Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ПРОРАСТАНИЕ ЭНДОСПОР ТЕРМОФИЛЬНЫХ АКТИНОМИЦЕТОВ

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "ПРОРАСТАНИЕ ЭНДОСПОР ТЕРМОФИЛЬНЫХ АКТИНОМИЦЕТОВ"

АКАДЕМИЯ НАУК СССР ИНСТИТУТ МИКРОБИОЛОГИИ

На правах рукописи

КИРИЛЛОВА Ирина Петровка

П Р О Р А С Т АН И О ЭИДОСПОР ТЕРМОФИЛЬНЫХ АКТИНОМ Ж1ЕТОВ

(Микроб!!ол';гня - 03.00.07 ) ( Дпсоортл'.т па русском иоы?;*1)

А в т п оферот диссертации ш-1 ( оме у г-шгто;; СТ'.""1 гчI

к а нп и пагп (VI олог>пеек их

!К' у к.

Москио - 1074

1

%

í i ; í. ZI

АКАДЕМИЯ НАУК СССР Институт микробиология

На правах доходном КИРИЛЛОВА Ирина Петровна

ГООРАСШШЕ ЗИД0СВ0Р ТЕРИОФМЛЫШ МТИНОНИЦВТОВ

(мшчхХИ»«»™! - ОЗ. ОС1. 07) ! . (Дяоеврхацмя яашовна »а русском явим )

Автореферат / двосергации на сонскаме умиой отемни кандидата оиологичвоиц вадк

Москва - 197*

Работа выполнена в Институте микробиологии Ш СССР.

Научный руководитель: доктор йиологических наук Л.В.ШАКУПКИЙ

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

кандидат биологических наук В .11.Дуда

Диссертация направлена на офиииальт-щ отзив ни кафедру микробиологии Московского Государственного Унш1ерситета.

Автореферат I« зрела к ¡¿¿¿j^M^L iv<5 г. .

Защита диссертации состоится " &tCrtG>AjtJL- Т9'/5 г.

ja ьо ' ; ~

в гК> часов на эаседашш Ученого Совета Института микробиологии АН СССР tr. Москва,.Профсоюзная ул., дом 7, корп. 2) .

С диссертацией мо:;:но ознакомиться в библиотеке Института микробиологии АН ССГЛ1.

Учений секретарь Института микробиологии AJ! СССР ст.н.с., k.ö.ii. Л.0би,иЦйи4

/ Л.К.Оениикая

ВВЕДЕНИЕ

Эндоспоры бактерий впервые были описаны около ста лет назад. Их активное изучение началось спустя 60 лет в связи с необходимостью -повышения эффективности стерилизации для нужд медицины и пищевой промышленности..Сравнительно недавно процессы образования и прорастания эндоспор бактерий начали использовать.в качестве модели в исследованиях по клеточной дифференциации. Для изучения самих спорообразующих . организмов, их структуры и химического состава,-а также различных стадий жизненного цикла были привлечены генетические и биохимические методы. Делаются первые шаги на пути понимания ^регуляции макромолекулярного синтеза в процесса жизнедеятельности таких сравнительно сложно дифференцированных прокариот, как спорообразующие бактерии. Специалисты в.этой области знаний надеются получить ответы и на такие общебиологические вопросы, как сущность анабиоза и прерывность жизни, инициация и стартерные механизмы роста, биохимия, физиология и детерминация развития организмов.

Количество информации о спорах бактерий с каждым годок возрастает лавинообразно, однако, регулярный исследованиям подвергается весьма ограниченное число объектов, список которых включает штамма вэсШив врр, и 2-3 сюэгпанш ерр. Несмотря на" значительную глубину изучения материала, которой достигли в особенности исследования по аэробным спорообразу-еощиш бактериям, становится все более очевидным, что одним дальнейшим углублением знаний будет очень трудно решить все те проблемы, которые.-ставит перед собой отрасль науки, начинающая обособляться под названием "спорологив". К числу наименее ясных вопросов относятся условия протекания.и механизмы осуществления самых Первых этапов превращения покоящейся споры в вегетативную клетку (активация, начало инициации). Учитывая изложенное, представлялась плодотворной мысль о расширении круга объектов, привлечении для изучения первых этапов прорастания спор таких микроорганизмов, само наличие вндо-

спор у которых-еще совсем недавно казалось маловероятный, В1968 году было обнаружено, . что два термофильных ак-тпномицета , Thermoaqtinomycee vulgaris и Actino bifida dichotomlca , Образуют СПОрЫ,СИЛЬНОО?ЛИЧаЮ1ЦИеОЯ ОТ спор ' других актиномицетов и во многой сходные с эндоопорами Bacillus врр. .йарешияи сосредоточить свое внимание на изучении ранних этапов прорастания эндоспор указанных актиномицетов, о которых в мировой литературе к началу этой рабо-. тц ииелись лишь разрозненные и достаточно противоречивые сведения. • '■' * .- . "'■

Первоначально наш было 'рассмотрено прорастание спор .'■ различных ИТамков Thermoactlnomyсен vulgaris ■■ и Aotinobifid а dichotomies ■ в зависимости от состояния культур и условий tlx поддержааня, Поскаиьку использовавшийся организиы являлись термофилами; нам представлялось интересным исследовать влияние-температурных режимов на свойства:спор указанных актиномицетов. Далее нами изучались.состояиие покоя и рашше этапы'про растай К« спор Т. vulgaris.". W JUdichotomlca *. акт«-вация и инициация.-Эксперименты и анализ их результатов позволили выявить и охарактеризовать-отличительные особенности процессов выхода из покоя эндоспор актиномицетов. Создается, впечатление,: чю изученные, споры,помимо обычных, характеризуются новымии неизвестными ракее-для эндоспор бактерий путями, которыми покоящаяся клетка может превращаться в вегетативную.:, - '■ ■; ' v ' У

' Диссертация состоит иа'двух часгей;;"Сйэйра литературы" и "Экспериментальной часта"..В первой главе "Обзора литерату ры"-изложены сведения об экзо- и эндоспорах актиномицетов, а также охарактеризованы культуры актиномицетов, образующие "эн доспоры.В последующих трех главах рассмотрены данные о покое и ранних этапах прорастания эндоспор бактерий; активации и -инициации,изложить которые мы считали целесообразным для про ведения последующего сравнения протекания процессов прорастания у эндоспор актиномидетсв и- бактерий. В "Эксперименталь ной части" работы описаны методы исследования и подученные 'результаты, изложенные в семи главах.Последний раздел этой

части посвящен обсуждении полученных результатов «анализу отличий поведения эндоспор актиномицегов от поведения эндоспор бактерий. Работа заканчивается выводами.

Э К С II В Р И а Е Н Т А Л Ь Н А Я ЧАСТЬ

. МАТЕРИАЛ И (МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ' !

/ •

■ / '

.В качестве материала исследования использовали ряд штампов двух видов термофильных актявомицетов; Thermoactinomycee vuleeria 136,605,1005,2725,2243,2601 И ■ AetlnoWfUaflicho-tonica -326,127,188,15Э5,2376. Культуры были выделены на среду Космачева /Агре,1973/» а затеи поддерживались'на пеп-■ тоино-кукурузном агаре (ПКЛ}/Раутенттейн,1957/. Для изучения влияния состава-питательной среды на:свойства формирующихся coop;помимо ПКА использовалась синтетическая среда ..(модифицированная Череда Хопвуда, Hopwood a. - Ferguson ,1570) С добавками дрожжевого автолизата» аминокислот, витаминов или ионов Са^+ и»«2^.

. Культуры >:Т.vulgaris в зависимости от условий опыта вы .ращивали на ПКА При 55° 16-72 час», при 37° - 72 час, ,на ойн тетической среда яри 55° - 72 чао., культуры ¿.dichotomies выращивали на ПКА при 55° <(8-50 час.

В ряде опытов использовали и сопоставляли по некоторым свойствам опоры, находящиеся в двух различных физиологических состояниях: свежее формированные, не тдаергавмеся охла* декию, значительную'часть популяции.которых составляла фракция покоящихся, непрорастающих в благоприятных условиях спор и охлажденные, после выращивания выдержанные 20-48 час при ' 20°, больная часть популяции которых была-епоообаа к прорастанию; :'' ■

U тех случаях, когда мицелия со спорами необходимо было снять с поверхности срады, вапричер, для.пригогоклеяяя суспензий опор, посев производили на поверхность целлофанового диска,наложенного на ПКА в чашке Петри. Образовавпувся после инкубации пленку мицелия со олораии можно било легко снять с

Ч

целлофана с помощью иегаллического шпателя без загрязнения материала веществами питательной среды,, ■ . . .. ■■'-..■:

.В ряде случаев использовали биомассу, выращенную непосредственно'на поверхности питательного агара, Такой матери- : ал Сыл удосен в-опытах, келью которых Окло изучение , микроскопической картины прорастания спор, изменения процента ироросших.спор в.зависимости от времени и условий хранения культур, влияния отдельных факторов, активирующих прораста-:■ нив спор. . : . ■ ": , ' . ' . ' • "

Люминесценция-гигантских колоний нао'людали по методу Звягинцева с соавт./196^/.

При изучении действия паров различных веществ на интакт яыа споры получили спорулирующую культуру на целлофановых , дисках, наложенных на 1ЖА. В эксикаторы или, анаэростаты типа Щ "помещали целлофановые диски с культурой или отпечатки . спор.на предметных.стёклах, при приготовлении отпечатков с по pu отделяли от .мицелия. Эксикаторы или анаэростаты заполняли газами или парами.испытываемых веществ,к, в случае необходимости, поглощали остаточный-кислород щелочным раствором . пирогаллола. ■ ■ \ ■ •'

Для изучения термоустойчивоети готоьшш суспензии спор, по методу Калакуцкого и Кирилловой /1%5/ с применением маг-i нитно-стрикционного деаинтегрутора.типа ь:зе(мощность 20 вт).

В опытах по активации и инициации.сг.ор применяли суспен зии спор, приготовленные при помощиручного, дезинтегратора типа Иоттера-звельхайма со стеклянным пестиком или стеклянных: бус диаметром мм. . :- ■ ^ ' '*'■■

- При определении термоустойчивости спор суспензии (но ' 0,5мл) прогревали в запаянных ампулах.30 мши с момента установления ;требуемой температуры, затеи;0,05-мл: высевали на ПКА.и после инкубации в течение Л8-55 час. при:55°.учитывали наличие роста. '•' '

При изучении активйрумщего действия тепла прогневали но Z мл суспензии спор в пробиркахЛО," 2Q или 30 мин. Результаты учитывали почнслу проросших спор. : '

.Исследование прорастания спор проводили путем высева

биомассы культур или спор из приготовленных „суспензий на поверхность НКА. в. чашки Петри таким' образ о и, чтобы в поло . зрения было 100-150 спор..Процент лроросиях спор (не менее 300, спор в разных полях зрения) подсчитывали с поиощью фа- , зово-контрастного устройства и микроскопа ИБИ-3 (увеличение 25 х 20 X ■/ . : " .. .'• ■ . - *

Инициацию спор проводили в жидкой средес рыбным экстрактом или в растворах индивидуальных веществ; приведенных в табл.1. ¿¡се растворы непосредственно перед началом опыта доводили до рН 7,0 с помощью ОД вНаОН И О,In HCI. Об инициации спор судили по падеаив оптической плотности суспензий при инкубации в указанных: веществах. Отбор проб и определение оптической плотности суспензии (ФЭК-56, кювета 1 =0,5см светофильтр № Сопроводили с интервалом в 20 шин..

- В опытам по изучению влиянии ряда веществ на процесс выхода спор из покоя суспензированные с помощь» стеклянных бус споры помещав в водные расгооры солей; Hgci2- бн, саС12 - бн, Kaci -бн, кс1 -4н; или в растворы аскорбиновой кислоты (2,0 г/л), фёнетилэвого спирта (10~г, Ю-3, 10~^моль), тиогли-. йолята натрия (20 г/л), холевой кислоты (насьвденнвй водный растао$ на >0 мин., 3 и 2'+ час^После чего учитывали число спор, способных к.Прорастанию на ШСА.

. Окрашивание спор проводили расгаорои метилен оз ой сини (1:1000) и по методу Пешкова /1955/.

' РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Зависимость прорастания спор от условий-■ ' " культивирования и состояния кулыуры.

Бремя развития культур зависело от состава питательной" сроды. На синтетическоп среде т.vulgaris заканчивал цикл развития при 55° через 48-72 чао., на комплексной среда ато время составляло у Т.vulgaris— 24 чао.,у A. dichotomies -48 чао, при 55°. Споры Г.vulgaris независимо от среды формирования, прорастали на Ила за X,i-2,0 4ac.,8-A.aicho-tomica за

2,5 - 3,0 час. при.55°. Время, прорастания у'всех'проверенных итаймов обоих актикоиицетов било постоянно, но число спор, способных к прорастании, сально варьировало. . ,

Исследуемые актиноияцеш при длительной лабораторией культивировании.сильно изменялись: расщеплялись на несколько вариантов, теряли воздушный шцелий, образовывали мало спор, среди которых лишь небольшая часть спор была способна к прорастаний, Восстановление утраченных свойств, в том числе и способности спор к прорастанию,можно было получить при удлинении интервалов иекду пассажами' и при проведении "дегенерировавших'! культур; через стерильную почву.

Способность спор к прорастанию зависела.от величины относительной .влажности (% ), при которой их хранили после получения. Как показали эксперименты,.резкое.снижение ■числа прорастающих спор.происходило при а^ » 0,8 и некоторое снихевие при; 0,4. и 0,6., что, воэко&но, связано с . активацией и последующее шшциацией .(¡пор в определены* границах относительной влажности / Те1Ле11 ,19Ь8; МагвНаП ■ в1. ,1963; Лаптева с соавт.,1У?2/. - .

На основании.полученных даиных бил разработан регламент получении и хранения исследуемых^культур. Для работы производили отбор вариантов первого и второго пересевов, которые' расщеплялись'в меньшее степени, чем обычные культуры, являющиеся смесью нескольких вариантов. Отбор осуществляли как из ионоспорових рассевов, так.и из гигантских колоний, путем отсева.спор из морфологически однородных колоний или секторов гигантских колоний.с хорошо развитым воздушным мицелием и обильным спороношением. В случае т.чиХцаПв эта работа значительно упрощалась, поскольку мог быть применен'разрабоган-ний нами люминесцентный: метод, который позволял оыстро проверить большое число колоний и в некоторых случаях различить визуально не различающиеся типы. Как правило, популяции с . большим числом спор,'способных к прорастанию,,находились в секторах и.колониях, люиинесцирующих оранжевым,коричневым и коричнево-фиолетовым цветом.

Споры отобранных вариантов сохранили в сухом виде(воэ-'

душно-сухое состояние или кзд безводным СаС12), поскольку в таких условиях при длительном хранении они менее всего из- > менялись.Соблюдение'указанных условий позволяло получать .в' дальнейшей работе воспроизводимые результаты.

Популяции спор изучаемых организмов характеризовались гакде значительной степень» гетерогенности, которая проявлялась в различном'времени, необходимой для прорастания разные фракций спор популяций, и в изменении, способности к прорастанию отдельных фракций в ответ на различные воздействияЛесть . спор популяции прорастала на питательной среде (ПКА) без каких-либо активирующих воздействий, часть - только после предварительной активации и,наконец» некоторое количество спор всегда оставалось непроросшим. В последующей работе, в зависимости от конкретно анализируемого вопроса, нами использова-. лись культуры о бпределешшм соотношением-указанных фракции в популяциях спор.

Поскольку изучение эндоспор бактерий часто ведетсяна ограниченно» числе штаммов, то трудно соотнести степени гетерогенности популяций-эндоспор бактерий и изучаемых актино-мицотов. Однако, кажется, что популяции спор sтайнол Bacii- \ lus ерр , ,.используемых в большинстве работ / нi-tchina ДЭ68Х сравнительно менее гетерогетш, чей таковые : т.vulgaris' и

A.dichotomica , хотя встречаются и исключения,, например, ■

B. a te arothermopblluc ¿NCA 151В (Pielde, 19^3) ' , '

■ ' 'i ■ . "

1 2.tloKotl '■'.■'

'* ' ■ ï ■ '

Эндоспоры термофильных актиномицетов Т.vulgaris и

A.dicho tónica . в отличие от спор других актиномицетоз и . . аналогично эндоспорам бактерия могут находиться в состоянии конститу гявного покоя. Споры с в ежеви ращенных культур указанных актиноиицетов после перенесения на свежий ПКА,как прави-„ ло, не.прорастают, -

Сохранению локоя спор изучаемых организмов способствует температура культивирования организма (¿7° ил# 55°) и низкая влажность атмосферы, в которую споры помещают сразу.после ■

• окончания их формирования. '■'' .л

Опытами было показано, что степень покоя спор т.vui^a-rie зависит от аминокислотного,и ионного с ос та ва ср е ды вы-рацивания.Бшт подобрана синтетическая.среда, с помощью но--. ; торой.было изучено влияние различных компонентов на глубину" покоя формирующихся спор;; Большая час?ь популяции спор,образованной на этой сроде без добавок,сразу после инкубации находилась" в состоянии покоя. Сходным образом вели себя споры, сформированные на среде.с витаминами. Несколько большее.число проросших'спор наблюдалось в популяциях-со сред, содержа- ' .дих". добавки сиеси аминокислот и-дрожжевого авто ли за та. В кон-; . тральных, популяциях спор с.ИКЛ'фракция покоящихся. спор .была ■ наименьшей.. . - - , • ' J.'г: / '.:■-. '■'■■ - г : -'• ■

. Введение в синтетическую Череду ионов »!g?Vi Ca2t значительно, влияло как на глубину покоя спор T.vulearjH ,' так и: ' на рост, культур.'. На минимальной'синтетической: среда организм рос скудно, добавление' Са^* и в особенности Мс2+:стимулиро- -»ало. рост.'. Изучение прорастания спор с упомянутых, сред пока- . зало, .что наличие".ионов-i среде выращивания снижает, степень hoкоя популяций спор (рис.1),' причем фракция.покоящихся спор в популяциях, сформированных на синтетической среде с Mg^obi-; Л а' лишь немного больше таковой в популяции, сформированной-, на-комплексной среде (JIKAJU- Популяции спор,„сформированные на синтетической среде с Са2+, -по данному признаку занимал^-.. промекуточное положение между спорами с синтетической среды "' о Mg2* и'спорами с минимальной'синтетичеокой среды; После вы-.-хода йэ покоя 'количество проросших спор, сформированных на ■ ' средах с ионами Са2+ или tig +практически.было равно числу проросших спор" с 1ЖА и 'заметно превышало величину вышедших--■из покоя спор а популяции;с"контрольной,?миниыальной синтетической среди, Йто соотношение, как видно:из 'рас Л, сохрани- -'лось-в-популяциях спор обоих- исследованных штаммов. Тикш". образом,, добаьление .ионовMg2+u »'минимальной синтетической среде:для "выращивания оказывает стимулирующее влияние на рост культур и снижает:глубину-покоя спор,сформированных ка синте-

ТическоЯ^среде., - ; • -

«л

СВЕИЕСФОШРОВАНШЕ

Г

#136'.. #2527 ,

ОШЖДЕШЫЕ( Э СУЙК ПРИ 20°)

N

#136

#2527

Рио.1. Влияние состава среды выращивания т.то1£вг1в . на.степень покоя и прорастание опо^.

: Ш - ИКА ■

'НИ| - синтетическая среда с «в - » - м - в Са'

2+ 2+.

Ыы lie йог л и обнаружить-литературных данных о влиянии указанных факторов непосредственно на глубин; покоя бактериальных эндоспорt однако есть сведения о влиянии состава среди »а другие свойства спор, связанные с покое«, например такие, как термоустойчивость. Аминокислотный состав среды ока-аывал существенное влияние на устойчивость к теплу спор в. megatavium / Kendo et ól,,1974b / И B.cureus/Tanl efc al. ,197V Введение в питательную среду культивирования ионов кальция, как правило, повышало устойчивость бактериальных спор к те- . плу, в то время(как добавление, ионов магния в большинстве описанных случаев не' влияло на термоустойчивоеть бактериальных спор /¡iueiyaiuai 19511 Amalia a. Ordal, 1957/.Результаты наших опытов показывают, что наибольшей термоу'стойчивостью обладают споры, сформированные на ПКА, споры с синтетической среды ,видимо, были не вполне полноценными, их термоустойчивость была наименьшей. Однако введение в состав среди" ионов кальция или магния увеличивало териоустойчивость спор . т.vulgaris . В отличие от большинства изученных бактериальных спор, споры T,vulsari3 становились гораздо более устой- -чивыми к теплу- при добавлена в среду культивирования ионов ■ магния, а не'кальция. .. - ••

Нами также изучалась устойчивость спор т.vulgaris к ряду химических агентов, таких как: метанол, фенол, 'формалин, декан, толуол, хлороформ. Выдерживание покоящихся спор Т.vulgaris в парах декана, толуола и хлороформа.в течение 144 ча-' сов к в парах метанола и фенола в течение 120 часов не снижало число жизнеспособны* спор в популяции. После выхода из покоя в популяции, подвергнувшейся обработке указанными агентами, было способно к прорастанию столько же спор, сколько и в контрольной,.необработанной популяции. Ноздействие паров формалина убивало некоторую часть.покоящейся популяции спор,но значительно меньюую й за более длительное время,чем» популяции,вышедшей из покоя. Полученные данные свидетельствуют о высокой устойчивости покоящихся эндоспор актиноыицетов, как и эндоспор других бактерий, к испытывавшийся веществам.

Экспериментальная проверка ьозможного присутствия в епо-.

13 -

pax т.TOigarie газообразннх веществ,иигиоирующих прорастание, не обнаружила подобных ингибиторов прорастания спор.

3."Активация

. В процессе выхода из покоя эндоспоры а/тинспицетов проходят те же стадии, что и эндоспоры бактерий) активации,инициацию, вырастание. В отличие от спор бактерий,как было обнаружено нами, эндоспоры актиномицетов могут выйти из покоя только после экспонирования действию пониженных температур. ■' Оптимальные температуры;',при которых имеет место активация спор к прорастанию, лежат ниже минимума для вегетативного роста организма и близки к 20°С, независимо от температуры формирования спор (55° или 37°)(Рис,2), Воздействие высоких тем-' пера тур, являющееся наиболее'универсальным и зффективвыЩпо' литературным данным) фактором активации спор бактерий, не но-, гло заменить охлаждения в наших-опытах, в доступной нам литературе по бактериальным эндоспорам мы не могли обнаружить > терминов, которые могли бы быть испольэоганы для характерно- . тики обнаруженного феномена, поэтому определили его, как.'

100

80

S 60

ai

at

с* о 40

<а

О.

& 20

tí

0

Время,часы 24 43 72 96 120 Рис.2. Выход ИЗ ПОКОЯ спор 5.ти1ваг1е 136 при разных температурах в атмосфер? кислорода и инертных газов.

Атмосфера кислорода: 1-20?, 2-4°, 3-37°, 4-55° Атмосфера.инертных газов - 5-20°

ет явление-"дозревания" ( aiterripening ), известное у некоторых -грибных спор '/SusBinan -. ,1966/» Общность,заключается : в ток, рчто необходимым условием для дозревания,как 'и в нашем случае;'является экспонирование спор и.(или) культур действию пониженной температуры. Если иметь.в.виду бактериальнне эндоспоры, то обнаружение у них описанного явления ставит вопрос „о возможности протекания сравнительно ранних процессов, частично альтернативных активации в общепринятом, толковании этого термина.- ; ■ '. '"',-'„ л ■■'■■■

1 На возможность существования феномена, подобного описанному,^ эндоспор бактерий может указывать фанг/, отмеченный . Пауелл./ Powell ,1950/..'Изучая прорастание снор.бактерий,она обратила внимание на то,что старение спор d.subtilis в 'вод ных суспензиях.шло.наиболее быстро при 20°,' а более' низкие; температуры задерживали процесс. Однако, в.Bubtilis ,-мезо-фильный организм,;и'температура '¿0° входит в интервал его физиологических температур'. - . .■'■ v.

< . Процесс низкотемпературной активации протекал в самих--спорах . Tivultaria . и A.dicho to mica и. не : требовал сохране-г-ния контакта спор:с мицелием. Для его осуществления;была необходима :прежде всего достаточно ьысская влажность».

Факторы,-предположительно препятствующие.элективной гидратации спор,например,;газообразные или жидкие "декан,толу ол,хлороформ, ингибировалиниакотеиперцтурную активацию,И наоборот, стиму ляций процесса наблюдалась в присутствии во-ществ»' легко раствори!щх'в воде,- таких как метанол,'^ацетон,/ и при. применении.воздействий, например, суспензированияспор в воде,^.которые могут способствовать, кик можно предположить оводнанил гидрофобных участков в споре.. Яаиоолее элективно';. было оуспенэирование спор T,Truiearia в.концентрированных ■ растворах '.KgC^ и СаС12(рис.3),' которое'приводило-1 практически мгновенно к выходу из покоя значительно^части спор популяции. ; .■. у-

/Известноi что споры: бактерий при.воздействии водных паров также могут активироваться :К прорастанию; / üyatt a.Leviп-воп"... ,1968/, а Льюис / i.ewis ,1969/ указывает,. что возцейст-

г" ' Время ^часы) , .

.Рис,3..Низкотемпературная активация'прорастания -; спор 1.тц1еаг 6-при су с пе и зиров а нии » ; ,

присутствии ионов. ■ '.

-----интактныё споры {контроль I)

Суспензии спор-в воде {контроль 2), .

- .,, , ■ _-. И6С1г (бн )........... с«с1г (6н), '

' —---КаС1 (6В ), КС1 (4Г ). •

вие водных паров может приводить в-конечном.результате к-активации, деактивации,„инициации илитибрли бактериальных> " спор. ■■■ .'- '

. Вторым необходимым условием-нкзкотемпературной.актнвации эндоспор актиномицетов:является:наличие.кислорода1 в; составе"^ газозой фазы. Как;показали.эксперименты, в инертных-Газах (азоГ,гелий) и-низкокипяиюс'углеводородах (смесь С^) за одно и то же время выходило из покор вдвое'меныаее количест-

во опор, чем в воздухе или кислороде. Парциальное давление кислорода, очевидно, не оказывает влияния на ход процесса в изученном интервале, о чем свидетельствуют два ойстоятельст-ва.Во-первых,.48^ спор-Приобретало способность прорастать во врем медленного поглощения пирогаллолом остаточного кисло-* рода, присутствовавшего в инертных газах,и,во-вторых, .скорость выхода спор из покоя Сила одинакова в воздухе и кислороде' Для выхода опор Bacillus Spp, ИЗ СОСТОЯНИЯ ПОКОЯ, судн по литературным'данный,.не требуется кислород,хотя В последнее время-стали появляться сообщения об ингибиро-ванип кислородом инициации спор некоторых клоогридий/ Garath-chandra et ai ,U9?V.Потребность в кислороде для выхода из покоя слор т.vulgaris - важная отличительная чёрта их поведения.

'В результате низкохемнеритурной активации споры теряли устойчивость к теплу к химическим агентам, Пары фенола и формалина не влияли'на выход спор из покоя, но по-разному действовали на.поконщиеся и'ооижденные спори. Первые были гораздо устойчивее к указанным веществам, чем.вторые, что' может свидетельствовать об изменении проницаемости в'процессе низкотемпературной активации.Интересно, что действие фенола проявлялось только в присутствии кислорода, и особенно чувствительны к нему споры, выходящие из покоя.'Можно предположить, ЧТО ВЫХОД criop' T.vul^arie из покоя сопровождается процессами, вкоторых участвует кислород,» повышенная чувствительность спор в этот период к фенолу может быть, связала о действием последнего на эги л^рцессы. Ч

Известно,'что. устойчивость к различным воздействиям активированных бактериальных спор не изменяется, она уменьшается на самых перных этапах инициации /Uouia а. Dring ,1972;/ Такшгобраэоы, споры, изучаемых организмов,' подвергнутые низкотемпературной активации, по своим свойствам били аналогии ны спорам бактерий, прошедший первые этапы инициации.Процесс низкмемпературной'активации был необратим в том смысле, что нам ни рагу не удавалось наблюдать деактивации.спор. 1

Споры подвергнутые длительному охлаждению, не нуждались

в каком-либо другом активирующем прорастание ."воздействии, в том числе.и тепловом. Более того вследствие снижения термо-~ устойчивости, прогревание при сублетальных температурах било губительно для-части спор-популяции, в результате чего число спор, способных к прорастанию не увеличивалось, а сокращалось. Отсутствие сведений об изменении свойств эндоспор ак-тиномицетов. при охлаждении, несоответствие их поведения -на ранних этапах прорастания наиболее широко обсуждаеиым схемам, видимо и явилось причиной^чрезвычайной противоречивости данных об их.тепловой aKi'Duaufti', полученных другими авторами в ходе исследований, выполнявшихся одновременно с нашими, Пер- ' воначально описанный эффект активации cjiop т,vulgaris и а. dichotomic^ С-использованием теплового шока / Cross et а] , 1968/, а несколько позднее T.Bacchari(Lacey ,1971/, в доследующих раСотах тех же и других авторов iie подтверждался; споры не нуждались в прогревании для прорастания и часто гиб-'ли после воздействия высоких температур /Attweli е-t ,-аД972; Attwell a. Grosa ,1973; 1'oereter ,1974/. ■ _

^ В этой связи важной представляется характеристика условий, в которых тепловая активация может быть наблюдаема, а также условий, исключающих этот феномен.

Эффект тепловой активации можно получить только на спо-.. pax тех популяций, значительную часть которых составляет по- s коящаяся фракция. Это могут оыть кратковременно охлажденные свежеофоршроллниис" споры, хранящиеся при низкой влажности, . или споры популяций,_плохо выходящих из покоя при низкотемпературной активации. суспензии спор должны готовиться по возможности быстро испонощью легкого механического воздействия.. Прогревание следует проводить немедленно после суспен-зирования. .

Тепловая активация не может быть продемонстрирована на спорах,(1J подвергнутых низкотемпературно и активации, ^суспензированных с помощью сильнодействующего агента, например,, ультразвука, (3) длительное время хранившихся в водных суспензиях. В этих случаях споры теряют термоустойчивооть и гибнут при воздействии высоких температур. .

Изучение кинетики-тепловой активации свежесформирован- -них-опор Т.ти1саг1а показала, что максимальное количество спор активируется к прорастанию ярогреваяяем при ХОО° между:

6 и 18 мин. , 1 ■ :. ",. ! :

. Нами^было обнаружено;, что применение-сильных активирую-; щих:воздействий (например, ультразвука) приводит:к падению термоустойчивооти у эндоспор актинемицетов. Выше отмечалось; что снижение устойчивости к теплу у спор бактерий характеризует ранние.этапы инициации,,а не,активации.,Полученные дан-вые^могух свидетельствовать^ чрезвычайно легком и быстром.' переходе эндоспор'актиномицетов^в результате примененного' воздействия из активированного состояния-в инициированное.^ Разграничение, этих двух ¡состояний; достаточно трудно провести, 'экспериментально, в .овязи^с'чен Ьесьна редко удается наблкИ -дагь деактивацию эндоспор актиномицетов. >"

Ввиду того;; что различные - воздействия в значительной:- . степени,влияют.на;степень готс)вности спор к прорастанию, появляется, необходимость для учёта степени активированности ввести понятия активация I.', П . Ш

: Кратковременное охлавдениё является необходимый первым ■ этапом-активации:(активация I), после.которого возможна даль нейшая активация прорастания^ с.помощью.теплового воздействия (активация П) и,: наконец,, длительное охлаждение приводит.:к■-. низкотемпературной активами; (активация В) спор. . '

; ■ Ч,Инициация и старение ■

, В дайном раэделеработы изучались:условия, в которых воспроизводимо . могла быть .наблюдаема ,инициация спор г.тид.--сагДз .'■ - . . ■' ... _: . ' ' •,. ;.' '

- Во времяУинициации споры ,т.тги1ёагХв ■ при наблюдении с -фазовыйконтрастом тёпшеюч, теряют светопреломление; оптиче окая;плотность 'суспензий умепыизется по сравнению .с исходной на: 50-60^. Следует" отметить, .что максимальное; падение оптиче скои плотности на"70-72^ наблюдалось у суспензий:спор,оформи рованкых:на'синтетической среде с ионами магния.-Столь глубо

19 г

кое падение оптической плотности в процессе инициации,судя по : литературный данным,:не отмечалось у суспензий.бактериальных'.'спор.К процессе инициации спор T.vui^nria изменяет- ' ся их способность к окрашивания по методу Пешкова; если покоящиеся и активированные споры окрашиваются в синий цвет, то инициированные - в красный. ■'■.,■ 1 ; • ,

Стадия инициации у спор изучаемых.организмов протекала сравнительно быстро- за несколько минут. Время инициации несколько варьировало у раэныхгштаммов, ко,для каждого штам- ' ма при данной температуре было постоянно ( т.vulgarle '268120 : минт. vul^aris 136 - 4Û иин. ,55°С). .Интервал. рН, в котором могла осуществляться инициация спор ï.vulijeris. ', .как и у спор бактерий, был несколько ширё, чем тот, в котором организм мог расти'. .На рис.4.показано, что интервал, оптимальный длп инициации спор т.vuieariV - 136 в рыбном бульоне, лежит в области значений рН - 6-8, а в глюкозе-рН - С-9(па-дение оптической плотности при'рН 1-3 вызвано коагуляцией : суспензии, как'Показал микроскопический /контроль). Ji. зависимости от инициирующего сец^стзз спори могли инициироваться "." 'в. интервале.plt 4,5,- 10,0, Uû-видшоиу, отот интервал колеблется также ù в зависимости от^штаааа изучаемого иктиноми-цето ,: так кик по данниа Фоерстера / l'oorater ■ ДЭ74/, к со- • жалеШш, не ; у ка a ai? того вида'термофильного актиноиицета,с „ которым он работал, инициация эндоспор иогла осуществляться, только при щелочних значениях pli,.а оптимальными.были.рН -.8,и - io,G. • • " -.;■':.■-.V.". '

._"'■■/ Студия'1 инициации спор изучаемых организмов оказалась чрезвычайно чувствительной к "изменению температурного режима. '■. ;Как показали наши "исследования, крайние значения оптимального::, интервала температур инициации ( oj't *- 55°-70°, тах 80°)выше' максимально;] томнературы роста, ранее установлённойдля этого организма (66°) /Агре,1ЭС4/. ■■ ' ' ■ "

- ■ : Скорость инициации.находилась в прямой зависимости от■ температуры инкубации:.снижение температуры с 55°.до 37° увеличивало время инициации спор в суспензии более чем в'6-10 раз а при .32° инициировались лишь'единичные споры в течение не-

■ . г - ■ г . Х . / J ' ' ■ - . ''

§ ^iio

к

s 90

М 70 n -

*-* 50

<a c=¡

?0 Рис

2 A 6 8 10 12 pH А.Инициация спор T.vulgarie' lí6 при различных.

■ • PH -- —. инициация в глюкозе,(ОД моль)

--- — .инициация в рыбном бульоне, , .

скольких дней. Проведенные эксперименты показывают, что слабый и часто невоспроизводимый рост культуры при температурах лежащих около минимальной границыдля вегетативного роста, -определяется невозможностью прохождения большинством спор в популяции стадии инициации.* Споры, прошедшие стадию инициал ции при повышенных температурах (55°-80°), вырастали и образовывали сплошной газон:вегетативного мицелия.после снижения температуры до минимальной для роста (27° - 28°U) в течение 48 часов, вместо обычных 14-30 дней;

Изучение кривых кинетики падения оптической плотности при инициации спор T.™igarie , полученных при разных температурах, позаоляет предположить, что указанная стадия апдо-спор термофильных актиномицетоз, как и у спор бактерий/ наchi meto et al ,1969/, протекает в два этапа; первый не связан с изменением оптической плотности и требует высоких температур,

во время второго этапа резко падает оптическая плотность суспензий,но высокая температура уже не требуетсй.и температура инкубации ыожёт быть значительно снижена. Поскольку,в отличие от активации, инициация является по Всеа,данный'знзи-матическиы процессом, полученные результаты могут свидетельствовать об участии в процессах инициации спор т.vulgaris ферментов с различимая темпера ту рными oi-тииуиаии. .

Бактериальные эндоспоры, в отличие от ¿эндоспор октипо-мицетов, инициируются в интервале температур, значительно более широкой, че;л тот, л со то ром- может осуществляться вегетативный рост организма, причем понижение темнёратуры, вплоть до не препятствует инициации / Knaysi ,ХУ64/. ' Нще одной особенностью инициации спор т.vulenris ,как. установлено нами, одновременно и независимо Кроссом/ Attneii а. Огоэз ,1973/,на позднее Фоерстерои / 1?оегк».ег ,1974/,является отсутствие избирательного отношения к веществом,индуцирующим прорастание, - подавляющее большинство использовавшихся нами веществ визивало инициации активированных спор в ■ суспензиях (табл.1). ■ '

Бремя инициации дли данного штамма не зависело от природы инициатора. Одники, реакция суспензии спор на различные инициаторы большой степени определялась временем ее храпения.'Споры изучаемых.организмов, в отличие от бактериальных эндоспор /1971/,инициировались в простых системах1 (как правило,в каком-лноо одной простом веществе С небольшим количеством u^ui.). 1?шшсе сооощсние Эри к со к/ Ei-lk-

воп об ОТСУТСТВИИ инициации спор Т.vulcaria в Д -

аланине й адеиоэине, по-видимому, объясняется тем, что,указанный автор использовал споры, не прошедшие .стадии низкотемпературном активации. ,

Viiitu)>.ccbh тот факт, что из вссх пснытанных веществ инициации) спор Т.vulgaris но индуцировали только двухосновные аминокислоты: лизин, аргишШ, - которые, как известно, часто необходимы-дли иплукции инициации спор бактерий (как правило анаэробов)/b'lijloka a. Frank ,1966f Wailee a.Wyatt ,i97i; iiriratliutiiitiura fit al. ',1974/.

"' - ■ 22 ■;■:■ л

г ■ ' Таблица I

Инициация спор т.уигеаПе 136 в растворах /

различных инициаторов

~~ Т Шадание 1 ^ ! I Падение -

■ ; Вещество . ! оъ* (в % Г Вещество 1 сш* (в %

I к исход- I . ' 1к. исход-

■ • 1 ной 1 - I ной .

Аминокислота • Углеводы и спирта '■: -

1 - цистеин . 39 :Фруктоэа 50

1 - гистидин, 53 дульцит . " ад

1 - норлейцин ■. ЬО ■ арабиноза ъь ' :

1 - гидроокси- 50 , инозит. 50

.. пролин 1 . ■ ■ - ■

1 -цистгин • 43 мапвит 54

1 .- асларагин 1 46 сорбоза 53

1 - серии 44 глюкоза 50 ..■.-.

Г - глутаиин . ,50 - ксилоза 50

1 - аланин - .50 . сорбит . 57

& - аланин.' рамноза 55

¿1 -'аланин . 52 лактоза 56

1 - треонин 50 трегалоза 51

1 - ориитин 71 - галактоза , 70 :

1 - аргинин - 80 мальтоза 5В -- :

1 - лизин ■: ^ 100 инулин - 80

- ' "раффиноза 75

Нуклеогиды " -..':. Соли :

. Аденозиндифосфат ' 59 ; КаС1 44

Аденозинмонофосфат 50 * КС1 .50

■' ■ СаС1? , - 55 ;

*)св -оптическая плотность суспензии спор.

. Поведение эндоспор те р но фйль н ых.а к тин омиц е то в в водник ^суспензиях-тан^е отличалось от ловедеяиЯ большинства бактериальных спор; споры актиномицетов,в суспензиях, очень быстро старели. Старение выражалось в увеличении степени'паде- , ния оптической плотности суспензий при последующей инициа-' ции, котороеобусловлено увеличением числа инициирующихся : спор;. Старению подвергались споры, прошедшие этап низкотеи- -пературной активации в.инта'ктном виде или в суспензиях.Ста- . рение спор происходило как"При пониженных (+4°,+20°С),тан я повышенных (+55°) температурах,"однако,в отличие от низкотемпературной активации оно ускорялось не поли¡кенкымк температурами, а оптимальными для роста. Суспензии бактериаль-кых'зндоспор, в отличие от актиномицетных, стареют лишь.после продолжительного хранения / Хеупап а, З^епсМк ',1%9/. ;

^ ; 5. Устойчивость спор Т,учТг:аг1о к тепловой

обработке на разных стадиях прораста'йин.

: '■;■.■: Крайней температурой, после воздействия которой в .течение* 30 минут еще удавалось получить,рост культур при высеве прогретой ' суспензии-покоящихся спор на 11КА, была 140? Подсчет числа прорастающих спор в этих опытах провести не удавалось, .так как после указанного воздействия сохраняло , , жизнеспособность! лишь очень незначительное число спор, очевидно,принадлежащих к третьей фракция (сверхпокоящихсн) спор, ■ составляющей не более 5;-. от о^цего,числа спор. Основная часть популяции была .менее термоустоцнва. Поскольку спори г1е' при охлаждении.активируются, исследователь^ проводя опыты по изучению--термоустойчивости в обычных условиях,всегда имеет "дело с популяцией спор, находящихся на той или иной - -стадии активации. наших* опытах'основная масса спор 80^), подвергавшихся кратковременному охлаждению (активация I),по— .гиоала "после прогревав при,100° и течение 50 минут. Споры, подвергнутые длительному охлаждению (активация Ш), были еще менее термоустойчивы. Уже десятиминутный прогрев при 100сбыя

губителен для них. - ^

С наступлением стадии инициации термоустойчивоеть спор вновь снижалась. Инициированные споры теряли казнеспособность после прогревания при 80° в течение 30 минут. Наименее термоустойчивы были споры на стадия вырастания: они не.выдерживали прогрев при 70° в течение 30 минут.

Таким образом, степень термоустойчивости изученных спор зависит от их физиологического состояния и уменьшается в следующем порядке: ■

покоящиеся активированные X — активированные И —-■инициированные -»-вырастающие..

6. Температурные режимы формирования и прорастания эндоспор т.уу1ргдг1э„

Изложенные в предыдущих разделах результаты были получены нз спорах, сформированных при,55°С. Снижение температуры инкубации культур до 37° приводило'.к-замедлению развития: формирование спор заканчивалось не к 18-24 часам (55°$, а к 48 часам. Изучение прорастания спор /сформиро-

ванных при 37?..показало, что эти споры сохраняют основные особенности, характерные,для спор, полученных при 55°. Часть популяции свежесформированных спор находилась в состоянии конститутивного покоя, сохранению которого способствовало выдерживание спор при 37°С - температуре их формирования. Выход из покоп стимулировался экспонирование« спор действию понижен ных температур о оптимумом-¿!0°. Без кратковременного охлаждения споры, сформированные при 37°, как.и споры, сформированные при 55° ,ве могли быть активированы к прорастанию с помощью теплового шока.

Помимо отмеченного сходства поведение спор, сформированных на ЛКА при 37°, характеризовалось и вполне определенными отличиями: понижалась термоустойчивость покоящихся и инициированных спор. Температура, вызывающая тепловую активацию, для этих спор равнялась 80°, а не 100°, как у спор, сформированных при 55°. ■ . ■.. ' ■'■ . . ' '

Полученные результаты показывают, .'что снижение температуры культивирования т.vulgaris влияет на свойства обра- ■ зующихся спор.и приводит к уменьшению всего "спектра" (за - исключением.низкотемпературноИ активации) критических для прорастания спор температур { т е puoy с т oii ч иво с ти, тепловой, активации'и инициации).

Проведённое исследование прорастания эндадпор термофильных актиномицето» даёт возможность пересмотреть существующие представления о температурных границах развития изучаешь организмов в природе..Ранее предполагалось,.что для . обеспечения развития термофильных актиношщетов в природе необходима постоянная повышенная теипература.Обнаружение низкотемпературной активации и исследование температурных границ стадии инициации эндоспор т.vuit^ris позволяет пред--положить, что повышенная температура нужна лишь краткое время, как это иллюстрирует нижеследующая схема:

,-активация . инициация вырастание д opt - opt 55°.. . ,„in 28° fini;8-30o

2-48 час 20 мин

О —: О Г- Ф — '

начало формирования вегетативной клетки

экологическое значение иолучинных данных очевидно.Пот-.ребность в охлаждении предотьращает прорастание спор, осра-эовевшихся в самонагревающемся субстрате, температура которого может повыситься до пределов,-летальных для вегетатив-

^ покоя- акчльи- И|1ИЦ1(_

щансп , рован- иров^ц-

спора . ная . ная

спора спора

кого роста, в этой связи,особенно интересно, что тепловая активация «олет наблюдаться лишь вслед за охлаждением. \ Поскольку рост и спорообразование I.vulgaris могут происходить при достаточно низких температурах, и высокая . температура требуется.'организму только.на кратковременной стадии инициации,.не лишено вероятности предположение, что . х.vulgaris может эфемерно развиваться в почвах^ прогреваемых солнцем до теипературы '45-55° в течение нескольких минут. ' ■ . . ■ ' ' ^ ' ■' '■*■■ - -

феномен низкотемпературной<активации несколько изменяет представление о возможной роли спор термофильных актине-, мицетоз.з этиологии аллергического заболеванияi известного под названием "фермерское легкое".Молчаливо предполагалось,, что в организме человека или животного споры термофильных акгиномицетов могут находиться л покоящемся состоянии,Обнаружение феномена ~ низкотемпературной активации показывает, что в организм могут попадать л находиться raw значительно более реанциолнеспособные споры, процессы активации которых могут переходить в инициацию, что может привести я гораздо более широкому их воздействию ка организм. В связи с потенциальным практическим значением этот вопрос,несомненно, заслуживает дополнительных широких исследований. Т

В заключение выдвигается и обсуждается новая гипотеза, связывающая процесс низкотемпературной активации со. струн--турными изменениями воды при определенных температурах,например, термальной деградацией полимеров типа (К2С)П . В том случае , если вода.находится вблизи больших молекул,ев перестройки могут влиять на состояние последних, в частности на их конфорыацию,.что в свою, очередь, может привести,например, к изменению проницаемости мембран в биологических объектах /Di-oet-Hancen ,195ЬД9?3/. Предполагается, что при переносе спорв область температур, примерно равных'20°, в них происходит перестройка вода, приводящая к изменению,-конфориации макромолекул, что индуцирует реакции, о-вехет-вешше за низкетемпературну» активацию,

рассматривается также возможность участия в низкотемле-

ратурной активации.знаиматических процессов,температурные, оптимума которых лежат ниже температурных границ роста организма. ::Л ■ "

DblBO Д Ы •

I.Изучено прорастание спор Т.vulgaris и A.dlchotorai- • са -термофильных актиномнцетов, образующих конститутивно' покоящиеся высок ^термоустойчивые эндоспоры. Особое внимание ^обращено на влияние условий формирования спор и поддержания: культур, на ранние этапы прорастания спор. -

1 2, Показано, .что к.числу главнейших факторов, "влияющих , на степень; покоя изученные спор и.коррелирующую с ней термоустойчивость к химическим агентам, относятся:1 • а) Состав срады формирования (аминокислоты.и ионы Са2+ ; и KS2* ). ■".' -'.':'.

' ' 6} Температура выращивания организма' (37° или 55°U). •

3. Сохранению состояния покоя способствует выдержива--ние интактных спор при температуре их фориировэния(37°или 5S°C), низкая относительная влажность (aw< Q, i),. отсутствие кислорода и газовой фазе.иыход спор из покоя иожст.подавляться, нарами толуола, хлороформа и декана.

■ .-.■. 4, Популяции спор, изученных организмов обычно гетерогенный содержат фракции спор, которые: а) цогут прорастать' без дополнительных активирующих воздействий; б) нуждаются:, для прорастания в активирующих воздействиях;,в) нуждаются'в особых активирующих воздействиях (сверхпопоящиеся).Соотношение фракций может определяться условиями формирования.спор " и поддержания культур. -,

-..,'5,,при Прорастании эндоспор'!f.vnl(;Tiris И A.dichotomies могут быть обнаружены та же стадии, что и при прорастании' более хорошо изученных спор Eacilaua орр, И Clostridium зрр, т.е.-активация, инициация и вырастание, важнейшие отличия -сводятся к следующим: ■ -

, а) Активация. Эндоспоры ангиной идет ив могут быть акти~-> вированы в результате инкубации при температурах» леиащихниже минимума для вегетативного роста(опти~ мальна температура + 20°С).Низкотемпературная активация может осуществляться только в присутствии ^кислорода, стимулируется парами метанола, ацетона, суспензированном в в оде, и, в значительно большей степени, в'рэстворахмесц и СаИ12.изученные споры осо-; *бо чувствительны к активаторам физической природы., Высокотемпературная активация может быть наблюдав- -мэ поело осуществления ранних этапов низкотемпера- ■ турной,Последняя необратима, ее поздние этапы.сов-, подают с первыми этапами инициации. •

61 Инициация. Характеризуется малой специфичностью на-: ' бора активных; инициаторов (сахара, аминокислоты,пу-риновые;основания■ ионы На+, К+,Са2+, Ив2+) и срав-/ нитеЛьно высоким температурным оптимумом 555°-?0°С) Как и в случае. спор других бактерий,инициация может 'осуществляться в интервале рН, несколько более ииро-» ком 5 -10,0),-чем вегетативный рост(5,0-в,0). -

6. Подвергкуты ревизии и уточнению существующие представления. б температурных режимах ранних этапов жизненного цикла :Т.-»и1еЕ1г1в , что может быть существенно для Ловима--вид поведения.этого организма в природе,« его роли в этиологии заболеваний типа "фермерское легкое".Предложена гипотеза, связывающая.впервые обнаруженный феномен низкотемпературной активации эндоспор с особенностями поведения воды -в определенных температурных ян!ервалах..

■список

печатных работ, в которых.изложено основное содержание диссертации

I, ¿славян P.P., Агра Н.С.,Калакуцкий Л.В.,]£ириллова И.И.'.197Х. Термоустойчивость спор актиномицетов в воде,воздухе и угдеводородах.Микробиология,¿0,293 . ■ ...'

; 2, Агре U.C.,Кириллова И.Я..Калакуцкий Л.В,'.1971.Прораб-такие спор термофильных актиномицетов.1.Зависимость от условий и состояния' культуры.Деп.ВИНИТИ № 3355.

<. '3. Arpo H.С,,Кириллова И.П;, Калакуцкий л,В.,1971.Прорастание спор термофильных актиноыицетов." 2.Гетерогенность популяций по отношению к прорастанию. Дек.ВШНШ1 к 3354.-.

. 4. Агре Н.С.,Кирилпсва И.П., Калакуцкий Л.В.,Асланян Р.Р. 1971. Прорастание спор термофильных актиномице тов. 3. Инициация спор TJiermoactinomyces vulgaris В ВОДНЫХ СуСПец- . зиях. Деп. вини™ И 3335. ■ .

■ 5. Agre N.S. .KlriUova I.P. ,Kalakoutskii I.V., 1972. Spore germination in thermophilic antinomycetea, 1 i Prell toi nary observation with Thermoасtindmyoas y»lgarls and ActlnoMflds d| chotomtca, Zbl. Bakt. Abt. ?.', l£2t 525.

6. Aere H.S.,Kirlllova I.P.jKalakoutBkii L.V.,1972.' Spore terminâtion In thermophilic aotlnomycetea, S.Germinal changes In water suspensions of Thermoactlnomycea vulgaris snores, ¿bl. lakt,. 2, 2ÎI, 539.

7,'Arpe tl.ü.,Кириллова И.П. (Волтпнская Э,В. .Калакуцкий JJ.B,,Ï972. Люминесценция КОЛОНИЙ Thermaactinomycpe yulga- ■ rie.í в связи со спорообразованием и прорастанием спор^икро- < биология, ¿i, 372. 1

"■.... в;..Кириллова И.н,.Агре:'Н.С., Калакуцкий Л.Б.1У7.1. Всегда дк-активирует тепловое воздействие прорастание спор тьегшо-аеtiпотуееs vulgaris ? микробиология.42. 655,

9. Кириллова Kl.П., Агре U.C.»Калакуцкий Л.В.,1973. Ус-.' ловия инициации опор Thennoactinomyces vulgaris * Микробиология, 42, 867. '

10. Кириллова И.П., Агре Н.С.,Калакуцкий JT.B..I974. ВЛИЯНИе охлаждения на прорастание СПОр ITienno antinomy сев vulvar!в .НиКрОбИОЛОГИЯ,43, 83. -

11. Xirillova I.P., Aere N.3., Kalakoutskii L.V., 1974. Spore initiation and minimum temperature for growth of Thennoectinomvcea vulgaris. 2. Allg. I.Ukrobiol., VJ, 69.

12. Kirlllova I.P., Agre ÍI.S., Kalakoutskii Г..1Г., 1974. Do spores of The гш o se t j потру с g s vulgaris behave зе typicñl bacterial endospüreg? 6 Intern, Spore Conf*, Abstráete of papera, 12.9, East Lansing, Mich,, U.S.A«

13. Кириллова И.П., Агре H.С..Калакуцкий Л.В.,1974. Контроль выхода ИЗ ПОКОЯ эндоспор Thermoactinomyces vulgaris . Микробиология /в печати/.

14. Кириллова 11.П., Агре Н.С..Калакуцкий Л.В.,1975. Температурные режимы формирования и прорастания эндоспор Thermoactinoráyces.vulgaris .Известия АН СССР,сер.-бЙОЛ. /в печати/.

. 15. Кириллова И.П.,Агре Н.С., Калакуцкий Л.Б., 1975. Прорастание спор Thermoàctiïiowyces vulgari a Î Значение состава среды,роль Hgsti Са2+.Микробиология /в печати/.

Результаты работы докладывались на: 1.Конференции молодых учёных Московского Государственного

Университета, Москва, 1971. 2.1 Всесоюзной конференции по регуляции биологических процес

сов у микроорга ни зыов,Пущи но-на-Оке,1972. 3.Конференции молодых ученых Института микробиологии АН СССР 1974.

3. 70р. Т.20&. "Знание"