Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Промышленные технологии производства биологически активных веществ из сырья природного происхождения

ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Промышленные технологии производства биологически активных веществ из сырья природного происхождения"

На правах рукописи 005045»*°

ФРОЛОВА МАРИНА АЛЕКСЕЕВНА

ПРОМЫШЛЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ СЫРЬЯ ПРИРОДНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

1 4 Р!ЮН 2012

Щелково - 2012

005045848

Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный консультант: академик РАСХН, академик НААН Украины, доктор ветеринарных наук, профессор, лауреат Государственной премии РФ, Заслуженный деятель науки РФ Самуйленко Анатолий Яковлевич

Официальные оппоненты:

Мелентъев Александр Иванович-доктор биологических наук, профессор, Институт биологии УНЦ РАН, директор;

Скотникова Татьяна Анатольевна-доктор биологических наук, ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности», зав. лабораторией обеспечения качества вакцин; Балышева Вера Ивановна-доктор биологических наук, ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологи и микробиологии», ведущий научный сотрудник лаборатории биотехнологии, лауреат Государственной премии.

Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко»

Защита состоится 03 июля 2012 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.069.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности РАСХН по адресу: 141142, Московская область, Щелковский район, пос. Биокомбината, д.17, ВНИТИБП, e-mail: vnitibp@mail.ru С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского и технологического инстшута биологической промышленности.

Автореферат разослан 01 июня 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук Фролов Юрий Дмитриевич

1.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1.Актуальность работы. Разработка промышленной технологии производства биологически активных веществ из сырья природного происхождения является важной задачей биотехнологии, позволяющей осуществить более полное и комплексное использование биоресурсов.

В настоящее время вопросами разработки препаратов на основе переработки морепродуктов в различных областях народного хозяйства занимаются многие научные коллективы как в нашей стране, так и за рубежом (Новикова М.В. с соавт., 1997; Самуйленко А.Я. с соавт.,2003; Быкова В.М. с со-авт.,2003; Гамзазаде А.И. с соавт.,2003; Большаков И.Н. с соавт.,2003; Фоми-чев Ю.П. с соавт., 2006; Wall D. et al., 2001; Chaidedgumjorn et al., 2002; Muz-zarelli R.A.A. et al., 2005).

Хитозан привлекает внимание широкого круга исследователей и практиков благодаря комплексу физико-химических и биологических свойств и неограниченной воспроизводимой сырьевой базе. Полисахаридная природа хи-тозана обусловливает его сродство к живым организмам, а наличие реакци-онноспособных функциональных групп обеспечивает возможность разнообразных химических модификаций, позволяющих усиливать присущие ему свойства или придавать новые в соответствии с предъявленными требованиями.

Значительный вклад в изучение хитина и хитозана внесли ученые: Быков

B.П., Рогожин C.B., Гамзазаде А.И., В.П., Варламов В.П., Албулов А.И., Немцев C.B., Нудьга Л.А., Скрябин К.Г., Сафронова Т.М., Быкова В.М., Ви-хорева Г.А., Феофилова Е.П., Маслова Г.В., Новиков В.Ю., Куприна Е.Э., Михайлов С.Н., Кильдеева Н.Р., Липатова И.М., Александрова В.А., Комаров Б.А., Марквичева Е.А., Урьяш В.Ф., Братская С.Ю., Тихонов В.Е., Лопатин

C.А., Велешко А.Н., Ежова Е.А., Акопова Т.А и другие исследователи, работы которых направлены на изучение свойств хитина и хитозана, способов их получения из разных видов сырья и применения в различных областях народного хозяйства.

Производство ферментных препаратов является одним из перспективных направлений в современной биотехнологии. Ежегодный мировой прирост объема их производства в настоящее время составляет 10-15 %. Наибольший удельный вес среди выпускаемых ферментных препаратов (до 60% общего объема) занимают протеиназы и амилазы. В настоящее время отечественная промышленность заметно отстает по объему производства ферментов от ведущих зарубежных стран, а высокие цены на коммерческие трипсины зарубежных производителей стимулируют интерес к разработке и усовершенствованию технологических процессов его получения.

Применяемые в настоящее время методы выделения ДНК из сырья животного происхождения многостадийны, трудоемки и требуют дорогостоящего оборудования и реактивов. У нас в стране и за рубежом она производится в небольших объемах. Основным недостатком большинства способов получения ДНК является дороговизна и сложность их воспроизведения в промышленных условиях. В связи с этим, разработка промышленной технологии получения дезоксирибонуклеиновой кислоты для практического применения актуальна.

Одним из современных подходов к решению проблемы иммунной недостаточности у молодняка сельскохозяйственных животных является разработка, производство и применение новых экологически безопасных эффективных препаратов, таких как пробиотики и пребиотики, которые в малых дозах способны существенно изменять обмен веществ и повышать общую резистентность организма (Панин А.Н., 1997; Субботин В.В. с соавт.,1998; Тараканов Б.В., 1998; 2002; Малик H.H., 2002; Архипов A.B., 2010).

Богатейший источник биологически активных веществ - обитатели Мирового океана, в частности моллюски, в мясе которых обнаружены соединения, обладающие широким спектром биологической и фармакологической активности. Способность повышать общую резистентность организма связывают с наличием в мидийных препаратах липидных антиоксидантов, меланоидинов и микроэлементов.

1.2. Цель и задачи исследований. Цель работы - разработка промышленных технологий изготовления биологически активных веществ из сырья природного происхождения и создание на их основе новых экологически безопасных эффективных биопрепаратов для применения в различных отраслях народного хозяйства.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- проанализировать современное состояние производства биологически активных веществ;

-разработать технологические процессы производства производных хито-зана, протеолитического ферментного препарата трипсина, дезоксирибонук-леиновой кислоты и мидийного гидролизата;

-изготовить опытные образцы препаратов, изучить их физико-химические свойства, биологическую активность и эффективность применения в различных отраслях народного хозяйства;

- разработать нормативную документацию на препараты и освоить их промышленный выпуск.

1.3. Научная новизна. Впервые разработаны промышленные технологии получения хитозана с заданными характеристиками для практического применения.

Установлена профилактическая и терапевтическая эффективность низкомолекулярного хитозана (ММ 5-10 кДа) при гамма-облучении мышей радиоцезием в летальных дозах.

Научно обоснована и экспериментально доказана целесообразность использования хитозана для терапии и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных.

Показана высокая ростостимулирующая активность хитозана при введении его в рацион подсосным свиноматкам и поросятам, при этом у животных отсутствовала стрессорная реакция адаптационного синдрома.

Установлены высокие сорбционные свойства хитозана в отношении бактерий Р.тикос1(1а и показана возможность его использования в качестве флокулянта в технологическом процессе концентрирования бакмассы.

Научно обоснована и экспериментально доказана эффективность влияния комплекса пробиотика «Проваген» с хитозаном на микробиоценоз толстого кишечника, динамику живой массы и морфо-биохимические показатели гомеостаза телят.

Экспериментально доказана эффективность выпаивания раствора хитозана из расчета 5 мг/голову начиная с 32-х дневного возраста в составе рациона кормления на среднесуточный прирост и живую массу цыплят-бройлеров.

Включение в рецептуру лечебно-профилактической зубной пасты низкомолекулярного водорастворимого хитозана (ММ 10-40 кДа) позволило получить пасту с противовоспалительным и кариеспрофилактическим действием, а также высокими очищающими и дезодорирующими свойствами (Патент РФ № 2328267).

Впервые разработана промышленная технология изготовления протео-литического ферментного препарата трипсина, отличающаяся экологической безопасностью производства, с применением адсорбента - природного полисахарида хитозана (Патент РФ № 2265053; Патент РФ № 2437936).

Впервые разработана промышленная технология изготовления дезокси-рибонуклеиновой кислоты (ДНК) из молок лососевых рыб с использованием ферментного препарата трипсина.

Впервые разработана экологически безопасная промышленная технология получения Мидийного гидролизата-биологически активной пищевой добавки из мяса мидий «Мидийный соус». (Патент РФ № 2284708).

Экспериментально обоснованы схемы применения Мидийного препарата при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных и птицы для увеличения интенсивности роста и уровня естественной резистентности.

1.4. Практическая значимость работы

Результаты исследований использованы при разработке технологий изготовления: различных форм и модификаций хитозана («Хитозан пищевой»; лекарственного средства для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных «Хитозан»;' косметического сырья «Сукцинат хитозана», «Ламихит» - экстракта ламинарии с хитозаном, «Фукохит» - экстракта фукуса с хитозаном); протеолитического ферментного препарата трипсина; дезоксирибонуклеиновой кислоты из молок лососевых рыб; мидийного гидролизата - биологически активной пищевой добавки из мяса мидий «Мидийный соус».

Промышленный выпуск разработанных препаратов освоен на производственном участке отдела получения биологически активных веществ ВНИТИБП и в ЗАО «Биопрогресс».

Создание новых технологий и организация промышленного выпуска биологически активных веществ дали возможность их применения:

- в ветеринарии (лекарственное средство «Хитозан»);

- в пищевой промышленности («Хитозан пищевой», биологически активная добавка «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб», биологически активная пищевая добавка «Мидийный соус»);

- в биологической промышленности (ферментный препарат трипсин);

- в парфюмерно-косметической промышленности (косметическое сырье «Сукцинат хитозана», «Ламихит», «Фукохит», «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб»).

Годовой объем выпуска биологически активных веществ в зависимости от вида продукции и потребностей составляет от 800 кг до 3-5 тонн.

1.5 Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

-промышленные технологии изготовления низкомолекулярного хитозана и сукцината хитозана;

-параметры острой и хронической токсичности хитозана;

-радиопротекторные и флокулирующие свойства хитозана;

- различные формы хитозана в ветеринарной практике; -оценка эффективности влияния препаратов хитозана на резистентность сельскохозяйственных животных и птицы;

-хитозан в составе кормовых добавок для сельскохозяйственных животных и птицы;

-хитозан в технологии получения протеолитического ферментного препарата трипсина;

-хитозан в составе парфюмерно-косметической продукции; -промышленная технология изготовления дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) и практические аспекты ее применения;

-промышленная технология получения Мидийного гидролизата; -эффективность применения мидийного гидролизата для повышения резистентности молодняка сельскохозяйственных животных и птицы. 1.6. Апробация работы. Основные материалы доложены и обсуждены: - в виде ежегодных отчетов по темам госзаданий на заседаниях ученого совета и методических комиссий ВНИТИБП (1996-2011 гг.); на секции «Ветеринарная биотехнология» Отделения ветеринарной медицины Россельхозака-демии (2008-2012 гг.); на Международных конгрессах в Москве, Санкт-Петербурге, Минске, Ялте, Алуште, Харькове, Всесоюзных, Республиканских и Всероссийских конференциях в Москве, Санкт-Петербурге, Орле, Черноголовке, Щелково, Ставрополе, Казани, Пущино, Махачкале, Луганске, Светлогорске, Нижнем Новгороде, Ярославле, Воронеже, Боровске, Южно-Сахалинске, Уфе, Армавире, Краснодаре (1996-2012 гг.). Разработки демонстрировались на выставках: П Международная выставка «Инновации 99. Технологии живых систем» (Москва, 1999); VIII Международная выставка «Медицина для Вас» (Москва, 2001); Международная выставка «Биотехника» (Ганновер, 2001); II Международная выставка «Планета и здоровье» (Москва, 2001); «Биотехнологии России» (Берлин, 2001); «Лаборатория-Экспо» (Москва, 2009-2011); «Биоиндустрия-биотехнологические решения для здравоохранения» (С.-Петербург, 2011); Российская агропро-

мышленная выставка «Золотая осень» (Москва, 2002-2011 гг.). Разработки по материалам диссертационной работы были награждены 16 дипломами, 7 золотыми, 3 серебряными и 1 бронзовой медалью ВДНХ СССР и ВВЦ. За разработку промышленных технологий изготовления биологически активных препаратов и внедрение их в производство автором получены 4 медали «Лауреат ВВЦ» и серебряная медаль РАЕН имени Е. Дашковой.

1.7. Публикации. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 101 научной работе, в том числе в 1 монографии и 19 статьях в изданиях по перечню, рекомендованному ВАК Минобрнауки России. По материалам исследований получено 4 Патента РФ на изобретения.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 307 страницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы, результаты, выводы и практические предложения, содержит 57 таблиц и 25 рисунков. Список литературы включает 458 наименований, из которых 300 отечественных и 158 зарубежных. В приложении представлены копии документов, подтверждающие достоверность работы, ее научную и практическую значимость.

1.9. Личный вклад автора заключается в формулировании проблемы, постановке целей и задач исследований, теоретическом и методическом обосновании путей решения поставленных задач, непосредственном планировании экспериментов и выполнении исследований, обобщении и интерпретации результатов, разработке нормативной документации, организации апробации и промышленного производства разработанных препаратов.

1.10. Благодарности. Автор выражает благодарность научному консультанту директору ВНИТИБП, академику РАСХН А.Я.Самуйленко. За практическую и консультативную помощь выражаю благодарность заведующему отделом получения БАВ ВНИТИБП доктору биологических наук, профессору А.И. Албулову, сотрудникам института А.С.Фоменко, С.М. Шинкареву В.И. Еремцу, Л.А.Неминущей, Т.А.Скотниковой, Т.А.Авдеевой, В.Н.Качалову, а также сотрудникам Центра «Бионженерия» РАН

В.ПВарламову, С.А.Лопатину, Брянской ГСХА Е.В.Крапивиной, Н.П.Старовойтовой, ВНИРО С.В.Немцеву, ИПХФ Б.А.Комарову, Уральской ГАВМ А.Р.Таировой, Белорусской ГСХА П.А.Красочко, МГАВМиБ им. К.И.Скрябина, ВГНКИ, ВНИИВВиМ, ФГУП «Щелковский биокомбинат».

2. Материалы и методы Работа выполнена в 1996-2012 гг. во ВНИТИБП согласно планам НИР и ОКР, а также в плане реализации творческого научного сотрудничества Брянской ГСХА и ГНУ ВНИТИБП в объеме комплексных исследований по теме «Изучение иммунного статуса и разработка мероприятий повышения резистентности свиней Брянской области» и Договора о творческом сотрудничестве Национального университета биоресурсов и природоиспользования (НУБиП) Украины (г. Киев) и ГНУ ВНИТИБП по проведению совместных исследований по вопросам создания, изучения и применения препаратов на основе хитозана в сфере ветеринарной медицины и животноводства.

Экспериментальные исследования осуществляли в отделе получения БАВ ВНИТИБП, ЗАО «Биопрогресс», Центре «Биоинженерия» РАН, Брянской ГСХА, УО «Белорусская государственная сельскохозяйственная академия», РУП «Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н.Вышелесского» Республики Беларусь, Уральской государственной академии ветеринарной медицины, Казанском НИИ эпидемиологии и микробиологии, в хозяйствах Московской, Тульской и Брянской областей (Агрофирма «Повадинская», СХПК «Заря Подмосковья» и «Щелковская птицефабрика» Московской области, АОЗТ «Красное» и КСХП «Приупское» Тульской области, СТФ СПК «Родина», ОУХ «Кокино» и СТФ СПК «Культура» Брянской области).

Эффективность разработок испытывали в ЗАО «Биопрогресс», ФГУП «Ставропольская биофабрика», ФГУП «Армавирская биофабрика», ОАО «Покровский завод биопрепаратов».

Объектами исследований служили опытно-промышленные партии хитозана с различной молекулярной массой (80 кДа, 150 кДа, 300 кДа, 380 кДа, 500 кДа) и растворимостью (кислоторастворимый и водорастворимый);

опытно-промышленные партии ферментного препарата трипсина; опытно-промышленные партии препарата дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК); опытно-промышленные партии мидийного препарата.

Животные: телята черно-пестрой породы 2 - 8-суточного возраста и 11,5-месячного возраста для оценки эффективности применения препаратов хитозана для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний у молодняка сельскохозяйственных животных и изучения влияния пробиотика «Проваген» и комплекса этого пробиотика с хитозаном на микробиоценоз толстого кишечника, динамику живой массы и морфо-биохимические показатели гомеостаза телят; поросята крупной белой породы (сосуны и отье-мыши), подсвинки крупной белой породы 3,5-4,5-месячного возраста, свиноматки крупной белой породы для оценки эффективности применения препаратов хитозана для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний у молодняка сельскохозяйственных животных и изучения влияния Мидийного препарата на резистентность сельскохозяйственных животных; цыплята-бройлеры кросса «Гибро» и цыплята породы кросс «П-46» 18-суточного и 6-суточного возраста для оценки эффективности применения Мидийного препарата; белые беспородные мыши-самцы массой 18-20 г, 25 г и 25-30 г для оценки токсичности препаратов.

Материалы и методы: хитин из панцирей камчатских крабов (ТУ 15-01472) - для изготовления хитозана: поджелудочная железа от убойных животных (крупный рогатый скот и свиньи) (ГОСТ 11285-73) - для изготовления трипсина; мидии-сырец (ТУ 15-02 279-83) - для изготовления мидийного гидролизата; молоки лососевых рыб (ТУ 9267-037-33620410) - для изготовления дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК); трипсин импортного («Ferak», «Sigma») и отечественного (НПО «Вектор») производства - для оценки активности опытно-промышленных партий препарата трипсин; культуры клеток различного происхождения: первичные - куриных эмбрионов (ФКЭ), почек теленка (ПТ) и перевиваемые линии клеток - почек свиньи (СПЭВ), почек сирийского хомячка (ВНК-1), McCoy - для оценки дисперги-

рующих свойств опытно-промышленных партий Трипсина; пробиотическая кормовая добавка «Проваген» - для изучения влияния комплекса этого про-биотика с хитозаном на микробиоценоз толстого кишечника, динамику живой массы и морфо-биохимические показатели гомеостаза телят черно-пестрой породы 1-1,5-месячного возраста; производственные штаммы Р.тиИоаск трех серовариантов: А - штамм 1231, В - штамм 681 и Д - штамм Т-80 - для оценки флокулирующих свойств хитозана; полупроницаемые мембраны в виде полых волокон из полиамида с пределом задержания по белку 15, 30 и 100 кДа - для очистки и концентрирования биологически активных веществ;

Протеолитическую активность трипсина определяли по методу Кшйг е! а1. с использованием субстрата казеина по Гаммерстену (1991 г.).

Степень дезацетилирования хитозана определяли модифицированным методом Ван-Слайка и кондуктометрическим титрованием.

Молекулярную массу хитозана определяли с использованием капиллярного вискозиметра Убеллоде с диаметром капилляра 0,71 мм.

Динамическую вязкость растворов хитозана определяли на ротационных вискозиметрах «КеогеБ!"," 11ео1е51-2" и Брукфилда.

Контроль готовых препаратов проводили в соответствии с ТУ.

Антиоксидантную активность мидийного препарата определяли амперо-метрически на приборе «ЯузаААА01».

Статистическую обработку результатов (с числом повторов п> 3) проводили методами Кербера в модификации Ашмарина, наименьших квадратов, статистических критериев Стьюдента-Фишера (г-критерий) и Кокса-Стюарта с использованием стандартных программ МАТНСаё-2001.

Этапы разработки

Алгоритм исследований

Форма завершения

Научная гипотеза и поисковые исследования

Разработка промышленных технологий

Доклинические испытания

Практическая реализация разработок

Препараты

Анализ современного состояния производства БАВ и

обоснование выбора видов сырья

Хитозан Поджелудочная железа Молоки Мясо мидий

КРС И свиней лососевых рыб

Низкомолекулярный хитоза»

т

Сукцинат хитозана

т~

Трипсин ДИК

Мидииныи гидролизат

Оценка состава, безвредности, биологической активности

т "

Ветеринария, медицина

т

Биологическая промышленность

Лекарственное средство «Хитозан»

X

Пищевая промышленность

Хитозан, трипсин

Технические условии. Технологические инструкции. Методические рекомендации. Свидетельства о государственной ; регистрации, санитарно-эпидемиологические заключения, акты испытаний

Хитозан пищевой, ДНК, иМидийный соус»

Парфюмерно- Животноводство

косметическая

промышленность

1 і

Сукцинат хитозана. кормовая добавка

Ламихит, Фукохит, Мидийный осадок

ДНК

Рис. 1 Структурно-логическая схема достижения цели диссертационной работы

3. Результаты исследований 3.1. Разработка промышленных технологий изготовления хитозана и его производных для практического применения в различных областях народного хозяйства. Применение хитозана в медицине, пищевой промышленности, ветеринарии и некоторых других областях требует строго определенных характеристик препарата. Проведенный нами сравнительный анализ образцов хитозана отечественных производителей показал, что препарат значительно отличается по качественным характеристикам. Функциональные свойства хитозана (сорбция, биологическая активность, токсичность и т.д.) зависят от молекулярной массы полимера. Так, хитозан с молекулярной массой до 35 к Да используется в качестве иммуностимулятора, радиопротектора, для покрытия микрокапсул и образования пленок. Полимер с молекулярной массой 30-100 кДа включают в состав БАД, применяют в производстве вакцин и сывороток. В бумажной и текстильной промышленности, а также для очистки сточных вод и сорбции тяжелых металлов целесообразно использование хитозана с диапазоном молекулярной массы 80-250 кДа. В пищевой, косметической промышленности, научных исследованиях преимущественно используют хитозан с молекулярной массой свыше 200 кДа. Поэтому исследования по созданию новых, более совершенных, экономичных и экологически безопасных технологий получения хитозана и его модификаций являются актуальными и имеют важное практическое значение.

3.1.1. Разработка промышленной технологии изготовления низкомолекулярного хитозана. Для получения низкомолекулярного водорастворимого хитозана с регулируемой молекулярной массой, пригодного для применения в ветеринарии, медицине и биотехнологии совместно с ВНИРО и Центром «Биоинженерия» РАН нами были проведены исследования, направленные на разработку параметров технологического процесса перекисного гидролиза хитозана. В экспериментах использовали хитозан в виде чешуек размером до 6 мм, молекулярной массой (ММ) 350 кДа и степенью дезацетили-рования (СДА) 79,3%. Для повышения реакционной способности хитозана

его подвергали аморфизации, поскольку известно, что макромолекулы хито-зана являются полужесткоцепными и во время проведения осаждения, промывки или при изменении концентрации препарата могут образовываться жидкокристаллические растворы, что отрицательно сказывается на реакционной способности и качестве продукта в целом.

Изменением условий проведения гидролиза хитозана (концентрация перекиси водорода, температура процесса и его продолжительность) удалось снизить его молекулярную массу до 23 кДа (Рисунки 2 и 3).

В качестве оптимальной концентрации перекиси водорода нами была выбрана 0,2%, так как 0,1% оказалась недостаточной для получения низкомолекулярного хитозана с молекулярной массой 20-50 кДа, а использование 0,3% -ной перекиси водорода при температуре 60°С приводило к появлению в конечном продукте окисленных и модифицированных остатков хитозана.

Процесс гидролиза останавливали добавлением двукратного объема холодной деминерализованной воды (8-10°С) и фильтрацией через бельтинг-ткань, в процессе которой происходила дополнительная очистка низкомолекулярного хитозана от солей и остатков перекиси водорода. Полное удаление перекиси водорода достигалось 2 - 3-кратной промывкой. После лиофильно-го высушивания полимер имел вид белого аморфного порошка.

В результате проведенных исследований разработана принципиально новая технология получения низкомолекулярного хитозана, включающая стадии гидролиза высокомолекулярного хитозана 0.2%-ной перекисью водорода при температуре 45°С в течение 1,5-2 часов, отделения низкомолекулярного хитозана на рамном фильтре с бельтинг-тканью, растворения при рН 5,5 и лиофильного или распытительного высушивания (рисунок 4).

Промышленное производство низкомолекулярного хитозана освоено на производственном участке отдела получения БАВ ВНИТИБП и в ЗАО «Биопрогресс». Годовой объем производства низкомолекулярного хитозана в зависимости от потребностей составляет до 800 кг.

3.1.2. Разработка промышленной технологии изготовления натриевой соли сукцината хитозана. Совместно с Шинкаревым С.М. (ВНИТИБП) была разработана технология получения натриевой соли сукцината хитозана, которая заключается в сукцинилировании активированного хитозана янтарным ангидридом, нейтрализации свободных карбоксильных групп янтарной кислоты раствором гидроокиси натрия, фильтрации полученного геля с последующим высушиванием на распылительной или лиофильной сушке (рисунок 5).

Рис.5. Блок-схема технологического процесса получения натриевой соли сукцината хитозана

При отработке параметров технологического процесса основными критериями оценки являлись степень замещения (СЗ) и выход натриевой соли сукцината хитозана.

На основании результатов органолептических, санитарно-гигиенических, микробиологических и токсикологических исследований натриевой соли сукцината хитозана, изготовленного по разработанной технологии, в аккредитованном испытательном лабораторном центре при ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» и в аккредитованном испытательном лабораторном центре AHO НИЦ «Косметология» было сделано заключение,

что препарат безвреден, ЛД^ при внутрибрюшинном введении >5 г/кг, при накожном >2,5 г/кг, что позволяет отнести его к IV классу опасности по ГОСТу 12.01.007-76. Препарат не обладает общетоксическим, кожно-раздражающим, сенсибилизирующим действием, физико-химические и микробиологические показатели соответствуют требованиям СанПиН 1.2.681-97 к косметическому сырью.

Натриевая соль сукцината хитозана в настоящее время применяется рядом отечественных косметических фирм в качестве биологически активного компонента при изготовлении кремов, гелей, шампуней, бальзамов-ополаскивателей и др. На зубную пасту, содержащую биологически активную добавку хитозан, обладающую противовоспалительным и кариеспрофи-лактическим действием, а также высокими очищающими и дезодорирующими свойствами, нами был получен Патент РФ №2328267 «Зубная паста», приоритет изобретения от 16.01.2007 г.

Для применения в качестве сырья для парфюмерно-косметической продукции были разработаны промышленные технологии изготовления комбинированных препаратов на основе экстрактов бурых водорослей - ламинарии («Ламихит») и фукуса («Фукохит»), ассоциированных с хитозаном. Препараты отличаются значительно более высокой биологической активностью благодаря синергизму компонентов, входящих в их состав.

Промышленное производство натриевой соли сукцината хитозана и препаратов на основе экстрактов бурых водорослей налажено на производственном участке отдела получения БАБ ВНИТИБП и в ЗАО «Биопрогресс». В настоящее время годовой объем производства препаратов в зависимости от потребностей составляет 600-1000 кг.

3.2. Изучение параметров острой и хронической токсичности хитозана С целью изучения возможности применения выпускаемого нами хитозана для лечения и профилактики заболеваний животных совместно с А.Р.Таировой (Уральская ГАВМ) и Кузнецовым П.А. (ВНИТИБП) был проведен комплекс экспериментов по определению острой и хронической ток-

сичности на мышах. Установлено, что максимально переносимая доза хито-зана составляет 1600 мг/кг, профилактическая - 70 мг/кг, а терапевтический индекс (соотношение этих доз) - 22,8 , что указывает на достаточный предел безопасного применения препарата в ветеринарной практике.

В соответствии с методикой определения хронической токсичности хито-зан вводили в желудок мышей в течение 6 месяцев с 5-дневными интервалами. Показатели содержания гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов в крови, а также гексаналовой пробы, определяющей состояние детоксицирующей функции печени, в опытной группе не отличались от таковых в контрольной.

При гистологическом исследовании внутренних органов от животных, получавших препарат хитозан в течение 6-ти месяцев, существенных изменений, которые можно было бы связать с воздействием препарата на их организм, не обнаружено.

Была исследована зависимость токсических свойств хитозана от его молекулярной массы. В опытах использовались белые мыши в возрасте 2-2,5 месяцев и массой тела 18-22 г. Препараты хитозана вводились однократно в виде 2 % растворов в уксусной кислоте. Контрольным животным также однократно вводили водный раствор уксусной кислоты с рН 5,8. Наблюдение за животными после инъекций испытуемых препаратов проводилось в течение 3 недель. Величину ЛД50 для препаратов хитозана вычисляли по методу Кер-бера. Как показали результаты исследований, фракции хитозана с молекулярной массой 0-5, 5-10, 10-20 кДа обладают значительно меньшей (в 2-3 раза) токсичностью, чем более высокомолекулярные фракции (с ММ от 20 кДа и более).

З.З.Изучение радиопротекторных свойств хитозана. Изучение радиопротекторных свойств хитозана проводили совместно с Лысенко Н.П. (МГАВ-МиБ им. К.И.Скрябина) и Шинкаревыс С.М. (ВНИТИБП) на мышах-самцах весом 20-25 г, подвергнутых гамма-облучению на установке «Гамма-панорама» (источник излучения - 137Сб, мощность излучения - 14 Р/мин, длительность облучения - 58,5 мин). Было сформировано 4 опытных и 2 кон-

трольных группы животных по 7 голов в каждой. Контроль I - облученные животные, контроль II - животные облучению не подвергались. Животным опытных групп вводили внутрибрюшинно хитозан (ММ 5-10 к Да) в дозе 200 мг/кг живой массы: I опытная группа - за 3 дня до облучения, II, III и IV опытные группы - через 3, 9 и 22 дня после облучения, соответственно. Сроки введения хитозана обоснованы основными стадиями лучевой болезни.

Результаты изучения радиопротекторных свойств хитозана представлены на рисунке 6. Полученные результаты свидетельствуют о положительном профилактическом и лечебном эффекте низкомолекулярного хитозана при гамма-облучении мышей в летальных дозах.

g_22__30 время,сутки

Рис.6. Радиопротекторные свойства хитозана

3.4. Практические аспекты применения хитозана и его производных в различных областях народного хозяйства

3.4.1. Применение различных форм хитозана в ветеринарной практике

В хозяйствах Московской, Курской и Тульской областей в период массовых отелов и опоросов проведена серия опытов по изучению эффективности применения хитозана для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных.

Совместно с Шинкаревым С.М. (ВНИТИБП) испытывался хитозан с различной молекулярной массой (80 кДа, 150 кДа, 300 кДа, 380 кДа, 500 кДа) и растворимостью (кислоторастворимый и водорастворимый), оптимизировались схемы лечения и профилактики (продолжительность, кратность и способ применения), уточнялась доза препарата. Контролем служили группы те-

лят и поросят, которым вводили антибиотики или не назначали лечебный препарат. Лечебный эффект хитозана оценивали по клиническому состоянию животных, среднесуточному привесу массы тела, по продолжительности течения болезни, проценту вылеченных или павших животных и по биохимическим показателям крови.

Первые опыты были проведены совместно со специалистами Курского облветуправления в хозяйствах Фатежского района Курской области на телятах с желудочно-кишечными заболеваниями. Использовали 2-3%-ный геле-вый раствор хитозана с молекулярной массой 300-500 кДа с различными схемами применения. Лечебный эффект наблюдали при выпаивании телятам геля хитозана в дозе 40-60 мл 3-4 раза в день перед кормлением. Курс приема составлял 2-5 дней в зависимости от интенсивности проявления диарейного синдрома. После получения разрешения Департамента ветеринарии МСХиП РФ широкие производственные испытания хитозана были продолжены в хозяйствах Тульской и Московской областей (Таблица 1).

Таблица 1

Эффективность применения кислоторастворимой формы хитозана различной молекулярной массы при лечении и профилактике желудочно-кишечных заболеваний телят в КСХП «Приупское» Тульской области

Эффективность ММ хитозана, кДа Кол-во голов Время протекания заболевания, сутки Привесы за время наблюдения (8 суток), кг Примечание

Лечебная 380 29 3±1 4,6±1,2 1 гол. -диарея после лечения

150 23 3±1 4,5±1,3 1 гол. - диарея после лечения

80 19 3±1 4,6±1,1 1 гол. -диарея незначительная

Профилактическая 380 22 - 5,1±1,7

150 16 - 6,1±1,4

80 24 - 6,1±1,6

Контроль - 19 6±2 4,8±1,4 Заболело-4 гол. Пало -2 гол.

Проведенные исследования показали, что хитозан имеет высокую терапевтическую И профилактическую активность при полном отсутствии токсичности и других побочных действий. При его использовании наблюдалось улучшение клинического состояния животных, исчезали признаки диареи, улучшались биохимические показатели крови, в 80- 90% случаев наступало полное выздоровление животных.

3.4.2. Изучение влияния хитозана на резистентность сельскохозяйственных животных. Для изучения влияния гелевого раствора хитозана на резистентность животных и оптимального режима его применения в УОХ «Коки-но» Выгоничского района Брянской области на свиньях крупной белой породы совместно с Крапивиной Е.В. (Брянская ГСХА) был проведен научно-хозяйственный опыт. Были сформированы с учетом возраста, живой массы и продуктивности за предыдущий опорос три группы аналогов - свиноматок крупной белой породы по 3 головы в каждой (А. Б и С группы, соответственно). Свиноматкам С группы дважды (с 6-го и 22-го дня после опороса) утром и вечером по 5 дней выпаивали 2%-ный гелевый раствор хитозана в 1%-ной уксусной кислоте в дозе 3 мл/кг живой массы, свиноматкам А и В групп хитозан не скармливали. Поросят от свиноматок А, В и С групп обозначили, соответственно, как 1 (контрольная)- хитозан не скармливали, 2 и 3(опытные)- дважды (на 30-й и 45-й день после рождения) утром и вечером по 5 дней вместе с подкормкой скармливали по 3 мл/кг живой массы 2%-ного гелевого раствора хитозана. Всем подопытным животным скармливали основной рацион (и подкормку) согласно рекомендуемым для данной половозрастной группы нормам. Контрольные индивидуальные взвешивания поросят проводили на 1, 30 и 60 сутки после рождения. Перед отъемом (в возрасте 60 суток) у подопытных поросят (по 6 голов из группы) были отобраны пробы крови для анализа.

Была установлена отчетливая тенденция увеличения выживаемости поросят во второй месяц жизни. При скармливании животным гелевого раствора хитозана за весь опытный период наибольший ростостимулирующий эф-

фект отмечается при скармливании хитозана только поросятам. (Рисунки 7 и 8). К 2-месячному возрасту количество эритроцитов в крови у всех исследованных животных было практически одинаковым, содержание гемоглобина превышало значения физиологической нормы, причем у животных, получавших препарат хитозана, было выше, чем у контрольных животных. Содержание лейкоцитов в крови поросят, получавших хитозан, соответствовало верхней границе физиологической нормы, при этом у контрольных животных этот показатель был значительно выше.

Рис.7 Динамика живой массы поросят при различных формах скармливания геле-

Рис.8 Выживаемость поросят в зависимости от способа скармливания хитозана

3.4.3. Применение хитозана в составе кормовых добавок для сельскохозяйственных животных и птицы. В условиях современного животноводства и птицеводства значительно усилилась технологическая и микробиологическая нагрузка на организм животных и птицы. При этом среди причин отхода молодняка основное место занимают болезни желудочно-кишечного тракта, возбудителями которых является условно-патогенная микрофлора. Баланс кишечной микрофлоры может быть восстановлен с помощью про-биотиков - кормовых добавок, представляющих собой одну или несколько стабилизированных культур симбиотических микроорганизмов. Помимо пробиотиков, имеется и другая группа препаратов, имеющих разную биологическую природу и механизм действия (кормовые антибиотики, ферменты, пребиотики и др.). Все эти препараты влияют на здоровье и продуктивность животного сходным образом - через регулирование микробной популяции в желудочно-кишечном тракте. К их числу может быть отнесен и хитозан.

Совместно со специалистами Брянской ГСХА (Крапивина Е.В.) было изучено влияние выпаивания разных доз пробиотика «Проваген», в состав которого входят пробиотические штаммы сапрофитных бактерий В.зиЫШэ ВКМ В-2287 и В.Нс11ешй>ггш5 ВКМ В-2414, и комплекса этого пробиотика с хитозаном на микробиоценоз толстого кишечника, динамику живой массы и морфо-биохимические показатели гомеостаза телят.

В МТФ СПК Агрофирма «Культура» был проведен научно-хозяйственный опыт. С учетом живой массы и интенсивности роста методом парных аналогов были сформированы 3 группы телят черно-пестрой породы 1 - 1,5-месячного возраста: 1 группа - контрольная, 2 и 3 - опытные. Телятам 2 группы ежедневно в течение 7 суток выпаивали пробиотик «Проваген» (14 г/голову), животным 3 группы - комплекс этого пробиотика (14 г/голову) с хитозаном (0,8 г/голову). Телята содержались в соответствующих ветеринарно-зоогигиеническим требованиям условиях, получали хозяйственный рацион в соответствии с общепринятыми нормами. Через 5 суток по-

еле окончания выпаивания препаратов у 3 голов из каждой группы брали содержимое прямой кишки для анализа микробиоты.

Как показали результаты исследований, выпаивание в течение 7 суток «Провагена» с хитозаном обусловило тенденцию к оптимизации в содержимом толстого кишечника телят уровня эшерихий.

Живая масса у телят 2 и 3 подопытных групп в начале эксперимента существенно не различалась, при этом через 14 суток опыта отмечена тенденция к повышению среднесуточных приростов живой массы на 10,64% и 21,28%, соответственно, по сравнению с контролем. Комплекс пробиотика с хитозаном в этом отношении оказался более эффективным. (Рисунок 9).

140 -------------------------------

% ;

120 -г----------------------------------- " І І

1-- !

і ]Іі - І І ----- 121 28,--- С «¡И ____

іоо І110'64

- ж.

¡^Иі

Контроль Группа 1 Группа 2

Рис.9 Влияние выпаивания 1-1,5 месячным телятам пробиотика «Проваген» и комплекса этого пробиотика с хитозаном на среднесуточные приросты живой массы

В результате анализа проб крови животных подопытных групп установлено, что перед началом опыта содержание лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина соответствовало нормативным значениям и по окончании его существенно не изменялось.

Содержание общего белка в сыворотке крови телят всех подопытных групп перед началом опыта соответствовало нижним границам физиологических значений без существенных межгрупповых различий. Выпаивание 11,5-месячным телятам пробиотика «Проваген» и комплекса этого пробиотика

с хитозаном обусловило оптимизацию гомеостаза, на что указывает увеличение общего белка и снижение билирубина в сыворотке крови. Добавка хи-тозана к пробиотику обусловила повышение уровня гуморальной защиты организма за счет повышения содержания у-глобулинов в сыворотке крови.

Изучение влияния хитозана в составе рациона кормления на продуктивность цыплят-бройлеров проводили совместно с Красочко П.А. (Белорусская ГСХА) в условиях структурного подразделения «Околица» ОАО «Птицефабрика им. Н.К.Крупской» Республики Беларусь.

Таблица 2

Схема опыта по изучению влияния хитозана на продуктивность цыплят-бройлеров кросса «Гибро»

Группа Количество голов Условия кормления

1 (контрольная) 7000 Основной рацион - O.P. (полнорационный комбикорм для цыплят-бройлеров соответствующего возраста)

2 (опытная) 7000 O.P. + хитозан ( 3 мг/гол с 32-х дневного возраста)

3 (опытная) 7000 O.P. + хитозан ( 5 мг/гол с 32-х дневного возраста)

За весь период опыта сохранность птицы в контрольной, 1 и 2 опытных группах составила 92,1%; 92,4% и 92,6 %, количество павшей птицы 7,9%; 7,6% и 7,4 %, получено прироста живой массы 883 г; 1165 г и 1153 г, живая масса в конце опыта составила 2210,0±55,19 г; 2545,60±95,54 г и 2626,00± 71,57 г, соответственно. Наблюдаемое положительное влияние хитозана в составе рациона кормления цыплят-бройлеров на их продуктивность возможно связано со способностью хитозана при поступлении с пищей обволакивать стенки слизистой кищечника, адсорбировать и выводить из организма мико-токсины, ионы тяжелых металлов, продукты метаболизма бактерий.

Исходя из условий эксперимента, наиболее оптимальной дозой хитозана является ежедневное выпаивание раствора хитозана из расчета 5 мг/голову, начиная с 32-х дневного возраста.

г

■

■I-

а

Среднесуточный прирост «ивой массы

ы Контроль • Г Р'.'ППЭ 1 и Группа 2

Живая масса в конце опыта. %

Рис.10 Динамика живой массы и среднесуточных приростов цыплят бройлеров при введении в корм хитозана

3.4.4. Применение хитозана в качестве флокулянта при концентрировании бакмассы Р.тиИос1с1а. Флокулирующие свойства хитозана изучали на производственных штаммах Р.тикоас1а трех серовариантов: А - штамм 1231, В - штамм 681 и Д - штамм Т-80 в цехе № 4 ФГУП «Щелковский биокомбинат». На первом этапе исследований было установлено, что наилучшие флокулирующие свойства проявляют 1%-ные растворы хитозана, что соответствует 0,02% в пересчете на сухое вещество, а оптимальное значение рН находится в пределах 5,5-6,2. Наиболее полный эффект флокуляции наблюдали в 10 - 12-часовых культурах пастерелл, при этом 4 - 8-часовые культуры в той или иной степени также взаимодействовали с хитозаном.

Изучалась эффективность процессов флокуляции в зависимости от температуры реакционной среды (4, 22 и 37°С), молекулярной массы хитозана (хитозан с ММ 2, 10 и 35 кДа оказался недостаточно эффективным) и степени дезацетилирования (79-97 %). Осаждение клеток пастерелл проходило эффективно при использовании растворов хитозана с ММ в диапазоне 50-500 кДа. После внесения хитозана образование осадка происходило уже через 1-2 минуты. Полностью процесс заканчивался за 24 часа. Увеличение экспозиции до 48-72 часов не давало положительного результата.

Из полученных данных следует, что характер и степень флокуляции клеток Р.тикоас1а различных серовариантов зависит от целого ряда факторов ( температуры взаимодействия клеток с флокулянтом, ММ хитозана, СДА и др.). Однако при всем многообразии условий эксперимента можно выявить некоторые общие закономерности. Клетки серовариантов Р.тикомёа на различных сроках роста популяций эффективнее связываются хитозаном по мере увеличения его молекулярного веса, при этом температура осаждения заметно снижается. В целом сравнительный анализ выявил относительно ограниченную активность хитозана с ММ 500 кДа. Следует отметить, что наиболее активным для концентрирования клеток Р.тикоас1а являются растворы хитозана с ММ 50 кДа (СДА 85%), 100 кДа (СДА 85%) и 250 кДа (СДА 79%). В данных экспериментальных условиях выявлена зависимость степени связывания культур пастерелл от серовариантной принадлежности штаммов. В порядке возрастания эффективности связывания бактерий хитозаном штаммы можно расположить следующим образом: А. В и Д. Последнее, скорее всего, объясняется особенностями морфологии клеток каждого сероварианта.

На основании полученных результатов можно сделать заключение о высоких сорбционных свойствах хитозана в отношении бактерий вида Р.тикос1с1а и возможности его использования в технологическом процессе концентрирования бакмассы.

3.4.5. Применение хитозана в технологии получения протеолитического ферментного препарата трипсин. Согласно оценке российских аналитиков, в настоящее время в нашей стране потребность промышленности в ферментных препаратах удовлетворяется за счет импорта более чем на 90%.

Разработанная нами технология получения трипсина включает стадию измельчения на коллоидной мельнице предварительно дефростированной при +15 - +25°С поджелудочной железы от убойных животных - крупного рогатого скота и свиней, получения экстракта трипсина с одновременным удалением из него балластных веществ в виде белково-липидного комплекса с использованием в качестве осадителя кислоторастворимого хитозана с мо-

лекулярной массой 150-250 кДа и нормой ввода 0,4-1,2 литра 1%-ного раствора хитозана на 1 кг поджелудочной железы, фильтрацию экстракта трипсина через бельтинг-ткань и ультрафильтрацию раствора через полупроницаемые мембраны в виде полых волокон из полиамида с пределом задержания по белку 15, 30 и 100 кДа, что обеспечивает необходимую степень очистки и концентрирования раствора трипсина перед его лиофильным высушиванием. Технология отличается простотой, полным исключением применения органических растворителей и солей-осадителей ферментов, воспроизводимостью и сравнительно низкими трудозатратами. Основные технологические операции могут быть осуществлены на отечественном оборудовании (рисунок 11).

Рис. 11. Блок-схема технологического процесса получения трипсина

Применение в качестве осадителя кислоторастворимого хитозана позволило в несколько раз увеличить выход целевого продукта, повысить его активность и сократить время изготовления (Патент № 2265053 «Способ полу-

чения трипсина», приоритет изобретения от 24.12.2002 г.). Разработан способ иммобилизации трипсина (Патент № 2437936 «Способ иммобилизации трипсина», приоритет изобретения от 17.06.2010 г.).

Испытания эффективности трипсина для диспергирования тканей животных и птиц при получении культур клеток в производственных условиях (ФГУП «Ставропольская биофабрика», ФГУП «Армавирская биофабрика», ОАО «Покровский завод биопрепаратов») показали, что испытуемый препарат не токсичен и обладает активными диспергирующими свойствами. Морфология клеток в культурах была без зернистости и признаков дегенерации.

Опытно-промышленный выпуск ферментного препарата трипсина налажен в условиях опытного производства в отделе получения БАВ ВНИТИБП и в ЗАО «Биопрогресс». 3.5.Разработка промышленной технологии изготовления дезоксирибо-нуклеиновой кислоты (ДНК) и практические аспекты ее применения.

Разработанный нами способ изготовления ДНК отличается высокой производительностью, возможностью масштабирования процесса, позволяющего получать высокий выход и снизить стоимость целевого продукта. В качестве исходного сырья для получения дезоксирибонуклеиновой кислоты используются замороженные молоки лососевых рыб. Схема технологического процесса получения ДНК представлена на рисунке 12.

При отработке параметров технологического процесса основными критериями оценки являлись содержание основного вещества в препарате ДНК и выход готового продукта. Было изучено влияние на эти показатели таких параметров, как соотношение компонентов реакционной смеси, температура и продолжительность процесса. Полученный продукт характеризуется следующими показателями: внешний вид - аморфный порошок; цвет - от белого до светло-коричневого; запах - свойственный данному продукту с рыбным оттенком; массовая доля влаги, %, не более - 8,0; массовая доля основного вещества, %, не менее - 40,0.

Рис.12. Блок-схема технологического процесса получения ДНК Лабораторные испытания ДНК, изготовленной по разработанной нами технологии, в аккредитованном испытательном лабораторном центре ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» показали, что препарат по санитарно-гигиеническим и микробиологическим показателям соответствует требованиям СанПиН 1.2.681-97 «Гигиенические требования к производству и безопасности парфюмерно-косметической продукции» и МУ 05 РЦ/3140. По параметрам острой токсичности сырье косметическое «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб» относится к малоопасным веществам (4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76) при внутрижелудочном пути поступления. В 50% концентрации не оказывает раздражающего действия на кожные покровы при однократном и повторном воздействии, раздражает слизистую оболочку глаз: 2 балла (гиперемия коньюктивы - 1 балл, отек века - 1 балл). В условиях проведенного эксперимента сенсибилизирующее действие не было обнаружено. В настоящее время ДНК в качестве биологически активной добавки введена в состав кремов, гелей и другой

косметической продукции, где оказывает геронтологическое действие на метаболические процессы, протекающие в коже.

Промышленное производство ДНК В настоящее время освоено на производственном участке отдела получения БАВ ВНИТИБП и в ЗАО «Биопрогресс» с годовым объемом производства в зависимости от потребностей 100150 кг.

3.6. Разработка промышленной технологии получения Мидийного гидролизата и изучение эффективности его применения для повышения резистентности молодняка сельскохозяйственных животных и птицы.

Биологически активные добавки в жизни животного играют важную роль -при крайне малых дозах они способны существенно изменить обмен веществ и повысить общую резистентность организма. В мясе мидий обнаружены соединения, обладающие широким спектром биологической и фармакологической активности. Способность повышать общую резистентность организма связывают с наличием в мидийных препаратах липидных антиоксидантов, меланоидинов и микроэлементов. Широкое применение нашли кислотные и ферментативные гидролизаты мидий. Учеными ВНИРО разработан Мидий-ный гидролизат кислотный лечебно-профилактический (МИГИ-К-ЛП), промышленное производство которого было налажено во ВНИТИБП-ЗАО «Биопрогресс». С целью оптимизации технологического процесса и увеличения объёмов производства нами была разработана экологически чистая технология получения мидийного гидролизата - биологически активной добавки к пище «Мидийный соус». При этом были решены вопросы локализации и нейтрализации выбросов, стандартизации препарата и снижения энергозатрат (Патент № 2284708 «Биологически активная пищевая добавка из мяса мидий и способ ее получения», приоритет изобретения 29.12.2004) (рисунок 13).

Рис.13. Блок-схема технологического процесса получения мидийного гидролизата

Нами были проведены испытания мидийного препарата, являющегося побочным продуктом при производстве «Мидийного соуса», в составе рациона молодняка свиней и птицы.

Изучение влияния Мидийного препарата на рост, развитие и сохранность цыплят проводили на Щелковской птицефабрике на цыплятах породы

кросс «П-46» (48710 голов) 6- и 18-суточного возраста и яйценоской породы «Родонит» (23690 голов) 4-суточного возраста. Мидийный препарат вводили в основной рацион из расчета 1,5 г/кг и 2,0 г/кг живой массы птицы в сутки.

Скармливание Мидийного препарата оказало положительное влияние на рост и развитие молодняка птицы: увеличение среднесуточного прироста живой массы на 4,2-10,9%, снижение затрат корма на 1 кг прироста живой массы на 3,9-4,4%, уменьшение количества расклевов, приводящих к гибели птицы, что свидетельствует о повышении биологической ценности кормов и общей резистентности организма.

Изучение эффективности применения Мидийного препарата при выращивании молодняка свиней крупной белой породы было проведено на подсвинках 4-месячного возраста со средней живой массой 46,95 кг совместно с Крапивиной Е.В. и Старовойтовой Н.П. (Брянская ГСХА) на СТФ СПК Агрофирма «Культура» Брянской области. Животные контрольной группы получали основной рацион, сбалансированный по основным питательным веществам в соответствии с общепринятыми нормами. Животным опытных групп дополнительно к основному рациону ежедневно скармливали Мидийный препарат в дозах 10, 15 и 20 г/кг сухого вещества рациона.

В конце опыта (на 114 день) среднесуточные приросты живой массы в опытных группах по отношению к контрольной были выше на 15,96%-19,45% , затраты корма на 1 кг прироста живой массы ниже на 13,75-16,35%.

В проведенном совместно со специалистами СПК «Новое Литвиново» (Московская область) научно-хозяйственном опыте на подсвинках крупной белой породы 4-х месячного возраста (Мидийный препарат скармливали в тех же дозах) через 15 дней после начала опыта было отмечено увеличение прироста живой массы подсвинков на 5,5- 6,3% по сравнению с контролем. Живая масса подсвинков опытных групп на 45-й день скармливания была на 7,9%-11,0% больше, чем у животных контрольной группы.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют об эффективности применения Мидийного препарата в качестве биологиче-

ски активной добавки в составе корма при выращивании молодняка свиней.

Многочисленными исследованиями установлено, что повышение содержания радиоцезия в почвах предопределяет более высокое включение его в ткани животных и снижение под влиянием хронического воздействия радионуклида функциональной активности защитных систем организма.

Для изучения влияния Мидийного препарата на резистентность животных, содержащихся в зонах с различной поверхностной активностью почвы по 137Сз и оптимального режима его применения совместно с Крапивиной Е.В. (Брянская ГСХА) в УОХ «Кокино», СТФ СХПК Агрофирма «Культура», СТФ СХПК «Родина» Брянской области была проведена серия опытов на свиньях крупной белой породы (свиноматки, поросята 30-суточного, 3-3,5-месячного, 4,5-месячного возраста). Испытывались разные схемы скармливания препарата: свиноматкам с 20-х суток после опороса в течение 5 дней вместе с кормом 0,5 литра на голову разведенного водой (1:3) Мидийного препарата (I схема); поросятам на 30-е сутки после рождения в течение 10 дней возрастающие дозы, начиная с 30 мл/голову разведенного водой (1:3) Мидийного препарата (II схема); поросятам из расчета 10, 15 и 20 г Мидийного препарата на 1 кг сухого вещества рациона в течение всего периода откорма молодняка свиней (III схема).

По I и II схеме скармливания Мидийный препарат оказывал положительный эффект в отношении выживаемости поросят к 60-дневному возрасту, их средней живой массе, содержания гемоглобина, количества лейкоцитов и уровня у-глобулинов в сыворотке крови. Наиболее эффективным оказалось непосредственное скармливание препарата только самим поросятам. Скармливание препарата по III схеме в течение 45 дней вызвало достоверное повышение среднесуточного прироста живой массы до 34,12% по сравнению с контролем, увеличение содержания гемоглобина, нормализацию содержания лейкоцитов.

На основании научно-хозяйственных опытов, проведенных в различных хозяйствах Брянской области, составлены Методические положения по применению Мидийного препарата при выращивании молодняка свиней.

4. ВЫВОДЫ

1. Разработана промышленная технология изготовления низкомолекулярного хитозана (ММ 20-50 кДа) с применением метода перекисного гидроли-

за.

2. Разработана промышленная технология изготовления натриевой соли сукцината хитозана, заключающаяся в сукцинилировании активированного хитозана янтарным аншдридом, нейтрализации свободных карбоксильных групп янтарной кислоты раствором гидроокиси натрия, фильтрации и высушивании раствора натриевой соли сукцината хитозана.

3. Определены параметры острой и хронической токсичности кислотора-створимого хитозана (ММ 250 кДа, СДА 88%): максимально переносимая доза - 1600 мг/кг, профилактическая доза - 70 мг/кг, терапевтический индекс - 22,8. В хроническом эксперименте на мышах внутрижелудочное введение раствора хитозана в дозе 70 мг/кг веса тела не привело к изменениям гематологических показателей крови и функционального состояния печени.

4. Установлено, что хитозан (ММ 5-10 кДа) обладает профилактическим и лечебным эффектом при гамма-облучении мышей в летальных дозах. Процент выживаемости животных был тем выше, чем на более ранних сроках относительно момента облучения вводился хитозан.

5. В экспериментальных условиях показана возможность и отработаны условия применения хитозана в качестве энтеросорбента при желудочно-кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных: в целях профилактики в виде 2%-ного раствора из расчета 2 мл на 1 кг живого веса за 30 минут до кормления 2 раза в день в течение 2 суток, для лечения в виде 3%-ного раствора из расчета 3 мл на 1 кг живого веса за 30 минут до кормления 3 раза в день в течение 3 суток.

6. В экспериментальных условиях изучено влияние выпаивания хитозана в комплексе с пробиотиком «Проваген» на микробиоценоз толстого кишечника, динамику живой массы и морфо-биохимические показатели гомеостаза телят. Установлено, что ежедневное выпаивание в течение 7 суток 1-1,5-месячным телятам комплекса пробиотика «Проваген» в дозе 14 г/голову и хитозана в дозе 0,8 г/голову в сутки приводит к оптимизации микробиоценоза толстого кишечника за счет повышения уровня эшерихий, повышение среднесуточных приростов живой массы на 9,62%, а также оптимизацию гомеостаза.

7. Установлена зависимость характера и степени флокуляции клеток Р. multocida различных серовариантов от молекулярной массы и степени дез-ацетилирования хитозана. Наиболее активными для концентрирования клеток P. multocida являются растворы хитозана с молекулярной массой 50 кДа (СДА 85%), 100 кДа (СДА 85%) и 250 кДа (СДА 79%).

8. Разработана экологически безопасная промышленная технология получения протеолитического ферментного препарата трипсина из поджелудочной железы убойных животных (крупный рогатый скот, свиньи) с использованием в качестве осадителя кислоторастворимого хитозана с молекулярной массой 150-250 кДа. Показана возможность применения трипсина для получения первичных и перевиваемых культур клеток.

9. Разработана технология получения ДНК из молок лососевых рыб с использованием протеолитического фермента трипсина, позволяющая получать препарат с высоким содержанием основного вещества (50-70%), отличающаяся высокой производительностью, возможностью масштабирования процесса, высоким выходом и низкой стоимостью целевого продукта.

10. Разработана экологически безопасная технология получения мидийно-го гидролизата - биологически активной добавки к пище «Мидийный соус».

11. В условиях научно-хозяйственного опыта показана эффективность применения в составе кормовых рационов мидийного препарата, являющегося побочным продуктом при производстве «Мидийного соуса», на рост, раз-

витие и уровень естественной резистентности у молодняка сельскохозяйственных животных и птицы.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

По результатам исследований разработана и утверждена в установленном порядке следующая нормативно-техническая документация: ТУ 9289-008-11734126-05 «Хитозан»; ТУ 9289-067-00472124-01 (Изменение № 1) «Хитозан пищевой»; ТУ 9284-027-11743126-08 «Сукцинат хитоза-на»;ТУ 9284-026-11734126-08 «Ламихит» (экстракт ламинарии с хитозаном); ТУ 9284-025-11734126-08 «Фукохит» (экстракт фукуса с хитозаном); ТУ 9154-030-11734126-10 «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб» ; ТУ 9289-029-11734126-09 Биологически активная добавка «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб»; ТУ 9283-02111734126-07 «Мидийный соус»; Инструкция по применению лекарственного средства Хитозан для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных (Регистрационный номер ПВР-2-2.6/01705 от 15 мая 2007 года); Технологический регламент па производство ферментного препарата трипсин; Методические положения по применению трипсина в биотехнологии при производстве препаратов ветеринарного назначения; Методические положения по применению хитозана в качестве флокулянта при концентрировании бакмассы Р.тикоис1а; Методические положения по применению Медийного препарата при выращивании молодняка свиней.

На разработанные препараты в государственных регистрационных органах получены: Свидетельство о государственной регистрации лекарственного средства для животных «Хитозан» (Регистрационный номер ПВР-2-2.6/01705 от 15.05. 2007 г.); Свидетельство о государственной регистрации биологически активной добавки «Хитозан пищевой» № 77.99.23.3.У.5797.6.09 от 10.06.2009 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение на Изменение № 1 к ТУ 9289-067-00472124-03 «Хитозан пищевой»

№ 77.99.23.003.Т.001570.06.09 от 10.06.2009 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9284-027-11734126-08 «Сукцинат хитозана» № 77.99.40.915.Т.003096.12.08 от 18.12.2008 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9284-026-11734126-08 «Ламихит» (экстракт ламинарии с хитозаном) № 77.99.40.915.Т.003098.12.08 от 18.12.2008 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9284-025-11734126-08 «Фукохит» (экстракт фукуса с хитозаном) № 77.99.40.915.Т.003099.12.08 от 18.12.2008 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение на сырье косметическое «Сукцинат хитозана», «Экстракт мидий», «Фукохит» (экстракт фукуса с хитозаном), «Ламихит» (экстракт ламинарии с хитозаном) № 77.99.40.915. Д.013950.12.08 от 18.12.2008 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9154-030-11734126-08 «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб» № 77.99.40.915.Т.001476.05.10.12.08 от 26.05.2010 г.; Свидетельство о государственной регистрации биологически активной добавки «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб» № 77.99.11.3.У. 11192.12.09 от 04.12.2009 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9289-029-11734126-09 Биологически активная добавка «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб» № 77.99.11.003.-Т.003227.12.09 от 04.12.2009 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9283-021-11734126-07 «Медийный соус» № 50.99.01.928.Т.-008693.06.07 от 04.06.2007 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение на «Медийный соус» № 50.99.01.928.П.009485.07.07 от 17.07.2007 г.

На производственных площадях ВНИТИБП - ЗАО «Биопрогресс» осуществляется промышленный выпуск: лекарственного средства для животных «Хитозан»; пищевого сырья «Хитозана пищевого», «Хитозана низкомолекулярного пищевого», «Кислоты дезоксирибонуклеиновой из молок лососевых рыб»; косметического сырья «Сукцината хитозана», « Лами-хита» (экстракта ламинарии с хитозаном), «Фукохита» (экстракта фукуса с хитозаном), «Кислоты дезоксирибонуклеиновой из молок лососевых рыб; биологически активной добавки «Медийный соус».

6. СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

6.1. Список научных публикаций в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ

1. Самуйленко АЛ. Различные виды хитозана для ветеринарии и животноводства/ АЛ. Самуйленко, С.М. Шинкарев, А.И. Албулов, М.А. Фролова, Е.В. Крапивина, П.А. Кузнецов // Аграрная Россия, М., 2004, С. 8-12.

2. Албулов А.И. Разработка и расширение сферы применения биологически активных препаратов на основе сырья природного происхождения/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, АЛ. Самуйленко, В.И. Еремец и др. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова. - 2006. - № 2. - С. 33-34.

3. Кржижановская Е.В. Адсорбционные и адъювантные свойства хитозана/ Е.В.Кржижановская, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, С.М. Шинкарев, Л.С. Люлькова, М.А. Фролова, H.A. Бондарева, A.B. Гринь, В.Б. Хабаров // Ветеринария и кормление,- 2008,- № 4,- С. 34-35.

4. Кржижановская Е.В. Антимикробный эффект кислоторастворимого хитозана/ Е.В.Кржижановская, А.И. Албулов, Е.А. Рубан, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова, В.И. Еремец, H.A. Бондарева, В.Б. Хабаров, A.B. Гринь // Ветеринария и кормление,- 2008.-№ 5.-С. 14-15.

5. Кржижановская Е.В. Изучение антимикробного действия низкомолекулярных фракций хитозана на микобактерии/ Е.В.Кржижановская, A.B. Гринь, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова, А.И. Албулов, H.A. Бондарева, В.Б. Хабаров, Н.К. Еремец, Е.В. Рахманина, И.А. Бараковский // Ветеринария и кормление.- 2008 -№ 6 -С 3133.

6. Кржижановская Е.В. Получение низкомолекулярного хитозана и изучение его антимикробных свойств/ Е.В .Кржижановская, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова, A.B. Гринь, А.И. Албулов, Е.А. Рубан, A.B. Гринь // Достижения науки и техники агропромышленного комплекса.-2008.-№ 11.-С. 45-46.

7. Кржижановская Е.В. Изучение антимикробного действия хитозана/ Е.В.Кржижановская, Варламов В.П., АЛ. Самуйленко, А.И. Албулов, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова, Н.К. Еремец, H.A. Бондарева, В.Б. Хабаров, A.B. Гринь // Сельскохозяйственная биология.-2008.6.-С. 119-121.

8. Антонов С.Ф. Изучение ранозаживляющих свойств хитозана/ С.Ф. Антонов, Е.В.Кржижановская, Ю.И. Филиппов, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук.-2008.-№ 6,- С. 52-54.

9. Фролова М.А. Практические аспекта применения хитозана в ветеринарной практике/ М.А. Фролова, АЛ. Самуйленко, А.И. Албулов, В.П. Варламов, С.М. Шинкарев, Н.К. Еремец, A.B. Гринь, В.И. Еремец, А.Г. Мищевцов, И.А. Бараковский // Труды Кубанского государственного аграрного университега.-Серия: ветер, науки,- Краснодар.-2009.-№1 (ч.1.).-С. 300-302.

10. Фролова М.А. Ферментные препараты коллагеназа и трипсин для использования в биотехнологии/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко // Труды Кубанского государственного аграрного университета,- Серия: ветеринарные науки,-Краснодар.-2009,- №1 (ч.1.).-С.303-304.

11. Фролова М.А. Роль гидролизата из мяса мидий в рационе кормления цыплят/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, Н.К. Еремец, Г.Ю. Косовский, Р.В. Рогов // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Серия: ветеринарные нау-ки.-Краснодар.-2009.-№1 (ч.2.).-С.346-347.

12. Албулов А.И. Хитансодержащие биологически активные добавки к пище в рационализации питания населения/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, О.В. Буханцев, В.М. Быкова, Немцев, С.В. Б.А. Комаров // Рыбпром.-2010.-№ 2.-С. 25-28.

13. Трескунов К.А. Эффективность фитохитодезтерапии и проблемы сертификации фитохитодезов/ К.А. Трескунов, Л.В. Погорельская, А.И. Албулов, М.А. Фролова, Б.А. Комаров // Традиционная медицин.-Выпуск 5.-2011.-С. 393-394.

14. Фролова М.А. Получение опытно-промышленной партии белкового гидроли-зата из тушек норок и изучение его токсичности/ М.А. Фролова, АЛ. Самуйленко, А.И. Албулов, В.Н. Денисенко, П.Н. Абрамов, Р.В. Рогов //Матер. Всерос. конф. с междун. участием «Экобиотех-2011» и 2-я Всерос. школа-конф. молодых ученых // Известия Самарского научного центраРАН.- Т.13. -№ 5(3). -2011.- С.207-209.

15. Крапивина Е.В. Влияние выпаивания телятам разных доз пробиотика «Прова-ген» и комплекса этого пробиотика с хитозаном на микробиоцидную активность нейтрофилов крови / Е.В. Крапивина, Д.В. Иванов, А.И. Феськов, М.А. Фролова, А.И. Албулов, О.В. Буханцев // Научный журнал КубГАУ [Электронный ресурс].-Краснодар: КубГАУ, 2012-№-02(76). -12 с. -Режим досту-na:http://ej .kubagro.ru/2012/02/pdf754.pdf

16. Буханцев О.В. Применение хитозана и белковых гидролизатов в комплексе с пробиотиком «Муцинол» при откорме поросят/ О.В. Буханцев, Р.В. Рогов, М.А. Фролова, А.И. Албулов, A.B. Гринь, П.Н. Абрамов, P.C. Краснокутский // Свино-водство.-2012.-№ З.-С 69-71.

17. Крапивина Е.В. Хитозан в составе пробиотической кормовой добавки «Прова-ген»/ Е.В. Крапивина, Д.В. Иванов, А.И. Феськов, М.А. Фролова, А.И. Албулов, О.В. Буханцев//Ветеринария и кормление.-2012.-№ 1.-С. 30-31.

18. Буханцев О.В. Влияние комплекса хитозан-пробиотик на морфо-биохимические показатели гомеостаза молодняка свиней/ О.В. Буханцев, Р.В. Рогов, М.А. Фролова, А.И. Албулов // Ветеринария и кормление.-2012.-№ 2.-С.32-33.

19. Фролова М.А. Разработка промышленной технологии изготовления трипсина для биотехнологических целей/ Фролова М.А. // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук.-2012.-№ З.-С. 45-46.

6.2. Монография.

20. Албулов А.И. Хитозан в косметике/ А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова//В монографии «Хитин-Хитозан», М., 2002-С.360-363.

6.3. Список патентов

21. Патент РФ № 2265053 Способ получения трипсина /А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, И.Г. Ермишина, С.М. Шинкарев, В.Н. Качалов, A.M. Трунов // приоритет от 24.12.2002,-опубл. 27.11.2005,- БИ № ЗЗ.-С. 180.

22. Патент РФ № 2284708 Биологически активная пищевая добавка из мяса мидий и способ ее получения /А.И. Албулов, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, АЛ. Самуйленко, В .А. Терентьев, Т.А. Телегина //приоритет от 29.12.2004.-опубл. 10.10.2006.-БИ. № 28,- С. 80.

23. Патент РФ № 2328267 Зубная паста / А.И. Албулов, П.Е. Козырев, АЛ. Самуйленко, Е.В. Кондратьев, М.А. Фролова, A.B. Гринь // приоритет от 16.01.2007.-опубл. 10.07.2008.-БИ № 19,- С. 390.

24. Патент № 2437936 Способ иммобилизации трипсина / В.М. Попова, В.И. Лукина, Е.И. Ярыгина, JI.A. Скороходова, А.И. Гуславский, АЛ. Самуйленко, И.И. Кочиш, И.И. Матвеева, В.И. Еремец, С.А. Гринь, A.A. Раевский, И.Л. Беро, М.А.

Фролова, H.K. Еремец // приоритет от 17.06.2010.-опубл. 27.12.2011.-БИ № 36 - С 812.

6.4. Список научных публикаций

25. Фролова М.А Использование хитозана в составе косметических препаратов/ М.А. Фролова //Мат. II Межд. научно-практич. конф.: «Биологически активные вещества и новые продукты в косметике» М.-1997.- С. 13-14.

26. Албулов А.И. Препараты из мяса мидий как лечебно-профилактические средства при лечении молодняка сельскохозяйственных животных/ А.И. Албулов, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, В.Н. Качалов, Е.А. Пилипейко // Мат. Всероссийск. на-учно-практ. конф., посвященной 70-летию Першина В.А..- Щелково,- ВНИТИБП.-1998,- С. 36-37.

27. Албулов А.И. Использование хитозана в ветеринарии в составе средств для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний у молодняка с/х животных/ А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова, A.C. Фоменко, С.М. Шинка-рев // Мат. Всероссийск. научно-практ. конф., посвященной 70-летию Першина

B.А.- Щелково,- ВНИТИБП,- 1998,- С. 38-39.

28. Сушков И.В. Использование хитозана в растениеводстве/ И.В. Сушков, В.Н. Чикин, А.И. Албулов, М.А. Фролова, A.C. Фоменко, Е.А. Е.А. Пилипейко //Мат. Всеросс. научно-практ. конф., повященной 75-летию со дня рождения Н.Ф.Чуклова,- Щелково,- 1998,- С. 44-45.

29. Бойков ПЛ. Проблема удаления запаха из морепродуктов и пути ее решения/ ПЛ. Бойков, Б.А. Комаров, А.И. Албулов, М.А. Фролова, Е.А. Пилипейко, Е.А.,

C.М. Шинкарев, Е.М. Лукьянова//Мат. Всеросс. научно-практ. конф., повященной 75-летию со дня рождения Н.Ф. Чуклова.- Щелково.- 1998.- С. 47-49.

30. Новикова М.В. Мидийные гидролизаты - новая высокоэффективная лечебно -профилактическая пищевая добавка/ М.В. Новикова, A.C. Фоменко, А.И. Албулов, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, A.M. Трунов // Мат. V Российский национ. конгр.: «Человек и лекарство»,- М.- 1998.- С. 390.

31. Албулов А.И. Хитозан и коллагеназа - биологически активные препараты из морепродуктов и других отраслях народного хозяйства/ А.И. Албулов, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, Б .А. Комаров, С.В. Енгашев // Мат. V Российский национ. конгр.: «Человек и лекарство»,- М,- 1998,- С. 342.

32. Албулов А.И. Мидийные препараты - новые продукты в косметике/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, A.C. Фоменко, С.М. Шинкарев // Мат. III Межд. научно-практич. конф.: «Биологически активные вещества, новые технологии и продукты в косметике»,- М.- 1998.- С. 24.

33. Албулов А.И. Новые эффективные лекарственные препараты из сырья природного происхождения/ А.И Албулов, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, A.M. Трунов // Мат. I Российской научно-практич. конф.: «Актуальные проблемы медицинской экологии».- Орел.- 1998.- С. 11-12.

34. Костеша НЛ. Производство и контроль медицинских, ветеринарных препаратов, опыт применения и реализации их в странах СНГ/ НЛ. Костеша, А.К. Дубровский, А.И. Албулов, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, A.B. Кузьминенкова, С.М. Шинкарев // Мат. Межд. научно-практич. конф.: «Производство и контроль медицинских, ветеринарных препаратов, опыт применения и реализации их в странах СНГ»,- Вольгинский.- 1999.- С. 21-23.

35. Албулов А.И. Лечебно-профилактические пищевые добавки из продуктов морского и растительного происхождения/ А.И. Албулов, A.C. Фоменко, М.А. Фроло-

ва, В.Н. Качалов, С.М. Шинкарев, A.M. Трунов//Мат. науч. конф.: «Место фитотерапии в современной медицине»,- Черноголовка.- 1999.- С. 4-7.

36. Новикова М.В. Мидийный гидролизат (МИГИ-K ЛП) как лечебно - профилактический препарат/ М.В. Новикова, А.И. Албулов, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев//Мат. научн. конф.: «Место фитотерапии в современной медицине».-Черноголовка,- 1999,- С. 28-31.

37. Албулов А.И. Хитозан - новый препарат для медицины и ветеринарии/ А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, БА.Комаров // Мат. VIX Российск. национ. конгр.: «Человек и лекарство».- М.-1999.- С. 379.

38. Албулов А.И. Применение хитозана в ветеринарии для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных/ А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, Н.Э. Нифангьев, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев //Мат. V конф.: «Новые перспективы в исследовании хитина и хи-тозана»,- М,- Щелково.- 1999.- С. 115-117.

39. Албулов А.И. Перспективы применения хитозана в косметике/ А.И. Албулов, Л.В. Симонова, М.А. Фролова, Е.А. Пилипейко, A.C. Фоменко//Мат. V конф.: «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М. - Щелково.- 1999.- С. 117-119.

40. Албулов А.И. Разработка новых лечебно-профилактических препаратов из морепродуктов и растительного сырья/ А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, Е.А. Пилипейко, A.B. Кузьминенкова // Мат. Всеросс. науч-но-практич. конф.: «Разработка и освоение производства нового поколения лекарственных средств для животных и их применение в ветеринарной пракгике».-Ставрополь,- 2000,- С. 70-72.

41. Пилипейко ЕА. Испытания препарата «Мидиум» в составе рациона кормления цыплят/ Е.А. Пилипейко, А.И. Албулов, М.А. Фролова, М.В. Новикова // Мат. Всеросс. научно-пракгич. конф., посвящ. 30-летию ВНИТИБП.- Щелково,- 2000.-С. 339-340.

42. Пилипейко Е.А. К вопросу использования препарата «Мидиум» при выращивании цыплят/ Е.А. Пилипейко, А.И. Албулов, М.А. Фролова, П.Б. Ершов //Сборник докладов Межд. конф. молодых ученых: «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов».- Щелково.- 2001.- С. 174-176.

43. Крапивина Е.В. Состояние защитных механизмов поросят при различных способах использования гелевого раствора хитозана/ Е.В. Крапивина, В.П. Иванов, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев //Мат. VI Межд. конф.: «Новые достижении в исследовании хитина и хитозана»,- М,- 2001,- С. 199200.

44. Мельник Н.В. Применение хитозана для осаждения клеток пастерелл из бульонных культур/ Н.В. Мельник, Н.Д. Скичко, Е.А. Шубина, А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова //Мат. VI Межд. конф.: «Новые достижении в исследовании хитина и хитозана».- М.- 2001.- С. 217-220.

45. Ершов П.Б. Применение биологически активных добавок из морепродуктов при повышенных физических нагрузках/ П.Б. Ершов, С.М. Шинкарев, В.В. Коржов, М.А. Фролова, А.И. Албулов // Сбор. докл. Межд. конф. молодых ученых: «Научные основы технологии производства ветеринарных биопрепаратов»,- Щелково,-2002,-С. 166-168.

46. Албулов А.И. Некоторые аспекты практического применения хитозана и его производных/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев //Ж. «Парафармацев-тика»,- 2002.- № 8.- С. 48.

47. Албулов А.И. Морские водоросли: путь к красоте/ А.И. Албулов, М.А. Фролова //Ж. «Сырье и упаковка для парфюмерии, косметики и бытовой химии» - 2002 -№ 5 (24).- С. 9. '

49. Албулов А.И. Хитозан: строение и свойства/ А.И. Албулов, М.А. Фролова //Ж. «Сырье и упаковка для парфюмерии, косметики и бытовой химии» - 2002 - № 1 (20).- С. 17. '' "

50. Албулов А.И. Мидии для красоты и здоровья нашего организма/ А.И. Албулов, М.А. Фролова //Ж. «Сырье и упаковка для парфюмерии, косметики и бытовой хи-мии».-2002.- № 6 (25).-С. 16.

51. Албулов А.И. Новое косметическое сырье из морских водорослей/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, О.М. Васильченко //Мат. VII Межд. научно-практ. конф.: «Косметические средства и сырье: эффективность и безопасность».- М,- 2002,- С. 37-38.

52. Албулов А.И. Хитозан как средство лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка с/х животных/ А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко М.А. Фролова, С.М. Шинкарев //Мат. Межд. научно-практич. конф.: «Современные вопросы патологии с/х животных»,- Минск,- 2003,- С. 33-34.

53. Албулов А.И. Хитозан: вчера, сегодня, завтра/ А.И. Албулов, М.А. Фролова //Мат. VIII Межд. научно-практич. конф.: «Косметические средства и сырье: эффективность и безопасность»,- М,- 2003.

54. Албулов А.И. Влияние препарата «Мидиум» в рационе питания молодняка с/х животных и птицы на гематологические показатели/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, Е.А. Пилипейко, Е.В. Крапивина, Н.П. Старовойтова //Мат. Межд. научно-практич! конф.: «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов» -Щелково,- 2003.- С. 175-178.

55. Албулов А.И. Эффективность использования препарата «Мидиум» при выращивании молодняка с/х животных/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, Е.А. Пилипейко, Е.В. Крапивина, Н.П. Старовойтова//Мат. Межд. научно-практич. конф.: «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов»,- Щелково - 2003 -С.179-182.

56. Шинкарев С.М. Технологические подходы к стандартизации качества хитозана/ С.М. Шинкарев, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова, A.C. Фоменко, П.А. Кузнецов//Мат. Межд. научно-практич. конф.: «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов»,- Щелково,- 2003,- С. 183-186.

57. Евтихов П.Н. Сравнительная оценка протеолитической активности ферментных препаратов, получаемых из животного и растительного сырья/ П.Н. Евтихов, С.А. Марушина, Т.А. Потрехалина, А.И. Албулов, М.А. Фролова, A.M. Трунов //Мат! Межд. научно-практич. конф.: «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов»,- Щелково.-2003.-С. 195-198.

58. Албулов А.И. Коррекция качества хитозановых препаратов в промышленных условиях/ А.И. Албулов, С.М. Шинкарев, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова, A.C. Фоменко, С.И. Лебедько //Мат. VII Межд. конф.: «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана», С-Пб - Репино.-2003.-С. 9-11.

59. Албулов А.И. Перспективы применения низкомолекулярных хитозанов в производстве БАД/ А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова //Мат. V Межд.

научной конф.: «Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения».-Черноголовка.-2004.-С. 312-319.

60. Фролова М.А. Некоторые направления применения различных форм хитозана в ветеринарной практике/ М.А. Фролова, А .Я. Самуйленко, С.М. Шинкарев, П.А. Кузнецов, Ю.Д. Фролов, А.И. Албулов //Мат. Межд. конф.: «Ветеринарная медицина 2005: современное состояние и проблемы обеспечения благополучия животноводства»,- Ялта.- 2005.-С. 45-49.

61. Албулов А.И. Получение низкомолекулярного хитозана методом ферментного гидролиза/ А.И. Албулов, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова, П.А. Кузнецов, A.B. Гринь, В .П. Варламов, A.B. Ильина, C.B. Немцев //Мат. Межд. научно-практич. конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», поев. 35-летию ВНИТИБП.-Щелково.- 2005.-С. 430-435.

62. Фролова М.А. ДНК из молок лососевых рыб - получение и свойства/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, С.М. Шинкарев, А.Я. Самуйленко, О.М. Васильченко, Д.А. Данишевский //Мат. Межд. научно-практич. конф.: «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», поев. 35-летию ВНИТИБП.-М.-2005.-С. 527-530.

63. Албулов А.И. Влияние скармливания хитозана на резистентность телят и поросят в условиях повышенной плотности загрязнения почв радиоцензием/ А.И. Албулов, Е.В. Крапивина, М.А. Фролова, АЛ. Самуйленко, В.И. Еремец, С.М. Шинкарев, П.А. Кузнецов, A.B. Гринь //Мат. Межд. научно-практич. конф. «Актуальные проблемы ветеринарной медицины в условиях современного животноводства».- Минск,- 2005.-С. 62-66.

64. Албулов А.И. Некоторые направления применения различных форм хитозана в ветеринарной практике/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, А.Я. Самуйленко, С.М. Шинкарев, П.А. Кузнецов, Ю.Д. Фролов //Межотраслевой научный сборник «Ветеринарная медицина»,- Харьков,- 2005.- № 85.- Т. 2.- С. 45-49.

65. Фролова М.А.'Практические аспекты применения хитозана и его производных в различных областях народного хозяйства/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, В.И. Еремец, С.М. Шинкарев, A.B. Гринь //Мат. VIII Межд. конф. «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана».-Казань.- 2006,- С. 68-70.

66. Албулов А.И. Разработка и расширение сферы применения биологически активных препаратов на основе сырья природного происхождения/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, А Л. Самуйленко, В.И. Еремец, Е.В. Шмидт //Мат. IV съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова.- Пущино.-2006.-С. 8-10.

67. Албулов А.И. Хитозансодержащие лечебно-профилактические препараты: настоящее и будущее/ А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, М.А. Фролова, Б.А. Комаров, С.М. Шинкарев, П.А. Кузнецов, Е.В. Шмидт //Мат. VI Межд. научной конференции «Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения в современной медицине».-Черноголовка.-2006.-С.22-24.

68. Албулов А.И. Опыт применения препаратов хитозана в сельском хозяйстве/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, В.П. Варламов, Кузнецов П.А., С.М. Шинкарев, Е.В. Шмидт, Е.И. Лебедько, A.B. Гринь //Мат. Межд. научно-практ. конф., посвященной 80-летию со дня рождения И.А.Харькова «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов»,- Щелково.-2006.-С. 257-261.

69. Албулов А.И. Сорбционные свойства хитозана и их применение при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных и птицы/ А.И. Албулов, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова, Е.В. Кржижановская, А.К. Чуклов, A.B. Гринь, Е.В.

Шмидт //Сборник научных трудов «Основные проблемы ветеринарной медицины и стратегия борьбы с заболеваниями сельскохозяйственных животных в современных условиях» .-Махачкала.-2007.-С. 251-254.

70. Албулов А.И. Применение ферментов в технологиях переработки мясных и рыбных производств/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, С.А., Марушина, Ф.М. Сне-гур, И.А. Ельцова //Сборник научных трудов Луганского национального аграрного университета,- Луганск.-2008.-№ 87.-С.З-7.

71. Кузнецов П.А. Получение фракций хитозана и изучение их биологических свойств/ П.А. Кузнецов, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, Ю.Д. Фролов // Мат. научно-пракгич. конф. «Пищевая и морская биотехнология: проблемы и перспективы»,- Светлогорск.- 2008.-С. 81-82.

72. Фролова М.А. ДНК из молок лососевых рыб - эффективная биологически активная добавка/ М.А. Фролова, А.Я. Самуйленко, А.И. Албулов, В.И. Еремец, О.М. Васильченко // Мат. научно-практич. конф. «Пищевая и морская биотехнология: проблемы и перспективы».-Светлогорск.-2008.-С. 140.

73. Албулов А.И. Результаты и проблемы внедрения инновационных технологий на основе хитинсодержащего сырья/ А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, В.И. Еремец, A.B. Гринь //Мат. IX Межд. конф. «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана».-Ставрополь.- 2008.-С. 7-9.

74. Албулов А.И. Использование хитозана в составе препаратов для лечения и профилактики болезней собак/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, СЛ., Е.В. Шмидт, Л.А. Гасанова, В.Н. Портянко, Е.И. Лебедько //Мат. XVI Моск. Межд. конгресса по болезням мелких домашних животных.-2008,-М.-С. 157-158.

75. Красочко П.А. Влияние низкомолекулярного хитозана на продуктивность и качество продукции от цыплят-бройлеров/ П.А. Красочко, М.А. Фролова, А.И. Албулов, Н.К. Еремец, A.B. Гринь, И.Л. Беро, В.И. Еремец, А.П. Дуктов //Мат. Межд. научно-практ. конф., посвящ. 40-летию ВНИТИБП «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов».-Щелково.- 2009.-С. 462-469.

76. Гулик Е.С. Влияние хитозана и хитабиса на состояние надэпителиального слизистого слоя тонкого кишечника/ Е.С. Гулик, Г.А. Костеша, А.И. Албулов, М.А. Фролова //Мат. Межд. научно-практ. конф., посвящ. 40-летию ВНИТИБП «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов».-Щелково.-2009.-С. 481-484.

77. Фролова М.А. Гидролизаты белков из сырья животного и растительного происхождения/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, Р.В. Рогов, И.Г. Ер-мишина, И.Л. Беро //Мат. Межд. научно-практ. конф., посвящ. 40-летию ВНИТИБП: «Научные основы производства ветеринарных биологических препара-тов».-Щелково.-2009,- С. 517-522.

78. Албулов А.И. Современное состояние и перспективы производства хитозан-содержащей продукции в России/ А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова, A.B. Гринь, О.В. Буханцев, В.П. Варламов //Мат. X Межд. конф.: «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана».-Нижний Новгород.-2010.-С.7-10.

79. Албулов А.И. Влияние способа высушивания на качество продукта при производстве хитозана и хитозансодержащей продукции/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, Б.А. Комаров, С.М. Шинкарев, О.В. Буханцев, В.И. Еремец //Мат. 10-й Межд. конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана»,-НижнийНовгород.-2010.-С. 74-77.

80. Фролова М.А. Ферментативные гидролизаты из различных видов сырья животного происхождения/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, Р.В. Рогов, А.К. Лихотин //Ж. «Труды БГУ».-2009.-Т. 4.-ч. 2.-С. 298-300.

81. Фролова М.А. Гидролизаты белков из сырья животного и растительного происхождения/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, Р.В. Рогов, И.Г. Ер-мишина // Сбор. мат. XI Межд. конф. молодых ученых «Пищевые технологии и биотехнологии».-Казань.-2010.-Ч. 2.-С.

82. Албулов А.И. Отечественные хитозансодержащие биологически активные добавки/ А.И. Албулов, В.П. Варламов, М.А. Фролова, Б.А. Комаров, О.В. Буханцев //Мат. I Межд. научно-практич. конф.: «Инновационные технологии управления здоровьем и долголетием человека».-2010.-Санкт-Петербург.-С. 10-14.

83. Фролова М.А. Эффективность применения препаратов хитозана при заболеваниях кожи и химических и термических ожогах/ М.А. Фролова, Е.И. Лебедько, С.М. Шинкарев, А.И. Албулов, О.В. Буханцев, Ю.Д. Фролов //Мат. межд. научно-практич. конф. «Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства»,- 2010.-Самара,- С. 334-337.

84. Комаров Б.А. Лиофилизация экстрактов лекарственных растений в присутствии хитозана полифракционного состава/ Б.А. Комаров, А.И. Албулов, М.А. Фролова, A.B. Гринь //Каталог докладов IV Межд. конф.: «Экстракция органических соединений».-Воронеж.-2010.-С. 95.

85. Фролова М.А. Влияние природного полимера хитозана в составе пробиотиче-ских препаратов на состояние здоровья и продуктивность сельскохозяйственных животных и птицы/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, A.B. Гринь, Р.В. Рогов //Мат. межд. научно-практич. конф., посвященной 40-летию ГНУ ВНИ-ВИПФиТ:«Актуальные проблемы болезней обмена веществ у сельскохозяйственных животных в современных условиях».-Воронеж.-2010.-С.

86. Фролова М.А. Биологические свойства различных форм и модификаций хитозана при использовании их в ветеринарии, животноводстве и агробиологии/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, С.М. Шинкарев, О.В. Буханцев, В.П. Варламов, Е.В. Крапивина, Ю.Д. Фролов //Мат. V Межд. конф. «Акт. проблемы биологии в животноводстве».-Боровск.-2010.-С. 124-125.

87. Фролова М.А. Разработка технологии изготовления гидролизатов из сырья различного происхождения для использования в животноводстве/ М.А. Фролова,

A.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, Р.В. Рогов, М.Ю. Тюрмина //Матер. V Межд. конф. «Актуальные проблемы биологии в животноводстве».-Боровск.-2010.-С. 109110.

88. Фролова М.А. Разработка промышленной технологии изготовления фармацевтических препаратов протеолитического действия для использования в различных областях народного хозяйства/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко,

B.П. Варламов, Р.В. Рогов, О.В. Буханцев //Сборник научных трудов «Перспективные биокатализаторы для перерабатывающих отраслей АПК».-М.-2010.-С. 123-128.

89. Фролова М.А. Лечебная эффективность хитозановых препаратов/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, С.Д. Антонов, С.М. Шинкарев, A.B. Гринь, О.В. Буханцев, Ю.Д. Фролов //Ж. «Ветеринарна медицина выпуск 95», Харьков, 2011, С. 232-233.

90. Фролова М.А. Изучение влияния хитозана в составе рациона кормления на продуктивность цыплят - бройлеров/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуй-

^коя^'опГс:^^' КРЗС0ЧК0 — -пуск 95,-

циоттЫ АИ aT^ZT S™"* Д°баВКИ ДЛЯ погашения кормового рациона пчел/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, Р.В. Рогов НГ Билатп г г

скийШах. Межд. научно-пракгич. к'онф, '«П>таразв«"^ва^bp"

Гр^аУвл~пИ-С.7ЬбТ РеГИОНОВ Р°ССИИ' СТраН СНГ " Зарубежья™

АЛ' Перспеетнвь1 прения биологически активных добавок к пище на основе морепродуктов/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, АЛ. Самуйленко В П Варламов, В.М. Быкова, О.В. Буханцев // Мат. IV Мевд. конф ■ «ШрсГё пои'

?схоРжГ„ия/Прв°ХеНИемлДУ^0П гаДР0ЛИЗа белка И3 СЫРЬЯР^ительного про-^ ' • ФР°лова' А-И- Албулов //Мат. II Межд. научной

Ш-154;<М°Л0ДеЖНаЯ ШуКа * ПИщевой промышленности». Ставрополь,2Ш С

94. Фролова М.А. Экологачески безопасные хитозансодержащие средства защита растении для агропромышленного комплекса/ М.А. Фролова, Л И. Л. бГо -Я СаМуйленко' Бухашкв, A.B. Гринь //Мат Межд. па^ш 201LC П°СВЯЩеНН0Й 10-летию Факультета пищевых биотехнолошй.-Уфа -

Application experience of chitosan in veterinary practice / M.A. Frolova, AI Albu-ov, AJ. Samujlenko, S.M. Shinkarev, O.V. Buhantsev // Adv. Chitin Sei • the lOA n-п Г8 9 еГеПСе °fthe EUr°Pean Chiti" S0dety- - St.-Petetersburg,' 2011 - Vol.

96. Фролова Л1А. Косметическое сырье и морепродукты / М.А. Фролова А И Албулов, О.М. Васильченко, В.И. Еремец, О.В. Бурцев, Р.В. Рогов Шат Межд' научно-практ. конф. «Пищевая и морская биотехнология м здорового п„ и решения медико-социальных проблем».-Светлогорск.-2011 -С 121-122

97. Албулов А.И. Хигозан содержащие биологически активные добавки - источни-

Гв^ГоТГ™ Албул0в' М-А- Фр-ова, В.П. Варламов,

A.B. Гринь, O.B. Буханцев, В.М. Быкова//Мат. Межд. научно-пракг. конф. <<Пшце-

вая и морская биотехнология для здорового питания и решения медико-

социальных проблем».-Светлогорск.-2011.-С. 6-7.

98. Фролова М.А. ДНК из молок лососевых рыб для применения в качестве БАД в

:ГюГГ.Р0ДУГ ^ ФрОЛОВа' А-И- ^^ °-М- Васильченко, Р В. тП'^; Р МбЖД- ПауЧН0-пРает- К0НФ- «Пищевая и морская био-

С™оТс,^11ТсРпГ12ГНИЯ И Pe~ МеД—ых проблем»,

99 Фролова М.А. Изучение эффективное™ применения мидийного гидролизата как кормовой добавки для повышения неспецифической резистентности организма

иГрТГ™ М-А- Фр°Л0Ва' А'И' АЛ6УЛ0В' А'Я' Самуйленко, Е.В Крапивина, Р.В. Рогов //Мат. научно-пракг. конф., посвященной 90-летию ФГУП «Армавирская биофабрика».-Армавир.-2011 .-С. 87-91.

100. Фролова М.А. Перспективы применения хигозана и его производных в со-

ВапляГ^ТпПРгПаРаТ°^М-А- Фр°Л0Ва' А'И' Албулов' AJL Самуйленко, В.П. Варламов, A.B. Гринь, О.В. Буханцев //Мат. Межд. научно-пракг. конф. «Фармацевтические и медицинские биотехнологии».-2012,- М.-С. 295-296.

101. Фролова М.А. Использование метода ультрафильтрации при получении ферментного препарата трипсина для биотехнологических целей/ М.А. Фролова, Р.В. Рогов, А.И. Албулов, Д.С. Немцев, A.B. Гринь //Мат. VI Межд. научно-практич. симпозиума: «Перспективные ферментные препараты и биотехнологические процессы в технологии продуктов питания и кормов».-М.-2012.-С. 47-50.

ОСНОВНЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

НД - нормативная документация

ТУ - технические условия

ТИ - технологическая инструкция

ОР - основной рацион

ФР - физиологический раствор

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

АА - антиоксидантная аюивность

БАВ - биологически активное вещество

БАД - биологически активная добавка

кДа - килодальтон

ММ - молекулярная масса

ММР - молекулярно-массовое распределение

СДА - степень дезацетилирования

СЗ - степень замещения

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

РНК - рибонуклеиновая кислота

КРС - крупный рогатый скот

ВНКИ-21 - перевиваемая линия клеток почки сирийского хомячка ПТ - почка теленка

СПЭВ - перевиваемая линия почек свиней ФКЭ - фибробласты куриных эмбрионов ИП - индекс пролиферации

Заказ № 261. Объем 2 п.л. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ООО «Петроруш». г.Москва, ул.Палиха 2а.тел.(499)250-92-06 www.postator.ru

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Фролова, Марина Алексеевна

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1.1 .Актуальность работы.

1.2.Цель и задачи исследований.

1.3. Научная новизна.

1.4. Практическая значимость работы.

1.5. Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1.6. Апробация работы.

1.7. Публикации.

1.8. Объем и структура диссертации.

1.9 Личный вклад автора.

1.10. Благодарности.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Природный полисахарид ХИТОЗАН.

2.1.1. Сырьевые источники для получения и строение хитозана.

2.1.2. Способы получения хитозана.

2.1.3. Свойства хитозана.

2.1.4. Основные направления практического применения хитозана и его производных в различных областях народного хозяйства.

2.1.4.1. Применение хитозана и его производных в пищевой промышленности.

2.1.4.2. Применение хитозана и его производных в животноводстве и растениеводстве.

2.1.4.3. Применение хитозана и его производных в медицине и ветеринарии.

2.1.4.4.Применение хитозана и его производных в парфюмерно-косметической промышленности.

2.1.4.5. Другие направления практического применения хитозана и его производных.

2.2. Протеолитический фермент ТРИПСИН.

2.2.1. Характеристика ферментных препаратов и способы их получения.

2.2.2.Области применения ферментного препарата трипсин.

2.3. ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА (ДНК).

2.3.1 Сырьевые источники для получения ДНК.

2.3.2.Способы получения ДНК.

2.3.3.Биологическая активность ДНК.

2.3.4. Области применения ДНК.

2.4.МИДИЙНЫЙ ГИДРОЛИЗАТ.

2.4.1. Способы получения Мидийного гидролизата.

2.4.2. Биологическая активность Мидийного гидролизата.

2.4.3. Области применения Мидийного гидролизата.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы исследований.

3.1.1. Материалы исследований.

3.1.2. Методы исследований.

3.2. Результаты исследований и их обсуждение.

3.2.1.Разработка промышленных технологий изготовления хитозана и его производных для практического применения в различных областях народного хозяйства.

3.2.1.1. Разработка промышленной технологии изготовления низкомолекулярного хитозана.

3.2.1.2. Разработка промышленной технологии изготовления натриевой соли сукцината хитозана.

3.2.2. Изучение параметров острой и хронической токсичности хитозана.

3.2.3. Изучение радиопротекторных свойств хитозана.

3.2.4. Практические аспекты применения хитозана и его производных в различных областях народного хозяйства.

3.2.4.1. Применение различных форм хитозана в ветеринарной практике.

3.2.4.2.Изучение влияния хитозана на резистентность сельскохозяйственных животных и птицы.

3.2.4.3. Применение хитозана в составе кормовых добавок для сельскохозяйственных животных и птицы.

3.2.4.4. Применение хитозана в качестве флокулянта при производстве вакцин.

3.2.4.5. Применение хитозана в составе биологически активных добавок.

3.2.4.6. Применение хитозана в технологии получения протеолитического ферментного препарата трипсин.

3.2.5.Разработка промышленной технологии изготовления дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) и практические аспекты ее применения.

3.2.5.1. Разработка промышленной технологии изготовления ДНК.

3.2.5.2. Практические аспекты применения ДНК.

3.2.5.2.1. Применение ДНК в составе биологически активных добавок (БАД).

3.2.5.2.2. Применение ДНК в составе парфюмерно-косметической продукции.

3.2.6. Разработка промышленной технологии получения Мидийного гидролизата и изучение эффективности его применения для повышения резистентности молодняка сельскохозяйственных животных и птиц.

4. ВЫВОДЫ.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Промышленные технологии производства биологически активных веществ из сырья природного происхождения"

Разработка промышленных технологий производства биологически активных веществ из сырья природного происхождения является важной задачей биотехнологии, позволяющей осуществить более полное и комплексное использование биоресурсов.

В настоящее время вопросами разработки препаратов на основе переработки морепродуктов в различных областях народного хозяйства занимаются многие научные коллективы, как в нашей стране, так и за рубежом (28, 29, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 309, 310, 311).

Хитозан привлекает внимание широкого круга исследователей и практиков благодаря комплексу физико-химических и биологических свойств и неограниченной воспроизводимой сырьевой базе. Полисахаридная природа хи-тозана обусловливает его сродство к живым организмам, а наличие реакци-онноспособных функциональных групп обеспечивает возможность разнообразных химических модификаций, позволяющих усиливать присущие ему свойства или придавать новые в соответствии с предъявленными требованиями.

В настоящее время исследования по хитину и хитозану координируются целым рядом национальных и международных организаций, таких, как Европейское хитиновое общество, Азиатско-Тихоокеанское хитиновое общество, Иберо-Американское хитиновое общество. В нашей стране с 2000 года действует Российское хитиновое общество.

Значительный вклад в изучение хитина и хитозана внесли ученые: Быков

B.П., Рогожин C.B., Гамзазаде А.И., В.П., Варламов В.П., Албулов А.И., Немцев C.B., Нудьга JI.A., Скрябин К.Г., Сафронова Т.М., Быкова В.М., Ви-хорева Г.А., Феофилова Е.П., Маслова Г.В., Новиков В.Ю., Куприна Е.Э., Михайлов С.Н., Кильдеева Н.Р., Липатова И.М., Александрова В.А., Комаров Б.А., Марквичева Е.А., Урьяш В.Ф., Братская С.Ю., Тихонов В.Е., Лопатин

C.А., Велешко А.Н., Ежова Е.А., Акопова Т.А и другие исследователи, работы которых направлены на изучение свойств хитина и хитозана, способов их получения из разных видов сырья и применения в различных областях народного хозяйства.

В течение последних трех десятилетий наблюдается резкий количественный и качественный скачок в потреблении мирового рынка хитина и хитозана. Так, только за период с 1984 по 1994 годы мировой рынок хитиновой продукции по данным ряда зарубежных изданий вырос приблизительно в 2535 раз. Ориентировочные объемы продаж только на рынках США и Японии по самым скромным оценкам могут в настоящее время составить по хитину -до 1000 тонн, по хитозану - до 200 тонн с перспективой дальнейшего увеличения. При этом необходимо учитывать, что хитин и хитозан являются сравнительно новым объектом международной торговли и коммерческая проработка этого направления будет продолжаться.

В настоящее время мировой потенциал сырья достаточен для производства более чем 150 тысяч тонн хитина в год, что более чем достаточно для современного уровня производства.

Объемы сырья в России самые крупные, основные технологические операции могут быть осуществлены на отечественном оборудовании.

По мнению специалистов, хитин-хитозан вступил в век своего промышленного применения и является «Материалом XXI века». Наиболее перспективными направлениями практического использования хитина и хитозана являются: сельское хозяйство (кормовая добавка для животных, покрытие семян растений с целью стимулирования роста и повышения урожайности, обеспечение сохранности собранного урожая) (69, 70, 71, 72, 73, 331, 332, 333), ветеринария и медицина (лечение и профилактика желудочно-кишечных заболеваний у молодняка сельскохозяйственных животных, получение шовного материала и искусственной кожи, стимулирование заживления ран, особенно ожоговых, в качестве адъюванта для повышения выработки антител, создание высокоэффективных нетоксичных противораковых препаратов, адсорбция ионов тяжелых металлов и некоторых радиоактивных изотопов - продуктов ядерного распада, снижение уровня холестерина в плазме крови, антимикробная активность и пролонгатор действия ряда биопрепаратов) (38, 43, 68, 74, 75, 82, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 364, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373) , парфюмерно-косметическая промышленность (увлажнитель, эмульсификатор, антистатик, смягчающее средство, противоперхотная и антимикробная добавка) (78, 79, 80, 81 345, 346, 347), пищевая промышленность (диетическое средство, эмульсификатор, невпиты-ваемый носитель, противоплесневый препарат) (39, 59, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 120, 126, 129, 130), текстильная промышленность (41, 76), производство бумаги и упаковочных материалов (42, 77), переработка отходов, очистка сточных вод (74, 344). По мере дальнейшего изучения свойств хитозана области его применения будут расширяться.

Интенсивный характер современных технологий выращивания сельскохозяйственных животных и птицы оказывают негативное влияние на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), изменяя эволюционно сложившуюся в условиях свободного выгула структуру микробиотипа (175,176, 404, 405, 406). Это служит одной из причин появления и распространения дисбактериозов животных и птицы, стратегия и тактика терапии которых с помощью только антибактериальных средств не всегда эффективна и безопасна (177, 178, 179, 405, 406, 407). В связи с этим, проблема поиска новых биологически активных препаратов для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных весьма актуальна, а применение хитозана для этих целей перспективно с учетом наличия у него таких свойств, как слабая аллергенность, низкая токсичность, апирогенность и биодеградируемость.

Производство ферментных препаратов является одним из перспективных направлений в современной биотехнологии. За последние 25-30 лет открыто, выделено и изучено большое количество ферментов из животных тканей, растений и полученных с помощью микроорганизмов. Ежегодный прирост объема производства ферментных препаратов во всем мире в настоящее время составляет 10-15 %.

Наибольший удельный вес среди выпускаемых препаратов (до 60 % общего объема выпуска) занимают протеиназы и амилазы. В настоящее время отечественная промышленность заметно отстает по объему производства от ведущих зарубежных стран.

Протеолитический фермент трипсин может быть использован в биологической промышленности при производстве культуральных вирусных вакцин, при работе с клеточными культурами, в медицине, ветеринарии и других отраслях, поэтому усовершенствование технологических процессов его изготовления является актуальным, Кроме того, высокие цены на коммерческие трипсины зарубежных производителей также повышают интерес к получению препарата трипсина, удовлетворяющего потребителя по качеству и цене.

Используемые в настоящее время технологии выделения ДНК многостадийны, трудоемки и требуют дорогостоящего оборудования и реактивов (145, 156, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156). В связи с этим у нас в стране и за рубежом она производится в небольшом количестве.

Основным недостатком большинства способов получения ДНК из источников животного происхождения является то, что они предназначены для использования в лабораторных условиях и не рассчитаны на получение целевого продукта в промышленных масштабах.

В связи с этим, разработка промышленной технологии получения дезок-сирибонуклеиновой кислоты (ДНК) с целью дальнейшего использования получаемого продукта в составе биологически активных добавок (БАД) и парфюмерно-косметической продукции актуальна.

Проблема иммунной недостаточности у молодняка сельскохозяйственных животных выходит на первое место, особенно при переводе хозяйств на промышленную основу и создании комплексов с большой концентрацией поголовья животных на малой территории. Это способствует тому, что у животных создается недостаточный иммунный фон и возможно снижение напряженности иммунитета. Болезни органов пищеварения у молодняка, как правило, протекают на фоне пониженной резистентности организма.

Одним из современных подходов к решению проблемы является разработка, производство и применение новых экологически безопасных эффективных препаратов, способных обеспечить биологическую защиту животных (180, 181, 182, 183, 184, 185).

Биологически активные добавки при крайне малых дозах способны существенно изменить обмен веществ и повысить общую резистентность организма. Богатейший источник биологически активных веществ - обитатели Мирового океана, в частности моллюски, в мясе которых обнаружены соединения, обладающие широким спектром биологической и фармакологической активности. Способность повышать общую резистентность организма связывают с наличием в мидийных препаратах липидных антиоксидантов, мела-ноидинов и микроэлементов.

Многочисленными исследованиями установлено, что повышение содержания радиоцезия в почвах предопределяет более высокое включение этого элемента в ткани животных и снижение под влиянием хронического воздействия радионуклида функциональной активности защитных систем организма. Это влечет за собой уменьшение минимальных инфицирующих доз микроорганизмов для развития инфекционного процесса, увеличение числа случаев с тяжелым клиническим течением болезни, а также снижение продуктивности животных.

В связи с этим, разработка технологии получения и изучение иммуностимулирующих и радиопротекторных свойств биологически активной добавки из мяса мидий актуальна.

1.2. Цель и задачи исследований.

Цель работы - разработка промышленных технологий изготовления биологически активных веществ из сырья природного происхождения и создание на их основе новых экологически безопасных эффективных биопрепаратов для применения в различных отраслях народного хозяйства.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- проанализировать современное состояние производства биологически активных веществ;

-разработать технологические процессы производства производных хито-зана, протеолитического ферментного препарата трипсина, дезоксирибонук-леиновой кислоты и мидийного гидролизата;

-изготовить опытные образцы препаратов, изучить их физико-химические свойства, биологическую активность и эффективность применения в различных отраслях народного хозяйства;

- разработать нормативную документацию на препараты и освоить их промышленный выпуск.

1.3. Научная новизна.

Впервые разработаны промышленные технологии получения хитозана с заданными характеристиками для практического применения.

Установлена профилактическая и терапевтическая эффективность низкомолекулярного хитозана (ММ 5-10 кДа) при гамма-облучении мышей радиоцезием в летальных дозах.

Научно обоснована и экспериментально доказана целесообразность использования хитозана для терапии и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных.

Показана высокая ростостимулирующая активность хитозана при введении его в рацион подсосным свиноматкам и поросятам, при этом у животных отсутствовала стрессорная реакция адаптационного синдрома.

Установлены высокие сорбционные свойства хитозана в отношении бактерий Р.шикос1ёа и показана возможность его использования в качестве флокулянта в технологическом процессе концентрирования бакмассы.

Научно обоснована и экспериментально доказана эффективность влияния комплекса пробиотика «Проваген» с хитозаном на микробиоценоз толстого кишечника, динамику живой массы и морфо-биохимические показатели гомеостаза телят.

Экспериментально доказана эффективность выпаивания раствора хито-зана из расчета 5 мг/голову начиная с 32-х дневного возраста в составе рациона кормления на среднесуточный прирост и живую массу цыплят-бройлеров.

Включение в рецептуру лечебно-профилактической зубной пасты низкомолекулярного водорастворимого хитозана (ММ 10-40 кДа) позволило получить пасту с противовоспалительным и кариеспрофилактическим действием, а также высокими очищающими и дезодорирующими свойствами (Патент РФ № 2328267).

Впервые разработана промышленная технология изготовления протео-литического ферментного препарата трипсина, отличающаяся экологической безопасностью производства, с применением адсорбента - природного полисахарида хитозана (Патент РФ № 2265053; Патент РФ № 2437936).

Впервые разработана промышленная технология изготовления дезокси-рибонуклеиновой кислоты (ДНК) из молок лососевых рыб с использованием ферментного препарата трипсина.

Впервые разработана экологически безопасная промышленная технология получения Мидийного гидролизата-биологически активной пищевой добавки из мяса мидий «Мидийный соус». (Патент РФ № 2284708).

Экспериментально обоснованы схемы применения Мидийного препарата при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных и птицы для увеличения интенсивности роста и уровня естественной резистентности.

1.4. Практическая значимость работы

Результаты исследований использованы при разработке технологий изготовления: различных форм и модификаций хитозана («Хитозан пищевой»; лекарственного средства для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных «Хитозан»; косметического сырья «Сукцинат хитозана», «Ламихит» - экстракта ламинарии с хитозаном, «Фукохит» - экстракта фукуса с хитозаном); протеолитического ферментного препарата трипсина; дезоксирибонуклеиновой кислоты из молок лососевых рыб; мидийного гидролизата - биологически активной пищевой добавки из мяса мидий «Мидийный соус».

Промышленный выпуск разработанных препаратов освоен на производственном участке отдела получения биологически активных веществ ВНИТИБП и в ЗАО «Биопрогресс».

Создание новых технологий и организация промышленного выпуска биологически активных веществ дали возможность их применения:

- в ветеринарии (лекарственное средство «Хитозан»);

- в пищевой промышленности («Хитозан пищевой», биологически активная добавка «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб», биологически активная пищевая добавка «Мидийный соус»);

- в биологической промышленности (ферментный препарат трипсин);

- в парфюмерно-косметической промышленности (косметическое сырье «Сукцинат хитозана», «Ламихит», «Фукохит», «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб»).

Годовой объем выпуска биологически активных веществ в зависимости от вида продукции и потребностей составляет от 800 кг до 3-5 тонн.

1.5 Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

-промышленные технологии изготовления низкомолекулярного хитозана и сукцината хитозана;

-параметры острой и хронической токсичности хитозана;

-радиопротекторные и флокулирующие свойства хитозана;

- различные формы хитозана в ветеринарной практике;

-оценка эффективности влияния препаратов хитозана на резистентность сельскохозяйственных животных и птицы;

-хитозан в составе кормовых добавок для сельскохозяйственных животных и птицы;

-хитозан в технологии получения протеолитического ферментного препарата трипсина;

-хитозан в составе парфюмерно-косметической продукции; -промышленная технология изготовления дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) и практические аспекты ее применения;

-промышленная технология получения Мидийного гидролизата; -эффективность применения мидийного гидролизата для повышения резистентности молодняка сельскохозяйственных животных и птицы. 1.6. Апробация работы. Основные материалы доложены и обсуждены: - в виде ежегодных отчетов по темам госзаданий на заседаниях ученого совета и методических комиссий ВНИТИБП (1996-2011 гг.); на секции «Ветеринарная биотехнология» ОВМ Россельхозакадемии (2008-2012 гг.); на Международных конгрессах в Москве, Санкт-Петербурге, Минске, Ялте, Алуште, Харькове, Всесоюзных, Республиканских и Всероссийских конференциях в Москве, Санкт-Петербурге, Орле, Черноголовке, Щелково, Ставрополе, Казани, Пущино, Махачкале, Луганске, Светлогорске, Нижнем Новгороде, Ярославле, Воронеже, Боровске, Южно-Сахалинске, Уфе, Армавире, Краснодаре (1996-2012 гг.).

Разработки демонстрировались на выставках: II Международная выставка «Инновации 99. Технологии живых систем» (Москва, 1999); VIII Международная выставка «Медицина для Вас» (Москва, 2001); Международная выставка «Биотехника» (Ганновер, 2001); II Международная выставка «Планета и здоровье» (Москва, 2001); «Биотехнологии России» (Берлин, 2001); «Лаборатория-Экспо» (Москва, 2009-2011); «Биоиндустриябиотехнологические решения для здравоохранения» (С.-Петербург, 2011); Российская агропромышленная выставка «Золотая осень» (Москва, 20022011 гг.). Разработки по материалам диссертационной работы были награждены 16 дипломами, 7 золотыми, 3 серебряными и 1 бронзовой медалью ВДНХ СССР и ВВЦ. За разработку промышленных технологий изготовления биологически активных препаратов и внедрение их в производство автором получены 4 медали «Лауреат ВВЦ» и серебряная медаль РАЕН имени Е. Дашковой.

1.7. Публикации. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 101 научной работе, в том числе в 1 монографии и 19 статьях в изданиях по перечню, рекомендованному ВАК Минобрнауки России. По материалам исследований получено 4 Патента РФ на изобретения.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 324 страницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы, результаты, выводы и практические предложения, содержит 42 таблицы и 33 рисунка. Список литературы включает 458 наименований, из которых 300 отечественных и 158 зарубежных. В приложении представлены копии документов, подтверждающие достоверность работы, ее научную и практическую значимость.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)", Фролова, Марина Алексеевна

4. ВЫВОДЫ

1. Разработана промышленная технология изготовления низкомолекулярного хитозана (ММ 20-50 кДа) с применением метода перекисного гидролиза.

2. Разработана промышленная технология изготовления натриевой соли сукцината хитозана, заключающаяся в сукцинилировании активированного хитозана янтарным ангидридом, нейтрализации свободных карбоксильных групп янтарной кислоты раствором гидроокиси натрия, фильтрации и высушивании раствора натриевой соли сукцината хитозана.

3. Определены параметры острой и хронической токсичности кислотора-створимого хитозана (ММ 250 кДа, СДА 88%): максимально переносимая доза - 1600 мг/кг, профилактическая доза - 70 мг/кг, терапевтический индекс - 22,8. В хроническом эксперименте на мышах внутрижелудочное введение раствора хитозана в дозе 70 мг/кг веса тела не привело к изменениям гематологических показателей крови и функционального состояния печени.

4. Установлено, что хитозан (ММ 5-10 кДа) обладает профилактическим и лечебным эффектом при гамма-облучении мышей в летальных дозах. Процент выживаемости животных был тем выше, чем на более ранних сроках относительно момента облучения вводился хитозан.

5. В экспериментальных условиях показана возможность и отработаны условия применения хитозана в качестве энтеросорбента при желудочно-кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных: в целях профилактики в виде 2%-ного раствора из расчета 2 мл на 1 кг живого веса за 30 минут до кормления 2 раза в день в течение 2 суток, для лечения в виде 3%-ного раствора из расчета 3 мл на 1 кг живого веса за 30 минут до кормления 3 раза в день в течение 3 суток.

6. В экспериментальных условиях изучено влияние выпаивания хитозана в комплексе с пробиотиком «Проваген» на микробиоценоз толстого кишечника, динамику живой массы и морфо-биохимические показатели гомеостаза телят. Установлено, что ежедневное выпаивание в течение 7 суток 1-1,5месячным телятам комплекса пробиотика «Проваген» в дозе 14 г/голову и хитозана в дозе 0,8 г/голову в сутки приводит к оптимизации микробиоценоза толстого кишечника за счет повышения уровня эшерихий, повышение среднесуточных приростов живой массы на 9,62%, а также оптимизацию го-меостаза.

7. Установлена зависимость характера и степени флокуляции клеток Р. multocida различных серовариантов от молекулярной массы и степени дез-ацетилирования хитозана. Наиболее активными для концентрирования клеток P. multocida являются растворы хитозана с молекулярной массой 50 к Да (СДА 85%), 100 кДа (СДА 85%) и 250 кДа (СДА 79%).

8. Разработана экологически безопасная промышленная технология получения протеолитического ферментного препарата трипсина из поджелудочной железы убойных животных (крупный рогатый скот, свиньи) с использованием в качестве осадителя кислоторастворимого хитозана с молекулярной массой 150-250 кДа. Показана возможность применения трипсина для получения первичных и перевиваемых культур клеток.

9. Разработана технология получения ДНК из молок лососевых рыб с использованием протеолитического фермента трипсина, позволяющая получать препарат с высоким содержанием основного вещества (50-70%), отличающаяся высокой производительностью, возможностью масштабирования процесса, высоким выходом и низкой стоимостью целевого продукта.

10. Разработана экологически безопасная технология получения мидийно-го гидролизата - биологически активной добавки к пище «Мидийный соус».

11. В условиях научно-хозяйственного опыта показана эффективность применения в составе кормовых рационов мидийного препарата, являющегося побочным продуктом при производстве «Мидийного соуса», на рост, развитие и уровень естественной резистентности у молодняка сельскохозяйственных животных и птицы.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

По результатам исследований разработана и утверждена в установленном порядке следующая нормативно-техническая документация:

- ТУ 9289-008-11734126-05 «Хитозан»;

- ТУ 9289-067-00472124-01 (Изменение № 1) «Хитозан пищевой»;

- ТУ 9284-027-11743126-08 «Сукцинат хитозана»;

- ТУ 9284-026-11734126-08 «Ламихит» (экстракт ламинарии с хитозаном);

- ТУ 9284-025-11734126-08 «Фукохит» (экстракт фукуса с хитозаном);

- ТУ 9154-030-11734126-10 «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб»

- ТУ 9289-029-11734126-09 Биологически активная добавка «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб»;

- ТУ 9283-021-11734126-07 «Мидийный соус»;

- Инструкция по применению лекарственного средства Хитозан для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных (Регистрационный номер ПВР-2-2.6/01705 от 15 мая 2007 года);

- Технологический регламент на производство ферментного препарата трипсин;

- Методические положения по применению трипсина в биотехнологии при производстве препаратов ветеринарного назначения;

- Методические положения по применению хитозана в качестве флоку-лянта при концентрировании бакмассы Р.тикос1ёа;

- Методические положения по применению Мидийного препарата при выращивании молодняка свиней.

На разработанные препараты в государственных регистрационных органах получены:

- Свидетельство о государственной регистрации лекарственного средства для животных «Хитозан» (Регистрационный номер ПВР-2-2.6/01705 от 15 мая 2007 года);

- Свидетельство о государственной регистрации биологически активной добавки «Хитозан пищевой» № 77.99.23.3.У.5797.6.09 от 10.06.2009 г.;

- Санитарно-эпидемиологическое заключение на Изменение № 1 ТУ 9289-067-00472124-03 «Хитозан пищевой» № 77.99.23.003.Т.001570.06.09 от 10.06.2009 г.;

- Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9284-027-1173412608 «Сукцинат хитозана» № 77.99.40.915.Т.003096.12.08 от 18.12.2008 г.;

- Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9284-026-1173412608 «Ламихит» (экстракт ламинарии с хитозаном) № 77.99.40.915.Т.003098.12.08 от 18.12.2008 г.;

- Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9284-025-1173412608 «Фукохит» (экстракт фукуса с хитозаном) № 77.99.40.915.Т.003099.12.08 от 18.12.2008 г.;

- Санитарно-эпидемиологическое заключение на сырье косметическое «Сукцинат хитозана», «Экстракт мидий», «Фукохит» (экстракт фукуса с хитозаном), «Ламихит» (экстракт ламинарии с хитозаном) №

77.99.40.915.Д.013950.12.08 от 18.12.2008 г.;

- Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9154-030-1173412608 «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб» № 77.99.40.915.Т.001476.05.10.12.08 от 26.05.2010 г.;

- Свидетельство о государственной регистрации биологически активной добавки «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб» № 77.99.11.3.У.11192.12.09 от 04.12.2009 г.;

- Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9289-029-1173412609 биологически активная добавка «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб» № 77.99.11.003.Т.003227. 12.09 от 04.12.2009 г.;

- Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9283-021-1173412607 «Мидийный соус» № 50.99.01.928.Т.008693.06.07 от 04.06.2007 г.;

- Санитарно-эпидемиологическое заключение на «Мидийный соус» № 50.99.01.928.П.009485.07.07 от 17.07.2007 г.;

На производственных площадях ВНИТИБП - ЗАО «Биопрогресс» осуществляется промышленный выпуск:

- лекарственного средства для животных «Хитозана»;

- пищевого сырья «Хитозана пищевого»;

- пищевого сырья «Хитозана низкомолекулярного пищевого»;

- косметического сырья «Сукцината хитозана»;

- косметического сырья Ламихита» (экстракта ламинарии с хитозаном);

- косметического сырья «Фукохита» (экстракта фукуса с хитозаном);

- косметического сырья «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб»;

- биологически активной добавки «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб»;

- биологически активной добавки «Мидийный соус»;

- биологически активной добавки «ХитАН»;

- биологически активной добавки «Полихит»;

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Фролова, Марина Алексеевна, Щелково

1. Немцев C.B. Научное обоснование комплексной технологии хитина, хитозана из панциря промысловых ракообразных и продукции на их основе.-М.:ВНИРО, 2006.-35 с.

2. Быков В.П. Состояние исследований и перспективы организации производства хитозана из ракообразных // Технология рыбных продуктов : Труды / ВНИРО. Москва, 1997.-С.208 221.

3. Быков В.П., Фурман Д.И. Получение хитозана из гаммаруса // Материалы Пятой конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Москва-Щелково 25-27 мая 1999 г. М.: Изд-во ВНИРО, 1999.- С. 18-21.

4. Водолажская C.B., Козлова И.Ю., Куприна Е.Э. Гаммарус перспективный источник для получения хитина, хитозана и белковых гидролизатов // Академия.,- 1997.-№ 4.-С.56-57.

5. Куприна Е.Э., Козлова И.Ю., Тимофеева К. Современные тенденции в способах получения и применения хитина и хитозана // Серия Обработка рыбы и морепродуктов: инф. Пакет ВНИПКИЭИА СУРХа, М.,1999.-вып. 3(1).-60 с.

6. Быкова В.М., Немцев C.B. Сырьевые источники и способы получения хитина и хитозана // Хитин и хитозан: Получение, свойства и применение/ Под ред. К.Г Скрябина, Г.А.Вихоревой, В.П.Варламова М.:Наука, 2002.-С.7-23.

7. УтеушевР.Р., Макатова М.Д. Технология рациональной переработки панцирьсодержащего сырья из речных раков // Материалы восьмой конф «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Казань 12-17 июня 2006г.- М: Изд-во ВНИРО, 2006. С.64-68.

8. Феофилова Е.П., Терешина В.М., Меморская A.C. Хитин мицелиаль-ных грибов: методы выделения, идентификация и физико-химические свойства//Микробиология. 1995.- Т.64.-№ 1. -С.27-31.

9. Немцев C.B. Выделение хитина и хитозана из медоносных пчел // Прикл. Биохим. Микробиол. 2004. - Vol. 40. - № 1. - Р. 46-50

10. Новиков В.Ю.Химический гидролиз хитина и хитозана //Материалы шестой международной конф. «Современные перспективы в исследовании хитина и .хитозана», Санкт-Петербург Репино 15-18 сентября 2003 г. - М.: Изд-во ВНИРО,2003. - С. 38-42

11. Новиков В.Ю., Чеботок E.H., Коновалова И.Н. Изучение механизма щелочного деацетилирования хитина и хитозана.// Материалы девятой конф «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Ставрополь, 2008.-С.39-42.

12. Мезенова О.Я., Григорьева Е.В. Совершенствование технологии хи-тина/хитозана из балтийского гаммаруса// Материалы восьмой конф «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Казань 12-17 июня 2006г.-М: Изд-во ВНИРО, 2006. С.40-43.

13. Новиков В.Ю., Рипак Ю.Б. Разработка и совершенствование технологии хитина и хитозана в Мурманске // Материалы восьмой конф «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Казань 12-17 июня 2006г.- М: Изд-во ВНИРО, 2006. С.46-51.

14. Патент 14-13599 Япония. Пер. с англ. КЕ-57017. Киев: Всесоюзный центр переводов, 1984, 15 с.

15. Авторское свидетельство 1363831 СССР. С 08 В 37/08

16. Передня A.A. Использование хитозана в кормах для рыб // Рыбное хоз-во. Сер. Корма и кормление в аквакультуре. Аналитическая и реферативная информация.- 2001.-Вып.1.-С.1-17.

17. Ежова Е.А. Модификация «холодного» способа деацетилирования хитина //Материалы седьмой международной конф. «Современные перспективы в исследовании хитина и .хитозана», Санкт-Петербург Репино 15-18 сентября 2003 г. -М.: Изд-во ВНИРО,2003. - С. 17-19.

18. Гиниче Ловас К. и др. Влияние некоторых параметров приготовления хитозана на его характеристики // Биоорганическая химия.-1984.-Т. 10.-№ 9.-С.1248-1252.

19. Быкова В.М., Фурман Д.И. Влияние режимов деацетилирования хитина из различных видов панцирьсодержащего сырья на качество хитозана //

20. Материалы Пятой конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хи-тозана», Москва-Щелково 25-27 мая 1999 г. М.: Изд-во ВНИРО, 1999.

21. Куликов С.Н., Тюрин Ю.А., Албулов А.И., Лопытин С.А., Варламов

22. B.П. Антибактериальная активность хитозана: практика и теория // Материалы девятой конф «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Ставрополь 13-17 октября 2008, г.- М: Изд-во ВНИРО, 2008.- С. 184-188.

23. Дударев В.Г., Иозеп A.A. Карбоксиметильная схема модификации хитина//

24. Материалы десятой конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Н.Новгород 29 июня 2 июля 2010 г. М.:Изд-во ВНИРО, 2010. -С.25-29.

25. Пестов A.B., Ятлук Ю.Г. Синтез в геле новый метод получения сульфоэтилхитозана// Материалы десятой конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Н.Новгород 29 июня 2 июля 2010 г. -М.:Изд-во ВНИРО, 2010. - С. 126-129.

26. Пестов A.B., Журавлев H.A., Ятлук Ю.Г. «Синтез-в-геле» новый метод получения карбоксиэтидхитозана // Журн. Прикл. Химии.-2007.-Т.80.-С.1184-1189.

27. Михайлов С.Н. Новые возможности химического сшивания хитозана // Материалы девятой конф «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Ставрополь 13-17 октября 2008, г.- М: Изд-во ВНИРО, 2008.-С.34-37.

28. Сан ПиН 2.3.2.1078-01 (индекс 1.3.7.)

29. Бучахчян Ж.В., Евдокимов А.И., Алиева Е.А., Шепило Е.А. Использование хитозана в молочных десертах// Материалы девятой конф «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Ставрополь 13-17 октября 2008, г.- М: Изд-во ВНИРО, 2008.- С.209-211.

30. Евдокимов И.А., Перлик Е.А., Василисин C.B., Алиева JI.P. Повышение качества йогуртного кисломолочного напитка// Материалы восьмой конф «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Казань 12-17 июня 2006г.- М: Изд-во ВНИРО, 2006. С.96-98.

31. Куликов С.Н., Алимова Ф.К., Захарова Н.Г., Немцев C.B., Варламов

32. B.П. Препараты «АгроХит» и «Триходермин» против болезней картофеля //Материалы седьмой международной конф. «Современные перспективы в исследовании хитина и .хитозана», Санкт-Петербург Репино 15-18 сентября 2003 г. - М.: Изд-во ВНИРОДООЗ - 99-102.

33. Смирнова Л.В., Пашук А.К. // Косметика и медицина, 1998.-№1.1. C.15-18.

34. Симонова Л.В., Пашук Л.К., Албулов А.И., Фоменко A.C. // Тез. Докл. Междунар. Научно-практич. Конф. «Биологически активные вещества и новые продукты в косметике». М. РПКА.-1996.-С.31.

35. Горлов И. // Сырье и упаковка для парфюмерии, косметики и бытовой химии / Приложение к журналу 2Красота для профессионалов» 2001 г.-№3(13).-С.17.81 .Виладот Ж.Л. //SOFW Yournal. -2001.-№3.-С.21-23.

36. Патент 02196587 Cl 20030120. Способ лечения деструктивной формы панкреатита /Большаков И.Н., Насибов С.Н., Приходько A.A., Винник Ю.С., Зыкова Л.Д., Бичурина Т.Б. Заявл.10.08.2001. Опубл. 20.01.2003.

37. Кассирский И.А., Алексеев Г.А. Клиническая гематология -М.:Медицина, 1970.-800 с.

38. Фомичев Ю.П., Шайдуллина Р.Г., Фомнова Е.О. и др. Влияние антисептиков и температуры среды на микробную обсемененность и метаморфоз личинок синантропных мух // Рыбоводство и рыболовство -2001.-№4.-С.13-14.

39. Быков В.Б. и др. Разработка технологии получения водорастворимой формы хитозана. Производство и применение хитина и хитозана // Тезисы докладов 4-й Всероссийской конференции.-М.:Изд-во ВНИРО.-С.26.

40. Албулов А.И. и др. Разработка технологии получения натриевой соли сукцината хитозана // Материалы пятой конф «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Москва-Щелково 25-27 мая 1999г. М.: Изд-во ВНИРО,1999.- С.7-8.

41. Барашков Т.К. Сравнительная биохимия водорослей // Пищевая промышленность.-М,-1972.-33 5с.

42. Идз М.Ф. Витамины и минеральные вещества. Полный медицинский справочник. Пер. с англ. Суглобова Е.Д. и др. С-Пб.:ИК «Комплект».-1996.-503 с.

43. Тодоров И.Н., Тодоров Г.И. Стресс, старение и их биохимическая коррекция.-М.: Изд-во «Наука» -2003.-С.51-54.

44. Патент 396103348/14. Способ лечения запущенных форм опухоли брюшной полости / Каплина Э.Н., Гринев М.В., Цибин Ю.Н. и др. Завялено 25.02.96, опублик. 10.09.99.- Бюлл. № 25.

45. Живрид Э.А., Истомин Ю.П. Изучение противоопухолевых свойств комплекса адриамицин-деринат в экспериментах.- Минск: Онкоцентр, 1994.

46. Казачкова Э.А. Применение препарата Деринат в комплексном лечении воспалительных заболеваний матки и придатков // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Материалы 1-ой Всерос. Конф. М.,2000. - С.23-24.

47. Мельников Д.Ю. Применение иммуноконьюгатов Дерината в различных областях медицины: Материалы 1-ой Всерос. Конф. М.,2000. - С. 6-8.

48. Патент № 93046329/14. Способ стимуляции лейкопоэза / Трещалин И.Д., Бодягин Д.А., Переверзева Э.Р. и др. Заявлено 11.10.93, опубл. 10.05.97 Бюлл. №13.

49. Патент № 95120725/14. Способ лечения заболеваний, характеризующихся аутоиммунной агрессией / Стариков В.В., Мягкоходов В.А., Радионов С.Ю. Заявлено 05.12.95,, опубл. 20.09.99.- Бюлл. № 26.

50. Пособие для врачей Деринат М.,1999. - 40 с.

51. Щукин С.А., Липин A.B., Рубинов Л.П. Опыт применения препарата Деринат в детской хирургической клинике // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Материалы 1-ой Всерос. Конф. -М.,2000. С.11-14.

52. Дубинина В.П., Фитенко Л.М., Городков Б.Г. Деринат в комплексной терапии больных с хроническими абструктивными заболеваниями легких // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Материалы 1-ой Всерос. Конф. М.,2000. - С. 17-19.

53. Каплина Э.Н. Некоторые итоги клинического применения препарата Деринат с 1976 по 2000 г. // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Материалы 1-ой Всерос. Конф. М.,2000. - С.3-6.

54. Соколов Т.В., Пшеничников О.В., Хейфиц В.Г., Миронов A.A. Опыт применения препарата Деринат в офтальмонологической практике // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Материалы 1-ой Всерос. Конф. М.,2000. - С. 26-28.

55. Чернышев М.Л. Комплексное лечение вирусных гепатитов «С» с использованием экстракорпоральных методов терапии и препарата Деринат // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Материалы 1-ой Всерос. Конф. М.,2000. - С. 36-42.

56. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А. СПИД М.: Народная Академия культуры и общечеловеческих ценностей., 1992. - 242 с.

57. Тутельян В.А. Биологически активные добавки в питании человека. -Томск: Изд-во НТЛ, 1999. 296 с.

58. Эрнандес Е. Теорема старения // Косметика и медицина. Научно-практич. Журнал, 1998,- № 3.- С. 5-8.

59. Пассаватер Р Свободнорадикальная теория старения // Косметика и медицина. Научно-практич. Журнал, 1998.- № 2.- С. 7-13.

60. Патент № 915446. Способ получения ДНК из молок рыб / Гаймула М.А., Кална В.Х., Микстайс У.Я., Эпштейн Л.М. Заявлено 10.10.80., опубл. 01.07.91.

61. Феофилова Е.П. Биологические функции и практическое использование хитина // Прикладная биология и микробиология. 1984.-Т.20.-Вып. 2. -С. 147.

62. Плиско Е.А., Нудьга Л.А., Данилов С.Н. Хитин и его химические превращения // Успехи химии.-1977.-Т.46.-№ 8.-С.1470-1487.

63. Александрова Т.А., Вассерман A.M., Гамзазаде А.И. Исследование внутримолекулярной подвижности хитозана методом спиновых меток // Высокомолекулярные соединения.-1983 .-Т.Б25 .-№3 .-С.219-222.

64. Марьин А.П., Феофилова Е.П., Генин Я.В. Влияние кристалличности на сорбционные и термические свойства хитизана // Высокомолекулярные соединения.-1982.-Т.Б24.-№9.-С.658-662.

65. Генин Я.В., Скляр A.M., Цванкин Д.Я. Рентгенографическое изучение пленок хитозана // Высокомолекулярные соединения.-1982.-Т.А26.-№ 11.-С.2411-2416.

66. Кайминь И.Ф., Озолиня Г.А., Плиско Е.А. Исследование температурных переходов хитозана// Высокомолекулярные соединения.-1980.-Т.А22.-№1.-С.151-156.

67. Сазанов Ю.Н., Федорова Г.Н., Плиско Е.А. Изучение термостабильности хитина, хитозана и некоторых его производных методом ДТА и ДТГ // Журнал прикладной химии.-1980.-Т.53.-№ 9.-С.2143-2146.

68. Любина С.Я., Стрелкина И.А., Нудьга Л.А. Двойное лучепреломление в потоке и вязкость растворов хитозана в уксусной кислоте при различной ионной силе // Высокомолекулярные соединения.-1983.-Т.А25.-№ 7.-С.1467-1472.

69. Прокопов A.A. N-производные хитозана и пленки на их основе. Дис. . канд. Техн. Наук.-Л., 1985.-158 с.

70. Акопова Т.А., Роговина С.З., Горбачева И.Н., Вихорева Г.А., Зеле-нецкий С.Н. Влияние размола на структуру и свойство хитозана // Высокомолекулярные соединения.-1996.-Т.А38.-№ 2.-С.263-268.

71. Красавцев В.Е. Криль как сырьевая основа хитинового производства // Матер. Пятой конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», Москва-Щелково 25-27 мая 1999 г. -М.: Изд-во ВНИРО, 1999. -С.35-37.

72. Быкова В.М., Немцев С.В. Сырьевые источники и способы получения хитина и хитозана / Хитин и хитозан : получение, свойства и примене-ние.-М.:Наука,2002.-С.7-23.

73. Красавцев В.Е. Увеличение экономического эффекта промысла криля // Рыбпром. 2010.-М? 2.- С.23-24.

74. Нудьга Л.А., Плиско Е.А., Данилов С.Н Получение хитозана и изучение его фракционного состава // Журнал органической химии.-1971.- Т. XII. С.2555-2558.

75. Куприна Е.Э., Козлова И.Ю., Тимофеева К.Г. Современные тенденции в способах получения и применения хитина и хитозана // Сер. «Обработка рыбо- и морепродуктов». -М.:ВНИЭРХ, 1999.-Вып. .III (1)-60 с.

76. Хитин и хитозан : природа, получение и применение // Материалы проекта CYTED N .М : Хитин и хитозан из отходов переработки ракообразных / Под ред. М. Se. Ana Pastor de Abram (Перу). Щелково: ООО «Мещера», 201 Ою - 294 с.

77. Ежова Е.А. Модификация «холодного способа» деацетилирования хитина //Материалы седьмой международной конф. «Современные перепективы в исследовании хитина и .хитозана», Санкт-Петербург Репино 15-18 сентября 2003 г. - М.: Изд-во ВНИРО,2003 - 17-19.

78. Ким Г.Н. Аминосахара и полиаминосахариды в сырье и пище из гидробыонтов: учеб. Пособие / Г.Н.Ким, С.Н.Максимова, Т.М.Сафронова. -Владивосток: Дальрыбвтуз, 2008. 87 с.

79. Некрасов Р.В., Кирилов М.П., Ушакова H.A. Использование пробио-тиков нового поколения в кормлении свиней // Проблемы биологии продуктивных животных. 2010. -№ 3. - С. 64-75.

80. Константинов В.А., Краснокутский P.C. Новый отечественный про-биотик «Проваген» // Свиноводство. 2009. № 5. -С.30-31.

81. Ашихмин Д. Пробиотик «Проваген» решение многих проблем при выращивании поросят// Свиноводство. 2010. - № 3. -С.46-47.

82. Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных. Справочное пособие / Под ред. А.П.Калашникова, В.И.Фисинина,

83. B.В.Щеглова, Н.И.Клейменова : 3-е изд. Перераб. И доп. М.: Агропромиз-дат, 2003.-456 с.

84. Методические указания по применению унифицированных биохимических методов исследования крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях. М. : ВАСХНИЛ, 1981 - 85 с.

85. Методы ветеринарно-клинической лабораторной диагностики: Справочник / И.П.Кондрахин, А.В.Архипов, В.И.Левченко и др. ; Под ред.И.П.Кондрахина. -М.: Колос, 2000.- 520 с.

86. Плохинский H.A. Биометрия. Изд-во Сибирского отделения АН СССР, Новосибирск, 1961.-362 с.

87. Малахов А.Г., Кармолиев Р.Х., Савойский А.Г. и др. Нормативы биохимических показателей обмена веществ в организме крупного рогатого скота. M.: MB А, 1986. 28 с.

88. Чумаченко В.Е., Высоцкий A.M., Сердюк H.A., Чумаченко В.В. Определение естественной резистентности и обмена веществ у сельскохозяйственных животных. Киев: Урожай, 1990. -136 с.

89. Интизоров М.М. Проблемы гнотобиологии и взаимоотношения ау-томикрофлоры и микроорганизма хозяина. Автореф. Дисс. Докт. Ветер. Наук, М., 1985.-С. 18-19.

90. Хасина Э.И, Сгребнева М.Н, Ермак И.М, Горбач В.И. Хитозан и неспецифическая резистентность организма // Вестник ДВО РАН, 2005. № 1. -С. 2-10.

91. Худякова Т.А, Крешков А.П. Кондуктометрический метод анализа. М.: Высшая школа, 1975. - С. 23-30.

92. Скляр A.M., Гамзазаде А.И, Роговина Л.З, Титкова Л.В, Павлова

93. C.А, Рогожин C.B., Слонимский Г.А. Исследование реологических свойствразбавленных и кмеренно концентрированных растворов хитозана. // Новое в реологии. Материалы XI Всесоюзного симпозиума по реологии. Суздаль, 1981.-С. 86.

94. Африканян Э.К. Энтомопатогенные бактерии и их значение Изд. Армянской ССР, 1973.- С.418.

95. Патент РФ № 2272072 С1,опублик. 26.08.2004 г. «Способ получения нуклеиновых кислот».

96. Грибанов О., Щербаков А., Перевозчикова И., Гусев А. Использование аэросила и фильтров GE/F для очистки фрагментов ДНК, ДНК плазмид и РНК//Биохимия, 1996.- Т.61.-С.10.

97. Патент РФ № 2091491 С1, опублик. 27.09.1997 «Способ получения нуклеиновых кислот из бактерий».

98. Патент РФ № 2295571 С2, опублик. 20.03.2007 «Способ получения препаративных количеств плазмидной ДНК из клеток рекомбинантных микроорганизмов»

99. Мазин A.A. и др. Методы молекулярной генетики и генной инженерии, Новосибирск: Наука, 1990.- С.9.

100. Патент СЩА № 6503738, МПК С 12 №5/00, А61 К35/00, опублик. 07.01.2003 г.

101. Патент США № 4962055, МПК С 12 №15/10, опублик. 09.10.1990 г.

102. Патент РФ № 219610 С12 № 15/10, С 12 Р 19/34, С 07 Н 21/04, G 01 Н 33/48.

103. Патент РФ № 2264410 С1, опублик. 20.11.2005 «Способ подготовки препарата ДНК из бактериальных клеток для постановки полимеразной цепной реакции»

104. Патент РФ № 2101354 С1, опублик. 10.01.1998 «Способ получения нуклеиновх кислот Bacillus anthracis»

105. Патент РФ 2005724 С1, опублик. 15.01.1994 «Способ производства натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты из животного сырья и установка для его осуществления».

106. Патент РФ № 2232768 С2 С07Н21/04

107. Патент РФ № 2122856 CI А61К35/60

108. Давидянц С.Б. Некоторые проблемы химии и биологической химии синтетических маланоидинов // Тезисы докладов Всесоюзного биохимического съезда, 1986. М.: Наука, 1986.- Т.2. - С. 80-81.

109. Александров С.А. Лекарство, которое едят // Химия и жизнь. 1989. -№12.-С. 63-66.

110. Терентьев В.А. Изучение возможности получения кислотного гид-ролизата из мелких беломорских мидий марикультуры // Новые белковые продукты на основе гидробионтов // Сборник научных трудов ВНИРО. -М.,1989. С. 150- 156.

111. Рехина Н.И., Беседина Т.В., Новикова М.В. Клинические испытания МИГИ-К ЛП (обзор) // Сборник научных трудов «Технология рыбных продуктов», 1997. М.: Издательство ВНИРО, 1997.- С. 93 - 99.

112. Малер Г., Кордес Ю. Основы быологической химии. М.:Мир, 1970. - 567 с.

113. Телегина Т.А., Павловская Т.Е.Разделение аминокислот и пептидов модифицированным методом лигандно-обменной хроматографии //Методы современной биохимии.-М.:Наука, 1975.-С.61-63.

114. Ленинджер А. Биохимия. Молекулярные основы структуры и функций клетки .- М.: Наука, 1975. С. 61-63.

115. Новикова М.В., Рехина Н.И., Шевцов В.К., Телегина Т.А. Биологически активные компоненты гидролизатов разного происхождения // Сборник научных трудов «Технология рыбных продуктов», 1997. М.: Издательство ВНИРО, 1997.-С. 100- 108.

116. Давидянц С.Б., Ведяшкин П.Ф. Основные пути развития структурной химии меланоидинов. Ставрополь.: СПТИ, 1985. - 15 с.

117. Ржавская Ф.М. Жиры рыб и морских млекопитающих. М.: Пищевая промышленность, 1976. - 470 с.

118. Кизеветтер И.В. Биохимия сырья водного происхождения.- М.: Пищевая промышленность, 1973.-С. 18-31.

119. Булатова И.В. Иммуномоделирующие свойства микроэлементов // ЭИ. Клиническая иммунология и аллергология.-1990. Вып.7.- С. 1 - 6.

120. Лаптев Г.Ю. T-RFLP новый биотехнологический метод для оценки микрофлоры рубца КРС /Лаптев Г.Ю. Кряжевских Л.АЛ Актуальные проблемы биологии в животноводстве: Матер. V Междун. науч. конф.- Боровск, 2010.-С.287-288.

121. Архипов A.A. Как обойтись без кормовых антибиотиков? / Архипов A.A.: мат. 1 Междун. Ветеринарного конгресса по птицеводству, М., 2005.-С. 232-235.

122. Данилевская Н.В. Выбор ветеринарных технологий в промышленном птицеводстве России в условиях глобализации рынков //Данилевская Н.В., Субботин A.B.// БИО. Журнал для специалистов птицевод, и животновод. хозяйств.-2006.-Сентябрь.-С. 10-12.

123. Перепелкин Н.В. Пробиотики эффективная альтернатива антибиотикам и стимуляторам роста животных / Перепелкин Н.В.// Ценовик.-2010ю-Январь.-С.45.

124. Данилевская Н.В. Фармакостимуляция продуктивности животных пробиотическими препаратами : автореф. дис. . д-ра веет наук / Данилевская Н.В.-М., 2007. -49 с.

125. Зинченко Е.В. Иммунобиотики в ветеринарной практике / Зинченко Е.В., Панин А.Н.- Пущино.-163 с.

126. Малик Н.И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: автореф. дис. . .д-ра биол. Наук/ Малик Н.И.- М. 2002.-42 с.

127. Панин А.Н. Пробиотики: теоретические и практические аспекты / Панин А.Н.// БИО: .Журнал для специалистов птицевод, и животновод, хо-зяйств.-2002.-№ 2 -С. 4-7.

128. Субботин В.В. Биотехнология пробиотиков ветеринарного назначения / Субботин В.В., Сидоров М.А.// Аграрн. Наука.-1998.-№3.-С.20-21.

129. Тараканов Б.В. Использование пробиотиков в животноводстве / Тараканов Б.В.- Калуга, 1998.-54 с.

130. Архипов A.B. Антиоксиданты в животноводстве /Архипов A.B.// Актуальные проблемы биологии в животноводстве: Матер. V Междун. науч. конф.- Боровск, 2010.-С. 129-131

131. Тихомиров В.В. Натуральные антиоксидантные комплексы в консервированных продуктах питания и перспективы использования: мат. Междун. Научно-практич. Конф- М.,2002.-С.29.

132. Волошин Д.В. Сравнение антиоксидантных свойств различных производных органического селена /Волошин Д.В. Заводник Л.Б. Шимкус А. .// Актуальные проблемы биологии в животноводстве: Матер. V Междун. науч. конф.- Боровск, 2010.-С.146-147.

133. Малик Е.В. Характеристика микробиотопа кишечника домашней и промышленной птицы /Малик Е.В., Панин А.Н., Малик Н.И., Сканчев А.И. //Сборник научных трудов ФГУ «ВГНКИ».-2006.-Т.67.- С.9-22.

134. Субботин В.В. Биотехнология пробиотика лактобифилола (бифаци-добактерина) и его лечебно-профилактическая эффективность: автореф. дис. . д-ра ветеринарных наук/ Субботин В.В.- М.,1999.-51 с.

135. Козлова З.Г. Количественная оценка антиоксидантной активности БАДов на основе автолизатов пивных дрожжей /Козлова З.Г., Харитонова A.A., Цепалов В.Ф. //Биотехнология: вода и пищевые продукты: мат. научного и практич. конгресса.-М.,2008.-С.107.

136. Лакин Г.Ф. Биометрия / Лакин Г.Ф. 3 изд., перераб. И дополн. -М.: Высш. Шк., 1980.-294 с.

137. Молодцов Н.В. Способ получения водорастворимого хитозана. Авторское свидетельство № 508212 кл.В37/08. Бюлл.№ 11. 25.03.76 г.

138. Пениче-Ковас К., Нието Х.М., Гарсия-Алонсо И., Феонандес Х.Р. Влияние некоторых параметров приготовления хитозана на его характеристики //Биоорганическая химия, 1984.-Т.10.-№ 9.-С. 1248-1252.

139. Рогожин C.B., Лозинский В.И., Вайнерман Е.С.,Кулакова В.К., Гам-зазаде А.И., Быкова В.М., Немцев C.B., Лобова В.И. Способ получения хитозана. Авторское свидетельство СССР № 1363831, 1986.

140. Нудьга Л.А. биоматериалы на основе хитина и хитозана из панцирь-содержащих отходов криля и пути их использования. М., 1992.-С. 40-44.

141. Плиско Е.А., Нудьга Л.А., Данилов С.Н. Хитин и его химические превращения//Успехи химии, 1977.-Т.ХЬУЬ.-вып. 8.-С.1470-1487.

142. Ванлербеш Г., Себаг Э. Способ получения производных хитина. Патент № 508212 кл.В37/08. Бюлл.№ 11. 25.03.76 г.

143. Мрачковская Т.А., Гамзазаде А.И., Рогожин C.B. Способ получения карбоксилсодержащих производных хитозана. Авторское свидетельство № 802290, кл. С 08 В37/08. Бюлл. № 5. 07.02.81.

144. Роговина З.С., Вихорева Г.А., Горбачева H.H., Зеленецкий С.Н., Акопова Т.А. Способ получения карбоксилсодержащих производных хитозана. Патент РФ №2100373, кл.С 08 В 37/08. Бюлл.№ 36. 27.12.97.

145. Роговина З.С., Акопова Т.А., Зеленецкий С.Н. Изучение экструзион-ного размола хитозана. Производство и применение хитина и хитозана. Тезисы докладов 4-й Всерос. Конф. М.: изд. ВНИРО 25.04.1995.-С.27

146. Бржески М.М. Получение хитина/хитозана из панцирей антарктического криля в промышленном масштабе // Матер. Междун. Конф по хитину и хитозану. Саппоро, Япония, 1982. Перевод КЕ-57232-Киев, 1983.

147. Салям Омер А. Разработка технологии получения хитина и хитозана из сепиона каракатицы. Автореф. дисс. На соиск. Уч. Степени канд. Техн. Наук -М, 1995.

148. Нудьга J1.M, Плиско И.А, Данилов С.Н. Получение хитозана и изучение его фракционного состава // Журнал органической химии, 1971.-T.XLI-С.111.

149. Грачева И.М, Кривова А.Ю. Технология ферментных препаратов, .2000.- М, Изд. «Элевар», 2000.- 512 с.

150. Албулов А.И, Самуйленко А .Я, Нифантьев Н.Э. и др. Применение хитозана в ветеринарии для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных: Матер пятой Междун. конф.- М.:ВНИРО, 1999.-С.115-117.

151. Мерзлаков С.В, Топурия Л.Ю, Кленов В.А. Применение хитозана для повышения воспроизводительной способности коров //Известия ОГАУ .2006.-№3 .-С.71 -73.

152. Таирова А.Р, Миргалимов Р.Л. Влияние хитинсодержащих препаратов на рост и развитие бычков в молочный период выращивания /Информационный листок//Челябинский ЦНТИ.-2008.-№ 83.-001-08.

153. Лазарева Е.В. Обеспечение экологической безопасности продуктов молочного скотоводства препаратами хитина/хитозана /Е.В.Лазарева, Р.Л.Миргалимов, А.Р.Таирова, Г.В.Мещерякова /Информационный листок //Челябинский ЦНТИ.-2008.-№ 83.-002-08.

154. Миргалимов P.A. Использование хитинсодержащих препаратов при выращивании бычков черно-пестрой породы /P.A. Миргалимов, А.Р.Таирова //Кормление сель скохозяйственных животных и кормопроизводство 2008.-№11.-С.67-76.

155. Таирова А.Р. Влияние хитиновых биополимеров на весовой рост бычков в молочный период выращивания / А.Р.Таирова, Е.В.Сенькевич, Р.Л.Мургалимов /Ученые записки КГАВМ-Казань.-2011.-С.211-216.

156. Таирова А.Р. Мясная продуктивность бычков при введении в рацион хитозансодержащих добавок / А.Р.Таирова, Е.В.Сенькевич, Р.Л.Мургалимов, Р.Р.Фаткуллин /Успехи соврем. Естествознания, Москва 2011.-№ 6.-С.31-33.

157. Албулов А.И. Различные виды хитозана для ветеринарии и животно-водств /А.И.Албулов, А.Я.Самуйленко, С.М.Шинкарев //Аграрная Россия.-2004.-№ 5.-С.8-12.

158. Албулов А.И. Некоторые аспекты промышленного выпуска и применения хитозана иего производных /А.И.Албулов, А.Я.Самуйленко, В.П.Варламов //Новые достижения в исследовании хитина и хитозана /ВНИРО.-2001 .-С.9-12.

159. Ковальчикова, М. Адаптация и стресс при содержании и разведении сельскохозяйственных животных / М. Ковальчикова, К.Ковальчик.-М.:Колос, 1978.-270 с.

160. Албулов А.И. Влияние скармливания хитозана и фитохитодеза на резистентность организма телят / А.И.Албулов, Е.В.Крапивина, A.B.Борода // Достижения науки и практики АПК.-2004.-№3.-С.24-27.

161. Горлов И. Новые антистрессовые препараты при выращивании и откорме бычков на мясо / И.Горлов. И.Осадченко, В.Ранделина и др.//Молочное и мясное скотоводство.-2008.-№ 5.-С.11-12.

162. Комаров, Б.А. Почему хитозан полезен человеку / Комаров Б.А.//Новые достижения в исследовании хитина и хитозана /ВНИРО: Материалы 9-й междун. конф. /ВНИРО.-2008.-С.187-195.

163. Немцев C.B., Зуева О.Ю.Хисматуллин М.Р., Албулов А.И., Варламов В.П. Получение хитина и хитозана из медоносных пчел //Прикладная биохимия и микробиология-2004.-Т.40.-№ 1.-С.42-46.

164. Салтыкова Е.С. Поскряков A.B., Николенка А.Г., Хайруллин P.M. Иммуномодулирующее действие хитоолигосахаридов на медоносную пчелу Apis mellifera L. //Эволюционная биохимия и физиология-2000.-№ 5.-С.563-568.

165. Фомичев Ю.П., Донник И.М., Федоров Ю.Н. и др. Эффективность применения энтеросорбентов при выращивании молодняка крупного рогатого скота в техногенных зонах России //Аграрная Россия.-2002.-№5.-С.45-48.

166. Фомичев Ю.П., Пучков Ю.Н. Влияние хитозана на выведение ра-дионуклеидов из организма и рост телят // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана. Материалы 6 международной конференции. -2001.-М.:ВНИРО -С.375-376.

167. Данилевич В.Н., Гришин Е.В. Новый подход для выделения геномной ДНК из дрожжей и грибов: получение ДНК-содержащих клеточных оболочек и их прямое использование в ПЦР //Ж. «Биоорганическая химия».-2002.-Т.28.-№ 2.-С.156-167.

168. Зиновьева C.B., Васюкова Н.И., Ильинская Л.И., Варламов В.П., Озерецковская О.Л., Сонин М.Д. Влияние хитозана на взаимоотношение в системе растение паразитические нематоды //Докл. Академии наук- М, 1999.-Е.367.-№6.-С.845-848.

169. Пищевые пленки из хитозана /Все о крабе// Северная Пацифика. Мировой океан.- Тихоокеанский вестник. 2004.21-22 (122-123).

170. Самуйленко А.Я., Албулов А.И., Еремец В.И., Ершов П.Б. Хитозан в составе биологически активных добавок к пище // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 7-й Междун. конф.Санкт-Петербург-Репино, 2003 .-С.271 -272.

171. Быканова О.Н., Максимова С.Н., Тарасенко Г.А. Перспективы использования хитозана в качестве Б АД к пище // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 8-й Междун. конф., Казань. 2006.-С.275-276.

172. Золднерс Ю., Киселева Т., Кайминыи И. Хитозан в кисломолочных продуктах // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 7-й Междун. конф.Санкт-Петербург-Репино, 2003.-С.243-245.

173. Шабрукова Н.В., Гамаюрова B.C. Хитозанглюкановые комплексы как сорбенты сыворотчных белков // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 10-й Междун. конф. Нижний Новгород, 2010.-С.283-284.

174. Шабрукова Н.В., Гамаюрова B.C. Выделение белков молочной сыворотки хитозанглюкановыми комплексами //Бутлеровские сообщения, 2008 г.-Т.133.-№3.-С.54-61.

175. Евдокимов И.А., Воробьев Е.В., Золотарева М.С. Фракционирование белков молочного сырья с использованием коллоидного раствора хитозана //

176. Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 8-й Меж-дун. конф., Казань. 2006.-С.287.

177. Куприна Е.Э„ Козлова И.Ю., Тимофеева К.Г. Современные тенденции в способах получения и применения хитина и хитозана: Обзорн. Ин-форм.//Сер.«Обработка рыбы и морепродуктов».-М.:ВНИЭРХ, 1999.-Вып. III (1).-60 с.

178. Албулов А.И., Фролова М.А., Буханцев О.В., Быкова В.М. и др. Хи-тозансодержащие биологически активные добавки к пище в рационализации питания населения //Рыбпром 20Ю.-№2.- С.25-28.

179. Ежова Е.А., Быкова В.М., Немцев С.М., Воротников Б.Ю. Расширение спектра использования БАД на основе хитозана //Рыбпром.-2007.-№1.-С.37-39.

180. Гафуров Ю.М., Мирошников Е.Г., Рассказов В.А. Пищевая профилактическая добавка «Витаген» // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 6-й Междун. конф.Москва-Щелково, 2001.-М.: Изд-во ВНИРО, 2001.-С.153-155.

181. Александрова Е.А., Суворов A.B., Антипенко Е.А. и др. Эффективность препарата «Олигохит» при вертеброгенной дорсалгии // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 7-й Междун. конф.Санкт-Петербург-Репино, 2003.-С. 131-135.

182. Кайминын И.Ф., Киселева Т.Б., Клявиныи З.В., Озолиня Г.А. Получение диетической пищевой добавки на основе хитозана // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 6-й Междун. конф.Москва-Щелково, 2001.-М.: Изд-во ВНИРО, 2001.-С. 175.

183. Патент № 2188829 Россия. Способ получения низкомолекулярного хитозана для противолучевых препаратов / Варламов В.П., Ильина A.B., Банникова Г.Е., Немцев C.B., Ильин Л.А., Чертков К.С., Андрианова И.Е., Пла-нонов Ю.В., Скрябин К.Г. 10.09.2002.

184. Тюпоненко Г.И., Скорикова Е.Е., Зезин А.Б. Электрофорез хитозана при лечении заболеваний пародонта // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 6-й Междун. конф.Москва-Щелково, 2001.-М.: Изд-во ВНИРО, 2001.-С.241-248.

185. Майгуров A.A., Солнцев A.C., Большаков И.Н., Орешкин И.В. Применение хитозана в лечении воспалительных заболеваний ротовой полости // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 8-й Междун. конф., Казань. 2006.-С.224-227.

186. Жоголев К.Д.,Жоголев С.Д., Цыган В.Н., Никитин В.Ю., Щедрина H.A., Нудьга Л.А. Изучение противовирусного действия препаратов хитозана // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 8-й Междун. конф., Казань. 2006.-С. 198-200.

187. Быканова О.Н., Максимова С.Н., Тарасенко Г. А. Медико-биологический эффект хитозана в составе пищевой среды // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 9-й Междун. конф.Ставрополь, 2008.-С. 147-149.

188. Рашидова С.Ш., Бардин C.B., Воропаева Н.Л., Рубан И.Н. наночасти-цы на основе хитозана как средства доставки лекарств // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 7-й Междун. конф.Санкт-Петербург-Репино, 2003 .-С. 190-192.

189. Кручиньска И., Бласиньска А., Комиссаршук А. Текстильные материалы из дибутирилхитина и их свойства // Соврем. Перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. 7-й Междун. конф. Санкт-Петербург-Репино, 2003.-С.382-383.

190. Баранова В.Н., Нудьга J1.A. Модифицированный хитозан в производстве бумаги //Бумажная промышленность, 1976.- №7.- С.9-10.

191. Баранова В.Н., Плиско Е.А., Нудьга JI.A. Применение хитозана в производстве бумаги // Целлюлоза, бумага, картон, 1978.- №6.- С.8-9.

192. Беленькая Н.Г., Алексеева Т.В., Плиско Е.А., Нудьга J1.A. Влияние хитозана на свойства бумаги различной композиции // Химия древесины, 1979.-№ 1-С. 109-114.

193. Ганичева С.И., Быстрова Е.С., Лоцманова Е.М. Влияние условий термического старения на молекулярные характеристики целлюлозы и механические свойства бумаги на ее основе // Журнал прикладной химии. 2004.-Т.77.- Вып. 1.- С.1186-1191.

194. Артюхов И.Л., Шокун Ю.Г.Применение мембранного процесса для получения ферментного препарата из рыбного сырья //Научн. труды Даль-рыбвтуза Владивосток, 1999.-Вып.2.-С.120-126.

195. Федоренко Б.Н., Трефилов Э.М., Згуревец H.A. Снижение потерь фермента от инактивации в промышленной ультрафильтрации//Тез. докл. Всес. конф. «Биотехнология 86», М.-1986.-С. 99-100.

196. Величко A.B. Методы получения и свойства трипсина сухого стерильного квалификации «для культур клеток»: дис. канд. биол. наук:03.00.06. -Москва.1996.-164 с.

197. Рудометова Н.В. Сорбционные методы выделения и очистки панкреатических ферментов: рибонуклеазы, дезоксирибонуклеазы, трипсина и химотрипсина: дис. канд.хим. наук С.-Петербург.-1994.

198. Попова В.М. Усовершенствование технологии и изучение свойств трипсина сухого для вирусологических целей: дис.канд. биол. наук Москва.» 1999.

199. Кислицин Ю.А. Выделение и структурно-функциональная характеристика трипсина камчатского краба: дис канд. Хим. Наук Москва.-2007.

200. Богданов В.Д., Сафронова Т.М. Структурообразователи и рыбные композиции. М.: ВНИРО, 1993.-177 с.

201. Гущина Э.В. Показатели неспецифической защиты поросят при введении иммуномодуляторов полисахаридной и пептидо-полисахаридной природы: дисс. канд ветер, наук Л.-1991.

202. Взнуздаева O.A., Зверева Г.А, Молодцов Н.В. Влияние хитозана на Jg М и JgG антителообразующие клетки у мышей//Иммунология.-1984.-№1.-С.53-55.

203. Дрозд H.H., Шер А.И, Макаров В.А. и др. Связь физико-химической структуры и антикоагулянтных эффектов у производных полисульфатиро-ванного хитозана //Экспериментальная и клиническая фармакология.-1994.-Т.57.-№ 4.- С.42-45.

204. Дубинская A.M., Доброворский А.Е. применение хитина и его производных в фармации: Обзор //Химико-фармацевтический журнал.- 1989.-Т.23.- № 5.- С.623-628.

205. Жоголев К.Д, Никитин В.Ю. Экспериментально-лабораторное изучение иммуномодулирующих свойств препаратов хитина и хитозана //Иммунология,-1998.-№6.-С.53-54.

206. Жоголев К.Д, Никитин В.Ю, Буланьков Ю.И, Десятова A.B. Влияние хитозана на миграцию, пролиферацию и дифференцировку стволовых кроветворных клеток //Материалы I съезда иммунологов России.- Новосибирск, 1992.-С.164-165.

207. Жоголев К.Д, Щедрина H.A., Никитин В.Ю, Ващенко В.И. Имму-нокоррегирующее действие препарата хитозана при бактериальной и гриппозной инфекции //Иммунокоррекция при инфекционной патологии.-Л.Д988.-С.32.

208. Жоголев К.Д, Щедрина H.A., Никитин В.Ю. Эффективность иммунологического адъюванта хитозана при бактериальной септической инфекции // IX научная конференция молодых ученых Академии. Тезисы докладов.- Л, Издательство ЛМедА им. С.М.Кирова.-1986.-С.44-45.

209. Петров Р.В, Хаитов P.M., Манько В.М. Контроль и регуляция иммунного ответа.-М.;Медицина-1981.-312 с.

210. Коваль Ю.Ф, Жоголев К.Д, Никитин В.Ю, Буланьков Ю.И, Десятова A.B. Изучение биологической активности препаратов хитина и хитозана //Материалы 1 съезда иммунологов России (23-25 июня 1992 г.).-Новосибирск.-1992.-С .219.

211. Насибов С.М, Большаков И.Н, Кулаев Л.В. Антибактериальная активность сорбентов на основе хитозана //Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодержащих отходов криля и пути их исполь-зования.-М.: ВНИРО-1992.-С.63-74.

212. Peter M.G. Advances in Chitin science, Volume IV, EUCHIS' 99 The European Chitin Society, Potsdam, 2000, 650 p.

213. Muzzarelli R.A.A., Peter M.G. Chitin Handbook. European Chitin Society, 1977, 528 p.

214. Sandford Paul A. Commercial sources of chitin and chitosan and their uthilization // Advances in Chitin Science. Volume V " EUCHIS-2002, P. 3542.

215. Hiroaki Sato, Mizutani Schi ichi, Tsuge Skin Ohtni. Determination of the degree of acetilation of chitin/ chitosam by pyrolisis gas chromatography in the presence of oxalic acid // Analitical Chemistry,- 1998, - P. 70.

216. Peniston O.P., Yohson E.I. Process of the manufacture of chitosan. US patent 4, 195, 175. 1980.

217. Mima S., Miya M., Iwamuto R., Yashikawa S. Yighly deacetilated and its properties.// Y. Appl. Polim. Sei. Technol.- 1983. 12: 187.

218. Muzzarelli R.A.A. Chitin. Oxford: Pergamon Press, 1977. P. 309.

219. Takada M., Tamida T // Suisan Daigakku Kenkyu Hokoku- 1969. P. 143 - 150.309/ Chaidedgumjorn et al. Effect of (13) and (14) - linkages of fully sulfated polysacchariles on their anticoagulant activity // Carbohydrate Research.-2002. - 2. ^ P.925-933.

220. Wall D et al. Characterisation of the anticoagulant properties of a range of structurally diverse sulfated oligosaccharides // Thrombosis Research.- 2001.337.- P. 325-335.

221. Gamzazade A., Sklyar A., Nasibov S., Sushkov J., Sushkov A., Knirel Yu. Structural features of sulfated chitosans carbohydrate polymers, 1997. 34. P. 113-116.

222. Djameela S.R., Yayacrishnan A. Glutaraldehide cross-linked chitosan microsphereas a long acting biodegradable drug delivery vehicle : studies on the in vitro degradation of the microsphereaus rat muscle // Biomaterials.- 1995/ V. 16. -P. 769-775.

223. Richards F.M., Knowles J. Glutaraldehide as cross-linking reagent // J. Mol. Biol.- 1968.-V.37.-P. 231-233.

224. Sashiwa H., Aiba S. Chemically modified chitin and chitosan as biomaterials // Prog. Polim. Sci.-2004.- V.29.-P.887-908.

225. Kurita K. Chitin and chitosan: functional biopolimers from marine Crus-taceams // Marine Biotechnol.- 2006. V.8. - P. 203-226.

226. Varma A.J., Deshapande S.V., Kennedy J.F. Metal complexation by chitosan and its derivatives : a review // Carbohydr. Polym.- 2004.- V.55.- P. 77-93.

227. Kumar M.N.V. Ravi, Muzzarelli R.A.A., Muzzarelli C., Sashiva H., Domb A.J. Chitosan chemistry and Pharmaceutical Perspectives // Chem. Rev.-2004.- V.100.-P. 6017-6084.

228. Tokura S., Nishi N., Tsutsumu A., Somorin O. Studios of chitin. VIII, Some properties of water soluble chitin derivatives // Polym. J.- 1983.- V/15/- P. 485-489.

229. Pestov A.V., Skorik Y.A., Kogan G., Yatluk Y.G. Alkilation of chitosan by (3-halopropionic acids in the presence of various acceptors //J. Appl. Polym sci.-2008.- V. 108.- P. 119-127.

230. Muzzarelli R.A.A., Muzzarelli C., Chitosan chemistry: relevance to the biomedical science // Adv. Polym Sci.- 2005.- V.186.- P. 151-209.

231. Sinba V.R., Singla A.K., Wadbawan S., Kausbik R.,Kumria R., Bansal K., Dbavan S. Chitosan microspheresas a potential carrier for drugs // Int. J. Pharm.- 2004.-V. 274,- P. 1-33.

232. Kumar M.N.V. A review of chitin and chitosan application // Research Functional Polim.- 2000.- V. 46.- P. 1-27.

233. Payne G.F., Ragbavan S.R. Chitosan: a soft interconnected for hierarchical assembly of nano-scale components // Soft Matter.- 2007.-V/3/- P. 497-652.

234. Yi H, Wu L.-Q., Bentley W.E., Ybodssi R., Rubloff G.W., Culver J.K, Payne G/F. Biofabrication with chitosan // Biomacromolecules.- 2005.-V.6.-P. 2881-2894.

235. Berger J., Reist M., Mayer J.M., Felt O., Peppos N.A., Gurny R. Structure and interaction in covalently and ionically crosslinked chitosan hydrogels for biomedical applications // Eur. J. Pharm. Biopharm.-2004.-V.57.-P. 19-34.

236. Berger J., Reist M., Mayer J.M., Felt O., Gurny R. Structure and interaction in chitosan hydrogels formed by complexation or aggregation for biomedical applications // Eur. J. Pharm. Biopharm.-2004.-V.57.-P.35-52.

237. Park Ro-Dog, Kyu-Jong. Jo., You- Jong. Jo., Yo-Lan Jin., Kil-Jong Kim, Jae-Han Shim, Yong-Woong Kim. Variation of antifungal activities of chitosans on plant pathogens. // J/ Microbiol. Biotechnol. 2001. - V. 12. - N. 1. -P.84-88.

238. Radhika Desikan, Socheila A.-H.- Mackerness, John T.Hancock, Steven J. Neill. Regulation of the Arabidopsis Transcriptome by Oxidative Stress // Plant Physiol.- 2001.-V. 127.-P. 159-172.

239. Rhoades J., Roller S. Antimicrobial actions of degraded and native chitosan against spoilage organisms in laboratory media and foods // Appl. Envirom. Microbiol. 2000.- 66(1).- P.80-86.

240. Uchida Y. Antibacterial activity by chitin and chitosan // Food Chemical. -1988.-V.2. -P.22-29.

241. Tsai G.J., Su H.Y. Antibacterial activity of shrimp chitosan against E.Coli // J/Food. Prot. 1999.- V/ 62. - P.239-243.

242. Leuba J.I., Stassel P. Chitosan and others amines: Antifungal activity and interaction with biological membranes // Chitin in Nature and Technology / Muzzarelli R., Jeuniaux C., Goodey G. (eds). Ylenum Press, New York/ -1986.- P. 215221/

243. Tsai G.J/, Su W.H., Chen H.C., Pan C.L. Antimicrobial activity of shrimp chitin and chitosan from different treatments //Fisheries Science. 2002.- V. 68.-P. 170-177.

244. Ravi Kumar M.N.V., Muzzarelli R.A.A., Muzzarelli C., Sashiva H., Damb A.J. Chitosan chemistry and pharmacological perspectives // Chen. Rev.-2004.-V. 104,-P. 6017-6084.

245. Ravi Kumar M.N.V. A review chitin and chitosan applications // Reactive and functional Polymers.- 2000.- V. 46.- P. 1-27.

246. Kato Y Application of chitin and chitosan derivatives in the pharmaceutical fields / Y. Kato< H Onishi, Y Machida // Curr. Pharm. Biotechnol. 2003.-V. 4.-N. 5.-P. 303-309.

247. Fujiwara M., Inhibitory effect of water-soluble chitosan on growth of Streptococcus mutans / M. Fujiwara, Y. Hayashi, N. Ohara // New Microbiol. -2004.-V. 27. -N. 1 P. 83-86.

248. Kim K.W., Thomas R.L., Lee C. et al. Antimicrobial activity of nature chitosan and O-carboxymethylated chitosan // J/ Food. Prot. 2003. - V. 66. - N. 8.-P. 1495-1498.

249. Griesbach U., Panzer C., Wachter R. // Cosmetics & Toiletries. 1999.- V. 114.-P. 81-83.

250. Wachter R, Sternberg E. // Adv. Chitin Sci.- 1996.-V.1.- P. 381.

251. Ueno K., Yamaguchi Т., Sakairi N. et al. // Adv. Chitin Sci.- 1997.-V.2.-P. 156.

252. Yamaguchi T.,Kishimoto S. Wound Realing effect of chitin " uigical dressing" // Trans. Soc. Biomat. 1988.- N. 1.- P. 216-222.

253. Babak V.G., Rinaudo M., Desbrinres J., Vikhoreva G.A., Michalski M.C. The effect of alkyl chain length of a polysoap on the surface activity of its complexes with cationic surfactants // Mendeleev Commun. 1977.- P. 149-151.

254. Ormrod D.J., Holmes C.C., Miller Dietary chitosan inhibits hypercholes-terolanemia and atherogenesis in the apolipoprotein E-deficient mouse model of atherosclerosis // Atherosclerosis. 1998.- V. 138.- N. 2. P. 329-334.

255. Peluso G., Petillo O., Ranieri M et al. Chitosan -mediated stimulation of macrophage function//Biomaterials. 1994. -V. 15. -N. 15. - P. 1215-1220.

256. Takeuchi H., Yamamoto H., Niwa Hino, Kawashimo Y. Enteral absorption of insulin in rats from mucoadhesivechitosan-coated liposomes // Pharm. Res. /- 1996.-V. 13.-N. 6.-P.896-901.

257. Muzzarelli R.A.A. Chitosan-glucan complex // Pat. Ger. 2923802. -1979.

258. Sato M., Onishi H., Takahara J. et al. In vivo drug and antitumor characteristics of watersoluble conjugated of mitomycin C with glicolchitosan and N-succinyl-chitosan // Biol. Pharm. 1996.- V. 19. - N. 9.

259. Muzzarelli R.A.A. Chitin Oxord. N. Y., Toronto, Sydney ,Paris, Frankfurt. - 1977.- Pergamon Press. - 309 p.357.0uchi T., Banda T. Fixation of 5-fluorouracil to chitosan and its antitumor activity // Trans.Soc. Biomal. 1988. - N. 1. - P. 232-236.

260. Murata J., Saiki J., Matsuno K. Inhibition of tumor cells arrest in lungs by antimetastasic chitin heparinoid // Jpn. J/ Cancer Res. 1990.- V. 81. N. 5, - P. 506-513.

261. Nikitin V.Yu., Zhogolev K.D., Bulankov Yu.J., Nudga L.A. Immunological activity of chitosan and its derivatives // International Journal immunore-abilitation. 1994.- N.l. - P. 254-255.

262. Nishimura K., Nishimura S., Nishi N. Immunological activity of chitin and its derivatives // Vaccine. 1984. - V. 2. - N. 1. - P. 93-99.

263. Suh J/K/, Matthew H.W. 2000.

264. Cui W., Kim D.N., Imamura M., Hyon S.H., Inoue K. Tissue-engeneered pancreatic islets: culturing rat islets in the chitosan sponge // Cell Transplant. -2001. V. 10. N. 4-5. - P. 499-502.

265. Bodek K.H. Evaluation of properties microcrystalline chitosan as a drug currier. Part I. In vitro release of diclofenac from microcrystalline chitosan hy-drogel // Acta Pol. Pharm. 2000. - V. 57. -N. 6. - P. 431-440.

266. Bodek K.H. Evaluation of microcrystalline chitosan properties as a drug currier. Part II. The influence of microcrystalline chitosan on release rate of keto-profen //Acta Pol. Pharm.-2001.-V. 58.-N. 3.-P. 185-194.

267. Kas H.S. Chitosan; properties, preparations and application to microparticules system // J/ Microencapsular. 1997. - V. 14. - N. 6. P. 689-711.

268. Vila A., Sunchez A., Janes K., Behrens J., Kissel T., Vila J.L., Alonso M.J. Low molecular weight chitosan nanoparticules an new curriers for nasal vaccine delivery in mice // Eur. J. Pharm. Biopharm. 2004. - V. 57. - N. 1. - P. 123131.

269. Tang Z.X., Qian J.Q., Shi L.E. Preparation of chitosan nanoparticules as currier for immobilized enzyme // Appl. Biochem. Biothechnol. 2007. - V. 136. -N/. 1. - P.77-96.

270. Bhattarai N., Ramay H.R., Chou S.H., Zhang M. Chitosan and lactic acid-grafted chitosan nanoparticules as curriers for prolonged drug delivery // Int. J. Nanomedicine. 2006. - V. l.-N. 2.-P. 181-187.

271. Karber G. // Arch. Txp. Path. Pharmac. 1931. - V. 162. - N. 4. - P.480.

272. Duez D.G., Dunn J.A., Thrope S.R., Bailis K.E., Luono T.J., McCance D.R., Baynes J.W. Accomulation of Milliard reaction products in skin collagen in diabetes and adding // J/ Clin. Invest. 1993.-91 (6). P. 2463-2469.

273. Brownlee M. Advanced protein glucosylation in diabeten and aging // Ann. Rev. Med. 1995. - V. 46. - P. 223-234.

274. Muzzarelli R.A.A. Chitin. Oxord: Pergamon Press. - 1977. - 309 p.

275. Gadnaire D., Saint-Germain D., Vineedon M. NMR studies of chitin and chitin derivatives // Micromol. Chem. - 1982. - V. 183. - N. 3. - P. 593-601.

276. Shigeno J., Kondo K., Takemoto K. Radiation- induced graft polymerization of sturene onto chitin and chitosan // J. Micromol. Sci. Chem. 1982. - V. A17.-N. 4.- P.571-583.

277. Mina S., Miya M., Jwamoto R. Highly deacetilated chitosan and its properties // J. Appl. Polim. Sci. 1983. - V. 28. - N. 6. - P. 1909-1917.

278. Zugenmeier P., Herbt W., Lieser G. Electronen-besch-leunigungs-intersuchungen an polymerkristallen des (3 -chitins // Colloid. And Polim. Sci. -1981. V. 259. - N. 4. - P. 472-473.

279. Bough W.A., Salter W.L., Wu A.C.M. Chemical composition, viscosity and molecular-weight distribution of chitosan products // Biotechnol. And bioeng. 1978,- V. 20.-N. 12.-P. 1931-1945.

280. Mattai J., Hayes E. Characterization of chitosan by pyrolyses mass-spectrometry // J/ Anal. Appl. Polym. Sci. 1982. - V. 27. - N. 4 - P. 327-334.

281. Tolaimate A., Desbrie' res J., Rhazi M., Alagui A., Vincendon M., Vot-tero P On the influence of deacetylation process on the physicochemical characteristics of chitosan from squid chitin // Polimer. 2001. - V.41.-N.7.-P. 24632469.

282. Zhang M., Haga A., Seciguchi H., Hirano S. Structure of insect chitin isolated from beetle larva cuticle and silkworm ( Bombyx mori) pupa exuvia // Int. J. Biological Macromolecules 2000. -V. 27. -N. 1. - P. 99-105.

283. Chang K.L.B., Tsai Q., Lee J., Fu W.-R. Heterogeneus N-deacetylation of chitin in alkalint solution // Cfrbohydrate Research 1997. - V. 303. - N. 3. - P. 327-332.

284. Batista L., Roberts G.A.F. // Macromol. Chem. 1990. - V. 191. P 429.

285. Domard A, Rinaudo M. // Int. J. Biological Macromolecules 1983. - V. 5.-P. 49.

286. Lusena C.V, Rose R.C. // J. Fish Res. Board Can. 1953. - V. 10. - P. 521-525.

287. Mina S, Miya M, Jwamoto R, Yoshikara S. // In chitin and chitosan. Ed. S. Hirano, S. Tokura. The Japaness Societe of Chitin and Chitosan 1982. P. 21-25. // In: Chitin handbook / Ed. R.A.A. Muzzarelli , M.g. Peter. Atec. Italy -1997.-P. 475-489.

288. No H.K, Meyers S.R. Preparation of chitin and chitosan // In: Chitin handbook / Ed. R.A.A. Muzzarelli, M.g. Peter. Atec. Italy 1997. - P. 475-489.

289. Patent 04195175 USA. Method of chitosan obtaining / Peniston Q.P, Johnson E.L.- 1980.

290. Etinno J, Reverdy M.E, Wouren V. Etude bacteriologique de cent, vingt-cing tndjcarditis infectibuses a streptocoque // Sem. Hop. Paris. - 1983. -V. 59.-N4.-P. 240-243.

291. Gamzazade A.I., Shlimak V.M, Sklar AM/, Shticova E.V, Pavlova S.A, Rogojin S.V.// Acta Polimerica. 1985. V.36. - N.8. - P. 420.

292. Leonil J, Molle D/ Study of triptic hydrolysis of |3-casein by HPLC // Preparation of peptides with biological activities. J. Dairy Res.- 1989.-Vol. 56.- 3.-P.552-554.

293. Etber Lipids. Biochemical and Biomedical aspects //Ed. Mangold M. -New York: Academic Press Inc., 1983.-275 p.

294. Folch F, Less M, Sloane-Stanley G.H. A simple method for the isolation and purification of total lipids animal tissues // J. Biol. Chem.-1957.-Vol.226.-P. 497 507.

295. Barsotelli E, Berra B. Acidi grassi co-3 prevensione della trombosi e dell ateroaclerosi. Valutacione critica dei dati della literature// Riv. Ital. sostanze.-1994.-Vol. 71.-N.1.-P.11-15.

296. Monnier V. Workshop on amino-carbonil reaction in vitro and in vivo. Maillard reaction // Maillard React. Food and Nutrit. Symp. 183 rd Meet. Americ Chem. Soc, Las Vegas, March 28 Apr. 2, 1982, Washington D.C.: 1983.- P.575-578.

297. Redleman J. The influence of Cu in the Maillard reaction // Carbohydr. Res.- 1990.-Vol.201.-N2.-P. 311-326.

298. Hunter J.O. A review of the role of the gut microflora in irriatable bowel syndrome and the effect of probiotic / Hunter J.O., Madden J.A. // Br. J. Nutr.-2002.-Vol. 88 (suppl. IV).-P. 67-72.

299. Jiraphocakul S. Influence of dried B. subtilis cultura and antibiotics on performance and intenstinal microflora in turkeys / Jiraphocakul S.//Chin. J. Immunol. Cell Biol.-2000.-N 78.- P. 80-84.

300. Maruta Kiyoshi/ Probiotics or antibiotics /.Maruta Kiyoshi// World Poultry.-1999.-N 3.-P. 1 12-127k>

301. Berg R.D. Probiotics, prebiotics , or conbiotics //Berg R.D.// Trends Microbiol.-1 998.-V0I.6/-P. 89-92.

302. Freter R. Factors effecting on the colonization of the gut by Lactobacilli and other bacteria / Freter R., De Macias M.E. // In: lid Herborn University Seminar Monograph. N 8. Probiotics of use in Opportunistic Infections.-1995.-P.256-420.

303. Gibson G.R. Dietary modulation on the human colonic microbiota: Introducing the concept of prebiotics / Gibson G.R., Robefroid M.B. // J. Nutr.-1995.-Vol.25.-N 6.-P. 1401-1412.

304. Collins M.D. Probiotocs, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut / Collins M.D. //Am.J.Clin.-1999.-N 9.-P.1052-1057.

305. Gissen A.S. Off probiotocs, prebiotics, and synbiotics / Gissen A.S. //ISS VRPS Inc.Vit. Res.Prod. Newsletters.-USA, 1995.-P. 111-117.

306. Roberfroid M.B. Prebiotics and probiotics: are they functional foods ?/ Roberfroid M.B. //Am. J. ClinNutr.-2000.-Vol.71/-N6.-P/1682-1687.

307. Babak V.G., Rinaudo M., Desrimbres J., Vikhoreva G.A., Michalski M.C/ The effect of alkyl chais ltngth of a polysoap on the surface activity of its complexes with cationic surfactants. Mendeleew commun. 1997.-P. 149-151/

308. Kim Y., Min D.S. Wound covering materials from polyelectrolyte complexes of chitosan with sulfomated chitosan // Trans. Soc. Biomat.-1988.-Nl.-P.558-562.

309. Watanabe K., Saiki I., Uraki Y., Tocura S. 6.0-carboxymethylchitin (CM-chitin) as drug carrier / Chem. Pharm. Bull. )Tokyo).-1990.-Vol.38.-N 2,- P.506-509.

310. Sosa M., Fazely F., Koch J.A. et al. N-carboxymethlchitosan-N,0-sulfate as an anti-HIV-1 agent// Biochem. Biophys. Res. Commun. -1991.-Vol. 174.- N 2.-P 489-495.

311. Domard A., Rinaudo M., Terrasin C. Manufacture of kwaternization chitosan. PF 33.02.402.-1986.

312. Kameyama H., Sekiguchi T. Manufacture of water-soluble chitosan. JP. 02.22.301.,1990.

313. Sagar A., Hamlyn P., Walas D. Nonwoven fabric. Pat. GB N 2165865, 1986.

314. Masci M.S., Randall V.G. Pat. US N 4125708, 1979.

315. Mina S., Yoshikawa S., Miya M. Pat. Japan N 53 130870, 1975.

316. Etsuko G. Manufacture of chitosan. Pat. Japan, N536891, 1993

317. Belamie E., Giraud-Guille M., Domard A. Microscopic studies of chitosan in condensed phases. Ist International conference of the European chitin society. Abstracts book. Brest-France/ September 11-13 1995.-P.11.

318. Denuzime A., Taverna M., Ferrier D., Domard A. Capillary electrophoresis of glucjsaminoglycan-derived disaccharides: applicationto stability studies of glucjsaminoglycan chitosan complexes // Electrophoresis, 1997.- V.18.- N 5.- P. 745-750/

319. Gibbert R.D., Patton P.A. Liquid crystal formation in cellulose and cellu-los derivatives. Progress in Polymer Scitnce.1983.- V.9.- P. 115-131.

320. Watatsuki ., Iba M., Imahara H.J/ Ferment. Technol. 1988.-66.-P/257265.430/ Watanabe K., Saiki I., Uraci Y., Tokura S/ 6.0-carboxymethylchitin (CM-chitin) as drug carrier /Chem.Pharm. Bull. (Tokyo).-I990.-Vol. 38.N2.-P.506-509.

321. Saltikova E.S., Poskryakov A.V., Benkowskaya G.V., Khayrullin R.M., Nikolenko A.G. Adaptive effect of chitooligosaccharides on the honeybee Apis mellifera L.// Biologically Active Polysaccharides. Oslo, 1998.-P.98.

322. Furukawa S., Taniani K., Yang J. Induction of gene expression of antibacterial proteins chitooligomers in the silkworm, Bombix mori //Insect Mol. Biol. 1999.-8(1).-P. 145-148

323. Park Y., Yoo N.C., Kim M.-H.,Park S.-C/. Cheong H., Jang M.-K, Nah J.-W. and Hahm K.-S. Investigation of the Antifungal Activity and Mtchanism of Action of LMWS-chitosan //J. Microbiol. Biotechnol.-2008.-V.18.-P. 1729-1734.

324. Glee P.M., Russell P.J., Welsch J.A., Pratt J.C., Cutler J.E. //Anal. Bio-chem.-1987.-V.164.-P.207-213.436.van Burik.J.-A.H. Schreckhise R.W., White T,C., Bowden R.A., Myerson D. // Medical Mycology.-1998.-V.36.-P.299-303.

325. Polaina J., Adam A.C.//Nucl. Acids Res.-1991.-V.19.-P.5443.

326. Dietchrich R.A., Lawton K., Friedrich L., Cade R., Willits M., Maleck K. 1999. Induced plant defense responses: scientific and commercial possidilities. Insect-plant interactions fnd induced plant defense // Novartis Foundation sympo-sium.-P.205-222.

327. Thaler J.S., Stout M.J., Karban R., Duffey S.S. 2001.- J. asmonat-mediated induced plant resistance affects a community of herbivores// Ecolog., 26 (3).-P.312-324.

328. Tumlinson J.H., Pare P.W., Lewis W.J. 1999. Plant production of volatiles semiochemicals in response to insect-derived elisitors //Insect-plant interactijns and induced plant defence //Novartis Foundation symposium.-P. 95-109.

329. Sebti Issam., Martial-Gros Adele, Carnet-Patiez Adele et al. Chitosan polymer as bioactive coating and film against Aspergillus niger contamination //J. Fool. Sci. 2005. 70.-N2-P.100-104.

330. Cho Y-W., Cho Y-N., Chung S-H., Yoo G., Ko S-W/ Water-sjluble chitin as a wound healing accelerator // Biomaterials.-1999.-V.20.-N.22- P.2139-2145.

331. Jagur-Grodzinski J. Biomedical application of functional polymers //Active & Functional Polimers.-1999.-V.39.-N.2.-P.99-138.

332. Khora E., Lim L. Implantable applications of chitin and chitosan // Bio-materials.-2003.-V.24.-N.13.-P.2339-2349.

333. Vongchan P., Sajomsang W., Subyen D., Kongtawelerta P. Anticoagulant activity of a sulfated chitosan // Carbohydrate Research.-2002.- V.337.- N.13.-P.1233-1236.

334. Ilium L. Chitosan and its use as a pharmaceutical excepient // Pharmaceutical Research.-1998.-V. 15.-N.9.-P. 1326-1321.

335. Shimuzu J., Takeda H. // J. Chem.Soc. Jap. 1998.- N9.- P.637-641.

336. Paluch D., Szosland L.,Koiodziej J., Staniszewska-Kus J., Szimonowicz M., Solski L.,Zywicka B. A biological investigation of dibutyrylchitin fibres //Ingeneering of biomaterials,1999.-V.II, -N 7-8.- P.53-60.

337. Hu G., St. Leger R.J. A phylogenetic approach to reconstructing the diversification of serine proteases in fungi //Journal of Evolutional Biology.-2004.-V.17.-P.1204-1214.

338. Polar L. The catalytic triad of serine peptidases // Cell. Mol. Life Sci.-2005.-V.62.-P.2161-2172.

339. Rawlings N.D., Barrett A.J. Families of serine peptidases //Methods in En-zymology.-1994.-V.244.-P. 19-61.

340. Xie W., Xu P., Wang W., Liu Q. Preparation of woter-soluble chitosan derivatives and their antibacterial activity // J. Appl. Polym. Sci. 2002.- V.85.-N 8.-P.1357-1361.

341. Cho Y.-W., Cho Y.-N., Chung S-H., Yoo G., Ko S-W. Water-soluble chitin as a wound healing accelerator //Biomaterials.-1999.-V.20.-N 22.-P.2139-2145.

342. Liu H., Mao J., Yao K., Yang G., Cui L., Cao Y. A stady on a chitosan gelatin-hyaluronic acid scaffold as artificial skin in vitro and its tissue engineering applications// J. Biomater. Sei. Polym. Ed. 2003,- V.14.- N1.- P. 25-40.