендации / Под ред. Серова В.Н., Краснопольского В.И., Делекторского В.В. и др. М.: Патент, 1996. - 22с.

117. Хламидиоз (клиника, диагностика, лечение): Методические рекомендации / Под ред. Серова В.Н., Краснопольского В.И., Делекторского В.В. и др. М.: Патент, 1997. - 23с.

118. Хламидиоз (клиника, диагностика, лечение): Методические рекомендации / Под ред. Серова В.Н., Краснопольского В.И., Делекторского В.В. и др. М.: Патент, 1999. - 22с.

119. Хламидиозы сельскохозяйственных животных / Под ред. Хазипова Н.З. и Равилова А.З. М.: Колос. - 1984. - 223с.

120. Хруленко В.Н., Мельник Н.В., Самуйленко А.Я. Комплекс санитарно-профилактических мероприятий по выявлению хламидиоза человека и животных. // Метер. межд. науч.-практ. конф.: "Науч. основы произв. вет. биол. преп.". 2003. - С.234-235.

121. Хусаинов Ф.М., Хамадеев Р.Х., Равилов А.З., Хисматуллина H.A. Использование иммуноферментного анализа для диагностики хламидиоза свиней / Вирусн. болезни с/ животных. Владимир. 1995. - С.67.

122. Шамсутдинова Н.В. Диагностика и профилактика хламидиоза домашних плотоядных животных. Автореф. дис. . канд. вет. наук. - Казань, 2002. -21с.

123. Шамсутдинова Н.В. Вакцины против хламидиоза собак и кошек. // Матер. Всероссийской науч.-произв. конф. по актуал. пробл. ветерин. и зоотехн. Казань: КГАВМ, 2002. - Ч. 2. - С. 188-190.

124. Шамсутдинова Н.В., Равилов Р.Х. Сравнительная оценка вакцин против хламидиоза собак и кошек. // Матер. X Московского междунар. ветерин. конгресса. М., 2002. - С. 108-109.

125. Шаткин A.A. Гальпровии (хламидии) и вызываемая ими патология // Гальпровиозы (хламидиозы) человека и животных. М., 1979. - Вып.1. -С.5-12.

126. Шаткин A.A. Основные принципы лабораторной диагностики гальпро-виозов (хламидиозов) / Гальпровиозы (хламидиозы) человека и животных. М., 1979. - Вып.1. - С.25-36.

127. Шаткин A.A. Урогенитальные хламидиозы / Контактные инфекции, передающиеся половым путем. К.: Здоровье, 1989. - С.191-214.

128. Шаткин A.A. Хламидии и хламидиозы (вчера, сегодня, завтра). / Актуальные вопросы диагностики и лечения хламидийных инфекций: Материалы. М: Медицина, 1990. - С.3-8.

129. Шаткин A.A., Бескина P.C., Панкратова В.Н. и др. Индикация антигенов гальпровий (хламидий) прямым иммунопероксидазным методом // Ж. Микроб., эпидемиол., иммунол. 1976. - № 9. - С.74-78.

130. Шафикова P.A. Иммунобиологическая характеристика хламидий, усовершенствование методов и средств лабораторной диагностики хламидиозов. Автореф. дис. докт. вет. наук. - Казань, 1991. - 38с.

131. Шафикова P.A., Равилов А.З., Гаффаров Х.З. Новое в диагностике хламидиозного аборта овец / Тез. докл. рес. науч.-произв. конф. Казань, 1989. -С.4.

132. Шахтмейстер И.Я. Рокситромицин (рулид) в терапии урогенитального хламидиоза. // Вестник дерматол. и венерол. №1.-1999. - С. 59.

133. Швырев Н.С. Введение в ветеринарную иммунологию. — 1999. 249с.

134. Шинский Г.Э., Мерзляков В.А., Тимофеева С.Б. Эпидемиологические аспекты хламидийной инфекции. / Вестник дерматологии и венерологии. -№1.-1999.-С. 11-13.

135. Щербань Г.П., ФирсоваТ.Д. Хламидиоз свиней, меры борьбы с ним / Тез. докл. Всесоюзн. науч.-исслед. конф.: Профилакт. желуд.-кишеч. иреспир. болезн. свиней. 1978. - С.53-54.

136. Щербань Н.Ф., Щербань Г.П., Ирский А.Г. Об этиологии вирусного аборта овец / Сб. научн. тр.: Акт. вопр. вет. вирусол. 1967. - № 2. - С.205.

137. Ямникова С.С., Федякина И.Т., Цибезов В.В. Диагностика хламидийной инфекции у мелких домашних животных. // Матер. X Московского меж-дун. вет. конгресса. М., 2002. - С. 89-91.

138. Alexander E.R., Wang S.P., Grayston J.T. Father classification of TRIC agents from ocular trachoma and other sources by the mouse toxicity prevention test // Am. J. Ophthal. 1967. - N63. - P.1469-1478.

139. Allaire A., Nathan L., Martens M.G. Chlamydia trachomatis: Managenet in pregnancy // Infect. Dis. Obstat. And Gynecol. 1995. - V.3. - N2. - P.82-88.

140. Anon S. Vaccinenow available // Colorado Rancher Farmer. 1982. - V.10. -N37.-P.28.

141. Babudieri В. The slide microagglutination tests in the field of Rickettsial and viral serology. Its Advantages and Limitations // Path. Microbiol. 1961. -N24. - P. 11-20.

142. Baker J.A. Comments in feline pneumonitis // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1971. - N214. - P.250-259.

143. Becker J. The Molecular Biology of Trachoma Agent // J. Isr. Med. 1972. -N8.-P.l 134-1137.

144. Bedson S.P Immunological studies with virus of psittacosis // Brit. J. Exp. Path. 1935. - N14. - P.165-170.

145. Bejric A. et al. Prilog vrigednosti septivola u profilaksi enteritisa in lage teladi. // J. Veterinaria (Sarajevo). 1976. - V.25. - №112. - S.201-206.

146. Belden E.L., Mckercher D.G. Passive hemagglutination test for bovine chlamydial abortion // Infec. and Immun. 1973. - 7. #2.-P. 141-146.

147. Blanco L.A. Les neo-rickettsiosis animal en Espana // Revista del patronato de biologia animal. 1968. - N3-4. - P.5-22.

148. Bowie W.R., Lee C.K. Prediction of efficacy of antimicrobial agents in treatment of infection due to Chi. Trachomatis // J. Infect. Dis. 1978. - V.138. -N3. -P.655-659.

149. Byrne C.J., Moulder I.W. Parasite specified phagocytosis of Chi. psittaci and Chi. trachomatis by L and Hela cells // J. Infect. And Immun. — 1978. - N19. -P.598-606.

150. Caldwell H.D., Kromhout J., Schachter J. Purification and partial characterization of the major outer membrane protein of Chi. trachomatis // Infect. Immunol.-1981.-N31.-P. 1161-1176.

151. Caldwell H.D., Judd R.C. Structural analysis of chlamydial major outer membrane proteins // Infect. Immunol. 1982. - N38 - P.960-968.

152. Calzolari E., Ciampaglia Q., Steffe M. et al. The efficacy of clarithromycin (A-56268 Te-031) in the treatment of genital chlamydial infection. // J. Drugs. Exp. Clin. Res. 1992. — V. 18. №10. - P.427-430.

153. Cello R.M. Microbiological and immunologic aspects of feline pneumomitis // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1971. -N158. - P.932-938

154. Cevenini R., Rumpianesi F., Donati M., Sarov I, A rapid immunoperoxidase assay for the detection of specific IgG antibodies to Chlamydia trachomatis //J. Clin. Pathol. 1983. - 36, #3.-P.353-356.

155. Chandler E.A., Gaskell C.J., Gaskell R.M. Feline medicine and therapeutics. -UK: "Blackwell Science Ltd", 1994. 696p.

156. Charton A. Chlamydioses des ruminants (bovine, ovine, caprine): etudes experimentales. 2. Composition polypeptidique des corps elementaires de soches de diverses origines // Bull. Acad. Vet. Fr. 1976. - V.49. - N4. - P.401-408.

157. Chassey D., Davies P., Dawson M. Immunoperoxidase detection of chlamydia ovis in experimentally infected cell culture // Brit. Vet. J. 1981. — V. 137 -N6. -P.634-638.

158. Chopra I., Storey C., Falla T.J., Pearce J.H. Antibiotics, peptidoglycan synthesis and genomics: the chlamydial anomaly revisited. // J. Microbiology. — 1998. V.144. - P. 2673-2678.

159. Christensen P.M., Nolkert M. Two complement fixing antigens from infected yolk sacs. II. The nature of the virus antigen and its relation to phosphatide antigen // Acta Path. Microbiol. Scand. 1955. - V.37. - N.3. - P.219-224.

160. Colon J.I. The role of folic acid in the metabolism of members of the psittacosis group of microorganisms // Ann. N.Y. Acad. Sc. 1962. -N98. - P.243.

161. De Gregorio R.M. Recent developments in the use of immunoglobulins for young animals / Proc. Cornell nutrition conf. for feed manufactures. Ithaca (N.Y.), 1991.-P. 102-108.

162. Dhingra P.N., Agarwal L.P., Mahajan V.M. et al. Chlamydia group antigen // Zbl. Vet.Med. -1981. B.28. - N4. - P.336-340.

163. Dhir S.P., Kenny G.E., Grayston J.T. Characterization of the group antigen of Chi. trachomatis // Am. Soc. Microbiol. 1971. - V.4. - N6. - P.725-730.

164. Dhir S.P., Hakomori S., Kenny G.E. et al. Immunochemical studies on chlamydial group antigen // J. Immunol. 1972. -N109. - P.l 16-122.

165. Duggan M.A., Pomponi C., Kay D., Robboy S J. Infantile chlamydial conjunc-ticitis A comparison of Papanicolaou Giemsa and immunoperoxidase staining methods // Acta cytol. 1986. -30, #4. - P.341-346.

166. Dwyer R.St. C. Chlamydial infection. Results of micro-immunofluorescence • tests for the detection of type-specific antibody in certain chlamydial infections. // Brit. J. Vener. Dis. 1972. - V.48. - P. 452-459.

167. Egerman R.S. The tetracyclines. // Obstet. Gynecol. Clin. North. Am. 1992. -V.19. -№3. P.551-561.

168. Ellens D.J. De Leeuw P.W. Enzyme-liked immunosorbent assay for diagnosis of rotavirus infections in calves. // J. Clin Microbiol. V.6. - 1977. — P.530-532.

169. Fames K., Richard D.F., Groft G.F., Johnson F.B. Evaluation of a cell culture-immunoperoxidase stain method for the diagnosis of chlamydia trachomatis infections // Abstr. Annu Veet Amer. Soc. Microbiol., 1986,- Washington D.C., 1986.

170. Frazer G., Berman D.T. Typospecific antigens in the PLV group of organisms // J. Bact. 1965. - N89. - P.943-948.

171. Friis R.R. Infection of L cells and Chi. psittaci, entry of the parasite and host responses to its development // J. Bacteriol. 1972. - V.l 10. - P.706-721.

172. Fukuchi H., Ogawa H., Ninamoto N. et al. Seroepidemiological surveillance of Chi. psittaci in cats and dogs in Japan // Vet.Res. 1985. - V.l 17. - N19. -P.503-504.

173. Гескелл P.M., Беннет М. Справочник по инфекционным болезням собак и кошек, (пер. с англ.). М. ¡"Аквариум ЛТД", 1999 - 224с.

174. Giauffret A., Russo P. Enquet serologique sur la chlamydiose des petits ruminants. Etude de la reaction de fixation du complement // Ree. Med. Vet. -1976. V.152. - N9. - P.535-541.

175. Guber F., Tomic D., Brajac I. Comparative trial with azitromycin and doxycy-clin in gonococcal and chlamydial infections in females // G. Ital. Dermatol, e Veneral. 1996. - V. 131. - N6. - P.403-406.

176. Hackstandt T. Identification and properties of chlamydial polypeptides that bind eucaryotic cell surface components // J. Bacteriol. 1986. - N165. - P.13-20.

177. Hewinson R.G., Griffiths P.C., Bevan B.J. et al. Detection of Chi. psittaci DNA in avian clinical samples by polymerase chain reaction // Vet. Microbiol. — 1997. V.54. - N2. - P.155-166.

178. Higachi N. Electron microscopic studies on the trachoma virus and psittacosis virus in cellcultures // Ex. Mol. Pathol. 1965. - N4. - P.24-29.

179. Jenkin H.M., Ross H.R., Moulder J.W. Spacies-specifie antigens from the cell walls of the agents of meningopneumonitis and foline pneumonitis //J .Immunol.-1961 .-86.-P. 123-127.

180. Kaleta E.F. Aktuelle Fragen der Diagnose und Bekämpfung der Psittakose // Tierarztl. Umsch. 1997. Jg.52. -Nl. - S.36-44.

181. Kuo C.C., Caldwell H.D., Wang S.P., Grayston J.T. Nongonococcal Urethritis and Related Infections.-Washington, D.C., 1977.-P.176-185.

182. Kuo C.C., Chi E.Y. Ultrastructural studies of Chi. trachomatis surface antigens by immunogold staining with monoclonal antibodies // Infect, and Immunol. -1987. V.55. - N5. - P.l 324-1328.

183. Lewis V.J., Thacker W.L., Engelman H.M. Indirect Hemagglutination Test for Chlamydial antibodies //App.Microbiol.-1972. -24, # 1 .-P.22-252.

184. Maclean I. W., Peelino R.W., Brunham R.C. Characterization of Chi. trachomatis antigens with monoclonal antibodies // Can. J. Microbiol. 1988. - N34. -P.141-147.

185. Maniré C.P., Tamura A. Preparation and chemical composition of the cell walls of nature infections dense forms of meningopneumonitis organisms // J. Bact. 1967. - V.94. - N4. - P.l 178-1183.

186. Martin D.H. Chlamydial infection. // J. Med Clin. North. Am. 1990. - V.3. -№6. -P.1367-1387.

187. Мартинов С., Попов Г. Вакцина против хламидуален абортус Kaj овците // Македон. Вет. Прегл. 1993. Г.22. - Бр.1/2. - С.25-33.

188. Me Ewen A.D., Foggie A. Enzootic abortion in ewes: Comparative studies of different vaccines // Am. J. Vet. Res. 1954. - V.66. - N28. - P.393-397.

189. Mc Ewen A.D., Foggie A. Enzootic abortion in ewes: Prolonged immunity following the injection of adjuvant vaccine // Am. J. Vet. Res. 1956. — V.68. - N40. - P.686-690.

190. Mendlowski В., Segre D. Purification of the virus ovine abortion and its use in agglutination test // Am. J. Vet. Res. 1963. - N25. - P.627-645.

191. Meyer K.F., Eddie B. The value of the complement fixation test in the diagnosis of psittacosis // J. Infect Dis. 1939. - N11. - P.225-233.

192. Mitscherlich E. Die Bekampfung des Virusabort der Schofes // Berl. und Munch. Tierarztl. Wochen. 1965. - B.78. - N5. - S.81.

193. Moorthy A.R.S., Spradbrow P.B. Chi. psittaci infection of horses with respiratory disease // Equine Vet. J. 1978. - V.10. -Nl. - P.38-42.

194. Morter R. Chlamydial diseases // Mod. Vet. Pract. 1981. - V.62. - N6. -P.467-468.

195. Moulder J.W. Биохимия внутриклеточного паразитизма. M.: Мир, 1965. — 197с.

196. Огнянов Д., Симерджиев Б., Макавеева-Симонова Е. и др. Исследования на комплементсвъращи противотела срещу неориккетсии различии видове домашни животни // Вет. Мед. Науки. 1965. - Т.П. - N4. - С.475-481.

197. Огнянов Д. Неориккетсиозите катозоонози // Вет. Сб. 1976. - Т.74. - N9. -С.12-15.

198. Oriel J.P. Treatment of nongonococcal urethritis / Charman's report and discussion: Nongonococcal urethritis and relat. infect. Washington, D.C., 1977. -P.38-48.

199. Page L.A. Stimulation of cell mediated immunity to Chlamydiosis in Turkeys by inoculation of Chlamydial Bacterin // Am. J. Vet. Res. 1978. - V,39. -P.473-480. '

200. Perez-Martinez J.A., Storz I. Chlamydial infection in cattle. Р.17/ Mod. Vet. Pract. 1985. - V.66. - N8. - P.517-522.

201. Perez-Martinez J.A., Storz I. Chlamydial infection in cattle. P.2 // Mod. Vet. Pract. 1985. - V.66. - N9. - P.603-608.

202. Petersen E.E. Chlamydien infektionen // MTA. 1996. - V.ll. - N5. -S.354,356-358,360,362.

203. Piriano F.F., Abel C. Plague assay for psittacosis virus in monolayers of chick embryo fibroblasts // J. Bacteriol. 1964. - N87. - P.1503-1511.

204. Popovici V. Contributions to the Epizootology of virus abortion in ewes // Ins. Cer. Bioprep. Pasteur. 1966. - N1. - P.29-39.

205. Popovici V., Sotirin E. Cercetari serologica a supra avortului virotic al oilor // Inst. Patol. si Gigiena. Anim. 1963. -N12. - P.237-243.

206. Reed D.K., Lincoln S.D., Kwaplan R.P., et al. Comparison of antigenic structure and pathogenicity of bovine intestinal Chlamydia isolate with an agent of epizootic bovine // Am. J. Vet. Res. 1975. - V.36. - N8. - P.l 141-1143.

207. Sarateanu D., Surdan C., Sorodoc G. Izolare unui inframicrobe dintrum facar de avorta enzootic ovin / Studii si cercetarie inframicrobiol. Acad. RPR, 1961. -N1.-P.95-103.

208. Sarov J., Becker Y. Trachoma agent DNA // J. Mol. Biol. 1969. - N42. -P.581-584.

209. Schachter J., Storz J., Tarizzo M.L., Bodel K. Chlamydiae as agents of human and animal diseases // Bull. Wrld. Hlth. Org. 1973. - V.43. -P.443-449.

210. Schachter J., Banks J., Sugg N. et al. . Serotyping of Chlamydia: isolates of bovine origin // Infect, and Immunol. 1975. - V.U. - N5. - P.905-907.

211. Schlossberger H., Kolle W., Hetsch H. Experimentelle Bakteriologie und Infektionskrankheiten-München, 1952.

212. Schmeer N., Adami M., Dopfer B. u.a. Zur humoralen Immunantwort von Ziegen, Kaninchen und Meerschweinchen hach der Vakzination mit einem Q-Fieber-Impfstoff // Berl. Munch. Tierarz. Wschr. 1985. - N98. - S.20-24.

213. Schmeer N., Krauss H., Apel J. et al. Analysis of caprine IgGl and IgG2 subclass responses to Chi. psittaci infection and vaccination // Vet. Microbiol. -1987. V.14. - N2. - P. 125-135.

214. Seffner W. Erffanrung in zum virusabort der Diagnose mittels komplement-bingungsreaktion // // Berl. Munch. Tierarztl. Wschr. 1960. - V.73. - N15. -S.284-287.

215. Seki C. et al. Monoclonal antibodies to Chi. psittaci: characteristics and antigenic analysis. // J. Jap. Vet. Sc. 1998. - V50. - N2. - P.383-393.

216. Skulnick M. Use of the PCR for the detection of Chlamydia trachomatis from endocervical and urin spesimen in an asimtomatic low-prevalence population of women. // J. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 1994. - 20(4). - P. 195-204.

217. Stephens R.S., Kuo C.C. Chi. trachomatis species-specific epitope detected on mouse biovar outer membrane protein // Infect. Immunol. 1984. - N45. -P.790-791.

218. Storz J- Superinfection of pregnant ewes latently infected with a psittacosis lymphogranuloma agent // Cornell Vet. 1963. - N53. - P.469-480.

219. Storz J. Chlamydia and chlamydia-included diseases. Illinois, USA, 1971.

220. Studdert M.J., Mc Kercher D. Bedsonia abortion of sheep. III. Immunological studies // Res. Vet. Sc. 1968. - N9. - P.331-336.

221. Terzin A.L., Matuka S., Fornazaric M.R., HXaca D.M. Preparation of group specific Bedsonia antigens for use in complement-fixation reaction // Acta Virol. 1961. - N5.-P.78-83.

222. Varju L. A komplementkotesi proba un LBCF modszere tuljesitokepessegene osszuhason lito vizsdalata // Magyar allatory Lapja. 1981. - V.36. - N5. -S.325-327.

223. Vitu C., Russo P., Giauffret A. Application du test ELISA a la serologie des chlamydioses des ovins et des caprine: Edu de comparative avec la reaction de fixation du complement // Bull. Lab. Vet. P 1984. - N13. - P.55-69.

224. Wang S.P., Grayston J.T. Trachoma and related disorders coused by chlamydial agents / Amsterdam, 1971. P.305-321.

225. Weiss E.J. Investigation of the stability of the trachoma agent // J. Infect. Dis. -1950. — V.87. P.249-263.

226. Wilson M.K. Isolation of PLV group virus from the faeces of clinically normal cattle in Britain // Vet. Rec. 1968. - V.74. - N49. - P.1430.

Информация о работе

Исхаков, Гали Мухамедович
кандидата ветеринарных наук
Казань, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Разработка иммуноглобулина против хламидиоза плотоядных животных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы