Показатели окислительного стресса при ожоговой травме

Михальчик, Елена Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Показатели окислительного стресса при ожоговой травме
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Показатели окислительного стресса при ожоговой травме"

На правах рукописи

Михальчик Елена Владимировна

ПОКАЗАТЕЛИ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА ПРИ ОЖОГОВОЙ ТРАВМЕ

03.00.04-Биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

МОСКВА - 2006

Работа выполнена в отделе молекулярной биологии

Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Росздрава Российский государственный медицинский университет.

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Коркнна Людмила Георгиевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Чернов Николай Николаевич доктор биологических наук Теселкин Юрий Олегович доктор биологических наук Панасенко Олег Михайлович

Ведущая организация:

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова

на заседании диссертационного совета Д212.203.13 при Российском университете дружбы народов (117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.б).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО Российский университет дружбы народов.

Автореферат разослан « /3 » 2006 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор фармацевтических наук,

Защита диссертации состоится «/У» 2006 года

доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Высокий риск осложнений при тяжелых ожоговых травмах в настоящее время все чаще связывают с развитием у пострадавших синдрома системного воспалительного ответа [Sheridan R.L., 1998; Самойленко Г.Е., 2000; Шанин Ю.Н., 2003]. Термическая травма вызывает выброс цитокинов и простагландинов, в результате чего усиливается взаимодействие между лейкоцитами, тромбоцитами и клетками эндотелия. Активация лейкоцитов, в первую очередь полиморфно-ядерных (ПМЯЛ), ведет к увеличению образования активных форм кислорода (АФК) и азота, что в сочетании с повышенной адгезией ПМЯЛ к эндотелию создает угрозу окислительного повреждения собственных органов и тканей [Horton J.W., 2003; Roth Е., 2004]. С другой стороны, резкое снижение радикап-продуцирующей активности ПМЯЛ может способствовать развитию сепсиса [Саркисов Д.С., 1987]. В норме повышенная продукция АФК компенсируется активацией защитных антиоксидантных ферментов (супероксид дисмутазы, каталазы, глутатион пероксидазы и др.). Дисбаланс между активностью радикал-продуцирующей и антиоксидантной систем приводит к избытку свободных радикалов, которые играют роль циркулирующих «патологических сигналов», и лежит в основе поражения легких и других внутренних органов [Величковский Б.Т., 2000; Chen L.W., 2003].

Внедрение в клиническую практику ранней некрэктомии (удаление ожогового струпа на 2-6 сутки после травмы) позволило улучшить результаты лечения обожженных и снизить риск гнойно-септических осложнений [Алексеев A.A., 2003]. Однако любая операция может повлечь за собой усиление продукции радикалов лейкоцитами как следствие хирургического стресса [Isozaku Н., 1999]. В настоящее время клиническими и экспериментальными исследованиями подтверждается теория «второго удара», которая заключается в том, что предактивированные вследствие травмы ПМЯЛ отвечают на последующее агрессивное воздействие (операция, инфекция) намного сильнее, чем в норме. Поэтому необходима количественная оценка эффектов операций и бактериальной эндотоксемии, способных играть роль «второго удара» при ожогах. На наш взгляд, перспективным методом для таких исследований является клеточная хемилюминесценция крови.

Не менее важную проблему представляет развитие окислительного стресса в ожоговой ране и близлежащих участках кожи. Первичным источником цитокинов и провоспалительных медиаторов при ожогах . является зона повреждения,

характеризующаяся усиленной миграцией нейтрофилов [Baskaran H., 2000]. Они очищают область повреждения кожи от продуктов термического распада биомолекул и бактерий при участии АФК. Их азуроф ильные гранулы содержат фермент миелопероксидазу, который катализирует превращение пероксида водорода в пшохлорит, и рассматривается как маркер миграции нейтрофилов в ткань [Trush M.А. ,1994; Xia Y.,1997; Basksian H., 2000]. Избыток АФК способствует развитию некроза в зоне ожога [Porto da Rocha Я., 2002] и повышает уровень липидной пероксидации в кожном лоскуте при пересадках [Goldstein R.K, 1992]. Пероксид водорода снижает жизнеспособность фибробластов и кератиноцитов [Thang Р.Т., 2001], а индукция антиоксидантных ферментов позволяет им адаптироваться к повышенному уровню образования АФК в ране и на ее краях для того, чтобы активно пролиферировать и дифференцироваться [Steiling H., 1999]. Однако в зоне ожога антиоксидантные ферменты быстро инактивируются [Кораб В., 2003; Naziroglu M., 2003].

Заживление раны зависит не только от ситуации в очаге повреждения, но и от состояния кожи на краю раны [Troshev К., 1990]. Сегодня очень мало известно о характере изменений в близлежащих неповрежденных участках кожи, хотя выявленное в эксперименте угнетение лактатдегидрогеназы свидетельствует о глубоких метаболических сдвигах в коже при ожогах [Заец Т.Л., 1977]. Это направление исследований представляет научный и практический интерес, поскольку ведет к пониманию механизмов ранозаживления и приживления аутотрансплантатов при тяжелых ожогах.

Таким образом, оценка и коррекция генерализованных и местных сдвигов в равновесии про- и антиоксидантных реакций может рассматриваться как важная составляющая в лечении ожогов, в том числе и хирургическом. Медицина не располагает средствами, способными предотвратить развитие системного воспалительного ответа и полиорганной недостаточности у пациентов с критическими ожогами, и многочисленные экспериментальные исследования направлены на поиск путей защиты органов (антицитокиновые препараты, антиадгезивные препараты). Перспективным представляется использование в этих целях комплексных антиоксидантных препаратов. Одновременно необходимо развивать методы оценки эффективности применения антиоксидантов, пригодные для клинических лабораторий [Шанин Ю.Н., 2003].

антиоксидантных систем крови, что связано главным образом с методическими сложностями и недостаточной проработанностью теоретической базы, отражающей роль АФК в патогенезе ожоговой болезни. Поэтому необходим анализ возможности использования таких методов для мониторинга про- и антиоксидантных сдвигов в крови детей с ожогами. " ■ ;

ЦЕЛЬ РАБОТЫ:

изучить комплекс нарушений системы антиоксидантной защиты крови и кожи при ожоговой травме, а также обосновать и апробировать метод клеточной хемилюминесценции цельной крови для мониторинга состояния детей с ожоговой болезнью.

ЗАДАЧИ:

1. Провести комплексное изучение развития окислительного стресса у пациентов с ожогами разной степени тяжести в динамике с целью выбора наиболее информативного показателя.

2. Обосновать применение и апробировать метод хемилюминесценции цельной крови для оценки тяжести состояния пациентов с ожогами и ожоговой болезнью, в том числе, и на фоне хирургического лечения.

3. В экспериментальной модели ожога у крыс оценить баланс про- и антиоксидантных систем крови и кожи и влияние на него хирургической некрэктомии и эндотоксемии.

4. В экспериментальной модели ожога у крыс оценить миграцию нейтрофилов в ткань легких (по активности тканевой миелопероксидазы) и влияние эндотоксемии на этот процесс.

5. Показать системное защитное действие комплекса экзогенных антиоксидантов при ожогах и послеожоговой эндотоксемии.

6. Оценить местное ранозаживляющее действие фитопрепарата на основе ферментированной папайи, обладающего антиоксидантной активностью.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА Впервые проведена оценка хемилюминесцентной активности изолированных нейтрофилов и цельной крови у детей с ожоговой травмой. Показано изменение активности нейтрофилов в зависимости от стадии заболевания и его тяжести, в том числе, и от развития органных поражений.

Впервые выявлено активирующее воздействие хирургической некрэктомии на хемилюминесцеяцию крови, регистрируемое уже в конце операции и возрастающее на 3-й сутки после операции.

Обнаружено стойкое снижение антиокислительной активности и железо-связывающей способности плазмы у пациентов с критическими ожогами, свидетельствующее о дефиците как белковых, так и низкомолекулярных антиоксидантов.

В экспериментальной модели термического ожога у крыс подтверждено повышение хемилюминесценции крови в ответ на ожог и хирургическую травму кожи, выявлен подъем хемилюминесценции через 24 часа после введения животным бактериального липополисахарида, показано усиление активности тканевой миелопероксидазы в легких животных под действием ожога и сопутствующей эндотоксемии.

Впервые изучено влияние ожога и эндотоксемии на баланс активности антиоксидантных ферментов и миелопероксидазы в коже вне зоны ожога. Показано, что кожа обладает способностью адаптироваться к местной воспалительной реакции за счет увеличения активности ферментов, в первую очередь, глутатион-пероксидазы и глутатион-Б-трансферазы. При этом в зоне ожога на 1-е сутки выявлена резкая инактивация антиоксидантных ферментов с последующим некрозом кожи к 4-м суткам.

Показано защитное действие антиоксидантного комплексного препарата на основе витаминов и аминокислот: в коже - нормализация активности защитных ферментов; в крови -снижение хемилюминесценции на пике воспаления и предотвращение снижения антиокислительной активности плазмы; в ткани легких - предотвращение роста активности миелопероксидазы как показателя местной воспалительной реакции.

Впервые показано местное ранозаживляющее действие препарата на основе ферментированной папайи.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ

Результаты изучения динамики показателей активности про- и антиоксидантных систем крови детей с ожогами имеют как общее медико-биологическое, так и клиническое значение для понимания патогенеза ожоговой болезни и направленного поиска адекватных антиоксидантных препаратов.

выделения нейтрофилов и может использоваться как экспресс-метод, в том числе и для определения изменения активности крови в ходе хирургических операций.

Проведенные клиническое и экспериментальное исследования изменения антиоксидантного статуса тканей при ожогах свидетельствуют о необходимости системного и местного применения антиоксидантных препаратов в острый период ожоговой болезни и при проведении хирургического лечения детей с ожогами. Показано защитное действие комплекса экзогенных антиоксидантов при системном применении и фитопрепарата с антиоксидантной активностью при местном применении.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Глубокие ожоги кожи вызывают системный воспалительный ответ, сопровождающийся ростом активности циркулирующих нейтрофилов. Хемилюминесценция крови адекватно отражает степень активации нейтрофилов. Она зависит от площади глубокого ожога, сроков с момента травмы, тяжести органных поражений и проведения хирургических операций.

2. Ожоговая травма вызывает миграцию нейтрофилов не только в зону ожога, но и в кожу вблизи зоны повреждения, а также в легкие. Миграция нейтрофилов сопровождается изменением антиоксидантных ферментов кожи: в зоне повреждения происходит стойкое снижение активности защитных ферментов, а вне зоны повреждения - постепенное повышение активности глутатион-пероксидазы и глутатион-8-трансферазы.

3. Эндотоксемия усиливает вызываемый ожоговой травмой окислительный стресс, миграцию нейтрофилов в кожные покровы и в легкие.

4. Комплекс экзогенных антиоксидантов снижает интенсивность хемилюминесценции крови на пике послеожогового воспаления, уменьшает степень угнетения антиоксидантной активности плазмы, предотвращает рост активности миелопероксидазы в легких, в том числе при ожогах, осложненных эвдотоксемией.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Основные положения работы доложены и обсуждены на Национальной научно-практической конференции с международным участием «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека» (Смоленск, 2001), международном симпозиуме «Активные формы кислорода и оксид азота: диагностическое, профилактическое и терапевтическое значение» (СПб - Кижи, 2002); 1-м Конгрессе национального общества детских дерматологов Италии (Рим, 2003); 2-ом Российском конгрессе "Современные технологии в педиатрии и детской хирургии" (Москва, 2003); Всероссийской

конференции "Актуальные вопросы хирургии детского возраста" (Москва, 2004); научной конференции "Фундаментальные и прикладные проблемы экологии человека" (Москва,

2004); 1-ой международной конференции "Кожа и окружающая среда" (Москва-СПб,

2005); б-м международном конгрессе Европейской Ассоциации детских хирургов (ЕиРЭА, Гданьск, 2005).

По теме диссертации опубликовано 32 научных работы.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на страницах; иллюстрирована _схемами и

рисунками, и таблицами. Состоит из введения, обзора литературы,

описания объектов наблюдения и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, а также библиографического указателя, включающего источника.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Работа выполнена в период с 1994 г. по 2005 г. на базе отдела молекулярной биологии ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет.

Объекты и методы исследования Клинические методы исследования Материалом для исследования служила кровь детей с термической травмой, находившихся на лечении в ДГКБ №9 им. Г.Н.Сперанского (г. Москва). Под наблюдением было 29 детей с ожогами в возрасте от 4 до 14 лет. В зависимости от тяжести травмы выделили три группы. В 1-ю вошли 5 детей с локальными ожогами (0,5-6% общей поверхности тела (ОПТ), глубиной ША, Б - IV степени), во 2-ю 12 пациентов с ожогами средней тяжести (15-30% ОПТ, глубиной П-ША,Б-1У), в 3-ю 11 больных с критическими ожогами (35-70% ОПТ, глубиной П-ША,Б-1У). Все пациенты находились на антибактериальной и дезинтоксшсационной терапии. Оъемы инфузионной терапии зависели от тяжести травмы.

Проводимое врачами 3-го хирургического отделения (зав.отделения — к.м.н. Пеньков Л.Ю.) лечение включало в себя хирургическую некрэктомию с одномоментной или поэтапной аутодермопластикой. Раннее хирургическое лечение осуществляли на 2-7 сутки с момента получения ожога. У 7 пациентов с тяжелыми ожогами исследовали эффекты операций по хирургическому удалению струпа. Продолжительность операций (некрэктомии и тангенциального очищения) составляла в среднем 78 ± 15 мин, объем оперативного вмешательства - 21± 13% от общей поверхности тела.

В качестве антиоксидантного препарата ежедневно per os применяли следующий комплекс: убихинон (3 мг/кг), альфа-токоферол (3 мг/кг), метионин (12 мг/кг), селен-аспартат (3 мкг/кг), соевые фосфолипиды (36 мг/кг) (препарат представлял собой готовый комплекс, выпускаемый под маркой «Иммуджен» Ш1 FARMACEUTICI, Италия, регистрационное удостоверение №002279.И.12.2000).

В качестве местного антиоксидантного средства использовали препарат на основе ферментированной папайи . («БиоРекс», Япония, регистрационное удостоверение №003227.И.392.07.2001).

Предварительно антиоксидантная активность исследуемых препаратов была протестирована в модельных клеточных и бесклеточных системах генерации активных форм кислорода.

Забор проб периферической крови осуществляли путем венопункции либо из катетера в динамике: на 1-3 сутки, на 4-7 сутки, на 8-12 сутки, на 13-17 сутки и на 18-24 сутки после травмы. В качестве контроля использовали кровь здоровых детей, направленных на плановую операцию (варикоцеле) и проходивших предварительное обследование в больнице №9 (13 человек, возраст 4-11 лет).

Экспериментальные методы исследования

Моделирование ожоговой травмы у крыс.Ожоговую травму моделировали у 60 крыс-самцов Вистар (400-450 г). Ожоги ША, Б степени на площади 20% получали, прикладывая к спине животных алюминиевый цилиндр (85°С, 10 сек) [Busch NA.,2000]. На четвертые сутки формировался струп. В ряде экспериментов струп удаляли хирургически методом тангенциального очищения, что позволяло оценивать площадь раны методом планиметрии и проводить ее обработку фитопрепаратом. При изучении эффектов комлекса экзогенных антиоксидантов («Иммуджен») опытная группа животных получала исследуемый препарат перорально. При изучении местного действия препарата на основе ферментированной папайи («БиоРекс») препарат наносили после удаления струпа на ткань раны вод повязку.

Моделирование, ожоговой травмы, осложненной эндотоксемией. Ожоговую травму, осложненную эндотоксемией, моделировали у 24 крыс-самцов породы Вистар (400-450 г). Создавали термический ожог кожи как описано выше, а на 4 сутки животным опытной группы интраперитонеально вводили 1 мл раствора липополисахарида Е. coli 0:111 в дозе 1 мг/кг. Животным контрольной группы вводили по 1 мл стерильного физ. раствора. Через 24 ч после введения ЛПС животных выводили из эксперимента

передозировкой барбитуратов. Параллельно моделировали эндотоксемию у здоровых животных.

Моделирование полнослойной эксцизионной раны у крыс. Полнослойную эксцизионную рану у крыс (8 самцов «Вистар» весом 350-400 г) создавали под общей анестезией в строго асептических условиях путем вырезания двух квадратов 15x15 мм с левой н правой стороны спины животного после выбривания шерсти.

Забор экспериментального материала у животных. В ходе экспериментов проводили забор крови из хвоста в пробирки с гепарином и под общей анестезией иссекали биоптат кожи в 10-20 мм от края раны. При выведении животных иссекали ткань раны и ткань легких.

Лабораторные методы исследования

Оценку хемилюминесцентной активности крови [Lindena J., 1987] проводили на люминометре Wallah Oy 1251 (Финляндия). Результаты выражали в приборных единицах (мВ) в пересчете на 10 мкл цельной крови или млн нейтрофилов.

Нейтрофилы периферической крови доноров и больных выделяли с использованием градиента плотности «фиколл-верографин» [Lindena J., 1988], плазму и эритроциты разделяли центрифугированием (10 мин, 400 g). Гомогенаты кожи и легких получали путем истирания образцов ткани в ручном гомогенизаторе Поггера в 10-кратном избытке фосфатного буфера (pH 7,4), затем образцы центрифугировали (30 мин, 900g) и оценивали активность ферментов в супернатанте.

Антиокислительную активность плазмы крови оценивали по методу Клебанова Г.И. [1990], активность каталазы - по методу Aebi Н. [1984] или Бухарина О.В. [2000], активность супероксид дисмутазы - по скорости аутоокисления адреналина [Misra Н.Р., 1972], активность глутатион-пероксидазы - по окислению восстановленного глутатиона в присутствии трет-бутилгидроперекиси [Гаврилова А.Н., 1986], активность глутатион-S-трансферазы - по скорости образования глутатион-8-2,4 динитробензола [Карпищенко А.И., 1999]. Активность тканевой миелопероксидазы оценивали по окислению орто-дианизидина [Andrews P.C., 1984]. Активность ферментов выражали в пересчете на содержание белка или на содержание гемоглобина. Содержание МДА в гомогенатах оценивали по количеству ТБК-активных продуктов [Uchiyama М., 1978].

Статистическую обработку и расчет корреляционных коэффициентов проводили с использованием пакета программ Statistica for Windows, ver.6. Результаты представляли как M±m, где М - среднее арифметическое, a m - стандартное отклонение. Достоверность различий между группами оценивали с использованием критерия Уилкоксона для

связанных величин и и-теста, или Меритерия Стъюдента для несвязанных величин. Достоверным считали различие при р<0,05. Для определения корреляционных связей использовали коэффициент линейной корреляции Пирсона (г).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Обоснование применения хемилюминесцентного анализа крови для оценки активности нейтрофилов. Рост хемилюминесценции цельной крови характерен для стадии ожогового шока [Шанин Ю.Н., 2003], а в течение нескольких недель после травмы сохраняется повышенный уровень хемилюминесценции изолированных нейтрофилов [Никушкина К.В., 1997]. Поскольку на хемитоминесцентный ответ крови могут влиять различные ее компоненты [Воейков В Л., 2003], мы провели сопоставление результатов оценки хемилюминесцентной активности крови и изолированных нейтрофилов здоровых доноров (Рис. 1-а), а также проанализировали характер связи между хемилюминесценцией цельной крови и абсолютным количеством нейтрофилов в пробе (Рис. 1-6).

(а)

О 20 40 60

ХЛ цельной крови, мВ/мл пробы

140

3 120-

о. с 100-

1 80-

га

х" ш 60 ■

& 40-

20-

(б)

100

Нейтрофилы, 10 кл/мл пробы

Рис.1. Связь между люмивол-зависимой хемилюминесценцией проб, содержащих цельную кровь доноров (10 мкл/мл) и: (а) - хемилюминесценцией проб, содержащих изолированные нейтрофилы этих же доноров (106 кл/мл); (б) -количеством аутентичных изолированных нейтрофилов, добавленных в пробу с цельной кровью. Ответ стимулировали ФМА (0,1 мкг/мл).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что хемшпоминесценция цельной крови зависит от активности и абсолютного количества нейтрофилов, и может применяться как показатель их активности без предварительного выделения клеток.

2. Влияние ожоговой травмы и послеожоговой эндотоксемии на показатели окислительного стресса в крови. В основе окислительного стресса лежит не только увеличение уровня образования оксидантов, но и отсутствие адекватного роста активности защитных антиоксидантных ферментов, что приводит к снижению уровня низкомолекулярных антиоксидантов [НаШугеП В., 2004]. Поэтому мы поставили задачей комплексную оценку изменения показателей крови при ожогах, а именно: измерение хемилюминесценции цельной крови (и изолированных нейтрофилов), активности антиоксидантных ферментов эритроцитов и антиокислительной активности плазмы.

При экспериментальных ожогах у крыс площадью 20% поверхности тела мы обнаружили подъем хемнлюминесцентной активности крови уже на первые сутки после ожога; максимальные значения наблюдались на 4-е сутки (Рис.2).

супм

Ряс, 2. Хемилюминесценции (ХЛ) крови крыс после ожога в динамике, % от нормальных (до ожога) значений (активатор свечения — люминол (0,2 мМ), стимулятор - ФМА (0,1 мкг/мл)). В пробу вносили 10 мкл крови.

сутки

Рис. 3. Динамика изменения активности антиоксидантных ферментов эритроцитов и антиокислительной активности плазмы (АОА) после ожога у крыс, % от нормальных значений.

На 4-е сутки был выявлен дисбаланс в системе антиоксидантной защиты эритроцитов: повышение уровня супероксид дисмутазы при отсутствии рост активности пероксид-утилизирующнх ферментов (каталазы и глутатион-пероксидазы) (Рис. 3). Только к 12-м суткам активность этих ферментов достоверно возрастала.

Неизбежным спутником ожоговой болезни является эндотоксемия, а бактериальные липополисахариды известны как предстимуляторы лейкоцитов. Мы моделировали послеожоговую эндотоксемию путем интраперитонеального введения липополисахарида Е. coli крысам на 4-е сутки после ожога, когда завершалось формирование струпа. В параллельном исследовании липополисахарид вводили здоровым животным.

хд% лпс

сутки

Рис. 4. Изменение люминол-завнсимой хемилюминесценции (ХЛ) крови крыс под действием ожога и введения липополисахарида (ЛПС, 1мг/кг на 4-е сутки после ожога), % от нормы. В контроле ЛИС вводили здоровым животным.

Как видно на Рис.4, введение хемилюминесценции крови через 24 ч (5-е с)

ЛПС

сутки

Рис. 5. Изменение активности анти-оксцдантных ферментов эритроцитов и антиокислительной активности (АОА) плазмы крыс после ожога и введения липополисахарида (1 мг/кг на 4-е сутки после ожога), % от нормы.

липополисахарида вызывало усиление ки после ожога); одновременно снижалась

активность антиоксидантных ферментов эритроцитов и антиокислительная активность плазмы (Рис.5).

У здоровых животных мы наблюдали рост хемилюминесценции крови, однако, активность антиоксидантных ферментов эритроцитов и АОА плазмы не изменялись. По-видимому, вклад эндотоксемии в развитие окислительного стресса при ожогах связан не только с дополнительной стимуляцией нейтрофилов, но и с нарушением работы антиохсидантной системы.

По данным клинико-пабораторного исследования, у детей с термической травмой хемилюминесцентная активность крови достоверно превышала нормальные значения и зависела от тяжести ожога (Рис.б-а).

30л 25 20 15 10 5 0

(а)

35-70%

(6)

35-70%

1-3 4-7

8-12 13-17 18-24

1-3 4-7

8-12 13-17

сутки с момента травмы

Рис.6. Хемилюминесценция (ХЛ) цельной крови (10 мкл/мл пробы) (а) и изолированных нейтрофилов (106 кл/мл) (б) у пациентов с ожогами (относительно нормальных значений): 0,5-6% - локальные ожоги; 15-30% -ожоги средней тяжести; 35-70% - ожоги критические. ХЛ стимулировали ФМА (0,1 мкг/мл) в присутствии люминола (ОД мМ).

Одновременно было зарегистрировано значительное усиление хемилюминесцентной активности изолированных нейтрофилов (Рис. 7-6) и рост их содержания в крови: при норме 4,7±0,9 млн/мл, у пациентов с ожогами средней тяжести показатель повышался до 7,9-11,1 млн/мл, а у пациентов с критическими ожогами - до 9,5-11,6 млн/мл.

Максимальные значения люминол-зависимой хемилюминесцентной активности крови у пациентов с ожогами средней тяжести отмечались на 7±2 сутки (в 20-25 раз выше нормы) (п=10) и были пропорциональны площади глубокого ожога (Рис. 7-а).

600

500-1

400

Цзоо

200 100 о

1000 800 600 400 200 О

(6)

0 10 20 Площадь ожога, % ОПТ

40 60 80 100 Площадь ожога, % ОПТ

Рис. 7. Связь между максимальными значениями люминол-зависимой хемилюми-несценции (ХЛ) крови и площадью глубоких (ША,Б-1У) ожогов:

(а) - у пациентов с ожогами средней тяжести (15-30%): коэфф. корр. 0,91;

(б) - у пациентов с критическими ожогами (35-70%): коэфф. корр. -0,72. ХЛ стимулировали ФМА (0,1 мкг/мл) в присутствии люминола (ОД мМ).

У пациентов с критическими ожогами максимумы хемилюминесценции приходились на 8±3 сутки (в 10 раз выше нормы) (п=10) и были обратно пропорциональны площади глубокого ожога (Рис. 8-6). При использовании люцигенина в качестве активатора свечения, показатели хемилюминесценции максимально превышали норму в 7,5 раз при критических ожогах и в 4,5 раза - при ожогах средней тяжести (табл.1).

Таблица 1. Динамика люцигенин-зависимой хемилюминесценции цельной крови (ХЛ, мВ) у пациентов с ожогами

Площадь ожога, % ОПТ Сутки с момента ожога

1-3 4-7 8-12 13-17 18-24

0,5-6 п=5 - 6,4 ±1,6* 6,9 ± 3,6* - -

15-30 п=12 9,0 ± 1,7* 10,1 ±4,7* 13,1 ±5,9* 13,0 ±9,5* -

35-70 п=11 11,5±2,3* 10,5 ± 5,9* 16,6 ± 7,1* 23,9 ± 1,4* 8,6 ± 4,1*

Норма п=13 2,9 ±1,2

*р<0,05 относительно нормы

Сопоставление данных свидетельствовало об изменении спектра продуцируемых в крови радикалов при ожогах и сдвиге в сторону пероксидных соединений, взаимодействующих в первую очередь с люминолом.

Несмотря на интенсивную инфузионную терапию, мы выявили достоверное снижение АОА плазмы (табл. 2).

Таблица 2. Показатели антиокислительной активности и железо-связывающей способности плазмы в зависимости от тяжести ожоговой травмы и сроков заболевания

Показатель Ожог, % Сутки с момента получения травмы Норма п=13

1-3 4-7 8-12 13-17 18-24

ЖСС, мкМ 35-70 п=11 25,5±4,3 17,8±3,3 28,»±8,2 24,2±4,2 29,0±3,9 42,5± 9,5

15-30 п=12 37,5±7,4 58,9±4,6 26,5±3,4

АОА, % 35-70 п=11 25,1± 15,6* 31,6±12,3* 36,1±12,4 26,6±10,9* 28,7±7,8* 49,4± 4,1

15-30 п=12 39,2± 14,3 27,9± 3,4* 28,1±8,7* 30,4±3,1*

*р<0,05 относительно нормы.

Одновременно было обнаружено стойкое уменьшение железо-связывающей способности (ЖСС) плазмы у пациентов с критическими ожогами, тогда как при ожогах средней тяжести достоверное снижение показателя наблюдали только на 13-17 сутки.

В эритроцитах пациентов с ожогами средней тяжести было зарегистрировано увеличение активности супероксид дисмутазы, тогда как активность глутатион пероксидазы практически не изменялась (табл. 3). У пациентов с критическими ожогами активность супероксид дисмутазы не увеличивалась, а активность глутатион пероксидазы двукратно превышала нормальные значения с первых суток после травмы. При критических ожогах, в отличие от ожогов средней тяжести, наблюдалось усиление активности глутатион-8-трансферазы, что, по-видимому, отражает накопление в эритроцитах продуктов окисления биологических молекул в результате глубокого окислительного стресса.

Таблица 3. Динамика активности антиоксидантных ферментов в эритроцитах пациентов с ожогами разной степени тяжести

Показа- Пло- 1-3 сутки 4-7 сутки 8-12 сутки 13-17 18-24 норма

тель щадь сутки сутки

ожога

гп, 35-70 220 193 209 202 157 94

ЕД/г п=П ±60* ±57* ±55* ±62* ±44* ±23

гемогл. 15-30 115 127 ±44 119 102

п=10 ±57 ±39 ±45

гст, 35-70 1,01 1,16 ±0,35 1,56 ±0,23* 1,42 1,66 0,86

ЕД/мг п—11 ±0,25 ±0,51 ±0,55 ±0,36

гемогл. 15-30 0,77 0,87 ±0,15 0,93 ±0,20 1,02 ±0,20 -

п=10 ±0,22

сод, 35-70 - 60,8 47,0 36,7 31,5 39,4

ЕД/мг п~11 ±30,0 ±20,4 ±21,9 ±9,1 ±12,5

белка 15-30 102,9 63,0 73,1 106,7 107,3

п=10 ±13,9* ±60,3 ±5,4* ±38,7* ±8,2*

*р<0,05 относительно нормы

3. Риск повреждения внутренних органов при ожоговой травме. Выход активированных нейтрофилов в ткани создает угрозу их окислительного повреждения, ведущего к развитию полиорганной недостаточности. В экспериментальном исследовании анализ активности тканевой миелопероксидазы, маркерного,, фермента нейтрофилов, выявил достоверный подъем показателя на 4-е и особенно - на. 12-е сутки после ожога (Рис.8). Бактериальный липополисахарид дополнительно у, увеличивал активность миелопероксидазы в легких на 5- сутки после ожога (через 24 ч после его введения), однако у здоровых животных таких эффектов при введении липополисахарида не наблюдали.

мпо,

ЕД/г белка

♦ *

» ожоги + ЛПС

200 -

ЛПС '

100

ожоги

сутки

Рис. 8. Влияние ожогов и послеожоговой эндотоксемии на активность миелопероксидазы (МПО) в ткани легких у крыс. Эндотоксемию моделировали внутрибрюшинным введением липополисахарида (ЛПС, 1 мг/кг).

*р<0,05 относительно нормы

Полученные результаты указывают на то, что при ожогах эндотоксемих играет роль «второго удара». Ожог повышает функциональную активность нейтрофилов, в том числе, и их готовность к ответу на последующую стимуляцию. Источником бактериальных липополисахаридов при ожогах могут являться рана [Ез1а М., 2001] и кишечник [Х1а Р.-У., 2002]. Под действием липополисахаридов усиливаются образование АФК нейтрофилами, их выход в ткани и вследствие этого - риск развития органных повреждений.

Учитывая существенный вклад различных патогенетических факторов в уровень продукции АФК нейтрофилами при тяжелых ожогах (травма, эндотоксемия), мы попытались соотнести тяжесть состояния детей с ожогами и уровень прайминга нейтрофилов в их крови, оцениваемый методом хемилюминесценции цельной крови,

В клинико-лабораторном исследовании были сопоставлены данные о максимальном подъеме хемилюминесцентной активности крови и выраженности повреждений внутренних органов у пациентов с ожогами (табл. 4).

Таблица 4. Связь между максимальным зарегистрированным уровнем хемилюминесценции (ХЛ) цельной крови и выявленными осложнениями у пациентов с ожогами разной степени тяжести

ХЛ, мВ Сутки, соответствующие максимуму ХЛ Кол-во пациен тов Поражение систем органов (число случаев) Деталь ный исход (число случаев)

Диапазон Среднее ±ст.откл Диапазон Среднее ±ст.откл Одна система органов Две и более системы

100-240 158±49 4-9 6,3±1,6 7 1 нет нет

260-500 403±101 4-11 7,2±2,1 10 7 2 2

520-800 781±67 4-12 8,8±3,6 4 нет 4 3

В среднем, показатель превышал 400 мВ у пациентов с повреждением одной или более систем органов, а при значениях выше 800 мВ возрастал риск летального исхода.

4. Эффекты хирургического удаления струпа на хемилюминесцептную активность крови. Операции по удалению струпа (некрэктомии) проводятся преимущественно в острый период ожоговой болезни (4-14 сутки), поэтому важно представлять характер их влияния на активность нейтрофилов.

По данным экспериментального исследования, удаление ожогового струпа у крыс на 4-е и 8-е сутки после ожога приводило к более выраженному подъему хемилюминесценции крови (Рис.9), что отражает провоспалительный характер влияния

Рис.9. Влияние хирургического удаления струпа (некрэктомии) на дипамику хемилюминесценции (ХЛ) крови крыс с ожогами (стрелками указаны сроки некрэктомии)

*-р<0,05 относительно группы «без некрэктомии».

хирургической травмы на лейкоциты.

сутки

Моделью для изучения эффектов собственно хирургической травмы кожи послужили полнослойные эксцизионные раны у крыс. Как видно на Рис. 10, иссечение кожного лоскута на площади 6 % общей поверхности тела вызывало подъем хемилюминесцентной активности крови в 2 раза.

70-

60-

о г 40

30-

20-

10 -

Он

0 день 4 деьь 8 день время с момента операции

* р<0,05 относительно точки до операции (0 день).

Рис. 10. Динамика люминол-зависимой хемилюминесценции крови, стимулированной ФМА, у крыс при моделировании полнослойной эксцизионной раны.

О развитии окислительного стресса в этих условиях свидетельствовало достоверное спижение антиокислительной активности плазмы (на 4-е сутки показатель был в три раза ниже, чем до операции).

Полученные в экспериментальном исследовании данные указывали на высокую вероятность активации нейтрофилов в результате операции по удалению струпа у пациентов и, следовательно, на необходимость оценки этих эффектов в клинике.

Клинико-пабораторное исследование эффектов семи операций по удалению струпа и обнаружили подъем хемилюминесцентной активности крови к концу операции (в среднем, на 20% от значений до операции) и увеличение показателя на 3-й сутки после операции (5 операций; рост показателя в среднем на 70% от уровня «до операции») (Рис. 11). Поскольку при критических ожогах удаление струпа проводят, как правило, в несколько этапов, оценка послеоперационной активации нейтрофилов могла бы помочь в оптимизации промежутков между операциями.

ХЛ, 80°

мВ

600-

400 -

200 -

до операции в конце 3 сутки после операции операции

Рве. 11. Влияние хирургической некрэктомии на хемилюмииесцекциго (ХЛ) крови у 7 пациентов с ожогами (средняя продолжительность операций составляла 78±15 мин, средпий объем оперативного вмешательства - 21±13% повепхности тела).

Хемилюминесцентный анализ цельной крови представляет интерес как интегральный методом, который, по нашим данным, позволяет оценивать реакцию крови на ожог в зависимости от его тяжести, на операции, на эндотоксемию. Необходимость оценки продукции радикалов в крови связана с высоким риском окислительных повреждений вследствие нарушений в системе антиоксидантной защиты крови, особенно при эндотоксемии.

5. Анализ показателей окислительного стресса в коже. Анализ показателей послеожогового окислительного стресса в коже проводился только в экспериментальном исследовании. Изучали свойства обожженной кожи, ткани раны и кожи на удалении 20 мм от зоны повреждения.

Экспериментальные ожоги вызывали резкое усиление активности миелопероксидазы в очаге повреждения (Рис.12-а) с одновременным снижением активности антиоксидантных ферментов, в первую очередь, супероксид дисмутазы и каталазы. При таком же термическом воздействии на кожный лоскут ex vivo происходила частичная инактивация каталазы и глутатион пероксидазы, но не супероксид дисмутазы (Рис. 12-6).

(б)

Рис.12. Влияние термического ожога (85°С, 10 сек) на активность миелопсроксидазы и антиоксидантных ферментов кожи: (а) через 24 ч после ожога in vivo; (б) через 2 часа после ожога ex vivo. *р<0,05 относительно нормы.

Мы предполагаем, что инактивация ферментов кожи in vivo является результатом сочетанного действия термического фактора и избыточной продукции оксидантов мигрирующими в очаг нейтрофилами.

К 4-м суткам в очаге происходило формирование струпа, площадь которого соответствовала площади ожога. Анализ ткани струпа обнаружил прямую корреляцию между активностью миелопероксидазы и содержанием малонового диальдегида (Рис. 13), что подтверждало гипотезу о непосредственном участии нейтрофилов и генерируемых ими оксидантов в развитии послеожогового некроза.

0,4

Рис.13. Корреляция между содержанием малонового диальдегида (МДА) и активностью миелопероксидазы в ткани струпа на 4 сутки после ожога у крыс (коэфф. корреляции 0,9).

0,1 0,2 0,3 МДА,мкмоль/г белка

Вне зоны ожога на первые сутки наблюдался подъем активности МПО при снижении активности супероксид оксидазы и катал азы, однако уже к 4-м суткам активность миелопероксидазы снижалась (Рис.14).

■ Рис. 14. Изменение

МПО активности миелоперокси-

гп дазы и антиоксидантных

/ \ ферментов в коже крыс вне

АГСТ зоны ожога (на расстоянии 20

Кат мм от области повреждения)

(% от нормальных значений).

сод 1 1

до 1 4 «У™

ожога

до ожога 1 сутки 4 сутки ЛПС.24

часа (5 сутки)

1 сутки 4 сутки ЛПС.24 часа

(5 сутки)

Рис. 15. Влияние бактериального липополисахарида на активность миеяопероксидазы и антиоксидантных ферментов в коже крыс: (а) — после ожога; (б)- у здоровых животных. ЛПС вводили в дозе 1 мг/кг внутрибрюшинно. Образцы кожи забирали в 20 мм от зоны повреждения.

По сравнению с реакцией кожи здоровых крыс на эндотоксемию, у животных с ожогами степень изменения активности миелопероксидазы была намного выше, а глутатион-в-трансферазы и каталазы - намного ниже. По-видимому, при ожогах бактериальная эндотоксемия увеличивает миграцию нейтрофилов в кожу вблизи зоны повреждения. В то же время, в результате ожога ослабляются механизмы адаптационной активации антиоксидантных ферментов кожи - глутатион-8-трансферазы и каталазы. В итоге усиливается риск развития местного окислительного стресса.

Для сравнения степени изменения активности ферментов в ожоговой ране и в коже вне зоны повреждения проводили эксперимент с двукратным удалением струпа на 4-е и 8-е сутки после ожога. В ткани раны даже на 12-е сутки активность миелопероксидазы превышала нормальные для кожи значения. В коже вне зоны ожога активность миелопероксидазы снижалась к 4-м суткам, а затем постепенно увеличивалась к 12-м суткам. При заживлении ожоговой раны под струпом (без проведения хирургической некрэктомии) на 12-е сутки показатель был в норме (Рис.16).

500 -,

то 400 -

с 01

ю зоо Н

с> 1

5 100 -|

до 1 сутки 4 сутки 8 сутки 12 сутки ожога

Рис. 16. Активность миелопероксидазы в образцах кожи крыс вне зоны ожога (светлые и серые столбики) и в ткани раны (темные столбики). Светлые столбики - эксперимент без удаления струпа, серые столбики - эксперимент с удалением струпа на 4-е и 8-е сутки после ожога. *-р<0,05 относительно точки «до ожога».

Активность глутатион пероксидазы в ткани раны постепенно восстанавливалась до нормальных для кожи значений, тогда как в коже вне зоны ожога наблюдалось достоверное превышение нормы уже на 4-е сутки. Повышение активности глутатион

пероксидазы в коже наблюдалось вплоть до 12-х суток независимо от проведения операций (Рис. 18-а). Аналогичные закономерности были выявлены и для глутатион-8-трансферазы. Ее активность в ткани раны падала па 8-е сутки и не превышала норму для кожи вплоть до 12-х суток, тогда как в коже на фоне двукратного проведения некрэктомии наблюдался значительный рост показателя к 12-м суткам (Рис. 18-6).

Согласно этим данным, окислительный стресс в коже в результате ожога запускает механизмы, ведущие к активации антиоксидантных ферментов. Однако под действием факторов, стимулирующих дополнительный рост активности нейтрофилов (эндотоксемия, хирургическая травма) уровень местного образования АФК возрастает настолько, что происходит инактивация защитных ферментов, усиливая окислительный стресс не только в очаге повреждения, но и в коже вблизи ожога.

(а)

Рис. 18. Изменение активности ГП (а) и ГСТ (6) в коже крыс вне зоны ожога н в ткани раны.

Светлые столбики -кожа, эксперимент без удаления струпа; серые столбики - кожа, эксперимент с удалением струлов па 4-е п 8-е сутки; темные столбики — ткань раны.

1Я.

до смета 1 сутки 4сугки 8 сутки 12сугки

40-,

(б)

точки «но ожога».

р<0,05 относительно

до 1 сутки 4 сутки 8 сутки 12 сутки ожога

6.Эффекты экзогенных антиоксидантов при ожоговой травме. Для

перорального применения был выбран комплекс антиоксидантов, включающий в себя альфа-токоферол, убихинон, метнонин, селен аспартат, фосфолипиды сои. По литературным данным, каждый из этих компонентов дает положительный эффект при ожогах.

В экспериментальном исследовании ежедневное введение препарата животным позволило снизить хемилюминесцентную активность крови на пике воспаления (на 4-е сутки) (Рис. 18).

0 2 4 6 8

сутки с момента ожога

Рис. 18. Изменение хемилюминесценции (ХЛ) крови животных контрольной (А) и опытной (■) групп. Животные опытной группы ежедневно получали комплекс антиоксидантов (140 мг/кг). Хемилюминесценцию стимулировали ФМА (0,1 мкг/мл) в присутствии люминола (ОД мМ). * - р<0,05 по сравнению с контрольной группой.

На фоне приема препарата стабилизировалась антиокислительная активность плазмы (Рис.19-а).

до ожога 4 сутки 12 сутки

(б)

140 -1

5 120 Н

100 -

1 80-

до ожога 4 сутки 12 сутки

Рис. 19. Антиокислительная активность (АОА) плазмы крыс (а) и активность мнелоперксндаэы в ткани легких (б) до и после ожога. Контрольная группа - светлые столбики; опытная группа - темные столбики. Животные опытной группы ежедневно получали комплекс антиоксидантов (140 мг/кг). * -р<0,05 относительно контрольной группы

Анализ ткани легких животных после ожога и ожога, осложненного эндотоксемией, выявил отсутствие подъема активности миелопероксидазы у животных опытной группы, получавших комплекс антиоксидантов (Рис.19-б). Препарат не оказывал влияния на активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах при ожогах.

Анализ кожи вне зоны повреждения показал, что рост активности миелопероксидазы после ожога не зависел от приема препарата, однако под действием бактериального липополисахарида рост показателя в опытной группе (у животных, получавших препарат) был достоверно меньше, чем в контрольной группе (табл. 5)

Таблица 5. Активность миелопероксидазы в эпидермисе крыс вне зоны ожога (Ед/г белка).

Сутки после ожога Группа животных

Контрольная (п=6) Опытная (п=6)

0 (до ожога) 20,6 ±7,8 33,1 ± 15,5

4 53,6 ±13,4* 65,5 ± 27,9

5 (24 часа после введения ЛПС) 121,1 ±40,9*'** 74,3 ± 20,7*

* - р < 0,05 относительно значения до ожога.

**- р < 0,05 относительно значения точки «4 сутки».

Комплексное воздействие препарата при ожогах заключалось, таким образом, в регуляции процессов образования радикалов в крови без полного их угнетения (что привело бы к сепсису) и в снижении риска развития осложнений (повреждения легких и кожи вблизи зоны ожога).

Данные клингасо-лабораторного исследования получены в группе пациентов с ожогами средней тяжести, получавших комплекс антиоксидантов в виде водной суспензии ежедневно начиная с вторых-третьих суток после ожога (6 человек, площадь ожога 26,7±7,5% общей поверхности тела). Группу сравнения составили 7 детей со средней площадью ожога 21,4±4,8%.

Применение комплекса антиоксидантов позволило снизить уровень хемилюминесцентнции крови на пике воспаления (4-7 сутки после травмы) (Рис. 20-а).

Одновременно происходила нормализация антиокислительной активности плазмы: только на 8-12 сутки этот показатель был ниже нормы (Рис. 20-6).

Сутки с момента ожога Сутки с момента ожога

Рис. 20. Динамика изменения хемилюминесцелции (ХЛ) крови (а) и АОА плазмы (б) у пациентов с ожогами средней тяжести (15-30%) на фопе приема комплекса антиоксидантов (100 мг/кг в день) (темные столбики) и в группе сравнения (светлые столбики).

*р<0,05 относительно группы сравнения (без антиоксидантной терапии)

Прием препарата не влиял на сроки приживления кожных лоскутов после аугодермопластики, однако, в группе сравнения были отмечены два случая частичного лизиса пересаженного лоскута (в отличие от группы пациентов, получавших комплекс). Кроме того, на фоне приема препарата у двух пациентов на 4-5 сутки отмечалась активная краевая и островковая эпителизация.

7. Эффекты местного применения фитопрепарата с антиоксидантной активностью. Выбор фитопрепарата на основе ферментированной папайи в качестве средства местной терапии при экспериментальных ожогах был обусловлен его антиоксидантными свойствами в модельных системах in vitro и способностью угнетать активность бактериальной каталазы. В концентрации 1-5 мг/мл препарат на 50% снижал образование супероксидного радикала в системе ксантин-ксантиноксидаза (Cso=5 мг/мл), гидроксильного радикала в реакции Фентона (C50-I мг/мл) и хемилюминесцентную

активность крови человека in vitro (Cso=2 мг/мл). Антиоксидантные свойства препарата обусловлены, по-видимому, содержанием в нем полифенолов (0,46 мкг/мг).

Предобработка шатаммов бактерий с высокой активностью каталазы (Staphylococcus aureus) фитопрепаратом (50 мг/мл) in vitro уменьшала активность фермента на 35%. Каталаза является мощным фактором персистенции бактерий в фагоцитах [Хараева З.Ф., 2003], и ее ингибирование фитопрепаратом существенно (в 500 раз) увеличивало количество погибших после фагоцитоза стафилококков.

В экспериментальном исследовании фитопрепарат наносили на ожоговую рану под повязку после удаления струпа на 4-е и 8-е сутки. Образцы грануляционной ткани животных опытной и контрольной групп существенно различались по активности каталазы на 12-е сутки (15,6±5,5 и 70,5±30,2 ЕД/мг белка соответственно; р<0,05). Различия между группами по активности супероксид дисмутазы отсутствовали.

Данные планиметрии свидетельствовали о существенном ускорении ранозаживления у животных опытной группы (Рис. 21).

Рис. 21. Динамика заживления ожоговой раны у крыс опытной группы (темные столбики) и контрольной группы (светлые столбики).

Животным опытной группы наносили на рану фитопрепарат на 4-е и 8-е сутки после удаления струпа.

*-р<0,05 относительно контрольной группы

На 12-е сутки площадь раны у животных экспериментальной группы была в 2 раза меньше, чем в контрольной группе. Одновременно в опытной группе происходило более заметное снижение хемишоминесцентной активности крови (на 12-е сутки значения показателя в опытной и контрольной группах составляли 17,5±0,1 и 33,5±17,б мВ соответственно при норме 9,3±4,0 мВ).

Поскольку изучаемый фитопрепарат представляет собой сложный комплекс полифенолов, кислот, Сахаров, полученные эффекты могут быть результатом сочетанного действия разных факторов, в первую очередь, антиоксидантов.

4-е а-е 12-е

сутки с момента ожога

В целом, проведенные экспериментальные и клинико-лабораторные исследования выявили существенные сдвига в системе антиоксидаитной защиты тканей при ожогах, происходящие на фоне резкого увеличения активности нейтрофилов. Острая воспалительная реакция при ожоговой травме характеризуется резким ростом хемилюминесцентной активности крови и изолированных нейтрофилов, сдвигом спектра образуемых АФК в сторону пероксвдов, реагирующих преимущественно с люминолом. Резкое увеличение активности миелопероксидазы в тканях свидетельствует о миграции нейтрофилов из кровотока, что в сочетании с их возросшей радикал-продуцирующей активностью создает угрозу окислительного повреждения тканей. Механизм окислительного стресса в такой ситуации включает в себя опережающий рост активности миелопероксидазы по сравнению с антиоксидантными ферментами. В наиболее тяжелых ситуациях (в очаге повреждения, при эндотоксемии) активация антиоксидантных ферментов нарушена, возможно, за счет прямого подавления их избытком оксидантов. Ингибирование антиоксидантных ферментов наблюдалось также в эритроцитах при послеожоговой эндотоксемии.

Таким образом, для защиты крови, кожи и внутренних органов от окислительного стресса при тяжелой ожоговой травме необходимо системное применение антиоксидантных комплексов начиная с первых дней после ожога. Антиоксидантная терапия способствует снижению избыточной продукции оксидантов на пике воспаления, не угнетая активность нейтрофилов в целом, и защищает собственную антиоксидантную систему организма.

ВЫВОДЫ

1. Тяжелые ожоги вызывают окислительный стресс, обусловленный резким ростом активности нейтрофилов и нарушением механизмов адаптационной стимуляции антиоксидантных ферментов в эритроцитах и в коже.

2. Рост люминол-зависимой хемилюминесцентной активности крови отражает увеличение активности нейтрофилов при ожогах. При площади глубоких ожогов 1530% общей поверхности тела максимальный уровень хемилюминесценции прямо пропорционален площади глубокого ожога и десятикратно превышает нормальные значения.

кратном превышении нормальных значений показателя. При этом люцигенин-зависимая хемшвоминесценция превышала норму не более, чем в 8 раз.

4. Послеожоговая эндотоксемия, обусловленная бактериальным липополисахаридом (1мг/кг), ведет к дальнейшему усилению хемишоминесцентной активности крови (в 2 раза), росту активности миелопероксидазы в легких (в 3 раза), к снижению активности аптиоксидантных ферментов эритроцитов и антиокислительной активности плазмы.

5. Хирургическое удаление ожогового струпа способно повышать хемилюминесцентную активность крови, поэтому необходим мониторинг показателей хемшпоминесценции в период активных хирургических вмешательств.

6. Развитию некроза кожи в зоне ожога предшествует резкое увеличение активности миелопероксидазы, свидетельствующее о миграции нейтрофилов, и снижение активности антиоксидантных ферментов в поврежденной коже.

7. Выявлен подъем активности миелопероксидазы в коже крыс вне зоны ожога (в 1,5 раза в течение первых суток) и способность кожи к адаптационному повышению активности антиоксидантных ферментов, в первую очередь, глутатион пероксидазы и глутатион-Б-трансферазы, При этом ожоги ослабляют адаптационную реакцию ферментов кожи (каталазы, глутатион-Б-трансферазы) на бактериальный липополисахарид.

9. Местное применение антиоксидантного фитопрепарата на основе ферментированной папайи ускоряет заживление ожоговых ран.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ: АОА - антиокислительная активность

АФК - активные формы кислорода МПО - миелопероксидаза

ГП - глутатион пероксидаза ОПТ - общая поверхность тела

ГСТ - глутатион-Э-трансфераза ПМЯЛ - полиморфноядерные лейкоциты

ЖСС - железо-связывающая способность ПОН - полиорганная недостаточность

Кат - каталаза ФМА - форболмиритатацетат

МДА -малоновый диальдегид ХЛ - хемилюминесценция

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБИЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Михальчик Е.В., Коркина Л.Г., Шиян С.Д., Бовин Н.В. Влияние неогликоконъюгатов на люминольную хемлиюминесценцию перитонеальных макрофагов крыс in vitro// Биологические мембраны,-1994.- T.l 1, №6.- С.581-587.

2. Михальчик Е.В., Хараева З.Ф., Ковальчук Л.В., Коркина Л.Г. Влияние интерлейкина-2 и интерферона-гамма на «дыхательный взрыв» макрофагов: изменения внутриклеточной продукции радикалов и углеводспецифических взаимодействий// Биологические мембраны.- 1996.-Т.13, №14. - С.361-366.

3. Хараева З.Ф., Михальчик Е.В., Коркина Л.Г., Ковальчук Л.В. Влияние рекомбинантных иммуноцитокинов на фагоцитоз и внутриклеточный киллинг нейтрофилами штаммов Staphylococcus aureus с различной каталазной активностью// Вестник Кабардино-Балакарского государственного университета. Серия «Медицинские науки».-2001.- №4,- С.11-15.

4. Михальчик Е.В., Хараева З.Ф., Супрун М.В., Коркина Л.Г. Свободные радикалы в патогенезе стафилококковых инфекций; Смоленск, 2001 г.: Материалы научно-практической конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека». - Смоленск,2001.- С.72-73.

5. Михальчик Е.В., Хараева З.Ф., Балабушевич Н.Г., Коркина Л.Г. Антикаталазный эффект препаратов на основе тропических растений — новый подход к борьбе с патогенными микроорганизмами; Смоленск, 2001 г.: Материалы научно-практической конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека». - Смоленск,2001.- С.337-339.

6. Mikhal'chik E.V., Kharaeva Z.F., Koval'chuk L.V., Nagoev B.S., Korkina L.G. The influence of cytokines upon the free-radical status of blood of patients with generalized and local Staphylococcal infection// R.J.Immunol.- 2002.- V.7, N 3.- P.251 -25 8.

7. Mikhal'chik E.V., Kharaeva Z.F., Oparin R.B., Korkina L.G. Relevance of the papaya fermentation product in the treatment of local inflammation and allergodermatoses associated with secondary infections; StPetersburg-Kiszhi, July 2002.: Thes. Int. Symp. "Reactive Oxygen and Nitrogen Species: Diagnostic, Preventive and Therapeutic Values".-St.Petersburg-Kiszhi, 2002.-P. 1-32.

8. Korkina L.G., Kharaeva Z.F., Mikhal'chik E.V., Feliccia D., Luci A. Experimental basis for beneficial effects of pro-antioxidants in treatment of viral and bacterial skin lesion; Geneva, September 2002.: Thes. the 32-nd Annual Meeting "Reactive Oxygen and Nitrogen Species: Diagnostic and Therapeutic Values".-Geneva, 2002.- P.313.

9. Suprun M.V., Mikhal'chik E.V., Afanasiev I.B., Korkina L.G.Inhibitory effect of natural product from Carica Papaya on production of oxygen and nitrogen radicals in cell free and cellular systems. ESR and chemiluminescence study; Novosibirsk, July 2002.; Thes. the VI Voevodsky Conference "Physics and Chemistry of elementary chemical processes".-Novosibirsk, 2002,- P.96.

10. Лючи А., Деева И., Михальчик E., Трахтман И., Де Люка К., Коркина Л. Успешное лечение рецидивирующих бородавок комбинацией криохирургии и перорального витаминно-аминокислотного препарата, содержащего коэнзим Q// Вестник Эстет. Мед.-2003.-Т.2, №3.- С.136-140.

11. De Luca С., Kharaeva Z., Mikhal'chik E., Luci A., Korkina L. Efficacia di una formulazione a base di pro/antiossidanti nel trattamento delle infezioni batteriche cutanee; Capri, Ottobre 2003.: Thes. Associazione Dermatologi Ospedalieri Italiani, XLI Congresso Nazionale.- Capri, 2003.- P.l 17.

12. Mikhal'chik E., Pen'kov L., De Luca C., Korkina L. I radicali liberi come mediatori della sindrome multi-organo nelle grandi ustioni in eta pediátrica; Roma, Apr., 2003.: Mat.l Congresso Nazionale Societa Italiana Dermatología Pediátrica (Si DerP), Roma, 2003-P.l-3.

13. Korkina L.G., Suprun M.V., Mikhal'chik E.V., Petrova A.V., Luci A., De Luca C. The protective and healing effects of a natural antioxidant formulation based on ubiquinol and Aloe vera against dextran sulfate-induced ulcerative colitis in rats// BioFactors.- 2003,-V.18, N 1-4,- P.255-264.

14. Михальчик E.B., Ануров M.B., Титкова C.M., Балабушевич Н.Г., Ларионова Н.И., Коркина Л.Г. Эффекты биологически активной добавки «Инсол» с антипротеазной активностью в модели острого воспаления// Вестник РГМУ.- 2004.- Т.38, №7.- С.71-

/ 74'

15. Михальчик Е.В., Иванова А.В., Ануров М.В., Титкова С.М., Пеньков Л.Ю., Коркина Л.Г. Профилактическое и лечебное действие комплексного антиоксидантного препарата при ожоговой травме у крыс// Бюлл.эксперим.биол.мед.- 2004,- Т.138, №9,-С.299-301.

16. Михальчик Е.В., Иванова А.В., Ануров М.В., Титкова С.М., Пеньков Л.Ю., Хараева З.Ф.,Коркина Л.Г. Ранозаживляющее действие препарата на основе папайи в экспериментальной модели термической травмы// Бюлл.эксперим. биол. мед. - 2004.-Т.137, Хвб.- С.638-640.

17. Mikhal'chik E.,Markushina M., Pen'kov L., Budkevich L., Korkina L. Free radicals as mediators of multi-organ failure after major pediatric burns; Gdansk, May 2005.: Thes. Of the Sixth European Paediatric Surgical Congress.- Gdansk, Poland, 2005,- P.106.

18. Mikhal'chik E.V., Titkova S.M., Anurov M.V., Oettinger A.P., Korkina L.G. The effect of burn trauma in rats on neutrophil recruitment and antioxidant enzymes activity in epidermis// Clin. Immunol.- 2005.-V.116, N 3,- S.255.

19. Неробеев А.И., Мохамед Ф., Мирошникова Е.А., Михальчик Е.В., Коркина Л.Г. Оптимизация результатов лечения пациентов с возрастным птозом мягких тканей лица// Вестник Эстет. Мед.- 2005,- №4,- С.14-20.

20. Балабушевич Н.Г., Ларионова Н.И., Михальчик Е.В., Ануров М.В., Титкова С.М., Коркина Л.Г. Эффекты биологической добавки «Инсол» с антипротеиназной активностью в модели острого воспаления; Москва, апрель 2005 г.: Тез.докл. XII Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- Москва, 2005.- С.638.

21. Макаров П.В., Титкова С.М., Ануров М.В., Михальчик Е.В., Чеснокова Н.Б., Безнос О.В., Столярова Е.Н., Оганесян О.Г., Трофимова М.В., Акопян А.В., Ключиков В.Ю., Коркина Л.Г. Изучение состояния местной антиоксидантной системы глаза при экспериментальной ожоговой травме роговицы и перспективы фармакологической коррекции ее показателей// Вестник офтальмологии. - 2005,- №6. - С.40-43.

22. Mikhal'chik E.V., Titkova S.M., Anurov M.V., Korkina L.G. Pro- and antioxidant enzymes in skin after experimental burns; Moscow-St.Petersburg, June 2005.: Thes. of the 1st Int.Conference "Skin & Environment".- Moscow-St.Petersburg, 2005,- P.22.

23. Mikhal'chik E.V., Ivanova A.V., Titkova S.M., Anurov M.V., Korkina L.G. The effect of E.coli lipopoysaccharide on oxidative and antioxidant enzymes in epidermis of rats after severe bums; Moscow-St.Petersburg, June 2005.: Thes.of the l$t Int.Conference "Skin & Environment".- Moscow-StPetersburg, 2005.- РЛО.^^ /,c/i/k &W.

24. Miroshnikova E.A., Muhamed F., Nerobeev A.I., Korkina L.G. Free radical production, antioxidant enzymes, and inflammatory markers in the blood and skin of the patients subjected to face-lift surgery; Moscow-St.Petersburg, June 2005.: Thes. of the 1st IntConference "Skin & Environment".- Moscow-St.Petersburg, 2005.- P.72.

^25. Михальчик E.B., Пеньков Л.Ю., Будкевич JLH., Маркупшна M.C., Иванова А.В., Коркина Л.Г. Маркеры окислительного стресса при хирургическом лечении детей с ожоговой травмой// Детская хирургия.- 2005,- №3,- С.40-44.

V 26. Михальчик Е.В., Титкова С.М., Ануров М.В., Эттингер А.П., Коркина Л.Г. Защитное действие комплексного антиоксидантного препарата на основе витаминов и

аминокислот при ожоговой травме у крыс, осложненной эндотоксемией// Бюлл.эксперим. биол. мед.-200б.-Т.141, №6.- С.636-638.

27. Иванова А.В., Михальчик Е.В., Мирошникова Е.А., Лукашева Е.В., Коркина Л.Г. Влияние эндотоксемии на антиоксидантные ферменты кожи крыс// Бюлл.эксперим.биол.мед.-2006.-т. 142, № 10.-С.393-395.

28. Мирошникова Е.А., Михальчик Е.В., Лукашева Е.В., Мухамед Ф., Неробеев А. Особенности воспалительной реакции при пластических операциях на лице// Эстетическая медицина.-2006.-Т.5, №2.-С.136-140.

29. Korkina L., Mikhal'chik Е., Suprun М., Pastore S., Pressi G., Dal Toso R. Antiinflammatory and wound healing activity of verbascosides derived from cultured plant cells// J .Investigative Dermatology.-2006,-V.l 25, N 3.- P.50.

30. De Luca C., Mikhal'chik E., Korkina L. Free radicals as mediators of multi-organ failure after major burns// J.Investigative Dermatology.-2006.-V.125, N 3.- P.48.

31. Михальчик E.B., Ануров M.B., Титкова C.M., Мирошникова Е.А., Лукашева Е.В., Ибрагимова Г.А., Коркина Л.Г. Активность антиоксидантных ферментов кожи при хирургических ранах// Бюлл.эксперим.биол.мед. -2006.-Т.146, №11.

32. Михальчик Е.В., Титкова С.М., Ануров М.В., Пеньков Л.Ю., Коркина Л.Г. Антиоксидантные ферменты кожи при экспериментальных ожогах// Биомедицинская химия.-2006.-Т.52, № 6.

Мйхальчик Е.В. (Россия). «Показатели окислительного стресса при ожоговой травме».

Диссертационная работа.посвящена исследованию активности нейтрофилов и системы антиоксидантной защиты крови и кожи на разных стадиях воспалительного процесса, вызванного ожоговой травмой. Было показано, что у детей с ожогами люминол-зависимая хемилюминесценция цельной крови отражает степень активации нейтрофилов и зависит от площади глубокого ожога, сроков с момента травмы, тяжести органных повреждений и проведения хирургических операций по удалению струпа. В эксперименте было показано, что у крыс ожоги (20% ОПТ) и послеожоговая эндотоксемия вызывают миграцию нейтрофилов в поврежденную кожу и в легкие. В сочетании с развитием дисбаланса в системе антиоксидантной защиты крови и кожи активированные нейтрофилы создают угрозу окислительного повреждения тканей. Было показано, что адаптационные изменения кожи вблизи зоны повреждения связаны с ростом активности глутатион-пероксидазы и глутатион-8-трансферазы. Системное применение комплекса антиоксидангов на основе альфа-токоферола, убихинона, селен-аспартата позволило снизить хемилюминесцентную активность крови на пике воспаления и предотвратить миграцию нейтрофилов в ткань легких, а местное применение антиоксидантного фитопрепарата ускоряло заживление ожоговой раны. Полученные результаты могут быть использованы для усовершенствования диагностики состояния пациентов с. ожоговой болезнью, разработки тактики антиоксидантной терапии и предотвращения системных (полиорганная недостаточность) и местных (вторичный некроз) осложнений при ожогах.

Mikhal'chik E.V. (Russia). "The parameters of oxidative stress after severe burns"

The thesis is devoted to the study of oxidative stress in blood and skin resulting from acute inflammation launched by severe burns. The chemiluminescence of whole blood was assessed in clinic and in experimental model of thermal trauma in rats. The values of chemiluminescence were dependent on the deep burn area, the period from the day of trauma, endotoxemia, surgical necrectomy. Bum trauma and post-bum endotoxemia were followed by neutrophils migration into lung tissue and skin (into burned area and its vicinity), registered as growth of tissue myeloperoxidase activity. The antioxidant enzymes activity went down in the burned area and steadily grew up in skin close to it. The treatment with antioxidant formulation based on alpha-tocopherol, selenium-aspartat, ubiquinol, methionin, soybean phospholipids had normalizing effect on the peak chemiluminescence values, antioxidant activity of plasma and myeloperoxidase activity in lung. Treatment of the bum wounds with syrup of fermented papaya showing antioxidant activity in model systems accelerated wound healing. These results may be useful for diagnostics and treatment of patients with severe bums.

Заказ №417. Объем 2 пл. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ООО «Петроруш». г. Москва, ул. Палиха-2а, тел. 250-92-06 www.postator.ru

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Михальчик, Елена Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Участие активных форм кислорода и азота в развитии ожоговой болезни (обзор литературы).

1.1. Краткая характеристика патогепеза ожоговой травмы.

1.2. Образование и роль активных форм кислорода и азота в организме.

1.2.1. Строение и химия активных форм кислорода и азота.

1.2.2. Основные пути образования активных форм кислорода и азота в организме.

1.2.3. Токсичность активных форм кислорода и азота.

1.2.4. Система антиоксидантной защиты.

1.3. Образование активных форм кислорода при ожоговой травме.

1.3.1. Влияние ожоговой травмы на микроциркуляцию в зоне повреждения и инициация роста продукции активных форм кислорода.

1.3.2. Активация радикал-продуцирующей активности иейтрофилов при ожоговой травме.

1.3.3. Продукты распада и термической модификации обожженной ткани как стимуляторы активности нейтрофилов.

1.3.4. Регуляторная роль цитокинов при ожоговой травме.

1.3.5. Роль циклооксигеназы и метаболизма арахидоновой кислоты в образовании активных форм кислорода при ожогах.

1.3.6. Влияние эндотоксемии на образование активных форм кислорода и азота при ожогах.

1.3.7. Провоспалительпое действие активных форм кислорода и азота.

1.3.8. Связь между активными формами кислорода и протеазной активностью в крови и тканях при ожогах.

1.4. Участие активных форм кислорода и азота в процессах ранозаживлеиия.

1.5. Значение активных форм кислорода и азота в развитии полиорганной недостаточности при ожоговой болезни.

1.5.1 Активация перекисного окисления липидов и состояние системы антиоксидантной защиты при тяжелых ожогах.

1.5.2 Сиидром полиоргаипой недостаточности при ожогах.

1.5.3 Ожоги и повреждение легких.

1.5.4 Ожоги и болезни желудочно-кишечного тракта.

1.6. Влияние хирургии и терапии иа продукцию активных форм кислорода и азота.

1.6.1. Влияние хирургического лечения на продукцию активных форм кислорода и азота пейтрофилами.

1.6.2. Влияние плазмофереза на продукцию активных форм кислорода пейтрофилами.

1.6.3. Эффекты антиоксидантной терапии при ожогах.

1.6.4. Влияние антиоксидантов иа процессы ранозаживлепия.

1.7. Резюме.

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Реактивы.

2.2. Клинические методы исследования.

2.2.1. Характеристика групп больных.

2.2.2. Характеристика групп пациентов, перенесших пластические операции.

2.2.3. Схемы забора материала для биохимических исследований.

2.3. Экспериментальные методы исследования.

2.31. Моделирование ожоговой травмы у крыс.

2.3.2. Моделирование ожоговой травмы, осложненной эндотоксемией, у крыс.

2.3.3. Моделирование эндотоксемии у крыс.

2.3.4. Забор экспериментального материала у животных в модели ожоговой травмы.

2.3.5. Моделирование полнослойпой эксцизионной раны у крыс.

2.3.6. Изучение местного ранозаживляющего действия фитопрепарата па основе ферментированной папайи.

2.3.7. Изучение эффектов комплекса витаминов-антиоксидантов и аминокислот при ожоговой травме у крыс.

2.3.8. Изучение эффектов комплекса витаминов-антиоксидантов и аминокислот при эндотоксемии у крыс.

2.3.9. Изучение эффектов комплекса витаминов-антиоксидантов и аминокислот при экспериментальных ожогах, осложненных эпдотоксемией, у крыс.

2.4. Лабораторные методы исследования.

2.4.1 Забор образцов крови у пациентов и доноров.

2.4.2. Забор образцов крови у экспериментальных животных.

2.4.3. Выделение и подготовка к анализам исследуемых компонентов крови.

2.4.4. Забор и подготовка к анализам образцов кожи, струпов, ткани раны и легких экспериментальных животных.

2.5. Методы оценки продукции активных форм кислорода клетками крови.

2.6. Биохимические методы анализа.

2.6.1. Методы определения активности антиоксидаптных ферментов.

2.6.1.1.Оценка активности каталазы.

2.6.1.2.0ценка активности супероксиддисмутазы.

2.6.1.3. Оценка активности глутатионпероксидазы.

2.6.1.4. Оценка активности глутатион-8-трансферазы.

2.6.2. Оценка активности миелопероксидазы.

2.6.3. Определение общей аптиокислительной активности плазмы.

2.6.4. Оценка содержания ТБК-активных продуктов в плазме и гомогенатах тканей.

2.6.5. Определение общего содержания белка.

2.6.6. Оценка содержания гемоглобина.

2.6.7. Оценка железо-связывающей способности плазмы.

2.6.8. Оценка количества восстановленного глутатиона.

2.7. Модельные системы для изучения антиоксидаптных свойств препаратов in vitro.

2.7.1. Система генерации супероксидного радикала (ксантин-ксантин оксидаза).

2.7.2. Оценка влияния исследуемых препаратов на активность ксантин оксидазы.

2.7.3. Система генерации гидроксильного радикала (FeS04-H202).

2.7.4. Оценка эффектов препаратов в модельной системе липидной пероксидации.

2.7.5. Система оценки эффектов препаратов на хемилюминесценцию клеток кро

2.8. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. Результаты исследования.

3.1. Клинико-лабопаторное исследование хемшпоминесцентной и антиоксидант-иой активности крови пациентов с ожогами.

3.1.1. Результаты измерения хемилюминесценции изолированных нейтрофилов периферической крови пациентов с ожогами.

3.1.2. Сравнительная оценка хемилюминесценции цельной крови и изолированных нейтрофилов здоровых доноров.

3.1.3. Результаты анализа хемилюминесценции цельной крови пациентов с ожогами.

3.1.4. Результаты оценки активности антиоксидантных ферментов эритроцитов у пациентов с ожогами.

3.1.5. Анализ изменения антиокислителыюй и железосвязывающей активности плазмы у пациентов с ожогами.

3.1.6. Исследование влияния хирургической некрэктомии на хемилюминесцепцию нейтрофилов.

3.1.7. Исследование эффектов хирургической травмы кожи и мягких тканей лица на хемилюминесценцию лейкоцитов.

3.2. Экснериментально-лабораторнос исследование влияния ожоговой травмы на хемилюмииесцентную и антиоксидантную активность крови крыс и показатели тканевого воспаления.

3.2.1. Оценка хемилюминесценции цельной крови в модели термической травмы у крыс.

3.2.2. Оценка показателей антиоксидантной активности крови экспериментальных животных после ожоговой травмы.

3.2.3. Оценка влияния липополисахарида на хемилюминесцентную и антиоксдантпую активность крови экспериментальных животных с ожоговой травмой.

3.2.4. Оценка влияния эндотоксемии на показатели про- и антиоксидантных систем крови у крыс.

3.2.5. Изменение активности миелопероксидазы в ткани легких и топкой кишки при экспериментальных ожогах.

3.3. Экспериментально-лабораторное исследование про- и антиоксидантных свойств кожи при ожогах, эндотоксемии и хирургических ранах.

3.3.1. Изучение влияния ожога на активность про- и антиоксидантных ферментов в зоне повреждения.

3.3.2. Изучение реакции кожи вблизи зоны повреждения при ожоговой травме.

3.3.3. Изучение влияния интраперитопеалыюго введения липополисахарида па активность про- и антиоксидаптпых ферментов в коже животных.

3.3.4. Исследование динамики изменения про- и антиоксидантных ферментов кожи и ткани рапы при экспериментальных ожогах.

3.3.5. Изучение влияния полнослойной эксцизионной раны на активность про- и антиоксидантных ферментов в коже животных.

3.3.6. Анализ изменения активности миелопероксидазы, СОД и каталазы в коже пациентов при операциях по подтяжке тканей лица.

3.4. Исследование аитиоксидантной активиости комплексных препаратов in vitro.

3.4.1. Эффекты комплекса витаминов-аптиоксидантов и аминокислот в модельных системах.

3.4.2. Эффекты фитопрепарата на основе ферментированной папайи в модельных системах.

3.5. Изучеине эффектов комплексных антиоксидантных препаратов в эксперименте.

3.5.1. Изучение действия комплекса витаминов-антиоксидантов и аминокислот па параметры про- и антиокидаптных систем крови животных при экспериментальных ожогах.

3.5.2. Влияние комплекса витаминов-антиоксидантов и аминокислот на свойства кожи при экспериментальных ожогах.

3.5.4 Эффекты местного применения фитопрепарата на основе ферментированной папайи при ожогах у крыс.

3.6. Исследование влияния комплекса витаминов-антиоксидантов и аминокислот на показатели про- и антиоксидантных систем крови у детей с ожогами.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Показатели окислительного стресса при ожоговой травме"

Актуальность проблемы. Высокий риск осложнений при тяжелых ожоговых травмах в настоящее время все чаще связывают с развитием у пострадавших синдрома системного воспалительного ответа [Sheridan R.L., 1998; Самойленко Г.Е., 2000; Шанин Ю.Н., 2003]. Термическая травма вызывает выброс цитокинов и простагландииов, в результате чего усиливается взаимодействие между лейкоцитами, тромбоцитами и клетками эндотелия. Активация лейкоцитов, в первую очередь полиморфно-ядерных (ПМЯЛ) ведет к увеличению образования активных форм кислорода (АФК) и азота, что в сочетании с повышенной адгезией ПМЯЛ к эндотелию создает угрозу окислительного повреждения собственных органов и тканей [Horton J.W., 2003; Roth Е., 2004]. С другой стороны, резкое снижение радикал-продуцирующей активности ПМЯЛ может способствовать развитию сепсиса [Саркисов Д.С., 1987]. В норме повышенная продукция АФК компенсируется активацией защитных антиоксидантных ферментов (супероксид дисмутазы, каталазы, глутатион пероксидазы и др.). Дисбаланс между активностью радикал-продуцирующей и антиоксидантной систем приводит к избытку свободных радикалов, которые играют роль циркулирующих «патологических сигналов», и лежит в основе поражения легких и других внутренних органов [Величковский Б.Т., 2000; Chen L.W., 2003].

Внедрение в клиническую практику ранней некрэктомии (удаление ожогового струпа на 2-6 сутки после травмы) позволило улучшить результаты лечения обожженных и снизить риск гнойно-септических осложнений [Алексеев A.A., 2003]. Однако любая операция может повлечь за собой усиление продукции радикалов лейкоцитами как следствие хирургического стресса [Isozaku П., 1999]. В настоящее время клиническими и экспериментальными исследованиями подтверждается теория «второго удара», которая заключается в том, что предактивированные вследствие травмы ПМЯЛ отвечают на последующее агрессивное воздействие (операция, инфекция) намного сильнее, чем в норме. Поэтому необходима количественная оценка эффектов операций и бактериальной эндотоксемии, способных играть роль «второго удара» при ожогах. На наш взгляд, перспективным методом для таких исследований является клеточная хемилюминесценция крови.

Не менее важную проблему представляет развитие окислительного стресса в ожоговой райе и близлежащих участках кожи. Первичным источником цитокинов и провоспалительных медиаторов при ожогах является зона повреждения, характеризующаяся усиленной миграцией пейтрофилов [Baskaran Н., 2000]. Они очищают область повреждения кожи от продуктов термического распада биомолекул и бактерий при участии АФК. Их азурофильные гранулы содержат фермент миелопероксидазу, который катализирует окисление хлорида до гипохлорита пероксидом водорода, и рассматривается как маркер миграции нейтрофилов в ткань [Trush М.А.,1994; Xia Y.,1997; Basksran Н., 2000]. Избыток АФК способствует развитию некроза в зоне ожога [Porto da Rocha R., 2002] и повышает уровень липидной пероксидации в кожном лоскуте при пересадках [Goldstein R.K, 1992]. Пероксид водорода снижает жизнеспособность фибробластов и кератиноцитов [Thang Р.Т., 2001], а индукция антиоксидант-ных ферментов позволяет им адаптироваться к повышенному уровню образования АФК в ране и на ее краях для того, чтобы активно пролиферировать и дифференцироваться [Steiling Н., 1999]. Однако в зоне ожога антиоксидантиые ферменты быстро инактивируются [Корас В., 2003; Naziroglu М., 2003].

Заживление раны зависит не только от ситуации в очаге повреждения, по и от состояния кожи на краю раны [Troshev К., 1990]. Сегодня очень мало известно о характере изменений в близлежащих неповрежденных участках кожи, хотя выявленное в эксперименте угнетение лактатдегидрогеназы свидетельствует о глубоких метаболических сдвигах в коже при ожогах [Заец T.J1., 1977]. Это направление исследований представляет научный и практический интерес, поскольку ведет к пониманию механизмов ранозаживления и приживления аутотрансплантатов при тяжелых ожогах.

Таким образом, оценка и коррекция генерализованных и местных сдвигов в равновесии про- и антиоксидантпых реакций может рассматриваться как важная составляющая в лечении ожогов, в том числе и хирургическом. Медицина не располагает средствами, способными предотвратить развитие системного воспалительного ответа и полиорганной недостаточности у пациентов с критическими ожогами, и многочисленные экспериментальные исследования направлены на поиск путей защиты органов (антицитокиновые препараты, аптиадгезивные препараты). Перспективным представляется использование в этих целях комплексных антиоксидаптных препаратов. Одновременно необходимо развивать методы оценки эффективности применения антиоксидантов, пригодные для клинических лабораторий [Шанин Ю.Н., 2003].

В настоящее время одной из наиболее актуальных и социально значимых проблем остается детский ожоговый травматизм, который не имеет тенденции к снижению. В детских ожоговых центрах крайне редко используются методы оценки про- и антиокеидантных систем крови, что связано главным образом с методическими сложностями и недостаточной проработанностью теоретической базы, отражающей роль АФК в патогенезе ожоговой болезни. Поэтому необходим анализ возможности использования таких методов для мониторинга про- и аптиоксидантных сдвигов в крови детей с ожогами.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: изучить комплекс нарушений системы антиоксидантной защиты крови и кожи при ожоговой травме, а также обосновать и апробировать метод клеточной хемилюминес-ценции цельной крови для мониторинга состояния детей с ожоговой болезнью.

ЗАДАЧИ:

1. Провести комплексное изучение развития окислительного стресса у пациентов с ожогами разной степени тяжести в динамике с целыо выбора наиболее информативного показателя.

2. Обосновать применение и апробировать метод хемилюминесцепции цельной крови для оценки тяжести состояния пациентов с ожогами и ожоговой болезнью, в том числе, и на фоне хирургического лечения.

3. В экспериментальной модели ожога у крыс оценить баланс про- и антиоксидаит-пых систем крови и кожи и влияние на пего хирургической иекрэктомии и эндо-токсемии.

5. Показать системное защитное действие комплекса экзогенных аптиоксидантов при ожогах и послеожоговой эндотокссмии.

Научная новизна. Впервые проведена оценка хемилюминесцентной активности изолированных нейтрофилов и цельной крови у детей с ожоговой травмой. Показано изменение активности нейтрофилов в зависимости от стадии заболевания и его тяжести, в том числе, и от развития органных поражений.

Впервые выявлено активирующее воздействие хирургической некрэктомии на хемилюминесценцию крови, регистрируемое уже в конце операции и возрастающее на 3-й сутки после операции.

Обнаружено стойкое снижение антиокислителыюй активности и железо-связывающей способности плазмы у пациентов с критическими ожогами, свидетельствующее о дефиците как белковых, так и низкомолекулярных антиоксидантов.

В экспериментальной модели термического ожога у крыс подтверждено повышение хемилюминесценции крови в ответ па ожог и хирургическую травму кожи, выявлен подъем хемилюминесценции через 24 часа после введения животным бактериального липополисахарида, показано усиление активности тканевой миелопероксида-зы в легких животных под действием ожога и сопутствующей эндотоксемии.

Впервые изучено влияние ожога и эндотоксемии на баланс активности антиок-сидантных ферментов и миелопероксидазы в коже вне зоны ожога. Показано, что кожа обладает способностью адаптироваться к местной воспалительной реакции за счет увеличения активности ферментов, в первую очередь, глутатионпероксидазы и глута-тиоп-8-трансферазы. При этом в зоне ожога на 1-е сутки выявлена резкая инактивация антиоксидантных ферментов с последующим некрозом кожи к 4-м суткам.

Показано защитное действие антиоксидантного комплексного препарата на основе витаминов и аминокислот: в коже - нормализация активности защитных ферментов; в крови - снижение хемилюминесценции на пике воспалепия и предотвращение снижения антиокислителыюй активности плазмы; в ткани легких - предотвращение роста активности миелопероксидазы как показателя местной воспалительной реакции.

Впервые показано местное ранозаживляющее действие препарата на основе ферментированной папайи.

Практическая ценность. Результаты изучения динамики показателей активности про- и антиоксидантных систем крови детей с ожогами имеют как общее медико-биологическое, так и клиническое значение для понимания патогенеза ожоговой болезни и направленного поиска адекватных антиоксидантных препаратов.

В результате скрининга методов оценки про- и антиоксидантных систем крови детей с ожоговой травмой установлена объективность и информативность метода клеточной хемилюминесценции цельной крови. Метод не требует длительной процедуры выделения нейтрофилов и может использоваться как экспресс-метод, в том числе и для определения изменения активности крови в ходе хирургических операций.

Проведенные клиническое и экспериментальное исследования изменения анти-оксидантного статуса тканей при ожогах свидетельствуют о необходимости системного и местного применения антиоксидантных препаратов в острый период ожоговой болезни и при проведении хирургического лечения детей с ожогами. Показано защитное действие комплекса экзогенных антиоксидантов при системном применении и фитопрепарата с антиоксидаптной активностью при местном применении.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

2. Ожоговая травма вызывает миграцию нейтрофилов не только в зону ожога, но и в кожу вблизи зоны повреждения, а также в легкие. Миграция нейтрофилов сопровождается изменением антиоксидантных ферментов кожи: в зоне повреждения происходит стойкое снижение активности защитных ферментов, а вне зоны повреждения - постепенное повышение активности глутатионпероксидазы и глута-тион-8-трансферазы.

3. Эпдотоксемия усиливает вызываемый ожоговой травмой окислительный стресс, миграцию нейтрофилов в кожные покровы и в легкие.

4. Комплекс экзогенных антиоксидантов снижает интенсивность хемилюминесцен-ции крови на пике послеожогового воспаления, уменьшает степень угнетения антиоксидаптной активности плазмы, предотвращает рост активности миелоперок-сидазы в легких, в том числе при ожогах, осложненных эпдотоксемией.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Основные положения работы доложены и обсуждены на Национальной научно-практической конференции с международным участием «Свободные радикалы, анти-оксиданты и болезни человека» (Смоленск, 2001), международном симпозиуме «Активные формы кислорода и оксид азота: диагностическое, профилактическое и терапевтическое значение» (Спб - Кижи, 2002); 1-м Конгрессе национального общества детских дерматологов Италии (Рим, 2003); 2-ом Российском конгрессе "Современные технологии в педиатрии и детской хирургии" (Москва, 2003); Всероссийской конференции "Актуальные вопросы хирургии детского возраста" (Москва, 2004); научной конференции "Фундаментальные и прикладные проблемы экологии человека" (Москва, 2004); 1-ой международной конференции "Кожа и окружающая среда" (Москва-СПб, 2005); 6-м международном конгрессе Европейской Ассоциации детских хирургов (ЕиРБА, Гданьск, 2005).

По теме диссертации опубликовано 32 научных работы.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Михальчик, Елена Владимировна

выводы

2. Рост люминол-зависимой хемилюминесцентной активности крови отражает увеличение активности нейтрофилов при ожогах. При площади глубоких ожогов 15-30% общей поверхности тела максимальный уровень хемилюминесценции прямо пропорционален площади глубокого ожога и десятикратно превышает нормальные значения.

3. У пациентов с критическими ожогами (35-70%) общей поверхности тела наблюдается обратная зависимость между максимальным подъемом люминол-зависимой хемилюминесценции и площадью глубокого ожога при более чем 20-ти кратном превышении нормальных значений показателя. При этом люцигешш-зависимая хемилюминесценция превышала норму не более, чем в 8 раз.

4. Послеожоговая эндотоксемия, обусловленная бактериальным липополисахаридом (1мг/кг), ведет к дальнейшему усилению хемилюминесцентной активности крови (в 2 раза), росту активности миелопероксидазы в легких (в 3 раза), к снижению активности антиоксидантных ферментов эритроцитов и антиокислительной активности плазмы.

5. Хирургическое удаление ожогового струпа способно повышать хемилюминес-центнуто активность крови, поэтому необходим мониторинг показателей хемилюминесценции в период активных хирургических вмешательств.

7. Выявлен подъем активности миелопероксидазы в коже крыс вне зоны ожога (в 1,5 раза в течение первых суток) и способность кожи к адаптационному повышению активности антиоксидантных ферментов, в первую очередь, глутатион пероксида-зы и глутатион-З-трансферазы. При этом ожоги ослабляют адаптационную реакцию ферментов кожи (каталазы, глутатион-8-трансферазы) на бактериальный ли-пополисахарид.

8. Системное применение комплекса антиоксидантов при ожогах позволяет уменьшить хемилюминесцентную активность крови на пике воспаления, инфильтрацию ткани легких нейтрофилами (в том числе, и при послеожоговой эндотоксемии) и нормализовать антиокислительную активность плазмы. 9. Местное применение антиоксидаптного фитопрепарата на основе ферментированной папайи ускоряет заживление ожоговых ран.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Совершенствование тактики лечения при ожогах происходит на основе данных, полученных при изучении патогенеза ожоговой болезни. Ожоговая болезнь развивается при площади глубоких ожогов более 10-15% поверхности тела или суммарной площади ожога более 30% поверхности тела. В основе развития ожоговой болезни лежит микроциркуляторная тканевая гипоксия, приводящая к тяжелым функционально-морфологическим изменениям со стороны внутренних органов и систем. К провоспа-лительным медиаторам при ожогах относятся гистамин, серотонин, простагландины, тромбоксан, цитокины и активные формы кислорода (АФК) и азота.

Значительное улучшение результатов лечения обожженных стало возможно благодаря разработке и внедрению в клиническую практику активной хирургической тактики, основанной на ранней некрэктомии с последующей аутодермопластикой.

Если при ожогах I-II степени происходит самостоятельная эпителизация, то при ожогах IIIA степени микроциркуляторные нарушения и раневая инфекция ведут к «углублению» ран за счет паранекроза, что в свою очередь, требует хирургического лечения. Длительное существование ожоговых ран ведет к истощению и ухудшению регенерации в целом.

В настоящее время полагают, что в основу комлексного лечения обожженных должен быть положен принцип единства общего и местного лечеиия, направленного на коррекцию генерализованных нарушений гомеостаза и па улучшение заживления ожоговой раны [Алексеев A.A., 1999].

Данные экспериментальных и клинических исследований указывают на значительную роль нейтрофилов и образуемых ими АФК в патогенезе ожоговой болезни [Sir О., 2000; Horton J.W., 2003; Шанин Ю.Н., 2003]. При нарушении равновесия между прооксидантами и антиоксидантами в пользу первых возрастает риск повреждения тканей, т.е развивается окислительный стресс [Sies Н., 1991].

Окислительный стресс ведет к гибели клеток путем некроза или апоптоза, либо к адаптации клеток и тканей и восстановлению их функций. Окислительный стресс -характерная черта многих патологий, включая диабет, атеросклероз, обструктивные бронхиты, пневмокониозы, инфаркт миокарда и др. [Коркина Л.Г., 1987; Величков-ский Б.Т., 2000; Ланкин В.З., 2004;].

Разрешение воспаления определяется, в первую очередь, судьбой нейторфилов: апоптоз и поглощение их макрофагами защищает ткани от агрессивных ферментов, содержащихся в первичных и вторичных гранулах нейтрофилов. Окислительный стресс запускает некоторые из путей, ведущих к апоптозу [Fadeel В., 2003].

Для оценки окислительного стресса нужны показатели, которые отвечают следующим требованиям [Halliwell В., 2004]: они должны иметь прогностическую ценность, быть связанными с показателями тяжести состояния; быть доступными и воспроизводимыми; позволять хранение образцов в течение некоторого времени; мало зависеть от диеты.

Учитывая существенные сдвиги в уровне образования АФК начиная с первых часов после ожога, на стадии ожогового шока и при развития ожоговой болезни, мы считаем перспективным использование методов, позволяющих оценивать образование АФК циркулирующими нейтрофилами.

В качестве метода оценки продукции АФК клетками крови мы выбрали метод клеточной хемилюминесценции, активированной люминолом, а в качестве стимулятора - форболовый эфир. По данным литературы, при площади ожогов более 21% ОПТ стимулированная латексом XJI изолированных нейтрофилов взрослых пациентов превышает нормальный уровень в 2 раза в течение как минимум 30 дней с момента ожога [Никушкина К.В., 1997]. При площади ожога 11-20% превышение нормы составляло не более 30%. При этом отмечалось снижение фагоцитарной активности нейтрофилов при всех площадях ожога и во все сроки наблюдения и усиление их адгезивности.

По нашим данным (табл.6), стимулированная форболовым эфиром хемилюми-несценция изолированных нейтрофилов максимально превышает норму в 2-2,5 раза при площади ожога 15-30% ОПТ и в 7-9 раз - при площади ожога 35-70% ОПТ.

При анализе результатов нельзя не учитывать того обстоятельства, что процедура выделения нейтрофилов может менять их свойства. В крови нейтрофилы находятся во взаимодействии с другими клетками [Воейков B.JI., 2003], в том числе, и под контролем цитокииов. В цельной крови примирующие эффекты цитокинов сохраняются в течение двух часов, тогда как прайминг изолированных нейтрофилов отличается нестабильностью [Brown G.E., 1997]. С этой точки зрения, представляет интерес применение метода клеточной хемилюминесценции цельной крови. С помощью этого метода были получены убедительные результаты, отражающие изменения в продукции АФК в крови пациентов с ожоговым шоком [Шанин Ю.Н., 2003].

Объективность оценки изменений в крови с помощью люминол-зависимой хемилюминесценции подтверждается выявленными нами связями между XJI и тяжестью травмы (площадью глубоких ожогов), осложнениями со стороны внутренних органов, сроками с момента получения травмы.

Рост хемилюминесценции цельной крови в ответ на ожоговую травму наблюдался как в клинике, так и при ожогах у крыс. Рост ХЛ не является специфическим следствием ожогов; мы наблюдали подъем показателя и при эксцизионных ранах у крыс, и в ходе пластических косметических операций. Мы полагаем, что рост ХЛ цельной крови под действием травмы - это проявление неспецифической воспалительной реакции.

Особенностью ожогов является одновременное или последовательное воздействие па нейтрофилы нескольких факторов: инфекции, эндотоксемии, хирургической травмы. В экспериментальном исследовании мы обнаружили, что ХЛ цельной крови изменяется при воздействии этих факторов как на здоровых (контрольных) животных, так и на животных с ожогами. Следует подчеркнуть, что и эндотоксемия, и хирургическая травма кожи усиливали хемилюминесценцию крови, что подтверждает их про-воспалителыюе действие.

Хирургическая некрэктомия - неотъемлемая часть лечения пациентов с глубокими ожогами, значительно улучшающая его результаты. Однако проведение операций может вызывать временное ухудшение состояния пациентов, особенно при критических ожогах. Мы показали, что кратные некрэктомии после ожогов у крыс приводят к более длительному и выраженному подъему ХЛ цельной крови.

На наш взгляд, оптимизация сроков проведения операций и промежутков времени между последовательными операциями с использованием данных о ХЛ цельной крови могло бы позволить избежать гиперактивации нейтрофилов в результате соче-танного действия ожоговой и хирургической травмы.

Для сравнительного анализа информативности различных показателей, измеренных в крови крыс с ожогами, мы схематичнно представили данные в таблице 33.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Михальчик, Елена Владимировна, Москва

1. Алексеев A.A. Современные методы лечения ожогов и ожоговой болез-ни//Комбустиология.-1999.-№1.-С.1-5.

2. Альес В.Ф., Андреев А.Г., Ульянова Г.И., Гранова Л.В., Астамиров М.К. Доставка, потребление и экстракция в острый период ожоговой болезни у детей// Анестезиология и реаниматология.-1998, №1.-С.4-7.

3. Ахкямов Э.М. Влияние нейтрофилов и их секреторных продуктов на иммунную реактивность организма и воспалительно-репаративные процессы в коже при экспериментальной ожоговой травме// Автореф.дисс.к.м.н. Челябинск.-1998. - 24 с.

4. Бабская Ю.Е., Лавров В.А., Олюнина H.A. Интенсивность свободно-радикального окисления липидов в острый период ожоговой болезни// Хирургия.-1985.-№11.-С.95-97.

5. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов.-М.:Медицина.,1989.-368 С.

6. Бондарепко Я.И. Иммуномодулирующее действие стабилизаторов клеточных мембран при смешанной инфекции на фоне ожоговой травмы// Автореф. дисс. к.м.н. -Курск.-2000.-24 с.

7. Бухарин О.В., Черкасов C.B., Сгибнев A.B., Забирова Т.М., Иванов Ю.Б. Влияние микробных метаболитов на активность каталазы и рост Staphylococcus aureus 6538 Р // Бюлл.Эксп.Биол.Мед.-2000.-Т. 130, Ж7.-С.80-82.

8. Величковский Б.Т. Молекулярные и клеточные основы экологической пульмонологии//Пульмонология.-2000.-№3.-С.10-18.

9. Виноградова Л.Ф. Патогенетические механизмы токсического и аллергического поражения печени и экспериментальная фармакотерапия антиоксидантами: витамином Е, убихиноном, селенитом натрия и их комбинациями.//Автореф.дисс.докт., М.-1990, 28с.

10. Вихриев Б.С., Бурмистров В.М. Ожоги: руководство для врачей// Л., Медицина. -1986.-272 С.

11. П.Владимиров Ю.А. Активированная хемилюминеекценция и биолюминесценция как инструмент в медико-биологических исследованиях //Соросовский образовательный журнал.-2001.-Т.7, №1.-С. 16-23.

12. Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и азотазначение для диагностики, профилактики и терапии//Биохимия.-2004.-Т.69,№1.-С.5-7.

13. Владимиров Ю.А., Потапенко А.Я. Физико-химические основы фотобиологических процессов//Москва, «Высшая школа».-1989.-199 С.

14. Воейков B.JI. Регуляторные функции активных форм кислорода в крови и в водных модельных системах//Дисс.соиск.уч.степ.д.биол.наук.-М.-2003.

15. Гаврилова А.Н., Хмара Н.Ф. Определение активности глутатион пероксидазы эритроцитов при насыщающих концентрациях субстрата// Лаб.дело.-1986.-№12.-С.721-724.

16. Григлевски P.E. Участие свободных радикалов в превращениях эндотелиалыюго простациклина и окиси азота // Новости фармации и медицины.- 1997.- т.31, № 12,- с.2-8.

17. Еремина Т.В. Показатели антиоксидантной системы эритроцитов при ожоговой травме// Автореф.дис.к.б.н. Ростов-на -Дону.-1999.-23 с.

18. Ермолов A.C., Смирнов C.B., Герасимова Л.И., Спиридонова Т.Г., Логинов Л.П., Титова Г.П., Волков C.B. Синдром полиорганной недостаточности у обожженных: проблемы диагностики, профилактики и лечения// Комбустиология.-1999, №1.-С. 23-27.

19. Заец Т.Л., Долгина М.И., Музыкант Л.И., Коткина Т.Н., Носова И.М., Каем Р.И., Панова Ю.М. Изменения ферментативной активности в коже обожженных животных// Вопр.Мед.Хим.-1977.-№6.-С.763-767.

20. Захаров В.В., Николаев A.B., Рагимов Ч.Р., Хохлов А.П., Шехтер А.Б., Черкасов М.Е., Кирсанов В.Ю. Нарушение окислительного метаболизма как критерий оценки течения раневого процесса в эксперименте// Бюлл.Эксп.Биол.Мед.-1991.-Т.112, №12.-590-593.

21. Звягинцева Т.В. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная активность в очаге кожной раны, вызванной радиационным и механическим воздействи-ем//Теор.Экспер.Мед.-2000.-№1.-С.44-47.

22. Ивашкин В.Т., Драпкипа О.М. Клиническое значение оксида азота и белков теплового шока.- М., Геотар-Мед, 2001.-88С.

23. Каем Р.И. Ожоги// Воспаление. Руководство для врачей./ Под ред. Серова В.В., Паукова В.С.-М.:Медицина,1995.-С.457-468.

24. Карпищенко А.И. Медицинские лабораторные технологии (в 2-х томах). Под ред. А.И. Карпищенко// СПб-«Интермедика»,1999,- 460 С.

25. Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теселкнн Ю.О. Оценка антиокислительных свойств плазмы крови с применением желточных липопротеидов //Лаб.дело.-1988.-№5.-С.59-62.

26. Козинец Г.П., Кульбака B.C., Кузив O.E. Применение антиоксидаптов в острые периоды ожоговой болезни// Клиническая хирургия.-1980.-№3.-С.37-40.

27. Коркина Л.Г. Механизм активации окислительного метаболизма фагоцитов и роль активных форм кислорода в патогенном действии пылевых частиц// Автореф.дисс. д.м.н.- Москва,-1987.-40 С.

28. Коркина Л.Г., Величковский Б.Т. Роль свободных радикалов в пылевой патологии легких// Сб. научных трудов «Кислородные радикалы в химии, биологии, медицине».- Рига.-1988.- С.153-163.

29. Куватов С.С. Ранняя диагностика и профилактика синдрома мультиорганной дисфункции при ожоговой болезни у детей// Автореф. дис.к.м.н. Уфа.-2002.-22 С.

30. Кузин М.И., Шимкевич Л.Л. Раны и раневая инфекция.-М.: Медицина.-1990.

31. Кулинский В.И., Колеспиченко Л.С. Обмен глутатиона// Успехи биол.химии,-1990.-Т.31 .-С. 157-179.

32. Лавинская H.H. Взаимосвязь параметров свободнорадикалыюго окисления и гемостаза в рамках ДВС- синдрома при механической и ожоговой травме// Авто-реф.дисс.к.м.н. СПб.- 1998. - 24 С.

33. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Каминный А.И., Беленков Ю.Н. Антиоксиданты и атеросклероз: критический анализ проблемы и направление дальнейших исследова-ний//Патогенез.-2004.-№1.-С.71-85.

34. Липатова В.А. Участие полиморфноядерных лейкоцитов в патогенезе нарушений сосудистой проницаемости при некоторых патологических состояпиях//Автореф. дисс. к.м.н.-Москва.-1993.-39С.

35. Львовская Е.И. Нарушение процессов липидной пероксидации при термической травме и патогенетическое обоснование лечения антиоксидантами из плазмы крови// Автореф.дисс.д.м.н. Москва.- 1998.-44 С.

36. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге//Наука.-Новосибирск.-1989.-344 С.

37. Мовшев Б.Е., Недошивина Р.В., Корякина И.К. Токсичность высокомолекулярного белка обожженной кожи по результатам биоиспытаний in vivo и in vitro// Бюлл.Эксп.Биол.Мед.-1980.- LXXXX, №10.-С.422-424.

38. Музыкант Л.И., Заец Т.Л., Долгина М.И., Коткина Т.И., Носова И.М. Ингибиторы трипсиноподобных протеолитических ферментов как средство предотвращения развития вторичного некроза в ожоговых ранах// Бюлл.эксп.биол.мед.-1977.-Т.84, №9.-С.288-291.

39. Назаренко Г.И., Кишкун А.А. Лабораторные методы диагностики неотложных со-стояний.-М.:Медицина., 2002.-567 С.

40. Насонова Н.П., Штукатуров А.К., Марковская О.В., Сайтгалин Г.З., Салистый П.В., Гриценко Д.А. Инструктивно-методические рекомендации по оказанию помощи детям с термической травмой.- Екатеринбург, 2002.- 41С.

41. Никушкина К.В. Характеристика полиморфноядерных лейкоцитов и гуморальных показателей иммунитета при ожоговой болезни// Автореф.дисс.к.м.н. Челябинск. -1997.-24 С.

42. Носатенко В.Е. Состояние медиаторного обмена и кожно-сосудистых реакций у обожженных// Дерматология и венерология, Киев, 1985.-вып.20.-С.71-74.

43. Острахович Е.А., Михальчик Е.В., Гетманская Н.В., Дурнев А.Д. Антиоксидантная активность экстракта из Uncaria Tomentosa// Хим.фарм.журнал.-1997.- №6.-С.49-51.

44. Пальцын А.А., Колокольчикова Е.Г., Алексеев А.А., Бобровников А.Е., Крутиков М.Г., Черновская Н.В., Бадикова А.К., Гришина И.А. Морфологическое исследование инфицированных ожоговых ран//Хирургия (Москва).-2000.-№3.-С.33-37.

45. Панасенко О.М., Осипов А.Н., Чеканов А.В., Арнхольд 10., Сергиепко В.И. При взаимодействии гипохлорита с трет-бутилгидропероксидом образуется перкосиль-ный радикал //Биохимия.-2002.-Т.67, № 8.-С.1061-1070.

46. Парамонов Б.А., Порембский Я.О., Яблонский В.Г. Ожоги: Руководство для врачей.- СПб.:СпецЛит., 2000.-480 С.

47. Пекарский Д.Е. К обоснованию патогенетической профилактики и терапии ожоговой болезни// Клиническая хирургия.-1982.-№3.-С.57-61.

48. Пекарский Д.Е., Захаренко О.М. Острая ожоговая токсемия// Клиническая хирур-гия.-1980.-№3.-С.55-59.

49. Полякевич A.C. Изменение биоцидности нейтрофилов крови при ожогах на фоне применения цеолитсодержащего сорбена «Литовит»// Автореф. дис.к.м.н. Ново-сибирск.-2002.- 24 С.

50. Ринейская О.Н. Перекиспое окисление липидов, активность ферментов антиокси-даптной защиты и системы комплемента у крыс с ожоговой травмой// Автореф. дисс. к.м.н. Минск.-1997.- 24 С.

51. Самойленко Г.Е. Синдром полиорганной недостаточности в хирургии ожогов у детей// Травма.-2000.-Т.1, № 1.-С.46-52.

52. Самойленко Г.Е. Хирургическое лечение тяжелообожжеппых детей// Комбустио-логия.-2002 .-№ 12-13 .-С.

53. Саркисов Д.С. Клинический аспект современных представлений о структурных основах адаптации и компенсации нарушенных функций// Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций: Руководство.- М.: Медицина, 1987.-С.57-84.

54. Саркисов Д.С., Каем Р.И., Втюрин Б.В., Туманов В.П., Пальцын A.A. Морфологические изменения в органах при ожоговой болезни и их значение в ее патогенезе// Хирургия.-1980.-№5.-С.8-13.

55. Серов В.В. Воспаление. Руководство для врачей/Под ред. В.В. Серова, B.C. Пауко-ва.-М.: Медицина, 1995.-640 С.

56. Сморщок С.А., Якубышипа Л.В., Сокольская В.А., Волков К.С., Кузив O.E., Бигу-няк В.Б. Влияние антиоксидантов на регенераторные процессы в ожоговой ране// Клиническая хирургия.-1982.-№3.-С.13-15.

57. Снейдер С.Х., Бредт Д.С. Биологическая роль окиси азота// В мире науки.- 1992.-№7.-С. 16-24.

58. Спиридонова Т.Г. Патогенетические аспекты лечения ожоговых ран// Русский медицинский журнал .-2002.-Т. 10, №8-9.-С.395-400.

59. Теселкин 10.0. Антиоксидаптпая активность плазмы крови как критерий оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма и эффективности применения экзогенных антиоксидантов// Автореф.дисс.д.б.н.-Москва.-2003.-39С.

60. Туманов В.П., Шимкевич JI.JI., Музыкант Л.И., Гасанов Т.М., Сергель О.С. Морфологические и цитологические особенности процесса заживления ожоговой раны при различных способах лечения// Бюлл. эксперим.биол.медиц.-1983.- T.XCVI,11.-С.107-110.

61. Федоров H.A., Недошивина Р.В., Корякина И.К., Мовшев Б.Е. Биологическая активность токсина, выделенного из обожженной кожи// Пат.Физ.Эксп.Терап.-1980.-№5.-С.45-49.

62. Хараева З.Ф. Свободно-радикальный статус фагоцитов больных стафилококковой инфекцией: регуляция иммуноцитокинами и антиоксидантами// Автореф. дисс. Д.м.н. Москва.- 2003.-47 С.

63. Хартманн П. Методическое руководство по лечению ран// ООО «Пауль Харт-манн».-М.-2000.-123 С.

64. Шанин В.Ю. Патогенез респираторного дистресс-синдрома как осложнения военно-травматического шока и острого периода тяжелой раневой болезни// Клин.Мед. Патофизиол. -1997, №1.-С.13-22.

65. Шанин Ю.Н., Шанин В.Ю., Зиновьев Е.В. Антиоксидантная терапия в клинической практике//ЭЛБИ-СПб.-2003.-121 С.

66. Шехтер А.Б., Серов В.В. Воспаление и регенерация. // Воспаление. Руководство для врачей// Под ред. В.В.Серова, B.C. Паукова.- М.:Медицина, 1995.- С.200-213.

67. Шилов В.Н. Псориаз решение проблемы (этиология, патогенез, лечение). М.: Издатель В.Н.Шилов, 2001.-304 С.

68. Aebi Н. Catalase //In Methods of Enzymatic analysis, ed. Bergmeyer.-Acad.Press, N.Y., London.-1984.-V.2.-P.673-684.

69. Ahmed S. El-D., el-Shahat A.S., Saad S.O.//Assessment of certain neutrophil receptors, opsonophagocytosis and soluble intracellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) following thermal injury//Burns.-1999.-V.25, No5.-P.395-401.

70. Allen R.C., Mead M.E., Kelly J.L. Phagocyte oxygenation activity measured by chemiluminescence and chemiluminigenic probes. In Handbook for Oxygen Radical Research//ed Greewald.-CRC Press, Florida.-l985.-P.343-351.

71. Allen R.C., Pruitt B.A. Humoral-phagocyte axis of immune defense in burn patients. Chemoluminogenic probing// Arch.Surg.-l 982.-V. 117.-P. 133-140.

72. Amstad P., Peskin A., Shad G., Mirault M., Moret R., Zbinden I., Cerutti P. The balance between Cu,Zn-superoxide dismutase and catalase affects the sensitivity of mouse epidermal cells to oxidative stress// Biochemistry.-1991.-V.30.-P.9305-9313.

73. Andrews P.C., Parens C., Krinsky N.I. Comparision of myeloperoxidase with respect to catalysis, regulation, and bactericidal activity// Arch.Biochem.Biophys.-1984.-V.228.-P.439-442.

74. Andrzejewska E., Niewiadomska H. Evaluation of selected parameters of the cytokine system in burn wounds in children//Pediatr.Surg.Int.-2000.-V.16,Nol-2.-P.80-84.

75. Aratani Y., Kura F., Watanabe H., Akagawa H., Takano Y., Suzuki K., Dinauer M.C., Maeda N., Koyama H. In vivo role of myeloperoxidase for the host defense//Jpn. J. Infect. Dis.-2004.-V.57,No5.-S.15.

76. Arbak S., Ercan F., Hurdag C.G., Karabulut 0., Gurbuz V., Corak A., Alican I. Acute lung injury following thermal insult to the skin: a light and transmission electron micro-scopial study// Acta Histochem.-1999.-V.101,No3.-P.255-261.

77. Arnold J. Review: Properties, Functions, And Secretion of human myeloperoxidase// Biochemistry.-2003.-V.69.-P.4-9.

78. Aruoma O.I., Halliwell B. Action of hypochlorous acid on the antioxidant protective enzymes superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase// Biochem. J.-1987.-V.248, No3.-P.973-976.

79. Atik B., Tan 0., Dulger H., Koseoglu B., Bekerecioglu M. The time course of serum malondialdehyde levels in burned humans//Eur.J.Gen.Med.-2004.-V.l,Nol,-P.26-27.

80. Atiyeh B.S., Al-Amm C.A. Immunology of burn injury an overview//Annals of Burns and Fire Disastres.- 2001.-V.14, No.2.- P.78-89.

81. Auchere F., Capeillere-Blandin C. Oxidation of Cu,Zn-superoxide dismutase by the mye-loperoxidase/hydrogen peroxide/chloride system: functional and structural effects// Free Rad. Res.- 2002.- V.36.- P.l 185-1198.

82. Awastishi YC, Sharma R, Singhai SS. Human glutathione S-transferase//Int.J. Biochem.-1994.- N26.- P.295-308.

83. Aziz K.A., Cawley J.C., Zuzel M. Platelets prime PMN via released PF4: mechanism of priming and synergy with GM-CSF// Br.J.Haematol.-1995.-V.91,No5.-P.846-853.

84. Babior B.M. The respiratory burst of phagocytes// J.Clin.Investig.- 1984.-V.73, N 3.-P.599-601.

85. Babior B., Kipnes R., Curnutte J. Biological defense mechanisms: the production by leukocytes of superoxide, a potential bactericidal agent //J.Clin.Invest.-1973.-V.52.-P.741-744.

86. Baeuerle P.A., Henkel T. Function and activation of NF-kappaB in the immune system // Annu.Rev.Immunol. -1994.-V. 12.-P. 141 -179.

87. Baggiolini M., Clark-Lewis I. Interleukin-8, a chemotactic and inflammatory cytokine// FEBS Lett.-1992.-V.307.-P.97-101.

88. Baker C.C., Trunkey D.D., Baker N.J.A simple method of predicting severe sepsis in burn patients//Am. J.Surg.-1980.-V. 139, N4.-P.513-517.

89. Ballard-Croft C., Maass D. Acute adenosine preconditioning is mediated by p38 MAPK activation in descrete subsellular compartments //Circ.Res.-2001 .-V.88.-P.175-182.

90. Baskaran H., Yarmush M.L., Berthiaume F. Dynamics of tissue neutrophil sequestration after cutaneous burns in rats// J.Surg. Res.- 2000.- Vol.93.-P.88-96.

91. Baud O., Greene A.E., Li J., Wang H., Volpe J.J., Rosenberg P.A. Glutathione peroxi-dase-catalase cooperativity is required for resistance to hydrogen peroxide by mature rat oligodendrocytes// J.Neurosci.-2004.-V.24, N 7.-P.1531-40.

92. Baumeister RG, Bohmert H., Weber G. Local and systemic changes of acid proteinases during advanced stages of burn injuries// Scand. J. Plast. Reconstr. Surg. 1979.- V.13, N 1,- P.185-188.

93. Bekyarova G., Yankova T. Alpha-tocopherol and reduced glutathione deficiency and decreased deformability of erythrocytes after thermal skin injuru// Acta Physiol.Pharmacol.Bulg.-1998.-V.23, N2.-P.55-59.

94. Bekyarova G., Yankova T., Kozarev I., Yankov D. Reduced erythrocyte deformability related to activated lipid peroxidation during the early postburn period// Burns.-1996.-V.22, N4.-P.291-294.

95. Bennet L.L., Rosenblum R.S., Davidson J.M., Barton R.M., Nanney L.B. An vivo comparision of topical agents on wound repair//Plast.Reconstr.Surg.-2001.-V. 108, N 3.-P.675-687.

96. Berard L., Young M.J., Hall D., Paul T., Ingold K.U.// Quantitative studies on the peroxidation of human low-density lipoprotein initiated by superoxide and by charged and neutral alkylperoxyl radicals//Am.J.Chem.Soc.-2001.-V.123.-P.12439-12448.

97. Berg C., Trofast C., Bengtsson T. Platelets induce reactive oxygen species-dependent growth of human skin fibroblasts// Eur.J.Cell.Biol.-2003.-V.82, N11.-P.565-571.

98. Berger M, O'Shea J., Cross A.S. Human neutrophils increase expression of C3bi as well as C3b receptors upon activation. //J. Clin. Invest.- 1984.-V. 74.-P. 1566-1571.

99. Berger M., Wetzler E.M., Wallis R.S. Tumor necrosis factor is the major monocute product that increases complement receptor expression of mature human neutrophils// Blood.-1988.-V.71, N 1.-P.151-158.

100. Bertin-Maghit M., Goudable J., Dalmas E., Steghens J.P., Bouchard C., Gueugniaud P.Y., Petit P., Delafosse B. Time-course of oxidative stress after major burns// Intensive Care Med.-2000.-V.26, N6.-P.800-803.

101. Berton T.A., Gordon S. Regulation of superoxide anion release by mouse maro-phages in culture// Trans.Royal Soc Trop Med Hyg.-1983.-V.77, N 5.-P.610-613.

102. Beutler E., Matsumoto F. Ethnic variations in red cell glutathione peroxidase activity// Blood.-1975.-V.46.-P. 103-110.

103. Biffl W.L., Moore E.E., Moore F.A., Peterson V.M. Interleukin-6 in the injured patient: marker of injury or mediator of inflammation//Ann.Surg.-1996.-V.224.-P.647-664.

104. Biffl W.L., Moore E.E., Zallen G., Johnson J.L., Gabriel J., Offner P.J., Silliman C.C. Neutrophils are primed for cytotoxicity and resist apoptosis in injured patients at risk for multiple organ failure//Surgery.-1999.-V.126,N 2.-P. 198-202.

105. Bjerknez R., Vindenes H., Pitkanen J., Ninnemann J., Laerum O.D., Abyholm F Altered polymorphonuclear neutrophilic granulocyte functions in patients with large burns//J.Trauma.-1989.-V.29,N6.-P.847-855.

106. Blakytny R., Erkell L.J., Brunner G. Inactivation of active and latent transforming growth facor beta by free thiols: potential redox regulation of biological action// Int.J.Biochem.Cell.Biol.-2006.-V.38.-P. 1363-1373.

107. Blum J, Fridovich I. Inactivationof glutathione peroxidase by superoxide radical// Arch Biochem Biophys.-1985.-V. 240.-P. 500-508 .

108. Bochkov V.N., Kadi A., Huber J., Gruber F., Binder B.R., Leitinger N. Protective role of phospholipid oxidation products in endotoxin-induced tissue damage // Nature.-2002.-V.419.-P. 77-81.

109. Bonni A., Frank D.A., Schindler C., Greenberg M.E. Characterization of a pathway for ciliary neurotrophic factor signaling to the nucleus// Science.-1993.-V.262.-P.1575-1579.

110. Border J.R.Hypothesis: sepsis, multiple system organ failure and the macrophage// Editorial Arch.Surg.-l 988.-V.285.-P. 123.

111. Borner J., Zimmermann T., Albrecht S., Roesner D. Selenium administration in severe inflammatory surgical diseases and burns in children//Med.Klin.-1997.-V.92,N3.-P.17-19.

112. Botha A.J., Moore A.F., Moore E.E., Kim F.J., Baneijee A., Peterson V.M. Postinjury neutrophil priming and activation: an early vulnerable window//Surgery.-1995.-V.l 18.-P.358-365.

113. Bradley P.P., Priebat D.A., Christensen R.D., Rothstein G. Measurement of cutaneous inflammation: estimation of neutrophil content with an enzyme marker// Invest. Dermatol.-1982.-V.78,N3 .-P.206-209.

114. Brouxhon S.M., Schneider S., Shenkut E., Pentland A. The role of cyclooxigenase-2 in skin burn injury//Acad.Emerg.Med.-2001 .-V.8.-P.520-521.

115. Brown G.C. Reversible binding and inhibition of catalase by nitric oxide// Eur.J.Biochem.-l 995.-V.232.-P. 188-191.

116. Brown G.E., Reiff J., Allen R.C., Silver G.M., Fink M.P. Maintenance and down-regulation of primed neutrophil chemiluminescence activity in human whole blood// J.Lek.Biol.-1997.-V.62,N 6.-P.837-844.

117. Brown G.E., Silver G.M., Reiff J., Allen R.C., Fink M.P. Polymorphonuclear neutrophil chemiluminescence in whole blood from blunt trauma patients with multiple inju-ries//J.Trauma.-1999.-V.46,N 2.-P.297-305.

118. Bucky L.P., Vedder N.B., Hong H.Z. Reduction of burn injury by inhibiting CD18-mediated leukocyte adherence in rabbits// Plast.Reconstr.Surg.-1994.-V.93.-P.1473-1480.

119. Burton G.W., Ingold K.U. Beta-carotene: an unusual type of lipid antioxidant// Sci-ence.-1984.-V.224.-P.569-573.

120. Burton L.K., Velasco S.E., Patt A., Terada L.S., Repire J.E. Xanthine oxidase contributes to lung leak in rats subjected to skin burn//Inflammation.-1995.-V.19,Nl.-P.31-38.

121. Busund R., Koukline V., Utrobin U., Nedashkovsky E. Plasmapheresis in severe sepsis and septic shock: a prospective, randomised, controlled trial// Intensive Care Med.-2002.-V.28, N 10.-P.1434-1439.

122. Cadenas S., Cadenas A.M. Fighting the stranger antioxidant protection against endotoxin toxicity// Toxicol.-2002.-V.180.-P.45-63.

123. Cain B.S., Meldrum D.R., Dinarello C.A., Meng X., Joo K.A., Baneijee A., Harken A.H. Tumor necrosis factor-alpha and interleukin-lbeta synergistically depress human myocardial function// Crit. Care Med.-1999.-V.27.-P.1309-1318.

124. Camera E., Lisby S., Dell M.L., Santucci B., Paganelli R., Baadsgaard 0., Picardo M. Levels of enzymatic antioxidants activities in mononuclear cells and skin reactivity to sodium dodecyl sulphate// Int.J.Immunopath.Pharmaco.-2003.-V.16,Nl.-P.49-54.

125. Cassatella M.A. On the production of TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL/Apo-2L) by human neutrophils // J.Leuc.Biol- 2006.- V.79, N 6.- P. 1140-1149.

126. Centikale O., Belce A., Konukoglu D., Senyuva C., Gumustas M.K., Tas T. Evaluation of lipid peroxidation and total antioxidant status in plasma of rats following thermal injury// Burns.-1997.-V.23,N2.-P.l 14-116.

127. Centikale O., Senel O., Bulan R. The effect of antioxidant therapy on cell-mediated immunity following burn injury in an animal model// Burns.-1999.-V.25,N2.-P.113-118.

128. Cetinkale 0., Konukoglu D., §enel 0., Kemerli G.D., Yazar S. Modulating the functions of neutrophils and lipid peroxidation by FK506 in a rat model of thermal injury// Burns.- 1999.- V.25.- P.105-112.

129. Chai J., Guo Z., Sheng Z. Protective effects of vitamin E on impared neutrophil phagocytic function in patients with severe burns// Zhonghua Zheng Xing Shao Shang Wai KeZa Zhi.-1995.-V.11,N 1.-P.32-35.

130. Chan E.L., Murphy J.T. Reactive oxygen species mediate endotoxin-induced human dermal endothelial NF-kappaB activation// J.Surg.Res.-2003.-V.l 11.N1.-P.120-126.

131. Chandel N.S., Maltepe E., Goldwasser E., Mathieu C.E., Schumacker P.T. Mitochondrial reactive oxygen species trigger hypoxia-induced transcription// Proc.Natl.Acad.Sci. USA.-1998.-V.95.-P. 11715-11720.

132. Chen F.S., Scher D.M., Clancy R.M., Vera-Yu A., Di Cesare P.E. In vitro and in vivo activation of polymorphonuclear leukocytes in response to particulate debris// J. Bio-med.Mater. Res. -1999.-V.48,N6.-P.904-912.

133. Chen L.W., Hsu C.M., Wang J.S., Chen H.L., Chen J.S. Inhibition of inducible nitric oxide synthase (iNOS) prevents lung neutrophil deposition and damage in bum rats// Shock.-2001 .-V. 15,N2.-P. 151-156.

134. Chen L.W., Huang H.L., Lee I.T., Hsu C.M., Lu P.J. Thermal injury-induced priming effect of neutrophil is TNF-alpha and p38 dependent // Shock.-2006.-V.26, N l.-P. 6976.

135. Chen L.W., Wang J.S., Chen H.L., Chen J.S., Hsu C.M Peroxynitrite is an important mediator in thermal injury-induced lung damage// Crit.Care.Med.-2003.-V.31, N8.-P.2170-2177.

136. Cherry G.W., Hudhes M.A., Leaper D.J., Ferguson M.W.J. Wound healing. Chapter 6 in Oxford Text Book of Surgery // Ed. P.J.Morris, W.C.Wood.-Oxford Univercity Press, 2nd ed.-2001.-P.129-159.

137. Chitnis D., Dickerson C., Munster A.M., Winchurch R.A. Inhibition of apoptosis in polymorphonuclear neutrophils from burn patients// J.Leukoc.Biol.-1996.-V.59,No6.-P.835-859.

138. Choi M., Rabb M.D., Arnaout M.A., Ehrlich H.P. Prevention of infiltration of leukocytes by monoclonal antibody blocks the development of progressive ischemia in rat bums// Plast.Reconstr.Surg.-1995.-V.96.-P. 1177-1185.

139. Cioffi WC, Burleson DG, Jordan Bs, Mason AD, Pruitt BA Granulocyte oxidative activity following thermal injury//Surgery.- 1992.-V.112.-P.860-865.

140. Clark L.A. Phagocytosis mediated by three distinct Fc receptor classes on human leucocytes//J.Exp.Med.-1990.-V. 171.-P.133-1345.

141. Colavitti R., Pani G., Dedogni B., Anzevino R., Borello S., Walenberger J., Galeotti T. Reacive oxygen species as downstream mediators of angiogenic signaling by vascular growth facor receptor-2/KDR // J.Bio.Chem.-2002.-V.277, N 5.-P.3101-3108.

142. Comhair S.A.A., Erzurum S.C. Antioxidant responses to oxidant-mediated lung diseases//Am.J.Physiol.Lung.Cell.Mol.Physiol.-2002.-V.283.-P.246-255.

143. Connor M.J., Wheeler L.A. Depletion of cutaneous glutathione by ultraviolet radiation// Photochem. Photobiol.-1987.-V.46.-P.239-245.

144. Cowley H.C., Bacon P.J., Goode H.F. Plasma antioxidant potential in severe sepsis: a comparision of survivors and nonsurvivors// Crit.Care.Med.-1996.-V.24.-P.l 179-1183.

145. Curi T.C., De Melo M.P., Palanch A.C., Miyasaka C.K., Curi R. Percentage of phagocytosis, production of 02.-, H202 and NO, and antioxidant enzyme activities of rat neutrophils in culture//Cell.Biochem.Funct.-1998.-V. 16,N 1 .-P.43-49.

146. Cuzzocrea S., Riley D., Caputi A.P., Salvemini D. Antioxidant therapy:a new pharmacological approach in shock, inflammation, and ischemia/reperfusion in-jury//Pharmacol.Rev.-2001 .-V.53.-P. 135-159.

147. Czaja A.J., McAlhany J.C., Andeas W.A., Pruitt B.A. Acute gastric disease after cutaneous thermal injury //Arch.Surg.-1975.-V.l 10, N 5.-P.600-605.

148. D'Alesandro M.M., Gruber D.E. Quantative and functional alterations of peripheral blood neutrophils after 10% and 30% thermal injury// J.Burn Care Rehabil.-1990.-V.l 1, N4.-P.295-300.

149. Dahinden C., Fehr J. Granulocyte activation by endotoxin// J.Immunol.-1983.-V.130,N 6.-P.863-868.

150. Dahlgren C., Karlsson A. Respiratory burst in human neutrophils//.!. Immunol.Meth.-199.-V.232, Nl-2.-P.3-14.

151. Dahlgren C., Stendal O. Role of myeloperoxidase in luminol-dependent chemilumi-nescence of polymorphonuclear leucocytes// Infect.Immunity.-1983.-V.39, N2.-P.736-741.

152. Damtew B., Marino J.A., Fratianne R.B., Spagnuolo P.J. Neutrophil lipoxygenase metabolism and adhesive function following acute thermal injury// J.Lab.Clin.Med.-1993.-V.121, N2.-P.328-336.

153. Daryani R., LaLonde C., Zhu D., Weidner M., Knox J., Demling R.H. Effects of endotoxin and a burn injury on lung and liver lipid peroxidation and catalase activity// J.Trauma.-1990.-V.30, N1 .-P.1330-1334.

154. Davis C.F., Moore F.D., Rodrick M.L. Neutrophil actvation after burn injury: contribution of the classic complement pathway and of endotoxin// Surgery.- 1987.-V. 102.-P.477-484.

155. Day B.J., Batinic-Haberle J., Crapo J.D. Metalloporphyrins are potent inhibitors of lipid peroxidation// Free Radic.Biol.Med.-1999.-V.26.-P.730-736.

156. De Brandt J.P., Cholett-Martin S., Hernvann A., Lioret N., Du R.L., Lim S.K. Cytokine response to burn injury: relationship with protein metabolism// J. Trauma.-1994.-V.36.-P.624-628.

157. De Simone C., Rusciani L., Venier A., Larussa F.M., Littarru G.P., Oradei A., Lippa S., Serri F. Vitamin E and coenzyme Q10 content in human epidermis and basal cell epithelioma//J.lnvest.Dermatol.-1987.-V.89.-P.317.

158. Del Maestro R.F.An approach to free radicals in medicine and biology //Acta Physiol. Scand.,Suppl.492 (Symposium Issue)-1980.-P.153-168.

159. Demling R.H., LaLonde C. Early postburn lipid peroxidation: effect of ibuprofen and allopurinol// Surgery.-1990.-V. 107.-P.85-93.

160. Denisov E.T., Afanas'ev I.B. Oxidation and antioxidants in organic chemistry and biology// Taylor&Francis group, CRC Press, F1 2005.- 1005 P.

161. Deplancke B., Gaskins H.R. Redox control of the transsulfuration and glutathione biosynthesis pathways//Curr.Opin.Clin.Nutr.Metab.Care.-2002.-V.5.-P.85-92.

162. Desai M.H., Herndon D.N., Rutan R.L., Abston S., Linares H.A. Ischemic intestinal complications in patients with burns// Surg. Gynecol.Obstet.-1991.-V.172.-P.257-261.

163. Dominguez-Rosales J.A., Mavi G., Levenson S.M., Rojkind M. H2O2 is an important mediator of physiological and pathological healing responses// Arch.Med.Res.-2000.-V.31, N1.-P. 15-20.

164. Dong Y.L., Abdullah K., Yan T.Z., Rutan T., Broemeling L., Robson M., Herdon D.N., Waymack J.P. Effects of thermal injury and sepsis on neutrophil func-tion//J.Trauma.-1993.-V.34, N3.-P.417-421.

165. Douglas B., Weinberg H., Song Y., Silverman D.G. Beneficial effects of ibuprofen on experimental microvascular free flaps: pharmacologic alteration of no-reflow phenomenon//Plast.Reconstr.Surg.-1987.-V.79.-P.366-371.

166. Dowling E.J., Chander C.L., Claxson A.W., Lillie C., Blake D.R. Assessment of a human recombinant manganese superoxide dismutase in models of inflammation// Free Radic.Res.Commun.-1993 .-V. 18.-P.291 -298.

167. Dries D.J., Lorenz K., Kovacs E.J. Differential neutrophil traffic in gut and lung after scald injury//J.Burn Care Rehabil.-2001.-V.22, N3.-P.203-209.

168. Droge W. Free radicals in the physiological control of cell function // Physiological Reviews -2002.-V.82.-P.47-95.

169. Drost A.C., Burleson D.G., Gioffi W.G., Mason A.D., Pruitt B.A. Plasma cytokines after thermal injury and their relationship to infection// Ann.Surg.-l 993.-V.218.-P.74-78.

170. Efron D.T., Most D., Barbul A. Role of nitric oxide in wound healing// Curr.Opin.Clin.Nutr.Metab.Care-2000.-V.3.-P. 197-204.

171. Eiserich J.P., Baldus S., Brennan M.L., Ma W., Zhang C., Tousson A., Castro L., Lu-sis A.J., Nauseef W.M., White C.R., Freeman B.A. Myeloperoxidase, a leukocute-derived vascular NO oxidase// Science.-2002.-V.296, N5577.-P.2391-2394.

172. Ellman G.L.Tissue sulfhydryl groups// Arch.Biochem.Biophys.-1959.-V.82.- P.70-77.

173. Englert R.P., Shacter E. Distinct modes of cell death induced by different reactive oxygen species//J.Biol.Chem.-2002.-V.277, N23.-P.20518-20526.

174. Eski M., Deveci M., £elikoz., Nisanci M., Ttiregiin M. Treatment with cerium nitrate bathing modulate systemic leukocyte activation following burn injury: an experimental study in rat cremaster muscle flap//Burns.- 2001.- V.27.-P.739-746.

175. Fadeel B., Kagan V.E. Apoptosis and macrophage clearance of neutrophils: regulation by reactive oxygen species // Redox Rep.- 2003.-V.8, N 3.-P.143-150.

176. Fang F.C. Antimicrobial reactive oxygen and nitrogen species: concepts and controversies// Nature Rev.Microbio.-2004.-V.2.-P.820-832.

177. Fang W., Yao Y., Shi Z. The time course and tissue distribution of endotoxin in rats after thermal injury// Zhonghua Zheng Xing Shao Shang Wai Ke Za Zhi.-1999.-V.15, N4.-P.298-300.

178. Farriol M., Fuentes F., Venereo Y., Solano I., Orta X., Segovia T. Antioxidant capacity in severely burned patients// Pathol.Biol.-2001.-V.49, N3.-P.227-231.

179. Faunce D.E., Gregory M.S., Kovacs E.A. Acute ethanol exposure prior to thermal injury results in decreased T cell responses mediated in part by increases in IL-6 production// Shock.-1998.-V. 10.-P. 135-150.

180. Fazal N., Al-Ghoul W.M., Choudhry M.A., Sayeed M.M. PAF receptor antagonist modulates neutrophil responses with thermal injury in vivo//Am. J. Physiol. Cell Physiol.-2001 .-V.281, N4.-P. 1310-1317.

181. Fazal N., Al-Ghout W.M., Schmidt M.J., Choudhry M.A., Sayeed M.M. Lyn- and ERK-mediated vs. Ca2+-mediated neutrophil 02- responses with thermal injury// Am.J.Physiol.Cell Physiol.-2002.-V.283.-P. 1469-1479.

182. Fazal N., Knaus U.G., Sabeh F., Gamelli R.L., McNulty J.A., Sayeed M.M. Enhanced expression of neutrophil NADH oxidase components in intestine of rats after burn injury//Shock.-1999.-V. 12, N6.-P.438-442.

183. Fearon D.T., Collins L.A. Increased expression of C3b receptors on plymorphonu-clear leucocytes induced by chemotactic factors and by purification procedures// J.Immunol.-1983.-V.130, N 1.-P.370-375.

184. Ferrara N., Henzel W.J. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding growth factor specific for vascular endothelial cells // Biochem.Biophys.Res.Commun.-1989.-V.161, N 2.-P.851 -858.

185. Fletcher J., Haynes A.P., Crouch S.M. Acquired abnormalities of polymorphonuclear neutrophil function//Blood Rev.-1990.-V.4, N2.-P. 103-110.

186. Foccati G., Bucknall R.C., Edwards S.W. Insoluble and soluble immune complexes activate neutrophils by distinct activation mechanisms: changes in functional responses induced by priming with cytokines// Ann.Rheum.Dis.-2002.-V.61, N1.-P.13-19.

187. Frank S., Munz B., Werner S. The human homologue of a bovine non-selenium glutathione peroxidase is a novel keratinocyte growth factor regulated gene// Oncogen -1997.-V.14.- P.915-921.

188. Friedl H.P., Till G.O., Trentz O., Ward P.A. Roles of histamine,comlement and xanthine oxidase in thermal injury of skin//Am.J.Pathol.-1989.-V.135, N1.-P.203-217.

189. Frisman E., Drozda D., Sipulova A., Racz 0., Babik J. Total antioxidant capacity of serum and prognostic indices in patients with burn trauma//Acta Chir.Plast.-2004.-V.46,Nol.-P.19-22.

190. Fritzsche R., De Week A.L. Chemiluminescence microscopy rveals functional heterogeneity in single neutrophils undergoing oxygen burst//Eur.J.Immunol.-1988.-V.18,N 5.-P.817-820.

191. Fuchs J., Huflejt M.E., Rothfuss L.M., Wilson D.S., Carcanmo G., Packer L. Impairment of enzymatic and nonenzic antioxidants in skin by UVB irradiation// J.Invest.Dermatol.-1989.-V.93.-P.769-773.

192. Fujisawa M., Kojima K., Beppu T., Futagawa K., Hiramatsu K. Early diagnosis of postoperative infection: assessment of whole blood chemiluminescence// Surg.Today -2000.-V.30, N4.-P.309-318.

193. Fujita T., Yamazaki Y. Influence of surgeon's volume on early outcome after total gasrectomy // Eur.J.Surg.-2002.-V.168, N 10.-P.535-538.

194. Fukai T., Folz R.J., Landmesser U., Harrison D.G. Extracellular superoxide dismu-tase and cardiovascular disease// Cardiovascular Res.-2002.-V.55.-P.239-249.

195. Fukasawa J., Kagaya K. Host defence mechanisms against fungal infection// Micro-bio.Sciences.-1988.-V.5, N 4.-P.124-127.

196. Fukushima R., Alexander J.W., Wu J.Z., Mao J.X. Time course of production of cytokines and prostaglandine E2 by macrophages isolated after thermal injury and bacterial translocation// Circ.Shock.-1994.-V.42.-P. 154-162.

197. Gaeta L.M., Tozzi G., Pastore A., Federici G., Bertini E., Piemonte F. Determination of superoxide dismutase and glutathione peroxidase activities in blood of healthy pediatric subjects// Clinica Chimica Acta.-2002.-V.322.-P.l 17-120.

198. Gallova L., Kubala L., Ciz M., Lojek A. IL-10 does not affect oxidative burst and expression of selected surface antigen on human blood phagocytes in vitro//Physiol.Res.-2004.-V.53.-P. 199-208.

199. Garner W.L., Rodriguez J.L., Miller C.G., Till G.O., Rees R.S., Smith D.J., Remick D.G. Acute skin injury releases neutrophil chemoattractants//Surgery.- 1994,- V. 116.-P.42-48.

200. Garrel C., Fontecave M. Nitric oxide: chemistry and biology. In Analysis of free radicals in biological systems.-Birkhauser Verlag, 1995.-P.21-36.

201. Gartner R., Albrich W., Angstwurm M.W. The effect of a selenium supplementation on the outcome of patients with severe systemic inflammation, burn and trauma//Biofactors.-2001 .-V.14, N1-4.- P. 199-204.

202. Gaut J.P., Byun J., Tran H.D., Lauber W.M., Carrol J.A., Hotchkiss R.S., Belaaouaj A., Heinecke J.W. Myeloperoxidase produces nitrating oxidants in vivo//J.Clin.Invest.-2002.-V.109.-P.1311-1319.

203. Gerschenson.L.E., Rotello R.J. Apoptosis: a different type of cell death// FASEB J.-1999.-V.6.-P.2350-2355.

204. Giroir B., Horton J.W., White D.J., Mclntyre K.L., Lin C.Q. Inhibition of tumor necrosis factor prevents myocardial dysfunction during burn shock.//Am.J.Physiol.-1994.-V.267.-P.118-124.

205. Girolomoni G., Pastore S., Albanesi C., Cavani A. Targeting tumor necrosis factor-alpha as potential therapy in inflammatory skin diseases// Curr.Opin. Investig. Drugs.-2002.-V.3, N11.-P.1590-1595.

206. Glasser L., Fiederlein RL The effect of various cell separation procedures on assays of neutrophil function // Am. J. Clin. Pathol. -1990.-V.93-P. 662.

207. Godin C., Caprani A. Interactions between neutrophils and endothelial cells // J.Cell. Sci.-1993.-V. 106.-P. 441-451.

208. Goldstein R.K., Augustin A., Milz J. Influence of free radical scavengers on myeloperoxidase activity and lipid peroxidation in acute skin grafts// Oxygen Transport to Tissue XIII.-Ed.Goldstick T.K., Plenum Press.-N.Y.-P.253-258.

209. Gonzalez-Rubio M., Voit S., Rodriguez-Puyol D. Oxidative stress induces tyrosine phosphorylation of PDGF alpha and beta-receptors and pp60c-src in mesengial cells// Kidney Int.-1996.-P.164-173.

210. Granger D.N. Role of xanthine oxidase and granulocytes in ischemia-reperfusion injury//Am. J.Physiol. 1988.-V.255.-P.1269-1275.

211. Granger D.N., Korthuis R.J. Physiological mechanisms of postischemic tissue injury// Annu. Rev.Physiol.-1995.-V.57.-P.311-332.

212. Griffin M.J., Mullinax P.J. High concentrations of bacterial lipopolysaccharide, but not microbial infection-induced inflammation activate macrophage C3 receptors for phagocytosis//J.Immunol.-1990.-V. 142, N 2.-P.697-701.

213. Griffiths S.W., Cooney C.L. Relationship between protein structure and methionine oxidation in recombinant human alpha antitrypsin // Biochemistry .-2002.-V.41.-P.6245-6252.

214. Grisham M.B., Everse J., Janssen H.F. Endotoxemia and netrophil activation in vivo//Am J Physiol.-1988.-V.254, N5.-P.1017-1022.

215. Grisham M.B., Granger D.N., Lefer D.J. Modulation of leukocyte-endothelial interactions by reactive metabolites of oxygen and nitrogen: relevance to ischemic heart desease // Free Rad.Biol.Med.-1998.-V.25.-P.404-433.

216. Grossmann A., Wendel A. Preparation of glutathione peroxidase from bovine erythrocytes// in Handbook of Methods for Oxygen Radical Research, ed.R.A.Greenwald.-CRC Press.-1985.-P.39-45.

217. Gruber D.F., D'Alesandro M.M. Alteration of rat polymorphonuclear leukocyte function after thermal injury//J.Burn Care Rehabil.-1989.-V.10, N5.-P.394-401.

218. Gruñe T., Davies K.J. Breakdown of oxidized proteins as a part of secondary antioxidant defenses in mammilian cells// Biofactors.-1997.-V.6, N2.-P.165-172.

219. Gu T., Sun Y. Changes in erythrocyte fluidity, fragility and deformability and serum lipid peroxid content in early burn period// Zhonghua Zheng Xing Shao Shang Wai Ke Za Zhi.-1994.-V.10, N 2.-P.124-126.

220. Guichardant M., Valette-Talbi L., Cavadini C., Crozier G., Berger M. Malondialde-hyde measurement in urine// J.Chromatogr.Biomed.Appl. 1994.-V.655, Nl.-P.l 12-116.

221. Habig W.R., Pbst M.J., Jakpoly W.B. Glutathione transferase.A first enzymatic step in mercuratic acid formation// J.Biol.Chem.-1974.-V.249.-P.7130-7139.

222. Halliwell B., Gutteridge J.M. Free radicals in biology and medicine.-Clarendon Press, Oxford, 1989.- 541 p.

223. Halliwell B., Whiteman M. Measuring reactive species and oxidative damage in vivo and in cell culture: how should you do it and what do the result mean?// Br.J.Pharmacol.-2004.-V.142.-P.231-255.

224. Hampton M.B., Kettle A.J., Winterbourn C.C. Involvement of superoxide and myeloperoxidase in oxygen-derived killing of Staphylococcus aureus by neutrophils// In-fect.Immun.-1996.-V.64.-P.3512-3526.

225. Hardy M.M., Flickinger A.G., Riley D.P., Weiss R.H., Ryan U.S. Superoxide dismu-tase mimetics inhibit neutrophil—mediated human aortic endothelial cell injury in vitro// J.Biol.Chem.-l 994.-V.269.-P. 18535-18540.

226. Hasenbrough JF, Wikstrom T, Braide M, Tenenhaus M, Rennekamfe OH, Kiessig V, Bjursten L. Neutrophil activation and tissue neutrophil sequestration in a rat model of thermal injury//J.Surg.Res.-1996.- V.61.- P. 17-22.

227. Hasslsen S.R., Ahrenholz D.H., Solem L.D., Nelson R.D. Actin polymerization contrbutes to neutrophil chemotactic dysfunction following thermal injury// J.Leuk.Biol.-1992.-V.52.-P.495.

228. Haycock J.W., Ralston D.R., Morris B., Freedlander E., MacNeil S. Oxidative damage to protein and alterations to antoxidant levels in human cutaneous thermal injury// Burns.-1997.-V.23,N7-8.-P.533-540.

229. He L.K., Liu L.H., Hahn E., Gaelli R.L.The expression of cyclooxygenase and the production of prostaglandin E2 in neutrophils after burn injury and infection// J.Burn Care Rehabil.-2001.-V.22, N1.-P.58-64.

230. Heggers J.P., Loy G.L., Del Beccaro E.J. Histological demonstration of prostaglandins and tromboxanes in burned tissue// J.Surg.Res.-1980.-V.28.-P.l 10-117.

231. Hermanowsky-Vosatka A., Detmers P.A., Gotze O. Clusering of ligand on the surface of a particle enhances adhesion to receptor-bearing cells// J.Biol.Chem.-1988.-V.263.-P.17822-17827.

232. Hewitt H., Whittle S., Lopez S., Bailey E., Weaver S. Topical use of papaya in chronic skin ulcer therapy in Jamaica// West Indian Med.J.-2000.-V.49, N1.-P.32-33.

233. Hirche T.O., Gaut J.P., Heinecke J.W., Belaouaj A. Myeloperoxidase plays critical roles in killing Klebsiella pneumoniae and inactivating neutriphil elastase: effects on host defense// J.Immunol.-2005.-V.174, N3.- P. 1557-1565.

234. Hodgson E.K., Fridovich I. The interaction of bovine erythrocyte superoxide dismu-tase with hydrogen peroxide inactivation of the enzyme//Biochemistry.- 1975.-V.14.-P.5294-5299.

235. Holan V., Krulova M., Pindjakova J., Zajicova A. The role of macrophages and nitric oxide in the effecor phase of allotransplantation reaction// Ann.Transplant.-2001.-V.6, N 1.-P.44-46.

236. Holzheimer R.G., Molloy R.G., Gorlach H., Wilkert S., Hehrlein F. IL-6 and TNF alpha release in association with neutrophil activation after cardiopulmonary bypass surgery // Infection.-1994.-V.22, N 1.-P.37-42.

237. Horton J.W. Free radicals and lipid peroxidation mediated injury in burn trauma: the role of antioxidant therapy// Toxicol.-2003.-V.189.-P.75-88.

238. Hoy A., Leininger-Muller B., Kutter D., Siest G., Visvikis S. Growing Significance of myeloperoxidase in non-infectious diseases// Clin.Chem.Lab.Med.-2002.-V.40, N1.-P.2-8.

239. Hu Z., Sayeed M.M. Supression of mitochondria-dependent neutrophil apoptosis with thermal injury// Am.J.Cell.Physiol.-2004.-V.286, N1 .-P.170-178.

240. Hu Z., Sayeed M.M. Supression of mitochondria-dependent neutrophil apoptosis with thermal injury // AmJ.Physiol.Cell Physiol.- 2004.-V.286, N 1.-P.170-178.

241. Huang N.F., Zac-Verghese S., Luke S. Apoptosis in skin wound healing// Wounds.-2002.-V.15,N6.-182-194.

242. Huo T.N., Fang R.H., Wei Y.H. Changes in lipid peroxide levels in the plasma of patients with thermal skin injuries// J.Formos.Med.Assoc.-1993.-V.92, N12.-P.1034-1039.

243. Hupkens P.,Boxma H., Dokter J. Tannic acid as a topical agent in burns: historical considerations and implication for new developments// Burns.-1995.-V.21.-P.57-61.

244. Ichikawa H., Wolf R.E., Aw T.Y., Ohno N. Coe L., Grander D.N., Yoshikawa T., Alexander J.S. Exogenous xanthine promotes neutrophil adherence to cultured endothelial cells// Am. J.Physiol.-1997.-V.273, N2Ptl.-P.342-347.

245. Im M.J., Hooper J.E. Age-dependent decrease in superoxide dismutase activity in rat skin//J.Invest.Dermatol.-1984.-V.82.-P.437.

246. Isozaku H., Nishino H., Sako S., Naomoto Y., Tanaka N. The relationship between levels of neutrophil-related facors and the degree of surgical stress// Int.Surg.-1999.-V.84.-P.105-110.

247. Jackson D.M. The diagnosis of the depth of burning// Br.J. Surg.-1953.-V.40.-P.588-596.

248. Jancinova V., Drabikova K., Nosal R., Danielova E. Platelet-dependent modulation of polymorphonuclear leukocyte chemiluminescence// Platelets.-2000.-V.ll, N5.-P.278-285.

249. Jattela M. Heat shock proteins as cellular lifeguards // Ann.Med.-1999.-V.31.-P.261-271.

250. Jeter E.K., Spivey M.A. Noninfectious complications of blood transfusion// Hema-tol.Oncol.Clin.North Am .-1995.-V.9.-P. 187-204.

251. Jia X., Zhu Z., Kong Q. The changes in TNF alpha in plasma and eschar of rats after thermal injury// Zhonghua Zheng Xing Shao Shang Wai Ke Za Zhi.-1996.-V.12, N 5.-P.367-371.

252. Jiang X., Wu T.H., Rubin R.L. Bridging of neutrophils to target cells by opsinized zymosan enhances the cytotoxicity of neutrophil-produced H202// J.Immunol.-1997.-V.159, N5.-P.2468-2475.

253. Johansson A., Dahlgren C. Luminol-amplified chemiluminescence activity in human monocytes: a comparision with the activity induced in granulocytes// J.Biolum.Chemilum.-1990.-V.5.-P.37-41.

254. Jozef L., Filep J.P. Selenium-containing compounds attenuate peroxynitrite-mediated NF-kappa B and AP-1 activation and interleukin-8 gene and protein expression an human leukocytes// Free Radic.Bio.Med.-2003.-V.35, N9.-P.1018-1027.

255. Kanwar S., Kubes P. Nitric oxide is an atiadhesive molecule for leukocytes// New Horizons.-1995.-V.3,Nl.-P.93-103.

256. Kaufman T, Neuman RA, Weinberg A Is postburn dermal ischemia enhanced by oxygen free radicals?//Burns.- 1989.-V.15.-P. 291-294.

257. Kehlet H, Jorgen Nilsen H: Impact of laparoscopic surgery on stress responses, im-munofunction, and risk of infectious complications//New Horizons-1998.-V.6.-P.80-88.

258. Kehrcr J.P. Free radicals as mediators of tissue injury and desease// Crit. Rev. Toxicol.-1993. V.23.-P.21-48.

259. Kehrer J.P. The Haber-Weiss reaction and mechanisms of toxicity// Toxicology.2000.-V.149, N 1.-P.43-50.

260. Kelly J.L., O'Sallivan C., O'Riordan M., O'Riordan D., Lyons A., Doherty J., Man-nick J.A., Rodrick M.L. Is circulating endotoxin the trigger for the systemic inflammatory response syndrome seen after injury?// Ann.Surg.-1997.-V.225, N5.-P.530-541.

261. Kelner M.J., Uglik S.F. Superoxide dismutase abolishes the platelet-derived growth factor-induced release of prostaglandin E2 by blocking induction of nitric-oxide synthase: role of superoxide// Arch.Biochem.Biophys.-1995.-V.322.-P.31-38.

262. Kemp A., Turner M.W. The role of opsonins in vascular sealing and the ingestion of zymosan by neutrophyls// Immunology.-1986.-V.59, N 1.-P.69-74.

263. Kerrigan C.L., Zelt R.G., Damiel R.K. Secondary critical ischemia time of experimental skin flaps//Plast.Reconstruc. Surg.-1984.-V.74.-P.522-524.

264. Khanna S.S., Roy D., Bagghi Upregulation of oxidant-induced VEGF expression in cultured keratinocytes by a grape seed proanthocyanidin extract// Free Rad.Biol.Med.2001.-V.31.-P.38-42.

265. Khdor B., Khalil Z. Modulation of inflammation by oxygen species: implications for aging and tissue repair//Free Rad.Biol.Med.-2001.-V.30, Nl.-P.l-8.

266. Kheradmand F., Werner E., Tremble P. Role of Racl and oxygen radicals in colla-genase-1 expression induced by cell shape change// Science.-1998.-V.280.-P.898-902.

267. Kim S.H., Johson V.J., Shin T.Y., Sharma R.P. Selenium attenuates lipopolysaccha-ride-induced oxidative stress responses through modulation of p38 MAPK and NF-kappaB signalling pathways.// Exp.Biol.Med.(Maywood).-2004.-V.229, N2.-P.203-213.

268. Kim Y.P., Lee S.C. Superoxide dismutase activities in the human skin// The biological role of reactive oxygen species in skin. Ed. Hayaishi O., Miyachi Y.- Tokyo: University of Tokyo Press and N.Y.: Elsevier, 1987.-P.225-230.

269. Kimura J., Hayakari M., Kumano T., Nakano H., Satoh K., Tsuchida S. Altered glutathione transferase levels in rat skin inflamed due to contact hypersensitivity: induction of the Alpha-class subunit 1// Biochem.J.-1998.-V.335.-P.605-610.

270. Kinnula V.L., Soini Y., Kvist-Makela K., Savolainen E.R., Koistinen P. Antioxidant defense mechanisms in human neutrophils// Antioxid.Redox.Signal.-2002.-V.4, N1.-P.27-34.

271. Kirschfink M., Mollnes T.E. CI-inhibitor: an anti-inflammatory reagent with therapeutic potential // Expert Opin.Pharmacother.-2001.-V.2, N 7.-P.1073-1083.

272. Klausner J.M., Paterson I.S., Goldman G., Kobzik L., Lelcuk S., Skornick Y., Eberlein T., Valeri C.K., Shepro D., Hechtman H.B. Interleukin-2-induced lung injury is mediated by oxygen free radicals // Surgery.-199l.-V. 108, N 2.-P.169-175.

273. Klebanoflf S.J. Myeloperoxidase// Proc.Assoc.Am.Physicians.-1999.-V.l 11, N5.-P.383-389.

274. Kobayashi S.D., Deleo F.R. An apoptosis differentiation programme in human polymorphonuclear leucocytes // Biochem.Soc.Trans.- 2004.-V.32.-P.474-476.

275. Kohen R., Oron M., Zlkowicz A., Kanevsky E., Farfouri S., Wormser U. Low molecular weight antioxidants released from the skin's epidermial layers: an age dependent phenomenon in the rat// Exp.Gerontol.-2004.-V.39.-P.67-72.

276. Kono Y, Fridovich I. Superoxide radical inhibits catalase// JBC.- 1982.- Vol.275., No.l.- P.5751-5754.

277. Kopac B., Buzadzic B. Oxidative stress and antioxidative defense in the skin of rats with thermal injury// Jugoslov.Med.Biohem.-2003.-V.22.-P.33-39.

278. Kopprasch S, Graessler J, Kohl M, Bergmann S, Schroder HE. Comparison of circulating phagocyte oxidative activity measured by chemiluminescence in whole blood and isolated polymorhonuclear leucocytes// Clin. Chim. Acta 1996.-V. 253 .-P. 145-157.

279. Kossi J., Peltonen J., Ekfors T., Niinikoski J., Laato M. Effects of hexose sugars: glucose, fructose, galactose and mannose on wound healing in the rat// Eur.Surg.Res.-1999.-V.31.-P.74-82.

280. Kowal-Vern A., McGill V., Gamelli R.L. Ischemic necrotic bowel gisease in thermal injury // Arch. Surg.-1997.-V.132, N 4.-P.440-443.

281. Kowal-Vern A., Walenga J.M., Hoppensteadt D., Sharp-Pucci M., Gamelli R.L. In-terleukin-2 and interleukin-6 in relation to burn wound size in the acute phase of thermal injury//J.Am.Coll.Surg.-1994.-V.178, N4.-V.357-362.

282. Krause S, Michel E., Brachmann P., Losche W., Heptinstall S., Till U. Cellular chemiluminescece of activated phagocytes of whole blood// Folia Haematol. Int. Mag. Klin.Morphol.Blutforsch.-1989.-V. 116, N6.-P.955-965.

283. Krischel V., Broch G.D., Suschek C. Biphasic effect of exogenous nitric oxide on proliferation and differentiation in skin derived keratinocytes but not fibroblasts // J.Invest.Dermatol.-1998.-V.l 11.-P.286-291.

284. Kulkarni S.K., Jain N.K., Singh A. Cyclloxigenase isoenzyme and newer therapeutic potential for selective COX-2 inhibitors// Methods Find. Exp. Clin. Pharmacol.-2000.-V.22.-P.291-298.

285. Kumar R., Seth R.K., Sekhon M.S., Bhargava J.S. Serum lipid peroxide and other enzyme levels of patients suffering from thermal injury// Burns.-1995.-V.21, N2.-P.96-97.

286. La Celle P., Blumenstock F.A., McKinley C., Saba T.M., Vincent P.A., Gray V. Blood-borne collagenous debris complexes with plasma fibronectin after thermal injury// Blood.-1990.-V.75, N2.-P.470-478.

287. LaLonde C., Hennigan J., Nayak U., Demling R. Energy charge potential and glutathione levels as predictors of outcome following burn injury complicated by endotoxe-miaII Shock.- 1998.-V.9, N1.-P.27-32.

288. LaLonde C., Nayak U., Hennigan J., Demling R. Antioxidants prevent the cellular deficit produced in response to burn injury.// J.Burn Care Rehabil.-1996.-V.17, N5.-P.379-383.

289. LaLonde C., Nayak U., Hennigan J., Demling R.H. Excessive liver oxidant stress causes mortality in response to burn injury combined with endotoxin and is prevented with antioxidants//J.Burn Care Rehabil.-1997.-V.18, N3.-P. 187-192.

290. Larochelle S., Langlois C., Thibault I., Lopez-Valle C.A., Roy M., Moulin V. Sensitivity of myofibroblasts to H202-mediated apoptosis and their antioxidant cell network// J. Cell.Physiol.-2004.-V.200, N2.-P.263-271.

291. Laubach V.E., Shesely E.G., Smithies 0., Sherman P.A. Mice lacking inducible nitric oxide synthase are not resistant to lipopolysaccharide-induced death// Proc. Natl. Acad.Sci.USA.-1995.-V.92.-P. 10688-10692.

292. Leaf A. Cell swelling: a facet of ischemic tissue injury// Circulatin.-1973.-V.48.-P.455-458.

293. Lee C.,Miura K., Liu X., Zweier J.L. Biphasic regulation of leukocyte superoxide generation by nitric oxide and peroxinitrite// J.Biol.Chem.-2000.-V.275, N50.-P.38965-38972.

294. Leff J.A., Burton L.K., Berger E.M., Anderson B.O., Wilke C.P., Repine J.E. Increased serum catalase activity in rats subjected to thermal skin injury// Inflammation.-1993.-V.17, N2.-P. 199-204.

295. Li Y., Metori K., Koike K. Granuloma maturation in the rat is advanced by the oral administration of Eucommia ulmoides Oliver leaf.// Biol.Pharmaceut.-2000.-V.23.-P.60-65.

296. Li Z., Yang Z., Luo X. Effects of CD11/CD18 on adhesion between endothelial cell and PMN and its expression in early stage postburn// Zhonghua Zheng Xing Shao Shang Wai Ke Za Zhi.-1997.-V.13, N5.-P.373-376.

297. Liekens S., De Clercq F., Neyts J. Angiogenesis: regulators and clinical applications// Biochem.Pharmacol.-2001 .-V.61 .-P.253-270.

298. Lindena J., Burkhardt H., Dwender A. Mechanisms of non-opsonized zymosan-induced and luminol-enhanced chemiluminescence in whole blood and isolated phagocytes//J.Clin.Chem.Biochem.-1987.-V.25.-P.765-778.

299. Little D., Regan M., Keane R.M. et al. Perioperative immune modulation// Surgery.-1993.-V. 114.-P.87-91.

300. Liu S., Adcock I.M., Old R.W., Barnes R.J., Evans T.W. Lipopolysaccharide treatment in vivo induces wide-spread tissue expression of inducible nitric oxide synthase mRNA// Biochem.Biophys.Res.Commun.-l 993.-V. 196.-P. 1208-1213.

301. Liu X.S., Luo Z.H., Yang Z.C., Li A.N. Clinical significance of alterations of plasma prostaglandin E2 (PGE2) in severely burned patients// Burns.-1996.-V.22.-P.298-302.

302. Ljunghusen 0., Berg S., Hed J., Lundahl J., Nettelblad H., Sjogren F., Stendahl 0. Transient endotoxemia during burn wound revision causes leukocyte beta 2 integrin up-regulation and cytokine release// Inflammation.-1995.-V. 19, N4.-P.457-468.

303. Loegering D.J. Intravascular hemolysis and RES phagocytic and host defence functions// Circ Shock.-1983.-V. 10, N4.-P.383-395.

304. Lojek A., Ciz M., Marnila P., Duskova M., Lilius E.M. Measurement of whole blood phagocyte chemiluminescence in the Wister rat// J.Biolumin.Chemilumin.-1997.-V.12, N5.-P.225-231.

305. Lowry O.H., Rosenbrough N.F., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent//J.Biol.Chem.-l 951.-V. 193.-P.265-270.

306. Lu W., Chen Y., Xia Z. Direct detection of oxygen free radicals produced in the viscera of burned rats using electron paramagnetic resonance spectroscopy// Chin.J.Traumatol.-2002.-V.5, N2.-P.118-120.

307. Ma Q., Kinneer K., Ye J., Chen B.J. Inhibition of nuclear factor kB by phenolic anti-oxidants:interplay between antioxidant signalling and inflammatory cytokine expression// Mol.Pharmacol.-2003.-V.64.-P.211-219.

308. Maguire J.J., Wilson D.S., Packer L. Mitochondrial electron transport-linked toco-pheroxyl radical reduction// J.Biol.Chem.-1989.-V.264.-P.21462-21465.

309. Mahoney E., Reichner J., Bostom L.R., Mastrofrancesco B., Henry W., Albina J. Bacterial colonization and the expression of inducible oxidase synthase in murine wounds // Am.J.Pathol.-2002.-V. 161, N 6.-P.2143-2152.

310. Maier K.L., Matejkova E., Hinze H., Leuschel L., Weber H., Beck-Speier I. Different selecivities of oxidants during oxidation of methionine residues in the alpha-1-proteinase inhibitor // FEBS Lett.-1989.-V.250.-P.221-226.

311. Manesh J., Daly J., Cheadle W.G., Kotwal C.J. Elucidation of the early events contributing to zymosan-induced multiple organ dysfunction syndrome using MIP-1 alpha, C3 knockout, and C5-deficient mice // Shock.-1999.-V.12.-P.340-349.

312. Manious M.R., Ertel W., Chaudry I.H. The gut: a cytokine-generating organ in systemic inflammation// Shock.-1995.-V.4.-P.193-199.

313. Mantle D., Gok M.A., Lennard T.W. Adverse and beneficial effects of plant extracts on skin and skin disoerders// Adverse Drug React.Toxicol.Rev.- 2001.-V.20, N2.-P.89-103.

314. Marano M.A., Moldawer L.L., Fong Y., Wei H., Mimei J., Yurt R. Cachetin/TNF production in experimental burns and Pseudomonas infection// Arch.Surg.-1988.-V.123.-P.1383-1388.

315. Marini M., Frabbetti F., Musiani D., Franceschi C. Oxygen radicals induce stress proteins and tolerance to oxidative stress in human monocytes // Int.J.Radiat.Biol.-1996.-V.70.-P.337-350.

316. Masaki H., Okano Y., Sakurai H. Differential role of catalase and glutathione peroxidase in cultured human fibroblasts under exposure of H202 or ultraviolet B light// Arch. Dermatol. Res.-1998.-V.290, N3.-P.113-118.

317. Mashino T., Fridovich I. Reaction of hypochlorite with catalase// Biochim.Biophys. Acta.-1988.-V.956, N1.-P.63-69.

318. Mason R.P., Chignell C.F. Free radicals in pharmacology and toxicology selected topics// Pharmacol.Rev.-1982.-V.33.-P. 189-211.

319. Maxwell S.R. Prospects for the use of antioxidant therapies// Drugs.-1995.-V .49.-P.345-361.

320. Mayers I. The nonspecific inflammatory response to injury// Can.J.Anaesth.-1998.-V.45, N9.-P.871-879.

321. Mayo J.C., Tan D.X., Sainz R.M., Lopez-Burillo S., Reiter R.J. Oxidative damage to catalase induced by peroxyl radicals: functional protection by melatonin and other antioxidants// Free Rad.Res.-2003.-V.37, N5.-P.543-553.

322. McClenahan D., Fagliari J., Evanson 0., Weiss D. Role of inflammatory mediators in priming, activation, and deformability of bovine neutrophils// Am.J.Vet.Res.-2000.-V.61, N5.-P.492-498.

323. Mclntyre T.M., Modur V., Prescott S.M., Zimmerman G.A. Molecular mechanisms of early inflammation // Thromb.Haemost.-1997.-V.78.-P.302-305.

324. McMillen M.A., Huribal M., Sumpio B. Common pathway of endothelial-leukocyte interaction in shock, ischemia and reperfusion// Am.J.Surg.-1993.-V.166.-P.557-562.

325. Meagher LC, Savill JC, Baker A, Fuller RW, Haslett C. Phagocytosis of apoptotic neutrophils does not induce macrophage release of thromboxane B2// J. Leuk. Biol .-1992.-V. 52.-P.269-277.

326. Mealy K, O'Farrelly C, Stephens R et al Impaired neutrophil function during anesthesia and surgery is due to serum factors// J. Surg. Res.-1987.-V.43.-P.393-397.

327. Melezynska-Matej M., Koziell J., Tolkacz M., Czernik J., Grzybek-Hryncewicz K. The dependence of serum opsonic activity on fibronectin and alpha-1 acid glycoprotein levels in children with burns// Pediatr.Pol.-1996.-V.71, N6.-P.511-516.

328. Mellors A., Tappel A.L. The inhibition of mitochondrial peroxidation by ubiquinone and ubiquinole//J.Biol.Chem.-1966.-V.241.-P.4353-4356.

329. Meyer T.N., da Silva A.L., Vieira E.C., Alves A.C. Heat shock response reduces mortality after severe experimental burns // Burns.-2000.-V.26.-P.233-238.

330. Mileski W., Gates B., Sigman A. Inhibition of leukocyte adherence in a rabbit model of major thermal injury// J. Burn Care Rehabil.-1993.-V.14.-P.610-616.

331. Milesky W., Borgstrom D., Lightfoot E., Rothlein R., Faanes R., Lipsky P., Baxter C Inhibition of leukocyte-endothelial adherence following thermal injury// J.Surg.Res.-1992.-V.52, N4.-P.334-339.

332. Misra H.P., Fridovich I. The role of superoxide anion in the autooxidation of epinephrine and a simple assay for superoxide dismutase// J.Biol.Chem.-1972.-V.247.-P.3170.

333. Mitchell J.A., Akarasereenont P., Thiermermann C., Flower R.J., Vane J.R. Selectivity of nonsteroidal antiinflammatory drugs as inhibitors of constitutive and inducible cy-clooxygenase// Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1993.-V.90.-P.l 1693-11697.

334. Morhenn V. Langerhans cells may trigger the psoriatic disease process via production of nitric oxide// Immunology Today 1997.-V.18, N 9.-P.433-436.

335. Moriwaki Y., Sugiyama M., Ozawa Y., Mochizuki Y., Kunisaki C., Kaiya N., Yama-zaki Y., Suda T. Changes in the response of neutrophils to endotoxin priming following major abdominal surgery// World J.Surg.-2002.-V.26.-P.521-526.

336. Morrison D.C., Bucklin S.E. Evidence for antibiotic-mediated endotoxin release as a contributing factor to lethality in experimental gram-negative sepsis// Scand.J.Infect.Dis. Suppl.-1996.-V.101.-P.3-8.

337. Moseley R., Hilton J.R., Waddington R.J., Harding K.G., Stephens P., Thomas D.W. Comparision of oxidative stress biomarker profiles between acute and chronic wound environments//Wound Rep.Reg.-2004.-V.12.-P.419-429.

338. Mosher M., Hurst T.S., Mayers I., Johnson D.H. Lazaroids-not nitric oxide inhibitors-improve hemodynamics after thermal injury in anesthetized guinea pigs.// J. Burn Care Rehabil.-l 996.-V. 17, N 4.-P.294-301.

339. Muangman P., Sullivan S.R., Honari S., Engrav L.H., Heimbach D.M., Gibran N.S. The optimal time for early excision in major burn injury.//J.Med.Assoc.Thai.-2006.-V.89, N 1.-P.29-36.

340. Muller J.M., Rupee R.A., Baeuerle P.A. Study of the gene regulation by NF-kappa B and AP-1 in response to reactive oxygen intermediates // Methods.-1997.-V.11, N3.-P.301-312.

341. Mulligan M.S., Till G.O., Smith C.W. Role of leukocyte adhesion molecules in lung and dermal vascular injury after thermal trauma of skin// Am.J.Pathol.-1994.-V.144.-P.1008-1015.

342. Munz B., Frank S, Hubner G, Olsen E, Werner S. A novel type of glutathione peroxidase: expression and regulation during wound repair//Biochem J.- 1997.-V.326.-P.579-585.

343. Murphy H.S., Warner R.L., Bakopoulos N., Dame M.K., Varani J., Ward P. Endothelial cell determinants of susceptibility to neutrophil-mediated killing// Shock.-1999.-V.12,N1.-P.111-117.

344. Murphy J.T., Duffy S., Purdue G.F., Hunt J.L. Thermal injury alters endothelial vasoconstrictor and vasodilator response to endotoxin// J.Trauma.-1999.-V.47, N3.-P.492-499.

345. Murphy T.J., Paterson H.M., Kriynovich S., Zang Y., Kurt-Jones E.A., Mannick J.A., Lederer J.A. Linking the "two-hit" response following injury to enhanced TLP4 reactivity// J.Leuk.Biol.-2005 .-V.77, N1 .-P. 16-23.

346. Muzaffar S., Jeremy J.Y., Angelini G.D., Stuart-Smith K., Shukla N. Role of the endothelium and nitric oxide synthasee by endotoxin and cytokines in porcine pulmonary arteries// Thorax.-2003.-V.58.-P.598-604.

347. Nauseef W.M. Assembly of the phagocyte NADH oxidase // Hisochem.Cell Biol.-2004.-V.122, N 4.-P.277-291.

348. Neefjes VME, Evelo CTA, Baars LGM, Blanco CE. Erythrocyte glutathione S transferase as a marker of oxidative stress at birth// Arch. Dis. Child. Fetal Neonatal Ed.-1999.- V.81.- F130-F133.

349. Neely A.N., Miller R.G., Holder I.A. Proteolytic activity and fatal gram-negative sepsis in burned mice: effect of exogenous proteinase inhibition // Infect.Immun.-1994.-V.62, N 6.-P.2158-2164.

350. Nicholls M.D. Transfusion: morbidity and mortality// Anaest. Intens. Care.- 1993.-V.21.-P.15-19.

351. Nielsen H.J. Detrimental effects of perioperative blood transfusion// Br.J.Surg.-1995.-V.82.-P.582-587.

352. Niiro H., Otsuka T., Izuhara K., Yamaoka K., Ohshima K., Tanabe T. Regulation by interleukin-10 and interleukin-4 of cyclooxigenase-2 expression in human neutrophils// Blood.-1997.-V.89.-P. 1621 -1628.

353. Niwa Y. Oxygen radical-related inflammatory diseases// The biological role of reactive oxygen species in skin. Ed. Hayaishi 0., Miyachi Y.- Tokyo: University of Tokyo Press and N.Y.: Elsevier, 1987.-P.151-161.

354. Nwariaku F., Sikes P.J., Lightfoot E.J., Mileski W.J. Inhibition of selectin- and in-tegrin-mediated inflammatory response after burn injury//J.Surg.Res.-1996.-V.63, N1.-P.355-358.

355. O'Neil GP, Ford-Hutchinson AW Expression of mRNA for cyclooxygenase-1 and cyclooxygenase-2 in human tissues// FEBS Lett.- 1993.-V.330.-P.156-60.

356. O'Toole E.A., Goel M., Woodley D.T. Hydrogen peroxide inhibits human keratino-cyte migration// Dermatol.Surg.- 1996.-V.22.-P.525-529.

357. Ocal K., Avian D., Cinel I., Unlu A., Yaylak F., Dirlik M., Camdeviren H., Aydin S. The effect of N-acetylcystein on oxidative stress in intestine and bacterial translocation after thermal injury//Burns.-2004.-V.30, N8.-P.778-784.

358. Ogura H., Tanaka H., Koh T., Hashiguchi N., Kuwagata Y., Hosotsuto H., Shimazu T., Sugimoto H. Priming, second-hit priming, and apoptosis in leukocytes from trauma patients//J.Trauma.-1999.-V.46,N 5.-P.774-781.

359. Ogura R., Kumano S. Free nucleosides and bases in the hyperkeratotic epidermis// Curr.Probl.Dermatol.-1983.-V. 11 .-P. 145-158.

360. Ohkuma N., Kajita S., Iizuka H. Superoxide dismutase in epidermis: its relation to keratinocyte proliferation// J.Dermatol (Tokyo).-1987.-V.14, P.562-568.

361. Oldhom K.T., Guice K.S., Till G.O., Ward P.A. Activation of complement by hy-droxyl radicals in thermal injury// Surgery.-1988.-V.104, N2.-P.272-279.

362. Ono Y., Kunii O., Kobayashi K., Kanegasaki S. Evaluation of opsonophagocytic dysfunctions in severly burned patients by luminol-dependent chemoluminescence // Micro-biol.Immunol.-1993.-V.37, N 7.-P.563-571.

363. Ono Y., Kunii O., Suzuki H., Ikeda H., Kobayashi K., Kanegasaki S. Opsonic acti-vaty of sera and blister fluid from severely burned patients evaluated by a chemilumines-cence method// Microbiol.Immunol.-1994.-V.38, N5.-P.373-377.

364. Opal S.M., Huber C.E. Bench-to-bedside rewiew: Toll-like receptors and their role in septic shock // Crit.Care.-2002.-V.6, N 2.-P.125-136.

365. Ormerod D.J., Harrison G.L., Miller T.E. Inhibition of neutrophil myeloperoxidase activity by selected tissues// J.Pharmacol.Meth.-1987.-V.18, N2.-P.137-142.

366. Osipov A.N., Panasenko O.M., Chekanov A.V., Arnold interaction of tret-butyl hydroperoxide with hypochlorous acid. A spin trapping and chemiluminescence study// Free Radic. Res. -2002.-V.36, N7.-749-754.

367. Palmieri T.L., Caruso D.M., Foster K.N., Cairns B.A., Gamelli R.L., Mozingo D.W., Kagan R.J., Wahl W. Et al. Effect of blood transfusion on outcome after major burn injury: a multicenter study //Crit.Care Med.-2006.-in print

368. Panes J., Granger D.N. Leukocyte-endothelial cell interactions: molecular mechanisms and implications in gastrointestinal disease// Gastroenterol.-1998.-V.l 14.-P.1066-1090.

369. Papa F., Scacco S., Vergari R. Respiratory activity and growth of human skin derma fibroblasts// Ital.J.Biochem.-l 998.-V.47.-P. 171-178.

370. Pascual C., Bredle D., Karzai W., Meier-Hellmann A., Oberhoffer M., Reinhart K. Effect of plasma and LPS on respiratory burst of neutrophils in septic patients// Intensive Care Med.-1998.-V.24, N 11 .-P. 1181 -1186.

371. Pascual C., Karzai W., Meier-Hellmann A., Oberhoffer M., Horn A., Bredle D., Reinhart K. Total plasma antioxidant capacity is not always decreased in sepsis// Crit.Care Med.-1998.-V.26, N 4.-P.705-709.

372. Peng D., Huang W., Ai S., Wang S. Clinical significance of leucocyte infiltrative response in deep wound of patients with major burns // Burns.-2006.-in print.

373. Phan T.t., Allen J., Hughes M.A. Upregulation of adhesion complex proteins and fi-bronectin by human keratinocytes treated with an aqueous extract from the leaves of Chromolaena odorata (Eupolin)// Eur.J.Dermatol.-2000.-V.l 0.-P.522.

374. Phillips C.L., Combs S.B., Pinnell S.R. Effects of ascorbic acid on proliferation and collagen synthesis in relation to the donor age of human dermal fibroblasts// J.Invest.Dermatol.-l 994.-V. 103, N 2.-P.228-232.

375. Piccolo M.T., Wang Y., Sannomiya P., Piccolo N.S., Piccolo M.S., Hugli T.E., Ward P.A., Till G.O. Chemotactic mediator requirements in lung injury following skin burns in rats//Exp.Mol.Pathol.-1999.-V.66,No3.-P.220-226.

376. Pietarinen-Runtti P., Lakari E., Raivio K.O., Kinnula V.L. Expression of antioxidant enzymes in human inflammatory cells//Am.J.Physio.Cell.Physio.-2000.-V.278, N1.-P.l 18-125.

377. Piguet P.E., Grau G.E., Vassalli P. Tumor necrosis factor and immunopathology // Immunol.Res.-1991 .-V. 10, N 2.-P. 122-140.

378. Pinkus R., Weiner L.M., Daniel V. Role of oxidants and antioxidants in the induction of AP-1, NF-kB, and glutathione S-transferase gene expression// J.Biol.Chem.-1996.-V.271.-P. 13422-13429.

379. Pintaudi A.M., Tesoriere L., D'Arpa N., D'Amelio L., D'Arpa D., Bongiorno A., Masellis M., Livrea M.A. Oxidative stress after moderate to extensive burning in humans// Free Radic.Res.-2000.-V.33, N2.-P.139-146.

380. Porto da Rocha R., Lucio D.P., Souza T.L., Pereira S.T., Fernandes G.J.M. Effects of a vitamin pool (vitamins A,E, and C) on tissue necrosis process: experimental study on rats// Aesth.Plast.Surg.-2002.-V.26.-P. 197-202.

381. Prince L.R., Allen L., Jones E.C., Hellewell P.G., Dower S.K., Whyte M.K., Sabroe I. The role of interleukin-lbeta in direct and toll-like receptor 4-mediated neutrophil activation and survival H Am.J.Pathol.-2004.-V.165, N 5.-P.1819-1826.

382. Radi R., Rodriguez M., Castro L., Telleri R. Inhibition of motochondrial electron transport by peroxynitrite //Arch.Biochem.Biophys.-1994.-V.308, N 1.-P.89-95.

383. Radke A., Mottaghy K., Goldmann C., Khorram-Sefat R., Kovacs B., Jassen A., Klsterhalfen B., Hafemann B., Pullua M., Kirschfink M. CI inhibitor prevents capillary leakage after thermal trauma// Crit.Care Med.-2000.-V.28.-P.3224-3232.

384. Rahman I. Oxidative stress, chromatin remodelling and gene transcription in inflammation and chronic lung diseases// J. Biochem.Mol.Biol.-2003.- V.36.-P.95-109.

385. Rasik A., Shukla A. Antioxidant ststus in delayed healing type of wounds//Int.J.Exp.Path.-2000.-V.81 .-P.257-263.

386. Ravage Z.B., Gomez H.F., Czemak B.J., Watkins S.A., Till G.O. Mediators of microvascular injury in dermal burn wounds// Inflammation.- 1998.-V.22,N6.-P.619-629.

387. Redl H., Gasser H., Schlag G., Marzi I. Involvement of oxygen radicals in shock related cell injury//Br.Med.Bull.-l993.-V.49, N3.-P.556-565.

388. Rees R., Smith D., Li T.D., Cashmer B., Garner W., Punch J., Smith D.J. The role of xanthine oxidase and xanthine dehydrogenase in skin ischemia// J. Surg.Res.-1994.-V.56, N2.-P.162-167.

389. Reilly D.M., Shiller H.J., Bulkey G.B. Pharmacologic approach to tissue injury mediated by free radiacals and other reactive oxygen metabolites// Am.J.Surg.-1991.-V.161.-P.408-503.

390. Rest F.R., Farrell C.F., Naids F.L. Mannose inhibits the human neutrophil oxidative burst// J.Leuk.Biol.-!988.-V.43.-P. 158-164.

391. Rhee P., Burris D., KaufTman C., Pikoulis M., Austin B., Ling G., Harviel D., Wax-man K. Lactated Ringer's solution cuases activation after hémorragie shock.// J.Trauma.-1998.-V.44.-P.313-319.

392. Richards R., Seaber A.V., Urbaniak J.R. Chemically induced vasospasms: effect of ischemia, vessel occlusion and adrenergic blocade// Plast. Reconstr.Surg.-1985.-V.75.-P.238-244.

393. Robinson M.J., Cobb M.H. Mitogen-activated protein kinase pathways// Curr.Opin.Cell.Biol.-l 997.-V.9, N 2.-P.180-186.

394. Rojkind M., Dominguez-Rosales J.-A., Nieto N., Greenwel P. Role of hydrogen peroxide and oxidative stress in healing responses// CMLS Cell.Mol.Life Sci.-2002.-V.59.-P.1872-1891.

395. Romeo C., Cruccetti A., Turiaco A., Impellizzeri P., Turiaco N., Di Bella C., Merlino M.V., Cifala S., Basile M., Gentile C., Salpietro D.C. Monocyte and neutrophil activity after minor surgical stress// J.Pediatr.Surg.-2002.-V.37, N5.-P.741-744.

396. Romero F.J., Bosch-Morell F, Romero EJ, Janero EJ, Romero B, Marin N, Roma J. Lipid peroxidation products and antioxidants in human disease.// Environ. Health Perspect.- 1998.-V.106(Suppl 5).- P.1229-1234.

397. Ross D., Norbeck K., Moldeus P. The generation and subsequent fate of gluthathio-nyl radicals in biological systems// J.Biol.Chem.-1985.-V.260.-P.15028-15032.

398. Roth E., Manhart N., Wessner B. Assessing the antioxidative status in critically ill patients//Curr.Opin.Clin.Nutr.Metab.Care.-2004.-V.7.-P. 161-168.

399. Rushmore T.H., Pickett C.B.Glutathione S-transferases: structure, regulation and thrapeutic implications// J.Biol.Chem.-1993.- V.268.- P.l 1475-11478.

400. Sabeh F., Baxter C.R., Norton S.J. Skin burn injury and oxidative stress in liver and lung tissues of rabbit models.// Eur.J.Chem.Clin.Biochem.-1995.-V.33, N 6.-P.323-328.

401. Sabeh F., Hockberger P., Sayeed M.M. Signalling mechanisms elevated neutrophil 0{ generation after burn injury//Am.J.Physiol.-1998.-V.274.-P.476-485.

402. Saccani A., Saccani S., Orlando S., Sironi M., Bernsconi S., Manovani A., Sica A. Redox regulation of chemokine receptor expression// Proc.Natl.Acad Sci USA.-2000.-V.97,N6.-P.2761-2766.

403. Saccini A., Saccini S., Orlando S., Sironi M., Sergio B., Ghezzi P., Mantovani A.,Siea A. Redox regulation of chemokine receptor expression// Proc.Natl.Acad.Sci.-2000.-V.97, N6.-P.2761-2766.

404. Saitoh D., Ookawara T., Fukuzuka K., Kawakami M., Sakamoto T., Ohno H., Okada Y. Characteristics of plasma extracellular SOD in burned patients// Burns.-2001.-V.27, N6.-P.577-581.

405. Salo M., Pertilla J., Lethonen O-P. Granulocyte chemiluminescence in patients with-postoperative infections// Arch.Surg.-1988.-V.123.-P.17-22.

406. Salvemini D., Korbut R., Anggard E., Vane J.Immediate release of nitric-oxide-like factor from bovine aortic endothelial cells by Escherichia coli lipopolysaccharide// Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1990.-V.87.-P.2593-2597.

407. Sanchez R. Initial shock from burns. Physiopathology: therapeutic principles// Pathol. Biol.-2002.-V.50,No2.-P.82-92.

408. Sancho P., Troyano A., Fernandez C., De Bias E., Aller P. Differential effects of catalase on apoptosis induction in human prononocytic cells. Relationships with heat-shock protein expression//Mol.Pharmacol.-2003.-V.63, N3.-P.581-589

409. Sandre C., Agay D., Ducros V., Uye V., Cruz C., Chacerelle Y., Roussel A.M. Early evolution of selenium status and oxidative stress parameters in rat models of thermal injury// J.Trace Elem.Med.Biol.-2004.-V. 17, N4.-P.313-318.

410. Santas F.X., Arroyo C., Garcia I., Blasco R., Obispo J.M., Hamann C., Espejo L. Role of mast cells in the pathogenesis of postburn inflammatory response :reactive oxygen species as mast cell stimulators// J.Surg.Res.-2000.-V.63.-P.237-240.

411. Sarkisov D.S., Kolokol'chokova E.G., Kaem R.I., Grishina I.A., Panova Iu.M. Electron-microscopic radioautographic study of bacterial invasion in severely burned pa-tients//Arch.Pathol.-1987.-V.49, N8.-P.35-41.

412. Sasaki J., Fujishima S., Iwamura H., Wakitani K., Aiso S., Aikawa N. Prior burn insult induces lethal acute lung injury in endotoxemic mice:effects of cytokine inhibi-tion//Am.J.Physiol.Lung.Cell.Mol.Physiol.-2003.-V.284.-P.270-278.

413. Sashwati R., Khanna S., Nallu K., Hunt T.K., Sen C.K. Dermal wound healing is subjected to redox control// Mol.Ther.-2006.-V.13, Nl.-P.211-220.

414. Sato E., Simpson K.L., Grisham M.B., Koyama S., Robbins R.A. Inhibition of MIP-1 alpha-induced human neutrophil and monocyte chemotactic activity by reactive oxygen and nitrogen metabolites// J.Lab.Clin.Med.-2000.-V.135.-P.161-169.

415. Sayeed M.M. Neutrophil signaling alteration: an adverse inflammatory response after burn shock./Medicina (B Aries).-1998.-V.58, N 4.-P.386-392.

416. Schabeuter K.U., Wood J.M. Free radicals in the human epidermis// Free Rad.Biol.Med.-1989.-V.6.-P.519-532.

417. Schafer F.Q., Buettner G.R. Redox environment of the cell as viewed through the redox state of the glutathione disulfide glutathione couple// Free Rad.Biol.Med.-2001.-V.30.-P.1191-1212.

418. Schaffer M.R., Tantry U., Gross S.S. et al. Nitric oxide regulates wound healing // J. Surg. Res. -2000.-V. 63.-P.237-240.

419. Schallreuter K.U., Pittelkow M.R., Wood J.M. Free radical reduction by thioredoxin reductase at the surface of normal and vitiligous keratinocytes// J.Invest.Dermatol.-1986.-V.87.-P.728-732.

420. Schallreuter K.U., Wood J.M. Free radical reduction in the human epidermis// Free Rad.Biol.Med.-1989.-V.6.-P.519-532.

421. Schallreuter K.U., Wood J.M. The activity and purification of membrane-associated thioredoxin reductase from human metastatic melanoma// Biochim. Biophys. Acta.-1988.-V.967.-P.103-109.

422. Schawa M.G. Macrophages and post-burn immune dysfunction// Burns.-2003.-V.29.-P.l-14.

423. Scheja A., Forsgren A. Functional properties of polymorphonuclear leukocytes accumulated in a skin chamber// Acta Pathl.Microbiol.Immunol.Scand(C).-1985.-93, N1.-P.31-36.

424. Schoonbrodt S., Piette J. Oxidative stress interference with the nuclear factor KB activation pathways// Biochem. Pharmacol.-2000.-V.60.-P.1075-1083.

425. Schraufstatter I.U., Ma M., Oades Z.G., Barritt D.S., Cochrane C.G. The role of Turl3 and Lysl5 of interleukin-8 in the high affinity interaction with the interleukin-8 receptor type A // J.Biol.Chem.-1995.-V.270, N 18.-P. 10428-10431.

426. Schumann R.R., Leong S.R., Flaggs G.W., Gray P.W., Wright S.D., Matchison J.C., Tobias P.S., Ulevitch R.J. Structure and function of lipoplysaccharide binding protein// Science.-l 990.-V.249.-P. 1429-1431.

427. Schwacha M.G. Macrophages and posr-burn immune dysfunction// Burns.-2003.-V.29.-P.1-14.

428. Scott W.A., Zrike J.M., Hamill A.L., Kempe J., Cohn J.A. Regulation of arachidonic acid metabolites in macrophages// J.Exp.Med.-1980.-V.152.-P.324-335.

429. Seifert R., Schultz G. The superoxide-forming NADH-oxidase of phagocytes. An enzyme system regulation by multiple mechanisms// Rev.Physiol.Biochem.Pharmacol.-1991.-V.117.-P.1-338.

430. Sen C.K.,Khanna S., Babior B.M., Hunt T.K., Ellison E.C., Roy S. Oxidant-induced vascular endothelial growth factor expression in human keratinocytes and cutaneous wound healing//Ann.N.Y.Acad.Sci.-2002.-V.957.-P.239-249.

431. Sengelov H., Follin P., Kjeldsen L., Lollike K., Dahlgren C., Borregaard N. Mobilization of granules and secretory vesicles during in vivo exudation of human neutrophils// J.Immunol.-1995.-V. 154, N8.-P.4157-4165.

432. Sethi S., Sharma P., Dikshit M. Nitric oxide- and oxygen-derived free radical generation from contro and lipopolysaccharide-treated rat polymorphonuclear leukocyte// Nitric 0xide.-2001 .-V.5, N5.-P.482-493.

433. Sharonov B.P., Churilova I.V. Inactivation and oxidative modification of Cu,Zn superoxide dismutase by stimulated neutrophils: the appearance of new catalytically active structures// Biochem.Biophys. Res. Commun.-1992.-V.189, N2.-P.1129-1135.

434. Shehab El-Din S.A., Aref S.E., Salama O.S. Assessment of certain neutrophil receptors, opsonophagocytosis and soluble intercellular adhesion molecule. 1(ICAM-1) foil-wing thermal injury//Ann.Burns Fire Disasters.-1998.-V.11.-P.27-37.

435. Sheng Z. Prevention of multiple organ dysfunction syndrome in patients with extensive deep burns//Chin.J.Traumatol.-2002.-V.5, N4.-P.195-199.

436. Sheng Z.Y., Tung Y.L. Neutrophil chemiluminescence in burned patients //J Trauma.-1987.-V.27, N 6.-P.587-595.

437. Sheridan R.L., Ryan C.M., Yin L.M., Hurley J., Tompkins R.G. Death in the burn unit:sterile multiple organ Failure// Burns.-1998.-V.24, N4.-P.307-311.

438. Shih H.C., Su C.H., Lee C.H. Superoxide production of neutrophils after severe injury: impact of subsequent surgery and sepsis// Am.J.Emerg.Med.-1999.-V.17, Nl.-P.15-18.

439. Shimizu S., Tanaka H., Sakaki S., Yukioka T., Matsuda H., Shimazaki S. Burn depth affects dermal interstitial fluid pressure, free radical production, and serum histamine levels in rats // J.Trauma.-2002.-V.54, N 4.-P.683-687.

440. Shindo Y., Witt E., Han D., Epstein W., Packer L. Enzymatic and non-enzymatic antioxidants in epidermis and dermis of human skin// J.Invest.Dermatol.-1994.-V.102.-P.122-124.

441. Shoup M., He L.K., Shankar R., Gamelli K. Cyclooxigenase-1 inhibitor NS-398 improves survival and restores leukocyte counts in burn infection// J.Trauma.-V.1998.-V.45.-P.215-220.

442. Shukla A., Rasik A.M., Patnaik G.K. Depletion of reduced glutathione, ascorbic acid, vitamin E and antioxidant defence enzymes in a healing cutaneous wounds// Free Rad.Res.-V.26.-P.93-l 01.

443. Siem S. Role of myeloperoxidase in the luminol-dependent chemiluminescence response of phagocytosing human monocytes//Acta Path. Microb. Immunol. Scand. Sect.C. -1983.-V.91.-P. 123-128.

444. Sies H. Oxidative stress: from basic research to clinical application// Am.J.Med.-1991.-V.91.-P.31-38.

445. Sievert A. Leukocyte depletion as a mechasm for reducing neutrophil-mediated is-chemic-reperfusion injury during transplantation//J.Extra Corpor.Technol.-2003.-V.35, N1.-P.48-52.

446. Simon A.R., Rai U., Fanburg B.L., Cochran B.H. Activation of the JAK-STAT pathway by reactive oxygen species// Am.J.Physiol.-1998.-V.275.-P. 1640-1652.

447. Simon R.H., Scoggin C.H., Patterson D. Hydrogen peroxide causes the fatal injury to human fibroblasts exposed to oxygen radicals// J.Biol.Chem.-1981.-V.256, N14.-P.7181-7186.

448. Sir 0., Fazal N., Choudhry M.A., Goris R.J., Gaill R.L., Sayeed M.M. Role of neutrophils in burn induced microcircular injury in the intestine// Shock.-2000.-V.14, N2.-P. 113-117.

449. Slatter D.A., Paul R.G., Murray M., Bailey A.J. Reaction of lipid-derived malondial-dehude with collagen// J.Biol.Chem.-1999.-V.274, N28.-P.19661-19669.

450. Sparkes B.G. Immunological responses to thermal injury// Burns.-1996.-V.23.-P.106-113.

451. Sparkes D.G., Monge G., Marshall S., Peters W., Allgower M., Schoenenberger G.A. Plasma levels of cutaneous burn toxin and lipid peroxides in thermal injury// Burns.-1990.-V.16.-P.118-122.

452. Splettstoesser W.D., Schuff-Wernwr P. Oxidative stress in phagocytes-«the enemy within» // Microsc.Res. Tech.-2002.-V.57, N 6.- P.441-455.

453. Sredni-Kenigsbuch D., Kamayashi T., Strassmann G. Neutrophil augment the release of TNFalpha from LPS-stimulated macrophages via hydrogen peroxide// Immunol.Lett.-2000.-V.71, N2.-P.97-102.

454. Stallmeyer B., Kampfer H., Kolb N., Pfeilschifter J., Frank S. The function of nitric oxide in wound repair: inhibition of inducible nitric oxide-synthase severely impairs wound epitheliazation // J.Invest.Dermatol.-1999.-V.l 13, N 6.-P.1090-1098.

455. Steed D.L. The role of growth factors in wound healing// Surg.Clin.N.Am.-1997.-V.77.-P.575-587.

456. Steele R.W. Clinical application of chemiluminescence of granulo-cytes//Rev.Infect.Dis.-l 991 .-V. 13 .-P.918-925.

457. Steiling H., Munz B., Werner S., Brauchle M. Different types of ROS-scavenging enzymes are expressed during cutaneous wound repair// Exp.Cell Res.-1999.-V.274.-P.484-494.

458. Stengle J., Meyers R., Pyle J., Dries D. Neutrophil recruitment after remote scald injury//J.Burn Care Rehabil.-l 996.-V. 17.-P. 14-18.

459. Stacker R., Frei B. Endogenous antioxidant defences in human blood plasma. In Oxidative stress: oxidants and antioxidants. Ed. Sies H. N.Y.:Academic Press., 1991.-P.225-243.

460. Stacker R., Maples K.R., Mason R.P. Free radical metabolite of uric acidII J.Biol.Chem.-1998.-V.263 .-P. 1709-1712.

461. Stoyanovsky D.A., Osipov A.N., Quinn P.J., Kagan V.E. Ubiquinone-dependent re-cucling of vitamin E radiacals by superoxide// Arch.Biochem.Biophys.-1995.-V.323, N2.-P.343-351.

462. Subrahmanyam N. Addition of antioxidants and polyethylene glycol 4000 enhances the healing property of honey in burns// Annals Burns Fire Dis. -1996.-V.9, N2.-P.93-99.

463. Suh Y.A., Arnold R.S., Lassegue B., Shi J., Xu X., Chung A.B., Griendling K.K., Lambeth J.D., Cell transformation by superoxide-generating oxidase Mox 1// Nature.-1999.-V.401 .-P.79-82.

464. Sundaresan M., Yu Z.X., Ferrans V.L., Sulciner D.J., Gutkind J.S., Irani K., Gold-schmidt-Clermont P.J., Finkel T. Regulation of reactive-species generation in fibroblasts by Racl // Biochem.J. 1996.-V.318.-P.379-382.

465. Susuki M., Asako H., Kubes P. Neutrophil-derived oxidants promote leukocyte adherence in postcapillary venules// Microvase.Res.-1991.- V.42.-P.125-138.

466. Tajima S., Pinnell S.R. Ascorbic acid preferentially enhances type I and III collgen gene transcription in human skin fibroblasts// J.Dermatol.Sci.-1996.-V.ll, N3.-P.250-253.

467. Tamai K, Aith K, Tsuchida S, Hatayama I, Maki T, Sato K. Specific inactivation of glutathione S-transferases in class Pi by SH-modifiers //Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1990.-V.167.- P. 331-338.

468. Tapiero H., Townsend D.M., Tew K.D. The antioxidant role of selenium and seleno-comounds// Biomed. Pharacother.-2003.-V.57, N3-4.-P.134-144.

469. Tarpey M.M., Wink D.A., Grisham M.B. Methods for detection of reactive metabolites of oxygen and nitrogen: in vitro and in vivo considera-tions//Am.J.Phusiol.Regul.Integr.Comp.Physiol.-2003.-V.286.-P.431-444.

470. Thannickal V.J., Fanburg B.L. Reactive oxygen species in cell signalling// Am.J.Physiol.Lung.Cell.Mo.Physiol.-2000.-V.279.-P.1005-1028.

471. Theilgaard-Mônch K., Knudsen S., Follin P., Borregaard N. The transcriptional activation program of human neutrophils in skin lesions supports their important role in wound healing// J.Immunol.-2004.-V.174.-P.7684-7693.

472. Thelen M., Dewald B., Baggiolini M. Neutrophil signal transduction and activation of the respiratory burst// Physiol.Rew.-1993.-V.73, N4.-P.797-821.

473. Theron A.J., Steenkamp K.J., Anderson R. NADPH-oxidase activity of stimulated neutrophils is markedly increased by serum // Inflammation.- 1994.-V. 18.-P.459-467.

474. Thiele J.J., Schroeter C., Hsieh S.N., Podda M., Packer L. The antioxidant network of the Stratum corneum//in Thiele J.Eisner P.(eds).-Oxidants and Antioxidants in Cutaneous Biology.Curr.Probl.Dermatol.-Basel,Karger-2001 .-V.29.-P.26-42.

475. Tiege M., Lortz S., Lenzen S. Relation between antioxidant enzyme gene expression and antioxidative defense ststus of insulin-producing cells// Diabetes.-1997.-V.46, N11.-P.1733-1742.

476. Till G.O., Beauchamp C.,Menapace D., Tourtellotte W.Jr., Kunkel R., Johnson K.J., Ward P.A. Oxygen radical dependent lung damage following thermal injury of rat skin// J.Trauma.-1983.-V.23, N4.-P.269-277.

477. Till G.O., Friedl H., Ward P.A. Antioxidant treatment in experimental thermal in-jury.//in Emerit I, Packer L, Auclair C (eds): Antioxidants in therapy and preventive medicine. N.Y., Plenum Press.- 1990.-P.543-549.

478. Till G.O., Guilds L.S., Mahrougni M., Friedl H.P., Trentz 0., Ward P.A. Role of xanthine oxidase in thermal injury of skin// Am.J.Pathol.-1989.-V.135.-P.195-202.

479. Till G.O., Hatherill J.R, Tourtllotte W.W., Lutz M.J., Ward P.A. Lipid peroxidation and acute lung injury after thermal trauma to skin// Am.J.Pathol.- 1995.-V.119.-P.376-384.

480. Todd R.F. Subcellular localisation of the large subunit of Mol/Mol': formerly gp 110, a surface glycoprotein associated with neutrophil adhesion// J.Clin.Invest.-1984.-V.74.-P.1280-1290.

481. Tredget E.E., Yu Y.M. The metabolic effects of thermal injury//World J.Surg.-1992.-V.16, N1.-P.68-79.

482. Troshev K., Kozarev I., Markov D. Regulation of traumatic skin wound healing by influencing the process in the neighbouring zone of the wound// Acta Chir.Plast.-1990.-V.32, N3.-P.152-163.

483. Trush M.A., Egner P.A., Kensler T.W. Mueloperoxidase as a biomarker of skin irritation and inflammation// Food Chem. Toxicol.-1994.-V.32, N2.-P.143-147.

484. Tunali T., Sener G., Yarat A., Emekli N. Melatonin reduces oxidative damagr to skin and normalizes blood coagulation in a rat model of thermal injury // Life Sci.-2005.-V.76, N 11.-P.1259-1265.

485. Turnage R.H., Nwariaku E., Murphy J., Schulman C., Wright K., Yin H. Mechanisms of pulmonary microvascular dysfunction during severe burn injury// World J.Surg.-2002.-V.26, N7.-P.848-853.

486. Tyler M.P., Watts A.M., Perry M.E., Roberts A.H., McGrouther D.A. Dermal cellular infalammation in burns. An insight into the function of dermal microvascular anatomy// Burns.-2001.-V.27, N5.-P.433-438.

487. Uchiyama M., Mihara M. Determination of malonaldehyde precursor in tissue by thiobarbituric acid// Anal.Biochem.-1978.-V.86, N1.-P.271-278.

488. Ueda H., Sugiura K. Lipid peroxide and superoxide dismutase in human skin// Cutaneous aging. Ed. Takase Y., Kligman A.M. Tokyo: University of Tokyo Press, 1988.-P.449-457.

489. Ueno N. Chemiluminescence of whole blood. Analysis of the kinetics and application of clinical examination of phagocytic functions of whole blood from various types of disease// Hokkaido Igaku Zasshi.-1986.-V.61.-P.947-960.

490. Ulrich D., Noach E.M., Pallua N. Plasma endotoxin, procalcitonin, C-reactive protein, and organ functions in patients with major burns// Handchir.Microchir.Plast.Chir.-2001 .-V.33, N4.-P.262-266.

491. Ushio-Fukai M., Alexander R.W. Reactive oxygen species as mediators of angio-genesis signaling: role of NAP(P)H oxidase // Mol.Cell Biol.-2004.-V.264.-P.85-97.

492. Van Dyke K., Van Duke C. Cellular chemiluminescence associated with disease states// Meth. Enzymol.-1986.-V.133.-P.493-507.

493. Van Eden S.F., Kitagawa Y., Klut M.E. Plymorphonuclear leukocytes released from the bone marrow preferentially sequester in lung microvessells// Microcirculation.-1997.-V.4.-P.369-380.

494. Van Griensven M., Kuzu M., Breddin M., Bottcher F., Krettek C., Pape H.C., Tschernin J.T.Polymicrobial sepsis induces organ changes due to granulocyte adhesion in a murine two hit model of trauma// Exp.Toxicol.Pathl.-2002.-V.54, N3.-P.203-209.

495. Varga G., Gal I., Roth E., Lantos J., Jaberansari M.T. Inflammatory mediators and surgical trauma regarding laparoscopic access:neytrophil function// Acta Chir.Hung.-1997.-V.36, N1-4.-P.368-369.

496. Vassiere C., Le Cabec V., Maridonneau-Parini I. NADPH oxidase is functionally assembled in specific granules during activation of human neutrophils// J.Leuk.Biol.-1999.-V.65.-P.629-634.

497. Vessey D.A. The cutaneous antioxidant system// Oxidative stress in dermatology. Ed. Fuchs J., Packer L.- New York, Base, Hong Kong: Marcel Dekker Inc., 1993.-P.81-103.

498. Victor V.M., De La Fuente M. Changes in the superoxide production and other na-crophage functions could be related to the mortality of mice with endotoxin-induced oxidative stress// Physiol, Res.-2003.-V.52.-P.101-l 10.

499. Vindenes II., Bjerknes R. Activation of polymorphonuclear neutrophilic granulocytes following burn injury: alteration of Fc-receptor and complement-receptor expression and of opsonophagocytsis// J.Trauma.-1994.-V.36, N2.-P.161-167.

500. Vindenes H., Ulvestad E., Bjerknes R. Increased levels of circulating interleukin-8 in patients with large burns:relation to burn size and sepsis// J.Trauma.-1995.-V.39,No4.-P.635-640.

501. Vogt P.M., Jokuszies A., Niederbichler A., Bosch K., Choi C.Y., Kail S. Early surgical management of severe burns// Unfallchirurg.-2006.-V.109, N4.- P.270-277.

502. Vogt W. Complement activation by myeloperoxidase products relaesed from stimulated human polymorphonuclear leukocytes// Immunobiology.-1996.-V.195, N3.-P.334-346.

503. Volger B.K., Ernst E. Aloe vera: a systematic review of its clinical effectiveness// Br.J.Gen.Practice.-1999.-V.49.-P.823-828.

504. Vorauer-Uhl K., Furnschlief E., Wagner A., Ferko B., Katinger H. Reepithelization of experimental scalds effected by topically applied superoxide gismutase: controlled animal studies// Wound Repair Regen.-2002.-V.10, N6.-P.366-371.

505. Walter J.B., Israel M.S. General patology.-N.Y.:Churchill, 1979.-P.

506. Wang J.F., Komarov P., Sies H., de Groot H. Contribution of nitric oxide synthase to luminol-dependent chemiluminescence generated by phorbol-ester-activated Kupffer cells// Biochem J.-l 991 .-V.279.-P.311-314.

507. Wang S., Fang P., Xu W. The role of PMNs in early progressive injury of deep partial-thickness burn wound// Zhongua Shao Shang Za Zhi.-2000.-V.16, N1.-P.46-49.

508. Ward C.,Walker A., Dransfield I., Haslett C., Rossi A.G. Regulation of granulocyte apoptosis by NF-kappaB// Biochem.Soc.Trans.-2004.-V.32, N3.-P.465-457.

509. Ward P.A., Till G.O. Pathophysiologic events related to thermal injury of skin// J.Trauma.-1990.-V.30, N12 Suppl.-P.75-79.

510. Watanabe S., Wang X.E., Hirose M. Rebapamide prevented delay of wound repair induced by hydrogen peroxide and supressed apoptosis of gastric epithelial cells in vitro// Digest. Dis. Sci.-l998.-V.43.-P. 107-112.

511. Weller R. Nitric oxide, skin growth and differentiation: more questions than answers?// Clin.Exper. Dermatol.-1999.-V.24.-P.388-391.

512. Wendel A. Glutathione Peroxidase //Enzymatic basis of detoxification, V.l. Ed. Jacoby W.B.- N.Y.: Academic Press, 1980.-P.333-353.

513. Wheeler L.A., Aswad A., Connor M.J., Lowe N. Depletion of cutaneous glutathione and the induction of inflammation by 8-methoxypsoralen plus UVA radiation// J.Invest.Dermatol.-1986.-V.87.-P.658-662.

514. Whyte MK, Meagher LC, MacDermot J, Hslett C. Impairment of function in aging neutrophils is associated with apoptosis//J Immunolio- 1993.- V.150.-P.5124-34.

515. Willms-Kretscher K., Majano G Ischemia of the skin: electron microscopic study of vascular injury// Am.J.Pathol.-1969.-V.54.-P.327-354.

516. Windzor A.C.J., Klava A., Guillou P.J., Reynolds J.V. Manipulation of local and systemic host defence in the prevention of perioperative sepsis// Br.J.Surg.-1995.-V.82.-P.1460-1467.

517. Winterbourn C.C., Kettle A.J. Radical-radical reactions of superoxide: a potential route to toxicity// Biochem. Biophys. Res. Commun.-2003.-V.305, N6.-P.729-736.

518. Wolf J., Cook G.H., Goldhammer A.R., Berkowitz S.A. Protein kinase C and priming of neutrophils// Curr.Op.Immunol.-1994.-V.6.-P. 131-139.

519. Wong H.R. Potential protective role of the heat shock response in sepsis // New Horiz.-1998 .-V.6.-P.194-200.

520. Wright S.D., Reddy P.A., Jong M.T.C., Erikson B.W. C3bi-receptor (compement receptor type 3) recognizes a region of complement protein C3 containing the sequence Arg-Gly-Asp// Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-l 987.-V.84.-P. 1965-1970.

521. Xia P-Y., Zheng J., Zhou H., Pan W-D., Qin X-J., Xiao G-X. Relationship between lymphocyte apoptosis and endotoxin translocation after thermal injury in rats// World J.Gastroenterol.-2002.-V.8, N3.-P.546-550.

522. Xia Y., Zweier J.L. Measurement of myeloperoxidase in leukocyte-containing tissues//Anal.Biochem.-1997.-V.245.-P.93-96.

523. Xu X., Hakansson L. Degranulation of primary and secondary granules in adherent human neutrophils// Scand.J.Immunol.-2002.-V.55, N2.-P.178-188.

524. Xuan Y-T., Guo Y., Han H., Bolli R. An essential role of the JAK-STAT pathway in ischemic preconditioning// Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-2001.-V.98, N 16.-P.9050-9055.

525. Yakabi K., Mimura H., Iwabuchi H., Ro S., Kamiichi H., Miura S., Nakamura T. Neutrophil-derived hydroxyl radicals mediate interleukin-8 induced increase in tetragas-trin-stimulated acid secretion in rats // Dig.Dis.Si.-2003.-V.48, N 6.- P.1081-1087.

526. Yamada Y., Endo S., Inada K. Plasma cytokine levels in patients with severe burn-injury with reference to relationship beteween infection and prognosis// Burns.-1996.-V.22.-P.587-593.

527. Yanagi N., Kono M., Kitahara M. Effect of electrolysed water on wound healing// Artificial Organs.-2000.-V.24.-P.984-987.

528. Yang R.B., Mark M.R., Gray A., Huang A., Xie M.H., Zhang M., Goddard A., Wood W.I., Gurney A.L., Godowski P.J. Toll-like receptor-2 mediates lipopolysaccharide-induced cellular signalling// Nature.-1998.-V.395.-P.217-219.

529. Yang Z.C. Clinical study of the pathogenesis of multiple organ failure after burns//Zonghua Zheng Xing Shao Shang Wai Ke Za Zhi.-1992.-V.8, Nl.-P.8-12.

530. Yohn J.J., Norris D.A., Yrastorza D.G., Buno I.J., Hake S.S., Repine J.E. Disparate antioxidant enzyme activities in cultured human cutaneous fibroblasts, keratinocytes, and melanocytes// J. Invest. Dermatol.-1991.-V.97.-P.405-409.

531. Yoshikawa T., Naito Y., Ueda S., Oyamada H., Takemura T., Yoshida N. Sugino S., Kondo M. Role of oxygen-derived free radicals in the pathogenesis of gastric mucosal lesions in rats//J.Clin.Gastroenterol.-1990.-V. 12, N1.-P.65-71.

532. Yoshimura S., Suemizu H., Taniguchi Y., Arimori K., Kawabe N., Moriuchi T. The human plasma glutathione peroxidase-enciding gene: organization, sequence and localization to chromosome 5q32// Gene.-1994.-V.145.-P.293-297.

533. Yu B., Wright S.D. Catalytic properties of lipopolysaccharide (LPS) binding protein. Transfer of LPS to soluble CD14// J.Biol.Chem.-1996.-V.271.-P.4100-4105.

534. Zgliczynski J.M., Kwasnowska E., Stelmaszynska T., Olszowska E., Olszowski S., Knapik J.M. Functional states of neutrophils as auggested by whole blood chemilumi-nescence// Acta Biochim.Pol.-1988.-V.35.-P.331-342.

535. Zhu M., Chapman W.G., Oberley M.J., Wasserman W.W., Fahl W. Chemoprotection conferred by electrophile responsive element-regulated expression of endogenous glutathione S-transferase genes// Clin. Chem.-2000.-V.8.-P.303-313.

536. Zingg J-M., Azzi A. Non-antioxidant activities of vitamine E //Curr.Med.Chem.-2004.-V.11.-P.1113-1133.

Информация о работе

Михальчик, Елена Владимировна
доктора биологических наук
Москва, 2006
ВАК 03.00.04

Диссертация

Показатели окислительного стресса при ожоговой травме - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Показатели окислительного стресса при ожоговой травме ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Показатели окислительного стресса при ожоговой травме"

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Михальчик, Елена Владимировна

Введение Диссертация по биологии, на тему "Показатели окислительного стресса при ожоговой травме"

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Михальчик, Елена Владимировна

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Михальчик, Елена Владимировна, Москва

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Показатели окислительного стресса при ожоговой травме
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия