Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА И МЕТОДА «ПОСРЕДНИКА» ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ УСТОЙЧИВОСТИ К ВИРУСУ ТАБАЧНОЙ МОЗАИКИ И ПЕРЕДАЧИ ВИРУСОВ СЕМЕНАМИ У ТОМАТА

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА И МЕТОДА «ПОСРЕДНИКА» ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ УСТОЙЧИВОСТИ К ВИРУСУ ТАБАЧНОЙ МОЗАИКИ И ПЕРЕДАЧИ ВИРУСОВ СЕМЕНАМИ У ТОМАТА"

JL-Z9W-

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ имени К. А. ТИМИРЯЗЕВА

На правах рукописи АДНАН МАХЕР ОСМАН

УДК 635.63.632.38

ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА И МЕТОДА «ПОСРЕДНИКА» ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ УСТОЙЧИВОСТИ К ВИРУСУ ТАБАЧНОЙ МОЗАИКИ И ПЕРЕДАЧИ ВИРУСОВ СЕМЕНАМИ У ТОМАТА

Специальность 06.01.11 —защита растений от вредителей и болезней

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 1989

1 сйиОЯ&Г

0

Работа выполнена на кафедре фитопатологии Московской ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева.

Научный руководитель — кандидат биологических наук, доцент В. А. Шмыгля.

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Ю. И. Помазков, кандидат биологических наук, доцент М. И. Дементьева.

Ведущее предприятие — Всесоюзный научно-исследовательский институт селекции и семеноводства овощных культур.

Защита диссертации состоится « 1989 г. в часов «0<?» минут на заседании специализи-

рованного совета К 120.35.03 в Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева.

Адрес: 127550, Москва И-550, ул. Тимирязевская, 49. Ученый совет ТСХА.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ ТСХА.

Автореферат разослан ..... 1989 г.

Ученый секретарь специализированного совета —

доцент

Н. К- Торянская

ОНЦИЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. РАБОТЫ" • , "

:;' -Актуальность теш:,Необходимым условием■ оДхЬективной-.за- :: •: щиты растений от вирусных заболеваний является ранняя-и точная -. диагностика зараженности растений, семенного и: посадочного ма- -териала -»важная часть селекции.и семеноводства многих - куль- - -.: тур. ' Решение этой- задачи, возможно при условии применения шсо- • '<кочувствительных и достоверных и вместе с тем,■простых и доступных для практики1 методов обнаружения вирусов; " -.. ; . • . < ■ • Большая роль в решении этой задачи принадлежит- методам -. . .иммунодиагностики, вследствие, их- доступности: и быстрого полу-.чения результатов.^ Наиболее чувствительным из них является•им--• муноферментный.анализ /ИСЕА./,.'обнаруживающий вирусы даже в очень; -низких концентрациях,: это позволяет Iрезко повысить" достовер- -'.ность диагностики зараженности растительного материала. Однако .» возможности ИЗА: используются';в практике селекции и семеноводства далеко- не полностью. В частности, не реализуется одно из его важнейших преимуществ' перед другими методами диагностики * -.возможность получения количественных результатов.' Кроме того,-. '■ известно^ что достоверность-отрицательных результатов ИФА отио-|сительна,' поэтоьяу продолжаются■ поиски■ методов,."шявляюп{их. зараженность 'испытуемого образца независимо от концентрации .вируса >',в нем*:Одним из таких; мет одов^явгается метод ."посредника"-' т.-■ /Шшгля В.А., - Макаев С.Щ.', 1985/. ■ Настоящая работа1 посвящена : -а испытанию И®.:для определения типов и степени-устойчивости;то-- -- мата к вирусу табачной мозаики /Вта/-и прменегом метода "пос- . редника" для обнаружош'Л.перода'ш* некотор:«: трусов сссена;/.« томата. * -

центр. С.:

'р. Г> . Е 'V

Г«*«^*»« И.....«•.«*

ачад. \м. ь:. 1..

7-1 !

л. „.и

*• Оба вопроса исследования представляют практический:инте-рес для селекции тсмата на" устойчивость к ВТМ и. для вырази в а-" ния семян этой-культуры,-свободных от вирусных инфекций.1 •.

:■ -, -" ДЕЛИ И ЗАДАЧИ - ИССЛЕДОВАНИИ -'' Цели-исследований состояли в разработке способа количественной оценки типа и•степени устойчивости, селекционных образцов томата к ВТМ,. а также.- в испы тании метода, "посредника" для.обнаружения- передачи некоторых - • вирусов семенами томата.' В. работе • были поставлены' следующие ■■ задачи: " "

.:■■■■■ , I. Испытать пнмуноферментный анализ для количественной оценки устойчивости исходных и селекционных образцов томата •■.■,■■ к ВТМ и разработать рекомендации по методике такой оценки. '

-'.2.. Провести испытание метода .."посредника" для обнаружения передачи вируса -табачной, мозаики /ВТМ/, М-вируса картофеля ,. г ■ /МВК/ и-вируса бронзовости .томата /ВЕТ/'семенами томата;

: ' • ' 'НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ' ЦЕННОСТЬ ИССЛЕДОВАНИИ.. Ь

1. Впервые.показано, что имцунофермоптлый-анализ может быть применен для оценки:относительной устойчивости к ВТМ исходных,• гиоридных:образцов,томата,, при отом достигается-значительно . ... большая, точность и достоверность. .

2. Метод - -'посредника" гсжет :быть использован для исследований.. семенной • передачи вирусов, а' также для контроля зараженности •-.:■■ партий семян. - , ' . „,

3. Впервые установлено, что М-'вирус картс4еля^и'вирус Оронзо- • вости^томата передаются семенами тсмата. .....' ■ •>••.-.: ;

■. АПГСПАЦ1Ш РАБОТА: Результаты исследований, доложены на-цауч ной конференций ТСХЛ/декабрь 1988 года/;

" ОБЪЕМ РАЮТЫ.- - Диссертационная "тебота -изложена на 122 - ■ . страницах.машинописного.текста, включает'23 .табллзи-и 2 рнсун-,:ка. Она состоит из введения,...5 глав» • выводов-и. практических . рекомендаций. Список использованной литературы включает 172_ • наименование. — • .■ • - - • ••.- ■ • - - .- -• / ■ . .

I. УСЛОВИЯ И МЕТ0ДШ1 ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ.

- -Исследования, выполнены-в 1986-1568 гг. в .лаборатории': ■ защиты растений ТСХА. ■ . ■ ■ • . • .: - ■

' ' ' 1Л." ПРОШЕНИЕ 1ЕА да ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИ ТОМАТА ■ К ВТМ Анализировали образцы, гомозиготные и гетерозиготные по генам ■ Тт-2 и Тщ-2 , а также'без -генов устоЯчивостпк ВТМ /для. сравнения/ из. коллекционных иселекционных, плтошнков Молдавского НИИ овощеводства и Лаборатории овощеводства.ТСХА.. Частьпоследа ванных образцов в предшествующие годы.прошла проверку-на-устойчивость к ВТ.М по суще с т вуп.'^е й методике./механическая инлкуля-ияя и визуальная-диагностика зараженности/.- В год анализа большинство образцов'было инокулировано ВТМ в молодом возрасте . - , /семядольные листья— два настоящих листе/. ' :'..- . --

.- - : Инокуляцию .проводили с применением карборунда,-- растения : ■ • выралу1вали- в зиших-и весенних'теплицах. Растения до инокуляции выдерживали в.темноте в: течение суток с целью повышения о-[уек- ■ тивностн заражения.. У- растений предназначенн'Л для инокулялзш-по два листа припудривали порошком карборунда, затем наносил:! , инокулвк.и растирали его

по поверхности.листа кусочком поролона. Инокулш готовили из---листьев турецкого-табака /N.cotiana tabaeum L /, сраженного • : обычным /зелёным/■штаммбм В1М. , - , -

. -:Кз листьев .отжимали- сок ручным прессом,- в -емкости к выжатому.соку добавляли стабилизирующий раствор'/Й^ Д1ЭКА.-//а/ для МВК и ВБТ.-Для ВТМ стабилизации, инокулша.не требуется, т.к.. . етот-вирус длительно сохраняет инфекционность в соке. ...-■.,

• ! Инокулироваяше растения. затеняли в течение. суток, - затем -, ■содержали при рассеянном свете и температуре-18-25°. - . ■ - -. - . --.••'■ ■ _ В МШИО листья для И<Ь\ отбирали'.в защищенном грунте".в фазе начала созревания плодов первой кисти; т.е. примерно'через два ■месяца после инокуляции. * ^ ;

- -В открытом грунте - в фазе .цветения первой кисти,.т.е. ,.'.. ■примерно через полтора месяца после инокуляции» : чг,

■: При-оценке образцов в теплицах Лаборатории защиты расте-. ний ТСХА. пробы";листьев отбирали-в фазе цветения первой кисти,-.; т'.е. примерно через I месяц, после инокуляции.• - - •'>.-.

-. .Bo Dcex случаях от 2-4 растений каждого, образца отбирали :; по одному нормально развитому сложному-листу среднего яруса. !■' Сок выжимали отдельно^ из каждого листа, разбавляли буферным . . раствором, -затем вносили в лунки аналитической-платы для И2А'.

.....- Иммуноферментшй анализ проводили по методике "сэццвич- ..

варианта" /.Clat-L. M.f, Adams KM ■ ,1977- г./ в модификации ; v ' "micro ELt&A - ", / Eichte*- 3, еЬ at ,1981, Re.henbäher D, • 1984/, с применением ко1шогатов,- меченных, перексидазой.:Результаты получали с помощью автоматического рвдера Oynalech МР-6С0 при-длине волны 490 ¡ct. В катдой серии-анализов было два контроля: сок-здорошх растений /отрицательный контроль/ и сок рас-

тений, заведомо зараженных диагностируемом вирусом /положи- -тельный контроль/. . , . *

• . Для достоверного разграничения фоновых значений абсорбции /Л^дд/ и положительных результатов применяли следующую формулу Р = X + ЗЕ / ■ Сазрег .им/,, где . ' ■ ■

.• - Р: - порог, достоверности положительных результатов; . • -■ Х - среднее ¡значение А^^д;отрицательного контроля:/здоровый материал/; - 1 ■

' ЗЕ - тройное - значение■максимального отклонения А^дд от среднего в ■ отрицательном контроле. Все значения А^од выше Р считаются положительными результатами. -

■ При оценке устойчивости селекционных образцов'томата к ■ .В2М с применением Ий\ получали не менее 4 значений-А^дд для коддого образца. Все.образцы, проанализированные в одной серии т.е.■в-одном.возрасте, при одинаковых¿условиях вегетации, сроках инокуляции и анализа, ранжировали в"'порядке возрастания максимальных значений А^од для каждого образца. Полученные.ва-.риационные ряда анализировали'статистическими "методами с целью определения порога положительных результатов /Р/ и разделения образцов на группы по.устойчивости к ВИЛ. В■тех случаях, когда результаты И*А. сока здорового табака оказывались выео; чем у -первых образцов серии,% в качестве отрицательного./здорового/ , контроля брали значения ИИ., первых трех или четырех: образцов ■■;"> вариационного ряда. . , -

• : ..*.: Для разделения' серии на- группы' по • устойчивости все полу-.....

"ченные значения А^дд подвергали дасперсиошюму^ анализу помето дико много$акторного опыта /Доспехов Б.А., 1901/. ;

......Полученные при этом значения контроля и НСРдд - слу«;ли

критерием для:определения границ между группами по устойчивое-, ти: . .. - . ' • , • , -

1-я группа - максимальные значения Л^од не выше X + ШСР^;

2-я группа - максимальные значения А^эд не.выше.X + ЗНСРд^;

3-я группа - максимальные значения А490 еь216 X + ЗНСРо^

В некоторых окытах била;применена другая .'схема: по"2-4 растения каздого, образца оставляли без инокуляции, выршцивали до анализа в тех ле условиях,' что . и; инокулированше растения V и анализировали'в' один день. Значения И2А обрабатывали статистически по каздому образцу в отдельности по модели однофактор-ного опыта, где контролем служили неинокулированше растения. В отом случае'¿образцу оценивали как по величине максимальных .■■. значений И5А, ;так и.по соотношению.фактических различий А490 инокулировашшх и неинокулированшх растений с НСР^. -

1.2. ТРАНСПХАНТАЩМ ПРОРОСТОВ'« £РАПЛЕНТОВ ТКАНИ НА. ::. ОТДЕЛЕННЫЕ ЛИСТЬЯ ТСШ.ТА II ТАБАКА' /метод ' " "ПОСРЕДНИКА"/.

■ 1 Трансплантация живой растительной ткани на системно-восприимчивые растения позволяет диагностировать крайне низкие; концентрации или неактивные формы вирусов, недоступные для дру' гих методов диагностики вирусов в растениях, в том числе в то-, матах. В трансплантационной системе происходит активизация вируса и размножениелего в клетках системно-восприимчивого растения -с образованием типичных вирусных-частиц .с обычными свойствами. Через некоторое время вирус может быть обнаружен в рас-.теник-акцепторе сравнительно простыми методами. - ;:

■ В наших опытах прИ'Иэучении передачи семенами томата М-ви-

руса картофеля /МВКЛш использовали ■ листья томата сорта Не в-«' скийи табака Дебни /М>соЪапа е1еЬпеу|, Оопип, оба растения вое--. приимчивы к вирусом Н- И: Й .-картофеля/. Для изучения-семенной ; передачи вируса бронзовости томата1/ВБТ-Л-- листья махорки . • 7М;соЬапа ^гЬса Ь /,.семенной-передачи ВТЛ - - листья турецкого табака / N. ЛаЬасит . и /■. Растения томата и табака выра-: 1цивали в изолированных"боксах теплицы Лаборатории эолиты расте ний ТСХА. в вазонах со смесью торфа, порогноя и песка. В осенне ■ зимний. период. растения досвечивали лампами "ДРЛ1М00. тают образ см, чтобы световой период составлял не менее 16 часов. Для-•трансплантации использовали растения,-здороше по внешнему "виду ,:и' проверенные серологическим методом ■• на чотсутствие вирусных инфекций. Семена томата, -. служившие подопытным- материалом для. •. .изучения семенной передачи', были получены от • растений,' заражен них соответствующим вирусом /МШ, ВБТ. или ВИЛ/. Проростки выращивали в чашках Петри на влажной фильтровальной бумаге или в перлите. Для диагностики зараженности взрослых, растений исполь зовали черешки листьев. " --''•-.„'

* МЕТОДИКА' ТРАНСПЛАНТАНТ!.}. Для: .трансплантации. от бирали молодые" полностью развитые листья среднего яруса от растений до цветения. Проростки, томата для трансплантации брали в фазе1пол ного < развития семядольных -листьев, затем срезали,у корня, под-семядольное колено клиновидно -заостряли.. На листе акцептора у основания:пластинки делали - Т-образный надроз.и.в продольную :'• .часть надреза вставляли заостренную часть проростка или.черенка. После трансплантации листья с'трансплантантами раскладывали • в: лотке на влажную фильтровальную бумагу, накраваяк. стсклсм и'инкубировали.12-15 дней при .нзпрерывном освещении яоминисцсн

тными или .'ртутными лампами .с интенсивностью около '4000;Лк.

' Контроль - листья тех же растений-акцепторов без транс-плантации,после инкубации листья анализировали с помощью ка-" пельного метода на зараженность МВК или ВИ.1. БЕГ диагностировали путем механической инокуляции соком"листьев-- "посредни- ' ка'.'. молодых,растений махорки / N илаЬ са, I- /. При наличии инфекции'в используемом" материале на инокулированных растениях появлялись типичнее признаки .ВБТ: ■крупные-некрозы на инокули-. рованшх листьях, хлороз, затем" отмирание верхушки.

2. РЕЗУЛЬТАШ ИССЛЕДОВАНИЙ .

гл. оценка устактссш тшата к втм с''помощью иа.;

, . С целью.определения типа устойчивости томата диагностировали.ВШ в растешшх.трех гибридов томата: ЗопаЫ : . ;

Русич; Р1 Карлсон.с/генотипом устойшшости.к'ВШ через I ме сяц после механической¡инокуляции.результаты опыта, приведенные в.табл. I, показывали* существенную'разшщу между-средними значениями А^дд в неинокулированном /контроле/ и, в-варйанте с,. 'инокуляцией. Это означает,. что в растениях испытанных гибридов развивается системная инфекция,"хотя и при шизкой концентрации ,вируса в тканях и отсутствии.симптомов.заболевания. Исходя из: этого можно, считать,." что .многие образца с генотипом Тт ' , . /Тщ -2^ практически устойчивы' к ,В1М, но .не по типу относительной "устойчивости с торможением распространения и накопления ви • руса в-растешшх. Следует отмотить .также',, что у: некоторых ино-, кулировшшых' растений всех трех гибридов значение А^дд5вьео;по рога положительных результатов"/Р/,-считая отрицательным контролем неинокулированные растения.

( Таблица I ,

'Результаты диагностики В1М в тибрадах томата методом.- : /инокуляция в возрасте семядольных листьев,, анализ • через I месяц после инокуляции// " " ' '

, . Гибрид, .. генотип

! ^Варианты

- Среднее

значение А

'490 <

Р05

„' I 0,083

Тт -2^/Тт -г2 2 0,100

Русич - \ I " ' - 0,016

Тщ"-2^/Тт -I ^ . • 2 , 0,098

FJ Карлсон ' , . I - 0,018

Тт -22/Тт -г2 2 0,091

0,011

0,030

• 0,025

I - Контроль, без инокуляции; ,

2-е инокуляцией В1М. 4

• -.•••• В таблице-2.приведены результаты и1а, 8 селекционных образ цов МНШО. Образцы .ранжировали по возраставщм максимальным. значениям А^дд,1 затем определили порог положительных: результатов'/Р/. Значения И5А. первых трех образцов полученного , ряда считали отрицательно /здоровым/ контролем. ' _

- 1 'Дисперсионный анализ полученных'результатов;дает возмож-, ность "условно разделить- все образцы, испытанные в-отой серии,-на'группы по степени"развития инфекционного процесса; а следовательно - по уровню относительной .устойчивости .к^ВхМ на три ;

- 10 -

. Таблица 2. • .

Результаты диагностики ВШ методом IHÁ- в образцах • томата-для отбытого -грунта'МНИИ0' /1987. г./ ¡ г -

Генотип! ЗНаЧ6Т А^90 - •г ?; ¡сроднее;макси- j. | }мальное|..

• K5/N1?-i Номер- }

• п/п j образца} Происхождение

I 531 Радуга-

2 " 554 ■ F3 Порыв X • Стандарт.

3 565 К 19/1986

4 730 S-12/ПКР/'

5 727 sanlapie^e: mejorada.

6 731 .■ -Салют -■ - Крымекий-12

7 ' 63? Wovosadilci-Dabuca»-

8 ' 598." íVj Ставдарт-.- X Планета- ."

. - . 0,008 .0,013 . . . Т,п I/+ . 0,034 ; . 0,026 ; I. группа

- ' 0,011 0,013 "0;099 0,106. +/+ 0,081 • 0,109

, 2 группа

+/+ 0,105 , 0,123'

0,102 0,134 3 группа

\ /К-/ - 0,024 о.о; Р. - 0,075 .o.'cí'*HCPq5 -.0,030 о4с.. -

группы: . - - •

I группа:. /К-/ + I НСР05: --высокая относительная устой-

чивость}

. 2 группа: Л <• /К-/ +-3 НСР^д■- средняя -относительная устойчи-■

• - ^уо ... <■ • - вость; • . .'<-..

■ 3 группа: А > /К-/ + 3 HCPqq - 'слабая устойчивость и- воспри--

. Ч9о ' - ■ •

имчивость.

/ ■ Разумеется,; что ото--, один.из многих.возможных .вариантов разделения вариационного' ряда. Результаты, представленные-в ■ ' таблице 2, показывают, что наибольшей устойчивостью обладают' образцы первой": хруппы ,-/• 1Р 531,- 554- и 565/; однако 'мевду, образцами 3-ей-группы и двумя образцами второй.группы нетьсу^ест- ; ; венной. разницы,': поэтому более - целесообразно; в данном^ случае: - -.•разделить все ^образцы на две.-группы: со значением А^эдгшже И: •выше'Р. Небольшое, количество образцов,- испытанных в этой серии .не дает возможности проследить. распределение генотипов 'по: ь группам -устойчивости,•однако образцы•554 и 598 с одинаковым генотипом устойчивости Т»п -1/+. оказались в разшх группах - . гаже, и ЕН20 порога положительных результатов ." По-видимому, устойчивость определяется не!только тремя известными-гонами,- но 1 и другими наследственными факторами," " * . -.

'■.-».-;-.)- В таблице 3 приведены -результата -диагностики ВТМ методом * И2А- в -19 образцах ШСШО.: Болыишство испытанных о бразцов показали результаты ниже порога•положительных результатов. Устой-: чивкми к ВШ можно считать 12 образцов со значением МА'от, , 0;027 до'0,065 о.ед., но наиболее устойчивыми следует считать три образца, ; с максимальными значениями„ ИИ - от. 0,027-до. 0,010;: о.ед.,- существенно но отличаю:цимися. от-"отрицательного.контро- V • ля /0,032 о.ед./. , ' , ч . .

Образцы с"кжотипом-устойчивости имеются во^всох трех' -.:,--. группах;"Iа'воспрпгмчишо-образвд только, во,2-й и 3-й группах./ Эти результаты -дают основшшо считать,\что-образцы,. гомозигот-:шо по тонам ?т -2 и Тт -г2, - не всегда-являются достаточно, устойчивыми' к ВН.'

Результаты диагностики ВТМ; методом И£А в образцах томата для заученного грунта / ЫШИО, 1988 г. / -

Показатели

Значения

, Л490 /от. - до/

-Количество -образ--цов ■ -

В том числе:

с гено-;без ге' типом. }нов ус Тт-2 / ¡тойчи-

Тш-2 |вости

•}гено-■¡тип не-¡извес-. j тен

' .В с е т .о ". , . 0,027-0,249. образцов, в т.ч.-:

A49q'< Р' - ' 0,027-0,065

а490

> Р

0,074-0,249-

Группировка образцов по резуль-■татам-ИФА. * -

1 группа..... , .'.

- < VK-/+I HCPQ5 0,027-0,040

2 группа .

< /К-/+3 ШР05" ■ О,»14-0,065

3 группа .- . ■ . - : >VK-/-t3 НСР05 - 0i0?4-0,249

19"

12 7

;ii

б 5

3 - 3

9 - '3

I I*

I I

б:

5 I

. !\ ./К-/ >= 0,032 o.e.; Р - 0,068 o.e.; HCPQg - O.Oir.o.e. . :.

В таблице 4 продстшзлены результат диагностики-ВШ методом И®, образцов MIEIiiO для защищенного грунта после' искусственного- хзаражения. - . , .... > . .т....

.:■■- -У образцов первой .группы значения A^qq не превышают 0,032 о.ед../высокая относительная устойчивость/, ко второй ■ -

- Результаты' диагностики B3.I методом.И®, в селекционных „образцах МНИИО'для залащенного грунта после искусственного заратения /1987 г./

Показатели

Значения

■ а4уо /от- до/

.Коли-.j - -В том числе": - .•■■"••

гено-;боз re-jrato- . ■ tinn.-¡типом' ч нов .ус-¡тип не. !„ р2, ¡тойчи- ¡извес-:

ой jBOCTII', j тон -

- - I T. i i

Всего образцов, • ' . ■

в-том числе: ■ ' " Г . . . . . -18

А490 < Р" ' ' 0,013-0,011 8 А450 > Р 0,013-0,231 .10

Группировка ^образцов по резуль- • • 7: - ■ татем ИФА ■ ... - .,.'.-■ : •

1 группа..;. ■ . ■ . ■ -. - -•< /К-7+1 НСР05 ' 0,013-0,062 6

2 группа , ■ : ■ '-'.■-.■

-' < /К-/-(З НСР05 - -0,013-0,054 -5

3 группа . ■, ■- ■ V ■ - -

• > /К-/-+3 ШРоз . 0,096-0,231 7

10 I . 7 4-4

б I . 3

■"■:.'/К-/..-" 0,017 -о.ед.;: Р = 0,041-о.ед;; НСР^ = 0,016 о.ед

группе /средняя относительная устойчивость/ отнесены образцы, ■ у которых максимальные_значения А^дд составили от 0,036 до 0,05-1 о.од. •; . ■■■■-•. . ■ ..

■ -Наиболее слабую-устойчивость и-восприимчивость показали - ,

гибриды:3-группы, где: максимальные значения А^дд составили от* О,096 до, 0,231 о.од.. Все„обр'азцы;3 группы;показали-достовер-;ше положительные.результаты И5А. Это * означает,-что концентра-ция:вирусного антигена в их соке достигает.значительного уровня, поэтому все они,-включая 4- образца1с генотипом Тт-2^/ Тт ~2?i не-могут считаться^устойчивыми' к ВШ.-vnJ

. " В таблице 5 представлены;результаты, диагностики ВТМ в серии исходных и.гибридных образцов.Лаборатории' овощеводства■ : -ТСХА. ' ' ' ' - " _ _

- - . Как. видно из таблицы;, диапазон максимальных:значений . • *490 составил.от.0,020"до 0,0469.о.ед., причем образцы в начале i и в кищо этого ряда- имеют одинаковых генотип по -устойчивости к BUl - Тт -&/Т m-2~.«Этот.же генотип имеют 13■образцов из 17,' из них больсо половины /8/. показали.результаты:И®А'ниже Р /0;052 о.е/." Из трех образцов .без генов устойчивости один - • /2464 - Марк/ по результатам И£А. оказался в .í-ой. группе /высокая относительная устойчивость/' и два ■ образца-72438' и Z\41/ •в 3-ей-грулпе,/низкая устойчивостьвосприимчивость/.ч: , • " ' Таким-образом,/и в этой серии образцов прямая;связь меж-;; ду генотипом- и*степенью относительной устойчивости^ к-BIM'от-сутствует. ¡ , > \

В таблице. 6 ¡приведены результаты HÍAсерии .29,образцов после ыехашгческой инокуляции В2М.- . ь -

/ ;Данные ■ показывают,' что почти половина образцов с гонотит пом Тт -2?/Тт'-2? показали положительныеj результата И£А," при í отом мппмальше и максимальные значешш A^qq у образцов с • этим генотипом' раз лгааютсл болоо,чем • в 6 * раз:/0,0250,155 ^ о.од./. v / '

Результаты диагностики ВШ в образцах томата . Лаборатории овощеводства ТСХА. /инокуляция ВТМ/ "' 1987 г. * ,

1 ",."■.--г

■.."!.■■■ ■ о- .г

Показатели • J- /от - до/ i. - i ! -

Значения А,

Коли-> чество образ" цов

В том числог

с гоно-j без тетином j нов ус-

Т^-22/ iT0ll4M-

I . • •. о .' teo'

I р-22 I .

вости

гено-. тип неизвестен -

Всего..образцов. -в том числе

-0,020^0,469 17

М90 *490

< Р > Р'

,0,020-0,047 0,054-0,469

Группировка об- . ;разцов по результата ИФА."-

1 группа*

< /К-/+1 HCPQQ

2 группа ,

< /К-/чЗ HCPQQ

3 группа .

> /К-/чЗ HCPQ5

"0,020-0,032 0,037-0,047 0,054-0,469

9 8

13

8 5'

I 2-

, /К-/- «- 0,022 о.ед.; Р» 0,052 Ь.ед";; НСР^ - 0,012 о.ед. ' .:

Всё образцы с генотипом восприимчивости к ВТМ .показали t : высокие значения. А4уо /0,233-0,300 о.ед./; таким образ ом резуль таты анализа согласузотся с генотипом .восприимчивости. Однако . . •отого, нельзя сказать об ;образцах, гомозиготных по гену Тщ -2*v

■ которые разделились'на три группы-по относительной устойчи- ; ■ "вости к ВПК' Можно ливь отметить, что количество образцов с -:;•,такихгенотипом в 1-ой группа "значительно больаё;' .чем во 2-ой

и 3-ей группе. _ / , - '

>■ ■ ■ *•Эти результаты подтверждают, ранее полученные-данные об г отсутствии-жесткой» связи между-генотипом Тщ -2^/Тт и'высоткой относительной устойчивостью томата к ВШ. Оценку устойчи— ч вости к.ВТМ в серии 'II.-образцов томата МНИИО .проводили-также л путем,сопоставления результатовИЩА. у инокулированных и неино-кулированных растений в теплице. Лаборатории - заняты растений/ TCXÄ. .. " - " •

• ? При инокуляции в.возрасте семядольных листьев -.и7 анализа через".один-месяц-после инокуляции у большинства образцов-полу-' чены,существенные различия меаду средними" значениями ;- AyjgQ -по вариантам / oll >,-„• HCPq^/,: однако степень: превышения-разницы над НСРдд различна. У.образцов Л-939, -Л-947, Л-926 ото преш-; .шение-очень ^невелико,-что-указывает на высокую-устойчивость к ВШ. "У;Л-1469. разница:несущественна,' иначе говоря факт, .инфекции ^достоверно не-установлен. Невелико.различие ■ по".вариантам■•.,* также у Л-926 ,чоднако.в вариантес.инокуляцией-полученные■значения A^g'Q выпге Р. Все.остальные образцы показали-в варианте •с инокуляцией результаты 11%. выше Р,- поэтому:не могут;считаться устойчивыми к ВВК. • - " _ \ *;.: ■ У сорта Ручеек /стандарт восприимчивости/, положительные7;

■ результаты ИSA■■были получены также.и в контроле /без инокуляции/, что может -Сыть объяснено передачей-инфекции.через семена от предшествующей репродукции*. > - • • • - Полученные результаты подтверждают-ранее 'сделанный -вывод

Результаты диагностики В1?Л вгибридах" томата Лаборатории-овощеводства ТСХА /инокуляция ВШ ¿/возрасте семядольных листьев/ 1988 г. ' ;'

Значения .{Коли-

Показатели

, л490 гено-/| без генов

/от - до/ ¡ттпп- ! типом ■ устойчи-

i ••■':■•" В том числе;

}цов

i >

'Т^-22

ycs j вости

Всего образцов, в том числе: - .

490-

< Р

¿490 > Р Группировка образцов по результатам ИФА. ■ ' ■ I группа •

< /К-/+1 HCPq5 2 группа.

< /К-/43 НСР05

3:группа - ;

> /К-/-Й нср05 •

0,031-0,059 0,060-0,300

29

14 15:

26

-14 12

0,031-0,058 0,060-0,101 0,112-0,300

14

7

8

14 7

5-

/К-/ = 0,032 о.ед.; Р= .0,059 о.ед.; НСР^ = 0,026 о.ед. ■

о том, что-образцы с генотипами Тщ-22/Т„, -г2 и Tm -1,Тт -2й/ Тт-1,Тт могут иметь различную устойчивость к BIM.: Описанный опыт-бил повторен," но и инокуляцией растений в более позд--нем возрасте /I мес./ и анализом растений через 1,5 месяца пос -ле инокуляции,-При отом, в отличие от предшествующего опыта,су -цественной разшщы по результатам И£А между инокулированными и контрольны!,'.« . растениями не было обнаружено у 5 образцов из II.

Этот >рооультат указывает/на• то,■.что", оптимальный сроком■ •■ V - ~ ;инокуляции для выявления?различий.устойчивоскг'япляется воз-и -;.'раст-полного- развития: семядольных-листьев. У сорта •Квартет*.'- * / Тт-2 /. положительный'.результат-ИГЛ был получен-и-в:•"::. -«неинокулнропанком'контроле, .вероятно,-.аследствие'семенной-.*; ш^екцни.' 5 . - .. ; ' ; • ~

' - ~ 3. ИСОЕДОВАНЛЯ ПЕРЕДАЧИ БИРУСОВ.СЕ^Лул'тО.'ЙТА.' - ! :: ■ 3.ОЕКАВаЕН^-ПЕРЕДАЧИ БТГЛ'СЕМЕНАМИ .Т0МАТАУ Для' опытов \ : использовали: семена,'токата, сорта .Пионерский, полученные от'рае- ■

тений, -зараженных 'обычным (зеленым).старом > >ВТМ;;,Вирус..в про-:.росткг,х,в ^асо тголного .развития .семядольных листьев диагности- Ь-чровали-методом:"посредника";-Методика описана-в ;разд.1.2. В • • -: таблиго 7 приведена результаты-диагностики ВТМ в;проростках тоиг.та. ( • - - - _ . - '

Таблица'7 -

. 7; ■; ■ Результаты . диагностики ВТМ- в .проростках томата"_сорта.

Пионерский, полученных-из'=зар?денных семян методом .транс-- ,, '.'плантации проростков: на'отделенные листья табака (1986-1987гг.)

" . ' 4 ' V- -

: .аоллчество. .Ь-т.ч.»-дали,'Г , Г '

, Варианта г * аналлаиро-1 полохителыме1 в %' - -

1 - " - (ЙсВДУпз"?0! результаты-

посростки из семян хранив- V • ' " • * *

шпхся I год * £0 II 18,3

Контроль, листья без транс-- - <

плантации 12 ^ , О 0 -

проростки из семян, хранив- " ' - • .

кихся 2 года- -* СО - 12 20 • '

контроль , листья . _

без тр&чсплантагии . - • 12 ' 0 ; 4 ' О !

-Ч ; ; - г Л:! -vV

■ -Данные, при веденные- в табл.7, показывают,-что семена, хранившиеся после;выделения из плодов в "течение"-!: и 2 лет, дали. 18,3 . . . и'20;$ заракенньк проростков'соответственно. Этот процент передачи значительно _'ге1же,; чем' при-использовании "свежевыделенных; семян ', .и'хранившихся не; более' двух, месяцев.(Млкаев^С.Ш,.Актаа С .,1987), • '•'öfliiifuco он показывает, ..что\полной инактивации вируса в семенах : при хранении их до двух летне происходит. • . .'

■:..-■■■ "Полученные результаты показывают, что метод "посредника" сколет"быть применен для-обнаружения зараженности•семян-ВГМ при; длительных сроках их хранения. <

= ч ' -:3.2.'"0Е11АРУКЕНИ5 .- ПЕРЕДАЧИ - ВИРУСА ЕРОНЗОВОСТИ ТОМАТА ,-СЕМЕНАМИ • TO:.tATA. Для обнаружения ЕЬТ. семенами томата-.использовали зараженные семена селекционного образца. Проростки в фазе пол-. • ного-развития семядольных - листьев трансплантировали, как -опи— / . сано выше, на- отделенные, листья иахорки; (j//e • r^siic*). . - ; - ' Результаты анализа представлены в таблице 8.

. • Таблица 8

Результаты диагностики ВБТ в проростках томата из •■'заражешпос семян методом "посредника"

Материал ■ ' Кол-во . Кол-во пот§лыше в % ~

объектов листьев - результаты

-Исходные .растения, . . .. ...... '

зараженные БЕТ --. 5 • 10 Ю 100

•Проростки из зара- - ■ .■--.. -. ? •

жекных семян ■ ' ' • 15 15 . . . - 3 20

Контроль,листья.без

трансплантации;- •■ '. -•■ ■ -- б . 0 0

- - / . *

" . Полученные данные показывают,- что БЕГ>передается семенами, томата в значительном проценте. Следовательно, растения,получившие ин&екцига через-семена, могут быть источниками заражения ' внутри посадок. Поэтому система мероприятий по. защите посадок • томата в открытом грунте от ВБТ; должна включать в себя приемы, направленные: против семенной инфекции.- ■ ■ .-. ■ : ■■.-■■.

Г:3.3'.:ОБНАРУЖЕНИЕ ПЕРЕДАЧИ ■ М-ВИРУСА.КАРГОЗЕДЯ:V;СЕМЕНАМИ■ .-ТОМАТА.■:.- Длг.- опытов по передаче МЗК.семенами. томата использова-■ли.семена сорта-Невский; полученные. от:растений, .зарат.енных отим: вирусом. Проростки трансплантировали на;отделенные листья табака• ДебЕгл . ( //"■ de.rtn.eyL &с>1пиС) \\. культурного томата. Вирус в отделен- ", -ных-листьях после инкубации-во влажных■камерах на свету.диагнос-1. тировали/ капельным серологическим методом, - Результаты приведены

в табл. 9,- • ' ^ I

" - • ■ Таблица 9

Результаты.диагностики• МЗК. в растениях томата;сорта т.?

Невский, выращенных из зараженных семян.' . '

Чг^енчя ' анализирован-' - * положительных

■'■'"• НЬК проростков-,., .¡ результатов , се...ян, •: 1ц растегай !" "

Растение -"посредник"

: мес:

Табак - Дебнп .' . Томат . с.Невский -

I I

ю"

18

20 5-; 54. 84

50 , 9,3 3,7 2,4

Результаты, приведенное в табл.9, показынают; что УЖ передастся секснтг. томата - и'.эта -передача--кокет - быть обнаружена-»•етодсн "лссрекмка". , , '

г . -. применение в. качестве- "посредника" табака Дебни .более -^целесообразно, чем-культурного томата, т.к.„при отом обнару-" кивается значительно больший процент зараженных проростков,■ кроме г того * листья-табака Дебни- более удобны■для тралспланта-. ци и и дольше остаются живыми во "влажных камерах 'на1 свету. '-.

В.-результате' опытов по; передаче: вирусов семенами-тома/га •с применением метода "посредника"' подтверждена передача ВТМ при хранении семян до.двух лет,-впервые установлена передача БЕГ и-МЗК1.Метод "посредника" может быть'рекомендован для диаг ностики; -вирусной-зараженности-семян'.томата.* ; • - : г

ВЫ ВОД Ы-

1 Проведено испытание иммуноферментного анализа /И ЗА/ для -диагностики вируса табачной мозаики •/ВШ/. в различных гено типах томата по устойчивости к ВШ с целью отбора устойчивых форм в селекции. ■ • ■ \ -■■,•-■ •-. ■ Показано, что у форм, ¡гомозиготных по гену с помощью И ЗА может•быть обнаружена системная инфекция ВШ после механической инокуляции,: что дает, основание отнести устойчивость таких форм не к сверхчувствительности, а к . относительной устойчивости.

Количественные.результаты ШзА, отражающие уровень, развития инфекционного процесса, могут различаться у форм с одинаковым генотипом по устойчивости к ВИЛ в 4-5"раз. Статический анализ количественных результатов ИЗ&. в.серии : образцов после искусственной инокуляции позволяет группи- -ровать образцы' по степени их - относительной устойчивости -к ВШ. ' .

Показано, что М-вирус картофеля /МВК/ и вирус бронзовости • томата /ВБТ/ могут■передаваться семенами томата в значительном проценте. • . Семенная передача МВК и ВБТ может быть:обнаружена методом -"посредника", т.е. путем трансплантации проростков на отделенные листья системно-восприимчивых растений. . " .

РЩОДЩВДИИ ДЛЯ ПРАКТИКИ.

Иммуноферментный анализ рекомендуется для оценки, относительной устойчивости к BIM исходных,- гибридных образцов и селекционных линий томата с различными вариантами статичес •ко^обработки количественных результатов. -

Метод -"посредника" мояет быть рекомендован для использования в исследовательской работе по передаче вирусов семена-

Объем 1'/4 п. л.

Заказ 1143.

Тираж 100

Типография Московской с.-х. академии им. К. А. Тимирязева 127550, Москва И-550, Тимирязевская ул., 44

Бесплатно