Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Полимерные дисперсные системы медико-биологического назначения

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Станишевский, Ярослав Михайлович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Полимерные микросферы биомедицинского назначения.

1.1.1. Получение полимерных микросфер методом гетерофазной полимеризации.

1.2. Иммобилизация биолигандов на поверхности полимерных микросфер.

1.2.1. Иммобилизация биолигандов на поверхности полимерных микросфер путем физической адсорбции.

1.2.2. Ковалентная иммобилизация биолигандов на поверхность полимерных носителей.

1.3. Применение полимерных микросфер в биоанализе.

1.3.1. Полуколичественные методы (тесты), проводимые при участии частиц полимерных суспензий.

1.3.2. Комплексные методы анализа биоспецифических взаимодействий, при участии полимерных микросфер.

1.3.3. Полимерные суспензии для проведения реакции фагоцитоза.

ГЛАВА

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Исходные вещества.

2.2. Методы исследования.

2.2.1 Получение полимерных суспензий в реакторе.

2.2.2. Дисперсионная полимеризация.

2.2.3. Очистка полимерных суспензий

2.2.4. Определение содержания полимера в суспензии (сухой остаток).

2.3 Определение размера частиц методом фотон - корреляционной спектроскопии

2.4. Определение \ - потенциала из данных по электрофорезу частиц, методом фотон корреляционной спектроскопии

2.5. Иммобилизация биолигандов на поверхности полимерных микросфер.

2.5.1. Адсорбция белков на поверхность полимерных микросфер

2.5.2. Ковалентное связывание биолигандов с функциональными группами полимерных микросфер.

2.6. Реакция латексной агглютинации (РЛА).

2.7. Выбор сенсибилизирующей дозы.

2.8. Оценка фагоцитарной активности полинуклеаров.

ГЛАВА 3.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ.

3.1.Синтез полимерных суспензий для создания тест-систем биомедицинского назначения

3.2.Создание тест-систем на фибронектин

3.3 Влияние способа иммобилизации биолиганда на устойчивость частиц суспензии.

3.4. Получение антительных диагностических тест-систем заданной специфичности.

3.5. Полимерные микросферы для изучения клеточных рецепторов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Полимерные дисперсные системы медико-биологического назначения"

Реакция взаимодействия частиц, находящихся в биологической среде, с биомолекулами или клетками широко используется в научных и практических целях. На этом взаимодействии основаны разнообразные варианты агглютинационных тестов, используемых в серологии и иммунохимии.

Со времен открытия фагоцитоза суспензии частиц остаются классическим "инструментом" для изучения этого процесса. Рецепторная теория Эрлиха инициировала целое направление в науке, в котором суспензионные системы заняли определенное место в методике проведения исследований.

На современном этапе развития науки можно выделить основные области применения суспензий в биологии и медицине - это иммунология и цитология.

Исторически сложилось так, что изначально широкое развитие получили методы проведения исследований с использованием суспензий частиц биологического происхождения (бактерии, дрожжи, эритроциты и.т.д.). Очевидно, это произошло за счет того, что достаточно легко удавалось добиться стабильности таких суспензий в биологических жидкостях, и созданные на их основе индикаторные системы получили широкое распространение.

После того, как такие частицы стали использовать в качестве носителей искусственно иммобилизированных на них биолигандов (антигены, антитела, гормоны и.т.д), было освоено промышленное производство диагностических тест-систем.

Хотя эти системы удовлетворяли исследователей чувствительностью и специфичностью иммунно-химических реакций, недостатком их является то, что такие носители биолигандов не были абсолютно инертны, так как, помимо иммобилизованного биолиганда, содержали на поверхности собственные биологически активные компоненты. Это побудило исследователей обратится к синтетическим носителям. Перспективным здесь было то, что в данном случае открывалась возможность контроля состава носителя, направленного выбора способа иммобилизации лиганда, регулирование визуализации реакции и.т.д.

Кажущаяся на первый взгляд простота перехода от биологических носителей к синтетическим в реальности не подтвердилась. Оказалось, что удачные лабораторные разработки таких систем часто не могли быть воспроизведены при масштабировании. Многие авторы, ориентируясь на универсальность бионосителей, переносили это представление и на синтетические суспензии. Кроме того, предполагалось, что одна система (полимерная микросфера-биолиганд) может иметь разное назначение, например, применяться при создании агглютинационных тестов, изучении фагоцитоза, детекции клеточных рецепторов и.т.д.

На наш взгляд такой подход оказался неправомерным и именно это является одной из причин нестабильности технологии получения таких систем.

Вышеизложенное позволяет выделить узловые моменты в создании стабильной технологии создания суспензионных носителей биолигандов. К ним относится прежде всего проблема агрегативной устойчивости микросфер в физиологических жидкостях. Это оказывается особенно важным в том случае, когда взаимодействие лиганда с рецептором учитывается по количеству адгезированных частиц на клеточной мембране.

Другой ключевой проблемой является способ иммобилизации лиганда на носителе. Именно от этого зависит не только качественные характеристики тест-системы, но и область ее применения.

Исходя из этого целью настоящей работы было : выявить параметры, определяющие возможность использования частиц полимерных суспензий в качестве носителей биолигандов и оценить перспективность создания на их основе систем различного биомедицинского назначения. Основные задачи исследования.

1. Определить влияние природы полимера и способа проведения гетерофазной полимеризации на свойства полимерных суспензий с целью выбора оптимальных условий их получения с заданным комплексом свойств.

2. Провести оценку их качества по устойчивости в физиологическом растворе, иммобилизации биолигандов на поверхность полимерных микросфер (на примере желатины, иммуноглобулина G) и системе контроля их активности в биологических реакциях.

3. Изучить устойчивость системы "полимерная микросфера-биолиганд" при разных условиях иммобилизации биолиганда (температура, физическая адсорбция, ковалентное связывание). Определить специфичность и чувствительность реакции латексной агглютинации (РЛА) с использованием полученных тест-систем.

4. Определить диапазон возможного применения полимерных суспензий для создания систем различного биомедицинского назначения.

Научная новизна.

- Получены новые антительные диагностические тест-системы для определения антигенов (Y.enterocolitica серотипаОЗ, L. canicola, S. pulorum, вируса инфекционного бронхита кур (ИБК) штамм Н120 и столбнячного анатоксина (СА)), путем аффинного связывания иммуноглобулинов кролика со спейсором-протеином А и путем ковалентного связывания иммуноглобулина G лошади, несодержащего Fc-фрагмент, к предварительно активированным карбоксильным группам полимера частиц.

- Впервые получены стабильные и контролируемые системы для детектирования на клетках - фибронектина, фибронектинового рецептора, Fc-рецептора и фиксированных на клеточной мембране иммунных комплексов.

- Установлено, что способ иммобилизации иммуноглобулина G (IgG) на поверхность полимерных микросфер влияет на их устойчивость: в случае присоединения IgG Fc-фрагментом (спейсор-протеинА) устойчивость системы выше, чем при присоединении его Fab-фрагментом (спейсор-антиген), при прочих равных условиях.

- Показано влияние природы желатина и ее конформации на диаметр частиц, заряд, устойчивость полимерных микросфер и чувствительность тест-систем. Показано, что предпочтительна иммобилизация желатины в конформации "клубка" на поверхность полимерных микросфер при 60°С.

- Впервые проведен сопоставительный анализ методов получения полимерных суспензий с частицами, различающимися составом межфазного слоя (природой полимера, ПАВ, функциональных групп, наличием красителя и флюоресцентной метки), а также их числом, и свойств полимерных носителей биолиганда по устойчивости в физиологическом растворе, иммобилизации биолигандов на их поверхность, и по системе контроля их активности в биологических реакциях.

- Показано, что при замене водной фазы на физиологический раствор, частицы полимерных суспензий, полученные дисперсионной полимеризацией и содержащие в межфазном адсорбционном слое поливинилпирролидон (ПВП), сохраняют свою индивидуальность. Полимерные микросферы полученные затравочной полимеризацией мономеров, образуют флокулированные агрегаты из двух и более частиц, что приводит к их спонтанной агглютинации. Использование их в качестве носителей биолигандов в физиологических растворах возможно только при наличии в межфазном адсорбционном слое - альбумина, определены его оптимальные концентрации.

Практическая значимость.

- Разработаны условия синтеза полимерных микросфер с заданным комплексом свойств. Показана возможность их применения при создании антительных диагностикумов для выявления :

• концентрации антигенов (Y.enterocolitica серотипаОЗ, L. canicola, S. pulorum, вируса ИБК штамм Н120) в биологических средах (путем иммобилизации антител через ковалентно связанный спейсор-протеин А);

• концентрации столбнячного анатоксина (СА) (путем прямой иммобилизации антител к функциональным группам носителя).

- Получены контролируемые тест-системы для детектирования на клетках -фибронектина, фибронектинового рецептора, Fc-рецептора и фиксированных на клеточной мембране иммунных комплексов при фагоцитозе. Положения, выносимые на защиту.

1. Тест-системы для определения антигенов (Y.enterocolitica серотипаЗ, L. canicola, S. pulorum, вируса ИБК штамм HI20 и столбнячного анатоксина (СА) - в PJTA, и тест-системы для детектирования на клетках - фибронектина, фибронектинового рецептора, Fc-рецептора и фиксированных на клеточной мембране иммунных комплексов.

2. Способ присоединения молекулы IgG к протеину А, столбнячному анатоксину и функциональным группам полимера на поверхности частиц.

3. Спектр применения полимерных микросфер в зависимости от природы иммобилизированного биолиганда и пространственной ориентации его на поверхности частиц.

4. Влияние природы желатины и ее конформации в водных растворах на свойства полимерных микросфер и их устойчивость в процессе создания тест-систем.

5. Условия синтеза полимерных микросфер с различным строением межфазного адсорбционного слоя, диаметрами в интервале 1,1-2,9мкм. и узким распределением по размерам и ^-потенциалом в интервале от -4,3 до -52,4мВ.

6. Влияние строения межфазного слоя полимерных микросфер на их диаметр, С,-потенциал и устойчивость в биологических средах.

7. Пути повышения устойчивости полимерных микросфер в процессе создания тест-систем различного биомедицинского назначения.

Обзор литературы.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Станишевский, Ярослав Михайлович

3.7 Выводы.

1. Получены новые антительные диагностические тест-системы для определения антигенов (Y.enterocolitica серотипаОЗ, L. canicola, S. pulorum, вируса ИБК штамм HI20 и столбнячного анатоксина (СА)), путем аффинного связывания иммуноглобулинов кролика со спейсором-протеином А и путем ковалентного связывания иммуноглобулина G лошади, несодержащего Fc-фрагмент, к предварительно активированным карбоксильным группам полимера частиц соответственно.

2. Показано, что природа биолиганда и способ его иммобилизации определяет диапазон использования полимерных микросфер для изучения биообъектов. Предложены системы для определения антител, антигенов в серологических реакциях и системы для детекции поверхностных клеточных рецепторов. Определены их параметры и способы контроля.

3. Установлено, что способ иммобилизации иммуноглобулина G (IgG) на поверхность полимерных микросфер влияет на их устойчивость: в случае присоединения IgG Fc-фрагментом (спейсор-протеинА) устойчивость системы выше, чем при присоединении его Fab-фрагментом (спейсор-антиген), при прочих равных условиях.

4. Впервые выявлено влияние природы желатина и ее конформации на диаметр частиц, заряд, устойчивость полимерных микросфер и чувствительность тест-систем. Показано, что предпочтительна иммобилизация желатины в конформации "клубка" на поверхность полимерных микросфер при 60°С, число частиц в полимерной суспензии должно

Я 1П составлять 10-10ш частиц/л.

5. Изучено влияние условий (температура, среда) и способа иммобилизации (физическая адсорбция, ковалентное связывание природы функциональных групп) на устойчивость системы, специфичность и чувствительность реакции латексной агглютинации (PJIA).

6. Впервые проведен сопоставительный анализ методов получения полимерных суспензий, частицы, которых различались составом межфазного слоя (природой полимера, ПАВ, функциональных групп, наличием красителя и флуоресцентной метки), а также их числом и свойств тест-систем, сконструированных на их основе по устойчивости в физиологическом растворе, способу иммобилизации биолигандов на их поверхность, и по системе контроля их активности в биологических реакциях.

3.6. Заключение.

Синтез полимерных суспензий различной природы был осуществлен разными способами гетерофазной полимеризации : эмульсионной (со)полимеризацией мономеров, затравочной и дисперсионной полимеризацией мономеров в присутствии растворимых и нерастворимых в воде ПАВ, а также в их отсутствие. Добавление флуоресцентной метки или окрашивание полимерной суспензии проводили в процессе их синтеза, а также после полной конверсии мономера. Основной особенностью всех видов полимеризации было создание условий для формирования устойчивых в процессе синтеза частиц с диаметрами в интервале 1,1- 2,9мкм и узким распределением по размерам. Это позволило получить полимерные микросферы с различным составом межфазного адсорбционного слоя; межфазным слоем, состоящим только из полимера и ионогенных фрагментов молекул инициатора (персульфата калия), содержащим функциональные группы полимера, способные непосредственно взаимодействовать с функциональными группами биолиганда (альдегидные, эпокси- группы), и после их активирования (карбоксильные, амино-группы), функциональные группы молекул ПАВ (карбоксильные), а также молекулы полимерного ПАВ- поливинилпирролидона.

Замена водной фазы на физилогический раствор показала, что поведение полимерных суспензий различно и зависит от строения межфазного слоя частиц. Частицы, содержащие в межфазном слое поливинилпирролидон, были устойчивы, но на их поверхность не происходило физической адсорбции таких биолигандов как желатина, протеин А, столбнячный анатоксин.

Их использование в иммуно-химических реакциях оказалось возможным только в присутствии в межфазном слое частиц альдегидных или карбоксильных групп, к которым было возможно ковалентно присоединить функциональные группы биолиганда.

Частицы, несодержащие поливинилпирролидон в межфазном слое, образовывали в физиологическом растворе и других биосредах агрегаты, т.е. не обладали необходимой для дальнейшего использования устойчивостью. Их применение в биоанализе оказалось возможным только после дополнительной адсорбции на поверхность частиц полимерного ПАВ-альбумина в определенной концентрации.

Эти частицы были использованы для создания тест-систем различного биомедицинского назначения.

При создании тест-системы на фибронектин в межфазный слой микросфер необходимо было добавить (физически сорбировать или ковалентно связывать) желатину в определенной концентрации, которая способна аффинно взаимодействовать с фибронектином. Предварительный анализ желатины различного производства (костно-щелочной, костно-щелочной, модифицированной путем добавления формальдегидного дубителя ЛШСИ-1, или алкильного радикала С§) позволил выбрать для исследований костно-щелочную желатину. Ее физически сорбировали на поверхность частиц и ковалентно связывали с поверхностными карбоксильными группами полимера. Подробные исследования по влиянию состава межфазного слоя частиц, способа иммобилизации на их поверхность желатины и температуры (определяющей ее конформацию "клубок", "спираль") на чувствительность PJIA с использованием полученных тест-систем, показали, что для создания теста на фибронектин предпочтительно использовать полимерные микросферы, содержащие в межфазном слое альбумин и желатину в определенном массовом соотношении, и карбоксильные группы полимера или ПАВ (для ее ковалентного связывания).

Обнаружено, что способ иммобилизации IgG на поверхность микросфер влияет на их устойчивость и чувствительность PJIA. Оказалось, что при присоединении IgG на поверхность полимерных микросфер Fc-фрагментом (спейсор-протеин А) устойчивость системы выше, чем при присоединении его Fab-фрагментом (спейсор-антиген), при прочих равных условиях.

Эти данные были положены в основу создания антительных диагностических тест-систем разной специфичности : иерсиниозный - к Yersinia enterocolitica серотипа 03, лептоспирозный к L. canicola, сальмонелезный к S. pulorum, к вирусу ИБК штамм HI20.

В этих исследованиях была обнаружена причина, не позволяющая создавать антительные тест-системы с использованием специфического у-глобулина. Эта причина состояла в том, что в общем пуле содержание специфического у-глобулина было мало по сравнению с неспецифическим. В этом случае на поверхность микросфер сорбировался в основном неспецифический у-глобулин и чувствительность PJIA была ничтожной.

Решить проблему создания антительной тест-системы удалось путем использования сывороток с высоким титром специфического у-глобулина.

В процессе решения этой задачи были решены и другие проблемы, такие как выделение у-глобулина из биосреды за счет аффинного взаимодействия его с протеином А, ковалентно связанным с поверхностными функциональными группами полимера микросфер; и создание антительной тест-системы на столбнячный анатоксин с использованием очищенного от других сывороточных белков у-глобулина, несодержащего Fc-фрагмент, ковалентно связанного с поверхностными карбоксильными группами полимера микросфер.

Полученные антительные диагностикумы оказались высоко чувствительны.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Станишевский, Ярослав Михайлович, Москва

1.Bangs L.B.1.munological applications of microspheres //The Latex Course.-1996.-N4.-p.l-29.

2. Елинов Н.П.Химическая микробиология. М.:Высшая школа,-1984.-c.294.

3. Carney J. Rapid diagnostic tests employing latex particles // Anal. Proc.-1990.-v.27.-p.99-100.

4. Lyerly D M., Hahn P. An assay for elevated levels of fecal leukocytes // American Clin. Lab.-1994.-v.5.-p.18-20.

5. Иммунология. Практикум.-К.: Высшая школа.-1989.-с.302.

6. Fujikawa Н., Igarashi. Rapid latex agglutination text for detection of Staphylococcal enterotoxins A to E that uses latex particles // Appl.Envir. Microbiol.-1988.-v.54.-N. 10.-p.2345-2348.

7. Kondo A., Kawano Т., Higashitani K. Immunological agglutination kinetics of latex particles with covalently immobilized antigens //J. Of Fermentation & Bioengin.-1992.-v.73.-N.6. -p.435-439.

8. Medcalf E.A., Newman D. J., Gilboa A., Gorman E.G., Price C.P. A rapid and robust particle-enhanced turbidimetric immunoassay for microglobulin // J. Immunol. Methods.-1990,-v. 129,-p.446-449.

9. Karmeyer W.H., Poiuly H.E., Tuengler V. Avtomated nephelometricassay for determining with novel shell /core particles// J. Clin. Lab. Anal.-1988.-v.2.-p.76-83.

10. Delanghe J.R., Chappele J. P., Vanderschueren S.C. Quantitative nephelometric assay for detection myoglobin evaluated //Clin. Chem.-v:36.-N.9.-p. 1675-1678.

11. Ameral J., Migaud M. Development and applications of a new photometric method for fast&sensitive immunoassays //Eur. Clin. Lab.-1991.-v.10.-p.28.

12. Cannel D.S., Giglio M., Benedek G.B., Cohen R.J. Immunoassay by light scattering intensity anisotropy measurements //Clin. Chem.-1987.-v.3.-p.45-48.

13. Giglio M., Benedek G.B., Cohen R.J., Cannel D.S. An immunoassay of high sensetivity //Mol. Immunol.-1986.-v.l7.-p.81-92.

14. Wilkins T.A., Brouwers G, Mareschal J.C., Cambiaso C. High sensetivity homogeneous particle-based immunoassay for thyrotropin//Clin. Chem.-1988.-v.34-N.9.-p. 1749-1752.

15. Particle aggregation method and apparatus: Eur Pat WO 93 /19367 MKN G 08 F 34 /244 /Coacly W.T.- опубл.-30.09.1993.

16. Particle agglutination immunoassay apparatus: US Pat 4,913,883 MKN С 08 F 2 /44 Лг К., TokinagaD., YoukogawaK.-ony6fl.-3.09.1990.

17. Nakamura N., Hashimoto K, Matsunara T. Immunoassay method for the detemination immunoglobulin G using bacterial magnetic barticles//Anal. Chem.-v.63.-N.3.-p.268-272.

18. Christensen H., Thyssen H.H., Schebye O., Berget A. Three highly sensitive "Bedsi< serum and urine tests for pregnancy compared //Clin. Chem.-1990.-v.36.-p. 1686-1688.

19. Tsuda S., Kamayak-Iwaki M., Hanada K., Kouda Y., Hikata M. A novel detection i identification technique for plant viruses: rapid immunofilter paper assay //Plant Disease.-195 V.76.-P.466-469.

20. Gibbs J., Brown C., Root D. ELIZA optimization //J. Immunol. Methods.-1994.-v.175.-p.1 103.

21. Drugs of abuse by immunoassay //Clin. Lab. Prod.-1992.-v.21.-N.3.-p.8-9.

22. Analytical test devices for assay for drugs of non-protein antigens us immunochromatographic techniques. US Pat 5,238,652 MKN G 01 N33/54 /Sun M., Pfei F.R.-опубл. 1993.

23. Lungstedt I., Ekman В., Sjoholm I. Detection and separation of lymphocytes with spec: surfase receptors by using microparticles //Biochem. j. -1987,-v. 170.-p. 161-165.

24. Molday R.S. Cell labeling and separation using immunospecific microspheres //Cell Sepai Methods. -1984.-v. 3.-p.237-263.

25. Wiker A.L., Sweeny D.J., Mowrey D.H., Coleman M.R., Morris D.K. Validation of particles concentration fluorescent immunoassay of Tylosin //Poster Reprint. AOAC Ann Meeting, Cincinnati.-1992.-August.

26. Vaida H.S., Porter S.E., Landt Y., Silva D.P., Ladenson I.H. Quantification of Lact Dehydrogenase-1 in serum with use of an M-subunit specific monoclonal antibody I 1С Chem.-1988.-v.76.-N. 12.-p. 1412-1414.

27. Patterson W., Werness P., Payne W.J., Matsson P., Leaflar C., Melander T. Random ; continuous-access immunoassays with cheminescent defection access automated analyser //C Chem. -1994. -v. 40. -N. 11. -p.2042-2045.

28. Boom R., Sol C., Salimans M., Jansen С, Van der Noorda D. Rapid and simple method purification of nucleic acids //j. Clin. Microbiol.-1990.-v.28.-p.495-503.

29. Freier С., Kan В., Gicquel T. Biotrol System 7000: Automated immunoassay analyzer Clin. Immunoassay.-1991.-v. 14.-N.2.-p. 111-114.

30. Larue C., Calsorani C., Leger J., PauB. Immunoradiometric assays ofMyosyn heavy ch fragments in plasma for investigation of myocardial infraction //Clin. Chem.-1991.-v.37.-N p.78-82.

31. Genzyme Product Literature.-1993.-p. 1000-1018.

32. Kronick P.L. Magnetic microspheres in cell separation //Methods of Cell Separat. /Е Catsimo N -1980.-V.3.-p. 115-139.

33. Keamshead J.T. Immunomagnetic manipulation of hematopoietic cells: A review of curr technology//j. Hematotherapy.-1998.-v. 1 .-p.35-44.

34. Fry G., Lachenmeier E., Mayrand E., Giusti В., Fisher J., Johnston-Dow L., Cathcart Finne E„ Kilaas L. A new approach to template purification for sequencing applications us paramagnetic particles //Bio Techniques.-1992.-v.l3.-p.l24-131.

35. Warshavsky D., Miller L. Arapid genomic walking technique based on ligation-media PCRand magnetic separation technology//Bio Techniques.-1994.-v. 16.-p.792-798.

36. Wilson R.K. High throughput purification of M13 template for DNA sequencing // . Techniques. -1993. -v. 15. -p .414-422.

37. Peeling RBrunham R. Molecular tecniques for the laboratory identification of Chlamydi Clin. Chem. -1994. -v. 6-p.78-82.

38. Margel S. Polyaldehyde microspheres as probes for cell membranes //j.Eng. Chem. Pr Res.-l 982.-v.21.-N3.-p.343-348.

39. Robert S., Molday R., Maner P. Review of cell surface markers and labeling techniques SEM //j. Histthochemic.-1980.-v. 12.-p.273-315.

40. Basch R.S., Berman J.W., LakownE. Cell separation using positive immunoselecl techniques.-j. Immunol. Methods.- 1983.-v.56.-p.269-280.

41. Jensen B.D., Vella F.A., Harner M.L., Hesselberg M.R., Steward L.A., Wong W. Zyna Zymmune CD4/CD8 assay: a novel alternative technology l/AACC Annual Meeting.- 19? N.198.

42. Hokama Y. Simplified solid-phase immunobead assay for detection of ciguatoxin and rela poly ethers//j. Clin. Immunoassats.-1991,- v.14.- p. 11-114.

43. Kowallik P., Schulz R, Guth В., Schade A, Paffliausen W., Gross R., Heusch Measurement of regional Myocardial blood flow with multiple colored microspheres / Immunol. Methods.- 1991,-v.83,-p.974-982.

44. Steinkamp J.A. Multiparameter analysis and sorting of mammalian cells //Method ( Separation.- 1987,- v.l.- p.251- 306.

45. Генералова A.H. Получение биоаналитических реагентов на основе полимерь дисперсий. Дисс. канд. хим. наук.-М.,2000.

46. Fluorescent microparticles with controllable stokes shifts: US Pat 7,882,299 MKN С 0 8/30/ Brikley J., Haugland R, Singler V. -опубл. 1992.

47. Takeuchi К. Scintillation proximity assay //Anal. Letters.- 1992,- v.23.- p.1342-1345.

48. Cook L., Irving D. Microsphere-based flow cytometric assays //j. Clin. Immunoassa 1989,-v. 12.- p.36-39.

49. Bang L.B. Uniform Latex Particles.- Indianapolis: Seradin Inc.- 1984.-p.68.

50. Петров P.B. Иммунология,- M.: Медицина,-1983,- с.368.

51. Enhanced agglutination method and kit. US Pat 4,636,479 MKN G 01 N33/546 /Martin F Kung Т.V. -заявл. 20.04.1983, опубл. 13.01.1987.

52. Кнорре Д.Г. ДНК- и РНК- зонды как алтернатива и дополнение иммунохимическ< анализа //ЖВХО им. Менделеева Москва,- 1989,- с.52-56.

53. Шабарова 3.А., Богданов А.А. Химия нуклеиновых кислот и их компонентов,- . Просвещение 1987,-с.650.

54. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия,- М.: Просвещение,- 1987,- с.815.

55. Gershani J.M., Palade G.F. DNA blotting: principles and applications. Review //Ai Biochem.1983.- v.131.- p.1-15.

56. Forster A.C., McLennus J.L., Skrigle D.C.,Soymons R.H. Non-radioactive hybridisat probes prepared by the chemical labelling of DNA with a novel reagent //Nucleic Acids R< 1985.- v.13.-p.745-761.

57. Chu B.C., Orgel L.E. Detection of specific DNA sequences with short biotin-labelled pro //DNA.- 1985,-v.4.-p.327-331.

58. Alhakim A.H., Hull R. Studies towards the develpment of chemically synthesised n radioactive biotinylated nucleic acid hybridisation probes // Nucleic Acid Res.-1986.- v. p.9965-9976.

59. Gebeche G., Rao P., Soochan P., Simms D.A., Klevan L. Novel biotynilated nucleotide labelling and colouremetric detection of DNA //Nucleic Acid Res.- 1987,- v.15.- p.4513-4534

60. Polymer Latexes : Preparation, Characterization, and Applications (ACS Symposium, 492) //Ed.by Daniels E.S.,Sudol E.D.,El-Aasser M.S.- .-N.-Y.: Kluwer Academic Pi 1998-437 p.

61. Bang L.B. Uniform latex particles.-Indianapolis:Seradyn Inc.,1984.-68 p.

62. Ugelstad J.,Mfutakamba H.R.,Mork P.C.,Ellingsen T.,Berge R, Holm L.,Schi R.,Jorgedal A.,Hansen F.K.,Nustad K. Preparation and characterization monodisperse polymer particles//J.Polym.Sci.,Polym.Symp.-1985.-v.72.-p.225-240.

63. Li W.-H., Li R., Stasver H.D.H.Monodisperse poly(chloromethylstyrene-co-divinylbenzene) microspheres by precipitation polymerization//J.of Polymer Science Part A:Polymer Chemistry-1999-Vol.37-Iss. 14-pp.2295-2303

64. Li W.-H., Li K., Stasver H.D.H Monodisperse poly(chloromethylstyrene-co-divinylbenzene) microspheres by precipitation polymerization//J. of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry-1999-Vol ,37-Iss.l4-pp.2295-2303

65. Bon S.A-F., Vanbeek H., Piet P., German A.L.Emulsifier-Free Synthesis of Monodisperse Core-Shell Polymer Colloids Containing Chloromethyl Groups//J.OF APPLIED POLYMER SCIENCE-1995-Vol.58-Iss. 1 pp. 19-29

66. Sarobe J., Forcada J.Synthesis of Core-Shell Type Polystyrene Monodisperse Particles with Chloromethyl Groups//COLLOID AND POLYMER SCIENCE-1996-Vol.274-Iss.l-pp.8-13

67. Gauthier M., Frank P.C.Submicron Pellicular Resins as Polymer Supports//REACTIVE & FUNCTIONAL POLYMERS-1996-"Vol.31-Iss. l-pp.67-79

68. Miraballesmartinez I., Martinrodriguez A., Hidalgoalvarez R.Chloroactivated Latex-Particles for Covalent Coupling of Antibodies Application to Immunoassays//J. OF BIOMATERIALS SCIENCE-POLYMER EDITION-1997-Vol.8-Iss. 10-pp.765-777

69. Margel S-, Nov E., Fisher I. Polychloromethylstyrene Microspheres Synthesis and Characterization// J.Polym.Sci., Polym.Chem.Ed.-1991- Vol 29- Iss 3-pp.347-355.

70. Huang Y.-H.,Li Z.-M.,MoravetzH.The kinetics of the attachment of reactive latex particles and the resulting latex stabi-lization//J.of Polym.Sci.,Polym.Chem.Ed.-1985.-v.23.- N 3 -p. 795-799.

71. Suen C.-H.,Moravetz H. The kinetics and retention of enzymatic activity in the covalent protein bonding to a polymer latex // Macromol.Chem.-1985.-N 186.-p.255-260.

72. Funke W. Reactive microgels polymers intermediate in size between single molecules and particles // British Polym.J.-1989.-N21.-p. 107-115.

73. Funke W. Intramolecularly crosslinked macromolecules: potent components of organic coating // J.Coat.Tech.-1988.-v.60.-N 60. -p.68-76.

74. Magnet S., Guillot J., Guyot A., Pichot C. Cross-Linking Ability of Styrene Butyl Acrylate Copolymer Lattices Functionalized with Glycidyl Methacrylate// Prog.organ.coating-1992- Vol 20- Iss 1-pp.73-80.

75. Moberg C., Rakos L. Functionalization of Polystyrene Particles with Monochiral Epoxy Groups Potent Precursors for Chiral Polyfiinctional Polymers //React.Pol.-1992- Vol 16-Iss 2-pp.171-179.

76. Verweij P.D., Sherrington DC. High-Surface-Area Resins Derived from 2,3-Epoxypropyl Methacrylate Cross-Linked with Trimethylolpropane Trimethacrylate// J.of Mater.Chem.-1991-Vol 1-Iss 3-pp.371-374.

77. Arshady R. Beaded Polymer Supports and Gels .2. Physicochemical Criteria and Functionalization// J.of Chromat.-1991- Vol 586-Iss 2-pp. 199-219.

78. Horak D., Svec F., Tennikova T.B., Nahunek M. Chromatographic Properties of Macroporous Beads from Poly(GMA-Co-Edma)//Ang.Makromol.Chem.-1992- Vol 195- Iss FEB-pp. 139-150.

79. Walenius M., Kulin L.I., Flodin P. Synthesis and Characterization of Copolymers of Trimethylolpropane Trimethacrylate and Glycidyl Methacrylate in Toluene .1.1 I React.Pol-1992-Vol 17-Iss3-pp.309-323.

80. Maehara Т., Eda Y., Mitani K., Matsuzawa S. Glycidyl Methacrylate Styrene Copolymer Latex-Particles for Immunological Agglutination Tests //Biomater.-1990- Vol 11-Iss 2-pp. 122-126.

81. Tuncel A., Kahraman R., Piskin E. Monosize Polystyrene Latices Carrying Functional-Groups on Their Surfaces// J.Appl.Polym.Sci.-1994- Vol 51- Iss 8- pp. 1485-1498.

82. Hoshino M., Arishima К.Survey of Preparation Techniques of Monodispersed Microspheres of Glycidyl Methacrylate and Its Derivatives//J.OF APPLIED POLYMER SCIENCE-1995-Vol.57-Iss.8-pp. 921-930.

83. Horak D., Straka J., Schneider В., Lednicky F.Pilar J. Poly(Ethylene Dimethacrylate) Particles with Poly(Glycidyl Methacrylate) Functionalities //Polymer-1994- Vol 35- Iss 6-pp. 1195-1202.

84. Иванчев С.С. Полифункциональные компоненты при радикальной по лимеризации и получении полимерных композиций // Успехи химии,- 1991.-т.60.-вып.7.-с. 1368-1390.

85. Елисеева В.И.,Асламазова Т.Р., Эмульсионная полимеризация в от сутствие эмульгатора и латексы на ее основе//Успехи химии,- 1991.-т.60.-вып.2.-с.398-428.

86. Елисеева В.И. Полимерные суспензии.-М.:Химия,1980.-295с.

87. Muroi S. Some physicochemical proprties of poly(ethyl acrylate)emulsion containing carboxyl groups// J.Appl.Polym.Sci. -1966.-N 10.-p.713-715.

88. Muroi S.,Hosoi K.,Ishikawa T. Characterization of carboxyl groups cntaining polymer latices//J.Appl.Polym.Sci.-1967.-Nll.-p. 1963-1966.

89. Грицкова И.А., Крашенинникова И.Г., Аль-Хаварин Д.И., Нусс П.В., Дорохова Е.А. Гжива Никсиньска И. Устойчивые полистирол-метакриловые суспензии с узким распределением частиц по размерам//Коллоидн. ж. -1995, -т.57. -N2. -с. 182-185.

90. Способ получения полимерных суспензий с узким РЧР в присутствии Ди-п-толил-карб-алоксифенилкарбинола: Пат. 163091, Республика Польша/Грицкова И.А.,Гжива Э-1994.

91. Грицкова И.А., Чирикова О.В., Щеголихина О.И., Жданов А.А. Необычный эффект стабилизации полимерных суспензий в присутствии карбоксилсодержащих поливинилсилоксанов// Докл.РАН-1994-т.334 -Nl-c.57-61.

92. Чирикова О.В.Синтез полимерных суспензий в присутствии карбоксилсодержащихполивинилсилоксанов:Дисс. .канд.хим.наук. МИТХТ, Москва, 1994.

93. Ш.Шалыт С.Я. Условия формирования межфазных адсорбционных слоеволеорастворимых мыл синтетичеческих жирных кислот и пути регулирования ихстабилизирующего действия.//Дисс. докт.хим.наук- Москва, 1987-264 с.

94. Митюк Д.Ю.Роль структуры и свойств межфазных адсорбционных слоев в процессерегулирования дисперсности систем типа вода/масло,стабилизированных алюминиевымимылами синтетических жирных кислот// Дисс. канд.хим.наук- Москва, 1985-122 с.

95. Суспензионная полимеризация винилхлорида. Стабилизаторы полимеризующейсяэмульсии. Сб. обзорной информации.-М.: НИИТЭХИМ, 1975.-с.63.

96. ПЗ.Милицкова Е.А. К вопросу стабилизации размеров гранул суспензионных полимеров

97. Пластические Maccbi.-1961.-N.8.-c.6-8.

98. Munzer М., Trommsdorff Е. Polymerizations in suspension // In : Polymer Processes. —New York.-p. 106-142.

99. Munzer M., Trommsdorff E. Polymerizatin in suspension // In : Polymer Processes.- New York.-p. 106-142.

100. Reinhardt H.I., Thiele R. Untersuchungin zur dishontinuirlichen suspensions polymerisations von styrol // Plaste b Kautsch.-1972.- Bd. 19.-N.9.-S.645-648.

101. Schulz Gr.V. Uber die polymerisation kinetik in hochkonzentrierten systemen. Zur kinetik des trommsdorffekter an methylmethacrylate // z. Physik. Chem.-1956.-Bd.8.-N.5-6.-s.290-317.

102. Суспензионная полимеризация метилметакрилата. Сб. обзорной информации. -М.: НИИТЭХИМ, 1975.-c.59.

103. Егоров В.В. Радикальная полимеризация поверхностно-активных мономеров. Авто реф.дисс. в форме научного доклада на соискание уч. степ, д.х.н. Москва, 1992.

104. Киселев Е.М. Полимерные материалы на основе гидропероксидного мономера 2-гидроперокси 2-метилгексен-5-ин-3 : Дисс. докт. хим. наук. -Львов., 1998.

105. Прокопов Н И. Синтез полимерных суспензий с узким распределением частиц по размерам методом гетерофазной полимеризации : Дисс. докт. хим. наук. -М., 1999.

106. К. Е. J. Barrett. Dispersion Polymerization in Organic Media// Wiley, London- 1975-456 p.

107. Ahmed S.F., Poehlein G.W. Kinetics of Dispersion Polymerization of Styrene in Ethanol .1. Model Development// INDUSTRIAL & ENGINEERING CHEMISTRY RESEARCH. -1997. -v.36. -Iss 7. -p.2597-2604.

108. Ahmed S.F., Poehlein G.W. Kinetics of Dispersion Polymerization of Styrene in Ethanol .2. Model Validation// INDUSTRIAL & ENGINEERING CHEMISTRY RESEARCH. -1997, -v.36. -Iss 7. -p.2605-2615.

109. Tseng C.M.,Lu Y.Y.,E1-Aasser M.S.,Vanderhoff J.W. Uniform polymer particles by dispersion polymerization in alkohol //J.Polym.Sci.,Polym. Chem.Ed.-1986.-v.24.-p.2995-3007.

110. Tuncel A., Kahraman R., Piskin E. Monosize Polystyrene Microbeads by Dispersion Polymerization//J. Appl. Polym. Sci. -1993. -v.50. -Iss 2. -p.303-319.

111. Dinnella C.,Doria M.,Laus M., Lanzarini G.Reversible Adsorption of Endopectin-Lyase to Tailor-Made Core-Shell Microspheres Prepared by Dispersion Polymerization//BIOTECHNOLOGY AND APPLIED BIOCHEMISTRY-1996-Vol.23-Iss.APR- pp. 133-140

112. Hosaka S., Murao Y., Tamaki H., Masuko S., Miura K., Kawabata Y. Monodisperse Microspheres of Copolymers of Glycidyl Methacrylate and Its Derivatives as Materials for Biomedical Application//Polym. Int.-1993.-v.30. -Iss 4. -p.505-511.

113. Сидельковская Ф.П. Химия N-винилпирролидона и его полимеров//М.:Наука-1970- 150с.

114. Громов В.Ф.Радикальная полимеризация водорастворимых мономеров// Дисс. докт.хим.наук- Москва, 1989- 317 с.

115. Карапутадзе Т.М. Поли- N-виниламиды медицинского назначения: синтез,физико-химические и биологические свойства и лекарственные препараты на их основе// Дисс. докт.хим. наук- Москва, 1990- 329с.

116. Кирш Ю.Э. Поли-Ы-винилпирролидон и другие поли-№виниламиды//М. :Наука -1998-252 с.

117. Okubo М., Shiozaki М. Production of Micron-Size Monodisperse Polymer Particles by Seeded Polymerization Utilizing Dynamic Swelling Method with Cooling Process// Polym. Int. -1993, -v.30.-Iss 4. -p.469-474.

118. Takahashi K.,Nagai K.Preparation of Reactive Polymeric Microspheres by Seeded Copolymerization Using a Polymerizable Surfactant Bearing an Active Ester Group//POLYMER-1996-Vol.37-Iss. 7-pp. 1257-1266

119. Елисеева В.И. Морфология и фазовая структура частиц, ее влияние на свойства латексов и пленок. Получение синтетических латексов, их модифицирование. // Москва, 1985, ЦНИИТЭ нефтехим,-с. 7.

120. Muroi S., Hosoi К., Hashimoto М. The Morphology of Core Shell Latex Particles. // j. Polym. Sci. : Polym. Chem. Ed.,-1984.-v.22.-N.6.-p. 1365-1372.

121. Muroi S., Hosoi К. Внутренная структура латексных частиц, полученных полимеризацией с двухстадийной нагрузкой мономера. // j. Chem. Soc. Jap. Chem. Ind. Chem.,-1984,- N.6.-p.954-958, РЖХ,-1985,1С-235.

122. Гаевой B.H. Эмульсионная полимеризация стирола и хлоропрена. // Дисс. канд. хим. наук., Москва.-1984.

123. Елисеева В.И., Шапиро Ю.Е., Титова Н.В., Буданов Н.А. О свойствах и микроструктуре композиционных латексных полимеров. // Высокомол. соед., -1989,-т.31 A.-N.2.-C.263-268.

124. Schlund В., Pith T.,Lambla М. Syntheses et caracte-ristiques structurelles de latex reactifs // Macromol.Chem.Suppl.- 1985.-N 10/1 l-p.419-433.

125. Method of protein coupling with latex beads: Brit. Pat. 2 004892, МКИ С 08 L 89/00, С 08 F 2/44 / Fisher Е.А.-за явл.25.03.1978,опубл. 12.11.1978.

126. Лукин Ю.В.,Грицкова И.А.,Праведников А.Н.,Бахарев В.И. Полиак ролеиновые латексы: синтез, введение наполнителей и механизм формирования//ДАН СССР.-1985.-T.285.-N 1.-с. 159-161.

127. Способ получения полиакролеиновых латексов: Ас. 1 565 845, МКИ С 08 F 116/34,2/22/ Бахарев В.Н.,Буряков А.Н.,Лукин Ю.В., Грицкова И.А.,Зубов В.П.-заявл. 14.8.1987,опубл.23.5.1990.

128. Способ получения полиакролеиновых латексов: А.с. 1 565 846, МКИ С 08 F 116/34,2/22/ Бахарев В.Н.,Буряков А.Н.,Лукин Ю.В.,Грицкова И.А.,Зубов В.П.,Клявинып М.К.,Роска А.С.,Зицманис А.Х.-заявл. 14.8.1987,опубл.23.5.1990.

129. Rembaum A., Chang М., Richards J., Li М. Synthesis and characterization hydrophilic microspheres//! Polym.Sci., Polym.Chem.Ed.-1984- Vol. 22-pp.609-619.

130. Margel S. Polyaldehyds microspheres as probes for cell membranes //J.Eng.Chem.Prod.Res.-1982.-v.21.-N 3.-p.343-348.

131. Дорохова E.A. Полимерные микросферы для реакции латекс-агглюти нации: Дис. . канд.хим.наук.-М., 1991.-108 с.

132. Bastosgonzalez D.,Hidalgoalvarez R.,Delasnieves F.J. Electrokinetic Behavior of Polystyrene Latexes with Different Surface Groups Effect of Heat-Treatment //J.OF COLLOID AND INTERFACE SCIENCE-1996-Vol.l77-Iss.2-pp.372-379

133. Ledissez C., Wong P.C., Mitchell K.A.R., Brooks D.E.Analysis of Surface Aldehyde Functions on Surfactant-Free Polystyrene/Polyacrolein Latex //MACROMOLECULES-1996-Vol.29-Iss.3-pp.953-959

134. Saito R., Ni X., Ichimura A., Ishizu K. Synthesis of core-shell type microsphere with reactive seed microspheres//J.of Applied Polymer Science-1999-Vol.69-Iss.2-pp.211-216

135. Changhong Y.,Zhang X.,Sun Z.,Kitano H.,Ise N. Poly(styren-co-acrolein) latex particles: copolymerization and characteristics // J.of Appl.Polym.Sci.-1990.-v.40.-p.89-98.

136. Tenoso H.J.,Smith D.B.Covalent bounding of antibodies to polysterene latex beads: concept//NASA Tech. Brief.-Washington, 1972-28 p.

137. Лукин Ю.В., Буряков А.Н., Егоров В.В., Туркин С.И., Зубов В.П., Грицкова И.А., Заиченко А.С., Воронов С.А., Пучин В.А. и Праведников А.Н. Способ получения магнитных латексов. А.с.СССР N1290690,-1986.

138. Подойницин С.Н., Бахарев В Н., Лукин Ю.В., Туркин С.И., Грицкова И. А., Зубов В.П., Буряков А.Н. Высокоградиентная магнитная сепарация клеток, меченных магнитными латексными частицами. 1. Осаждение меченых клеток. Биотехнология,-1989.-т.5,-с.371-375.

139. Norde W. Adsorption of proteins from solution at the solidiquid interface // Advan. Colloid and Interface Sci.-1986.-v.25.-N.4.-p.267-340.

140. Камышный А.Л. Адсорбция глобулярных белков на твердых носителях : некоторые физико-химические характеристики// ж. физ. химии.-1981.-т.55.-Вып.З.-с.562-580.

141. De Baillcu N., Voegel J.C., Sohmitt A. Adsorption of human albumin and fibrinogen onto heparin-like materials.l. Adsorption isoterms// Colloids and Surfaces.-1985.-v.l6.-p.271-288.

142. Norde W., Fraaye J.G., Lyklema J. Protein adsorption at solid-liquid interfacts : a colloid-chemical approach // AGC Symposium Series.-1987.N.343.-p.36-47.

143. Norde W., Mac Ritchie F., Nowicka G., Lyklema J. Protein adsorption at solid-liquid interfacts : reversibility and conformation aspects // j. Colloid and Interfaces Sci.-1986.-v. 112.N.2.-p.447-456.

144. Norde W., Lyklema J. The adsorption of human plasma albumin and bovine pancreas ribonoclease at negatively charged polystyrene surfaces //j. Colloid and Interfaces Sci.-1978.-v.66.N.2.-p.257-302.

145. Lyklema J., Norde W. Biopolymer adsorption with special reference to the serum albumin-polystyrene latex system// Croat. Chem. Actia.- 1973.-v.45.N.l.-p.67-84.

146. Fair B.D., Jamieson A.M. Studies protein adsorption on polystyrene latex surfaces // j. Colloid and Interfaces Sci.-1980.-v.77.N.2.-p.525-534.

147. Kawaguchi H., Amagasa H., Hagiya Т., Kimura N., Ohtsuka Y. Interaction between proteins and latex particles having different surface structures // Colloids and Surfaces.-1985.-v.l3.-p.295-311.

148. Грицкова И.А., Нусс П.В., Дорохова E.A., Гусев C.A., Крашенинникова И.Г., Аль-Хаварин Д.И. Адсорбция белков на полистирольных микросферах и постановка реакции латекс-агглютинации.//Коллоидный журн.,1994.-т.56.-К4.-с.491-495.

149. Грицкова И.А., Крашенинникова И.Г., Дорохова Е.А., Нусс П.В., Гусев С.А., Аль-Хаварин Д.И. . Адсорбция белков на поверхности частиц полистиролметакрилатных суспензий. // Коллоидный журн., 1994.-т.56.-N.4.-с.487-490.

150. Басырева Л.Ю. Создание диагностических тест-систем на основе полимерных суспензий и факторы, определяющие их чувствительность и специфичность : Дис. канд. хим. наук. -М,,1994.

151. Измайлова В.Н., Ямпольская Г.П.,Сумм Б.Д. Поверхностные явления в белковых системах.М. : Химия, 1988.

152. Bagchi P. Birnbaum S.M. Effect of рН on the adsorption of immunoglobulin G on anionic polyvinyltoluene model latex particles //j.Colloid arid Interface Sci.-1981.-v.83.-N.2.-p.460-478.

153. Kondo A., Kawanot Т., Higashitani K. Immunological agglutination Kinetics of Latex Particles with Covalently Immobilized antigens, //j. Ferment Bioeng. .-1992.-v.73.-N6,-p.435-439.

154. Kasuya Y., Fujimoto K., Miyamoto M., Jujit T.,Otala A. Preparation of Peptide-Carrying Microspheres with bioactivity on Platelets // j. Biomater Sei-Polym. Ed.-1993.-v.4.-N.4.-p. 369-3 80.

155. Yamada Т., Muzamatsu N.,Kondo T. Phagocytosis of monosac coharide-Binding latex particles by buinea-Pig polimor-phonuclear leucocytes // j. Biomater Su-Polym. Ed.-1993.-v.4.-N.4.-p.347-355.

156. Kondo A., Yamasaki R., Higashitani K. Affinity Purification of antibodies using immunomicrospheres //j. Ferment Bioeng. .-1992.-v.74.-N.4.-p.226-230.

157. Horak D.Uniform Polymer Beads of Micrometer Size//ACTA POLYMERICA-1996-Vol.47-lss. 1 -pp.20-28

158. Kumar D., Butler G.B.Methods of Formation of Organic Particles of Controlled Sizes//J.OF MACROMOLECULAR SCIENCE-REVIEWS IN MACROMOLECULAR CHEMISTRY AND PHYSICS-1997-Vol. C3 7-Iss.2-pp.3 03 -333

159. Sakota K.,Okaya T.Polymerization behavior of carboxylic monomers in the preparation of carboxylated latexes //J.Appl.Polym.Sci.-1976.-N 20.-p.2583-2587.

160. Zaborsky O. Immobilized enzymes.-Cleveland: CRS Press,1978. -230c.

161. Latex polymter reagent for diagnostics tests: US Pat. 3 857931,, MKM D 08 N 32/00 / Hager HJ.-заявл.21.5.1974, опубл.11.10.1974.

162. Kjellqvist К. Reactive Acid Curing Waterborne Microparticles// Prog.in org. coatings.-1994-Vol 24-Iss 1-4-pp 209-223,

163. Аффинная хроматография: методы / под ред. Дина П.Джонсона У., Мидла Р.: пер.с англ.-М. Мир, 1988.-278с.

164. Kitano H.,Sun Z.-H.,Ise N. Functionalized polymer latices. 2.Catalitic effects of imidazole-containing latices on hydrolyses of phenyl esters // Macromol.-1983.-v.16. -p.1306-1310.

165. Овчинников Ю.А.Биоорганическая химия.-М.:Просвещение, 1987.-815с. 198Johansen L.,Nustad K.,Orstavik T.B.,Ugelstad J.,Berge A.,EllengsenT. The new latex agglutination test kit for immunological assay//J.Immunol.Methods.-1983.-N59,-p.255 -264.

166. Wagner Т.,Hsu C.J.,Kelleher G. The preparation of immunomicrospheres for enzyme immobilization // Biochem.J.-1968.-v.l08.~p.892-898.

167. Patel R.P.,Price S. The preparation of latex particles for covalent bounding of biochemicals/ZBiopolymers. -1967. -v. 5. -p. 5 83 -5 87.

168. Sundaram P.V. Protein carrying latices for immunoserological research // Biochem.Biophys.Res.Commun.-1974.-v.61.-N 2,- p.667-672.

169. Cuatrecasas P. Using of hydroxyl-containing latex particles for IgG bounding // J.Biol.Chem.-1970.-v.245.-p.3059-3063.

170. Nilsson K.,Mosbach K. Hydroxyl-containing latices: using for proteins immobilization // Eur.J.Biochem.-1980.-v.l2.- p.397-402r

171. NilssonK.,Mosbach K. Preparation of hydroxyl-containing polymer particles and their using for enzyme fixation//Biochem. Biophis.Res.Commun.-1981.-v. 102.-p.449-457.

172. Nustad K.,Johansen L.,Schmid R.,Ugelstad J.,Ellingsen T.,Berge A. Preparation of polymer latex particles carriers of a biochemicals and enzymes // A. Agents Actions Suppl.-1982.-v.9.-p.207-212.

173. Bethell G.S.,Ayers J.S.,Hancock W.S.,Hearn M.T.W. Using of imydazole derivatives for covalent coupling of antibody onto polymer particles surface // J.Biol.Chem.-1979.-v.254.-p.2572- 2574.

174. Pichot C. Latex structures et functionnalises // Bulletin de la Societe Chimique de france.-1987.-N4.-p.725-733.

175. Бакеева И.В.,Грицкова И.А,,Басырева Л.Ю.,Повалий Т.М. Синтез полистирольных латексов в присутствии углеводов в качестве поверхностно-активных веществ // VIII Всесоюзная научно-техни ческая конференция "Латекс-90":Тез.докл.-М., 1991.-с.20.

176. Препаративная органическая химия /под ред. Вульфсона Н.С.: пер.с польск,-М.:Химическая литература, 1959.-888 с.

177. Bulmus V., Ayhan Н, Piskin E.Modified PMMA Monosize Microbeads for Glucose-Gxidase Immobilization//CHEMICAL ENGINEERING JOURNAL-1997-Vol.65-Iss.l-pp.71-76

178. Вейганд-Хильгетаг. Методы эксперимента в органической химииЛер.с нем,-М.:Химия, 1968.-944 с,

179. Kawaguchi H.,Hochino H.,Ohtsuka Y. The reactional polymer latexes preparation // J.Appl.Polym.Sci.-1981.-v.26.-p.2015-2019.

180. Tanaka H. Hoffman reaction of polyacrylamide.relationship between reaction conditionand degree of polymerization of polyvinylamine // J.Polym.Sci.,Polym.Chem.Ed:-1979.-v. 17,-N4.-p. 1239-1247.

181. Kawaguchi H.,Hochino H.,Amagasa H.,Ohtsuka Y. Modification of polymer latex // J.Coll.and Intrface Sci.-1984.-v.97.-N 2.-p.465-475.

182. Stenberger L. Electron microscopy of enzymes: principles and methods.-N.Y., 1973.-250 p.

183. Richards F.,Kuowles J. The studies of the reaction between glutaraldehyde and a protein molecules //J.Mol.Biol.-1968.-v.37.-p,231-235.

184. Davis S.D., Ilium L. Polymeric microspheres as drug carriers // Biomaterials.-1988.-v.9.-p.111-115.

185. Yen S.P.S.,Rembaum A.,Molday R.W.,Dreyer W. Polymer particles for immunological assay // In: Emulsion polymerization: ACS Sumposium Series.-ACS, Washington.-1976,-p.236-257.

186. Otto H.,TakamiyaH.,Vogt A. Methods of protein fixation // J.Immun.Methods.-1973.-v.3.-p. 137-142.224.1nman J.K.,Dintzis H.M. Methods of protein fixation // Biochemistry.-1969.-v.8.- p.4074-4082.

187. Margel S. Characterization and chemistry of polyaldehyde microspheres// J.of Polym.Sci.,Polym.Chem.Ed.-1984.-v.22.-p.3521-3533.

188. Margel S.,Rembaum A. Synthesis and characterization of poly(glutaraldehyde),a potential reagent for protein immobilization and cell separation //Macromol.-1980.-N13-p. 19-24.

189. The method for preparation of functional polymer latices and their using for immunological assay: US Pat. 4 060 597, МКИ С 08 F 116/34, 2/22, L 89/00 / Sato Y., Weda 8.-заявл.9.03.1977, опубл. 14.11.\911.

190. Latex agglutination test kit and method of their preparation:US Pat. 4 226 747,. МКИ G 01 N 33/546, С 08 F 12/08 / Roncary G. заявл.30.01.1980, опубл. 17.10.1980.

191. Suen C.H.,MoravetzH. Reactive latex studies. I.Kinetics of reactions of poly(vinilbenzylchloride) latex with water- soluble dyes // Macromol.-1984,-N 17.-p.l800-1803.

192. Upson D.A. Reactive functional latex polymers // J.of Polym.Sci.,Polym.Symposium.-1985.-N 72.-p.45-54.

193. Kitano H.,Yan C.,Maeda Y.,Ise N. Covalent bounding of bioligands onto polymer latices: a direct and undirect methods //Biopolymers.-1989.-v.28- p.693-699.

194. Федтке M. Химические реакции полимеров: пер.с нем.-М.:Химия,1990.-152 с.

195. Gopalan R.,Subbarayan К. Kinetics and mechanism of oxidation of benzyl chloride by chromatic acid // J.Ind.Chem.Soc.-1979.-v.56.- N 7,- p.669-672.

196. Ferrabochi P.,Azandi M.N.,Santaniella E.,Trave S. Preparation of aldehyde containing latex particles by oxydation of chloromethyl-containing latices // Synth. Commun. -1986,-v. 16,-p.43-45.

197. Ganju L. et. al. A rapid latex agglutination test for detection of antibodies in tuberculosis and hansen's disease // J. Immunoassay -1991.-v,12.-iss.4.-p.579-596.

198. Mongkolsirichaikul D. et. al. Development of a latex agglutination inhibition reaction test for amphetamines in urine // j. Immonol. Methods. -1993 .-v.157.-Nl-2.-p.189-196.

199. Zuerlein T.G. et. al. Latex agglutination detection of group В step tococcal inoculum in urine // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. -1991.-v. 14.-iss.3.-p. 191-195.

200. Ефремова Н.Б. Разработка на основе полимерных микросфер диагностического набора для оценки резервной фагоцитарной активности. Дисс. канд. биол. наук. М. 1995

201. Златопольский А.Д., Мазуров В.И. Строение фибронектинов: сходство и различие. // Вопросы мед. химии,- 1985,- Т. 31.-№ 6,- с. 2-14.

202. Любимов А.В., Глейберман А.С. Поверхностные белки клеток и их изменения при нормальном развитии и опухолевом росте // в "Явления индукции и дифференцировкипри опухолевом росте",- М.: Наука, 1981. с.171-258.

203. Титов В.Н., Сапфирова В.М. Фибронектин крови : биологическая и диагностическая значимость. Обзор// Тер. архив,- 1984.-Т.56. с. 147-149.

204. Mcdonagh J. Plasma fibronektin. Strukture and function //Hematology.- N.Y., 1985. v. 5,-p. 1-4.

205. Yamada K., Olden K. Fibronektins- adhesive glycoproteins of cell surfase and blood // Nature.- 1978,-v.275.-p. 179-184.

206. Mosseson M., Amrani D. The strukture and biological aktiveties of plasma fibronektin // Blood.-1980.-v.56.-p. 145-158.

207. Clark R., DellePella P., Manseau E. Blood vessel fibronektin increases in conjunction with endothelial cell proliferation and capillary ingrowith during wound healing // J. Invest. Dermat.-1982.-v. 79.-p.269-276.

208. Mosseson M., Amrani D. Interactions with glicosaminoglicans // in "Plasma Fibronektin. Structure and function". Hematology.- N.Y., 1985.-v.5.-p.77-98.

209. Hormann H. Iteraction with fibrinogen and fibrin // in "Plasma fibronektin. Strukture and funktion". Hematology.-N.Y., 1985,-v.5.-p. 99-120.

210. Keski- Oja J., Yamada K.M. Isolation of an actin-binding fragment of fibronektin // Biochem. J.-1981,-v.-193,-p. 615-620.

211. Pande H., Shvely J. NH2 -terminal seguences of DNA-, heparin- and gelatin binding tryptic fragments from human plasma fibronectin // Arch. Biochem. Biophys.-1982.- v.213.- p. 258-265.

212. Pierschbacher M., Ruoslahti E., Sundelin J. The cell attachment domein of fibronektin. Determination of the primary strukture // J. Biol. Chem.- 1982,- v. 257,- p. 9593-9597.

213. Deitch E. A., Gelder F., McDonald J.C. Sequential prospective analisis of nonspecific host defense system aftertherminal injury // Arch. Surg-1984.- v. 119,- p. 83-89.

214. Mosher D., Williams E. Fibronektin concentracion is decreased in plasma of severely ill patiens with disseminated intravascular coagulation // J. Lab. Clin. Med.- 1978,- v.91,-p. 729-735.

215. Sab Т., Scovill W., Power S. Human host defense mechanism as they relate tu surgery and trauma // Surg. Ann.-1975.- v. 12,- p. 1-20.

216. Scovill W., Saba Т., Blumenstock F. Opsonic surfase binding glycoprotein therapy during sepsis // Ann. Surg.- 1978.- v. 188,- p.521-529.

217. Будагов PC., Конов А.В., Петров B.H. Изменение уровня сывороточного фибронектина и состояние ретикулоэндотелиальной системы при ожогах и радиационо-термических поражениях//Пат. физиол. эксп. тер,- 1985,-1 2,- с. 27-29.

218. VanDeWater L. Phagocytosis // in "Plasma fibronektin. Strukture and function". Hematology.-N.Y., 1985,-v.5.-p. 175-196.

219. Pearlstein E. Substrate activation of cell adhesion factor as a prerequisite for cell attachment // Int. J. Cancer.- 1978,- v.22.- p. 32-35.

220. Rocco M., Carson M., Hantgan R. Dependense of the shape of the plasma fibronektin molecule on solvent composition : ionic strength and glycerol content // J. Biol. Chem.-1983,-v.258.- p. 14545-14549.

221. Мазуров В.И. Биохимия коллагеновых белков. М.: Химия, 1974.

222. Вейс А. Макромолекулярная химия желатина. М.: Пищепромиздат, 1971.

223. NagarajanR. // Colloid. Surf. 1985. V. 13. P. 1.

224. Narath A., Gindlach D. // Photogr. Korresp. 1969. V. 105. 11. P. 53.

225. Nordwig A., Horman H., Kuhn K. et al.// Z. Phys. Chem. 1961. V.325.№ 2. P.242.

226. Вюстнек P., Цастров JI., Кречмар Г.//Коллоид, журн. 1987. Т.49.1 1. с. 10.

227. Wustnek R., Kragel J.// Studies Interface Science / Eds Mebius D., Miller R. Amsterdam: Elsevier, 1998. V.7. P.433.

228. Измайлова B.H., Ребиндер П.А. Структурообразование в белковых системах. М.: Химия, 1974.

229. Бусол Т.Ф., Письменная Г.М., Жиглецова С.К., Тарасевич Б.Н., Измайлова В.Н. Адсорбция желатины на жидких границах раздела фаз. // Коллоидн. журн. 1979. Т. 41. № 6. С. 1055-1060.

230. Бусол Т.Ф. Исследование межфазных адсорбционных слоев желатины методом спектроскопии внутреннего отражения. // Дисс. канд. хим. наук. М. 1980.

231. Измайлова В.Н., Тарасевич Б.Н., Бусол Т.Ф., Письменная Г.М. К определению межфазных адсорбционных слоев желатины методом МНПВО. // Коллоидн. журн. 1977. Т.39. 5. С. 958-960.

232. Bernstein F.C., Kaetzle T.F. ed al.// J. Mol. Biol. 1977. V. 112. P.535.

233. Sayle R. // Molecular Grafics Visualisation Tool, RasMol. 2.1.2.В. UK: University Edinburgh, 1991.

234. Измайлова В.Н. Ямпольская Г.П., Сумм Б.Д. Поверхностные явления в белковых системах. М.: Химия, 1988 с. 240.

235. Алентьев А.Ю., Измайлова В.Н., Ямполльская Г.П. // Коллоид, журн. 1991. Т. 53. № 4. с. 609.

236. Левачев С.М., Измайлова В.Н.//Коллоид, журн. 1994. Т.56. № 2. с. 193.

237. Ребиндер П. А. Поверхностные явления в дисперсных системах. Коллоидная химия. // Избр. тр. М.: Наука, 1978. Т.1.

238. Измайлова В Н., Ямпольская Г.П., Туловская З.Д. // Коллоид, журн. 1998. Т.60. № 5. с. 598.

239. Кульман Р.А. О новом пути экспериментального исследования десорбции ПАВ с жидких границ раздела фаз. // Докл. АН СССР. 1965. Т. 162. С. 1095-1097.

240. Frisch Н., Simha R. Statistical mechanics of Flexible High Polymers at Surfaces. // J. Chem. Phys. 1957. V.27. 13. P. 702-706.

241. Пчелин В. А. Поверхностные свойства белковых веществ. М.: Гизлегпром. 1951. с.200

242. Adams D.J., Evans М.А., Mitchell J.R., Phillips M.С., Roes P.M. Adsorption of lysozime and some acelyl derivatives at the air-water interface. //J. Polym. Sci. 1971. Part C. P. 167-179.

243. Wustneck R. An experimental study of the surface rheology of adsorbed protein layers. // Colloid and Polymer Sci. 1984. V. 262. P. 821-826.

244. Исследование структуры двойного электрического слоя полистйрольных латексов / А.А. Баран, Л.М.Дудкина, Н.М. Соболева, О.С.Чечик Коллоид, журн., 1981,43.,N2, с.211-219.

245. Измайлова В.Н., Ребиндер П.А. Структурообразование в белковых системах,- М.: Наука, 1974.-262с.

246. Адсорбция желатины на жидких границах раздела фаз / Т.Ф. Бусол, Г.М. Письменная, С.К. Жиглецова и др. Коллоид, журн., 1979,41.,N6,c.l055-1060.

247. Баран А.А. Электроповерхностные явления и устойчивость полимерсодержащих дисперсных систем : Автореф. дис. .д-ра хим. наук.-Л.,1980.-44с.

248. К. Abe Vaynberg, Norman J. Wagner, and Ravi Sharma . Polyampholyte Gelatin Adsorption to Colloidal Latex : pH and Elektrolyte Effects on Acrylic and Polystyrene Latices. // Biomacromolecules 2000,1, 466-472.

249. Kawanishi, N.; Christenson, H. K.;Ninham, B.W. J. Phjs. Chem 1990, 94, 4611-4617.

250. Vajnberg, K. A.; Wagner, N.J.; Sharma, R.; Martic, P. JCIS 1998, 205,131-140.

251. Прокопов Н.И.,Грицкова И. А., Хейман Г.П., ЧирковаМ.В.// Коллоидн. ж. 1995,T.57,N4,c.526-530.

252. Прокопов Н.И.,Грицкова И.А.,Черкасов В.Р., Чалых А.Е.// Успехи химии.1996;т. 65, N2, с. 178-192.

253. Maryann B.,Elnarson and John С. Berg// Journ of Colloid and Interface Sci. 1993,v. 155,p. 163-172 (Electrosteric Stabilization of Colloidal Latex Dispersions).

254. Virgen J.W., and Berg J.C.// Journ of Colloid and Interface Sci.l992,v.l49,p.528.

255. ЬСапустина А. А. Полимеризация стирола в отсутствие эмульгатора без перемешивания. Автореферат к.х.н.,М. 1999.

256. Екель Jackel К., Kolloid -Z. Z Polymere, 1964,197, р.143.

257. Kondo A.,Kawano Т., ItohF., Higashitani К //1. Immunol. Methods. 1990. v. 135. p. 111.

258. Прокопов Н.И., Грицкова И.А., Черкасов B.P., Чалых А.Е. // Успехи химии. 1996. Т. 65, №2. с. 178.

259. Peula J.M. Hidalgo-Alverez R., de las Nivest F.J. // J. of Colloid and Interface Sei, 1998. v. 201. №>2, p. 139.

260. Н.В.Яшина "Иммунохимические реагенты на основе окрашеных микросфер иолистирольиого латекса". Автореферат. Москва 1997г.

261. Wasserman R.L., Capra J.D. Immunoglobulins. In: The Glycoconjugates, edited by M.I. Horowitz and W. Pigman, pp. 323-348, Academic Press, New York (1977).

262. Hilschmann N, Craig L.C. Amino acid sequence studies with Bence Jones proteins, Proc. Natl. .Acad. Sci. USA 53, 1403-1409(1965).

263. Natvig J.B., Kunkel H.G. Human immunoglobulins: Classes, subclasses, genetic variants, and idiotypes, Adv. Immunol., 16, 1-59 (1973).

264. Porter R.R. The hydrolysis of rabbit y-globulin and antibodies wi,th crystalline papain, Biochem. J., 73,119-126 (1959).

265. Silverton E.W., Novia M.A., Davies D.R. Three-dimensional structure of an intact human immunoglobulin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 5140-5144 (1977).

266. Movitz J. The. biosynthesis of protein A.- In: Staphylococci a. Staph. Dis./Ed. J. Jeljaszewicz.- Stuttgart: Fisher, 1976, p.427-437.

267. Forsgren А. и Nordstr6m. Protein A, from Staphylococcus aureus: the biological significance of its reaction with IgG.- Ann.N.Y. Acad,. Sci.,. 1974, vol ,236,. p. 252-265.

268. Тарханова И.А., Сычева И.М., Толовская K.P. и др. Сравнительный анализ взаемодействия белка А из Staphylococcus aureus с нативным, востановленным и аггрегированным IgG .-ЖМЭИ, 1979, N6, с.27-31.

269. Grov A. Human colostral IgA interacting with Staphylococci protein A .- Acta path, microbiol. scand., Sect. C., 1976, vol. 84, p.71-72:

270. Lind I. The interaction between staphylococci protein A and IgM. In: Staphylococcia. Staph. Dis./Ed. J. Jeljaszewicz.- Stuttgart: Fisher, 1976.

271. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. // Санкт- Петербург, 1998,- с. 427-430.

272. Bizzini В. The specifity and action of animal, bacterial plant toxins. Receptor and recognetion. // Sev. В.- V.l, №> 9,-L: Chapman and Hall.- 1976,- 177 p.

273. Bizzini В., Blass J., Raynaud M. Etude suv le mecanisme de la detoxification des toxines proteiques par le fovmol. II. Fixation quantitative du fovmol 14C .// Ann. Inst. Pastur (Paris).-1969,-V. 116.-P. 501-521.

274. Chin W., Rankert D., Cumming M.A., Robinson J.P. Characterization of crystalline filtrate tetanus toxin. // J. Ultrastruct. Res.- 1982.-V. 79., N2 3. p. 285-293.

275. Robinson J.P., Hollyday U.A., Pcklesimer J.B., Puett D. Tetanus toxin conformation. // Mol. Cell. Biocherm.-1974.-v. 5., № 3.- p. 147-151.

276. Ю.В.Лукин. Труды МХТИ-1985-Вып.135.-с.88-92.

277. Измайлова В.Н., Ямпольская Т.П., Туовская З.Д. // Коллоидн. Ж. 1998, т. 60, №5. с. 598.

278. В.Н.Измайлова, П.А.Ребиндер. Структурообразование в белковых системах. Издательство " НАУКА" Москва 1974.

279. Меншова А.Ю., Дмитриева И.Б., Кучук В.И., Скуркис Ю.О., Евсеева Т.Г., Шабельс Б.М. //Коллоидн. ж. 1999, т. 61, №6. с. 799.

280. АМ.Королюк, В.Б.Сбойчаков. Медицинская микробиология.-Учебное пособие. Санкт-Петербург 1999г.

281. МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ1. ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ

282. ВСЕРОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ КОНТРОЛЯ, СТАНДАРТИЗАЦИИ И СЕРТИФИКАЦИИ ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ (ВГНКИ)123022, Москва, Д-22 Звенигородское шоссе,5 Тел.: 253-14-910Г./0.Я? №Jна№ б/н от 02.10.01 г.

283. Зам. декана медицинского факультета Российского Университета Дружбы Народов Далину М.В.117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая,8

284. Наборы были проверены ш показателям специфичности и чувствительности.

285. Результаты испытаний антигенного варианта латексного диагностического набора представлены в таблице 1.1. Табл.1

286. Пробы Титр вируса в lg ЭИД50 Результат PHJIA

287. ЭЭЖ, содержащая вирус ИБК 7,0 Положительная реакция — 1 о в разведениях 10" и 10"

288. ЭЭЖ, содержащая вирус НБ 9,0 Отр.3. Нормальная ЭЭЖ Отр. Отр.

289. Латексный антиген не взаимодействовал с гетерологичным вирусом НБ и нормальной аллантоисной жидкостью, что свидетельствовало о его специфичности.

290. Результаты испытаний аншгельного варианта латексного диагностиче ского набора представлены в таблице 2.

291. Сыворотки Результат РНЛА с антительньм вариантом латексного диагностикума ИБК1 SS ЮУ (KPL) 1:2002 SS ШУ (ГОЕХХ) 1:8003 SS ЕВУ (BioChek) 1:8004 SS NDV (KPL) 1:16005 SS M.g. (KPL) 1:16006 SS Reo (KPL) 1:16007 SN (KPL) 1:64008 SN ■ 1:6400

292. Вариант латексного диагностического набора для выявления антител к вирусу инфекционного бронхита кур является не специфичным и подлежит дальнейшей доработке.

293. Замдиректора ВГНКИ по научной работе, профес»1. Исп.: с.н.с. Руденко Т.В.иллов1. Size Reportzhelatin 60 st С Pmple Systemord Number: 38 Instrument Type: ZetaSizerlame: Live size Temperature (°C): 25.2

294. Path: Count rate (kCps): 21.9lpleRI: 0.00, Abs:0.00 Cell Type: ZET5110

295. Detector Angle (deg.): 90.00lersant Rl: 1.33