Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение новых форм ярового ячменя (Hordeum vulgare L. ) с помощью биотехнологий in vitro

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Хитрова, Любовь Михайловна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Селекция растений in vitro.

1.2. Получение гаплоидов.

1.3. Генетическая трансформация растений.

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

И.1. Селекция ярового ячменя in vitro.

11.2. Получение гаплоидов ярового ячменя.

11.3. Генетическая трансформация ярового ячменя.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

ГЛАВА III. Отбор in vitro генотипов ячменя на повышенную устойчивость к кислым почвам.

ГЛАВА IV. Получение гаплоидов ячменя (hordeum vulgare) с использованием гаплопродюссера (#. bulbosum).

ГЛАВА V. Генетическая трансформация ячменя с помощью установки blolistic pds-1 ООО/не particle delivery system фирмы blo-rad.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение новых форм ярового ячменя (Hordeum vulgare L. ) с помощью биотехнологий in vitro"

Род Hordeum L. включает три вида ярового ячменя: Н. vulgare, Н. distichon, Н. intermedium и один вид ячменя озимого Н. sativum. Наряду с перечисленными видами культурного ячменя существует много диких видов этих растений, среди которых представляет интерес многолетний эфемероид Н. bulbosum.

Ячмень яровой является одним из наиболее древних сельскохозяйственных растений. Он был найден в раскопках стоянок человека каменного века. С доисторических времен его выращивали на территории Греции, Италии, Китая. За 5 тыс. лет до христианской эры ячмень возделывали в Египте, в Средней Азии, в третьем тысячелетии - на территории современной Украины и Молдавии. Это пластичная и очень скороспелая культура с большим разнообразием форм, которую выращивают во внетропических областях Северного и Южного полушария, поднимаясь до 3 тыс. метров и выше в условиях высокогорья, а также в условиях Крайнего Севера. Это одна из наиболее скороспелых культур, вегетационный период которой в зависимости от сорта составляет от 55 до 110 дней.

Ячмень используется как продовольственная, кормовая и техническая культура. Он содержит в среднем 12% белка, 6% клетчатки, 65% безазотистых экстрактивных веществ, 2% жира, 3% золы. Из зерна ячменя производят перловую и ячневую крупу, а также муку, которую при необходимости можно добавлять к ржаной и пшеничной. Из ячменя готовят суррогат кофе и другие продукты. Зерно, мякину и солому используют на корм скоту. Эта культура дает сырье для пивоваренной и спиртоводочной промышленности. Лучшими для пивоварения являются сорта с крупным зерном (масса 1000 зерен 40-45 г.), тонкопленчатые, с энергией прорастания не ниже 95%, с высоким содержанием крахмала (более 78%). Лучшие результаты в пивоварении дают сорта, содержащие глобулины и проламины - высокомолекулярные белки. Отрицательное влияние на процесс пивоварения оказывают белки альбумины, а также небелковые азотсодержащие вещества. 4

Яровой ячмень лучше многих других зерновых сельскохозяйственных культур приспособлен к изменению почвенно-климатических условий. Семена начинают прорастать при 1-2°С при оптимуме 20-22°С. Всходы выдерживают заморозки до -8°С. Однако в период цветения и созревания семян растения очень чувствительны к заморозкам. Для зародыша зерновки опасны заморозки 1-3°С. Высокие температуры ячмень переносит лучше, чем пшеница. Яровой ячмень считается одним из наиболее засухоустойчивых среди хлебных злаков.

Устойчивость сортов ячменя к засухе сильно варьирует. Наиболее чувствительны к недостатку воды растения в фазе выхода в трубку. При недостатке влаги колос не может нормально развиваться, в результате чего увеличивается число стерильных колосков, что ведет к существенному снижению урожая. Яровой ячмень можно выращивать на самых различных почвах, с глубоким пахотным горизонтом получены наибольшие урожаи. На песчаных почвах и супесях ячмень развивается плохо. Малопригодны также кислые торфяные и засоленные почвы. Оптимум почвенной кислотности лежит в пределах 6,8-7,5. Благодаря своим биологическим особенностям ячмень является зерновой культурой, которую традиционно выращивают при неблагоприятных условиях внешней среды.

Существенный вред культуре ячменя наносят основные вредители этой культуры - шведская и гессенская мухи, зеленоглазка, проволочники, клопы-черепашки. Болезни вызывают значительное снижение урожая этой культуры, особенно в годы развития эпифитотий. Ячмень поражают возбудители твердой и пыльной головни, карликовой ржавчины, мучнистой росы, различного рода пятнистостей (сетчатой - Н. teres Sacc., темно-бурой - Н. sativum Pamm., полосчатой - Н. gramineum Rabh.), вирусных болезней.

Таким образом, для нужд пищевой промышленности и кормовых целей необходимы высокобелковые сорта, для пивоваренной промышленности требуются сорта с высоким содержанием крахмала и низким -водорастворимых белков альбуминов, а также азотсодержащих экстрактивных веществ. Необходимы высокопродуктивные сорта для выращивания на кислых и засоленных почвах, скороспелые сорта для условий дефицита влаги. 5

Если учесть, что более половины сельскохозяйственных угодий России находится в зоне рискованного земледелия, то культура ячменя приобретает большое народно-хозяйственное значение как один из наиболее пластичных хлебных злаков. Кроме того, все имеющиеся сорта должны обладать устойчивостью к наиболее опасным для того или иного региона болезням и вредителям.

Получение сортов с заданными физиолого-биохимическими свойствами, устойчивых к абиотическим, а особенно к биотическим стресс-факторам, методами традиционной селекции - процесс длительный и чрезвычайно трудоемкий. Порой не хватает жизни селекционера для создания сорта с комплексом необходимых полезных свойств. В этой связи необходимо привлечение новых методов современной биотехнологии для решения тех или иных задач практической селекции. Речь не идет о подмене традиционной селекции биотехнологией. Необходимо сочетание преимуществ и возможностей как традиционной селекции, так и биотехнологии. Только во взаимодействии этих наук лежит путь к успеху. Существенные перспективы имеет в частности возможность получения новых генотипов культурных растений методами биотехнологии. С этой целью используют методы селекции in vitro, получения гаплоидов, а также генетической трансформации.

Культура изолированных клеток и тканей - одна из фундаментальных разработок современной биотехнологии. Этот метод входит составной частью в целый ряд различных биотехнологий. Наиболее широко он используется для целей клеточной, или селекции in vitro Высокая изменчивость клеток растений в культуре и огромное число селектируемых единиц в определенном объеме культуральной среды позволяет производить отбор клеток устойчивых к тому или иному селективному фактору. Ими могут быть ионы солей, в частности ионы алюминия - токсический фактор кислых почв, растворы солей, имитирующие различные типы почвенного засоления, токсические и другие физиологически активные вещества фитопатогенных грибов и т.д. Проведя отбор клеток устойчивых к перечисленным выше факторам, создают условия для их размножения, получают клеточную линию, обладающую заданными 6 свойствами. Индукция морфогенеза и регенерации дает возможность получить из клеточных популяций растения-регенеранты, а из них вырастить фертильные растения. Для вегетативно размножаемых или самоопыляющихся растений такие регенераты, обладающие комплексом необходимых признаков, могут дать начало новым сортам культурных растений. Для перекрестников необходимым условием является передача отселектированных признаков семенному потомству.

Другим направлением биотехнологии фундаментального характера является получение гаплоидных и дигаплоидных растений. В основе метода получения гаплоидов, то есть растений с уменьшенным вдвое числом хромосом, лежит метод культивирования мужских и женских половых клеток, соответственно микро- и макроспор, на искусственных питательных средах. Как результат редукционного деления в процессе микро- и макроспорогенеза образуются клетки, содержащие половинный набор хромосом. На соответствующих питательных средах из таких клеток образуется неорганизованная каллусная ткань, а из нее при соответствующих условиях можно получить гаплоидные растения-регенеранты. Удвоение числа хромосом превращает гаплоид в дигаплоидное, или диплоидное фертильное растение. Такие растения гомозиготны, что облегчает выявление рецессивных признаков, не проявляющихся обычно в гетерозиготном состоянии. Наряду с использованием культуры гаплоидных клеток in vitro для получения гаплоидов применяют метод гаплопродюссера, в качестве которого используют Н. bulbosum. При опылении Н. vulgarе пыльцой Н. bulbosum происходит оплодотворение яйцеклетки Н. vulgare, однако, в процессе дальнейшего развития зародыша наблюдается элиминация хромосом Н. bulbosum и возникает растение с уменьшенным вдвое против обычного числом хромосом. У ярового ячменя оно равно семи. В настоящее время полученные различными методами гомозиготные линии прочно заняли свое место в программах по селекции ячменя, пшеницы, ржи и других культур.

Генетическая трансформация растений - относительно новый метод получения измененных форм самых различных сельскохозяйственных культур. Он заключается в переносе определенных (целевых) генов в составе генетической конструкции в геном растения-реципиента. Генетическая конструкция обычно содержит целевой и маркерный гены под контролем общего промотора, который является участком молекулы ДНК, к которому присоединяются молекулы РНК-полимеразы, что сопровождается транскрипцией соответствующих генов. Происходит экспрессия целевого и маркерного гена, последний служит для отбора трансформированных регенерантов. В результате экспрессии целевого гена осуществляется биосинтез соответствующего белка и возникает новый признак у такого генетически трансформированного растения. Таким образом в растения кукурузы был, например, перенесен ген эндотоксина из Bacillus thuringiensis и получен сорт кукурузы, устойчивый к кукурузному мотыльку - опасному вредителю этой культуры.

В соответствии с вышеизложенным, для получения новых форм растений ячменя - цели нашего исследования - было необходимо решить следующие задачи:

• разработать регламент, учитывающий содержание в питательной среде ионов трехвалентного алюминия, солей фосфора, желирующих компонентов и т.д., для осуществления селекции in vitro',

• разработать биотехнологию получения новых форм ярового ячменя, отличающихся повышенной устойчивостью к иону алюминия - токсическому фактору кислых почв;

• исследовать биологические особенности созданных в НИИСХ ЦРНЗ гибридов ярового ячменя in vitro с целью использования их для бульбозной технологии получения гаплоидных растений;

• провести оценку гибридов ярового ячменя по выходу гаплоидных регенерантов;

• применительно к биологическим особенностям исследуемых генотипов разработать технологию получения дигаплоидных фертильных форм ярового ячменя на основе использования Н. bulbosum в качестве гаплопродюссера; 8

• модифицировать метод генетической трансформации ярового ячменя с помощью прибора Biolistic PDS-1 ООО/Не Particle Delivery System фирмы Bio-Rad для осуществления высокоскоростной баллистической трансфекции с использованием модельного сорта ячменя Golden Promise и других. 9

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Хитрова, Любовь Михайловна

выводы

1. Впервые разработан регламент, учитывающий содержание ионов алюминия, солей фосфора, желирующих компонентов (соотношение агар-агара и желатины), а также режимов автоклавирования селективных питательных сред для культивирования незрелых зародышей ячменя с целью проведения селекции in vitro. Отбор на селективных питательных средах целесообразно проводить, начиная с помещения первичного экспланта в условия действия токического фактора, наличие которого сохраняется и на последующих этапах селекции in vitro.

2. Биотехнология отбора in vitro генотипов ярового ячменя на повышенную устойчивость к токсическому фактору кислых почв включает следующие этапы ~ (модули): выращивание донорных растений ячменя, самоопыление, получение фертильных колосьев, вычленение незрелых зародышей ячменя и введение их в культуру in vitro, культивирование ткани незрелых зародышей, отбор на селективных средах, индукцию морфогенеза, индукцию ризогенеза, получение растений-регенерантов, адаптацию регенерантов к условиям почвенной культуры, оценку по селектируемому признаку in vivo.

3. Количество фертильных колосьев и зерновок, полученных в результате опыления Hordeum vulgare пыльцой Н. bulbosum зависит от генотипа гибрида ячменя ярового. Наибольшее число зерновок и выделенных из них зародышей (46,2%) было получено у гибрида №2 (сорт Идеал х 5226). Наименьшими показателями (10,3% и 10,8% соответственно) характеризовались гибрид №9 (сорт Роланд х 5331) и гибрид №11 (сорт Карина х 5425). 5331).По числу гаплоидных регенерантов (23,5%) выделяется гибрид №8(Боратинский х 5343).

4. Дигаплоиды, полученные с помощью бульбозной технологии, существенно различаются как по числу колосьев, так и по числу зерен в колосе и, соответственно, по общему числу зерен на растение,' последний показатель использован нами для характеристики продуктивности ячменя.

112

Широкое варьирование признака продуктивности дает возможность проведения отбора новых генотипов ячменя по этому признаку.

5. Биотехнология получения новых генотипов ячменя с использованием метода гаплопродюссера Hordeum bulbosum включает следующие этапы (модули): выращивание донорных растений ячменя, синхронизацию цветения Hordeum vulgare и Н. bulbosum, сбор и хранение пыльцы Н. bulbosum, кастрацию цветков Н. vulgare, опыление Н. vulgare пыльцой Н. bulbosum, получение фертильных колосьев, вычленение гаплоидных незрелых зародышей ячменя и введение их в культуру in vitro, культивирование гаплоидной ткани незрелых зародышей, индукцию морфогенеза, индукцию ризогенеза, получение растений-регенерантов, цитологическую оценку плоидности растений-регенерантов, обработку раствором колхицина гаплоидных растений-регенерантов, адаптацию дигаплоидов к условиям почвенной культуры, первичную оценку продуктивности.

6. Подобраны параметры обстрела щитков незрелых зародышей ячменя (давление гелия, расстояния между разрывающимся диском и макроносителем, макроносителем и останавливающей сеточкой, останавливающей сеточкой и мишенью). Отмечена зависимость морфогенной способности от давления газа при обстреле и соответственно количества внесенной чужеродной ДНК.

7. Показано наличие транзиентной экспрессии гена глюкуронидазы после введения чужеродной ДНК в культуру незрелых зародышей ячменя методом высокоскоростной баллистической трансфекции с помощью прибора Biolistic PDS-1 ООО/Не Particle Delivery System. Обнаружена зависимость между количеством голубых пятен, демонстрирующих активность GUS гена, и процессами регенерации.

8. Биотехнология получения трансгенных растений включает следующие этапы (модули): выращивание донорных растений ячменя, самоопыление, получение фертильных колосьев, вычленение щитков из незрелых зародышей ячменя и введение их в культуру in vitro, предварительное культивирование ткани щитка и подготовка реципиентной

115

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. Разработка модульной биотехнологии получения новых форм ярового ячменя.

Нами предложены биотехнологии получения новых форм растений ячменя: отбор in vitro, получение дигаплоидов, генетическая трансфомация. Каждая из этих биотехнологий представляет собой совокупность этапов, осуществляемых в определенной последовательности для получения конечного результата или продукции. Конечной продукцией наших технологий является растение, обладающее новыми свойствами -повышенной устойчивостью к стресс-фактору, гомозиготностью (дигаплоиды), трансформантами с изменёнными признаками в зависимости от интродуцированного гена. Последовательность этапов трех биотехнологий приведена на страницах 65, 78, 92-93.

Наиболее простой, с точки зрения количества этапов, является биотехнология селекции in vitro с использованием селективных питательных сред (технология КС). Биотехнология получения генотипов, обладающих повышенной устойчивостью к иону алюминия - токсическому фактору кислых почв, состоит из 11 этапов: 1). выращивания донорных растений; 2). самоопыления; 3). получения фертильных колосьев; 4). вычленения незрелых зародышей и введения их в культуру in vitro; 5). культивирования ткани незрелых зародышей; 6). отбора на селективных средах; 7). индукции мофогенеза; 8). индукции ризогенеза; 9). получения растений-регенерантов; 10). адаптации к условиям почвенной культуры; 11). оценки по селектируемому признаку.

Биотехнология получения дигаплоидов - более сложная, она состоит из 15 этапов: 1). выращивания донорных растений; 2). синхронизации цветения Hordeum vulgare и Hordeum bulbosum; 3). сбора и хранения пыльцы Н. bulbosum; 4). кастрации цветков Н. vulgare; 5). опыления Н. vulgare пыльцой Н. bulbosum; 6). получения фертильных колосьев; 7). вычленения

97 гаплоидных незрелых зародышей и введения их в культуру in vitro; 8). культивирования гаплоидной ткани незрелых зародышей; 9). индукции мофогенеза; 10). индукции ризогенеза; 11). получения растений-регенерантов;

12). цитологиченской оценки плоидности растений-регенерантов;

13). дигаплоидизации (обработки раствором колхицина гаплоидных растений-регенерантов); 14). адаптации дигаплоидов к условиям почвенной культуры; 15). первичной оценки дигаплоидов по хозяйственно полезным признакам. Сравнение обеих биотехнологий позволяет выделить этапы, общие для той и другой биотехнологии. Это выращивание растений-доноров, вычленение незрелых зародышей, культивирование тканей незрелых зародышей; индукция моногенеза, индукциия ризогенеза, получение растений-регенерантов, адаптация к условиям почвенной культуры. Фактически биотехнология селекции in vitro входит в состав биотехнологии получения дигаплоидов. Исключение составляет этап отбора на селективной среде. Заключительные этапы обеих биотехнологий сходны, однако, первая завершается оценкой устойчивости к селективному фактору (трёхвалентному иону алюминия), тогда как вторая - включает первичную оценку хозяйственно ценных признаков, мы проводили оценку продуктивности (количество зерновок в одном колосе). Аналогичны также этапы индукции морфогенеза, ризогенеза и получения растений-регенерантов, которые осуществляются на аналогичных средах с использованием регуляторов роста (а-нафтилуксусной кислоты и кинетина).

Можно сделать вывод, что обе биотехнологии состоят из аналогичных унифицированных функциональных технологических этапов - модулей. Каждый модуль состоит из ряда методов, а последние - из методических приемов и операций, соблюдение которых даёт возможность получать воспроизводимые результаты. Модули могут быть как основные, то есть пригодные для использования в нескольких биотехнологиях, так и дополнительные, необходимые только для получения растений с определёнными свойствами.

98

Таким образом, биотехнология отбора in vitro (КС) состоит из трех основных модулей и одного дополнительного (вспомогательного). Первый из них (модуль КС I) включает выращивание растений и получение фертильных колосьев. Конечным результатом этого модуля являются колосья, содержащие незрелые зародыши ячменя. Большое влияние на выход зародышей оказывают условия культивирования растений: минеральное питание, фотопериод, интенсивность освещения, водный и температурный режим, отсутствие вредителей и болезней и пр. При несоблюдении этих условий зародыши не образуются и выход "продукции" этого модуля может быть чрезвычайно низким, что ставит под сомнение выполнение последующих этапов технологии.

Следующий модуль (КС II) состоит из вычленения незрелых зародышей. Состояние вычленяемых зародышей и их способность к каллусо-и морфогенезу в значительной степени зависит от условий^ при которых они были получены. Это еще раз подчеркивает необходимость функционирования первого модуля в условиях^ близких к оптимальным. Важными этапами второго модуля является индукция морфо- и ризогенеза. Выявление индукторов морфо- и ризогенеза обычно осуществляется эмпирически и зависит от генотипа, количества и соотношения экзогенных регуляторов роста. При замене генотипа необходима корректировка количества и соотношения регуляторов роста, а иногда и замена одних на другие, отвечающие специфике исследуемого генотипа. Конечным продуктом второго модуля являются растения-регенеранты.

Наряду с основным модулем КС II, необходимо выделить дополнительный КС II3. Этот модуль специфический, отражающий особенности селекции in vitro. Он заключается в создании питательных сред, содержащих селективный фактор, позволяющий отбирать генотипы с необходимыми свойствами. Замена этого модуля на другой дает возможность вести отбор генотипов с другими признаками. В нашей работе мы использовали селективную среду, содержащую токсический ион трехвалентного алюминия. Другие селективные среды дадут возможность

99 вести отбор на устойчивость к избыточному засолению, токсинам фитопатогенов и др.

Третий модуль (КС III) - адаптация регенерантов к условиям почвенной культуры. Мы выделили адаптацию в самостоятельный модуль, учитывая важность этого процесса на результаты селекции in vitro. Пробирочные растения-регенеранты получены в условиях асептики, отличающихся очень сильно от обычных условий произрастания растений. Пересадка в почву является сильнейшим стресс-фактором для регенерантов. Это изменение условий температуры, влажности, субстрата, освещенности. В почве возникает контакт с микроорганизмами почвы, в том числе и патогенными. Для повышения результативности работы необходимо максимально сохранить полученные растения-регенеранты. С этой целью используют приемы создания оптимальной влажности, обработки экзогенными регуляторами роста И др.

Заключительным модулем технологии отбора in vitro (КС IV) является первичная оценка адаптированных регенерантов на устойчивость к стресс-фактору. В наших опытах - это выращивание растений на кислых почвах. При отборе на других селективных средах ведется оценка устойчивости к засолению, фитопатогенам и др.

Биотехнология получения дигаплоидов (технология ДГ) начинается с модуля аналогичного первому модулю селекции in vitro: выращивания донорных растений и получения фертильных колосьев. Однако этот основной модуль (ДГ I) усложняется дополнительным модулем (ДГ V1) специфическим для получения дигаплоидов. Он включает синхронизацию цветения Hordeum vulgare и Hordeum bulbosum, сбор и хранение пыльцы Н. bulbosum, кастрацию цветков Н. vulgare, опыление Я vulgare пыльцой Я. bulbosum. В комплексном виде модуль (ДГ I + ДГ 1а) пригоден для использования как при селекции in vitro, так и при генетической трансформации. Второй основной модуль (ДГ II) рассматриваемой биотехнологии аналогичен соответствующему модулю (КС II) биотехнологии селекции in vitro. Небольшая коррекция необходима лишь в изменении концентраций

100 регуляторов роста при индукции морфо- и ризогенеза. Однако в эту технологию включен второй дополнительный модуль ДГ Па - специфичный для биотехнологии получения дигаплоидов - это цитологический контроль плоидности регенерантов и дигаплоидизация их, последняя достигается обработкой гаплоидов раствором колхицина^ который препятствует клеточному делению, разрушает веретено, предотвращает расхождение дочерних хромосом, что ведет к удвоению их числа, вызывает удвоение числа хромосом, т.е. получение клеток с удвоенным числом хромосом.

Третий модуль (ДГ III) технологии получения дигаплоидов полностью аналогичен соответствующему модулю предыдущей биотехнологии.

Четвертый модуль (ДГ IV) - первичная оценка хозяйственно полезных признаков дигаплоидов может быть использован также для оценки аналогичных признаков в различных биотехнологиях. Например, в технологии селекции in vitro^ в технологии генетической трансформации после оценки генотипов по селективному признаку в случае необходимости можно провести оценку хозяйственно полезных признаков (количественные и качественные показатели урожая, морфометрические, морфофизиологические и др. показатели).

Наиболее сложная биотехнология генетической трансформации начинается с основного модуля ГТI - общего для трех рассматриваемых нами биотехнологий. Второй основной модуль (ГТ II) технологии ГТ отличается от аналогичных модулей предыдущих технологий (КС и ДГ) тем, что в культуру in vitro вводят не целые зародыши, а лишь их щитки. Дополнительно вводится этап культивирования эксплантов на осмолярной среде до и после обстрела. Кроме того, при использовании генетических конструкций, содержащих, помимо целевого> и маркерный ген, проводится отбор на селективных питательных средах. Это может быть ген неомицинфосфотрансферазы, обеспечивающий устойчивость к канамицин-сульфату или ген ацетилтрансферазы, придающий устойчивость к фосфинотрицину -трипептидному антибиотику, обладающему гербицидными свойствами.

101

Именно этот гербицид использовался в качестве селективного фактора в наших опытах.

Наибольшую сложность для экспериментального выполнения представляет модуль ГТ Иа. Он включает: предварительное культивирование ткани щитка и подготовку реципиентной системы для обстрела микрочастицами, клонирование и выделение плазмидной ДНК, приготовление микроносителей (микрочастиц золота) покрытых плазмидной ДНК, обстрел реципиентной системы микрочастицами.

Очень трудоёмкими являются этапы клонирования и выделения плазмидной ДНК, приготовление микроносителей и преципитация плазмидной ДНК на микрочастицы золота, обстрел реципиентной системы микрочастицами; последующие этапы (культивирование эксплантов -реципиентной системы - после обстрела, отбор на селективных средах в случае использования маркерного гена) не отличаются существенно от этапов других биотехнологий. Индукция морфогенеза, индукция ризогенеза, получение растений-регенерантов и адаптация к условиям почвенной культуры аналогичны соответствующим этапам других биотехнологий. Обстрел реципиентной системы микрочастицами и подтверждение трансгенной природы трансформантов требуют специального дорогостоящего оборудования. Что касается оценки трансгенных растений по селектируемому признаку, то эта оценка зависит от целей трансформации, то есть экспрессии интродуцированного гена.

Модуль ГТ III-адаптация к условиям почвенной культуры технологии ГТ-аналогичен соответствующим модулям в технологиях КС и ДГ. Однако в технолйгии ГТ необходимо подтверждение трансгенной природы полученных трансформантов. Это осуществляется с помощью полимеразной цепной реакции ПЦР, иммуноблотинга и др. (дополнительный модуль ГТ Ша). Первичная оценка трансгенных растений осуществляется в зависимости от свойств трансгена (основной модуль ТГ IV). В случае необходимости можно использовать оцеку хозяйственно полезных признаков (модуль ДГ IV).

Выращивание растений и получение фертильных колосьев

Рис. 14. Модульная биотехнология получения новых форм ярового ячменя.

103

Модульная биотехнология получения новых форм ярового ячменя (Hordeum vulgarе) приведена на рис. 14.

Таким образом, нами предложены три модульных биотехнологии отбора in vitro (КС), получения дигаплоидов (ДГ) и генетической трансформации (ГТ). Под биотехнологическим модулем мы понимали унифицированный функциональный блок (объединенный общностью приборов, оборудования, других условий осуществления и пригодный для использования в различных биотехнологиях). В зависимости от свойств конечного продукта (регенерантов с новыми свойствами: устойчивость к алюминию, дигаплоидов, генетических трансформантов и др.) из различных модулей, как из "кирпичиков", можно формировать необходимые биотехнологии. В случае необходимости для вышеупомянутых биотехнологий можно составить технологические карты с учетом приборов, оборудования и квалификации специалистов, необходимых для функционирования основных, дополнительных модулей и биотехнологии в целом.

2. Характеристика новых форм ярового ячменя?полученных методами биотехнологии.

С помощью биотехнологий отбора in vitro и получения дигаплоидов нами получено 1920 регенерантов и 722 дигаплоидных линии ярового ячменя гибридов селекции НИИСХ ЦРНЗ. Материал был использован в селекционном процессе НИИСХ ЦРНЗ в качестве исходного материала. Три линии ярового ячменя, отобранные на селективных средах с алюминием, изучены в конкурсном сортоиспытании. По своим хозяйственно-биологическим показателям (урожайности, устойчивости к пыльной головне и мучнистой росе) эти линии превосходили стандартный сорт Зазерский 85. Урожайность этих линий в условиях НПО «Подмосковье» и Рязанской СОС приведена в таблице 10.

104

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Хитрова, Любовь Михайловна, Москва

1. Авдонин Н.С. Повышение плодородия кислых почв. М., Колос, 1969.

2. Альферманн А.В., Бергманн В., Брайт С., Ван Монтегю М., и др. Биотехнология сельскохозяйственных растений. Пер. с англ. В.И. Негрука, Предисл. Р.Г.Бутенко. М., Агропромиздат, 1987, 301 с.

3. Барбер С.А., Биологическая доступность питательных веществ в почве. Механистический подход. Пер с англ. Ю.Я.Мазеля: под ред. и с предисл. Э.Е. Хавкина. -М., Агропромиздат, 1988,- 376 с.

4. Батыгин Н.Ф., Семашко А.Л., Пути оценки оптимальных условий выращивания растений на примере ячменя сорта Надя. Нетрадиционные методы селекции зерновых культур и кормовых трав в Северо-Западной зоне РСФСР. Сборник научных трудов, JL, 1985, 54-60.

5. Болвелл Г .П., Вуд К.Р., Гонзалес Р.А., Данвелл Дж.М., Диксон Р.А. и др., Биотехнология растений: культура клеток. Пер. с англ. В.И.Негрука, предисл. Р.Г.Бутенко, М., Агропромиздат, 1989, 280 с.

6. Бутенко Р.Г., Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений., М., "Наука" 1964, 348 с.

7. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе: Учеб. Пособие, М., ФБК-ПРЕСС, 1999,-160 с.

8. Бутенко Р.Г., Технология in vitro в сельском хозяйстве. С.-х. Биология. 1983. № 5,-3-7.

9. Внучкова В.А., Получение гаплоидов из пыльников тритикале и их цитологическая характеристика. Докл. ВАСХНИЛ. 1979. №9, 8-10.

10. Внучкова В.А., Методические указания по индукции каллуса и регенерации растений зерновых злаков при культивировании незрелых зерновок in vitro. М., ВАСХНИЛ, 1987,21 с.

11. Внучкова В.А., Чеботарева Т.М., Аветисова Л.А., Индукция каллуса и растений пшеницы ин витро при посадке незрелых зародышей. Сельскохозяйственная биология, 1987, 4, №1.

12. Внучкова В.А., Чеботарева Т.М., Молчанова Л.М., Получение гаплоидов ячменя в культуре ткани при использовании гаплопродюссера. Сельскохозяйственная биология, 1985, № 10, 46-48.

13. Внучкова В.А., Неттевич Э.Д., Чеботарева Т.М., Хитрова Л.М., Молчанова Л.М., Испаользование методов in vitro в селекции ячменя на устойчивость к токсичности кислых почв. Доклады ВАСХНИЛ, 1989, №7, 2-5,

14. Гапоненко А.К., Мунтян М.А., и др., Регенерация растений Triticum aestivum in vitro. Цитология и генетика, 1985,19, № 5, 335-342.117

15. Гершензон С.М., Основы современной генетики. Киев: Наук. Думка, 1983, 560с.

16. Гёринг X., Стресс-реакция растений на воздействие неблагоприятных физических и химических факторов среды. . Доклады ВАСХНИЛ, 1982, № 1.

17. Глеба Ю.Ю., К.М. Сытник, Слияние протопластов и генетическое конструирование высших растений, Киев, Наук, думка, 1982, 104 с.

18. Голованова И.В., Создание устойчивых к бурой ржавчине линий пшеницы методом андрогенеза in vitro. Тезисы докладов VII Международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда", М.,1997, с. 364.

19. Горбунова В.Ю., Круглова Н.Н., Физиологические аспекты андрогенеза in vitro у злаков. Тезисы докладов VII Международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда", М.,1997, с. 81.

20. Дрейпер Д., Скотт Р., Армитидж Ф., Дьюри Г. и др., Генная инженерия растений. Лабораторное руководство. Под ред. Д. Дрейпера и др., М., Мир, 1991,408 с.

21. Дунаева С.Е., Изучение влияния генотипа и на скрещиваемость и морфогенез зародышей в связи с получением гаплоидов культурного ячменя. Тезисы докладов Всесоюзной научно-технической конференции118

22. Применение биотехнологий в животноводстве, растениеводстве и ветеринарной медицине», Ленинград, 1988, с. 202-204.

23. Дьяков Ю.Т., Дементьева М.И., Семенкова И.Г. и др., Общая и сельскохозяйственная фитопатология. М., Колос, 1984, 495 с.

24. Жамбакин К.Ж., Терлецкая Н.В., Манабаева Ш.А., Турашева С.К., Морфогенез в культуре репродуктивных органов злаков. Тезисы докладов VII Международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда", М.,1997, с. 89.

25. Искаков А.Р., Терлецкая Н.В., Сомаклональная варибельность и перспективы ее использования в селекции ячменя. Тезисы докладов VII Международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда", М.,1997, 219.

26. Кайзер К., Мюррей Н., Дэвис Р.В. и др. Клонирование ДНК. Методы. Под ред. Д. М. Гловера. М., Мир, 1988, 538 с.

27. Карабаев М.К., Джардемалиев Ж.К., Бегалиев М.К., Курбаков О.И., Сопабаева Б.А., Шевченко Е.Л. Культура пшеницы in vitro, В сб. "Биология культивируемых клеток и биотехнология растений", отв. ред. Р.Г. Бутенко, М., "Наука", 1991,252-255.

28. Картель Н.А., Манешина Т.В., Органогенез в культуре клеток ячменя. Тр., 3 съезда Всесоюзного общества генетиков и селекционеров им. Н.И.Вавилова, Л.,1977, 231.119

29. Карначук Р.А., Свет и фитогормоны в индукции морфогенеза в культуре зародышевой ткани пшеницы. Тезисы докладов VII Международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда", М.,1997, 105.

30. Климашевский Э.Д., Чернышова Н.Ф. Генетическая вариабельность устойчивости растений к ионной токсичности (Н и А1) в зоне корней: теория и практические аспекты. С.-х. Биология, 1980, т. 15, 2.

31. Климашевский Э.Л., Идентификация устойчивости растений к кислотности почвы. Доклады ВАСХНИЛ, 1983, 10, 3-5.

32. Климашевский Э.Л., Генетический аспект минерального питания растений,М., Агропромиздат, 1991, 415 с.

33. Климов С.В., Власенко Н.М., Рыбакова М.И., Оценка устойчивости яровых зерновых злаков к некоторым почвенным стрессам. Сб. Трудов НИИСХЦРНЗ, 1985, 155-164.

34. Коваленко П.В., Овсюк Т.Н., Игнатова С.А., Морфогенез в каллусных культурах ярового ячменя. Тезисы докладов VII Международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда", М., 1997, 111.

35. Колесников В.А., Зеленина И.А., Семенова М.Л., Шафен Р., Зеленин А.В., Баллистическая трансфекция клеток млекопитающих in vitro. Онтогенез, 1995, т.26, №6, 467-480.

36. Кучеренко JT.A. Подходы к разработке технологии массовой регенерации растений in vitro, В сб. "Биология культивируемых клеток и биотехнология растений", отв. ред. Р.Г. Бутенко, М., "Наука", 1991, 232 242.

37. Литовкин К., Игнатова С., Бондарь Г., Прорастание незрелых зародышей ячменя {Hordeum vulgare L.) в условиях in vitro. Тезисы докладов VII Международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда", М.,1997, 123.

38. Лукьянюк С.Ф., Разработка приемов для получения гаплоидов ячменя и тритикале. Автореф. канд. дис. М., 1983.

39. Лукьянюк С.Ф., Игнатова С.А., Метод гаплоидии в селекции зерновых культур. С.-х. Биология. 1983. №5, 8-15.

40. Морозова С.Е., Продолжительность сохранения регенерационной способности у каллусов пшеницы.В сб. "Биология культивируемых клеток и биотехнология растений", отв. ред. Р.Г. Бутенко, М., "Наука", 1991, 256 -259.

41. Муромцев Г.С., Бутенко Р.Г., Тихоненко Т.И., Прколфьев М.И., Основы сельскохозяйственной биотехнологии, М., Агропромиздат, 1990, 384 с.

42. Мухина Ж.М., Харченко П.Н., О перспективах клеточной инженерии риса. Тезисы докладов VII Международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда", М.,1997, 139.

43. Ницще В., Венцель Г., Гаплоиды в селекции растений. Пер. С англ. В.В.Попова; Предисл. Ю.П. Лаптева, М., Колос, 1980. - 128с.

44. Новоселова А.С., Мазин В.В. Использование методов биотехнологии в селекции многолетних бобовых трав. В сб. "Состояние и развитие сельскохозяйственной биотехнологии" (Материалы Всесоюзной Конференции. Москва, июнь 1986 г.) Л., 1986, 61-67.121

45. Павер Дж. Б., Чепмен Дж. В., Изолирование, культивирование игенетические манипуляции с протопластами растений, В кн. "Биотехнология растений: культура клеток", перев. с англ. В.И. Негрука, под ред. Р.Г. Бутенко, М., ВО "Агропромиздат", 1989, с. 52 82.

46. Папазян Н.Д., Культура зародышей и стеблевых узлов некоторых сортов ячменя, в сб. "Апомиксис и цитоэмбриология растений", Саратов, 1983, 142-151.

47. Паушева З.П., Практикум по цитологии растений, М., "Колос", 1980.

48. Поддубная-Арнольди В.А., Цитоэмбриология покрытосеменных растений, М., Наука, 1976, 508 с.

49. Першина JI. А., Отдаленная гибридизация ячменя: (генетические и биотехнологические аспекты). Автореф. Дис. . д-ра биол. наук. Новосибирск, 1995, 25 с.

50. Рахимбаев И.Р., Тивари Ш., Бишимбаева Н.К., Кушнаренко С.В., Азимова Е.Д., Биотехнология зерновых культур, Алма-Ата, Гылым, 1992. 240 с.

51. Россеев В.М., Изучение культуры тканей ячменя. Теоретические основы селекции и семеноводства сельскохозяйственных культур в Западной Сибири. Сборник научных трудов, Новосибирск, 1985, 105-108.

52. Россеев В.М., Изучение НС-каллусогенеза ячменя.Селекция и семеноводство в Сибири и на Дальнем Востоке. Сборник научных трудов, Новосибирск, 1987, 102-104.

53. Россеев В.М., О некоторых аспектах культуры клеток и тканей. Вопросы генетики, селекции и семеноводства сельскохозяйственных культур. Научно-технический бюллетень, Новосибирск, 1988, вып. 5, 3-4.

54. Соколов В.А., Шумный В.К., Технология гаплоидов в генетике и селекции растений. В сб. Вавиловское наследие в современной биологии. М., Наука, 1989.-247- 269.122

55. Сидоров В.А., Биотехнология растений. Клеточная селекция, Отв. ред. Глеба Ю.Ю., Киев, Наук думка, 1990, 280 с.

56. Стройков Ю.М., Шкаликов В.А., Защита сельскохозяйственных культур от болезней. М., Изд. МСХА, 1998, 263 с.

57. Тиссера Б., Эмбриогенез, органогенез и регенерация растений, В кн. "Биотехнология растений: культура клеток", перев. с англ. В.И. Негрука, под ред. Р.Г. Бутенко, М., ВО "Агропромиздат", 1989, с.97 127.

58. Турков В.Д., Гужов Ю.Л., Шелепина Г.А., Кишмария Я.Ш., Кометиани Д.Г., Хромосомные исследования растений в проблемах селекции, клеточной инженерии и генетическом мониторинге, атлас-пособие. М., Издательство Университета дружбы народов 1988, 64с.

59. Тырнов B.C., Гаплоидия у растений. Научное и прикладное значение. Серия "Чтения памяти академика Н. И. Вавилова". М., Наука, 1998, 53 с.

60. Харченко П.Н., Получение гаплоидов и гомозиготных линий у риса методом in vitro. Автореф. Дис. . канд. биол. наук. Л., 1986, 18 с.

61. Харченко П.Н., Кучеренко Л. А., Культивирование пыльников риса. Апомиксис и цитоэмбриология растений, 1978, 4.

62. Харченко П.Н., Шкловский В.Н., Использование метода культуры пыльников в ускорении селекционного процесса. Докл. ВАСХНИЛ. 1982. №9, -24-25.

63. Успенская В.А., Пути ускорения селекционной работы с яровым ячменем при искусственно создаваемых условиях выращивания. Нетрадиционные методы селекции зерновых культур и кормовых трав в Северо-Западной зоне РСФСР. Сборник научных трудов, Л., 1985, 9-14.

64. Харченко П.Н., Савенко Е.Г., Датга П., Кумар Д., Диплоидизация гаплоидов риса. Тезисы докладов VII Международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда", М.,1997, 181.

65. Шамина З.Б., Андрогенез и получение гаплоидов в культуре пыльников и микроспор. В сб. Культура клеток растений М., Наука, 1983, 124-136.

66. Шевелуха B.C., Калашникова Е.А., Дегтярев С.В., Кочиева Е.З., Прокофьев М.И., Новиков Н.Н., Ковалев В.М., Калашников Д.В., Сельскохозяйственная биотехнология. Под ред B.C. Шевелухи, М., Высш. шк„ 1998,-416 с.

67. Ягодин Б.А., Смирнов П.А., Петербургский А.В., Асаров Х.К., Демин В.А., Решетникова Н.В., Агрохимия, под ред. Акад ВАСХНИЛ Ягодина Б.А., М., Агропромиздат, 1989, 639 с.

68. Яковлева Н.П., Фитопатология. Программированное обучение. М., Колос, 1983, 271 с.

69. Abdullah В., Cocking Е.С., Thompson J.A., Efficient plant regeneration from rice protoplasts through somatic embryogenesis. Biotechnology, 1986, 4, 10871090.

70. Ahmed K.Z.,Sagi F., Culture and fertile plant regeneration from regenerable embriogenic suspension cell-derived protoplasts of wheat (Triticum aestivum L.). Plant Cell Rep,1993,12, 175-179.124

71. Arcionis S., Pezzotti M., Damiani F., In vitro selection of alfalfa plants resistant to Fusarium oxysporum f. sp.medicaginis. Theor.and Appl. Genet., 1987, 74, 6, 700-708.

72. Barcello P., Vazquez A., Martin A., Somatic embryogenesis and plant regeneration from tritordeum. Plant Breeding, 1989, 103, 235-240.

73. Barcello P., Hagel C., Becker D., Martin A., Lorz H., Transgenic cereal (Trtordeum) plants obtained at high efficiency by microprojectile bombardement of inflorescence tissu. Plant Journal, 1994, 4, 583-592.

74. Bebeli P, Karp A, Kaltsikes P.J, Somaclonal variation from cultured immature embryos of rye differing in heterochromatic content. Genome, 1990, 33, 177183.

75. Becker D., Brettschneider R., Lorz H., Fertile transgenic weat from microprojectile bombardement of scutellar tissu. Plant Journal, 1994, 2, 299-307.

76. Bennici A., D' Amato F., In vitro regeneration of durum wheat plants: I. Chromose numbers of regenerated plantlets. Z.Pflanzenzucht, 1978, 4, 305-311.

77. Bessa A., In vitro selection of wheat tolerant to Septoria nodorum Berk.: effect of toxins. In "International Congress on: Genetic Manipulation in Plant Breeding -Biotechnology for The Breeder-", Abstr., Helsingor, 1988, p.91.

78. Bidney D, Scelonge C, Martich J, Burrus M, Sims L, Huffman G, Microprojectile bombardment of plant tissues increases transformation frequency by Agrobacterium tumefaciens. Plant Mol. Biol., 1992, 18, 301-313.

79. Bower R., Birch R.G.,Transgenic sugarcane plants via microprojectile bombardement. Plant Journal, 1992, 3, 409-416.

80. Breiman A, Roterm D, Karp A, Shaskin H, Heritable somaclonal variation in wild barley (Hordeum spontaneum). Theor. and Appl. Genet., 1987, 74, 104- 112.

81. Breiman A., Plant regeneration from Hordeum spontaneum and H. bulbosum immature embryo derived calli, Plant Cell Reports, 1985, 4, 70- 73.125

82. Brettschneider R, Becker D, Lorz H, Efficient transformation of scutellar tissue of immature maize embryos. Theor. and Appl. Genet., 1997, 94, 6-7, p. 737-748.

83. Brinch-Pedersen H, Olesen A, Rasmussen S.K, Holm P.B, Generation of transgenic wheat (Triticum aestivum L.) for constitutive accumulation of an Aspergillus phytase. Molecular Breeding, 2000, 6, 195-206.

84. Bytebier В., Deboeck F., De Greve H., Van Montagu M., Hernalstteens J.-P., T-DNA organisation in tumour cultures and transgenic plants of the monocotyledon Asparagus officinalis. Proc. Nat. Acad Sci USA 1987 84, 53455349.

85. Cao J., Duan X., McElroy D., Wu R., Regeneration of herbicide resistant transgenic rice plants following microprojectile-mediated transformation of suspension culture cells. Plant Cell Rep., 1992, 11, 585-591.

86. Castillo A.M., Vasil V., Vasil I.K., Rapid prodaction of fertile transgenic plants of rye (Secale cereale L.). Bio/technology, 1994, 12, 1266-1371.

87. Chan M.-T., Chang H.-H., Ho S.-L., Tong W.-F., Yu S.-M., Agrobacterium-mediated production of transgenic rice plants expressing a chimeric a-amylase promoter/'P-glucuronidase gene. Plant Mol. Biol., 22, 491-506.

88. Chan M.-T., Lee T.-M.,Chang H.-H., Transformation of indica rice (Oryza sativa L.) Mediated by Agrobacterium tumefaciens. Plant Cell PhysioL 33,577583.

89. Cheng M., Fry JE, Pang S., Zhou H., Hironaka CM, Duncan DR, Conner Т., Wan Y, Genetic transformation of wheat mediated by Agrobacterium tumefaciens. Plant Physiol., 1997, 115, 971-980.

90. Cheng T.Y, Smith H.H, Organogenesis from callus culture of Hordeum vulgare. Planta, 1975, 123, 307-310.

91. Conner A.J., Meredith C.P., Large scale selection of aluminum-resistant mutants from plant cell culture: expression and inheritance in seedlings. Theor. and Appl. Genet., 1985, 71, № 2, p. 159-165.

92. Conner A.J., Meredith C.P., Strategies for the selection and characterization of aluminum-resistant variants from cell cultures of Nicotiana plumbaginifolia. Planta, 1985, 166, 4, 466-473.

93. Creissen G, Smith C, Franic R, Reynold H, Mullineaux P, Agrobacterium-and microprojectile-mediated viral DNA delivery into barley microspore-derived cultures. Plant Cell Rep., 8, 680-683.

94. Dale P.J., Deambrogio E, A comparison of callus induction and plant regeneration from different explants of Hordeum vulgare. Zeitschrift fur Pflanzenzuchtung, 1979, 94, 65-67.

95. Dale P.J., Marks M.S., Brown M.M., Woolston C.J., Chen D.F., Gilmour D.M., Flavell R.B., Agroinfection of wheat: inoculation of in vitro seedlings and embryos. Plant Sci., 1989, 63, 237-245.

96. Datta K., Potrykus I., Datta S.K., Efficient fertile plant regeneration from protoplasts of the Indica rice breeding line IR72 (Orysa sativa L.). Plant Cell Rep., 1992, 11,229-233.

97. Datta S.K., Datta K., Potrykus I., Fertile Indica rice plants regenerated from protoplasts isolated from microsporedeerived cell suspensions. Plant Cell Rep., 1990, 9, 253-256.

98. Datta S.K., Peterhans A., Datta K., Potrykus I., Genetically engineered fertile Indicf rice recovered from protoplasts. Bio/Technology 1990, 8, 736-740.

99. Delhaize E, Ryan P.R, Randall P.J, Aluminum tolerance in wheat (Triticum aestivum L.). II. Aluminum-stimulated excretion of malic acid from root apices. Plant Physiol., 1993, 103, 695-702.

100. De Sousa C.N.A, Classification of Brazilian wheat cultivars for aluminium toxicity in acid soils. Plant Breeding, 1998, 117, 217-221.

101. D' Halluin K, Bonne E, Bossut M, De Beuckeleer M, Leemans J, Transgenic maize plants by tissue electroporation. Plant Cell, 1992, 4, 1495-1505.

102. Dix P.H., Cell line Selection, In: "Plant cell culture technology", ed. M. M. Yeoman, Blackwell scientific publications, Oxford., 1986, p.143 201.

103. Dolgykh Y.I., Larina S.N., Shamina Z.B., Use of tissue culture to test plant resistance to abiotic stresses. Maize Genet. Coop. News letter, Columbia, Mo., 1992, № 66, p.82.

104. Donn G., Eckes P., Muller H., Genubertragung auf Nutzpflanzen. BioEngineering 1992 8, 40-46.

105. Fretz A., Jahne A., Lorz H., Cryopreservation of embreogenic suspension cultures of barley (Hordeum vulgare L.). Botanica Acta, 1992, 105, 140-145.

106. Fromm M., Taylor L. P., Walbot V., Stable transformation of maize after gene transfer by electroporation. Nature, 1986, 319, 791-793.

107. Fromm M.T., Morrish F., Armstrong A., Willams R., Thomas J., Klein N.M., Inheritance and expression of chimeric genes in the progeny of trasgenic maize plants. Bio/Technology, 1990, 8, 833-839.

108. Funatsuki H., Lorz H., Lazzeri P.A., Use of feeder cells to improve barley protoplfst culture and regeneration. Plant Science, 1992, 85, 179-187.128

109. Gamborg O.L, Miller R.A, Ojima K, 1968, Nutrient requirement of suspension cultures of soybean root cells. Exper. Cell Researth 1968, 50, 148151.

110. Gaponenko A.K, Petrova T.F, Iskakov A, Sozinov A.A, Cytogenetics of in vitro cultured somatic cells and regenerated plants of barley (hordeum vulgare L.). Theor. and Appl. Genet., 1988, 75, 905-911.

111. Genovesi D., Willetts N., Zachwieja S., Mann M., Spenser Т., Flick C., Gordon-Kamm. Transformation of an elite maize inbred through microprojectile bombardement of regenerable embryogenic callus. In vitro Cell. Dev. Biol., 1992, 18, 189-200.

112. Golovkin M.V., Abraham M., Morocz, Bottka S., Feder A., Dubits D., Production of transgenic maize plants by direct DNA uptake into embryogenic protoplasts. Plant Sci 1993, 90, 41-52.

113. Golds T.J., Babczinsky J., Mordhorst A.P., Koop H.-U. Protoplast preparation without centrifugation: plant regeneration from barley (Hordeum vulgare L.) Plant Cell Rep. 1993, 13, 188-192.

114. Goldstein C.S, Kronstrad W.E, Tissue culture and plant regeneration from immature embryos of barley Hordeum vulgare. Theoretical and Applied Genetics, 1986,71,631-636.

115. Gould J., Devey M., Hasegawa O., Ulian E.C., Peterson G., Smith R.H., Transformation of Zea mays L. Using Agrobacterium tumefaciens and the shoot apex. Plant Physiol., 1991, 95, 426-434.129

116. Gray D.J., Finer J.J., Development and operation of five particle guns for introduction of DNA into plant cells. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 1993, 33,219.

117. GroverA, Saji C, Sanan N, Griver A, Taming abiotic stresses in plants through genetic engineering: current strategies and perspective. Plant Sci., 1999, 143, 101-111.

118. Gupta H.S., Pattanayak A., Plant regeneration from mesophyll protoplasts of rice (Oryza sativa L.) Bio/Technology 1993,11, 90-94.

119. Gurel F., Gozukirmizi N., Optimization of gene transfer into barley (Hordeum vulgare L.) mature embryos by tissue electroporation. Plant Cell Reports, 2000, 19, 8, 787-791.

120. Haccius В., Question of unicellular origin of nonzygotic embryos in callus cultures. Phytomorphology, 1978, 28, 74-81.

121. Hahne В., Lorz H., Hahne G., Oat mesophyll protoplasts: their response to various feeder culture. Plant Cell Rep. 1990, 8, 590-593.

122. Hanzel J.J., Miller J.P., Brinkkkman M.A., Fendos E., Genotype and media effects on callus formation and regeneration in barley, Crop. Sci., 1985, 25, 2731.

123. Hang A., Frauc Kowiak J. D., Callus induction and plant generated from soe some diploid and tetraploid barley. Barley Genet. Newslett, 1984, 14, 40-41.

124. Henry J., Buyser Z., Androgenese zur des bles tenders en coursed selection. 2. V Obtention des graines. Z. Pflanzenzucht., 1980, 84,9-17.

125. Hiei Y., Ohta S., Komari Т., Kumashiro Т., Efficient transformation of rice (Oryza sativa L.) mediated by Agrobacterium and sequence analysis of the boundaries of the T-DNA. Plant J., 1994, 6, 271-282.

126. Hiei Y., Toshihiko K., Method for transforming monocotyledons. Biothecnol. Adv., 1997, 15, №3-4, p. 792.

127. Hoekstra S., van Zijderveld M.H., Heidkamp F., van der Mark F., Microspore culture of Hordeum vulgare L.: the influence of dencity and osmolaity Plant Cell Rep., 1993, 12, 661-665.130

128. Hooykaas P.J.J. Schilperoort R.A., Agrobacterium and plant genetic engineering. Plant Mol. Biol. 1992, 19, 15-38.

129. Huang В., Sunderland N., Temperature stress pretreatment in barley anther culture. Ann. Bot. 1982, v.49, -77-88.

130. Hunter C.P., Plant regeneration from microspores of barley, Hordeum vulgare. PhD thesis. Wye College, University of London, Ashford, Kent, 1988.

131. Hunter C.P., The effect of anther orientation on the production of microspore derived embryoids and plants of Hordeum vulgare cv.Sabarlis. Plant Cell Reports. 1985, v.4, 267-268.

132. Hunter C.P., Loose R.W., Clerk S.P., Lyne R.L., Maltose the preferred carbon source for barley anther culture. In "International Congress on: Genetic Manipulation in Plant Breeding -Biotechnology for The Breeder-", Abstr., Helsingor, 1988, p.71.

133. Hutabarat D., In vitro improvement of aluminium tolerance by gamma-rays in a rice cultivar. In "International Congress on: Genetic Manipulation in Plant Breeding -Biotechnology for The Breeder-", Abstr., Helsingor, 1988, p. 37.

134. Ishida Y, Saito H, Ohta S, Hiei Y, Komari T, Humashiro T, High efficiency transformation of maize (Zea mays L.) mediated by Agrobacterium tumefacience. Nat Biotechnol, 1996, 14, 745-750.

135. Jahne A., Becker D., Brettschneider R., Lorz H., Regeneration of trasgenic, microspore-derived, fertile barley. Theor. Appl. Genet., 1994, 89, 4, 525-533.

136. Jahne A., Becker D., Lorz H., Genetic engineering of cereal crop plants: a review. Euphytica, 1995, 85, 35-44.

137. Jahne A., Lazzeri P.A., Jager-Cussen M, Lorz H., Plant regeneration of embryogenic cell suspensions of barley {Hordeum vulgare L.). Theor. Appl. Genet, 1991, 82, 74-80.

138. Jahne A, Lazzeri P.A, Lorz H, Regeneration of fertile plants from protoplasts derived from protoplasts derived from embryogenic cell suspensions of barley {Hordeum vulgare L.) Plant Cell Rep, 1991, 10, 1-6.

139. Jelaska S, Rengel Z, Cesar V, Plant regeneration from mesocotyl callus of Hordeum vulgare L. Plant Cell Reports 1984, 3, 125-129.131

140. Jensen C.J., Monoploids production by chromosomes elimination. In: Applied fundamental aspects of plants. Cell, tissue, organ culture. N.-Y.,ien: Springer Verlag, 1977, 229-239.

141. Jensen L.G, Politz O., Olsen O., Tomsen K.K, Vonwettstein D., Inheritance of a codon-optimized transgene expressing heat-stable (1,3-1,4)-Beta-Glucanase in scutellum and aleurone of germinating barley. Hereditas, 1998, 129, 3, p. 215225.

142. Jordan M.S., barter E.N., Somaclonal variation in triticale. Can. J. Genet, and Cytol., 1985,27,2, 151-157.

143. Jorgensen R.B, Jensen C.J, Andersen B, von Bothmer R, High capacity of plant regeneration from callus of interspecific hybrids with cultivated barley (Hordeum vulgare L.). Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 1986, 6, 199-207.

144. Jorgensen R.S., Andersen В., Culture of isolated barley microspores. Selection of viable and embryogenic grains. In "International Congress on: Genetic Manipulation in Plant Breeding -Biotechnology for The Breeder-", Abstr., Helsingor, 1988, p.81.

145. Kao K.N., Barley anther and microspore culture. In "International Congress on: Genetic Manipulation in Plant Breeding -Biotechnology for The Breeder-", Abstr., Helsingor, 1988, p. 71.

146. Karp A, On the current understanding of somaclonal variation. In: Miflin B.J, (ed.), Oxford Surveys of Plant Molecular and Cell Biology. Oxford University Press, Oxford, 1991, Vol. 7, p. 1-58.

147. Karp A, Lazzeri P, Regeneration, Stability and Transformation of Barley. In: Shewry P.R, (ed.),"Barley: Genetics, Biochemistry, Molecular Biology and Biotechnology", University of Bristol, Bristol, 1991, 549-571.

148. Karp A, Steel S.H, Breiman A, Shewry P.R, Parmar S., Jones M.G.K, Minimal variation in barley plant regenerated from cultured immature embryos. Genome, 1987, 29,405-412.

149. Kasha K.J., Kao K.N., High frequency haploid production in barley (Я vulgare L.). Nature, 1970, 225, 874-876.

150. Kasha K.J., Reinbergs E., Utilization of Haploidy in Barley. Barley Genetica 3, Munchen. Ed. H. Gaul, 1976, 307-315.

151. Kazuga M, Liu Q, Miura S, Yamaguchi-Shinozaki K, Shinozaki K, Improving plant drought, salt, and freezing tolerance by gene transferof a single stress-inducible transcription factor. Nature Biothechnol., 1999, 17, 287-291.

152. Khan M.A., Ahmed S., Begum I., Jilli S.A., Alvi A.S., Evaluation of exotic barley germplasm for biotic and abiotic stresses Mediterranean Highland Ballochistan, Rachis, barley and wheat newsletter, 1997, v. 16, n.1/2, 32- 40.

153. Knudsen S., Due I.K., Andersen S.B., Genotypic effects on anther culture in barley. In "International Congress on: Genetic Manipulation in Plant Breeding -Biotechnology for The Breeder-", Abstr., Helsingor, 1988, p.82.

154. Knudsen S., Muller M., Transformation of developing barley endosperm by particle bombardment. Planta, 1991,185, 330-336.

155. Koblitz H., Barley establichment of cultures and the regeneration of plants. Crops, 1986, v.l, 181-203.

156. Kunihiko О., Koji О., Characterization of aluminum and manganese tolerant cell lines selected from carrot cell cultures. Plant and cell physiology, 1983, v.24, № 5, p.789-797.

157. Kunihiko O., Hiroshi A., Koji O., Release of citric acid into the medium by aluminum-tolerant carrot cells. Plant and Cell Physiology, 1984, v. 25, № 5, p. 855-858.

158. Langrige P., Brettschneider R., Lazzeri P., Lorz H., Transformation of cereals via Agrobacterium and the pollen pathwey: a critical assessment. Plant Journal, 1992, 2, 631-638.

159. Larkin P.J., Ryan S.A., Brettell R.I.S., Scowcroft W.R., Heritable somaclonal variation in wheat. Theor. and Appl. Genet., 1984, 67,2,443-445.

160. Larkin P.J, Scowcroft W.R, Somaclonal variation a novel source of variability from cell cultures for plant improvement. Theor. and Appl. Genet., 1981,60, 197-214.

161. Lazzeri P., Brettschneider R., Luhrs R., Lorz H., Stable transformation of barley via PEG-induced direct DNA uptake into protoplasts. Theor. Appl. Genet., 1991, 81,437-444.

162. Li L, Qu R, de Kochko A, Fauquet C, Beachy RN, An improved rise transformation system using the biolistic method. Plant Cell Rep., 1993, 12, 250255.

163. Li X.-Q., Liu C.-N., Ritchie S.W., Peng J.-Y., Gelvin S.B., Hoodges Т.К., Factors influencing Agrobacterium-mediated transient expression of gusA in rice. Plant Mol. Biol., 1992, 20,1037-1048.

164. Li Z., Murai N., Efficient plant regeneration from rice protoplasts in general medium. Plant Cell Rep. 1990, 9, 216-220.

165. Linacero R, Vazquez A.M, Somaclonal variation in plants regenerated from embrio calluses in rye Secale cereale L. In: Horn W, Jensen С J, Odenbach W,134

166. Schneider О. (eds), Genetic Manipulation in Plant Breeding. Walter de Gruyter, Berlin, Germany, 1986, p. 479-482.

167. Lindsey K., Jones M.G.KK., Plant Biotechnology in Agriculture, Open University Press, 1989, p.241.

168. Luckett D.J, Rose D, Knights E, Paucity of somaclonal variation from immature embryo culture of barley. Australian J. of Agricultural Research, 1989, 40,1155-1159.

169. Ltihrs R, Lorz H, Initiation of morphogenic cell suspension and protoplast culture of barley (Hordeum vulgare L.). Planta, 1988, 175, 71-81.

170. Lupotto E, Callus induction and plant regeneration from barley mature embryos. Annals of Botany, 1984, 54, 523-529.

171. Lyne R.L, Bennett R.I, Hunter C.P, Embryoid and plant production from cultured barley anthers. In: Withers L.A. & Alderson P.J, (eds), Plant Tissue Culture and its Agricultural Applications, Butterworths, Guildford, UK, 1986, p. 405-411.

172. Machii H., Mizuno H., Hirabayashi Т., Li H., Hagio Т., Screening wheat genotypes for high callus induction and regeneration capability from anter and immature embryo cultures. Plant Cell, Tissue and organ Cult., 1988, 53, 1, p. 6774.

173. Maheshwari N., Rajyalakshmi K., Baweja K., Dhir S.K.,Chowdhry C.N., Maheshwari S.C., In vitro culture of wheat and genetic transformation -retrospect and prospect. Critical Reviews in Plant Sciences, 1995, 14(2), 149178.

174. McBride K.E., Maliga P., Expression of Bacillus thuringiensis cry proteins in plant plastids. Biothechnol. Adv., 1997, 15, 2, p. 541.

175. McElroy D.,Zhang W., Cao J., Wu R., Isolation of an efficient actin promotor for use in rice transformation. Plant Cell, 1990, 2, 163-171.

176. Meins F. Jr., Determination and morphogenetic competence in plant tissue culture, In: "Plant cell culture technology", ed. M.M. Yeoman, Blackwell scientific publications, Oxford., 1986, p. 7 26.135

177. Mendel R.R, Mliller B, Schulze J, Kolesnikov V, Zelenin A, Delivery of foreing genes to intact barley cells by high-velocity microprojectiles. Theor. Appl. Genet., 1989, 78, 31-34.

178. Meredith C.P., Selection and characterization of aluminum-resistant variants from tomato cultured cells. Plant Sci. Lett., 1978, v.12, p. 25-34.

179. Mooney P.A., Goodwin P.B., Dennis E.S., Liewllin D.J., Agrobacterium tumefaciens-gene transfer into wheat tissues. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 1991,25,209-218.

180. Mordhorst A.P., Lorz H., Embriogenesis and development of isolated barley (Hordeum vulgare L.) microspores are influenced by the amount and composition of nitrogen sources in culture media. J. Plant Physiol., 1993, 142, 485-492.

181. Morocz S., Donn G., Nemeth J., Dubits D., An improved system to obtain fertile regenerants via maize protoplasts isolated from a highly embryogenic suspension culture. Theor. Appl. Genet. 1990, 80, 721-726.

182. Moukadiri O, Lopes C.R, Cornejo M.J, Physiological and genomic variations in rice cells recovered from direct immersion and storage in liquid-nitrogen. Physiol. Plant., 1999, 105, 3, p. 442-449.

183. Murashige Т., Skoog F., A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol, plant., 1962, 15, 13, p. 473-497.

184. Negrotto D, Jolley M, Beer S, Wenck A.R., Hansen G, The use of phosphomannose-isomerase as a selectable marker to recover transgenic maize plants (Zea Mays L.) via Agrobacterium transformation. Plant Cell Reports, 2000, 19, 798-803.

185. Nguyen Manh Don, Nong nghiep cong nghiep thuc plam. Agr. and Food Ind., 1997, 2, p. 78-80.

186. Novak F.I., Ohnotkova L., Die entvernte Hybridisation ais Methode zur Gewinnung von Haploiden von Gerste und Weizen. Tag-Ber., Akad. Landwirtsch. Wiss., 1980, 171, 157-162.

187. Novak F.I., Ohnotkova L., Kubalakova M., Cytogenetic studies of callus tissue of wheat (Triticum aestivumL.). Cereal Res. Commun., 1978, 6, 135-147.136

188. Oettler G, Wietholter S, Horst W.J, Genetic parameters for agronomic traits of triticale and other small-grain cereals grown on aluminium-toxic soil in southern Brazil. Plant Breeding, 2000, 119, p. 227-231.

189. Olsen F.L, Isolation and cultivation of embryyogenic microspores from barley (Hordeum vulgare L.). Hereditas, 1991, 115, 255-266.

190. Orton T.J, A quantitative analysis of growth and regeneration from tissue cultures of Hordeum vulgare L, H. jubatum and their interspecific hybrid. Environmental and Experimental Botany, 1979, 19, 319-335.

191. Orton T.J, Chromosomal variability in tissue cultures and regenerated plants of Hordeum. Theor. and Appl. Genet, 1980, 56, 101- 112.

192. Orton T.J, Somaclonal variation theoretical and practical considerations. Gene Manipul. Plant Improv. 16th Stadler Genet. Symp, New York, London, 1984, 427-468.

193. Papes D, Garaj-Vrhovac V, Jelaska S, Kolevska-Pletikapic B, Chromosome behaviour in cultured cell populations of higher plants. In: Brandham P.E, Bennet M.E. (eds), Kew Chromosome Conference II. George Allen & Unwin, London, UK, 1983, p. 155-163.

194. Pedersen S, Andersen S.B, Due I.K, Embryogenic cell cultures from wheat pollen. In "International Congress on: Genetic Manipulation in Plant Breeding -Biotechnology for The Breeder-", Abstr, Helsingor, 1988, p.84.

195. Pellet D.M, Grunes D.L, Kochian L.V, Organic acid exudation as an aluminum-tolerance mechanism in maize (Zea mays L.). Planta, 1995, 196,788795.137

196. Pellet D.M, Papernik L.A, Kochian L.V, Multiple aluminum-resistance mechanism in wheat: roles of root apical phosphate and malate exudation. Plant Physiol., 1996, 112, 591-597.

197. Pickering R.A., The assessment of variation in two populations of Hordeum bulbosum L. for improving success rates in a doubled haploid barley programme. Euphytica, 1983, 32, 3, 903-910.

198. Potrykus I., Gene transfer to cereals: an assessment. Tibtech.,1989, 7, 269273.

199. Potrykus I., Gene transfer to cereals: an assessment and perspectives. Physiol. Plant., 1990, 79, 125-134.

200. Powell W., Borrino E.M, Allison M.J, Griffiths D.W, Asher M.J, Dunwell J.M., Genetical analysis of microspore-derived plants of barley (Hordeum vulgare). Theor. and Appl. Genet., 1986, 72, 19-26.

201. Powell W., Borrino E.M, Goodall V, The effect of anter orientation on microspore-derived plant production in barley (Hordeum vulgare L.). Euphytica, 1988,38, 159-163.

202. Powell W., Caligari P.D.S, Dunwell J.M., Field performance of lines derived from haploid and diploid tissues of Hordeum vulgare. Theor. and Appl. Genet., 1986,72,458-465.

203. Powell W., Dunwell J.M., In vitro genetics of barley (Hordeum vulgare L.): Response of immature embryos to 2,4-dichlorphenoxyacetic acid, Heredity, 1987, vol.58,p.75 80.

204. Powell W., Hayrer A.M, Wood W, Dunwell J.M, Huang B, Variation in the agronomic characters of microspore-derived plants of Hordeum vulgare cv. Sabarlis. Heredity, 1984, 52, 19-23.

205. Prioli L.M, Sondahl M.R, Plant regeneration and recovery of fertile plants from protoplasts of maize (Zea mays L.). Bio/Technology, 1989, 7, 589-594.

206. Raineri D.M., Bottino P., Gordon M.P., Nester E.W., Agrobacterium-mediated transformation of rice {Orysa sativa L.). Bio/Technology, 1990, 8, 3338.138

207. Rajcan-Separovic E.,The timing of kanamycin selection in tissue culture of wheat (T. aestivum) embrios. In "International Congress on: Genetic Manipulation in Plant Breeding -Biotechnology for The Breeder-", Abstr., Helsingor, 1988, p.91.

208. Rashid A., Reinert J., High-frequency embriogenesis in initial pollen cultures ofNicotianatabacum. Naturwissenschaften, 1981, 68, 7, 378-379.

209. Rashid H, Yokoi K, Toriyama K, Hinata K, Transgenic plant production mediated by Agrobacterium in Indica rice. Plant Cell Rep, 1996, 15, 727-730.

210. Rathore K.S., Chowdhury V.K., Hodges Т.К., Use of bar as selectable marker gane and for the production of herbicide-resistance in rice plants from protoplasts. Plant Mol. Biol., 1993, 21, 871-884.

211. Ritala A, Mannonen L, Aspegren K, Salmenkallio-Martilla M, Kurten U, Hannus R, Lozano J.M, Teeri T.H, Kauppinen V, Stable transformation of barley tissue culture by particle bombardment. Plant Cell Reports, 1993, in press.

212. Saalbach G, Koblitz H, Attempts to initiate callus formation from barley leaves. Plant Science Letters, 1978, 13, 165-169.

213. Sanford J.C., Klein T.M., Wolf E.D., Allen N„ Delivery of substances into cells and tissues using a particle bombardement process. J. Part. Sci. Tech., 1987, 5,27-37.

214. Sanford J.C., Biolistic plant transformation. Physiol. Plant., 1990, 79, 206209.

215. Sanford J.C., DeVit M.J., Russell J.A., Smith F.D., Harpending P.R., Roy M.K., Johnston S.A., An improved, helium-driven biolistic device.Technique, 1991,3,3-16.

216. Schmohl N, Pilling J, Fisahn J, Horst W.J, Pectin methylesterase modulates aluminium sensitivity in Zea mays and Solanum tuberosum. Physiologia Plantarum, 2000, 109, 4, 419-427.

217. Shillito R.D., Carswell G.K., Jonsons C.M., DiMaio J.J., Harms C.T., Regeneration of fertile plants from protoplasts of elite inbred maize. Bio/Technology, 1989, 7, 581-587.

218. Singh R.J, Chromosomal variation in immature embryo derived callus of barley (Hordeum vulgare L.). Theor. and Appl. Genet., 1986, 72, 710- 716.

219. Sith R.H., Bhaskarau S., Schertz K., Sorgum plant regeneration from aluminium selection media. Plant Cell Reports, 1983, 2, № 3, p. 129-132.

220. Skirvin R.M, Chu M.C, Mann M.L, Young H, Sullivan J, Fermanian T, Stability of tissue culture medium pH as a function of autoclaving, time, and cultured plant material. Plant Cell Rep., 1986, 5, 4, 292-294.

221. Smith M.K., McComb J.A., Selection for NaCl tolerance in cell cultures of Medicago sativa and recovery of plants from a NaCl-tolerant cell line. Plant Cell Reports, 1983, 2, № 3, p. 126-128.

222. Smith R.H, Hood E., Agrobacterium tumefaciens transformation of monocotyledons. Crop Sci, 1995, 35, 301-309.

223. Somers D.A., Rines H.W., Gu W., Kaeppler H.F., Bushnell W.R., Fertile transgenic oat plants. Bio/Technology, 1992, 10, 1589-1594.

224. Subrahmaniyam N.C., Kasha K.J., Selective chromosomal elimination during haploid formation in barley following interspecific Hybridization. Chromosoma., 1973, v.42, 111-125.

225. Sunderland N., Xu Z.H., Shed pollen culture in Hordeum vulgare. J. Exp. Bot, 1982, v.33,- 1086-1095.

226. Tada Y., Sakamoto M., Fujimura Т., Efficient gene introduction into rice by electroporation and analysis of transgenic plants: use of electroporatin buffer lacking chloride ions. Theor. Appl. Genet. 1990, 80, 475-480.140

227. Tahir М., Ottekin A. Winter and facultative barley germplasmm impruement for continental Mediterranean environments, Rachis, barley and wheat newsletter, 1997, v. 16, n. 1/2, 1-8.

228. Teeri T.H, Patel G.H, Aspegren A., Kauppinen V., Chloroplast targeting of neomycin phosphotransferase II with a pea transit peptide in electroporated barley mesophyll protoplasts. Plant Cell Reports, 1989, 8, 187-190.

229. Terada R., Nakayama Т., Iwabuchi M., Shimamoto K., A wheat histone H3 promotor confers cell division-dependent and -independent expression of the gusA gene in transgenic rice plants. Plant Journal, 1993, 3, 241-252.

230. Thomas M.R, Scott K.J, Plant regeneration by somatic embryogenesis from callus initiated from immature embryos and immature inflorescences of Hordeum vulgare. J. of Plant Physiology, 1985, 12, 159-169.

231. Thorn E.C., Effect of melibiose and polyethylene glycol on anther-culture response in barley. In "International Congress on: Genetic Manipulation in Plant Breeding -Biotechnology for The Breeder-", Abstr., Helsingor, 1988, p.80.

232. Tingay S, McElroy D, Kalla R, Fieg S, Wang M, Thornton S, Brettell R, Agrobacterium tumefaciens-m&dmXtd barley transformation. Plant J., 1997, 11,6, 1369-1376.

233. Tobita Satoshi, Takahashi Hideto, Miyake Hiroshi, Totsuka Tsumugu, Selection and partial characterization of copper-resistant line of rice (Oriza sativa) callus culture. J. Plant Physiol., 1988, 133, 5, 545-549.

234. Van Leurt J.A.G., Grando S., Ceccarelli S., Differenses in common root rot among barley lines selected for different environements, Rachis, barley and wheat newsletter, 1997, v. 16, n.1/2, 40- 46.

235. Vasil I.K., Progress in regeneration and genetic manipulation of cereal crops. Bio/ Technology, 1988, 6, p.397-401.141

236. Vasil V., Castillo A.M., Fromm M.E., Vasil I.K., Herbicide resistant fertile transgenic wheat plants obtained by microprojectile bombardment of regenerable embryogenic callus. Bio/Technology, 1992, 10, 667-674.

237. Vasil I.K., Vasil V., Advances in cereal protoplast reserch. Physiol Plant,1992, 85, 279-283.

238. Vasil V., Vasil I.K, The ontogeny of somatic embryos of Pennisetum americanum (L) K. Schum I in cultured immature embryos. Botanical Gazette, 1982, 143,454-465.

239. Walker D.J, Black C.R, Miller A.J, The role of Cytosolic potassium and pH in the growth of barley roots. Plant Physiol., 1998, 118, p. 957-964.

240. Walters D.A., Vetsch C.S., Potts D.E., Lundguist R.C., Transformation and inheritance of a hygromycin phosphotransferase gene in maize plants. Plant Molec. Biol., 1992, 18, 189-200.

241. Wan Y., Lemaux P.G., Generation of large numbers of independently transformed fertile barley plants. Plant Physiol., 1994, 104, 37-48.

242. Weeks J.T., Anderson O.D., Blechl Rapid production of multiple independent lines of fertile transgenic wheat (Triticum aestivum). Plant Physiol.,1993, 102, 1077-1084.

243. Weigel R.C, Hughes K.W, Long term regeneration by somatic embryogenesis barley (Hordeum vulgare L.) tissue cultures derived from apical meristem explants.Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 1985, 5, 151-162.

244. Wu H, McCormac AC, Elliot MC, Chen D, Agrobacterium-mediated stable transformation of cell suspension cultures of barley (Hordeum vulgare L.). Plant Cell Tissue Organ Cult, 1998, 54, 161-171.

245. Zakri A.H., Induction and selection of aluminium-resistant variants from soybean cell cultures. "Nucl. Techn. and In vitro Cult. Plant. Improv. Proc. Int. Symp., Vienna, 19-23 Aug., 1985". Vienna, 1986, 267- 273.

246. Zhang X, Jessop R.S, Analysis of genetic variability of aluminium tolerance response intriticale. Euphytica, 102, 177-182.142

247. Zhu Mu-yuan, Huag Chun-nong, Xu A-bing, Yuan Miao-bao, In vitro selection of aluminum-tolerant variant of barley callus and its characterization. Acta Botanica Sinica, 1990, 32, № 10, p.743-748.

248. Zimny J., Becker D, Brettschneider R, Lorz H, Fertile, transgenic Triticale (x Triticosecale Wittmack). Molec. Breeding, 1995, 1, 155-164.

249. Zimny J., Lorz H., Factors influencingsomatic embryogenesis of rye (Secale cereale L.). In "International Congress on: Genetic Manipulation in Plant Breeding -Biotechnology for The Breeder-", Abstr., Helsingor, 1988, p. 65.

250. Zong Ma, Susan C. Miyasaka, Oxalate Exudation by Taro in Response to Al. Plant Physiol., 1998, 118, p. 861-865.1. Россельхозакадемия1. Научно-исследовательскийинститут сельского хозяйства Центральных районов Нечернозёмной зоны

251. ДИРЕКТОРУ ВНИИСБ П. Н ХАРЧЕНКО2000 г.п/о Немчиновка Московской области тел. № 591-83-911. СПРАВКА