Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка биоконверсии отходов переработки зерна в белковые кормовые препараты путем твердофазной и глубинной ферментации их с помощью дрожжевых микроорганизмов

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Разработка биоконверсии отходов переработки зерна в белковые кормовые препараты путем твердофазной и глубинной ферментации их с помощью дрожжевых микроорганизмов"

МИНИСТЕРСТВО ОБЩЕГО И ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОИЗВОДСТВ

'8 ОД На правах рукописи

1 НОЯ 1986 КНЯЗЕВА Ирина Анатольевна

РАЗРАБОТКА БИОКОНВЕРСИИ ОТХОДОВ

ПЕРЕРАБОТКИ ЗЕРНА В БЕЛКОВЫЕ КОРМОВЫЕ ПРЕПАРАТЫ ПУТЕМ ТВЕРДОФАЗНОЙ И ГЛУБИННОЙ ФЕРМЕНТАЦИИ ИХ С ПОМОЩЬЮ ДРОЖЖЕВЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ Специальность 03.00.23 — Биотехнология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

МОСКВА 1996

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте биосинтеза белковых веществ и Московской государственной академии пищевых производств.

Научные руководители: доктор технических наук, профессор В. М. Кантере, доктор технических наук, профессор А. Ю. Винаров.

Официальные оппоненты: доктор технических наук А. Ю. Кривова, кандидат технических наук Н. Ю. Биригой.

Ведущая организация — Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии.

Защита состоится *6 . ноября 1996 г. в A часов на заседании диссертационного совета К 063.51.04 Московской государственной академии пищевых производств по адресу: Москва, А-80, Волоколамское шоссе, 11. 6U¿8 .

Просим Вас принять участие в заседании диссертационного совета или прислать отзыв в двух экземплярах, заверенных печатью учреждения, по вышеуказанному адресу.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГАПП. j у . ~

Автореферат разослан . Л \ ' У . . . 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета — к. т. н., доцент

О. И. Тихомирова

•I» .СЕВЕ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТУ

Актуальность темы. Микробиологическая технология — это перспективное направление биотехнологии, которое изучает закономерности, присущие популяциям микроорганизмов, позволяющие теоретически и экспериментально обосновать метода и режимы получения целевых микробных продуктов с заданными свойствами в оптимальных условиях. Результаты изучения этих процессов являются основой создания различных микробиологических производств. По объему выпускаемой продукции кормовые белковые препараты являются одним из самых многотоннажных препаратов биотехнологической промышленности.

Наиболее перспективным направлением в биотехнологии корловых препаратов сегодня является биоконверсия дешевого возобновляемого растительного сырья. Во всем мире отходы сельского хозяйства широко используется для переработки в полноценный корм путем выращивания на этом сырье микроорганизмов, богатых белком и другими биологически активными веществами. Утилизации сельхозотходов посвящены научные технологические разработки в Германии, Франции и других странах.

В нашей стране, так же, как и во всем мире, ежегодно накапливается огромное количество отходов сельского хозяйства, в частности, соломы-'до 100 юш.т, отрубей злаковых-до 9, гречневой лузги-до 7, фуражного зерна-до 29 млн.т. Потребность животноводства в белке покрывается сейчас только на 75$, а общий дефицат его в стране достигает 5 млн.т.

Наибольший практический интерес представляет отходы зернопере-рабатывашцего производства. Такой интерес связан с тем, что для получения кормового белкового препарата требуется высокое содержание балка, а эти отходы содержат до 60$ крахмала и всего липгь 3-12% белка, поэтому при 'сбалансировании кормов по белку неизбежно происходит непродуктивный перерасход отходов и переполнение кормов углеводным питанием.

Возможность повысить содержание белка в отходах связана с предварительным выращиванием на этих отходах микроорганизмов, например, дрожжей, которые, потребляя углеводы, накапливает в своей биомассе белок и обогащает отхода белком за счет понижения уровня полисахаридов в среде. Поэтому исследования,направленные на биоконверсив о по-иощьо микроорганизмов отходов крупяного л мукомольного производств, можно считать актуальными и персаектизшап. Кроме того, экономически выгоден комплексный подход к рациональному использовании отходов производства, дающий глш г. создзпип безотходной технолога, пагэ-цу использовании сырья.

-А-

О важности и актуальности свидетельствует также и то, что даннэд работа является частью разработки отраслевых договоров и подготовки : федеральной программы по биотехнологии на этапе переработки сырья в кормовые продукты.

Цель и задачи исследований. Целью данных исследований является научное обоснование и сравнительный анализ процесса биоконверсии отходов переработки зерна в белковые кормовые препараты путем твердофазной и глубинной ферментации их с помощью дрожжевых микроорганизмов.

В соответствии с поставленной целью были решены следущие задачи:

- исследование состава различных отходов крупяного и мукомольного производств;

- сравнительная оценка нескольких культур микроорганизмов на их способность накапливать биомассу с высоким содержанием белка на различных средах, сконструированных на основе АПК;

- изучение отобранных штаммов EiJoiwitDpsts filultxpNi 20-9 и Candida ьаШ» Кд-25 при .их глубинном и поверхностном культивировании и сравнительная их оценка по белку и способности расти на отходах АПК;

- разработка условий глубинного способа С. scotttf Кд-25 для получения кормового белкового препарата;

- разработка условий твердофазного культивирования на рост и развитие £. ji-bwCi-jjiPa 20-9, на накопление им глюкоамилазной активности и белка;

- изучение возможности использования отходов мукомольного, крупяного производств, солодовых ростков доя получения кормовых банковых добавок;

- составление лабораторного регламента и наработка опытных партий кормовых препаратов, полученных при твердофазной s глубинной ферментации. ^

Научная новизна

1. Исследована возможность получения кормовых байховых препаратов на отходах АПК при поверхностном и гдубшшоа способах культави-ровашя с использованием дрокевых культур. Найдены шхфооркишаш, аффективно растущие при обоих способах ^гльтявлрокшяя я дацио увеличение на 78-852 содержания белка в кормовых препаратах.

2. Показано,, что £■ ¿¿.bufciger« 20-9 ва разработавшее средах образует до 145-150 ед глшоамилазпой активности ю I г препарата, что позволило использовать его для культивировался па ерэдах, содор-Еззгх драхшдсодеусяцвэ отходы без подработай. Оообоппо хорозий факт бил получен при твердофазной культдвдроглттта.

3. Подобраны условия, позволящие обеспечить максимальное накопление белка, быстрый рост культуры и значительное образование им глюкоамилазы.

4. Проведен скриннинг микроорганизмов, способных утилизировать отходи зерноперерабатывавдих производств. Отобраны два культуры микроорганизмов, способных активно расти на отходах АПК: E.4-Lbu£lgepa 20-9 и C.ücottii Кд-25.

Практическая значимость. Результаты теоретических и экспериментальных исследований по глубинному культивированию дали возможность для сбора всех исходных данных для составления лабораторного регламента на производство кормовых белковых препаратов с использованием врахмалсодержащих отходов (регламент прилагается к диссертации).

Разработаны оптимальные условия для поверхностного кудьтивирова-шш Б. j^bu&ijeoa 20-9, обеспечиващие высокое содержание в культуре, глпкоамилазы и белка, которые,послугат исходными данными для составления лабораторного регламента. Успесно проведена в условиях стендовой установка наработка опытной партии кордового белкового препарата (акт прилагается к диссертации).

Апробашя работа. Основные материалы диссертации бшш дологены па: - конференции молодых ученых БиБ-90, г.Тамбов;

- U около молодых уче1шх в Болгарии, г.Варна, 1990;

- конференции "Елосшзтез деллпяозы п других компонентов клеточной стенки", г.Казань, 1990;

- конференции "Концепция создания экологически чистых регионов", г.Волгоград, 1991;

- конференции "Пути эффективного использования достижений в АПК? г.Чернозцы, 1991.

Публикации, По материалам диссертационной работа опубликовано 5 статей.

Структура л объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения л обзора литературы ( ЧЗс.), методической части ( 1?с.), экспериментальной части, иллюстрированной 12 рисунками и 13 таблицами ( 59с.), выводов (2с..), списка использованной литературы,состоящего из 2IS источников, из них 161 па русском языке, и щшссмшя, и состаз которого входят 3 документа.

Сояоттта работы. Во нгодецип обосновала актуальность таа з определены гздата пмттзего есслсдохшпя.

В сбзорэ лзтертура рассготроз! (Ьотсполоплсспо Ешравлэшм ZCCGZbOCZZZZX огголез пгроработпз рмтптольпого C:ipHI о пегедкз t=s-

-J-

роорганизмов, особенности культивирования их поверхностным и глубинным способами, факторы, влияпцие на эти процессы, особенности а проблемы твердофазного и глубинного способов культивирования микроорганизмов в промышленных условиях. Обобщен мировой опыт применения микроорганизмов в процессах биоконверсии растительного сырья. Уделено внимание сравнению процессов поверхностного и глубинного культивирования и их сочетанию.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использовано 30 штаммов дрожкей, дрожкеподобных микроорганизмов и микроскопических грибов, предоставленных нам из коллекций культур МГАПП и ВНИИсинтезбелок.

Определение общего и белкового азота проводили методом Къелвдаля. Глюкоамилазная активность определялась по Зихерту-Блейеру глюкозоок-сидазнш методом. Количество мшфоорганизмов в препарате определялось путем последовательного разведения и высева на агаризсванные среды. При глубинном культивировании подсчет микроорганизмов проводился в счетной камере Горяева либо непосредственно, либо после разведения. Лигнин определяли весовым методом после удаления гира и других сопутствующих веществ. Клетчатку определяли весовым методом после удаления крахмала в 1,124? соляной кислоте в кипящей водяной бане. Крахмал определяли методом Эверса. Сахара определяли по Бертрану и методу Шо-ыоди-Нельсона. Трудногидролизуемые полисахарида определялись методом Кизеля и Семигановского. Липиды - методом Проскурякова и Чшговой» Зольность - общепринятым методом после сжигания, Вдагность в образцах определяли высушиванием до постоянной массы и вхспресс-иетодом Чкажй.

Культивирование микроорганизмов осуществлялось в колбах на качалках и лабораторной установке для твердофазной ферментации в канатах. Все опыты проводились в 3-5 параллельных в представлены в виде среднеарифметических величин. Отклонения от усредненных величин даны в графическом материале и таблицах.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУДДШЕ

3.1. Исследование состава различных отходов круцяного в мукомольного производств

Существует достаточно большой перечень отходов, состав которых зависят от сорта зерновой культуры, климатических условий при подучо-шш верна, а главное, от обработки верпа па зорпопврерабатыпайцЕх предприятиях. Поэтому шши бшш проведены исследования различных об-

разцов отходов, полученных с мелькомбинатов в г.Оренбурге, Москве, Подольского комбината и кафедры комбикормового производства и мукомольной кафедры МГАШ. В табл.1 представлены данные анализа этих образцов. По одноименным отходам устанавливалось среднеарифметическое значение показателя и указывалось минимальное и Максимальное отклонение от средней величины, поэтому имел место достаточно широкий разброс данных по каждой позиции* Как видно из таблицы, большинство отходов крупяного производства в виде лузги имели содержание белковых веществ от 2,7 до 9,2$, отходы в виде мучек имели содержание белковых веществ больше, и оно колебалось от 17,7 до 34,7$. Однако ориентироваться на отходы в виде мучек нецелесообразно, т.к. они могут быть непосредственно использованы в комбикормах, и их количество на мелькомбинатах было небольшим и неопределенным. Содержание клетчатки для всех видов лузги было очень высоким -от 42,7? (рисовая лузга) до 70,5$ (ячменная лузга) и естественно в 5-10 раз клетчатки меньше в цучках-от 2,0 до 7,5$. Также имеет место значительное отличие образцов по содерганию крахмала: в мучках - от 35,1 до 62,0$, в лузге в 2-5 раз меньше-12,7-27,055. Количество РВ без гидролиза во всех видах отходов было сравнительно небольшим и составляло от следовых количеств.до 3,8$. Содорзанне липидов зависело от ввда отхода. В лузге их было 0,6-1,5$, а в мучках заметно больше-9,1-29,8$. Содержание зольных веществ во всох образдах было примерно одинаковым-1,9-15,0$, причем в лузге зольных элементов было больше, чем в мучке. Интересны данные по кормосмеса. По всем показателям: этот отход является усредненным материалом, в котором несколько выше уровень белковых веществ -примерно на 10-15$ по сравнению с чистой лузгой и сравнительно высокий урозень в образцах: крахмал примерно па 18-20$ низе, чем в мучках и выше на 20-27$, чем в лузге.

3.2. Сравнительная оценка культур микроорганизмов на их

способность накапливать биомассу с высоким содержанием белка на различных средах, сконструированных на основа отходов зергоперерабатшзалцего производства

Задачей настоящего исследования был выбор наиболее активно растущих мшфооргатазиов на отходах переработки зерна пшеницы, ячменя, кукурузы, гречнезой мучки. Сравнительная оценка микроорганизмов проводилась экспресс-катодом, закдочащсмся в высеве исследуемых штан-!.ив па чалки Петря с шштшсст агарззовашпглз сродагл питательными, содерзащпмз соответствующий источник углерода плес минеральные содп среды Иторсопа. Результата лсслодоеоезЯ представлены в табл.2. Из

-.Г-

Епт^эпгз состава отходов крупяного производства

Та&пша I

£3 пп Ешганование отхода крупяного производства Содержание, % к сухим веществам

Белковые в-ва Клетчатка Крахмал РВ без гидролиза Липвды Зольные в-ва

X. Просзпая лузга 2,6-1.4 62,0-65,4 14,0-20,1 0,5-3,8 0,58-0,72 6,0-9,8

2. Цросяшя мучка 25,2-28,1 2,8-5,1 36,0-45.2 0,1-0,48 16,0-21,2 5,9-6,3

3. Грэтвовая лузга 4,0-6,0 53,0-59,7 23,5-27,0 следы 0,56-0.85 5,2-6,0

4. Грсшезая свояка 7,6-9,2 12,0-14,3 56,8-62,0 0,3-0,7 1,6-2,1 3,0-4,2

5. Овсяная лузга 3,0-4,5 48,5-55,0 16,5-19,0 следы 1,0-1,5 10,5-14,0

6. Овсяпзя цучкз 22,8-30,2 5,4-7,5 28,4-35,3 0,1-0,15 20,6-27,3 5,8-8,7

7. йчазнта лузга 2,9-4,8 61,7-70,5 14,0-17,2 0,1-0,3 0,5-1,2 9,3-10,5

8. Я^'эпкая иучка 30,7-33,4 2,9-3,5 35,1-44,5 0,05-0,2 9,1-11,5 4,0-4,9

9. Рисовая лузга 2,7-3,4 42,7-50,2 21,4-25,3 следы 0,6-1,3 11,1-14,2

10. Риоовая иучка 17,7-23,8 2,1-3,0 38,9-42,5 - 25,0-29,8 4,8-5,3

И. Гороховая лузга 5,6-6,4 60,8-66,7 12,7-17,0 0,2-0,4 следы 4,8-5,7

12. Гороховая иучка 29,5-34,7 2,0-2,5 40,0-44,1 0,05-0,15 12,7-17,8 1,9-2,5

13. Шпзкичкыа еародшзи 30,0-32,4 3,8-4,2 30,5-32,8 0,1-0,2 10,0-13,4 2.8-3,0

14. Отход шлифовка зорно-стоев.мучек или юс сяеоь о лузгой -"кормосмвсь" 10,2-13,5 не опред. 20,4-31,1 8,6-10,7 1,2-5,1 не опред.

Таблица 2

Активность роста мицелиальных грибов и дрожжей на плотных питательных средах, содержащих отходы пшеницы, кукурузы, ячменя.

N5 Наименование Основной Увеличение гигантской колонии, Среднесуточное увеличение

№ микро- компонент мм колонии. мм

организмов срелы часы

24 48 72 по субстратам среднее

1 2 3 4 5 6 7 8

1 Trichodcrma Пшеница 8 22 28 9,3 17,95

viride Ячмень 11 28 80 26,6

BKMF-ИЭО Кукуруза - - - -

2 Pénicillium Пшеница 8 13 4.3

vericullosum Ячмень 12 20 6,6 3,9

BKMF-365 Кукуруза 2 3 1,0

3 Geolrichum Пшеница 10 14 4,7

candidum Ячмень 20 50 16,6 9,5

BKMF-2306 Кукуруза 14 22 7.3

4 Pénicillium Пшеница 20 30 10,0

chrysogenum Ячмень ' 30 50 16,6 13,3

BKMF-245 Кукуруза - - -

5 PolyponiS Пшеница 10 25 32 10,7

squamosus Ячмень 24 56 18,6 15,5

BKMF-64 Кукуруза 28 52 17,3

6 Pusarium Пшеница 24 30 10,0

merismoides Ячмень 35 48 16.0 13,6

BKMF-250 Кукуруза 33 45 15,0

7 Trichoderma Пшеница 4 10 3,0

lignorum Ячмень 16 40 70 23.3 17,6

BKMF-426 Кукуруза 14 45 80 26,6

8 Aspergillus Пшеница 22 35 11,7

mger Ячмень - - - 11,7

BKMF-228 Кукуруза - - -

9 Aspergillus Пшеница 13 21 7.0

awamori Ячмень 40 62 20,6 13.6

BKMF-254 Кукуруза 16 40 23,3

10 Oidium Пшеница - - -

pullulans Ячмень 16 18 6,0 5.65

ВСБ-622 Кукуруза 14 16 5,3

И Sporobolomices Пшеница - -

sp. Ячмень 14 20 6,6 7.3

ВСБ-610 Кукуруза . 20 24 8,0

12 Aspergillus Пшеница - -

foelidus Ячмень 30 55 18,3 18.3

BKMF-20gS Кукуруза 28 55 18,3

13 Pénicillium Пшеница 11 12 4,0

terlikowski Ячмень 9 22 7.3 6.4

BKMF-365 Кукуруза 1.5 13 24 8,0 _

Таблица 2 (продолжение)

1 2 3 4 5 1 6 1 7 ' 1 8 1

14 "nchoderma Пшеница 8 9 3,0

reesei Ячмень - - - 3,0

JKMF-2047 (укуруза - - -

15 indomycopsis 1шеница 24 41 20.5

ibuligera 20-9 Ячмень 32 53 13,3 14,1

MTAnn кукуруза 34 43 8,6

16 Candida пшеница 12 24 12

scottic Ячмень - . - 10,0

Ka-25 Кукуруза 34 40 8

17 Candida Пшеница II 26 8,7

tropicalis Ячмень 22 40 10,0 8.8

K-41 Кукуруза 19 38 7.4

18 Candida Пшеница 10 22 7,3

nigosa Ячмень 16 18 6,0 8.6

BCE-576 Кукуруза 32 38 12,6

19 Candida Пшеница 8 11 3,7

rugosa Ячмень 8 ' 28 9,3 6,5

BCE-925 Кукуруза - - -

20 Candida Пшеница 4 12 4,0

utilis Ячмень - - • . 4,0

BCE-651 Кукуруза 12 12 4.0

21 Saccharomyces Пшеница 5 11 3,7

cerevmae Ячмень - - - 3.7

BKMY-1168 Кукуруза - - -

22 Candida Пшеница 2 15 5.0

trofricalis Ячмень - - - 4,8

BCE-166 Кукуруза 12 14 4.6

23 Candida Пшеница 12 18 6,0

scottii Ячмень 6 50 15,6 8.5

BCE-880 Кукуруза 8 12 4.0 •

24 Candida Пшеница 14 25 8,3

mallosa Ячмень - , . 8,3

BCE-899 Кукуруза 20 25 8.3

25 Candida Пшеница 6 4 4.3

boidinii Ячмень • ■ 4.3

BCB-719 Кукуруза -

26 Fusarium Пшеница

merismoides Ячмень 13 35 11,6 11,6

BCE-250 Кукуруза /14 36 11.6

27 Aspergillus Пшеница - . .

flavui Ячмень ЗС 5С 16,6 14,9

BCB-256 Кукуруза 1 6 33 40 13,3

данных таблицы видно, что наиболее интенсивный рост был па средах,содержащих отходы переработки пшеницы, кукурузы, ячменя, наблюдается у микроскопических грибов Aspe^iICus foehiJus , "ТриЬоЛеРгПй /inide. . TntehodeprrM tignopum , Polipopus squamosus Размер колоний варьируется от 15,5 до 18,3 мм, а среди дрожжей наилучшие результаты были получены в опытах с fhclomycopsis PCbuti-

20-9, Cqndida bcoitii Кд-25, Candida -tropicalis k-4I. Размеры'колоний соответственно составляли 14,1; 10,0; 8,8 мм. Исследованиями было показано, что экспресс-метод отбора перспективных микроорганизмов был весьма эффективен. Однако, несмотря на некоторые положительные результаты по росту и развитию у мицелкальных грибов, мы не сочли возможным остановиться на них, т.к. известно много случаев, когда грибы на определенных субстратах могут образовывать токсины вплоть до афлотоксинов, поэтому далее наш выбор был сосредоточен на дрожжах и дрожжеподобных организмах, т.к. они в подавляющем большинстве не обладают токсичностью грибов и наиболее часто используются для обогащения кормов белком, особенно отходов переработки зерна,содержащих значительные количества крахмала и его декстрины и мало белковых веществ. В результате проведенных исследований и анализа для дальнейшего исследования было отобрано три штамма дрожжей: Endomycopsis 20-9 (шшп), Candida ьс-ott i i кд-25 и

Candida -bpopicuUs к-41 (ВШИсинтезбелок).

3.3. Сравнительная оценка отобранных штаммов при их

глубинном и поверхностном способах культивирования

В данном разделе работы основной задачей являлась разработка условий культивирования, обеспечивающих микроорганизму возможность максимального накопления в его биомасса белка. Нами было изучено влияние состава среды на способность дрожжей накапливать биомассу,а для культуры Endom^copsis j^öbußCgsoa 20-9 контролировалось также образование внеклеточной амилазы. Внимание к глюкоамилазе было связано с тем, что ее высокое содержание в культуральной жидкости позволяло исключить процесс предобработки сырья и удешевить производство. По результатам выращивания дрожжей Е.^LbuCtgcpq и С. Scott L i/ поверхностным способом при различном соотношении пшеничных отрубей и солодовых ростков в составе среды была установлена зависимость, которая представлена на рис.1. Во всех опытах ддя обеспечения более высокой рыхлости среды 15$ от общей массы балл заменены на смесь кукурузного гмыха и древесных опилок в соотношении 1:1. Остальные 85$ в каждом варианте менялись от 0 до 85$ и наоборот для

еа

V У I ! 2 < £ S Ъ=> i

\ А. 1 _ <

ч, ч. < i_

— -- t ---

N ч V.— -г- СМ

N S.

_ч

'О h ЧГ --- ----

3

т 1 i. 1 1 Í

el *

F-S -- « 4 --- —

» KJ.

' N v

о ч ч,

ч n 1

Ii

•X S3

Sí

о >. к

* о

N Pi

S Ö Ч

•ч * > а

5¡¡ и S

ч a a

«IfcO» ^

e.2.2»

ír a ч; tojo •

t- «Q Ï41 " ^

- vi

a a и о.

-с

S о

«û o° ^ «1

- w

£ w -

"M vu ¿о ya 'иэжупоа!? YJsvnong

-S-Ь-te-~-ê-а

J/iKü 'ntYVHUVBMlHVJ <3±DQHVHJ.Xy _".

So Q о о а 13 о

¡í¡ ¿ « «а ' «

j/yijti 'iiTvvMuvaitoiyj ъхзвнашяу

^ *—■

" е

^ §5? -S

[S-ïfcg

V :>:? §1$

•V.

«i

«Л ¿T f» "

-Ю-

пшеничных отрубей и солодовых ростков. Из рисунка ввдно, что P.^übu-tógena 20-9 (кривая 2) растет поверхностным способом более интенсивно, чем C.Scott i! Кд-25 приблизительно в 1,5 раза. Вероятно.это можно объяснить тем, что Е у übuti. genot 20-9 образу-

ет значительное количество глюкоамилазы (кривая -j),что позволяет этим дрожжам постоянно иметь легкоусвояемый источник углерода - глюкозу, в то время как С Scott i i Кд-25, не обладая амилазами, испытывает дефицит по углероду и очень плохо растет, поэтому с этим итаммом далее при поверхностном способе культивирования мы не работали. Наилучший результат по Е. 20-9 был получен при соотношении пше-

ничных отрубей и солодовых ростков 65-75/5 к 10-25$ соответственно. Далее по культуре Е. 20-9 были продолжены исследования

по подбору оптимального соотношения древесных опилок и кукурузного гмыха (15-2СЙ) ja неизменном уровне пшеничных отрубей и солодовых ростков (80-85%). Результаты этих опытов представлены на рис.2. На рис.2а приведены данные, где варьируемая часть составляет 15%, на рис.26-20%. Анализ полученных данных показал, что чем больше в среда кукурузного жмыха, тем выше активность глюкоамилазы и больше образовывается биомассы. Опилки заметно тормозят биосинтез и рост культуры. Наивысшие результаты были получены, когда кукурузного жмыха в среде било 18-20%, а опилок не более 2%. В этом случае накапливалось в среде ГлА до 235 ед ГлА/г и биомассы в 1,25 раза больше, чем в контрольном варианте (рис.1).

При глубинном способе выращивания Е. ^¿ХиСС^еиа 20-9 в куль-туральной жидкости определяли твердый нерастворимый остаток, белковый азот в нем, ГлА в фильтрате культуральной жидкости. Результаты представлены lía рис.3. Из рисунка видно, что состав среды имеет очень большое влияние на образование ГлА и накопление биомассы микроорганизма. Накопление биомассы на этих средах зафиксировать очень слогно. Микроскопирование биомассы после ее отмывания от нерастворимой часта показывает,что с увеличением длительности культивирования резко возрастает количество повреяденных и мертвых клеток, поэтому естественно набладается лизис клеток и уменьшение количества биомассы по весу. Уровень белкового азота возрастает, но не очень сильно. Оценивая возможности Е. 20-9 при глубинном культивировании, мы сочли нецелесообразным его дальнейшее использование, т.к. процесс потребовал высоких энергетических затрат при небольшом выходе препарата в маленьком содержания белка. В табл.3 представлены результата скспорз-кента по вырацивании C.s^íti! Кд-25 гдубинньа способом па различных продобработашшх сродзг. Дашше вырспизаюя показывал?, что

Рис. 3. Влияние длительности глубинного культиёи-раЬаиия на Биосинтез глюкалмилАШ И НА OEPAïa&AHUe Биомассы £ndamy-copsis fiSuligera £0-3.

Обозначение ;

<\1 -¡мокоамилашая

Актншсп;г',г-ие-

РА С ТВОРИМАЯ VACTé НерАСГйвРиМОМ VACfMj

i^î-Cfega М'-2; г'х'з' - среда

rtn.

О 12 24 Я 18 60 72 Длительность КУЛЬТИВИРОВАНИЯ, V

Таблица 3

Влияние гидролиза углеводсодержащего компонента среды на рост С. SCOttùl

Цифровое выражение показателей по вариантам

Исследуюмые

показатели

процесса

â I

0 5 § &

1 I

а 3

о 10

ы: о

g ï <S 9-

X

q Т

' g 8.5

Гидромодуль^ 1: 8 1. 8 1: 8 1: 3 1: 8 1: 8 1: 8 1:'3

Температура С 20 40 20 30 30 20 40 40

Время, ч 48 36 48 42 42 48 36 36

РВ(%) в гидропизате

с 0,1 н серной к-той 1,5 2,8 5.0 3,5 1,8 2,7 0,5 1.5

Содержание белка

после выращивания, 20,4 25,8 35,6 30,7 22,5 28,3 15,1 14,2

Прирост белка по 1

сравнению с

сырьём, % 15,0 18,9 24,8 20,8 17,4 21,8 11,5 9,8

-/г-

С.Scottii хорошо растет на всех отходах, давая прирост белка на 17,4-24,8$, несколько хуже рост на кормосмеси -15$ прироста, на содоме -11,5$ прироста и на гречневой лузге 9,8$ прироста. Учитывая,что отобранный штамм не обладает способностью гидролизовать биополимеры среды, возникла необходимость предобработки среда кпслота-ли при гидромодуле 1:8. В данном эксперименте мы использовали серную кислоту, в аналогичных исследованиях с другими кислотами и при изучении влияния температуры на процесс гидролиза данных отходов мы припли к результату увеличения прироста белка по сравнению с исходны:.! сырьем до 55$ при совместном культивировании дрожжей С. Scott- i i Кд-25 и гриба Р. squamosus -64 на гидролизатах зернофуража и кормосмесей. Полученные данные дали основание для составления лабораторного регламента. Таким образом, было показано, что каилучп;:е показателя получаются для Б. ^йЬиСЦегм 20-9 при поверхностном способе культпвироза-ния, а для глубинного способа более эффективно совместное культивирование двух культур: дрожжей С. Scott IL Кд-25 и гриба P. Stfuurflo-ÜUS> -64.

Далее нами было проведено исследование влияния услозий твердофазного культивирования на рост и развитие E.^Lbu^ùgôPq 2С-9,на накопление им ГлА и белка. Изучали влияние длительности культивирования, влажности среды, толщины слоя среды, дозы и возраста посевного материала, а также исследовали возможность замены пшеничных отрубей на другие отходы мельничного и крупяного производств. Контроль проводился по ГлА и содержанию белкового азота в поверхностной культуре. Исследования влияния влажности среды проводились в диапазоне от 40 до 80$ через каждые 5$. Для большей четкости резуль^ты при графическом исполнении были разделены на три группы. На рис.4,5,6 сгруппированы они следующим образом: рис.4 - влажности среды 40,45, 50$; рис.5 - влажности 55,60,65$; рис.6 - влажности среды 70,75,80$. Из рисунков видно, что наибольшее накопление белковых веществ наблюдается во всех случаях к 24-25 часу, а ГлА - к 36-40 часу культивирования, но в это время заметно снижался выход культуры по массе.

Сопоставляя все полученные данные по абсолютным величинам,можно было придти к выводу, что наилучшие и стабильные результаты по всем показателям получаются при влажности 60-65$, но все же разброс данных был достаточно большим. Для большей наглядности все полученные на рис.4,5,6 результаты были по своим максимальным величинам для каждой влажности обобщены на рис.7. Действительно, только при влажности среды в 60$ можно было получить при 24-часовом культивировании наивысший выход белковых веществ примерно 185 мг белка/г и сравни-

2ч ¿Ь 48 63 0 12 24 5Ь В ЛИ ТСЛ ьН ОСТЬ КУЛЬТИБИРОЬАНИЯ., Ч.

Рис.А Влияние ьлалности среды на нлкопление ГлЙ, велкл к нл ьыхад культуры от массы исходной среды (ц'.к^ры на ет^аых' — °/а Е.ла>ккоети ие/едной со еды: 40,45 ц50)

о 1г гч зь ч! 60 о п

длительность культиьиров.ани я, ч. .

Рис.5 Влияние влажности среды на скопление ГлА Ьелкд i на выход ю/лшры £.+1би^ерлго-9 от массы иааднаи £рбаы (цифры на крибых —%мажн0сги исшнаи с?еды: 55,60 и ь5)

-/У—

гч и, ч8 во о « гч it те го

длительность культ ив иро ьа h ия, ч.

Рис.6. Ьлиямие влажности среды на кахсп/.ение белкд и на выход культуры от ¡чассы исходной среды (чифры на кривых — % влажности неходкой cpe^w: 70;75u80)

обозначений: tfWpbi гч'й^ОчАесб - Время ЬЪЯТИЯ ПМб*НА АНАЛИЗ

усло1ия_ппыта: SaceË о 30мм;

-tib't ; таи чзчасс4

tu 30 4Q алАчсиасть исходной питлтельной

s0 60 70 СРедя ,"/»

Рыс.7. Зависимость нАкаплении й культуре и

йыхода культур*! по млсхе от исходной гьлАжна£7И ср«аы

телько высокую,ГлА - 150 ед/г при выходе культуры по массе в 60$ от исходной ареды.

Далее представлялось целесообразным вновь провести исследование процесса культивирования во времени при влажности 60$ в нескольких параллельных. Результаты этих опытов представлены на рис.8. Из рисунка видно, что наиболее важно проводить культивирование с целью получения кормовой добавки не более; 24 часов. Необходимо отметить, что во всех, опытах наблвдается после 24 часов роста культуры некоторое снижение в культуре белка, вероятнее всего, это связано с тем, что свободные азотистые вещества до э.того времени полностью потребляются культурой и далее вдет гидролиз этих соединений и -расход их на процессы жизнедеятельности организма.

о 12 гч а ч« т о 12 гч зь и ео

Длительность культи ан ро ьа н и я , ч Рис.8 Влияние длительности культивирования нарост ку;ьтуры> : накопление ГлА и Белкл ( \Л/ = 60% ,зске6 0,5'/с1Ь 30мм, t 30°С}.

В следующей серии опытов мы изучали влияние температуры воздуха в камере и подаваемого для аэрации на рост культуры, накопление белка и образование ГлА. Каждая серия опытов проводилась в 6 повторнос-тях на выбранной среде, при влажности среды 6С$, высоте слоя 30 ш и длительности культивирования 24 и 40 ч. Результаты исследований представлены на рис.9. Из рисунка видно,что отступление в ашбув сторону от выбранного диапазона температур 28-32°С неизбежно приводило

!

ги г к гв до зг » зь зг

гч ¿ь гг ¡а зг м зь 28

теипературл врастильной кап ере и паддалемсго Рис.9. Ьлияние темперлтуры Воздуха в клмеяе и подаВАЕМОГО еСЭЛУХА ДЛЯ аэрации на рЗСТ КУЛЬТУРЫ О^РА30-

в а.... п г. а 1гпаи а <1 п .... i....._....../-7- он . i.'« . . _ вч

-4 л

"3150 о

5? 55 Ч

а- ЗИ5

5 50

-л

а "а ""

а £10 3 ,3 1-

г

'ix

•р %

Й 7« ■Я м

|С5 § .x •о ? а

Я еа .4

л* (о С.

! ! о о зВД V а. и1й и о 0 1)0 1'Л ь< |и 1 V 32 5! 1 ■о § си О. -? -О 5»" а: л 5 66 о X 555 < < ая-

! ! 1 1

.л г Г•' N \ / —■ \ N.

1 \ { \ ); / \

1 \ /1 \ л- Д. \ (

• ! 1 л ✓ / / > 1 / ч ( N -- >-• ¡г' \

/ ¡¿/Г / \ \

/! ! / / \ 1 \

г 1 Б' 3 1 1 1 Гл Л

: 1 М _1. 1-1,..- 1 1

1!5

Ш Си СШ

•з «Г о *

к»г!

о,

ю ш

5 <0 15 10 45 N94$ $0 55 5 10 15 20 55 М »5 43 45 50 65 Высота слоя питательной среды, мм

Рис.10 Влияние высоты слоя питАтельной среды на рзст культуры,ОБрмовАний глюкоомилааы -и о ел к А - ЗДчаса; 60% 0,5% , 13>о° С)

- /А

к снижению биосинтеза глюкоамилазы и уменьшению уровня белка в культуре. Ка основании результатов этих оштов можно сказать, что оптимальной температурой является 30°С ± 1*-2°С.

Известно, что высота слоя питательной среды имеет очень большое значение, т.к. очень большой слой среды может вызвать перегрев вуль-туры, а малый - способствует подсыхании среди в процессе роста ыикро-оргашзма. Поэтому далее в напей работе мы исследовали влияние толщины слоя ка все параметры культуры. При поверхностном способе культивировало проводили на той г.е среде, влажность которой после засева в стартовый момент б^та 60$, засев осуществлялся 60-часовой посевной культурой в количестве 0,5$, выращивание проводили в кюветах при ЗСРС в течение 24 ч. Кагдий вариант ставился в 6 позторностях при варьируемой толике слоя среды от 5 до 55 юл. Все опыты проводились на одной партии отходов, исходное содержание белка было одинаковым -143,4 л1 белка на I г среды. Результаты этих исследований представлены ка рис.10. Анализ данных показывает, что при очень высокой толщине слоя наблюдается очевидная тенденция падения содержания белка в культуре до 153-157 мг белка/г, т.е. црирост составляет только 10-14 мг/г, что свидетельствует о том, что рост культуры происходит только с поверхности и что имеет место серьезный перегрев культуры за счет плохой аэрации центральных слоев среды в кювете (кривая 3). Температура внутри растущей культуры только при толщине слоя -5-30 им не поднимается выи;е 30-31°С, дальнейшее увеличение толщины с 35 до 55 мм сопровождается ростом температуры в корже культуры, что приводит к остановке роста культуры (кривая 4). Очень тонкий слой в 5-10 мм не может обеспечить условия для нормального развития микроорганизма, т.к. действительно имеет место подсыхание и снижение влажности в культуре, что тормозит рост и ¡¡акоплекие белка и глюкоамилазы (щ>и-вая 5). Уровень белка стабильно достигает максимальной величины 183-185 мг белка на I г при толщине слоя 20-35 мы.

В ранее проведенных работах Садовой А.И. и Лосяковой Л.С. было установлено, что оптимальный возраст посевной культуры - 60 часов, поэтому нашей задачей было определение дозы посевного материала при поверхностном способе культивирования и влияние его на биосинтез белка, накопление глюкоамилазы и выход культуры. Среда, на которой определялась оптимальная доза посевного материала, состояла из 65$ пшеничных отрубей, 15$ солодовых ростков и 20$ кукурузного жмыха, при высоте слоя 25 мм, влажности среды 55$, температуре культивлро-вания 30°С. Каждый вариант засева ставили первоначально в 3 параллельных опытах, а затем для более тщательного определения еще повто-

ряли в указанном диапазоне в 6-кратной повторности. Результат этих исследований представлен на рис.11. Из предстазлекньк результатов видно, что более низкая дозировка посевного материала, чем 0,5% ке обеспечивает достаточной скорости роста микроорганизма за 24 ч, а более высокий (виде 0,7$) процент засеЕа, правда, приводит к небольшому увеличению ГлА, но зыход культуры снижается, и, самое глазное, несколько поникалось содержание белка в культуре.

При изучении возможности использования отходов мукомолы; ;го и крупяного производств и отходов гшвоваре:ЕЯ-солодовых.ростков-для получения кормовых белковых добавок мы учитывали, что Ё.^СЬиСйзеосХ 20-9 весьма чувствителен к наличию в состазе среды лшщдов, которые способствуют более, интенсивному росту микроорганизма и образования им глюкоамилазы. Поэтому мы отбирали образцы отходов, имеюцио повышенное содержание липидов. Результаты анализа отобранных для эксперимента образцов представлены в табл.4.

Таблица 4

Характеристика отходов крупяного, мукомольного производства и солодовых ростков, используемых в средах для получения кормовой добавки при Т5Й Е.20-9

Наименование Содержание в отходах, %

пп отходов Белок (белк.Ях6,25) РВ без гидролиза Крахмал по Ззерсу Липиды

I. Пшеничные

отруби 15,0 4,75 22,9 3,20

2. Рнаные отруби 16,9 5,40 21,0 3,25

3. Просяная лузга 4,0 3,0 18,0 • 0,71

4. Просяная мучка 22,0 0,42 45,2 21,20

5. Пшеничный зародыш 32,4 0,15 30,5' 13,38

6. Овсяная лузга 4,5 следы 18,5 1,50

7. Овсяная мучка 28,9 0,15 34,5 27,30

8. Гороховая лузга 6,4 0,35 16,8 0

9. Гороховая мучка 34,7 0,15 42,5 17,8

10. Рисовая лузга 3,4 следы 25,3 1,30

II. Рисовая мучка 21,8 0 40,5 29,8

12. Гречневая лузга 4,5 следы 27,0 0,85

13. Гречневая сполка 9,0 0,65 58,8 2,10

14. Ячменная лузга 4,8 0,28 17,2 1,15

15. Ячменная мучка 33,4 0,20 44,0 11,50

16. Солодовые росткп 4,0 8,1 20,6 1,80

-з 50

180

70

60

0,1 С,Ь 0,5 0,7 0,9 1,1 1,1 1,5 1,7 1,9 г,1

Кодичестао вносимого посевного мдтеРИАм',%

Засее. 60-ти часовой культурой £.}16 ийрыаго-д^ '-изучалась 2Ч-гасоёа4 •К-ЦлЬтурД слоя - 30 мм, темперАтурА культиьиро-вания зо°с.Влажность Р.ср^ы - <го°1.

о,| о,г о,5 о,т о,9 1,1 1,1 «,5 1,7 1,9 г,1 г,з , Количества ьносимого посеоиого мАтериала,/о

Рис.II Влияние каличестьл посевного ма-терилАА на рост культуры Е.^биС^ега 20-9, НАкоплеиие велкА,образование глюкоами-

ЛАЗЫ И ВЫХОД СУХОЙ МАССЫ КУЛЬТУРЫ НА

24-тый час её роста.

Из таблицы видно, что воо отходы заметно отличается по своему составу: у мучек - высокое содержание белка, крахмала, липддов.а лузги содержат значительно меньше крахмала и белка. Следует отметить,что при общих положительных показателях для мучек этот отход содержит много мелкой фракции, неблагоприятно воздействующей на структуру питательной среды, давдей комкование и уменьшающей доступ воздуха к растущей культуре. Поэтому далее в работе с учетом всех возможных особенностей интуитивно было сформировано 10 различных сред,содержащих на фоне пшеньчных отрубей, солодовых ростков, ржаных отрубей добавки мучек и лузга различных культур. Далее в работе все эти 10 сред были апробированы и еще испытаны 3 варианта кормосмесей, непосредственно полученных с зерноперерабатывающих комбинатов. На этих вариантах сред проводили выращивание 2иЬиСо5й\>а 20-9 поверхностным способом в разработанных нами условиях. Изучение и оценка каждого варианта среды проводились единовременно в 6 параллельных кюветах,т.е. при полной загрузке растильной камеры. Полученные культуры в каждой из 6 кювет анализировались отдельно, а затем из этих результатов рассчитывали среднеарифметический показатель, и эти величины помещались в таблицу. Результаты этих исследований представлены в табл.5.

Таблица 5

Сравнительная характеристика кормовых белковых добавок, полученных при поверхностном способе культивирования ЕЫот^сор^с, ^оЬиССде^ 20-9 при использовании сред, сконструированных из отходов мукомольного, крупяного производства и солодовых ростков

Варианты сред Характеристика 24-часовои культуры Прирост белка

Выход, % Глшоамн- Белок

от сухой лазная (белк.Я х мг на г % к исход-

кассы ахт-гть, ед/г х 6,*2â? культуры ному белку

исх.среды мг/г

Среда й I 83,9 109,4 159,8 41,3 34,85

Среда ß 2 , 81,4 118,8 128,5 42,5 49,42

Среда й 3 '80,1 124,4 187,1 61,0 48,37

Среда й 4 79,7 115,0 234,1 60,2 34,62

Среда й 5 84,8 95,7 137,8 36,1 35,43

Среда й е 82,0 101,1 185,6 45,6 32,36

Среда й 7 81,0 85,7 212,3 51,2 34,48

Среда й 8 77,8 125,8 224,0 63,8 39,83

Среда й 9 81,2 101,3 157,3 52,6 50,24

Среда й 10 79,7 107,2 200,5 54,0 36,86

Среда ß il-A 78,9 101,0 174,0 60,4 53,17

Среда й П-Б 79,3 100,5 194,4 59,3 43,83

Среда ß II-B 83,7 117,4 140,1 38,6 38,30

Из таблицы видно, что Ё. ^Lbutügenq 20-9 достаточно хорошо растет на всех изучаемых средах. Однако прирост белка был различен. Прослеживается определенная закономерность: увеличение ГлА. почти всегда связано с повышенным содернанием в среде лшщдов - среды 2,3,4,8, 10 и II-B - ГлА от 107,2 до 125,8 ед/г. Молено было бы предположить, что наибольшей прирост белка в % долген соответствовать наивысшей ГлА, но это не всегда имеет место. Наибольший прирост белка в мг/г больше коррелировался с выходом готовой культуры. Выход культуры на 24 час ее роста составляет от 77,8;1 (среда 1в 8) до 84,8$ (среда !Ь 5). Иными словам, экспериментально доказано, что отходы переработки зерновых культур могут с успехом использованы быть для получения кормовых препаратов, обогащенных микробным белком.

ВЫВОДЫ

1. Проанализировано большое количество различных отходов мукомольного к крупяного производств, в том числе несколько вариантов пшеничных и ржаных отрубей. Установлено, что большинство отходов крупяного производства имеют: содержание белковых веществ для отходов, сосгояцкх из наружных оболочек зерна - 2,7-9,2$ и дая отходов в воде мучек - 17,7-34,7/0. Учитывая то, что отходы в виде мучек непосредственно используются в комбикормовой промышленности и имеют пылевидную структуру, в нашей работе для работы были выбраны отруби и кормосмеси.

2. Проведен скрининг микроорганизмов, относящихся к различным родам, на способность их расти на зерновых субстратах. Показано,что наилучше результаты получаются с двумя видами дрожжевых организмов: Е. Hbutlgepq 20-9 и C.Scüfc.tu Кд-25.

3. Проведен сравнительный анализ отобранных штаммов при их глубинном и поверхностном способах культивирования. Показано, что наилучшие результаты при поверхностном способе наблюдались у Е. ^i-Ьч-Ltg^nq 20-9, а для глубинного-С.Scottct Кд-25.

4. Установлено, что Е. ^ibutißanet 20-9 помимо обогащения субстрата белком биомассы также образует глюкоамилазу, которая способствует усвоению крахмалсодержащего сырья без его предварительной обработки. При глубинном культивировании C..Sc-°tbü Кд-25 необходимо проводить кислотный гвдрояиз полисахардцов мельничных и крупяных отходов.

5. Показана возможность совместного глубинного культивирования С. s>cofctLi, кд-25 и Р. Squamosus -64 на гпдролизатах зернофурака и кормосмесей, позволяющая получить дополнительноо увеличение прироста белка по сравнению с исходным сырьем до 55%.

6. Разработана новая питательная среда для твердофазного культивирования Е.^ЫСидепа 20-9 следующего состава: 65$ пшеничных, отрубей, 15$ солодовых рсстков, 18-20$ кукурузного ззмыха и 0-2$ березовых опилок,- обеспечивающая накопление максимального содерглния белка в готовой культуре 183-185 мг/г и активность глнкоамклазы - до 145-150 ел/т.

7. Разработаны условия твердофазной ферментации Ь.-J(.buCujePa 20-9, обеспечивающие биосинтез белка и глюкоамилазы (длительность роста, величина засева, температура, толщина слоя, влажность среды), определен выход культур в 80$ от сухой массы среды.

8. Показано, что дрожжеподобный микроорганизм Е. -vi-but^^1"* 20-Э достаточно эффективен и на других средах, кроме кормосмесей. Практически на всех средах наблюдается в готовом препарате увеличение содержания белка в 1,4-1,5 раза, а гликоамилазная активность накапливается от 85,7 до 125,8 ед/г. Установлено, что с ростом глюко-амилазной активности наблюдается увеличение з среде липццов. Выход -готовой культуры в зависимости от состава среды может изменяться от 77,8 до 84,8$.

9. Разработанные технологии кормовых белковых препаратов апробированы в укрупненных стендовых условиях. По результатам проверки получены акты испытаний и опытные партии кормовых препаратов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Князева ИЛ., Вислоух В.А., Воробьева Г.И., Винаров А.Ю. Биоконверсия мельничных отходов в белково-утлеводшй корм // Материалы конференции молодых ученых "БиБ-90". Тамбов, 1990. С.100.

2. Князева И.А., Вислоух В.А., Винаров А.Ю., Кантере В.Ы. Оптимизация биотеошологического процесса утилизации сельскохозяйственных отходов // 1У школа молодых ученых. Варна, Болгария,1990. С.7-8.

3. Вислоух ВД., Воробьева Г.И., Винаров А.Ю., Князева И.А. Ферментативный гидролиз рисовой лузги // Ш Всесоюзная конференция "Биосинтез цзллвдозы и других компонентов клеточной стенки". Казань, 1990. C.I08-I09.

4. Вислоух ВД., Воробьева Г.И., Князева И.А., Рыбалтовская Н.Б. Впоконверсия растительных отходов // Комбикормовая промышленность. 1990. .'5 3. С.22-24.

5. Впогоух ВД., Кпязова ИД., Воробьева Г.И., Впкаров А.Ю., Рыбал-Т02ская Н.Б. Получопиэ биомассы дрожжей па смешанном субстрате

о пспсльсогашгсм бпоотицузяторов // Передовой производственный

опыт в мод. и микробиол.пром., рекомецд. для внедрения; Научно-технический информац.сб.статей. 1990. Вып.З. С.30-36.

6. Выслоух З.А., Князева И.А., Воробьева Г.И., Винаров А.Ю., Сидоренко Т.Е. Использование отработанной вдльтуральной жидкости производства ЕВК на н-парафинах для получения корма на основе гвдролизатов растительного сырья // Передовой производственный опыт в мед. и микробиол.пром., рекоменд. для внедрения: Научно-техн.информ.сб.статей. I9S0. Вып.З. С.50-53.

7. Выслоух В.А., Князева И.А., Воробьева Г.И., Винаров А.Ю. Некоторые способы предобработки растительного сырья и их биологическая оценка // Передовой производственный опыт в мед. и мшфобиол. пром., рекомевд.для внедрения: Научно-техн.инфорл.сб.статей. 1989. Выи.4. С.1-5.

8. Выслоух В.А., Воробьева Г.И., Винаров А.Ю., Миносян МЛ.., Князева И.А. Белковая добавка на основе зернового сырья // Тез.науч-но-теор.кокф. "Концепция создания экологически чистых регионов". Волгоград, 1991. С.8.

9. Князева H.A., Выслоух В.А., Воробьева Г.И., Винаров A.D., Канте-ре В.М. Биоконверсия мельничных отходов в белково-углеводный корм // Тез.Всес.коир. "Пути эффективного использования достижений в АПК". Черновцы, 1991. С.II.

10. Князева И.А., Чернышева Т.Г., Выслоух В.А., Винаров А.Ю. Деструкция отходов сельского хозяйства различными микроорганизмами // Мед.пром. и биотехн. Наука, произв., маркетинг: Информ.сбор-ник. 1992. Вып.№ 5-6. C.6-I2.

11. Лабораторный регламент на производство кормовых белков из крах-малосодернащего сырья // ЛР 64-5461-44-90.