Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка и использование высоких медико-биологических технологий в эндоэкологии

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Разработка и использование высоких медико-биологических технологий в эндоэкологии"

На правахрукописи

ГУКАСОВ Вадим Михайлович

РАЗРАБОТКА И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ВЫСОКИХ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ В ЭНДОЭКОЛОГИИ

Специальность: 03.00.16. - Экология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва 2004

Работа выполнена в Государственном унитарном предприятии «Отраслевой научно-практический комплекс «Здоровье» Межведомственного координационного совета по медицинской технике и высоким медицинским технологиям (г.Москва).

Официальные оппоненты: Академик РАН, доктор медицинских наук, профессор Пирузян Л.А. Доктор биологических наук, профессор Журавлев А.И. Доктор биологических наук Котелевцев СВ.

Ведущая организация - Институт экологии человека и гигиены окружающей среды РАМН.

Защита состоится 19 февраля 2004 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.17 в Российском университете дружбы народов по адресу : 113093, г. Москва, Подольское шоссе, д. 8/5, Экологический факультет РУДН.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу : 117923, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. б.

Автореферат разослан 19 января 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор

27918 1

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность темы. Одной из наиболее актуальных проблем современной эндоэкологии является изучение свободнорадикальных процессов. Активная деятельность человека на земле, связанная с загрязнением окружающей природной среды, существенно отразилась на состоянии биосферы и «индикатором» подобных изменений на клеточном уровне могут служить свободные радикалы - атомы или осколки молекул неорганической или органической природы, обладающие огромной реакционной способностью и влияющие на протекание обменных процессов, как в живых клетках организма, так и в биосфере, в целом (Козлов, 2000). Уровень протекания реакций свободнорадикального окисления (СРО) является «индикатором» нормальных и патологических процессов в организме. В связи с этим большое значение приобретают исследования реакций СРО как в нормальных клетках организма, так и при развитии патологических процессов разной этиологии (Эмануэль, 1954-1965;Тарусов, 1954-1970; Журавлев, 1961-1971; Козлов, 1965-1975; Владимиров, 1969-2000) Целый • ряд жизненно важных процессов в организме (дыхание, фосфорилирование, детоксикация чужеродных субстратов, окисление биологически важных соединений) протекает с участием свободных радикалов. При патологических процессах разной этиологии уровень протекания реакций СРО достаточно высок и значительно превышает таковой в случае клеток и тканей «условно здорового» организма. Свободные радикалы «фигурируют» при целом наборе болезней - от гипертонии, рака, лучевой болезни до болезни Паркинсона. Согласно исследованиям Р. Катлера (1989) существуют косвенные доказательства того, что свободные радикалы ускоряют процесс старения. Известно, что у долгожителей обнаруживается больше ферментов «поглощающих» свободные радикалы (например, супероксиддисмутазы) (Фридович, 1965). Отсюда чрезвычайно важное значение приобретает познание механизмов защиты организма от реакций СРО с участием ферментов и антиокислителей (антиоксидантнай защита - АОЗ).

Среди методов оценки реакций СРО в биосистемах особое место занимают биохемилюминесцентные методы, обладающие большой чувствительностью и позволяющие изучать кинетику СРО субстратов в целых и модельных системах. Переход к исследованию кинетики биохемилюминесценции (БХЛ), в частности, в плазме крови, создание современных высокочувствительных и надежно работающих хемилюминометров открывает широкие возможности многократного и динамического исследования пациентов без ущерба для их здоровья. Для оценки уровней неспецифической резистентности организма на основе измерения параметров СРО в биологических объектах разных систем сложности, используют современные высокие технологии, и, в первую очередь, аппаратно-программные комплексы с целью получения объективной информации о состоянии организма и его изменениях при развитии предпатологических и патологических процессов разной этиологии (Та-русов, Журавлев, 1961; Владимиров, Шерстнев, 1989; Журавлев, 2003; Гукасов и др., 2003). Данная работа представляет новое звено в цепи многолетних исследований сотрудников Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных химических соединений и Государственного унитарного предприятия «Отраслевой научно-практический комплекс «Здоровье» - рабочего органа Межведомственного координационного совета по медицинской технике и высоким медицинским технологиям.

1.2. Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилась разработка и применение высоких медико-биологических технологий, основанных на аппаратурно-программном обеспечении анализа универсальных неспецифических ответных реакций организма по измерению баланса свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты (отношение СРО/АОЗ) и его коррекции в эндоэкологии.

Для осуществления поставленной цели были определены следующие основные задачи:

1. Разработать и внедрить технологию аппаратурно-программного обеспечения оценки и прогнозирования действия антропогенных факторов разной природы на эндоэкологическое состояние организма человека и животных по изучению ;ртшптг| СРО/АОЗ в клинике и эксперименте.

2. Разработать технологию мониторинга коррекции эндоэкологического состояния организма и выявления групп риска по оценке динамики изменения уровня СРО/АОЗ

<3. Разработать технологию для прогнозирования биологической активности ряда природных и синтезированных фармакологических препаратов по изучению их про- и антиоксидантного действия в сочетании с их электронноакцепторной активностью, а также влиянием на показатели скорости деоксигенации эритроцитов крови, Н+АТФ-азную активность и трансмембранный потенциал субмитохондриальных частиц (СМЧ)

4 Разработать технологию оценки путей утилизации кислорода в биологических системах организма с целью диагностики скрытых форм его гипоксического состояния при длительном искусственном кровообращении

5 • Разработать и внедрить экспресс-микрометод индуцированной биохемилюминесценции (ИБХЛ) для анализа уровня СРО/АОЗ в плазме крови здоровых доноров и больных с разной этиологией заболевания

1.3. Научная новизна и научно-теоретическое значение Впервые разработаны и использованы в эксперименте и клинике принципы универсальности фазового изменения показателей уровня СРО/АОЗ. С помощью функциональных проб выявлены адекватные реакции организма и прогнозирование их развития, позволяющих определить предпатологию (патологию) организма и предложить для коррекции фармакологические средства, обладающие защитным антиоксидативным действием Разработка и применение программно-аппаратурного обеспечения и алгоритмов оценки функционального состояния организма по уровню СРО/АОЗ позволило оценить его резервные возможности и выраженность действия на него экстремальных факторов Впервые разработана технология оценки оксидазного (ферментативного) пути утилизации кислорода и связанного с ним аккумуляции АТФ в организме для изучения скрытых форм изменения эндоэкологического состояния организма человека и животных в условиях действия на него экстремальных факторов В клинических условиях (хронический гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда, нейроциркуляторная дистония, бронхиальная астма, гематологические и кожные заболевания), а также при действии на организм человека и животных экстремальных факторов (интоксикация ионами тяжелых металлов, четыреххлористым углеродом и табачным дымом, гипероксия, гипоксия, интенсивные физические нагрузки, экспериментальный инфаркт миокарда, экспериментальная язва желудка, циркуляторная и тепловая ишемия сердца и почек) впервые апробирован экспресс-микрометод ИБХЛ для анализа уровня СРО/АОЗ в плазме крови Впервые проведена оценка действия природных и синтетических соединений на показатели уровня СРО/АОЗ в простых модельных и сложных биологических системах (липосомы, синаптосомы, митохондрии, гомогенаты тканей), позволяющая выявить их биологическую активность (адаптогенную, аллергенную, противоишемическую, антихолинэстеразную, гестагенную и антигестагенную, рецепторосвязывающую, синергетическую, параметры токсикометрии)

1.4. Практическое значение. С помощью разработанного аппаратно-программного комплекса показана возможность использования технологии определения и регистрации интегральных показателей динамики индуцированного СРО плазмы крови для выявления донозологических состояний у практически здоровых людей и выявления групп риска у больных бронхиальной астмой, хроническими гастродуоденальнными заболеваниями, в процессе проведения- хирургических операций, эффективности лечения больных ишемической болезнью сердца и нейроциркуляторной дистонией, при скрытой форме гипоксии и оценки эффективности длительного искусственного кровообращения у человека и животных, оценки чувствительности организма к катехоламиновому стрессу и к фактору сезонности, к гипо- и гипероксии, интенсивным физическим нагрузкам

Динамическое наблюдение за параметрами индуцированного СРО методом БХЛ в сыворотки крови послужило ранним диагностическим тестом при развитии тяжелой ишемии и некротических изменении миокарда Разработанная технология оценки показателя

дыхательного коэффициента утилизации кислорода (ДКУК) в организме может быть успешно использована в клинике и эксперименте для диагностики скрытой гипоксии и выявления адекватности искусственного кровообращения. Разработанная комплексная технология, включающая разработку и модификацию методов, а также аппаратурного обеспечения для оценки нарушения процессов СРО/АОЗ, деоксигенации эритроцитов, электроноакцепторной активности, флуоресцентного выявления свободных жирных кислот при экстремальных воздействиях на организм; избытке катехоламинов при стрессе; избытке восстановленных пиридиннуклеотидов; инактивации антиокислительных компонентов при агрессии и авитаминозе Е; накоплении свободных жирных кислот при гипоксии; накоплении металлосодержащих комплексов (интоксикация ионами ртути и свинца, накопление соединений геминового и негеминового железа), позволяет проводить раннее и комплексное выявление эндоэкологических факторов, переключающих оксидазный путь утилизации кислорода, связанный с ресинтезом АТФ и накоплением энергии в организме на оксигеназный, связанный с образованием высокотоксичных продуктов СРО. Разработка технологий прогнозирования чувствительности организма к эндоэкологическим факторам в условиях проведения функциональных проб по оценке динамики изменения показателей СРО/АОЗ в микроколичествах плазмы крови позволяет ускорить и предопределить проведение профилактических и специальных осмотров контингентов лиц к определенным видам нагрузок и профессиональной деятельности, разработать схемы тренировочного процесса ускорения подготовки высокопрофессиональных специалистов с большими резервными возможностями организма в определенных областях деятельности (спорт, космонавтика и т.д.). Возможность проведения индивидуального мониторинга коррекции эндоэкологического состояния организма с помощью разработанной технологии, включающей микро-экспресс методы оценки показателей СРО/АОЗ в плазме крови организма человека и животных с использованием аппаратно-программного комплекса PXL-01 и программного пакета Monies Status позволяет оптимизировать процесс коррекции организма до формирования адекватной реакции, что значительно повышает эффективность проводимого лечения и дает значительный экономический эффект, сокращая пребывание больных в стационаре. Использование технологии выявления биологической активности природных и синтезированных химических соединений по их влиянию на уровень протекания СРО/АОЗ в простых биологических системах in vitro позволяет значительно ускорить и удешевить этап направленного синтеза новых химических соединений с выраженной адаптогенной активностью, наименьшей токсичностью и аллергенностью при разработке новых высокоэффективных корректоров эндоэкологического состояния организма.В результате проведения скрининга биологически активных химических соединений найден новый синтетический препарат адаптогенного действия трекрезан, являющийся активным антиоксидантным средством. Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре системной экологии экологического факультета РУДН и кафедре молекулярной фармакологии и радиобиологии РГМУ. Технологии представленные в диссертации используются для выявления больных из групп риска на кафедре внутренних болезней №2 1-го лечебного факультета Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова, Всероссийском центре хирургии для оценки адекватности искусственного кровообращения, в Государственном унитарном предприятии «Отраслевой научно-практический комплекс «Здоровье» для оценки уровней адаптации, выявления донозоологических состояний и факторов эндоэкологического риска у здорового контингента лиц, занятых по работам в оборонно-промышленном комплексе. 1.5. Основные положения, выносимые на защиту.

1.Высокие медико-биологические технологии по измерению уровня СРО/АОЗ в организме человека и животных в клинике и эксперименте.

2.Программно-аппаратное обеспечение анализа уровня СРО/АОЗ как эффективный способ коррекции эндоэкологического состояния организма.

3.Дыхательный коэффициент утилизации кислорода (ДКУК) как метод выявления скрытой формы гипоксии в организме.

4.Уровень СРО/АОЗ по анализу индуцированной биохемилюминесценции в микроколичествах плазмы крови как способ выявления донозологических состояний условно здорового контингента лиц и групп риска больных с разной этиологией.

5.Адаптогенная и антиаллергенная активности биологически важных соединений и компонентов крови по анализу СРО/АОЗ и ряда биохимических показателей (трансмембранный потенциал, ЬГАТФ-азная активность).

6.Антигипоксическая активность биологически важных соединений по анализу уровня СРО/АОЗ, электронноакцепторной активности (ЭА) и скорости деоксигенации эритроцитов крови.

1.6. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Всесоюзных, Всероссийских и Международных конференциях: 2-ой Всесоюзный симпозиум по пересадке почки (Вильнюс 1978); 1'" Научной конференции «Кровоснабжение, метаболизм и функция органов при реконструктивных операциях», (Ереван, 1979); Региональной сессия научного совета по неорганической химии АН СССР, (Фрунзе, 1980); Зей Всесоюзной конференции «Биологически активные соединения кремния, германия, олова и свинца». (Иркутск, 1980); Всесоюзной учредительной конференции по токсикологии (Москва, 1980); Ш Всесоюзного симпозиума «Физиологические и клинические проблемы адаптации и гипоксии, гиподинамии и гипотермии» (Москва, 1981); Материалы VII Международного конгресса по гипербарической медицине (Москва, 1981); Всесоюзная конференция «Актуальные проблемы оценки фармакологической активности химических соединений» (Москва, 1981); 1ш Всесоюзного биофизического съезда (Москва, 1982); VII международный конгресс «Гипербарическая медицина» (Москва, 1983); Всесоюзное совещание «Биоантиоксидант» (Черноголовка, 1983); Всесоюзная научная конференция «Использование моделей патологических состояний при поиске биологически активных препаратов»(Москва, 1983); VII International Congress of Hyperbaric Medicine, USA, (Long Beach, California, 1984); 1-ый Всесоюзный симпозиум «Фармакологическая коррекция кислородзависимых патологических состояний» (Москва, 1984); III симпозиум по гипербарической оксигенации «Гипербарическая оксигенация» (в хирургии и реаниматологии) (Москва, 1985); II Всесоюзная конференция «Биоантиоксидант» (Москва, 1986); Всесоюзная конференция «Фармакологическая коррекция гипоксических состояний» (Москва, 1988); «Всесоюзная научная конференция. Оценка фармакологической активности химических соединений: принципы и подходы (Москва, 1989); Ш Всесоюзная конференция «Биоанти-оксиданты», (Москва, 1989); International conference on «Regulation of free radical reaction» (biomedical aspects), Bulgaria (Varna 1989); Constituent Congress International Society for pathophysiology (Moscow, 1991); Congress of the International Society for Adaptive Medicine (Japan, Tokyo, 1993); International Conference on Clinical chemiluminesce (Berlin, 1994); VII Всероссийского симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 1994); XV European Section Melfing of the International Society for Hart Research (Copenhagen, 1994); 2ой Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» (Москва, 1995); 23 International Congress of Internal Medicine (Manila, Philippines, 1996), Всероссийская конференция с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Санкт-Петербург, 1999); 5ой Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы защиты и безопасности» (Санкт-Петербург, 2002); 4-ый Международный форум «Высокие технологии XXI ВЕКА «ВТХХ1-2003» (Москва, 2003).

1.7. Публикации. По теме диссертации опубликовано 135 работ в форме статей и тезисов в сборниках научных конференций, трудах научных съездов и конференций.

1.8. Структура и объем диссертации. Структура диссертации традиционна. Она содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, 7 глав с результатами экспериментов и их обсуждением, общие выводы и

указатель цитируемой литературы. Работа изложена на 255 стр. машинописного текста, содержит 30 таблиц, проиллюстрирована 80 рисунками и схемами. Библиографический указатель содержит 252 ссылки на работы отечественных и иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ 2.1 Экспериментальные материалы и клинические исследования. Работа основана на экспериментальном материале и клинических наблюдениях (табл. 1). Экспериментальные данные получены на 34 собаках, на 1232 крысах, на 1125 мышах. Клинические наблюдения включают 252 практически здоровых донора и 549 больных. Проведено испытание 277 биологически активных химических соединений (ХС).

Табл. 1. Общая характеристика экспериментального материала и клинических наблюдений.

г контрольная группа. Кожные заболевания: очаговая склеродермия, контрольная группа 20 15 10

2 Технология оценки ДКУК Операции на сердце в условиях длительного ИК. 26 34(собаки)

3 Технология комплексной оценки механизма противопшоксической активности природных и химических соединений: влияние на динамику СРО гомогенатов: сердца, почек; , Влияние на деохсигенацию эритроцитов. Модель экспериментального инфаркта миокарда, модель тепловой ишемии сердца. Модель циркуляторной ишемии, модель тепловой ишемии. Модифицированная и стандартизированная кулонометрическая методика 290 (крысы) 130 (крысы) 90 (крысы) 115 (крысы) 159 образцов крови 11 4 3 2 8

Определение электрон- акцепторной активности Модифицированная и стандартизированная люминесцентная методика 747 тест-систем 36

4 Технология комплексной оценки адахпо-генлой активности природных н химических соединений: Определение уровня антнокиелнтельной активности (АОА). Определение мембранного потенциала. Определение Н* АТФ-азной активности. Определение устойчивости к гипоксии. Стаддартиифованная ре2*-индуцироваяная БХЛ-методика определения АОА: в липосомах, в митохондриях, в гомогенатах органов крыс 6 субмигохондриальных частицах В субмигохондриальных частицах Модель острой гипобарической гипоксии 106 (крысы) 390 (мыши) 400 образцов тест-систем 185 образцов тест-систем 720 образцов тест-систем 720 образцов тест-систем 79 37 4 24 24 13

Определение физической выносливости. Определение выживаемости при воздействии радиации. Тест плавания Модель рентгеновского облучения 360 (мыши) 330 (мыши) 12 11

5 Технология определения параметров токсикометрии. Определение динамики показателей СРО. Стандартизированная модель Ре^-ивдуцированной БХЛ в липосомах 225 образцов тест-систем 9

б Технология определения специфичности аллергенов. Определение динамики показателей СРО Стандартизированная модель Рс2*-индуцированпой БХЛ в липосомах 200 образцов тест-систем, 40 аллергенов

2.2 Методы исследования. Состояние уровня СРО/АОЗ оценивали в митохондриях, гомогенатах органов и плазме крови с помощью метода Ре2+-индуцированной БХЛ (Владимиров и др., 1969). В работе также использовался модифицированный микрометод Ре2*-индуцированной БХЛ (Гукасов и др., 1987). Содержание ТБК-акгивных продуктов определяли спектрофотометрически в двухволновом режиме: Xi =532 нм, Xi =580 нм с помощью методики (Asakawa, 1980). Прямое определение первичных и вторичных продуктов ПОЛ в липидах, экстрагированных из гомогената миокарда, проводили по методу (Bligh, Dyer, 1959; Кейтс, 1975) с добавлением ионола в экстрагирующую смесь до конечной концентрации 10'3 М. По спектрам поглощения раствора липида в гексане измеряли оптическую плотность на длинах волн 215 нм (общие липиды), 232 нм (диеновые конъюгаты, ДК) /Bolland, Koch, 1945/, 275 нм (кетотриеновые конъюгаты, КТ) с перерасчетом на 1 мг липида в 1 мл гексана (ед.оптич.плотн./мг липида). Рассчитывали индексы окисленности Д (232/215) и Д (275/215), отражающие долю липидов, окисленных до ДК и КТ (Klein, 1970). Спектры поглощения регистрировали на спектрофотометре Hewlett Packard 8451 А. Содержание шиффовых оснований (ШО) (Bidlack, TappeJ, 1973) в растворе липидов в гексане определяли на спектрофотометре Hitachi по спектрам испускания при длине волны возбуждения 365 нм и длинах волн испускания 420-440 нм. Соответствующих максимуму интенсивности флуоресценции ШО (в отн. ед.), которую пересчитывали на 1 мг липида в 1 мл гексана. Антиокислительная активность ХС и биологических субстратов определялась методом Ре2+-индуцированной БХЛ (Владимиров и др., 1973). Активность СОД определяли спектрофотометрически по степени ингибирования восстановления нитросинего тетразолиевого в системах генерации супероксидного анион-радикала ксантин/ ксантиноксидаза (Beachump, Fridovich, 1971). Активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и митохондриальной а-глицерофосфатдегидрогеназы (а-ГФДГ) определяли цитохимически в лимфоцитах крови по Нарциссову (1969). В нейтрофилах определяли активность миелопероксидазы (МП) бензидиновым методом (Лилли, 1969), щелочной фосфатазы (ЩФ) - по Davis, Ornstein /1959/, КФ - по Goldberg, Barka (1962). Измерение трансмембранного электрического потенциала на мембране СМЧ проводили с помощью метода искусственных проникающих ионов (Либерман, Топалы, 1969). СМЧ получали при ультразвуковой дезинтеграции сердца быка (Хансон, Смит, 1964). Н* АТФ-азную активность СМЧ определяли по методу (Нимура, Чане, 1967). Активность аденилатциклазы плазматических мембран определяли по методу (Орехович и др., 1975). Выделение плазматических мембран печени мышей проводилось по методу (Neville, 1968). Парциальное напряжение кислорода в венозной и артериальной крови, а также динамику кислотно-щелочного равновесия исследовали микрометодом Аструпа на анализаторе "Radiometer" (Дания). Для изучения регионарного газообмена использована модифицированная методика (Новокшонов, 1985) сочетания электромагнитной флуометрии (на аппарате фирмы "Radiometer") с катетеризацией органных сосудов через периферические ветви. Расчет регионарного потребления кислорода проводили по Фику: ПОг =[МОК-(рОгА - рОгВ)]/100, где ПОг -потребление кислорода (мл/мин), МОК - минутный объем кровообращения -производительность аппарата (мл/мин), рОгА и рОгВ - парциальное напряжение кислорода в артериальной и венозной крови (об.%). Проводилось исследование содержания в крови молочной и пировиноградной кислот с расчетом их соотношения и уровня эксцесс--лактата (Huckebee, 1958); свободного гемоглобина (Дервиз, Бялко, 1978). Для оценки аллергологического статуса пациентов проводили определение уровня общего иммуноглобулина Е методом иммуноферментного анализа; скарификационные кожные пробы по общепринятой в клинической аллергологии методике (Lieberman, Crawford, 1982) со стандартным набором готовых аллергенов с использованием в качестве тест-контроля гистамина и растворителя, а для оценки уровня неспецифической реактивности бронхов проводился ацетилхолиновый тест по принятой в клинике методике (Бородин, Дорогова, 1984). В работе использовались модифицированные и стандартизированные методы: определения АОА с помощью Ре5*"индуцированной БХЛ в липосомах куриного желтка

(Гукасов, Каплан, 1983); кулонометрический метод определения деоксигенации эритроцитов (Гукасов, Гацура 1986); определение электронакцепторной активности ХС люминесцентным методом по дегидрированию НДДН (Гукасов, Гацура, 1986). Для оценки разработанных интегральных показателей системы СРО/АОЗ - Кц>х и Z, характеризующих резистентность организма к экстремальным воздействиям и уровни адаптации организма использовался созданный аппаратно-программный комплекс на базе портативного хемилюминометра PXL-01 и программного продукта "Montes Status" (Гукасов, 1996).

2.3 Статистическая обработка результатов исследований. Статистическая обработка результатов проводилась на персональном компьютере с использованием стандартного пакета прикладных статистических программ Statistica for Windows, StatSoft, Inc., 1993 и оригинального пакета статистических программ Статистика для баз данных, версия для Windows 95/NT (Пятницкий, Соколинский, кафедра высшей математики РГМУ).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Разработка и применение высоких медико-биологических технологий по измерению уровня СРО/АОЗ в организме человека и животных в клинике и эксперименте.

Для создания технологии оценки адаптационной перестройки в организме человека и животных по изменению системы СРО/АОЗ необходимо было разработать: чувствительные, экспрессные, информативные методы оценки показателей системы в микрообъемах плазмы крови; изучить закономерности изменений показателей системы при действии на организм экстремальных экзо- и эндоэкологических факторов среды; описать алгоритмы возможных изменений показателей системы при различных состояниях организма; разработать программно-аппаратный комплекс для регистрации, математической обработки результатов анализов, их визуализации и хранения в базе данных; разработать аналитическую экспертную систему оценки уровней адаптационной перестройки организма для определения его резервных возможностей, эффективности коррекции и прогноза состояния организма в условиях действия экзо- и эндоэкологических факторов среды. В качестве метода для оценки влияния экзо- и эндогенных факторов на динамику СРО в организме животных и человека был выбран метод ИБХЛ. Данные, приведенные в ряде работ (Фархут-динов, 1984; Vladimirov, 1986, свидетельствуют о том, что метод ИБХЛ позволяет наиболее точно определять интенсивность протекания реакций СРО в биологических системах. С целью мониторинга эндоэкологического состояния организма в работе разработан чувствительный микрометод определения интенсивности СРО, основанный на анализе параметров Fe2+ -индуцируемой БХЛ (рис. 1). Индукцию БХЛ осуществляли с использованием растворов, содержащих ионы :. В качестве показателей

СОР/АОЗ рассчитывались интегральные показатели и коэффициенты. Определяли следующие параметры кривых ИБХЛ для оценки уровня СРО в плазме крови -интенсивность быстрой вспышки БХЛ (I), рассчитываемую как максимальную амплитуду БХЛ, а также К, " ¡щшмьЛбуфер; для оценки АОЗ плазмы крови — максимальную скорость ингибирования БХЛ (V), рассчитываемую как тангенс угла наклона (tga) начальной «нисходящей части» вспышки, а также Ку^Ущвзмы/ Vey,^ период полузатухания БХЛ (РР), определяемый как время в секундах, в течение которого интенсивность БХЛ достигает величины полуамплитуды вспышки, а также Крр = РРплммы / РРбуфер. Для суммарной оценки СРО/АОЗ рассчитывали интегральные показатели БХЛ (IPx, Z) по формуле: IPx -(I • РРхлУУ, а также К|Р, =1РХл^ы/ IPx буфер и Z= (К, -Kj ) + (К2-КРР ) + (K3-Kv ) + (К* -Кц.«), где Кь К2, - коэффициенты.

Разработанный микрометод БХЛ позволяет измерять и рассчитывать параметры кривых индуцированной БХЛ системы содержащей 4-10 мкл плазмы крови (раздел 3.7), что дает возможность осуществлять динамический индивидуальный контроль за состоянием системы СРО/АОЗ при изменении эндоэкологического состояния организма как человека, так и экспериментальных животных.

Рис.1. Изучаемые параметры быстрой вспышки Гег*-индуцируемой БХЛ. I„,„, - интенсивность максимальной амплитуды быстрой вспьппки БХЛ, \4п> - максимальная скорость иншбирования быстрой вспьшжи V, РР - период полузатухания БХЛ, Ц* - стационарная БХЛ.

Согласно теории метода Fe5* •-индуцированной БХЛ разработанной ранее (Владимиров и др., 1974) интенсивность XJI быстрой вспышки пропорциональна концентрации липидных гидроперекисей в исследуемой биологической пробе, а значение параметра Ущм быстрой вспышки тем больше, чем выше антиокислительная активность присутствующих в реакционной системе ХС; при этом существенное влияние на его величину оказывают антиоксидантные свойства самого железа, что особенно заметно при добавлении в систему больших концентраций индуктора (FeSCVTHiO) (Владимиров, Петренко, 1976). Известно также, что определенный вклад в формирование быстрой вспышки вносят процессы, несвязанные напрямую с перикисным окислением липидов (ПОЛ) (СРО белков, рекомбинация радикалов воды) (Фархутдинов, 1984). Очевидно, что при регистрации БХЛ проб, содержащих микроколичества биологического материала, роль процессов, связанных с рекомбинацией радикальных продуктов нелипидной природы, возрастает. В качестве вероятного механизма, приводящего к активации генерирования свободных радикалов при введении ионов Fe2* в буферную среду, можно предложить их взаимодействие с фосфатными группами, что, как известно, обусловливает образование в качестве одного из продуктов супероксидного радикала (Semin et al., 1985) и как следствие увеличение интенсивности сверхслабого свечения.

Создание микрометода анализа СРО/АОЗ плазмы крови явилось одним из базовых элементов при разработке медицинских технологий в данной работе (схема 1). С целью изучения информационной ценности разработанного микрометода по динамике показателей СРО плазмы крови, разработки алгоритмов и программного обеспечения для оценки и прогноза эндоэкологического состояния организма проводилась оценка его использования у здорового контингента людей (спортсмены, лица занимающиеся оздоровительными комплексами), больных с легочными, желудочно-кишечными заболеваниями, ишемической болезнью сердца, вегетососудистой дистонией, кожными заболеваниями, злокачественными заболеваниями крови, операционных больных.

Состояние здоровья условно здоровых доноров изучали с помощью общепринятых методов клинико-функционального обследования с включением инструментальных методов исследования, определения динамики СРО/АОЗ плазмы крови -индуцированной БХЛ методом в условиях покоя и после стандартной функциональной нагрузки. Функциональной нагрузкой после исходного состояния (проба 1) служила проба с 30 приседаниями в течение 30 сек. (проба 2) с последующим 5-минутным отдыхом (проба 3), после чего испытуемый выполнял бег на месте 45 сек. с максимально возможной для него интенсивностью (проба 4). Восстановительный период после него ограничивался также 5 мин. (проба 5). Результаты оценки динамики показателей системы СРО/АОЗ, полученные с помощью БХЛ-метода, сопоставлялись с данными клинико-функционального обследования для выяснения степени корреляции между ними.

Схема 1.

Базовые элементы для пазработкн медицинских технологий на основе показателей СРО/АОЗ в биологических системах

и

Исследования показали, что по направленности изменений изучаемых показателей БХЛ плазмы крови у условно здоровых доноров в процесс проведения функциональных проб можно выделить два типа реакции. На рис. 2 представлена динамика изменения IPx у условно здоровых доноров. Для первого типа реакции (27 чел.) характерно наличие высокого исходного уровня понижение 1Рх на функциональные как аэробные, так и анаэробные нагрузки, что связано с активацией деятельности эндогенной АОЗ, восстановление ЕРх в период отдыха до исходных значений вследствие достаточных фондов в организме антиокислительных веществ и ферментов, что способствует поддержанию биоокислительного гомеостаза. Противоположная картина установлена у условно здоровых доноров, реагирующих по второму типу (28 чел.). Исходный уровень IPx у них, как правило, существенно ниже. При физических нагрузках (как аэробных, так и анаэробных) значения № увеличиваются, а в период отдыха наблюдается лишь тенденция к его понижению Общий уровень ЕРх по окончании функциональной пробы у данной группы спортсменом существенно выше исходного, что говорит о нарушении антиокислительных регуляторных механизмов гомеостаза вследствие истощения резервов АОЗ.

Рис. 2. Типы реакции у условно здоровых доноров по данным интегрального показателя И БХЛ, где1Рх=(1„РРхл)/У»

Если рассматривать изменения БХЛ с позиций системного подхода, то важно проанализировать характер сдвигов отдельных параметров БХЛ плазмы крови у условно здоровых доноров с различными типами реакции. Для всех лиц, реагирующих по первому типу, характерна синхронность фазовых изменений между показателями РР и IPx (рис. 3). Для скорости ингибирования типично нарастание в период аэробной нагрузки и отдыха после нее, тогда как реакция на анаэробную нагрузку сопровождается выраженным понижением показателя V до исходного уровня. Иная картина наблюдается у спортсменов, реагирующих по второму типу. У всех лиц этой группы отсутствует синхронное изменение показателей РР и IPx. Так, если значение РР при аэробной нагрузке и отдыхе после нее повышается, то при анаэробной нагрузке отмечается противоположная направленность данного показателя. Изменения показателей V и I у данной группы условно здоровых доноров не имели достоверных различий.

С целью выяснения информативной ценности показателей БХЛ они были сопоставлены с результатами клинико-функционального обследования доноров •. Было установлено, что среди лиц, реагирующих по первому типу реакции, ни в одном случае не было выявлено признаков патологии или предпатологии, в то время как все случаи предпатологии обнаружены в группе условно здоровых доноров со вторым типом реакций, которые были связаны, по данным ЭКГ, с дистрофическими изменениями в сердце, выражающимися в нарушении питания сердечной мышцы и проявляющиеся в нарушении сердечного ритма Полученные результаты свидетельствуют о том, что у лиц, реагирующих по второму типу,

имеются специфические физиологические и биохимические особенности, предопределяющие возможность возникновения предпатологических состояний. Выявленное нами существенное различие между двумя типами реакции связано с наличием ряда особенностей, что крайне важно для диагностических целей (см. табл. 2). Это касается направленности и динамической согласованности изменений изучаемых показателей, характера фазовых сдвигов 1Рх на нагрузку, а также скорости и степени восстановления последнего до исходного уровня после функциональной нагрузки. При этом ведущим показателем для первого типа реакции является скорость ингибирования, тогда как для второго типа реакции патогномоничным является период полураспада Н2О2. Важно подчеркнуть, что для реакции первого типа, по данным 1Рх, характерно превалирование уровня защиты (УЗ) над уровнем возникшего отклонения (УО), тогда как. у лиц с неадекватной реакцией значение уровня отклонений больше уровня защиты. Можно полагать, что отмеченное обстоятельство предопределило отсутствие у лиц, реагирующих по первому типу, всяких патологических нарушений, тогда как вся выявленная предпатология была обнаружена у условно здоровых доноров, реагирующих по второму типу. Отмеченные особенности позволяют заключить, что лица, реагирующие по первому типу, являются практически здоровыми и такой тип реакции следует признать адекватным; лица же, реагирующие по второму типу, могут иметь скрытые, неинформативные формы патологии (состояние предпатологии) и данный тип реагирования, учитывая его особенности, можно считать неадекватным.

Проведенное сопоставление между различными показателями динамики НгОг-индуцируемой БХЛ в плазме крови позволило выявить наличие достаточно четкой связи между характером (адекватностью) реакции и состоянием испытуемых условно здоровых доноров по данным клинико-функционального обследования. Полученный на основании предлагаемых нами параметров БХЛ интегральный показатель 1Рх является информативным, объективным и, что особенно важно, экспрессным тестом, позволяющим оценить функциональное состояние условно здоровых доноров и наличие у них клинически не проявляющихся форм патологии. При проведении анализа динамики показателей системы СРО/АОЗ (рис. 3) в группе практически здоровых доноров в процессе выполнения ими аэробно-анаэробной функциональной пробы было установлено три типа ответной реакции показателей АОЗ плазмы крови: 1 - согласованный тип реакции системы АОЗ (позиция 1, уменьшение РР, увеличение V), 2 - частично согласованный тип реакции АОЗ (позиция 2, уменьшение РР, уменьшение V), 3 - рассогласованный тип реакции системы АОЗ (позиция 3, увеличение РР, уменьшение V) (описание типов реакции АОЗ см. в разделе 3.2). При изучении динамики интегрального показателя Ъ у группы условно здоровых доноров в процессе выполнения ими аэробно-анаэробной функциональной пробы удалось достоверно выявить помимо группы доноров с адекватной и неадекватной реакцией группу доноров с замедленной адекватной реакцией (рис. 4, группа 2). Использование показателя Ъ позволяет количественно разделить группу условно здоровых доноров в процессе выполнения ими аэробно-анаэробной функциональной пробы на доноров с адекватной реакцией, доноров с адекватной замедленной реакцией и на группу доноров с неадекватной реакцией, что может соответствовать существованию различных уровней адаптации организма условно здоровых доноров по их про-антиоксидантному статусу (рис. 5). Полученные данные имеют большое значение для проведения мониторинга уровней адаптации здорового организма к различным экстремальным воздействиям.

С целью оценки информационной ценности показателей индуцированной БХЛ при использовании разработанного микрометода проводилось изучение динамики СРО/АОЗ в организме экспериментальных животных при действии различных экзо и эндоэкологических факторов таких как: авитаминоз Е, интоксикация ионами тяжелых металлов и ОО», гипербарический кислород, острая пшобарическая гипоксия, нормобарическая гипоксия, хроническая ингаляция табачным дымом, циркуляторная ишемия почек, экспериментальный инфаркт миокарда, катехоламиновый стресс, сезонность года и др.

Табл. 2. Патофизиологические особенности разных типов реакций условно здоровых доноров по данным динамики показателей СРО/АОЗ в процессе проведения аэробно-анаэробной функциональной нагрузки.

Тип реакции Направленности изменений изучаемых параметров БХЛ Динамическая согласова ниость междуРР и IPx Особенность фазовых изменений Характер восстановления Ведущий диффе-ренциаль ный показатель Взаимоотношение МЗ и МО Наличие патологиче ских сдвигов Оценка функцио иального состояния организма Характер реакции

I РР V IPX синхронность характер колебаний IPx скорость выраж ен- нось

1 + имеется имеет ся на исходном уровне быстрая латная V УЗ УО отсутствует практически здоров адекватная

11 + + + + отсутствует отсутствует отклонение от исходного уровня медленная ньпол ная РР УЗ УО имеются ьаличие патологии неадекватная

Примечание I - интенсивность быстрой вспышки БХЛ, V - максимальная скорость ингибирования БХЛ, РР - период полузатухания БХЛ, 1РХ =(1 РР)/ V, УЗ - уровень защиты, УО - уровень отклонения, МЗ - максимум защиты, МО - максимум отклонения. «-» - уменьшение; «+» - увеличение.

Рис. З.Типы реакций показателей системы СРО/АОЗ у практически здоровых доноров в процессе выполнения ими аэробно-анаэробной функциональной пробы. - согласованный, тип реакции системы АОЗ, ^ частично согласованный тип реакции АОЗ, § рассогласовааный тип реакции системы АОЗ. Номера проб см. в рис. 2.

Рис. 4. Изменение динамики интегрального показателя X у практически здоровых доноров с разной адекватностью реакции на аэробно-анаэробную функциональную пробу. Номера проб см. в рис. 2.

Рис. 5. Уровни доверительных интервалов значения показателя X у практически здоровых доноров.

3.2 Аппаратно-программное обеспечение для анализа СРО/АОЗ как эффективного способа коррекции эндоэкологического состояния организма.

Полученные результаты с использованием разработанного микрометода ИХЛ по измерению динамики СРО/АОЗ плазмы крови как у здоровых, так и больных с различной нозологией позволили разработать алгоритмы и программное обеспечение для оценки уровней адаптации организма в условиях действия на него разработанных функциональных нагрузок или экзо- и эндогенных экстремальных факторов. Вопросы алгоритмизации диагностики являются основными при решении задач автоматизации диагностического процесса. В настоящее время алгоритмы клинической диагностики широко используются в медицинской практике ряда ведущих медицинских учреждений. Наиболее широко используемыми диагностическими алгоритмами являются алгоритмы с применением "весовых" коэффициентов для каждого признака и выбором диагноза по наибольшему "весу" (Казначеев и др., 1980). При организации донозологических обследований населения с целью оценки адаптационного уровня здорового человека и выявления состояний предпатологии большое значение имеет разработка высокочувствительных и объективных показателей функциональных возможностей организма.

Одним из перспективных направлений в этом аспекте может стать определение в плазме крови перекисных продуктов, так как этот показатель отражает интегральные изменения, происходящие во внутренней среде организма. Использование разработанных функциональных проб позволяет судить не только о наличии исходного уровня системы СРО/АОЗ, но и оценивать резервы этой системы в организме. Перспективным направлением в этой области может стать разработка специфических функциональных проб, основанных на отборе отдельных факторов риска экстремальных условий среды, с которыми приходится постоянно сталкиваться здоровому человеку и вырабатывать к ним соответствующие адаптационные механизмы, реализуемые в первую очередь за счет изменения адекватности состояния системы СРО/АОЗ и связанных с ней перестройкой кислородного гомеостаза в организме. Особенно в такой оценке системы СРО/АОЗ нуждаются контингенты здоровых лиц, постоянно сталкивающихся со стрессовыми ситуациями, от которых во многом зависит жизнь самого человека и даже вопросы глобального характера. От того, каков уровень системы СРО/АОЗ у конкретного индивидуума, зависит характер адекватности ответной реакции организма на стрессовую ситуацию. Адекватность реакций зависит также от наличия высоких резервных возможностей организма (системы АОЗ). В связи с этим на первое место выдвигаются проблемы, связанные с организационно-методическими вопросами обеспечения работ, связанных с разработкой методики проведения анализа системы СРО/АОЗ в плазме крови, диагностической матрицы, описывающей уровни состояния системы СРО/АОЗ и алгоритмы программного обеспечения оценки уровней адаптации здорового и больного человека. Для разработки диагностической таблицы алгоритмов уровней адаптации здорового и больного человека было использовано несколько принципов, основанных на закономерностях изменения системы СРО/АОЗ, выявленных в группах условно здорового и больного контингента лиц с использованием микрометода ИБХЛ:

1. Принцип направленности показателей системы СРО/АОЗ [увеличение (+), уменьшение (-)] в плазме крови после проведения функциональной пробы;

2. Принцип согласованности работы системы АОЗ. Тип реакции АОЗ считается согласованным, если определяется увеличение активности системы как по показателю V (увеличение), так и по показателю РР (уменьшение РР). Если активность АОЗ изменяется только по одному показателю, то такой тип реакции является частично согласованным. Если активность АОЗ уменьшается по обоим показателям, как-то уменьшение V и увеличение РР, то такая реакция АОЗ является рассогласованной.

3. Принцип уникальности каждого показателя, оцениваемый введением весовых коэффициентов каждому показателю при расчете суммарного коэффициента Ъ, дающий интегральную оценку каждому уровню СРО/АОЗ (адаптации организма). Коэффициент оценивался путем сложения изменений величин показателей системы СРО/АОЗ выраженных

в %-ном отношении к исходным данным (с учетом значения их функциональной напрвленности) и умноженных на весовые коэффициенты (К).

Z=KI+KPP +KV+KIPx., где I, РР ,V и 1Рх - показатели БХЛ.

4. Принцип оценки резервных возможностей организма. Если в ответ на функциональную нагрузку выявляется увеличение активности 2-х показателей АОЗ, то такие резервные возможности организма считаются большими. Если в ответ на функциональную нагрузку выявляется увеличение активности только одного показателя АОЗ, то такие резервные возможности организма оцениваются как ограниченные. Если в ответ на функциональную пробу выявляется уменьшение активности показателей АОЗ, то такие резервные возможности организма оцениваются как сниженные.

5. Принцип оценки действия экзо- и эндоэкологических факторов на организм. Если в условиях выполнения стандартной функциональной пробы на организм на пациента действуют какие-то экзо- и эндоэкологические факторы включая проведение медикаментозного или другого типа лечения или же занятие спортом, то, в зависимости от того, какой уровень согласованности АОЗ выявляется, производится оценка лечения (тренировок), воздействия факторов. Если достигается согласованная реакция АОЗ, дается оценка воздействия факторов на организм или лечения (тренировок) как хорошая. Если достигается частичная согласованность в звеньях АОЗ, то оценка воздействия факторов на организм или лечения (тренировок) расценивается как удовлетворительная. Если в результате действия факторов на организм или лечения (тренировок) происходит рассогласование работы звеньев АОЗ, то дается оценка лечения (тренировок), как неудовлетворительная.

6. Принцип оценки прогноза действия экзо- и эндоэкологических факторов на организм. Если в процессе действия экзо- и эдоэкологических факторов на организм человека включая проведение лечебных (оздоравливающих) процедур, достигается согласованная реакция АОЗ организма, то прогноз такого действия факторов на организм, в том числе лечения или оздоровления считается благоприятным, устойчивым. Предполагается, что согласованная реакция АОЗ повысит устойчивость организма к экстремальным факторам внешней среды на длительный период времени. Если в результате воздействия на организм пациента факторов, в том числе лечения или оздоровления (тренировок), тип реакции АОЗ установится как частично согласованный, то прогноз такого действия факторов на организм в том числе и лечения или оздоровления оценивается, как благоприятный, но кратковременный. При длительном или сильном воздействии экзо- и эндоэкологических факторов на организм, в том числе неадекватно подобранной схеме лечения, оздоровления или физических тренировок, может возникнуть феномен рассогласования АОЗ. В таком случае прогноз проведенного лечения или оздоровления (тренировок) оценивается как неблагоприятный. В этом случае требуется устранить или уменьшить действие экзо- и эндоэкологических факторов на организм, в том числе пересмотреть схемы лечения или оздоровления (тренировок) в сторону уменьшения доз препаратов или нагрузок с возможной заменой препаратов и временном приостановлении выполнения тренировок.

Исходя из перечисленных принципов оценки показателей системы СРО/АОЗ, с учетом полученных результатов измерения этих показателей у группы спортсменов и больных, можно составить алгоритмы отдельных уровней функционального состояния организма человека (табл. 3).

Для эффективного использования разработанных алгоритмов оценки уровней адаптационных перестроек организма человека в ответ на действие экзо- и эндоэкологических факторов среды были разработаны программно-аппаратный комплекс, включающий портативный хемилюминометр PXL-01, интерфейсный блок и программный пакет Montes Status. Программный пакет Montes Status имеет автоматизированную компьютерную базу данных для хранения и поиска более 100000 тысяч пациентов. Составной частью программного пакета является программа «Регистратура» для ввода, записи в память компьютера и редактирования записей данных; программа «PXL-01» для осуществления обмена данными с прибором PXL-01 и накопления материала (кривых БХЛ)

Табл. 3. Таблица алгоритмов функционального состояния организма в норме и при патологии по данным ИБХЛ.

№ Уровень здоровья Функциональное состояние Клиническое состояние Направленность показателей СРО/АОЗ Согласованность показателей АОЗ Резервные возможности Оценка лечения Прогноз лечения

к, Крр Ку 1Рх

1 адекватные реакции физиологические приспособительные реакции практически здоров +(-) + согласованы большие хорошо благоприятный устойчивый

2 неадекватные реакции напряжение донозологиче-ские состояния + + + + частично согласованы ограничены удовл. благоприятный кратковременный

3 неадекватные реакции истощение Патология -к-) + - + рассогласованы резко снижены неудовл. неблагоприятный

4 неадекватные реакции ареажтивность осложнения заболевания + + рассогласованы (2 и большее число раз) резко снижены неудовл. неблагоприятный, нарастающий

Примечание. Ьц = Гщизмы /1буфер, Ки> = РР плазмы / РРбуфер, Ку "^плазмы А'буфср, К[рх =1РХ плазм ы/1Рх буфер

для последующего анализа; программа «EXPERT» для анализа и обработки данных, полученных при помощи программы PXL-01. Программа «EXPERT» позволяет графически и в виде цифровых таблиц представлять на экране монитора информацию по изменению коэффициентов Kj, Крр, Kv, Kipx, Z кривой БХЛ, а также проводить расчет уровня АОА биологически активных веществ и субстратов в случае использования режима записи быстрой и медленной фазы FeJt- индуцированной БХЛ. Программа после каждого измерения динамики БХЛ микроколичества плазмы крови пациента при действии на него разработанных дозированных функциональных проб нормобарическая гипоксия,

физические нагрузки, пробы с ацетилхолином или гистамином), после проведения расчетов и анализа выдает формализованное заключение:

• о резервных возможностях организма;

• проводит оценку действия экзо- и эндоэкологических факторов среды на организм;

• проводит оценку прогноза действия экзо- и эндоэкологических факторов среды на организм.

Использование разработанного аппаратно-программного обеспечения для анализа СРО/АОЗ позволяет в значительной степени оптимизировать проведение коррекции эндоэкологического состояния больных за счет большой информативности динамики как отдельных показателей, так и интегральных показателей, используемых в программном обеспечении. Так, мониторирование системы СРО/АОЗ у больных с ишемической болезнью сердца в процессе проводимого лечения гипербарооксигенацией (ГБО) позволило выявить наличие двух типов реакции на ГБО (рис. 6).

Для первого типа реакции (рис. 6 А) характерно увеличение интенсивности и скорости ингибирования БХЛ, а также уменьшение времени периода полураспада Н2О3 уже на первом сеансе ГБО, что свидетельствует о быстром включении защитных мобилизационных резервов организма в ответ на происходящую активацию СРО. Для второго типа реакции организма на ГБО (рис. 6 Б) свойственно первоначальное уменьшение скорости ингибирования БХЛ и увеличение периода полураспада на фоне отсутствия изменений или же уменьшения интенсивности БХЛ в плазме крови. Такая особенность реакции, очевидно,' объясняется тем, что в этом случае организм, при действии ГБО не успевает своевременно включить системы АОЗ. Именно у больных с этим типом реакции системы СРО/АОЗ при лечении ГБО были выявлены все случаи осложнений и неэффективности лечения. При изучении показателей БХЛ плазмы крови в динамике как у здоровых, так и у больных, реагирующих на ГБО по первому типу реакции, в большинстве случаев наблюдался относительно короткий период адаптационной перестройки. Изменение показателей БХЛ у этой группы с самого начала имеет направленность, характерную для фазы адекватных ответных реакции. При этом, на протяжении ряда сеансов происходит фазовое увеличение скорости ингибирования БХЛ и уменьшение периода полураспада то есть мобилизация эндогенных резервов антиоксидантной системы организма в ответ на фазовое увеличение интенсивности БХЛ плазмы крови, говорящее об активизации перекисного окисления. Реакция второго типа у обследованного контингента лиц на ГБО, по данным показателей БХЛ, характеризуется наличием длительного периода адаптационной перестройки. Рассматривая в этом аспекте реакции больных, подвергшихся действию гипербарической терапии, следует отметить, что у группы больных, реагирующих по второму , типу, развитие адекватных реакций, свидетельствующих о реализации терапевтического эффекта, происходит значительно позже, чем у больных, реагирующих по первому типу. Это связано, по-видимому, с замедленной мобилизацией защитных резервов эндогенной антиокислительной системы в ответ на активацию СРО. Отмеченные особенности определяют возможность возникновения парадоксальных реакций на ГБО, когда вместо увеличения интенсивности и скорости ингибирования БХЛ происходит их уменьшение, а время полураспада увеличивается. Эти изменения свидетельствуют о

наступлении фазы неадекватных реакций, характеризующейся нарушением сопряженности и длительности защитных реакций и возникновением их рассогласованности.

Рис. 6. Влияние ГБО на изменение показателей СРО у больных ИБС с различной чувствительностью к гипербарическому 02 .А - адекватная реакция у больных ИБС, Б - неадекватная реакция у больных ИБС.*, ** - р<0.05, р<0.01 по сравнению с исходом.

При выявлении изменений, возникающих в организме при действии ГБО, изучаемые показатели оказались более чувствительными по сравнению с общепринятыми клинико-лабораторными методами исследования. Так, в тех случаях, когда, исследования показателей кислотно-щелочного равновесия, активности трансаминаз, а также результаты функциональных методов (ЭКГ, показатели центральной гемодинамики) не давали достоверной информации, изучаемые показатели БХЛ позволяли выявить достоверные изменения. Таким образом, изучаемые показатели позволяют еще до развития биохимических, физиологических и клинических изменений в организме улавливать развитие состояния предпатологии. Установленная в исследованиях зависимость между развитием отрицательных клинических реакций на ГБО и особенностями изменений изучаемых показателей может дать в руки кли-

ницистов дополнительную информацию, способствующую выявлению ранних доклинических признаков отрицательного действия ГБО. Для этого состояния характерно возникновение рассогласования между скоростью ингибирования (V) и временем полураспада Н2О2 (РР). Принимая во внимание высокую чувствительность и экспрессность БХЛ-микрометода, лежащего в основе аппаратно-программного обеспечения для анализа СРО/АОЗ, его использование в клинических условиях при лечении ГБО следует считать перспективным. Использование интегрального показателя индуцированной БХЛ в микроколичествах плазмы крови позволяет устанавливать границы адекватных реакций организма при проведении его коррекции. Использование значений интегрального показателя БХЛ (ДПЪс) (позволило выявить достоверные различия в реакции на действие ГБО у больных ишемической болезнью сердца (ИБС) с положительным и отрицательным клиническим эффектом, соответственно равные -3,8±4,4 и +31,2+14,4 (р<0,01) и больных нейроциркуляторной дистонией (НЦД) с положительным и отрицательным клиническим эффектом, соответственно равные +2,74+1,94 и -8,58+1,44 (р<0,002) и тем самым установить оптимальные сроки воздействия ГБО на больных: с 5 по 9 сеанс для больных ИБС и до 5 сеанса для больных НЦЦ.

Использование разработанного микрометода ИБХЛ позволяет путем непосредственного исследования гомогенатов микробиопсии кожи пораженного участка у больных кожными заболеваниями по интенсивности быстрой вспышки те» -индуцируемой БХЛ рассчитать коэффициент (К) с помощью предложенной формулы (как отношение амплитуды БХЛ в пробах, содержащих и не содержащих гомогенат) и по его значению, если оно совпадает с доверительным интервалом значений К для больных с положительным клиническим эффектом лечения ГБО равным 6,0 - 16,8 (р=0,01), прогнозировать получение клинического эффекта при использовании ГБО (при режиме 1,7 ата, 45 мин., 12 сеансов) у больных с кожными заболеваниями.

Данные по прогнозированию чувствительности больных с очаговой склеродермией к ГБО представлены в табл. 4. Представленные результаты свидетельствуют о достоверном различии коэффициента К у больных с очаговой склеродермией о группе с клиническим эффектом (и без него). В конце курса ГБО коэффициент К у группы больных с клиническим эффектом достигал значений контроля. У больных без клинического эффекта показатель К после курса ГБО не изменялся, оставаясь значительно ниже значений К здоровых лиц (контрольная группа). Для сравнительной характеристики предлагаемого способа было проведено прогнозирование клинического эффекта лечения гипербарической оксигенацией у больных очаговой склеродермией по данным прототипа, когда проводилось определение содержания малонового диальдегида (МДА) в плазме крови больных до и после курса лечения ГБО. Из табл. 4 видно, что использование прототипа предлагаемого способа не позволяет достоверно прогнозировать у больных клинический эффект лечения ГБО.

Табл. 4. Клинический эффект лечения ГБО больных с склеродермией.

Клинический эффект лечения ГБО К до курса ГБО К после курса ГБО Концентрация МДА (нмоль/мл)

1. Больные с клиническим эффектом Количество больных 11,4±2,4 10 Р<0,05* Р<0,05" 5,7±1,1 10 Р<0,05*» 4,62±0,2 34

2. Больные без клинического эффекта Количество больных 3,35±0,61 5 Р<0,05* Р<0,001»* 3,3±0,66 5 Р<0,001** 4,7±0,3 6 Р>0,05+

3. Контрольная группа Количество больных 7,4±0,28 14 7,4+0,28 14 3,2±0,2 10

* - достоверность изменения коэффициента БХЛ до и после лечения, ** - достоверность изменения

коэффициента БХЛ у больных по сравнению с контролем.,+ достоверность между 1 и 2 группами.

Таким образом, предлагаемый способ прогнозирования клинического эффекта ГБО позволяет более точно прогнозировать клинический эффект гипербарической оксиганации у больного по сравнению с прототипом, когда прогноз осуществляется по определению продуктов ПОЛ - МДА в плазме крови. В результате выполнения данного фрагмента работы была созвана технология для оценки и прогнозирования действия экзо- и эндоэкологических факторов в организме на основе разработки интегральных микрометодов оценки такой универсальной адаптационной регуляторной системы организма как СРО-АОЗ организма; разработки адекватных функциональных проб для оценки резервных возможностей организма; разработки алгоритмов оценки функциональных состояний на основе установленных закономерностей изменения показателей, характеризующих систему СРО-АОЗ; разработки пакета программ Montes Status и аппаратного комплекса позволяющих полностью автоматизировать процесс регистрации, математической обработки, хранения, визуализации, поиска, анализа данных и выдачу формализованных заключений о эндоэкологическом состоянии организма и прогнозе его развития.

3.3 Измерение дыхательного коэффициента утилизации кислорода (ДКУК) как метода выявление скрытой формы гипоксии в организме.

Развитие гипоксии при длительном искусственном кровообращении (ИК) требует разработки технологии ее диагностики и изыскания эффективных противогипоксических препаратов. Одной из таких технологий может бьпь разработка технологии выявления скрытой формы гипоксии по оценке путей утилизации СЬ организмом. В качестве модели для разработки технологии оценки путей утилизации и их коррекции с помощью препаратов (инозин, а-токоферол, НАД), была выбрана модель длительного ИК. Наблюдали 26 больных разного возраста и пола, которые были оперированы на сердце в условиях длительного ИК (3—4 ч). Первая группа (13 человек) была контрольной. Больные 2-й группы получали инозин. Препарат в дозе 30 мг на 1 кг массы тела, в 500 мл 5 % глюкозы применяли дважды — в пред- и постперфузионном периодах, 2/3 общего количества раствора вводили капельно внутривенно в течение 60 мин от начала операции и до пережатая аорты. Остальную часть вводили в течение 30 мин после окончания основного этапа операции и снятия зажимов с аорты. Операции произведены в условиях ИК продолжительностью 170—220 мин и глубокой гипотермии (температура в пищеводе 21—22 °С) на аппарате «Решсо» (США). При заполнении первичного объема аппарата использовали желатиноль, 5% раствор глюкозы, 2 % раствор хлорида калия, бикарбонатный буфер, 5 мл гепарина. Донорскую кровь не применяли. Общий объем равнялся 1800+100 мл с гемодилюцией 25—30 % от объема циркулирующей крови (ОЦК). Время пережатия аорты составляло от 100 до 180 мин. Защиту миокарда осуществляли применением холодовой и фармакологической кардиоплегии по методике; разработанной в ИССХ им. А.И. Бакулева РАМН (Цукерман и др., 1979). Расчетная объемная скорость перфузии составляла 2,3—2,4 л на 1 м2 поверхности тела в 1 мин. С момента достижения заданного уровня охлаждения объемную скорость снижали до 1,8 л на 1 м2 поверхности и поддерживали ее на таком уровне в течение всего периода гипотермии. Проводили протезирование 1 клапана (2 операции), 2 клапанов (20 операций), 12 клапанов в сочетании с аортокоронарным шунтированием (4 операции). Исходное состояние больных обеих групп было одинаковым. Артериальную и венозную кровь исследовали в пред- и постперфузионном периодах, а также в начале перфузии, на 10, 20, 30, 60, 120 и 180-й минутах ИК. Показатели кислотно-щелочного состояния (КЩС) изучали на микроанализаторе Аструпа (Дания) с расчетом потребления кислорода (ПОа) по Фику.

Динамику СРО определяли по скорости начальной экспоненциальной части кривой медленной вспышки Fe2+ -индуцированной БХЛ. Интенсивность ИБХЛ пропорциональна корню квадратному радикалов и зависит от концентрации антиоксидантов через

коэффициент, соответствующий тангенсу угла наклона прямых, выражающих зависимость свечения от времени (Владимиров и др., 1974). Рассчитывали ДКУК по формуле: ДКУК= (П02э/П01-1) - (Сэ/Си -1),

где ПОгЭ и ПОгИ-исходное и этапные значения потребления кислорода организмом (в мл/мин); Си и Сэ - исходное и этапные значения светосуммы БХЛ (в отн. ед.). Полученный коэффициент в динамике характеризует соотношение 2 путей утилизации кислорода - энергетического и свободно-радикального. Преобладание первого из них выражается положительным значением ДКУК, второго - отрицательным. В последнем случае потребляемого кислорода недостаточно для обеспечения энергопродукции. В работе проведено также изучение показателя ДКУК и влияние на него противогилоксических препаратов на модели длительного ИК на 34 собаках. Исследовалась корреляционная связь показателя ДКУК с систолическим давлением в аорте (РА, кПа), центральным венозным давлением (РВ, кПа), общим периферическим сосудистым сопротивлением (ОПС, дин-см-с'5), рН венозной крови, эксцесс-лактатом (ЭД мМ/л), потреблением организмом кислорода, светосуммой медленной вспышки БХЛ отн. ед.), гемоглобином плазмы крови (НЬ, мМ/л), малоновым диальдегидом в плазме крови (МДА), супероксидисмутазой крови (СОД), антиокислительной активностью (АОА) плазмы крови, ПОг-потребления кислорода (мл/мин).

Результаты исследований крови представлены в табл. 5. Общее ПОг в течение первых 30 мин ИК, соответствующих интенсивному охлаждению, у больных 2-й группы хотя и существенно снижалось (до 55 % предперфузнонного уровня), но не в такой степени, как у больных 1-й группы, у которых минимальное ПОг составляло 15 % исходного. На последующих этапах, вплоть до начала согревания, на 120-й минуте перфузионного периода ПОг в случаях применения инозина оставалось стабильным (110-112 мг^мин) и достаточно высоким, в то время как у больных 1-й группы колебания ПО2 (42-112 мл/мин) были более значительны. В течение последующих 60 мин ИК в процессе согревания и в постперфузнонном периоде ПОг возрастало более существенно у больных 2-й группы. Следует также отметить, что у больных, леченных инозином, количество потребляемого кислорода достигало исходных значений, чего не наблюдалось в контроле. Интенсивность БХЛ плазмы крови у больных 2-й группы не возрастала, однако наблюдалась небольшая ее активация в начале перфузии. Более того, уже с 20-й минуты ИК свечение уменьшалось, что могло быть обусловлено наряду с другими причинами и антиоксидантным (прямым или косвенным) действием препарата. В то же время у больных 1-й группы в течение всего перфузионного периода светосумма БХЛ превышала исходный уровень и снижалась лишь после отключения аппарата.

Ингибирование СРО в сочетании с более значительным объемом потребляемого кислорода под влиянием инозина объективно улучшало дыхание клеток, что проявлялось в благоприятной динамике ДКУК. Уменьшение этого показателя даже в начале ИК не достигало критического значения (-1). На последующих этапах ДКУК стабильно возрастал, а в конце ИК и после отключения аппарата становился положительным. Дыхательный дефицит кислорода в соответствии с нашим коэффициентом в 1-й группе больных хотя и уменьшался, но был более значительным, и весь период наблюдения ДКУК оставался отрицательным. Различия в кислородном режиме организма у больных обеих групп отражались на КЩС крови, изменения которого также были различны. Если на начальных этапах перфузии у больных 1-й группы наблюдался дыхательный алкалоз, то в случаях применения инозина отмечалась тенденция к развитию метаболического ацидоза, который, однако, оставался компенсированным. После 60-й минуты ИК ситуация менялась: у больных 1-й группы развивался метаболический ацидоз, а у больных, получавших инозин, КЩС постепенно выравнивалось и в постперфузионном периоде его основные показатели приближались к исходным.

Таким образом, проведенные клинические исследования показали высокую информативную ценность разработанного показателя ДКУК для оценки развития скрытой гипоксии организма, позволяющим судить о развитии гипоксии в динамике, о соотношении путей утилизации в тканях и выраженном противогипоксическом действии препарата

Табл. 5. Кислородный режим организма и КЩС крови больных при операциях на сердце в условиях длительного ИК и гипотермии с введением и без введения инозина

Показатель Группа больных Перед ИК Начало ИК 10 мин 20 мин Время ИК 30 мин 60 мил 120 мин 180 мин После ИК

П02, 1-я 195,4 90,8 80,04 42,59 64,82 72,13 112,12 147,5 113,8

мл/мин ±32,78 ±10,09 ±2,30 +10,04 ±15,30 ±8,18 ±21,26 +21,37 ±22,67

2-я 207,4 112,3 111,1 110,2 110,4 110,5 112,2 180,5 198,3

±20,1 ±16,4 ±18,2 ±11,1 ±13,8 ± 16,8 ±11,4 ±21,3 ±11,4

в, отн. ед. 1-я 36,72 57,7 55,6 54,8 53,9 41,8 41,4 46,4 29,1

±3,40 ±12,6 ±4,8 ±3,6 ±4,2 ±7,2* +4,2* +5,6 ±2,4

2-я 31,8 39,1 32,4 30,1 27,2 24,1 22,9 23Д 22,1

±7,3 ±10,1* ±6,3 +4,6 ±9,3* ±5,2 ±5,3 +8,3* ±4,8

ДКУК 1-я 0 -1,12±0.11 -1,09±0.09 -1,28±0.15 -1,12±0.12 -0,74±0.08 -0,5±0.06 -0,45±0.07 -0,07±0.02

2-я 0 -0,6±0.05 -0,45±0.04 -0,39±0.04 -0,31 ±0.05 -0,21±0.03 -0,16±0.02 0,12±0.02 0,23±0.03

рн 1-я 7,45 7,44 7,49 7.45 7,44 7,37 7,30 7,29 7,30

±0,025 ± 0,030 ± 0,038 + 0,042* +0,053* +0,040 ±0,035 +0,030 ±0,031

2-я 7,44 7,45 7,42 7,41 7,39 7,36 7,39 7,40 7,44

±0,03 ±0,07 ±0,04 ±0,026 + 0,028 ±0,08 ±0,06 ±007 +0,09

Песо, кПа 1-я 3,62 4,48 3,58 3,36 3,20 4,25 4,85 4,69 4,01

±0,18 ±0,38 ±0,43* ±0,46* ±0,40* ±0,19 ±0,16 ±0,44 ±0,23

2-я 3,34 3,89 3,85 3,80 3,75 4,00 4,20 4,28 3,89

±0,50 ±0,51 ±0,46 ±0,70 ±0,66 ±0,72 ±0,02 ±0,74 ±0,79

ВЕ, 1-я -2,15 -2,67 -3,02 -2,76 -4,04 -4,4 -4,5 -5,0 -6,1

м моль/л ±0,64 ±0,38 ±0,57 ±0,80* ±0,71 ±0,55 +6,72 ±0,56 ±0,49

2-я -1,9 -2,8 -з.з -3,4 -4,1 -4,2 -4,2 +4,2 +3,8

±0,51 ±0,6 ±0,51 ±0,50 ±0,7 ±0,6 ±0,7 ±0,4 ±0,7

Примечание. По сравнению с исходными значениями различия достоверны (Р<0,05), звездочкой отмечены данные, статистически незначимо (Р>0,05) отличающиеся от исходных значений.

инозина при операциях на сердце в условиях длительного ИК. Ингибирование реакций СРО под влиянием инозина способствует не только уменьшению интоксикации, но и более экономной утилизации кислорода для обеспечения дыхания клеток. Результаты полученные при анализе характера корреляционных связей между показателями гемодинамики, КЩС, рядом других биохимических и биофизических показателей с показателями характеризующими потребление и пути утилизации кислорода (ПСЬ, ДКУК) (рис. 7) при изучении длительного ИК в эксперименте на собаках, показали нарушение взаимосвязи между потреблением кислорода и его утилизацией (низкое недостоверное значение коэффициента корреляции 0.358) в процессах тканевого дыхания и ее восстановление при использовании таких противогипоксических препаратов как НАД, а-токоферол и инозин (рис. 8, 9) (значения коэффициентов корреляции равны, соответственно, 0.895, 0.874 и 0.734).

* р<0.05 ** Р<0.01

Рис. 7. Корреляционные связи между показателями длительного искусственного кровообращения без коррекции в эксперименте на собаках, где РА - систолическое давление в аорте, РВ - центральное венозное давление, ОПС - общее периферическое сопротивление, рН - рН венозной крови, ЭЛ -эксцесс-лактат, ПОг - потребление кислорода, 8 - светосумма медленной вспышки Ре2*-индуцированной БХЛ, НЬ - гемоглобин плазмы, СОД - активность супероксиддисмутазы, АОА -антиокислительная активность крови, МДА - малоновый диальдегид в плазме крови, ДКУК -дыхательный коэффициент утилизации

* р<0.05 ** Р<0.01

Рис. 8. Корреляционные связи между показателями длительного искусственного кровообращения с коррекцией инозином в эксперименте на собаках. Обозначения см. рис. 7.

Рис. 9. Корреляционные связи между показателями длительного искусственного кровообращения с коррекцией а-токоферолом (а) и НАД (б) в эксперименте на собаках. Обозначения см. рис. 7. р<0.05, ** - р<0.01, ♦♦♦ - р<0.001

3.4 Оценка уровня реакций СРО/АОЗ в микроколичествах плазмы крови для выявления донозологического состояния условно здорового контингента лиц и группы . риска с разной этиологией.

С целью выявления групп риска среди условно здоровых доноров и больных с заболеваниями желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), легких, сердечно-сосудистой системы (в процессе проведения операций на сердце) проводилось измерение показателей СРО/АОЗ в плазме крови указанных групп с использованием разработанного аппаратно-программного обеспечения. Во всех случаях измерение показателей СРО/АОЗ проводилось на фоне функциональных проб (у условно здоровых доноров - аэробно-анаэробная проба; у больных легочными заболеваниями - ацетилхолиновый тест (АЦХ-тест); у больных с заболеваниями ЖКТ - гипоксическая проба - ГП, гипероксическая проба - ГРП, проба с физической нагрузкой - ПФН и гистаминовая проба). Помимо изучения прогностической ценности отдельных показателей системы СРО/АОЗ для оценки тяжести заболеваний у больных с язвенной болезнью 12-ти перстной кишки и желудка и процесса лечения, использовался интегральный показатель активности системы СРО/АОЗ - показатель Z, рассчитываемый в рамках разработанной экспертной системы оценки с использованием программ PXI-01 и Expert, программного пакета Montes Status.

Как показали результаты исследования, уровень колебания показателя Ъ в процессе выполнения функциональных проб (ГП, ГРП, ПФН) у больных язвенной болезнью 12-ти перстной кишки в стадии обострения (рассчитывались доверительные границы изменения показателя Ъ при (р=0,05) (-6,47±-6,03) совпадает с уровнем колебания показателя - у популяции условно здоровых доноров с неадекватным характером реакции системы СРО/АОЗ и с рассогласованной реакцией АОЗ (рис. 10, 3 уровень). Уровень колебания показателя Ъ у больных с язвенной болезнью 12-ти перстной кишки в стадии обострения отличается от уровня колебаний показателя Ъ у популяции обследованных условно здоровых доноров с рассогласованной реакцией АОЗ, меньшей амплитудой колебаний и тем, что он находится фактически у самой нижней границы уровня Ъ для популяции условно здоровых доноров с рассогласованной реакцией АОЗ. Таким образом, использование разработанной экспертной системы и ее программного обеспечением для оценки уровня эндоэкологического состояния у больных с язвенной болезнью 12-ти перстной кишки и желудка показало, что уровень активности СРО/АОЗ у больных характеризуется (по направленности показателей системы и показателю Ъ) неадекватной реакцией системы СРО/АОЗ, истощением системы АОЗ (рассогласованный тип реакции АОЗ).

\ значение Ъ у здоровых доноров с адекватной реакцией на аэробно-анаэробную физическую нагрузку ДО значение / у здоровых доноров с замедленной адекватной реакцией на аэробно-анаэробную физическую * нагружу

а значение / у здоровых доноров с неадекватной реакцией на аэробно-анаэробную физическую нагрузку

Рис. 10. Изменение интегрального показателя Ъ в группах риска: здоровые доноры (1 - реакция практически здоровых доноров (спортсменов) на аэробно-анаэробную физическую нагрузку, 2 -реакция доноров (спортсменов) с состоянием предпатологии на аэробно-анаэробную физическую, больные бронхиальной астмой (3 - больные с положительным АЦХ-тестом без клинических признаков бронхиальной астмы, 4 - больные с положительным АЦХ-тестом с клиническими признаками бронхиальной астмы), больные в пероид проведения операции- аорто-коронарного шунтирования (5 - без послеоперационных осложнений, 6-е послеоперационными осложнениями), больные с язвенной болезнью и хроническим гастритом (7 - группа с благоприятным течение заболевания с АО эффектом гистаминовой пробы, 8 - группа с неблагоприятным течение заболевания с проокевдантным эффектом гистаминовой пробы),

Изучение влияния гистаминовой пробы у больных с заболеваниями ЖКТ на динамику ИБХЛ плазмы крови выявило два типа БХЛ-ответа. У большинства больных в фазе обострения (27 из 50 - 60%) (1 группа) гистамин увеличивал интенсивность БХЛ плазмы крови, т.е. оказывал прооксидантный эффект (ПО). Ю превосходил показатели условно здоровых доноров в 1.18 раза и достоверно возрастает к 5 мин. и особенно 30 мин. гистаминовой пробы. У 18 больных (2 группа) выявлен антиоксидантный (АО) эффект гистамина: Ю был исходно выше, чем в 1 группе и также превосходил показатели условно здоровых доноров в 1.5 раза (р<0,001), а после введения гистамина Ю достоверно снижался к 5 и 30 мин.

гистаминовой пробы в 1.3-1.4 раза (р<0,01). Изменения БХЛ плазмы в случаях АО-эффекта гистамина проявляются на фоне исходно увеличенного который впоследствии

имел тенденцию к снижению, что свидетельствует о мобилизации резервов системы АОЗ в процессе развития реакции на гистамиа В группе с ПО-эффектом гистамина показатель Крр не был увеличен, что может свидетельствовать о некотором исходном напряжении системы АОЗ и ее дальнейшей несостоятельности в процессе развития реакции. Последнее положение подтверждается также наличием высокой скорости ингибирования ХЛ в этой группе (р<0.01). Анализ результатов в обеих группах показал, что группу с ПО-эффектом гистамина составили пациенты с относительно более тяжелым течением заболевания и более длительным язвенным анамнезом: 20 из 27 пациентов этой группы (74%, р<0.05) страдали язвенной болезнью, сочетавшейся с эрозивным гастритом или дуоденитом), в то время как в группе с АО-эффектом гистамина количество больных с эрозивно-язвенными поражениями было меньше (61%). Кроме того, в эту группу входили все пациенты с неязвенной диспепсией. Количество пациентов с тяжелым и среднетяжелым течением заболевания в группе с ПО-эффектом гистамина было 65%, в то время как в группе с АО-эффектом - 50%. Длительность заболевания в группе с ПО-эффектом составила 7.1+.1.71 гг., а в группе с АО-эффектом - 2.6+0.55 гг. Как показали результаты обследования, больные с язвенной болезнью и хроническим гастритом (рис. 10, позиция 7) с благоприятным течением заболевания с АО-эффектом гистаминовой пробы имеют колебания показателя Ъ на уровне его значений у условно здоровых доноров с адекватной реакцией на функциональную нагрузку (1 уровень). У больных с язвенной болезнью и хроническим гастритом (рис. 10, позиция 8) с неблагоприятным течением заболевания с прооксидантным эффектом гистаминовой пробы отмечено колебание показателя Ъ на уровне его значений у условно здоровых доноров с неадекватной реакцией на функциональную нагрузку (3 уровень). Таким образом, использование показателя Ъ позволяет выявлять группы риска у больных с заболеваниями ЖКТ, что может быть использовано для ранней диагностики и повышения эффективности лечения указанных групп.

В процессе операций на сердце с ИК, когда механизмы поддержания гомеостаза значительно напряжены, могут возникать условия для выраженного нарушения регуляции свободнорадикальных реакций. В этой связи задачами работы явились изучение параметров системы СРО/АОЗ во время операций на открытом сердце и оценка прогностического значения выявленных изменений. В работе проведено обследование пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС) в возрасте 37-58 лет, которым выполняли аортокоронарное шунтирование. Всем больным проводили однотипную многокомпонентную сбалансированную общую анестезию (фентамил, седуксен, дроперидол, ардуан на фоне ингаляции смеси N20 и 0; в соотношении 2:1). ИК осуществляли в режиме умеренной гипотермии (26-28 Для защиты миокарда во время пережатия аорты использовали холодовую фармакологическую кардиоплегию. Пробы смешанной венозной крови для исследований брали из центральной вены на следующих этапах: 1-й - исходное состояние (в операционной); 2-Й - начало ИК до охлаждения; 3-й - во время ИК при расчетной гипотермии; 4-й - в конце ИК после согревания; 5-й - в конце операции. Кроме того, показатели СРО/АОЗ оценивали в оттекающей от миокарда крови, пробы которой брали через катетер, установленный в коронарном синусе, на двух этапах: перед наложением зажима на аорту и после его снятия.

Как видно из данных табл. 6, на этапах исследования в смешанной венозной крови отмечали тенденцию к увеличению I. В конце операции показатель становился в 1,6 раза больше исходного. Это свидетельствовало о повышении интенсивности СРО, особенно в постперфу-зионном периоде. Одновременно наблюдали увеличение V и тенденцию к некоторому уменьшению РР, что свидетельствовало об активизации АОЗ. В крови, оттекающей от миокарда, после снятия зажима с аорты происходило уменьшение величины I (с 6,3+0,8 до 3,84±О,52 отн.ед.); (Р< 0,05) замедление V (с 4,8±0,8 до-2,24±0,42; р <0,05) и отмечалась тенденция к некоторому удлинению РР (с 0,21+0,02 до 0,25+0,04 отн ед.; р<0,05). Такая динамика в целом

Табл. 6. Динамика параметров системы СРО/АОЗ в группе больных, оперированных на открытом сердце

Показатель Этап исследования

1-й 2-й 3-й 4-й 5-й

I, отн. ед. 4,83+0,7 6,51+0,85 6,06+0,74 3,79+0,54 7,8+0,7'

V 3,61+0,58 4,6+0,74 4,65+0,69 4,4+0,71 6,71+0,76"

РР, отн. ед. 0,31+0,05 0,28+0,06 0,2+0 02 0,26+0,06 1,8+0,01

Примечание. I - интенсивность быстрой вспышки БХЛ, V - максимальная скорость ингибирования ХЛ, РР - период полузатухания БХЛ, • - различие достоверно (р<0,05) по сравнению с 1-м этапом. Статистическую обработку полученных данных проводили методом вариационной статистики. Достоверность оценивали по критерию Стьюдента.

характерна для снижения интенсивности СРО и уменьшения активности АОЗ. С целью оценки прогностического значения сдвигов в системе СРО/АОЗ сопоставляли показатели при неосложненном и осложненном течении операций. В первую группу входили пациенты, у которых постперфузионный и ближний послеоперационный периоды протекали без особенностей (1-я группа). Вторую группу составили больные, у которых в постперфузионном периоде наблюдали явления острой сердечной недостаточности или стойкие нарушения ритма сердца, потребовавшие интенсивной медикаментозной коррекции. Различий между группами по возрасту больных (соответственно, 49,5±2,3 и 48,3±2,2 года), объему оперативного вмешательства (соответственно, 3,2±О,3 и 3,5±0,4 шунта), длительности ИК (соответственно 87,8±7,8 и 94,5+2,05 мин), продолжительности аноксии миокарда (соответственно 59,4+1,5 и 61,0+1,4 мин.) и уровню гипотермии (соответственно 26,2+0,3 и 26,0+0,4 С0) не было. Обращало на себя внимание то, что во 2-й группе исходная величина I в смешанной венозной крови была в 2 раза выше (р<0,05), чем в 1-й. В дальнейшем существенных изменений I у больных 2-й группы не происходило: величина показателя колебалась от 6,5+0,92 до 8,07+0,84 отн.ед. (р <0,05). У пациентов 1-й группы интенсивность ПОЛ на протяжении периода наблюдения менялась характерным образом. В начале ИК величина I возрастала на 101,1% по сравнению с исходной, принятой за 100% (р<0,05). В течение ИК отмечали тенденцию к снижению I., в результате которой в конце перфузии показатель становился в 1,7 раза меньше (р<0,05), чем во 2-й группе. К концу операции I увеличивалась до 236,7% от исходной (р<0,05). В динамике V у больных 1-й и 2-й групп также имелись различия. В первом случае в конце операции отмечено существенное увеличение значений показателя до 6,6+1,0 (р<0,05), причем относительно исходной величина V достигала 246,3%. Во 2-й группе достоверных изменений абсолютных значений V не было. В конце операции показатель возрастал по сравнению с исходным, принятым за 100% на 60,5% (р>0,05). Различие в динамике РР между группами не отмечено: к концу операции была зарегистрирована тенденция к некоторому снижению величины параметра. Изменения показателей системы СРО/АОЗ в пробах крови, взятой из коронарного синуса, также имели определенные отличия при неосложненном течении оперативного вмешательства. У больных 1-й группы после снятия зажима с аорты отмечено достоверное (р<0,05) снижение I в 1,8 раза. Между значениями I в смешанной венозной крови и в крови, оттекающей от миокарда, выявлена прямая тесная корреляционная связь У

пациентов 2-й группы существенных изменений I в крови коронарного синуса не было, корреляционная связь с величиной I в смешанной венозной крови отсутствовала. Аналогичным образом динамика V имела характерные особенности. У больных 1-й группы значения V в крови, оттекающей от миокарда, после снятия зажима аорты были в 2,7 раза меньше (р<0,05), чем до периода временной аноксии сердца. Коэффициент корреляции с величиной V в смешанной венозной крови составлял 0,6 (р<0,05). У пациентов 2-й группы достоверного снижения V в крови коронарного синуса не происходило, корреляционная связь со значениями V в смешанной венозной крови отсутствовала. Существенных изменений РР у пациентов обеих групп не отмечено.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о возможности различных реакций системы СРО/АОЗ в ответ на комплекс патофизиологических сдвигов, возникающих во время операций с ИК, в зависимости от исходного состояния этой системы. Больные 'о исходно высоким уровнем СРО и отсутствием в дальнейшем колебаний показателей СРО/АОЗ оказались подвержены риску нарушения сердечной функции в постперфузионном периоде. Помимо прогностической ценности отдельных показателей системы СРО/АОЗ у больных в процессе операции на сердце, другим важным аспектом использования программ PXI 01 и Expert, является выделение группы больных с неадекватной реакцией системы СРО/АОЗ, истощением системы АОЗ (рассогласованный тип реакции АОЗ), совпадающая с группой больных у которых в постоперационном периоде наблюдались осложнения. У этой группы больных, на разных этапах операции, рассогласованный тип реакции АОЗ отмечался 2 и большее число раз. Доверительные границы колебания показателя Z у больных из группы риска, с прогнозируемыми осложнениями основного заболевания сердца в постоперационном периоде, находился в диапазоне -5.4Ш.13 (Р=0.05), что соответствует уровню неадекватной реакции системы СРО/АОЗ организма условно здоровых доноров по показателю Z (рис. 10, позиция 6). Полученные данные служат аргументом в пользу применения для предоперационной подготовки кардиохирургических больных различных антиоксидантов, например <х-токоферола, аскорбиновой кислоты и др.

Обследование пациентов с обострением атопической бронхиальной астмы (АБА) легкого персистирующего течения и пациентов с внелегочными атопическими проявлениями (аллергическая риносинусопатия, поллиноз в форме рино-конъюнктивального синдрома, атопический дерматит) без клинических и спирометрических признаков бронхоспазма показало, что у больных АБА легкого персистирующего течения в фазе обострения, также как и у больных другими атопическими заболеваниями по сравнению со здоровыми лицами наблюдается стереотипное повышение уровня интенсивности ИБХЛ (Ki) в плазме в среднем в 1,5-2 раза (р<0,01). Так, у здоровых исходная К, составила 0,74+0,03, в группе пациентов с обострением атопической бронхиальной астмы 1,01 +0,04, р<0,001, при аллергическом рините 1,О8+О,О5, р<0,01, при атопическом дерматите 1,12+0,08, р<0,05. В то же время, поллиноз, который у всех обследованных был вне обострения (обследование проводилось в осенне-зимний период) и диагносцировался по анамнестическим и аллергологическим данным, не сопровождался повышением Kj. Полученные данные могут свидетельствовать, что обострение атопических заболеваний сопровождается повышением активности свободнорадикальных процессов в плазме. Что касается особенностей состояния АОЗ при атопических заболеваниях, то выявлялись достоверные различия по показателю Kv — более высокая скорость ингибирования при наличии ринита (1,15+0,06 и 0,91+0,07, р<0,05). При наличии аллергического дерматита отмечалась более высокая скорость ингибирования, чем при его отсутствии (1,28+0,13 и О,81+О,08, р<0,01), различия по скорости ингибирования сохранялись и после ацетилхолинового теста (АЦХ-теста), несмотря на разнонаправленность изменений Kv - увеличение при отсутствии дерматита и уменьшение при его наличии. Таким образом, такие клинические проявления атопии, как аллергический ринит и, особенно, аллергический дерматит при отсутствии бронхообструктивного синдрома сопровождаются, помимо отчетливого повышения интенсивности СРО достаточно активным состоянием систем АОЗ, что, возможно, препятствует реализации аллергической реакции на уровне бронхов. При наличии ринита у пациентов с АБА показатель Кп* как до, так и после теста был выше, чем у пациентов без ринита (1,19+0,14 и О,87+О,О5, р<0,05). Это может свидетельствовать о меньшей напряженности системы АОЗ с отсутствием реакции на нагрузку при сочетании ринита и астмы. В то же время, при сравнении средних значений показателей ИБХЛ у пациентов с АБА при наличии или отсутствии аллергического дерматита достоверных различий не выявлено. У пациентов с атопическими проявлениями выявлено три уровня повышения IgE - незначительное (30-130 МЕ/л), умеренное (130-300 МЕ/л) и значительное (свыше 300 ме/л). У всех отмечены положительные результаты кожных проб

от моновалентной (I) до поливалентной (IV) сенсибилизации. Положительный результат АЦХ-теста отмечен у всех пациентов с АБА и у 3 (18%) пациентов с другими атопическими заболеваниями. -

При поливалентной сенсибилизации и содержании ^Е свыше 300 ед/мл у пациентов с внелегочной аллергией показатель. скорости ингибирования был достоверно выше

(1,22+0,15 и 0,82+0,12, р<0,05), а интегральный показатель ИБХЛ (Кп>„) - ниже (0,86+0,07 и 1,23±0,09, р<0,01), что свидетельствует о более напряженном исходном состоянии АОЗ, чем при моновалентной. У этих пациентов повышению активности АОЗ на фоне АЦХ-теста, о чем свидетельствовало повышение Ку и снижение периода полузатухания вспышки Крр, клинически соответствовал отрицательный результат теста. Несмотря на то, что у всех пациентов с АБА результат АЦХ-теста был положительным, реактивность бронхов на ацетилхолин оказалась различной. При этом у пациентов со значительным повышением уровня ^Е и поливалентной кожной сенсибилизацией, которые клинически демонстрировали меньшую степень чувствительности к ацетилхолину, имелись определенные особенности реакции системы АОЗ на АЦХ-тест. Так, период полузатухания Крр у них достоверно снижался (а при моновалентной аллергии с незначительным повышением ^Е имел тенденцию к повышению, различия по А Крр достоверны: -0,20±0,08 и 0,05±0,03, р<0,01). За счет повышения на фоне теста показатель скорости ингибирования Ку после теста у пациентов с поливалентной сенсибилизацией становился достоверно более высоким (0,95±0,0б и 1,19±0,05, р<0,05). Что касается К1рх) то этот показатель на фоне АЦХ-теста достоверно уменьшался на 40 % при значительном и, наоборот, увеличивался при незначительном повышении ^Е (различия по А Кн>х достоверны: -0,55±0,24 и 0,12±0,13 , р<0,05). Все это позволяет высказать предположение о важном значении состояния системы СРО/АОЗ в формировании (или, наоборот, в неформировании) атопического бронхообструктивного синдрома. Следует еще раз подчеркнуть, что помимо известной концепции "свободно-радикального воспаления" при бронхиальной астме необходимо учитывать также возможность влияния состояния системы СРО/АОЗ на степень выраженности проявлений генетически детерминированного атопического состояния. Поскольку известно о существовании различных факторов, повышающих риск формирования АБА, нами была предпринята попытка выявить особенности состояния системы СРО/АОЗ, которые, возможно, способствуют развитию бронхообструктивного сидрома в программе атопического состояния. При анализе исходного состояния АОЗ, а также по реакции системы АОЗ на АЦХ-тест среди больных с различными внелегочными проявлениями атопии отчетливо выделялось две группы: для пациентов, отнесенных к группе А, были характерны достоверно более высокие значения исходного показателя скорости ингибирования (1,36±0,22 и 0,94±0,07, р<0,05). Характерной особенностью ответа системы СРО/АОЗ на АЦХ-тест вне зависимости от его клинического результата в указанной группе в отличие от остальных пациентов с атопией явилось снижение скорости ингибирования К, более чем на 30% (-О,43±0,16 и 0,18±0,06, р<0,001). Исходно более низкий показатель Кп* в этой группе (О,73±О,О7 и 1,10±0,07, р<0,01) на фоне теста достоверно увеличивался в 1,5 раза при уменьшении его у остальных пациентов с атопией (0,36±0,07 и -0,13±0,04, р<0,001). Для этой группы больных были типичны клинические проявления, которые по современным представлениям значительно повышают риск формирования астмы: положительный результат АЦХ-теста или поллиноз, сочетавшийся с высокой степенью аллергизации и эозинофилией, что позволяет рассматривать полученные рассогласованные изменений показателей АОЗ на фоне АЦХ-теста с типичными для АБА гиперреактивностью бронхов, как дополнительный лабораторный критерий для выделения группы риска по развитию АБА. Количественная оценка уровня эндоэкологического состояния у пациентов из группы риска по показателю Ъ при проведении нагрузочного АЦХ-теста выявило доверительный интервал его значений равный -4,59±0.39, который совпадает с интервалом неадекватной реакции СРО/АОЗ здоровых доноров и достоверно отличается от доверительного интервала значений показателя Ъ для больных с клиническими признаками

бронхиальной астмы, положительным АЦХ-тестом и рассогласованной реакцией АОЗ -5,2+0.19 (при р=0,05) (рис. 10, позиции 3 и 4).

Помимо определения направленности показателей и информационной ценности каждого показателя системы СРО/АОЗ для оценки предпатологии у условно здоровых доноров, проводилась количественная оценка выявленных типов реакции организма на нагрузочные пробы по показателю Z, с помощью программ PXL01 и Expert. Сопоставление уровней показателя Z (доверительные границы колебания показателя при Р=0,05) для практически здоровых доноров и условно здоровых доноров с состоянием предпатологии (рис. 10, позиции 1 и 2), с уровнями адекватной и неадекватной реакции у условно здоровых доноров системы СРО/АОЗ показало, что доверительный интервал показателя Z у практически здоровых доноров (2.6311.61) совпадает с колебанием показателя Z для популяции условно здоровых доноров с адекватной реакцией АОЗ (1 и 2 уровень). В то же время доверительный интервал, колебания показателя Z для условно здоровых доноров с признаками предпатологии (-1.73+1.39) совпадает с доверительным интервалом колебания показателя Z для популяции условно здоровых доноров с адекватной (замедленной) реакцией организма (2 уровень) и достоверно (р<0.001) отличается от доверительного интервала показателя Z у практически здоровых доноров.

Таким образом, разработанная система и программное обеспечение к ней, позволяют проводить экспрессную оценку уровня предпатологии у условно здоровых лиц и выявлять больных из групп риска при различных заболеваниях.

3.5 Измерение адаптогенной и антиаллергической активности биологически важных соединений по уровню СРО, трансмембранному потенциалу и Н*АТФ-азной активности компонентов клеток органов и липидных модельных систем.

В настоящее время возрастает роль применения экзогенных антиоксидантов как способа повышения мощности АОЗ и тем самым повышения резистентности организма. В подтверждение правоты высказанной концепции можно привести данные, полученные ранее (Бурлакова, Слепухина, Каплан, 1969). Использование в данной работе экзогенных антиоксидантов в условиях гипо- и гипероксии сопровождалось уменьшением концентрации свободных радикалов, увеличением мощности эндогенной АОЗ и повышением выживаемости животных. В проведенных исследованиях установлено, что вещества с антиоксидантной активностью обладают широким спектром протекторного действия.' Подтверждением этого являются данные, полученные у ряда веществ (табл. 7). Способность антиоксидантов повышать сопротивляемость организма к ряду экстремальных воздействий среды является качеством для веществ, относящихся к классу адаптогенов. Естественно предполагать, что механизм защитного действия адаптогенов может быть связан с их способностью поддерживать определенный уровень образования свободных радикалов и перекисных продуктов. С этой целью нами было изучено антиоксидантное действие ряда природных адаптогенов, таких как радиола розовая (РР), элеутерококк (ЭЭ), аралия манчжурская (АР), а также культуральная форма радиолы розовой (РР-1). Сравнительный анализ исследованных фитоадаптогенов позволил расположить их в строгий ряд по убыванию антиоксидантной активности: РР > ЭЭ > РР-1 > АР (рис. 11).

В работе изучалась адаптогенная активность такого препарата как трекрезан (трис-/2оксиэтил/-аммониевая соль ортокрезаксиуксусной кислоты - крезацин). Являясь антиоксидантом препарат оказывает выраженное антиокислительное действие на все показатели Ре2*-индуцированной БХЛ: в концентрации 2'Ю"4 М увеличивает латентный период БХЛ на 35% и уменьшает скорость БХЛ на стадии медленной вспышки на 25%, оказывая незначительное ингибирование БХЛ (10%) на стадии быстрой вспышки БХЛ в довольно низкой концентрации 2,10"i М. В работе выявлен широкий спектр адаптогенного действия трекрезана: установлена его высокая противогипоксическая активность, противогипер- и противогипотермическое действие, а также выраженное актопротекторное и противострессорное действие и другие виды активности

По результатам исследований (табл.-7) был проведен многомерный линейный регрессной-

Рис. 11. Ангпоксидантная активность некоторых фитоадаптогснов: РР — экстракт родиолы розовой, ЭЭ — экстракт элеутерококка, РР-1 — настойка из биомассы культуры ткани родиолы розовой, АР — настойка аралии маньчжурской,

где So, S - скорость БХЛ на начальной экспоненциальной части медленной вспышки Ре2*-ивдуцированной БХЛ, соответственно, в контроле и с препаратом, с - концентрация препаратов в ячейке (мг/мп).

ный анализ для всего комплекса изучаемых показателей (защитный эффект действия гнтиоксидантов in vivo и их эффективность действия на моделях in vitro). Исследования показали, что информативность АОА препарата при прогнозе защитного эффекта этого препарата можно повысить, если вместо отдельных показателей in vitro и in vivo прогнозировать суммарные защитные эффекты in vivo при гипоксии, физических нагрузках и действии радиации, а в условиях in vitro использовать показатели активности Н*-АТФазы субмитохондриалъных частиц (СМЧ) и мебранный потенциал (МП) СМЧ. В этих случаях коэффициент множественной корреляции достигает, соответственно, R=0.75 (p<0.05), если суммарный защитный эффект in vivo прогнозируется по величине АОА ХС. Если же суммарный коэффициент защиты в условиях in vivo прогнозировать по данным как об АОА ХС, так и об эффективности действия АОА in vitro на показатели активности Н^-АТФазы СМЧ и МП СМЧ, то прогнозирование оказывается высоко достоверным В

работе было получено значение коэффициента регрессии для прогноза суммарного адап-тогенного эффекта ХС при гипоксии, физических нагрузках и действии радиации по данным АОАХС и их коэффициентов действия на активность If-АТФазы СМЧ и МП СМЧ in vitro: Суммарный адаптогенный = 1.78 • [lg(AOA)] + 4.32 • [(If-АТФаза) + (МП СМЧ)] - 5.7 эффект ХС при pCO.Ol р<0.01

Использование экспериментальных результатов и их математического анализа по изучению антиоксидантного действия сывороток крови со специфическими неинфекционными аллергенами (14 сывороток крови больных со специфическим аллергеном овсяницы), сывороток крови с неспецифическим аллергеном (ольха, полынь - 11 сывороток больных) и сывороток крови больных беспыльцевой аллергии (6 сывороток) на модели липосом методом -индуцированной БХЛ показало возможность оценки специфической

активности неиифекщюнных аллергенов, если рассчитывать индекс БХЛ на стадии начальной экспоненциальной медленной вспышки БХЛ (ИХ) по формуле: ИХ = (Vc/Vca)-(Vk/Va). где ИХ - индекс БХЛ; Ve и Vca - скорости БХЛ в присутствии сыворотки или сыворотки с аллергеном, соответственно; Vk и Va - скорость БХЛ на начальной экспоненциальной части медленной вспышки в контроле или в присутствии аллергена ( в трех концентрациях: ЮООед, 100 ед, 10 ед), соответственно. Аллерген считается специфически активным при значении индекса БХЛ выше - 0.01 для всех концентраций препарата или при значении индекса БХЛ выше 0.27 хотя бы при одном значении препарата. По таблице сопряженности была проанализирована связь значений показателя V липосом с наличием или отсутствием положительных значений у пациентов кожных проб (КП) и радио-аллерго-сорбентным тестом (PACT). Оказалось, что связь показателя V с КП положительная и высокодостоверная (X =20.04, р<0.001, коэффициент сопряженности К=0.767).' Несколько слабее оказалась связь между КП и PACT (X =4.07, p<0.05, коэффициент сопряженности К=0.43), связь меящу показателями V и PACT оказалась недостоверной (XI;=1.03, p*.l). Таким образом, результаты исследования показали, что существует достоверная связь между

библиотека I

СПтрбург I оэ n0 кг ?

Табл. 7.Влияние корректоров эндоэкологического состояния организма (антиоксидантов) на устойчивость организма к экстремальным воздействиям и параметры простых биологических моделей

№ Виды экстремальных воздействий на организм - Параметры простых биологических моделей

группы К= опыт/контроль К= опыт/контроль

антиоксидантов .(АО) Гипоксия к) II о> 2 5 е 1 Действие радиации (К) Гипертермия (К) и • о & 6 2- с » Интоксикация ионами свинца (К) Гипотермия (К) & и <4 Я е * Ь 8 и Выжимаемость парамеций (К) 8 сЗ е 5« 1 о 3 § 1 4Й ЭИ 6? 5 £ 1 1 Резистентность ЭЦ ^сУЗ(К) Резистентность ЭЦ к ГО (К)

.1. 4.57 1.75 1.11 1.25 2.57 1.4 1.09 0.7 0.69 1.08 0.92 1.02 0.93 1.09 0.88

Общая ±0.89 ±0.26 ±0.05 ±0.08 ±0.86 ±0.08 ±0.02 ±0.06 ±0.08 ±0.04 ±0.02 ±0.1 ±0.02 ±0.08 ±0.09

группа п=13 п=12 п=11 п=10 п=3 п=3 п=3 п=24 п=24 п=11 п=11 п=10 п=10 п=9 п=11

АО

2. АО с 6.73 1.84 1.13 1.24 0.69 0.55 0.99 0.89 0.92 0.92 1.19 0.92

АОА ±1.37 ±0.45 ±0.05 ±0.09 - - - ±0.07 ±0.11 ±0.01 ±0.04 ±0.09 ±0.03 ±0.1 ±0.6

выше п=5 п=5 п=6 п=6 п=14 п=14 п=7 п=6 п=7 п=6 п=6 п=6

ю3м-'

3. АО с 2.56 1.55 1.09 1.27 0.70 0.88 1.2 0.97 1.37 0.94 0.89 0.83

АОА ±0.35 ±0.32 ±0.09 ±0.14 - - - ±0.12 ±0.08 ±0.05 ±0.02 ±0 04 ±0.02 ±0.05 ±0.09

ниже п=6 п=7 п=5 п=4 п=10 п=10 п=4 п=5 п=3 п=4 п=3 п=4

103М"' р<0.01 2.3 р<0.05 2.3 р<0.001 2.3 р<0.001 2.3 р<0.01 2.3

Примечание, п - количество АО; К - максимальное значение отношения опыта к контролю, АОА - антиокислительная активность, МПСМЧ - мембранный потенциал субмитохондриальных частиц, ЭЦ - эритроциты, УЗ - ультразвук, ГО - гипоосмотическая среда

чем связь между двумя традиционными показателями активности аллергенов КП и PACT. Разработанный способ оценки специфической активности неинфекционных аллергенов имеет ряд высоких технико-экономических показателей. Он не требует приготовления специальных форм аллергенов (нерастворимых полимер-аллергенных конъюгатов), так как при применении способа изменения скорости БХЛ используют обычные коммерческие аллергены. Метод не требует необходимости получения специальных моноспецифических сывороток, содержащих меченые радиоактивным изотопом антитела. Метод является экспрессным (на одно исследование уходит 15 мин.).

З.б Исследование антиогипоксической активности биологически активных веществ по уровню СРО, электроиакцепториой активности и скорости деоксигеиации эритроцитов крови.

В системе доклинического фармакологического исследования специфического действия антигипоксических средств (АГПС) важное место занимает изучение их защитного действия в условиях моделирования ишемии и гипоксии головного мозга и сердца - главных органов, определяющих выживание организма при общей гипоксии. Эти исследования, кроме того, имеют самостоятельный интерес для поиска противоишемических средств. Ниже представлены новые технологии, позволяющие оценить активность АГПС в условиях экспериментальной патологии сердца, и рассмотрены методы выявления некоторых сторон механизма действия потенциальных АГПС.

Исследование действия антигипоксантов на процессы деоксигенации крови. Повышение скорости деоксигенации крови является существенным компонентом адаптационных реакций при гипоксии и, с этой точки зрения, исследование этого показателя важно для понимания механизма формирования защитного действия потенциальных АГПС. Изучение действия АГПС на скорость деоксигенации взвеси эритроцитов проводилось методом полярографической кулонометрии по способу, предложенному ранее И.М. Эптптеином в модификации (Гукасов, Гацура, 1986). Электролиз проб крови проводили на специально собранной установке при разности потенциалов на электродах 1,375 В, температуре 37°С, скорости вращения магнитной мешалки 350 об/мин. В качестве электролита использовали 0,1 М раствор HCl. Донорскую кровь в объеме 0,1 мл разбавляли в 0,3 мл физиологического раствора (рН7,4), полученный раствор крови насыщали смесью, состоящей из 95% 0% и 5% СОг, в течение 60 сек. при избыточном давлении 150 мм рт. ст. Каплю сатурированной пробы наносили на поверхность ртути в рабочую ячейку и накрывали шлифованным стеклом. Затем камеру осторожно заполняли электролитом и после 2 мин. термостатирования замыкали измерительную цепь полярографа. Запись изменения тока электролиза производилась автоматически на самопишущем потенциометре КСП=4 до установления стационарного уровня остаточного тока Растворы исследуемых веществ, приготовленные на физиологическом растворе (рН 7,4), добавлялись к 0,1 мл крови таким образом, чтобы полученный рабочий раствор (0,4 мл) содержал изучаемый препарат в необходимой концентрации. Далее рабочий раствор насыщали Ог и определяли ток электролиза, после чего строились графики зависимости содержания НЬОз от показателя изменения тока электролиза в ячейке и графически находили значения показателей деоксигенации (ПДК), который измерялся в условных единицах по величине изменения тока электролиза ячейки в момент полунасыщения пробы кислородом и с цепью удобства, выражался по формуле: ПДК=(1/Д1)-100; а также константу деоксигонации крови (К), выражающуюся углом наклона прямой, характеризующей зависимость изменения тока электролиза ячейки от насыщения пробы кислородом на участке, соответствующем 50% деоксигенации. С целью стандартизации измерений ПДК крови, в каждом образце крови, взятой от крысы, предварительно изучалось действие 2,3-дифосфоглицерата (2,3-ДФГ) в концентрации М. В работе использовалась лишь кровь от животных, в которой

выявлялось стимулирующее дексигенацию действие 2,3-ДФГ. Исследуемые АГПС изучали в концентрациях 10*—10° М с учетом их возможного содержания в тканях организма при введении соединений в диапазоне условных терапевтических доз. Как показали результаты

Табл. 8. Влияние натрия сукцината и натрия малата на показатели деоксигенации крови.

№ Препарат Количество Концентра- Константа де- ПДК

п/п опытов ция пре- оксигенации

парата (М) крови (К)

1 Контроль . 5 - 0,46±0,03 1,9±0,03

2 ДФГ 10 1,2-10"* 2,23 ±0,16* 3,0±0,10

3 Натрия сукцинат 6 6,2-10"4 0,70±0,07* 1,8±0,10

4 Натрия малат 10 5,6-10ц 1,15±0,11* 1,2±1,60

Примечание. * - достоверность различий при р < 0,05, ПДК - показатель деоксигенации

исследования влияния ряда соединений, обладающих противогипоксической активностью на показатели ПДК и К крови крыс, они обладают довольно выраженным влиянием на процесс деоксигенации крови (табл. 8). Можно предположить, что в основе изменения сродства гемоглобина к Oj под действием АГПС могут лежать как конформационные механизмы изменения проницаемости мембран эритроцитов для Ог, так и сдвиги энергетического блока (активация гликолиза и увеличение синтеза 2,3-ДФГ) с последующим изменением сродства гемоглобина к Ог. Что касается конкретного механизма действия изученных соединений на сродство гемоглобина к О2, то он требует специального дополнительного изучения с использованием модуляторов проницаемости эритроцитарных мембран и постановки экспериментов с растворами гемоглобина.

Исследование электронакцепторной активности (ЭА) антигипоксантов. Электрон-акцепторные соединения могут представлять интерес как средства коррекции последствий кислородной недостаточности и метаболического ацидоза, сопровождаемых сдвигом рН вследствие накопления избытка недоокисленных продуктов и восстановленных форм никотинамидных энзимов. Учитывая это обстоятельство, следует признать полезной оценку сравнительной ЭА как новых, так и традиционных АГПС и противоишемических средств. Оценка электронакцепторной (дегидрирующей) активности АГПС проведена по тесту дегидрирования НАДН люминесцентным методом на установке с автоматической регистрацией люминесценции НАДН. Концентрация НАДН, необходимая для титрования в диапазоне чувствительности установки, была найдена экспериментально с помощью калибровочного графика и соответствует 0,15-0,63 мг в 1 мл среды инкубации, поскольку интенсивность люминесценции в данном диапазоне концентрации НАДН изменяется линейно. Измерения проводили при длине волны возбуждающего света 340 нм. Люминесценцию НАДН регистрировали при длине волны 465 нм. Расчет ЭА проводился по формуле: ЭА=[(1оЛ)-1]/С, где ЭА - электронакцепторная активность; 1о - исходная интенсивность люминесценции НАДН; I - интенсивность люминесценции НАДН в присутствии фармакологического средства; С - концентрация фармакологического средства в молях (Гукасов, Гацура, 1986). Как показали результаты экспериментальных исследований, изученные соединения с выраженной антипшоксической активностью обладают также способностью угнетать люминесценцию НАДН (табл. 9).

Исследование влияния антигипоксантов на перекисное окисление липидов (ПОЛ") при ишемии миокарда. Снижение пула энзимов АОЗ и активация ПОЛ мембранных структур кардиомиоцитов является важным этапом пгаоксической альтерации миокарда. С этой точки зрения влияние АГПС на процессы ПОЛ представляет существенный интерес для понимания механизма защитного действия этих средств при ишемии и гипоксии миокарда. Для воспроизведения тепловой «ишемии» изолированное сердце инкубировали в течение 2 ч в среде (105 mMKCI, 20 мМ КН2РО4 при 37 °С и при рН 7,4. Острую ишемию миокарда крыс вызывали 2-часовой перевязкой передней нисходящий ветви левой коронарной артерии. Операцию проводили под тиопентал-натриевым наркозом. Вскрывалась грудная клетки крысы, производилась перевязка передней нисходящей ветви левой коронарной артерии на уровне нижнего края ушка левого предсердия. Операция проводилась при искусственном дыхании. Крыс забивали декапитацией. Выделяли сердце и из него иссекали участок

Табл. 9. Дегидрирующая активность электронакцепторвых средств и энергообеспечивающих веществ

№ п/п Вещество К-во опытов Коицен трация, М Показатели люминесценции НАДН ЭА (М-1)

1«, отн. ед I, ота. ед Концентрация, уменьшающая 1.-Л в 2 рата (М)

1 Цитохром С 10 1.2-10"5 107.5± 1.2 81.7± 12* 4.7'10 2.110*

2 Аскорбиновая кислота 15 1.9-10'2 120.5± 1.2 84.5± 2.1 » 1.6-10"1 63

3 Колмплекс аскорбиновой кислоты и Ре3* 10 10" 96.9± 1.4 86.7± Об* 1.2-10"1 1.7-103

4 Натрия сукцинат 10 6-10° 101.4± 1.1 93.1± 16' 3.6- ю-' 2.8

5 Натрия малат 14 6-10° 115.7± 1.5 101.7± 1.2* 5.6-10"2 13.3

Примечание. 1о и I -люминесценция НАДН без препарата и с препаратом, ЭА - электронакцепторная

активность, * - достоверность различий при р < 0,05

ишемизированной ткани миокарда. Величину зоны некроза и ишемии определяли с помощью индикаторного дифференциального метода (Сернов, Соколова, 1990) Исследуемые препараты с целью пролонгирования действия вводили в бедренную вену в течение 1 ч после перевязки коронарной артерии. Липосомы приготовляли из желтка куриного яйца путем смешивания его с равным количеством фосфатного буфера с последующим перемешиванием магнитной мешалкой в течение 10 мин до образования однородного гомогената (Гукасов, Каплан, 1983). Липосомы хранили на льду и использовали в течение одного рабочего дня. Исследуемые соединения добавляли к 4 мл суспензии липосом (разведение 1:1 фосфатным буфером) в концентрациях от 10"7 ДО 10"3 М. После 3 мин инкубации препаратов с липосомами при 37°С и постоянном перемешивании с помощью механической мешалки в кювету добавляли 1 мл раствора и в

течение 10 мин проводили регистрацию кинетики БХЛ. В интактном и ишемизированном миокарде, а также липосомах оценивали изменения БХЛ, индуцированной ионами двухвалентного железа, по следующим параметрам: интенсивность быстрой вспышки, латентный период, скорость и светосумма медленной вспышки, концентрация спонтанного и Ре^-индуцированного МДА. Каждый из изучаемых показателей лимитируется определенными реакциями ПОЛ (Владимиров и др., 1974). Так, интенсивность быстрой вспышки, измеренная как амплитуда быстрой выспышки в мм, пропорциональна содержанию гидроперекисей липидов в гомогенате ткани сердца, латентный период г характеризует потенциал антиоксидантной системы, а скорость начального участка медленной вспышки б, измеренная как tg угла, характеризует процесс ПОЛ на стадии разветвленных цепных реакций. Светосумма медленной вспышки, определяемая как площадь .под кривой БХЛ медленной вспышки (мм2), характеризует суммарный выход перикисных радикалов в реакциях разветвления цепей.

В опытах с воспроизведением тепловой ишемии сердца изучаемые вещества вводили внутрибрюшинно за 30 мин до забоя животных в дозах, дающих противогипоксический эффект и улучшающих функциональную активность ишемизированного миокарда. Введение исследуемых соединений в определенных дозах после перевязки коронарной артерии приводило к изменению некоторых параметров ПОЛ в гомогенатах ишемизированного миокарда, указывающих на антиоксидантный эффект препаратов (табл. 10). Исследование динамики развития ПОЛ в зависимости от длительности ишемии показало, что при перевязке коронарной артерии начальные изменения ПОЛ отмечаются через 60 мин ишемии и достигают максимума через 2-3 ч после окклюзии (Головкин, Гукасов, 1988). Важно отметить увеличение при острой ишемии миокарда как продуктов ПОЛ — МДА> так и потенциала ПОЛ, выявляемого по показателям скорости нарастания и светосуммы медлен-

Табл. 10. 'Антиоксидангный н противоишемический эффекты некоторых энергообеспсчнвающнх средств.

Интенсивность Латентный Содержание малонового Зона

быстрой период, диальдегвда нМ на 1 мг некроза/

Условия опыта п ВСПЫШКИ Т МЕН белка зона

БХЛ, I отн. ед. исходное Fe"- ишемии,

индуцированное %

Контроль 10 64,2±5,6 (100) 0,89±0,07 9,7±0,8 45,8±11,5»(472) 68±4,2(п=9)

Фруктозо-1,6 9 47,4±3,5* (73,4) 2,3±0,07» (258) 15,8±2,3 20,9±2,9 (132) 28±5,5»

дифосфат, 300 мг/кг (п=9)

Цитотром с, 20 10 40,7±4,4* (63,4) 2,86±0,31 (321) 6,0±1,2 9,1±2,9* (152) 32±3,4*

мг/кг (п=7)

Сукцинат натрия, 10 52,9+5,4 (82,4) 0,74±0,07 (83) 6,8±0,2 36,9±2,9(543) 38±5,9*

100 мг/кг

Малат натрия. 200 10 58,0±3,2 (90,6) 0,78±0,08 (88) 7,7±0,5 3б,8±3,8 (4 78) 30±6,0*

мг/кг (п=11)

достоверные различия с контролем (р<0,05). В скобках - процент.

ной вспышки Ре2*-индуцированной БХЛ с 285+38 ММ1 в интактном миокарде до 487±84 мм2 в ишемизированном миокарде. Сходная картина отмечена и при тепловой ишемии сердца, однако в отличие от острой коронарогенной ишемии в этих опытах наблюдалось укорочение периода индукции медленной вспышки БХЛ.

Представленные в табл. 10 данные свидетельствуют о том, что существует выраженная взаимосвязь между влиянием фруктозо-1,6-дифосфата и цитохрома с на ПОЛ и их кардиопротекторным эффектом, тогда как интермедиатам цикла Кребса такая корреляционная связь не присуща. Результаты экспериментов указывают на возможность ограничения размеров некроза через 4 ч после перевязки коронарной артерии без существенного снижения потенциала ПОЛ, выявляемого добавкой к гомогенатам миокарда двухвалентного железа. Следует отметить, что кардиопротекторный эффект малата и сукцината не проявляется и при тотальной гипоксии изолированного сердца на фоне развития метаболического ацидоза. С выраженным антиацидотическим действием фруктоза-1,6-дифосфата и цитохрома с можно связать и наличие антиоксидантного действия этих субстратов, ибо торможение закисления цитоплазмы в зоне ишемии блокирует один из пусковых механизмов ПОЛ при острой ишемии миокарда (Mazo, Frishman, 1987), а также ослабляет сопряженное с ацидозом истощение пула эндогенных антиоксидантов. Таким образом, положительное влияние исследованных препаратов на эксцесс-лактат, коллатеральное коронарное кровообращение, проницаемость мембран и другие функциональные показатели сердца с регионарной ишемией миокарда (Гацура, 1981) сопровождается торможением ПОЛ лишь при введении активаторов гликолитической энергопродукции Для уточнения некоторых сторон механизма действия исследуемых соединений представляется целесообразным изучение их влияния на ПОЛ ткани миокарда, подвергнутой тепловой ишемии, а также в липосомах. Если при коронарогенном инфаркте влияние исследуемых веществ на ПОЛ может быть связано с их центральными эффектами, с действием на уровень кровоснабжения ишемизированного миокарда и маскирующим эффектом дефицита доставки препаратов в зону ишемии, то при тотальной тепловой ишемии изолированного сердца выявляется в основном прямой эффект препаратов на тканевые процессы активации ПОЛ. Опыты же на липосомах открывают возможности изучения физико-химического взаимодействия с липидами яичного желтка, являющимися субстратами Fe -индуцированного процесса ПОЛ. Анализ этих данных в сочетании с материалами, характеризующими мембранотропный эффект по тесту проницаемости мембранных структур позволяет приблизиться к уточнению роли мембрано-стабилизирующего влияния АГПС в формировании их защитного эффекта при общей и региональной гипоксии. Представленные выше методические приемы исследования влияния

АГПС на такие основные патогенетические механизмы пшоксической альтерации как уровень ПОЛ и процессы деоксигенации крови необходимы для уточнения специфики лечебного действия АГПС на этапе их углубленного доклинического исследования. Исследование антиангинального и противоишемического действия потенциальных антигипоксических средств также представляется обязательным этапом фармакологического изучения при оценке возможностей применения антигипоксических средств в кардиофармакологии.

3.7 Разработка и исследование метода БХЛ плазмы крови и гомогенатов тканей организма для экспресс-анализа состояния организма в норме и патологии. •

В работе была изучена зависимость основных показателей динамики индуцированной БХЛ в зависимости состава и параметров инкубационной среды. Проведенные - исследования показали, что, как правило, происходит увеличение параметров К4 и Ку (рис. 12, а), причем можно выделить 2 участка на кривой концентрационной зависимости: начальный, на котором наблюдается линейный рост К; и Ку при добавлении в реакционную систему возрастающих количеств плазмы крови (0-10 мкл), и участок монотонного линейного роста исследуемых параметров (при добавлении плазмы в объеме более 10 мкл) Отклонение экспериментальной кривой от строгой линейной зависимости можно объяснить как известным эффектом самотушения БХЛ плазмой крови за счет преобладающего действия ее системы антиокислителъной защиты (Клебанов и др., 1988), так и определенной инерционностью системы регистрации БХЛ, начинающей проявляться в случае быстрого увеличения (или уменьшения) интенсивности свечения, например при добавлении макроколичеств биологического материала в реакционную систему. В связи с этим целесообразно брать плазму крови для исследований в количестве 4-10 мкл, что, с одной стороны, позволит зарегистрировать ее модифицирующее воздействие на изучаемые параметры, а с другой - исключит вероятность возникновения сложностей при интерпретации результатов. Так, например, при регистрации БХЛ проб, содержащих 4 мкл плазмы крови 19 интактных крыс К» составила 1,29+0,04 отн. ед. (с варьированием индивидуальных значений в пределах 0,92-1,55 отн. ед.), Ку - 1,41±0,09 отн. ед. (с варьированием индивидуальных значений в пределах 1,0-2,15 отн. ед.). Проведенные исследования по изучению влияния добавления на параметры БХЛ подтвердили

теоретическое положение о существовании линейной зависимости между величиной показателя К и концентрацией перекисных продуктов в изучаемом объекте. Отмечено, что параметры К; и Ку не претерпевают изменений при варьировании рН среды в пределах 7,0— 8,0. Результаты хорошо воспроизводятся при повторных изменениях. Ошибка метода составляет 4-5% при регистрации К^и 8-10% при определении Ку. Проведенный

Рис. 12. Концентрационная зависимость параметров быстрой вспышки БХЛ от количества добавляемой в систему плазмы крови (а) и от концентрации ионов Ре" (б).

По осям абсцисс: а - объем добавляемой плазмы (в мкл), б - концентрация ионов Ре2* (в мМ); по осям ординат - К, (в отн. ед.) и Ку (в отн. сд). 1 и 2 - кривые концентрационной зависимости, соответственно, К( и Ку.

анализ зависимости изучаемых параметров ХЛ от концентрации ионов в системе

позволил установить (см. рис. 12, б), что их значения практически не зависят от количества добавляемого.индуктора (РеБО^ТНзО) (в достаточно широком диапазоне концентраций) (2—8 мМ) Наблюдаемое уменьшение амплитуды «быстрой вспышки» при по-

видимому, связано с проявлением антиоксидантных свойств железа. При осуществлении предлагаемой модификации методики индукция процесса СРО происходит при появлении в реакционной системе ионов

в концентрации, близкой к 8 мМ,— избыточной с точки зрения достижения возможности регистрации максимальной амплитуды «быстрой вспышки» БХЛ, но исключающей возможность влияния хелаторов железа на изучаемые параметры, что было подтверждено с помощью специально проведенных исследований по изучению концентрационной зависимости показателей и Ку от добавляемого в реакционную систему ЭДТА.

Поиск неспецифических показателей, информативных для диагностики предпатологии, — актуальная проблема токсикологии. Известно, что развитие интоксикации различной природы сопровождается изменениями ПОЛ в тканях и активности ряда ферментов лейкоцитов периферической крови. Вместе с тем комплексное изучение этих показателей для выяснения корреляций между ними при развитии интоксикации до последнего времени не проводилось. В работе исследовалась информативная ценности неспецифических показателей, таких как СРО и спектр ферментов лейкоцитов периферической крови, в диагностике предпатологии на примере токсической гепато- и нефропатии у беспородных крыс самцов Представлялось интересным выяснить информативную значимость отдельных параметров динамики СРО. В специальной серии исследований (на примере отравления сулемой) установлено, что увеличение интенсивности Ре2*-индуцируемой БХЛ на стадии «быстрой вспышки» носило дозозависимый характер. Параллельно с

-индуцированным БХЛ-анализом СРО из системы, содержащей плазму, отбирали пробы для определения скорости накопления одного из вторичных продуктов ПОЛ-МДА. В работе также изучены физиологические, биохимические и морфологические параметры, характеризующие состояние структуры и функции почек и печени, которые определяли общепринятыми методами (табл. 11). Функциональные и морфологические исследования животных (крысы), подвергавшихся действию сулемы в дозах 1 и 5 мг/кг и ССЦ в дозах 1500 и 7800 мг/кг, свидетельствовали о развитии выраженной токсической

Табл .11. Сравнительная чувствительность специфических и неспецифических показателей состояния почек и печени после воздействия малых и средних доз

Через 3 сут после воздействия НвСЬ После 2-го введения ССЦ

показатель состояния почек доза, показатель состояния печени доза,

мг/кг мг/кг

1,0 15 1500

Спонтанный диурез (18ч) + Длительность сна, вызванного - +

гексеналом

Содержание мочевины в моче — + Проба на выделение - +

бромсульфолеина в крови

Содержание мочевины в плазме — + Морфология гепатоцитов - +

Проба на выделение фенолового — + Интенсивность «быстрой + +

красного вспышки» БХЛ плазмы

Относительная масса органа - + Скорость накопления МДА. + -

Морфология проксимальных канальцев — + Активность: а-ГФДГмит + +

Интенсивность «быстрой вспышки» ХЛ + + МП + +

плазмы >

Скорость накопления МДА + + КФ + +

Активность а-ГФДГмит + +

МП + +

КФ + +

Примечание. Статистически значимые изменения: - не наблюдаются; + - наблюдаются.

нефро- и гепатопатии. Максимальное развитие патологического процесса отмечалось под влиянием средних доз HgCb через 3 суг. после введения и после 2-го введения CCU. Иная картина возникала при введении малых доз изучаемых ядов. HgClj в дозе 0,1 мг/кг и CCU в дозе 15 мг/кг не вызывали заметных функциональных и морфологических изменений по сравнению с контролем. Меящу тем через 3 сут после воздействия HgCb и после 2-го введения ССЦ динамика кинетики Ге2+-индуцированной БХЛ и скорости накопления МДА плазмы, а также активность МП и а-ГФДГ лейкоцитов крови при данных дозах существенно изменялись. При этом ряд изученных показателей (интенсивность «быстрой вспышки» XJI и активность а-ГФДГ) значимо изменялись уже через сутки после введения HgClj и ССЦ. Полученные данные свидетельствовали о высокой чувствительности выбранных нами тестов, причем при воздействии малых доз исследуемых ядов наиболее ранними показателями возникающих нарушений являлись интенсивность «быстрой вспышки» XJI плазмы и активность а-ГФДГ лейкоцитов периферической крови.

Весьма важным было выяснение взаимосвязи меящу показателями СРО и ферментами лейкоцитов как при ртутной интоксикации, так и при отравлении ССЦ. Особенности изменений данных показателей и взаимосвязь между ними при интоксикации HgCb представлены на рис. 13. Как показали результаты исследований, развитие ртутной интоксикации характеризовалось дозозависимым повышением интенсивности «быстрой вспышки» ХЛ, скорости накопления МДА и активности КФ • (Р<0,05), причем между изменениями интенсивности «быстрой вспыпшо> и активностью данного фермента наблюдалась прямая зависимость. Необходимо отметить, что активность КФ изменяется несколько замедленно. Окислительные ферменты ГФДГ и МП лейкоцитов дозозависимо снижали свою активность (Р<0,05). При этом между изменениями интенсивности ХЛ и активностью данных энзимов наблюдалась обратная зависимость. При действии СС14 картина изменений интенсивности «быстрой вспышки» ХЛ плазмы и активности МП, КФ, а-ГФДГ лейкоцитов крови была в основном аналогичной наблюдаемой при ртутном отравлении (Р<0,05).

Полученные данные свидетельствовали о том, что при отравлениях CCU и сулемой в плазме крови активируются процессы ПОЛ, что подтверждается работами и других исследователей. Поскольку активация процессов СРО приводит к изменению селективной проницаемости клеточных и субклеточных мембран (Владимиров и др, 1974), изменение активности ферментов в клеточных органеллах может явиться следствием этого процесса. Происходящие сдвиги в ферментном статусе лейкоцитов можно объяснить нарушением митохондриальной мембраны, что влечет за собой изменение активности а-ГФДГ митохондрий и в свою очередь способствует нарушению глицерофосфатного шунта. Нарушение лизосомальной мембраны приводит к выходу протеолитических ферментов, о чем свидетельствует установленный нами факт увеличения активности КФ нейтрофилов крови, являющейся маркером повреждения лизосом. Понижение активности МП, по-видимому, связано с действием пероксидов на мембраны пероксидазосом. Таким образом, интоксикация организма указанными ядами вызывала активацию процессов СРО в -плазме, что приводило к изменению ферментного спектра лейкоцитов периферической крови и, в конечном итоге, к нарушению клеточного метаболизма. При анализе обнаруженных изменений СРО и изученных энзимов лейкоцитов крови при токсической нефро- и гепатопатии установлены их неспецифический дозозависимый характер и высокая чувствительность сравнительно с традиционным тестированием. При сохранении гомеостаза на уровне организма, органов и клетки исследование СРО плазмы и энзимного статуса лейкоцитов позволило диагностировать его нарушения на молекулярном уровне, т.е. служить методическим приемом в тестировании предпатологии. О негативном характере обнаруженных изменений свидетельствовала их качественная аналогия при воздействии малых и больших доз ядов. Результаты экспериментов дали основание считать интенсивность «быстрой вспышки» Ге2+-индуцируемой БХЛ информативным

Рис. 13. Характер изменения интенсивности быстрой вспышки -индуцированной БХЛ плазмы крови и активности энзимов лейкоцитов при разной степени интоксикации Н§СЪ. а — интенсивность «быстрой вспышки» БХЛ (в отн. ед.); б — активность МП нейтрофилов (в ед. Kaгlow); в - активность а-ГФДГмит лимфоцитов (число гранул формазона в 50 лимфоцитах), г — активность КФ нейтрофилов (в ед. Kaгlow); 1-0.1 мг/кг, 2-1 мг/кг, 3-5 мг/кг, 4-контроль.

мнкроэкспресс-тестом оценки действии на организм токсических факторов различной природы по анализу динамики СРО плазмы крови.

В работе на беспородных крысах было изучено также влияние 6 режимов кислородной недостаточности на эндоэкологическое состояние организма животных по динамике СРО/АОЗ плазмы крови с использованием разработанного микрометода по изменению показателя интенсивности быстрой вспышки Ре2*-индуцированной БХЛ Пробы для проведения хемилюминесцентного анализа при исследовании корреляционной зависимости между устойчивостью организма животных к острой кислородной недостаточности и интенсивностью «быстрой вспышки» БХЛ отбирали однократно - перед проведением тестирования крыс в барокамере, при изучении действия острой гипобарической гипоксии (ОГБГ) - дважды: до и непосредственно после окончания действия данного фактора, а при исследовании эффекта умеренной нормобарической гипоксии (ГТС-10), ишемии головного мозга и ингаляции табачного дыма - многократно в ходе эксперимента. Изучали следующие параметры кривой Ре -индуцированной БХЛ в гомогенатах тканей: интенсивность «быстрой вспышки», продолжительность латентного периода, тангенс угла наклона полулогарифмических апоморфоз «медленной вспышки» и светосумму восходящего участка «медленной вспышки» за стандартный для каждого органа промежуток времени. Параллельно определяли содержание ТБК-активных продуктов ПОЛ в гомогенатах тканей до и через 10 мин после добавления ионов железа и рассчитывали среднюю скорость образования МДА в этой системе.

Регистрация БХЛ плазмы крови интактных крыс выявила значительное варьирование индивидуальных значений параметра К) (в пределах 0,92-1,55), что, по-видимому, является следствием разной суммарной эффективности работы тканевых систем антиокислительной защиты обследованных особей. Наличие данных литературы о существовании корреляционной зависимости между активностью ферментных систем, регулирующих

интенсивность свободнорадикалышх реакций, и устойчивостью организма к кислородной недостаточности (8йрег й а1., 1988) явилось основанием для проведения соответствующих исследований в отношении изучаемого показателя. По результатам тестирования животных на модели ОГБГ общая популяция была разделена на 3 группы: с низкой устойчивостью к гипоксии (НУ, п-28, среднее время жизни на «высоте» 11000 м — Т= 1,48+0,15 мин), средней (СУ, п-18, Т=5,27+0,36 мин) и высокой (ВУ, п-8, Т= 13,20+1,48 мин). Выявлено, что особи, составляющие группу НУ, характеризуются более высоким исходным значением параметра Ю, чем животные двух других групп (рис. 14 А), достоверной разницы между которыми по изучаемому показателю не наблюдается. Применение разработанного критерия позволяет выделит*4 животных с низкой устойчивостью из общей популяции с 90—95-процентной надежностью. Достоверность определения особей с повышенной устойчивостью к кислородной недостаточности несколько ниже (ошибка прогноза в сопоставлении с результатами стандартного тестирования составляет 15—20 %).

Рис. 14. А. Значение параметра К, у разных по устойчивости к гипоксии групп животных. Группы животных с низкой (1), средней (2) и высокой (3) устойчивостью к гипоксии. По оси ординат - К, -интенсивность БХЛ (в отн. ед.) .*- статистически достоверное различие (р<0,05) между данной группой и группой низкоустойчивых к гипоксии животных. Б. Параметр К, при хронической ингаляции крыс табачным дымом. Столбики с горизонтальной штриховкой - контрольная группа животных, с вертикальной - опытная группа. По оси абсцисс - срок от начала воздействия: 1-2 нед., 2 — 3 мес, 3 — 2 мес., 4 — 3 мес, по оси ординат - & — интенсивность ХЛ (в отн. сд.). • - статистически достоверное различие (р<0,05) между опытом и контролем.

Для оценки информативности метода представляло интерес проведение сравнительного анализа влияния экстремальных воздействий различной природы на величину показателя . Было отмечено, что как при воздействии на организм острой гипобарической гипоксии (экспозиции животных на «высоте» 9000 м) и при создании ишемии головного мозга (перевязка а.а. caгotes сот.) средняя величина амплитуды «быстрой вспышки» ХЛ не изменялась: 108,1+4,9% при 10 мин. ОГБГ и 98,3+4,4%, 94,1+7,3%, 99,8+6,9%, 99,1+4,2% и 121,4+14,4% соответственно при 5, 15, 30, 60, 180 мин. длительности воздействия ишемии головного мозга (р>0,05). Неизменность показателя К] можно объяснить тем, что компенсаторная реакция увеличения активности ферментов - тушителей АФК (Гуляева, 1989) в ответ на действие ОГБГ и ишемии головного мозга не способна уже эффективно защитить ткани и органы от действия повреждающих факторов, но обусловливает неизменность, либо лишь незначительное увеличение интенсивности БХЛ. В то же время длительные воздействия умеренных по интенсивности повреждающих факторов могут вызывать интенсификацию свободнорадикальных процессов вследствие постепенной инактивации ферментов антиокислительной защиты интермедиатами и конечными продуктами ПОЛ, истощения, пула тушителей АФК, что может сопровождаться ростом показателя Кратковременная адаптация животных к нормобарической гипоксии (ГГС-10,

до 120 мин.) приводила к достоверному (р<0,05) уменьшению (до 8%) параметра Ki, что может быть связано со стимулирующим действием умеренной кислородной недостаточности на антиоксидантные системы организма (Меерсон и др., 1989).

В работе изучалось также состояния системы СРО/АОЗ организма под влиянием однократной 6-часовой гипоксии, а также при адаптации животных к действию прерывистой нормобарической гипоксии. Установлено, что при однократном 6-часовом воздействии ГТС-10 не происходит статистически достоверного изменения ни одного из изученных параметров «быстрой вспышки» ХЛ плазмы крови в общей группе животных. Не обнаружено значимых отличий параметров кривой ХЛ гомогенатов печени, почек, сердца и головного мозга после 6-часовой гипоксической нагрузки от соответствующих параметров без нагрузки (табл. 12). Выявлена различная скорость накопления ТБК-активных продуктов в тканях исследуемых органов, которые по мере увеличения значения этого показателя можно расположить в следующем порядке: сердце, печень, почки и головной мозг. Гипоксическое воздействие не оказывало влияния на скорость образования конечных продуктов ПОЛ в тканях, что вместе с результатами ХЛ-анализа тканей может свидетельствовать об отсутствии свободнорадикального повреждения тканей, а, следовательно, о физиологичности действия ГГС-10.

Двухнедельная адаптация крыс к прерывистой нормобарической гипоксии приводила к некоторому увеличению интенсивности «быстрой вспышки» БХЛ (на 15—20 %), что указывает на повышение содержания перекисных радикалов в плазме крови, которое сохранялось и через 1 неделю после прекращения действия ГГС-10 (рис. 15) Выявленная активация СРО сопровождалась более интенсивным увеличением мощности антиоксидантной системы (повышением на 20—33 % максимальной скорости ингибирования «быстрой вспышки» БХЛ), что обеспечивало ее преобладание в восстановительный период после гипоксического воздействия. При этом рассчитанный интегральный показатель Kip», отражающий стехиометрическое соотношение про- и антиоксидантных систем, во время адаптации к ГГС-10 достоверно не изменялся, что подтверждает отмеченную ранее физиологичность данного воздействия. Проведенный анализ не выявил существования корреляции между показателями БХЛ тканей различных

Табл. 12. Значения показателей ПОЛ гомогенатов органов крыс после 6-часовой гипоксической нагрузки ГГС-10 (М+т)

Показатель Группа животных Группа животных Печень Почки Головной мозг

Интенсивность «быстрой вспышки» БХЛ, отн.ед (I) Контроль Опыт 55,0 ¿4,7 43,7 ±4,1 70,1 ±8,1 57,6 ±5,1 110,4 ±10,2 97,7 ± 15,5 97,2 ±9,9 73,7 ±9,2

Продолжительность латентного периода, с. (Т_). Контроль Опыт 66 ±10 87 ±11 70 ±15 95 ±12 78± 11 74 ±7 43 ±3 50 ±4

Тангенс угла наклона полулогарифмических аломорфоз «медленной вспышки» ^) Контроль Опыт 0,062 ± 0,008 0.056 ±0,011 0,147 ±0,037 0.133 ±0,018 0,168 ±0,019 0,254 ±0,022 0,172 ±0,012 1217 ±198

Светосумма «медленной вспышки» БХЛ, отк. ед. (в) Контроль Опьгг 2716 ±587 2396 ±637 1083 ± 298 1111 ±222 874 ±279 908 ±187 1779 ±223 1217±198

Скорость накоплении МДА в пробе, мкмоль-л*1мнн"1 Контроль Опыт 5,42 ±0,94 8,37±2,13 18,64 ±4,16 19,30 ±5,43 34,48 ±5,33 35,79 ±2,75 68,06 ±7,67 55,14 ±4,62

Примечание. Значения подсчитаны за первые 150 с для гомогената сердца, 60 с — для гомогената печени, 40 с — для гомогената почек и головного мозга.

0.8 Г I I 1

о 7 14 21 с*т

Рис. 15. Влияние прерывистой нормобарической гипоксии (ПНГ) на показатели (отн.ед.) «быстрой вспышки» БХЛ плазмы крови крыс опытной (1) и контрольной (2) групп: а - интенсивность БХЛ (К,); б - максимальная скорость БХЛ (Kv); в - интегральный показатель БХЛ (Кщ,). По оси абсцисс - сутки после начала действия ПНГ. • - статистически достоверные отличия (р<0.05) между опытом и контролем.

органов и параметрами «быстрой вспышки» БХЛ плазмы крови, взятой у животных в конце сеанса 6-часового гипоксического воздействия. В то же время, отмечено наличие корреляционной зависимости между показателями ПОЛ в ткани сердца после 6-часовой гипоксической нагрузки и параметрами «быстрой вспышки» БХЛ образцов плазмы крови, взятых на 10-й минуте после начала действия ГГС-10 (табл. 13). В контрольной группе животных аналогичные закономерности не выявлены.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что не только продолжительная (3-6 месяцев) адаптация к условиям высокогорья (Суткова, Бараба, 1986) или 1-1,5-месячная адаптация к периодическому 3-6-часовому действию барокамерной гипоксии (Меерсон и др., 1989), но и действие более кратковременной (2 недели по 30 мин ежедневно) прерывистой нормобарической гипоксии сопровождается повышением активности естественных антиоксидантных систем организма, обеспечивающих надежное

Табл 13. Значения коэффициентов корреляции между показателями БХЛ гомогенатов сердца и параметрами «быстрей вспышки» БХЛ плазмы крови крыс.

Параметры «быстрой Показатели Fe''-индуцированной БХЛ гомогенатов сердца

вспышки» БХЛ

I т„ t.<5 Ф AS

К, 0,62 -0,49 0,51 0,33

Крр -0,93 -0,45 -0,93 -0,86

Kv , 0,68 -0,70 0,67 0,65

-0,81 0,76 -0,79 -0,78

ингибирование реакции чрезмерной активации ПОЛ под влиянием различных экстремальных факторов. Имеются все основания полагать, что выявленные особенности изменения состояния гомеостатической системы СРО/АОЗ организма являются важным элементом механизма известного профилактического и лечебного действия прерывистой нормобарической гипоксии (Караш, Стрелков, Чижов, 1988), а разработанный микрохемилюминесцентньш метод оценки динамики системы СРО/АОЗ в организме может быть важным-элементом технологии по мониторингу достижения адекватной реакции организма при действие на него такого фактора как прерывистая нормобарическая гипоксия. Использование разработанного экспресс метода для оценки динамики СРО в микроколичествах плазмы крови крыс получавших в течении трех месяцев питательный рацион с различным содержанием витамина Е (рис. 16), позволило установить определенную закономерность в изменении динамики показателей БХЛ, индуцированной НгОг-Те2*. Так если достоверное увеличение ингибирующего действия витамина Е на процесс СРО/АОЗ прослеживается в диапазоне концентраций витамина от 0 до 25 мг/кг, то большие концентрации витамина Е (100 мг/кг) не вызывают достоверного изменения показателя интенсивности и максимальной скорости ингибирования БХЛ, вызывают изменение направленности показателя 1Рх в сторону его увеличения, на фоне уменьшения значения показателя PP. Полученные результаты показали возможность существования двух типов реакции СРО организма при изменении его антиоксидантного статуса. Первый тип реакции имеет согласованный характер направленности со стороны показателя (I), характеризующего интенсивность СРО (его уменьшение) и показателей, характеризующих активность эндогенной антиоксидантной системы - увеличение максимальной скорости ингибирования (V) и уменьшение периода полузатухания (РР) ИБХЛ, характерен для действия

Концентрация витамина Е в плазме (отн.ед.)

Доза витамина Е в диете (мг/кг)

Рис. 16 Влияние _рациона с различным содержанием Vit Е на показатели быстрой вспышки ицлуцированной ИгО^-Ре1* ХЛ плазмы крови крыс. * - р<0.05, ** - р<0.001.

Сравнение проводилось с группой животных, получавших физиологическую дозу Vit Б - 12.5 мг/кг в течение 3-х месяцев ежедневно.

физиологической дозы витамина Е в пищевом рационе (12.5 мг/кг) и свидетельствует об адекватной реакции системы СРО/АОЗ организма. Критерием адекватности в этом случае является уменьшение IPx, свидетельствующего о превалировании процессов АОЗ над процессами образования свободных радикалов в организме. Причем изменения антиоксидантного статуса организма крыс получавших в пищевом рационе физиологическую дозу витамина Е совпадали с критическим значением показателя Ист, после чего при даче больших доз витамина Е происходило экспонентоциальное увеличение

этого показателя, свидетельствующего о резком уменьшении образования перекисных продуктов на стадии стационарных реакций в конце цикла индуцированного Бе^-НгОг СРО плазмы крови. Именно в критических точках значений изменений показателей АОЗ модельных систем были зарегистрированы максимальные эффекты антиоксидантного действия ряда антиоксидантных стероидных гормонов в физиологических концентрациях (Гукасов, 1976). Второй тип реакции СРО формируется при даче больших доз витамина Е в пищевом рационе крыс (100 мг/кг) и характеризуется частичным рассогласованием динамик изменения показателей антиоксидантной систем организма (уменьшение значений показателей РР и V). Указанные изменения показателей АОЗ происходят на фоне формирования тенденции к снижению показателя I, что характеризует действие АОЗ в данном случае как менее эффективное по сравнению с действием физиологической дозы витамина Е. Полученные изменения со стороны эндогенной системы СРО/АОЗ организма крыс при даче им в пищевом рационе большой дозы витамина Е имеют неадекватный характер, поскольку происходят на фоне увеличения 1Рх, что свидетельствует о превалировании реакций активации СРО над реакциями эндогенной АОЗ. Изучалось также влияние на интенсивность СРО плазмы крови однократного внутримышечного введения масляного раствор а-токоферола ацетата в дозах 10, 50 и 100 мг/кг. Контрольная группа животных получала масляную основу препарата. Действие оценивали через 24 ч. Введение животным антиоксиданта а-токоферола в дозе 50 мг/кг приводит к статистически достоверному уменьшению показателя I (в среднем па 11,2%) (р<0,05). Препарат в дозах 10 и 100 мг/кг влиял на амплитуду «быстрой вспышки» БХЛ, причем если в первом случае его концентрация оказалась недостаточной для проявления антиоксидантных свойств, то во втором она была, по-видимому, избыточной, что обусловливало развитие известного в литературе прооксидантного эффекта а-токоферола (Айдарханов и др., 1989). Использование разработанного микрометода БХЛ позволило получить данные о взаимосвязи интенсивности СРО липидов и степени ишемической деструкции миокардиоцитов. В данной работе проведено изучение информативной ценности различных показателей ИБХЛ сыворотки крови у больных острым инфарктом миокарда и их зависимости от степени некротического повреждения миокарда, определяемого на основании активности креатинфосфокиназы (КФК) и ее кардиоспецифичной фракции МВ. В работе обследованы больные с острым крупноочаговым инфарктом миокарда и здоровые доноры. Больные поступили в сроки от 1 1/2 до 5 ч с начала развития болевого статуса. У 9 больных выявлен трансмуральный инфаркт миокарда передней локализации, у 10 крупноочаговый инфаркт миокарда задней стенки левого желудочка. Диагноз ставился на основании клинических данных, ЭКГ и биохимического исследования КФК и ее изофермента МВ, так как известно, что одним из основных тестов диагностики и оценки степени деструкции сердечной мышцы является определение в динамике уровня общей КФК и ее изофермента МВ. Состояние больных на основании клинического и инструментального обследования расценивалось как тяжелое. Проводили параллельное изучение показателей ИБХЛ и активности общей КФК и ее изофермента МВ в сыворотке крови, взятой у больных через каждые 3 ч на протяжении первых 2 сут от начала болевого синдрома и далее каждые 6-12 ч до 4-х суток заболевания включительно с последующим однократным исследованием на 5-7-е сутки. Полученные результаты представлены в табл. 14. Выявлены определенные закономерности изменения показателей БХЛ у больных острым инфарктом миокарда. Так, БХЛ, индуцируемая Бе2* и НгОг, а также БХЛ, индуцируемая реактивом Фентона (Ие2* + Н2О2), достоверно

уменьшались на 12-18-м часу от начала развития болевого статуса. Дальнейшее течение инфаркта миокарда сопровождалось постепенным увеличением интенсивности БХЛ, индуцируемой Н2О2, а также БХЛ, индуцируемой реактивом Фентона, до показателей здоровых лиц. При изучении БХЛ, индуцируемой Те2*, отмечено, что восстановление БХЛ происходит медленнее, оставаясь достоверно сниженным вплоть до 7-х суток

наблюдения. В отличие от показателей интенсивности БХЛ установлено достоверное увеличение времени полураспада экзогенной перекиси водорода (РР) в системе сыворотки

Табл. 14. Изменение показателей ИБХЛ, активности КФК и ее изофермента MB у больных в остром периоде инфаркта миокарда (М±т).

Показатель Группа здоровых лиц (п=20) Время с момента развития болевого статуса (п = 19)

Зч 6ч 12 ч 18 ч 24 ч 48 ч 72 ч 5-7 суток

Активность КФК, ед/л 68,3±8,3 302±56,3 678,9±165,7 1818,1±403,6 2013,6±561,1 1956,2±691,7 1051,2± 449±107,5 148,9*

261,5 24,6

Активность фракции МВ КФК, 2,89±0,5 14,9±5,5 38,9 ± 16,0 132,7±46,7 136,1*49,9 103,5±21,3 57,8*14,7 31,2±6,8 5,3*1,4

ед/л

I ХЛ-индуцируемой Ре2*,отн. ед. 43,0±1,4 40,2±3,4 31,8±2,1 26,0±2,3 27,1±3,1 29,5±3,3 29,7±2,0 29,6±2,5 29,7*2,7

Р >0,05' <0,01 <0,001 <0,001 <0,002 <0,001 <0,001 <0,001

I ХЛ-индуцируемой Н202,оггн. ед. 41,6±2,0 35,2±3,9 33,8±3,8 31,4±3,3 27,2±1,8 29,8±3,4 28,7±3,7 38,3*5,8 39,9*6,3

Р >0,05 =0,05 <0,05 <0,001 <0,02 <0,01 >0,05 >0,05

I ХЛ-индуцируемой реактивом 76,8±3,9 68,4±9,б 53,6±8,4 47,8±7,4 46,8±9,3 63,7±8,8 69,2±9,0 89,7±7,9 79,1*6,5

Фентона (Н202+Ре2*), отн. ед.

Р >0,05 <0,02 <0,01 <0,01 <0,01 >0,05 >0,05 >0,05

Время полураспада

Н202, сек. (РР) 1,5±0,2 5,1±1,1 5,7±0,9 6,8±1,3 5,8±1,0 4,7±1,6 3,4±0,8 2,3*0,5 2,1*0,3

Р <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 <0,05 >0,05 >0,05

Примечание, р вычислено по сравнению с показателями здоровых лиц.

крови больных. Максимум увеличения периода полураспада выявлен на 12-й час болезни, после чего показатель снижается вплоть до его нормализации к концу 3-х суток. У всех обследованных больных также выявлена достоверная гиперферментемия КФК и фракции МВ, превышавшая норму к 15-21-му часу болезни соответственно в 27 и 45 раз. Нормализация активности КФК и фракции МВ у этих больных достигнута на 5-е сутки заболевания. В работе впервые проведена сравнительная оценка информативных возможностей различных показателей индуцируемой БХЛ, отражающих перекисный статус организма при инфаркте миокарда в зависимости от степени деструкции сердечной мышцы, определяемой на основании гиперферментемии КФК и ее изофермента МВ и установлена взаимосвязь между степенью деструкции миокарда, определяемой на основании гиперферментемии КФК и ее фракции МВ, и ингибированием индуцированной БХЛ сыворотки крови больных. При этом обнаружено совпадение пиков активности фракции МВ КФК с максимальным ингибированием БХЛ.

Значительный интерес для понимания механизма изменения интенсивности СРО сыворотки крови больных инфарктом миокарда представляет достоверное увеличение периода полураспада экзогенной перекиси водорода (РР) в системе сыворотки крови исследуемых больных с его наибольшим увеличением (в 4,5 раза) в фазу максимальных деструктивных изменений миокарда. По-видимому, это связано с функциональной неполноценностью ишемических антиоксидантов (продуктов деструкции) и свидетельствует о необходимости использования физиологических антиоксидантов.

При анализе обследованных больных, поступивших в наиболее ранние сроки заболевания (до 2 ч), удалось найти выраженную активацию ПОЛ, определяемую при использовании БХЛ, индуцируемой Ре2+ (рис. 17). На рисунке приведено динамическое наблюдение за показателями БХЛ, индуцируемой Ге2+, и кардиоспецифичным изоферментом МВ у больного П., 60 лет, поступившего в блок интенсивного наблюдения и лечения с диагнозом: ИБС, острый инфаркт миокарда задней стенки левого желудочка сердца. Как видно на рис. 17, у больного до 6-го часа от начала развития болевого статуса активность фракции МВ КФК была нормальной, в это же время в сыворотке крови выявлена активация ПОЛ. В дальнейшем при развитии некроза миокарда (повышение активности фракции МВ КФК) отмечена типичная фаза ингибирования БХЛ с нормализацией ее на 5-е сутки болезни. На 44-е сутки больной был выписан в удовлетворительном состоянии. Проведенное исследование позволяет по-новому интерпретировать участие СРО/АОЗ в развитии инфаркта

МВ КФК, I,

ед/л ОТН.СД.

о

Рис. 17. Динамика интенсивности БХЛ, индуцируемой Бс2 (сплошная линия) и активности фракции МВ КФК (пунктирная линия) у больного П., 60 лет.

го

миокарда, учитывая установленный фазовый характер его изменения, что также устраняет имеющиеся противоречивые данные как о преимущественной активации процесса ПОЛ при

экспериментальном инфаркте миокарда (Калмыкова и др. 1974; Коган и др. 1976), так и его преимущественном ингибировании (по данным -индуцируемой БХЛ) при ишемии веществами типа низкомолекулярных пептидов, которые и являются депрессорами БХЛ, индуцируемой Ре5+ (Малюгин и др., 1975).

Таким образом, динамическое наблюдение за параметрами интенсивности БХЛ сыворотки крови может служить ранним диагностическим тестом как развития тяжелой ишемии и в последующем некротических изменений в миокарде, так и степени их выраженности учитывая наличие прямой связи между ингибированием интенсивности БХЛ сыворотки крови с содержанием продуктов ишемической деструкции миокарда — гиперферментемией креатинфосфокиназы и ее кардиоспецифичного изофермента МВ.

С целью изучения динамики СТО в организме при сочетанном действии экстремальных факторов (гипоксии, гипероксии) на организм животных (собак) была выбрана модель длительного искусственного кровообращения с использованием пенно-пленочного противоточного оксигенатора. Изучались показатели Ре2+-индуцированной БХЛ плазмы крови - светосумма (в) и скорость начальной экспоненциальной части медленной вспышки (5). Светосумма ХЛ и 5 с началом ИК увеличилась, достигнув максимального значения на 10-й мин. (см. рис. 18) Затем снижалась, достигая исходного уровня примерно на 60-й мин. Снижение продолжалось вплоть до 90-й минуты, когда светосумма становилась меньше исходной. К концу ИК наблюдалось некоторое возрастание значений исследуемого показателя. После отключения АИК наблюдалось резкое снижение интенсивности БХЛ, однако с последующим повышением. Таким образом, наблюдалось трехфазное изменение БХЛ

3-1 Э, отнед. 5

Рис. 18. Изменение динамики показателей Ре2* -индуцированной БХЛ плазмы крови собак при длительном искусственном кровообращении. 5- тангенс угла начальной экспоненциальной части медленнлой вспышки БХЛ, в- светосумма медленной вспышки БХЛ, отн. ед. *,**, *** - достоверность по сравнениюс исходом (р<0.05. р<0.01, р<0.001)

Первая фаза изменения БХЛ в процессе ИК связана с увеличением окисляемости липопротеидов сыворотки крови. В начале ИК в организм поступает кровь с высоким рОь что может быть первичным фактором, инициирующим ПОЛ (Владимиров, Арчаков 1972). На это косвенно указывают также увеличение накопления МДА и возрастание гемолиза. На второй стадии в ответ на повышение способности липопротеидов к окислению включаются, по-видимому, компенсаторные механизмы регуляции перекисного гомеостаза, что приводит к снижению БХЛ на 30—60-й минуте ИК и снижению накопления МДА после добавления железа. Известно, например, что при гипероксии наблюдается выход в кровь глюкокортикоидов (Мухин и др., 1978) а, как показано (Гукасов, Федоров 1977), стероидные гормоны обладают антиоксидантными свойствами в физиологических концентрациях. Вполне возможно, имеет место активация и антиоксидантных ферментов. Одновременно происходит некоторое уменьшение концентрации свободного гемоглобина в сыворотке. На третьей фазе в процессе реагирования антиоксидантов со свободными радикалами в

реакциях ПОЛ происходит, по-видимому, истощение защитной антиокислительной системы, которая уже не способна в должной мере ингибировать свободнорадикальные реакции Начиная с 90-й минуты ИК интенсивность БХЛ возрастает снова, указывая на повышение окисляемости липопротеидов сыворотки крови. Не вызывает сомнения, что ИК сопровождается развитием гипоксии органов и тканей. Резкое снижение интенсивности БХЛ после отключения АИК может быть следствием мобилизации продуктов ишемии, которые, по-видимому, обладают антиокислительными свойствами (Лопухин и др., 1983). Использование коэффициентов микро-экспрессметода ИБХЛ оценки СРО/АОЗ дает возможность прогнозировать чувствительность организма к действию экстремальных факторов экзо- и эндогенной природы (гипоксия, гипероксия, интенсивные физические нагрузки и др ). Н рис. 19 А показано изменение коэффициентов ИБХЛ плазмы крови мышей до и после действия функциональной нормобарической 5 мин. Ог-пробы в группах низкоустойчивых (рис. 19 А, группа 1) и высокоустойчивых (рис. 19 А, группа 2) мышей к гипербарическому Ог (3 атм.). Как видно из рисунка использование интегральных показателей ИБХЛ позволяет достоверно выявить группы животных,

чувствительных к токсическому действию ГБО, оцениваемого по времени наступления судорог и времени жизни мышей (рис. 19 Б).

Рис. 19. А - Влияние функциональной кислородной пробы на изменение показателей СРО/АОЗ плазмы крови мышей низкоустойчивых (группа 1) и высокоустойчивых (группа 2) к токсическому действию Ог, где 1 - показатели до пробы, 2 - показатели после пробы. Б - Время наступления судорог (1) и время жизни мышей (2) низко- (группа 1) и высокоустойчивых (группа 2) при токсическом действии гипербарического Ог. *, *** - достоверность показателей медлу группами (соответственно, р<0.05, р<0.001), -, - - - достоверность показателей медлу значениями до и после Ог-пробы (соответственно, р<0.05, р<0.01).

В табл. 15 показано наличие высокой корреляционной связи между рядом коэффициентов ИБХЛ с временемжизни (12) и временем наступления судорог (1|) у мышей. Использование гипо-нормобарической О?- пробы по интегральному показателю Ъ ИБХЛ позволяет оценивать чувствительность спортсменов к интенсивным физическим нагрузкам (рис. 20 А) и к потреблению О2 (рис. 20 Б) На рис. 20 А и Б представлены уровни общей работоспособности Р^С и уровни максимального потребления 02, измеренные по методам, описанным ранее (Виноградов, 1986), в зависимости от наличия резервных возможностей АОЗ спортсменов, оцениваемых по степени согласованности реакции АОЗ на функциональную пробу. Отмечено, что чем больше резервные возможности спортсменов (чем выше согласованность реакции АОЗ), тем выше уровень работоспособности и максимального потребления СЬ организмом. Показатель Ъ у спортсменов с высоким уровнем резервных возможностей (рис. 21, группа 1) достоверно отличается от показателя Ъ у спортсменов с низкими резервными возможностями (рис. 21, группа 2).

Табл 15 Корелляционные матрицы значимости коэффициента корреляции показатечей СРО/АОЗ плазмы крови мышей при действии на них функциональной пробы (5 мин нормобарического Ог) с показателями токсичесого действия ГБО А - до функциональной пробы с 02> Б - после функциональной пробы с Ог, где К,, Кя>, Ку, Ко*, Ъ - показатели СРО/АОЗ плазмы крови у мышей, ^ - время наступления судорог у мышей, - время жизни мышей

Рис 20 А - влияние резервных возможностей АОЗ организма на уровень общей работоспособности спортсменов (PWC), Б - влияние резервных возможностей АОЗ организма на уровень максимального потребления Ог у спортсменов (МПК),

где группа 1 - рассогласованная реакция АОЗ на гипо-нормобарическую функциональную пробу, группа 2 - частично согласованная реакция АОЗ на гипо-нормобарическую функциональную пробу, группа 3 - согласованная реакция реакция АОЗ на гипо-нормобарическую функциональную пробу

Рис 21 Изменение интегрального показателя Ъ плазмы крови у спортсменов с разными резервными возможностями АОЗ, где группа 1 - рассогласованная реакция АОЗ на гипо-нормобарическую функциональную пробу, группа 2 - согласованная реакция реакция АОЗ на гипо-нормобарическую функциональную пробу + - р<0 05

В работе проводилось изучение информационной ценности коэффициентов Ре2+-Ы2(У индуцированной БХЛ плазмы крови для выявления больных миеломой, лейкозом и лимфомой (рис. 22). Как показали результаты исследований использование К в качестве диагностического критерия позволяет достоверно отдифференцировать уровень Ю плазмы крови больных от Ю плазмы условно здоровых доноров, и в некоторых случаях позволяет выявить различия между самими заболеваниями (рис. 22 А). Использование же традиционного показателя ИБХЛ I для диагностических целей не выявило достоверных различий между изучаемыми группами условно здоровых доноров и больных злокачественными заболеваниями (рис. 22 Б), что свидетельствует о больших диагностических возможностях разработанных и представленных в данной работе коэффициентов и интегральных показателей не только для оценки уровня функционального состояния условно здоровых доноров, но и для диагностики наличия у больных злокачественных заболеваний крови.

4,03,5 3,0 2,5 2,0 1.5 1.0

• — здоровые доноры — мегома

»—лейкоз т— тифома

Б

-здрроеьвдоноры

- м«л0№

—лейся

— лшфоыв

14 сек

Рис. 22. Изменение коэффициента Ре2*-Н202--ивдуцированной БХЛ (А) и интенсивности БХЛ (Б) в плазме крови условно здоровых доноров и больных миеломой, лейкозом и лимфомой на разных сроках процесса индукции ИБХЛ. К, - коэффициент интенсивности ИБХЛ, I - интенсивность ИБХЛ, сек. - время развития ИБХЛ. * - достоверные различия с здоровыми донорами (р<0.05), + -достоверные различия между группами больных с лимфомой и лейкозом (р<0.05).

В заключении приводится обобщающая схема 2, иллюстрирующая роль свободных радикалов, продуктов ПОЛ и антиоксидантной системы в развитии неспецифических ответных реакций организма, их диагностики и прогнозировании действия разных по природе экстремальных факторов.

Схема 2. Роль свободных радикалов, продуктов ПОЛ и антиоксидантной системы и прогнозировании действия разных по природе экстремальных факторов.

в развитии неспецифических ответных реакций состояний организма, их диагностике

Технологии оценки эндоэкологического состояния организма

1 2 3 4 5 6 17 8

Оценка уровней адаптации (показатель Ъ ) Оценка оксигеназного звена утилизации 02 (показатель ДКУК) Оценка факторов переключающих оксидазный путь утилизации 02 на оксигеназный Оценка адекватности реакции организма Выявление донозоологических состояний у условно здоровых лонопов Выявление групп риска у больных бронхиальной астмой с постхирургическими осложнениями Оценка тяжести эндоэкологического состояния больных с злокачественными заболеваниями крови Оценка эффективности лечения рольных

СДЭ СЧ 8 НАДН

1 г ' г 1 ' 1 ' 1 ' 1

+ - + + + -+ + + + +

+ ++ + + ++ - + + +

+ ++ + + ++ - + + +

где А - анаболизм, АД - адреналин, ГБО - гипербарическая охсигеващи, К - катаболизм, МКО - михросо-мальное окисление, МП - мембранный потенциал субмигохондриальных частац, НА - норадреналин, П02 -потребление Оь САС - симпатико-адреналовая система, СЖК - свободные жирные кислота, СДЭ - скорость деоксигенации эритроцитов, ЦНС - центральная нервная система

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ

1. Разработана и внедрена технология программно-аппаратурного обеспечения оценки и прогнозирования действия антропогенных факторов разной природы на эндоэкологическое состояние организма человека и животных по изучению динамики изменения уровня СРр/ЛО3 в клинике и эксперименте.

2. Разработана технология мониторинга коррекции эндоэкологического состояния организма и выявления групп риска у больных с разной нозологией по оценке динамики изменения уровня СРО/АОЗ.

3. Разработана технология для прогнозирования биологической активности ряда природных и синтезированных фармакологических препаратов по изучению их про- и антиоксидантного действия в сочетании с их электронноакцепторной активностью, а также влиянием на показатели скорости деоксигенадии эритроцитов крови, Н+АТФ-азную активность и трансмембранный потенциал субмитохондриальных частиц.

4. Разработана технология оценки путей утилизации кислорода в биологических системах организма с целью диагностики скрытых форм его гипоксического состояния при длительном искусственном кровообращении.

5. Разработан и внедрен экспресс-микрометод индуцированной биохемилюминес-ценции (ИБХЛ) для анализа уровня СРО/АОЗ в плазме крови здоровых доноров и больных с разной нозологией

6. Трекрезан как новый фармакологический препарат адаптогенного действия является активным антиоксидативным средством (проявляет свойства ингибитора свободных радикалов) и эффективен при лечении больных с нарушенной сопротивляемостью организма.

7. Совокупность полученных результатов показывает, что уровень СРО/АОЗ в сочетании с программно-аппаратурным обеспечением - важный интегральный показатель для контроля за функциональным состоянием АО системы организма и эффективностью применения природных и синтетических антиоксидантов в условиях развития оксидантного стресса.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Г.Я. Дубур, АХ. Ведена, В.М. Гукасов, Ю.А. Владимиров. Регуляция инициируемого ионами Fe2* перекисного окисления липидов митохондриалъных мембран в опытах in vitro антиоксидантамя 1,4-дигидропиридинового ряда. Вопросы медицинской химии, 1976, т. ХХП, вып. 5, с. 665-672.

2. Ю.А. Владимиров, В.М. Гукасов, В.К. Федоров, П.В. Сергеев. Действие тироксина на перекисное окисление липидов в мембранах митохондрий. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1977, № 5, том ЬХХХП, с. 558-561.

3. П.В. Сергеев, В.К Федоров, В.М. Гукасов, Ю.А. Владимиров. Два возможных механизма действия тироксина на набухание митохондрий. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1977, №6, том LXXX1IL с. 680-683.

4. EJL Кадлан, Г.А Асоян, В.М. Гукасов, ДВ. Кулаев, И.А. Максимова, В.И. Смирягина, Влияние инозина на процесс перекисного окисления липидов почек при ишемии// Материалы II Всесоюзного симпозиума по пересадке почки, 1978, г. Вильнюс, с. 124.

5. Е.Я. Кадлан, Г.А. Асоян, ДВ. Кулаев, В.М. Гукасов. Защита почек от ишемического повреждения инозином. Материалы проблемной комиссии МЗ СССР «Трансплантация органов и тканей», г. Новосибирск, 1978, с. 51.

6. Е.Я. Каплая, В.М. Гукасов. Особенности влияния некоторых антигипоксантов на характер перекисного окисления липидов. Материалы симпозиума «Стресс и адаптация», г. Кишенев, 1978, с. 35.

7. Е.Я Каплая, В.М. Гукасов и др. Некоторые особенности состояния почек при паю- и гипероксии. Материалы 13го Съезда Всесоюзного физиологического общества, г. Алма-Ата, 1979, с. 25.

8. Е.Я. Каллан, В.М Гукасов, Д.В. Кулаев, И.А Максимова, В.И. Смирягина. О некоторых показателях жизнеспособности ишемизированных почек я критериях возможности их трансплантации. Материалы VIII Всесоюзной конференции по пересадке органов и тканей, Баку, 1979, с. 287-288.

9. Д.В. Кулаев, Г.А Асоян, Е.Я. Каллан, В.М. Гукасов, И.А Максимова, В.И. Смирягина, Применение инозина для защиты почек от ишемического повреждения// Актуальные вопросы пересадки органов и тканей, Труды 2го МОЛГМИ им. Пирогова, г. Москва, 1979, том 9ХГО, серия хирургия, выпуск 23, с. 49-50.

10. Е.Я. Каплая, ИХ Соколов, А.С. Лосев, Г.А Асоян. ДВ. Кулаев, И. А Максимова, АИ. Навоктонов, В.М. Гукасов, И.М. Чушев, С.С. Нурмагомаев, В.И. Смирягина. Изучение противогипоксического действия рибоксина в эксперименте. Химико-фармацевтический журнал, 1979, 8, с. 69-73.

11. Г.А Смирнова, В.М. Гукасов. Особенности перекисного окисления липидов крови у больных хроническим алкоголизмом. В сборнике: Вопросы алкоголизма. Труды института судебной психиатрии им. Проф. В.П. Сербского. М., 1979, №32, с. 42-46.

12. Е.А Каллан, Г.А Асоян, В.М. Гукасов, ДВ. Кулаев, И.А. Максимова, В.И. Смирягина, ИВ. Жигагева. Особенности кинетики и накопления продуктов перекисного окисления в гомогенатах и митохондриях почек

крыс при разных сроках ишемии и восстановления кровотока в них Iм Научная конференция «кровоснабжение, метаболизм и функция органов при реконструктивных операциях», Ереван, 1979, с 288-290

13 Е Л Каплан, Г А. Асоян, В М Гукасов, Д В Кудаев, И А. Максимова, В И. Смирягина, И В Жигагева, И М Чушев 1" Научная конференция «Кровоснабжение, метаболизм и функция органов при реконструктивных операциях», Ереван, 1979, с 292-293

14 Е Я. Кашин, В И. Солнышкин, В М Гукасов, И А Максимова, М Е Власова Удаление ионов тяжечых металлов ионобменными смолами из биологических объектов Региональная сессия научного совета по неорганической химии АН СССР, посвященное проблемам бионсорганической химии, Фрунзе, 1980, с 76

15 ЕЯ. Каплан, В М, Гукасов, В И Солнышкин, В И Смирягина, И А. Максимова, МЕ Власова. Оценка токсиче-ского действия ионов тяжстых металлов методом хемилюминесценции Региональная сессия научного совета по неорганической химии АН СССР, посвященное проблемам бионеорганической химии, Фрунзе, 1980, с 77

16 В М Гукасов, Т А Смирнова, Е Я Каплан О наличии корреляции между интенсивностью перекисного окисления липидов сыворотки крови и степенью алкогольной интоксикации. В материалах Всесоюзного симпозиума «Биохимия алкогочизма», Минск, «Наука и техника», 1980, с 75-76

17 ЕЯ Каплан, В Л Водочазский, ВМ Гукасов, ИЕ Дробинсхая АС Лосев, АИ. Цукерман, Некоторые аспекты механизма действия 1-(этокси)силатрана. В материалах 3 Всесоюзной конференции «Биотогически активные соединения кремния, германия, очова и свинца. Иркутск, 1980, с 75-76

18 С С Мисюлин, М. Дворжак, М.П Шерстнев, АП Камахин, ВМ. Гукасов Некоторые стороны обмена эмбрионов при развитии в условиях изменения концентрации простогландина Б2, Труды 2го МОЛГМИ им Пирогова, том СЬХГУ, серия гисточогия, выпуск 2, «Функциональная морфотогия зморионального развития человека и млекопитающих», Москва, 1981, с 71-77

19 В М Гукасов, ЕЯ Каплан, В И Смирягина, В И. Солнышкин, И А. Максимова. Использование метода хемилюминесценции для оценки тяжести ртутной интоксикации. В материалах Всесоюзной учредительной конференции по токсикочогии, 25-27 ноября 1980 г, Москва, с 193

20 В М. Гукасов, Е Я. Капдан. Фазовые изменения скорости перекисного окисления липидов как универсальная реак-ция организма на действие субэксгрсмальных факторов среды В сборнике Ш Всесоюзного симпозиума «Физиочо-гические и клинические проблемы адаптации и гипоксии, гиподинамии и гипотермию), 1981, Москва, т 1, с 32

21 ВМ. Гукасов, ЛЛ Фролова, ЕЯ Каплан Некоторые механизмы действия тиреокальцийтонина при гипокинезии крыс В сборнике III Всесоюзного симпозиума «Физиочогическис и клинические проблемы адаптации и гипоксии, гиподинамии и гипотермию), 1981, Москва, т 1, с 51

22 В М Гукасов, ЕЯ Каплан, КБ Ст)шш,А.И Новокшонов Роть перекисного окисления липидов в патогенезе раз-вития гипоксии во время искусственного кровообращения Б сборнике III Всесоюзного симпозиума «Физиоло-гические и клинические проблемы адаптации и гипоксии, гиподинамии и гипотермии», 1981, Москва, т 1, с 33

23 В М Гукасов, И К. Сокотов, Е Я Каплан. Рочь реактивности организма в проявлении адаптогенного эффекта при некоторых экстремальных воздействиях. В сборнике III Всесоюзного симпозиума «Физиочогическис и клинические проблемы адаптации и гипоксии, гиподинамии и гипотермии», 1981, Москва, т 1, с 35

24 Е Я. Каплан, В М Гукасов, Е А. Демуров, И Е Максимова, Е В Федорова, В А. Пантелеймонов, Ю Б Колосков В материалах VII Международного конгресса по гипербарическои медицине, Москва, 1981, с 17425 Е Я. Каплан, В М. Гукасов, Е А. Демуров, Е В Федорова, ИЕ Максимова, В А Пантечеймонов Некоторые

особенности перекисного окисления чипидов сыворотки крови при гипербарической оксигенации, В материалах VII Международного конгресса по гипербарической медицине, Москва, 1981, с 176-177

26 Д.В Кучасв, И Г Кочсргин, Г А. Асоян, Е Я. Каплан, В М. Гукасов, И М. Чушев, Н А. Барышникова, Г К Кучаев, Л.К. Алтухова, В И. Смирягина. Консервация почек инозином Эффективность и возможные механизмы действия Вестник АМН СССР, 1981, №10, с 75-79

27 Ю А. Зимаков, В М. Гукасов В таяние ацетилхолина, холнномиметических средств и их аитогонистов на хемилюминесценцию модельной системы перекисного окисления липидов синаптосомы мозга крыс-Н2О2-эозин Тезисы Всесоюзной конференции «Актуальные проблемы оценки фармакочогической активности химических соединений, Москва, 1981, часть 1, с 137-138

28 В М Гукасов, В И Смирягина, И А Максимова, Е Я Каплан, Б С Каплан, Г М Айрапетян, РВ Соловьева, И Б Зукакава, И В Жигагева. Критерии эффективности аитидотного действия химических соединений при свинцовой интоксикации организма. Тезисы Всесоюзной конференции «Актуальные проблемы оценки фармакологической активности химических соединений», Москва, 1981, часть 1, с 103-104

29 ИВ Березовская, М.Е. Власова, ВМ Гукасов Перекисное окисление липидов как показатечь тяжести интоксикации Тезисы Всесоюзной конференции «Актуальные проблемы оценки фармакочогической активности химических соединений», Москва, 1981,1 часть, с 41-42

30 В Ю Полумисков, А А. Берестов, В М. Гукасов, О А Авилова. Изменение показатечей индуцированьой хемилюминесценции при остром инфаркте миокарда Республиканский сборник научных трудов «Острый инфаркт миокарда», Москва, 1981, том ХЬ^, с 75-80

31 АП Гочиков, А А Берестов, ВЮ Полумисков.В М Гукасов, О А. Авилова, ЕЯ Каплан Информативная ценность различных показатечей хемилюминесценции сыворотки крови бочьных острым инфарктом миокарда Кардиология, 1982, т 22, №1, с 40-44

32 И А. Максимова, В И Смирягина, О В Протасова, М.Ю Буслова, И И Матвеева, Е Я. Каплан, В М. Гукасов Патогенетическое обоснование фармакопрофилактики интоксикаций тяжелыми металлами Тезисы Iго Всесоюзного биофизического съезда, Москва, 1982, том 3, с 56

33 ЕЯ. Каплан, ВМ. Гукасов, В В Швыдкий, И К Соколов, КБ Асоян, ЯМ. Свердлов, ВФ Аникеев, Г В Сумаруков, МГ Трудолюбова. Использование некоторых биофизических показателей для оценки функционального состояния организма и степени тренированности к физическим нагрузкам Тезисы докладов республиканской научной конференции и пленума Всесоюзной проблемной комиссии «Медицинские проблемы физической кучьтуры» АМН СССР, Каунас, 1983,1 часть, с 59-61

34 ЕЯ. Каплан, ВМ Гукасов, ЕА. Демуров, ЕВ Федорова, ИЕ Максимова О механизмах токсического

действия кислорода и возможности его оценки с помощью изучения кинетики перекисного окисления дипидов. Матсриалы'УН международного конгресса «Гипербарическая медицина», Москва, 1983, том. 2, с. 155-157.

35. М Е. Власова, И.В. Березовская, В.М. Гукасов. Роль перекисного окисления лшшдов плазмы и ферментного спектра лейкоцитов крови в оценке предпаталогии химической этиологии. Химико-фармацевтический журнал, 1983, №12, с. 1432-1436.

36. М.А. Грум-Гржимайло, В.В. Рудольф, И.А. Максимова, П.М. Яшнова, Н.И. Пересыпкина, В.В. Суздалева, П.С. Васильев, ЕЯ. Каплан, А.М. Бузынский, В.М. Гукасов, Г.С. Малахова, Л.М. Мироненко, Т.Г. Коваленко. Авторское свидетельство. «Безалкогольный напиток «Новияка-тонизирующий», 1983, №1086576.

37. Ю.Б. Писарский, В.М. Гукасов, Е.Я. Каплан. Влияние триэтаноламина и 1-хлорметилсилатрана на кинетику перекисного окисления липидов in vitro. Тезисы Всесоюзного совещания «Биоантноксидант», Черноголовка, 1983, с. 30-31.

38. Е.Я. Каплан, В.М. Гукасов, И.А. Максимова, В.И. Смиряпша, Б.С. Каплан, М.Ю. Буслова, И.И. Матвеев, А.А. Касгрова, О.В. Протасова. Обоснование к использованию антиоксидантов при свинцовой интоксикации. Тезисы Всесоюзного совещания «Биоантиоксидант», Черноголовка, 1983, с. 162-163.

39. ЕЛ Каплан, В.М. Гукасов, И.В. Жигачева, А.И. Машнин, В.В. Швыдкий, И.К. Соколов, И.Е. Дробннская, А.В. Лиманцев, А.Р. Казаров, В.Ф. Аникеев, Л.В. Татьяненко. О корреляционной связи между антиокислительной активностью химических соединений и их адаптогенным эффектом при агрессивных воздействиях на организм. Тезисы Всесоюзного совещания «Биоантиоксидант», Черноголовка, 1983, с. 140-141.

40. М.Е. Власова, В.М. Гукасов, И.В. Березовская, Е.Я. Каплан. О коррелятивной зависимости между показателями перекисного окисления липидов плазмы крови и активностью миелопероксидазы нейтрофилов периферической крови при некоторых интоксикациях. Тезисы Всесоюзного совещания «Биоантиоксидант», Черноголовка, 1983, с. 162-163.

41. Е.Я. Каплан, В.М. Гукасов, Е.А. Демуров, В.Ф. Аникеев, ЯМ. Свердлов, В.В. Швыдкий, Е.В. Федорова, И.Е. Максимова! Использование модели гипербарической оксигенащш для выявления перспективных антиоксидантов и коррекции ишемических расстройств. Материалы Всесоюзной научной конференции «Использование моделей патологических состояний при поиске биологически активных препаратов», Москва, 1983, часть 1, с. 74-75.

42. В.М. Гукасов, И.А. Максимова, В.И. Смирягина, М.Ю. Буслава, И.И. Матвеева, О.В. Протасова, ИВ. Жигачева, И.Е. Дробинская, В.В. Швыдкий, Б.С. Каплан, АА Кайрова, Р.Ф. Кузина, Р.И. Казаров, В.Ф. Аникеев, Я.М. Свердлов. Выяснение информационной ценности некоторых боифизических и боихимических методов для оценки альтерации организма при интоксикации ионами свинца и защитном действии фармакологических препаратов. Материалы Всесоюзной научной конференции «Использование моделей патологических состояний при поиске биологически активных препаратов», Москва, 1983, часть II, с. 44-45.

43. И.В. Ступин, А.И. Новокшонов, Е.Я. Каплан, В.М Гукасов. «Способ выявления неадекватности искусственного кровообращения», Авторское свидетельство, № 1088702,1984.

44. S.N. Efuni, L.D. Ashurova, Ye.Ya. Kaplan, V.M. Gukasov, EA Demurov, A.S. Kokotkina. The use of some biophysical indeces for evaluation of patients state in hyperbaric oxygenation. VII International Congress of Hyperbaric Medicine, USA, Long Beach, California, 1984, p. 15.

45. B.M. Гукасов, ЕЯ. Каплан, Л.Д. Ашурова, Е.А Демуров, Е.В. Федорова, А.С. Кокоткина, С.Н. Ефуни. Использование метода хемилюминесценции в качестве объективного показателя фармакокоррекции пшероксических расстройств. Тезисы докладов 1-го Всесоюзного симпозиума «Фармакологическая коррекция кислородзависимых патологических состояний», Москва, 1984, с. 12-13.

46. А.З. Лиманцев, А.И. Машнин, И.Е. Дробинская, В.М. Гукасов, Е.Я. Каплан. Использование простых биологических моделей для отбора противопгаоксических средств. Тезисы докладов 1-го Всесоюзного симпозиума «Фармакологическая коррекция кислородзависимых патологических состояний», Москва, 1984, с. 23-24.

47. Е.Я. Каплан, В.М. Гукасов, И.А. Максимова, В.И. Смирягина, А.С. Кокоткина, И.И. Матвеева, М.Ю. Буслова. Фармакокоррекция гистотоксичсской гипоксии у животных, вызванной отравлением ионами свинца. Тезисы докладов 1-го Всесоюзного симпозиума «Фармакологическая коррекция кислородзависимых патологических состояний», Москва, 1984, с. 56-57.

48. В.М. Гукасов, Е.Я. Каплавн, И.А. Максимова, В.И. Смирягина, И.В. Жигачева. О некоторых молекулярных меха-низмах ишемических повреждений и возможностях их фармакокоррекции. Тезисы докладов 1-го Всесоюзного сим-позиума «Фармакологическая коррекция кислородзависимых патологических состоянии», Москва, 1984, с. 113-114.

49. Е.Я. Каплан, В.М. Гукасов, А.В. Лиманцев, А.И. Машнин. К вопросу о связи между антиокислительной и противогипоксическои активностью химических соединений. Тезисы докладов 1-го Всесоюзного симпозиума «Фармакологическая коррекция кислородзависимых патологических состояний», Москва, 1984, с. 17-18.

50. А.Я. Шарипкина, В.М. Гукасов. Зависимость адаптивной активности гумата натрия от интенсивности перекисного окисления липидов. Тезисы докладов 2-ой научно-практической конференции по комплексно-целевой программе «Здоровье», Днепропетровск, 1984, с. 265-266.

51. С.Н. Ефуни, ЕЛ. Каплан, А.И. Лукаш, В.М. Гукасов, СИ Дуткин, В.В. Внуков, Е.А. Демуров. Особенности хемилюминесценции системы, содержащей НО? в присутствии соединений железа. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1984, XCVuL 7, с. 42-45.

52. Г.О. Лурье, В.П. Осипов, ДГ. Руденко, МА. Юшков, Н.В. Фадеева, В.М. Гукасов, ГХ. Пятницкая. Клинический опыт искусственного кровообращения в условиях гипербарической оксигенащш. Анестезиология и реаниматология, 1985,2, с. 8-12.

53. Л.Д. Ашурова, В.М. Гукасов, А.И. Сушков, H.IL Васильева. Некоторые особенности динамики параметров перс-кисного окисления липидов У больных с нарушениями ритма сердца. Тезисы Ш симпозиума по гипербарической оксигенации «Гипербарическая окенгекация» (в хирургии и реаниматологии), Москва, 1985, с. 73-74.

54. В.М. Гукасов, Е.Я. Каплан, Л.Д. Ашурова, Е.А. Демуров, Е.В. Федорова, А.С. Кокоткина, И.А. Лукьянчикова, С Н. Ефуни. О формировании неспецифических реакций организма на молекулярном уровне при действии ГБО. Тезисы III симпозиума по гипербарической оксигенации «Гипербарическая оксигенация» (в хирургии и реаниматологии), Москва, 1985, с. 167-168.

55 К A. Форсунова, E A Каплан, В M. Гукасов, И E Mаксимова, В Б Сгшрнчев, Н С Блажеевич. Использование некоторых витаминов из группы антиоксидантов в качестве протекторов при токсическом действии кислорода на организм в условиях ^O Тезисы III симпозиума по гипербарической оксигенации «Гипербарическая оксигенадия» (в хирургии и реаниматологии), Mосква, 1985, с 175

56 E A Каплан, В M. Гукасов, И.К. Соколов, Б С Каплан, АВ Лиманцсв, В Ф Aникeeв, Л Н Шантапова. Принципы использования некоторых биофизических и цитохимических показателей в спортивной медицине для оценки функционального состояния организма. Республиканский сборник научных тезисов «Врачебный контроль физическим воспитанием и реабилитация спортсменов», Mосква, 1985, с 72-76

57 E A Каплан, В M. Гукасов, В К Вслитченко, Р E Mотылянская Тезисы докладов Всесоюзной научно-практической конференции «Проблемы восстановтения и повышения работоспособности спортсменов», Mосква, 1985, с 28-2$

58 ИВ Ступин, AИ Новокшонов, A.^ Mалашeнков, Г И Логинова,БН. Богонатов, ТВ Aртюхина, ВM Гукасов Противогипоксическос действие инозина при операциях на сердце в условиях длительного искусственного кровообращения и гипотермии. Вестник академии медицинских наук СССР, 1985,4, с 48-51

59 ВM Гукасов, EЯ Каплан. Некоторые особенности ингибирования пероксидации липидов при экстремальных воздействиях в изолированных органах и целостном организме Тезисы докладов II Всесоюзной конференции «Биоантиоксидант», Mосква, 1986, том 2, с 26-27

6G ВM Гукасов, EЯ Каплан. Использование некоторых параметров ингибирования перекисного окистения липидов по данным хемилюминограмм в качестве критерия оценки состояния здоровья Тезисы докладов II Всесоюзной конференции «Биоантиоксидант», Mосква, 1986, том 2, с 121-122

61 С Н Eфуни, В M. Гукасов, Л Д. Aшурова, E A. Демуров, EЛ. Каплан. Способ определения индивидуальной чувствительности к пшербарической оксигенации. Aвторскоe свидетельство, № 1294344,1986

62 В Н Сыров, В M Гукасов, M Б Султанов, E A Каплан. O6 антиоксидантных свойствах иеробола Доклады академии наук Уз ССР, 1986,1, с 48-5G

63 В Н. Сыров, 3 A. Хушбакгова, В M Гукасов, EЛ Каплан, M Б Сутганов Сравнительное изучение действия активных стероидов и эстрогенов на перекисного окисления липидов в матке крыс Доклады академии наук Уз ССР, 1986, 3, с 47-49

64 И Г Кузнецов M M Расулов, В M. Гукасов, С К. Суслова, E A Каплан, M.C Сорокина, M Г Воронков, Р И Половникова. Влияние метилэтил(силатран-1-илметил) сульфоний йодида на перекисного окисления липидов при экспериментальной язве желудка. Химико-фармацевтический журнал, 1986,9, с 1035-1037

65 ВM Гукасов, M M Расулов, С Н Eфуни, EЛ Каплан, В И. Смирягина, M^ Великая Oсобeнности противо-гипоксического действия пирацитама Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1987,6, с 683-685

66 ВM. Гукасов, EЛ Каплан, PJE Mотылянская, ГД Mинаeва, СП. Никотаева. Испотьзование параметров кинетики перекисного окисления липидов для оценки функционального состояния организма Теория и практика физической культуры, 1987,5, с 44-46

67 И Г Кузнецов, С К. Суслова, M M, Расулов, В M Гукасов, E A Каплан. Влияние метилурацила на перекисного окисления липидов в плазме крови и гомогенатах тканей язвенного дефектов стенки желудка крыс Вопросы медицинской химии, 1987, т 33,3, с 77-80

6 8 AИ Новокшонов, В M. Гукасов, M П. Шеретнев, EЯ Каплан, И.В Ступнин, СН Eфуни. Хсмилюминесценция сыворотки крови в присутствии двухвалентного железа при длительном искусственном кровообращения. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1987,7, с 104-106

69 В Н. Сыров, 3 A Хушбакгова, В M Гукасов, Э X Батыров, E A Каплан. Aнтиоксидантная активность некоторых растительных фенольных соединений, Химико-фармацевтический журнал, 1987, том XXI, 1, с 5962

7G S N Efum, L D Ashurova, Ye Ya. Kaplan, V M. Cukasov, E A. Demurov, A.S Kokotkina The use of kmetik indices of peroxidahon in plasma to evaluate oxygen effects in humans Proceedings of the VIII international Congress of Hyperbanc Mcdicme, USA, Long Beach California, 1987, p 8-12

71 В Д Головкин, ВM Гукасов Перекисное окисление липидов как критерий пшоксических и ишемических повреждений в миокарде Тезисы докладов I Всесоюзная конференция «Фармакологическая коррекция пшоксических состояний», Mосква, 1988, с 34

72 В M Гукасов, В В Гацура Влияние малоата и сукцината на кинетику дсоксигенации крови Тезисы докладов I Всесоюзная конференция «Фармакологическая коррекция пшоксических состояний», Mосква, 1988, с 37

73 В Д Головкин, В M Гукасов Влияние некоторых антиангинальных средств на перекисное окисление липидов при острой ишемии миокарда. Тезисы докладов I Всесоюзная конференция «Фармакологическая коррекция гипоксических состояний»,Mосква, 1988, с 34

74 M Л.Хачатурьян, П Г Комаров, В M Гукасов, M В Биленко Изучение показателей перекисного окисления липидов в сердце и печени крыс высоко- и низкоустойчивых к острой гипоксии. Тезисы докладов 1 Всесоюзная конференция «Фармакологическая коррекция гипоксических состояний», Mосква, 1988, с 136-137

75 В M. Гукасов, A^ Mатюшин, E A Бучнева Регутяция гормонами процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантная терапия при ишемической болезни сердца. Горький, 1988, с 74-79

76 В Д Готовит, В M Гукасов, В В Гацура Действие обзидана и изоптина на показатети перекисного свободно-радикального окисления липидов ишемизированного миокарда. Фармакология и токсикопогия, 1988, 2,с 56-58

77 В Д Головкин, В M. Гукасов, В В Гацура. Втияние курантила и нитроглицерина на процесс перекисного окисления липидов в условиях ишемии миокарда. Фармация, 1988,5, с 54-56

78 V V Gatsura, Р V Sergeev, A.G Berykh, S A. ChukaeyA V M. Gukasov The role of hart free radical oxidation system m integral reaction of organism to hypoxia J Mol Cell Cardiology, 1988,20, Suppl 5, p 71

79 И Г Кузнецов, M.M Расулов, ВM, Гукасов, С К. Суслова, EA Каплан, MГ Воронков Влияние изопропоксигематрана на перекисное окисление липидов на экспериментальной язве желудка крыс Изв Сиб Oto-ния ATCCCT, серия биол науки, 1988, 2G, №3, с 1G5-11G

80 L D Aschnrova, V M. Gukasov, J A. Demurov, S N Zcfura Die Best immuny der individuellen sensibilitit des orgaiusmus bei hyperbarer oxygenaQon, Z Gesamte mn.Med, Zahrg, 1988,43, Helt 14, p 38G-383

81 E Ya Kaplan, V M. Gukasov, IK Sokolov, В S Kaplan, A V Limansev, V F Amkecv, L N Shantanova The use of

some biophysical and cytochemical indices in sports medicine for assessing the functional state of the body. Sport Training Med. And Rehab., 1988, Vol. 1, p. 21-23 (Harwood Academic Publishers Gmbh Printed in the USA).

82. B.M. Гукасов, Л.Н. Серов. Методика определения дегидрирующей активности для поиска энергообеспечивающих противоишемических средств. «Всесоюзная научная конференция. Оценка фармакологической активности химических соединений: принципы и подходы, Москва, 1989, часть 1, с. 92.

83. В.М Гукасов, Л.Н. Серов, В.В. Гацура. Хемнлюминесценцентный метод исследования перекисного окисления липидов в кардиофармаколопш. «Всесоюзная научная конференция. Оценка фармакологической активности химических соединений: принципы и подходы, Москва, 198$, часть 1, с. 93.

84. B.C. Мезенцева, В.М. Гукасов. К методике оценки влияния фармакологических веществ на деоксигенацию эритроцитов. «Всесоюзная научная конференция. Оценка фармакологической активности химических соединений: принципы и подходы,Москва, 1989, часть 2, с. 204.

85. Л.Н. Сернов, В.М. Гукасов, Ю.Б. Розонов, В.В. Гацура, В.П Булгаков, Ю.Н. Журавлев. Кардиопротекторное действие кирказона маньчжурского и возможности биотехиологического получения его активных фракций. «Всесоюзная научная конференция. Оценка фармакологической активности химических соединений: принципы и подходы, Москва, 1989, часть 3, с. 293.

86. СА Чукасв, АХ. Белых, В.М. Гукасов. Прогнозирование устойчивости организма к острой кислородной недостаточности при изыскании антигипоксических средств. «Всесоюзная научная конференция. Оценка фармакологической активности химических соединений: принципы и подходы, Москва, 1989, часть 3, с. 354.

87. Е.Я. Каплан, В.М. Гукасов. О зависимости между адаптогенным и антиоксидантным действием. Ш Всесоюзная конференция «Биоантиоксиданты», Москва, 1989, том II, с. 28-29.

88. Ф.П. Крендаль, В.М. Гукасов, Л.О. Аккуратова, ЯВ. Левина Об изучении корреляции между антиокисдительным и адаптогенным действием препаратов жень-шеня и радиолы розовой. III Всесоюзная конференция «Биоантиоксиданты», Москва, 1989, том II, с. 37-38.

89. А.Н. Кудрин, В.М. Гукасов, Е.В. Крюковская, Л.Р. Галушкина, Е.А. Демуров, Ю.Б. Колосков. О прямой связи антиокислительного и адаптогенного действия комплексных препаратов аралии манчжурской и элеутерококка. III Всесоюзная конференция «Биоантноксиданты», Москва, 1989, том II, с. 38-39.

90. В.М. Гукасов, ЕЯ. Каплан, ME. Власова. Особенности механизма антиоксидантного действия природных и синтетических веществ. Ш Всесоюзная конференция «Биоантиоксиданты», Москва, 1989, том II, с. 182-183.

91. Е.В. Крапивина, А.П. Погромов, В.М. Гукасов, Л.Д. Ашурова. Функциональные нагрузочные пробы (пшероксическая, гипоксическая, физические нагрузки) в оценке перекисного окисления липидов у больных язвенной болезнью. Тезисы IV симпозиума «Гипербарическая оксигенация» (новое в практике и теории ГБО), 1989, с. 97, издание АМН СССР.

92. Л.Д. Ашурова, В.М. Гукасов, Ф.П. Крендаль.' К оценке соотношения между антигипоксическим и антиокислитель-ным действием препаратов радиолы розовой. Тезисы докладов Всесоюзной конференции «Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока», Томск, ТНЦ СО АМН СССР, 1989, выпуск 2, с. 94.

93. A.N. Kudrin, E.V. Krukovskaya, L.R. Galushkma, V.M. Gukasoy. Correlation of the antioxidant and adaptational effect of the preparations of azalia and eleutherococcus. International conference on «Regulation of free radical reaction» (biomedical aspects), 1989, Bulgaria, Varna, p. 94.

94. A.P. Pogromoy, V.M. Gukasov, E.V. Kraprvina. The types of the reaction of lipid peroxidation in patients with duodenal ulcer in conditions of functional tests. International conference on «Regulation of free radical reaction» (biomedical aspects), 1989, Bulgaria, Varna, p. 134.

95. V.V. Gatsura, P.V. Sergeev, A.G. Bcrykh, S.A. Chukaev, V.M. Gukasov. The use of parametrs of plasma lipid peroxidation for the prediction of the organism resistance to hypoxia at the scrinning of annhypoxants. International conference on «Regulation of free radical reaction» (biomedical aspects), 1989, Bulgaria, Varna, p. 48.

96. A.B. Мещеряков, Т.Н. Рузайкина, И.Е Пиляева, И.А. Кохтав, Е.А. Демуров, В.М. ГЛкасов. Перекисное окисление липидов при операциях на открытом сердце, Анестезиология и реаниматология, 1990, 1, с. 19-22.

97. И.И. Дементьева, Е.А. Демуров, В.М. Гукасов, И.Е. Максимова, Т.С. Фокина, Г.В. Бадалян, Е.А. Кукаева. Роль гипероксии в изменении перекисного окисления липидов и тканевого метаболизма у больных, оперированных в условиях искусственного кровообращения. Анестезиология и реаниматология, 1990,6, с. 41-45.

98. B.C. Яснецов, А.В. Евсеев, В.М. Гукасов, А.И. Матюшин, Сравнительная антиокислительная активность фенибута, фентоламина и попола. Фармакология и токсикология, 1990, т. 53, №5, с. 45-47.

99. А.И. Матюшин, И.В. Левандовский, В.М. Гукасов, ДМ. Зелснов. К вопросу о механизме действия массивных доз преднизолона. Сборник «Моделирование, патогенез и терапия пшоксических состояний», Горький, 1990, с.

100. В.М. Гукасов, ЕВ. Крюковская, Л.Р. Галушкина, А.Н. Кудрин, Е.Я. Каплан, Ф.П. Крендаль, Л.В. Левина. Способ определения активности фитоадаптогенов. Авторское свидетельство, №1712870,1991.

101. В.М. Гукасов, А.Ф. Сидоренко, ВВ. Гацура. Влияние комплекса витаминов с высоким редокс-потенциалом на перекисное окисление липидов. Вопросы хемилюминесценции, 1991, т.2, №1, с. 1-4.

102. М.Л. Хачатурян, В.М. Гукасов, ИГ. Комаров, MB. Биленко. Использование методов оценки перекисного окисления липидов для прогнозирования устойчивости организма к стрессу. Вопросы хемилюминесценции, 1991, т.2, №2, с. 1-8.

103. П.В. Сергеев, А.Г. Белых, С А. Чукаев, В.М. Гукасов, ЕЯ Каплан, ME Власова, Т.В. Рясина. Влияние экстремальных воздействий и антиоксиданта а-токоферола на интенсивность хемилюминесценции плазмы крови. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1991, т. СХП, № 12, с. 575-577.

104. В.В. Гацура, В.М Гукасов, B.C. Мезенцева, Ю.Б. Розонов Л.Н. Сернов, О.П. Соколова. Методы углубленного фармакологического изучения антигипоксантов. Итоги науки и техники. Фармакология. Хкмиотерпевтические средства. 1991, т. 27, с. 100-119.

105. П.В. Сергеев, Г.В. Снегирева, В.М. Гукасов, В.В. Гацура. Соотношение антиоксидантного и противоишемического эффектов некоторых энергообеспечивающих средств. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1991, т. СХП, № 10, с. 381-382.

106. A.G. Belykh, V.V. Gatsura, V.M Gukasov, S.A. Chukaev. Effects of ischemia and hypoxia on the free-radical oxidation of tissue lipids and approaches the correction of impaired homeostasis in prooxidant and antioxidant systems ofthe body. Constituent Congress International Society for pathophysiology, Moscow, May 28-June 1, 1991, p. 332.

107. С.А Чукаев, А Г. Белых, В М. Гукасов Перекисное окисление липидов тканей экспериментальных животных при действии нормобарической гипоксии. Республиканский сборник научных трудов 2ой Московский Государственный Медицинский институт им. Н И. Пирогова, Москва, 1991, с. 125-128

108 В.М. Гукасов, ЛД Ашурова, С.А. Чукаев, ТВ. Сухова, Е.Д Демуров, CR Ефуни. Способ оценки индивидуальной чувствительности организма х физическим нагрузкам. Авторское свидетельство, №1803871, 1992.

109. С Н Ефуни, А А. Антоньев, Номоносва ТН, ВМ. Гукасов, Е.А. Демуров, ЕЯ Каплан, Л Д Ашурова Способ определения индивидуальной чувствительности к гипербарической оксигенации у больных с кожными заболеваниями. Авторское свидетельство, №1708308,1992.

ПО. Б.М Винер, ВМ. Гукасов, ФИ Крендаль, Л В Левина. Исследования антиоксидантной активности некоторых фитоадалтогенов. Вопросы хемилюминесценции, 1992, т.З, № 1, с. 1-4

111. П.В Сергеев, А Г. Белых, С.А Чукаев, В.М. Гуьасов. Влияние антиоксидантов на быструю вспышку Fe2+-индуцированной хемилюминесценции. Экспериментальная и клиническая фармакология, 1992, т. 55, №2, с. 6062.

112. А Г. Белых, В М. Гукасов, С.А Чукаев. Состояние системы свободнорадикального окисления при действии нормобарической гипоксии Физиологический журнал, 1992, т. 38, № 5, с. 73-76.

113. А В. Самойлов, Р.Д Сейфулла, Н О. Камаев, Т.Н. Лукьянова, В М. Гукасов, М В. Белоус. Радиозащитные и антиоксидантные свойства солюбилизированного 2-а-токоферол-ацетата. Экспериментальная и клиническая фармакология, 1992, т. 55, №4, с. 42-44.

114. СВ. Гуцура, ВМ Гукасов. Влияние антагонистов кальция на процессы деоксигенации крови. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1992,114, № 10, с. 380-381.

115. А П Погромов, ВМ. Гукасов, Е.В. Крапивина. Кинетика индуцированной хемилюминесценции у больных язвенной болезнью желудка, двенадцати-перстной кишки, хроническим гастритом и у доноров. Сборник трудов ММА им. ИМ. Сеченова «Свободноадикальные процессы и перекисное окисление липидов при заболеваниях внутренних органов». Москва, 1993, с. 78-85.

116 A. G. Belykh, V.M. Gukasov, S A Chukaev. Effect of adap station to intermittent normobaric hypoxia on pro- and antioxidant systems of the body. The Ш Word Congress of the International Society for Adaptive Medicine, Tokyo, Japan, April, 26-28,1993, p. 61.

117 SA. Chukaev, P.V. Sergccv, V.M. Gukasov, A. G. Beljkh, YuA. Shovkoplyas, VS. Marenkov. New chemiluminesccnt method of prediction of the organism resistance to physical training. International Conference on Clinical chcrralummesce, Berlin, April 25-28,1994, p 61

118 С.А Чукаев, В М. Гукасов, А.Г. Белых Новый , метод прогнозирования устойчивости организма к физическим нагрузкам. Материалы VII Всероссийского симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации», 26-28 апреля, Москва, 1994, с. 313.

119 Л Д Ашурова, В К Велитченко, ВМ. Гукасов, Е.А. Демуров, С.Н. Ефуни, Т.В. Сухова, С А. Чукаев Функциональные нагрузочные пробы (гипероксическая и физическая) в оценке индивидуальной чувствительности организма к физическим нагрузкам Гипербарическая физиология и медицина, 1994, № 1-2, с. 8-12.

120. M.VBilcnko, ML. Khachaturyan, V.M. Gukasov. Norepmephnne-induced injury and hpid peroxidatiomn myocardium of rats high and low resistant to hvpoxia. G Mol Celt Cardiol, 1994, v. 26, №6, Ab stracts of the XV European Section Melting of the International Society for Hart Research (Copenhagen, Denmark, 8-11 June, 1994), p

121. M Л Хачатурьян, В М. Гукасов, М В. Биленко, Н А Агаджаняя Катехоламиновые повреждения миокарда у крыс с различной устойчивостью к гипоксии. Тезисы докладов 2го Российскийского национального конгресса «Человек и лекарство», 10-15 апреля, 1995, Москва, -М: РЦ «Фармединфо», 1995, с. 227.

122 МЛ Хачатурьян, В.М Гукасов, MB. Биленко, НА. Агаджанян Стрессирующий эффект тестирования на устойчивость к гипоксии и изучение перскисного окисления липидов для се оценки. Тезисы докладов 2го Российскийского национального конгресса «Человек и лекарство», 10-15 апреля, 1995, Москва, -М: РЦ «Фармединфо», 1995, с. 227-228.

123. МЛ. Хачатурян, ВМ Гукасов, ПГ. Комаров, Л Б. Пирогова, MB. Биленко Влияние сезона года на показатели перекисного окисления липидов миокарда животных с различной устойчивостью к гипоксии Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, № 7,1995, с 87-90

124 МЛ Хачатурян, В М. Гукасов, ПГ. Комаров, Л Б Пирогова, MB. Биленко. Показатели перекисного окисления липидов органов крыс с различной устойчивостью к гипоксии. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.т 121, №1,1996, с. 26-29

125 МЛ. Хачатурян, В.М. Гукасов, ПГ. Комаров, Л Б Пирогова, MB. Биленко Сравнительная оценка показателен перскисного окисления липидов сердца, печени и мозга крыс с различной устойчивостью к гипоксии Бюллетень экспериментальной биологии и медицины,т.121,Л'ь 2,1996, с. 138-143

126. М L. Khachaturyan, V М. Gukasov. Stress effect of test on hypoxia resistance and study of myocardium lipid peroxidation for its estimation Book of Abstracts of 23 International Congress of Internal Medicine (Manila, Philippines, 1-6 February, 1996), p. 161.

127. M L. Khachaturyan, V.M. Gukasov, M.V. Bilenko Catecholamine-induced myocardium injury in rats high and low resistant to acute hypoxia. Book of Abstracts of 23 International Congress of Internal Medicine (Manila, Philippines, 16 February, 1996), p 102.

128 ВМ. Гукасов. Контроль кислородного статуса организма. Гипербарическая физиология и медицина, 1996, №4, с. 74-75. 2

129 А П. Погромов, А А Белов, О А. Цветкова, ВМ. Гукасов. Кинетика Fe2* - индуцированной хемилюминесценции плазмы при атопической бронхиальной астме и других проявлений атопии Пульмонология, 1998, № 4, с. 62-66.

130. Н В. Кирпичнихова, А.В. Камерницкий, Г. С. Гриненко, ЕН Карева, ВМ Гукасов, И С. Левина, СН Петровская, Е.Ю. Иванова. Антигестагены и перекисное окисление липидов Всероссийская конференция с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии», 1999,2-5 июня, Санкт-Петербург, с..

131. В К. Альпидовский, Ю П. Кохтов, В С. Маренков, В М. Гукасов, В Ссрра. Новая экспертная система для

экологической медицины. 1999, М, Практическая медицина на рубеже веков, с. 115-117.

132. В.Т. Новиков, В.М. Гукасов, С.А. Гараоков, В.Н. Комаров, В.Н. Покровский. Новейшие медицинские технологии оборонно-промышленного комплекса по обеспечению лечебных учреждений России медицинской техникой и оборудованием. Тезисы докладов 5 Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы защиты и безопасности)), Санкт-Петербург, 2002, с. 320-321.

133. В.М. Гукасов,В.Т. Новиков, СА. Гараоков, В.Н. Комаров, П.Н. Лускинович, А.А. Мак, Л.К Соме, Н.Б. Леонидов, В.В. Гацура, Ю.П. Козлов, B.C. Маренков. Научно-технический потенциал двойных технологий ОПК для разработки высоких медицинских технологий. Материалы конференции 4-ый Международный форум Высокие технологии XXI «BTXXI-2003», Москва, с. 201-201.

Благодарности

Я благодарен академику РАН, проф., д.м.н. Льву Арамовичу Пирузяну и проф., д.м.н. (Елизару Яковлевичу Каштану) за предоставленную возможность работать по данной тематике в НИИ по БИХС; академику РАМН, проф., д.м.н. Павлу Васильевичу Сергееву за предоставленную возможность проведения совместных работ с сотрудниками и аспирантами кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии РГМУ; проф., д.б.н. Юрию Павловичу Козлову за предоставленную возможность сотрудничать по данному направлению с аспирантами и сотрудниками кафедры системной экологии экологического факультета РУДН; проф., д.м.н. Виктору Тимофеевичу Новикову за предоставленную возможность выполнять данное исследование в ГУЛ «ОНПК «Здоровье»; академику РАМН, проф., д.б.н. Юрию Андреевичу Владимирову за предоставленную возможность проведения совместных работ с сотрудниками кафедры биофизики РГМУ, а также многочисленным коллегам кем посчастливилось проводить эту работу: В.В. Гацуре, Л.Н. Сернову, А.П. Погромову, С.Н. Ефуни, М.В. Биленко, А.И. Новокшонову, Е.А. Демурову, B.C. Маренкову, М П. Шерстневу, Б.С. Каплан, АА. Белову, И.Н. Шварц, В.И. Матюшину, В.К. Федорову, И.А. Максимовой, В.И. Смирягиной, Д.В. Кулаеву, И.Е. Дробинской, Р.И. Казарову, А.В. Лиманцеву, М.Е. Власовой, И.В. Жигачевой, Л.Д Ашуровой, [Р.Е. Мотылянской], М.М. Расулову, В.Н. Сырову, В.Д. Головкину, Н.В Гукасовой, М.Л. Хачатурьян, С.А. Чукаеву, А.Г. Белых, Ф.П. Крендалю, Е.В. Крапивиной, Е.Н. Каревой, В. Серра, В.А. Фрадкину, Р.В. Корнеевой, ИД Харламовой, Ю.В. Шафоростовой, А.Н. Широбокову и др.

Гукасов Вадим Михайлович (Россия) Разработка и использование высоких медико-биологических технологий в эндоэкологии

В работе представлены разработки в области высоких медицинских технологий в эндоэколгии и их применение. Были изучены свободно-радикальные реакции и влияние антиоксидантов на их образование в простых и сложных биологических системах, тканях животных и человека.

Gukasov Vadim M. (Russia) The development and application of higher medico-biological technologies in endoecology

In this study the development and application of higher medico-biological technologies in endoecology are considered. The free radical reactions and antioxidants-controlled of their formation in the simple and complex of the biological systems, the tissues of animals and of men were studied.

Принято к исполнению 15/01/2004 Исполнено 16/01/2004

Заказ № 14 Тираж: 150 экз.

ООО «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 Москва, Балаклавский пр-т, 20-2-93 (095)318-40-68 www.autoreferat.ru

й"2469 РНБ Русский фонд

2004-4 27918

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Гукасов, Вадим Михайлович

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Новые медико-экологические технологии для оценки 9 эндоэкологического состояния организма

1.2 Свободные радикалы и их роль в патологии

1.2.1. Свободные радикалы и механизмы оксидативного повреждения легких

1.2.2. Свободные радикалы и их роль в патогенезе язвенной болезни 31 желудка (ЯБЖ) и 12-перстной кишки (ЯБДК)

1.2.3. Свободные радикалы и их роль в процессе онкогенеза

1.2.4. Свободные радикалы и их роль в развитии гипоксии

1.2.5 Роль свободнорадикального окисления в развитии гестозов у женщин

1.3 Основные механизмы действия антиоксидантов

Глава 2. Материалы и методы исследований

2.1 Экспериментальные материалы и клинические исследования

2.2 Методы исследования

2.3 Статистическая обработка результатов исследований

Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение 58 3.1 Разработка и применение высоких медико-биологических технологий по измерению уровня СРО/АОЗ в организме человека и животных в клинике и эксперименте

3.1.1. Базовые элементы для разработки медицинских технологий на основе показателей СРО/АОЗ в биологических системах

3.1.1.1 Обоснование информационной ценности показателей микрометода анализа системы СРО/АОЗ плазмы крови

3.1.1.2 Установление фазовых изменений показателей системы СРО/АОЗ в организме

3.1.2. Оценка адекватности реакции организма при действии на него экстремальных факторов по данным динамики системы СРО/АОЗ плазмы крови

3.1.3. Использование показателей системы СРО/АОЗ плазмы крови для установления уровней адаптации организм и резервных возможностей

3.1.4. Использование показателей системы СРО/АОЗ для оценки 81 чувствительности организма к экстремальным факторам

3.1.5. Связь показателей системы СРО/АОЗ с физиологическими особенностями организма

3.1.6. Использование показателей СРО/АОЗ для диагностики заболеваний

3.1.6.1. Использование показателей СРО/АОЗ для диагностики гемобластозов

3.1.6.2. Использование показателей СРО/АОЗ для диагностики гестозов 92 3.1.7 Разработка аппаратно-программного обеспечения для анализа СРО/АОЗ.

3.2 Программно-аппаратное обеспечение анализа СРО/АОЗ как эффективного способа коррекции эндоэкологического состояния организма

3.3 Измерение дыхательного коэффициента утилизации кислорода как метода выявление скрытой формы гипоксии в организме 107 3.3.1 Измерение дыхательного коэффициента утилизации кислорода для выявление скрытой формы гипоксии и ее коррекции в организме больных в клинике

3.3.1 Измерение дыхательного коэффициента утилизации кислорода для выявление скрытой формы гипоксии и ее коррекции в экспериментах на собаках 112 3.3.3 Изучение корреляционных связей показателя ДКУК с потреблением кислорода организмом, показателями СРО/АОЗ, центральной гемодинамики и показателями кислотно-щелочного равновесия в организме собак при длительном ИК 117 3.3.4- Разработка алгоритмов оценки функционального состояния организма по показателям центральной гемодинамики

3.4 Оценка уровня реакций СРО/АОЗ в микроколичествах плазмы крови для выявления донозслсгического состояния условно здорового контингента лиц и группы риска с разной этиологией 123 3.4.1. Изменение показателей СРО/АОЗ плазмы крови у больных с заболеваниями ЖКТ

3.4.2 Изменение показателей системы СРО/АОЗ плазмы крови у больных с

ИБС во время проведения операций на открытом сердце

3.4.3 Изменение показателей системы СРО/АОЗ плазмы крови у больных с заболеваниями легких

3.4.4 Изменение показателей системы СРО/АОЗ плазмы у условно здоровых доноров в состоянии предпатологии

3.5 Измерение адаптогенной и антиаллергической активности биологически важных соединений по уровню СРО, трансмембранному потенциалу и Н^АТФ-азной активности компонентов клеток органов и липидных модельных систем

3.5.1 Изучение адаптогенной активности биологически важных соединений на простых биологических моделях

3.5.2 Изучение аллергенной активности препаратов на модели липосом

3.5.3 Изучение параметров токсикометрии химических соединений на модели липосом

3.5.4 Изучение синергитического эффекта на модели липосом

3.5.5 Изучение антигестагенной активности биологически активных соединений

3.5.6 Изучение активности антихолинэстеразных средств на модели синаптосом

3.5.7 Изучение антиокислительной активности природных и химических соединений в различных простых биологических системах (суспензии митохондрий, липосомы)

3.5.7.1 Скрининг АОА природных соединений на модели суспензии митохондрий

3.5.7.2 Скрининг АОА природных соединений на модели липосом

3.5.7.3 Скрининг АОА синтезированных и природных соединений на модели липосом и связь АОА с другими видами биологической активности

3.6 Исследование антигипоксической активности биологически активных веществ по уровню СРО, электронакцепторной активности и скорости деоксигенации эритроцитов крови

3.6.1 Исследование действия антигипоксических средств на процессы деоксигенации крови

3.6.2 Исследование электронакцепторной активности (ЭА) антигипоксических средств

3.6.3 Исследование влияния антигипоксических средств на перекисное окисление липидов при ишемии миокарда 176 3.7 Разработка и исследование метода БХЛ плазмы крови и гомогенатов тканей организма для экспресс-анализа состояния организма в норме и патологии

3.7.1 Разработка микрометода БХЛ в плазме крови и других биологических жидкостях

3.7.2 Использование микрометода ИБХЛ в биологии и медицине

3.7.2.1 Использование микрометода ИБХЛ в токсикологии

3.7.2.2 Использование микрометода ИБХЛ для оценки воздействия на организм различных типов гипоксии

3.7.2.3 Использование микрометода ИБХЛ для оценки устойчивости организма к стрессу

3.7.2.4 Влияние сезона года на показатели ПОЛ миокарда животных с различной устойчивостью к гипоксии

3.7.2.5 Влияние изопропоксигерматрана на ИБХЛ плазмы крови и гомогенатах тканей желудка при экспериментальной язве желудка у крыс 204 Заключение 206 Осно вные выводы 213 Список литературы 214 Приложение 1 240 Приложение 2 253 Список сокращений

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка и использование высоких медико-биологических технологий в эндоэкологии"

Одной из наиболее актуальных проблем современной эндоэкологии является изучение свободнорадикальных процессов. Активная деятельность человека на земле, связанная с загрязнением окружающей природной среды, существенно отразилась на состоянии биосферы и «индикатором» подобных изменений на клеточном уровне могут служить свободные радикалы - атомы или осколки молекул неорганической или органической природы, обладающие огромной реакционной способностью и влияющие на протекание обменных процессов, как в живых клетках организма, так и в биосфере, в целом (Козлов Ю.П., 2000). Уровень протекания реакций свободнорадикального окисления (СРО) является «индикатором» нормальных и патологических процессов в организме. В связи с этим большое значение приобретают исследования реакций СРО как в нормальных клетках организма, так и при развитии патологических процессов разной этиологии (Эмануэль Н.М., 1961-1982; Тарусов Б.Н., 1961-1965; Журавлев А.И., 1961-1965; Козлов Ю.П., 1965-1983; Владимиров Ю.А, 1965-2000).

Целый ряд жизненно важных процессов в организме (дыхание, фосфорилирование, детоксикация чужеродных субстратов, окисление биологически важных соединений) протекает с участием свободных радикалов. При патологических процессах разной этиологии уровень протекания реакций СРО достаточно высок и значительно превышает таковой в случае клеток и тканей «условно здорового» организма. Свободные радикалы «фигурируют» при целом наборе болезней - от гипертонии, рака, лучевой болезни до болезни Паркинсона. Согласно исследованиям Р. Катлера (1989) существуют косвенные доказательства того, что свободные радикалы ускоряют процесс старения. Известно, что у долгожителей обнаруживается больше ферментов «поглощающих» свободные радикалы (например, супероксиддисмутазы) (Fridovich J., 1978). Отсюда чрезвычайно важное значение приобретает познание механизмов защиты организма от реакций СРО с участием ферментов и антиокислителей (антиоксидантной защита — АОЗ).

Среди методов оценки реакций СРО в биосистемах особое место занимают биохемилюминесцентные методы, обладающие большой чувствительностью и позволяющие изучать кинетику СРО субстратов в целых и модельных системах. Переход к исследованию кинетики биохемилюминесценции (БХЛ), в частности, в плазме крови, создание современных высокочувствительных и надежно работающих хемилюминометров открывает широкие возможности многократного и динамического исследования пациентов без ущерба для их здоровья. Для оценки уровней неспецифической резистентности организма на основе измерения параметров СРО в биологических объектах разных систем сложности, используют современные высокие технологии, и, в первую очередь, аппаратно-программные комплексы с целью получения объективной информации о состоянии организма и его изменениях при развитии предпатологических и патологических процессов разной этиологии (Тарусов Б.Н., Журавлев А.Н., 1961; Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., 1989; Журавлев А.Н., 2003; Гукасов В.М. и др., 2003).

Данная работа представляет новое звено в цепи многолетних исследований сотрудников Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных химических соединений и Государственного унитарного предприятия «Отраслевой научно-практический комплекс «Здоровье» - рабочего органа Межведомственного координационного совета по медицинской технике и высоким медицинским технологиям.

Целью данной работы ■ явилась разработка - и применение высоких медико-биологических технологий, основанных на аппаратурно-программном обеспечении анализа универсальных неспецифических ответных реакций организма по измерению баланса свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты (отношение СРО/АОЗ) и его коррекции в эндоэкологии.

В задачи исследования входило:

1. Разработать и внедрить технологию аппаратурно-программного обеспечения оценки и прогнозирования действия антропогенных факторов разной природы на эндоэкологическое состояние организма человека и животных по изучению динамики изменения уровня СРО/АОЗ в клинике и эксперименте.

2. Разработать технологию мониторинга коррекции эндоэкологического состояния организма и выявления групп риска по оценке динамики изменения уровня СРО/АОЗ.

3. Разработать технологию для прогнозирования биологической активности ряда природных и синтезированных фармакологических препаратов по изучению их про- и антиоксидантного действия в сочетании с их электронноакцепторной активностью, а также влиянием на показатели скорости деоксигенации эритроцитов крови, Н^АТФ-азную активность и трансмембранный потенциал субмитохондриальных частиц (СМЧ).

4. Разработать технологию оценки путей утилизации кислорода в биологических системах организма с целью диагностики скрытых форм его гипоксического состояния при длительном искусственном кровообращении.

5. Разработать и внедрить экспресс-микрометод индуцированной биохемилюминесценции (ИБХЛ) для анализа уровня СРО/АОЗ в плазме крови здоровых доноров и больных с разной этиологией заболевания.

Научная новизна и научно-теоретическое значение.

Впервые разработаны и использованы в эксперименте и клинике принципы универсальности фазового изменения показателей уровня СРО/АОЗ. С помощью функциональных проб выявлены адекватные реакции организма и прогнозирование их развития, позволяющих определить предпатологию (патологию) организма и предложить для коррекции фармакологические средства, обладающие защитным антиоксидативным действием. Разработка и применение программно-аппаратурного обеспечения и алгоритмов оценки функционального состояния организма по уровню СРО/АОЗ позволило оценить его резервные возможности и выраженность действия на него экстремальных факторов. Впервые разработана технология оценки оксидазного (ферментативного) пути утилизации кислорода и связанного с ним аккумуляции АТФ в организме для изучения скрытых форм изменения эндоэкологического состояния организма человека и животных в условиях действия на него экстремальных факторов. В клинических условиях (хронический гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда, нейроциркуляторная дистония, бронхиальная астма, гематологические и кожные заболевания), а также при действии на организм, человека и животных экстремальных факторов (интоксикация ионами тяжелых металлов, четыреххлористым углеродом и табачным дымом, гипероксия, гипоксия, интенсивные физические нагрузки, экспериментальный инфаркт миокарда, экспериментальная язва желудка, циркуляторная и тепловая ишемия сердца и почек) впервые апробирован экспресс-микрометод ИБХЛ для анализа уровня СРО/АОЗ в плазме крови. Впервые проведена оценка действия природных и синтетических соединений на показатели уровня СРО/АОЗ в простых модельных и сложных биологических системах (липосомы, синаптосомы, митохондрии, гомогенаты тканей), позволяющая выявить их биологическую активность (адаптогенную, аллергенную, противоишемическую, антихолинэстеразную, гестагенную и антигестагенную, рецепторосвязывающую, синергетическую, параметры токсикометрии).

Практическое значение.

С помощью разработанного аппаратно-программного комплекса показана возможность использования технологии определения и регистрации интегральных показателей динамики индуцированного СРО плазмы крови для выявления донозологических состояний у практически здоровых людей и выявления групп риска у больных бронхиальной астмой, хроническими гастродуоденальнными заболеваниями, в процессе проведения хирургических операций, эффективности лечения больных ишемической болезнью сердца и нейроциркуляторной дистонией, при скрытой форме гипоксии и оценки эффективности длительного искусственного кровообращения у человека и животных, оценки чувствительности организма к катехоламиновому стрессу и к фактору сезонности, к гипо- и гипероксии, интенсивным физическим нагрузкам.

Динамическое наблюдение за; параметрами индуцированного СРО методом БХЛ в сыворотки крови послужило ранним диагностическим тестом при развитии тяжелой ишемии и некротических изменений миокарда. Разработанная технология оценки показателя дыхательного коэффициента утилизации кислорода (ДКУК) в организме может быть успешно использована в клинике и эксперименте для диагностики скрытой гипоксии и выявления адекватности искусственного кровообращения. Разработанная комплексная технология, включающая разработку и модификацию методов, а также аппаратурного обеспечения для оценки нарушения процессов СРО/АОЗ, леоксигенации эритроцитов, электроноакцепторной активности, флуоресцентного выявления свободных жирных кислот при экстремальных воздействиях на организм; избытке катехоламинов при стрессе; избытке восстановленных пиридиннуклеотидов; инактивации антиокислительных компонентов при агрессии и авитаминозе Е; накоплении свободных жирных кислот при гипоксии; накоплении металлосодержащих комплексов (интоксикация ионами ртути и свинца, накопление соединений геминового и негеминового железа), позволяет проводить раннее и комплексное выявление эндоэкологических факторов, переключающих оксидазный путь утилизации кислорода, связанный с ресинтезом АТФ и накоплением энергии в организме на оксигеназный, связанный с образованием высокотоксичных продуктов СРО. Разработка технологий прогнозирования чувствительности организма к эндоэкологическим факторам в условиях проведения функциональных проб по оценке динамики изменения показателей СРО/АОЗ в мпкроколичествах плазмы крови позволяет ускорить и предопределить проведение профилактических и специальных осмотров контингентов лиц к определенным видам нагрузок и профессиональной деятельности, разработать схемы тренировочного процесса ускорения подготовки высокопрофессиональных специалистов с большими резервными возможностями организма в определенных областях деятельности (спорт, космонавтика и т.д.). Возможность проведения; индивидуального мониторинга коррекции эндоэкологического состояния организма с помощью разработанной технологам, включающей микро-экспресс методы оценки показателей СРО/АОЗ в плазме крови организма человека и животных с использованием аппаратно-программного комплекса PXL-01 и программного пакета Montes Status позволяет оптимизировать процесс коррекции организма до формирования адекватной реакции, что значительно повышает эффективность проводимого лечения и дает значительный экономический эффект, сокращая пребывание больных в стационаре. Использование технологии выявления биологической активности природных и синтезированных химических соединений по их влиянию на уровень протекания СРО/АОЗ в простых биологических системах in vitro позволяет значительно ускорить и удешевить этап направленного синтеза новых химических соединений с выраженной адаптогенной активностью, наименьшей токсичностью и аллергенностью при разработке новых высокоэффективных корректоров эндоэкологического состояния организма. В результате проведения скрининга биологически активных химических соединений найден новый синтетический препарат адаптогенного действия трекрезан, являющийся активным антиоксидантным средством. Материалы диссертации; используются в учебном процессе на кафедре системной экологии экологического факультета РУДН и кафедре молекулярной фармакологии и радиобиологии РГМУ. Технологии представленные в диссертации используются для выявления больных из групп риска на кафедре • внутренних болезней №2 1-го лечебного факультета Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова, Всероссийском центре хирургии для оценки адекватности искусственного кровообращения, в Государственном унитарном предприятии «Отраслевой научно-практический комплекс «Здоровье» для оценки уровней адаптации, выявления донозологических состояний и факторов эндоэкологического риска у здорового контингента лиц, занятых по работам в оборонно-промышленном комплексе.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Гукасов, Вадим Михайлович

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ

1. Разработана и внедрена технология программно-аппаратурного обеспечения оценки и прогнозирования действия антропогенных факторов разной природы на эндоэкологическое состояние организма человека и животных по изучению динамики изменения уровня СРО/АОЗ в клинике и эксперименте.

2. Разработана технология мониторинга коррекции эндоэкологического состояния организма и выявления групп риска у больных с разной нозологией по оценке динамики изменения уровня СРО/АОЗ.

3. Разработана технология для прогнозирования биологической активности ряда природных и синтезированных фармакологических препаратов по изучению их про-и антиоксидантного действия в сочетании с их электронноакцепторной активностью, а также влиянием на показатели скорости деоксигенации эритроцитов крови, Н^АТФ-азную активность и трансмембранный потенциал субмитохондриальных частиц.

41 Разработана технология оценки путей утилизации кислорода в биологических системах организма с целью диагностики скрытых форм его гипоксического состояния при длительном искусственном кровообращении.

5. Разработан и внедрен экспресс-микрометод индуцированной биохемшиоминес-ценции (ИБХЛ) для анализа уровня СРО/АОЗ в плазме крови здоровых доноров и больных с разной нозологией

6. Трекрезан как новый фармакологический препарат адаптогенного действия является активным антиоксидативным средством (проявляет свойства ингибитора свободных радикалов) и эффективен при лечении больных с нарушенной сопротивляемостью организма.

7. Совокупность полученных результатов показывает, что уровень СРО/АОЗ в сочетании с программно-аппаратурным обеспечением - важный интегральный показатель для контроля за функциональным состоянием АО системы организма и эффективностью применения природных и синтетических антиоксидантов в условиях развития оксидантного стресса.

Заключение.

Разработка и внедрение высоких технологий является тем стратегическим приоритетом государства, которое обеспечит дальнейшее ускорение поступательного экономического развития России. Согласно прогнозам мирового экономического развития, к концу текущего десятилетия треть рынка наукоемкой продукции придется на информационные высокие технологии (Сироткин О.С., 2003). Как известно, ключевыми аспектами информационных технологий являются функциональные отношения внутри информационной системы и ее функциональные отношения со средой. Этот же ключевой аспект определяет суть эндоэкологии, рассматривающей границы адекватного (нормального) и неадекватного (патологического) взаимодействия организма с факторами внешней и внутренней среды. Такое совпадение принципов функционирования двух перечисленных систем показывает насколько актуальны и значимы высокие информационные технологии для решения проблем эндоэкологии.

В результате проведенных исследований с использованием разработанной технологии мониторинга эндоэкологического состояния организма, включающей разработанный чувствительный микроэкспресс метод оценки уровня системы СРО/АОЗ, специально разработанные функциональные пробы и программно-аппаратный комплекс (портативный хемилюминометр PXL-01, интерфейсный блок и программный пакет Montes Status), установлен фазовый характер изменений реакции системы СРО/АОЗ в плазме крови организма, имеющий адекватную и неадекватную направленность (были оценены синхронность, характер фазовых колебаний и характер восстановления) на фоне влияния эндогенных факторов (таких заболеваний как инфаркт миокарда, бронхиальная астма, язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки, онкогематологических заболеваний и т.д.) и экзогенных факторов (действие таких факторов внешней среды как физические нагрузки, гипоксия, гипероксия, интоксикация и т.д.). В работе также проведена оценка. резервных возможностей организма с использованием разработанного принципа согласованности функциональной направленности системы АОЗ по данным показателя ИБХЛ (Крр, Kv). В результате проведенных исследований выявлено три типа резервных возможностей с согласованной, частично согласованной и рассогласованной реакцией системы АОЗ, отличающиеся также между собой количественно по интегральному показателю Z, что позволяет судить об уровнях адаптации в организме. Выявление характера фазовых колебаний системы СРО/АОЗ в организме явилось ключевой предпосылкой для проведения разработок целого ряда прикладных технологий в данном исследовании. Проведение анализа уровней адаптации, установленных для практически здоровых доноров (спортсменов) показало, что каждый уровень адаптации достоверно отличатется друг от друга по показателю общей работоспособности (PWC) у спортсменов. Кроме того, группа спортсменов с согласованной реакцией системы СРО/АОЗ в плазме крови имеет достоверно более высокое значение максимального потребления кислорода (МПК) по сравнению с группой спортсменов с частично согласованным и рассогласованным типом реакции системы СРО/АОЗ. В работе также установлены границы адаптации для практически здоровых доноров и условно здоровых доноров с предпатологией; больных с бронхиальной астмой и больных, предрасположенных к ней; больных с риском постхирургических осложнений; больных с заболеваниями ЖКТ с риском неблагоприятного клинического течения.

Имеются разные взгляды на значение и механизмы фазовых (волновых) колебаний физиологических процессов в организме, дискоординация и десинхронизация которых является первым признаком возможных патологических сдвигов (Судаков К.В., 1993). Однако, каким образом определить и оценить степень согласования, уровень дискоординации и десинхронизации физиолога чес к их регуляторных процессов, остается до сих пор открытой проблемой. Направление поиска ответов на эти вопросы можно искать в имеющемся представлении о том, что все процессы регуляции в биологических объектах построены как осцилляторы, а следовательно основой их анализа должна быть волновая теория (Андронов А.А., 1981; Пригожин И., 1985). На этой основе в настоящее время формируется информационно-волновая медицина, получают признание представления о существенной роли резонанса во взаимодействии осцилляторных процессов; в организме. Между осциллирующими структурными колебаниями молекул возможна синхронизация по фазе колебаний за счет электормагнитного или акустического поля, что в свою очередь может объяснить кооперативные переходы клеточных макромолекул и их комплексов (Конев С.В. и др., 1980).

Вместе с тем, известно, что носителем информации в биологических системах могут быть кванты электромагнитного поля (Казначеев В.П., 1981). Согласно гипотезе, выдвинутой С. Сунг (Sung S.S., 1979), коммуникация между клетками в организме осуществляется за счет связывания биохемилюминесцентной реакции с биофотохимической. В этом аспекте представляют интерес работы о ведущей роли системы СРО/АОЗ в формировании неспецифической резистентности организма к действию экстремальных факторов среды (Гукасов В.М., Каплан Е.Я., 1981-1989гг), учитывая тот факт, что уровень СРО за счет рекомбинации перекисных радикалов, вносит значительный вклад в формирование реакций биохемилюминесценции в организме, являясь отражением прижизненных окислительно-восстановительных процессов (Журавлев А.И., 1965). В качестве второго компонента системы СРО/АОЗ его антиоксидантного звена могут выступать стероидные гормоны, даже в физиологических концентрациях - регуляторы реакции адаптации в организме (Гукасов В.М., Владимиров Ю.А. и др., 1974; Гукасов В.М., Сергеев П.В. и др., 1974). Именно чередование реакций СРО и АОЗ в организме, связанных между собой по системе обратной связи, может определять фазовый характер колебаний показателей ИБХЛ в организме, а вместе с ними (учитывая широкий спектр влияния радикалов и антиоксидантов на все жизненно важные функции организма) и другие метаболические и физиологические процессы. Взаимоотношения процессов образования свободных радикалов, продуктов ПОЛ и антиоксидантной системы в формировании фазовой реакции организма под действием экзо- и эндоэкологических факторов и ответных метаболических неспецифических процессов в клетке представлено на схеме 2. С этих позиций представляется весьма обоснованным и перспективным использовать показатели динамики БХЛ биологических систем для оценки адекватности реакций организма на действие эндоэкологических факторов, уровней адаптации и резервных возможностей организма, а также биологической активности природных и синтезированных химических соединений.

На базе проведенных исследований на основе созданных интегральных показателей и коэффициентов ИБХЛ удалось разработать ряд медико-биологических технологий для оценки и выявления до нозологических состояний в группе условно здоровых доноров, групп риска у больных с различной нозологией, толерантности организма к физическим нагрузкам, гипоксии и гипероксии, для диагностики онкогематолгических заболеваний (гемобластозов) и гестозов, контроля и оптимизации коррекции эндоэкологического состояния здорового и больного контингента лиц (схема 2). Информационная ценность разработанной технологии мониторинга эндоэкологического состояния организма заключается также и в том, что в основе экспертной системы оценок созданного программного пакета Montes Status используются не столько абсолютные значения системы СРО/АОЗ, а сколько соотношения между ними (коэффициенты, интегральные показатели). Такой подход в настоящее время является наиболее перспективным, так как учитывает соотношение и связи элементов не только внутри системы, но и с окружающими объектами.

Использование показателей СРО плазмы крови в сочетании с показателями потребления кислорода, позволило разработать дыхательный коэффициент утилизации кислорода - ДКУК, дающий представление об оксигеназном (ферментативном) звене утилизации кислорода в организме и на этой основе создать технологию оценки скрытых форм гипоксических состояний организма, что нашло свое применение при операциях на открытом сердце у больных с кардиологическими заболеваниями для оценки адекватности искусственного кровообращения. С использованием показателя ДКУК и ряда других разработанных технологий — оценка скорости деоксигенации эритроцитов, оценка электронакцепторной и антиокислительной активности выявлены перспективные противогипоксические препараты и проведена сравнительная оценка некоторых из них как факторов, переключающих оксидазный путь утилизации кислорода на оксигеназный в организме (схема 2).

В работе показана возможность использования показателей системы СРО/АОЗ в простых биологических моделях для оценки антиоксидантной, адаптогенной, аллергенной, рецепторсвязывающей, синергитической и холинэстеразной активностей природных и синтетических ХС, а также оценки параметров их токсичности (схема 2). В результате проведенного скрининга вновь синтезированных ХС на разработанной липосомальной тест-системе установлена антиокислительная активность у нового фармакологического препарата с адаптогенными свойствами — трекрезана.

Разработанные технологии и программно-аппаратный комплекс для оценки уровней системы СРО/АОЗ в организме открывают новые перспективы по непрерывному мониторированию и коррекции эндоэкологического состояния организма человека в условиях нарастающего прессинга экологических факторов риска на организм. Использование разработанных технологий для оценки биологической активности природных и синтетических соединений может значительно ускорить процесс направленного синтеза и изыскания новых эффективных противострессорных фармакокорректоров эндоэкологического состояния организма, обладающих адаптогенными свойствами, направленной синергитической и рецепторсвязывающей активностью, а также лишенных таких побочных эффектов как аллергогенность и токсичность.

Схема 3.2. Роль свободных радикалов, продуктов ПОЛ и антиоксидантной системы и прогнозировании действия разных по природе экстремальных факторов.

Технологии прогнозирования действия экзо- и эндоэко логических факторов

1 2 3 4 5

Прогнозирование показателей токсикометрии факторов на модели липосом Прогнозирование наличия адаптогснного дей-стви факторов W Ьй ? ш • = й ЕГ'З Е о « к са о о и а ° — u — -г га Я = о 2 йа ш Прогнозирование стспснп ишсмнчсского повреждения органов факторами Прогнозирование индивидуальной чувствительности организма к факторам

О 1 <N О + Физическая нагрузка Сезонные колебания

Экзо- и эндоэкологические факторы тТ

Сродство 4 НЬ к 02

1|02

Резистентность эритроцитов

АО А

Образование свободных радикалов и перекисей 02" , Н02"', Н2 02, ОН"

Накопление СЖК

Аденилат циклазная активность I цАМФ

Электронакцепторная активность

I f

Первичное образование продуктов ПОЛ

J"

Подавление ►мко Нарушение структуры мембран

Нарушение работы ионных насосов

Накопление Накопление Са2* в цитоплазме гоксических Т сгсс

2* продуктов.

Активация фосфолипазы А2 М

Накопление СЖК

Накопление Fe t

Нарушение транспорта электронов дыхательной цепи ^ (накопление НАДН) I

Развитие тканевой гипоксии

Нарушение селективной проницаемости для FT, Н2 О, Г

Вторичное образование продуктов ПОЛ

Истощение АО£

Нарушение активности — дыхательных ферментов i

Разобщение окисления, фос-форилирования

Дефицит макроэрго"!^ Набухание, отек клетки

Жировой обмен 4

Накопление СЖК

Нарушение клеточного метаболизма К>А

Нуклеиновый обмен, нако- Белковый оомен, накопление мо-пление мочевой кислоты чевины яммиякя, креатинфосфата

Выход протеаз, гидролаз

Углеводный обмен, накопление HL

Третичное образование продуктов ПОЛ

Ацидоз в развитии неспецифических ответных реакций состояний организма, их диагностике

Технологии оценки эндоэкологического состояния организма

ТВ-о

Q.

3 & я о

S с о ю „ й « * I о. В с w р fr'g £ л о с

3 ев н с I я о г со о

Л ^ nN ■х л я с: g £

О Я еЗ i £0

СО

Ьй п л ig В rt со со CS сЗ г м

О О u с

S w Р гч

СЗ ы X 1) а О я

СЗ со Я с: h i

J rt h я л с и

•е- й а я г} т сз 2 1 § I £ о о J я

Я Я . Э •я

§ з й 9 я

СЗ СО АЛ

3 5 Ь

5 я 3 т н т о ^ о О N О г м сз о G.

Я Н г н

CS са м о й itf Я

L>

Я" О л Л

СО

Я Я Л и а. о

Я a о о 3" Я (-. о е: о о со О X о PC я о с; м к 2 СО

ТГ

23 са о а. о о я са о е; и л о чт Я о е; со ее 3 я

S « я я

О X X о о о я 5 я. ы и о гг я

U р. л О. й оГ^ Я я и т о «

Я н я са я

CQ Ю Й а>

•в" m

§ 3 х s о я + + +•-++ + + + ++ + + ++- + + + ++ + + ++- + + + где А - анаболизм, АД - адреналин, ГБО - гипербарическая оксигенация, К - катаболизм, МКО - микросо-мальное окисление, МП - мембранный потенциал субмитохондриальных частиц, НА - норадреналин, П02 -потребление 02, САС - симпатико-адреналовая система, СЖК - свободные жирные кислоты, СДЭ - скорость деоксигенации эритроцитов, ЦНС - центральная нервная система

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Гукасов, Вадим Михайлович, Москва

1. Aikens J., Dix Т. Perhidroxil radical HOO initiated lipid peroxidation: the role of fatty acid hydroperoxides.//J. Biol. Chem.- 1991, Vol. 266, p. 15091-15098.

2. Allen R.C. Chemiluminescence and the study of biological oxydation reactions. Chemical and biological initiation of excited states.- New York: Academic Press, 1982, P. 309-314.

3. Amstad P., Krupitza.G. Mechanism of c-fos induction by active oxigen.// Cancer Res.-1992.- Vol. 52.- p. 3952-3960.

4. Asakawa T.A., Matsushita S. Coloring conditions of Thiobarbiturie acid test for detecting lipid hidroperoxides // Lipids.- 1980, Vol. 15, №3, p. 137-140.

5. Atzori L., Olafsdottir K., Corriga AM., Bannenberg G. Thiol modidfication in H2O2-and thromboxane-induced vaso- and bronchoconstriction in rat perfussed lung. //J. Appl. Physiol.- 1991.- Vol. 71.- p. 1309-1314.

6. Aust C.D., Morehouse L.A., Thomas C.D. Role of metals in oxigen radical reaction. // J.Free Rad.Biol.Med,- 1985,- № 1.- p. 3-25.

7. Bidlack W.R., Tappel A.L. Fluorescent product peroxidation // Lipids.- 1973, Vol. 8,N4, p. 203-209.

8. Bligh E.V., Dyer W.C. // Can. J. Biochem. Physiol.- 1959, Vol. 37, P. 911-915.

9. Bowling A. Measuring health: a review of quality of life measurement scales.-Buckingham, Bristol, Biddies Ltd, Guilford and King's Lynn., 1991,174 p.

10. Broide D.H., Lotz M., Cuomo A.J. et al. Citokines in simptomatic asthma airways // J. Allergy Clin. Immunol.- 1992,- Vol. 89.- p. 958-967.

11. Buhl M.R., Kemp E., Kemp C. // Fransplat. Proc.- 1977.- vol. 9,- p. 1603.

12. Bulkley G.B. Free-radical mediated reper fusion in Jury: a selective review // Brit. J. Cancer, 1987, v.55, Supply N8, p.66-70.

13. Busse W. Eosinophils in asthma // Ann. Allergy.- 1992.- Vol. 68,- p. 286-290.

14. Chakraborty S., Nandi A. Ascorbat protects quinea pig tissues against lipid peroxidation. // Free Rad. Biol. Med.- 1994,- Vol. 16(4).- p. 417-426.

15. Chang J., Marsshall M. Proinflamatory effects of phospholipase A2 in several in vitro and in vivo system // Adv. Prostaglandin Tromboxane Leucotriene Res.- 1989,- Vol. 19.- p. 594- 597.

16. Cheeseman KH, Emery S, Maddix SP, Slater TF, Burton GW, Ingold KU. Studies on lipid peroxidation in normal and tumour tissues. The Yoshida rat liver tumour // Biochem J., 1988,- Vol. 250,- N1, p. 247-252.

17. Cheeseman, K.H., Burton, J. W., Ingold,K.U. and Slater,T.F. Lipid peroxidation and lipid antioxidants in normal and tumor cells // Toxicol. Pathol.- 1984.- Vol. 12,- p. 235-239

18. Ching T.L., de Jong J., Bast A, Structural characteristics of histamine H2 receptor antagonists that scavenge hypochlorous acid // Eur. J. Pharmacol.- 1994,- Vol. 268 (1).-P. 89-93.

19. Chitano P., Di Stefano A., Finotto S. et al. Ambroxol inhibits airway hyperresposiveness induced by ozone in dogs. // Respiration.- 1989.- Vol. 55(suppl. 1).-p. 74-78.

20. Cohrane C.G. Mecanisms of oxidant injury of cells // Mol. Asp. Med.- 1991.- Vol. 12 -p. 137-147.

21. Comporti M. Lipid peroxidation. Biopathological significance.// Mol. Aspects Med.-1993.- Vol. 9 p. 199-207.

22. Cotgreave I., Moldeus P. Host biochemical defense mechanism against prooxidants. Ann. Rev. // Pharmacol. Toxicol.- 1988.- Vol. 28,- p. 189-212.

23. Crain I.L., Gleen J.L., Green D.E. // Biochem. Biophys. Acta 1956.-Vol. 122.- P. 475487.

24. Canter D., Nanke L. Can health be a quantitative criterion? A multi-facet approach to health assessment.- Science of health, Plenum Press, 1992, p. 83-98.

25. Dargel A. Lipid peroxidation a common pathogenetic mechanism? // Exp. Toxic. Pathol., 1992, Vol. 44, p. 169-181.

26. Das D., Bandyopadhyay D., Banerjee R.K. oxidative inactivation of gastric peroxidase by site-specific generation of hydroxyl padical and its role in stress-induced gastric ulceration. // Free Radic Biol Med.- 1998.- Vol. 24 (3).- P.460-469.

27. Doni M.G. Antioxydant defence and protection or cell membranes from lipid peroxidation. // Agents and Actions.- 1987.- v. 22, N3-4,- p. 353-356.

28. Elleck D. The new direction in health policy // Am. J. Occup. Therapy.- 1990, vol. 44, p. 947-949.

29. Esterbauer H. Cytotoxity and genotoxity of Iipidoxidation products // Am, J. Clin. Nutr.- 1993.- Vol. 57(suppl).- p. 779-788:

30. Fantone J.C., Ward P.A. Polymorphonuclear leukocyte-mediated cell and tissue injury: oxygen metabolites and their relations to human disese // Human Pathology.- 1985, Vol. 16,- P. 973-978.

31. Fernando A.R., Griffits J.R., O'Donoghue E.P. et al. // Lancet, 1976, vol. 1, p. 555-557.

32. Fleischer В. Activation of human T lymphocytes requirements for mitogen-induced proliferation of antigen-specific T lymphocytes clones. I I Eur. J. Immunol.- 1983- Vol. 13, p. 970-976.

33. Fridovich J. // Photochem. and photobiol.- 1978 v. 28 - p. 733—741.

34. Fuller R.W. The role of the alveolar macrophage in asthma. // Respir. Med.- 1989, Vol. 83 -p. 177-183.

35. Gespach C., Abita J.-P. Human Polymorphonuclear Neutrophils Pharmacological characterization of Histamine receptors Mediating the Elevation of Cyclic AMP. // Molecular Pharmacol.- 1981.- V. 21.- P. 78-85.

36. Goldberg A.F., Ватка T. Acid phosphatase activity in human blood cells // Nature, 1962, vol. 195, p. 207-300.

37. Goldberg M., Dab W. Complex indices for measuring a complex Phenomenon. Measurements in health promotion and protection.- 1987.- p. 174-194.

38. Goldstein E. Hydrolitic enzymes of alveolar macrophages // Rev. Infect. Dis.- 1983, Vol. 5.- p. 1078-1092.

39. Goodwin B. Frontiers of biology in relation to health. Science of health.- Plenum Press, 1992,-p. 51-58.

40. Gorski F., Krakowiak A., Ruta U. et al. Eosinophil and neutrophil chemiluminescence in patients with atopic asthma and in helthy subjects // Allergol. mmunopathol. Madr. -1993 -Vol. 21.- p. 71-74.

41. Grisham M.B., Granger D.N. Neutrophil-mediated mucosal injury. Role of reactive oxygen metabolites // Dig: Dis. Sci.- 1988, V. 33., N. 3., P. 65-155.

42. Gurthner G., Farrukh I. The role of arachidonate mediators in peroxide-induced lung injury.// Am. Rev. Respir. Diseas.- 1987, Vol. 136, p. 480-483.

43. Guyton K., Kensler T. Oxidative mechanisssm in carcinogenesis// Br. Med. Bui.- 1993, Vol. 49.- p. 523-544.

44. Hafeman D.C., Sunde R.A, Hoekstra W.G. // J. Nutr.- 1974.- V. 104,- P. 580-587.

45. Halliwell B. Biochemical mechanisms accounting for the toxic action of oxygen on living organisms: the key role of superoxide dismutase // Cell. Biol. Int. Rep.- 1978.-Vol. 2, P. 113-128.

46. Halliwell В., Chirico S. Lipid peroxidation: its mechanism, measurement andsignificans. // Am.J.Clin. Nutr.- 1993; 57(suppl).- p. 715-725.

47. Halliwell В., Gutteridge J. Role of free radicals and catalitik metal ions in human diseases: an overview// Methods Ensimol.- 1990, 186, p. 1-85.

48. Hansen M„ Smith A.L. // Biochem. Biophys. Acta.- 1964,-Vol. 81.- P. 214-222

49. Hawiger J. Formation and regulation of platelet and fibrin hemostatic plug // Human Pathology.- 1987.-Vol. 18-p. 111-122.

50. Herd J.A. Cardiovascular response to stress // Physiol. Rev.- 1991.- Vol. 71, № 1, p. 305.

51. Hess M., Manson N., Okabe E. Involvement of free radical in the pathophysiology of ischemic heart disease. // Canad. J. Physiol. Pharmacol.- 1982, V. 60,- P. 1382-1389.

52. Huckebee W.E. Relationship of private and lactate during anaerobic metabolism // J. Clin. Invest.- 1958,- Vol. 37,- P.244:

53. Itoh M., Guth P. Role of oxygen-derived free radicals in Hemorrhagic chock-induced gastric lesions in the rat.// Gastroenterology.- 1985 V. 88, P. 1162-1167.

54. Jacoby D.B., Choi A.M. Influenza virus induces expression of antioxidant genes in human epithelial cells. // Free Radic. Biol. Med.- 1994,- Vol. 16(6), p. 821-824.

55. Jarjour N.N., Calhoun W.J. Enhanced production of oxygen radicals in asthma // J. Lab. Clin. Med.- 1994, v. 123, p. 131-137.

56. Jaschonek K., Muller C.P. Platelet and vessell associated prostacyclin and thromboxane A2/prosstaglandin endoperoxide receptors.// Eur. J. Clin. Invest.- 1988, Vol. 18; p. 1-8.

57. Kaliner М.А., Barnis P.J., Person C.G.A. Asthma: Its pathology and treatment. Marcel Dekker, NY, 1991.

58. Kanofsky J., Sima P. Singlent oxigen production from reaction of ozone with biological molecules//J. Biol. Chem.- 1991, Vol. 266, p. 9039-9042.

59. Kirshenbaum L.A., Singal P.K. Can- J. // Physiol. Pharmacol. 1992, Vol. 70, № 10, P. 1330-1335.

60. Kolb H. Nitric oxide: a patogenetic factor in autoimmunity. // Immunology Today, 1992,-Vol. 13.-p. 157-160.

61. Koplin A.N. The future of public health: a local health department view. // J. Public Health Policy.- 1990, Vol. 11, №4, p. 427-437.

62. Kozol R.A., Punzo A., Elgelaly S. A., ea. Neutrophil chemotactic factors in human gastric secretions from patients with mucosal diseases // Gastroenterology.- 1988, V. 94, N. 5, Part 2, P. 239-245.

63. Kramer K., Rademaker B. Influence of lipidperoxidation on beta-adrenoreceptors. // FEBS Lett.- 1986,- Vol. 198,- p. 80-84.

64. Krinsky N. Antiocsidant functions of carotinoids. // Free Rad. Biol. Med.- 1989.- Vol. 6,- p. 617-635.

65. Krinsky N. Detection and biological Function or active oxygen species. // Photochem. and Photobiol.- 1985, v.41, Suppl, p.96.

66. Kroegel C. Virchow J.C. Luttmann W. Pulmonary immune cells in helth and disease. The eosinophil leukocyte. // Eur. Respir. J., 1994, Vol. 7; p. 519-543.

67. Laitinen L.A., Laitinen A., Haahtela T. Airway mucosal inflammation even in patients with newly diagnosed asthma. // Am. Rev. Respir. Dis., 1993,- Vol. 147,- p. 697-704.

68. Lansing M.W., Ahmed A., Cortes A. et al. Oxygen radicals contribute to antigen induced airway hyperresponsivenes in conscious sheep // Am. Rev. Respir. Dis.- 1993, Vol. 147.-p. 321-326.

69. Lansing M.W., Mansour E., Ahmed A. et al. Lipid mediators contribute to oxigen-radical-induced airway responce in sheep.// Am. Rev. Respir. Dis.- 1991, Vol. 144, p. 1291-1296.

70. Larson J.S. The measurement of health.- New York-London: Greenwood Press, 1978, 171 p.

71. Laughton M.J., Halliwell В., Evans P. J. et al. // Biochem. Pharmacol., 1989, Vol. 38, N 17, P. 2859—2865.

72. Ledwozyw A. The influens of mormobaric hyperoxia on antioxidant enzymes activities and peroxidation product devels in rat lungs.// Arch. Vet. Pol.- 1992.- Vol. 32,- p. 135141.

73. Leff A.R., Hamann K.J., Wegner C.D. Inflammation and cell-cell interaction in airway hyperresponsiveness//Am. J. Physiol.- 1991, Vol. 260,p. 189-206.

74. Lieberman P.L., Crawford L. V. Management of the Allergic Patient.- ACC. New York, 1982,- p. 38-82.

75. Mannanioni P.F., Palmerani В., Pistalli A. et al. Histamine release by platelet aggregation // Agents and actions.- 1990.- Vol. 30.- p. 44-48.

76. Mason J.O./McGinnes J.M. "Healthy people 2000". An overview of the national health promotion and disease prevention objectivies // Public Heaith Rep.- 1990, Vol. 105, №5, p. 441-445.

77. Mayner D.D. Radical trapping antioxidants in vitro and in vivo. // Bioelectrochem. and Bioenerg.- 1987, v.18, N1-3, p. 219-229.

78. Mazo Sh. R, Frishman W. H.// Amer. Heart J., 1987, Vol. 114, N 5, P. 1206-1215.

79. Mc Cay P.B. Vitamin E: Interactions with free radicals and ascorbate // Annu Rev. Nutr.- 1985, v.5, p.323-340

80. McBeath W.H. Health for all: a public health vision. //Am. J. Of Public Health.- 1991, vol. 81, №12,-p. 1540-1565.

81. McCord J.M. The superoxide free radical: its biochemistry and pathophysiology // Surgery.- 1983, V. 94, N. 3, P. 412-414.

82. Meerson F.Z., Kagan V.E., Kozlov Yu.P., Belkina L.M., Arkhipenko Yu.V. The role of lipid peroxidation in pathogenesis of ischemic damage and the antioxidation protection of the heart // Basic Res. Cardiol.- 1982,- v. 77.- p. 465-485.

83. Meretey K., Bohm U., Falus A. Action of histamine on PHA chemiluminescence response of blood mononuclear cells in autoimmune patients // Agents and Actions.-1986, Vol. 18 ( S ).- P.254-257.

84. Minotti G. Sources and role of iron in lipid peroxidacion. // Chem. Res. Toxicol.- 1993, Vol. 6, p. 134-146.

85. Misawa M., Arai H. Airway inflammation induced by xanthin/xanthine oxidase in guinea pigs. // Agents Actions.- 1993, Vol. 38 (1-2).- p. 19-26.

86. Miyazawa Т., Fujimoto K., Suzuki Т., Yasuda K. Determination of phospholipid hydroperoxide using luminol chemiluminescence-high performance liquid chromatography. Methods Enzymol., 1994; Vol. 233, p. 324-332

87. Mraz M., Faltova E, Lincova D. el al. // Basic Res. Cardiol., 1986. Vol. 81. - P. 7482.

88. Murrell G., Francis N. Modulation of fibroblast proliferation by oxigen free radicals. // BiochemJ.- 1990,- Vol. 265,- p. 659-665.

89. Muzykantov VR, Danilov SM A new approach to the investigation of oxidative injury to the pulmonary endothelium: use of ACE as a marker // Biomed Sci.- 1991.- v.2.- p. 11-21.

90. Neville K. // Biochem. Biophys. Acta.- 1968.-Vol. 154.- P. 540-552.

91. Noack H. Concepts of health and health promotion. Measurements in health promotion.- Copenhagen, 1987.- p. 5-28.

92. Nordmann R. Radicaux libres stress oxidatif et vitamines antioxidantes. // C-R-Seances-Soc-Biol-Fil.- 1993, 187(3), p. 277-285.

93. Ogino K., Oka S., Takemoto T. Gastric mucosal injury induced by inhibitor of superoxide dismutase in rats. // Gastroenterology.- 1989.- V.96, N.5, Part 2, P. 372-379.

94. Olafsdottir K., Atzori 1. Mechanism of hydroperoxide-induced broncho and vasoconstriction in isolated and perfused rat lung // Pharm. Toxicol.- 1991,- Vol. 68.- p. 181-186.

95. Olafsdottir K., Ryrfeld A. Hyperoxid-induced bronchoand vasoconstriction in the isolated rat lung. // Exp. Lung Res.- 1991.- Vol. 17.- p. 615-627.

96. Orrenius S.,McConkey D. Role of Ca2f in toxic cell killing. // Trends Pharmacol. Sci.- 1989, Vol. 10, p. 281-285.

97. Oshima A., Asayama K., Sakai N. The role of endogenous superoxide dismutase (SOD) and glutation peroxidase (GPX) in the experimental gastric ulcer model // Gastroenterology.- 1988,- V. 94, N. 5, Part 2,- P. 336-340.

98. Oshima A., Kitajima M., Sakai N. The significance of coenzyme Q10 anion radical in the ischemia-reperfusion model of the stomach ulcer.// Gastroenterology.- 1989.- V. 96, N. 5, Part 2, P. 379-385.

99. Panasenko O.M. Free radical generation by monocytes and neutrophyls. // Biomed. Sci., 1991, Vol. 2, p. 581-589.

100. Parker S. E„ Weinstock J. // J. med. chem., 1973, v. 16, p. 34.

101. Pascoe G.A., Reed D.J. Relationship between cellular calcium and vitamin E metabolism during protection against cell injury // Arch. Biochem. Biophys.- 1987, v.253, N2.-p. 287-296.

102. Perry M.A., Wadna S., Parks D.A. Role of oxygen radicals in ischemia-induced leisions of cat stomach // Gastroenterology.- 1986.- V. 90,- P. 362 -367.

103. Popp F. On the coherense of ultraweek, fotoemission from livingtissues. Disequilibrium and Selforganisation.- Dordrecht, Residel, 1986, p. 207-230.

104. Quintanilha A. // Biochem. Soc. Trans.- 1984.- Vol. 12, N 3, P. 403-404.

105. Rhodes J. Erithrocyte rosettes provide an analogue for Schiff base formation in specific T-cell activation. // J. Immunol.- 1990, Vol. 145, p. 463-469.

106. Robinson K. What is health. Community health. N-Y., 1983, p. 18-28.

107. Schreck R., Rieber P. Reactive oxigen intermedia- tes as apparently widely used messengers in the activation of the NFkB Transcription factor and HIV-1. // EMBO J., 1991, Vol. 10, p. 2247-2258.

108. Shichijo Т., Ariyama A., Tsuji Y. Oxygen radicals. // Nippon-Rinsho.- 1993, Vol. 51(3), p. 638-642.

109. Sizuki M., Grisham M.B., Granger D.N. Superoxide plays a role in superfiision-induced leucocyte adherence to microvascular endothelium // Gastroenterology.- 1989, V. 96, N. 5, Part 2, P. 497-503.

110. Smith R. First step towards a strategy for health. // British Med. Journal.- 1991, vol. 303.- p. 82-96.

111. Smith S.M., Parks D.A., Granger D.M. Gastric mucosal injury in the rat. Role of iron and xantine oxidase.// Gastroenterology.- 1987, V. 92, P. 950-956.

112. Sporn P.H.S., Peters-Golden M., Simon R.H. Hydrogen-peroxide induced arachidonic acid metabolism in the rat alveolar macrophage // Am. Rev. Respir. Dis.-1988,-Vol. 137,- p. 49-56.

113. Stein H.J., Esplugues-J.V. Role of acidification in oxygen radical induced gastric mucosal injury. // Gastroenterology.- 1987.- V. 92, P. 950-956.

114. Stein H.J., Oosthuizen M.M.J. Glutatione protects rat gastric mucosa against ischemia-reperfusion injury//Gastroenterology.- 1988, V. 94, N. 5, Part 2,- P. 443-451.

115. Stipek S., Novak L., Vinklar P et.al. Plasma xanthine oxidase activity correlates with the resistance to severe hypoxia In different species // Physiol. Bohemosl:, 1988, v. 37, N2, p. 107-113.

116. Sung S.S. A possible biophotochemical mechanism for cell communication.- In: Electromagnetic Bio-Information. Proceedings of the Symposium, Marburg, September 5, 1977, Munchen-Wien-Baltimore.- 1979.

117. Takagi K., Okabe S., Saziki R. A new method for the production of chronic ulcer in rats and effect of several drugs on its healing //Japon J. Pharmacol.—1969.— V. 19, N 69.

118. Takamasu M., Fuse Y., Kamamoto K. On the mechanism of the diethyldithiocarbamate-induced gastro-duodenal mucosal damage in rat // Gastroenterology.- 1989, V. 96, N. 5, part 2,- P. 501-510.

119. Takeuchi K., Okabe S., Niida H. A new model of duodenal ulcers induced in rats by diethyldithiocarbamate, a superoxidedismutase (SOD) inhibitor.// Gastroenterology, 1989, V. 95, N. 5, Part 2, P. A501.

120. Tibbits G.F., Nagatomo Т., Sasaki M., Barnard R.J. // Science. 1981. - Vol. 213. -№4513.-P. 1271-1273.

121. Torii Y., Saito H. Introdaction of emesis in Suncus murinus by pyrogallol, generator of free radicaqls // Br. J. Pharmacol.- 1994, 111(2), p. 431-434.

122. Tsimoyannis E.C., Sarros C.J. Ranitidine and oxygen-derived free radical scavengers in hemorrhagic shock induced gastric leisions // Gut.- 1988,- V. 29, P. 826829.

123. Vladimirov Yu. A. Free radical lipid peroxidation in biomembranes: mechanism, regulation and biological consequences. In: Free Radicals, Aging and Degenerative Diseases, 1986, Alan R. Liss., Inc., p. 141-195.

124. Von Ritter C., Hinder R.A. Gastric mucosal lesions induced by hemorhagic shock in baboons//Dig.Dis.Sci.- 1988, V. 33, P. 856-864.

125. Von Sonntag C. The chemical basis of radiation biology.- London.- 1987.

126. Walsh D.C.,-Jennings S.E., Mangione T. et al. Health promotion versus health protection? // J. Public Health Policy, 1991, №2, p. 148-164.

127. Wandall H. Effect of omeprazol on polymorphonuclear leucocyte hemotaxis, superoxide anion generation and degranulation. Gastroenterology.- 1988.- V. 94, N. 5, Part2, P. 486-494.

128. Ware J.E. Standarts for validating health measures. Definition and content. // J. Chron. Diseases.- 1987.- № 6 p. 473-480.

129. Weiss S.I. Oxygen, ischemia and inflammation. // Acta Physiol. Scand 1986, v.126, Suppl. N548, p. 39-46.

130. Храпова Н.Г. // В кн.: Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М., 1982. -С. 59-73.

131. Zilber Yu. A, Velena А. Н., Uldrikis Ya. R. et al. In: Federation of the European Biochemical Society 9th Meeting Abstracts.- Budapest, 1974, p. 228.

132. Zimmerman B.J., Granger D.N. Role of leucotriene B4 in ischemia/reperfusion-induced granulocute infiltration. // Gastroenterology.- 1989 V. 96, N. 5, Part 2- P. 697-705.

133. Агаджанян И.А., Елфимов А.И. Функции организма в условиях гипоксии и гиперкапнии. М., Медицина, 1986, 270 с.

134. Агаджанян Н.А., Воложин А.И., Евстафьева Е.В. Экология человека и концепция выживания. М., ГОИ ВИНМЦ МЗ РФ, 2001, с. 4-5.

135. Айдаралиев А.Д. Яковлев В.М., Иыаналиев Д.М. Оценка функционального состояния при адаптации к условиям высокогорья. // Физиология человека,-1982,- N3.- с. 463-468.

136. Айдарханов Б .Б., Локшина Э.А., Ленская Э.Г. Молекулярные аспекты механизма антиокислительной активности витамина Е и особенности действия а-и 7-токоферолов. //Вопр. мед. Химии.- 1989.-т. 35, N3,- с.2-9.

137. Акоев И.Г. Радиационные последствия и интеграционная гипотеза старения: Проблемы радиационной герантологии.-М., 1976, с. 178-191.

138. Алдонин Г.М. Синергетическая концепция диагностики по кардиоритму. Межд. конференция «Новые информационные технологии в медицине и экологии»,- Тез. докл., Украина, Крым, Гурзуф.- 1998, т. 2, с. 112-115.

139. Александров О.В., Лурье Б.Л., Гноевых В.В. и др. Влияние длительной кислородотерапии на хемилюминесценцию и антирадикальную активность у больных хроническим обструктивным бронхитом. // Пульмонология.- 1992,- №3, с. 13-16.

140. Амосов Н.М. Раздумья о здоровье.- М., 1978, 178 с.

141. Андронов А.А., Витт А.А., Хайкин С.Э. Теория колебаний. М.: Наука,- 1981.561 с.

142. Антипов М.С., Каленик Н.А., Свиридов В.В. Антиоксидантная защита организма беременных с угрозой прерывания и возможность ее повышения методом УФОК.- Научно-практическая конференция.- Саратов,- 1997, С. 26-28.

143. Апанасенко Г.JI. Охрана здоровья здоровых. Валеология: диагностика, средства и профилактика обеспечения здоровья, СПб., 1993, с. 49-60.

144. Артамонов С.Д., Данилов М.А., Лубяко А.А., Онищенко Н.Д. Действие витамина Е на энергобаланс миокарда в норме, при ишемии и реоксигенации. // Фармакол. и токсикол,- 1985.- т.48 N6,- с.28-33.

145. Бадюгин И. С. Токсикология синтетических ядов.- Казань, 1974, с. 94-95.

146. Баевский P.M. Берсенева А.П. Автоматизированный прогностический комплекс "Вита-90" в системе массовых донозологических обследований населения. Информатизация в деятельности медицинских служб, Респ. сборник науч. трудов.- М., 1992, Часть 1, с. 126-136.

147. Баевский P.M. Методика оценки функционального состояния организма человека. // Мед. труда и пром. Экология, 1995, № 3, с. 30-34.

148. Баевский P.M. Прогнозирование состояний на грани нормы и патологии. М., Медицина, 1979,295 с.

149. Барабой В.А. Перекисное окисление и стресс.- С-Пб, Наука, 1992.

150. Барабой В.А., Коробова Л.М. Определение антиоксидантного действия гистамина// Фармацевтический журнал (УССР).- 1987, № 1.- С.65-67.

151. Березовский В.А. Гипоксия и индивидуальные особенности организма.- Киев, Наукова думка, 1978, 215 с.

152. Березовский В.А, Бойко К.А., Клименко К. С. и др. Гипоксия и индивидуальные особенности реактивности. / Под ред. В.А. Березовского. Киев, 1978,-216 с.

153. Березовский В.А., Бойко О.А., Курбаков Л.А., Гридина Т.Н. К вопросу о механизме формирования различий в естественной резистентности крыс к острой гипобарической гипоксии // Физиол. Журнал,- 1985,- т. 31, N3, с. 257-262.

154. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов.- М., Медицина, 1989, 368 с.

155. Болевич С. Роль свободнорадикальных процессов в патогенезе бронхиальной астмы: Автореф. Дисс. докт. мед. Наук, М., 1995, 45с.

156. Борисова И.Г., Сейфулла Р.Д., Журавлев А.И. Действие антиоксидантов на физическую работоспособность и перекисное окисление липидов в организме.// Фаркакол. итоксикол.- 1989.-Т.52, N4.-C.89-92.

157. Бородин Ю.П., Дорогова О.А. Применение ингаляционного теста с ацетилхолином в комплексной диагностике хронического астматического бронхита и бронхиальной астмы // Воен.-мед. журнал,- 1984, N11, с. 55-56.

158. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты и синтетические ингибиторы радикальных процессов // Успехи химии, 1975, т. 44, N10, с. 1871-1886.

159. Бурлакова Е.Б., Алексеенко А.В., Молочкина Е.М., Палычина Н.П., Храпова Н.Г. Биоантиоксидантыв лучевом поражении и злокачественном росте,- М., 1975.

160. Бушов Ю.В. Психофизиологическая устойчивость человека в особых условиях деятельности: оценка и прогноз. Томск., 1992, 176 с.

161. Вакарица А. В., Мышкин В. А. Сборник науч. работ Воен.-мед. факультета при Куйбышев, мед. ин-те,- 1979, вып. 8, с. 66-67.

162. Васадзе Г.Ш., Михель И.М., Думбадзе Г.Г. Метод системно-аналитических психофизиологических исследований в медицине.- Тбилиси, Сабчота сакарт-вело, 1986, 286 с.

163. Василенко В.Х., Гребенев А.Л., Шептулин А.А. Язвенная болезнь.- М.: Медицина,- 1987, 283 с:

164. Васютинский Н.П. Золотая пропорция. М.: Молодая гвардия, 1990,238 с.

165. Вилков Г. А., Лактионова А. А., Лукаш Н.А. и соавт. Активность антиоксидантных ферментов в лимфоцитах при язвенной болезни. Материалы IV Всесоюзного съезда гастроэнтерологов, М.-Л., 1990, Т. I, С. 174-175.

166. Виноградов В.М., Урюпов Ю.Ю. Гипоксия, как фармакологическая проблема // Фармакол. и токсикол, 1985, т.48, N4, с.9-20.

167. Виноградов В.М., Урюпов Ю.Ю. Гипоксия, как фармакологическая проблема. Фармакол. и токсикол., 1985, т. 48, N4, с. 9-20.

168. Владимиров Ю. А., Петренко Ю. М. // Биофизика.- 1976, Т. 21, № 2, С. 424427.

169. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский образовательный журнал,- 2000,- т. 6, №12,- с. 13-19.

170. Владимиров Ю.А. Фотохимия и люминесценция белков М., Наука, 1965, 232с.

171. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. и др. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Биофизика. 1992. Т. 29. С. 3-250.

172. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах.- М., Наука.- 1972,- 252 с.

173. Владимиров Ю.А., Оленев В.И., Суслова Т.В. Информация анализа кривых хемилюминесценции при перекисном окислении липидов. В сб. Труды 2-го мед. института, т.9. серия хирургия, выпуск 8, М, 1974, с. 6-34.

174. Владимиров Ю.А., Сергеев П.В., Сейфулла Р.Д., Руднев Ю.Н. Влияние стероидов на перекисное окисление липидов мембран митохондрий печени// Мол. биол.- 1973.- т. 7, № 2,- с. 247-253.

175. Владимиров Ю.А. Суслова Т.Б., Оленев В.И. Хемилюминесценция, сопряженная с образованием липидных перекисей в биологических мембранах. // Биофизика,- 1969, т. XIV, № 5,- с. 836-845.

176. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П. Хемилюминесценция клеток животных. М., ВИНИТИ, Сер. Биол., 1998, т. 24, с. 176.

177. Волков Н.И., Ширковец Е.А. Об энергентческих критериях работоспособности спортсменов. В сб. «Биоэнергетика», JI., 1973, с. 18-30.

178. Галетти П., Бричер Г. Основы и техника экстракорпорального кровообращения.-М.: Медицина, 1966, с. 62.

179. Ганина А.А. Перекисное окисление липидов и структурно-функциональные особенности эритроцитов у беременных с поздним токсикозом. /Влияние мембраностабилизирующей терапии. Авторефат диссертации канд. мед. Наук, М., 1985.

180. Гацура В. В. // Успехи физиол. наук. 1981, №1, С. 97-118.

181. Гацура В.В. Фармакологическая коррекция энергетического обмена ишемизированного миокарда.-М., 1993, с. 122-137.

182. Герасимов А.М., Ковшенко Е.А., Касаткина Н.Д. и др. // Докл. АН СССР, 1979, Т. 244, № 2, С. 492-495.

183. Глебов Р. Н. В кн.: Транспортные аденозинтрифосфатазы.- М.: 1977, с. 12-15.

184. Головкин. В. Д., Гукасов В, М. Фармакологическая коррекция гипоксических состояний -М., 1988, С. 33.

185. Грызлова О.Ю. Исследование органов. человека с помощью фрактальной геометрии. Вестник новых медицинских технологий, 1998, Т. V, № 1, С. 25.

186. Гукасов В.М. Влияние стероидных гормонов на процесс перекисного окисления липидов мембран митохондрий: Автореферат на соиск. учен. степ, канд. биол. наук.- М., 1976.

187. Гукасов В.М. Контроль кислородного статуса организма. Гипербарическая физиология и медицина, 1996, №4, с. 74-75.

188. Гукасов В.М., Каплан Е.Я., Мотылянская Р.Е., Минаева Г.Д., Николаева С.П. Использование параметров кинетики перекисного окисления липидов для оценки функционального состояния организма. Теория и практика физической культуры, 1987, 5, с. 44-46.

189. Гукасов В.М., Федоров В.К. Роль изменений структуры мембран в клеточной патологии. Труды 2-го МОЛГМИ им. Н.И. Пирогова, 1977, т. LXXH, вып. 1, с. 852.

190. Гуляева Н.В. Ингибирование свободнорадикального окисления липидов в механизмах срочной и долговременной адаптации к стрессу.- Биол. науки, 1989, N4, с. 5-14.

191. Давыдов Б.В., Голиков П.П. Влияние дибунола на уровень а-токоферола в тканях, мембранах эритроцитов и плазме крови крыс при инфаркте миокарда. // Патол. физиол. и эксперим. терапия,- 1988, N2, с. 33-36.

192. Далидович К.К., Мараховский Ю.Х., Шестаков А.А. Перекисное окисление липидов и антиоксидантное обеспечение при язвенной болезни двенадцитиперстной кишки. // Клин.Мед.- 1988., N. 10,- С. 109-112.

193. Даниляк И.Г., Коган А.Х., Болевич С. Генерация активных форм кислорода лейкоцитами крови, перекисное окисление липидов и антиперекисная защита у больных бронхиальной астмой. // Тер. арх., 1992, № 3, с. 54-57.

194. Дервиз Г.В., Бялко Н.Х. Уточнение метода определения гемоглобина, растворенного в плазме крови // Лаб. Дело,- 1966.- №8,- С. 461-464.

195. Дмитриева Н.В. Симметрийный подход к анализу реовазограммы. // Физиология человека,- 1993, № 5, с. 53-64.

196. Дмитриева Н.В. Симметрийный подход к анализу электрокардиограммы. // Известия АН СССР. Сер. Биол,- 1989,- № 3,- с. 450-456.

197. Дмитриева Н.В. Симметрийный подход к оценке функционального состояния организма человека. // Известия АН СССР. Сер. Биол.- 1990, № 1, с. 52-66.

198. Ерин А.Н., Спирин М.М., Табидзе Л.В., Каган В.Е. Образование комплексов а-токоферола с жирными кислотами. Возможный механизм стабилизации биомембран витамином Е.// Биохимия.- 1983, т.48, N11- с. 1855-1861.

199. Ершов В.И., Коган А.Х., Соколова И.Я. Свободнорадикальные процессы у больных ишемическои болезнью сердца и их механизмы. Свободнорадикальные процессы и перекисное окисление липидов при заболеваниях внутренних органов, М., 1993, С.33-40.

200. Жицкий A.M. Профилактика и лечение привычного невынашивания беременности с использованием антиоксидантов. М, 1989, С. 68.

201. Журавлев А.И. Квантовая биофизика животных и человека. М., 2003, с. 3-212.

202. Журавлев А.И., Веселовский В.А., Живое свечение. М., Знание, 1963.

203. Журавлев А.И., Веселовский В.А., Кощеенко Н.Н. Биолюминесценция. «Труды МОИПа», 1965, т. 21, с. 19-51.

204. Журавлев А.И., Корженко В.П. Хемилюминесценция липидов и скорость роста лососей. ДАН СССР, 1963, т. 152, вып. 2.

205. Журавлев А.И., Меламид А.Е., Свищев Т.М., Ковалева Т.А., Попов Г.А., Регинский Ф.Н. К измерению хемилюминесценции неохлажденным ФЭУ. «Свободнорадикальные процессы в биологических системах», Тез. докл. сипозиума МОИП, М/, Изд-во АН СССР, 1964.

206. Журавлев А.И., Поливода А.И., Тарусов Б.Н. Механизм инактивации радикалов и перекисей естественными антиоксидантами. // Радиобиология,- 1961, т. 1, вып. 1.

207. Журавлев А.И., Тарусов Б.Н. О механизме защитного антиокислительного действия серосодержащих соединений // Радиобиолгия.- 1962, т. 4.

208. Журавлев А.И., Тарусов Б.Н., Есакова Т.Д. Новая физико-химическая особенность раковых опухолей. Труды VIII Международного протворакового конгресса, т. 4, М., Изд-ьо АН СССР, 1963.

209. Журавлев А.И., Филипов Ю.Н., Симонов В.В. Хемилюминесценция и антиокислительные свойства тканей липидов человека. //Биофизика.- 1964.- т. 9, вып. 6.

210. Журавлев А.И., Филипов Ю.Н., Симонов В.В. Хемилюминесценция и антиокислительные свойства липидов человека. В кн.: Биохемилюминесценция.-М.- 1965 - с. 75-90.

211. Зимакова И. Е. // Фармакол. и токсикол., 1977, № 6, с. 684—687.

212. Зимина А.А. Активное выявление больных на ранних этапах развития бронхиальной астмы: Автореф. к.м.н.-Л., 1991.

213. Казанова Г.В., Байкова В.Н., Думбрайс К.О., и др. Изменение показателей перекисного окисления липидов в процессе лечения детей, страдающих различными онкологическими заболеваниями. // Вопр. Онкологии.- 1997.- № 2.- С. 453-456.

214. Казин Э.М., Кураев Г.А., Шорин Ю.П., Лурье С.Б. Использование автоматизированных программ для комплексной автоматизированной оценкииндивидуальных адаптивных возможностей организма // Физиология человека.-1993,- № 3.- с. 88-93.

215. Казин Э.М., Шорин Ю.П., Лурье С.Б. и др. Автоматизированная оценка адаптивных возможностей организма у лиц с различным морфотипом // Физиология человека.- 1992, №1, с. 97-101.

216. Казначеев В.П., Баевский P.M., Берсенева А.В. Донозологическая диагностика в практике массовых обследований населения. Л., Медицина, 1980,207 с.

217. Казначеев В.П., Казначеев СВ. Адаптация и конституция человека. Новосибирск, 1986,148 с.

218. Казначеев В.П., Михайлова Л.П. Сверхслабое излучение в межклеточных взаимодействиях,- Наука.- 1981,- с. 3-23.

219. Калмыкова В. И., Арончик Э. К., Гришина И. М. П Сов. мед.- 1974, № 1, с. 23—28.

220. Калью П.И. Сущностная характеристика понятия "здоровье" и некоторые вопросы перестройки здравоохранения: обзорная информация. ВНИИМИ, 1988, 69 с.

221. Каплан Е.Я., Гукасов В.М. О зависимости между адаптогенным и антиоксидантным действием. П1 Всесоюзная конференция «Биоантиоксиданты», Москва, 1989, том П, с. 28-29.

222. Караш Ю.М., Стрелков Р. Б. Чижов А. Я. Нормобарическая гипоксия в лечении, профилактике и реабилитации,- М.: Медицина, 1988, 352 с.

223. Карпман В.Л., Белоцерковский З.Б., Гудков И.А. Исследование физической работоспособности у спортсменов. Л., 1974, 95 с.

224. Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О. и др. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов. //Лаб. Дело.- 1988,- N5,- с. 59-62.

225. Коваленко Е.А., Катков А.Ю., Семенов В.И. и др. Кислородный режим организма человека в условиях крайних степеней гипобарической гипоксии. // Патол. физиол. и эксперим. Терапия,- 1981,- N4.- с.26-31.

226. Ковальчук Л.А., Хлопась А.А. Регионарный кровоток, секреторная и моторная функции желудка и двенадцатиперстной кишки у больных с дуоденальными язвами // Клин. Мед.- 1988, N. 7, С. 82-87.

227. Коган А. X., Кудрин А. Н., Николаев С. М. В кн.: Свободнорадикальное окисление липидов в норме и патологии.- М., 1976, с. 71.

228. Коган А.Х., Кудрин А Н., Кактурский JI.B., Лосев Н.И. Свободнорадикальные перекисные механизмы патогенеза ишемии и инфаркта миокарда и их фармакологическая регуляция // Патол. физиол.и экспер. терапия,- 1992 №2, С.5 -15.

229. Коган А.X., Лосев Н.И., Бирюков Ю.В., и соавт. О роли легких в регуляции генерации активных форм кислорода лейкоцитами в норме и патологии. // Патол. физиол. и экспер. терапия.- 19911- N 1.- С. 46-49.

230. Коган А.Х., Погромов А.П. Активные формы кислорода, лейкоциты и патогенез гастродуоденальной язвенной болезни,- М., 1991, 27 с.

231. Козлов Ю.П. Роль свободных радикалов в нормальных и патологических процессах: Автореферат дисс. на соиск. уч. Степ, доктора биол. наук (0-91 -биологическая физика), М.- 1968.

232. Козлов Ю.П. Свободно-радикальные процессы в биологических системах. М., Биофизика (учебник), 1968.

233. Козлов Ю.П. Свободные радикалы и их роль в биосфере. Сб. «Актуальные проблемы экологии и природопользования», М., Изд-во РУДН, 2000, с. 18-21.

234. Козлов Ю.П. Сворбодные радикалы и их роль в нормальных и патологических процессах.- М, Изд-во МГУ, 1973.

235. Козлов Ю.П., Данилов B.C., Каган В.Е., Ситковский М.В. Свободно-радикальное перекисное окисление липидов в биологических мембранах,- М., Изд-во МГУ, 1972.

236. Козлов Ю.П., Каган В.Е., Архипенко Ю.В. Молекулярные механизмы повреждения мембран саркоплазматического ретикулума.- Иркутск.- Изд-во ИГУ, 1983.

237. Козлов Ю.П., Скурлатов Ю.И. Свободно-радикальный баланс как «химический регулятор» в био- и экосистемах // Вестник РУДН. Серия: экология и безопасность жизнедеятельности, 2003, № 9, с. 15-19.

238. Колб В. Г., Камышников B.C. Клиническая биохимия,- Минск, 1976, с. 50-53.

239. Коломейцева А.Г., Черненко Т.С. Биохимические изменения в организме беременных женщин. // Акушерство и гинекология, 1986, № 4, С. 22-26.

240. Комаров Ф.И., Калинин А.В. Болезни желудка и двенадцатиперстной кишки / в кн.: Диагностика и лечение внутренних болезней (под. ред. Ф.ИЛСомарова и А.И.Хазанова), М., Медицина, 1992.-T.3.-C.34-110.

241. Конев С.В. Межклеточные контакты,- Минск.- Наука и техника.- 1977.

242. Корман Д.Б. Рак молочной железы и ненасыщенность липидов крови. // Вопросы онкологии,- 1997,- т. 43 №2.- с. 164-170.

243. Крайнова Н.Н., Азарова Т.Е., Розина В.И., Шевко И.Г. и др. Биохимические изменения: в фетоплацентарной системе мать плацента - плод в процессе подготовки организма женщины к родам при осложненной беременности. -Теория и практика, 1998, № 3, С. 25-27.

244. Кузнецова В.А., Тимошенко С.О., Ситникова О.Т. Клиническое значение показателей перекисного окисления липидов в диагностике восполительных заболеваний внутренних половых органов женщин. Вестник Ивановской мед. Акад.- 1997, № 1-2, С. 130-131.

245. Кулаков В.И., Мурашко В.А, Бурлеев В.А. Клинико-биохимические аспекты патагенеза гестозов. Просвещение. М., 1995.

246. Кулиев И.Я., Шведова А.А., Каган В.Е., Красновский А.А. (мл.), Козлов Ю.П. Повреждающее действие света на сетчатку: участие синглетного кислорода и перекисей липидов. // Докл. АН СССР 1982,- т. 263.- с. 1005-1009.

247. Кумерова А.О., Быкова Е.Я., Шкестерс А.П., Леце А.Г. и др. Антиоксидантный статус крови в ранних критических периодах беременности.// Российский вестник перинатологии и педиатрии,- 1999, № 1, С. 27-30.

248. Кущ И.Б. Структурные нарушения эритроцитарных мембран и способ их коррекции у беременных с гестозами. Автореферат диссертации канд. мед. Наук, М., 1988.

249. Ли X. И., Владимиров Ю.А., Деев А.И. Сравнительное изучение действия. карнозина и других антиоксидантов на хемилюминесценцию суспензии однослойных липосом в присутствии ионов железа. Изд-во МГУ, Москва, 1990.

250. Либерман Е.Я, Топалы В.П. // Биофизика.- 1969,- т. 14,- С. 452-456.

251. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия,- М., 1969, с. 341.

252. Лищук В.А. Мосткова Е.В. Основы здоровья: актуальные задачи, решения, рекомендации (обзор). М., 1994, 133 с.

253. Лопухин Ю. М, Владимиров Ю. А., Молоденков М. Н. и др. Регистрация хемилюминесценции составных частей сыворотки крови // Бюл. эксп. биол. и мед., 1983, т. 95, № 2, с. 61-63.

254. Лощилов В.И. Информационно-волновая медицина и биология. Труды IV международной конф. "Новые информационные технологии в медицине и экологии IT+ME'98", Крым, Ялта-Гурзуф, 1998, с. 12-14.

255. Лукьянова Л.Д. // В кн.: Фармакологическая коррекция гипоксических состояний. М., 1989. - С. 11-44.

256. Лукьянова Л.Д., Балмуханов Б. С., Уголев А.Т. Кислородзависимые процессы в клетке и ее функциональное состояние. М., Наука, 1982, 301 с.

257. Максимов А.Л. Прогнозирование адаптационных реакций и оценка физиологических резервов человека в экстремальных условиях среды на основе концепции интегрального маркера. Автореф. докт. мед. наук, Магадан, 1994, 57 с.

258. Малышев В.В., Екимов Е.Н. Фармакологическая коррекция нарушений сократительной функции сердца при стрессе // Бюл. экспер. биол., 1985, т. 97, №8, с. 206-208.

259. Малюгин Э. Ф., Владимиров Ю. А, Беляков Н. А. и др. В кн.: Экспериментальные основы лечения печеночной недостаточности.- М., 1975, с. 19-25.

260. Мансурова Л.А. Воронков М.Г., Слуцкий Л.И. Влияние изопропоксигерматрана на пролиферативную и репаративную функцию соединительной ткани // ДАН СССР.— 1982.—Т. 262. ,V 5.

261. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., 1977, т.1, с. 450.

262. Меерсон Ф. 3. Адаптация, стресс и профилактика. М., 1981, с. 226-230.

263. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. — М., 1988, 256 с.

264. Меерсон Ф.З., Твердохлиб В.П., Боев В.М., Фролов Б.А. Адаптация к периодической гипоксии в терапии и профилактике. М., Наука, 1989, 70 с.

265. Мелихов О.Г. состояние перекисного окисления липидов и антиокислительной системы эритроцитов при различных режимах хронического перегревания. В кн.: Медико-биологические аспекты действия на организм высокой температуры. Смоленск, 1989, с. 19-22.

266. Мелконян М.М., Мхатарян В.Г. Влияние а-токоферилацетата на некоторые биохимические параметры крови белых крыс в условиях акустического стресса // Бюл. экспер. биол., 1985, т. 100, №9, с. 270-273.

267. Могильницкая Л.В., Прокофьев В.Н., Фан А., Жоголев В.В. Влияние гипоксии на состояние мембран и перекисное окисление липидов в легких и крови крыс. Вопр. мед. химии, 1993, №6, с 34-37.

268. Морзкина Т.С., Ригин С.С. и др. 4-й Всесоюзный съезд онкологов, Тез. Докл., Л., 1986, с. 473.

269. Мягков И.И., Бадюк Р.А. Состояние окислительно-восстановительных процессов при инфаркте миокарда и их коррекция // Кардиология. 1984,- т. 24 -№5,-с. 104-106,

270. Нарциссов Р. П. // Арх. анат., 1969, № 5, С. 85.

271. Недошивин Р.В. Биологический метод определения токсичности на мышах с предварительно блокированной РЭС. М., Медицина, 1972.

272. Нейфах Е. А. Тез. Докл. 2-го Всесоюзн. Биохим. Съезда, М., 1978., с. 21.

273. Никонов В.В. Стресс: Современный патофизиологический подход к лечению. Харьков, Консум, 2002, с. 65-80.

274. Новиков Ю.К. Свободно-радикальное воспаление и антирадикальная защита у больных бронхиальной астмой. // Российск. мед. журнал, 1997, т. 5, №17, с. 11431148.

275. Новокшонов А. И. Патогенез, диагностика и фармакокоррекция гипоксии при операциях в условиях длительного искусственного кровообращения: Дисс. докт. мед. наук- М., 1985 48 с.

276. Онищенко Н.А. В кн.: Актуальные вопросы консервации органов,- М.: 1979, ч. 2, с. 18-20.

277. Орлов Ю.Н,, Виленский А.В., Меняев Ю.А. Интегральная электрография человека. Труды IV международной конф. "Новые информационные технологии в медицине и экологии IT+MF98". Крым, Ялта-Гурзуф, 1998, с. 289-290.

278. Осипов В.И. Основы искусственного кровообращения,- М.: Медицина, 1976, с. 250-251.

279. Пак И.В., Трофимова Н.И., Хлопова Е.Н. Характер изменений в системе перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты при привычном невынашивании беременности. Современная диагностика в практике здравоохранения. Самара, 1995, С. 135-136.

280. Палеев Н.Р., Мравян С.Р., Шарапов Г.Н., Григорьева Н.М., Янковская М.О. Диагностическое значение состояния свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы при некоторых некоронарогенных заболеваниях миокарда. М., 1993, С.49-55.

281. Пальмина Н.П. Система регуляции уровня антиокислительной активности липидов клеточных органелл при опухолевом росте. Дисс. на соискание уч. степ, докт. биол. наук, М, 1985.

282. Пасечников В.Д., Ермолаева Н.Ю., Вирганский А.О. Роль местных факторов регуляции сосудистого кровотока в развитии гипоксии слизистой оболочки желудка при язвенной болезни. Тер.Арх., 1988, T.LX., N. 12, С. 74-76.

283. Пестрикова Т.Ю., Григорьев В.Ф. О патогенезе плацентарной недостаточности при гестозе. Акушерство и гинекология, 1990, № 3, С. 37 -38.

284. Петровский В.Б., Ефуни С.Н., Демуров Е.А. и соавт. Гипербарическая оксигенация и сердечно-сосудистая система, М., Наука., 1986, 325 с.

285. Погромов А.П. Применение ГБО в лечении хронических заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки. Дисс. на соискание уч. степ. докт. мед. Наук, М, 1991, 348с.

286. Подопригорова В.Г. Роль свободнорадикального окисления липидов и антиоксидантных систем в патогенезе и саногенезе язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, возможности коррекции антиоксидантами: дисс.док.мед.наук, М., 1998.-329.

287. Полякова Л.В., Бектаева P.P., Лещенко В.И. Опыт лечения эрозивно-язвенных эзофагитов с применением гипербарической оксигенации. Материалы IV Всесоюзного съезда гастроэнтерологов, М. -Л., 1990., Т.1., С. 500-501.

288. Пригожин И. От существующего к возникающему. М.: Наука.- 1985.

289. Прокопенко В.М., Арутюнян А.В., Кузьминых Т.У. и др. Система свободнорадикального окисления и антиоксидантная активность в тканях плаценты при преждевременных родах. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1997, № 12, С. 632-634.

290. Прокопенко В.М., Арутюнян А.В., Кузьминых Т.У., Фролова З.Ф. Свободнорадикальное окисление в тканях последа при недоношенной беременности. Вопросы медицинской химии, 1995, № 3, С. 53-56.

291. Прокопенко В.М., Кошелева Н.Г., Фролова З.Ф., Кроль Т.М. Применение хемилюминотералии при угрозе прерывания беременности поздних сроков. Акушерство и гинекология, 1999, № 4, С. 44-45.

292. Пугаев А.В., Багдасаров В.В. Перекисное окисление липидов как пусковой механизм в патогенезе острого воспаления поджелудочной железы. Свободно-радикальные процессы и перекисное окисление липидов при заболеваниях внутренних органов, М., 1993, С.90-94.

293. Рыболовлев Р. С. В кн.: Гигиена и токсикология пестицидов и клиника отравлении,- Киев, 1965, вып. 3, с. 452—458.

294. Chance В., Nishimura М. // Methods Enz.- 1967.- Vol.X.- Р.641-690.

295. Саидходжаев А. И. // Химия природ, соедин,- 1979, № 4, С. 437-466.

296. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М., Медгиз, 1960, 254 с.

297. Сергеев П.В., Сейфулла Р.Д, Дунаев В.Г., Руднев Ю.Н. Влияние адреналина, норадреналина, дофамина, ДОФА и фенилаланина на перекисное окисление липидов в мембранах митохондрий печени. Бюл. экспертам, биол. и мед., 1975, т.80, N12, с.25-28.

298. Сернов Л. Н., Соколова О. А. Гериартрические средства: Экспериментальный поиск, использование.-Киев, 1990, С. 156.

299. Сидоренко А.Ф., Гацура В.В. Действие комплекса витаминов с окислительно-восстановительными свойствами на течение гипоксии и ишемии миокарда // Фармакол. итоксикол.- 1984,-т. 47 с. 46-50.

300. Сироткин О.С. Научно-технический потенциал двойных технологий ОПК для разработки высоких медицинских технологий. Материалы конференции «4-ый Международный форум Высокие технологии XXI «ВТ ХХ1-2003», Москва, с. 5.

301. Смирнов Л.Д., Дюмаев К.М. Целенаправленный синтез биологически активных соединений на основе Р-производных азотистых гетероциклов. В сб: Целенаправленное изыскание физиологически активных веществ. Докл. 7-го Всес. симп., Рига, 1989, с. 5-44.

302. Смирнова Е.Г., Нижний С.В., Япржинский Л.С. Изв. АН СССР, Сер. Биол., 1982, №4, с. 499-508.325; Снегова Е.А., Ожиганова В.Н. Неиммунные механизмы бронхиальной астмы. Тер. архив, 1990, № 12, с. 116-119.

303. Соколов Е.И., Подачин В.П., Белова Е.В. Эмоциональное напряжение и реакции сердечно-сосудистой системы. М, Наука, 1980,240 с.

304. Ступин И.В., Новокшонов А.И., Пирогова Л.Б. Сопоставление противогипоксического эффекта а-токоферола, НАД и инозина при длительном искусственном кровообращении. Фармакол. и токсикол., 1984, т.47, N1, с.88-93.

305. Судаков К.В. Диагноз здоровья. М., 1993, 122 с.

306. Судаков К.В. Диагноз здоровья.-М,- 1993ю- 122 с.

307. Судаков К.В. Стресс как экологическая проблема научно-технического прогресса. Л., Наука, 1984, 662 с.

308. Суколинский В.Н. Перспективы применения антиоксидантов в комбинированном лечении злокачественных опухолей. Вопросы онкологии, 1990, т. 36, №2, с. 138-141.

309. Сутковой Д.А., Барабой В.А. Неспецифическая резистентность организма и влияние условий высокогорья. Адаптация и резистентность организма в условиях гор.- Киев, Наук, думка, 1986, С. 210-217.

310. Тарусов Б.Н., Журавлев А.И. Биолюминесценция липидов. «Биолюминесценция», «Тр. МОИП», т. 21, М., Наука, 1965.

311. Тарусов Б.Н., Поливода А.И., Журавлев А.И. Изучение сверхслабой спонтанной люминесценции животных клеток, Биофизика, 1961, т. 6, вып. 4.

312. Тарусов Б.Н., Поливода А.И., Журавлев А.И. Обнаружение хемилюминесценции в печени облученных животных, Радиобиология, 1961, т. 1, вып. 1.

313. Тарусов Б.Н., Поливода А.И., Журавлев А.И., Секамова Е.И. Сверхслабое спонтанное свечение тканей животных. Цитология, 1962, т. 4.

314. Фархутдинов Р. Р. // Тер. арх.- 1984, № 8, С. 150-153

315. Фассахов Р.С., Бойчук С.В., Рахматуллин И.М. Роль эозинофилов при бронхиальной астме. Тер. архив, 1992, №1, с. 147-151.

316. Фрлькис Р. А. Комполненты тканевой дыхательной цепи сердечной мышцы и их изменения при инфаркте миокарда: Автореф. на соиск. зван. докг. биолог. Наук,-Харьков, 1971.

317. Фролов В. А. // Бюл. Экспер. биол. и мед.- 1984 №4,- с. 420-423.

318. Хмелевский Ю.В., Розанов А Я. Обмен витаминов при сердечно-сосудистых заболеваниях.- Киев: Здоровья,- 1975 161 с.

319. Храпова Н.Г. Перекисное окисление липидов и системы, регулирующие его интенсивность. В сб: Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. М., Наука, 1981, с. 147-152.

320. Цветков В.Д. Ряды Фибонччи и оптимальная организация сердечной деятельности млекопитающих. Пущино, 1984, 15 с.

321. Чекман И.С., Потемкина Н.Н., Туманов В.А. // Фармакол. и токсикол., 1977, № 1, с. 113-122.

322. Чижов А.Я., Осипенко А.В. О механизмах адаптации организма к дозированной гипоксической гипоксии // Пат. физиол. и эксп. терапия,- 1980, № I, с.69-72.

323. Чучалин А.Г., Солдатов Д.Г. Вирусная инфекция в пульмонологии. // Тер. Архив,- 1992,-№3.-с. 3-15.

324. Шалина Р.И., Кущ И.Б., Орешкина В.П. и др. Роль свободнорадикальных реакций в развитии беременности // Акушерство и гинекология,- 1989,- № 5,- С. 34-41.

325. Шаназаров А.С., Рыскулова Г.К., Байходжоев М.С. Изменение активности супероксиддисмутазы у лиц с различным уровнем устойчивости к гипоксии.- В кн.: Фармакологическая коррекция гипоксических состояний. Ижевск, 1988, с. 145.

326. Шапот B.C. Биохимические аспекты опухолевого роста. М, 1975, с. 304.

327. Шмушкович Б.И., Чеглакова Т.А., Чучалин А.Г. Бронхиальная астма. Механизмы кортикозависимости//Пульмонология,- 1993.-№ 1,- с. 35-49.

328. Щедрина А.Г. Онтогенез и теория здоровья. Новосибирск,- 1989,- 135 с.

329. Щукина М.Я. Активность природных антиоксидантов при адаптации к высокогорью,- В кн.: Фармакологическая коррекция гипоксических состояний,-Ижевск, 1988, с. 147-148.

330. Эмануэль Н.М. Антиоксиданты в пролонгировании жизни. Биология старения,- Л.: Наукаю- 1982,- с. 569-585.

331. Эмануэль Н.М. Физико-химия рака // Природа.- 1982.- № 1.- с. 76-83.

332. Эмануэль Н.М., Лясковская Ю.Н. Торможение процессов окисления жиров,-М., Пищепромиздат,-1961,- с. 359.

333. Яковлев М.Ю., Зубаирова Л.Д., Крупник А.Н., Пермяков Н.К. Альвеолярные макрофаги в физиологии и патологии легких // Архив патологии.- 1991.- №4,- с. 3-8.