Получение газонных трав, толерантных к засолению и ионам меди, методами биотехнологии

Гладков, Евгений Александрович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Получение газонных трав, толерантных к засолению и ионам меди, методами биотехнологии
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Получение газонных трав, толерантных к засолению и ионам меди, методами биотехнологии"

На правах рукописи

ГЛАДКОВ Евгений Александрович

ПОЛУЧЕНИЕ ГАЗОННЫХ ТРАВ, ТОЛЕРАНТНЫХ К ЗАСОЛЕНИЮ И ИОНАМ МЕДИ, МЕТОДАМИ БИОТЕХНОЛОГИИ

03.00.23 — биотехнология 03.00.16 — экология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2003

Работа выполнена в лаборатории генетики культивируемых клеток отдела биотехнологии и биологии клетки Института физиологии растений РАН и на кафедре экологической и промышленной биотехнологии Московского государственного университета инженерной экологии.

Научные руководители: кандидат биологических наук, доцент Юлия Ивановна Долгих; доктор технических наук, профессор Валентин Васильевич Бирюков.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Александр Андреевич Минин; кандидат биологических наук, доцент Елена Анатольевна Калашникова.

Ведущая организация — Биологический факультет Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова.

Защита диссертации состоится в 2003 г. в /У^й-

сов на заседании диссертационного совета Д .220.043.10 при Московской сельскохозяйственной академии имени К.А. Тимирязева.

Адрес: 127550, г. Москва, ул. Тимирязевская, 49. Ученый совет МСХА.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке МСХА.

Автореферат разослан £0 2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета— кандидат биологических наук

Г.И. Карлов

г тс

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Один из важнейших элементов озеленения городов -газоны. Газоны имеют не только декоративное значение, но и выполняют огромную экологическую, санитарно-гигиеническую роль, защищают почву от водной и ветровой эрозии, а город от пылевых образований.

Газоны, расположенные в городе, постоянно испытывают действие техногенных и антропогенных факторов. Содержание меди, цинка и свинца в городских почвах превышает ПДК более чем в 5 раз (Обухов, 1990). Наибольшей фитотоксичностыо среди тяжелых металлов обладает медь. Крайне высокое содержание меди фиксируется даже в почвах скверов и парков.

Один из способов решения проблемы озеленения города даже в неблагоприятных экологических условиях является получение растений, устойчивых к загрязнениям почвы. Наряду с градиционными методами селекции перспективно использовать современные биотехнологические подходы, которые уже хорошо зарекомендовали себя при получении растений, толерантных к различным экологическим стрессовым факторам: засухе, засолению, низким и высоким ' температурам и др. (№Ьогз,1980; Долгих, 1994; Белянская, 1995). Применительно к

газонным травам подобные работы отсутствуют, хотя нет принципиальных показаний против их использования.

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы было получение с помощью методов биотехнологии газонных трав, толерантных к засолению и солям меди.

Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА /" СПетербик

гТ7эк _

провести оценку фитотоксичности ряда противогололедных реагентов, предложенных для использования в городе Москве;

на примере 2 практически важных видов газонных трав оптимизировать условия культивирования каллусных культур овсяницы и полевицы и регенерации растений;

разработать условия клеточной селекции для отбора устойчивых к хлориду натрия и солям меди каллусных линий газонных трав;

из отобраных каллусных линий, толерантных к хлориду натрия и солям меди, получить растения регенеранты, устойчивые к этим токсикантам;

проверить сохранение признаков солеустойчивости и толерантности к меди в следующих поколениях выделеных регенерантов.

Научная новизна работы. Проведено испытание фитотоксичности 7 образцов противогололедных материалов в диапазоне концентраций 0,1-1,5% на прорастание семян газонных трав овсяницы красной и полевицы гигантской. Показано, что болыпинсгво изученных противогололедных магериалов ингибирует прорастание семян уже в концентрациях 0,5-1%.Разработана схема клеточной селекции, включающая культивирование каллусной ткани на средах с хлоридом натрия или ионами меди в сублетальных концентрациях в течение 2 пассажей и последующая регенерация и укоренение на среде с токсикантами, а затем и в почве. Впервые с помощью биотехнологических методов получены растения полевицы и овсяницы, толерантные к соли. У полевицы показано наследование признака солеустойчивости в двух поколениях.Впервые получены растения полевицы, толерантные к высоким концентрациям меди, показано наследование признака устойчивости к меди в следующем поколении.

Практическая ценность работы. Полученные толерантные формы газонных трав могут служить основой для создания новых сортов, обладающих устойчивостью к засолению и ионам меди. Разработанная схема клеточной селекции может быть использована для получения устойчивых форм других видов растений.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Пущинской школе-конференции "Биология - наука 21 века", 2003; Международной выставке Доркомэкспо 2003, Москва; Международных конференциях "Инженерная

защита окружающей среды", Москва, 2002, 2003; Международной конференции «Экологическая безопасность как фактор устойчивого развития», 2001,2002 г.(работа дважды признанна лучшей); Международных симпозиумах Юнеско «Техника и технология экологически чистых производств», 2001, 2002, 2003; Международной конференции «Сельское хозяйство и природные ресурсы», 2002 г., Москва, Международном конгрессе «Биотехнология, состояние и перспективы», Москва, 2002 г.

Основные результаты докладывались на 5 выставках: "НТТМ 2001" (Москва, ВВЦ, получена медаль ВВЦ); выставке молодежных инициатив (Москва, ВВЦ, 2001); "НТТМ 2002" (Москва ВВЦ, получен диплом ВВЦ); международной выставке "Биотехнология- состояние и перспективы развития" (Москва, мэрия, 2002); международной выставке "Взгляд в будущее- экспо 2010" (Москва, ВВЦ, 2002).

Структура и объем диссертации Работа изложена на страницах

машинописного текста. Она состоит из введения, обзора литературы, описания методов, результатов и их обсуждения, выводов. Список литературы включает^^Т? источников. Текст иллюстрирован /¿таблицами и -/-/рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объектами исследования было 2 вида газонных трав: овсяница красная красная (Festuca rubra) и полевица побегоносная (Agrostis stolonifera) Фитотоксичность противогололедных реагентов проверяли на другом виде полевицы - полевице гигантской (Agrostis gigantea L.)

Условия культивирование каллусных культур и регенеращи растений. Первичный каллус получали из семян на агаризованной среде Мурасиге-Скуга (МС), содержащей ЗОг/л сахарозы, 500мг/л гидролизата казеина и 7 г/л агар агара. Концентрации 2,4-Д варьировали в пределах от1 до 10мг/л. Для роста каллуса использовали среду МС с добавлением от 1 до 3 мг/л 2,4-Д. Раз в месяц клетки пересаживали на свежую питательную среду. Регенерацию растений проводили на среде МС без гормонов, укоренение на среде МС с 2мг/л НУК. Укоренившиеся регенеранты высаживали в почву.

Оценку степени токсичности противогололедных материалов( ПГМ) проводили путем проращивания семян овсяницы и полевицы в чашках Петри на

фильтровальной бумаге, смоченной растворами тестируемых реагентов в концентрациях 0,05-1,5%.В качестве реагентов использовали: хлорид натрия технический карьерный , хлорид магния шестиводный (Бишофит),хлорид кальция, твердый и жидкий (ХКМ), нитраты кальция и магния, карбамид (НКММ), ацетат аммония (Антиснег-1, Марка А), ацетат калия (Нордикс-П).

Оценку устойчивости камусных культур и растений к засолению и ионам меди проводили для каллусных тканей по увеличению сырой массы иннокулюмов после месяца культивирования на средах с разным содержание селективных факторов, а для растений - по всхожести семян в почве, содержащей ЫаС1 или Си804, и увеличению сухой массы за два месяца. В каждом варианте опыта анализировали по 200 семян, 200 растений или 150 каллусов, опыты повторены трижды.

Для каждого качественно отличающегося вида эксперимента рассчитаны значения дисперсии воспроизводимости относительных величин, усреднённые для всего массива данных, а также доверительные интервалы различий между группами измерений при надежности оценки 95%.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Экологическая экспертиза ПГМ

Учитывая негативные для растений последствия применения хлористого натрия для борьбы с гололедом, по заданию правительства Москвы рядом организаций предложены новые ПГМ. Нами было проведено изучение влияния различных ПГМ на прорастание семян газонных трав полевицы и овсяницы.

Летальной концентрацией для всех реагентов, включая техническую соль, оказалось их содержание в воде 1,0-1,5% (Табл.1). Степень токсичности ПГМ на стадии прорастания семян и в период роста растений была примерно одинаковой.

По степени опасности все испытанные реагенты можно отнести к двум группам: к 1-ой группе могут быть отнесены Бишофит, ХКМ твердый и жидкий, Нордикс-П как относительно безопасные при условии соблюдения принятых норм их расхода в течение зимнего периода Во 2-ю труппу реагенте® с возможными отрицательными последствиями их действия на растения вошли Ангиснег-1 и НКММ Высокая фитотоксичность обоих реагентов проявилась при разведении нативных препаратов (0,5-1 г/ 1000 мл воды), что во много раз превышает степень токсичности №С1 для этой тест-системы.

Таблица 1. Влияние противогололедных реагентов на прорастание семян полевицы и овсяницы в % к контролю на воде.

ПГМ Всхожесть при концентрации ПГМ, %

од 0,5 1.0 1,5

1 2 1 2 1 2 1 2

Хлорид натрия (технич) - - 81 30 76 12 12 0

Хлорид магния (Бишофит) 105 114 79 82 79 30 60 0

Хлорид кальция, твердый 90 68 74 52 48 0 14 0

Хлорид кальция жидкий 81 55 71 46 38 9 19 0

Нитраты кальция и магния 71 15 10 0 0 0 0 0

Ацетат аммония 56 32 4 0 0 0 0 0

Ацетат калия (НордиюЯТ) 100 78 61 10 62 10 52 0

Примечание к таблице 1 • «1» - полевица; «2» - овсяница.

Поскольку все испытанные ПГМ обладают определенной фитотоксичностью, р актуальной является задача получения растений, толерантных к засолению. Все

реагенты первой группы (бишофит, ХКМ) содержат токсичный для растений ион хлора. Кроме того, техническая соль до сих пор широко применяется в борьбе с * гололедом, хотя и обладает большей фитотоксичностью, чем выбранные ПГМ.

Поэтому при разработке биотехнологии получения устойчивых к ПГМ газонных трав в качестве селективного агента был выбран хлорид натрия. Предполагалось, что толерантные к NaCl растения могут проявить перекрестную устойчивость к бишофиту и ХКМ.

2. Разработка условий полунения и культивирования каллуса и регенерации растений.

Эффективная система каллусогенеза и регенерации растений является обязательным условием успешного применения биотехнологических подходов. Были оптимизированы условия каллусогенеза, культивирования каллуса и индукции морфогенеза. Была использована универсальная среда МС с разным содержанием 2,4-Д При концентрации 2,4-Д 1 мтУл у полевицы и овсяницы наблюдали интенсивное прорастание семян, процент образования каллуса был невысок. При концентрации 2,4-Д 10 мг/л частота каллусообразования была значительной, однако большая часть каллуса была неэмбриогенной. Эмбриогенный каллус формировался с высокой частотой на семенах обеих трав при концентрации 2,4-Д 3 и 5 мг/л (Табл.2).

Таблица 2. Влияние концентрации 2,4-Д на каллусообразование у овсяницы и полевицы

Концентрация 2,4-Д, мг/л % каллусогенеза % регенерирующих каллусов

Индукция каллуса Культивирование каттуса

овсяннида половица овсяница полевица

1 - 23 33 - -

3 3 5 5 10 10 1 3 1 3 1 3 50 80 80 95

50 80 70 78

50 78 70 82

50 78 65 78

43 56 40 45

43 56 40 43

Довершелшьйиггервап различий (% ог измеряемой величины) 7,8 5,6 6,1 4,0

Культивирование каллуса на средах с высоким содержанием 2,4-Д вело к быстрой потере способности к морфогенезу. При снижении концентрации 2,4-Д до 1 мл удалось повысить частоту регенерирующих растения каллусов до 80% у овсяницы и до 95% у полевицы (Табл.2).

Для дальнейшей работы была выбрана среда МС, содержащая Змг/л 2,4-Д для образования каллуса, 1мг/л -для пассирования.

В результате проведенной оптимизации условий культивирования тканей полевицы и овсяницы разработана эффективная система in vitro, характеризующаяся высокой частотой образования каллуса и регенерации растений.

3. Получение газонных трав, толерантных к засолению

3.1. Определение чувствительности культивируемых тканей и растений к

NaCl

Для проведения селекции и оценки получаемых регенерантов нужно было определить чувствительность к соли растений и каллусных культур.

Масса каллуса на среде без соли увеличивалась за месяц в 6 раз. Добавление 1% NaCl вызывало снижение роста тканей в 2 раза для полевицы и в 1.6 раза для овсяницы. При 2%-ном засолении средняя масса каллуса была в 2,5 раза ниже контрольной у обоих видов трав. На средах с 1 и, особенно, 2% NaCl сильно проявлялась гетерогенность культивируемых тканей.

Интенсивность роста отдельных инокулюмов различалась в полтора-два раза. Часть каллусов погибала на среде с солью, а некоторые сохраняли рост на уровне контроля.

Засоление значительно снижало эмбриогенную способность каллусной ткани. При 1% засоления у выживших каллусов полевицы эмбриогенная способность составляла 49% от контроля, у овсяницы-56%, при 2% засолении у полевицы- 45%, у овсяницы -43%. Таким образом, только половина каллусов выживших на средах с NaCl сохраняла способность к регенерации растений.

Концентрации 1% и 2% были выбраны для дальнейшей селекции в культуре клеток.

Действие соли на растения определяли пределах концентраций 0,3-1%, так как именно такой уровень засоления регистрируется в почвах Москвы.

Таблица 3. Влияние №С1 на всхожесть семян и рост растений овсяницы и полевицы.

Концентрация N301, % Всхожесть семян, % от контроля Средняя масса растений, %от контроля

Овсяница Полевица Овсяница Полевица

0,3 65 52 71 62

0,6 56 37 58 50

1,0 20 22 46 50

Доверительный интервал различий (% от измеряемой величины) 3,7 5,0 4,3 . 3,5

Ингибирующее влияние на прорастание семян и рост растений проявлялось уже при низкой концентрации ЫаС1 (03%)- При невысоких концентрациях хлорида натрия более чувствительной оказалась полевица, однако однопроцентное засоление было одинаково токсично для обеих трав (Табл.3). Растения на засоленной почве росли медленно, листья, особенно нижние, желтели и засыхали Концентрация 1% ЫаС1 являлась сублетальной для овсяницы и полевицы, при очень низкой всхожести у большинства выживших растений половина листьев желтела и отмирала.

3.2. Получение солеустойчивых клеточных клонов и растений.

Для отбора солеустойчивых клонов первичный каллус культивировали на средах с 1 и 2 % ЫаС1. В ходе отбора происходило изменение выживающих эксплантов: уменьшалась эмбриогенная способность ткани, нерастущие экспланты приобретали темный цвет, некротизировались. Светлые экспланты, увеличившиеся в размере, отбирали для дальнейшей пересадки. Отобранные экспланты помещали вновь на селективную среду с 1% и 2% №С1. После двух пассажей в на среде с 1% №С1 и у овсяницы, и у полевицы выжило около 30% каллусов. Процесс морфогенеза является наиболее чувствительным к стрессам [Белянская и др ,1994 ]. Поэтому для повышения вероятности отбора только устойчивых мутантных вариантов регенерацию растений из отобранных клонов также проводили на среде с 1% КтаС1. Только 60 каллусов овсяницы и 200 каллусов полевицы сформировали растения, более половины которых погибла при пересадке в почву (Табл.4).

Таблица 4. Отбор толерантных к ЫаС1 растений овсяницы и полевицы

Концентрация №С1, % Общее число каллусов Число устойчивых клонов Число регенерантов ю укго Число регенерантов в почве

Полев. Овеян. Полев. Овеян Полев. Овеян. Полев. Овеян.

1 1500 450 590 180 200 60 132 26

2 600 300 150 86 50 25 18 9

При проведении селекции в более жестких условиях (среда с 2% НаС1) значительная часть каллусной ткани теряла жизнеспособность в течение 2 недель. Лишь некоторые клоны сохраняли эмбриогенную способность и имели прирост биомассы. Из них были получены растения-регенеранты, однако с меньшей частотой, чем при проведении селекции на среде с 1% соли. Полученные растения хуже приживались в почве и не дали семян. По-видимому, культивирование клеток на среде с 2% соли вызывает неспецифические повреждения, которые впоследствие снижают выживаемость регенерантов В целом выживаемость овсяницы была ниже, чем у полевицы.

3.3. Характеристика растений-регенерантов

Выжившие растения-рсгенеранты полевицы и овсяницы первоначально выращивали в почве без соли. Около 5% регенерантов имели морфологические отличия от исходных растений: отсутствие кущения, более жесткие и темные листья. Остальные растения были морфологически нормальны и росли так же, как контрольные образцы. После месяца выращивания растения были срезаны на расстоянии 10 см от поверхности почвы для имитации стрижки газона. Затем для проверки солеустойчивости в сосуды с частью растений вносили ШС1 в концентрациях 0,5 - 2,0%. Остальные регенеранты были использованы для оценки характера отрастания травы после стрижки и для получения семян.

Прирост растений в почве без соли за месяц был одинаковым у исходных растений и регенерантов и составил 5 см для овсяницы и 4 см для полевицы. В варианте с засолением выживаемость регенерантов была выше выживаемости исходных растений при всех концентрациях №С1. С увеличением концентрации соли

разница увеличивалась (Табл.5). Средний прирост за месяц у растений, полученных из солеустойчивых клонов, был в 2 раза больше при уровне соли 1% и в три раза при полуторапроцентном засолении (Табл. 5). В отличие от пожелтевших исходных растений, большая часть регенерантов сохраняла высокие декоративные качества при концентрации NaCl 1%. При более высокой средней устойчивости растений, полученных после клеточной селекции, индивидуальные растения демонстрировали различную реакцию на NaCl. Например, у полевицы при концентрации соли 1% из 10 растений 3 имели чувствительность на уровне исходных растений, 2 оказались немного устойчивее, а на 5 регенерантов засоление не оказывало никакого влияния. По-видимому, не у всех растений, регенерированных из отселектированных клеточных клонов, признак устойчивости проявляется на уровне цело: о организма, и степень его проявления может быть различной.

Таблица 5 Выживаемость и рост растений-регенераншв полевицы (овсяницы), полученных после селекции на солеустойчивость (в % к росту

без засоления)

Концэпрация NaCl,% Выживаемость исходных растший,% Выживаемость регенератов, % Прирост исходных растений в засоленой почве, % Прирост регенератов в засоленной почве %

полев. овеян. Полев. Овеян. Полев. овеян. полев овеян.

05 100 100 100 100 58 69 90 100

1.0 90 100 100 100 33 33 70 80

1.5 10 20 80 80 18 20 56 50

2.0 0 0 30 20 0 0 26 | 20

Доверительный интервал различий (% от измеряемой величины) - - - 5,6 6,5 4,3 2,6

Анализ солеустойчивости растений, полученных из отселектированных клонов показал, что методом клеточной селекции можно получить газонные травы, толерантные к засолению.

3.4. Проверка наследования признака солеустойчивости

Поскольку селекционную ценность представляет только наследуемая солеустойчивость, необходимо было проверить реакцию на засоление растений, выращенных из семян регенератов. Несмотря на отсутствие морфологических отличий от контроля, регенеранты существенно различались по семенной продуктивности. У овсяницы зацвело только одно растение, образовавшихся семян было слишком мало для анализа. У полевицы семена завязались у десяти регенерантов, полученных из клонов, отобранных на среде с 1% КаС1. Потомство трех наиболее продуктивных клонов было использовано для определения солеустойчивости.

Всхожесть семян регенерантов № 1 и № 2, проращиваемых в чашках Петри на фильтровальной бумаге, смоченной 1% раствором ЫаС1, и длина проростков через три недели после начала опыта были в два раза больше соответствующих показателей исходных растений. У контрольных проростков в варианте с солью корни появились только у единичных семян, а у семян регенератов ингибирования корнеобразования по сравнению с семенами, проращиваемыми на воде, не отмечено (Рис.1).

Рис 1. Влияние 1% засоления на всхожесть и рост потомков растения-регенерата полевицы

_□ Всхожесть_И Рост_

По 30 семян регенератов № 1 и № 3 высаживали в почву с содержанием №С1 0,7%. Семена контрольных растений в этих условиях не проросли, хотя в почве без

соли они имели всхожесть 95%.У регенеранта № 1 всходы дали 60 % семян, а у регенеранта № 3 - 33 %. По степени кустистости и высоте потомки регенерантов на соли не уступали растениям, выращенным в нормальной почве (Таб.6). У отселектированных растений отмечено обильное цветение и завязывание семян в стрессовых условиях.

Табл 6. Влияние хлорида натрия на всхожесть, рост и декоративные свойства растений первого поколения (Р^.

Найме нование групп расте ний Коли честворасге ний Всхожесть % Кустис тость (число побегов) Количе ство продук тивных побегов Высота, см

Контроль (без соли)

Исходные 26 86,7 3,7 1,5 14,5

1 Р, (№1) 23 76,7 5,0 3,5 14,9

Р[(№3), 19 63,3 4,2 3,4 14,2

В том числе растение* 1 - 17 10 18

Концентрация МаС1 = 0,7%

Исходные 0 0 0 0 0

Р, (№1) 18 60 4,9 3,1 15

В том числе растение** 1 - 18 5 23

Р1(№3) 5 33 5,9 3,2 13,5

В том числе растение*** 1 - 12 7 17

Проверка следующего семенного поколения также показала сохранение признака солеустойчивости.

Проявление солеустойчивости в потомстве регенерантов, полученных после клеточной селекции, свидетельствует о мутационной природе данного признака. Различная степень устойчивости к №С1 является, вероятно, отражением сегрегации генов, контролирующих реакцию на засоление.

4. Проверка устойчивости к бишофиту растений, толерантных к №С1

Наличие общих механизмов устойчивости позволяет предполагать, что формы, толерантные к одному фактору, могут быть менее чувствительны и к другим Так как бишофиг может быть рекомендован в качестве новой противогололедной смеси вместо хлористого натрия, целесообразно было проверить устойчивость к нему растений, толерантных к ЫаС1. Хлористый магний мало повлиял на прорастание семян: всхожесть как отселектированных, так и исходных растений была высокой. Но исходные растения значительно отставали в росте от контрольных, а рост растений, выращенных из семян регенеранта. почти не уступал росту в почве без соли (Табл 7) В следующем поколении 90% проверенных Ь'аО-устойчивых растений также росли на бишофите лучше, чем контрольные.

Таблица 7. Влияние бишофита (1%) на рост растений полевицы,

устойчивых к N801

Растения Всхожесть, Рост,

% от контроля % от контроля

Исходные 78 50

Устойчивые к N301 83 86

Доверительный интервал различий (%) 6,7 5,4

Таким образом, данный метод можно рекомендовать для получения газонных трав, обладающих повышенной устойчивостью к неблагоприятным условиям мегаполисов

4. Получение растений, толерантных к ионам меди

4.1. Определение чувствительности культивируемых тканей н растений к

меди

Другим важным составляющим техногенным фактором являются соли тяжелых металлов, среди которых медь имеет наибольшее значение. Для селекции устойчивых к ионам меди газонных трав была исследована чувствительность растений и каллусных культур овсяницы и полевицы к CuS04. В почвах г. Москвы зарегистрировано содержание ионов меди до 300 мг/л (Добровольский,Строгонова,1997). Между тем нами было показано, что добавление в сосуды с экспериментальными растениями 150 мг/л Си вызывает значительное уменьшение всхожести семян и двукратное замедление роста у обеих трав . При повышении дозы меди до 300 мг/л у растений начинался хлороз, а при длительном выращивании в загрязненной почве они погибали.

Добавление соли меди в питательную среду ингибировало рост каллуса (Табл. 8). Как и целые растения, культивируемые ткани овсяницы были более чувствительны к меди, чем полевицы. Одна и та же степень подавления роста отмечена у овсяницы при дозе Си 100 мг/л, а у полевицы при дозе 150мг/л.

При концентрации 300 мг/л и выше каллус газонных трав приобретал голубую окраску, вероятно, вследствие интенсивного накопления меди в клетках. Большая часть каллусных инокулюмов теряла способность к регенерации растений после культивирования на среде с медью.

На основании исследования действия меди на каллусные ткани и растения овсяницы и полевицы доза 150 мг/л была выбрана в качестве селективной для отбора устойчивых клеток и растений.

Та&ьСВлияние меди на рост и способность к морфогенезу каллуса газонных трав

;if.. I

¥ Л • , 1 Вид Концентрация меди, мг/л % прироста по отношению к контролю % образования эмбриогенного каллуса но отношению к контролю

Полевица 100 61,5 33,3

150 36,9 20,5

200 20 6,4

300 3,8 2,5

450 0 0

Доверительный интервал различий {%) - 4,0 4,4

Овсяница 100 34,2 21

150 28,5 18

200 10,7 5

300 2,1 2,5

450 0 2,5

Доверительный интервал различий (%) - 4,5 6,5

4.2. Отбор и характеристика толерантных к меди растений

Для отбора толерантных к меди растений была использована такая же схема селекции, как и в случае с МаС!. Селективный фактор присутствовал в среде на всех этапах отбора, включая укоренение регенерантов.

Таблица 9. Отбор толерантных к ионам меди растений овсяницы и полевицы

Общее число каллусов Число устойчивых клонов Число регенерантов in vitro Число регенерантов в почве

Полев. Овеян. Полев. Овеян. Полев. Овеян. Полев. Овеян.

700 250 256 62 80 10 35 0

Всего в селективных условиях было получено 80 регенератов полевицы и 10 регенерантов овсяницы (Табл. 9). Жизнеспособность последних была крайне низкой, все они погибли в течение 7 недель после посадки в почву. Поэтому проверить устойчивость к меди у регенерантов овсяницы не удалось.

Большинство регенератов полевицы имели нормальную морфологию и хороший рост. Пять регенератов зацвели и дали семена. Для проверки устойчивости к высоким концентрациям меди регенераты полевицы были высажены в почву со 150 мг/л Си. Около 80% растений, полученных из устойчивых к меди клеток, росли при этой дозе металла так же интенсивно, как в чистой почве.

Для определения наследуемости признака устойчивости к меди, около 300 семян одного из регенератов проращивали со 150мг/л меди. Всхожесть семян регенерата была в 3 раза выше, чем у исходных растений (рис.2). Медь не угнетала рост исследуемых растений и не вызывала хлороза.

Рис.2. Влияние меди (150 мг/г) на всхожесть и рост растений полевицы

□ Исходные растения

■ Потомки регенерантв____

Примечания к рис 2: «1» - всхожесть, «2» - рост.

Таким образом, большинство растений-регенерантов, полученных из устойчивых к меди клеточных линий, обладало повышенной толерантностью к меди. У растений полевицы показано наследование отселектированного признака в следующем поколении

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Табл. 10. Эффективность клеточной селекции

Селективный фактор Концентрация Кол-во семян Кол-во растений % Кол-во растений давших семена % Кол-во растений у кот. уст-ть наслед-ся в след. поколении %

NaCl 1% 1875 7,04 1,06 0,74

NaCl 2% 750 2,4 0 0

Cu2+ 150мг/кг 875 4 1,14 0,8

У полевицы показано наследование толерантности к обоим стрессовым факторам Благодаря небольшой продолжительности культивирования тканей в селективных условиях удалось сохранить достаточную способность к регенерации растений и избежать нежелательной сомаклональной изменчивости. Более эффективным оказалось проведение отбора в относительно мягких селективных условиях (1Л)5о) с последующим ею завершением уже на уровне растений. При использование для селекции среды с 2% №С1 существенно уменьшалась способность культивируемых клеток к морфогенезу, а полученные растения имели низкую жизнеспособность.

По частоте выделения форм с наследуемой толерантностью разработанный способ клеточной селекции не уступает индуцированному мутагенезу, но количество нежелательных генетических изменений в нашем случае было ниже. Процесс получения растений со стабильной и наследуемой устойчивостью при использованной в данной работе биотехнологии занимает два года. Это намного меньше, чем

проведение селекции традиционным методом с применением отдаленной гибридизации.

Все перечисленное выше позволяют рекомендовать данный метод для получения газонных трав, обладающих повышенной устойчивостью к неблагоприятным условиям мегаполисов.

ВЫВОДЫ:

1. Подобраны условия индукции и культивирования каллусных тканей и регенерации растений газонных трав овсяницы красной красной и полевицы побегоносной. Активный рост тканей и наибольшая частота регенерации получены при использовании среды МС с 3 мг/л 2,4-Д для индукции, с 1 мг/л - для пролиферации каллуса и среды МС без гормонов для регенерации растений.

2. Определена реакция растений и культивируемых тканей полевицы и овсяницы на хлористый натрий и ионы меди. Концентрации 1 и 2% NaCI и доза меди 150 мг/л определены как селективные как для клеток in vitro, так и для растений.

3. Разработаны условия клеточной селекции каллусных культур и растений, толерантных к хлориду натрия и ионам меди. Предложенная схема предусматривает проведение всех этапов отбора (культивирование тканей в течение двух циклов выращивания и регенерацию растений) в селективных условиях.

4. Из устойчивых к 1 и 2% хлорида натрия каллусов получены растения полевицы и овсяницы, толерантные к соли. У полевицы показано наследование признака солеустойчивосги в двух поколениях.

5. Проведена экологическая оценка новых противогололедных материалов. Показано, что наименьшей фитотоксичностью обладают бишофит и хлорид кальция. Применение ацетата аммония и НКММ нежелательно из-за их выраженного отрицательного действия на растения.

6. Выявлена перекрестная устойчивость к 1% бишофита у растений, толерантных к соли.

7. В результате клеточной селекции получены растения полевицы с наследуемой толерантностью к 150 мг/л меди.

8. Устойчивые к стрессовым факторам растения не уступали исходным по таким газонным качествам как габитус, кустистость и скорость роста.

Публикации:

1. Гладков Е.А., Долгих Ю.И., Бирюков В.В. Отбор солеустойчивых газонных трав с помощью методов биотехнологии. // Биотехнология.-М.,2003 - №5 - С.32 -37.

■•2. Гладков Е.А., Долгих Ю.И. Оптимизация процесса получения каллуса. // В сборнике статей трудов МГУИЭ. - М.,1999. - Т.4. - С. 158 - 162.

3. Гладков Е.А., Долгих Ю.И., Аксенова H.A. Анализ стресс-индуцируемых белков в чувствительных и устойчивых к NaCl клетках // В сборнике статей трудов МГУИЭ.-М.,2001.- Т. 5. -С.16-18.

4. Gladkov Е.А., Dolgikh Yu.I., Shevyakova NI., Biryukov V.V The effect of antiicing reagents and heavy metals on the growth of lown's grasses. // In: Symp. Plant underEnvironmental Stress -Moscow,2001 -pp.80.

5. Гладков E.A., Долгих ЮИ., Бирюков B.B. Перспективы применения методов биотехнологии, для совершенствования газонных трав в неблагоприятных экологических условиях города. // В сборнике докладов 5 межд. конференции "Экологическая безопасность и устойчивое развитие".- Москва, 2001 -С 335 -336.

6 Гладков ЕА., Долгих ЮИ., Бирюков В.В., Шевякова Н.И., Шайкина Е.Ю. Экологические подходы в решении проблем городского озеленения. // В сборнике научных трудов МГУИЭ " Математика, механика, экология". - М., 2002. -вып. 1 С. 189-193.

7. Гладков Е.А., Долгих Ю И., Бирюков В.В. Получение газонных трав, устойчивых к неблагоприятным экологическим условиям города // В сборнике докладов VI Междунар, конф. « Рио 10+ Экологическая безопасность, как ключевой фактор устойчивого развития». - М.,2002. -С. 150-151.

8. Гладков Е.А., Долгих Ю.И., Бирюков В.В., Шевякова Н.И., Шайкина Е.Ю. Экологическая оценка противогололедных материалов и отбор толерантных, к неблагоприятным условиям окружающей среды, газонных трав // В сборнике III Междунар. российско-иранской конф «Сельское хозяйство и природные ресурсы». Москва,2002 - С. 183.

9. Гладков Е.А., Долгих Ю.И., Бирюков В.В. Биотехнологическая модификация газонных трав, устойчивых к экологическим стрессам города. // В

сборнике I Международного Конгресса «Биотехнология, состояние и перспективы». - Москва, 2002. -С.129-130.

10. Гладков Е.А., Долгих ЮИ., Бирюков В.В. Получение растений устойчивых к хлористому натрию и засухе // Материалы II Международной конференции «Актуальные проблемы современной генетики». -Москва , 2003. - С 57-58.

11. Гладков Е.А., Долгих Ю.И., Бирюков В.В , и др. Клеточная селекция газонных трав, устойчивых к высоким концентрациям меди и цинка. // Сборник докл. Международной конференции "Инженерная защита окружающей среды".-М.,2003.-С.51-52.

12. Гладков Е А., Долгих Ю.И, Бирюков В.В., и др. Отбор газонных трав, устойчивых к неблагоприятным условиям мегаполисов, с помощью методов биотехнологии // Тез докл. V Международной выставки Доркомэкспо. -М , 2003 -С. 56 -57.

13. Гладков Е А., Долгих Ю.И., Колодезных 3 К , Шевякова Н.И., Шайкина Е.Ю , Бирюков В В ,и др. Экологическая оценка противогололедных материалов и отбор газонных трав, толерантных к бишофиту. // В сборнике докл Международной конференции "Инженерная защита окружающей среды". - Москва ,2003. - С.53.

14. Гладков Е.А., Долгих Ю.И., Бирюков В.В. Отбор солеустойчивых растений с помощью методов биотехнологии. // В сборнике тез. докл VII Путинской школы-конференции "Биология - наука 21 века" - 2003 - С 95

Объем 1,25 пл.

3ак.437

АНО «Издательство МСХА» 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 44

Тираж 100 экз.

i *

* г

РНБ Русский фонд

2006-4 28466

t -

0 9 on i zdOi

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гладков, Евгений Александрович

Введение.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Экология города.

1.1.1 Экологические функции газонов.

1.1.2 Состояние газонов в городах.

1.2. Действие тяжелых металлов на растения.

1.2.1 Влияние тяжелых металлов на рост и развитие растений.

1.2.2. Действие тяжелых металлов на клетки растений.

1.2.3. Устойчивость растений к тяжёлым металлам (ТМ).

1.3. Влияние засоления на растения.

1.4. Клеточная селекция.

1.4.1. Клеточная селекция на устойчивость к засолению.

1.4.2. Клеточная селекция на устойчивость к тяжелым металлам.

Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Глава 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Экологическая экспертиза противогололёдных материалов (111 М).

3.1.1. Испытание фитотоксичности ПГМ в фазе вегетативного роста растений при внесении водных растворов реагентов в почву.

3.2. Разработка условий получения и культивирования каллуса и регенерации растений.

3.3. Получение газонных трав, толерантных к засолению.

3.3.1. Определение чувствительности культивируемых тканей и растений к

NaCl.

3.3.2. Получение солеустойчивых клеточных клонов и растений.

3.3.3. Характеристика растений-регенерантов.

3.3.4. Проверка наследования признака солеустойчивости.

3.3.5. Проверка устойчивости к бишофиту растений, толерантных к NaCl.

3.4. Получение растений, толерантных к ионам меди.

3.4.1. Определение чувствительности культивируемых тканей и растений к меди.

3.4.2. Отбор и характеристика толерантных к меди растений.

3.5. Эффективность клеточной селекции

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение газонных трав, толерантных к засолению и ионам меди, методами биотехнологии"

Один из важнейших элементов озеленения городов - создание газонов различного назначения. Их роль в условиях нарушенной экологии городов непрерывно растет. Газоны имеют не только декоративное значение, но и выполняют огромную экологическую, санитарно-гигиеническую роль, оздоравливают окружающую среду, защищают почву от водной и ветровой эрозии, а город от пылевых образований. Газоны оказывают успокаивающее действие на человека, снимают усталость.

Газоны, расположенные в городе, постоянно испытывают действие техногенных и антропогенных факторов. Среди техногенных факторов наибольшую опасность представляют соли тяжелых металлов.

В последние годы из-за использования противогололедных смесей в почвы весной наряду с тяжелыми металлами в значительном количестве поступают соли. Это приводит к неблагоприятному для роста и развития растений изменению химических и физико-химических свойств почвы. Хлоридный ион, составляющий 50% используемых противогололедных смесей, один из самых агрессивных компонентов городских почв. Весной около многих автомагистралей и на улицах города засоление почв достигает среднего и сильного значения от 0,4 до 1% (Шевякова и др., 1997, 2000). Такое засоление является пределом для нормального роста и развития большинства видов древесно-кустарниковых растений и газонных трав. В Москве гибель более половины деревьев вызвана ненормированным применением противогололедных средств. Характерное действие загрязняющих веществ на городские газоны - «краевой эффект», состоящий в образовании не покрытых растительностью участков придорожных газонов вдоль проезжей части.

Данные экологические проблемы решаются неэффективно, погибшие от засоления виды растений заменяются теми же видами, которые ждет та же участь. Решение данной проблемы - создание растений, устойчивых к неблагоприятным факторам мегаполиса и жесткий контроль за экологической обстановкой города.

Для получения растений, устойчивых к загрязнениям почвы, наряду с традиционными методами селекции перспективно использовать современные биотехнологические подходы, которые уже хорошо зарекомендовали себя при получении растений, толерантных к различным экологическим стрессовым факторам: засухе, засолению, низким и высоким температурам и др. В настоящее время получены клеточные линии, устойчивые к некоторым тяжелым металлам( Гончарук и др., 2001), однако регенерация из них фертильных растений остается серьезной проблемой. Получены клеточные линии перца и кукурузы, устойчивые к осмотическому стрессу (Diaz, 1994, Долгих и др., 1994) растения устойчивые к засолению( Ларина, 1995, Белянская и др., 1995). Информации о получении клеточных линий и растений, устойчивых к промораживанию, низким и высоким температурам мало,больших успехов добиться не удалось.

Среди первых работ на устойчивость к замораживанию была работа И.ИТуманова (1977) каллусную ткань Picea abies сначала закаливали охлаждением, а затем замораживали. Были получены устойчивые клеточные линии, однако получить растения не удалось. Получены клеточные культуры картофеля, устойчивые к морозу, однако растения оказались стерильными (Swaaij, 1986). Получены каллусные культуры кукурузы , толерантные к низким температурам (устное сообщение, Долгих, 1996), единственное сообщение о получении с помощью культуры клеток жароустойчивых растений сделано на кукурузе (Долгих и др., 1994).

Цель и задачи исследования

Целью нашей работы было получение с помощью методов биотехнологии газонных трав, толерантных к засолению и солям меди.

Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

- на основании изучения литературы по загрязнению почв мегаполисов определить диапазоны концентраций хлорида натрия и ионов меди в почве;

-провести оценку фитотоксичности ряда противогололедных реагентов, предложенных для использования в городе Москве;

-на примере 2 практически важных видов газонных трав оптимизировать условия культивирования каллусных культур овсяницы и полевицы и регенерации растений;

-разработать условия клеточной селекции для отбора устойчивых к хлориду натрия и солям меди каллусных линий газонных трав;

- из отобранных каллусных линии, толерантных к хлориду натрия и солям меди, получить растения-регенеранты, устойчивые к этим токсикантам;

-проверить сохранение признаков солеустойчивости и толерантности к меди в следующих поколениях выделенных регенерантов.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Гладков, Евгений Александрович

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании подбора условий культивирования in vitro и исследования реакции культивируемых тканей овсяницы и полевицы на хлористый натрий и ионы меди разработана биотехнология получения растений, толерантных к этим стрессовым факторам. Выбранная схема отбора, предусматривающая и культивирование, и регенерацию растений в селективных условиях, обеспечила отбор форм с преимущественно генетической природой устойчивости. Доказательством этого утверждения является тот факт, что отбираемые in vitro признаки проявились на уровне целых растений, и большая часть регенерантов имела повышенную устойчивость к засолению и ионам меди. У полевицы показано наследование толерантности к обоим стрессовым факторам. Благодаря небольшой продолжительности культивирования тканей в селективных условиях удалось сохранить достаточную способность к регенерации растений и избежать нежелательной сомаклональной изменчивости. Более эффективным оказалось проведение отбора в относительно мягких селективных условиях (LD50) с последующим его завершением уже на уровне растений. При использование для селекции среды с 2% NaCl существенно уменьшалась способность культивируемых клеток к морфогенезу, а полученные растения имели низкую жизнеспособность.

2. Определена реакция растений и культивируемых тканей полевицы и овсяницы на хлористый натрий и ионы меди. Концентрации 1 и 2% NaCl и доза меди 150 мг/л определены как селективные как для клеток in vitro, так и для растений.

4. Из устойчивых к 1 и 2% хлорида натрия каллусов получены растения полевицы и овсяницы, толерантные к соли. У полевицы показано наследование признака солеустойчивости в двух поколениях.

6. Выявлена перекрестная устойчивость к 1% бишофита у растений, толерантных к соли.

7. Получены растения полевицы с наследуемой толерантностью к 150 мг/л меди.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гладков, Евгений Александрович, Москва

1. Бабкин В. В. Действие тяжелых металлов на продуктивность и обмен веществ клевера красного // Тез. Докл. Конф. Молодых ученых: «Эффективность применение средств химизации и продуктивность с.-х культур». М., 1994; с. 7-9.

2. Бабкин В.В., Завалин А.А. Физиолого-биохимические аспекты действия тяжелых металлов на растения // Химия в сельском хозяйстве, 1995; №5; с. 17-21.

3. Баринова Ю.В., Гусаковкая М.А., Блинцов А.Н., Ермаков М.П. Увеличение уровня эндогенных фитогормонов в завязях Triticum aestivum в начале эмбриогенеза in vitro // Тез. докл. IV международной конф. «Регуляторы роста и развитие растений». М., 1997; с. 11.

4. Белянская С.Л., Шамина З.Б. Получение и характеристика клонов риса, резистентных к стрессовым факторам. // Физиол. Раст., 1993, т. 40, №4 с. 681.

5. Белянская С.Л., Шамина З.Б. Морфогенез в клонах риса, резистентных к стрессовым факторам. // Физиол. Раст., 1994, т 41, №4, с. 656-665.

6. Бессонова В.П. Клеточный анализ роста корней Lathyrus odoratus L. придействии тяжелых металлов // Цитология и генетика 1991 — 25, вып. 6-с. 18-24.

7. Бессонова В.П. Перекисное окисление липидов в вегетативныхи генеративных органах показатель загрязнения среды тяжелыми металлами // Экологические проблемы охраны живой природы - М.: Изд-во АП СССР, 1990, - 4.2, С. 89

8. Бойценюк Л.И., Хорхе Рикелме Д., Курапов П.Б., Калашников Д.В. Влияние физических, химических и гормональных факторов на рост пыльцевых трубок настурции in vitro // Доклады ТСХА, 1996; Вып. 267; с. 26-40.

9. Бургутин А.Б. Вариабельность по солеустойчивости у сегрегантов соматического гибрида картофеля //Автореф. дисс. на соиск уч. степ. канд. б. н. М., 1996.

10. Бутенко Р.Г., Строгонов Б.П., Бабаева Ж.А. Соматический эмбриогенез в культуре ткани моркови в условиях высоких концетраций солей в среде // Докл. АН СССР, 1967, т. 175, №5, с. 1179-1181

11. Важенин И.Г. Корни растений как биоиндикатор уровня загрязненности почвы токсическими элементами // Агрохимия, 1984; № 2; с. 73.

12. Власов П.В., Ракитина Т.Я. Влияние ультрофиолетовой радиации на выделение этилена у устойчивого мутанта Arabidopsis thaliana // IV Межд. Конф.: Регуляторы роста и развития растений. М., 1997; с. 43.

13. Вонсавичене В.Н., Сташаускайте С.А. Влияние меди на содержание идолилуксусной кислоты и ее катаболизм в корнях растений // IX Всесоюзная Конф. по проблемам микроэлементов в биологии. Докл. Кишинев: Штиинца, 1981; с. 155-157.

14. Воскресенская О. JI. Влияние избытка цинка в среде произрастания на целостность мембран и сверхслабое свечение корней овса. // Йокшар- Ола: Map. ун-т, 1987 - 15с. (Рукопись деп. в ВИНИТИ 24.03.87, №2103-В87)

15. By Дык Куанг, Нгуен Хыу Донг. Мутагенез и прямой отбор солеустойчивых клонов в культуре пыльников риса. Тезисы Международной конференции " Биология культивируемых клеток и биотехнология"//Новосибирск, 1988, с. 181

16. Генкель П.А. Физиология жара и засухоустойчивости растений // М. Наука, 1982, 280с.

17. Гончарук Е.А., Калашникова Е.А. Изучение морфофизиологических реакций генотипов льна- долгунца в различных условиях выращивания при воздействии соли кадмия. // М., Сельскохозяйственная биотехнология, т.1, 2000, с.88-99.

18. Гончарук Е.А., Калашникова Е.А., Дубравина Г.А., Загоскина Н.В. Влияние кадмия на морфологические и биохимические характеристики чайного растения и льна долгунца. // М., Сельскохозяйственная биотехнология, т.2, М.2001,с.99-111.

19. Гуральчук Ж. 3. Механизмы устойчивости растений к тяжелый металлам // Физиология и биохимия культурных растений, Т.26, №2,1994,с. 107-118.

20. Димитчик В.В., Соколик А.И., Юрин В.М. Токсичность избытка меди и толерантность к нему растений // Успехи современной биологии, 2000, Т. 121, №5, с. 511-526

21. Долгих Ю.И., Ларина С.Н., Шамина З.Б. Селекция на осмоустойчивость кукурузы in vitro и характеристика растений-регенератов. // Физиол. Раст., 1994, т. 41, №1. С. 114 -120.

22. Долгих Ю.И., Пустовойтова Т.Н., Жданова Н.Е. Соотношение эндогенных фитогормонов в компетентных и некомпетентных к соматическому эмбриогенезу зародышах кукурузы. // Физиология растений, 1999,Т.46,с.645-650 .

23. Дридзе И.Л., Хадеева Н.В., Майсурян А.Н. Характеристика регенератов табака, устойчивых к воздействию стрессовых факторов. // Физиол. Раст., т. 39, №5, 1992, с. 1027-1033

24. Едгорова Д.Ш., Алимджанова Д.Р. Мониторинг плодовых деревьев в условиях загрязнения тяжелыми металлами. // Сборник тезисов " Биология-наука XXI века" Пущино, 2003, с. 167.

25. Жемкова Л.Н., Бирюкова З.В., Терехова Т.С„ Фоминых В.Л., Шабалова В.И. Содержание тяжелых металлов в органах растений // Пробл. использования, воспр-ва и охраны лесн.ресурсов: Матер.Респ.науч.-практ. конф. Йошкар-Ола, 1989, Кн. 1. С. 135-136

26. Жизневская Г.Я. Медь, Молибден и железо в азотном обмене бобовых растений//М., 1972; с. 334 .

27. Захарин А.А. О некоторых особенностях солевого обменагликофитов при засолении среды. // Агрохимия, 1980, №8 С. 139

28. Игнатьевская М.А., Рассказова Е.М., Чернавина И.А. Влияние избытка меди на обмен железа у растений овса // Физиология растений, 1983; № 30;с. 172.

29. Игошина Т.И., Косицин А. В. Устойчивость к свинцу карбоангидразы Melina nutans // Ботан. Журнал, 1990.-75; № 8; с. 1144-1150.

30. Ильин В.Б., Степанова М.Д Защишые возможности системы почва-растение при загрязшнии почвы тяжелыми металлами. В кн.: Тяжелые металлы в окружающей среде. // М.: Изд-во Моск. Ун-та, 1980; с. 80-85.

31. Ильин В.Б. Тяжелые металлы в системе почва-растение. // Новосибирск: Наука, Сиб. отделение, 1991; с. 151.

32. Кабата-Пендиас А., Пендиас X. Микроэлементы в почвах и растениях. // М.: Мир, 1989; с. 439.

33. Кабанов В.В. Физиология галофитов и гликофитов при засолении среды хлористым натрием. Афтореф. дисс. д-ра биол. наук. Киев, 1985

34. Калашникова Е.А. Влияние факторов гормональной и негормональной природы на морфогенетический потенциал интактных растений пшеницы в культуре in vitro. // Сельскохозяйственная биотехнология, т.2, М.2001.

35. Каплунова Е.В., Сорокин С.Е. Влияние внесенных в почву соединений цинка, свинца и кадмия на зольный состав растений // Химияпочв: Микроэлементы в почвах и современные методы их изучение. М., 1985; с.29-33.

36. Кильчесвкий А.В., Пинчук И.И., Баширова JI.H. Методы гаметной и клеточной селекции на устойчивость томата к тяжелым металлам // Проблема экологии в сельском хозяйстве. Тез. Докл. М., 1993; ч. 2; с. 34-35.

37. Кефели В.И. Природные ингибиторы роста // Физиология растений, 1997; т. 44; с. 471-480.

38. Ковалевский A.J1. Биогеохимия растений. // Новосибирск: Наука Сиб. отделение, 1991, 200с.

39. Кузнецов Вл.В., Шевякова Н.И., Карпачевский Л.О. Новые подходы к практике озеленения мегаполисов. // IV Междун. конф. Проблемы управления качеством окружающей среды. 1999, с26-30.

40. Курсакова B.C., Трофимов И.Т. Химический состав многолетних трав в условиях хлоридно-сульфатного засоления почвы // Продуктивность сельскохозяйственных культур на засоленных почвах западной сибири, Омск 1982, с. 30-38

41. Кучеренко Л.А. Подходы к разработке технологии массовой регенерации растений in vitro. Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. II Под ред. Бутенко. М.," Наука", 1991, с. 232

42. Ладонина Н.Н., Ладонин Д.В. Загрязнение почв юго-восточного административного округа г. Москвы медью и цинком // Экология, 2000,1, с. 61-65.

43. Лапина Л.П., Строгонов. Б.П. Локализация солей в клетках в связи с присоблением растении к условиям засоления. // Успехи совр. биол., 1979, т. 88, вып.1, с.93.

44. Ларина С.Н. Клеточные линии и растения-регенеранты как модель для изучения солеустойчивости // Автореф. дисс. на соиск уч. степ, кацц. б. н. М., 1995.

45. Леонова Н.С. Рост и развитие растений картофеля в условиях in vitro при повышенных концентраций тяжелых металлов в среде // Сельско-хоз. Биотехнология, 1999, №3, с. 107-110

46. Люттге У., Хигинботам Н. Передвижение веществ в растенияз. // М. : Колос, 1984, с. 408.

47. Матвеев В.Н., Прохорова Н.В., Павловский В.А., Никитин С.И., Тяжелые металлы в некоторых сельскохозяйственных растениях Самарской области // Вопросы экологии и охраны природы в лесостепной и степной зонах, Самара: Самарский университет, 1995, 228 с.

48. Минеев В.Г., Гомонова Н.Ф., Накопление тяжелых металлов в почве и поступление их в растения в длительном агрохимическом опыте // Докл.РАСХН, вып. 6, 1993, с. 20-22

49. Мельничук Ю.П. Влияние ионов кадмия на клеточное деление и рост растений // Киев: Наук.думка, 1990, с. 148

50. Нгуен Тхи Ли Ань, Повышение устойчивости яровой пшеницы к абиотическим стрессам методами биотехнологии // Автореф. дисс. на соиск уч. степ, канд.с-х. наук, М.: 1995, с. 22

51. Новожилов О.В., Левенко Б.А. Изолирование к анализу клеточных линий люцерны, устойчивых к аналогах метионика пролина, и регенерантов из них. Тезисы Междунар. конфер. "Биология культив. клеток и биотехнология // Новосибирск, 1988, с. 176

52. Обухов А.И., Бабьева И.П., Гринь А.В., Зырин Н.Г., Научные основы разработки предельно допустимых концентраций тяжелых металлов в почвах // Тяжелые металлы в окружающей среде, М.: МГУ, 1989,210с.

53. Обухов А.И. Лепнева О.М., Охрана и рекультивация почв, загрязненных тяжелыми металлами // Тяжелые металлы в окружающей среде и охрана природы, М.: МГУ, 1988, с. 23-36.

54. Осипова Е.А., Цыбулько Н.С., Шамина З.Б. Вариабельность клеточных клонов Thalictrum minus in vitro. // Физиология растений,1999, т.46,с. 656-661.

55. Ошмарина В.И., Шамина З.Б., Бутенко Р.Г. Получение резистентных к NaCl и этионину клеточных линий Nicotiana sylvestris и их характеристика. // Генетика, 1983, т. 19, №5, с.822

56. Павлов А.В.,Тырышкин Л.Г., Пинаева М.Ю. //Высокоэффективный каллусогенез в культуре тиса. // Сборник тезисов «Биология клеток растений IN VITRO, биотехнология сохранения генофонда. М. 1997,502 с,

57. Подашевка О.А., Федяев В.В. Изменение величины R/PG у растений рода Calendula в норме и в условиях повышенного содержания кобальта и меди // Сборник тезисов 'Биология — наука XXI века", Пущино, 2003, с.204

58. Парибок Т.А. Загрязнение растений металлами и его эколого-физиологические последствия // Растения в экстремальных условияхминерального питания. JL: Наука, 1983; с. 82-99.

59. Пейве Я.В. Медьсодержащие оксидоредуктазы растений // Биологическая роль меди. М., 1970; с.22.

60. Пигулевская Т.К., Чернавина И. А. Интенсивность фотосинтеза и метаболизм углерода у растений овса при избытке цинка в среде выращивания // Физиология устойчивости растений нечерноземной зоны РСФСР. Саранск: Изд-во Мордов. Ун-та, 1986; с. 89-95.

61. Пинский Д.Л., Орешкин В.Н. Тяжелые металлы в окружающей среде// Экспериментальная экология. М.: Наука, 1991; с. 201-213.

62. Пронина Н.Б. Экологические стрессы // Москва, Издательство МСХА, 2000, 310с.

63. Пронина Н.Б., Рохас Д.Р. Накопление токсичных микроэлементов и тяжелых металлов в зерне пшеницы и овса в условиях эрозионнго стресса. // Сельскохозяйственная биотехнология, т.2, М.2001,с 270-287.

64. Растения в экстемальных условиях минерального питания // Под ред. Н.В. Алексеевой-Поповой, Л. 1983, 178с.

65. Сергеева Л.Е. Новая селективная среда с ионами бария -альтернативная система для отбора солеустойчивых линий //

66. Биотехнология, 2000, №2, с. 47-52

67. Сливинская Р.Б. Возможные причины анатомических нарушений у растений под действием тяжелых металлов // Современные проблемы экологии анатомии растений. Владивосток, 1991; с. 147-148.

68. Соболев А.С., Мельничук Ю.П., Калинин Ф.Л. Влияние кадмия на интенсивность роста проростков гороха // Физиология и биохимия культурных растений, 1982. 14; № 1; с. 79-83.

69. Станис В.А., Слесаравичюс АК. Регенерация растений в культуре тканей и клеток рейграсов, овяниц и их гибридов // Методические рекомендации. Вильнюс, 1985, 22 с.

70. Строгонов Б.П. Солеустойчивость растений. Физиология с/х растений. // М. Изд-во Моск. ун-та, 1967, т.З, с. 270

71. Таланова В.В., Акумова Т.В., Титов А.Ф. Изменение уровня эндогенной АБК в листьях и корнях огурца под влиянием неблагоприятных температур // III Межд. Конф. Регуляторы роста и развития растений. М., 1995; с. 34-35.

72. Таланова В.В., Титов А.Ф., Боева Н.П. Изменение уровня АБК в растениях при действии стресс-факторов разной природы // IV Межд. Конф. Регуляторы роста и развития растений. М., 1997; с. 38-39.

73. Таланова В.В., Титов А.Ф., Боева Н.П. Влияние ионов кадмия и свинца на рост и содержание пролина и АБК в проростках огурца // Физиология растений, 1999; Т. 46; № 14; с. 164-167.

74. Тарабрин В.П. Физиология устойчивости древесных растений в условиях загрязнения окружающей среды тяжелыми металлами // Микроэлементы в окружающей среде. Киев: Наук. Думка, 1990; с. 17-19.

75. Туманов И.И., Бутенко Р.Г., Оголевец И.В., Сметюк В.В. Повышение морозостойкости культуры каллусной ткани ели путем вымораживания менее устойчивых клеток // Физиология раст. 1977, т. 24, №5, с. 895-899

76. Тырнов В. С. Основные направления использования гаплоидов в генетических исследованиях // Гаплоидия у покрытосеменных растений.-Саратов, 1974.-Ч. 2.-С. 104-123.

77. Тяжелые металлы в системе почва-растение-удобрение. Под общей редакцией, М.М. Овчаренко. // М., 1997; 290 с.

78. Удовенко Г.В. Солеустойчивость культурных растений. // Л. "Колосс", 1977, с.215

79. Федоров А. К. Бшлошямношлешихтрав.//-М.: Колос, 1968.- 176 с.

80. Феник С.И., Трофимяк Т.Б., Блюм Я.Б. Механизмы формирования устойчивочти растений к тяжелым металлам // Успехи современной биологии, т. 115, в.3, 1995, с. 261-275

81. Хадеева Н.В., Дридзе И.Л., Майсурян А.Н. Выделение солеустойчивых форм риса путем прямой и непря мой селекции в культуре ткани // Биотехнология, 2000, №3, с. 27-38

82. Холопцева Н. П., Тимофеева В. П. Влияние гамма-облучения и обработки семян многолетних злаковых трав химическими мутагенами на качество растений. Многолетние травы. // Вопросы селекции и агрономии.-Петрозаводск, 1985.- С. 22-27.

83. Хохлов С. С., Зайцева М. И. Морфология и анатомия гаплоидов

84. Гаплоидия и селекция.-М.: Наука, 1976.-С. 25-36.

85. Хочатка П., Сомеро Дж. Стратегия биохимической адаптации. // М: Мир, 1977, с. 124

86. Ц в е л е в Н. Н. Злаки СССР. // Л.: Наука, 1976,- 788 с.

87. Черняускас Г. И., Жидоните Я. А. Задачи, методы и результаты селекции злаковых трав // Тез. Всесоюз. семинара по селекции многолетних трав.- 13-15 июня 1972,-Дотнува, 1972.-С. 9-21.

88. Ш а л ы г и н И. Н. Получение тетраплоидов в роде Lolium воздействием колхицина на прорастающие семена // ДАН СССР, 1941.-Т. 30.-№ 6.-С. 525-527.

89. ШаминаЗ.Б. Особенности генетической изменчивости соматических клеток растений // Биотехнология. 1987.-Т. 3.-№ З.-С. 361-364.

90. Шевелуха B.C., Калашникова Е.А., Воронин Е.С. и др. Сельскохозяйственная биотехнология под ред. академика РАСХН B.C. Шевелухи // Москва "Высшая школа" 2003, изд.2, 457 с.

91. Шевцов И. А. Использование инбридинга у растений. // Киев: Наукова Думка, 1983.-315 с.

92. Шевякова Н.И. состояние и новые подходы к решению проблемы солеустойчивости растений. // Физиол. и биох. основы солеуст-чи растений, докл., 1986, с.54

93. Шевякова Н.И., Рощупкин Б.В., Парамонова Н.В., Кузнецов Вл.В. Стрессорный ответ клеток Nicotiana selvestris на засоление и высокую температуру. Аккумуляция пролина, полиаминов, бетаинов и Сахаров. // Физиол-я растений, 1994, т. 41, №4, с. 558

94. Шевякова Н.И., Кузнецов Вл.В. Стратегия озеления г. Москвы в условиях интенсивного техногенеза. // Труды практ. Конф. Экологические проблемы крупных административных единиц мегаполисов. 1997

95. Шевякова Н.И., Кузнецов Вл.В., Карпачевских JI.O. Причины и механизмы гибели зеленых насаждений придействии техногенных факторов городской среды и создание стресс-устойчивых фитоценозов. // Лесной вестник, 2000, №6 (15)

96. ШикшнянТ. 3., СлесаравичюсА. К. Генетико-селекционное изучение межвидовых и межродовых гибридов в родах овсяница и райграс // Тез. докл. научно-методического совещания по генетическим методам в селекции трав.- Вильнюс, 1987.-С. 60-61.

97. Шутова 3. И. Перспективный для селекции материал различных видов райграса // Бюл. ВИР.- 1980.-№ 100.-С. 32-34.

98. Юрьева И.О. Изучение различий в вариационных потенциях генотипов сортов картофеля // Использование клеточных технологий в селекции картофеля. Научные труды НИИКХ, М., 1987, с. 6-10

99. Abbas М.А., Younis М.Е., Snukry W.M. Plant growth, metabolism and adaptation in relation to stress conditions. XIV. Effect of salinity on the internal solute concentrations in Phaseolus vulgaris // J. Plant Physiol. -1991.-138, №6. -P.722-727.

100. Ahloowalia B.S. Use of partially male sterile perennial ryegrass for hybrid cultivar production// Crop. Sci.-1981.-Vol. 21.-Nr. 3.-P. 415-418.

101. Ahloowalia B.S., Sherington J. Transmission of somaclonal variation in wheat //Euphytica.- 1985.-Vol. 35.-Nr. 2.-P. 525-527.

102. Akbar M., Krush G.S., Hillerislambers D. Genetics of salt tolerance in rice. Rice Genetics. // Presiding of the International Rice Genetics Simposium. May, 66.Manila, 1986, p. 399-409.

103. Ashraf M. Organic substances responsible for salt tolerance in Eruca sativa.// Biol. Plant., Plant., 1994, v.91, N1, p.82-86.

104. Armi A.R., Alam S.M. Effect of salt stress on germination, growth, leaf atomy and mineral elements composition of weat cultivars.// Ada. Phys. Plantarum, 60,v.l2, N 3, p. 215-224.

105. Awada S., Campbeil W.F., Dudley L.M., lunmak J.Y, Khan M.A. Ihteraktive effects of sodium chloride, sodium sulfate, calcium sulfate, and calcium chloride on been growth, photosynthesis, and ion uptake // J. Plant Nutr. -1995. -18, №5.-P.889-900.

106. Bajji Mohammed, Kinet Jean-Marie, Lutts Stanley. Salt stress effects on roots and leaves of Atriplex halimus L. and their corresponding callus cultures //Plant Sci-1998. -137, №2. -P.131-142.

107. Barcelo J., Poschenrieder Ch. Plant water relations as affected by heavy metal stess: a review. // J. Plant Nutr. -1990. 13, N1. - P.l-37.

108. Barlass M., Skone K.G. Relative Nad tolerances of grapevine cultivars and brids in vitro. // Z. Pflanzenphisiol. Bd, 1981, v. 102, p.147-156.

109. Basu Rins, Ghosh Barati. Polyamines in various rice (Oryza sativa) genotypes with respect to sodium chloride salinity // Physiol. Plant. 1991. -Vol.82.-P 575-581.

110. Baszynski T. Heavy metals as factors affecting photosynthetic apparatus activity // Folia physiol, 1986, gen. 1:7. P. 27.

111. Baszynski Т., Wajda L., Kroc M. et al. Photosynthetic activitis of cadmium-treated tomato plants // Physiol. Plant, 1980. -48, N. 4, p. 365-370.

112. Baszynski Т., Кгос M., Krupa Z., Ruszkowska M., Wojoieska U., Wolinska D. Photosynthetic apparatus of spinach exposed to excess copper // Z. Pflanzenphysiol, 1982, N. 108, p. 385.

113. Bazzaz M.B., Carlson R.W., Roife G.L. Effect of heavy metals on plants: Part I. Inhibition of gas exchange in sunflower by Pb, Cd, Ni and Ti // Environ. Pollut., 1974. -7, N. 1, p. 56-64.

114. Belonaly N., Bouharmont J. NaCl-tolerant plants of Poncirus trifoliata regenerated from tolerant cell lines // theor. Appl. Genet., 1992,v. 83, P.509-514.

115. Belgacem Henchi, Lachaai Makhtar, Gerald Joelle, Larher Francois. Accumulation de solutes mineraux et organiquis chez Plantago albicans cultive en presence de chlorure de sodium // C.r. Acad. Sci. 1986. -Ser.3,302, №3. - P. 103108.

116. Berg T. Studies of hybrids between perennial ryegrass (Lolium perenne L.) and meadow fescue (Festuca pratensis) Huds. 1 // Meld. Norges Landbruks-hogskoll.- 1979.-Vol. 58.-Nr. 17.-P. 1-15.

117. Bergman Ben A., Stomp Anne-Marie. Effect of genotype on rooting of hypocotyls and in vitro-produced shoots of Pinus radiata // Plant Cell, Tissue and Organ Cult. -1994.-39, №3. P. 195-202.

118. Benetzen J.L., Adams T.L. Selection and characterization of cadmium-resistant suspension cultures of the wild tomato Lycopersicon peruvianum // Plant Cell ,1984 rep. 3, P.258-261.

119. Ben- Hayym G, Vaadin C.J., Williams B.C. Proteins associated with salt aptation in citrus and tomato cells: Involvement of 26 kD polipeptides. // Phisiol. ant, 1989, v.77, N 3, p.332-340.

120. Ben-Hayym G., Kochba J. Aspect of salt tolerance in NaG-selected stable cell line of Citrus sinensis. // Plant Physiol., 1983, v. 72, p. 685

121. Bernstein Nirit, Zilberstain Miriam, Meiri A. Inhibition of avocado root growth by NaCl stress // Phytoparasitica. -1996. -24, №1. P.81-82.

122. Bernstein L. Osmotic adjasment of plants to saline media 2. D. phase, Am. J. Bot 1963, V50 p.360.

123. Bhaskaran S., Smith R.H. Cell biology and molecular genetics. Regeneration cereal tissue culture: A review. // Crop. Sci., 1990, v.30, p. 13281336.

124. Binzel M.L., Hasegawa P.M., Rhodes D. Solute accumulation in tobacco cells adapted to NaCl. // Plant Physiol., 1987, p. 1408

125. Bolarin M.C., Santa-Cruz A., Cayuela E., Perez-Altocea F. Short-term solute change in leaves and roots of cultivated and wild tomato seedlings under salinity // J. Plant Physiol. -1995. -147, №34. P.463-468.

126. Braoly S.J., Gibbson T.S., Barlow W.E., Speirs J.A., Salt tolerance in plants. I. nic compatible organic solutes and the stability of plants ribosomes. // Plant. Us and Env, 1984, v.7, N8, p.571-578.

127. Bright S.W.J., Thorpe T.A., Characterization of growht, waler relation and proline accumulation in sodium sulfate tolerant callus of Brassica napus L. // cv. Westar. Plant Physiol., 1987, v. 84, P. 106.

128. Brown G., Brinkrmann K. Heavy metal tolerance in Forestuca ovina1. from contaminated sites in the Eifel Mountains.// Germany, Plant and Soil, 1992, N. 143/2, p. 239-247.

129. Breese E. L., Lewis E. J. Breeding versatile hybrid grasses. // Span, 1984.-V. 27.-Nr. l.-P. 21-23.

130. Bressan R.A., Singh N.K., Handa A.K. Resistance of cultured higher plant cell to polyethyleneglycol-induced water stress. // Plant Sci. Lett., 1981 v. 21 p. 23.

131. В u с к n e г R. C., Hill H., H о w i n A. W., В u г г u s P. B. Fertility of annual ryegrass X Tall Fescue amphiploids and their derivatives// Crop Sci., 1965.-Vol. 5.-P. 395-397.

132. BuhringJ. Die Realisierung vollstandiger Generationen bei Lolium perenne (L.) under besonderer Berucksictigung der Technischen VernalisationyyArch. Zuchtungsforsch. //-Berlin, 1975.-Bd. 5.-H. 4.-P. 231-238.

133. Bulk R.W. van den. Application of cells and tissue culture and in vitro lection for diseasee resistance breeding. // Euphitica, 1991, v. 56., N3, p. 269-285.

134. Butenko R.G., Nikiforova I.D., Chernov V.A. Grown and conditions and selection of tolerant cell lines // Postdam. ForschB. -1998- № 57- C.9-19.

135. Cachorro Pilar. Ortiz Antonio, Carda Antonio. Implication of calcium nutrition on the response of Phlseolus vulgaris L. to salinity // Plant and Soil. -1994.-159.№2.-P.205-212.

136. Cagas В., Janecek J. Jednoducha metoda identifikace krizencu kostraw lucni a kostravy rakosovite. Sb. UVTIZ // Genet, a slecht., 1981.- Vol. 17.-Nr. 3.-P. 227-233.

137. Cano-Emilio A., Perez-Alfocea F., Moreno Vicente., Caro Manuel, Bolarin Maria C. Evaluation of salt tolerance in cultivated and wild tomato speciesthrough in vitro shoot apex culture I I Plant Cell, Tissue and Organ Cult. -1998. -53, №1.-P. 1-26.

138. Cella R., ParisiB., Nielsen E. Characterization of a carrot cell line resistant to azetidine -2-carboxylic acid // Plant Sci. Letters, v. 24, №2, 1982, p.125-135.

139. Chaleff R.S., Stolarz A. Factors influensing the freqency of callus rmation among cultured rice (Oryza saliva) anther. // Physiol. Plant, 1981, v.51, N2, P.201-206.

140. Chandler S.F., ТЬофе Т.A., Chatracterization of growth, water relations and oline accumulation in sodium sulfate tolerant callus of Brassica napus L, cv. star (Canola). // Plant. Phisiol., 1987, v.84, N1, p.106-111.

141. Chaudhary M.T., Md Shah-E-Alam, Merrett M.J., Wainwright S.J, The generation of salt-tolerant plants of Medicago media from salt-stressed sponsion cultures. // Rice Biotech. Quart., 1994, v.17, p.31-32.

142. Cheeseman J.M., Wickens L.K. Control of Na+, K+ transport in Spergularia rina. II. Effect of plant size, tissue ion contents and roots-shoot ratio at derate salinity. // Phisiol. Plant., 1986., v.67? p.7-14.

143. Cheeseman J.M. Meshanisms of salt tolerance in plants. // Plant. Phisiol., 1988, v.67, p.547-550.

144. Chen C.C. Effect of sucrose concentration on plant production in anther ilture of rice. // Crop. Sci., 1978, v.18, p.905-906.

145. Chretten D., Guillot-Salmen Т., Bahl J., et al. Lipid and protein changes in joba callus under salt stress. // Phisiol. Plant., 1992, v.86, N3, p. 372-3

146. Chandler S.F., Vasil J.H. Selection and characterization of NaCl tolerant cells from embryonic cultures of Pennisetum purpuseum Schum (Napiergrass)// Plant Sci. Lett,v. 37, p3-8.

147. Christopher Т., Prolaram В., Subhash K., Differential in vitromorphogenetic response in hypocotyl segment of Capsicum annuum // Indian J. Exp. Biol. -1991. -29, №1. P.68-69.

148. Conger В. V., Carabia Т. V. Callus induction and plantlet regene ration in orchardrgrass // Crop Sci., 1978.-V. 18.-Nr. 3.-P. 157-159.

149. Conger В. V., Hanning G. E., G г а у D. J., Mc Daniel R. E. Direct embryogenesis from mesophyll cells of orchardgrass // Science.- 1983.- Vol. 221.-P. 850-851.

150. Crougham T.P., Stavarek S.J., Rains D.W. Selection of NaCl-tolerant line of cultured alfalfa cells. // Crop Sci, 1978, p. 959.

151. Crowder L.V. Interspecific and intergenetic hybrids of Festuca and Lolium // J. of Heredity.- 1953,-Vol. 44.-P. 195-203.

152. Condon Т., Muuns R., James R. Processes limiting growth in salinesoils. // Rice otech. Quart., 1994, v.17, p.29-30.

153. Cori P., Schiff S. Response of in vitro Cultures of Nicotiana3

154. Tabacum L to copper stress and selection of plants from Cu tolerant callus // Plant cell tissue and organ culture - 1998, vol 53, Iss 3, pp 161-169

155. Croughan T.P., Stavarek S.J., Rains D.W. Selection of a NaCl tolerant line of itured Alfalfa cells. // Crop. Sci., 1978, v.18, N 6, p.959-963.

156. Croughan T.P., Stavarek S.J., Rains D.W. In vitro development of salt sistant plants. //Env. Exp. Bot., 1981, v.21, p.317-324.

157. Cox P., Thurman D.A. Inhibition by zinc of soluble fhd cell wall acid phosphatases of zinc-tolerant and non-tjlerant clones of Anthoxantum odoratum. // New. Phytol., 1978, vol. 80, N 1, p. 17-22

158. Dale J. Meristem tip culture in Lolium, Festuca, Phleum and Dactyiis // Plant Science Letters.- 1977.-Vol. 9.- P. 333-338.

159. Dashek William V., Erickson S., Sharon S. Isolation, assay, biosynthesis,translocation, and function of proline in plant cells and tissues // The Botanical Review. -1981.-Vol.47, №3. P.349-381.

160. Daines R.J., Gould H.R. The cellular basis of salt tolerance studied with issue cultures of the halophitic grass Distichlis spicata. // J. Plant. Physiol., 1985, 119, N4, p.269-280.

161. Delgado Isabel C., Sancher-Raya A. Juan. Physiological response to salmity and potassium supply // Commun. Soil Sci. and Plant Anal. -1999. -v.30, Ж56.-Р.773-783.

162. Domozlicka E., Opatrny Z. The effect of cadmium on tobacco cell culture and the sebction of potentially Cd-resistant cell lines. // Biol. Plant.,, 1989, 31(1), 19-27.

163. Dolgikh Yu.I. High level of variability among the plants regenerated from callus of inbred A188 Maize Genetics Cooperation Newsletter .1999. P. 7071

164. Dix P.J., Pearce R.S. Proline accumulation in NaCl-resistant and cell lines of Nicotiana sylvestris. // Z. Pflanzenphysiol., 1981, v. 102, p. 243

165. Downton W.J.S. Photosynthesis in salt-stressed grapevines // Austr. Jour. Plant Physiol. -1997. -Vol.4. P.183-192.

166. Dracup M., Gibss J., Greenway H. Melibose, a sutable, non-permeating moticum for suspension cultured Tabacco cells. // J.Exp.Bot., 1986, v.37, N180, p. 1079-89.

167. Dracup M. Increasing salt tolerance of plant through toleranceeshanisms. //J. Plant. Physiol, 1991, v.18, N1, p.5.

168. Dubey R.S., Rani M. Salinity increaced accumulation of free amino acids in erminating rice ceeds differing in salt tolerance. // J. of Agron. and Crop Sci., 1989, 163, N4, p.236-247.

169. Dunkan D.R., Widholm J.M. Praline accumulation and its implication in cold olerance of regenerable maize callus. // Plant. Physiol., 1987, v.83, N3, p.703-708.

170. Eapen S., George L. Hygh frequency plant regeneration through somatic bryogenesis in finger millet (Eleusine coracana L.) // Gaerth. Plant. Sci., 1989, v.61., p.127-130.

171. Epstein E. Responses of plants to saline environments. In: Rains D.W., lentine R.C., Hollaender A.(eds) Genetic engineering of osmoregulation. Impact on ant productivity for food, chemicals and energy. // Plenum, N.Y., 1980, p.7-21.

172. Fedina I.S., Tsonew T.D., Guleva E.I. ABA as a modulator of the response of Pisum sativum to salt stress // J. Plant Physiol. -1994. -143, №2. -P.245-249.

173. Fernandez-Caso Marta, Pelaez Maria I., Ruiz Maria L. Onset of in vitro morphogenic response and protein pattern changes in Phaseolus vulgaris L. // J. Plant Physiol. -1996. -149. №6. P.757-761.

174. Fallon K.M., Phillips R. Responsess to water stress in adapted and adapted carrot cell suspension cultures. // J. Exp. Bot., 1989, v.40, N215, p.68l-687.

175. Flowers T.J. The effect of sodium chloride on enzyme activites from four alophite species of chenopodiaceae. //Phitochem., 1972, v.ll, p.1881-1886.

176. Flowers Т.J., Troke P.F., Yoe A.R. The mechanisms of salt tolerance in halophytes. I I Ann. Rev. Plant Physiol, 1985, v.89, p. 41

177. Flowers T.J., Yeo A.K. Variability in the resistance of sodium chloride linity within rice (Oryza saliva L.) varietes. // New. Phitol., 1981, v.88, p.363-373.

178. Flowers T.J., Yeo A.R. Ion relations of plant under drought and salinity. // str. J.Plant. Physiol., 1986, v.13, p.75-91.

179. Frick Hugh, Golt Caroline. Sensitivity of Lemna minor growth to osmotic potential and relative tolerance of its callus // J. Plant Pysiol. -1995. v.146, №5-6, -P.718-724.

180. Freidt W., Nichterlein K., Nickuel M., Biotehnology in breeding of flax (Linum usitatissimum): the present status and future prospects//FLAX: Breed and Utis: Proc.EEC Flax Workshop., Brussels, 4-5 Vay, 1988, p. 5-13.

181. Gaudchau, Michael; Schneider, Martin; Investigation of heavy metall accumulation in various medicinal plants and linseed// International symposium breeding research on medicinal and aromaiic plants, 1996, p. 433

182. Gabrielle R., Gori R., Scala A. Ni toxity on cornation (Dyanthus arriophyllus L.) cell cultures: selection of Ni-tolerant lines and effects of Ca and Mg. // Plant. Sci, 1994, v. 104, N2, p.225-230.

183. Gettys K.L., Hancock Y.F., Cavalieri a.J. salt tolerance of in vitro activity of leucine aminopeptidase, peroxidase and malate dehydrogenase in halophytes Spartina alterniflora and S. patents. // Bot. Gas., 1980, v, 141, №4, p. 453.

184. Gibbs R., Dracup M., Greenway H., Mc Comb J. A. effect of high Nad on growth, rgor and internal solutes of tobacco callus. // J. Plant. Physiol., 1989,v.l34,Nl,p.65,

185. Gilissen L.J.W., van Staveren M. J. Zinc-resistant cell lines of Haplopapput gracilis// J.plant Physiol, v. 125, P. 95-103, 1986

186. Glinski J., Turski R., Heavy metal pollution of polish soil//New enviromental aspects of land use in Poland and Hungary, 1993, №40, p. 1-5.

187. Goldfarb Barry, Hackett Wesley P., Furnier Glenn R., Mohn Carl Ал, Plietzsch Andreas. Adventitious root initiation in hypocotyl and epicotyl cuttings of eastern white pine (Pinus strobus) seedlings // Physiol. Plant. -1998. 102, №4. -P.512-513.

188. Greenway H., Munns R. Meshanisms of salt tolerance in non-fcalophites. //Ann. ev.Plant.physiol, 1980, v.31, p.149-190.

189. Greenway H., Munns R. Interaction beetween growth, uptake of Cl-and Na+ and water relations in saline environments. II. Haghly vacuolared cells. // Plant, Cell and Envir, 1983,v.6,N7, p.575-589.

190. Gregorio G.B., Senadhira D. Genetic analisis of salinity tolerance in rice iyza sativa L.). // Theor. and Appl.genet., 1993,v.86, N2/3, p.333-338.

191. Gross R.E., Pugno P., Dugger W. Observation on the mecanism of copper damage in Cglorella // Plant Physiol., 1970, N46, p. 183

192. Gulati A., Jaiwal P.K-. Cellular and whole plant response of Vigna radiata to NaCl stress II Bid. Plant. -1994. -36, №2. P.301-307.

193. Gurrier Gilles. Proline accumulation in salt-stress tomato: Differentproline precursors in Lycopersicon esculentum and Lycopersicon pennellii // J. Plant Nutr. -1998. -21,№3. -P.505-513.

194. Haddon Lindsay, Northcote D.H. The influence of gibberellic acid and abscisic acid on cell and tissue differentiation of bean callus // J. Cell Sci. -1976. -20, №l.-P.47-55.

195. Hatch D.J. The effect of pH on the uptake of cadmium by four plants species grown in flowing solution culture/ZPlant and soil, vol.105, №1, 1988, pp. 121-126.

196. Harms C.T., Oeztli J.J. The use of osmotically adapted cell cultures to study salt tolerance in vitro//J. Plant Physiol., 1985,v.l20, P.29-38.

197. Hasegawa P.M., Bressan R.A. Handa A.K. Cellular machanisms of salinity tolerance. //Hort. Sci, 1986, v,21 ,N6. p.1317

198. Heisher J.W., Nabors M.W. Osmotic ajustment of cultured tobacco cells grown on sodium chloride. // Plant Physiol., 1981, v. 67, p. 720

199. Heyser J.W., Chacon M.J., Warren R.S. Characterization of L-5-C13.-Proline sinthesis in Halophytic and nonhalophytic suspension cultures by C13 NMR. // J. ant. Physiol. 1989, v.135, p.459-466.

200. Hitoshi Obata, Noriyki Inoue, Kunio Imai and Masano Umebayas, Cadmium tolerance of calli induced from roots of plants with differences in cadmium tolerance I I Soil Sci. Plant Nutr., vol. 40, №2,1994, p. 351-354.

201. Hogan G.D., Rauser W.E. tolerance and toxicity of cobalt, copper, nickel and zinc in clones of Agrostis gigantea. // New Phytol., 1979, vol. 83, N 3, p. 665-670,

202. Huang Cheng X., Steveninck Reinhard F.M. van. Effect of moderate salinity lion accumulation and structural changes in meristematic cells of barleyroots, bstr. // Annu.Meet.Bot.Soc.Amer. Richmond, 5-9 aug., 1990. Amer. J.Bot, 1990, v.77, N6, p.100.

203. Huang В., Hatch E., Goldsbrough P.B. Selection abd characterization of cadmium tolerant cells in tomato // Plant Physiol., 1987, v.52,P. 211-221.

204. Izzo R., Belligno A., Muretoree G., Navari Izzo F. Seedling growth and Ca2+, K+ and Na+ accumulation in maize roots as affected by NaCl // Agrochimica -1996.-40, №l.-P.25-32.

205. Jackson P.J. Poly (gamma-glutamilcysteinyl) glycin: its role in cadmium resistance in plant celIs//Proc. Nat. Acad.Sci.USA, vol. 84, №11, 1987, p. 6619-6623.

206. Jackson P.J., Roth E.J., McClure P.R., Naranjo C.M. Selection, isolation and characterization of cadmium-resistant Datura innoria suspension culture // Plant Phys., 1984,v.75, P.914-918.

207. Jolivet J., Pireaux J.C., Dizengzement P. Chages in properties of barley eaf mitochondria isolated from Nad-treated plants. // Plant. Physiol., 1990, v.33,Nl,p,128.

208. Jianjun Chen, Peter B.Goldsbrough. Increased Activity of Glutamylcysteine Synthetase in Tomato Cells Selected for Cadmium Tolerance/ZPlant Physiol, 1994, vol.106, №1, p.233-239.(23)

209. Joshi K.K. Embryogenesis in endosperm, stem and leaf calli of Linum austriacum// Embryology and seed reproduction, XI hit. Symp., Leningrad, 1990, p.67.

210. Karataglis S.S. Differential tolerance of Agrostis tenus populations growing at two mine soils to Cu, Zn, Pb. // Phyton, 1980, vol. 20, N 1-2, p. 15-22

211. Katiyar S., Dubey R.S. Salinity-induced accumulation of poliamines in termina-ting rice seeds differing in salt tolerance. // Trop.Sci., 1990, v.30, N3, p.229-240.

212. Ketchum R.E.B., Warren R.S., Klima Larry J. et al. The meshanism and regulation of proline accumulation in suspension cellcultures of the halophitic grass Distichlis spicata L. // J.Plant.Phys.,1991, v.137, N3» p.368-374.

213. Kishor P.B. Kavi., Dange V. Sucrose metabolism in callus cultures of cotton ring growth. // Ind.J. Exp.Biol., 1990, v.28, N4, p.352-355.

214. Kishinami J., Windholm J.M. Selection of copper and zinc resistant 'Ф Nicotiana plumbaginifolia cell suspension cultures // Plant Cell physiol., 1986, 27,1. P.1263-1268.

215. Koyro H.W., Stelzer R. Ion concentration in the cytoplasm and vacuities of rhisodermis cells from NaCl treated Sorghum, Spartina and Puccinelliaplants. // J. Plant. Physiol., 1988, v. 133, N4, p.44l

216. Krishnamurthy R., Anbazhagan M., Bhagwat K.A. Glicinebetaine accumulation and varietal adaptability to salinity as a potential metabolic easure of salt tolerance in rice. Curr. // Sci.(India), 1988, v.57, N5, p.259-261.

217. Kumar V., Sharma D.R. Selection and characterization of an L-thiazolidine 4- carboxylic acid resistant callus culture of Vigna radiata (L) Wilczek var. radiata// J. Exp. Bot., 1989,v.40(210), P.143-147.

218. Labirte G., Hellebust J.A. Pyrroline-5-carboxilate reduetace in Chlorella utitrophica and Chlorella saccharophila in relation to osmoregulation. // Plant, hysiol, 1989, v.91, N3, p.917-923.

219. Lanyi J.K. Irregular belier structure in vesicles prepared from alobacterium cutirubrum lipid. // Biochem.Byophys.Acta., 1974, v.356, p.245-256.

220. Larher F., Qemener B. L ajustement osmotique pendant la vie vegetative de icer arientinum L. cultive en sodium chloride. // Cr. Acad. Sci., 1991, ser.3, v.312, p.55.

221. Last D.I., Brettel R.I.S. Embryo yild in wheat anther culture in influence by the choice of sugar in the culture medium. // Plant Cell Repots., 1990, v.9, N1, p.14-16.

222. Lidon, F.C., Henriques, F.S.: Copper toxicity in rice: diagnostic criteria and effect on tissue Mn and Fe. // Soil Sci., 1992, 154:130-135.

223. Liso, R., Calabrese, G., Bintoni, M.B., Arrigoni, 0.: Relationship between ascorbic acid and cell division. // Exp. Cell Res., 1984, 150: 314-320.

224. Longa, M.A., del Rio, L.A., Palma, J.M.: Superoxide dismutases of chestnut leaves. Castcmea saliva: Characterization and study of their involvement in natural leaf senescence. // Physiol. Plant., 1994,92:227-232.

225. Lupotto E., Locatelli F., Lusardi М.С./ In vitro selection for Salt tolerance in maize// In Biotechnology in Agriculture and forestry, v.25. Maize (and by Bajaj P.S.) Springer-Verlag, Berlin. Heidelberg, 1994, pp. 314-330.

226. Makrigiorgos, G.M., Bump, E., Huang, C., Baranowska-Kortylewicg, J., Kassis, A.I.: A fluorimetric method for the detection of copper-mediated hydroxyl free radicals in the immediate proximity of DNA. // Free Radic. Biol. Med., 1995, 18:669-678.

227. Maksymiec, W., Baszynski, T: The influence of Ca2+on the toxicity extent of Cu action on runner bean plants at different growth stages of their primary leaves. // Biol. Bull. Poznan 32 (Suppl.): 40, 1995.

228. Maksymiec, W., Baszynski, Т.: Different susceptibility of runner bean plants to excess copper as a function of growth stages of primary leaves. // J. Plant Physiol., 1996,149:217-221.

229. Maksymiec, W., Russa, R., Urbanik-Sypniewska, Т., Baszynski, Т.: Effect of excess Cu on the photosynthetic apparatus of runner bean leaves treated at two different growth stages. // Physiol. Plant, 1994,91: 715-721.

230. Markossian, K.A., Aikazyan, V.T., Nalbandyan, R.M.: Two copper-containing proteins from cucumber (Cucumis sativus) //. Biochim. biophys. Acta, 1974,359:47-54.

231. Maslenkova, L.T., Zanev, Y., Popova, L.P.: Oxygen-evolving activity of thylakoids from barley plants cultivated on different concentration of jasmonic acid. // Plant Phvsiol. 93:1316-1320.1990,

232. Ma Mi, Tsang Wing Keung, Kwan К M Frances, Preliminary studies of the identification and expression of metallothionein-like gene in Festuca Rubra//Acta Botanica Sinica, vol.30, № 11, p. 1078-1081.

233. Maroti M., Bognar J., Effect of toxic metals inhibiting the growth, of plant callus tissues//Acta Agronomica Hungarica, vol. 40, №1-2,1991, p. 39-47.

234. Marshall G., Field analysis of variation in somaclones of fibre flax (Linum Usitatissimum L.)//Natural Fibres, vol.37, 1994, p.9-15.

235. Meharg A.A. The role of the plasmalemma in metal tolerance in angiosperms//Physiol.Plant.88, 1993, p.191-198.

236. Meharg A.A. Integrated tolerance mechanisms: constitutive and adaptive plant responses to elevated metal concentrations in the environment/ZPlant, cell and environment, vol.17, №9,1994, p. 989-993.

237. Mersik S., Kubik I. Delating of heavy metals by the humus acids and influence of peat on the uptake of Zn, Pb, and Cd by plants// Int.conf., vol.422, Warsaw, 1995, pp. 19-31.

238. McBrien D.C.H., Hassal K.A. Loss of cell potassium by cholorella vulgaris after contact with toxic amounts of copper sulphate// Physiol. Plant, 1965, N18, p.1059

239. McCoy T.J. Charakterization of alfalfa (Medicago sativa ) plants regenerated from selected NaCl tolerant cell lines// Plant Cell Rep., 1987, 6(6), 417-422.

240. McHughen A. A. salt tolerance through increased in flax line selected for salt yolerance in vitro // Theor and Appl. Genet., 1987, v. 74, N6, p, 727

241. Metz R., Wilke B.M., Einfluss der Bodenbelastung von

242. Rieseifeldem auf Wachstum, Ertrag und Scnwemietallentzug von126

243. Mais//Wiss. Zeitschrift der Humboldt Universitat zu Berlin, R.Agrarwissenschaften, Bd., ,1992, N°3, p. 41.

244. Moustakas. M. Lanaras. Т., Symeonidis. L., Karataglis, S.: Growth and some photosynthetic characteristics of field grown Avena sativa under copper and lead stress. // Photosynthetica 30: 389-396.1994.

245. Mukheiji S, Gupta В/ Characterization of copper toxicity in lettuce seedlinga // Physiol. Plant., 1972, N27, p. 126

246. Naiki N., Yamagata Sh., Isolation and some properties of copper-binding proteins found in copper-resistant strain of yeast//Plant a. Cell Physiol., vol. 17, №6, 1976, p. 1281-1295.

247. Narayanan K.K., Kangasamy S.R. Inheritance of salt tolerance in prodenies of tissue culture selected variants of rice// Curr. Sci. (India) 1989 - 58 -Xs21 -p, 1204-1205

248. Ouzounidou, G,: The use of photoacoustic spectroscopy in assessing leaf photosynthesis under copper stress: correlation of energy storage to photosystem II fluorescence parameters and redox change of P700- //- Plant Sci., 1996, 113:229-237.

249. Perez-Alfocea Francisco, Larther Francos. Sucrose and proline ассшшкйкзп andsugar efflux in tomato leaf discs affected by NaCl and polyethylene glycol 6000 iso127osmotic stresses//Plant Sci. -1995. -107, №1. P.9-15.

250. Polyakoff-Maiber A. Biochemical and phesiological responses of higher plant to salinity stress. // Biosaline research, Eds: A. Hollander. 1982 p.145.

251. Prakash A.H., Vajrana Bhaiah, P.C. Reddy. Effect of salt stress on callus development from hypocotyl segments of sunflower (Helianthus annuus L.) genotypes/ZHella. -1993. -16, №. 18. -P.71 -76.

252. Prutz, W.A.: Interaction between glutatione and Cu(II) in the vicinity of nucleic acids, it Biochem. J., 1994,302:373-382

253. Punz, W.F., Sieghardt, H.: The response of roots of herbaceous plant species to heavy metals. // Environ, exp. Bot., 1993,33: 85-98.

254. Ramagopal S. Salinity stress induced tissue-specific proteins in barley seedlings. // Plant Physiol., 1987, v.84, p. 324

255. Reboredo, F.: Interaction between copper and zinc and their uptake by Halimione portulacoides (L.) Alien. // Bull, environ. Contam. Toxicol. 52: 598605, 1994.

256. Reese R.N., Wagner G.J. Effects of buthionine sulfoximine on Cd-binding peptide levels in suspension-cultured tobacco cells treated with Cd, Zn or Cu//Plant Physiol., vol.84,, №3,1987., p.574

257. Reilly A., Reilly C. Copper induced chlorosis in becium hombld H Plant and Soil, 1973, N38, p. 671

258. Renganathan, M., Bose, S.: Inhibition of primary photochemistry of photosystem П by copper in isolated pea chloroplasts. // Biochim. biophys. Acta, 1989,974:247-253.

259. Ros Roc, Picazo I. Plasmalemma ATPase activity from Oryza sativa shoots abd roots. Effect of several metal ions // Physiol, plant, 1990, 79, №2, Pt.2, p. 19

260. Rus-Alvares, Guerrier G. Proline metabolic pathways in callus from Lycopersicon esculentum and L. pennellu under salt stress // Biol. Plant. 1994. -36, №2.-P.277-284.

261. Sabu A., Sheeja Т.Е., Nambisan Padma. Comparison of proline accumulation in callus and seedlings of two cultivars of Oryza sativa L. differing in salt tolerance//India J. Exp. Biol. 1995. -33, №2. -P.139-141.

262. Scheller H.V. et al. Phytochelatin synthesis and glutathione levels in response to heavy metals in tomato cells//Plant Physiol., vol.85, №4, 1987, p. 1031-1935.

263. Sharma O.K., Heavy metals environment: // IntConf., Athens, Sept, vol.1, 1985, p.610-611.

264. Sharma Pankaj, Raj am Manchikatia V. Genotype, explant and position I effects on organogenesis and somatic embryogenesis in eggplant (Solarium melongena L.) // J. Exp. Bot. -1995. -46, №282. P. 135-141.

265. Shevyakova N.I., Klochkova V.S., Lomova M.G., Malyuzhenets E.E., Kuznetsov Vl.V. Peculiarities of the salt stress effect on plants in urban conditions. // Proceedings of the internxonf. on Ecology in cities, 1998, Greec$4k27.

266. Singh M., Singh B.B., Ram P.C. Effect of iso-osmotic levels of salts abd PEG-6000 on Saccharides, free proline and nitrogen content during early seedling growth of pea (Pisum sativum L.). Biologia plant., 1990, v. 32, N3, p. 232

267. Soeda Kenji, Okuma Eiji, Kukuda Miho, Murata Yoshijwki, Tada Mikiro. Composition of free aminoacids in salt-unadaptated and adaptated tobacco cultured cells // Plant Physiol.-1997.-I 14, №3.-P.120,

268. Smith M.K., McComb J.A. Selectionfor NaCl-tolerance in cell cultured of Medicago sativa and recovery of plant cell line// Plant Cell Repts, 2, 126-8, 1983

269. Sudhaker C., Reddy P.S., Veeranjane Yulu K. Effect of salt130stress on the enzymes of proline synthesis and oxidation in green grom (Phaseolus aureus Rox b.) seedlings // J. Plant Physiol. -1993. -141, №5. -P.621-623.

270. Swaaij A.C. Jocobsen E. Keil J.A., Feenstra W.J. Selection, characterization and regenerationof hydroxyproline-resistant cell lines of Solanum tibetosum: tolerance to NaCl and freezing stress. // Physiol. Plant., 1986» v. 68. p.359

271. Taylor G.J. Exclusion of metals from the symplasm: a possible mechanism of metal tolerance in higher plant // J. Plant. Nutr. 1987 - 10- N 9/16 -P. 1213-1222

272. Tejklova E., Long-term in vitro shoot-tip culture and plant regeneration in flax//Rostlinna vyroba, vol.38, N°12, 1992, p. 1022.

273. Teruo Asami, Soil pollution by metals in Дарая/Ягашасйоп of the XII Congress Inter. Soc. Soil Sci., vol. 2,1986, p.222-223.

274. Tobita S., Takahashi H., Miyake H., Totsuka T. Selection and partical characterization of copper- of copper-resistant line in rice (Oryza sativa) cullus culture// J. Plant Physiol., 133(5), 545-9, 1988

275. Thurman D.A, Mechanisms of metal tolerance in higher plants. V. 2.//Ed. Leap n.w.l.: Applied Sci. Publ., 1981, p. 239

276. Troncoso A., Matte C., Cantos M., Lavee S. Evaluation of salt tolerance of in vitro growth grapevine rootstock varieties // Vitis. -1999. -38, Лгй2. -P.55-60.

277. Turner R.G., Marshall C. The accumulation of Zn65 by root131homogenates of Zn-tolerant and non-tolerant clones of Agrostis tenius Sibth, И -New Physiol., 1971, wol. 70, N 4, p.538-545

278. Tyerman S.D., Oata P., Gibbs J., Dracup M., Greenway H. Turgor-volume regulation and cellular water relations of Nicotiana tabacum roots growth in high salinities // Austral. J. Plant Physiol. 1989. -16, №6. P.517-531.

279. Verkleij J.A.C., Schat H. // Heavy metal tolerance in plants: Evolutionary aspects / Ed. Shaw A.J.N.Y,: CRC press, 1990 p. 179

280. Wallace A., Mueller R.T. Effect of iron level on trace metal stress in bush bean plants grown in solution culture. J. Plant Nutr., 1980, vol.2, N 1-2, p. 99-102

281. Wainwright S.J., Woolhouse H.W. Some physiological aspects of copper and zinc tolerance in Agrostis tenuis Sibth cell elongation and membrane damage // J. Exp. Bot -1977 28 - N105 - P. 1029-1036

282. Weckx J., Clijsters H Heavy metals induce oxidative stress // Physiol, plant. 1992- 85 - N 3- Pt 2 - p 73,

283. Woolhouse H.W. Photochemical phylogeny //Ed. Harborne J.B.L." Acad. Press. 1970 p. 207

284. Yin-Ming Li, Rufus L.haney, Albert A.Schneiter, Screening for low grain cdmium phenotypes in sunflower, durum wheat and flax//Euphytica, vol. 94, 1997, p,23*30.

285. Zenk Meinhart H. Heavy metal detoxification in higher plant a review//Gene 179 Л996, p,21-30.

286. Zhan Xiang-can, Jones David A., Kerr Alien, Regeneration of flax t plants transformed by Agrobactcrium rhizogencs//Plant Mol. Biol, №5, 1988, p. 551-559.О

Информация о работе

Гладков, Евгений Александрович
кандидата биологических наук
Москва, 2003
ВАК 03.00.23

Диссертация

Получение газонных трав, толерантных к засолению и ионам меди, методами биотехнологии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы