Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Применение озонотерапии при гнойно-некротических поражениях копытец у крупного рогатого скота

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Применение озонотерапии при гнойно-некротических поражениях копытец у крупного рогатого скота"

На правах рукописи

МИЩЕНКО Елена Владимировна

ПРИМЕНЕНИЕ ОЗОНОТЕРАПИИ ПРИ ГНОЙНО - НЕКРОТИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИЯХ КОПЫТЕЦ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

06.02.03- ветеринарная фармакология с токсикологией 06.02.04- ветеринарная хирургия

АВТОРЕФЕРАТ

г 4 ОКТ 2013

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Краснодар - 2013

005535486

Работа выполнена в лаборатории паразитологии и ветеринарно - санитарной экспертизы ГНУ Краснодарского научно - исследовательского ветеринарного института Россельхозакадемии.

Научный руководитель:

Научный консультант:

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор, член - корреспондент РАСХН Антипов Валерий Александрович

доктор ветеринарных наук, профессор Родин Игорь Алексеевич

доктор ветеринарных наук, заведующая лабораторией фармакологии ГНУ Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института Россельхозакадемии Семененко Марина Петрова

кандидат ветеринарных наук, ветеринарным врач частной практики (ПБОЮЛ),г. Краснодар Шихина Светлана Николаевна

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО Ставропльский государственный аграрный университет

Защита диссертации состоится «25» октября 2013 г. в Ю00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г.Краснодар, ул. Калинина,13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г.Краснодар, ул. Калинина, 13).

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» - http://www.kubsau.ru « 23 » сентября 2013 г. и официальном сайте ВАК РФ - http://www.vak.ed.gov.ru.

Автореферат разослан «23» сентября 2013г. Учёный секретарь диссертационного совета

Родин И.А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В связи с интенсификацией животноводства гнойно-некротические поражения копытец у коров встречаются довольно часто и составляют наиболее высокий удельный вес среди всех прочих заболеваний конечностей. Эти заболевания поражают большое количество животных, но чаще всего наблюдаются у крупного рогатого скота. Данная патология наносит весьма ощутимый экономический ущерб вследствие высокой частоты проявления и широкой распространенности, как в Российской федерации, так и за рубежом (Н.С.Островский, 1964; Чабановский С.Г., 1974; Мосин В.В., 1975; Санин А.Г., 1978; Шакуров М.Ш., 1983; Бороздин Э.К., 1996; Елисеев А.Н.с соавт., 2000; Назаров М.В., 2001; Родин И.А., 2002; Herrus S.F., 1958; Smith J.R., 1964; Amsron G., 1988 и др.). Убытки складываются из-за снижения продуктивности, живой массы, преждевременной выбраковки, замены животных в стаде и с расходами на лечение (Молоканов В.А., 1998; Лукьяновский В.А., 2003).

Актуальность изыскания способов и средств терапии гнойно-некротических поражений копытец у коров, несмотря на большое количество экспериментальных и клинических исследований, до сего времени остаётся острой.

Вышеизложенное свидетельствует о потребности поиска и разработки новых средств терапии гнойно-некротических поражений пальцев у коров.

С рассматриваемых позиций значительный интерес представляет озон, широко применяемый в медицинской и ветеринарной практике как фармакологический агент (Антипов В.А., 2004).

Данная работа посвящена проведению исследований по разработке оптимальных параметров применения этого препарата при гнойно-некротических поражениях пальцев у коров.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является изучение, разработка и внедрение в практику ветеринарной хирургии медицинского озона для лечения гнойно - некротических поражений пальцев у коров. Для реализации были поставлены следующие задачи:

• изучить параметры общетоксического действия озона на организм животных;

• разработать методики проведения озонотерапии в ветеринарной практике;

• провести исследования биологической активности озона на непродуктивных животных;

• изучить эффективность озонотерапии при гнойно - некротических поражениях пальцев у коров.

Научная новизна. В результате проведенных исследований дано практическое обоснование применения озона в ветеринарной медицине, определены его физико-химические и основные токсикологические характеристики. Разработан ряд устройств и методик проведения озонотерапии у животных при различных способах введения, аппаратно-программные средства, предназначенные для автоматизации и совершенствования параметров проведения процедур озонотерапии, а также диагностики эффективности озонотерапии. Установлен высокий уровень биологической активности и лечебной эффективности озонированного физиологического раствора при ряде патологий у непродуктивных животных. В условиях производ-

ства определена высокая эффективность применения медицинского озона при лечении коров больных гнойно - некротическими поражениями пальцев.

Практическая значимость. Для практической ветеринарной хирургии предложена комплексная схема лечения с использованием медицинского озона, обладающего высокой лечебной эффективностью при гнойно - некротических поражениях пальцев у коров. Ветеринарной практике предложены:

- прибор для экспресс-диагностики состояния баланса окислительной и антиокислительной системы, основанный на принципиально новом методе регистрации индуцированной хемолюминисценции биологических жидкостей;

- прибор для принципиально нового метода проведения процедур инфузии ОФР, позволяющий точно измерять концентрацию озона в физиологическом растворе КаС1 на этапе приготовления озонированного физиологического раствора, а также поддерживать заданную концентрацию все время инфузии приготовленного раствора пациенту.

Апробация результатов исследований. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ученых советах Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института в 2010-2012 гг., на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии», посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (г. Краснодар, 2011г.), на международной научно-практической конференции «Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения», посвященной 90-летию со дня образования Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар, 2011), на международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар,2009г.).

Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 5-ти печатных работах, 3 из которых в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

- характеристика физико-химических свойств и способов получения озона;

- токсикологическая оценка озона;

- биологическое влияние озона при различных методах введения на организм животных;

- результаты комплексного метода лечения при гнойно-некротических поражениях пальцев у коров;

Структура н объём диссертационной работы. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста в компьютерном варианте и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложений. Список литературы включает 131 источников, в том числе 20 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 8 таблицами, 14 рисунками.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась в лаборатории паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ГНУ Краснодарского научно - исследовательского ветеринарного института в 2008 - 2012 гг. в соответствии с государственной темой 06.01.01. (регистрационный номер 01.9.80.006908).

Токсикологические исследования проведены при техническом содействии кандидата ветеринарных наук Тяпкиной Е.В.

При постановке опытов были использованы токсикологические, физиологические, клинические, морфологические, биохимические и другие методы исследований.

В лабораторных, экспериментальных и научно-хозяйственных опытах было использовано 56 белых мышей, 48 белых крыс, 8 кроликов, 2 морские свинки, 319 собак, 250 кошек и 55 коров.

Комплексные клинико-экспериментальные и научно-производственные исследования проводили в условиях ветеринарной клиники Майкопской районной станции по борьбе с болезнями животных (п. Тульский) и на молочных комплексах ОАО Агрокомплекс «Гиагинский им. Ю.Х. Тхайцухова» и учхоза «Кубань» Кубанского ГАУ Краснодарского края.

В работе использовались известные (Шмакова И.П., Назаров Е.И. и др., 2004) и специально разработанные экспериментальные приемы измерения концентрации озона в газовой и водной среде, а также оценки влияния озона на биохимические и физиологические показатели крови животных.

В ходе проведения экспериментальной части работы исследовалось общее токсическое и раздражающее действие озона на организм животных, влияние на морфо-биохимические показатели крови, а также терапевтическая эффективность при ряде патологий у собак и кошек и гнойно - некротических поражениях пальцев у коров.

Токсикометрическую оценку проводили в остром опыте в трех сериях на лабораторных животных (белые крысы и мыши).

Озонированный физиологический раствор опытным животным (как мышам, так и крысам) вводили однократно при различных способах введения: перорально, с помощью шприца, внутрибрюшинно и внутривенно. Концентрация озона в растворе достигала 22 мг/л (максимальное количество озона, способное раствориться в физиологическом растворе). В контрольных группах животным вводили физиологический раствор в объемах, соответствующих каждой опытной группе. О токсическом действии озона судили по картине общего состояния, поведению подопытных животных, поедаемое™ корма.

Подострую токсичность озона изучали на белых мышах и крысах. При этом мышам опытной группы испытуемый озонированный физиологический раствор вводили через день в течение 14-ти дней внутрибрюшинно в количестве 1,0 мл на 1 введение с концентрацией озона в растворе 3 мг/л. Крысам опытной группы испытуемый препарат вводили внутрибрюшинно в количестве 2 мл на 1 введение через день в течение 14 дней. За животными вели пристальное наблюдение, учитывая их поведение, общее состояние и аппетит. По истечению 7-ми дней после последнего введения раствора 5 мышей и 3 крысы из каждой группы были подвергнуты эвтаназии с последующим вскрытием и проведением паталогоанатомических исследований.

Изучение раздражающего действия озонированного физиологического раствора проводили в двух сериях опыта методом конъюнктивальных проб и методом накожных аппликаций на кроликах-альбиносах и морских свинках согласно ГОСТ РИСО 10993.10-99.

О наличии у озонированного раствора раздражающих свойств судили по появлению на месте аппликации гиперемии, отека, утолщения кожной складки, расчесов. Болезненность участка определяли по реакции животного на пальпацию в месте аппликации препарата.

Влияние методов озонотерапии на организм животных проводили в условиях ветеринарной клиники на собаках и кошках для оценки эффективности лечения и подбора оптимальной дозы озона.

С этой целью были изучены параметры средней скорости кровотока (ССК) с помощью специализированного устройства, имеющего двухволновой выносной спектральный датчик и графический ЖКИ-дисплей для записи кривой изменения оксигенированности крови.

Баланс системы ПОЛ-АОС животных оценивали с помощью специализированного хемолюминометра «Бозон-БХЛ», измеряющего интенсивность индуцированной хемолюминесценции, возникающей в ходе реакции Фентон. Плазму получали центрифугированием образца крови в течение 10 мин. при частоте 3000 об.мин. и температуре 10 град.С. Далее образец плазмы смешивали с 0.4 мл фосфатного буфера с рН=7,5. В полученную смесь добавляли заранее приготовленную навеску сернокислого железа (76 мг). Вспышку люминесценции инициировали смешиванием полученного приведенным выше способом раствора и порции 2% перекиси водорода в количестве 0.2 мл.

Лечение болезней органов дыхания, пищеварения, опорно-двигательной системы, гипоксических состояний, заболеваний вирусной этиологии у кошек и собак проводилось с помощью метода большой аутогемотерапии с озоном (БАГТО), позволяющий вводить в организм животного наибольшую дозу озона непосредственно в кровь.

Процедура проходила следующим образом: животное фиксировали на столе в положении лежа на боку. Выстригали шерсть на передней лапы в области конту-рирования подкожной вены предплечья. Готовили к работе перистальтический насос «Бозон-БАГТО» и контейнер для забора крови, стенки которого непосредственно перед процедурой орошали физиологическим раствором натрия хлорида в количестве 30-50 мл и раствором гепарина - 500 ЕД. Затем накладывали жгут на лапу животного и вводили внутривенный катетер, который фиксировался к лапе лейкопластырем. Подсоединяли трубку от контейнера с физ.раствором к внутривенному катетеру и включали перистальтический насос. Кровь от пациента поступала в пластиковый контейнер с физиологическим раствором с гепаринизирован-ными стенками.

При лечении непродуктивных домашних животных (кошки, собаки) применялись также системные методики введения озона в организм больных животных: инфузия озонированного физиологического раствора внутривенно, большая ауто-гемотерапия, ректальные инсуффляции озонокислородной смеси.

Клинико-экспериментальные и научно-производственные исследования включали в себя изучение клинического статуса, морфологических, биохимических показателей крови у клинически здоровых коров и у коров с гнойно-некротическими поражениями пальцев. Придерживаясь аналогии методов исследо-

вания, изучали: температуру тела, частоту пульса и дыхания, руминацию; количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, гематокрита, СОЭ, лейкограмму и показатели системы гемостаза.

Полученные данные по показателям клинически здоровых коров являлись контролем при изучении влияния гнойно-некротических поражений пальцев на общее состояние, морфологические, биохимические показатели организма животных.

У коров с гнойно-некротическими поражениями пальцев проводили исследование и описание воспалительного очага дистальной части конечности. Для этого осматривали животное в состоянии покоя, учитывая положение и постановку конечностей, характер постановки и состояние копытец. Особое внимание уделяли дисталыюму отделу конечностей, обращая внимание на величину и форму пораженных копыт, припухлость и наличие ран в области пальца, состояние роговой стенки, наличие трещин, расседин, волнистостей, шероховатостей и других дефектов. С подошвенной стороны копыта обращали внимание на форму подошвы, степень её выпуклости или вогнутости, состояние белой линии, рога мякиша и подошвы. Исследование местной температуры копыта, а также выявления болезненных мест в области венчика и пальцевого мякиша проводили тыльной стороной кисти руки, для сравнения таким же путем определяли температуру здорового копыта. Методом пальпации определяли болезненность, плотность тканей, местную температуру и болевую чувствительность. Дополнительно использовали метод проводки животного на освещенной территории фермы, учитывали степень, характер хромоты. Обращали внимание на качество, запах, цвет и характер выделяемого экссудата пораженных копытец.

При изучении у больных коров с гнойно-некротическими поражениями копытец учитывали стационарность болезни, процент заболевших животных, возраст, породу, время года, условия содержания и кормления, а также многие другие факторы (поедаемость корма, общее состояние животного, температуру тела, морфологические показатели крови).

На основании клинического обследования и данных ортопедической диспансеризации из числа обследованных коров черно-пестрой породы в возрасте от 4 до 6 лет, с живой массой 350-400 кг, было отобрано 15 коров с заболеваниями ди-стального отдела конечностей с диагнозом флегмона тканей свода в области меж-копытцевой щели и флегмона мякиша.

По принципу аналогов, с незначительными расхождениями в массе тела, возрасте и патологическом процессе, сформированы 4 группы, по 5 голов каждой, из них две подопытные и одна группа контрольная. Условия содержания, кормления и ухода были одинаковы.

Продолжительность опытов составила 30 дней, исследования проводили с периодичностью по отношению к фоновым показателям на 7, 14, 21 сутки по единым методикам во всех группах. Результаты, полученные при исследовании опытных групп животных, сравнивались с данными контрольной группы, а также по отношению к клинически здоровым животным.

В начале исследования у всех животных определялся клинический статус (измерялась температура тела, производился подсчет пульса и дыхания, количество руминаций, молочная продуктивность), определялся морфологический состав и физические свойства крови, биохимические показатели крови, условия кормления и содержания.

В целях комплексного воздействия на патологический процесс для всех исследуемых групп коров предварительно проводили:

1. Циркулярную новокаиновую блокаду 0,5%-ым раствором новокаина.

2. Промывание поражённого участка раствором калия перманганата в разведении 1:1000.

3. Механическую и хирургическую расчистку поражённых конечностей.

Затем лечебные мероприятия назначали в зависимости от учетной группы

животных и фазности раневого процесса.

Животным контрольной группы местно на поражённую конечность накладывали салфетку, пропитанную фракцией АСД-3 на трое суток с последующей ее заменой через каждые трое суток. Лечение продолжали до полного клинического выздоровления животных.

В первой опытной группе в целях создания в очаге поражения неблагоприятной среды для развития гнилостной и анаэробной микрофлоры всем животным 23 раза в сутки применяли влажно-высыхающие повязки, которые готовили из 8-12 слоёв марли, смачивали их озонированным маслом (ОМ) с пероксидным числом 400 - 800, отжимали, покрывали тонким слоем гигроскопической ваты и прибинтовывали. Повязку меняли по мере высыхания. Указанную процедуру выполняли ежедневно до полного клинического выздоровления животного.

Во второй группе наряду с местным воздействием озонированного масла, дополнительно через день, применяли внутривенное введение озонированного физиологического раствора (ВОФР) с концентрацией озона (КО) 1-3 мг/л.

Все лабораторные, клинические, ортопедические исследования выполнялись по единым методикам во всех сериях опытов.

Скорость заживления ран определяли с помощью обведения контуров ран на целлофане (целлофанография) с последующим переведением на миллиметровую бумагу, определяли время появления грануляций и эпителиальной ткани. Проводили термометрию раневой и контрольной поверхности, вели фотографирование, проводили прижизненную биопсию некротических участков тканей в начале исследования и на 14-е сутки. Учитывали количество и характер раневого отделяемого, размеры, границы припухлостей и отёчностей тканей вокруг поражённых участков.

На основании данных лабораторного, клинического и ортопедического обследования устанавливали диагноз. Результаты обследования заносили в журналы наблюдений и истории болезни.

Для анализа заживления по вторичному натяжению проводили измерение площади раневой поверхности по методике, предложенной Л.Н. Поповой (1942). На рану накладывали стерильный целлофан и на него наносили контуры ран. Рисунок переносили на миллиметровую бумагу и подсчитывали площадь раны. Измерение повторяли через каждые 6-10 дней и вычисляли процент уменьшения площади раневой поверхности за сутки по отношению к предыдущему результату.

Динамику заживления ран и скорость заживления вторичным натяжением у животных определяли по методике А.Б. Шнейдера (1983). Количество эритроцитов и лейкоцитов в крови животных подсчитывали в камере с сеткой Горяева. При определении числа лейкоцитов и выведения лейкоцитарной формулы использовали методики A.A. Кудрявцева и Л.А. Кудрявцевой (1974).

Содержание гемоглобина определяли с помощью фотоэлектроколориметра (Кудрявцев А. А.., Кудрявцева Л. А., 1974; Кондрахин И.П., Курилов Н.В., Малахов

А.Г., 1985). Для выведения лейкограммы крови готовили мазки и окрашивали их по Филиппсону. В готовых мазках, под иммерсией, подсчитывали 100 клеток и проводили расчеты.

Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) проводили по Панчен-кову. (Поликарпова Н.С., Дмитриевой ТА., 1965).

Результаты СОЭ учитывали через 15, 30, 45, 60 минут и 24 часа от начала постановки пробы. Цветной показатель рассчитывали по формуле, принятой в клинической диагностике.

Для определения гематокритной величины использовали центрифуг Т-10, в которой одновременно исследовали две пробы крови. В укороченную пипетку Панченко, после обработки 10% раствором трилона "Б", набирали кровь до метки "0". Пипетку с кровью центрифугировали при 3000 об/мин - 10 минут. Количество делений шкалы, занятых эритроцитами, принимали за гематокритную величину.

Полученный в исследованиях цифровой материал подвергнут обработке с использованием стандартных программ статистического анализа для 1ВМ РС, «8ТАТ18Т1КА». Данные обработаны методами вариационной статистики для связанных и несвязанных величин с вычислением показателя достоверности различий - критерия I Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990). Вычисляли среднеарифметический показатель, ее ошибку, показатели варьирования признаков, аргумент Стьюдента и достоверную разницу между сравниваемыми величинами. Разница считалась достоверной при Р < 0,05; 0,02; 0,01; 0,001.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Состав, физико-химические свойства и способы получения озона

Озон (от греч. Огоп-пахнущий), аллотропная форма кислорода. Газ синего цвета, в жидком состоянии темно-синий, в твердом - сине-фиолетовый. Молекула •озона симметричная ангулярная (уголковая); длинна связи 0-0 0,12717 нм, угол ООО 116,78 , |х 1,78 • 10 - 30 Кл • м. Температура плавления 80,6 К, температура кипения 161,2 К.

При нормальных условиях масса 1 л О3. 2,1445 г. ± Плотность газа при 273,2 К 2,141 г/л, при 298,2 К 1,962 г/л, плотность жидкого при 90,2 К 1,571 г/смЗ. При 123,2 К 1,473 г/смЗ.

В газе О3 диамагнитен, в жидком состоянии слабо парамагнитен, магнитная восприимчивость +1,8 • 10— 6. В УФ спектре озон имеет широкую сильную полосу поглощения в интервале 200-300 нм с максимумом при X 255 нм (полоса Гартли).

Растворимость озона в воде (0,21 объема в 1 объеме раствора при 298 К) почти в 7 раз выше растворимости кислорода. В кислой среде растворимость озона падает, в щелочной - возрастает. Гораздо выше растворимость озона в хлорированных углеводородах и хладонах.

Озон термически неустойчив в газе и в растворах. В водных растворах распад озона медленно идет при комнатной температуре и заметно ускоряется с ростом рН. В газе более устойчив; медленный распад идет около 70 градусов, быстрый - выше 100 градусов.

Озон образуется в процессах, сопровождающихся выделением атомарного кислорода, например при разложении перекисей, окислении фосфора и т.п. В промышленности его получают из воздуха или кислорода в озонаторах действием тихого электрического разряда при низких температурах. Сжижается 03 легче, чем 02, и потому их легко разделить.

В своей работе для получения озона мы использовали генератор озона «Бо-зон-Н» (НПП «Эконика» г. Одесса).

3.2 Токсикологическая оценка озона

Эксперименты по определению токсических свойств озона были проведены в остром опыте на 36 половозрелых беспородных белых мышах (18 самок и 18 самцов) со средней массой тела 20-25г (возраст 2-2,5 мес.) и 36 половозрелых белых крысах (18 самок и 18 самцов) со средней массой тела 150-200 г (возраст 2,5-3,0 мес.).

Все животные были распределены на 6 групп по 6 мышей и 6 крыс в каждой группе, из которых 3 группы были опытными, а - 3 - контрольными.

Озонированный физиологический раствор опытным животным (как мышам, так и крысам) вводили однократно при различных способах введения: перорально, с помощью шприца, внутрибрюшинно и внутривенно. Концентрация озона в растворе достигала 22 мг/л (максимальное количество озона, способное раствориться в физиологическом растворе). В контрольных группах животным вводили физиологический раствор в объемах, соответствующих каждой опытной группе. О токсическом действии озона судили по картине общего состояния, поведению подопытных животных, поедаемости корма.

В первой серии эксперимента мышам опытной группы испытуемый препарат вводили перорально в количестве 1 мл с концентрацией озона 22 мг/л (суммарная доза озона составила 22 мкг). Крысам первой опытной группы препарат вводили перорально в количестве 2 мл с концентрацией озона 22 мг/л. Суммарная доза озона составила 44 мкг соответственно.

Во второй серии озонированный физиологический раствор в тех же концентрациях подопытным животным вводили внутрибрюшинно - мышам в количестве 1,0 мл с концентрацией озона 22 мг/л однократно, крысам - в количестве 2 мл однократно.

Третья серия эксперимента проводилась при внутривенном введении озонированного физиологического раствора. Мышам - в количестве 0,5 мл с концентрацией озона в растворе 22 мг/л (суммарная доза озона составила 11 мкг однократно). Крысам - в количестве 3 мл с концентрацией озона в растворе 22 мг/л однократно (суммарная доза озона составила 66 мкг).

Мыши и крысы четвертой, пятой и шестой групп служили биологическим контролем. Им вводился физиологический раствор в тех же объемах, что и озонированный физиологический раствор, вводимый подопытным животным первой, второй и третьей групп.

Установлено, что озонированный физиологический раствор при перораль-ном, внутривенном и внутрибрюшинном введении в указанных дозах не вызвал гибели и острой интоксикации животных, не влиял отрицательно на их общее состояние и поведение. Рефлексы оставались сохраненными, животные были подвижны с хорошо выраженным аппетитом. При этом нарушений функциональной активности органов пищеварения и мочеотделения не наблюдали.

Таким образом, на основании проведенных исследований среднесмертель-ную дозу (1Л)5о) и пороговую дозу (минимальную дозу, при введении которой в организме возникает небольшой, но статистически достоверный сдвиг какого-либо чувствительного интегрального или специфического показателя) препарата определить не удалось, так как при всех испытуемых дозах гибели опытных животных не регистрировали.

Учитывая, что введение озонированного физиологического раствора с концентрацией озона в растворе 22 мг/л в дозе переносится животными без видимых последствий, он классифицируется как препарат малотоксичный и по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» относится к 4-му классу опасности (малоопасные вещества).

Эксперименты по определению подострой токсичности озона проводились на 20 беспородных половозрелых белых мышах и 12 беспородных половозрелых белых крысах, распределенных на 4 группы (две группы по 10 мышей и две группы по 6 крыс).

Животным опытных групп испытуемый озонированный физиологический раствор вводили через день в течение 14-ти дней внутрибрюшинно мышам - в количестве 1,0 мл, крысам — 2,0 мл на 1 введение с концентрацией озона в растворе 3 мг/л. Мыши и крысы двух других групп служили биологическим контролем, им препарат не вводили.

В результате проведенных исследований отмечено, что длительное применение озона в различных дозах не оказывает вредного влияния на организм лабораторных животных.

При патоморфологическом и гистологическом исследовании органов и тканей экспериментальных животных отклонений и каких-либо особенностей в строении выявлено не было.

Изучение сенсибилизирующего и раздражающего действия озонированного физиологического раствора при воспроизведении у кроликов и морских свинок специфических тестов не выявило его негативного влияния, как в месте нанесения, так и на общую ответную реакцию организма.

3.3 Влиянне методов озонотерапии на организм животных

3.3.1 Изучение параметров средней скорости движения крови и оценка антиоксидантной активности у собак

Изучение средней скорости кровотока (ССК) собак проводили для оценки эффективности озонотерапии и подбора оптимальной дозы.

Антиоксидантная активность - суммарная физико-химическая величина, характеризующая способность данного субстрата тормозить реакции окисления. Она зависит от относительного количества и физико-химических параметров каждого из биоантиоксидантов, имеющихся в анализируемой смеси.

В эксперименте участвовало 25 собак, которых подвергали измерению средней скорости кровотока (ССК) до проведения процедуры большой аутогемоозоно-терапии с дозой озона 2-4 мг на животное и после процедуры. Измерения проводились каждый час после однократной процедуры. У всех собак до проведения процедуры отбиралась кровь в количестве 5,0 мл. Кровь центрифугировали 3000 об/мин. Сыворотку исследовали на приборе «Бозон-БХЛ». Затем проводили проце-

дуру. Через час после ее окончания отбирали кровь из вены, получали сыворотку и проводили измерение. Всего 8 измерений. Параллельно с этим проводили измерения скорости периферического кровотока.

В результате окислительного стресса (таблица 1) на 3-й час после озонотера-пии у подопытных животных наблюдался скачок продуктов перекисного окисления липидов при одновременном снижении скорости периферического кровотока. На 4 - 7 часы эксперимента наблюдалось постепенное снижение кривой ПОЛ-АОС и повышение ССК, что говорит о том, что в организме собак после искусственно вызванного окислительного стресса происходит адаптация, включаются механизмы антиоксидантной защиты, увеличивается кровоток, улучшается реология крови. И уже к 8-му часу измерения уровень продуктов перекисного окисления опускается к исходным показателям (до проведения озонотерапии), в то время как ССК незначительно снижается по сравнению с 3-им часом эксперимента, но остается увеличенной по сравнению с контролем.

Таблица 1 - Изменение средней скорости кровотока и антиаксидантной активности у собак при проведении озонотерапии (п=25)

№ процедуры Бозон-БХЛ, ус.ед. Скорость кровотока, с

фоновые исследования 590 1,93±0,23

через 1 час 575 1,66±0,41

через 2 часа 575 1,66±0,35

через 3 часа 421 2,50±0,29

через 4 часа 435 2,85±0,33

через 5 часа 475 2,63±0,18

через 6 часов 435 3,33±0,27

Установлено, что в то время как растут показатели перекисного окисления -падает скорость периферического кровотока. Наблюдается, так называемый, «зеркальный эффект». Таким образом, данный метод позволяет оценить реакцию организма животных на озон, скорректировать дозу и длительность курса лечения. При этом разработанный нами хемолюминесцентный метод измерения состояния баланса оксидантных и антиоксидантных систем организма имеет большую прогностическую эффективность, чем наиболее распространенный в настоящее время метод основанный на измерении послесвечения реакционной смеси, реализованный в БХЛ-06.

3.3.2 Применение процедур большой аутогемотерапии с озоном у кошек и собак

В условиях ветеринарной лечебницы нами было проведено более 150 процедур большой аутогемотерапии с озоном (БАГТО) у животных. Процедуры применяли животным при лечении болезней органов дыхания, пищеварения, опорно-двигательной системы, при гипоксических состояниях, при заболеваниях вирусной этиологии у кошек и собак.

Метод БАГТО позволяет ввести в организм животного наибольшую дозу озона непосредственно в кровь. Таким образом, озон оказывает противовирусное действие благодаря своим стерилизующим свойствам, а так же опосредованному воздействию на иммунную систему.

Для процедуры БАГТО были отобраны кошки и собаки различных пород и возрастов, больные инфекционными заболеваниями, у которых через катетер в пластиковый пакет с физиологическим раствором натрия хлорида в количестве 3050 мл и раствором гепарина - 500 ЕД отбираликровь, объем которой составлял 50200 мл в зависимости от массы тела животного. Затем отобранная кровь насыщалась озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 10-20 мг/л непосредственно в контейнере.

После барботирования кровь возвращалась обратно пациенту в вену, с помощью перистальтического насоса, включенного в режиме реверс. Во время проведения процедуры, а это от забора крови до ее возврата составляет около 10 минут, кровь не сворачивается благодаря гепаринизированным стенкам контейнера.

3.3.3 Применение озонотерапин в гнойной хирургии

Для изучения антибактериального действия озонированного физиологического раствора на штаммы микроорганизмов, наиболее часто встречающихся при инфекционно-воспалительных хирургических заболеваниях у кошек и собак, нами в условиях ветклиники было создано по 5 групп животных (по 4 собаки и 4 кошки в каждой группе) с гнойным воспалением мягких тканей. После предварительной очистки раны животным первых опытных групп проводили орошение раны озонированным физиологическим раствором с концентрацией 20 мг/л с последующим наложением стерильной ватно-марлевой повязки один раз в день, до полного выздоровления (таблица 2).

Таблица 2 - Результаты применения озона при гнойных воспалениях мягких тканей животных (п=4)

группы Методы и средства лечения Сроки заживления раны у кошек, дней Сроки заживления раны у собак, дней

1-опыт Обработка раны озонированным физиологическим раствором с концентрацией 20 мг/л 6±0,8 7±1,1

2-опыт Обработка раны озонированным маслом с перекисным числом 2000 4±0,5 4±0,7

3-опыт Наружная газация поверхности раны озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 60 мг/л 5±0,7 4±0,4

4- контроль Обработка раны 3% перекисью водорода, с последующим наложением на рану мази «Левомеколь» 8±1,2 9±1,5

Животным вторых опытных групп обработку раны проводили озонированным маслом с перекисным числом 2000 с последующим наложением стерильной ватно-марлевой повязки, один раз в день, до полного выздоровления.

Животным третьих опытных групп проводили наружную газацию в пластиковом мешке поверхности раны озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 60 мг/л один раз в день, до полного выздоровления.

И, наконец, животным контрольных групп поверхность раны обрабатывали 3%-ной перекисью водорода, с последующим наложением на рану мази «Левоме-коль» под стерильную ватно-марлевую повязку один раз в день, до полного выздоровления.

При исследовании штаммов бактерий Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aureginosa, выделенных из раневой поверхности подопытных животных до начала экспериментального периода, после применения озонотерапии роста микрофлоры не было выявлено ни в одном из случаев вне зависимости от видовой принадлежности микроорганизмов. То есть, произошло непосредственное деструктивное влияние озона на бактериальные клетки с последующим полным прекращением жизнедеятельности микроорганизмов. При этом в пробах от контрольных групп отмечался рост микрофлоры.

В результате проведенных исследований установлено, что по сравнению с группой контроля у животных первых трех опытных групп происходило сокращение сроков лечения. Раны быстрее очищались. Значительно раньше появлялись здоровые грануляции.

Таким образом, озонированный физиологический раствор с различной концентрацией озона оказывает бактерицидное действие на микроорганизмы и существенно сокращает сроки лечения гнойных ран.

3.3.4 Эффективность озонотерапии при лечении различных заболеваний у мелких домашних животных

Работа по изучению воздействия озона на организм животных проводилась на базе Майкопской районной станции по борьбе с болезнями животных п.Тульский Майкопского района Республика Адыгея с июля 2005 по декабрь 2007 годов.

Целью исследования явилось определение клинической эффективности применения озона в условиях ветеринарной клиники. При этом было проведено лечение 274 собак и 210 кошек, при котором озонотерапия использовалась как монотерапия, так и в комплексе с традиционным лечением.

При этом применялись системные методики введения озона в организм больных животных: инфузия озонированного физиологического раствора внутривенно, большая аутогемотерапия, ректальные инсуффляции озонокислородной смеси.

Для лечения животных озон применялся при различных способах введения и концентрациях: для внутривенных инфузий - озонированный физиологический раствор (ОФР) с концентрацией озона 1-2 мг/л. Ректальные инсуффляции озонокислородной смеси (ОКС) проводились с концентрацией озона 20-60 мг/л. Большая аутогемотерапия (БАГТ) с дозой озона 1-3 мг. Малая аутогемотерапия (МАГТ) с дозой озона 0,2-0,4 мг. Газообразное введение ОКС (подкожно, внутрикожно, внутримышечно) - с концентрацией озона 2-30 мг/л.

При наличии показаний озонированная дистиллированная вода вводилась интрагастрально через зонд с концентрацией озона 10-18 мг/л. Озонированное масло (ОМ) применялось в виде накожных аппликаций. Для продувания наружного слухового прохода при отитах использовали ОКС 40-80 мг/л.

Все процедуры были проведены на приборе «Бозон-С» производства НПП «Эконика».

Местно озон применяли в качестве асептического и противовоспалительного средства. Озонированная дистилированная вода применялась для промывания глаз, ран, уретры, мочевого пузыря, матки. Проводили лаваж брюшной полости и выпойку животным. Для промывания ран и выпаивания использовали дистиллят с высокой концентрацией озона-15-22 мг/л. Для промывания уретры, мочевого пузыря и для лаважа брюшной полости использовали более низкую концентрацию-7-10 мг/л.

За 8 месяцев работы озонотерапевтического кабинета было проведено 855 процедур.

Пациенты получали озонотерапию на фоне комплексного лечения. Озоноте-рапия включала в/в капельное введение озонированного физиологического раствора с концентрацией озона I мг/л ежедневно или через день № 5-7. Ректальные ин-суффляции озонокислородной смеси с концентрацией озона 30-40 мг/л и объемом 50-300 мл в зависимости от веса животного. Обкалывание ОКС патологических очагов с концентрацией озона 10-20 мг\л. Местного применения озонированного масла. Газация ОКС пораженных конечностей. Малая аутогемотерапия.

При болезнях органов пищеварения проводилась выпойка озонированного дистиллята, ректальные инсуффляции ОКС 20-70 мг/л, в/в ОФР. Сравнительный анализ результатов лечения показал, что при дополнительном назначении озоноте-рапии наблюдается более выраженная положительная динамика клинических и лабораторных показателей.

При парадонтозе проводили промывание полости рта озонированным дистиллятом с концентрацией 15-20 мг/л и аппликации озонированного масла с пере-кисным числом 1000. Курс лечения составлял 10 процедур.

При болезнях органов дыхания применялись ректальные инсуффляции ОКС 30-40 мг/л, большая аутогемотерапия с дозой озона 0,5-1,5 мг.

При болезнях мочеполовой системы озонотерапия включала следующие процедуры: ОФР 1-2 мг/л, БАГТО 0,5-1 мг, рекральные инсуффляции ОКС 30-40 мг/л, влагалищные инсуффляции ОКС 30-40 мг/л, промывание уретры и мочевого пузыря ОД 7-10 мг/л.

При болезнях опорно-двигательной системы (дегенеративно-дистрофические заболевания позвоночного столба, усложненные компрессионно-ишеми-ческой невропатией, артриты, артрозы) применялись капельницы с ОФР 1-2 мг/л, БАГТО 0,5 мг, РИ 20-30 мг/л, паравертебральное внутримышечное обкалывание ОКС 10 мг/л, интра- и параартикулярное введение ОКС 10-15 мг/л.

Во всех случаях отмечался явный положительный эффект воздействия озона. Происходила коррекция нарушений гомеостаза. Озон проявлял свои противовоспалительные, анальгезирующие, дезинтоксикационные, иммуномодулирующие, бактерицидные, вирицидные, фунгицидные свойства. Это позволило значительно сократить количество вводимых лекарственных препаратов, то есть сокращались затраты владельцев животных на лекарственные препараты, а в случаях, где было возможно применение озона как монотерапии, вообще оградить животных от побочных эффектов аллопатических медикаментозных средств. Количество дней лечения на стационаре сокращалось на 5-7 дней

У 42 больных животных в послеоперационный период произошло ускорение заживления раневых поверхностей в период реабилитации (на 4,3-5,8 дней соответственно).

3.4 Лечебная эффективность озона при лечении гнойно - некротических поражениях копытец у коров

Клинические испытания по сравнительной оценке терапевтической эффективности озона при гнойно-некротических заболеваниях пальцев крупного рогатого скота были проведены на молочном комплексе ОАО Агрокомплекс «Гиагинский им. Ю.Х. Тхайцухова» в течение 2010 - 2012 гг.

Для эксперимента были подобраны две опытных и одна контрольная группы коров с гнойно-некротическими язвами мякишей, в возрасте 4-6 лет по десять голов в каждой, придерживаясь принципа аналогов по степени и характеру поражений. Для контроля клинического состояния и показателей крови подопытных коров с гнойно-некротическими поражениями пальцев, было исследовано десять клинически здоровых коров.

При первичном приеме у животных всех групп проводили расчистку копыт, делали циркулярную блокаду пораженной конечности 0,5% раствором новокаина. Копытца очищали от грязи и навоза, промывали раствором калия перманганата 1:1000, удаляли некротизированные ткани и останавливали кровотечение, далее раневую поверхность обрабатывали с учетом принятой схемы лечения (таблица 3).

Таблица 3 - Схема лечения гнойно-некротических заболеваний дистального отдела конечностей у подопытных коров

Группы животных контрольная I - опытная II - опытная

Расчистка копыт, механическая и хирургическая обработка пораженного участка

Схема лечения Местное наложение марлевой салфетки, пропитанной фракцией АСД-3 Местное наложение марлевой салфетки, пропитанной раствором озонированного масла (ОМ) с перок-сидным числом 400-800. Местное наложение марлевой салфетки пропитанной раствором озонированного масла с пероксидным числом 400-800+ в/в введение озонированного физиологического раствора в дозе 300 - 500 мл., с концентрацией озона 1-3 мг/л

Смена повязок через сутки до полного заживления раневого дефекта

На четвертые сутки лечения у коров контрольной группы наблюдалась небольшая отечность дистальной части конечности, местная температура была повышена, при пальпации отмечалась сильнейшая болевая реакция. Поверхность дефекта покрыта клейким экссудатом серо-желтого цвета с примесью гноя, при отделении наложений ткани сочные с красным оттенком. Ткани по окружности язвы припухшие, напряженные и болезненные. Животные пораженную конечность держали в полусогнутом состоянии или опирались на зацепную часть копыта. При движении отмечали хромоту опорного типа. Животные большую часть времени лежали. Общее состояние угнетенное, аппетит понижен.

На восьмые сутки, при снятии повязки, внутренняя сторона влажная с небольшим количеством гноя и кусочками отторгнутых тканей. Поверхность раны покрыта тонким слоем гноя, эпителиальный ободок в виде отдельных островков ярко-розового цвета. Кожа утолщена, местная температура повышена, при паль-

пации сильная болезненность. Пораженную конечность животные держали в полусогнутом состоянии, хромота слабо уменьшилась, функция конечности нарушена, опирание осторожное, шаг укорочен. При движении животные щадят пораженную конечность. Аппетит удовлетворительный.

На двенадцатые сутки у животных отечность дисталыюй части выражена незначительно. При снятии повязки внутренняя часть ее влажная, дно дефекта в некоторых местах выполнено здоровой грануляционной тканью, которая покрыта тонкой фибриновой пленкой и небольшим количеством экссудата, у некоторых животных выявили островки мертвой ткани со следами гноя. По краям язвы дефекта виден тонкий эпителиальный ободок. Прилегающие ткани немного отечные, болезненность сохранена. Общее состояние и аппетит немного улучшились, у некоторых животных повышенная потребность в воде. Функция конечности восстанавливается, но после проводки появлялась незначительная хромота.

На шестнадцатые сутки больные заданный корм хорошо поедают. Дисталь-ная часть конечности приобрела нормальную конфигурацию. Состояние животных значительно улучшилось, большую часть времени проводят стоя. Хромота у одних животных отсутствовала, у других она была слабой степени. Полость язвы полностью заполнена грануляционной тканью красного цвета, при соскобе кровоточит, по краю язвы широкий эпителиальный ободок, прилегающие ткани подвижные, местная температура соответствует окружающим тканям. У некоторых животных болезненность сохранена, местная температура слегка повышена.

На двадцатые сутки животные бодрые, подвижные. Аппетит хороший. Хромота почти у всех животных отсутствует. При снятии повязки внутренняя ее часть в некоторых местах слегка влажная, дефект покрыт тонкой пленкой, при отделении которой нагноений не обнаружено, болезненности, и повышения местной температуры не обнаруживали, кожа вокруг дефекта складчатая, подвижная. У одной коровы поверхность язвы покрыта молодой роговой тканью, в дальнейшем лечении не нуждается. У остальных животных центральные части язв заполнены здоровыми ярко-розовыми грануляциями, им провели дополнительное лечение.

На двадцать вторые сутки все коровы контрольной группы выздоровели, функции конечностей полностью восстановлены. Животные охотно поедают заданный корм. В среднем период лечения коров этой группы составил 22,7 дней.

При лечении коров первой опытной на четвертые сутки общее состояние удовлетворительное, аппетит понижен, у коров отмечается повышенная потребность в воде. При снятии повязок внутренняя сторона их влажная, в центре дефекта мертвые клетки. Поверхность язвы покрыта тонким слоем фибриновой пленки, в некоторых местах небольшое количество гноя. Под пленкой сочные грануляции красно-розового цвета, эпителиальный ободок располагается по краю дефекта в виде отдельных участков. Кожа утолщена, местная температура повышена, при пальпации сильная болезненность. Опирание пораженной конечности происходит на зацепную часть, хромота слабо уменьшилась, функция конечности нарушена, большую часть времени животные проводят лежа. При движении животные щадят пораженную конечность.

На восьмые сутки у животных общее состояние и аппетит улучшились. Функция конечности восстанавливается, при проводке отмечается незначительная хромота. При снятии повязки внутренняя часть ее немного влажная, дно язвы выполнено здоровой мелкозернистой грануляционной тканью ярко-розового цвета. Грануляционная ткань покрыта тонкой фибриновой пленкой и небольшим количе-

ством экссудата, у некоторых животных выявили островки мертвых клеток со следами гноя. По краям язвы хорошо виден тонкий эпителиальный ободок. Прилегающие ткани слегка отечные, болезненность сохранена.

На двенадцатые сутки общее состояние животных хорошее, большую часть времени проводят стоя, заданный корм поедают охотно. Хромота у одних животных отсутствовала, у других она была слабой степени. Полость язвы полностью заполнена грануляционной тканью розового цвета нагноение отсутствует, по краю язвы широкий эпителиальный ободок, прилегающие ткани подвижные, местная температура соответствует окружающим тканям, болезненность отсутствует.

На шестнадцатые сутки животные бодрые, подвижные. Аппетит хороший. Хромота у всех животных отсутствует. При снятии повязки у двух коров дефект покрыт молодым рогом, в дальнейшем лечении не нуждаются. У остальных коров при снятии повязок хорошо просматривается рост молодого рога от периферии к центру, в центре здоровые грануляций, болезненности и повышения местной температуры не обнаружено, кожа вокруг дефекта складчатая, подвижная, им провели дополнительное лечение.

На восемнадцатые сутки все коровы первой опытной группы выздоровели. Функции конечностей полностью восстановлены. Животные бодрые, охотно попо-едают заданный корм. В среднем период лечения коров этой группы составил 18,1 дня.

При лечении коров второй опытной на четвертые сутки после начала лечения у животных общее состояние улучшалось, повысился аппетит. Некоторые коровы опирались на зацепную часть копыта, другие большую часть времени лежали. Отечность тканей вокруг дефекта спала. При снятии повязки внутренняя ее сторона слегка влажная в центре. Дно язв выполнено мелкозернистыми грануляциями розового цвета, покрытые тонкой фибриновой пленкой, при ее отделении у некоторых коров кровоточили грануляции, нагноений не обнаружено.

На восьмые сутки общее состояние коров хорошее, животные охотно поедают заданный корм. Хромота у трех коров отсутствует, у остальных слабой степени. Местная температура и болезненность отсутствуют. При снятии повязки внутренняя часть ее сухая, полость дефекта заполнена грануляционной тканью, рост равномерный, кровоточивости нет, окружающие ткани мягкие, безболезненные.

На двенадцатые сутки у всех животных аппетит хороший, жажды не отмечено, коровы большую часть времени находятся в движении. Функция конечности у всех коров восстановлена, после активных движений хромота не выявлена. Дефект покрыт молодым рогом. Четыре коровы выздоровели, одной провели дополнительное лечение.

На четырнадцатые сутки все коровы выздоровели, функции конечностей восстановлены полностью. В среднем период лечения коров второй опытной группы составил 13,3 дня.

По результатам эксперимента, можно заключить, что все апробированные средства и схемы лечения гнойно-некротических поражений в области пальцев у коров, при тщательной первичной механической и хирургической обработках, в конечном итоге, дают положительный эффект, однако сроки их выздоровления не одинаковы. Наиболее короткие сроки лечения оказались во второй опытной группе, где наряду с местным применением на язвы озонированного масла делали внутривенные введения озонированного физиологического раствора.

При фоновых исследованиях морфологических показателей крови подопытных коров всех групп установлено низкое содержание гемоглобина (79,6± 1,18 г/л в контрольной группе, 77,8± 1,94 г/л - в первой опытной группе и 75,4±2,03 г/л соответственно во второй опытной группе коров). Гематокритная величина также была ниже нормы и в среднем составила 0,3±0,02 л/л.

Во всех группах отмечалось незначительное повышение СОЭ - на 0,1 - 0,2 мм/ч., что свидетельствует о развитии местных воспалительных процессах.

При исследовании крови коров контрольной группы на 7-е сутки содержание лейкоцитов достоверно (Р<0,05) снизилось на 12,9%, тогда как остальные показатели не имели существенных различий по сравнению с фоновыми показателями крови.

В первой и во второй опытных группах на 7-е сутки произошли изменения всех морфологических показателей. Содержание эритроцитов достоверно повысилось (Р<0,001) на 5,3 и 11,5%, соответственно. Гемоглобин в первой опытной группе повысился (Р<0,02) на 10,7, во второй - на 18,4 %

Уровень лейкоцитов в первой опытной группе снизился на 14,4%, во второй - на 19,1%.

На 14-е сутки после начала лечения в контрольной группе количество эритроцитов и содержание гемоглобина увеличились на 9,4 на 14,1% соответственно (Р<0,01), тогда как содержание лейкоцитов и скорость оседания эритроцитов, напротив, снизились на 16,7 (Р<0,01) и 6,7% (Р<0,05).

В опытных группах количество эритроцитов повысилось на 16,7% и 27,7%, уровень гемоглобина - на 14,5% и 19,9% (Р<0,01), гематокритная величина - на 25,0% (Р<0,001).

В конце экспериментального периода (на 21-е сутки), количество лейкоцитов в контрольной группе по сравнению с фоновыми показателями снизилось на 33,3% (Р<0,01), в первой опытной - на 36,9% и во второй опытной группе - на 37,3% (Р<0,001). СОЭ соответственно - на 26,7% (Р<0,02), 33,3% и 43,8% (Р<0,001)

Содержание гемоглобина увеличилось (при достоверности Р<0,001) в контрольной группе на 11,9%, в первой опытной - на 17,9%, во второй - на 23,9%.

Увеличение количества эритроцитов и концентрации гемоглобина свидетельствует о нормализации организма больных животных, поэтому увеличение учитываемых показателей красной крови можно считать как активацию обменных процессов, а также нормализацию окислительно-восстановительных процессов не только в организме, но и в тканях пораженной конечности.

При исследовании лейкоцитарной формулы установили, что во второй опытной группе на 14-е сутки лечения количество сегментоядерных нейтрофилов возросло на 36,4%(Р<0,05) (сдвиг нейтрофилов вправо) при одновременном снижении на 17,2% лимфоцитов. Подобные изменения указывают на благоприятное течение заболевания.

На 21-е сутки уровень сегментоядерных нейтрофилов в контрольной группе возрос на 48, 1%, а содержание лимфоцитов снизилось на 19,4%, однако эти показатели являлись недостоверными Р>0,05.

При биохимических исследованиях сыворотки крови установлено, что содержание витамина А, кальция, неорганического фосфора, магния, глюкозы, а также белка и его фракций не имело существенных различий.

Однако в конце опыта в контрольной группе снизилось содержание общего белка на 10,7% (Р<0,05), у-глобулинов на 18,8% (Р<0,02). Тогда как в опытных

группах имелась тенденция к увеличению общего белка на 3,5 и 5,5%, соответственно (Р>0,05).Так как белки сыворотки крови регулируют кислотно-щелочное равновесие, участвуют в обмене веществ, переносят макро- и микроэлементы, витамины, выполняют защитную функцию организма, то повышение их содержания в сыворотке крови коров опытных групп говорит об улучшении общего состояния организма, а следовательно и скорейшего выздоровления больных животных.

Таким образом, на основании получении данных подтверждена высокая лечебная эффективность предложенного нами комплексного метода лечения.

ВЫВОДЫ

1. Полученный с помощью генератора «Бозон-Н» (НПП «Эконика» г. Одесса) озон является малотоксичным препаратом, не вызывающим гибели животных, как в острых, так и в хронических экспериментах и не влияющим отрицательно на их общее состояние, что по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» позволяет его отнести к 4-му классу опасности (незначительно опасные вещества). Он не проявляет местного раздражающего и сенсибилизирующего действия, не вызывает каких-либо изменений в структуре внутренних органов.

2. Разработанные методы оптимизации и методики проведения процедур озонотерапии позволяют более точно оценить реакцию организма животных на озон, скорректировать дозу и длительность курса лечения, а также планировать длительность курса озонотерапии при лечении заболеваний.

3. Для применения озонотерапии в ветеринарии предложены методы озонотерапии, которые, по оказываемому ими эффекту делятся на методики общего (системного) и местного действия. К методикам общего действия относятся: внутривенное введение озонированного физиологического раствора натрия хлорида с концентрацией озона 1-2 мг/л; большая аутогемотерапия с озоном; ректальная ин-суффляция озонокислородной смесью. К методикам местного действия относятся: применение озонированных растворов; наружная газация озонокислородной смесью; обкалывание патологического участка озонокислородной смесью; наружное применение озонированных масел.

4. Применение озонотерапии при лечении различных заболеваний у мелких домашних животных (собак и кошек) способствует коррекции нарушений гомео-стаза, позволяет значительно снижать количество вводимых лекарственных препаратов, сокращать количество дней лечения в стационаре на 5-7 дней, ускорять заживление раневых поверхностей в послеоперационный период на 4,3-5,8 дней.

5. Озонирующий физиологический раствор с различной концентрацией озона оказывает положительное влияние на показатели крови животных, снижая уровень лейкоцитов на 33,3-37,3%, СОЭ - на 26,7%, повышая концентрацию эритроцитов и гемоглобина на 13,3% и 19,7%, уровень общего белка и гамма-глобулинов - на 3,5 и 5,5%.

6. При местном применении медицинского озона у коров, с гнойно-некротическими поражениями в области пальцев репаративная регенерация носила характер субституции с замещением утраченных структур вначале на грануляционную, затем на фиброзную, а затем на рубцовую соединительную ткань, тогда как у коров при комплексном его применении - репаративная регенерация также носила характер субституции, но с элементами реституции частичным восстановлением структур кожи.

7. Комплексная схема лечения гнойно-некротических поражений в области пальцев у коров с помощью озонированного масла и внутривенного введения озонированного физиологического раствора, позволяет сократить сроки выздоровления животных на 4,8 дня по сравнению с местным применением озонированного масла и на 9,4 дня по сравнению с традиционными методами лечения данной патологии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1.В качестве комплексного лечения гнойно - некротических поражений копытец у коров использовать местное и внутривенное применение медицинского озона.

2.Полученные результаты по применению озонотерапии рекомендуются для использования в учебном процессе ветеринарных факультетов и вузов.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Хацкелевич, О.В. Озонотерапия в ветеринарной медицине /О.С. Ушаков, О.В. Хацкелевич // Вестник физиотерапии и курортологии. - 2006. - J\P> 05 -С.72.

2. Хацкелевич, О.В. Применение озонотерапии при воспалении наружного слухового прохода у собак и кошек / О.В. Хацкелевич // Вестник физиотерапии и курортологии. - 2006. - № 05. - С.87.

3. Хацкелевич, О.В. Расширение возможностей метода индуцированной хемилюмннесценции. Бозон - БХЛ /И.Е. Назаров, О.В. Хацкелевич II Общая реаниматология. - 2006. - Т. 2. - № 04/1. - С.306.

4. Самарина, Е.В. Быстрая фаза вспышки индуцированной хемилюмннесценции - новый метод оценки эффективности озонотерапии / И.Е. Назаров, Е.В. Самарина, А.Н. Иванов // Казанский медицинский журнал. -2007. - № 04. - С. 309.

5. Самарина, Е.В. Озонотерапия в ветеринарии / В.А. Антипов, Е.В. Самарина// Труды Кубанского государственного аграрного университета. -2009. - № 1 (ч. 1). - С. 255 - 256.

Подписано в печать 22.09.2013г Формат А5 60x841/16 Печать цифровая Усл. печ. л. 1,0

Заказ № 1861_

Типография «Световод» 350004, г. Краснодар ул. Калинина 134/2

бумага офсетная тираж 100 экз.

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Мищенко, Елена Владимировна, Краснодар

ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ КРАСНОДАРСКИЙ НАУЧНО - ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

На правах рукописи

МИЩЕНКО ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

ПРИМЕНЕНИЕ ОЗОНОТЕРАПИИ ПРИ ГНОЙНО-НЕКРОТИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИЯХ КОПЫТЕЦ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

06.02.04 - ветеринарная хирургия

Диссертация на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

00

0) Научный руководитель: доктор

2 со ветеринарных наук, профессор

СО ^ В.А. Антипов

Т— с\|

О -

СМ § Научный консультант: доктор

0 ветеринарных наук, профессор

И.А. Родин

Краснодар - 2013

СОДЕРЖАНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ 4

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................8

2.1 Обоснование применения озона в ветеринарной медицине 8

2-2 Механизмы действия озона на организм............ Ю

2.3 Лечебные и профилактические мероприятия при заболеваниях пальцев у крупного рогатого скота............ 32

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.......... 43

4. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ................. 51

^ ^ Состав, физико-химические свойства и способы получения

озона................................ 51

4.2 Токсикологическая оценка озона................ 54

4.2.1 Острая токсичность озонированного физиологического раствора......................... 54

4.2.2 Подострая токсичность озонированного физиологического раствора....................... 57

4.2.3 Определение раздражающего и сенсибилизирующего действия озонированного физиологического раствора. 59

4.3 Разработка методов проведения озонотерапии........ 61

^ ^ Влияние применения средств и методов озонотерапии на организм животных......................... 63

4.4.1 Изучение параметров средней скорости движения крови.............................. 63

4.4.2 Измерение сыворотки крови собак методом биохеми-люминесценции (оценка антиоксидантной активности

у собак)........................... 64

4.4.3 Применение процедур большой аутогемотерапии с озоном у кошек и собак.................. 67

4.4.4 Применение озонотерапии в гнойной хирургии..... 69

4.4.5 Применение озонотерапии при мочекаменной болезни

у котов........................... 71

4.4.6 Эффективность озонотерапии при лечении различных заболеваний у мелких домашних животных....... 73

4.5 Лечебная эффективность озона..................................77

4.5.1 Лечебная эффективность озона при лечении гнойно -некротических поражений у коров........................77

4.5.2 Влияние озона на показатели крови коров с гнойно -некротическими поражениями пальцев..................96

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ...... . 103

6. ВЫВОДЫ................................................................110

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ..................................112

8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ..............................................113

ПРИЛОЖЕНИЯ 129

ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

рН - водородный показатель;

ПОЛ - перекисное окисление липидов;

ОФР - озонированный физиологический раствор хлорида натрия; СГЭ - среднее содержание гемоглобина в одном эритроците; ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота.

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В связи с интенсификацией животноводства гнойно-некротические поражения копытец у коров встречаются довольно часто и составляют наиболее высокий удельный вес среди всех прочих заболеваний конечностей. Эти заболевания поражают большое количество животных, но чаще всего наблюдаются у крупного рогатого скота. Данная патология наносит весьма ощутимый экономический ущерб вследствие высокой частоты проявления и широкой распространенности, как в Российской федерации, так и за рубежом (Н.С.Островский, 1964; Чабановский С.Г., 1974; Мосин В.В., 1975; Санин А.Г., 1978; Шакуров М.Ш., 1983; Бороздин Э.К., 1996; Елисеев А.Н.с соавт., 2000; Назаров М.В., 2001; Родин И.А., 2002; Нег-rus S.F., 1958; Smith J.R., 1964; Amsron G., 1988 и др.). Убытки складываются из-за снижения продуктивности, живой массы, преждевременной выбраковки, замены животных в стаде и с расходами на лечение (Молоканов В.А., 1998; Лукьяновский В.А., 2003).

Актуальность изыскания способов и средств терапии гнойно-некротических поражений копытец у коров, несмотря на большое количество экспериментальных и клинических исследований, до сего времени остаётся острой.

Выше изложенное свидетельствует о потребности поиска и разработки новых средств терапии гнойно-некротических поражений пальцев у коров.

С рассматриваемых позиций значительный интерес представляет озон, широко применяемый в медицинской и ветеринарной практике как фармакологический агент (Антипов В.А., 2004).

Данная работа посвящена проведению исследований по разработке оптимальных параметров применения этого препарата при гнойно-некротических поражениях пальцев у коров.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является изучение, разработка и внедрение в практику ветеринарной хирургии

медицинского озона для лечения гнойно-некротических поражений пальцев у коров. Для реализации были поставлены следующие задачи:

• изучить параметры общего токсического действия озона на организм животных;

• разработать методики проведения озонотерапии в ветеринарной практике;

• провести исследования биологической активности озона на непродуктивных животных;

• изучить эффективность озонотерапии при гнойно-некротических поражениях пальцев у коров.

Научная новизна. В результате проведенных исследований дано практическое обоснование применения озона в ветеринарной медицине, определены его физико-химические и основные токсикологические характеристики. Разработан ряд устройств и методик проведения озонотерапии у животных при различных способах введения, аппаратно-программные средства, предназначенные для автоматизации и совершенствования параметров проведения процедур озонотерапии, а также диагностики эффективности озонотерапии. Установлен высокий уровень биологической активности и лечебной эффективности озонированного физиологического раствора при ряде патологий у непродуктивных животных. В условиях производства определена высокая эффективность применения медицинского озона при лечении коров больных гнойно-некротическими поражениями пальцев.

Практическая значимость. Для практической ветеринарной хирургии предложена комплексная схема лечения с использованием медицинского озона, обладающего высокой лечебной эффективностью при гнойно-некротических поражениях пальцев у коров. Ветеринарной практике предложены:

- прибор для экспресс-диагностики состояния баланса окислительной и антиокислительной системы, основанный на принципиально новом методе

регистрации индуцированной хемолюминисценции биологических жидкостей;

- прибор для принципиально нового метода проведения процедур ин-фузии ОФР, позволяющий точно измерять концентрацию озона в физиологическом растворе №С1 на этапе приготовления озонированного физиологического раствора, а также поддерживать заданную концентрацию все время инфузии приготовленного раствора пациенту.

Апробация результатов исследований. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ученых советах Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института в 2010-2012 гг., на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии», посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (г. Краснодар, 2011г.), на международной научно-практической конференции «Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения», посвящённой 90-летию со дня образования Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар, 2011), на международной научно-практической конференции, посвящённой 35-летию факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар,2009г.).

Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 5-ти печатных работах, 3 из которых в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Основные положения, выносимые на защиту;

- характеристика физико-химических свойств и способов получения

озона;

- токсикологическая оценка озона;

- биологическое влияние озона при различных методах введения на организм животных;

- результаты комплексного метода лечения при гнойно-некротических поражениях пальцев у коров;

Структура и объём диссертационной работы. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста в компьютерном варианте и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложений. Список литературы включает 131 источников, в том числе 20 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 8 таблицами, 14 рисунками.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Обоснование применения озона в ветеринарной медицине

История открытия, основные характеристики озона. История развития мировой озоиотерапии чрезвычайно богата именами, направлениями, историческими приоритетами. С момента возникновения и по мере развития этого метода осуществлены поистине революционные открытия. На протяжении более чем 100 лет этот метод используется многими авторитетными врачами при лечении различных заболеваний.

Работы по изучению лечебного действия озона продолжались до второй мировой войны. Н. К1еттапп (1921), применил озон для общего лечения "полостей тела". В 30-х гг. 20 века Е.А. Фиш, зубной врач, изложил свой богатый опыт применения озона в этой области в публикациях на итальянском, французском и немецком языках, а затем - в пятидесятые годы - написал обширную диссертационную работу на основе этого материала. Фиш начинает лечение озоном на практике, и Пэйр (1932), становится его пациентом, на котором применен этот метод, а затем сам активно использует озон для лечения гнойных ран. В заявке на изобретение первого лабораторного прибора Фишем был предложен термин "СУТ0201Ч", который и сегодня значится на генераторах озона, используемых в зубоврачебной практике. Йоахим Хэнзлер (1908-1981), создал первый медицинский генератор озона, который позволял точно дозировать озоно-кислородную смесь, и тем самым дал возможность широко применять озонотерапию. Р. АиЬог§ (1936), выявил эффект рубцевания язв толстой кишки под действием озона и обратил внимание на характер его общего воздействия на организм.

Работы по изучению лечебного действия озона во время второй мировой войны активно продолжались в Германии, немцы успешно применяли озон для местного лечения ран и ожогов. Однако после войны практически на два десятилетия исследования были прерваны, что обусловлено появлени-

ем антибиотиков, отсутствием надежных, компактных генераторов озона и озоно-стойких материалов.

К началу 70-х гг. стало ясно, что антибиотики не способны в полной мере решить проблему гнойно-септических заболеваний. Признание этого факта послужило толчком к разработке методов озонотерапии на новом научном и техническом уровне. Обширные и систематические исследования в области озонотерапии начались в середине 70-х гг., когда в повседневной медицинской практике появились стойкие к озону полимерные материалы и удобные для работы озонаторные установки. Интерес к озонотерапии усиливался по мере накопления данных о биологическом действии озона на организм и появления сообщений из различных клиник мира об успешном использовании озона при лечении целого ряда заболеваний.

В настоящее время озонотерапия широко используется во всем мире, особенно в Германии, России, Швейцарии, Кубе, Италии, Франции. В США многие частные ассоциации врачей обратились к изучению данного метода при лечении СПИДа. Ганс Вольф и Зигфрид Риллинг в 1972 г. учредили Германское медицинское общество озонотерапевтов и разработали его устав. Вся врачебная и исследовательская деятельность Вольфа была посвящена озону. Он имел множество публикаций, посвященных озонотерапии, и был неутомим в деле распространения метода по всему миру.

В ноябре 1973 г. основан Международный институт озона как общественно-научная и просветительская организация. В 1979 г. начинает работать Международное медицинское общество озонотерапевтов. В настоящее время ассоциация широко действует, активно проводит международные конгрессы, в которых принимают участие врачи разных специальностей из таких стран, как Германия, Австрия, США, Куба, Россия, Франция, Италия, Япония. В 1983 г. создается Ассоциация озонотерапевтов Италии. В последние годы в России идут активные исследования механизмов действия и эффективности технологий применения озона в медицине. Под руководством академика АМН СССР Б.А. Королева группой ученых (Г.А. Бояринов, А.Н. Монахов,

Д.М. Зеленев, А.И. Тарасова) ЦНИЛ Нижегородского государственного медицинского института разработан новый метод озонотерапии - интрасосуди-стое введение насыщенных озоном растворов.

В октябре 1977 г. был проведен первый эксперимент на собаке по обоснованию данного метода, а в апреле 1979 г. впервые в мире озонированный кардиоплегический раствор был введен в коронарное русло больной при операции врожденного порока сердца.

В ноябре 1986 г. впервые проведено озонированное искусственное кровообращение у больной во время протезирования митрального клапана. В ходе изучения нового метода и технических средств использования озона были разработаны методические подходы парентерального применения озонированных растворов при проведении трансфузионной терапии, обработке переливаемой консервированной и аутокрови больных в послеоперационном, постреанимационном периодах. Был раскрыт ряд важнейших механизмов, определяющих патогенетический эффект озонотерапии.

Основными центрами исследования и внедрения озонотерапии стали Москва и Нижний Новгород. С 1994 г. в России действует Ассоциация российских озонотерапевтов, объединившая единомышленников этого метода со всей России, которая широко внедряет технологии озонотерапии в практическое здравоохранение. В Москве это В.А. Максимов, В.Я. Зайцев, Н.М. По-бединский, В.М. Зуев, O.E. Колесова, И.Т. Васильев, Н.П. Лебкова, А.З. Змызгова. И.И. Белянин, С.Д. Разумовский, в Нижнем Новгороде - Г.А. Боя-ринов, С.П. Перетягин, С.Н. Горбунов, К.Н. Конторщикова, А.Н. Серова, В.Ю. Шахов и многие другие.

2.2. Механизмы действия озона на организм

Озон - один из наиболее сильных окислителей (гораздо сильнее обычного кислорода). Он окисляет все металлы (за исключением Au и платино-

вых), а также большинство др. элементов. При действии на некоторые неорганические и органические соединения образует озониды

Озон образуется в процессах, сопровождающихся выделением атомарного кислорода, например при разложении перекисей, окислении фосфора и т.п. В промышленности его получают из воздуха или кислорода в озонаторах действием тихого электрического разряда при низких температурах. Сжижается Оз легче, чем О2, и потому их легко разделить.

Сильные окислительные свойства озона позволяют использовать его при получении многих органических веществ, для отбеливания бумаги, масел и т.д. Озон уничтожает микроорганизмы, поэтому его применяют для очистки воды и воздуха.Однако в воздухе допустимы лишь очень малые концентрация озона, т.к. он чрезвычайно ядовит; предельно допустимая концентрация озона в воздухе 10%.

Озониды, один из видов перекисных соединений. Неорганические озониды, например КОз, характеризуются наличием молекулярного иона 0~3 — (озонидный ион). В органических озонидах группировка Оэковалентно связана с двумя радикалами, например:

ягс—0—СНЯ), '-0-0-'

Согласно литератупным данным механизмы действия озона на организм следующие:

1. Бактерицидное и противовирусное действие. Бактерицидное действие озона распространяется в отношении всех видов Грамм "+", Грамм "-" флоры, так же в отношении грибов и простейших. При этом, в отличие от многих антисептиков, озон не оказывает разрушающего и раздражающего действия на ткани, так как клетки многоклеточного организма имеют антиок-сидантную систему защиты. Непосредственной причиной гибели бактерии при действии озона является, во-первых, локальное повреждение плазмати-

ческой мембраны в процессе озонолиза двойных связей, во-вторых, нарушение функции органелл за счет действия вторичных окислителей.

Обнаружено проникновение озона внутрь микробной клетки, вступление его в реакцию с веществами цитоплазмы и превращение замкнутого плазмида ДНК в открытую ДНК, что снижает пролиферацию бактерий. Эффект озонированного растительного масла обусловлен наличием озонидов. Полагают, что за счет кислородной связи озонид ненасыщенной жирной кислоты соединяется с рецептором для микроорганизмов и блокирует его. Наибольшим бактерицидным эффектом обладает масло с пероксидным числом 2,5-3 тыс. Но даже при разведении масляного раствора в 10, 20, 50 и 100 раз оно сохраняет стерилизующий эффект в отношении микроорганизмов. Установлено также повышение чувствительности бактерий к действию антибиотиков и белков системы комплемента н�