Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка бентонитового диагностикума для индикации радиоиндуцированных токсических соединений

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка бентонитового диагностикума для индикации радиоиндуцированных токсических соединений"

На правах рукописи Гайнуллин Руслан Рустамович

РАЗРАБОТКА БЕНТОНИТОВОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ИНДИКАЦИИ РАДИОИНДУЦИРОВАННЫХ ТОКСИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ

03.00.01 - Радиобиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

(Л

. - • "3 1 " V.'..—

Казань - 2009

003465576

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности

животных» (ФГУ «ФЩРБ-ВНИВИ») г. Казань

Научный руководитель: - доктор ветеринарных наук, профессор

Низамов Рамзи Низамович Официальные оппоненты: - доктор биологических наук

Асланов Рашид Михайлович - кандидат биологических наук Позднякова Надежда Михайловна

Ведущее учреждение: ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита диссертации состоится « » ^ 2009 г. в 10 ч на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (420075, г. Казань-75, Научный городок-2, ФГУ «ФЦГРБ-ВНИВИ»),

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань).

Автореферат разослан «С » ^-^^2009 г.

Ученый секретарь диссертационного л

совета, кандидат ветеринарных наук,

старший научный сотрудник / В.И. Степанов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность проблемы. В связи с сохранением опасности возникновения аварийных ситуаций в атомной промышленности, возникает необходимость быстрого решения ряда медицинских и ветеринарных проблем по ранней лабораторной диагностике острых лучевых поражений.

В условиях массовых радиационных поражений, требующих проведения сортировки пострадавших, когда большинство надежных клинических признаков лучевого поражения отсутствуют, а имеющаяся симптоматика весьма неспецифична и полиморфна, использование арсенала традиционных методов для диагностики лучевой патологии (дозиметрических, клинико-гематологаческих, биохимических,

эндокринологических, патофизио-, патоморфологических и т. д.) является < мало эффективным. (Мазурик В.К., 1987). В этой ситуации единственным источником количественной информации о наличии и тяжести лучевого поражения становятся биологические показатели (Гембицкий Е.А., Владимиров В.Г., 1978), в частности иммунохимические (Клемларская H.H., 1977; Киршин В.А., Низамов Р.Н., Конюхов Г.В., 1999).

На основании работ основоположников отечественной радиационной иммунологии (Киселев П.П., 1960; Петров Р.В., 1962; Троицкий В.Л., 1965; Клемпарская H.H., 1975) и их последователей (Киршин В.А. и др., 1991), стало очевидным, что лучевая болезнь представляет собой вторичный иммунодефицит, сопровождающийся накоплением в организме радиотоксических продуктов оксидативной модификации (анафилотоксины, радиотоксины), обладающих антигенными свойствами и, персистируя в крови, органах и тканях, создают эффект антигенемии (радиотоксинемии). Сказанное является надежной и перспективной основой для разработки методов ранней иммунодиагностики лучевого поражения (Иванов A.A., 1981). '

С учетом изложенного в отделе радиобиологии ФГУ «ФЦГРБ -ВНИВИ» были проведены исследования, в результате которых были

разработаны иммунофлуоресцентная, иммуноферментная, серологическая и аллергическая тест-системы для иммунодиагностики лучевых поражений. В практических условиях наиболее приемлемым и удобным является РНГА -тест с использованием эритроцитарного диагностикума. Вместе с тем, воспроизводимость РНГА ограничивается высокой чувствительностью эритроцитов к колебанию факторов внешней среды (pH, температура, наличие химических веществ), ведущих к инактивации эритроцитарного препарата (Каральник Б.В., 1976). Для преодоления указанных технологических трудностей рядом исследователей были использованы химические сорбенты, в частности, бентониты, которые в реакции бентонитовой флокуляции (РБФ) значительно превосходят по своей активности известного аналога - РНГА по таким важнейшим параметрам, как чувствительность, стабильность и время исследования. Вместе с тем известно, что используемые в ветеринарии и животноводстве бентониты в качестве сорбентов тяжелых металлов, токсикантов и радионуклидов, весьма вариабельны по минерало - химическому составу, а бентониты Татарстанской зоны относятся к средне- и низкокачественным вариантам бентонитового сырья, что диктует необходимость активации минеральных сорбентов, приводящей к значительному повышению их сорбционной способности как по отношению к токсикантам, так и по отношению к микробным антигенам и антителам (Мерабишвили М.С., 1975; Пручкина З.В. и др., 1982; Бударков В.А., 1999; Лысенко Н.П., 1999; Маяков Е.А. и др., 2002; Тремасов МЛ. и др., 2004; Ежкова A.M., 2005; Антипов В.А. и др., 2007; Шкаева H.A., 2008; Wallace R., 1970).

Учитывая, что поиск методов и средств повышения эффективности иммунологических тест-систем для индикации радиотоксических веществ в организме животных и животноводческой продукции, а также изучение возможности замены биологического сырья на природные (химические) иммуносорбенты при изготовлении стабильных диагностикумов,

представляет одну из актуальных задач иммунохимии, нами были предприняты настоящие исследования.

1.2 Цель и задачи. Целью настоящих исследований являлась разработка технологии изготовления противорадиационного антительного бентонитового диагностикума для индикации радиоиндуцированных токсических продуктов в организме животных.

: Исходя из цели, на разрешение были поставлены следующие задачи:

1. Отработать оптимальные условия активации бентонитового сырья для использования его в качестве иммуносорбента в реакции бентонитовой флокуляции (РБФ).

2. Получить высокоактивные и специфические антигены, противолучевые гипериммунные сыворотки и иммуноглобулины для конструирования антительного бентонитового диагностикума (АТБД).

3. Сконструировать бентонитовый диагностикум и испытать его эффективность на лабораторных и с.-х. животных.

1.3 Научная новизна. Впервые разработана технология изготовления высокочувствительного и специфичного противолучевого антительного бентонитового диагностикума для специфической индикации радиоиндуцированных антигенов в организме облученных животных в реакции бентонитовой флокуляции.

С учетом возможности применения полученного АТБД при серолошческой диагностике лучевых поражений животных, определены диагностические критерии лучевой болезни, предусматривающие обнаружение радиоиндуцированных антигенов в исследуемых пробах (сыворотке крови, плазме, лейкоцитах, внутренних органах) в титрах - 1:8 -1:512. Показано, что наличие изучаемого антигена в. исследуемых пробах в титрах, превышающих диагностический на 3 шага разведения является неблагоприятным прогностическим признаком, ведущим к радиационной гибели животных. Научная новизна подтверждена патентом РФ № 232476.

1.4 Практическая ценность работы. На основе сравнительного изучения эффективности различных иммуносорбентов предложен диагностикум нового поколения - антительный бентонитовый диагностикум для обнаружения радиомодифицированных оксидативных макромолекул (РМОМ) в организме животных. Результаты исследований будут использованы при разработке методических рекомендации по получению и применению бентонитового диагностикума для индикации радиотоксических веществ (РТВ) в сыворотке крови, органах и тканях облученных животных.

1.5 Основные положения, выносимые на защиту.

1. Оптимальные параметры улучшения сорбционных свойств низкосортного бентонитового сырья.

2. Условия получения органомонтмориллонитовых комплексов на основе бентонита и специфических иммуносорбентов.

3. Применение бентонитового диагностикума в реакции бентонитовой флокуляции для индикации радиомодифицированных оксидативных молекул в организме.

1.6 Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных сессиях Ученого совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по рассмотрению отчетов о НИР (Казань, 2005-2008 гг.), научно-практической конференции молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (Казань, 2007-2008), Всероссийской научно-практической конференции ФГОУ ВПО «КГАВМ им. Н.Э. Баумана» (Казань, 2007), Российской научной конференции Военно-медицинской академии (Санкт-Петербург, 2008). .,..,..„

1.7 Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 2 статьи в рекомендованных ВАК изданиях.

1.8 Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 146 страницах компьютерной верстки, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов

исследования и их обсуждения, выводов, предложений производству, приложений. Работа иллюстрирована 18 таблицами. Список использованной литературы включает 222 наименований, в том числе 42 зарубежных авторов.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследования

Работа выполнена в 2006-2008 гг. в лаборатории радиационной иммунологии и радиационных методов исследований отдела радиобиологии ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ».

В экспериментальных исследованиях были использованы: 155 белых крыс 6 месячного возраста, живой массой 180 - 200 г, 15 овец породы «Прекос» 1,5 - 2 летнего возраста живой массой 30 - 50 кг; нативные и очищенные супернатанты гомогенатов, нормо-, крио- и термоэкстракты органов и тканей (печени, почек, селезенки, лимфатических узлов, кишечника, интимы сосудов, кожи) облученных сублетальными и летальными дозами гамма - излучений (контрольный антиген) и аналогичные объекты от необлученных (отрицательный контроль) лабораторных животных, ожоговые (гетерологичный контроль). В качестве стандартного лучевого антигена в серологических (РНГА, РБФ) использовали хиноидный радиотоксин, полученный из печени облученных в летальных дозах белых крыс, убитых на 10-е сутки после радиационного воздействия и этаноловые экстракты из облученного картофеля; нормальные (негативные) сыворотки крыс, лошади; специфические противолучевые крысиные и бараньи гипериммунные сыворотки, экспериментальные серии противолучевых антирадиотоксических сывороток.

В качестве потенциального иммуносорбента для исследований испытали 3 образца бентонитовых глин Березовского, Тарн-Варского и Биклянского месторождения Республики Татарстан, 27 вариантов -модификантов бентонитов, 6 экспериментальных серий бентонитовых диагностикумов, в качестве стандартного иммуносорбента использовали эритроциты барана. В качестве объектов индикации лучевых антигенов

служили пробы периферической крови, фракционированной на сыворотку, плазму, форменные элементы (эритроциты, лейкоциты, лимфоциты), внутренних органов и тканей (печени, почек, селезенки, кишечника, лимфатических узлов, яичников, семенников, надпочечников и поджелудочной железы) павших и убитых в различные сроки после облучения подопытных животных.

Моделирование лучевой болезни у лабораторных (белые крысы) и с.-х. животных (овцы) легкой, средней и тяжелой степени тяжести осуществляли путем облучения их на гамма-установке «Пума» с источником излучений 137Cs с периодом полураспада 26,6 года. Животных облучали однократно при мощности экспозиционной дозы излучения 5,9 Р/час в дозах соответственно: для крыс 6,0 и 9,0 Гр, для овец - 3,8 Гр.

Экспериментальное моделирование ожогов у животных с целью получения ожоговых антигенов и для проведения дифференциальной диагностики пораженных ионизирующим излучением животных от обожженных, проводили по методике, разработанной сотрудниками отдела радиобиологии ВНИВИ (Д.Н. Попов, 1991).

Для изготовления диагностикума использовали эритроциты барана, которые после формалинизации по L. Csizmas (1961), танизации по S.V. Boyden (1950), сенсибилизировали глобулинами антирадиотоксической гипериммунной сыворотки по В.А. Шамардину и Б.В.Каральнику (1971). Антирадиотоксическую сыворотку получали путем гипериммунизации овец лучевым антигеном - радиотоксином. Экзогенную генерацию лучевого антигена — радиотоксина осуществляли путем облучения растительной ткани - клубней картофеля на гамма-установке «Исследователь» в дозе 400 Гр. Обработка облученного материала, изолирование антигенной фракции, очистку и стабилизацию радиотоксина осуществляли в соответствии с методическими рекомендациями А.М. Кузина (1966). Для повышения иммуногенной активности антигена полученный радиотоксин конъюгировали с иммуномодулятором, используя для этой цели неполный

адъювант Фрейнда (НАФ). Полученный конъюгированный антиген использовали для гипериммунизации овец, используя для этой цели схему четырехкратного внутримышечного введения иммуногена.

Через семь дней после последнего введения антигена, брали пробы крови, получали сыворотку, из нее выделяли глобулины путем высаливания сульфатом аммония по М.М. Каплан (1976) и полученную глобулиновую фракцию использовали в качестве сенситина. Полученные сенсибилизированные антирадиотоксическими антителами эритроциты стабилизировали формалином в объемной концентрации 1,5% и использовали диагностикум (АТЭД) в качестве оценочного критерия степени активации нового потенциального иммуносорбента - бентонита и его активированных вариантов для изготовления в дальнейшем бентонитового диагностикума.

Нейтрализацию и элиминацию гетерологичных антител из глобулинов осуществляли методом фильтрации их через пропитанные тканевыми экстрактами мембраны «Владипор» и методом адсорбции антител по Кателлани с использованием иммуносорбентов. Приготовление иммуносорбентов (тканевых порошков из органов необлученных животных) и адсорбцию глобулинов осуществляли по разработанным в отделе методикам (Рац. предложение №2 и №3 от 5.07.94). Полноту истощения глобулинов проверяли в РНГА с использованием гетерологичных антигенов (лизатов эритроцитов, тормо-, нормо- и криоэкстр актов органов необлученных животных, ожоговых антигенов). Критерием полноты истощения глобулинов являлись отрицательная РНГА с гетерологичными антигенами и положительная реакция с гомологичным (лучевым) антигеном.

Для повышения адсорбционной активности бентонитового сырья использовали метод термохимической обработки материала по М.С. Мерабишвили (1971), предполагающего предварительную термическую обработку бентонитового сырья, с последующей кислотной обработкой, отмывку и помол готового продукта, метод селективного фракционирования

- по З.В. Пручкиной и др. (1982). Размеры частиц минералов в отдельных фракциях определяли методом микрометрии, используя специальный окуляр со шкалой и предметное стекло с калиброванной линейной шкалой, разграфленной в условных единицах (Powell Е.О., Errington F.P., 1963). В качестве сравнительного материала с разрабатываемым нами бентонитовым диагностикумом, а также в качестве оценочного критерия степени активации испытуемых образцов бентонита, использовали иммунохимическую тест-систему - реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) с антательным эритроцитарным диагностикумом (АТЭД), изготовленным согласно «Методическимрекомендациям...»(1994).

Цифровые показатели анализировали по стандартным программам вариационной статистики согласно пакету программ Microsoft Exel - 2000 с выведением коэффициента достоверности по Фишеру и применением критерия Стьюдента.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Получение активированных иммуносорбентов из бентонитов для конструирования противорадиационного диагноегикума

Минерально-сырьевая база бентонитов, добываемых на 20 месторождениях России и ближнего зарубежья представлена в основном, средне- и низкокачественными щелочноземельными бентонитами и бентонитоподобными глинами. Поэтому для производства высококачественных минеральных сорбентов требуется применение дополнительных способов обработки исходного сырья с использованием химического, термического, механического и комбинированных методов.

Учитывая, что использование нативных (неактивированных и нефракционированных) бентонитов для приготовления бентонитовых диагностикумов является малоэффективным (Wallace R., 1970; Пручкина З.В., 1982), на первом этапе исследований проводили изучение сорбционной активности испытуемых образцов бентпороппсов (Тарн-Варский,

Биклянский, Березовский) иммунохимическим методом, используя для этой цели РНГА тест-систему с АТЭД. Оценку сорбционной активности испытуемых образцов бентонитов проводили по степени снижения содержания титров антигена-радиотоксина в жидкой фазе дисперсионной среды, определяемого в РНГА с АТЭД. Результаты определения сорбционной активности испытуемых образцов бентпорошков представлены в таблице 1.

Таблица 1 — Сорбционная активность бентонитов Татарстанской зоны до термохимической активации__

Месторождение бентонитов Содержание радиотоксина в жидкой фазе после окончания сорбции Сорбционная активность бентонитов, %

снижение антигена в жидкой фазе, % адсорбировано антигена, %

Биклянское 1:64 (61о&) 75,0 25,0

Тарн-Варское 1:32 (51ОЙ2) 62,5 37,5

Березовское 1:128 (71о&) 87,5 13,5

Стандартный иммуносорбент (формалинизированные, танизированные эритроциты барана) контроль 1 1:64 (61о§2) 75,0 25,0

Рабочий раствор антигена без бентонита (контроль 2) 1:256 (81о&) - -

Из представленных в таблице материалов видно, что испытанные образцы бентпорошков обладали различной сорбционной активностью, которая колеблется от 13,5 до 37,5 %. Следовательно, бентпорошки Татарстанской зоны, имея различный минеральный состав и различное содержание основной сорбционной компоненты - монтмориллонита, проявляют значительную вариабельность по сорбционной активности,

которая не превышает 37,5%, что диктовало необходимость проведения дополнительной активации минерального сырья.

С учетом литературных сведений о том, что сорбционные свойства бентонитов значительно повышаются в результате химического, термического и других способов обработки (М.С. Мерабишвили, 1971), следующую серию опытов проводили по отработке оптимальных способов активации изучаемых бентонитов, с использованием метода термохимической обработки в присутствии реагентов-модификаторов. Нами были исследованы 6 различных вариантов активации для каждого из образцов испытуемых месторождений бентонитов. При этом были отобраны 3 оптимальных варианта активации, при которых получали сырье, обладающее наибольшей иммуносорбционной активностью. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Оптимальные параметры активации бентонитов Татарстанской зоны .

Образцы бентонита Температура предварит, термич. обработки, °С Время термич. обработки, мин Конц. H2S04 % Продолжительность активации, мин Конеч. конц. радиотоксина в маточном р-ре, log2 Сорбционная активность, %

До актива ции После актива ции

Биклян-ский 220 90 16 190 5,0 25 37,5

Тарн-Варский 190 80 14 160 4,0 37,5 50,0

Березовский 250 100 18 220 5,0 13,5 37,5

Из данных таблицы видно, что оптимальными условиями активации являются предварительная термическая обработка бентонитов при температурах от 190 до 250 °С, использование серной кислоты с концентрацией от 14 до 18%, при общей продолжительности процесса от 160 до 220 мин.

В этой же серии опытов для испытуемых щелочноземельных бентонитов Татарстанской зоны проведена апробация другого способа модифицирования — селективного фракционирования испытуемых образцов глины, основанного на удалении при отмывании из бентонита кварца и растворимых солей, за счет чего происходит увеличение процентного содержания глинистой составляющей (монтмориллонитовая фракция) до 80 -"90%, что обеспечивает повышение сорбционных свойств глины, а также выделения фракции с размерами частиц 0,0006-0,0009 мм, обусловливающие увеличение чувствительности реакции (Пручкина З.В., 1982)

В результате проведенного селективного фракционирования трех образцов нами были изготовлены 9 фракции бентонитов, то есть по 3 фракции на каждый образец. Полученные фракции бентонитов испытывали на сорбционную активность, используя для этой цели иммуннохимический метод контроля степени активации.

Результаты иммунохимического анализа сорбционной активности различной фракции бентонитов представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Сорбционная активность различных фракций бентонитов Татарстанской зоны в иммунохимической тест-системе (РЫТА)___

Бентониты Фракции бентонитов Начальная концентрация радиотоксина в маточном растворе, Конечная концентрация радиотоксина в маточном растворе, 1о& Сорбционная активность

Кратность активации % активации

Биклян-ский I 8,0 4,0 2,0 50,0

П 8,0 5,0 1,6 37,5

III 8,0 6,0 1,3 25,0

Тарн-Варнский I 8,0 3,0 2,7 65,5

П 8,0 4,0 2,0 50,0

Ш 8,0 5,0 1,6 37,5

Березовский I 8,0 4,0 2,0 50,0

П 8,0 6,0 1,3 25,0

Ш 8,0 7,0 1,1 13,5

Из данных таблицы видно, что наибольшей сорбционной активностью обладала первая фракция Тарн-Варского бентонита, коэффициент сорбции (КС) которого составлял 2,7.

Полученные на первом этапе работы активированные варианты бентонитов были использованы в дальнейшем в качестве потенциальных иммуносорбентов для конструирования антительного варианта бентонитового диагностикума для проведения РБФ с целью индикации радиомодифицированных макромолекул в организме животных.

' 3.2 Разработка технологии изготовления бентонитового диагностикума

На основе полученных образцов бентонитов, подвергнутых термохимической активации, а также фракционированию, нами были проведены исследования по разработке технологии изготовления антительного бентонитового диагностикума для проведения РБФ. Для этой цели нами были отобраны 3 образца бентонитов, подвергнутых термохимической активации, а из полученных ранее 9 фракции бентонитов Тарн-Варского, Биклянского и Березовского месторождений необходимо было исследовать сорбционную активность первых фракций бентонитов данных месторождений. Это обосновывалось тем, что отобранные фракции обладали наиболее высокой иммуносорбционной активностью по сравнению с другими фракциями.

Технология изготовления бентонитового диагностикума состояла из двух последовательных этапов. Первый - нагрузка (сенсибилизация) частиц бентонита серологически активным веществом (сенситином), второй -агглютинация предварительно сенсибилизированных частиц бентонита. Чувствительность РБФ, а значит, и сопоставимость полученных результатов в значительной мере определялась условиями сенсибилизации частиц бентонитового сырья. Поэтому, с этой целью, экспериментальным путем были подобраны оптимальные параметры соотношения бентонита и сенситина, времени, а также температурный режим процесса

сенсибилизации, при совместном действии которых достигалось максимальное иммунохимическое взаимодействие компонентов реакции. При этом в качестве антител использовали гипериммунные сыворотки, полученные от овец, гипериммунизированных хиноидным радиотоксином. Для изготовления диагностикума 190 мг иммуносорбента (фракция №1) суспендировали в 100 мл дистиллированной воды. Бентонитовую суспензию .смешивали с антительным компонентом в соотношении 3:7 (3 мл суспензии и 7 мл гипериммунной сыворотки). Сенсибилизацию проводили в термостате при температуре 30 °С в течение 30 мин. Затем смесь центрифугировали при 3000 об/мин в течение 7 мин. Надосадочную жидкость удаляли. С целью удаления частиц сыворотки, не вступивших во взаимодействие (сенсибилизацию) с частицами бентонита, полученный осадок дважды отмывали в 10 мл дистиллированной воды при 3000 об/мин в течение 10 мин. Супернатант также удаляли, а осадок ресуспендировали в 3,5 мл дистиллированной воды.

Для визуальной индикации комплекса антиген — антитело в тест -системе, полученный комплекс бентонитовая суспензия - сенситин метили специальным индикаторным красителем - метиленовым синим, концентрацию и количественное соотношение которого определяли экспериментальным путем. Установлено, что оптимальная концентрация метиленовой сини составляла 0,1%, а количество вносимого индикатора в комплексе адсорбент+сенситин 0,7 мл.

Таким образом, в ходе проведенных исследований нами была разработана технология получения экспериментального варианта антительного бентонитового диагностикума. При этом были экспериментально подобраны оптимальные параметры сенсибилизации, обеспечивающие наиболее эффективную степень адсорбции иммуносорбента и сенситина, что в свою очередь предопределяло получение максимально положительных результатов реакции агглютинации.

Дальнейшие исследования были направлены на апробацию полученного экспериментального варианта бентонитового диапюстакума с целью индикации токсических продуктов радиолиза в органах, тканях, а также в сыворотке крови животных, подвергнутых воздействию ионизирующих излучений в костномозговом диапазоне доз (1,0 до 10 Гр).

3.3 Индикация радиоиндуцированных антигенов в пробах органов и тканей облученных животных антительным бентонитовым диагностикумом

С целью разработки метода прижизненной диагностики лучевых поражений животных с помощью антительного бентонитового диагностикума, на этом этапе исследований в качестве экспериментальной модели использовали 60 белых крыс обоего пола половозрелого возраста живой массы 180-220 г. Животных, после исследований сывороток крови на наличие или отсутствие радиоиндуцированных антигенов в РБФ, разделили на 4 группы по 18 крыс в каждой, подвергли внешнему гамма-облучению на установке «Пума» в дозах ЛД50 (6,0 Гр) 1-я группа и ЛДюо (9,0-10,0 Гр) 2-я группа, а также термическому воздействию из расчета 10 % поверхности кожного покрова (3-я группа). Животных 4-й группы воздействию указанных факторов не подвергали и они служили биологическим контролем.

Через 3, 7, 10, 14, 21, 28 дней после облучения и термического . воздействия, у животных всех групп в динамике брали пробы крови, и после обработки, подвергали реакции бентонитовой флокуляции на предмет обнаружения радиоиндуцированных антигенов. Результаты индикации радиоиндуцированных антигенов в периферической крови с использованием РБФ в динамике после облучения лабораторных животных гамма-лучами в летальных (9,0 Гр), сублетальных (6,0 Гр) дозах показали, что уже через 72 часа после радиационного воздействия в сыворотке крови регистрируются антигены. Значительная антигенемия сыворотки крови наблюдалась в период с 3 по 14 сутки после облучения. Животные с титрами антигена

превышающими диагностический в 3-4 раза (облученные в дозе ЛДюо) погибали на 21-28 сут, а у облученных в сублетальных дозах, через 21-28 сут происходила активная элиминация антигена.

Изучение распределения антигена в отдельных фракциях и форменных элементах периферической крови показало, что он обнаруживается в эти сроки не только в сыворотке, но и в плазме, лейкоцитах, эритроцитах и -лимфоцитах (Т-клетках), причем к моменту активной элиминации антигена (после 14 сут) значительное его количество обнаруживается в иммуноцитах (Т-хелперах).

На следующем этапе исследования были направлены на установление сроков максимального накопления радиоиндуцированных антигенов, изучение распределения их по различным органам и тканям и элиминации их из организма. Для реализации поставленной задачи, облученных в летальных и сублетальных дозах гамма-лучей животных, убивали по 3 крысы из каждой группы через 3,7,10, 14, 21,28 сут, извлекали внутренние органы (селезенку, печень, почки, лимфатические узлы, костный мозг, легкие, семенники, яичники, шерсть, желудок, тонкий и толстый отдел кишечника и экскременты), подвергали их предварительной обработке и после подготовки проб к исследованию, антигенсодержащий материал подвергали анализу с помощью антительного варианта бентонитового диашостикума.

Проведенные исследования по индикации радиоиндуцированных антигенов в организме облученных животных показали, что максимальные титры обнаружены в печени, селезенке, почках, лимфатических узлах, толстом и тонком отделе кишечника независимо от дозы облучения. Максимальное накопление антигена в органах и тканях облученных животных установлено на 7-10 дни после облучения, что имеет практическое значение для убоя облученных животных с целью получения тканевых антигенов для серологического анализа и гипериммунизации животных.

3.4 Применение АТБД для диагностики лучевых поражений е.- х.

животных

Полученные положительные результаты по изучению возможности обнаружения радиоиндуцированных антигенов в организме облученных лабораторных животных послужили основанием для проведения аналогичных опытов на с.-х. животных с целью разработки способов иммунодиагностики лучевых поражений животных с использованием АТБД путем прижизненного обнаружения радиоиндуцированных антигенов в периферической крови животных. Для реализации поставленной задачи, были проведены опыты на мелком рогатом скоте. Опыты ставили на 15 овцах обоего пола 18-24-месячного возраста, породы «Прекос», с средней массой 37,5 кг, разделенных по принципу аналогов на 5 групп. Животные 1-й группы (3 овцы) получали кадмия хлорид в течение 20 дней в дозе 5 ПДК (контроль кадмия хлорида); животные 2 группы (3 овцы) получала кадмия хлорид в течение 20 дней в дозе 5 ПДК с последующим облучением в дозе 3,8 Гр (контроль комбинированного поражения); 3-ю группу животных (3 овцы) затравливали в течение 20 дней кадмия хлоридом в дозе 5 ПДК и облучали в дозе 3,8 Гр, после чего подвергали лечению противорадиационным лечебно - профилактическим иммуноглобулином и бентонитом Биклянского месторождения (леченая группа); 4-ю группу (3 овцы) облучали в дозе 3,8 Гр (контроль облучения); 5-я группа (3 овцы) — не подвергалась никаким воздействиям и служила биологическим контролем. Кадмия хлорид вводили орально при помощи зонда в виде водного раствора, облучение животных проводили на гамма-установке "Пума", противорадиационный лечебно-профилактический иммуноглобулин в 10%-ной концентрации вводили животным подкожно через 2,24,48 часов после облучения в дозе 50,0 мг/кг, бентонит добавляли в рацион животных с первых дней затравки кадмия хлоридом и в течении 30 дней после облучения из расчета 2% от массы рациона овец.

Развитие в пораженном организме процесса аутоиммунизации продуктами тканевого распада было обусловлено появлением радиоиндуцированных антигенов - радиотоксинов, которые были обнаружены с использованием разработанного нами АТБД.

В 1-й группе (затравка кадмия хлоридом) уровень радиотоксина во все сроки исследований колебался в пределах исходных значений, данную - группу можно считать гетерологичным контролем.

У только облученных овец (4 группа) уже на 3 сут после раздельного воздействия выявляются лучевые антигены — радиотоксины в титрах 3,67±0,41 в РНГА. Максимальный уровень радиотоксина отмечаются на 14 сут и составляют 6,00±0,71 при 0,33±0,41 в группе биологического контроля.

Во 2 группе - комбинированное воздействие кадмия хлорида и у -облучение - титры антигена во все сроки опыта были выше, чем в группе контроля облучения, максимум приходится на 14 сут и составлял 7,67±0,41 при 5,67±0,41 в группе леченых овец и 0,67±0,41 в группе биологического контроля. Высокое содержание титров антигена во 2 группе по сравнению с контролем облучения можно объяснить тем, что кадмия хлорид усиливает действие радиации на организм, тем самым вызывая образование больших количеств радиотоксина, следовательно, угнетает специфический иммунитет организма на действие ионизирующих излучений, поэтому титры РТ в РНГА регистрируются на 2 разведения больше, чем в группе контроля облучения (без затравки). В то время как лечебный иммуноглобулин повышает общий иммунный статус организма и, как следствие, титры РНГА у животных 3 группы в течение всего времени исследований не превышают титры группы контроля облучения. На основании исследований можно сделать вывод об эффективности лечения бентонитом и иммуноглобулином пораженных животных кадмия хлоридом и радиацией.

4 ВЫВОДЫ

1. Методами термохимического модифицирования и фракционирования выделены 18 вариантов модификантов и 9 фракций бентонитов из 3 различных месторождений (Тарн-Варское, Биклянское, Березовское) Татарстанской зоны.

2. Установлено, что оптимальными параметрами активации Тарн-Варского бентонита являются 80 - минутная обработка 14% - ньм раствором серной кислоты после 90 - минутного термического воздействия на сырье при 190 °С; для бентонитов Биклянского происхождения эти параметры составляют: 100 - минутный контакт глины с 16% - ной серной кислотой, после 1,5 - часового термического воздействия на исходный материал при температуре 220 °С и для Березовского - 2 часовой контакт глины с 18% - ной серной кислотой после предварительной 100 - минутной термической обработки глины при 250 °С при оптимальном соотношении компонентов (бентонит: кислота) 1:3,1:4,1:5 соответственно.

3. Определены оптимальные параметры фракционирования бентонитов независимо от минерально - химического состава, которые заключаются в предварительной обработке глины 0,1 и соляной кислотой, удалении кварца и нерастворимых солей и изолировании фракции бентонита с размерами частиц 0,0006 - 0,0009 мм, увеличивая тем самым удельную поверхность и сорбционный объем иммуносорбента.

4. Апробирована и установлена возможность использования иммунохимического метода для оценки степени активации на разных этапах технологического модифицирования бентонитов с использованием РНГА -теста на основе антительного варианта эритроцитарного диагностикума (АТЭД), основанного на измерении остаточной концентрации радиотоксина в дисперсионной среде «бентонит - радиотоксин».

5. Разработана технология изготовления антительного варианта бентонитового диагностикума на основе активированных вариантов бентонитов и специфического сенситина - антирадиотоксических антител

путем 30 - минутной сенсибилизации частиц бентонита при соотношении компонентов 3:7 и последующим внесением в иммунохимический комплекс индикаторного компонента - 0,1% - ной метиленовой сини из расчета 0,7 мл на 100 мл суспензии диагностикума.

6. Испытание полученного диагностикума в реакции бентонитовой флокуляции (РБФ) на облученных в различных дозах лабораторных и - сельскохозяйственных животных показало, что новый диагностический препарат является специфичным (отрицательная реакция с гетерологическими сыворотками), активным (превышая титры РНГА на 2-3 разведения) и стабильным (сроки хранения 12-18 месяцев).

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработанный на основе активированных вариантов бенитонитов антительный бентонитовый диагностику*! (АТБД) рекомендуется использовать в реакции бентонитовой флокуляции (РБФ) для серологической диагностики острой лучевой болезни путем индикации радиотоксических веществ в периферической крови и органах и тканях животных.

Результаты исследований будут использованы при разработке «Методических рекомендациях по диагностике острой лучевой болезни с применением РБФ тест-системы».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Гайнуллин, P.P. Изучение возможности использования бентонита в качестве иммуноадсорбента для конструирования противорадиационного антительного диагностикума /Р.Р. Гайнуллин, И.Р. Юнусов //Матер. Всеросс. науч.-практ. конф. КГАВМ - Казань, 2007. - С. 109-111.

2. Гайнуллин, P.P. Увеличение уровня экзогенных антирадикальных ферментов как фактор повышения радиорезистентности организма /И.Р. Юнусов, P.P. Гайнуллин

//Матер. Всеросс. науч.-практ. конф. КГАВМ - Казань, 2007. - С. 120121.

3. Гайнуллин, P.P. Диагностикум для индикации радиоиндуцированных токсических соединений /P.P. Гайнуллин, И.Р. Юнусов //Матер, науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» - Казань, 2007. - С. 33-35.

4. Гайнуллин, P.P. Антиоксидантное действие фитопрепаратов при острой лучевой болезни /И.Р. Юнусов, Р.Р. Гайнуллин //Матер, науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» - Казань, 2007. - С. 96-98.

5. Гайнуллин, P.P. Новая тест-система для ранней диагностики лучевого поражения /A.B. Иванов, P.P. Гайнуллин, Р.Н. Низамов и др. //Вестник военно-медицинской академии. - 2008. - № 3 (23). - С. 177.

6. Гайнуллин, P.P. Тест-система для обнаружения радиоиндуцированных токсических продуктов методом реакции бентонитовой флокуляции //Науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов «Достижения молодых ученых - в производство», посвященная 100-летию со дня рождения профессора Х.Х. Абдуллина, 25-26 июня 2008 г. - Казань. -2008. - С. 28-30.

7. Гайнуллин, Р.Р. Применение бентонита в качестве иммуносорбентов при конструировании противорадиационного диагностикума //Ветеринарный врач. - 2008. - № 6. - С. 17-20.

Гайнуллин Руслан Рустамович

РАЗРАБОТКА БЕНТОНИТОВОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ИНДИКАЦИИ РАДИОИНДУЦИРОВАННЫХ ТОКСИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ

03.00.01 - Радиобиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань- 2009

Подписано в печать 03.03.2009 Сдано в набор 04.03.2009 Заказ 73

Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman Усл. печ. л. 1,0. Бумага офсетная. Тираж 100 экз. Отпечатано с оригинал-макета в типографии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 420075, г. Казань-75, Научный городок-2

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гайнуллин, Руслан Рустамович

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Молекулярно-клеточные механизмы лучевого поражения.

2.1.1. Пути образования радиотоксических веществ и их роль в лучевом поражении организма.

2.2. Природа, роль и выявление радиотоксических веществ в организме животных и объектах ветеринарного надзора.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы исследований.

3.1.1. Материалы исследований.

3.1.2. Методы исследований.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1. Получение активированных иммуносорбентов из бентонитов для конструирования противорадиационного диаг- ^ ностикума.

4.2. Разработка технологии изготовления бентонитового диаг- ^ ностикума.

4.3. Индикация радиоиндуцированных антигенов в пробах органов и тканей облученных животных антительным бен- 78 тонитовым диагностикумом.

4.3.1. Подготовка проб периферической крови, органов и тканей животных для проведения реакции бентонитовой флоку- 79 ляции (РБФ).

4.3.2. Выявление радиотоксических веществ в периферической крови облученных животных.

4.4. Индикация радиотоксических веществ в органах и тканях ^ облученных лабораторных животных.

4.5. Применение антительного бентонитового диагностикума (АТБД) для диагностики лучевых поражений е.- х. живот- 97 ных.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

6. ВЫВОДЫ.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка бентонитового диагностикума для индикации радиоиндуцированных токсических соединений"

1.1 Актуальность проблемы. В связи с сохранением опасности возникновения аварийных ситуаций в атомной промышленности, возникает необходимость быстро решать ряд медицинских и ветеринарных проблем по ранней лабораторной диагностике острых лучевых поражений.

В условиях массовых радиационных поражений, требующих проведения сортировки пострадавших, когда большинство надежных клинических признаков лучевого поражения отсутствуют, а имеющаяся симптоматика весьма неспецифична и полиморфна, что обусловливает бесперспективность использования арсенала традиционных методов для диагностики лучевой патологии (дозиметрических, клинико-гематологических, биохимических, эндокринологических, патофизио-, патоморфологических и т. д.) (Мазурик В.К., 1987), единственным источником количественной информации о наличии и тяжести лучевого поражения становятся биологические показатели (Гембицкий Е.А., Владимиров В.Г., 1978), в частности, биохимические и им-мунохимические (Клемпарская H.H., 1977; Киршин В.А., Низамов Р.Н., Конюхов Г.В., 1999).

На основании работ основоположников отечественной радиационной иммунологии (Петров Р.В., 1962; Киселев П.П., 1960; Троицкий В.Л., 1965; Клемпарская H.H., 1981) и развитых их последователями (Киршин В.А. и др., 1991), стало очевидным, что лучевая болезнь представляет собой вторичный иммунодефицит, сопровождающийся накоплением в организме радиотоксических продуктов оксидативной модификации (анафилотоксины, радиотоксины), обладающие антигенными свойствами и, персистируя в крови, органах и тканях, создают эффект антигенемии (радиотоксинемии) (Петров Р.В.), что является надежной и перспективной основой для разработки методов ранней иммунодиагностики лучевого поражения (Иванов A.A., 1981).

С учетом изложенного в отделе радиобиологии ФГУ «ФЦТРБ -ВНИВИ» были проведены исследования, в результате которых были разработаны иммунофлуоресцентная, иммуноферментная, серологическая (Курбангалеев Я.М., 2000) и аллергическая тест-системы для иммунодиагностики лучевых поражений. В практических условиях наиболее приемлемым и удобным является РИГА - тест с использованием эритроцитарного диагно-стикума. Вместе с тем воспроизводимость РНГА ограничивается высокой чувствительностью эритроцитов к колебанию факторов внешней среды (pH, температура, наличие химических веществ), ведущих к инактивации эритроцитарного препарата (Каральник Б.В., 1976). Для преодоления указанных технологических трудностей рядом исследователей были использованы химические сорбенты, в частности, бентониты, которые в реакции бентонитовой флокуляции (РБФ) значительно превосходят по своей активности известного аналога — РНГА по таким важнейшим параметрам, как чувствительность, стабильность и время исследования. Вместе с тем известно, что используемые в ветеринарии и животноводстве бентониты в качестве сорбентов тяжелых металлов, токсикантов и радионуклидов, весьма вариабельны по минерало - химическому составу, а бентониты Татарстанской зоны относятся к средне- и низкокачественным вариантам бентонитового сырья, что диктует необходимость активации минеральных сорбентов, приводящей к значительному повышению их сорбционной способности как по отношению к токсикантам, так и по отношению к микробным антигенам и антителам (Мераби-швили М.С., 1975; Пручкина З.В. и др., 1982; Бударков В.А., 1999; Лысенко Н.П., 1999; Маяков Е.А. и др., 2002; Тремасов М.Я. и др., 2004; Ежкова A.M., 2005; Антипов В.А. и др., 2007; Шкаева H.A., 2008; Wallace R., 1970)

Учитывая, что поиск методов и средств повышения эффективности иммунологических тест-систем для индикации радиотоксических веществ в организме животных и животноводческой продукции, а также уточнение замены биологического сырья на природные (химические) иммуносорбенты при изготовлении стабильных диагностикумов, представляет одну из актуальных задач иммунохимии, нами были предприняты настоящие исследования.

1.2. Цель и задачи. Целью настоящих исследований являлась разработка противорадиационного бентонитового диагностикума для индикации радиоиндуцированных токсических продуктов в организме животных.

Исходя из поставленной цели, на разрешение были поставлены следующие задачи:

1. Отработать оптимальные условия активации бентонитового сырья для использования его в качестве иммуносорбента в реакции бентонитовой флокуляции (РБФ).

2. Получить высокоактивные и специфические антигены, противолучевые гипериммунные сыворотки и иммуноглобулины для конструирования антительного бентонитового диагностикума (АТБД).

3. Сконструировать бентонитовый диагностикум и испытать его эффективность на лабораторных и с.-х. животных.

1.3. Научная новизна. Впервые разработана технология изготовления высокочувствительного и специфичного противолучевого АТБД для специфической индикации радиоиндуцированных антигенов в организме облученных животных в реакции бентонитовой флокуляции.

С учетом возможности применения полученного АТБД при серологической диагностике лучевых поражений животных, определены диагностические критерии лучевой болезни, предусматривающие обнаружение радиоиндуцированных антигенов в исследуемых пробах (сыворотке крови, плазме, лейкоцитах, внутренних органах) в титрах - 1:8 — 1:512. Показано, что наличие изучаемого антигена в исследуемых пробах в титрах, превышающих диагностический на 3 шага разведения является неблагоприятным прогностическим признаком, ведущим к радиационной гибели животных. Научная новизна подтверждена патентом РФ № 232476.

1.4. Теоретическая и практическая ценность работы. На основе сравнительного изучения эффективности различных иммуносорбентов предложен диагностикум нового поколения - антительный бентонитовый диагностикум (АТБД) для обнаружения радиомодифицированных оксидативных макромолекул (РМОМ) в организме животных. По результатам исследований будут разработаны методические рекомендации по получению и применению бентонитового диагностикума для индикации радиотоксических веществ (РТВ) в сыворотке крови, органах и тканях облученных животных.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Оптимальные параметры улучшения сорбционных свойств низкосортного бентонитового сырья.

2. Условия получения органомонтмориллонитовых комплексов на основе бентонита и специфических иммуносорбентов.

3. Применение бентонитового диагностикума в реакции бентонитовой флокуляции для индикации радиомодифицированных оксидативных молекул в организме.

1.6. Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных сессиях Ученого совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по рассмотрению отчетов о НИР (Казань, 2005-2008 гг.), научно-практической конференции молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (Казань, 2007-2008), Всероссийской научно-практической конференции ФГОУ ВПО «КГАВМ им. Н.Э. Баумана» (Казань, 2007), Российской научной конференции Военно-медицинской академии (Санкт-Петербург, 2008).

1.7. Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано научных работ, в том числе 2 статьи в рекомендованных ВАК РФ изданиях.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 144 страницах компьютерной верстки, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, предложений производству, приложений. Работа иллюстрирована 18 таблицами. Список использованной литературы включает 222 наименований, в том числе 42 - зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Гайнуллин, Руслан Рустамович

6. ВЫВОДЫ

1. Методами термохимического модифицирования и фракционирования получены 18 вариантов - модификантов и 9 фракций бентонитов из 3 различных месторождений (Тарн-Варское, Биклянское, Березовское) Татар-станской зоны.

2. Установлено, что оптимальными параметрами активации Тарн-Варского бентонита являются 80 - минутная обработка глины 14% - ным раствором серной кислоты после 90 — минутного термического воздействия на сырье при 190 °С; для бентонитов Биклянского происхождения эти параметры составляют: 100 - минутный контакт глины с 16% - ной серной кислотой после 1,5 - часового термического воздействия на исходный материал при температуре 220 °С и для Березовского - 2 часовой контакт глины с 18% - ной серной кислотой после предварительной 100 — минутной термической обработки глины при 250 °С при оптимальном соотношении компонентов 1:3, 1:4, 1:5 соответственно.

3. Установлены оптимальные параметры активации бентонитов путем фракционирования независимо от минерально - химического состава, которые заключаются в предварительной обработке глины 0,1 н соляной кислотой, удалении кварца и нерастворимых солей и изолировании фракции бентонита с размерами частиц 0,0006 - 0,0009 мм, увеличивая тем самым удельную поверхность и сорбционный иммуносорбента.

4. Апробирована и установлена возможность использования иммуно-химического метода для оценки степени активации на разных этапах технологического модифицирования бентонитов с использованием РЫТА — теста на основе антительного варианта эритроцитарного диагностикума (АТЭД), основанного на измерении остаточной концентрации радиотоксина в дисперсионной среде «бентонит - радиотоксин».

5. Разработана технология изготовления антительного варианта бентонитового диагностикума на основе активированных вариантов бентонитов и специфического сеиситина - антирадиотоксических антител путем 30 - минутной сенсибилизации частиц бентонита при соотношении компонентов 0,3:0,7 и последующим внесением в иммунохимический комплекс индикаторного компонента — 0,1% - ной метиленовой сини из расчета 0,7 мл на 100 мл суспензии диагностикума.

6. Испытание полученного диагностикума в реакции бентонитовой флокуляции (РБФ) на облученных в различных дозах лабораторных и сельскохозяйственных животных показало, что новый диагностический препарат является специфичным (отрицательная реакция с гетерологическими сыворотками), активным (превышая титры РНГА на 2-3 разведения) и стабильным (сроки хранения 12-18 месяцев).

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработанный на основе активированных вариантов бенитонитов антительный бентонитовый диагностикум (АТБД) рекомендуется использовать в реакции бентонитовой флокуляции (РБФ) для серологической диагностики острой лучевой болезни путем индикации радиотоксических веществ в периферической крови, органах и тканях животных.

Результаты исследований будут использованы при разработке «Методических рекомендаций по диагностике острой лучевой болезни с применением РБФ тест-системы».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гайнуллин, Руслан Рустамович, Казань

1. Антипов, В.А. Перспективы применения природных алюмосиликатных минералов в ветеринарии /В.А. Антипов, М.П. Семененко, A.C. Фонта-нецкий и др. // Ветеринария. — 2007. № 8. — С. 54-57.

2. Астахова, Т.А. Химическая природа липидных радиотоксинов и распределение их по органам и тканям /Т.А. Астахова, С.Г. Билуши, E.H. Гончаренко и др. // Радиотоксины. М.: Атомиздат, 1966. - С. 119-125.

3. Бак, 3. Химическая защита от ионизирующей радиации /3. Бак. — М.: Атомиздат, 1968.-451 с.

4. Барабой, В.А. Спонтанная хемилюминесценция сывороток крови в норме и при воздействии ионизирующей радиации /В.А. Барабой // Лучевое поражение. -М.: Изд-во МГУ, 1987. С. 123-131.

5. Барабой, В.А. Перекисное окисление и стресс /В.А. Барабой, И.И Брехман, В.Г. Голопин и др. СПб.: Наука, 1992. - 148 с.

6. Барабой В.А. Специфические особенности лучевого поражения /В.А. Барабой, Ю.А. Гриневич, С.В Мартыненко // Тез. докл. радиобиол. съезда. Пущино, 1993.-Ч. 1. - С. 72-73.

7. Барабой, В.А. Стресс в развитии радиационного поражения. Роли регу-ляторных механизмов /В.А. Барабой, С.А. Олейник // Радиац. биол. Ра-диоэкол. 1999. - Т. 39. - № 4. - С. 438-443.

8. Барабой, В.А. Способ обнаружения малондиальдегида в биологических объектах /В.А. Барабой, В.Э. Орел, A.M. Карнаух // Лаб. дело. 1991. -№5.-С. 63-65.

9. Барабой, В.А. Перекисное окисление и радиация /В.А. Барабой, В.Э. Орел, И.М. Карнаух. Киев: Наукова думка, 1991. — 256 с.

10. Барабой, В.А. Окислительно-антиоксидантный гомеостаз в норме и патологии /В.А. Барабой, Д.А. Сутковой. — Киев: Наукова думка, 1997. — 419 с.

11. Барабой, В.А. Хемилюминесценция крови в экспериментальной и клинической онкологии /В.А. Барабой, Е.Е. Чеботарев. Киев: Наукова думка, 1984.- 184 с.

12. Белов, А.Д. Ветеринарная радиобиология /А.Д. Белов, В.А. Киршин. -М.: Агропромиздат, 1987.-287 с.

13. Белов, А.Д. Радиобиология /А.Д. Белов, В.А. Киршин, Н.П. Лысенко и др. Под. ред. А.Д. Белова. М.: Колос, 1999. - 364 с.

14. Белоконский, И. Кинетический метод изучения радиозащитного действия ингибиторов радикальных реакций /И. Белоконский, Г. Русев // Биофизика. 1959. - Т. 4. - С. 204-207.

15. Блюменфельд, Л.А. Электронный парамагнитный резонанс /Л.А. Блю-мепфельд, А.Н. Тихонов // Соросовск. образоват. журн. — 1997. № 9. -С. 91-99.

16. Болтбарзе, З.Я. Тараненко Г.А. Свободнорадикальное состояние ли-пидных радиотоксинов /З.Я. Болтбарзе, Ю.П. Козлов, Ю.Б. Кудряшов и др. // Радиотоксины. М.: Атомиздат, 1966. - С. 126-129.

17. Бударков, В.А. Краткий радиоэкологический словарь /В.А. Бударков, A.C. Зенкин, В.А. Киршин. Саранск: Изд-во Мордов. Ун-та, 2000. -254 с.

18. Бударков, В.А. Применение сорбентов радиоактивного цезия в ветеринарии /В.А. Бударков // Ветеринария. 1999. - № 2. - С. 50-52.

19. Бударков, В.А. Применение сорбентов в условиях острого хронического облучения животных /В.А. Бударков, Д.В. Куршков, С.А. Зарванская // Матер, междун. симпозиума. Казань, 2005. - С. 284-285.

20. Бурлакова, Е.Б. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии /Е.Б. Бурлакова. М., 1982. - С. 74-83.

21. Бурлакова, Е.Б. Биооксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте /Е.Б. Бурлакова. — М: 1975. — 205 с.

22. Бурлакова, Е.Б. О специфичности действия излучения в процессе образования токсических продуктов в жирах /Е.Б. Бурлакова // Научн. докл. выс. шк. Сер. биол. 1960.-Т.1. -№1.-С. 145-150.

23. Бурлакова, Е.Б. Регуляторные нарушения липоперекисного окисления у хронически облученных детей /Е.Б. Бурлакова // Матер, конф. по пробл. противолуч. защиты. М., 1998. - С. 123-124.

24. Бурлакова, Е.Б. Репарация клеточных мембран и ее значение в лучевом поражении /Е.Б. Бурлакова, JI.H. Шишкина // Пробл. природн. и моди-фицир. радиочувствительности. М.: Наука, 1983. - С. 29-43.

25. Бурлакова, Е.Б. Биооксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте /Е.Б. Бурлакова, A.B. Алесенко, Е.М. Молочкина и др. М.: Наука, 1975.-214 с.

26. Бурлакова, Е.Б. Система окислительно-восстановительного гомеостаза в радиационно-индуцированной нестабильности /Е.Б. Бурлакова, В.Ф. Михайлов, В.К. Мазурик // Радиац. биол., радиоэкол. 2001. - Т.41. -№5.-С. 489-499.

27. Владимиров, Ю.А. Кальциевые насосы живой клетки /Ю.А. Владимиров // СОЖ. 1998. - №3. - С. 20-27.

28. Владимиров, Ю.А. Свечение, сопровождающее, биохимические реакции /Ю.А. Владимиров // Соросов, образоват. журн. — 1999. № 6. — С. 25-32.

29. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах /Ю.А. Владимиров // СОЖ. 2000. - Т. 6. - № 12. - С. 13-19.

30. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в живых системах /Ю.А. Владимиров, O.A. Азизова, А.И Деев и др. // Биофизика. 1991. - Т. 29. — С. 81-87.

31. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в живых системах /Ю.А. Владимиров, O.A. Азизова, А.И. Деев и др. // Биофизика. 1992. - Т. 29. -С. 3-250.

32. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах /Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. М.: Карал, 1972. - 315 с.

33. Владимиров, Ю.А. Исследования сверхслабых свечений в биологических системах /Ю.А. Владимиров, Ф.Ф. Литвин // Биофизика. — 1959. — Т. 4.- №5.-С. 601-605.

34. Гембицкий, Е.А. Ранняя диагностика как основа медицинской сортировки пораженных ионизирующей радиацией /Е.А. Гембицкий, В.Г. Владимиров // Военно мед. журнал. - 1978. - №9. - С. 20-24.

35. Гончаренко, E.H. Гипотеза эндогенного фона радиорезистентности /E.H. Гончаренко, Ю.Б. Кудряшов. -М., 1980. 235 с.

36. Гончаренко, E.H. Применение адаптогена МИГЧ-К в 1986-87 г.г. на ЧАЭС /E.H. Гончаренко, Ю.Б. Кудряшов // Матер, конф. по пробл. про-тиволуч. защиты. М., 1998. - С. 70-71.

37. Гончаренко, E.H. Химическая защита от лучевого поражения /E.H. Гончаренко, Ю.Б. Кудряшов. М., 1985. - 305 с.

38. Гончаренко, М.С. Изучение перекисного окисления липидов (ПОЛ) в тканях крыс при облучении /М.С. Гончаренко, Е.И. Латыпова // Матер, респ. научн. произв. конф. по акт. пробл. зоотехн. - Казань, 1996. - С. 97.

39. Горизонтов, П.Д. Патологическая физиология лучевых поражений /П.Д. Горизонтов // Радиационная медицина М.: Госатомиздат, 1963. -С. 164-231.

40. Горизонтов, П.Д. Экспериментальная терапия лучевой болезни /П.Д. Горизонтов // Радиационная медицина. М.: Атомиздат, 1960. - С. 112140.

41. Горизонтов, П.Д. Некоторые данные о природе токсических факторов при лучевой болезни /П.Д. Горизонтов, Г.П. Груздев // Патол. физиол и экспер. терапия 1963. - №1 .-С. 14-18.

42. Горизонтов, П.Ф. Патогенез, экспериментальная профилактика и терапия лучевых поражений /П.Ф. Горизонтов. М.: Медицина, 1964. - 315 с.

43. Гусев, В.А. Супероксиддисмутаза радиобиологическое значение /В.А. Гусев, О.С. Брусов, Л.Ф. Панченко // Вопр. мед. хим. - 1980. - №1. - С. 291-301.

44. Гусев, В.А. Супероксидный радикал и супероксиддисмутаза в свобод-норадикальной теории старения /В.А. Гусев, Л.Ф. Панченко // Вопр. мед. хим. 1982. - Т. 28. - Вып. 4. - С. 8-25.

45. Давыдова, И.Н. Изменение окислительной способности тканей при острой лучевой болезни у крыс /И.Н. Давыдова // Лучевая болезнь и комбинированное поражение организма. Л: 1958. - С. 158-161.

46. Дубинина, Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве специальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса /Е.Е. Дубинина // Вопр. мед. хим. 2001. - Т. 47. - № 6. - С. 561-581.

47. Егоров, В.И. Токсикологическая оценка сочетанного воздействия деци-са и Т-2 токсина на организм животных и изыскание профилактических средств /В.И. Егоров // Диссертация . канд. биол. наук. Казань, 2007.- 135 с.

48. Жеребченко, П.Г. Противолучевые свойства индолалкиламинов /П.Г. Жеребченко. М.: Атомиздат, 1971. - 217 с.

49. Жуланова, З.И. Образование органических веществ в организме при облучении рентгеновскими лучами /З.И. Жуланова // Радиобиология. — 1961. -№1.- С. 70-73.

50. Журавлев, А.И. Биохимические и физико-химические основы биологического действия радиации /А.И. Журавлев. М.: Изд-во МГУ, 1957. -С. 16-18.

51. Журавлев, А.И. Сверхслабое свечение сывороток крови и его значение в комплексной диагностике /А.И. Журавлев, А.И. Журавлева. М; 1975.- 159 с.

52. Залезняк, П.Н. Активирование бентонитов для снятия ингибиторов сыворотки при постановке реакции торможения гемагглютинации /П.Н. Залезняк, Т.Х. Гильманова, Н.В. Кирсанов // Матер, докл. вс. научн. конф., поев. 90-летию КВИ. — Казань, 1965. С. 76-77.

53. Ибрагимова, М.И. Исследования методом ЭПР метаболических изменений крови под действием радиотоксинов /М.И. Ибрагимова, В.Ю Петухов, Е.П. Жеглов и др. // Радиац. биол., радиоэкол. 2004. - Т. 44. -№5.-С. 529-534.

54. Иванов, A.A. Анафилактоидные механизмы первичной реакции на облучение /A.A. Иванов // Иммунотерапия экспериментальной острой лучевой болезни. Под ред. H.H. Клемпарской. М.: Энергоиздат, 1981. -С.32-43.

55. Иванов, A.A. Влияние радиации на систему иммунитета и иммунологические методы модификации радиорезистентности /A.A. Иванов // Лучевое поражение. М.: Изд-во МГУ, 1987. - С. 154-160.

56. Иванов, A.B. Фармако-токсикологические свойства и эффективность применения «Янтарос плюс» и природных минералов в животноводстве /A.B. Иванов // Диссертация . доктора биол. наук. Казань, 1999. — 265 с.

57. Иммунологические методы исследования: Пер. с англ./ Под ред. И. Лефковится, Б. Перкиса. М.: Мир, 1988. - 530 с.

58. Ильязов, Р.Г. Снижение поступления цезия-137 в продукты скотоводства при использовании природных сорбентов /Р.Г. Ильязов // Радио-экол. аспекты жив-ва. Гомель: Полеспечать, 1996 - С. 128-141.

59. Ишкаев, Т.Х. Arpo экологические аспекты комплексного использования местных сырьевых ресурсов и нетрадиционных агроруд в сельском хозяйстве /Т.Х. Ишкаев, Ш.А. Алиев, И.А. Яппаров - Казань: Центр инновационных технологий. - 2007. - 230 с.

60. Какушкина, M.JI. К вопросу о токсичности липидов при лучевом поражении животных /М.Л. Какушкина // Радиотоксины. — М.: Атомиздат, 1966.-С. 151-157.

61. Каральник, Б.В. Возникновение и развитие методов серологического анализа /Б.В. Каральник // ЖМЭИ. 1964. - №7. - С. 134-140.

62. Каральник, Б.В. Эритроцитарные диагностикумы /Б.В. Каральник. -М.: Медицина, 1976. 164 с.

63. Киршин, В.А. Способ серологической диагностики радиационных поражений с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) /В.А. Киршин, Р.Н. Низамов, Г.В. Конюхов и др. // Патент РФ № 2145712 от 31.07.1997 г.

64. Клемпарская, H.H. Аллергия и радиация /H.H. Клемпарская. М.: Медицина, 1968. - 239 с.

65. Клемпарская, H.H. Аутосенсибилизация облученного организма /H.H. Клемпарская // Иммунотерапия экспериментальной острой лучевой болезни. -М.: Энергоиздат. 1981. С. 5-14.

66. Клемпарская, H.H. Клеточные аутоиммунные реакции, выявляемые с помощью провоцирующих воздействий у животных и человека /H.H.

67. Клемпарская // Аутоантитела облученного организма. М.: Атомиздат, 1972.-С. 235-256.

68. Клемпарская, H.H. К методологии исследования иммунного статуса облученного организма /H.H. Клемпарская // Сб. тез. вс. научн. конф. -М., 1991.-С. 18-19.

69. Клемпарская, H.H. Передача токсических аутоантител потомству через молоко /H.H. Клемпарская // Аутоантитела облученного организма. — М.: Атомиздат, 1971. С. 255-266.

70. Козлов, Ю.П. Роль свободных радикалов в нормальных и патологических процессах / Ю.П. Козлов // Автореф. дисс. на соиск. ученой степени докт. биол. наук. М., 1969. - 53 с.

71. Коломийцева, И.К. Липидные перекиси в нормальном и облученном организме /И.К. Коломийцева // Биофизика. — 1960. Вып. 5. - С. 339341.

72. Коломийцева, И.К. Липидные перекиси в нормальном и облученном организме /И.К. Коломийцева // Автореф. дисс. на соиск. уч. степени канд. биол. наук. М., 1964. - 25 с.

73. Кольтовер В.К. Надежность ферментативной защиты клеток от супероксидных радикалов /В.К. Кольтовер // ДАН СССР. 1981. - Т. 256. -С. 199-202.

74. Конопляников, А.Г. Образование липидных радиотоксинов у животных после облучения нейтронами, протонами и гамма лучами /А.Г. Конопляников, Ю.Б Кудряшов // Радиотоксины. М.: Атомиздат, 1966. - С. 130-135.

75. Конюхова, О.Г. Индикация иммунопатологических комплексов в мясе и мясопродуктах облученных животных /О.Г. Конюхова, A.C. Титов // Матер, докл. научн. произв. конф. по пробл. ветерин. и животноводства. - Казань, 1997. - С. 122.

76. Копылов, В.А. Механизм образования и идентификация токсических веществ хиноидной природы, образующихся в облученном организме /В.А. Копылов // Радиотоксины. М.: Атомиздат, 1966. - С. 18-27.

77. Кравцов, Г.М. К вопросу о механизмах радиосенсибилизирующего действия гидроперекисей ненасыщенных жирных кислот /Г.М. Кравцов // Автореф. дисс. на соиск. ученой степени канд. биол. наук. М; 1976.-25 с.

78. Кричевская, Е.И. Состояние гистаминового обмена в облученном организме /ЕМ. Кричевская // ДАН СССР. 1960. - № 6. - С. 1105-1109.

79. Крушинская, Н.П. Образование малон-диальдегида при гамма облучении /Н.П. Крушинская, М.И. Щальпов // ДАН СССР. 1980. - Т. 250. -№3. - С. 653-657.

80. Крышев, И.И. Радиологические исследования Чернобыльской аварии /И.И. Крышев, P.M. Алексахин, И.Н. Рябов // Под ред. И.И. Крышева. -М., 1991.-С. 172.

81. Кудряшов, Ю.Б. Лучевое поражение «критических систем» ЯО.Б. Куд-ряшов // Лучевое поражение: сборник под редакцией Ю.Б. Кудряшова. М.: Изд-во МГУ, 1987. - С. 5-72.

82. Кудряшов, Ю.Б. Образование липидных радиотоксинов у животных после облучения гамма лучами 60Со /Ю.Б. Кудряшов // Инф. биол. ра-диобиол. 1985. - Вып. 3. - С. 6-7.

83. Кудряшов, Ю.Б. Основы радиационной биофизики /Ю.Б. Кудряшов. -М., 1982.-219 с.

84. Кудряшов, Ю.Б. Роль липидных радиотоксинов в лучевом токсическом эффекте /Ю.Б. Кудряшов // Радиотоксины. — М.: Атомиздат, 1966. — С. 105-118.

85. Кудряшов, Ю.Б. Роль радиотоксинов в лучевом токсическом эффекте /Ю.Б. Кудряшов // Радиобиология. 1961. - Т. 1. - Вып. 1. - С. 104-106

86. Кудряшов, Ю.Б. Современные проблемы и перспективы противолучевой химической защиты /Ю.Б. Кудряшов // Матер, конф. по пробл. противолуч. защиты. М., 1998. - С. 5.

87. Кудряшов, Ю.Б. Токсические вещества липидной природы и их роль в лучевом поражении /Ю.Б. Кудряшов // Автореф. дисс. на соиск. уч. степени, доктора биол. наук. М., 1966. - 47 с.

88. Кудряшов, Ю.Б. Роль биологически активных веществ радиотоксинов в лучевом поражении /Ю.Б. Кудряшов, E.H. Гончаренко // Радиобиология. - 1970. - Т. 10. -Вып.2. - С. 219-229.

89. Кудряшов, Ю.Б. Роль биологически активных веществ радиотоксинов в лучевом поражении /Ю.Б. Кудряшов, E.H. Гончаренко // Радиобиология. 1970. - Т. 10. - Вып. 2. - С. 212-229.

90. Кудряшов, Ю.Б. Роль липидных радиотоксинов в лучевом токсическом эффекте /Ю.Б. Кудряшов, E.H. Гончаренко // Инф. биол. радиобиол. — 1984.-Вып. З.-С. 3-5.

91. Кузин, A.M. Вторичные биогенные излучения лучи жизни /A.M. Кузин. - Пущино, 1997. - 38 с.

92. Кузин, A.M. Молекулярная радиобиология клеточного ядра /A.M. Кузин. М.: Атомиздат, 1973. - 208 с.

93. Кузин, A.M. Патогенез, экспериментальная профилактика и терапия лучевых поражений /A.M. Кузин. — М.: Медицина, 1964. 315 с.

94. Кузин, A.M. Проблема радиотоксинов // Современные проблемы радиобиологии/A.M. Кузин. М: 1975.-Т. 4.-С. 191-218.

95. Кузин, A.M. Радиационная биохимия /A.M. Кузин. М., 1975. - 179 с.

96. Кузин, A.M. Радиационная биохимия /A.M. Кузин. М.: Изд-во АН СССР, 1962.-197 с.

97. Кузин, A.M. Роль перекисей и кислорода в начальных стадиях радиобиологического эффекта /A.M. Кузин. — М.: Изд-во АН СССР, 1960. -С. 3-8.

98. Кузин, A.M. Структурно-метаболическая гипотеза в радиобиологии /A.M. Кузин. -М.: Наука, 1970. 105 с.

99. Кузин, A.M. Структурно-метаболическая теория в радиобиологии /A.M. Кузин. М., 1986. - 179 с.

100. Кузин, A.M. Радиотоксины /A.M. Кузин, В.А. Копылов. М., 1983. -243 с.

101. Кузин, A.M. Радиотоксины /A.M. Кузин, В.А. Копылов. М., 1980. -315 с.

102. Кузин, A.M. О возможном участии природных хинонов в биологической активности «фактора цветения» /A.M. Кузин, В.А. Копылов, М.Э. Вашапова и др. // Физиол. растений. 1978. — Т. 25. — Вып.4. - С. 837859.

103. Кузин, A.M. Образование комплексов с переносом заряда между нук-леотидными основаниями и тетрахлор-н-бензохиноном /A.M. Кузин, Н.П. Королев, Э.А. Бурштеин // Радиотоксины. М.: Атомиздат, 1966. -С. 63-70.

104. Кузин, A.M. Динамика накопления и взаимосвязь липидных и хиноид-ных радиотоксинов /A.M. Кузин Ю.Б. Кудряшов, Н.Е. Лебедева и др. // Радиотоксины. — М.: Атомиздат, 1966.-С. 186-191.

105. Кулинский, В.И. Лекционные таблицы по биохимии /В.И. Кулинский. Иркутск: Иркут. мед. ин-т, 1994. - Вып. 4. - 94 с.

106. Кулинский, В.И. Обмен биогенных моноаминов у облученных животных и механизмы радиозащитного эффекта /В.И. Кулинский // Авто-реф. дисс. на соиск. ученой степени д-ра биол. наук. М., 1970. - 53 с.

107. Кучеренко, Н.Е. Биологическое метилирование и его модификация в ранний период лучевого поражения /Н.Е. Кучеренко. Киев, 1981. -193 с.

108. Лабзина, Н.Г. Цитогенетическое действие липидных радиотоксинов /Н.Г. Лабзина//Радиотоксины.-М.: Атомиздат, 1986.-С. 176-181.

109. Ли, Д.Е. Действие радиации на живые клетки /Д.Е. Ли // Пер. с англ. — М.: Атомиздат, 1963. 305 с.

110. Лысенко, Н.П. Использование веществ, ускоряющих выведение радионуклидов из организма животных /Н.П. Лысенко // Радиобиология. — М.: Колос, 1999.-С. 185-187.

111. Маги, Дж. Л. Радиационная химия /Дж. Л. Маги // Пер. с англ. М.: Изд-во иностр. литературы., 1953. -367 с.

112. Мазурик, В.К. Биохимическая индикация лучевого поражения /В.К. Мазурик // Лучевое поражение. М.: Изд-во МГУ, 1987. - С. 100-112.

113. Мазурик, В.К. Некоторые биохимические детерминанты и маркеры радиорезистентности организма млекопитающих /В.К. Мазурик, В.Ф. Михайлов // Радиац. биол., радиоэкол. 1997. - Т. 37. - Вып.4. - С. 512-521.

114. Мазурик, В.К. Радиационно-индуцируемая нестабильность генома: феномен, молекулярные механизмы, патологическое значение /В.К. Мазурик, В.Ф. Михайлов // Радиац. биол., радиоэкол. — 2001. — Т. 41. № З.-С. 282-289.

115. Мазурик, В.К. Радиобиологические основы биохимической индикации лучевого поражения / В.К. Мазурик // Автореф. дисс. на соиск. уч. степени докт. биол. наук. М., 1983. - 50 с.

116. Малков, Е.А. Мероприятия по снижению перехода радионуклидов из кормов в продукцию животноводства /Е.А. Малков, В.А. Бударков, Л.В. Васильев //Ветер, патол. 2002. - № 3. - С. 101-109.

117. Мальц, В. Образование органических перекисей в печени крыс, облученных ионизирующими излучениями /В. Мальц // Биофизика. 1960. — Вып.5. - № 5. — С. 547-551.

118. Мельникова, С.К. Влияние растительных радиотоксинов на животный организм /С.К. Мельникова, В.А. Копылов // Радиотоксины. М.: Атомиздат, 1966. - С. 88-91.

119. Михайлов, В.Ф. Радиационно-индуцируемая нестабильность генома: феномен, молекулярные механизмы, патогенетическое значение /В.Ф. Михайлов // Радиац. биол., радиоэкол. 2001. - Т.41 - № 3. - С. 272289.

120. Михайлов, В.Ф. Сигнальная функция активных форм кислорода в ре-гуляторных сетях ответа клеток на повреждающие воздействия /В.Ф. Михайлов, В.К. Мазурик, Е.Б. Бурлакова.// Радиац. биол., радиоэкол. -2003. Т.43. - № 1.-С. 5-18.

121. Михайлов, В.Ф. Сигнальные молекулы, участвующие в развитии радиационного эффекта /В.Ф. Михайлов, В.К. Мазурик, Е.Б. Бурлакова // Матер. VI Междун. конф. «Биооксидант». М., 2002. - С. 395-396.

122. Мочалина, A.C. Образование липидных перекисей в облученном организме /A.C. Мочалина // Первичные радиобиологические процессы. — М.: Атомиздат, 1973. С. 96-101.

123. Мочалина, A.C. Токсическое действие водорастворимых продуктов окисления облученной линоленовой кислоты /A.C. Мочалина // Радиотоксины. -М.: Атомиздат, 1966. С. 181-186.

124. Мочалина, A.C. О природе и характере накопления гемолитического фактора, появляющегося в печени облученных крыс /A.C. Мочалина, Ю.Б. Кудряшов // ДАН СССР. 1956. - Т. 109. - № 3. - С. 515-518.

125. Мочалина, A.C. Образование липидных перекисей в облученном организме и методы их выявления /A.C. Мочалина, JI.JI. Хамайде // Радиобиология. 1964. - Т. 4. - С. 487-491.

126. Неустроев, Г.В. Сравнительное действие гамма лучей и радиотоксинов хиноидной природы на развитие икры вьюна /Г.В. Неустроев, В.Г. Кондратенко, В.А. Копылов и др. // Радиотоксины. — М.: Атомиздат, 1966.-С. 79-86.

127. Низамов, Р.Н. Методы индикации токсических иммунных комплексов в мясопродуктах облученных животных /Р.Н. Низамов, Н.В. Акмулли-на, Р.В. Нефедова // Тез. докл. 3-го съезда по радиац. исслед. Пущино, 1997.-T. 1.-С. 66-67.

128. Низамов, Р.Н. Использование иммунохимических тест-систем для ранней диагностики ОЛБ /Р.Н. Низамов М.Л. Гусарова, В.А. Киршин // Матер, докл. научн. произв. конф. по пробл. ветерин. и животноводства. - Казань, 1995.-С. 115.

129. Никонов, C.B. Изыскание средств лечения животных при Т-2 и афла-токсикозе /C.B. Никонов // Диссертация . канд. биол. наук. Казань, 2004.- 184 с.

130. Норбаев, Н. Количественные закономерности появления хинонов в облученных растительных тканях и дрожжевых клетках /Н. Норбаев, A.M. Кузин // Радиотоксины. М.: Атомиздат, 1966. - С. 28-37.

131. Олтеану, В. Липидные радиотоксины дрожжевых клеток /В. Олтеану, E.H. Гончаренко, А.Г. Конопляников и др. // Радиотоксины. М.: Атомиздат, 1966.-С. 135-140.

132. Орел, В.Э. Хемилюминесцентный анализ в биологии и медицине /В.Э. Орел. Киев, 1978.- 193 с.

133. Осипов, А.Н. Образование гидроксильных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа /А.Н. Осипов, Э.Ш. Якупова, Ю.А. Владимиров // Биофизика. 1993. - Т. 38. - № 3. - С. 390-396.

134. Папуниди, Э.К. Ветеринарно санитарная оценка мяса животных при сочетанной интоксикации тяжелыми металлами и применение цеолитов /Э.К. Папуниди // Вет. врач. - 2008. - № 3. с. 8-9.

135. Папуниди, Э.К. Фармако-токсикологическая характеристика цеолитов майнского месторождения /Э.К. Папуниди // Диссертация . канд. вет. наук. Казань: КГАВМ, 1996.-125 с.

136. Петров, Р.В. Иммунология острого лучевого поражения /Р.В. Петров. — М.: Госатомиздат, 1962. -415 с.

137. Петров, Р.В. Иммунология острого лучевого поражения /Р.В. Петров. — М.: Госатомиздат, 1962. -414 с.

138. Петров, Р.В. О видовой, органной и органоидной специфичности тканевых антигенов облученных животных /Р.В. Петров, Л.И. Ильина // Мед. радиол. 1959. - №12. - С. 41-47.

139. Петров, Р.В. О циркуляции в токе крови тканевых антигенов при острой лучевой болезни /Р.В. Петров, Л.И. Ильина // Биол. экспер. биол. и мед. 1957. - №8. - С. 20-26.

140. Плышевская, Е.Г. Образование хинонов в печени облученных животных /Е.Г. Плышевская, Н. Норбаев, А.М. Кузин // Радиотоксины. М.: Атомиздат, 1966. - С. 37-43.

141. Поляков, И.И. Стойкие эритроцитарные препараты диагностики и индикации особо опасных инфекций /И.И. Поляков, Д.Т. Ширяев, С.М. Рассудов // Пробл. особо опасных инфекц. 1969. - №4. — С. 54-57.

142. Пручкина, З.В. Способ получения диагностикума для проведения реакции бентонитовой флокуляции /З.В. Пручкина, Г.П. Сомов, Л.В Краснова и др. // Авт. свид-во №952260 от 23.08.82.

143. Пручкина, З.В. Способ получения диагностикума для проведения реакции бентонитовой флокуляции /З.В. Пручкина, Г.П. Сомов, Л.В. Краснова и др. // Патент СССР №952260 от 22.08.82 // Бюлл. №31. 1982.

144. Романцев, Е.Ф. Радиация и химическая защита /Е.Ф. Романцев. — М.: Атомиздат, 1968. 215 с.

145. Романцев, Е.Ф. Радиация и химическая защита /Е.Ф. Романцев. М.: Атомиздат, 1971.-305 с.

146. Романцев, Е.Ф. Ранние радиационно-биохимические реакции /Е.Ф. Романцев. —М.: Атомиздат, 1966. 196 с.

147. Свердлов, А.Г. Опосредованное действие ионизирующего излучения /А.Г. Свердлов. М.: Атоиздат, 1968. - 205 с.

148. Семенов, Э.И. Поиск средств профилактики смешанных микотоксико-зов животных /Э.И. Семенов // Диссертация . канд. биол. наук. Казань. 2006. -160 с.

149. Скворцов, В.В. Выживаемость и индикация патогенных микробов во внешней среде /В.В. Скворцов, B.C. Киктенко, В.Д. Кучеренко. М.: Медгиз. - 350 с.

150. Соколовский, В.В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах неспецефической реакции организма на экстремальное воздействие /В.В. Соколовский // Вопр. мед. химии. 1988. - №4. - С. 2-11.

151. Соколовский, В.В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах в реакциях организма на экстремальное воздействие /В.В. Соколовский // Вопр. мед. хим. 1988. - №4. - С. 2-11.

152. Способ диагностики радиационный поражений организма и способ получения препарата для его осуществления: Патент РФ № 2145712 /Авт. Авилов В.М., Киршин В.А., Низамов Р.Н., Конюхов Г.В., Курбангалеев ЯМ.

153. Спинке, Дж. Введение в радиационную химию /Дж. Спинке, Р. Вудс. -М.: Атомиздат, 1967. 379 с.

154. Стеккенаус, В. Ультраструктура и функция клеток /В. Стеккенаус. -Пер. с англ. М.: Мир, 1965. - 200 с.

155. Суворов, П.Н. Химия и фармакология средств профилактики радиационных поражений /П.Н. Суворов, B.C. Шашков. М.: Атомиздат, 1975.- 279 с.

156. Схоллоу, А. Радиационная химия органических соединений /А. Схол-лоу // Пер. с англ. -М.: Изд-во иностр. литературы, 1963. 297 с.

157. Тару сов, Б.Н. Основы биологического действия ионизирующих излучений /Б.Н. Тарусов. М.: Наука, 1954. - 305 с.

158. Тарусов, Б.Н. Первичные и начальные процессы биологического действия радиации /Б.Н. Тарусов. М.: Изд-во АН СССР, 1963. - 234 с.

159. Тарусов, Б.Н. Первичные процессы лучевого поражения /Б.Н. Тарусов.- М.: Госатомиздат, 1962. 217 с.

160. Тарусов, Б.Н. Первичные процессы лучевого поражения /Б.Н. Тарусов, А.И. Потвода, А.И. Журавлев // Биофизика. 1961. - Т. 6. - №4. - С. 490-493.

161. Тимофеев-Рессовский, Н.В. Применение принципа попадания в радиобиологии /Н.В. Тимофеев-Рессовский, В.И. Иванов, В.И. Корогозин. — М.: Атомиздат, 1968. 327 с.

162. Томсон, Ф. Защита млекопитающих от ионизирующих излучений /Ф. Томсон. -М.: Атомиздат, 1964. -253 с.

163. Трофимова, Ф.А. Обоснование технологического модифицирования щелочноземельных бентонитов и бентонитоподобных глин /Ф.А. Трофимова // Автореф. дисс. на соиск. уч. степени канд. геолого-минерал, наук. М., 2006. - 25 с.

164. Трофимова, Ф.А. Проблемы производства глинопорошков для буровых растворов в России /Ф.А. Трофимова, Т.З. Лыгина, В.В. Власов // Бурение и нефть. 2006. - №12. - С. 14.

165. Фархутдинов, P.P. Хемилюминесцентные методы исследования сво-боднорадикального окисления в биологии и медицине /P.P. Фархутдинов, В.А. Лиховских // Учебно-методическое пособие. Уфа: Изд-во БГМИ, 1995.- 110 с.

166. Фаттерахманов, Л.Р. Комбинированное поражение животных кадмия хлоридом и гамма-излучением: применение средств терапии /Л.Р. Фаттерахманов // Диссертация . канд. биол. наук. — Казань, 2008. — 147 с.

167. Фомичев, Ю.П. Сорбционно-детоксикиционные технологии в животноводстве и ветеринарной медицине /Ю.П. Фомичев // Аграрн. Россия. 2004. - № 5. - С. 3-7.

168. Хансон, К.П. Молекулярные механизмы радиационной гибели клеток /К.П. Хансон, В.Е. Комар. -М., 1983. 315 с.

169. Цеолиты: эффективность и применение в сельском хозяйстве / Под ред. Г.А. Романова. М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2000. - Ч. 1. - 254 с.

170. Чернова, Р.В. Экспресс-диагностика лучевого поражения с.-х. животных с использованием метода иммуноферментного анализа /Р.В. Чернова, Р.Н. Низамов // Матер, респ. научн. — произв. конф. по пробл. ве-терин. и животноводства. — Казань, 1995. — С. 176.

171. Шарифуллина, Д.Т. Разработка методов и средств для выявления лучевой аллергии у животных /Д.Т. Шарифуллина // Автореф. дисс. на со-иск. ученой степени канд. биол. наук. — Казань, 2002. 23 с.

172. Шкаева, H.A. Влияние ферроцианидно бентонитового сорбента ХЖ-90-SR-TM на переход тяжелых металлов из кормов в молоко коров /H.A. Шкаева // Вет. врач. - 2008. - № 2. - С. 22 - 25.

173. Шубинкова, Е.А. Морфологические и гистохимические изменения органов животных, подвергнутых действию липидных радиотоксинов /Е.А. Шубинкова, Ю.Б. Кудряшов, Г.И. Горошкина и др. // Радиотоксины.-М.: Атомиздат, 1966.-С. 158-176.

174. Ярмоненко, С.П. Противолучевая защита организма /С.П. Ярмоненко. -М.: Атомиздат, 1969. 301 с.

175. Ярмоненко, С.П. Радиобиология человека и животных /С.П. Ярмоненко. М.: Высшая школа, 1977. - 368 с.

176. Aubar, M. Current Topics in Radiation Research /M. Aubar, P. Neta 11 Lit. J. Appl. Rad. 1967. - V.II. - P. 443-523.

177. Babior, B.M. Investigating antibody catalyzed ozone generation by human nentrophils /B.M. Babior, C. Tamuchi, J. Reudi et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.-2003.-V. 100.-P. 3031-3034.

178. Beckmann, J.S. Nitric oxide, superoxide and peroxinitrite /J.S. Beckmann., W.H. Koppenol // Am. J. Physiol. 1996. V. 271. - P. 1424-1437.

179. Bernheim, F. The presence of peroxidized lipid in irradiation tissues /F. Bernheim // Rad. res. 1963. - №3. - P. 17-19.

180. Bernheim, F. Antioxidants activity and lipid peroxide formation in irradiated tissues /F. Bernheim, A. Barber, A. Ottolenghi et al. // Rad. res. 1958. - V. 9. - № 1. - P. 96-98.

181. Beruheim, F. Lipid peroxide formation in irradiated animals /F. Beruheim // Fed. proc. 1973. -V. 32. - № 8. - P. 1870-1874.

182. Borisov, V.P. Mineral sorbents used as an antibodies in ease of radiostrontium and radio cesium intoxication /V.P. Borisov, L.A. Ilyin, M.M. Kendych // Publishing House of the Hungarian Academy of Scienceses, Budapest, 1988. — 244 p.

183. Croemer, J. Mitochondrial implication in apoptosis /J. Croemer // Cell death and differentiation. 1997. - V.4. - P. 443-456.

184. Dahle, W. Toxicity of radioxidized linoleic acid /W. Dahle // Brit J. Radiol. 1997. - V. 1 - №46. - P. 46-59.

185. Dubouloz, P. Etude histochemique des peroxides lipidiques products dans la pean par les rayons X /P. Dubouloz, I. Dumas // Compt. rend. soc. biol. V. 144.-P. 1080-1083.

186. Ehrlich P. Leukaemie, Pseudoleukaemie, Haemateglobulinemie /P. Ehrlich. -Wien, 1901.-305 p.

187. Ellinger F. Die Histaminhypotheses der biologischen Stranlenwirkungen // Schweiz, med. wochenschr. 1935. -B. 81. - №3. -P. 61-63.

188. Feinendegen, L.E. Radiation problems in fusion energy production /L.E. Feinendegen, E.P. Kronkitc, V.P. Rond // Radiat. and environ, biophys. — 1980.-Vol. 18. -№3.-P. 157-183.

189. Fridovich, I. Superoxide anion radical, superoxide dismutase, and related matters /1. Fridovich // J. Bid. ehem. 1997. - V. 272. - P. 199-202.

190. Frobkis, V.V. Effects of antioxidant butylated hydroxytoluene in rats /V.V. Frobkis, E.N. Jorban, V.K. Koltover // A J E. 1990. - V. 13. - P. 5-8.

191. Gerber, G. Analytic methods for biochemical indicates of radiations injury / G.Gerber, J.P. Decock // Acted radiol. therapy, phys., boil. — 1974. — Vol. 13.-№6.-P. 556-571.

192. Hansteffer, A. Apoptosis /A. Hansteffer, S. Izumo // Circulât, res. 1998. -V. 81. -№11.-P. 1111-1129/

193. Harman, D. Aging Minimizing free radical damage /D. Harman // J. Anti — Aging medicine. 1999. - V.2. - P. 15-36.

194. Harman, D. Free radicals theory of aging D. Harman // Free Radicals and Aging / ed. I. Emerit and B. Chancet. Basel: Birkhanser, 1992. - P. 1-10.

195. Harman, D. Theory based on free radicals and radiation chemistry /D. Harman // J. Gerontol. 1956. - V.l. - P. 298-300.

196. Hollaender, A. Effect of X-rays on bact. coli I A. Hollaender // Proc. nat. acad. sei. 1951. - V.22. - P. 19-21.

197. Horgan, V.J. Chemical properties of X-ray activated molecules /V.J. Horgan, J. St. L. Philpot // Int. J. Rad. biol. 1964. - №8. - P. 165-167.

198. Horgan, V.J. Lipids and their Oxidation /V.J. Horgan, J. St. L. Philpot // Biochemic J. 1957. - V. 27. - P. 63-66.

199. Jilbert, D.L. Oxigen and living processes: an interdisciplinary approach /D.L. Jilbert. New - York. Springer-Vedag, 1981. - 401 p.

200. Little, J.B. Radiation-induced genomic instability /J.B. Little // Int. J. radiation biol. 1998. -V. 74. - №6. - P. 663-671.

201. Liuser, M.C. Revovery from the toxitic effects of irradiation /М.С. Liuser, R.J. Helber // Radiology. 1905. - №23. - P. 738-740.

202. Magwood, S.E. The absorbtion of somatic antigens of salmonella by polystyrene latex particles /S.E. Magwood, E. Annan // Canad. j. compar. med. veteran, sci. 1981. - V. 25.-P. 69-71.

203. Mead, J. F. Radiation-induced lipid peroxidation /J. F. Mead // Science. — 1952.-V. 115.-P. 470-472.

204. Morgan, A.R. Parameter of myelopoetic activity /A.R. Morgan, R.L. Cone, T.M. Elgot//Nucl. acid res. 1976. -V. 3. - P. 1139-1149.

205. Philpot, J. Attempted estimation of organic peroxides in X irradiation mice /J. Philpot // Rad. res. 1963. - №1. - P. 372-375.

206. Parizek, I. Deoxycytiding in urine as an indicator of changes after irradiation /I. Parizek // Nature. 1958. - Vol. 182. - № 4637. - P. 721-722.

207. Pry or, W.A. Free radical in Biology /W.A. Pryor. New York, 1976. - V.I. -P. 239-277.

208. Sahalfer, H. Mitogen-Activated Protein Kinases /Н. Sahalfer, M.J. Weher // Mol. cell, biology. 1999. -V. 19. - №4. - P. 2435-2444.

209. Schwartz, H.P. Studies of the electron transfer system. The role of phospholipids in electron transfer /Н.Р. Schwartz // Arch, biochem. and biophys. — 1963. V. 101.-P. 103-105.

210. Seno, Satumaru. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues /Satumaru Seno, Michio Yamamoto // Acta medicinue Okayama. 1965. - №19. - P. 59-61.

211. Seymour, C.B. High yields of lethal mutation in somatic mammalian cells that survive ionizing radiation /С.В. Seymour, C. Mothersil, T. Alper // Int. J. radiation biol. relaf. stud. phys. chem. med. — 1986. V. 50. - №1. - P. 167-179.

212. Sweet, J.P. Biophysical aspects of radiation quality /J.P. Sweet, J.K. Thomas // J. Phys. Chem. 1964. - V.68. - P. 1363-1368.

213. Takahashi, Y. Study on the passive hemagglutination reaction by the phosphotide M. tuberculosis /Y. Takahashi, K. Ono // Am. rev. resp. dis. -1961.-V. 83.-P.-386-389.

214. Tolmasoff, J. Superoxide dismutase /J. Tolmasoff, T. Ono, R. J. Cutler // Proc. nat. acad. sci. USA. 1980. - V. 77. - P. 2777-2781.

215. Wallace, R. The bentonite flocculation test in the assay of Nisserria antibody /R. Wallace // J. Immunol. 1970. - V. 16. - №8. - P. 655-659.

216. Wide, L. An immunological method for the assay of human chronic gonadotrophin /L. Wide // Acta endocrinol. 1962. - V. 41. - P. 70-73.