Разработка и совершенствование биотехнологических процессов при промышленном производстве биопрепаратов

Попова, Вера Михайловна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка и совершенствование биотехнологических процессов при промышленном производстве биопрепаратов
ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Разработка и совершенствование биотехнологических процессов при промышленном производстве биопрепаратов"

На правах рукописи

005006524

ПОПОВА Вера Михайловна

РАЗРАБОТКА И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ПРИ ПРОМЫШЛЕННОМ ПРОИЗВОДСТВЕ БИОПРЕПАРАТОВ

03.01.06-биотехнология (в том числе бионаногехнологии)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

- 8 ДЕК 2011

Щелково - 2011

005006524

Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный консультант: доктор биологических наук

Нежута Александр Александрович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор,

Заслуженный ветеринарный врач РФ Мельник Николай Васильевич

доктор ветеринарных наук, профессор Владимир Викторович Субботин

доктор биологических наук Владимир Егорович Козлов

Ведущая организация - ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»

Защита состоится 23 декабря 2011 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.069.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» Россельхозакадемии по адресу: 141142, Московская область, Щелковский район, пос. Биокомбината, д. 17, ВНИТИБП; тел/факс: (496) 56-732-63; e-mail: vnitibp@mail.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» (ВНИТИБП).

Автореферат разослан 22 ноября 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук Фролов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Развитие биотехнологии обусловлено общим прогрессом науки и техники. Совершенствование промышленной технологии производства биопрепаратов наиболее успешно осуществляется при совместном решении биотехнологических и технических вопросов. Разработка биотехнологических процессов при культивировании клеток, вирусов и бактерий, выделении энзимов является актуальной проблемой при получении эффективных биопрепаратов (Грачев В.М., 1985; Спиер P.E. и Гриффите Дж„ 1989; Блинов Н.П., 1995; Дьяконов Л.П., 2000; Хапчаев Ю.Х., 2003; Жарникова И.В., 2004; Беклемишев А.Б., 2004; Албулов А.И., 2004; Самуйленко А.Я., Рубан Е.А., 2005; Соловьев Б.В., 2005; Тихонов И.В., 2005; Гуславский А.И., 2007; Жданова H.A., 2009).

Разработка современных технологий в производстве биопрепаратов требует переоснащения оборудования, использования высокоэффективных методов и перспективных материалов, что обеспечит выпуск конкурентоспособной продукции.

Одной из важнейших задач производства биопрепаратов является совершенствование методов культивирования (клеток, вирусов и бактерий) с использованием отечественного оборудования и учетом качественных характеристик препарата. Способ управляемого глубинного культивирования нашел широкое применение в производстве бактерийных препаратов, который за короткое время позволяет получить максимальное количество бактериальной массы. Одной из проблем при культивировании клеток животных и вирусов является поддержание жизнеспособности клеток. Наряду с распространенными стационарным и динамичным (роллерным) способами культивирования клеток и вирусов суспензионное культивирование привлекает внимание исследователей при изготовлении вакцин и диагностических препаратов для максимального накопления клеток и получения

вируссодержащего материала (Новохатский A.C., 1979; Лукина В.А., Слепенко Т.Б., Сенько Е.Ф., 1981; Рубан Е.А., Соловьев Б.В., Самуйленко А .Я, 2005). Суспензионный и псевдосуспензионный (на микроносителях) методы культивирования микроорганизмов создают равноценные условия по всему объему сосуда, позволяют контролировать и регулировать необходимые параметры (pH, рОг, еН, t), осуществлять контроль роста клеток, исключать возможность контаминации, способствовать экономии питательной среды (Сергеев В.А., 1976; Голубев Д.Б., Сомнина A.A., Медведева М.Н., 1976; Осидзе Д.Ф., 1976; Новохатский A.C., 1979; Тарасов В.П., 1990; Гаврилюк Б.К., Сафронов В.П., 1981; Ночевный В.Т., 1994; Дьяконов Л.П., Ситьков, 2000; В.И. Хапчаев Ю.Х., 2003; Тихонов И.В., Рубан Е.А., Самуйленко А.Я, 2005; Жданова H.A., 2009). Осуществление крупномасштабного культивирования клеток в суспензии и на микроносителях в реакторах специального назначения отечественного производства связано со сложностью обеспечения стерильности процесса. Исключение контаминации культуральной жидкости посторонней микрофлорой и попадания продуктов биосинтеза в окружающую среду, поддержание, контроль и регулирование процессом являются важнейшими факторами.

В производстве вирусных вакцин при дезинтеграции клеток используют в основном импортный протеолитический ферментный препарат трипсин. Совершенствование технологии с целью получения фермента высокой активности сопряжено с использованием методов очистки и сушки препарата, что позволит создать конкурентоспособную продукцию с заданными свойствами и провести импортзамещение.

Применение мембранных способов очистки, разделения и концентрирования позволяет создать экологически безопасные, энергосберегающие технологические процессы (Фридлянский И.И., 1976; Дытнерский Ю.И.; 1986, Платэ H.A., 1999; Тимашов С.Ф., 2000; Шапошник В.А., 2001; Дубяга В.П., Бесфамильный И.Б., 2005; Свитцев A.A., 2007; Гуславский А.И., 2007; Андреева И.С., 2009).

Таким образом, совершенствование технологии культивирования в биореакторах вирусных и бактерийных препаратов, получение отечественного препарата трипсина, разработка различных способов очистки, разделения, концентрирования биологических жидкостей с учетом современных достижений биотехнологии (в настоящее время) являются актуальными.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является разработка и совершенствование биотехнологических процессов в производстве ферментов и биопрепаратов, при получении трипсина и культивировании клеток, при очистке и фильтровании биологических жидкостей с использованием современного оборудования и материалов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- усовершенствовать технологию промышленного производства трипсина;

- разработать способ иммобилизации трипсина на полимерном носителе и получения теплостойких композиций; определить токсичность полимерных материалов с помощью пастерелл и культур клеток;

- усовершенствовать способы культивирования клеток животных при получении противовирусных препаратов с применением современного оборудования и материалов;

- усовершенствовать способ глубинного культивирования золотистого стафилококка St. aureus для получения биологически активного протеина А;

усовершенствовать технологию различных методов очистки биологических растворов при микрофильтрации, ультрафильтрации и электродиализе:

определить область применения безасбестовых материалов и мембранных фильтров для предварительной, тонкой и стерилизующей фильтрации, при разделении и концентрировании жидкостей с использованием отечественного оборудования;

разработать технологию получения очищенного альбумина, применяемого в качестве компонента питательной среды при культивировании лептоспир с помощью ультрафильтрации и электродиализа.

Научная новизна. - Усовершенствована технология производства трипсина с применением способов центрифугирования при разделении суспензии после экстрагирования и высаливания фермента и последующего распылительного или сублимационного высушивания, обеспечивающих высокое качество препарата, не требующих его дополнительного измельчения и просеивания препарата.

- Разработана промышленная технологическая линия производства трипсина с использованием современного оборудования. Технология испытана в опытно-промышленных условиях, получен патент РФ № 2403285 от 04.06.2009 "Способ получения трипсина" (оп. 10.11. 2010 бюл. № 31. - С. 743).

Усовершенствован способ очистки и концентрирования трипсина методом ультрафильтрации через разделительные модули на полых волокнах с обеспечением подачи жидкости центробежным насосом.

- Разработан способ иммобилизации протеолитического фермента трипсина, сохраняющего свойства при длительном хранении и обладающего активностью на уровне контроля, обеспечивающего получение жизнеспособных клеток, более высокий выход при культивировании в сравнении с нативной формой.

Определены технологические параметры культивирования перевиваемых линий клеток ПТ-80 и ВНК-21/13 в суспензии и псевдосуспензии на микроносителях в биореакторах с магнитным приводом и аэрацией культуры.

- Разработан модуль технологической обвязки для биореакторов (0,005; 0,025; 0,1; 0,25м3). Отработана технология культивирования перевиваемых клеток в биореакторах с использованием специализированного отечественного оборудования, оснащенного фильтрами тонкой очистки воздуха и пара с фильтрующими элементами из пористого титана; запорной малогабаритной и регулирующей арматурой, обеспечивающей осуществление технологических операций в автоматическом режиме.

- Разработаны полимерные композиции, которые применены в биологическом оборудовании в качестве конструкционного материала, стойкие к биологическим и химическим средам, температурным факторам (авторские свидетельства: № 384361 бюл. - 1973. - № 43. - С.167; № 701129 бюл. - 1979. -№ 44. - С.193; № 770126 бюл. - 1980. - № 37. - С.308; № 783311бюл. - 1980. -№44.-С. 110).

- Впервые в отечественной ветеринарной практике разработана технология и использован метод обессоливания альбумина с помощью электродиализа для повышения эффективности процесса очистки растворов от солей.

Практическая значимость. На основании проведенных исследований по разработке и усовершенствованию технологических процессов получения ферментов и биопрепаратов разработана нормативная и технологическая документация.

"Технологический регламент производства трипсина сухого для вирусологических целей", утвержденный 01.06.1995 г., директором ВГНКИ и директором ГНУ ВНИТИБП.

"Технические условия ТУ 9358.013.00008064-96 "Трипсин сухой для вирусологических целей", утвержденные 04.03.1996 г., директором ВГНКИ и согласованные 07.03. 1996 г. Департаментом ветеринарии МСХ РФ.

"Наставление по применению трипсина сухого для вирусологических целей", утвержденное 04. 03. 1996 г. № 13-6-2/540, Департаментом ветеринарии МСХ РФ.

Разработана технологическая схема производства трипсина. Технология изготовления трипсина освоена в ГНУ ВНИТИБП и НПО "Синтез" (г. Курган), на Алма-Атинском и Омском биокомбинатах. Опытно-промышленные серии трипсина использованы для получения первичных и перевиваемых культур клеток при производстве противовирусных вакцин на Курской и Армавирской биофабриках, Омском и Алма-Атинском биокомбинатах.

Определены условия культивирования клеток в биореакторах, разработан Технологический регламент "Культивирование клеток и вирусов с использованием экспериментальных образцов оборудования", утвержденный директором ГНУ ВНИТИБП 28.12.1985 г. Разработана технологическая схема процесса культивирования клеток и вирусов в аппаратах (реакторах). Технология культивирования клеток и вирусов использована в производстве противовирусных вакцин и диагностических препаратов (ИРТ, ПГ-3, РС, ВД-БС, АВИ, бешенства, БМ).

- Разработаны и предложены в качестве конструкционного материала полимерные композиции, стойкие к биологическим и химическим средам, температурным факторам. Во ВНИТИБП организован участок по изготовлению полимерных материалов, предложен комплект пресс-форм для изделий биотехнологического назначения.

переходы, процессов микрофильтрации и ультрафильтрации; усовершенствован метод очистки альбумина с помощью электродиализа при получении питательной среды для культивирования лептоспир в промышленных условиях.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

- технологические процессы изготовления трипсина;

- разработка способа иммобилизации трипсина на полимерном носителе и получения теплостойких композиций; определение токсичности полимерных материалов с помощью пастерелл и культур клеток;

усовершенствование глубинного культивирования золотистого стафилококка St. aureus для получения биологически активного протеина А;

- усовершенствование предварительной, тонкой и стерилизующей фильтрации биологических растворов (питательных сред, раствора трипсина, сыворотки крови и других) с помощью фильтровальных материалов на безасбестовой основе;

- совершенствование процессов микрофильтрации и ультрафильтрации в биопромышленности с использованием современных фильтровальных материалов и оборудования;

- технология обессоливания альбумина с помощью электродиализа в условиях промышленного производства.

Личный вклад автора заключается в формулировании проблемы, постановке целей и задач исследований, решении поставленных задач, планировании эксперимента и выполнении исследований, обобщении результатов и использовании их в практике.

Апробация работы. Материалы исследований доложены и обсуждены:

- на 23 Всесоюзных, Республиканских, Международных и Всероссийских совещаниях, семинарах, конференциях, посвященных научным и практическим проблемам технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов и биотехнологии, проводившихся в Москве, Владимире, Щелкове, Волжске, Курске, Сергиев-Посаде, Покрове, Краснодаре, (1981-2009 гг.);

- на секции "Ветеринарная биотехнология" (2011 г).

Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 72 научных работах, в том числе 12 в рецензируемых изданиях, входящих в перечень ВАК Минобрнауки РФ для публикации материалов докторской диссертации. Получено 6 авторских свидетельства и патентов.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 292 страницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы, результаты, выводы и практические предложения, приложения, содержит 40 таблиц и 52 рисунка. Список литературы включает 457 наименований, из которых 358 отечественных и 99 зарубежных. В приложении представлены копии документов, подтверждающие достоверность работы, ее научную и практическую значимость.

Автор выражает признательность академику РАСХН А.Я. Самуйленко за научно-методическую помощь в организации и проведении исследований.

Искреннюю благодарность за руководство НИР и ОКР автор приносит А.И. Гуславскому, Е.Э. Школьникову, В.П. Гайденко, Б.В. Соловьеву, И.Н. Матвеевой, а также [В.А. Лукиной|, ¡B.C. Иванову!, [Е.А. Рубану.

Практическую и консультативную помощь в выполнении некоторых разделов диссертации оказывали сотрудники института Н.И. Гвозденко, Н.М. Пухова, JI.A. Скороходова, В.Н. Егорова, A.A. Раевский, А.А.Потемкин, В.Н. Качалов, Е.И. Ярыгина, Е.П. Сапегина, Ю.Д. Фролов, В.Н. Еремец, JI.B. Аписимова, С.М. Панферова, Н.И. Назаркина, И.Б. Пивикова, А.Б Абрамов, В.Е. Васько, М.А. Фролова, а также сотрудники ВГНКИ В.Т. Ночевный, H.A. Башашкина, Ставропольской биофабрики - А.П. Сурмило, НПО порошковой металлургии - М.П. Анащенко, ВНИИ ЦБП - A.B. Канарский.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена в 1980-2010 гг. согласно планам НИР и ОКР ГНУ ВНИТИБП в соответствии с отраслевыми научными программами, в рамках Российской научно-технической программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации.

Экспериментальные исследования осуществляли в лабораториях и отделах института, во Всероссийском государственном центре качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ВГНКИ). Практическую реализацию научно-исследовательских разработок осуществляли на Щелковском, Омском и Алма-Атинском биокомбинатах, Ставропольской, Курской, Краснодарской биофабриках, НПО "Синтез" (г. Курган).

2.1.1. Материалы

Питательные среды и растворы. В работе использовали культуральные среды Игла, 199, гидролизат лактальбумина; растворы Хенкса и Эрла; трипсин импортного ("Difko", "Ferak", "Merk") и отечественного производства ТУ 9358013.00008064-96; сыворотки крупного рогатого скота (КРС), овец; защитные среды: сахарозо-альбуминовую (СФГА) и сахарозо-желатозную

(СФГЖ); разбавитель вируса и раствор концентрата разбавителя для противовирусных вакцин (ТУ 9384-001-93840700-00).

Для изготовления вакцины против лептоспироза животных применяли питательную среду ГНКИ, в которой использовали альбуминовую фракцию сыворотки крови овец; для культивирования Staphylococcus aureus - бульон Хоттингера и мясопептонный бульон (МПБ).

Культуры клеток. В экспериментах использовали первичные культуры клеток (ПКК) различного происхождения - почек крольчат (ПК), щенков (ГТТЦ), кошек (ПКШ), эмбрионов коров (ПЭК), фибробластов эмбрионов кур (ФЭК) и перепелов (ФЭП); а также перевиваемые линии клеток: почки сирийского хомячка (ВНК-21), почки теленка (ПТ-80), почки крупного рогатого скота (MDBK), почки собаки (MDCK), почки свиньи (СПЭВ) (Ночевный В.Т., Башашкина Н.А., 1996-1999).

В качестве доноров были взяты: 1-4 - недельные крольчата, 1-2 -месячные щенки и котята, 3-9 - месячные эмбрионы коров, 6-10 - дневные перепелиные и 6-14 - дневные куриные эмбрионы.

Вирусы. Оценивали чувствительность тест-культур клеток к вирусам болезни Ауески (ВБА) штамма БУК-682, парагриппа -3 (ПГ-3) - штамма МВА 1/44, инфекционного ринотрахеита (ИРТ) крупного рогатого скота - штамма МВА 1/80, энтерита собак (ПВЭС) - штамма С и Д, болезни Марека, вируса герпеса индеек (ВГИ) - штамма ФС-126, инфекционной бурсальной болезни (ИББ) птиц - штамма "Био-92", чумы плотоядных - штамма (ЭПМ). Работы проводилась совместно с ВГНКИ.

Staphylococcus aureus (St. aureus). Штамм золотистого стафилококка А-676 использовали для выделения протеина А (Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. ДА. Тарасевича).

Микрофильтрационные мембраны "Владипор", изготовленные из ацетата целлюлозы и регенерированной целлюлозы - МФА-А с размером пор

0,2-0,5 мкм, МФА-МА (0,2-0,5 мкм) и МФЦ (0,15; 0,2; 0,45 мкм), а также капроновые мембраны "Мифил" производства АН Белорусской ССР (г. Минск) и г. Таллин (5,0; 3,0 и 0,2 мкм), мембраны фирм "Millipor" и "Pall" (0,45 и 0,22 мкм и микропористые ядерные фильтры (от 0,03 до 8 мкм) использовали для очистки биологических жидкостей и растворов.

Ультрафильтрационные мембраны УАМ-50, 100, 150, 200, 300, 500 с диаметром пор - 0,005; 0,01; 0,015; 0,02; 0,03; 0,05 мкм (ацетат целлюлозы) и полупроницаемые мембраны в виде полых волокон типа ВПУ-5ПА, ВПУ-15ПА, ВПУ-50ПА, ВПУ-ЮОПА из полиамида с пределом задержания по белку 5, 15, 50, 100 кДа применяли для очистки и концентрирования биологически активных веществ.

Глубинные фильтры. При фильтровании биологических жидкостей применяли материалы на безасбестовой основе в виде пластин и картона: -фильтр-пластины - ФП (предварительной очистки), ФТ (тонкой очистки), ФС (стерилизующие), ФД (для удаления пирогенов) и картон КФМП и КФБЖ, разработанные по нашим техническим требованиям Марийским филиалом Волжского научно-исследовательского института целлюлозно-бумажной промышленности для медико-биологических целей (Канарский A.B., 2000).

Ионообменные мембраны. В работе применяли катионитовые мембраны МК-40 и анионитовые мембраны МА-41 из полиэтилена и ионитов.

Полимерные композиции. Сополимеры винилиденфторида и гексафторпропилена (фторкаучуки СКФ-26) и винилиденфторида и перфторметилвинилового эфира (СКФ-260) использовали для получения полимерных композиций и при иммобилизации трипсина; и кремнийорганические фторсилоксановые каучуки СКТФТ-100, СКТФТ-50.

2.1.2. Оборудование

Оборудование для культивирования клеток, вирусов, микроорганизмов и ферментов. Для получения первичных культур клеток и

выращивания вирусов использовали роллерные аппараты. Монослойное культивирование клеток осуществляли на многотрубчатом культиваторе V=0,006 м3 в отделе вирусологии и культур клеток. Культивирование клеток и вирусов в суспензии и на микроносителях осуществляли в спиннере объемом 0,001 м3 и ферментерах (биореакторах) объемом 0,005; 0,025; 0,1; 0,25 м3, разработанных ГНУ ВНИТИБП и Иркутским НИИхиммашем, выполненных из нержавеющей стали, оснащенных магнитным приводом /Гуславский А.И./, датчиками температуры, рН, еН, р02 /Рубан Е.А., Раевский А.А., Абрамов А.Б., Потемкин А. А./.

В технологической обвязке использовали запорную, запорно-регулирующую арматуру (малогабаритные вентили сильфонные проходные МВСП и угловые вентили МВСУ, разработанные ЦКБарматуростроения; электроисполнительные механизмы ЭИМ и запорные клапаны с электромагнитным приводом ПТ 26525, разработанные ВНИИэлектропривод и ЦКБарматуры по технико-экономическим требованиям ГНУ ВНИТИБП и изготовленные ПО "Пензтяжпромарматура"). Для очистки, стерилизации и обезвреживания отработанных газов использовали фильтры предварительной и тонкой очистки с фильтроэлементами диаметром 46; 75; 90; 120 мм из фторопласта - 4 и титана (с диаметром пор 12-20 мкм и 2-6 мкм).

Глубинное культивирование штамма St. aureus, применяемого для выделения протеина А, проводили в лабораторном биореакторе АК-210 (объемом 0,01м3), с автоматическим контролем и регулированием температуры, скорости перемешивания, аэрации, рН.

При получении трипсина использовали следующее оборудование: электромясорубку МП, эмалированные и нержавеющие реакторы (объемом 0,060-1,Ом3), нутч-фильтры, центрифуги (осадительно-фильтрующие ОФСстО,1 и 0,2 м3/час; суперцентрифугу ОТР-Ю1К; шнековую ОГШ), саморазгружающиеся и камерные сепараторы. Сушку фермента проводили на

распылительных установках РСЦ 1,2/09 БК РСЦ-10 и "Минор" фирмы "Ниро-Атомайзер" и сублимационных - ТГ-15, ТГ-50.

Оборудование для фильтрования и разделения. Для тонкого и стерилизующего фильтрования водных растворов, биологических жидкостей, питательных сред, ферментных растворов с помощью мембранных фильтров использовали фильтродержатели диаметром 90, 142, 293 мм и мультиплетную установку УСФ-0,28/7. Мембранное разделение различных растворов осуществляли на фильтрационных ячейках ФМ-02 объемом 10, 200, 1000 мл с магнитной мешалкой, тонкоканальной установке ФТ-01, опытной ультрафильтрационной установке "фильтр-пресс" УФ-5, и ультрафильтрационных разделительных модулях на полых волокнах фирмы Мем-Текс (РФ г. Мытищи): УВА-2-5ПА, УВА-2-15ПА, УВА-2-50ПА, УВА-2-100ПА и модифицированной установке УФУ с центробежным насосом марки ЦНГ-0,5/10. Электродиализатор типа ЭК-04-74 с ионообменными мембранами (катионитовыми МК-40 и анионитовыми МА-41) использовали при обессоливании альбумина в производственных условиях. При электродиализе происходит перенос ионов из одного раствора в другой через ионообменные мембраны. Движущей силой процесса является внешнее электрическое поле. Катионы двигаются к катоду, а анионы к аноду. Постоянный ток, проходящий через раствор, устанавливается в зависимости от природы растворенных веществ, их концентрации и подведенного напряжения.

Для разделения культуральных жидкостей, выделения клеток, вирусов, ферментов, сбора осадка, белка из надосадочной жидкости, осветления суспензий применяли различные центрифуги и сепараторы: 8-23, 8-24, 8-70; ОФС„- 0,1; ОФС„- 0,2; ОТР-Ю1К; сепаратор Ж5-АСГ-ЗМ (Гуславский А.И.).

2.1.3. Методы

Методы культивирования клеток и вирусов. Пролиферативную активность клеточных культур оценивали с помощью индекса пролиферации. Концентрацию клеток определяли путем их подсчета в камере Горяева.

Жизнеспособность клеток в суспензии выражали в процентом соотношении к общему количеству клеток. Титр вируса ВГИ определяли по количеству фокусообразующих единиц в 1 см3, титр вируса ИББ по методу Кербера (1931) в модификации Ашмарина И.П. (1959).

Методы контроля фермента. Физико-химические свойства трипсина определяли по ГОСТ 202642-89. Наличие фермента в суспензии осуществляли экспресс-методом на фотопленке; протеолитическую активность - по РСТ ЛССР 424-84 ТУ ОКП 921.828.1500 и ТУ 9358.013.00008064-96 - по Шоу-Петиколас. Диспергирующие свойства трипсина на тест-культуре клеток ФЭК оценивали по выходу клеток из 1 г, жизнеспособности, адгезивным и ростовым свойствам (урожаю, УК и индексу пролиферации, ИП).

Физико-механические свойства полимерных композиций. Свойства полимерных вулканизатов в исходном состоянии и после теплового старения определяли по ГОСТ 9024-74 и ГОСТ 9.029-74.

Статистическая обработка результатов. При статистической обработке экспериментальных результатов использовали метод регрессивного анализа. Достоверность результатов оценивали по критерию Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1980). Результаты считали достоверными при Р <0,05.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Производство биопрепаратов представляет собой комплекс взаимосвязанных биотехнологических процессов: приготовление компонентов среды и ее изготовление, получение фермента и его раствора для дезагрегации культур тканей; культивирование (клеток, вирусов и бактерий); выделение и очистка биологических растворов, питательных сред и растворов; сушка биопрепаратов. В связи с этим рассматривались вопросы получения отечественного ферментного препарата трипсина для вирусологических целей, процессы культивирования клеток при получении вирусных вакцин,

осуществления крупномасштабного культивирования в стерильных условиях; получения бактерийной массы для получения протеина А, разработки мембранных способов очистки, разделения, концентрирования и стерилизации при использовании отечественного оборудования и материалов.

2.2.1. Усовершенствование технологии получения фермента трипсина

2.2.1.1. Разработка технологических процессов изготовления трипсина

В производстве противовирусных вакцин для дезинтеграции клеток используется протеолитический фермент трипсин, в основном импортного производства. Нами проведены исследования по разработке технологии получения фермента отечественного производства. Для этого необходимо было решить комплекс задач, таких как выделение, разделение и очистка фермента, его консервация, оценка физико-химических и биологических свойств. В качестве исходного сырья при получении фермента использовали поджелудочную железу (ПЖ) крупного рогатого скота (КРС), свиньи и птиц. ПЖ КРС была наиболее технологична. Исходное сырье использовали после 412 месяцев хранения, обеспечивающее активацию профермента трипсина. Двукратное замораживание, оттаивание и последующее измельчение ПЖ до частиц размером 8 мм, разрушающие клеточные оболочки ткани, исключали образование устойчивой суспензии и способствовали полному выделению фермента из исходного сырья и увеличению активности препарата на 40 ЕД (22-27%) по сравнению с сильно измельченной железой ( до частиц 2 мм). Максимальную активность фермента получали через 6 час экстрагирования и 12 час отстоя на первой стадии и в течение 2-3 час экстрагирования на второй стадии. Перемешивание суспензии в процессе экстрагирования проводили в автоматическом режиме (3 мин - перемешивание, 7 мин - простой), обеспечивающее незначительное пенообразование и исключающее получение

устойчивой суспензии. Экстрагирование фермента проводили при температуре не выше 16°С, так как при более высокой температуре наблюдается инактивация и самопереваривание трипсина. Снижение температуры суспензии до 7+2 °С позволило получить препарат с максимально высокой активностью. РН на 1 этапе экстрагирования составлял 3,1 - 3,35, а на 2 этапе - 1,7 - 2,0. При осаждении балластных веществ в течение 6 час выход составил 9,5% от объединенного экстракта и 30% от исходного сырья. Выход балластных веществ в сухом виде составил 11% от его общей массы и 2,3% от исходного сырья. После 12-18 час второго этапа высаливания выход трипсина по отношению к фильтрату после удаления балластных веществ составил 2-2,5%. Процент выхода трипсина от исходного сырья колебался от 2,5% до 6%. В сухом виде выход фермента составил 60-80% от осажденного субстрата и 2,53,5% от массы исходного сырья.

Проведенные исследования позволили рекомендовать для разделения суспензии после экстрагирования следующее оборудование с учетом массы исходного сырья: до 70 кг - центрифуги ОФСст; от 70 до 100 кг - центрифуги Рапид, ОФСст, от 100 и более - шнековую центрифугу ОГШ отдельно или совместно с центрифугой ОФСст для последующего осветления фильтрата. При разделении суспензии после высаливания балластных веществ и трипсина использовали следующее оборудование: 20-50 кг - центрифугу ОФСст, 20-100 кг - суперцентрифугу ОТР-Ю1К, более 100 кг - сепараторы для отделения балластных веществ и трипсина, и суперцентрифугу для извлечения трипсина после осаждения. Протеолитическая активность препарата после разделения суспензии с помощью центрифуг была на 20-40% выше, чем при использовании обычного фильтрования, при этом снизились потери, и улучшилось качество готового препарата. Кроме того, в 2-3 раза уменьшились затраты рабочего времени и количество обслуживающего персонала.

Остаточное содержание солей в высоле трипсина составляло 30-50%, удаление которых проводили с помощью ультрафильтрационных установок на

полых полупроницаемых волокнах из полиамида при диафильтрации, что позволило в 6-7 раз снизить количество сульфата аммония до 3-5 %, при необходимости до полного обессоливания.

В связи с термолабилыюстыо ферментного препарата изучали возможные способы его консервации при использовании различных методов высушивания и влияние их на ферментативную активность трипсина (табл. 1).

Таблица 1

Сравнительная оценка влияния методов высушивания на ферментативную активность трипсина

п=3

Метод высушивания Температура высушивания, °С Время сушки, ч Характеристика препарата

на входе на выход Массовая доля влаги,% Активность, ЕД

Распылительный 130-140 60-75 2 1,56+0,37 443+28,6

Сублимационный -40 30 30 2,30+0,24 455+9,0

Кондуктивный (калориферный) 35-37 24-30 4,25+1,11 232+17,6

Конвективный 35-37 24-30 3,85+0,82 294+25,0

Нативный препарат контроль - - - 50,00+3,24 492+26,2

Результаты проведенных исследований по выбору метода высушивания

конечного продукта показали, что кондуктивный и конвективный методы длительны и требуют дополнительных технологических операций измельчения и просеивания трипсина, кроме того кондуктивный метод повышает вероятность обсеменения фермента. Наиболее эффективным по производительности и экономичности для больших объемов является метод распылительного высушивания, позволяющий получить тонкодисперсный порошок трипсина, содержащий не более 3% массовой доли влаги, с активностью близкой к нативной форме трипсина, альтернативным для небольших партий - сублимационный метод. Преимуществом этих двух способов является получение трипсина с высокой протеолитической активностью, низкой массовой долей влаги, не требующих измельчения и просеивания ферментного препарата. Полученный трипсин соответствовал требованиям ТУ9358-013-00008064-96: протеолитическая активность не ниже

150 ЕД по Шоу-Петиколас; массовая доля влаги не более 3 %, значение буфера - 7,4 при растворении образца фермента; значение мутности не фильтрованного раствора не более 6,5x10"3 1/см или не более 0,05 ЕД оптической плотности (ОП); выход клеток из 1 г ткани КЭ в пределах 150-215 млн клеток при 90-96% жизнеспособности. Серию трипсина для получения культур клеток считают активной и нетоксичной, если изготовленный 0,25% раствор фермента обеспечивает дезагрегацию и выход из 1 г ткани не менее 90 млн. клеток с жизнеспособностью не ниже 90%, без признаков дегенерации клеток в культуре.

2.2.1.2. Разработка технологической линии промышленного производства трипсина

Нами разработана технологическая линия промышленного производства трипсина, включающая эффективное современное оборудование: реакторы с автоматическим перемешиванием суспензии и регулированием температурного режима, оборудование для разделения суспензии после экстрагирования и высаливания, оборудование для высушивания конечного продукта. За счет применения современной техники обеспечен наиболее высокий уровень механизации, автоматизации процессов, что способствовало получению более активного трипсина, повышению производительности труда. Предполагаемый экономический эффект от организации производства трипсина сухого (ТС) для вирусологических целей на 1000 кг в год равен 118 млн. руб.

Освоение технологии изготовления трипсина проводили в ГНУ ВНИТИБП и НПО "Синтез" (г. Курган), на Алма-Атинском и Омском биокомбинатах. Опытно-промышленные серии трипсина использованы для получения культур клеток при изготовлении вакцин против болезни Марека, чумы плотоядных, болезни Ауески и трансмиссивного гастроэнтерита свиней. Пригодность опытно-промышленных серий трипсина для получения культур

клеток противовирусных препаратов была подтверждена на Омском, Алма-Атинском биокомбинатах и Курской биофабрике.

2.2.1.3. Использование трипсина при культивировании клеток в производстве противовирусных вакцин

Опытно-промышленные образцы фермента проверялись при культивировании на широком спектре культур клеток совместно с сотрудниками ВГНКИ и на биопредприятиях. Установлена эффективность использования трипсина для получения различных видов первичных культур клеток (выход клеток с 1 г. ткани для ФЭК, ПЭК, ТБ, ПКЩ, ПЩ, ПК составил 137,2; 72; 166; 93,5; 57; 121 млн.кл. соответственно) и перевиваемых культур клеток MDBK, MDCK, СПЭВ.

Клеточные культуры, изготовленные с использованием растворов опытно-промышленных серий трипсина, по чувствительности и уровню накопления вирусов: штаммов: - БУК-628 вируса болезни Ауески; MB А 1/77 вируса парагриппа-3 (ПГ-3); МВА 1/80 вируса инфекционного ринотрахеита (ИРТ) крупного рогатого скота, штаммы С и Д парвовирусного энтерита собак (ПВЭС), по морфологии и срокам проявления ЦПД были сходны с контрольными культурами клеток (Дифко), что говорит о равноценности и перспективности растворов фермента для практического использования.

Трипсин был испытан на Омском биокомбинате для диспергирования ткани перепелиных эмбрионов (ПЭ) при получении культуры клеток ФЭП и вакцины против болезни Марека из штамма ФС-126 герпеса индеек. Фермент обладал равной с контролем диспергирующей активностью в отношении ткани ПЭ и обеспечивал выход 45,8-68,9 млн. кл/г, равноценный контролю, с жизнеспособностью клеток 95-97%. Опытные и контрольные культуры клеток ФЭП характеризовались равноценной чувствительностью и были пригодными

для получения штамма "ЭПМ" вируса чумы плотоядных в производственных условиях.

Таким образом, отечественный фермент трипсин, полученный по усовершенствованной технологии, пригоден для культивирования клеток и вирусов и не уступает по эффективности импортному препарату.

2.2.2. Разработка и применение полимерных композиций в технологии производства биопрепаратов

2.2.2.1. Разработка способа иммобилизации трипсина на полимерном носителе

Для консервации трипсина, с целью сохранения его диспергирующих свойств и протеолитической активности, нами разработан способ иммобилизации на фторсодержащем полимерном носителе (СКФ-26 и СКФ-260 ВРТ) с высокой химической, биологической стойкостью и инертностью (табл. 2).

Таблица 2

Влияние иммобилизованного трипсина на получение клеточных культур

п=5

N Наименование Наименование Проте ПЭ КЭ

фермента носителя олити Выход Жизнеспо Выход Жизнес

ческая клеток с собность клеток с пособно

актив 1г. клеток, 1 г. сть

ность, ткани % ткани клеток,

ЕД млн. млн. %

I Нативный трипсин 235 85 96 120 97

II Иммобилизова СКФ-26 235 125 97 150 97

нный трипсин СКФ-260ВРТ 235 145 96 160 97

Испытания иммобилизованного фермента на полимерном носителе в

качестве диспергирующего агента показали возможность использования его при дезагрегации тканей перепелиных и куриных эмбрионов (ПЭ и КЭ), выход клеток с единицы ткани превышал уровень контроля. Полученные клетки были жизнеспособны при монослойном культивировании. При соблюдении

стерильности рост клеток КЭ был выше уровня контроля на 25-33%, а рост клеток ПЭ на 47-70%.

Таким образом, разработан способ иммобилизации трипсина на полимерном носителе, обеспечивающий сохранение свойств фермента, его протеолитическую и диспергирующую активность. Жизнеспособность клеток, полученных с использованием иммобилизованного фермента, была на уровне контроля, а выход клеток с единицы ткани превышал его.

2.2.2.2. Разработка полимерных материалов для биотехнологического оборудования

Полимеры с повышенной термической стабильностью, химической стойкостью и биологической инертностью, такие как фторкаучуки, использовали не только как носители при иммобилизации протеолитического фермента трипсина, но и как конструкционные материалы для биологического оборудования (авторские свидетельства: № 701129, "Резиновая смесь на основе фторуглеродных каучуков", бюл. - 1979. - № 44. - С.193.; № 770126, "Резиновая смесь на основе фторкаучука", бюл. - 1980. - № 37. — С.308; № 783311, "Резиновая композиция на основе сополимера винилиденфторида", бюл. - 1980. - № 44. - С. 110).

Испытание деформационных свойств полимеров при длительном старении в течение 502 сут. при комнатной температуре показало, что накопление остаточной деформации у фторуглеродной резины составляло - 16 %, у силиконовой резины - 23 - 25 % (в зависимости от наполнения). Высокая сопротивляемость полимеров при 20% сжатии позволила рекомендовать их для уплотнительных и герметизирующих изделий.

В результате проведенных исследований были разработаны новые полимерные материалы, обладающие теплостойкостью, агрессивостойкостью, инертностью на основе фторкаучука СКФ-26 и СКФ-260 Д. Технологичность

фтористых резиновых смесей улучшали при использовании совмещенных композиций с фторсиликоновыми смесями и олигомерными фторсодержащими соединениями, обладающими повышенной теплостойкостью при 200°С. Потеря массы при вуланизации у этих композиций составляли 4-2%. Усадка изделий была 2-1,5 %, в то время как . у контрольной смеси с дибутилсебацинатом потери массы и усадка составили соответственно 12% и 10%. Применение совмещенных композиций на основе фторкаучуков и фтосиликоновых смесей, фторсодержащего пластификатора обеспечивало вулканизацию под давлением в прессе, в котле и в воздушной среде термостата или в трубе агрегата непрерывной вулканизации, с последующим термостатированием. В качестве совулканизата бифургина или его замены были предложены новые вулканизующие агенты: производные дитиомочевины и соединение 1,4 бис (2-меркаптобензтиазолилметилен) - пиперазина, позволяющие получать теплостойкие материалы. Для уплотнительных прокладок нами были разработаны пресс-формы, изготовленные на Ставропольском ОЗТО и испытанные во ВНИТИБП и Щелковском биокомбинате.

2.2.2.3. Определение токсичности полимерных материалов с использованием микроорганизмов и на культуре клеток

Разработка и применение конструкций и материалов, обеспечивающих стерильные условия культивирования клеток и микроорганизмов, являются важной задачей биотехнологии. Используемые при этом полимерные материалы должны быть не только прочными, устойчивыми к моющим средствам, химическим реагентам, температурным воздействиям, но и быть инертными. В связи с этим определение токсичности материалов необходимо для их оценки при конструировании технологического оборудования.

Определение токсичности с использованием микроорганизмов. Нами предложен метод определения токсичности полимерных материалов с

использованием микроорганизмов. Испытания проводились в лаборатории микробиологии (Анисимова Л.В., Сапегина Е.П., Никитина Р.А, 1984) на культуре Pasteurella multocida, 2 авирулентный (пастеровский) штамм. Установлено, что резина на основе силиконового каучука, совмещенная композиция фторкаучука и фторсшшконовой смеси и резина на основе фторкаучука не оказывали ингибирующего действия на рост микроорганизмов Pasteurella multocida и могут быть использованы в конструкционных узлах технологического оборудования при производстве противобактерийных препаратов.

Определение токсичности на культуре клеток. Наряду с вышеуказанным методом проводили испытание токсичности полимеров на культуре клеток. Для оценки токсичности резиновых изделий использовали культуру клеток ПТ-80. Исследования проводили совместно с сотрудниками лаборатории культур клеток (Гвозденко Н.И., Пухова Н.М., Соловьев Б.В., 1990). Высокий прирост клеток был получен при испытании резин на основе силиконового каучука, совмещенной композиции фторкаучука и фторсиликоновой смеси и резины на основе фторкаучука. Клетки не прикреплялись к стеклу или формировали редкие очаги роста в случае использования токсичных материалов. Метод определения токсичности полимеров исключает использование животных, уменьшает трудозатраты и время проведения опытов.

2.2.3. Усовершенствование способов культивирования клеток при культивировании вирусов

В практике существуют несколько способов получения культур клеток для противовирусных препаратов, среди них: стационарный, динамичный, суспензионный и псевдосуспензионный на микроносителях. Использование роллерных аппаратов при монослойном культивировании клеток, особенно для

первичных культур, позволяет экономить потребление питательной среды по сравнению со стационарным способом.

Для совершенствования монослойного культивирования клеток проведены испытания многотрубчатого культиватора V=0,006 м3 с использованием технологической обвязки биореактора. Технологическая обвязка к аппарату включала линии подачи, очистки, стерилизации газовой смеси и отвода отработанных газов; подачи пара; термостатирования и поддержания температурного режима в биореакторе; подачи компонентов (питательной среды, засевной культуральной жидкости) и обеспечивала контролируемый и управляемый процесс культивирования клеток в отличие от роллерной технологии. Первичные клетки куриных и перепелиных эмбрионов росли не только на внутренней, но и на внешней поверхности стеклянных трубок аппарата.

Увеличение площади ростовой поверхности клеток обеспечивалось также с помощью микроносителей, суспензируемых в питательной среде (псевдосуспензии), что способствовало регулированию и поддержанию параметров культивирования, получению однородной культуры и осуществлению контроля качества культуры и выхода клеточной биомассы. При культивировании клеток на микроносителях (МЫ) в биореакторе объемом 0,005 м3 установлено влияние режимов перемешивания на адсорбцию клеток к поверхности микроносителя, определен тип мешалки. Перемешивание микроносителя (акрилекса) проводили трехлопастной мешалкой с углом поворота лопастей 90° и 45°, а также шестилопастной турбинной мешалкой. Равномерному распределению микроносителя способствовало использование трехлопастной мешалки с углом поворота лопастей а=90° при скорости перемешивания от 40 до 60 об/мин. При 80 об/мин распределение МН такое же, как при 40 об/мин. Клетки, снятые с микроносителя, являлись посевным материалом для 0,025 м3 реактора. Установлена оптимальная посевная концентрация клеток ПТ-80 на микроносителях (8-12 кл/МН). Равномерное

распределение клеток после 3 час адсорбции наблюдали при концентрации 1012 кл/МН, что позволило достичь 95% прикрепления клеток к микроносителю. Полученные результаты были взяты за основу при разработке культивирования клеток ФЭП и ФЭК псевдосуспензионным способом.

Концентрация клеток ПТ-80 в суспензии при скорости перемешивания 40 об/мин и 60 об/мин трехлопастной мешалкой с углом поворота а=90 0 изменялась незначительно и увеличивалась при 80 об/мин, процент мертвых клеток ПТ-80 при этом снижался на 12 -15%.

Для осуществления суспензионного культивирования клеток в реакторах (объемом 0,005; 0,025; ОД; 0,25 м3) разработана технологическая обвязка. Конструкция биореакторов имела вводы для датчиков контроля параметров процесса (рН, еН, рОг, При культивировании в биореакторе объемом 0,005м3 температурный режим культивирования обеспечивали системой термостагирования, а снабжение С02 и воздухом осуществляли с помощью аппарата управляемой подачи газовой фазы (У 111 Ф).

Суспензионное культивирование клеток ВНК-21/13 в биореакторе (0,005м3) проводили в питательной среде Игла + 199 (1:1) с добавлением сыворотки крови крупного рогатого скота (10%) при посевной концентрации клеток 100000 кл/мл. Перемешивание суспензии осуществляли с помощью трехлопастной мешалки с углом поворота а=90° со скоростью 220 об/мин. В результате получено максимальное накопление клеток после 67 час культивирования, процент мертвых клеток при этом составил 2%, а индекс пролиферации - 4,5.

Применение отъемно - доливного способа позволило продлить процесс деления клеток в суспензии. В процессе суспензионного культивирования ВНК-21/13 первый цикл длился 72 час, затем добавляли свежую порцию среды с сывороткой крови крупного рогатого скота (КРС) 10% в фазе логарифмического роста культуры. Второй цикл длился 71 час, а третий цикл

после замены среды с сывороткой (10%) - 40 час. Индекс пролиферации в первом цикле составил 4,5; во втором - 4,2 и в третьем -1,6.

Наряду с использованием среды Игла и 199 (1:1) применяли также питательную среду на основе мышечного гидролизата (рис. 1).

а) б)

Рис. 1. Суспензионное культивирование клеток ВНК-21/13 при использовании мышечного гидролизата:

а) - концентрация живых клеток в мл суспензии;

б) - процентное содержание мертвых клеток в мл суспензии.

Суспензионное культивирование клеток ВНК-21/13 в питательной среде мышечного гидролизата повысило индекс пролиферации до 7,4. После 67 час культивирования добавляли свежую питательную среду в объеме 1 л, и продолжали процесс культивирования до получения индекса пролиферации клеток 7,4. Процесс культивирования клеток проводили при поддержании постоянной температуры (37+0,1 )С°; рН 7,0-7,2+ 0,1; концентрации рОг 9-17% (32-96 мм.рт.ст.), при регулировании объемной доли С02 5-7 % во входящем газе и еН (+75 до +10мв), осуществляли контроль питательной среды и отобранных проб на МПБ, МПА, агаре Сабуро.

При культивировании в биореакторах использовали фильтры в виде фильтроэлементов из фторопласта и титана с диаметром пор 12-20 мкм и 2-6 мкм. Испытание разработанных фильтров показало, что срок службы титановых фильтроэлементов, обладающих устойчивостью к деформациям, был в 1,5-2 раза больше, чем фторопластовых. Для обеспечения стерильности

процессов культивирования клеток использовали полимерные теплостойкие материалы в качестве уплотнительных изделий в реакторах и технологической обвязке.

В технологической обвязке биореакторов объемом 0,025; 0,1 и 0,25 м3 применена малогабаритная запорная арматура: вентили МВСП и МВСУ и запорные клапаны с электромагнитным приводом, которые позволили уменьшить в 2 раза габариты и в 8-10 раз вес арматуры по сравнению с серийными вентилями. Технологическая обвязка, состоящая из системы очистки поступающих и отходящих газов, термостатирования, подачи необходимых компонентов (питательной среды, засевного инокулята, титрантов), позволила осуществить культивирование клеток в биореакторах суспензионным и псевдосуспензионным способами при управлении процессом.

Полученные клеток ПТ-80 использовали при разработке биореакторной технологии получения вирусов ИРТ и ПГ-3 в псевдосуспензии (на микроносителях) и конструировании инактивированных вакцин и диагностических препаратов (Иванов B.C., Пухова Н.М., Васько В.Е.). Применение клеток ВНК-21/13 привело к повышению инфекционности вируса ИРТ в 10 раз, а иммуногенности в 3-4 раза, но репродуцированный вирус в монослое клеток ПТ-80 обладал большей активностью, чем вирус, полученный в клетках ВНК-21/13. Суспензионное культивирование клеток ВНК-21/13 было использовано при производстве инактивированной вакцины против бешенства из штамма Щелково-51 (Иванов B.C.).

Разработана технологическая схема культивирования клеток и вирусов, включающая технологические модули с аппаратами для культивирования клеток (объемом 0,005 м3; 0,025; 0,100; 0,250 м3) и вирусов (0,630 м3), а также технологический модуль с аппаратом для приготовления питательной среды (0,250м3), емкости для приготовления моющего раствора (1000м3) и емкости для обезвреживания отработанных жидкостей (1000м3).

Таким образом, нами впервые в производстве ветеринарных препаратов осуществлено культивирование клеток ПТ-80 и ВНК-21/13 в суспензии и псевдосуспензии на микроносителях при культивировании вирусов ИРТ и ПГ-3 с использованием специальных биореакторов, разработанных ВНИТИБП и ИркутскНИИхиммашем. В конструкции реакторов были предусмотрены вводы в среду культивирования датчиков контроля параметров процесса (рН, еН, рСЬ, ^С). Аппараты оснащены рубашкой для термостатирования и стерилизации, трубой передавливания и перемешивающим устройством с приводом мешалки через магнитную муфту, обеспечивающей герметичность узла в зоне привода. Для осуществления процесса культивирования в реакторах разработана технологическая обвязка. Использование малогабаритной запорной и регулирующей арматуры, а также фильтров из пористого титана для очистки и стерилизации воздуха, применение уплотнительных изделий из теплостойких материалов, выдерживающих воздействие различных химических сред, позволили обеспечить процесс культивирования клеток и вирусов в стерильных условиях.

Проведенные исследования послужили основой для разработки технологического регламента "Культивирование клеток и вирусов с использованием экспериментальных образцов оборудования" и технологической схемы процесса. Использование специализированного оборудования, средств механизации и автоматизации способствовало увеличению выхода продукции при производстве биопрепаратов.

В настоящее время разрабатываемые технологии согласуются с учетом требований международных стандартов ИСО серии 9000:2008 и Правил производства и контроля качества лекарственных средств вМР (ГОСТ Р 522492009) с применением аттестованных (валидированных) методов и оборудования.

2.2.4. Усовершенствование способа глубинного культивирования золотистого стафилококка St. aureus для получения протеина А

Глубинное культивирование в реакторе проводили также при получении бактерийной массы, используемой для выделения белка А.

При конструировании иммуносорбентов, диагностических препаратов особый интерес представляет иммобилизация биолиганда через спейсор -протеин А, который встречается у 99% штаммов золотистого стафилококка и составляет 1,7 % сухого веса клетки и 6,7 % веса клеточной стенки (Матвеева И.Н., 2008). В связи с этим осуществляли усовершенствование способа глубинного культивирования золотистого стафилококка St. aureus для получения протеина А.

Культивирование золотистого стафилококка St. aureus проводили в питательной среде на основе бульона Хоттингера и мясопептонного бульона (МПБ) в биореакторе АК-210 объемом 0,01м3. Длительность фазы приспособления культуры золотистого стафилококка St. aureus составила - 0,51,5 час, а фазы логарифмического роста - 3,2 - 4,6 час. Максимальная биологическая активность протеина А получена из культуры при сроке культивирования 8 час и посевной дозе 50 млн.кл/мл, скорости перемешивания 100 об/мин, при температуре 37°С, при поддержания рН 7,2 и конечной концентрации St. aureus -1,9 млрд/мл. Процесс культивирования осуществляли в стерильных условиях, при использовании титановых фильтров для воздуха, системы автоматического контроля и регулирования параметров.

Бактерийную массу золотистого стафилококка инактивировали формалином (10%) или прогреванием при 60°С, 70°С, 80°С в течение 30 мин; и использовали для выделения протеина А после хроматографической очистки. Инактивированная прогреванием клеточная суспензия при ультразвуковой дезинтеграции в течение 10 секунд импульсивно 6 раз, позволила получить биологически активный белок А в количестве - 20 мг. Дезинтеграция же

клеточной суспензии, инактивированной формалином, приводила к потере биологической активности белка А. Белок А из клеточной суспензии, инактивированной формалином, извлекали методом солевой экстракции, при этом получали активный препарат, но в небольших количествах (10 мкг).

Использование аффинного сорбента IgG КРС на BrCN-Сефарозе 4В при одноступенчатой обработке дезинтегрированной ультразвуком клеточной суспензии стафилококка, инактивированной прогреванием при 60°С в течение 30 мин, культуральной среды позволило получить протеин А. Анализ чистоты выделенного протеина А показал наличие единственной белковой полосы с ММ 42 кД. Хроматографически чистый протеин А конъюгировали с ферментом пероксидазы и использовали в биотехнологии компонентов диагностических тест-систем.

Таким образом, в результате проведенных исследований усовершенствован способ глубинного культивирования золотистого стафилококка St. aureus в реакторе АК-210 и получен, биологически активный протеин А. Определены, условия культивирования, при этом максимальная концентрация бактериальной массы составила 1,9 млрд. кл/мл. Отработаны методы инактивации культуральной суспензии и дезинтеграции клеток. Установлено, что инактивация клеточной суспензии формалином приводила к потере биологической активности белка А после дезинтеграции ее ультразвуком. Из инактивированной формалином клеточной суспензии протеин А выделяли методом солевой экстракции, но в малых количествах. Активный препарат получали при температурной инактивации клеточной суспензии, ультразвуковая дезинтеграция которой имела минимальные потери, и количество выделенного активного белка А в 20000 раз больше, чем в случае инактивированной формалином клеточной массы. Протеин А использовали для конструирования иммуносорбентов и получения диагностических препаратов.

2.2.5. Усовершенствование технологии различных методов очистки биологических растворов

Применение различных методов очистки при получении питательных сред и растворов для бактерийных и вирусных препаратов необходимо для осуществления культивирования в стерильной среде и повышения качества вакцин. В этой связи проводились исследования по использованию глубинных, мембранных фильтров/ оборудования и выбору методов микрофильтрации, ультрафильтрации и электродиализа.

2.2.5.1. Применение материалов на безасбестовой основе для предварительной, тонкой и стерилизующей фильтрации биологических растворов

При очистке растворов медико-биологического назначения к фильтрующим материалам предъявляются такие требования, как исключение подвижности матрикса, вымывание различных компонентов, в особенности канцерогенных веществ, таких как асбест, что характерно для асбестовых фильтр-пластин. Совместно с сотрудниками ВНИИ ЦБП проведены работы по созданию безасбестовых фильтровальных пластин и картона для фильтрации биологических растворов.

Установлено, что фильтрационные свойства пластин зависели от их состава. Так при увеличении содержания диатомита до 60% в фильтр-пластинах ФП-1 для предварительной очистки по сравнению с композицией (ФП), содержащей 50% этого сорбента, понижало в 4 раза удельную скорость фильтрации воды. Замена в стерилизующих пластинах (ФС) окиси алюминия на диатомит (ФС-1) незначительно снижала скорость прохождения воды, и повышала скорость прохождения сыворотки КРС. Картон марки КФБЖ, КФМП использовали для предварительной фильтрации и в качестве префильтра перед мембранами при очистке желудочного сока, при

фильтровании питательных сред, растворов трипсина. Опытные образцы безасбестовых фильтр-пластин размером 200x200 мм, 300x300 мм, 400x400 мм, диаметром 293 мм испытывали по воде, биологическим, солевым и ферментным растворам, питательным средам.

Полученные результаты позволили рекомендовать фильтр-пластины ФП, ФТ, ФС, ФД и картон КФБЖ и КФМП для фильтрования, очистки, стерилизации биологических растворов разного назначения. Фильтровальные виды бумаги и картона освоены на бумажной фабрике (г. Косино, Московской обл.), Красногорском ЭЦБЗ и промышленном производстве ВНИИ ЦБП.

2.2.5.2. Применение микрофильтрации и ультрафильтрации для очистки биологических растворов

Исследование процессов микрофильтрации. Для получения стерильных питательных сред, растворов трипсина, защитных сред, разбавителей использовали микропористые мембраны отечественного и импортного производства. Максимальную скорость процесса фильтрации наблюдали у комплекта капроновых мембран фирмы Pall. Двухслойные мембраны обладали устойчивостью к стерилизации в автоклаве. На рис. 2 представлена скорость стерилизующей фильтрации различных сред и растворов для вирусных препаратов через микрофильтрационные мембраны в сочетании с префильтрами на безасбестовой основе.

Использование микрофильтрационных мембран в сочетании с префильтрами обеспечило получение стерильных растворов: 3% глютамина, концентрата лактальбумина, защитных сред (СФГА и СФГЖ), концентрата разбавителя и 0,25% раствора трипсина, используемых при культивировании вирусов. Префильтры повышали производительность мембран (с размером пор 0,2 мкм) в 5 раз в-процессе фильтрования глютамина 3% и концентрата лактальбумина. При фильтрации защитной среды СФГА производительность мембран возрастала в 4 раза при использовании одного слоя картона КФБЖ и в

7 раз при использовании двух слоев картона между слоями микрофильтрационных мембран. Для объемов до 5 л рекомендуется использовать комбинации КФБЖ и мембраны 0,2 мкм; для больших объемов сочетание КФБЖ + 0,2 мкм + КФБЖ + 0,2 мкм. В качестве префильтра перед стерилизующей мембраной 0,2 мкм при фильтровании защитной среды с желатином использовали микрофильтрационные мембраны большего диаметра пор (0,8 мкм), которые в сравнении с глубинными фильтрами повышали скорость фильтрования. Использование префильтра перед мембраной или между мембранами повышало удельную производительность при

микрофильтрации концентрата разбавителя.

Рис. 2. Результаты стерилизующей фильтрации различных сред и растворов через микрофильтрационные мембраны в сочетании с префильтрами на безасбестовой основе:

глютамин 3%: I - КФМП+0,2мкм+КФМП+0,2мкм; II - 0,2мкм; концентрат лактальбумина: I - КФМП+0,2мкм+КФМП+0,2мкм; II - 0,2мкм; III КФБЖ+0,2мкм+КФБЖ+0,2мкм; СФГА: II - 0,2 мкм; III - КФБЖ + 0,2мкм +КФБЖ + 0,2мкм; IV - КФБЖ + 0,2мкм; СФГЖ: V - 0,8 мкм + 0,2 мкм; VI - ФС; концентрат разбавителя: II - 0,2 мкм; VII - 0,2 мкм +КФМП+0,2 mkm;VIII - 0,2 мкм+ КФБЖ+0,2 мкм; IX - КФБЖ + 0,8 мкм + КФБЖ+ 0,2 мкм; X - КФМП + 0,8 мкм + КФМП+ 0,2 мкм; 0,25% раствор трипсина: XI - КФМП + 0,8мкм + КФМП + 0,45мкм + КФМП + 0,2мкм; XII -КФБЖ + 0,8мкм + КФБЖ + 0,45мкм + КФБЖ + 0,2мкм.

При стерилизации растворов трипсина использовали префильтры КФБЖ

или КФМП между мембранами 0,8 мкм - 0,45 мкм - 0,2 мкм. Сыворотку крови

фильтровали через мембраны с размером пор 0,45 мкм и 0,22 мкм после

предварительной фильтрации через глубинные фильтры.

Технология микрофильтрации питательных сред, сывороток, растворов трипсина, в виде защитных сред, концентрата разбавителя вакцины отработана при производстве вакцины против болезни Марека и инфекционной бурсальной болезни птиц. При этом использовали комплект лабораторного стерилизующего фильтрационного оборудования ЛКСФ-1 с набором фильтродержателей диаметром 12, 25, 47, 90, 142, 293 мм и промышленные установки УСФ-293 и УСФ-0,28/7, которые испытывали на инертность и безвредность. После технических доработок отечественные образцы были рекомендованы для использования при стерилизации питательных сред, сывороток крови, растворов трипсина.

Исследование процессов ультрафильтрации. Для очистки солевого раствора альбумина и его эффективного концентрирования использовали мембраны Владипор УАМ-300 и УАМ-200 (с селективностью по белку 9899%), которые обеспечивали процесс ультрафильтрации с минимальными потерями белка. По сульфату аммония селективность этих мембран составила 0-2% и 5-10% соответственно. Процесс осуществляли на ячейке ФМ-02, тонкоканальной ультрафильтрационной установке ФТО-01 и рабочем макете аппарата УФ-5. На установке ФТО-01 концентрировали раствор альбумина до содержания белка 40-45%, а на аппарате УФ-5 - до 15%. В условиях производства Ставропольской биофабрики на установке ФТО-01 осуществляли обессоливание раствора альбумина диафильтрацией. Содержание соли в полученном растворе альбумина составляло 0,2% и белка 10%, что соответствовало требованиям инструкции по приготовлению питательной среды для культивирования патогенных лептоспир. Установка ФТО-01 рекомендована для очистки и концентрирования альбумина объемом до 6 л, а УФ-5 для больших объемов (6-10 л). Использование установки ФТО-01 в 4 раза сокращало время обессоливания альбумина, УФ-5 - в 6 раз по сравнению с простым диализом.

Очистку, концентрирование растворов белков, ферментов, вирусных, бактериальных суспензий осуществляли на ультрафильтрационных аппаратах на полых волокнах с целью снижения концентрационной поляризации на мембранах за счет прохождения потока жидкости. На рис. 3 представлен процесс обессоливания и концентрирование раствора трипсина (0,25%) при диафильтрации на ультрафильтрационных аппаратах разных марок.

'1-УШ-5ПА ♦МЙШ -ММВШОПА -*-№Ш-Ш11Л

-1-УВА-2-5ПА -в»1].УВА.Ы511А -А-Ш-УВШОПА -*-№УВА-Ы0М1А

О 0,5 1 1,5 2 2,5 3 Ищыдиафчьтращ

Рис. 3. Обессоливание и концентрирование раствора трипсина при диафильтрации на ультрафильтрационных аппаратах разных марок.

0,25% раствор трипсина обессоливали на аппарате УВА-2-50 в 6 раз за 12 цикла диафильтрации через полые волокна ВПУ-50ПА при одновременном концентрировании. Разделительный модуль УВА-2-100 с полыми волокнами ВПУ-ЮОПА концентрировал фермент на всех циклах диафильтрации при постепенном удалении солей из раствора. Степень концентрирования фермента возрастала с 5 на первом цикле до 7 на четвертом цикле диафильтрации.

Замена системы подачи жидкости центробежным насосом марки ЦНГ-0,5/10 вместо перистальтического позволила эффективно использовать разделительные модули фирмы Мем-Текс типа АР-2 с площадью фильтрации 2 м2 различных марок УВА-2-5ПА, УВА-2-15ПА, УВА-2-50, УВА-2-100 ПА, с полыми волокнами типа ВПУ-5ПА, ВПУ-15, ВПУ-50, ВПУ-100 из полиамида с пределом задержания по белку 5, 15, 50, 100 кДа при очистке ферментных и других биологических растворов.

. Метод ультрафильтрации использовали для концентрирования суспензии вируса чумы плотоядных животных. С помощью ультрафильтрации концентрировали 12 л исходной суспензии в 40 раз за 2 часа, а 6 л вирусной суспензии концентрировали до 100 мл за 4 часа (в 60 раз). Метод ультрафильтрации способствовал концентрированию суспензии в 40-60 раз.

Таким образом, исследование процесса микрофильтрации позволило применить отечественные и импортные мембраны на основе ацетата целлюлозы, регенерированной целлюлозы, нейлона (капрона) и других полимеров, а также использовать оборудование для очистки и стерилизации питательных сред и растворов в производстве биопрепаратов. Усовершенствование метода ультрафильтрации за счет применения тонкоканального и плоскопараллельного аппаратов снизило концентрационную поляризацию на поверхности мембран в процессе очистки альбумина и вирусной суспензии. Ультрафильтрационные аппараты с полупроницаемыми полыми волокнами ускорили процессы фракционного разделения, обессоливания и концентрирования биологических жидкостей.

Разработка технологии очистки и концентрирования биологических растворов в настоящее время реализуется согласно требованиям ГОСТ Р 522492009 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств» с применением валидированных методов и оборудования.

2.2.5.3. Применение электродиализа для очистки альбумина от солей сульфата аммония

При сотрудничестве с Краснодарским государственным университетом (КГУ) и Ставропольской биофабрикой, нами исследована возможность применения электродиализа для обессоливания альбумина. Процесс электродиализа представляет собой направленный массоперенос ионов солей под действием электрического тока.

Работу на технологической электродиализной установке осуществляли в автоматическом циркуляционном режиме при параллельном включении рабочих камер электродиализатора типа ЭК-04-74 (КГУ) и напряжении 75-85В, температуре не выше 35°С. Содержание солей аммония в растворе альбумина после электродиализа не превышало 0,2%, что соответствовало требованиям инструкции на питательную среду для культивирования патогенных лептоспир. Максимальная производительность аппарата по целевому продукту составляла 4,5 л/час, по исходному продукту 8,1 л/час. Электродиализ сократил в 7,2 раза время обессоливания раствора альбумина по сравнению с ранее проводимым диализом.

3. ВЫВОДЫ

1. Усовершенствована технология промышленного производства трипсина с использованием центрифугирования для разделения суспензии после экстрагирования и высаливания фермента; и крупномасштабного способа высушивания методом распыления для больших объемов раствора фермента и сублимационного для небольших партий фермента.

Разработанная промышленная технологическая линия производства трипсина испытана в опытно-промышленных условиях, а полученные партии фермента рекомендованы для использования в производстве противовирусных вакцин.

2. Применение трипсина позволило получить первичные культуры клеток (ФЭК, ФЭП, ПЭК, ТБ, ПК, ПКШ, ГПЦ) и перевиваемые линии клеток (МОВК, МОСК, СПЭВ), которые обладали равноценной чувствительностью к вирусам и обеспечивали максимальное их накопление в производстве вакцин против болезни Марека, инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 крупного рогатого скота и парвовирусного энтерита собак. Подтверждена пригодность трипсина при производственном получении культур клеток ФЭП и

выращивании штамма ФС-126 вируса герпеса индеек и штамма ЭПМ вируса чумы плотоядных.

3. Разработан способ иммобилизации протеолитического фермента трипсина на полимерном носителе (сополимере винилиденфторида и гексафторпропилена, а также винилиденфторида и перфторметилвинилового эфира). Протеолитическая активность и диспергирующая способность фермента при этом не снижались; клетки ФЭП и ФЭК, полученные с его применением, обладали жизнеспособностью на уровне контроля, а выход клеток превышал значение контрольного опыта.

4. Получены теплостойкие полимерные материалы на основе фторкаучуков (СКФ-26 и СКФ-260Д), совмещенные композиции с фторсиликоновой смесью и фторсодержащим пластификатором, обладающие повышенной теплостойкостью к температуре 200°С, стойкостью к различным химическим средам (кислотам, щелочам и маслам) и деформационным воздействиям при сжатии.

Разработан способ оценки токсичности полимерных материалов с помощью микроорганизмов (пастерелл) и на культуре клеток (ПТ-80), исключающие использование животных, уменьшающие трудозатраты и время проведения опытов.

5. Усовершенствована технология псевдосуспензионного и суспензионного культивирования первичных и перевиваемых клеток в биореакторах (объемом - 0,005; 0,025; 0,100; 0,250 м3) с системой технологической обвязки.

Разработана технология суспензионного культивирования клеток ПТ-80 и ВНК-21/13 в биореакторах. Максимальный индекс пролиферации клеток ВНК-21/13 - 7,4 получен при использовании питательной среды на основе мышечного гидролизата.

6. Усовершенствована технология глубинного культивирования золотистого стафилококка St. aureus в биореакторе АК-210 объемом 0,01м3;

определены условия получения культуры, используемой для выделения биологически активного протеина А: при температуре культивирования 37 "С, скорости перемешивания 100 об/мин, рН 7,2 и аэрации воздухом со скоростью 1,4 л/мин, посевной дозе культуры 50 млн.кл/мл и конечной концентрации St. aureus -1,9 млрд.кл/мл.

7. Усовершенствована предварительная, тонкая и стерилизующая фильтрация питательных сред, сыворотки крови, ферментных солевых растворов с помощью фильтр-пластин на безасбестовой основе ФП, ФТ, ФС, ФД, а также картона КФБЖ и КФМП. Отработана технология микрофильтрации питательных сред, сывороток, растворов трипсина, защитных сред, концентрата разбавителя вакцины при производстве вакцины против болезни Марека.

8. Усовершенствована система очистки и концентрирования раствора альбумина с помощью ультрафильтрации на мембранной тонкоканальной и "фильтр-прессе" установках. Для получения высокоочищенных и концентрированных растворов трипсина, вирусных суспензий и биологических жидкостей применены аппараты с полупроницаемыми мембранами в виде полых волокон типа ВПУ-5ПА, ВПУ-15ПА, ВПУ-50ПА, ВПУ-100ПА из полиамида с пределом задержания по белку 5, 15, 50, 100 кДа. Полые волокна ВПУ-50ПА за 1-2 цикла диафильтрации в 6 раз снижали содержание солей и обеспечивали концентрирование раствора трипсина. Полупроницаемые полые волокна ВПУ-100ПА эффективно концентрировали фермент в 7 раз при постепенном удалении солей из раствора. Метод ультрафильтрации на полых волокнах позволил концентрировать в 40-60 раз по объему вирусную суспензию чумы плотоядных.

9. Разработана технология глубокого обессоливания раствора альбумина методом электродиализа (до минимального содержания солей 0,2 %) в производстве вакцины против лептоспироза, обеспечивающим сокращение времени диализа в 7,2 раза.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты исследований включены в следующие документы.

1. По результатам исследований разработана и утверждена Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода Российской Федерации нормативно-технологическая документация:

- Технологический регламент производства трипсина сухого для вирусологических целей, 01.06.1995г.;

- Технические условия ТУ 9358.013.00008064-96 " Трипсин сухой для вирусологических целей", 04.03.1996г.;

- Наставление по применению трипсина сухого для вирусологических целей, 04.03.96г., № 13-6-2/540.

- Методические рекомендации по определению специфических антител к антигенам вирусов инфекционного ринотрахеита (ИРТ), парагриппа-3 (ПГ-3), респираторно-синцитиальной инфекции (РС), вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС), аденовирусной инфекции крупного рогатого скота (АВИ) в комплексной тест-системе иммуноферментного анализа (ИФА), рассмотренные и одобренные 21 сентября 2007 года на секции "Ветеринарная биотехнология" ОВМ РАСХН, протокол №1, утвержденные 18.03.2008г.

2. Разработана технологическая схема производства трипсина. Предложена технология получения трипсина сухого для вирусологических целей, которая освоена на базе ГНУ ВНИТИБП, Омского и Алма-Атинского биокомбинатов, Курганского НПО "Синтез".

3. Технологический регламент "Культивирование клеток и вирусов с использованием экспериментальных образцов оборудования", утвержден директором ГНУ ВНИТИБП 28.12.1985г. Разработана технологическая схема процесса культивирования клеток и вирусов в аппаратах (реакторах).

4. Опытно-промышленный регламент на производство вакцины антирабической для животных, утвержден 20.09.2009г. директором ВНИТИБП.

5. Лабораторный регламент на производство антирабической вакцины сухой для крупного и мелкого рогатого скота, утвержден директором ВНИТИБП 22.10.2010 г.

6. Технологический регламент "Вирус - вакцина сухая культуральная против болезни Марека из штамма ФС-126 М вируса герпеса индеек, утвержден директором ВНИТИБП 28.12.1990 г.

7. Технологический регламент по изготовлению и контролю набора компонентов для определения уровня специфических антител к вирусам ИРТ, ПГ-3, РС, ВД-БС, АВ крупного рогатого скота в комплексной тест - системе иммуноферментного анализа, утвержден директором ВНИТИБП 21.07.2007г.

8. Разработаны полимерные композиции из теплостойких биологически инертных материалов для технологического оборудования биопроизводств. Получены авторские свидетельства (авт. св. № 701129, "Резиновая смесь на основе фторуглеродных каучуков", бюл. — 1979. - № 44. - С.193.; авт. св. № 770126, "Резиновая смесь на основе фторкаучука", бюл. - 1980. - № 37. - С.308; авт. св. № 783311, "Резиновая композиция на основе сополимера винилиденфторида", бюл. - 1980. - № 44. - С.110). Материалы использованы на Щелковском биопредприятии (акты об использовании предложения от 16.02.09г.).

9. Разработан способ переработки смесей, и вулканизации в ГНУ ВНИТИБП, на Щелковском биокомбинате и в ОКБ КП. Организован участок по изготовлению полимерных материалов.

10. Разработан и испытан с положительным результатом в условиях производства способ обессоливания методом ультрафильтрации и электродиализа раствора альбумина, используемого для приготовления питательной среды ГНКИ, предназначенной для культивирования патогенных лептоспир. На Ставропольской биофабрике получено 8 серий альбумина, общим объемом 167 л (Акт испытаний от 12.11.1981 г.).

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки России

1. Попова В.М. Разработка биотехнологических процессов при получении биопрепаратов и ферментов /Попова В.М. //Труды Кубанского государственного аграрного университета. Серия: Ветеринарные науки. - Краснодар,- 2009. - № 1,-(4.1).-С. 80-81..-

2. Попова В.М. Исследование методов очистки, концентрирования и разделения биологических жидкостей с использованием мембранной технологии в производстве ветеринарных препаратов /Попова В.М., Кочиш И.И., Беро И.Л., Самуйленко А.Я., Гуславский А.И. //Ветеринария и кормление. - 2009.- № 6,- С. 6-7.

3. Еремец Н.К. Современные биотехнологические методы получения и оценки качества протеина А золотистого стафилококка /Еремец Н.К., Матвеева И.Н., Беро JI.K., Киш JI.K., Самуйленко А.51., Еремец В.И., Попова В.М. //Ветеринарная медицина. - 2009,- С. 189-190.

4. Попова В.М. Разработка и оптимизация биотехнологий производства ветеринарных препаратов и ферментов /Попова В.М., Кочиш И.И., Беро И.Л., Самуйленко А.Я., Гуславский А.И. //Сельскохозяйственная биология. - 2010,- № 4,-С. 45-50.

5. Попова В.М. Использование трипсина для получения культур клеток и вирусов при изготовлении противовирусных препаратов /Попова В.М., Кочиш И.И., Беро И.Л., Самуйленко АЛ., Гуславский А.И., Ночевный В.Т., Соловьев Б.В. //Ветеринария и кормление. - 2010.- № 3,- С. 14-15.

6. Попова В.М. Современные направления в развитии биотехнологии ветпрепаратов и ферментов /Попова В.М. //Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук.- 2010. - № 5. - С. 40-41.

7. Беро ИЛ. Человек и биотехнология XXI века /Беро ИЛ., Ганяев А.М., Эрнст К Л., Пурто Е.Е., Самуйленко АЛ., Раевский АА., Попова В.М., Гринь СА., Бондарева НА. Иванов А.В., Иванов АА. //Ветеринарный врач. - 2010. - № 6. - С. 7-14.

8. Махлис Ф.А. Влияние многоядерных ароматических смол на свойства бутадиен-шггрильных каучуков /Махлис Ф.А., Попова В.М. //Каучук и резина. -1973. - № 5. -С.29-32.

9. Махлис Ф.А. Изменение структуры бутадиен-нитрильных и фторкаучуков при облучении /Махлис Ф.А., Губанова Г.Г., Попова В.М. //Высокомолекулярные соединения. - 1973. - А15. - № 5. - С. 1995-2002.

10. Попова В.М. Разработка полимерных композиций для изделий, используемых в биопромышленности /Попова В.М. //Каучук и резина. - 2011. - № 5,-С. 36-37.

11. Попова В.М. Композиции на основе фторкаучуков, используемые в биопромышленности /Попова В.М., Матвеева И.Н., Самуйленко АЛ., Симаненкова Л.Б.//Каучук и резина,-2011-№ 5.-С. 38-39.

12. Попова В.М. Биотехиологические методы получения протеина А золотистого стафилококка /Попова В.М., Самуйленко АЛ,, Матвеева И.Н. //Технологии живых систем. —2011. — Т.8. - №6. - С. 82-84.

Список авторских свидетельств и патентов

13. Попова В.М. Способ получения трипсина /Попова В.М., Самуйленко А.Я., Гуславский А.И., Беро И.Л., Школьников Е.Э.. Нежута A.A., Еремец В.И., Лукина В.А., Скотникова Т.А., Скороходова Л.А., Еремец Н.К., Кочиш И.И. Патент РФ № 2403285 от 04.06.2009. Опубликовано 10.11. 2010. - Бюл. № 31. - С. 743.

14. Попова В.М. Способ иммобилизации трипсина /Попова В.М., Лукина В.А., Ярыгина Е.И., Скороходова Л.А., Гуславский А.И., Самуйленко А.Я., Кочиш И.И., Матвеева И.Н., Еремец В.И., Гринь С.А., Раевский A.A., Беро И.Л., Фролова М.А., Еремец Н.К. Заявка на патент № 2010124270/10 (034645) от 17.06.2010 (решение о выдаче патента на изобретение 28.07.2011).

15. Махлис Ф.А. Резиновая смесь на основе ненасыщенных каучуков /Махлис Ф.А., Попова В.М., Савин B.C., Клипиницер, Мирошина Т.В. Авт.св. № 384361. -Бюл. - 1973. - №43. - С.167.

16. Задунайская М.К. Резиновая смесь на основе фторуглеродных каучуков /Задунайская М.К., Гринблат М.П., Попова В.М., Губанов В .А., Румянцев Д.Д., Долгопольский И.М., Фролов В.Г., Кирошко П.Б., Хазен Л.З., Кузьминова Н.М., Лундстрем A.M., Веретенников Н.В. Авт.св. № 701129. Бюл. - 1979. - № 44. - С. 193.

17. Попова В.М. Резиновая смесь на основе фторкаучука /Попова В.М., Задунайская М.К., Кругликов A.M., Фролов В.Г., Гольберг Е.Л., Симаненкова Л.Б., Киро З.Б., Донцов A.A., Эйстрах Л.А. Авт. св. № 770126. Бюл. - 1980. - № 37. - С. 308.

18. Гринблат М.П. Резиновая композиция на основе сополимера винилиденфторида /Гринблат М.П., Лундстрем A.M., Кирошко П.Б., Кузьминова Н.М., Губанов В.А., Веретенников Н.В., Долгопольский И.М., Соколов C.B., Задунайская М.К., Попова В.М., Кругликов A.M., Фролов В.Г., Гольберг Е.Л., Худяков А.Д., Гилинская Н.С., Санкина Г.А., Галил-Оглы, Донцов A.A. Авт. св. № 783311.Бюл. - 1980.-№44.-С. 110.

Публикации в других изданиях

19. Гайденко В.П. Изучение условий очистки и концентрирования раствора альбумина методом ультрафильтрации /Гайденко В.П., Марковская С.М., Попова В.М., Гребешок С.М., Рейфман Л.С. //Доклады III Всесоюзной конференции по мембранным методам разделения смесей,-Ч. 2.-Владимир, 1981.-С. 187-188.

20. Денисенко Г.Ф. Очистка водных растворов методом электродиализа /Денисенко Г.Ф., Косиков A.M., Сурмило А.П., Гайденко В.П., Попова В.М., Гнусин Н.П., Заболоцкий В.И., Письменный В.Ф., Брод И.И., Киселев О.Б. //Доклады Второй Всесоюзной конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". - М. - 1981.- С. 216-217.

21. Гайденко В.П. О применении резин в технологическом оборудовании биологического производства /Гайденко В.П., Попова В.М. //ЭИ Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности,- М.-1982.- №1. - С. 27-30.

22. Анисимова Л.В. Определение токсических свойств резин при культивировании пастерелл /Анисимова Л.В., Гайденко В.П., Попова В.М. //ЭИ Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. - М,-1984.-№1. - С. 4-6.

23. Попова В.М.Очистка и стерилизация воздуха в процессе культивирования клеток с помощью пористого титана и пористого фторопласта /Попова В.М., Батуров

В.И., Анащенко М.П. //Материалы Всесоюзной научно-практической конф. "Современные направления в развитии технологии производства и повышения качества электроизоляционных и фильтровальных материалов на целлюлозной основе".-Волжск,- 1986.-С. 137-138.

24. Попова В.М. Биологическая оценка резиновых изделий на культурах клеток /Попова В.М., Гвозденко Н.И., Пухова Н.М., Соловьев Б.В. //"Культивирование клеток животных и человека": Материалы III Всесоюзного совещания. - Пущино.-1990.-С. 131-132.

25. Попова В.М. Исследование деформационных свойств полимеров, предназначенных для уплотнительных изделий /Попова В.М. //Доклады IV Всесоюзной конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". - М. - 1991,- С. 230-231.

26. Гуславский А.И. Исследование методов разделения при очистке желудочного сока лошадей /Гуславский А.И., Школьников Е.Э., Попова В.М., Домнина Н.И., Качалов В.Н., Сысолин A.C. //Доклады IV Всесоюзной конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". - М. -1991.- С. 225.

27. Гуславский А.И. Процесс разделения и очистки хламидиосодержащей суспензии в технологии производства /Гуславский А.И., Школьников Е.Э., Попова В.М., Качалов В.Н., Самсонова Г.И. //Доклады IV Всесоюзной конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". - М. -1991.- С. 221.

28. Гуславский А.И. Исследование процесса получения ферментного препарата трипсина /Гуславский А.И., Школьников Е.Э., Попова В.М., Самсонова Г.И., Качалов В.Н., Ковальчук Л.И. //Доклады IV Всесоюзной конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". -М. -1991,- С. 226-227.

29. Попова В.М. Обессоливание альбумина методом электродиализа /Попова В.М., Сурмило А.П. //Доклады IV Всесоюзной конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". -М.-1991,- С. 192-194.

30. Гуславский А.И. Совершенствование способа изготовления трипсина сухого для вирусологических целей /Гуславский А.И., Попова В.М., Ночевный В.Т. //Материалы Всероссийская конференции 25-27 июня 1996 г. Моск. акад. Ветмедицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина. - М. -1996. - С. 45-46.

31. Гуславский А.И. Освоение производства трипсина сухого для вирусологических целей /Гуславский А.И., Попова В.М., Ночевный В.Т., Башашкина H.A. //Доклады V Всесоюзной конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково. - 1996.-С. 324-325.

32. Гуславский А.И. Трипсин сухой для вирусологических целей /Гуславский А.И., Попова В.М. //Доклады научно-производственной конференции "100 лет Курской биофабрике и агропромышленности России". - Курск. - 1996. - С. 100 -101.

33. Попова В.М.. Исследование процесса ультрафильтрации и диафильтрации неочищенных ферментов с помощью полых волокон /Попова В.М., Гуславский А.И. //Доклады V Всероссийской конференции "Научные основы технологии

промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково.

- 1996.- С. 209-210.

34. Попова В.М. Влияние процесса разделения на качество трипсина для вирусологических целей /Попова В.М., Гуславский А.И., Ночевный В.Т. //Доклады V Всероссийской конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково. - 1996. - С. 211.

35. Попова В.М. Разработка термостойких прокладок /Попова В.М., Гуславский А.И. //Доклады V Всероссийской конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". -Щелково, - 1996.-С. 235.

36. Попова В.М. Усовершенствование технологии получения трипсина /Попова В.М., Гуславский А.И., Самсонова Г.И. //Доклады V Всероссийской конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково. - 1996. - Щелково, 1996.- С. 322-323.

37. Попова В.М. Совершенствование способа изготовления трипсина сухого для вирусологических целей /Попова В.М., Гуславский А.И., Ночевный В.Т. //Доклады Всероссийской конференции "Инфекционные болезни молодняка с/х животных". - М. - 1996. - С. 100-102.

38. Фролова М.А. Использование метода ультрафильтрации в технологии получения сывороточного гонадотропина /Фролова М.А., Попова В.М., Емельянов Н.И., Гуславский А.И. //Доклады V Всероссийской конференции. - Щелково. - 1996.

- С. 212.

39. Попова В.М. Влияние разделения суспензии на качество ферментного препарата трипсина /Попова В.М., Гуславский А.И. //Материалы II Международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля с/х продукции " -М. - 1997. - 1 ч. - С. 56.

40. Попова В.М. Усовершенствование технологии получения трипсина сухого для вирусологических целей /Попова В.М., Гуславский А.И. //Материалы II Международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля с/х продукции " -М., 1997. - 1 ч. - С. 57.

41. Попова В.М. Очистка и стерилизация питательных сред и растворов трипсина /Попова В.М., Иванов B.C., Гуславский А.И. //Доклады Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 70-ю со дня рождения В.А. Першина "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов" (14 июля 1997). - Щелково. - 1998. - С. 48-49.

42. Попова В.М. Усовершенствование технологии изготовления трипсина сухого /Попова В.М., Гуславский А.И., Ночевный В.Т., Башашкина H.A. //Доклады Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 70-ю со дня рождения В.А. Першина. Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов (14 июля 1997). - Щелково. - 1998. - С. 4950.

43. Попова В.М. Очистка и стерилизация сред и растворов трипсина /Попова В.М., Иванов B.C., Гуславский А.И., Шишов П.В. //Доклады Всероссийской научно-практической конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково. - 1998. - С. 203.

44. Попова В.М. Трипсин сухой и его применение для культур клеток в вирусологической практике /Попова В.М., Гуславский А.И., Ночевный В.Т., Башашкина H.A. //Доклады Всероссийской научно-практической конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково. - 1998. - С. 208.

45. Попова В.М. Изучение влияния технологических факторов на качество и активность трипсина сухого для вирусологических целей /Попова В.М., Гуславский

A.И. //Материалы конференции "Производство и контроль медицинских, ветеринарных препаратов. Опыт применения реализации их в странах СНГ". 27-28 мая 1999. ФУП Покровский з-д биопрепаратов 30 лет со дня основания.- п. Вольгинский. - 1999,- С. 13

46. Гуславский А.И. Разработка технологии и технологической линии производства трипсина сухого для вирусологических целей /Гуславский А.И., Попова В.М., Ночевный В.Т. //Материалы конференции "Производство и контроль медицинских, ветеринарных препаратов. Опыт применения реализации их в странах СНГ". 27-28 мая 1999. ФУП Покровский з-д биопрепаратов 30 лет со дня основания, -п. Вольгинский. - 1999. - С. 14.

47. Гуславский А.И. Новые фильтрующие материалы для биотехнологии /Гуславский А.И., Попова В.М., Гуславская Т.А., Расчетнова Т.С. //Материалы конференции "Производство и контроль медицинских, ветеринарных препаратов. Опыт применения реализации их в странах СНГ". 27-28 мая 1999. ФУП Покровский з-д биопрепаратов 30 лет со дня основания. - п. Вольгинский. - 1999. - С. 15.

48. Попова В.М. Усовершенствование технологии изготовления и изучение свойств трипсина сухого для вирусологических целей. Автореф. дисс. канд. биолог. наук-М.1999.24 с.

49. Шишов П.В. Испытание сухого трипсина, предназначенного для вирусологических целей /Шишов П.В., Попова В.М., Гуславский А.И., Ночевный

B.Т. //Материалы Всероссийской конференции молодых ученых и аспирантов по птицеводству. - Сергиев-Посад. - 1999. - С. 38-39

50. Гуславский А.И. Вопросы очистки, разделения и концентрирования биологических жидкостей /Гуславский А.И., Попова В.М. //Доклады Всероссийской научно-практической конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов".-Щелково, 2000.- С. 308-309.

. 51. Гуславский А.И. Процессы разделения и концентрирования жидких систем в биотехнологии /Гуславский А.И., Попова В.М., Гуславский А.И., Еремец В.И., Гуславская Т.А. //Сборник статей Международной научно-практической конференции "Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными экзотическими и зооантронозными болезнями животных ".- Покров. - 2000. - С. 124125.

52. Гуславский А.И. Состояние производства фильтрующих материалов для биотехнологии /Гуславский А.И., Попова В.М., Гуславская Т.А., Канарский A.B. //Доклады Всероссийской научно-практической конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково - 2000. - С. 307308.

53. Попова В.М.Фильтрация питательных сред, растворов и сывороток /Попова В.М., Гуславский А.И. //Доклады Всероссийской научно-практической конференции

"Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". -Щелково-2000.-С. 312-313.

54. Попова В.М. Обессоливание белковых растворов /Попова В.М., Гуславский А.И., Сурмило А.П. //Доклады Всероссийской научно-практической конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". -Щелково. - 2000. - С. 313-314.

55. Попова В.М. Технологические аспекты производства трипсина сухого для вирусологических целей /Попова В.М., Гуславский А.И. //Доклады Всероссийской научно-практической конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково. - 2000.-С. 314-315.

56. Попова В.М. Разработка технологии и технологической линии производства трипсина сухого для вирусологических целей /Попова В.М., Соловьев Б.В., Гуславский А.И., Ночевный В.Т. //Доклад на семинаре - презентации инновационных научно-технических проектов "Биотехнология - 2000". - Пущино. - 2000. - С. 28.

57. Расчетнова Т.С. Процессы фильтрации жидких систем в биотехнологии /Расчетнова Т.С., Гуславский А.И., Попова В.М. //Сборник докладов Международной конференции молодых ученых "Научные основы производства ветеринарных биопрепаратов". - Щелково. - 2001. - С. 130-132.

58. Гуславский А.И. Эффективность добавки в рацион птиц природных цеолитов /Гуславский А.И., Лукина В.А., Пухова Н.М., Ярыгина Е.И, Попова В.М., Расчетнова Т.С., Бобычев В.А. //Сборник докладов Международной конференции молодых ученых "Научные основы производства ветеринарных биопрепаратов". -Щелково.-2002.-С. 131-133.

59. Попова В.М. Аспекты валидации процесса фильтрации биологических жидкостей /Попова В.М., Гуславский А.И., Соловьев Б.В., Расчетнова Т.С. //Сборник докладов Международной конференции молодых ученых "Научные основы производства ветеринарных биопрепаратов". - Щелково. - 2002. - С. 156-160.

60. Попова В.М. Разработка технологии производства трипсина сухого для биологических целей /Попова В.М., Соловьев Б.В., Гуславский А.И., Ночевный В.Т. //Сборник докладов Международной конференции молодых ученых "Научные основы производства ветеринарных биопрепаратов". - Щелково. - 2003. - С. 162-163.

61. Попова В.М. Разработка технологии получения трипсина /Попова В.М., Гуславский А.И., Ночевный В.Т., Егорова В.Н. //Доклады Всероссийской научно-практической конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково. - 2005. - С. 289-294.

62. Попова В.М. Иммобилизованный трипсин /Попова В.М., Ярыгина Е.И., Лукина В .А., Скороходова Л.А.//Доклады Всероссийской научно-практической конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково. - 2005. - С. 294-297.

63. Матвеева И.Н. Выделение биологически активного протеина А для использования в биологических исследованиях /Матвеева И.Н., Гринь С.А., Кузнецов Д.П., Мальгин Ю.А., Мальгина Т.А., Попова В.М. //Материалы Международной конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково. - 2005. - С. 421-423.

64. Матвеева И.Н. Получение биологически активного протеина А из золотистого стафилококка /Матвеева И.Н., Гринь С.А., Кузнецов Д.П., Мальгин ЮЛ.,

Мальгина Т.А., Попова В.М. //Материалы Международной конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково, 2005. -С. 423-425.

65. Попова В.М. Основные направления биотехнологии и систематизации биотехнологических процессов /Попова В.М. //Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 80-ю со дня рождения И.А. Хорькова, 15 декабря 2006 года, "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково. -2006. - С. 170-172.

66. Попова В.М. Разработка технологии производства трипсина сухого для биологических целей /Попова В.М., Гуславский А.И., Ночевный В.Т. //Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 80-ю со дня рождения И.А. Хорькова, 15 декабря 2006 года, "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". -Щелково. - 2006. - С. 163-169.

67. Попова В.М. Испытание фильтра тонкой очистки биологических жидкостей /Попова В.М., Кочиш И.И., Гуславский А.И, Иванов С.Д. //Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 40-ю института, 910 декабря 2009г., "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково, 2009. - С. 429-430.

68. Попова В.М. Оценка свойств трипсина при длительном хранении /Попова В.М., Гуславский А.И., Кочиш И.И. //Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 40-ю института, 9-10 декабря 2009г., "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". -Щелково, 2009. - С. 434-435.

69. Рубан Е.А. Совершенствование технологии производства противовирусных препаратов /Рубан Е.А., Раевский A.A., Гуславский А.И., Попова В.М., Кочиш И.И., Беро И.Л. //Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 40-ю института, 9-10 декабря 2009г., "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково, 2009. - С. 413-418.

70. Попова В.М. Химическая очистка трипсина /Попова В.М., Гуславский А.И., Кочиш И.И. //Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 40-ю института, 9-10 декабря 2009 г., "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково, 2009. - С. 432-434.

71. Попова В.М. Обеспечение стерильных условий при культивировании клеток животных и микроорганизмов в биореакторах /Попова В.М., Раевский A.A., Гуславский А.И., Беро И.Л., Кочиш И.И., Дадасян АЛ. //Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 40-ю института, 9-10 декабря 2009 г., "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". -Щелково, 2009. - С. 418-421.

72. Попова В.М. Фильтровальный картон для осветления и стерилизующей фильтрации биопрепаратов /Попова В.М., Гуславский А.И., Кочиш И.И., Канарский A.B. //Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 40-ю института, 9-10 декабря 2009г., "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - Щелково, 2009. - С. 430-431.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АВИ аденовирусная инфекция крупного рогатого скота

БМ болезнь Марека

ВБА вирус болезни Ауески

ВГИ вирус герпеса индеек

ВД-БС вирусная диарея-болезнь слизистых

ВНК-21 перевиваемая линия клеток почки сирийского хомячка

ВЧП вирус чумы плотоядных

ГЛА гидролизат лактальбумина

ИББ инфекционная бурсальная болезнь птиц

ИП индекс пролиферации

ИРТ инфекционный ринотрахеит

ИФА иммуноферментный анализ

КККЭ культура клеток куриных эмбрионов

ККПЭ культура клеток перепелиных эмбрионов

КРС крупный рогатый скот

КФБЖ картон фильтровальный для биологических жидкостей

КФМП картон фильтровальный для медицинских препаратов

МН микроносители

мпк микропроцессорный комплекс

МОВК перевиваемая линия почек телят

млск перевиваемая линия почек собак

нтд нормативная техническая документация

ОФС осадительно-фильтрующая центрифуга

пвэс парвовирусный энтерит собак

пг-з парагрипп-3

ПК почка крольчат

пкш почка кошек

плк перевиваемая линия клеток

ПС питательная среда

ПТ-80 перевиваемая линия клеток почки теленка

пщ почка щенка

пэк почка эмбрионов коров

РА рост (рост стимулирующая активность в баллах)

РС респираторно-синцитиальная инфекция

СК сыворотка крови

СПЭВ перевиваемая линия почек свиней

ТБ текстулы быка

тп трипсин

тс трипсин сухой для вирусологических целей

УК урожай клеток

ФП фильтр-пластины для предварительной фильтрации

ФТ фильтр-пластины для тонкой фильтрации

ФС фильтр-пластины для стерилизующей фильтрации

ФЭК фибробласты эмбрионов кур

ФЭП фибробласты эмбрионов перепелов

ЦПД цитопатогенное действие вирусов

цпи цитопатические изменения в культуре клеток

Заказ № 261. Объем 2 п.л. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ООО «Петроруш». г.Москва, ул.Палиха 2а.тел.(499)250-92-06 www.postator.ru

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Попова, Вера Михайловна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Важнейшие этапы развития биотехнологии.

2.2. Объекты биотехнологии.

2.3. Прогресс биотехнологии при создании биопрепаратов и ферментов.

2.4. Биотехнологические процессы микробиологических, вирусологических, ферментных производств и их вооруженность.

2.5. Использование полимерных материалов в биотехнологии.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1.1. Материалы

3.1.2. Оборудование.

3.1.3. Методы.

3.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.2.1. Усовершенствование технологии получения фермента трипсина.

3.2.1.1. Разработка технологических процессов изготовления трипсина.

3.2.1.2. Разработка технологической линии промышленного производства трипсина.

3.2.1.3. Освоение опытно-промышленной технологии производства трипсина.

3.2.1.4. Использование трипсина при культивировании клеток в производстве противовирусных вакцин.

3.2.2. Разработка и применение полимерных композиций в технологии производства биопрепаратов.

3.2.2.1. Разработка способа иммобилизации трипсина на полимерном носителе.

3.2.2.2. Разработка полимерных материалов для биотехнологического оборудования.

3.2.2.3. Определение токсичности полимерных материалов с использованием микроорганизмов и на культуре клеток.

3.2.3. Усовершенствование способов культивирования клеток при культивировании вирусов.

3.2.4. Усовершенствование способа глубинного культивирования золотистого стафилококка St.aures для получения протеина А.

3.2.5. Усовершенствование технологии различных методов очистки биологических растворов.

3.2.5.1. Применение материалов на безасбестовой основе для предварительной, тонкой и стерилизующей фильтрации биологических растворов.

3.2.5.2. Применение микрофильтрации и ультрафильтрации для очистки биологических растворов.

3.2.5.3. Применение электродиализа для очистки альбумина от солей сульфата аммония.

4. ОБСУЖДЕНИЕ.

5. ВЫВОДЫ.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка и совершенствование биотехнологических процессов при промышленном производстве биопрепаратов"

Актуальность темы. Развитие биотехнологии обусловлено общим прогрессом науки и техники. Совершенствование промышленной технологии производства биопрепаратов наиболее успешно осуществляется при совместном решении биотехнологических и технических вопросов. Разработка биотехнологических процессов при культивировании клеток, вирусов и бактерий, выделении энзимов является актуальной проблемой при получении эффективных биопрепаратов (Грачев В.М., 1985; Спиер P.E. и Гриффите Дж., 1989; Блинов Н.П., 1995; Дьяконов Л.П., 2000; Хапчаев Ю.Х., 2003; Жарникова И.В., 2004; Беклемишев А.Б., 2004; Албулов А.И., 2004; Самуйленко А .Я., Рубан Е.А., 2005; Соловьев Б.В., 2005; Тихонов И.В., 2005; Гуславский А.И., 2007; Жданова H.A., 2009).

Т.Е., Сенько Е.Ф., 1981; Рубан Е.А., Соловьев Б.В., Самуйленко А .Я, 2005). Суспензионный и псевдосуспензионный (на микроносителях) методы культивирования микроорганизмов создают равноценные условия по всему объему сосуда, позволяют контролировать и регулировать необходимые параметры (pH, рОг, еН, t), осуществлять контроль роста клеток, исключать возможность контаминации, способствовать экономии питательной среды (Сергеев В.А., 1976; Голубев Д.Б., Сомнина A.A., Медведева М.Н., 1976; Осидзе Д.Ф., 1976; Новохатский A.C., 1979; Тарасов В.П., 1990; Гаврилюк Б.К., Сафронов В.П., 1981; Ночевный В.Т., 1994; Дьяконов Л.П., Ситьков, 2000; В.И. Хапчаев Ю.Х., 2003; Тихонов И.В., Рубан Е.А., Самуйленко А.Я, 2005; Жданова H.A., 2009). Осуществление крупномасштабного культивирования клеток в суспензии и на микроносителях в реакторах специального назначения отечественного производства связано со сложностью обеспечения стерильности процесса. Исключение контаминации культуральной жидкости посторонней микрофлорой и попадания продуктов биосинтеза в окружающую среду, поддержание, контроль и регулирование процессом являются важнейшими факторами.

Важными этапами при приготовлении питательных и защитных сред, сывороток, ферментов в производстве вирусных вакцин и бактерийных препаратов являются их очистка, разделение и концентрирование, стерилизация. Выбор методов их осуществления представляет сложную задачу, и зависит от качественной характеристики жидкости (Тихонов И.В., 2005). Применение мембранных способов очистки, разделения и концентрирования позволяет создать экологически безопасные, энергосберегающие технологические процессы (Фридлянский И.И., 1976; Дытнерский Ю.И.; 1986, Платэ H.A., 1999; Тимашов С.Ф., 2000; Шапошник В.А., 2001; Дубяга В.П., Бесфамильный И.Б., 2005; Свитцев A.A., 2007; Гуславский А.И., 2007; Андреева И.С., 2009).

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- усовершенствовать технологию промышленного производства трипсина;

- усовершенствовать способ глубинного культивирования золотистого стафилококка St. aureus для получения биологически активного протеина А; усовершенствовать технологию различных методов очистки биологических растворов при микрофильтрации, ультрафильтрации и электродиализе: определить область применения безасбестовых материалов и мембранных фильтров для предварительной, тонкой и стерилизующей фильтрации, при разделении и концентрировании жидкостей с использованием отечественного оборудования; разработать технологию получения очищенного альбумина, применяемого в качестве компонента питательной среды при культивировании лептоспир с помощью ультрафильтрации и электродиализа.

Научная новизна. Усовершенствована технология производства трипсина с применением способов центрифугирования при разделении суспензии после экстрагирования и высаливания фермента и последующего распылительного или сублимационного высушивания, обеспечивающих высокое качество препарата, не требующих его дополнительного измельчения и просеивания препарата.

Определены технологические параметры культивирования перевиваемых линий клеток ПТ-80, ВНК-21/13 в суспензии и псевдосуспензии на микроносителях в биореакторах с магнитным приводом и аэрацией культуры.

- Разработан модуль технологической обвязки для биореакторов (0,005; 0,025; 0,1; 0,25м'). Отработана технология культивирования перевиваемых клеток в биореакторах с использованием специализированного отечественного оборудования, оснащенного фильтрами тонкой очистки воздуха и пара с фильтрующими элементами из пористого титана; запорной малогабаритной и регулирующей арматурой, обеспечивающей осуществление технологических операций в автоматическом режиме.

- Разработаны полимерные композиции, которые применены в биологическом оборудовании в качестве конструкционного материала, стойкие к биологическим и химическим средам, температурным факторам (авторские свидетельства: № 384361 бюл. - 1973. - № 43. - С. 167; № 701129 бюл. - 1979. -№ 44. - С. 193; № 770126 бюл. - 1980. - № 37. - С. 308; № 7833Пбюл. - 1980. -№44.-С. 110).

Технологический регламент производства трипсина сухого для вирусологических целей", утвержденный 01.06.1995 г., директором ВГНКИ и директором ГНУ ВНИТИБП.

Технические условия ТУ 9358.013.00008064-96 "Трипсин сухой для вирусологических целей", утвержденные 04.03.1996 г., директором ВГНКИ и согласованные 07.03. 1996 г. Департаментом ветеринарии МСХ РФ.

Наставление по применению трипсина сухого для вирусологических целей", утвержденное 04. 03. 1996 г. № 13-6-2/540, Департаментом ветеринарии МСХ РФ.

- Усовершенствована предварительная, тонкая и стерилизующая фильтрация биологических растворов с помощью материалов на безасбестовой основе. Определены условия и возможность использования в биопромышленности экологически безопасных, исключающих фазовые переходы, процессов микрофильтрации и ультрафильтрации; усовершенствован метод очистки альбумина с помощью электродиализа при получении питательной среды для культивирования лептоспир в промышленных условиях.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту: - технологические процессы изготовления трипсина;

- усовершенствование технологии культивирования перевиваемых клеток животных при получении вирусных препаратов суспензионным и псевдосуспензионным способами (на микроносителях) в биореакторах; усовершенствование глубинного культивирования золотистого стафилококка St. aureus для получения биологически активного протеина А;

- технология обессоливания альбумина с помощью электродиализа в условиях промышленного производства.

Апробация работы. Материалы исследований доложены и обсуждены:

- на заседаниях Ученого совета ГНУ ВНИТИБП (1980-2009 гг.) в виде ежегодных отчетов по заданиям научно-технической программы (НТП) (19802009 гг.), фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса (АПК) Российской Федерации (РФ) на 2006-2010 гг.; на 23 Всесоюзных, Республиканских, Международных и Всероссийских, совещаниях, семинарах, конференциях, посвященных научным и практическим проблемам технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов и биотехнологии, проводившихся в Москве, Владимире, Щелкове, Волжске, Курске, Сергиев-Посаде, Покрове, Краснодаре, (1981-2009 гг.); на секции "Ветеринарная биотехнология" (2011 г).

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)", Попова, Вера Михайловна

5. ВЫВОДЫ

2. Применение трипсина позволило получить первичные культуры клеток (ФЭК, ФЭП, ПЭК, ТБ, ПК, ПКШ, ПЩ) и перевиваемые линии клеток (МБВК, МОСК, СПЭВ), которые обладали равноценной чувствительностью к вирусам и обеспечивали максимальное их накопление в производстве вакцин против болезни Марека, инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 крупного рогатого скота и парвовирусного энтерита собак. Подтверждена пригодность трипсина при производственном получении культур клеток ФЭП и выращивании штамма ФС-126 вируса герпеса индеек и штамма ЭПМ вируса чумы плотоядных.

5. Усовершенствована технология псевдосуспензионного и суспензионного культивирования первичных и перевиваемых клеток в л биореакторах (объемом - 0,005; 0,025; 0,100; 0,250 м) с системой технологической обвязки.

6. Усовершенствована технология глубинного культивирования золотистого стафилококка St. aureus в биореакторе АК-210 объемом 0,01м3; определены условия получения культуры, используемой для выделения биологически активного протеина А: при температуре культивирования 37 °С, скорости перемешивания 100 об/мин, pH 7,2 и аэрации воздухом со скоростью 1,4 л/мин, посевной дозе культуры 50 млн.кл/мл и конечной концентрации St. aureus - 1,9 млрд. кл/мл.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты исследований включены в следующие документы.

- Технологический регламент производства трипсина сухого для вирусологических целей, 01.06.1995г.;

- Технические условия ТУ 9358.013.00008064-96 " Трипсин сухой для вирусологических целей", 04.03.1996г.;

- Наставление по применению трипсина сухого для вирусологических целей, 04.03.96г., № 13-6-2/540.

- Методические рекомендации по определению специфических антител к антигенам вирусов инфекционного ринотрахеита (ИРТ), парагриппа-3 (ПГ-3), респираторно-синцитиальной инфекции (PC), вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС), аденовирусной инфекции крупного рогатого скота (АВИ) в комплексной тест-системе иммуноферментного анализа (ИФА), рассмотренные и одобренные 21 сентября 2007 года на секции "Ветеринарная биотехнология" ОВМ РАСХН, протокол №1, утвержденные 18.03.2008г.

6. Технологический регламент "Вирус - вакцина сухая культуральная против болезни Марека из штамма ФС-126 М вируса герпеса индеек, утвержден ВНИТИБП 28.12.1990 г.

8. Разработаны полимерные композиции из теплостойких биологически инертных материалов для технологического оборудования биопроизводств. Получены авторские свидетельства (авт. св. № 701129, "Резиновая смесь на основе фторуглеродных каучуков", бюл. - 1979. - № 44. - С.193.; авт. св. № 770126, "Резиновая смесь на основе фторкаучука", бюл. - 1980. - № 37. - С.308; авт. св. № 783311, "Резиновая композиция на основе сополимера винилиденфторида", бюл. - 1980. - № 44. - С.110). Материалы использованы на Щелковском биопредприятии (акты об использовании предложения от 16.02.09г.).

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Попова, Вера Михайловна, Щёлково

1. Адаме Р. Методы культивирования клеток для биохимиков. М.- 1983.- 264 с.

2. Аиба Ш. Биохимическая технология и аппаратура / Аиба ИТ., Хемфри А., Миллис Н. М.: Пищевая промышленность. - 1976. - 587 с.

3. Акиныпина Т.В. Разработка набора реагентов для оценки эффективности поствакцинального иммунитета к вирусу бешенства в серологических реакциях. Дисс. канд. биолог, наук. Щелково. - 2005. - 141 с.

4. Албулов А.И. Разработка промышленных технологий производства сорбентов и биологически активных препаратов из гидробионтов для ветеринарии и других отраслей народного хозяйства. Автореф. дисс. докт. биолог, наук. Щелково. - 2004. - 59 с.

5. Александров В.Я. Клетки, макромолекулы и температура. Л.: Наука.- 1975.-722 с.

6. Алексеева Ю.И. Модификация синтетических латексов полисахаридами. Автореф. дисс. канд. хим. наук. М. - 1992. - 24 с.

7. Алферов В.Б. Режим стерилизации жидкой питательной среды в глубинном производстве кишечных вакцин / Алферов В.Б., Богачев Р.И. // В кн. Труды Ташкентского НИИ вакцин и сывороток. Ташкент. - 1961. - Т. VI (20).-24 с.

8. Альберте Р. Молекулярная биология клетки / Альберте Р., Брей Д., Льюис Дж. и др. М. - 1986. - Т. 1. -223 с.

9. Аль-Хаварин Д. И. Синтез функциональных полимерных суспензий для иммунологических исследований. Автореф. дисс. канд. хим. наук. М.: МИТХТ. 1994. - 24 с.

10. Ю.Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях / Анджапаридзе О.Г., Гаврилов В.И., Семенов Б.Ф., Степанова Л.Г. М.: Медицинская литература. - 1962. - 285 с.

11. Андреевская Н.М. Влияние антиоксидантов на стабильность диагностических сывороток в процессе хранения / Андреевская Н.М., Михайлова В.А., Каретникова Э.С. // Биотехнология. 1998. - № 4.- С. 68-71.

12. Андрианов Г.П. Физико-химия полиолефинов. М.: Химия. - 1974.143 с.

13. Артемова JI.B. Диагностическая значимость ПЦР в расшифровке этиологии инфекций, вызванных условно-патогенными возбудителями. Дисс. канд. биолог, наук. -М. 2005. - 121 с.

14. Артюхов H.A. Разработка процессов мембранной очистки ферментных растворов. М. - 1994. - 157 с.

15. Афонин Н.И. Способ получения эмульсии перфторсоединений / Афонин Н.И., Доронина H.H., Терешина Е.В., Апросин Ю.Д. // патент SU 1251679 А, 1986.

16. Ахмедов A.M. Белки сыворотки крови при инфекционных болезнях животных. М.: Колос. - 1968. - 168 с.

17. Байбаков В.И. Биотехнология. 1989. - 5. № 1 - С. 61-64.

18. Байрак В.А. Практикум по ветеринарной микробиологии / Байрак В.А., Беляев В.М., Гительсон С.С. и др. М.: Колос. - 1980 - 216 с.

19. Баранов С.А. Оптимизация крупномасштабного культивирования гибридомных клеток //Биотехнология. 1995. - № 12. - С. 3-7.

20. Баснакьян И.А. Культивирование микроорганизмов в переменных условиях. М.: Наука. - 1982. - 120 с.

21. Баснакьян И.Н. Оптимизация культивирования микроорганизмов в иммунобиологии // Микробиология. 1989. - № 5. С. 28-37.

22. Басырева Л.Ю. Создание диагностических тест-систем на основе полимерных суспензий и факторы, определяющие их чувствительность и специфичность. Дисс. канд. хим. наук. М.: МИТХТ. - 1994. - 127 с

23. Батченко Г.В. Выделение, идентификация и характеристика изолятов инфекционного бронхита кур и инфекционного ларинготрахеита птиц. Дисс. канд. биолог, наук. Владимир. - 2004. - 156 с.

24. Башашкина H.A. Стандартизация методов контроля культуральных питательных сред и компонентов. Автореф. дисс. канд. биол. наук. М. - 1994. -25с.

25. Бейли Дж. Основы биохимической инженерии / Бейли Дж., Олисс Д. М.: Мир. - 1989. - Т.2. - 590 с.

26. Бекер М.Е. Биотехнология / Бекер М.Е., Лиепиныш Г.К., Райпулис Е.П. М.: ВО Агропромиздат. - 1990. - 334 с.

27. Бекер М.Е. Введение в биотехнологию. М.: Пищевая промышленность. - 1978. - 231 с.

28. Беклемишев А.Б. Использование методов молекулярной биологии и генной инженерии для конструирования вакцинных и диагностических препаратов. Дисс. докт. биолог, наук. Новосибирск. - 2004. - 413 с.

29. Беклемишев А.Б. Способ иммобилизации ДНК на полистирольных планшетах / Беклемишев А.Б., Ярмолинская Е.В., Филимонов Н.Г., Мартакова H.A. / Авт. свид. SU IV 1679775, 1991.

30. Белов A.A. Влияние текстильных носителей на свойства иммобилизованного трипсина / Белов A.A., Рыльцев В.В., Игнатюк Т.Е., Филатов В.Н. // Хим. волокна. 1992. - № 3. - С. 33-34.

31. Биологические мембраны. Методы / Под ред. Дж. Финдлея, У. Эванза, М.: Мир. - 1990. - 424 с.

32. Биотехнология. / Отв. Редактор A.A. Баев.- Наука. М., 1984. - 311 с.

33. Биотехнология. В 8 ми томах. / Под ред. Н.С. Егорова, В.Д. Самуилова. Уч. пособие для вузов. - М.: Высшая школа. - 1987. - 159 с.

34. Биотехнология 2000 // Тезисы семинара инновационных научно-технических проектов 26-28 сентября 2000 - Пущино. - 2000. - 196 с.

35. Биотехнология и биоинженерия. В 3 х томах. // Аппаратура и управление. - Рига: Зинатне. - 1978. - Т. 3. - 138 с.

36. Биотехнология клеток животных. В 2-х томах. / Под ред. P.E. Спиера и ДЖ Гриффитса. М.: ВО Агропромхимиздат. - 1989. - Т. 1. - 365 е., Т. 2. -518 с.

37. Биотехнология: принципы и применение. / Под ред. И. Хиггинса. Д. Беста, Дж. Джонса. М.: Мир. - 1988.- 479 с.

38. Биотехнология растений. / Под ред. С.Х. Мантелла и X. Смита. М.: ВО Агропромиздат. - 1987. - С. 241-244.

39. Бирюков В.В. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза / Бирюков В.В., Кантере В.М. М.: Наука. -1985.-293 с.

40. Блинковский A.M. Способ получения иммуносорбента / Блинковский A.M., Демина A.A., Покровский В.И. и др. // Патент SU 1356738 А 1, 1985.

41. Богрянцева М.П. Технология изготовления питательной среды сухой стерильной на основе гидролизатов. Автореф. дисс. канд. биолог, наук. -Новосибирск. 1999. - 28 с.

42. Бобровская И.В. Антигенные свойства инфекционных и термоинактивированных препаратов вакцинных штаммов вируса болезни Марека. Автореф. дисс. канд. биолог, наук. Щелково. - 2000. - 28 с.

43. Борисович Ю.Ф. Ветеринарные препараты: Справочник / Сост.: Борисович Ю.Ф., Кириллов Л.В.; Под ред. Д.Ф.Осидзе М.: Колос. - 1981. -448 с.

44. Букалов В.П. Вулканизуемая резиновая смесь на основе фторкаучука / Букалов В.П., Тусеев А.П. Авт. свид. 546630, оп. 15.02.77.

45. Буряков А.Н. Синтез магнитовосприимчивых полимерных дисперсий биомедицинского назначения. Дисс. канд. хим. наук.- М. 2000. -154 с.

46. Быков В.А. Расчет процессов микробиологических производств / Быков В.А., Винаров А.Ю., Шерстобитов В.В. Киев: Техника. - 1985. - 215 с.

47. Вагиков В.И. Средства и методы стерилизации, применяемые в медицине. М.: Медицина. - 1973. - 104 с.

48. Варфоломеев С.Д. Биотехнология. Кинетические основы микробиологических процессов / Варфоломеев С.Д., Калюжный C.B. М.: Высшая школа. - 1990. - 296 с.

49. Васильев H.H. Моделирование процессов микробиологического синтеза / Васильев H.H., Амбросов В.А., Складнев A.A. М.: Лесная промышленность. - 1975. - 293 с.

50. Васильев А.П. Разработка твердофазного иммуноферментного анализа для прямого обнаружения антигенов вируса классической чумы свиней. Дисс. канд. биолог, наук. Покров. - 2005. - 122 с.

51. Величко A.B. Методы получения и свойства трипсина сухого стерильного квалификации " для культур клеток". Автореф. дисс. канд. биолог, наук. М. - 1996.-24 с.

52. Величко A.B. Сухой трипсин диспергент для получения культур клеток // Цитология. - М. - 1994. - Т. 36. № 6 - С. 548 - 554.

53. Веселов А.И. Технологическое оборудование витаминных и микробиологических производств. М.: МТИПП. - 1984. - 108 с.

54. Виестур У.Э. Биотехнология. Биотехнологические агенты, технология, аппаратура / Виестур У.Э., Шмите И.А., Жилевич А.В. Рига, Зинатне,. - 1987. -263 с.

55. Виестур У.Э. Культивирование микроорганизмов / Виестур У.Э., Кристапсонс М.Ж., Былинкина Е.С. М.: Пищевая промышленность. - 1980. -232 с.

56. Вирник А.Д. Получение клеток и волокон, содержащих протеолитические ферменты / Вирник А.Д., Гостищев В.К., Кильдеева Н.Р. и др. // Прикладн. биохимия и микробиология. 1987. - Т. 23. - № 1. - С. 78 - 83.

57. Вольф JI.A. Ферментативные волокна для пищевой промышленности и медицины / Вольф JI.A., Хохлова В.А. // Получение и применение волокна со специфическими свойствами: Сб. Мытищи. - 1980. - С. 91 - 101.

58. Воробьева Л.И. Промышленная микробиология. М.: МГУ. 1989.294 с.

59. Воробьева Г.А. Химическая стойкость полимерных материалов М.: Химия. - 1981.-296 с.

60. Воронин Е.С. Контаминанты ветеринарных вирусных вакцин. М.: Агропромиздат. - 1986. - 161 с.

61. Вудворд Дж. Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы. -М.:Мир. 1988. - 159 с.

62. Гайденко В.П. Запорная арматура для ферментеров / Гайденко В.П. Слюнявчиков А.Ф. // Тезисы докладов симпозиума Биотехнология ибиоинженерия в 3-х томах. Аппаратура и управление. Рига: Зинатне. - 1978. -Т.З.-С. 33-35.

63. Гайденко В.П. Технологическая обвязка биореакторов / Гайденко

64. B.П., Назаркина Н.И. // Экспресс-информация. "Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности ". М. 1981. - № 2.1. C. 3-4.

65. Галаев И.Ю. Новые методы аффинной очистки белков. Аффинное осаждение / Галаев И.Ю., Маттиассон Б. Н. // Биохимия. 1997.- Т.62, вып. 6. -С. 669-676.

66. Галил-Оглы Ф.А. Способ пластификации резиновых смесей на основе фторкаучука / Галил-Оглы Ф.А., Гилинская Н.С. Авт. свид. 267886, оп. 28.10.71.

67. Галил-Оглы Ф.А. Фторкаучуки и резины на их основе / Галил-Оглы Ф.А. Новиков A.C., Нудельман З.Н. М.: Химия. - 1966. - 236 с.

68. Гендон Ю.З. Культуральные гриппозные вакцины // Вопросы вирусологии. 2002. - С. 4-11.

69. Гендон Ю.З. Успехи в разработке культуральных гриппозных вакцин // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2002. - № 5. - С. 25-30.

70. Гербова JI.B. Производство изделий медицинского назначения на основе силоксановых каучуков / Гербова Л.В., Рушанова И.М. // Тем. сборн. сер. произв. РТИ и АТИ. М.: ЦНИИТЭНефтехим. - 1982. - 45 с.

71. Гетман Е.В. Технологические этапы изготовления культуральной вакцины против инфекционной бурсальной болезни птиц. Автореф. дисс. канд. биолог, наук. М. - 2000. - 31 с.

72. Глупушкин П.М. Кабельные резины / Глупушкин П.М., Саакян А.Е., Щербаков Д.П.- М., Л. 1966. - 356 с.

73. Голубев Д.Б. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии / Голубев Д.Б., Соминина A.A., Медведева М.Н. Ленинград: Медицина. - 1976. - С. 1-89.

74. Горшков A.B. Исследование вулканизации полидиметилвинил-силоксанового каучука. Автореф. дисс. канд. хим. наук. М. - 1980. - 25 с.

75. Грачева И.М. Технологическое проектирование предприятий ферментной промышленности / Грачева И.М., Калунянц К.А., Кестельман В.Н. и др. М.: Пищевая промышленность. - 1973 - 288 с.

76. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов. М.: Пищевая промышленность. - 1975. - 392 с.

77. Грачева Н.Я. Разработка и исследование резин с мицеллиальными отходами производства бенилпенициллина и модифицирующей системой на их основе: Автореф. дисс. канд. техн. наук. Л. - 1990. - 20 с.

78. Гребенюк В.Д. Обессоливание воды ионитами / Гребенюк В.Д., Мазо A.A. М.: Химия. - С. 1-51.

79. Григорьевская И.И. Антительные тест-системы на основе полимерных суспензий для мониторинга биополлютантов и биологически важных соединений. Дисс. канд. хим. наук. М. - 2005. - 162 с.

80. Грицкова И.А. Адсорбция белков на полистирольных микросферах и постановка реакции латекс-агглютинации / Грицкова И. А., Ну се Т.В., Дорохова Е.А. // Коллоид, ж.- 1994. Т.56 - №4. - С. 491 - 495.

81. Гуль В.Е. Акутин М.С. Основы переработки пластмасс. М.: Химия. - 1985.-400 с.

82. Гуль В.Е. Структура и прочность полимеров. 2 изд. M.: Химия. -1971.-344.

83. Гуславский А.И. Высокоэффективные аппараты для разделения, очистки и концентрирования жидких систем и новые биотехнологические процессы на их основе. Автореф. дисс. докт. техн. наук Щ. - 2007. 55 с.

84. Давыдова Г.А. Разработка новых биоматериалов типа "искусственная кожа" на основе фторполимерного латекса модифицированного полисахаридами. Дисс. канд. физ.-мат. наук.- Пущино. 2005. - 122 с.

85. Данченко Г.Н. Выделение хламидиоза индеек, изучение его биологических свойств и получение штамма, адаптированного к культурам клеток. Автореф. дисс. канд. ветер, наук. СПб. - 1995.- 16 с.

86. Джарылгасов С.А. Качество материалов для культуры клеток применяемых в биотехнологии / Джарылгасов С.А., Борисова С.М., Пухова Н.М. и др. // Обзорн. инф. Микробиологическая промышленность. Вып. 3.- М., 1987. 29 с.

87. Диксон М.П. Ферменты / Диксон М.П., Уэбб Э. М.: Мир - 1982 .-Т.1.-389 с.

88. Добыш C.B. Разработка и изучение нового поколения перевязочных средств на основе модифицированных полимерных материалов: Дисс. докт. техн. наук в форме научн. докл. M. - 1999. - 68 с.

89. Догадкин Б.А. Химия эластомеров.- М.: Химия 1972. - 391 с.

90. Долгов О.Н. Кремнийорганические жидкие каучуки и материалы на их основе / Долгов О.Н., Воронков М.Г., Гринблат М.П. М.: Химия - 1975. -112 с.

91. Донцов A.A. Влияние термомеханических воздействий на структуру и свойства фторкаучука СКФ-26 и его вулканизатов / Донцов A.A., Иванов A.A., Трещалов В.И. Чулюкина A.B. // Каучук и резина. 1977. - С. 21-24.

92. Донцов A.A. Каучук-олигомерные композиции в производстве резиновых изделий / Донцов A.A., Канаузова A.A., Литвинова Т.В. М.: Химия.- 1988.-216 с.

93. Дрыгин В.В. Молекулярные методы диагностики вирусных болезней животных (на примере ящура, инфекционной бурсальной болезни и инфекционного бронхита кур). Автореф. Дисс. докт. биолог, наук. Покров. -2005.-51 с.

94. Дьяконов Л.П. Культура клеток и тканей животных / Дьяконов Л.П., Глухов В.Ф., Поздняков A.A. и др. // Учебно-методическое пособие. -Ставрополь. 1980. - 112 с.

95. Дытнерский Ю.И. Баромембранные процессы. М.: Химия. - 1986.271 с.

96. Евчик B.C. Модификация резин на основе фторкаучуков. М. - 1986.- 64 с.

97. Егоров Н.С. Проблемы и перспективы / Егоров Н.С., Олескин В.Д., Самуилов В.Д. // Биотехнология: В 8-ми книгах / Под ред. Н.С. Егорова, В.Д. Самуилова. М.: Высшая школа. - 1987. - Кн. 1. - 159 с.

98. Егоров A.M. Теория и практика иммуноферментного анализа / Егоров A.M., Осипов A.M., Дзинтаев Б.Б., Гаврилова Е.М. М.: Высшая школа.- 1991.-288 с.

99. Блинов Н.П. Основы биотехнологии. СПб.: Наука. - 1995. - 600 с.

100. Блинов Н.П. Химическая микробиология. М.: Высшая школа, 1989.- 295 с.

101. Ермолаев Е.Д. Применение ультрафильтрации для выделения и очистки ферментов. // Методы получения высокоочищенных ферментов. Тезисы Всесоюзн. симп. Вильнюс. - 1978. - С. 21-22.

102. Жамбалова А.П. Разработка новых биоматериалов для решения задач тканевой инженерии / Жамбалова А.П., Давыдова Г.А. // Тезисы 9 международной конференции молодых ученых. "Биотехноллогия наука XXI века". - Пущино. - 2005. - С. 114.

103. Жарникова И.В. Методические подходы и разработки биотехнологии иммунобиологических препаратов для диагностики инфекционных особо опасных заболеваний и детекции их возбудителей. Дисс. докт. биолог, наук.- Ставрополь. 2004. - 313 с.

104. Захарченко П.И. Справочник резинщика. Материалы резинового производства / П.И. Захарченко, Ф.И. Яшунская, В.Ф. Евстратов, П.Н. Орловский, М.: Химия. - 1971. - 608 с.

105. Зубкова Л.Б. Синтетические ионообменные материалы /Зубкова Л.Б., Тевлина A.C., Даванкова А.Б.- М.,: Химия. 1978. - 183 с.

106. Иванов Н.П. Научные основы разработки диагностических препаратов из бруцелл. Дисс. докт. ветер, наук. - Казань. - 1984. - 42 с.

107. Игнатюк Т.Е. Перевязочные материалы с металлокомплексами на основе иммобилизованного трипсина / Игнатюк Т.Е., Медушева Е.О., Белов и др. // Тезисы докл. IV симпоз. "Химия протеолитических ферментов". М., ИБХ РАН. - 1997. - С. 146.

108. Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы. / Под ред.Дж. Вудворда. М.: Мир. - 1988. - 215 с.

109. Иммобилизованные ферменты. Современное состояние и перспективы /2 т. Под ред. И.В. Березина, В.К. Антонова, К. Мартеника. М.: МГУ. - 1976. - Т. 1 - 296 с. - Т. 2. - 358 с.

110. Ионитные мембраны. Гранулы. Порошки. // Каталог. М.: НИИТЭХИМ, НИИПМ. 1977. - 31 с.

111. Кадималиев Д. А. Биотехнология нетоксичных композиционных материалов из отходов растительного сырья и микробиологической промышленности. Дисс. докт. биолог, наук. М. - 2003. - 339 с.

112. Калунянц К.А. Машины и аппараты для микробиологического синтеза /Калунянц К.А., Голгер Л.И., Завьялов Ю.Ф. М.:Наука. - 1985. - 288 с.

113. Калунянц К.А. Оборудование микробиологических производств / Калунянц К.А., Голгер Л.И., Балашов В.Е. М.:Агропромиздат. - 1987. - 398 с.

114. Канарский A.B. Структурные и функциональные свойства фильтровальных видов бумаги и картона: Дисс. докт. техн. наук. СПб. - 1994. -51 с.

115. Каримуллина И.Г. Оптимизация технологии культивирования вирусов парагриппа 3, инфекционного ринотрахеита и хламидий при разработке ассоциированной вакцины. Дисс. канд. биолог, наук. - Казань, 2004. - 132 с.

116. Карпов A.M. Сушка продуктов микробиологического синтез / Карпов A.M., Улумеев A.A. М.: Легкая и пищевая промышленность. - 1982 - 216 с.

117. Кельман Г.Я. Токсические свойства химикатов добавок для полимерных материалов. - М.: Медицина. - 1974. - С. 82 - 83.

118. Кестинг P.E. Синтетические полимерные мембраны. Структурный аспект. М.: Химия. - 1991. - 336 с.

119. Кильдеева Н.Р. Иммобилизация модифицированного а-химотрипсинв структуре клеток из триацетата целлюлозы / Кильдеева Н.Р., Ларионова Н.И., Казанская Н.Ф., Вирник А.Д. // Биохимия , 1980. Т.45. - № 3. - С. 569 - 574.

120. Кильдеева Н.Р. Научные основы получения волокнистых и пленочных биокатализаторов из белоксодержащих формовочных дисперсий. Автореф. дисс. докт. хим. наук. М. - 1998. - 36 с.

121. Киселев О.Б. Исследование процесса очистки инозина методом электродиализа / Киселев О.Б., Якушонок В.А., Григорьева В.Д., Брод И.И. // Электрохимия, сборн. научн. трудов. Краснодар. - 1979. - С. 57 - 62.

122. Клесов A.A. Новый ультразвуковой метод изучения состава и свойств полиферментных систем. Ферменты целлюлозного комплекса / Клесов A.A., Чурилова И.В. // Биохимия. 1980.- Т. 45, №1.- С. 3-10.

123. Ковальская Л.А. Защитная среда для вирус-вакцины против ньюкасловской болезни птиц (штамм Ла-Сота). Автореф. Дисс. канд. биолог, наук.-М., 1986.- 16 с.

124. Козлов П.В. Физико-химические основы пластификации полимеров / Козлов П.В., Панков С.П. М.: Химия. - 1982. - 224 с.

125. Кононов Ю.А. Исследование механизма переноса ионов через ионитовые мембраны и условия их поляризации. Автореф. дисс. канд хим. наук. Ленинград. - 1975. - 25 с.

126. Корнев А.Е. Технология эластомерных материалов / Корнев А.Е., Буканов A.M., Шевердяев О.Н. М.: Химия. 2001. - 210 с.

127. Коршунова Т.А. Стерилизующие капроновые мембраны " Мифил" / Коршунова Т.А., Артамонов В.А., Мостовлянский O.A. // Тезисы докладов IV Всесоюзной конференции по мембранным методам разделения смесей.

128. Полупроницаемые мембраны (синтез, свойства, методы исследования). М. -1987. - С. 34.

129. Котов В.Б. Состояние и тенденция развития биотехнологии за рубежом // Новости науки и техники, сер. Биотехнология. Реф. ст. ВИНИТИ. -Вып. 10. М. - 1989. - С. 11 -18. с.

130. Котов В.В. Исследование в области электродиализа слабых электролитов с применением ионитовых мембран. Автореф. дисс. канд. хим. наук. Воронеж. - 1972. - 25 с.

131. Кошелев Ф.Ф., Корнев А.Е., Буканов A.M. Общая технология резины. / Изд. 4-е, перераб. и доп. М.: Химия. - 1978. - 527 с.

132. Крамм Э.А. Основы надежности антиконтаминантной защиты биотехнологических процессов. Автореф. дисс. докт. техн. наук. М. - 1993. -295 с.

133. Кузнецов Д.П. Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого-скота: диагностика на основе современных методов биотехнологии: Автореф. дисс. докт. биолог, наук. Щелково. - 2001. - 49 с.

134. Кузьминский A.C. Физико-химические основы получения, переработки и применения эластомеров / Кузьминский A.C., Кавун С.М. Кирпичев В.П. М.: Химия. - 1976. - 366 с.

135. Кулис Ю.Ю. Аналитические системы на основе иммобилизованных ферментов. Вильнюс: Мослас. - 1981.- 200 с.

136. Культивирование клеток животных и человека. // 2-е Всесоюзное совещание. Пущино. - 1985. - 184 с.

137. Культивирование клеток животных и человека //III Всесоюзное совещание 13-15 февраля 1990. Пущино. - М. - 1990. - 189 с.

138. Лабораторный практикум по технологии резины / Под ред. Н.Д. Захарова.- М.: Химия. 1988. - 256 с.

139. Лавров H.A. Применение полимеров в медицине Лавров H.A., Крыжановская Т.С.- М.: Пластические массы. 1995. - Т. 2. - С. 44 - 47.

140. Ламберт Дж. Среды для выращивания клеток. Биотехнология клеток животных Ламберт Дж., Берг Дж. Р. М. - 1989. - С. 98 - 138.

141. Лаппо В.Г. Результаты и перспективы токсикологического изучения полимеров медицинского назначения Лаппо В.Г., Селаври Т.В. // Всесоюзное научно-технического совещание М.: ЦБНТИ Минмедпром. 1975. - С. 27 - 28.

142. Лебедев П.Д. Теплообменные, сушильные и холодильные установки. -М.: Энергия. 1972. - 317 с.

143. Липатов H.H. Мембранные методы разделения молока и молочных продуктов / Липатов H.H., Марьин В.А., Фетисов Е.А. М.: Пищевая промышленность. - 1976. - 168 с.

144. Липатов В.Н. Саморазгружающиеся сепараторы. / Липатов В.Н., Новиков О.П. М.: Машиностроение. - 1975. - 247 с.

145. Литвинова Т.В. Пластификаторы для резинового производства.- М.: ЦНИИТЭНефтехим. 1981. - 89 с.

146. Лобанов А.Н. Синтез полимерных суспензий медико-биологического назначения: Дисс. канд. хим. наук. М. - 2003. - 142 с.

147. Лундстрем A.M. Влияние дегидрофторирования сополимера СКФ-260 на его вулканизационную активность / Лундстрем A.M., Кирошко П.Б., Гринблат М.П.//Каучук и резина. 1974. - № 11. - С. 9-11.

148. Лукина В.А. Вакцина против болезни Марека и оценка ее активности иммуноферментным анализом: Автореф. Дисс. докт. биолог, наук. М. - 1992. -46 с.

149. Лукина В.А. Очистка и концентрирование вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота для использования в иммуноферментном анализе / Лукина В.А., Быкова Н.Н, Бойко A.A., Шайханова З.Т. // Экспресс-информация.

150. Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности.-Щелково. 1985. - № 7.- С. 1 - 4.

151. Лурия С. Общая вирусология / Лурия С., Дарнелл Дж. М.: Мир. -1970.-423 с.

152. Лыков A.B., Леончик Б.И. Сушка распылением. М: Машиностроение. - 1966. - 331 с.

153. Майджи Е.В. Гибриды клеток сельскохозяйственных животных и их чувствительность к некоторым вирусам. Автореф. Дисс. канд. биол. наук. -М. -1987. 20 с.

154. Мамедов Н.Ш. Разработка теоретических основ ветеринарного приборостроения (ветеринарные аспекты). Автореф. дисс. канд. ветер, наук. -Алма-Аты. 1996. - 26 с.

155. Марков А.Г. Полимерные микросферы для получения биотест-систем на С реактивный белок. Дисс. канд. биол. наук. - 2005. - 113 с.

156. Матвеев В.Е. Научные основы микробиологической технологии. -М.: Медицина. 1985. - 224 с.

157. Матвеев В.Е. Научные основы получения чистых культур микроорганизмов в технологии вакцин / Матвеев В.Е., Вадимов В.М., Воробьев A.A. М.: Медицина. - 1980. - 256 с.

158. Матвеев В.Е. Основы асептики в технологии чистых микробиологических препаратов. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981.-312 с.

159. Махлис Ф.А. Влияние многоядерных ароматических смол на свойства и радиационную стойкость резин из бутадиен-нитрильных каучуков /

160. Махлис Ф.А., Попова В.М., Савин B.C., Клепиницер И.Л. // Каучук и резина. -1973.-5.-С. 29-32.

161. Махлис Ф.А. Терминологический справочник по резине / Махлис Ф.А., Федюкин Д.Л. М.: Химия. - 1989. - 400 с.

162. Медведева И.Н. Синтез, свойства и применение ионитовых мембран в электродиализе / И.Н. Медведева, Г.З. Нефедова, В.Н. Смагин, Н.Е. Кожевникова, К.П. Брауде // Обзорн. Инф. Сер. Общеотраслевые вопросы, М.: НИИТЭХИМ, 1985.- Вып. 11 (241). - 43 с.

163. Мембраны и пленки Владипор / Проспект Владимир, ВНИИСС, 1981. - 12 с.

164. Методические рекомендации по определению вредных веществ, выделяющихся из полимерных материалов в воду, модельные среды и пищевые продукты. Л., 1981. - 102 с.

165. Методические указания по санитарно- гигиенической оценке резиновых и латексных изделий медицинского назначения. М. - 1988. - 137 с.

166. Методические указания по санитарно-химическому исследованию резин и изделий из них, предназначенных для контакта с пищевыми продуктами. М. - 1988. - 89 с.

167. Методы получения высокоочищенных ферментов //Тезисы Всесоюзного симпозиума. Вильнюс. - 1978. - 167 с.

168. Микрогомогенезатор биологических препаратов в жидкости. // Авторское свидетельство СССР, № 951102. 1982.

169. Миркин Г.Ф. Применение фторолигомеров в качестве малых технологических добавок / Миркин Г.Ф., Лебедин М.Л и др. // Промышленность CK шин и РТИ. 1988. - № 2. - С. 18-20.

170. Михайлов А.Ю. Анализ отказов и пути повышения надежности монтажных схем ферментеров при производстве полуфабрикатов чумной вакцины / Михайлов А.Ю., Бузанов Н.И., Черкасов H.A.// Биотехнология. -1994. № 5. - 37 с.

171. Моисеев В.В. Применение белков при получении эластомеров / Моисеев В.В., Попова O.K., Косовцев В.В.-М.:ЦНИИТЭНефтехим.-1985.- 52 с.

172. Молоканов Ю.К. Процессы и аппараты нефтегазопереработки. М.: Химия. 1980.-408 с.

173. Морозов C.B. Водородный топливный электрод на основе ферментов: Дисс. канд. хим. наук. М. - 2003. - 159 с.

174. Мосичев М.С. Общая технология микробиологических производств / Мосичев М.С., Складнев A.A., Котов В.Б. М.: Легкая и пищевая промышленность. - 1982. - 264 с.

175. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты М.:Наука.-1971. - 415с.

176. Мотина Г.Л. Вопросы очистки и стерилизации технологического воздуха, применяемого в процессах биосинтеза / Мотина Г.Л., Былинкина Е.С. // В кн.: Труды ВНИИА. Сер. " Технология производства и изучение антибиотиков. М., 1974. - С. 37 - 59.

177. Мотина Г.Л. Применение стекловолокнистых материалов для стерилизации воздуха / Мотина Г.Л., Казакова И.А. , Былинкина Е.С. // Хим. фарм. журн. 1972.-№9-С. 41 - 45.

178. Мотина Г.Л. Фильтры для стерилизации воздуха /Мотина Г.Л.,. Шатунова Л.Н., Казакова И.А., и др. // Обзорная информация. Серия химико-фармацевтическая промышленность. М. - 1978. - 29 с.

179. Мулин Ю. А. Пентапласт / Мулин Ю. А., Ярцев М.К.- Л.: Химия, -1975.- 120 с.

180. Муравьева С.И. Санитарно химический контроль воздуха промышленных предприятий / С.И. Муравьева, М.Д. Бабина, А.Г., Атласов и др. - М.: Медицина. - 1982. - 234 с.

181. Муромцев Г.С. Основы сельскохозяйственной биотехнологии / Муромцев Г.С., Бутенко Р.Г., Тихоненко Т.И., Прокофьев М.И. М.: ВО Агропромиздат. - 1990. - 383 с.

182. Назаркина Н.И. Опытно-промышленная эксплуатация технологической обвязки биологического реактора / Назаркина Н.И., Батуров

183. B.И., Рубан Е.А. и др. // Экспресс-информация. "Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности ". М. 1985. - № 2.1. C. 5-8.

184. Назаркина Н.И. Очистка и стерилизация воздуха на биопредприятиях / Назаркина Н.И., Батуров В.И., Мотина Г.Л. // Экспресс-информация. Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. М. - 1985. - № 5 - С. 10 - 13.

185. Нежута A.A. Научное обоснование и методика разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов. Автореф. дисс. докт. биолог, наук. Щелково. - 2003. - 53 с.

186. Никитин Е.Е. Замораживание и высушивание биологических препаратов / Никитин Е.Е., Звягин И.В. М.: Колос. - 1971. - 343 с.

187. Николаев А.Ф. Технология пластических масс. Л.: Химия. -1975. -368 с. '

188. Ниязматов A.A. Способ получения диагносткума для определения антигенов и антител инфекционных заболеваний / Ниязматов A.A., Чечик О.С. и Покровский В.И. //Патент SU 1757479 A3.- 1990.

189. Новицкая С.П. Фторэластомеры / Новицкая С.П., Нудельман З.Н., Донцов A.A. М.: Химия. - 1988. - 161 с.

190. Новохатский A.C. Тканевые и клеточные культуры в вирусологии и молекулярной биологии // В сб. Итоги науки и техники. ВИНИТИ АН СССР. Сер. Вирусология. М. - 1979.- Т. 8. - С. 3 - 134.

191. Ночевный В.Т. Оптимизация процессов производства культур клеток и вирусов в суспензии переживающих тканей. Дисс. докт. биол. наук. М. -1994.-49 с.

192. Общая вирусология: Руководство. В 2 т./ Под ред В.М. Жданова, С.Я. Гайдамович; АМН СССР. М.: Медицина. - 1982. - Т.1.- 496 с.

193. Общая вирусология: Руководство. В 2 т./ Под ред В.М. Жданова, С.Я. Гайдамович; АМН СССР. М.: Медицина. - 1982.- Т.2.- 520 с.

194. Осошник И.А. Практикум по технологии резиновых изделий / Осошник И.А., Шеин B.C.- Л.: Химия. 1989. - 222 с.

195. Пашков А.Б. Пластические массы / А.Б. Пашков А.Б., Л.Д. Слабская Л.Д., Е.И. Люстгартен Е.И., А.Б. Леготинг А.Б. 1970 - № 7. - С. 9 - 11.

196. Пере дереев Н.И. Способ выделения антигенов из бруцелл / Передереев Н.И., Блехерман Б.Е., Сапегина Е.П. и др. // Авт. свид. СССР № 606245. 1978.

197. Передереев Н.И. Ультразвук в биологической промышленности / Передереев Н.И., Хорьков И.Ф., Блехерман Б.Е., Рубан Б.Е. // Материалысимпозиума "Физико-химические основы физических факторов на живой организм" М. - 1974. - С. 13.

198. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. -М.: Мир. 1978.-331 с.

199. Пестов С. С. Исследования фазовой структуры и совулканизации каучуков в смесях. Дисс. канд. хим. наук. М. - 1979. - 186 с.

200. Петров Р.В. Иммуногенетика и искусственные антигены Петров Р.В., Хаитов P.M., Аталлауханов Р.И. М.: Медицина. - 1983. - 256 с.

201. Петрянов И.В. Волокнистые фильтрующие материалы ФП / Петрянов И.В., Козлов В.И, Басманов П.И., Огородников Б.И. М.: Знание -1968.-78 с.

202. Пивненко Т.М. Получение и свойства трипсина из пилорических придатков тихоокеанских лососей / Пивненко Т.М., Эпштейн JT.M., Колодзейская JI.M. и др. // Прикл биохим. И микробиол. М. - 1989. - Т. 25. -№ 4. - С 490 - 497.

203. Пинаев Г.П. Методы культивирования клеток // Сб. Научные труды Ин-та цитологии АН СССР. Л.: Наука. - 1988. - 319 с.

204. Пиотровский К.Б. Старение и стабилизация синтетических каучуков и вулканизатов / Пиотровский К.Б., Тарасова З.Н. М.,: Химия. - 1980. - 264 с.

205. Платэ H.A. Ковалентное связывание ацилированного трипсина с полимерными носителями / Платэ H.A., Валуев Л.И., Егоров Н.С., Аль-Нура М.А. // Прикл. Биохимия и микробиол. 1977. Т. 13. - № 5. - С. 673 - 676.

206. Платэ H.A. Иммобилизация протеолитических ферментов на полиэтилене, полипропилене и лавсане / Платэ H.A., Валуев Л.И., Чупов В.В. // Высокомолек. соед. 1980. - Т. 22. А. - № 9. - С. 1363 - 1366.

207. Платэ H.A. Физиологически активные полимеры / Платэ H.A., Васильев А.Е. М.: Химия. - 1986. - 296 с.

208. Позмогова И.Н. Культивирование микроорганизмов в переменных условиях. М.: Наука - 1983. - 201 с.

209. Полупроницаемые мембраны (синтез, свойства, методы исследований) // Тезисы докладов IV Всесоюзной конференции по мембранным методам разделения смесей 27-29 мая 1987. М., - 1987. - 113 с.

210. Пономаренко В.А. Фторсодержащие гетероцепные полимеры. М.: Наука. - 1973.-304 с.

211. Попова В.М. Совершенствование способа изготовления трипсина сухого для вирусологических целей / Попова В.М., Гуславский А.И., Ночевный В.Т. // Доклады Всероссийской конференции "Инфекционные болезни молодняка с/х животных". М. - 1996. - С. 100 - 102.

212. Попова В.М. Обессоливание альбумина методом электродиализа /Попова В.М., Сурмило А.П. // Доклады IV Всесоюзной конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". М. - 1991.- С. 192 - 194.

213. Приборы и лабораторное оборудование для научных исследований по новым направлениям биологии и биотехнологии / Описание научных принципов устройства новых приборов и методики пользования ими. -Пущино. 1990. - 138 с.

214. Прокопов Н.И. Синтез полимерных суспензий с узким распределением частиц по размерам методом гетерофазной полимеризации. Дисс. докт. хим. наук. М., 1999. - 52 с.

215. Прокопов Н.И. Синтез моно дисперсных функциональных полимерных микросфер для иммунодиагностических исследований / Н.И. Прокопов, И.А. Грицкова, В.П. Черкасов, А.Е. Чалых // Успехи химии.- Т 65. №2. М.: МИТХТ. - 1995. - 178 - 192.

216. Промышленная микробиология /Под общей ред. Н.С. Егорова. М.: Высшая школа. 1989. - 689 с.

217. Рабинович И.М. Применение полимеров в медицине. Д.: Медицина. - 1972.- 198 с.

218. Работнова И.Л. Хемостатное культивирование и ингибирование роста микроорганизмов / Работнова И.Л., Позмогова И.Н. М. - 1979. - 207 с.

219. Разработка, апробация и государственный контроль ветеринарных препаратов // Тезисы докладов Всесоюзной конференции 31 марта 2 апреля 1981.-М. - 1981.- 195 с.

220. Рахманин П.П. Основные направления развития агробиологической промышленности России / Рахманин П.П., Самуйленко А.Я., Ломакина Т.А. // Вкн. Курская биофабрика. К 100 биологической промышленности России. -Курск. 1996. С. 287 - 290.

221. Резиновая смесь на основе фторэластомера / Миннесота Майнинг энд Мэнью Факчуринг Ко (США), патент, 492092 оп. 15.10.75.

222. Рубан Е.А. Автоматизация процессов культивирования клеток животных в суспензии // Экспресс-информация. Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Щелково. - 1981. - № 6. - С. 8-11.

223. Рубан Е.А. Влияние температуры среды на жизнедеятельность микроорганизмов. Экспресс-информация. "Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности ". М. - 1977. -№7.-С. 12- 14.

224. Рубан Е.А. Оптимизация и масштабирование процессов глубинного культивирования микроорганизмов и клеток животных с использованием методов систематического анализа. Автореф. дисс. докт. биолог, наук. М. -1995. 47 с.

225. Рубан Е.А. Роль окислительно-восстановительного потенциала в процессе культивирования микроорганизмов // Микробиологическая промышленность. М. - 1975. - № 112 (131), С. 20 - 24.

226. Руководство по вакцинному и сывороточному делу / Под ред. П.Н. Бургасова.- М.: Медицина. 1978. - 440 с.

227. Румянцева И. В. Поликлональные, моноклональные и антиидиотипические антитела к разным серотипам вируса болезни Марека. Автореф. дисс. канд. биолог, наук. Щелково. - 2002. - 24 с.

228. Рыльцев B.B. Свойства и применение протеолитических систем, иммобилизованных на текстильных материалах / Рыльцев В.В., Филатов В.Н. // тезисы докладов IV симпоз. "Химия протеолитических ферментов" М.: ИБХ РАН. - 1997.-С. 145.

229. Салдадзе K.M. Ионообменные высокомолекулярные соединения / Салдадзе K.M., Пашков А.Б. Титов B.C. М.: Госхимиздат. - 1960. 356 с.

230. Самуйленко А.Я. Основы биотехнологии производства биологических препаратов / Самуйленко А.Я., Рубан Е.А. // В 2 т. Под общ. ред. А.Я. Самуйленко, Е.А. Рубана.- М. 2000.- Т.1.- С. 1-376. -Т.2.- С. 379 -781.

231. Саноцкий И.В. Методы определения токсичности и опасности химических веществ. М. - 1970. - 316 с.

232. Свойства и применение термопластов // В кн.: Материалы 1-го Всесоюзного совещания. Казань, 28-30 сентября 1971. Воронеж: Изд. ВГУ, 1975.-205 с.

233. Сергеев В.А. Вирусные вакцины.- Киев. 1993. - 368 с.

234. Симаненкова Л.Б Изучение вулканизации фторкаучука СКФ-26 азотсодержащими соединениями. Автореф. канд. техн. наук. М. - 1979.- 29 с.

235. Синтез и свойства уретановых эластомеров /Под ред. Н.И. Апухтиной. Л.: Химия. - 1976. - С. 16 - 18, 99 - 102, 171 - 175.

236. Синтетический каучук / Под ред. И.В. Гармонова. 2 изд., перераб. -Л.: Химия. - 1983.-560 с.

237. Слепенко Т.Б. Выделение из клеток и изучение свойств вируса герпеса индеек. Автореф. дисс. канд. биол. наук. М. - 1987. - 24 с.

238. Смагин В.Н. Применение мембранных методов разделения веществ / Смагин В.Н., Медведев И.Н., Кожевникова Н.Е., Садчикова Т.П. //Обзорн. Инф. Сер. Общеотраслевые вопросы, М.,НИИТЭХИМ. - 1985. - Вып. 10(240). - 43 с.

239. Смирнов В.В. Научные основы производства диагностических препаратов / Смирнов В.В., Чаплинский В .Я., Андреева З.М., Богоявленская Л.Б Киев: Наукова думка. - 1980.- 234 с.

240. Смирнова О.В. Поликарбонаты / Смирнова О.В., Ерофеева C.B. М.: Химия. - 1975.-С. 190- 191.

241. Современные направления в развитии технологии производства и повышении качества электроизоляционных и фильтровальных материалов на целлюлозной основе / Материалы Всесоюзной научно-технической конференции. Волжск. - 1986, - 176 с.

242. Соколов С. В. Методы синтеза и свойства термостойких эластомеров. М. - 1978. - С. 13 - 18.

243. Соловьев Б.В. Технологии промышленного производства культуральных вакцин против болезни Марека и инфекционной бурсальной болезни. Автореф. Дисс. докт. биолог, наук. М. - 2001.- 52 с.

244. Сорокин В.К. Фильтрующие перегородки из пористого титана.- М.: Хим. и нефт. Машиностроение. 1976. - № 5. - С. 46 - 47.

245. Сперанский C.B. Методические рекомендации. Новосибирск.1975. 26 с.

246. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Биргера. М.: Медицина. - 1982. - 464 с.

247. Стасенкова К.П. Токсикология ингредиентов резиновых смесей и латексных изделий / Стасенкова К.П., Шумская Н.И. // Темат. обзор, сер. произв. РТИ и АТИ. М.: ЦНИИТЭНефтехим. - 1974. - С. 485 - 492 .

248. Станишевский Я.М. Полимерные суспензии для диагностической тест-системы на фибронектин / Станишевский Я.М, Грицкова И.А., Измайлова В.Я. и др. // Биотехнолог, теоретич. и научно-практич. журн. M -. 2001. - Вып. З.-С. 71 -84.

249. Станишевский Я.М. Свойства частиц полимерной суспензии, используемой в качестве носителя биолигандов при получении тест-системы // Тезисы междун. Конф. студен, и аспирантов по функциональным наукам "Ломоносов-2001". М. - 2001. -С. 190.

250. Станишевский Я.М. Полимерные дисперсионные системы медико-биологического назначения. Дисс. канд. биолог, наук. М. - 2001. - 150 с.

251. Стейнер Р. Мир микробов / Стейнер Р., Эдедьберг Э., Нигрем Д.М. -М.: Мир, 1979.-Т. 3.-171 с.

252. Сухотин A.M. Химическое сопротивление материалов / Сухотин A.M., Зотиков B.C.- Л., 1975. 408 с.

253. Тагер A.A. Физикохимия полимеров. М.: Химия. - 1978. - 528 с.

254. Танков Д.Ю. Исследование функциональных азометиновых соединений в качестве ингредиентов резиновых смесей. Дисс. канд. техн. наук.-Волгоград. 2003. - 117 с.

255. Тарасов В.Н. Итоги науки и техники. // ВИНИТИ АН СССР. Сер Микробиология. М. - 1975. - Т.4. - С. 152 - 207.

256. Тарасов В.Н. Клеточные культуры в производстве биологически активных веществ // В сб. Итоги науки и техники. ВИНИТИ АН СССР. Сер. Вирусология. 1979.- Т. 8. - С. 135 - 156.

257. Тарасов В.Н. Культура клеток в вирусологии // Реф. ВИНИТИ, М. -1990. -Т.19. - С. 22-23 .

258. Терентьев А.П. Способ вулканизации фторорганических эластомеров / Терентьев А.П., Ермолаев A.B. Авт. свид. 171567, 1965.

259. Термостойкие пластики // Экспресс информация. - М. - 1979.- № 22.-23 с.

260. Технология получения, свойства и применение материалов на основе термостойких полимеров / Ред. Э.Н.Телешова, A.A. Берлин // Эксп. инф. термост. Пластики.- 1979. - № 22. - С. 9 - 21.

261. Тимашов С.Ф. Физика-химия мембранных процессов. М.: Химия -1988.-240 с.

262. Тихоненко Т.И. Генная инженерия и вирусология / Виусы и генная инженерия Вест. АМН СССР. 1983. - С 67 - 75.

263. Тихонов И.В. Биотехнология / Тихонов И.В., Рубан Е.А., Грязнева Т.Н., Самуйленко А.Я., Гаврилов В.А. Под ред. акад. РАСХН Е.С. Воронина. -СПб.: ГИОРД. 2005 - 792 с.

264. Товарницкий В.И. Молекулы и вирусы.-М.:Сов.Россия.-1978 208 с.

265. Тривен М. Иммобилизованные ферменты. Вводный курс и применение в биотехнологии. Пер. с анг. Е.Б. Майзеля, под ред. И.В. Березина.-М.: Мир. 1983.-213 с.

266. Трошкова Г.П. Разработка технологии производства и методов контроля препаратов для культур клеток в сухой стерильной форме. Дисс. докт. биолог, наук. Кольцово. - 2004. - 291 с.

267. Тыщенко И.П. Ультраструктурный анализ компонентов реакции латекс агглютинации / Ветеринария. - 1992.-№ 7-8. С. 26 - 29.

268. Универсальные газовихревые безградиентные биореакторы, Проспект выставки "Мир биотехнологии " 2005. 4 с.

269. Уэбб Ф. Биохимическая технология и микробиологический синтез биологически активных соединений. М.: Медицина - 1988. - 633 с.

270. Федосеев К.Г. Физические основы и аппаратура микробного синтеза биологически активных соединений. М.: Медицина. - 1977. - 304 с.

271. Ферментационная аппаратура. Рига, зинатне. - 1980. - 124 с.

272. Филиппов С. Ю. Разработка иммуноферментного набора для определения уровня антител к вирусу парагриппа 3 крупного рогатого скота: Дисс. канд. биолог, наук. - Щелково. - 2004. - 135 с.

273. Филиппова Г.И. Концентрирование препаратов иммуноглобулинов / Филиппова Г.И., Кузнецова C.B., Скороходова JI.A. и др. // Экспресс-информация. "Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности ". М. - 1980. - № 5.- С. 16 - 19.

274. Фильтровальное оборудование в США // Обзорная информация ЦИНТИХИМНЕФТЕМАШ. М. - 1991. - 56 с.

275. Фильтры для жидкостей микробиологической промышленности // Обзорная информация, ВНИИСЭНТИ, М. 1985.- 55 с.

276. Фихте Б.А. Дезинтеграция клеток / Фихте Б.А., Гуревич Г.А. М.: Наука. - 1988.-224 с.

277. Фихте Б.А. Дезинтегратор микроорганизмов ФУГ-1 / Фихте Б.А., Гуревич Г.А. Авторское свидетельство СССР № 514627, 1978.

278. Фримель Г. Иммунологические методы. М: Медицина. - 1987. - С 219 -221.

279. Фробишер М. Основы микробиологии. М.: Мир. - 1965. - 295 с.

280. Фторполимеры / Пер. с анг. А.Ю. Алабиной, под ред. С.П. Круковского, М. 1975. - 448 с.

281. Фторэластомеры / Патент Англия. 1481193 оп. 27.07.77.

282. Хананашвили J1.M. Технология элементоорганических мономеров и полимеров / Хананашвили JI.M., Андрианов К.А. / 2-е изд., перераб. М.: Химия. - 1983. - 416 с.

283. Хапчаев Ю.Х. Разработка методов получения и культивирования первичных и перевиваемых культур клеток животных для производства вирусных вакцин. Дисс. докт. биолог, наук. М. - 2003. - 180 с.

284. Хашин O.B. Разработка набора реагентов для определения уровня антител к вирусу гриппа А кур иммуноферментным методом. Дисс. канд. биолог, наук. Щелково. 2004. - 138 с.

285. Хванг С.Т. Мембранные процессы разделения / Хванг С.Т., Каммермейер К.пер.с англ. Под ред. Ю.И.Дытнерского. М.: Химия. - 1981. -464 с.

286. Хижняк Л.И. Разработка технологии изготовления, методов контроля и исследование свойств сыворотки крови плодов овец. Автофер. дисс. канд. биолог, наук. М. - 1995. - 18 с.

287. Хижнякова Т.М. Культивирование клеток млекопитающих на новом отечественном субстрате / Хижнякова Т.М., Саркисов И.Ю., Дарненко С.О., Подчерняева Р.Я. // Вопросы вирусологии. 1991. - С. 523 - 526.

288. Хижнякова Т.М. Культивирование клеток на пористом микроносителе с использованием различных видов сывороток / Хижнякова Т.М., Подчерняева Р.Я., Мельниченко Е.И. // Биотехнология. 1998. - № 5 С. 38-42.

289. Химия окружающей среды / Под редакцией Дж. О.С. Бокриса, пер. с анг. О.Г. Скотниковой и Э.Г. Тетерина. Под ред А.П. Цыганкова. М.: Химия. -1982.-672 с.

290. Цыперович A.C. Ферменты (основы химии и технологии). Киев: Техшка. - 1971.-358 с.

291. Чайка H.A. Применение реакции агглютинации сенсибилизированного латекса для вирусных инфекций / Чайка H.A., Горбачев E.H. //Вопросы вирусологии. 1985. - № 5. - С. 516 - 523.

292. Чайка H.A. Применение реакции агглютинации латекса для диагностики паразитарных болезней // Мед. паразитол.- 1982. № 2 . - С. 65 -72.

293. Чайка H.A. Реакция агглютинации латекса // В кн. Серологическая диагностика паразитарных болезней. М.: ВНИИМИБ. - 1982. - С. 14-25.

294. Черемнова Т.А. Изучение биосинтеза ксиланазы плесневым грибом Aspergilus Awamori. Автореф. дисс. канд. техн. наук. М. - 1979. - 24 с.

295. Чулюкина A.B. Исследование закономерностей влияния компонентов резиновых смесей и условий их переработки на свойства уплотнительных резин на основе фторкаучуков. Автореф. дисс. канд. техн. наук.-М. 1974.-25 с.

296. Чулюкина A.B. Теплостойкие резиновые материалы / Чулюкина A.B., Крюкова А.Б., Брангина Л.Б. // Тем. обзор. Сер. произв. РТИ и АТИ. М.: ЦНИИТЭНефтехим. - 1983.-44 с.

297. Шеин B.C., Шутилин Ю.Ф., Гриб А.П. Основные процессы резинового производства Шеин B.C., Шутилин Ю.Ф., Гриб А.П. Л.: Химия. -1988.-160 с.

298. Шерстнев П.П. Полимеры в медицинской технике. М.: Медицина. -1980.- 368 с.

299. Шигина Ю.В. Иммунология. -М.: РИОР. 2007. - 183 с.

300. Шкарлат П.Е. Латексные тест-системы для экспресс-диагностики лептоспирозной инфекции собак. Автореф. канд. биол. наук. М. - 2003. -127 с.

301. Шуманский С.М. Синтез и свойства полимерных микросфер с функциональными группами на поверхности. Автореф. дисс. канд. хим. наук. -М. 1993.-24 с.

302. Шумская Н.И. Система гигиенической оценки и санитарного контроля резин, используемых в медицине и для контакта с пищевыми резинами. Дисс. докт. мед. наук. М. - 1986. - 423 с.

303. Шумская Н.И. Сравнительная оценка методов определения токсичности резиновых изделий в экспериментах на животных и в культуре клеток / Шумская Н.И., Миронова Л.М., Малыгина И.Г., Соминский A.A. и др. // Гигиена и санитария. 1980. - № 1. - С. 50-52.

304. Шумская Н.И. Токсикология новых промышленных веществ / Шумская Н.И., Найденко Н.Ф. М.: Медицина. - 1972. - № 12. - С. 124 - 132.

305. Элизбарашвили Э.И. Особенности культивирования вирусов оспы птиц в растущей и перевивающей культуре ткани. Автореф. дисс. докт. биолог, наук.-М. 1987.-20 с.

306. Экструдируемая резиновая смесь на основе фторкаучуков / Патент США. 3851018., 1973.

307. Экструдируемые фторэластомеры / Патент США 3933732, оп. 20.01.76.

308. Юданова Т.Н. Полимерные раневые покрытия с ферментным и антимикробным действием. Дисс. докт. хим. наук.- М. 2004. - 409 с.

309. Южелевский Ю.А. , Бурмистрова Л.И. Силоксановые каучуки и материалы на их основе медицинского назначения / Тем. обз. сер. произв. CK. -М.: ЦНИИТЭНефтехим. 1987. - 70 с.

310. Яковлева Т.В. Структура фторкаучука и ее влияние на свойства получаемых резин. Автореф. дисс. канд. хим. наук. М. - 1982.- 25 с.

311. Ярославов А. А. Способ получения иммуносорбента для иммуноанализа / Ярославов А.А., Ченчик А.А., Блинковский A.M. // SU патент 1706295 А 1.

312. Ярыгина Е.И. Гуморальный поствакцинальный иммунитет у кур, привитых моно-, би и поливалентными вакцинами против болезни Марека. -Автореф. дисс. канд. биолог, наук. - М. - 1998. 24 с.

313. Ярыгина Е.И. Антигенные и иммуногенные свойства штаммов вируса болезни Марека при создании эффективных экспериментальных и производственных вакцин. Автореф. дисс. докт. биолог, наук Щ. - 2005. 54 с.

314. Aib S. Separation of cells from Culture Media. / Aib S., Nagatini M. Separation of cells from Culture Media. // Adv. Biochem. Eng., 1,3.- 1971.- p. 68.

315. Akiyame Т., Sugano Т., Niki E. // Buseki Kagaku, 29. 1980. - p. 584.

316. Atkinson B. Biochemical Engineering and Biotechnology Handbook / Atkinson В., Mavitina F. // Macmillan Publishers Ltd., Surrey, England .- 1983. p. 127.

317. Aunins J.G., Grougham M.S Wang D.I. C. et. al. Biotechnol. and Bioeng. Symp., № 17. 1986. - pp. 600 - 723.

318. Bachrach H.L. The basis for cloning the foot-end-mouth diseas virus protein immunogen. In: Proc. genet, eng. intern, conf. Reston ( Va). - 1981, vol. 4, p. 42 - 50.

319. Balin A.K. Oxygensitive stagesof the cell cycle of human diploid cells / Balin A.K. Goodman D. B.P., Rassmussen H., Cristofalo V. J. J. Cell Biol., vol. 78. -1978.-pp. 390-400.

320. Banes A. Biocompatible polyorganosiloxane composition for cell culture apparatus: Пат. США, № 4789601. 1988.

321. Bartal A.H. Apparatus for enhancing cell growth, preservation and transport. Пат. США, № 4734313. 1988.

322. Bello R.A. Robinson C.W., Moo-Joune M. Mass Transfer and Liquid Mixing in Externalirculating Zoop Contractors/ // Adv. Biotech., 1. 1981. p. 547.

323. Better P. Recovery Processes: Past, Present, Future, 184 . // Amer. Chem. Soc. Mtd., September. 1982. - p. 211.

324. Butter M., Jenkins H.J. Biotechnology, 12. 1989. - pp. 97 - 110.

325. Brookman J.S.G. Further studies on the mechanisms of cell distraction by extreme pressure extrusion. // Biotechnol. And Bioeng., vol.17, №4. 1975 - p. 465 -479.

326. Caidenbank P.H. // Trans Inst ohem. End. 36. 1958. - p. 448.

327. Cavtron I. An effluent air filter / Cavtron I., Favell H. K. // Apple Bacteriol, 30(11).- 1967. - pp. 261- 263.

328. Cell culture techniques. Mc Culloch E.A. Clinics in haematology, London, Philadelphia, 13, № 2. 1984. - p. 519.

329. Chan R., Maatsuura T., Sourirajan S. // Ind. Eng. Chem., Prod. Res. Dev., 21.- 1982.-p. 605.

330. Charlier G. Wellemans G., 1. ale . et. al. Arch. exp. Veterinarmed, 38, № 6. 1984. pp. 894 - 899.

331. Chase H.A. Affinity Separations Using Immobilized Monoclonal Antibodies. // Chem. Eng. Sei., 39. 1984. - p. 1098.

332. Chiken serum may substitute for fetal call serum in cell culture. Biotechnol. News, 7, №19. 1987. - p. 6.

333. Choppin G. Cited in Referents, 122 1981. - p. 15.

334. Culture plate. Amer. Biotechnol. Lab, 6, №8 A., 1988. p. 46.

335. Cunningham D.D. Proteases as growth factors. // In "Tissue growth factors " Ed. R. Baserga, Berlin etc. 1981. - pp. 229 - 248.

336. Davis S.G. Biphasid media culture apparatus, Gibco Div. Mogul. Corp. naT. CILLA № 460895, №432848. 1987.

337. Davis A.R. et al. Expression of antigenic determinants of the hemagglutinin gene of a human influenza virus in E. coli / Davis A.R. Nayak D. P., Heda M. J. Proc. Nat. Acad. Sei. US. - 1981, 78, p. 5376 - 5380.

338. Darbyshire., Large Scale Enzyme Extraction and Recovery, Topics in Enzyme and Fermentation Biotechnology, Wiseman A. (ed) Halsted Press / J. Wiley., N.J. vol. 5.- 1981. p. 147.

339. De Baillou N. Adsorption of human albumin and librinogen onto heparin like materials. Adsorption isoterms / De Baillou N., Voegel J.C., Schmitt A. // Colloids and Surfaces. - 1985. - v.16. - p. 271 - 288.

340. De Bruyne N.A. Magnetic stirrer apparatus with quided, floating stirrer. Toche Corp. Пат. США № 4665377, 1984.

341. Dorman R.G. Theory of fibrans filtration // In "Higt Efficiently air Filtration" But termorth, London. - 1964. - pp. 67 - 69.

342. Dunnill P. J. Continuous enzyme processing. The isolation of prolyl -tRNA synthetase from Phaseolus aures / Dunnill P. J. Currie A. Lilly M.D. // Biotechnol. Bioeng. 12. 1970. - p. 63.

343. Edwards V. Recovery and Purification of Biologocals. // Adv. App. Microbiol., 11.- 1969.-p. 159.

344. Elworth R. Treatment of process air for culture. // In "Methods in Mikrobiology" Vol. 1, Academic Press, London. 1969. - pp. 123 - 136.

345. Ernst R.R. Sterilisation by heat. In"Desinfection, Sterilization and Preservation". // Led and fabiger, Philadelphia, Pennsylvania, 1977, - pp. 481 -521.

346. Feder J. Meth. Enzymol, vol. 135. Acad. Press. -1987. - pp. 383 - 399.

347. Fermentation and Biochemical Engineering Handbook, Vogel H.C. ( ed) Noyes Publication, Park Ridg, N. Y., 1996. p. 799.

348. Ferry J. // Chem. Rev., 18. 1986. - p. 373.

349. Foster P.R., Dunnill P., Lilly M.D. //Biochem. Bioeng. 13. 1971. - p.713.

350. Foster P.R. The presipitation of enzymes from cell extracts of Saccharomyces cerevisial by polyetylene glycol / Foster P.R., Dunnill P., Lilly M.D //Biochim. Biophys Acta. 317. - 1973. - p. 505.

351. Gasner L.L. Microbial cell recovery enhancement through flocculation / Gasner L.L., Wang D.I.C. // Biotechn. Bioeng. 12. - 1970. - p. 873.

352. Gebimer R.G. Cell culture filtere apparatus and method. Monsanto Co / Gebimer R.G. Tolbert W. R. IlaT. CII1A № 82571 1987.

353. Gething M.J. The expression of the influence virus hemagglutinin gene from SV-40-HE recombinants. In Eukaryotic viral vectors. Cold Spring Harbon / Gething M.J., Sambrook J. - 1982. - p. 29 - 33.

354. Glater J., Zachariah M. // 188th National ACS Meeting, Philadelphia, P.A. August. 1984.-pp. 26-31.

355. Ham R.G. Media and growth requirements / Ham R.G. McKeehan W. L. // In"Methods in Ensymology"Vol. 58. Academic Press. - New York.-1979.-p. 103.

356. Ham R.G. Survival and growth requirements of nontransformed cell. In. Tissue growth factors. Ed.R. Baserga. Berlin etc. - 1981. - pp. 13 - 88.

357. Hattory K. Studies on the Efficiency of PVA Air Sterilisation Filter for Cjllecting Airborne microbes " / Hattory K., Kunihiro H., Jokoo S. J. of Ferment Technology" - 1972. - vol. 50. -№ 6. - p. 432 - 437.

358. Hayflick L. Moorhead P.S. The serial cultivation diploid cell strains / Hayflick L. Moorhead P.S. Exp. Cell Res. 25. - 1961. - p. 585.

359. Heath C. Belfort G. Adv. Biochem. Eng. Biotechnol.- 34.-1987.- pp. 1-31.

360. Heggins J.J. An investigation of the unit operations involved in the continuous flow isolation of b-galactosidase from E. coli / Heggins J.J., Lewis D.J., Aaly W.H., Mosqueira F.G. Dunnill P., Lilly M. D. // Biotechnol. Bioeng.- 20. -1978.-p. 159.

361. Hoppit H. B. Method of installing and testing absolute (high efficiency particulate arrestor) filters in the industry. Semin. Filter, absjlute aerosol ind Nucl. Aix-en Provence. - 1976. - S. J., S. a. 8 (1-8) 10.

362. Hu W. S., Dodge T. C. Fraim K. K. et. Al. Develop. Biol. Standart, 66 / Hu W. S., Dodge T. C. Fraim K. K. 1987. - pp. 279 - 300.

363. Ilnickik, Drozol E., Skawinski W. et. al. // Foim Morphol (Wars).- 44, № 2, 1985.-pp. 90-98.

364. Invarsson B.A. Adsorption of protein on metal sulfaces studieol by ellipsometrie and capacitance me asurements / Invarsson B.A., Hegg P.O., Lundstrom K.I., Jansson V. // Colloids and Sulfaces. 1985. - v.13. - з. 169 - 192.

365. Kario R. Rapid quantitative evaluation of plazma D-Dimer levels in Thrombotic states using an automatiece lates Potometric immunoassay / Kario R. Matsuo T., Kabayashi H., Matsuo M. // Tromb. Res. 1992. - May. - v. - 166. № 23.- 179 - 189.

366. Kasuya V. Preparation of peptide carrying microsperes with bioactivity on platelets / Kasuya V., Fujimota K., Miyamoto M., Jujit T., Otaka A // J. Biomater Sci - Polym. Ed. - 1993. - v. 4,- № 4 - p. 369 - 380.

367. Keilman M.R. Plastic roller bottle for suspension culture. Baxmer Trevenol / Keilman M.R. Symbl R.P. // Lab. Пат. № 940889, СІЛА, 1988.

368. Keleman M.V. Controlled cell disruption. A comparison of the farces required to disrupt different microorganisms / Keleman M.V., Sharpe I.E.E.// J. Cell. Sci., vol. 35, 1979. pp. 431 - 441.

369. Kingsley R. J. Bernhardt F. M. Wilber K. M. et. al. In vitro, 23, № 4 1987.-pp 297-302.

370. Kleid D.G. et al. Cloned viral protein vaccine for foot and mouth disease Responses in cattle and swine / Kleid D.G. Yansura D. Small B. Science, 1981, 214, p. 1125 - 1129.

371. Kondo A. Immunological agglutination kinetics of latex particles with covlently immobilized antigens / Kondo A., Kawanot T., Higashitni K. // J. Ferment Boing. 1992. v.73. № .6 - p. 435 - 439.

372. Kondo A. Affinity purification of antibodies using immunomicrospheres / Kondo A., Vamasaki R., Higashitani K. // O. Fermment Bioeng. 1992. v.74 - № 4. -p. 226-232.

373. Kula M.A., Kroner K.H., Hustedt H. Purificaion of Enzymes by Liquid Extraction. // Adv. Biochem. Eng., 24, 1982. p. 103.

374. Küpper H. et al. Cloning for cDNA of major antigen of foot and mouth disease virus and expression in E. coli. Nature / Kupper H. Keller W., Kurtz C.1981, 289, p. 555 559.

375. Kruger D., Dreson. Kamp B., Ziedler K. // Monat Sch. Veterinarmed. -1985.-40. -№ 2. -pp. 58-61.

376. Marffy F. Enzyme yields from cell of Brewers, Yeast distrupted by treatment in a horizontal disintegrator / Marffy F., Kula M.R.Ibid, vol. 16, №5, 1974. -pp. 623 -624.

377. Mizrachi A., Lazer A. Cytotechnol., 1, №3, 1988 pp. 199 - 214.

378. Monod J. La technigue de culture continue: theorie ef applications. Ann. Ins. Pasteur, Haris, 79. 1960. - pp. 390 - 410.

379. Morgan J. F. Nutrition of animal cell, in tissue culture. I. Intial Studies on a syntetic medium / Morgan J. F., Morton H. J., Parker R. C. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med.-73.- 1950. pp. 1 - 8.

380. Nesaratham S.T. The suscethtibility to ultrasonic disintegration of Klebsiella pheumonice Europ / Nesaratham S.T., Wase D.A., J., Blekbrought N. // J. Appl Microbial, and Piotechn., vol. 15. №1. -1982. - pp. 56 - 58.

381. Nickolaus N. What, When and Why of Caltridge Filters. "Filt. And Sep. 1975, №2, p. 155 - 169.

382. Nisson K // Trends Blotechnol. 5. - N 3. - 1987 - p. 10.

383. Norde W. Adsorption of proteins from soution at the solid- liquid. // Advan. / Colloid fiid Iterface See.- 1986.- v. 25. № 4.- p. 267 340.

384. Norde W. Protein adsorption at solid liquid interfaces: a colloid -chemical approach / Norde W., Fraaye J.G.F.M., Lyklema J. // ASC Sumposium Series. - 1987. - № -343. - p. 36 - 37.

385. Norde W. Protein adsorption at solid liquid interfaces: reversibility and conformation asplects / Norde W., Mac Ritchie F., Nowicka G., Lyklema J. // J. Colloid and Interfaces Sci. - 1986. - v. 112. - № 2. - p. 447 - 456.

386. Noser P. Limant A.J. Cell Biol. Suppl., 42, № 15. 1986 p. 10.

387. Pall D. Quality contor of absolute bacterial removal filters "Process Biohem" 1975, vol. 10, №1, p. 9 - 11.

388. Pardee A.B. Molecular mechanisnis of the "Cell Growth" in concer. (C., Nicolini, ed ) Plerum. New York. - 1981. - pp. 673 - 714.

389. Pollack R.E. Hough P.V.C. The cell surface and malignant transformation / Pollack R.E. Hough P.V.C. // Aun. Rev. Med. 25, 1974. pp. 431 - 446.

390. Polesky H. Comparison of viral hepatitis marker test metohods based on AABB Cap survey data Amer / Polesky H., Hanson S. J. Clin. Path. - 1981. - v. 76. -№4.-p. 521 - 524.

391. Pyle P., Darlow M. Firman I. E. Aheafed ultra high efficiency filter for mechanical ventilation Lancet / Pyle P., Darlow M. Firman I. E. //1969. pp. 136 -137.

392. Rindertz N. R. Savage R. E. Cellhy brids N. Y., San Francisco, London, -1976.-p. 336.

393. Ross R. The platelet-derived factor, // In: Tissue growth factors Ed. R. Baserga. Berlin etc. 1981. - pp. 133 - 160.

394. Trials. Pokrov Biologies Plan. Pokrov, Vladimir region, Russia Desember 11 16. -1995.-p. 66-67.

395. Schneider J. Genet. Eng. New, №5, 1987.- p.16, 20; № 1, 1988. p. 1429.

396. Shier J. " Diewichtigsten genormten FilterpufVerfaren. Ein Uberblik. -Chem Rundschau". 1976. - Bd. 29, № 38, s. 23, 25-29, 31, 33.

397. Shutte H. et. Al. Experiences with a 20-litre industrial bead mill for the disruption of microorganisms / Shutte H., Kroner K.H., Hustedt H.// Enzyme Microbiol, and Technol., vol. 5. №2. 1983. - pp. 143 - 148.

398. Siiman R.W. The visoostat: Prodnetstet metod ef feed rate control in oontinions fermentation / Siiman R.W. Bagley B.I. // Biotechnol. Bloend. - 21.1979.-pp. 173-179.

399. Spier R.E. The economic Implication of ammal cell biotechnology. 8 Int. Biotechnol. Symp., Paris, Proc., vol. 1, Paris. 1989. - pp. 205-215.

400. Tijssen P. In: Burdon H. & van Knippenberg P.H., ed. Laboratory technigues in biochemistry and molecular biology Amsterdam Elsevier, 1985.-p. 121.

401. TMG report on serum-free media and flavour and fragrans chemicals. Biotechnol. Bui., 7, №2. 1988. pp. 5 - 6.

402. Tolhert W.R., Prior P. Adv. Res. Anim. Cell Tehnol. Proc. NATO Adv. Res. Workshop. Brussels. 1987, Dordrecht, 1989. pp. 119 - 145.

403. Tolbert W.R. Large -scale mammalian cell culture; design and use of an economacal bath suspension system / Tolbert W.R. Schoenfeld R.A. Levis C., Feder J.//Biotechn. Bieng., vol. XXIV, №7, 1983. pp. 1670 1679.

404. Van Dulm P. The adsorption of human plasma albumin on solid surfaces, with special attention to the Kinetic aspects / Van Dulm P., Norde W. // J. Colloid and Interface Sci. 1983. - v.91. - № 1. - pp. 248 - 255.

405. Waymouth C. eds. The Growth Requirements of Vertebrate Cells in Vitro / Waymouth C., Ham R.G. Chappie P. J. // Cambrige Univ. Press. London and New York, 1981.-p. 28.

406. Waymouth C., Cell culture metods for molecular and cell biology. 1984. -V.l.-p. 23.

407. Welke C., Drebonromp B. Zur Qualtatras zellzucht // Arch exper. Veter. -1988.-pp. 138- 150.

408. Welke G. Zur Qualität ssicherung von Trypsin zyr Zellzucht / Welke G., Dresenkamp B.// Arch exper.Vet.med. Leipzig. - 1988. - V. 42.- pp. 302 - 307.

409. Weissman B.J., Eisken I. C. // Chem. Eng. Progr., vol. 63, № 9. -1967. -pp. 28 33.

410. Wisentan A. Biochemical basis of free and immobilized enzyme application in industry, analysis, synthesis and therapy // J. Chem. Technol and biotechnol. 1980. - V. 30 - pp. 521 - 529.

411. Zanka J., Leahy T. J. Practice Aspects of Tangential Flow Filtratioo in Cell Separation Purification of Fermentation Products, LeRoith D. et., al. (eds). // Amer. Chem. Soc. Symposium Ser. 27. 1985. - p. 51.

Информация о работе

Попова, Вера Михайловна
доктора биологических наук
Щёлково, 2011
ВАК 03.01.06

Диссертация

Разработка и совершенствование биотехнологических процессов при промышленном производстве биопрепаратов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы