Почвенные микроорганизмы-биодеструкторы органических пестицидов

Колупаев, Алексей Вячеславович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Почвенные микроорганизмы-биодеструкторы органических пестицидов
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Почвенные микроорганизмы-биодеструкторы органических пестицидов"

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

им. М.В. Ломоносова _Биологический факультет_

КОЛУПАЕВ АЛЕКСЕЙ ВЯЧЕСЛАВОВИЧ

Почвенные микроорганизмы-биодеструкторы органических пестицидов

03.02.03 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

На правах рукописи

004611ЬЬУ

Москва, 2010 г.

004611669

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Вятский государственный гуманитарный университет», г. Киров (ГОУ ВПО ВятГГУ) и Государственном научном учреждении Зональный научно-исследовательский институт сельского хозяйства Северо-Востока Россельхозакадемии, г. Киров

Научный руководитель

доктор биологических наук

Широких Александр Анатольевич

Научный консультант

доктор технических наук

Ашихмина Тамара Яковлевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук

Семенов Александр Михайлович

кандидат биологических наук

Дмитриева Елена Юрьевна

Ведущая организация

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов имени Г.К. Скрябина РАН, Пущино, Московская область

Защита состоится 26 октября 2010 г. в 15 ч. 30 мин. на заседании диссертационного совета Д.501.001.21 при Московском государственном университете имени М.ВЛомоносова по адресу: 119992, Москва, Ленинские горы, дом 1, МГУ, корп. 12, Биологический факультет, ауд. М-1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета МГУ.

Автореферат разослан__2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.б.н.

Пискункова Н.Ф.

Актуальность темы. Пестициды - химические средства защиты растений, интенсивное и не всегда обоснованное применение которых привело к тому, что в последнее время они рассматриваются также в числе самых опасных синтетических поллютантов (Ермаков и др., 2001; Ананьева, 2003). Одной их серьезных экологических проблем является загрязнение природных объектов органическими пестицидами, обладающими высокой токсичностью и персистентностью (Попов и др., 2003). Кроме мест интенсивного применения пестицидов, потенциальную опасность для окружающей среды и человека несут места их захоронения - специальные подземные бетонированные бункеры или колодцы. Одним из самых крупных среди таких объектов в РФ является Кильмезский полигон захоронения непригодных к использованию пестицидов и ядохимикатов (Кировская область), в котором захоронено около 590 т препаратов химической защиты. Токсичные вещества могут проникать из могильников в окружающую среду и создают угрозу для всех живых организмов, включая почвенное микробное население (Thyssen, 1998; Wodageneh, 1998). Большинство проводимых исследований посвящено изучению влияния пестицидов на популяции микроорганизмов в почвах агроценозов (Alexander, 1999; Soil pollution..., 2004), тогда как вопросы изучения почвенных микробных комплексов в районах захоронения пестицидов, освещены недостаточно. В то же время микроорганизмы, выделенные из экосистем, подвергающихся длительному воздействию пестицидов, обладают потенциалом к более быстрому разложению данных соединений (Nowak, 1998), что делает необходимым изучение микробных сообществ почв, загрязненных пестицидами, как для оценки биологического риска, так и для отбора перспективных агентов для технологии биоремедиации природных объектов.

Цель работы - изучение структуры микробных комплексов подзолистых почв в районе Кильмезского полигона захоронения пестицидов и поиск микроорганизмов-деструкторов органических пестицидов тетраметилтиурам-дисульфида (ТМТД) и симазина.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Дать характеристику изменений в структуре микробного комплекса подзолистой почвы в условиях пестицидного загрязнения.

2. Описать адаптивные реакции у доминирующих в комплексе микроорганизмов (на примере Тг'гсИойегта \iride) на присутствие в среде органических пестицидов ТМТД и симазина.

3. Путем селекции в условиях периодического культивирования в присутствии ТМТД и симазина выделить наиболее резистентные штаммы бактерий и микромицетов и провести анализ их свойств.

4. Составить искусственные ассоциации устойчивых к пестицидам изолятов бактерий и микромицетов и определить их эффективность в отношении биодеструкции ТМТД и симазина в условиях лабораторной модели.

Научная новизна работы. На основании морфологических и биохимических признаков (для бактерий) и экологических показателей (для микромицетов) впервые выявлены различия в структуре между комплексами микроорганизмов подзолистых почв из зоны влияния Кильмезкого полигона захоронения пестицидов и фоновой территории.

Установлено, что грибы рода ТгкИос1егта, часто встречающиеся в комплексе микромицетов почвы с фоновой территории, переходят в разряд доминантных в комплексе при пестицидном загрязнении.

Выявлена характерная морфобиологическая реакция гриба Т. \iride на возрастание в среде концентрации симазина и ТМТД, заключающаяся в формировании мицелиальных агрегатов различной плотности. С увеличением степени коагрегации мицелия доля неагрегированного мицелия соответственно снижалась, а скорость биодеструкции пестицидов, наоборот, возрастала. Экспериментально показана существенная роль процессов агрегации гиф в увеличении устойчивости микромицета Т. \iride к симазину и ТМТД.

Показано, что эффективность биодеструкции симазина и ТМТД искусственными ассоциациями наиболее резистентных к данным пестицидам

представителей аборигенной почвенной микрофлоры выше при использовании бактериальной ассоциации, чем грибной и смешанной (грибы+бактерии).

Практическая значимость работы. Выявленные перестройки в структуре комплексов почвенных микромицетов и бактерий в зоне влияния объекта учтены при разработке методов биоиндикации почв на загрязнение органическими пестицидами. Полученные результаты вошли в разработанную с участием автора данного исследования областную программу «Комплексный экологический мониторинг окружающей среды в районе Кильмезского полигона захоронения пестицидов в Кировской области» (2008-2010 гг.).

Составлена рабочая коллекция, включающая 17 бактериальных изолятов и 4 изолята микромицетов из загрязненных пестицидами почв, перспективных для разработки технологий биоремедиации почв, загрязненных ТМТД и симазином.

Штамм гриба Т. viride Sil рекомендован для использования в целях биотестирования в отношении ТМТД и симазина.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены на Всероссийской молодежной научной конференции «Актуальные проблемы биологии и экологии» (Сыктывкар, 2009; 2010); Междисциплинарном микологическом форуме (Москва, 2009; 2010); Всероссийской конференции с элементами научной школы для молодежи «Экотоксикология-2009» (Пущино, 2009); V молодежной школе-конференции с международным участием «Актуальные аспекты современной микробиологии» (Москва, 2009); Всероссийском симпозиуме с международным участием «Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов» (Москва, 2009); Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы региональной экологии в условиях устойчивого развития» (Киров, 2009; 2010), областной научно-практической конференции молодежи «Экология родного края: проблемы и пути их решения» (Киров, 2010), 14-й Пущинской международной школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2010).

Публикации. Материалы исследований изложены в_печатных работах,

в том числе 4 статьи опубликованы журналах, включенных в перечень ведущих рецензируемых изданий ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4-х глав экспериментальной части, заключения, выводов,

списка литературы и приложения. Работа изложена на _ страницах

машинописного текста, включает _ рисунков и _ таблиц. Библиография

насчитывает _ наименований, из них _ отечественных и _ зарубежных

работ.

Место проведения работы. Пробоотбор производился совместно с сотрудниками ОГУ «Вятский научно-технический информационный центр мониторинга и природопользования» (ВятНТИЦМП). Пробоподготовка почвенных образцов к анализу проводилась в Лаборатории биомониторинга Института биологии Коми НЦ УрО РАН и ВятГГУ. Микробиологический анализ был выполнен в Лаборатории генетики ГНУ НИИСХ Северо-Востока Россельхозакадемии. Химический анализ проводился в лабораториях химического факультета ВятГГУ и химического факультета ВятГУ, лаборатории токсикологического анализа филиала ФГУ «Россельхозцентр». Автор выражает глубокую благодарность Широких И.Г., Ашихминой Т.Я., Перминовой Э.И., Огородниковой С.Ю., ДабахЕ.В., Домниной Е.А., Соколовой Т.А., Сазанову A.B., Хабибуллиной Ф.М. и другим сотрудникам названных учреждений за помощь в выполнении работы.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования служили образцы почв с территорий, расположенных вблизи Кильмезского полигона захоронения пестицидов. В рамках областной программы комплексного экологического мониторинга этого объекта были определены три площадки мониторинга (ПМ), расположенные вниз по склону от объекта на расстоянии 0,7 (ПМ 1); 1,8 (ПМ 2); 2 км (ПМ 3), а также фоновый участок (ПМ Ф), находящийся в 5 км от захоронения (рис. 1).

N Кильмеэстий

полисам' ^^

пестредаа Ш

: •'

ПМ 1 4 _________ ПМ2

ПМ 3

ПМФ Масштаб 1:100000

Рис. 1. Схема расположения площадок мониторинга в районе Кильмезского полигона захоронения пестицидов (ПМ 1 - площадка мониторинга № 1;

ПМ 2 - площадка мониторинга № 2; ПМ 3 - площадка мониторинга № 3;

ПМ Ф - фоновый участок)

Для оценки влияния пестицидов на микробный комплекс почвы сравнивали численность и структуру комплексов бактерий и микромицетов в образцах, отобранных на ПМ 1 и ПМ Ф, характеризующихся сходными по генезису и свойствам почвами: подзолистые супесчаные с маломощной подстилкой (до 3 см), среднекислые (рНка 4,5-4,8) с низким содержанием элементов питания. Почва с ПМ 2 была отнесена к дерново-подзолистым легкосуглинистым, с ПМ 3 - к аллювиальным болотным. Их исследование проводили для выявления общих закономерностей изменений в структуре почвенных микробных комплексов под воздействием пестицидов.

Химический анализ на наличие в почве пестицидов проводили методом газовой хроматографии (Цвет-500, ПИД).

Для определения численности и выделения микроорганизмов из почвы использовали методы посева на агаризованные питательные среды RHM (для бактерий) (Belimov, Deitz, 2000) и Чапека (для микромицетов) из разведений почвенных суспензий (Методы почвенной ..., 1991). Структуру комплекса бактерий характеризовали с использованием физиолого-биохимических и морфологических показателей отдельных культур (Нетрусов и др., 2005). Родовую идентификацию проводили согласно определителю бактерий Берджи (1997). Структуру комплекса микромицетов определяли с использованием показателя пространственной частоты встречаемости родов, видовое разнообразие - на основе расчёта индекса Шеннона, для определения степени сходства комплексов микромицетов использовали коэффициент Съеренсена (Кураков, 2001). Родовую принадлежность микромицетов определяли по морфологическим и культуральным признакам (Литвинов, 1967; Сатгон и др., 2001). Грибы рода Trichoderma определяли по ключу Александровой и др. (2006).

Радиальную скорость роста микромицетов определяли на агаризованной среде Чапека (Кожевин, 1989).

Способность штамма гриба Т. viride S11 к биодеструкции и реакции на присутствие пестицидов в среде выявляли в модельном опыте по методике (Monharram et al., 1994) в нашей модификации. Культивирование гриба осуществляли в жидкой среде Чапека (рН 4,5) с добавлением 0,1; 0,2; 0,4; 1 и 2 мкг/мл симазина и 0,03; 0,06; 0,12; 0,3; 0,6 мкг/мл ТМТД, что соответствует 0,5; 1; 2; 5 и 10 ПДК для симазина и 0,5; 1; 2; 5 и 10 ОДК для ТМТД. В эксперименте использовали стандартные образцы (ГСО) данных пестицидов. Контролем в опыте служил вариант без добавления пестицида. Остаточную концентрацию пестицидов в культуральной жидкости микроорганизмов определяли методом хромато-масс-спектрометрии (GCMS-QP2010 Plus, Shimadzu, Япония). Химический анализ проб культуральной жидкости, микроскопию и определение биомассы микроорганизмов в каждом из вариантов проводили на первые, третьи и седьмые сутки. Концентрацию

свободных аминокислот определяли методом хромато-масс-спектрометрии в пробах культуральной жидкости по методике, изложенной в (Strigacova et al., 2001). Морфобиологическую реакцию гриба T.viride S11 на повышение концентрации пестицида в среде оценивали по значению длины неагрегированного мицелия, концентрации и структуре мицелиальных агрегатов (Coxetal., 1998; Maheshwari, 2005). Для характеристики структуры мицелиальных агрегатов рассчитывали коэффициент Ко (%), равный отношению ширины периферического мицелия к диаметру мицелиального агрегата (Paul, Thomas, 1998). Биомассу гриба определяли гравиметрически после высушивания до воздушно-сухого состояния. Повторность опыта пятикратная.

Бактериальные и грибные штаммы, способные к биодеструкции симазина и ТМТД, выделяли методом, изложенным в (Klages, Lingens, 1980) в нашей модификации. Исходным материалом служила смешанная проба из образцов почв, отобранных с ПМ 1 - ПМ 3. Селекцию микроорганизмов проводили при периодическом культивировании в жидкой питательной среде Чапека (рН 7,0) с постоянно возрастающим фактором селекции (ТМТД или симазин) в двух вариантах: в первом пестицид служил в качестве единственного источника углерода, во втором — дополнительно вносили 1 % сахарозы. Культивирование проводили в качалочной культуре при температуре 27°С в течение 40 суток. Исходная концентрация ввиду различной токсичности пестицидов составляла для симазина 5,0 мкг/мл, для ТМТД - 0,05 мкг/мл. После каждых пяти суток инкубации культуры пассировали на свежую питательную среду с добавлением соответствующего пестицида в концентрации, превышающей предыдущую в 1,5 раза (до 100 мкг/г для симазина и до 1 мкг/мл для ТМТД). Микробные изоляты из последнего пассажа каждого из вариантов выделяли на среде RHM (бактерий) и Чапека (микромицеты).

Чувствительность изолятов к повышенным концентрациям ТМТД (0,1 и 0,2 мг/мл) и симазину (10,0 и 20,0 мг/мл) определяли методом дисков (Microbiological application..., 2001).

В модельном опыте изучали способность бактериальной, грибной и смешанной ассоциаций к биодеструкции ТМТД и симазина. Культивирование микроорганизмов проводили в жидкой среде Чапека (рН 7,0) с использованием в качестве источника углерода ТМТД или симазина в концентрациях 0,2 и 0,4 мг/мл соответственно. Контролем служили аналогичные варианты ассоциаций с добавлением глюкозы в концентрации 2% в качестве единственного источника углерода. Остаточную концентрацию симазина определяли методом хромато-масс-спектрометрии, ТМТД - фотометрически (Sharma et al., 2003) на 3, 7 и 14-е сутки. Биомассу микроорганизмов определяли гравиметрически после высушивания до воздушно-сухого состояния.

Фитотоксичносгь культуральной жидкости тестировали на проростках ячменя сорта Новичок по методикам, изложенным в ГОСТ 12038-84.

Статистическую обработку результатов осуществляли с помощью встроенного статистического пакета Excel (MS Office 2007).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

В результате химического анализа почв, отобранных в пределах ПМ 1 -ПМ 3, было установлено наличие органических пестицидов симазина и ТМТД в концентрациях 0,001-0,002 мкг/г (0,01ПДК) и 0,02-0,04 мкг/г (0,33-0,66 ОДК), соответственно. В пробах почв с ПМ Ф данные соединения не обнаружены.

Численность и структура комплексов бактерий и микромицетов почв окрестностей Кильмезского полигона захоронения пестицидов

В почвах с ПМ 1 численность бактерий достигала 2,4хЮ9 КОЕ/г, а микромицетов - 1,6x10s КОЕ/г. Для ПМ Ф эти показатели составили соответственно 1,2хЮ9КОЕ/г и 0,15x10s КОЕ/г, т.е. существенно не отличались. Более значительными были изменения в структуре микробных комплексов.

Оксндазо- Д 36,1'4

лоложительхые |46,7'1

Печатные фермы 53й3

Щт

73,3%

Гидролнтики

Факультативные яназробы

Облигатиые аэробы

Граиотркцатсл ь ныв

Г рам положительные

46.7%

[46.7%

J5W'-

1ПМФ з ПМ1

« 20 #

60 М 1(КК Доля прсдстмигеяей, •

Рис. 2. Сравнительная характеристика комплексов бактерий по морфологическим и биохимическим признакам в подзолистых почвах в зоне влияния объекта (ПМ 1) и фоновой (ПМ Ф)

Из образцов подзолистой почвы было изолировано 22 культуры бактерий, относящихся к рр. Bacillus, Rhodococcus, Micrococcus,

Pseudomonas и др. В структуре комплекса бактерий почв с ПМ 1 по сравнению с ПМ Ф выявлены следующие отличительные особенности:

1) уменьшение в 2,7 раза доли подвижных форм бактерий;

2) увеличение на 10% доли оксидазоположительных изолятов бактерий;

3) увеличение в 5,2 раз количества изолятов бактерий-гидролитиков;

4) тенденция к увеличению доли грамотрицательных бактерий в комплексе (рис. 2).

Комплекс микроскопических грибов в почве с ПМ Ф был представлен видами 11 родов

(рис. 3). Доминировали представители р. Penicillium, к числу типичных частых относились рр. Trichoderma, Cladosporium, типичных редких - Aspergillus, Acremonium, Geomyces, Humicola, Paecilomyces.

Рис. 3. Структура комплексов микромицетов в подзолистых, дерново-подзолистой и аллювиальной болотной почвах

К числу отличительных особенностей структуры комплекса

микромицетов почвы с ПМ 1 по сравнению с ПМ Ф являлись: 1) сокращение i

количества родов с 11 до 6; 2) снижение частоты встречаемости представителей |

рода Aspergillus; 3) исчезновение из комплекса типичных представителей родов

Cladosporium, Humicola, Acremonium и Paecilomyces; 4) появление нового рода

Ulocladium; 5) переход рода Trichoderma из разряда часто встречающихся в

разряд доминирующих. i

Видовое разнообразие мицелиапьных грибов в почве с ПМ Ф (Н=5,04)

было в 2,3 раза выше, чем в почве с ПМ 1 (Н=2,14). Сравнение комплексов

микромицетов, выделенных из исследованных почв, с помощью коэффициента

Aspergillus

Humicola

Acremonium

Phialopliora

Geothrichum

Scopuiariopsis

Fusarium

Ulocladium

Типичный редкий

> 10 да > 30%

Случайный

от 0 до > 10%

Отсутствие рода

Trichoderma

Cladosporium

Типичный частый

сходства Съеренсена (Ks=0,52) подтверждает существенные перестройки в комплексе микромицетов, что, возможно, обусловлено воздействием пестицидов.

Анализ структуры комплексов микромицетов загрязнённых пестицидами дерново-подзолистой (ПМ 2) и аллювиальной болотной (ПМ 3) почв выявил общие с комплексом подзолистой почвы (ПМ 1) особенности структуры, заключающиеся в узком родовом спектре (5 и 4 рода) и доминирующем положении гриба Trichoderma viride.

Таким образом, нами выявлены изменения в структуре микромицетного и бактериального комплексов почв, загрязненных пестицидами, которые можно использовать для биодиагностики в отношении пестицидного загрязнения почвы.

Выявление способности к биодеструкции н реакций штамма Trichoderma viride Sil на присутствие пестицидов

Известно, что наличие в среде таких поллютантов, как тяжёлые металлы (Татзетдинова, 2008) и пестициды (Colla et al., 2008) оказывает влияние на морфобиологические и кинетические показатели Trichoderma viride. Поэтому представляло интерес изучение реакций природных изолятов данного гриба, выделенного из загрязнённых пестицидами почв, на присутствие в среде ТМТД и симазина.

Значение радиальной скорости роста колоний у изолята Т. viride, выделенного из почвы с ПМ 1 (Кг=0,65±0,11 мм/ч), было в 2,5 раза меньше скорости роста изолята, полученного из почвы с ПМ Ф (Кг=1,61±0,15 мм/ч). Максимальное значение данного показателя отмечено для изолята Т. viride из почвы с ПМ 3 (Кг=1,90±0,04 мм/ч). Скорость роста для изолята, выделенного из дерново-подзолистой почвы с ПМ 2, имела промежуточное значение (Кг=1,50±0,15мм/ч), которое существенно не отличалось от фонового. Полученные данные свидетельствуют о кинетической разнокачественности

штаммов этого вида, обусловленной, возможно, воздействием пестицидного загрязнения.

В дальнейшем для постановки модельных экспериментов использовали изолят Т. viride Sil. Наблюдали за изменениями химических показателей культуральной жидкости и биоморфологической структуры Т. viride Sil при росте в жидкой питательной среде Чапека с добавлением ТМТД и симазина в различных концентрациях.

Выявление способности к биодеструкции ТМТД и симазина у Т. viride Sil

При культивировании Т. viride Sil в жидкой питательной среде с добавлением ТМТД и симазина во всех вариантах опыта наблюдалось уменьшение концентрации исследуемых пестицидов в культуральной жидкости (табл. 1).

Таблица 1

Степень и скорость биодеструкции симазина и ТМТД в глубинной культуре

Т. viride Sl 1 (на седьмые сутки)

Вариант ПДК Симазин ТМТД

Исходная концентрация, мкг/мл Остаточная концентрация, х! О'2 мкг/мл | Степень деструкции, % Скорость деструкции, хЮ"3 мкг/ч s f" - 3 » 5 о а х а -с о о * Sil Остаточная концентрация, 1 х| О"3 мкг/мл 1 Степень деструкции, % f г ё I"5 Ш О Во О Ч ~

0,5 0,1 0 100,0 0,60 0,03 0 100,0 0,09

1 0,2 7,8±1,3 60,7 0,72 0,06 29,4±0,4 50,8 0,18

2 0,4 12,0±1,4 70,0 1,66 0,12 29,5±0,9 75,4 0,53

5 1,0 17,1±2,2 82,9 4,94 0,3 20,2±0,5 93,3 1,67

10 2,0 27,4±5,2 86,3 10,27 0,6 7,5±0,4 98,7 3,54

Таким образом, в результате анализа нами было выявлено, что штамм Т. viride Sil обладает способностью к биодеструкции пестицидов ТМТД (при исходной концентрации 0,6 мкг/мл) на 98,7% и симазина (при 2,0 мкг/мл) на 86,3%. Выявлена линейная зависимость скорости биодеструкции обоих пестицидов от их исходной концентрации (рис. 4).

v-, 10 1,0 25 ° о 0.1 Z2 0,3 0,4 O.S 05 0.7

Исходная концентрация симазина, мкг/ил Исходная концентрация ТМТД, мкг/ип

Рис. 4. Изменение скорости биодеструкции в зависимости от начальной концентрации симазина (а) и ТМТД (б)

Выявление адаптивных реакций у T. viride S11 на присутствие в среде ТА4ТД и симазина

Нами установлено методом хромато-масс-спекгрометрии наличие в культуральной жидкости T. viride S11 свободных аминокислот при достаточно высоких концентрациях пестицидов (от 2 ПДК и выше), в то время как в контрольном варианте эти соединения не были выявлены. Обнаруженные аминокислоты были иденгафицированы как у-аминобутират и глутамат. Максимальные концентрации этих соединений в вариантах с симазином были отмечены на первые сутки культивирования (2,1х10'6-2,7х10"6 мг/л), а в случае с ТМТД они возрастали (от 0,3x10* до 1,2x10"6 мг/л) вплоть до окончания периода наблюдения. Поскольку в литературе сообщалось, что экскреция свободных аминокислот в среду повышает устойчивость гриба к пестицидам (Pesticide Biotransformation in ..., 2001; Гончарова и др., 2010), мы можем рассматривать накопление этих соединений в культуральной жидкости как адашивную реакцию к токсическому действию симазина и ТМТД.

Под влиянием пестицидов наблюдалось на первые и третьи сутки культивирования снижение биомассы гриба по сравнению с контрольным вариантом в 1,5-2 раза. На седьмые супси значение биомассы в контроле (4,56±0,55 г/л) достоверно не отличалось от каждого из опытных вариантов (3,41-4,45 г/л), что косвенно свидетельствует о преодолении грибом токсического действия пестицидов.

При глубинном культивировании биомасса гриба Т. viride Sil была представлена следующими структурами: мицелиальные агрегаты (пеллеты),

свободный неагрегированный мицелий и споры (рис. 5).

Рис. 5. Морфологические структуры, образуемые Т. viride S11 при глубинном

культивировании в жидкой питательной среде. А: 1 - споры; 2 - свободный мицелий; В: - мицелиальный агрегат (р - периферическая зона; с - центральная зона; d — диаметр мицелиального агрегата)

Характерной морфобиологической реакцией Т. viride Sil на повышение концентрации пестицидов в среде было увеличение концентрации мицелиальных агрегатов. На третьи сутки культивирования количество данных структур в опытных вариантах превышало контрольное значение в 1,3-3,6 раза в зависимости от исходной концентрации пестицида. На седьмые сутки только в вариантах 5 и 10 ПДК количество мицелиальных агрегатов было в 1,82,8 раза, больше чем в контроле (рис. 6).

■ Симазин СТМТД

Рис. 6. Концентрация мицелиальных агрегатов по вариантам опыта (а) - 3-й сутки культивирования; (б) - 7-е сутки культивирования

Наряду с увеличением концентрации мицелиальных агрегатов характерной морфобиологической реакцией на пестициды было возрастание плотности этих структур, подтверждаемое результатами измерения величины их отдельных зон с последующим расчетом Ко (данные приведены в диссертации). В частности, на седьмые сутки культивирования значение коэффициента KD в каждом из опьггаых вариантов уменьшалось в 2,1-3,5 раза по сравнению с контролем (85,7%) по мере увеличения концентрации пестицида в среде.

Другой реакцией Т. viride Sl 1 на увеличение концентрации пестицида в среде было изменение длины неагрегированного мицелия. Если в первые сутки культивирования присутствие симазина и ТМТД в среде стимулировало рост мицелия в 1,2-2,6 раза, то при дальнейшем культивировании значение данного показателя в каждом из опытных вариантов уступало контрольному в 1,2-3,5 раза

Установлено, что Т. viride Sil проявляет адаптивные реакции на присутствие пестицидов ТМТД и симазина, заключающиеся в выделении в среду свободных аминокислот, в уменьшении дшшы неагрегированно мицелия, в увеличении концентрации и плотности мицелиальных агрегатов, что свидетельствует о его потенциале для биотестирования в отношении данных пестицидов.

Отбор штаммов микроорганизмов, способных к деградации пестицидов ТМТД и симазина

Отбор микробных штаммов-деструкторов осуществляли в несколько этапов: 1) селекция наиболее устойчивых к действию пестицидов штаммов в периодической культуре 2) анализ их физиологических признаков и свойств, включая выявление антагонизма между изолятами бактерий и микромицетов и 3) определение у них резистентности к повышенным концентрациям ТМТД и симазина.

Селекция микробных штаммов, наиболее устойчивых к действию ТМТД и симазина в периодической культуре

Исходя из литературных данных о роли комегаболитов в выделении микроорганизмов-деструкторов высоко персистентных пестицидов (Myazaki et al.,

1970; Yarden et al., 1985), селекцию штаммов микроорганизмов, устойчивых к действию ТМТД и симазина, проводили в двух вариантах: в первом - в качестве источника углерода служил пестицид, во втором - пестицид и 1% сахароза.

Всего было отселектировано 19 штаммов бактерий и 4 штамма микромицетов (табл. 2). Предварительно бактериальные изоляты были отнесены к рр. Enterobacter, Flavobacterium, Rhodococcus и Pseudomonas. Большинство из них составили представители рр. Pseudomonas (57%) и Flavobacterium (26%).

Таблица 2

Результаты селекции штаммов, устойчивых к ТМТД и симазину

Вариант селекции Бактериальные штаммы Штаммы микромицетов

Пестицид Наличие кометаболита (сахарозы), +/- Количество по вариантам, шт. Родовая принадлежность Количество по вариантам, шт. Родовая принадлежность

£ + 3 Pseudomonas, Enterobacter 2 Mycelia sterilia

- ■ 3 Pseudomonas, Flavobacterium 0 -

§ 3 + 4 Flavobacterium, Pseudomonas, Enterobacteria 1 Trichoderma

я я и - 9 Flavobacterium, Pseudomonas, Rhodococcus 1 Mycelia sterilia

Качественный и количественный состав бактериальных культур, выделенных с добавлением и без добавления кометаболита (сахарозы), принципиально не отличался. В частности, при сравнении признаков бактериальных штаммов, отселектированных по симазину и симазину+сахарозе, было установлено, что в вариантах с добавлением сахарозы доля гидролитиков составила 60%, а в вариантах без сахарозы - 80%. Также в аналогичных вариантах доли оксидазоположительных штаммов составили 80% и 60%, а облигатных аэробов - 90% и 80% соответственно. Такие же данные

получены в вариантах с ТМТД. Таким образом, селекция штаммов микроорганизмов-деструкторов ТМТД и симазина возможна и без добавления кометаболита.

Среди полученных в результате селекции микромицетов был идентифицирован вид Тпскойегта у^Ше, а три других штамма представляли собой светлоокрашенные формы стерильного мицелия МусеИа з1егШа. Анализ результатов измерения радиальной скорости роста колоний (табл. 3) позволил отнести данные грибные изоляты к типу быстрорастущих в соответствии с градациями, использованными в ранее опубликованных работах (Терехова и др., 1998).

Таблица 3

Радиальная скорость роста изолятов микромицетов, выделенных из различных вариантов опыта

Вариант селекции Штамм Скорость роста Кг, мм/ч

Пестицид Наличие кометаболита (сахарозы), +/-

ТМТД + МусеИа 51епНа Т11 0,83±0,13

МусеНа 51елНа Т12 0,63±0,04

Симазин + ТгхсЪойсгта \iride 5М1 1,80±0,06

- МусеНа 51егШа Б22 0,74±0,04

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что при длительном культивировании в присутствии органических пестицидов (симазина и ТМТД) преимущество получают быстрорастущие почвенные микромицеты.

Выявление антагонизма между штаммами бактерий и микромицетов Большинство микроорганизмов в естественных условиях реализует потенциал к биодеструкции в комплексе с другими представителями микробной системы. При этом эффективная трансформация ксенобиотиков возможна лишь при условии отсутствия антагонизма между организмами-

деструкторами (Bandara et al., 2006). Следующим этапом работы явилось выявление возможного антагонизма между бактериальными и грибными изолятами, полученными в результате селекции на устойчивость к изучаемым пестицидам. В модельном опыте было установлено отсутствие антагонизма между отдельными изолятами микромицетов: не наблюдалось явного подавления роста и изменений морфобиологических показателей грибов (плотность, окраска мицелия). В то же время было отмечено, что два бактериальных штамма Flavobacterium sp. ВАС5Т2 и Pseudomonas sp. BAC6S1 проявляли антагонизм по отношению ко всем грибным изолятам.

Определение чувствительности изолятов к повышенным концентрациям ТМТД и симазина

Наиболее устойчивые к токсическому действию пестицидов штаммы микроорганизмов, как правило, способны к активной биодеструкции этих ксенобиотиков (Bellinaso et al., 2003; Saikia, Gopal, 2004). Для выявления особо устойчивых штаммов использовали пестициды в концентрациях, превышающих в 100 и 200 раз концентрации, применявшиеся при селекции в последнем пассаже (табл. 4). В результате было определено, что штаммы Pseudomonas sp. BAC8S1, Pseudomonas sp. BAC11S2, Pseudomonas sp. BAC15S2 и Pseudomonas sp. BAC20S2 обладают резистентностью к симазину и ТМТД в концентрациях 20 и 0,2 мг/мл соответственно. В то же время были отмечены случаи ингибирования роста штаммов как пестицидом, по которому не проводилась селекция (симазином - штаммов Enterobacteria sp. ВАС1Т1, Pseudomonas sp, BAC2T1, Pseudomonas sp. BAC3T1 и ТМТД - Enterobacteria sp. BAC7S1, Pseudomonas sp. BAC13S2, Flavobacterium sp. BAC19S2, Rodococcus sp. BAC16S2), так и высокими концентрациями пестицида у штаммов, селектированных по данному пестициду (ТМТД - в концентрации 0,1 и 0,2 мг/мл - Pseudomonas sp. ВАС4Т2 и Pseudomonas sp. BAC3pT2, соответственно; симазином - в концентрации 10 мг/мл - Flavobacterium sp. BAC14S2, Flavobacterium sp. BAC17S2). Таким образом было определено, что

Таблица 4

Чувствительность штаммов бактерий и микромицетов

к различным концентрациям ТМТД и симазина

Вариант селекции Концентрация, мг/мл

симазина ТМТД

Пестицид а 1 И* х я 5 о -Ü-ж Штамм 10 20 од 0,2

Бактерии

Enterobacter BAC1T1 0 10 0 8

+ Pseudomonas BAC2TI 7 0 -

тмтд Pseudomonas BAC3T1 7 0

Pseudomonas BAC3pT2 0 0 0 25

Pseudomonas BAC4T2 0 7

Enterobacteria BAC7S1 8,5 . 7 .

+ Flavobacterium BAC8S1 0 0 0 0

Flavobacterium BAC9SI 0 12 0 12

Pseudomonas BAC11S2 0 0 0 0

Pseudomonas BACI3S2 0 - 7,5 -

Сиыазин FIa\'obacterium BAC14S2 20 0 -

Pseudomonas B AC15 S2 0 0 0 0

- Rodococcus BAC16S2 0 0 0 10

Flavobacterium BAC17S2 20 . 0 .

Pseudomonas B AC 18S2 7,5 0

Flavobacterium BAC19S2 10 10

Pseudomonas BAC20S2 0 0 0 0

Микрошшеты

тмтд + Mycelia steriliaTl 1 0 0 0 0

Mycelia sterilia T12 0 0 10 0

Симазин - Trichoderma viride SM1 0 0 0 0

+ Mycelia sterilia S22 0 0 0 0

Примечание: цифры обозначают радиус (мм) зоны отсутствия роста микроорганизмов вокруг диска с пестицидом; «-» — анализ не проводили

большинство бактериальных изолятов не обладают комплексной резистентностью к ТМТД и к симазину.

В случае грибных изолятов была выявлена чувствительность к ТМТД в концентрации 0,1 мг/мл только у МусеНа $1епНа Т12. Остальные штаммы микромицетов обладали резистентностью к высоким концентрациям данных пестицидов.

Таким образом, четыре штамма представителей рода Pseudomonas и штаммы микромицетов Trichoderma viride SM1, Mycelia sterilia Tll и Mycelia sterilia S22 обладают наибольшей резистентностью к ТМТД и симазину, что дает нам основание предполагать у них наличие потенциала к биодеструкции этих пестицидов.

Определение эффективности биодеструкции ТМТД и симазина искусственными ассоциациями микроорганизмов в модельных условиях

Биодеструкция пестицидов ассоциациями микроорганизмов

Из отселектированных и проявивших наибольшую резистентность к ТМТД и симазину штаммов были составлены три вида ассоциаций: бактериальная, грибная, смешанная (бактерии+грибы). Было установлено, что все экспериментальные ассоциации микроорганизмов были в разной степени способны к биодеструкции ТМТД и симазина (табл. 5).

Таблица 5

Динамика биодеструкции симазина и ТМТД ассоциациями микроорганизмов

в модельных условиях

Ассоциация Время культивирования, суг. Пестицид

ТМТД (0,2 мг/мл) Симазин (0,4 мг/мл)

Остаточная концентрация, мг/мл Степень деструкции, % Остаточная концентрация, мг/мл Степень деструкции, %

Бактериальная 3 0,12*0,01 40,9 0 100,0

7 0,09±0,01 52,2 - -

14 0,06*0,01 67,4 - -

Грибная 3 0,18±0,02 11,6 0,051±0,001 87,0

7 0,14±0,02 32,2 0 100,0

14 0,08±0,01 59,3 - -

Смешанная 3 0,17±0,03 17,7 0,132±0,002 67,5

7 0,11±0,04 44,2 0 100,0

14 0,07±0,01 61,2 - -

Примечание:* — » - анализ не проводили

Продолжительность деструкции симазина и ТМТД исследуемыми микробными ассоциациями заметно различалась. Полная деструкция симазина бактериальной ассоциацией была отмечена уже на третьи сутки, тогда как

грибной и смешанной - на седьмые сутки с начала культивирования. За период наблюдений полной деструкции ТМТД ни в одном из вариантов опыта достигнуть не удалось. На 14-е сутки инкубации наибольшее значение степени биодеструкции было в варианте бактериальной ассоциации (67,2%) по сравнению с грибной (59,3%) и смешанной (61,2%) ассоциациями.

Была отмечена тенденция к увеличению микробной биомассы в ряду ассоциаций: бактериальная < грибная < смешанная (табл. 6). Биомасса бактериальных ассоциаций в опытных вариантах по сравнению с контрольным была меньше в 5-8 раз, а грибной - в 3 раза. В присутствии ТМТД смешанная ассоциация уступала контролю по биомассе в 3 раза, а в варианте с симазином - значения достоверно не отличались. Эти данные свидетельствуют о замедлении процессов деления и развития клеток организмов-деструкторов под воздействием пестицидов.

Таблица 6

Биомасса (г/л) ассоциаций микроорганизмов в вариантах опыта

Ассоциация Вариант опыта

Контроль ТМТД Симазин

Бактериальная 0,40±0,08 0,05±0,01 0,08±0,01

Грибная 3,6±0,4 1,2±0,2 1,2±0,1

Смешанная 4,6±0,8 1,4±0,2 4,2±0,4

Фитотоксичность исходных растворов пестицидов и культуралъной жидкости микробных ассоциаций

Промежуточные продукты микробной деградации пестицидов могут оказаться более токсичными, чем исходные соединения (Попов и др., 2003). Поэтому важным показателем оценки перспективности штаммов для биоремедиации является отсутствие фитотоксичности (Молекулярные основы..., 2005).

В модельном опыте изучено влияние культуральной жидкости вариантов опыта и растворов пестицидов в исходных концентрациях на проростки ячменя. Оценивали всхожесть, показатели линейного роста и накопление биомассы

растений (табл. 7). Из исследуемых пестицидов наибольшее влияние на всхожесть семян оказывал симазин, снижая ее в 2,6 раза по сравнению с контролем. В меньшей степени снижалась всхожесть ячменя под влиянием ТМТД (на 13%). Культуральная жидкость микробных ассоциаций, культивируемых как в присутствии пестицидов, так и без них, также ингибировала всхожесть семян. Всхожесть снижалась в ряду: бактериальная > смешанная > грибная ассоциации. Линейные показатели проростков в вариантах с растворами пестицидов и культуральной жидкостью либо имели тенденцию к уменьшению значения, либо достоверно не отличались от контроля. Биомасса проростков в опытных вариантах достоверно не отличалась от биомассы контрольных растений.

Таблица 7

Влияние культуральной жидкости ассоциаций и растворов пестицидов на всхожесть,

линейные показатели и накопление биомассы проростками ячменя

Вариант Всхожесть, % Длина, см Биомасса, г

побег корень

Контроль (дистиллированная вода) 94 7,2±1,0 6,7±1,0 0,21±0Д4

Растворы пестицидов

Раствор ТМТД (0,2 мг/мл) 81 8,0±1,3 4,1±0,7 0,23±0,03

Раствор симазина (0,4 мг/мл) 36 8,2±1,1 3,9±0,7 0,2±0,01

Культуральная жидкость контрольных вариантов ассоциаций

Бактериальная 76 7,4 ±1,3 3,7±0,7 0,19±0,03

Грибная 9 5,1±0,6 2,4±0,4 0,13±0,01

Смешанная 28 7,9±1,4 3,6±0,5 0,19±0,03

Культуральная жидкость вариантов ассоциаций с ТМТД

Бактериальная 77 8,0±1,4 5,3±1,0 0,2±0,03

Грибная 18 7,0±1,3 4,4±0,7 0,2 ±0,01

Смешанная 31 4,4±0,8 4,0±0,7 0.26±0,01

Культуральная жидкость вариантов ассоциаций с симазином

Бактериальная 76 8,5±1,6 4,6±0,9 0,21±0,03

Грибная 5 7,3±0Д 4,2±0,8 0,18±0,03

Смешанная 61 7,4±1,4 8,0±1,5 0,24±0,02

Наименьшим фитотоксическим действием в результате определения морфометрических показателей проростков характеризовалась бактериальная ассоциация, наиболее эффективно осуществлявшая биодеструкцию ТМТД и симазина среди всех испытанных ассоциаций. Таким образом, бактериальная

ассоциация наиболее перспективна в целях ремедиации почв, загрязненных пестицидами ТМТД и симазином, по сравнению со смешанной и грибной ассоциациями.

ВЫВОДЫ

1. Впервые установлено, что структура комплекса микромицетов подзолистой почвы при пестицидном загрязнении имеет специфические черты, отличающие ее от комплекса микромицетов аналогичной почвы фоновой территории:

- расширение спектра доминантов за счет представителей рода Trichoderma,

- снижение родового и видового разнообразия,

- исчезновение представителей типичных частых и типичных редких в фоновой почве родов: Cladosporium, Humicola, Paecilomyces, Acremonium.

В структуре бактериального комплекса загрязненной пестицидами подзолистой почвы выявлено снижение в 2,7 раза доли подвижных форм и увеличение в 5,2 раз доли гидролитиков по сравнению с комплексом фоновой почвы. Это позволяет использовать комплексы микромицетов и бактерий в целях биоиндикации загрязненных пестицидами почв и разработки способов их ремедиации.

2. Составлена рабочая коллекция, включающая 17 изолятов бактерий и 4 изолята микромицетов, полученных путем селекции в периодической культуре с постоянно возрастающими концентрациями ТМТД и симазина. Наиболее устойчивыми к действию симазина и ТМТД среди бактерий были представители рода Pseudomonas sp., а среди микромицетов - штаммы Т. viride и Mycelia sterilia.

3. В модельных опытах показана биоморфологическая и кинетическая разнокачественность грибов Т. viride, выделенных из фоновой и загрязненной пестицидами подзолистой почвы, заключающаяся в вегетативной несовместимости штаммов при их попарном сращивании, более поздних сроках

начала спороношения и существенно меньшей радиальной скорости роста изолятов из загрязненной почвы.

4. Установлено, что к числу адаптивных реакций Т. viride на присутствие в среде ТМТД (0,03-0,6 мкг/мл) и симазина (0,1-2,0 мкг/мл) относятся: уменьшение в 1,2-3,5 раза по сравнению с контролем длины неагрегированного мицелия, увеличение в 1,3-3,6 раза концентрации и в 2,1-3,5 раза плотности мицелиальных агрегатов. В культуральной жидкости Т. viride в присутствии ТМТД (0,12-0,6 мкг/мл) и симазина (0,4-2,0 мкг/мл) выявлено наличие свободных аминокислот глутамата и у-аминобушрата.

5. У природного изолята Т. viride Sil при глубинном культивировании выявлена способность к биодеструкции симазина и ТМТД. Скорость биодеструкции линейно зависела от исходной концентрации того и другого пестицида. Степень деструкции на седьмые сутки культивирования микромицета в средах, содержащих пестицид в концентрациях равных 10 ПДК (ОДК), составила для симазина 86%, для ТМТД - 98% от исходного содержания.

6. Сравнительная оценка степени биодеструкции пестицидов искусственно составленными ассоциациями устойчивых к ним микроорганизмов показала, что бактериальная ассоциация штаммов Pseudomonas sp. BAC8S1, Pseudomonas sp. BAC11S2, Pseudomonas sp. BAC15S2 и Pseudomonas sp. BAC20S2 более эффективно осуществляла биодеструкцию ТМТД (67% на 14-е сутки культивирования) и симазина (100% на 3-й сутки) в сравнении с грибной и смешанной ассоциациями. Кроме того, при биотестировании бактериальная ассоциация характеризовалась меньшим по сравнению с грибной и смешанной ассоциациями фитотоксическим действием.

ПУБЛИКАЦИИ

1. Колупаев A.B., Ашихмина Т.Я., Широких И.Г. Реакция почвенных микромицетов на пестицидное загрязнение // Иммунология, аллергология, инфектология. 2009. № 2. С. 50-51.

2. Колупаев A.B., Широких A.A., Широких И.Г. Реакция гриба Trichoderma viride на пестицидное загрязнение // Иммунология, аллергология, инфектология. 2010. № 1. С. 64.

3. Колупаев A.B., Широких A.A., Широких И.Г. Биодеградация симазина и ТМТД микробными ассоциациями в лабораторных условиях // Иммунология, аллергология, инфектология. 2010. № 1. С. 64—65.

4. Ашихмина Т.Я., Колупаев A.B., Широких A.A. Биотрансформация пестицидов в наземных экосистемах (обзор) // Теоретическая и прикладная экология. 2010. № 2. С. 4-12.

5. Широких A.A., Колупаев A.B. Грибы в биомониторинге наземных экосистем //Теоретическая и прикладная экология. 2009. № 3. С. 4—14.

6. Колупаев A.B., Широких A.A., Широких И.Г. Трансформация пестицидов почвенной микрофлорой // Актуальные аспекты современной микробиологии: V молодежная школа-конференция с международным участием. Институт им. С.Н. Виноградского РАН - М.: МАКС Пресс, 2009. С. 112-114.

7. Колупаев A.B., Широких A.A., Широких И.Г. Изучение бактериального комплекса почв, загрязненного пестицидами // Инновационные методы и походы в изучении естественной и антропогенной динамики: Материалы всероссийской научной школы для молодежи (в 3 частях). Часть 3 (Киров, 30 ноября - 5 декабря 2009 г.). Киров: ООО «Лобань», 2010. С. 60-61.

8. Колупаев A.B., Широких A.A., Широких И.Г. Характеристика комплекса микромицетов почв, загрязненных пестицидами // Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов: Всероссийский симпозиум с международным участием, Москва, МГУ им. М.В. Ломоносова, биологический факультет, 24-27 декабря 2009 г.: Материалы. М.: МАКС Пресс, 2009. С. 86.

9. Колупаев A.B., Широких A.A. Влияние симазина на биоморфологическую структуру гриба Trichoderma viride в условиях лабораторной модели // БИОЛОГИЯ - НАУКА XXI ВЕКА: 14-я Пущинская международная школа-конференция молодых ученых. Пушино, 19-23 апреля. Сборник тезисов. 2010. С. 234.

Подписано в печать 13.09.2010 г. Формат 60x84 'Лб. Бумага офсетная. Усл. печ. л. 1,7. Тираж 100 экз. Заказ № 1464.

Издательство Вятского государственного гуманитарного университета, 610002, г. Киров, ул. Красноармейская, 26

Издательский центр Вятского государственного гуманитарного университета, 610002, г. Киров, ул. Ленина, 111, т. (8332) 673-674

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Колупаев, Алексей Вячеславович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. Взаимодействие почвенных микроорганизмов и пестицидов. 8 1.1. Пестициды как поллютанты почвенных экоситем.

1.2 Влияние пестицидов на почвенные микроорганизмы.

1.3 Влияние факторов среды на токсическое действие пестицидов.

1.4 Биодеструкция пестицидов в почве.

1.4.1 Стратегии микробной биодеструкции пестицидов.

1.4.2 Ферменты, участвующие в биодеструкции пестицидов.

1.4.3 Характеристика и механизмы биодеструкции почвенными микроорганизмами пестицидов симазина и ТМТД.

1.4.3.1 Характеристика симазина.'.

1.4.3.2 Механизмы биодеструкции симазина.

1.4.3.3 Характеристика ТМТД.

1.4.3.4 Механизмы биодеструкции ТМТД.

Глава II. Объекты и методы исследования.

2.1. Характеристика объекта исследования.

2.2. Микробиологические методы.

2.3 Химические методы.

Глава III. Численность и структура комплексов бактерий и микро-мицетов почв в окрестностях Кильмезского полигона захоронения пестицидов.

3.1 Численность комплексов бактерий и микромицетов почв окрестностей Кильмезского полигона захоронения пестицидов.

3.2 Сравнение структуры комплексов почвенных бактерий.

3.3 Сравнение структуры комплексов почвенных микромицетов.

Глава IV. Изучение физиолого-биохимических признаков изолятов Triclioderma viride, выделенных из почв в районе Кильмезского полигона захоронения пестицидов.

4.1 Фенотипические различия между изолятами Trichoderma viride, выделенными из почв района исследования.

4.2 Адаптивные реакции Т. viride S11 на присутствие симазина и ТМТД в среде.

4.2.1 Выявление способности Т. viride S11 к биодеструкции ТМТД и симазина.

4.2.2 Выявление биохимических адаптивных реакций Т. viride SI 1 на присутствие в среде ТМТД и симазина.

4.2.3 Выявление морфобиологических адаптивных реакций Т. viride SI 1 на присутствие в среде ТМТД и симазина.

Глава V. Биодеструкция пестицидов почвенными микроорганизмами.

5.1 Отбор перспективных штаммов микроорганизмов-деструкторов.

5.1.1 Селекция наиболее устойчивых к действию пестицидов штаммов микроорганизмов в периодической культуре.

5.1.2 Выявление антагонизма между штаммами микромицетов и бактерий.

5.1.3 Определение чувствительности штаммов к высоким концентрациям ТМТД и симазина.

5.2 Определение эффективности биодеструкции ТМТД и симазина искусственными ассоциациями микроорганизмов в модельных уело—88 виях.

5.2.1 Степень биодеструкции пестицидов ассоциациями микроорганизмов.

5.2.2. Фитотоксичность культуральной жидкости и растворов пестицидов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Почвенные микроорганизмы-биодеструкторы органических пестицидов"

2003). Одной их серьезных экологических проблем является загрязнение природных объектов органическими пестицидами, обладающими высокой токсичностью и персистентностью (Попов и др., 2003). Кроме мест интенсивного применения пестицидов, потенциальную опасность для окружающей среды и человека несут места их захоронения — специальные подземные бетонированные бункеры или колодцы. Одним из самых крупных среди таких объектов в РФ является Кильмезский полигон захоронения непригодных к использованию пестицидов и ядохимикатов (Кировская область), в котором захоронено около 590 т препаратов химической защиты. Токсичные вещества могут проникать из могильников в окружающую среду и создают угрозу для всех живых организмов, включая почвенное микробное население (Thyssen, 1998; Wodageneh, 1998). Большинство проводимых исследований посвящено изучению влияния пестицидов на популяции микроорганизмов в почвах агроценозов (Alexander, 1999; Soil pollution.,

2004), тогда как вопросы изучения почвенных микробных комплексов в районах захоронения пестицидов, освещены недостаточно. В то же время микроорганизмы, выделенные из экосистем, подвергающихся длительному воздействию пестицидов, обладают потенциалом к более быстрому разложению данных соединений (Nowak, 1998), что делает необходимым изучение микробных сообществ почв, загрязненных пестицидами, как для оценки биологического риска, так и для отбора перспективных агентов для технологии биоремедиации природных объектов.

Цель работы - изучение структуры микробных комплексов подзолистых почв в районе Кильмезского полигона захоронения пестицидов и поиск микроорганизмов-деструкторов органических пестицидов тетраметилтиурамдисульфида (ТМТД) и симазина.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

2. Описать адаптивные реакции у доминирующих в комплексе микроорганизмов (на примере Trichoderma viride) на присутствие в среде органических пестицидов ТМТД и симазина.

Установлено, что грибы рода Trichoderma, часто встречающиеся в комплексе микромицетов почвы с фоновой территории, переходят в разряд доминантных в комплексе при пестицидном загрязнении.

Выявлена характерная морфобиологическая реакция гриба Т. viride на возрастание в среде концентрации симазина и ТМТД, заключающаяся в формировании мицелиальных агрегатов различной плотности. С увеличением степени коагрегации мицелия доля неагрегированного мицелия соответственно снижалась, а скорость биодеструкции пестицидов, наоборот, возрастала. Экспериментально показана существенная роль процессов агрегации гиф в увеличении устойчивости микромицета Т. viride к симазину и ТМТД.

Показано, что эффективность биодеструкции симазина и ТМТД искусственными ассоциациями наиболее резистентных к данным пестицидам представителей аборигенной почвенной микрофлоры выше при использовании бактериальной ассоциации, чем грибной и смешанной (грибы+бактерии).

Штамм гриба Т. viride S11 рекомендован для использования в целях биотестирования в отношении ТМТД и симазина.

Публикации. Материалы исследований изложены в 9 печатных работах, в том числе 4 статьи опубликованы журналах, включенных в перечень ведущих рецензируемых изданий ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4-х глав экспериментальной части, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 140 страницах машинописного текста, включает 18 рисунков и 21 таблицу. Библиография насчитывает 340 наименований, из них 72 отечественных и 268 зарубежных работ.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Колупаев, Алексей Вячеславович

ВЫВОДЫ

- расширение спектра доминантов за счет представителей рода Trichoderma,

- снижение родового и видового разнообразия,

4. Установлено, что к числу адаптивных реакций Т. viride на присутствие в среде ТМТД (0,03-0,6 мкг/мл) и симазина (0,1-2,0 мкг/мл) относятся: уменьшение в 1,2—3,5 раза по сравнению с контролем длины неагрегированного мицелия, увеличение в 2,1-3,5 раза плотности мицелиальных агрегатов. В культуральной жидкости Т. viride в присутствии ТМТД (0,12-0,6 мкг/мл) и симазина (0,4-2,0 мкг/мл) возрастает содержание свободных аминокислот.

5. У природного изолята Т. viride S11 при глубинном культивировании выявлена способность к биодеструкции симазина и ТМТД. Скорость биодеструкции линейно зависела от исходной концентрации того и другого пестицида. Степень деструкции на седьмые сутки культивирования микромицета в средах, содержащих пестицид в концентрациях равных 10 ПДК (ОДК), составила для симазина 86%, для ТМТД - 98% от исходного содержания.

6. Сравнительная оценка степени биодеструкции пестицидов искусственно составленными ассоциациями устойчивых к ним микроорганизмов показала, что бактериальная ассоциация . штаммов Pseudomonas sp. BAC8S1, Pseudomonas sp. BAC11S2, Pseudomonas sp. BAC15S2 и Pseudomonas sp. BAC20S2 более эффективно осуществляла биодеструкцию ТМТД (67% на 14-е сутки культивирования) и симазина (100% на 3-й сутки) в сравнении с грибной и смешанной ассоциациями. Кроме того, при биотестировании бактериальная ассоциация характеризовалась меньшим, по сравнению с грибной и смешанной ассоциациями фитотоксическим действием.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследования микробоценозов почв, загрязненных пестицидами, имеют несомненную практическую значимость. Изменения в структуре комплексов почвенных микроорганизмов, вызванные токсическим действием пестицидов обладают биодиагностическим потенциалом. В то же время в популяциях микроорганизмов таких почв возможно появление штаммов, способных к активной деструкции пестицидов. Такие культуры, безусловно, перспективны для ремедиации природных сред.

В ходе настоящего исследования нами были получены результаты, которые были включены в Областную программу комплексного мониторинга Кильмезкого полигона захоронения пестицидов. В большинстве случаев, в мониторинговые исследования объектов захоронения пестицидов ограничиваются только периодическим анализом грунтовых вод и почв на наличие наиболее токсичных пестицидов (Бабкина и др., 2003; Лунев, 2005; Исаков и др., 2009). При этом авторами не уделяется внимания способам оценки влияния как самих пестицидов, так и продуктов их биодеструкции на биоту окрестных территорий.

Впервые нами была предпринята попытка использовать характеристики почвенной микрофлоры на различных уровнях (сообществ, популяций, организмов) в системе комплексного биомониторинга на примере одного из самых крупных в России захоронений непригодных к использованию пестицидов.

Предварительный химический анализ показал наличие пестицидов симазина и ТМТД в почвах в зоне влияния объекта в концентрациях 0,001— 0,002 мкг/г (0,01 ПДК) и 0,02-0,04 мкг/г (0,33-0,66 ОДК) соответственно.

Были показаны изменения в структуре комплексов бактерий и микромицетов подзолистых почв, загрязненных пестицидами, в сравнении с комплексом аналогичной почвы на фоновой территории. Комплекс бактерий подзолистых почв, загрязненных пестицидами, отличался от фонового уменьшением в 2,7 раза доли подвижных форм бактерий, увеличением на

10% доли оксидазоположительных изолятов и увеличением в 5,2 раза количества гидролитиков. Характерными перестройками в комплексе микромицетов подзолистой почвы, загрязненной пестицидами, было сокращение спектра родов, исчезновение представителей типичного частого рода Cladosporium и типичных редких родов Humicola, Paecilomyces, Acremonium. Также отмечено появление не характерного для почвы фоновой территории рода Ulocladium. В комплексах почв со всех площадок мониторинга виды p. Trichoderma становятся доминантными.

Данные исследования изменений естественных микробных сообществ загрязненных пестицидами почв подтвердили тенденции, заключающиеся в уменьшении доли подвижных форм и увеличении доли гидролитиков в комплексе почвенных бактерий, а также исчезновения некоторых родов и смене доминантов в комплексах почвенных микромицетов, выявленные в результате экспериментальных исследований других авторов по воздействию данных препаратов в почвах агроценозов.

Выявленные изменения в структуре микробных комплексов можно использовать для биодиагностики пестицидного загрязнения.

Большинство исследований по воздействию поллютантов на фенотипические признаки микромицетов проводится на примере тяжелых металлов (Soil ecotoxicology, 1997; Trichoderma and Gliocladium, 1998; Татзетдинова и др, 2008). Нами показано, что присутствие пестицидов в почве также может влиять на проявление реакции вегетативной несовместимости между изолятами Trichoderma viride и кинетические показатели этого гриба. Показано, что изоляты микромицета Trichoderma viride, выделенные из почв с площадок мониторинга в зоне влияния объекта обладали вегетативной несовместимостью. При изучении кинетических характеристик изолятов данного гриба, выделенного из почв с различных площадок мониторинга, было установлено, что реакцией Т. viride на присутствие почве ТМТД и симазина является уменьшение радиальной скорости роста. Этот факт также может быть учтен при биоиндикации подзолистых почв, загрязненных ТМТД и симазином.

Также нами проведено комплексное исследование реакций гриба Т. viride на присутвие в среде ТМТД и симазина. На примере штамма Т. viride S11 была выявлена способность к биодеструкции симазина (на 86%) и ТМТД (на 68%) в модельных условиях. Было показано, что скорость биодеградации линейно возрастает при увеличении исходной концентрации того и другого пестицидов. Было экспериментально установлено, что при повышении концентрации (до 5 и 10 ПДК) исследуемых пестицидов в среде происходит включение такого механизма детоксикации, как увеличение концентрации свободных аминокислот, а также изменение биоморфологической структуры гриба (увеличение концентрации и плотности мицелиальных агрегатов, уменьшение длины неагрегированного мицелия).

Большинство исследований структуры мицелиальных грибов при глубинном культивировании носят прикладной характер для биотехнологических производств (Сох et al., 1998). Наиболее часто объектами таких исследований служат штаммы грибов Aspergillus niger и Penicillium chrysogenum. Авторами показано, что воздействие различных факторов среды (рН, концентрация и форма источника углерода, степень аэрации, перемешивание, температура и др.) оказывает влияние на формирование мицелиальных агрегатов (Cui et al., 1998). Наши исследования на примере штамма Т. viride S11 расширили представления в данной области. В эксперименте было показано, что к числу этих факторов можно причислить наличие в среде пестицидов ТМТД и симазина.

В целом, выявленная зависимость морфобиологических реакции Т. viride S11 от концентрации ТМТД и симазина в среде в сочетании со стабильностью этого штамма при хранении указывают его на перспективность для применения в целях биотестирования в отношении ТМТД и симазина.

В большинстве случаев для поиска штаммов микроорганизмов, способных к деструкции симазина и ТМТД, исследователями выбираются почвы агроценозов (Shirkot C.L. 1994; Santiago et al., 2003; Krutz et al., 2008; Sparling et al., 2008). В нашем исследовании было показано, что почвы, расположенные на территориях вблизи объектов длительного храненияи захоронения пестицидов также могут рассматриваться в качестве перспективных для поиска микроорганизмов-биодеструкторов пестицидов. В результате селекции резистентных штаммов в двух вариантах: с кометаболитом (сахарозой) и без кометаболита — были получены бактериальные штаммы pp. Enterobacteria, Rodococcus, Flavobacterium и Pseudomonas и штаммы микромицетов p. Trichoderma и Mycelia sterilia. При изучении свойств штаммов бактерий, полученных в различных вариантах селекции, было показано, что отсутствие в среде сахарозы не влияет на их физиолого-биохимические признаки, что противоречит результатам Moore J.K. и соавторов (1983). Возможно, это связано как с особенностями выделенных микроорганизмов, так и с действием изучаемых нами пестицидов.

Установлено, что наиболее резистентными к повышенным концентрациям пестицидов (ТМТД - 0,1 и 0,2 мг/мл; симазина — 10 и 20 мг/мл) были штаммы Pseudomonas sp. BAC8S1, Pseudomonas sp. BAC11S2, Pseudomonas sp. BAC15S2 и Pseudomonas sp. BAC20S2 и Trichoderma viride SMI, Mycelia sterilia T11 и Mycelia sterilia S22.

В литературных источниках описаны результаты успешной биодеструкции различных пестицидов ассоциациями почвенных бактерий (Katsuyama, et al., 2009; Krishna,, Philip, 2009), микромицетов (Bordeleau et al.,1971), а также смешанной ассоциации (Levanon, 1993). В нашем исследовании проведено сравнительное изучение эффективности биодеструкции ТМТД и симазина искусственными ассоциациями наиболее резистентных штаммов бактерий и микромицетов по отдельности и совместно. Было экспериментально показано, что наиболее эффективно биодеструкция ТМТД (до 67%) и симазина (100%) происходила под воздействием ассоциаций бактериальных штаммов Pseudomonas sp. BAC8S1, Pseudomonas sp. BAC11S2, Pseudomonas sp. BAC15S2 и Pseudomonas sp. BAC20S2, чем под воздействием грибной и смешанной ассоциаций. Бактериальная ассоциация, кроме того, проявляла наименьший по сравнению с грибной и смешанной ассоциациями фитотоксический эффект в отношении проростков ячменя.

Результаты опыта могут свидетельствовать о том, что искусственная ассоциация бактерий наиболее перспективна и может быть рекомендована в целях ремедиации почв, загрязненных ТМТД и симазином.

Отметим также, что изменения микробных комплексов почв изучаемого района являются следствием негативных хронических процессов, связанных с возможным вымыванием пестицидов из захоронения. Поэтому необходимо продолжать мониторинговые исследования природных сред в районе Кильмезкого полигона захоронения пестицидов для своевременного предупреждения более серьезных последствий.

Вместе с тем, почвы с прилегающих к объекту территорий могут рассматриваться как перспективные для поиска штаммов микроорганизмов-деструкторов данных ксенобиотиков с целью их последующего коммерческого использования для ремедиации природных объектов, загрязненных пестицидами.

105

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Колупаев, Алексей Вячеславович, Киров

1. Абакумов В.А. Экологические модификации и развитие биоценозов // Экологические модификации и критерии экологического нормирования: Тр. Междунар. Симпоз., Нальчик, 1-12 июня 1990 г. JL: Гидрометеоиздат, 1991. -С. 18-40.

2. Агрономическая микробиология / Под ред. Г.С.Муромцева JL: Колос, 1976.-231 с.

3. Александрова А.В., Великанов JI.JI., Сидорова И.И. Ключ для определения рода Trichoderma // Микология и фитопатология. — 2006. — Т. 40. Вып. 6. С. 457-468.

4. Ананьева Н.Д. Микробиологические аспекты самоочищения и устойчивости почв. М.: Наука, 2003. - 223 с.

5. Андреев А.В. Оценка биоразнообразия, мониторинг и экосети / Под ред. П.Н. Горбуненко. Кишинев: BIOTICA, 2002. - 168 с.

6. Анисимова М.А. Детоксицирующая способность почв и выделенных из них гуминовых кислот по отношению к гербицидам.: Автореф. дис. .кан. биол. наук. М., 1997. - 24 с.

7. Бабкина Э.И., Сурин В.А., Самсонов Д.П., Цитцер О.Ю. и др. Полигоны захоронения пестицидов как источник загрязнения окружающей среды // Природные ресурсы. Использование и охрана природных ресурсов в России. -2003,-Бюл. № 11-12.-С. 115-122.

8. Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. М.: МГУ, 1983. - 248 с.

9. Биоиндикаторы и биотестсистемы в оценке окружающей среды техногенных территорий / Ред. Т.Я. Ашихмина, Н.М. Алалыкина. Киров: О-Краткое, 2008.-336 с.

10. Бурков Н.А., Зубова Т.И. Экологические последствиянеутилизируемых пестицидов // Аграрная наука достижения и перспективы: Тез. докл. научн. конф. Киров, 9-10 июня 1994. - Киров, 1994. — С. 56-58.

11. Васильева Г.К., Орлинский Д.Б., Семенова Н.А., Герц С.М., Башкин В.Н. Разработка крупномасштабного картирования территорий по самоочищающейся способности почв от остатков пестицидов // Агрохимия. -1991. -№ б -С. 81-93.

12. Введение в прикладную энзимологию. Иммобилизованные ферменты / Под ред. И.В. Березина, К. Мартинека. М.: Высшая школа, 1982. - 383с.

13. Веселовский И.В., Живицкий Г.П. Влияние симазина и междурядных обработок на некоторые агрохимические свойства почвы // Агрохимия. — 1976.-№2.-С. 127-133.

14. Володарская Н.А., Баскаков Ю.А., Спиридонов Ю.Я., Мельникова И.Я. Миграция и скорость детоксикации некоторых сим-триазинов в дерново-подзолистой среднесуглинистой почве // Агрохимия. 1975. - № 12. - С. 103108.

15. Галиулин Р.В., Пачепский Я.А., Сухопарова В.П., Соколов М.С., Шукюров Т.Х. Самоочищение сельскохозяйственных территорий от остаточного количества стойких пестицидов в зависимости от свойств почв // Агрохимия. 1990. -№ 1. - С. 97-114.

16. Гигиенические нормативы содержания пестицидов в объектах окружающей среды. М.: Информационно-издательский центр Госкомсанэпиднадзора России, 1997. - 52 с.

17. Головлева Л.А., Головлев Е.Л., Зякун A.M. и др. Метаболизм ордрама -гербицида тиокарбамата микроорганизмами // Известник АН СССР. Серия биол., 1978.-№ 1,-С. 44-51.

18. Гончарова И.А., Луговнева А.П., Воронкович Н.В., Валюта А.А. Действие фунгицидных препаратов на жизнедеятельность плесневых грибов // Иммунопатология, аллергология, инфектология. — 2010. — № 1. — С. 233.

19. Горбатова О.Н., Жердев А.В., Королева О.В. Триазиновые пестициды: Структура, действие на живые организмы, процессы деградации // Успехи биологической химии. 2006. - Т. 46. — С. 323-348.

20. Горбатова О.Н., Королева О.В., Ландесман Е.О., Степанова Е.В., Жердев А.В. Индукция биосинтеза лакказы как способ увеличения потенциала детоксификации базидиомицетами // Прикладная биохимия и микробиология. 2006 - Т. 42 - № 4 - С. 468-474.

21. Григорьев A.M. Особенности развития микроскопических грибов под клевером при загрязнении почв.: Автореф. дис. .канд. биол. наук. М., 2003.-22 с.

22. Добровольская Т.Г. Структура бактериальных сообществ почв. М.: Академкнига, 2002. 281 с.

23. Дурмишидзе С.В., Буадзе О.А., Девдариани Т.В., Кахая М.Д., Кавтарадзе Л.К. Влияние бенз(а)пирена на ультраструктуру делящихся клеток корня кукурузы // Растения и химические канцерогены. Л.: Наука, 1979.-С. 12-13.

24. Дьяков Ю.Т. Вегетативная несовместимость грибов простейшая форма иммунного ответа // Современная микология в России. Том 2. Материалы 2-го Съезда микологов России. - М.: Национальная академия микологии, 2008. - С. 34.

25. Звягинцев Д.Г. Почва и микроорганизмы. М.: МГУ, 1987. - 256 с.

26. Захаренко В.А. Гербициды. М.: Агропромиздат, 1990. - 240 с.

27. Зименко Т.Г., Самсонова А.С., Мисник А.Г., Гаврилкина Н.В., Филипшанова Л.И. Микробные ценозы торфяных почв и их функционирование. -Мн.: Наука и техника, 1983. 181 с.

28. Зинченко В.А. Природа действия гербицидов производных триазина на растения. М.: Мин-во с-х: ТСХА, 1972. - 28с.

29. Кожевии П.А. Микробные популяции в природе. М.: Московский университет, 1989. - 175 с.

30. Куликова Н.А. Связывающая способность и детоксицирующие свойства гумусовых кислот по отношению к атразину.: Автореф. дис. .канд. биол. наук. М., 1999. - 29с.

31. Кураков А.В. Методы выделения и характеристики структуры комплексов микроскопических грибов наземных экосистем. М.: МАКС Пресс, 2001.-92 с.

32. Литвинов М.А. Определитель микроскопических почвенных грибов. -Л.: Наука, 1967.-303 с.

33. Лунев М.И. Пестициды и охрана агрофитоценозов. М.: Колос, 1992.270 с.

34. Мартыненко В.И., Промоненков В.К., Кукаленко С.С.,

35. Володкович С.Д., Каспаров В.А. Пестициды: справочник. М.: Агропромиздат, 1992. — 368.с.

36. Марфенина О.Е. Антропогенная экология почвенных грибов / О.Е. Марфенина. М.: Медицина для всех, 2005. - 195 с.

37. Марфенина О.Е. Антропогенные изменения комплексов микроскопических грибов в почвах.: Автореф. дис. .д-ра. биол. наук. М., 1999.-49 с.

38. Мельников Н.Н. Пестициды. Химия, технология и применение. М.: Химия, 1987.-712 с.

39. Методы почвенной микробиологии и биохимии: Уч. пособие / Под ред. Д.Г. Звягинцева. -М.: Изд-во МГУ, 1991. 304 с.

40. Микробная деградация пестицидов / Т.П. Дворникова и др.; отв.ред. И.И. Либерштейн; Акад. наук СССР Молдова, Отд. микробиологии. -Кишинев: Штиинца, 1991. 80 с.

41. Микроорганизмы и охрана почв / Под ред. Д.Г. Звягинцева. — М.: Изд-во МГУ, 1989.-206 с.

42. Мирчинк Т.Г. Почвенная микология. М.: МГУ, 1988. - 220 с.

43. Молекулярные основы взаимоотношений ассоциативных микроорганизмов с растениями / Под ред. В.В. Игнатова. М.: Наука, 2005. -262 с.

44. МУ 1766-77. Методические указания по определению хлорорганических пестицидов в почвах методом газожидкостной хроматографии. М.: «Колос», 1992. - 20 с

45. МУ 3222-85. Унифицированная методика определения фосфорорганических пестицидов в продуктах растительного и животного происхождения, лекарственных растениях, кормах, воде, почве хроматографическими методами. М.: «Колос», 1989. - 108 с.

46. МУ 5044-89. Методические указания по определение ТМТД и продуктов его превращения в воде, зерновых культурах. М.: «Колос», 1992. -23 с

47. Мэггаран Э. Экологическое разнообразие и его измерение. М.: Мир, 1992.- 173 с.

48. Общая микробиология / под ред. А.И. Нетрусова, И.Б. Котовой М.: Издательский центр «Академия», 2007. - 288 с.

49. Одум Ю. Экология в 2-х томах Т. 2. / Пер. с англ. М.: Мир, 1986.376 с.

50. Отурина И.П., Кобечинская В.Г. Экологический аспект загрязнения почв Крыма агрохимикатами // Сб. «Актуальные вопросы развития инновационной деятельности в государствах с переходной экономикой». — Симферополь, 2001. С. 80-82.

51. Полянская Л.М., Кочкина Г.Н., Кожевин П.А., Звягинцев Д.Г. Кинетическое описание комплексов почвенных актиномицетов // Микробиология, 1989.-Т. 57.-№ 5.-С. 854-859.

52. Попов С.Я., Дорожкина Л.А., Калинин В.А. Основы химической защиты растений / Под ред. С .Я. Попова. М.: Арт-Лион, 2003. - 208 с.

53. Практикум по микробиологии / А.И. Нетрусов, М.А. Егорова, Л.М. Захарчук и др.; Под ред. А.И. Нетрусова. М.: Изд. центр «Академия», 2005. - 608 с.

54. Рабинович М.Л., Болобова А.В., Васильченко Л.Г. Разложение природных ароматических структур и ксенобиотиков грибами // Прикладная биохимия и микробиология. 2004. - Т. 40 - № 1. - С. 5-23.

55. Романенко Н.Д., Попов И.О., Таболин С.Б., Бугаева Е.Н., Заец В.Г. Переспективы использования бактерий-антагонистов против наиболее фитопатогенных видов нематод, вирусов и грибов // Агро XXI. 2008. — № 1-З.-С. 23-27.

56. Саттон Д., Фогертилл А., Ринальди М. Определитель патогенных и условнопатогенных грибов. М: Мир, 2001. — 486 с.

57. Семенкова И.Г., Соколова Э.С. Фитопатология М.: Издательский центр «Академия», 2003. - 480 с.

58. Семенова Н.Н. Построение имитационных моделей поведения пестицидов в агроценозе // Агро XXI. 2007. - № 7-8. - С. 9-11.

59. Современная микробиология: Прокариоты: В 2-х томах. Т. 2. / Под ред. Й. Ленгелер, Г. Древе, Г. Шлегель. М.: Мир, 2005. - 496 с.

60. Соколова Т.А., Алексеева С.А. Поглощение почвами сульфат-иона (обзор литературы) // Почвоведение. 2008. - № 2. - С. 158-167.

61. Татзетдинова Д.И. Биологическая активность выщелоченных черноземов Юго-востока Республики Татарстан.: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Казань, 2008. - 24 с.

62. Терехова В.А. Микромицеты в оценке водных и наземных экосистем. -М.: Наука, 2007.-215 с.

63. Терехова В.А., Семенова Т.А., Трофимов С.Я. Структура комплексов микромицетов в подстилке заповедных ельников Тверской области // Микология и фитопатология. 1998. - Т. 32. - Вып. 3. - С. 18-24.

64. Уиттекер Р. Сообщества и экосистемы. М.: Прогресс, 1980. - 328 с.

65. Федоров JI.A., ЯблоковА.В. Пестициды токсический удар по биосфере и человеку. - М.: Наука, 1999. - 462 с.

66. Федосеева Е.В., ПацаеваС.В., Терехова В.А. Влияние гумата калия на некоторые физиологические характеристики микроскопических грибов разной пигментации // Микология и фитопатология. 2009. - Т. 43. - Вып. 3. -С. 243-249.

67. Хабибуллина Ф.М. Биологическое разнообразие и продуктивность антропогенных экосистем Крайнего Севера. — Екатеринбург, 2005. 122 с.

68. Чкаников Д.И. Поведение 2,4-Д и других хлорфеноксикислот в почве // Агрохимия. 1983.-№ 12.-С. 111-121.

69. Экология микроорганизмов / Под ред. А.И. Нетрусова. М.: Академия, 2004.-272.

70. AbdEl-Ghany Т.М., AbdEl-Mongy М., Afify М.М. Dynamic changes in amino acids and volatile metabolites of soil fungus Aspergillus flavus as result of chloropyrifose methyl application // J. of App. Sci. Research. 2009. - Vol. 5. -№ l.-P. 1-8.

71. Aelion C.M., Swindoll C.M., Pfaender F.K. Adaptation to and biodegradation of xenobiotic compounds by microbial communities from a pristine aquifer// Appl. Environ. Microbiol. 1987. - Vol. 53. -№ 9. - P. 2212-2217.

72. Aggarwal P.K, Sud R.K., Gupta K.G. Effect of pesticides on the methylene blue reduction test in milk // J. of Dairy Science. 1973,- Vol. 56. - P. 1562-1564.

73. Alexander M. Biodegradation and Bioremediation. 2nd ed. San Diego, CA: Academic, 1999.-453 p.

74. Alexander M. Biodegradation of organic Chemicals // Environmental Sci. Technology. 1985. -№ 18.-P. 106-110.

75. Alexander M. Biodegradation of Chemicals of Environmental // Concern. Sci.-1981.-№211.-P. 132-138.

76. Allinson M., Williams В., Graymore M., Stagnitti F. Environmental fate of pesticides used in Australian viticulture IV. Aqueous stability of dithianon // Toxicol. & Environm. Chemistry. 1999. - Vol. 70. - № 3-4. - P. 401-414.

77. An introduction to environmental biotechnology / Ed. by M. Wainwright. Technology & Engineering, 1999.-p. 171.

78. Andreoni V., Colombo M., Gennari M., Negre M., Ambosoli R. Cometabolic degradation of acifluorfen by a mixed microbial culture // J. Environm. Sci. 1994. - № 29. - P. 963-987.

79. Applied bioremediation and phytoremediation / Ed. by A. Singh, O.P. Ward. Springer, 2004.-p. 281.

80. Awadalla O.A. El-Refaie I.M. Effect of herbicides on toxicity of fungicides against Rhizoctonia solani causing damping-off of control // J. of Phytopatology. -1993,-Vol. 140.-P. 187-192.

81. Ayansina A.D.V., Oso B.A. Effect of two commonly used herbicides on soil microflora at two different concentrations // African J. of Biotechnol. — 2006. — Vol. 5.-P. 129-132.

82. BacmagaM., Kucharski J., WyszkowskaJ. Impact of crop protection chemicals on plants and animals // J. Elemenmtol. 2007. - № 12. — S. 135-148.

83. Bandara W.M.M.S., Seneviratne G., Kulasooriya S.A. Interactions among endophytic bacteria and fungi: effects and potentials // J. Biosci. 2006. - Vol. 31. -P. 645-650.

84. BarrD.P., Augst S.D. Pollutant degradation by white rot fungi // Rev. Environ. Contam. Toxicol. 1994. -№ 138. - P. 49-72.

85. Belimov A.A., Deitz K.-J. Effect of associative bacteria on element composition of barley seedlings grown in solution culture at toxic cadminium concentrations//Microbiol. Res. 2000. - Vol. 155.-P. 113-121.

86. Bellinaso M., Greer C.W., Peralba M. Biodegradation of the herbicide trifluralin by bacteria isolated from soil // Microbiol. Ecol. 2003. - Vol. 43. -P. 191-194.

87. Bioindicator systems for soil pollution / Ed. by N.M. van Straalen, D.A. Krivolutskii. Springer, 1996. - 261 p.

88. Biology of prokaryotes / Ed. by J.W. Lengeler, G. Drews, H.G. Schlegel. -Georg Thieme Verlag, 1999. 955 p.

89. Bioremediation through Rhizosphere Technology. ACS Symposium Series № 563 / Ed. by T.A. Anderson, J.R. Coats. American Chemical Society. 1994. -249 p.

90. Biziulc M. Pestycydy, wystepowanie, oznaczanie I unieszkodliwianie. -Warszawa: Naukowo-Techiczne, 2001. 275 p.

91. Bloem J., Hopkins W., Benedetti A. Microbiological methods for assessing soil quality. CABI, 2006. - 307 p.

92. Bogan B.W., Lamar R.T. One-electron oxidation in the degradation of creosote polycyclic aromatic hydrocarbons by Phanerochaete chrysosporium II Appl. and Environm. Microbiol. 1995. - Vol. 61. - No. 7. - P. 2631-2635.

93. BoganB.W., Lamar R.T., Hammel K.E. Fluorene oxidation in vivo by Phanerochaete chrysosporium and in vitro during manganese peroxidase-dependent lipid peroxidation // Appl. Environm. Microbiol. 1996. - Vol. 62. - № 5.-P. 1788-1792.

94. Bollag J.-M. Biochemical transformation of pesticides by soil fungi. CRC // Crit. Rev. Microbiol. 1972. - № 2. - P. 35-58.

95. Bordeleau L.M., Bartha R. Ecology of herbicides transformation: synergism of two soil fungi // Soil biology and biochemistry. 1971. - Vol. 3. - № 4. -P. 281-284.

96. Bottomley P.J., SaweyerT.E., Boesma L. DickR.P., Hemphill D.D. Winter cover crop enhances 2,4-D mineralization potential of surface and subsurface soil // Soil Biol. Biochem. 1999. - V. 31. - № 6. - P. 849-857.

97. Bray J.R., Curtis J.T. An ordination of the upland forest communities of southern Wisconsin // Ecol. Monogr. 1957. - Vol. 27. - P. 325-349.

98. Breazeale F.W., Camper N.D. Bacterial, fungal and actinomycete populations in soils receiving repeated applications of 2,4-dichloro-phenoxy acetic acid and trifluralin // Appl. Microbiol. 1970. - № 19. - P. 369-380.

99. Brenner S. The molecular evolution of genes and proteins: tale of two series // Nature. 1988. - № 334. - P. 528-530.

100. Brewer D., Taylor A., Keeping J.W., Taha A.A., Thaller V. Production of experimental quantities of isocyanide metabolites of Trichoderma hamatum // Can. J. Microbiol. 1982. - № 28. - P. 1252-1260.

101. Bridges J.S., Dempsey C.R. Pesticide waste disposal technology. William Andrew. - 1988.-331 p.

102. Brokamp A., Happe В., Schmidt F.R.J. Cloning and Nucleotide Sequence of a D,L-Haloalkanoic Acid Dehalogenase Encoding Gene from Alcaligenes xylosoxidans ssp. denitrificans ABIV // Biodegradation. 1997. - № 7. - P. 383396.

103. Bryant D.W., McCalla D.R., Leeksma M., Laneuville P. Type I nitroreductases of Escherichia coli II Can. J. Microbiol. 1998. - № 127. - P. 8186.

104. BuckovaM., Godocikova J., PolekB. Responses in the mycelial growth of Aspergillus niger isolates to arsenic contaminated environments and their resistance to exogenic metal stress // J. of Basic Microbiol. 2007. - Vol. 47. -P. 295-300.

105. Busse M.D., Ratcliff A.W., Shestak C.J., Powers R.F. Glyphosphate toxicity and the effects of long-term vegetation control on soil microbial communities // Soil Biol. Biochem.-2001.-Vol. 33.-P. 1777-1789.

106. Bordjiba O.; Steiman R.; Kadri M.; Semandi A.; Guiraud P. Removal of herbicides from liquid media by fungi isolated from a contaminated soil // J. of Environm. Quality. 2001. - Vol. 30. - P. 418-426.

107. Caracciolo A.B., Giuliano G., Grenni P., Guzzella L., Pozzoni F., Bottoni P., et al. Degradation and leaching of the herbicides metolachlor and diuron: a case study in an area of Northern Italy // Environm. Pollution. 2005. - Vol. 134. -P. 525-534.

108. Carvalho D.D.C., Oliveira D.F., Correa R.S.B., Campos V.P., Guimaraes R.M., Coimbra J.L. Rhizobacteria able to produce phytotoxic metabolites // Brazilian J. of Microbiol. 2007. - Vol. 38. - P. 759-765.

109. Cassidy M.B., Trevors J.T., Zablotowicz R.M. Chlorophenol and nitrophenol metabolism by Sphinogomonas sp. UG30 // J. Ind. Microbiol. Biotechol.- 1999.-№ 23.-P. 351-368.

110. Cerniglia C.E. Biodegradation of polycyclic aromatic hydrocarbons // Biodegradation. 1992.-№3.-P. 351-368.

111. Chaudhry G.R., Ali A.N., Wheeler W.B. Isolation of a methyl parathion-degrading Pseudomonas sp. that possesses DNA homologous to the opd gene from a Flavobacterium sp. // Appl. Environm. Microbiol. 1988. - № 54. - P.' 288-293.

112. Chen H.L., Yao J., Wang F., Bramanti E., Maskow Т., Zaray G. Acute toxic effects of three pesticides on Pseudomonas putida monitored bymicrocalorimeter I I J. Environm. Sci. Health. B. 2009. - Vol. 44. - № 2. - P. 157-163.

113. Choi K.D., Jeohn G.H., Rhee J.S., Yoo O.J. Cloning and nucleotide sequence of an esterase gene from Pseudomonas fluorescens and expression of the gene in Escherichia coli II Agric. Biol. Chem. 1990. - № 54. - P. 2039-2045.

114. Colla L.M., Primaz A.L., de Lima M., Bertolin Т.Е., Costa J.A.V. Isolation and screening of fungi to bioremediation from triazine herbicide contaminated soil // Cienc. agrotec.- 2008. Vol. 32. - №. 3. - P. 809-813.

115. Cox P.W., Paul G.C., Thomas C.R. Image analysis of the morphology of filamentous micro-organisms //Microbiology. 1998. - Vol. 144. - P. 817-827.

116. Cui Y.Q., van der Lans R.G.J., Luyben K.C.A.M. Effect of agitation on fungul morphology of submerged fermentation // Biotechnology and Bioengineering. 1997. - Vol. 55. - № 5. - P. 715-726.

117. Cycori M., Piotrowska-Seget Z. Changes in bacterial diversity and community structure following pesticides addition to soil estimated by cultivation technique // Ecotoxicology. 2009. - Vol. 18. - P. 632-642.

118. CyglerM., Grochulski P., SchragJ.B. Structural determinants defining common stereoselectivity of lipases toward secondary alcohols // Can. J. Microbiol. 1995.-№41.-P. 289-296.

119. DeSouzaM.L., Seffernick J., Martinez В., Sadowsky M.J., WackettL.P. The atrazine catabolism genes atzABC are widespread and highly conserved // J. Bacteriol. 1998. - Vol. 180. - № 7. - P. 1951 -1954.

120. Dec J., Bollag J.-M. Phenoloxidase-mediated interactions of phenols and anilines with humic materials // J. Environ. Qual. — 2000. — № 29. — P.665-676.

121. Dieguez-Carbonell D., Rodriguez Pascual C. Adsorption of the herbicide "2,4-D" by montmorillonite // Environ. Qual. Safety. 1975 suppl. Vol. III. -237 p.

122. Don P.H., Pemberton J.M. Genetic and physical map of 2,4-dichlorphenoxyacetic acid degradative plasmid pJP 4 // J. Bacteriol. - 1985. - V. 161.-№ l.-P. 466-468.

123. Dorr V.R. Die Aufnahme von 3,4-Benzpyren durch Pflanzenwurzeln // Landwirtsch Forsch. 1970. - Bd. 23. - S. 371-379.

124. DuaM., Singh A., Sethunathan N., Johri A.K. Biotechnology and bioremediation: successes and limitations // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2002 -Vol. 59.-P. 143-152.

125. Duah-Yentumi S., Johnson D.B. Changes in soil microflora in response to repeated applications of some pesticides // Soil Biol. Biochem. 1986. - Vol. 18. P. 629-635.

126. Dumontet S., Perucci P. The effect of acifluorfen and trifluralin on the size of microbial biomass in soil // The Sci. of the Total Environm. 1992. - Vol. 123-124.-P. 261-266.

127. Edelstein L., Hadar Y. A model for pellet size distributions in submerged mycelial cultures // J. Theor. Biol. 1983. - Vol. 105. - № 3. - P. 427-452.

128. Engelhardt G., Wallnofer P.R., Plapp R. Purification and properties of an aryl acylamidase of Bacillus sphaericus, catalyzing the hydrolysis of various phenylamide herbicides and fungicides // Appl. Microbiol. 1973. - № 26. -P. 709-718.

129. Enzymes in the environment: Activity, Ecology and Applications / Ed. by R.G. Burns and R.P. Dick. Marcel Dekker Inc., New York, 2002. -614 c.

130. Erickson L.E., Davis L.C., Muralidharan N. Bioenergetics and bioremediation of contaminated soil // Thermochim. acta. 1995. - Vol. 250. -№ 2. - P. 200-222.

131. FlieBbach A., Mader P. Short- and long-term effects on soil microorganisms of two potato pesticide spraying sequences with either glufosinate or dinoseb as defoliants // Biology and Fertility of Soils. 2004. - Vol. 40. - № 4. - P. 268-276.

132. Fomina M., Ritz K., Gadd G.M. Nutritional influence on the ability of fungal mycelia to penetrate toxic metal-containing domains // Mycological Research. 2003. - Vol. 107. - № 7. - P. 861 -871.

133. Foye W.O., Van De Workeen I.B., Matthes J.D. Copper complexes of aromatic dithiocarbamates and their antifungal activity // J. of the American Pharmaceutical Association. 1958. - Vol 47. - P. 556-558.

134. FrearD.S., Mansager E.R., Swanson H.R. Picloram metabolism in leafy spurge: isolation and identification of glucose gentiobiose conjugates // J. Agric. Food Chem. 1989. - № 37. - P. 1408-1412.

135. Fungi in bioremediation / Ed. by G.M. Gadd. Cambridge University Press. 2001.-481 p.

136. Fuscaldo F., Bermar F., Monterubbianesi G. Persistence of atrazine, metribuzin and simazine herbicides in two soils // Pesq. agropec. bras. — 1999. — Vol. 34.-P. 2037-2044.

137. Gaynor J.D. Microbial hydrolysis of diclofop-methyl in soil // Soil Biol. Biochem. 1992. - № 24. - P. 29-32.

138. Gennari M., Negre M., Ambosoli R., Andreoni V., Vincenti M., Acquati A. Anaerobic degradation of acifluorfen by different enrichment cultures // J. Agric. Food Chem. 1994. - № 42. - P. 1232-1236.

139. Gennari M., Vincenti M., Negre M., Ambosoli R. Microbial metabolism of fenoxaprop-ethyl // Pestic. Sci. 1989. - № 44. - P. 299-303.

140. Getzin L.W. Degradation of chlorpyrifos in soil: influence of autoclaving, soil moisture, and temperature // J. Econ. Entomol. 1981. - Vol. 74. - P. 158162.

141. Gomez F., Martinez-Toledo M.V., Salmeron V., Rodelas В., Gonzalez-Lopez J. Influence of the insecticides profenofos and diazinon on the microbialactivities of Azospirillum brasilense II Chemosphere. 1999. - Vol 39. - P. 945957.

142. Gonod L.V., Martin-Laurent F., Chenu С 2,4-D impact on bacterial communities, and the activity and genetic potential of 2,4-D degrading communities in soil // Microbiology Ecology. 2006. - Vol. 58. - № 3. - P. 529537.

143. Graham P.H., Ocambo G., Ruiz L.D., Duque A. Survival of Rhizobium phaseoli in contact with chemical seed protectants // Agron. J. 1980. - Vol. 72. -P. 625-627.

144. Griffiths B.S., RitzK., WheatleyR., Kuan H.L., BoagB., Christensen S., Ekelund F., Sorensen S. Response of sorbtion processes of MCPA to the amount and origin of organic matter in a long-term experiment // Europ. J. Soil Sci. 2001. -Vol. 52.-P. 279-286.

145. Grimm L.H., Kelly S., HengstlerJ., Gobel A., Krull R., Hempel D.C. Kinetic studies on the aggregation of Aspergillus niger conidia // Biotechnol. Bioeng. 2004. - Vol. 87.-№2.-P. 213-218.

146. Groenewegen P.E.J., Breeuwe P., van Helvoort J.M.L.M,1.ngenhoff A.A.M., de Vries F.P., de Bont J.A.M. Novel degradative pathway of 4-nitrobenzoate in Comamonas acidovorans NBA-10. // J. Gen. Microbiol. 1992. -Vol. 138.-P. 1599-1605.

147. Groenewegen P.E.J., de Bont J.A.M. Degradation of 4-nitrobenzoate via 4-hydroxylaminobenzoate and 3,4-dihydroxybenzoate in Comamonas acidovorans NBA-10 // Arch. Microbiol. 1992,-№ 158-P. 381-386.

148. Guar A.C., MistraK.C. Effect of simazine, lindane and resan on soil respiration and nitrification rates // Plant and soil. 1977. - Vol. 46. - P. 782-786.

149. Haggblom M.M., Janke D., Salkinoja-Salonen M.S. Hydroxylation and dechlorination of tetrachlorohydroquinone by Rhodococcus sp. strain CP-2 cell extract//Appl. Environm. Microbiol. 1989. - № 55. - P. 516-519.

150. Hall J.C., Hoagland R.E., Zablotowicz R.M. Pesticide biotransformation in plants and microorganisms: similarities and divergences. Washington, DC: American Chemical Society, 2001. - 432 p.

151. Hamalcer J.W., Tompson J.M. Organic chemicals in the soil environment / Ed. by C.A.J. Goring, J.W. Hamaker N.Y.: Marcel Dekker Inc., 1972. - Vol. 1. -49 p.

152. Hammond P.M., Price C.P., Scaven M.D. Purification and properties of aryl acylamidase from Pseudomonas fluorescens ATCCC 39004 // Eur. J. Biochem. -1983. -№ 132.-P. 651-655.

153. Hanson L.E., Howell C.R. Biocontrol efficacy and other characteristics of protoplast fiisants between Trichoderma koningii and T. virens II Mycol. Res. — 2002.-Vol. 106.-№3.-P. 321-328.

154. Hart M.R., Brookes P.C. Soil microbial biomass and mineralization of soil organic matter after 19 years of cumulative application of pesticides // Soil Biol. Biochem. 1996.-Vol. 28.-P. 1641-1649.

155. Hassanein W.A., Awny N.M., El-Mougith A.A., Salah El-Dien S.H. The antagonistic activities of some metabolites produced by Pseudomonas aeruginosa Sha8 // J. of Appl. Sci. Research. 2009. - Vol. 5. - № 4 - P. 404-414.

156. Heilling C.S., Dennison D.G., Kaufman D.D. Fungicides movement in soils // Phytopatology. 1974. - Vol. 64. — P. 1091-1100.

157. Helvi H.-T., Rosenberg C., SitanenH., Kilpi S., Simojolci P. The effect of annual use of pesticide on soil reduces in the soil and barley yields // Pesticide Sci. 1985. - Vol. 16. - № 4. - P. 341-348.

158. Hirase К., Matsunaka S. Purification and properties of propanil hydrolase in Pseudomonas picketti II Pestic. Biochem. Physiol. 1991. - № 39. - P. 302-308.

159. Hoagland R.E., Zablotowicz R.M., Locke M.A. An integrated phytoremediation strategy for chloroacetamides in soil / Phytoremediation of Soil and Water Contaminants. ACS Symposium Series 664. Washington, D.C.: American Chemical Society. 1997. - P. 38-53.

160. Howard P.H. Handbook of environmental fate and exposure data for organic chemicals. CRC Press Tylor & Francis Group. Vol. 3. 1991. - 712 p.

161. Jimenez-Tobon G.A., Penninckx M.J. Lejeune R. The relationship between pellet size and production of Mn (II) peroxidase by Phanerochaete chrysosporium in submerged culture // Enzyme and Microbiol. Technology. 1997. — Vol. 21. — №7.-P. 537-542.

162. Лшёпег-ТоЬоп G., Kurzatkowski W., Rozbicka В., Solecka J., Pocsi I., Penninckx M.J. In situ localization of manganese peroxidase production in mycelial pellets of Phanerochaete chrysosporium II Microbiology. — 2003. -Vol. 149.-P. 3121-3127.

163. Joshi D.K., Gold M.H. Degradation of 2,4,5-trichlorophenol by the lignin-degrading basidiomycete Phanerochaete chrysosporium II Appl. Environm. Microbiol. 1993. - № 59. - P. 1779-1785.

164. Kadiayala V., Spaine J.C. A two-component monooxygenase catalyzes both the hydroxylation of p-nitrophenol and the oxydative release of nitrite from 4-nitrocechol in Bacillus sphaeriticus II Appl. Evironm. Microbiol. 1998. - № 64. - P. 2479-2484.

165. Kamanavalli C.M., NinnekarH.Z. Biodegradation of propoxur by Pseudomonas species // World J. of Microbiol, and Biotech. 2000. - Vol. 16. -№4. P. 329-331.

166. Kamrin M.A. Pesticides profiles toxicity. Environmental impact "and fate.-N.Y.: Levis Publishers, 1997. P. 524-527.

167. Karns J.S. Gene sequence and properties of an s-triazine ring-cleavage enzyme from Pseudomonas sp. strain NRRLB-12227 // Appl. Environm. Microbiol. 1999. - Vol. 65. - P. 3512-3517.

168. Katayama A., Matsumura F. Degradation of organochlorine pesticides, particularly endosulfan by Trichoderma harzianum II Environm. Toxicol. Chem. 1993. -№ 12.-P. 1059-1065.

169. Katsuyama C., Nakaoka S., Takeuchi Y., Tago K., HayatsuM., Kato K. Complementary cooperation between two syntrophic bacteria in" pesticide degradation // J. Theor. Biol. 2009. - Vol. 256. - № 4. - P. 644-654.

170. Kaufman D.D. Accelerated biodegradation of pesticides in soil and its effect on pesticide efficacy / Proc. Br. Crop Prot. Conf. 1987. - Vol. 2. - P. 515-522.

171. Kiiskinen L.-L., Kruus K., Bailey M., Ylosmaki E., Siika-aho M., Saloheimo M. Expression of Melanocarpus albomyces laccase in Trichodermareesei and characterization of the purified enzyme // Microbiology. 2004. - Vol. 150. - P.3065-3074.

172. Kiiskinen L.-L., Ratto M., Kruus K. Screening for novel laccase-producing microbes // J. of Appl. Microbiol. 2004. - Vol. 97. - P. 640-646.

173. Kinouchi Т., Ohnishi Y. Purification and characterization of 1-nitropyrene nitroreductases from Bacteroides fragilis II Appl. Environm. Microbiol. 1983. -№46.-P. 596-604.

174. Klages U., Lingens F. Degradation of 4-chlorobenzoic acid by a Pseudomonas sp. // Zenterblatt. Bakt. Hyg.31. Abt. Orig. 1980. - Vol. 1. - P.215-223.

175. Kocher H., Kellner H.M., Lotzsch K, Dorn E., Wink O. Mode of action and metabolic fate of the herbicide fenoxaprop-ethyl // Br. Crop Prot. Conf. Weeds. -1985.-№ l.-p. 341-347.

176. KornerovaM., HolaD., ChodovaD. The effect of irradiance on Hill's reaction activity of atrazine-resistant and -susceptible biotypes of weeds // Photosynthetica. 1998. - Vol. 35. - P. 265-268.

177. Krishna K.R., Philip L. Biodegradation of mixed pesticides by mixed pesticide enriched cultures // J. Environm. Sci. Health B. 2009. — Vol. 44. — № 1. -P. 18-30.

178. Krzysko-Lupica Т., StrofW., Kubs K., SkorupaM., WieczorekP., Lejezak В., Kafarski P. The ability of soil-borned fungi to degradate organophosphanate carbone to phosphorus bonds // Appl. Microbiol, and Biotech. 1997.-№48.-P. 549-552.

179. Kullman S.W., Matsumura F. Metabolic pathways utilized by Phanerochaete chrysosporium for degradation of the cyclodiene pesticide endosulfan // Appl. Environm. Microbiol. 1996. - № 62. - P. 593-600.

180. KulysJ., Krikstopaitis К., Ziemys A., Schneider P. Laccase-catalyzed oxidation of syringates in presence of albumins // J. Mol. Catalysis В. — 2002. -Vol. 18.-P. 99-108.

181. Kumar S., Mukerj i K.G., Lai R. Molecular aspects of pesticide degradation by microorganisms // Critical Rev. in Microbiol. 1996. - Vol. 22. - № 1. - P. 126.

182. Kuwatsura C., Igarashi M. Degradation of PCP on soil // Soil Sci. and Plant Nutrition. 1975. -№ 4. -P. 21.

183. Maeda K., Tonomura K. Microbial degradation of tetramethylthiuram disulfide (In Japanese) // Kogyo Gijutsuin Hakke Kenkyusho Кепкуu Hokoku. -1971.-№33.-P. 1-8.

184. Magarey R.C., Yip H.Y., Bull J.I., Johnson E.J. Effect of the fungicide mancozeb on fungi associated with sugarcane yield decline in Queensland // Mycol. Res. 1997.-Vol. 101.-P. 858-862.

185. Maheshwari R. Fungi: experimental models in biology / R. Maheshwari. -Taylor & Francis Group, LLC. 2005. 240 p.

186. Manahan S.E. Toxicological chemistry and biochemistry. 3rd ed. — Lewis Pub., 2003.-424 p.

187. Mandic L., Bukic D., Dordevic S. Soil fungi as indicators of pesticide soil pollution // Proc. Nat. Sci, Matica Srpslca Novi. Sad. 2005. - Vol. 109. - P. 97102.

188. Martensson A.M. Effects of agrochemicals and heavy metals on fast-growing rhizobia and their symbiosis with small-seeded legumes // Soil Biol. Biochem. 1992. - Vol. 24. - P. 435-445.

189. Martinez-Toledo M.V., Salmeron V., Gonzalez-Lopez J. Effect of the insecticides methylpyrimifos and chlorpyrifos on soil microflora in an agricultural loam // Plant and soil. 1992. - Vol. 147. - P. 25-30.

190. Martinez-Toledo M.V., Salmeron V., Gonzalez-Lopez J. Effect of simazine on the biological activity of Azotobacter chrodococcum II Soil Sci. — 1991. -Vol. 151.-P. 459-467.

191. Mayer A.M., Staples R.C. Laccase: new functions for an old enzyme // Phytochemistry. 2002. - Vol. 60. - № 6. - P. 551-565.

192. McDaniel C.S., Harper L.L., Wild J.R. Cloning and sequencing of a plasmid-bome gene (opd) encoding a phosphotriesterase // J. Bacteriol. — 1988. -№ 170.-P. 2306-2311.

193. Megharaj M. Heavy pesticide use lowers soil health // Kondinin Landcare Group Magazine, Farming Ahead, 2002. Vol. 121. -P.37-38.

194. MetzB., KossenN.W.F. The growth of molds in the form of pellets: Literature review // Biotechnol. Bioeng. 1977. - Vol. 19. - P. 781-799.

195. Microbes at work / Ed. by H. Insam, I. Franke-Whittle, M. Goberna. -Springer Verlag, 2009. 329 p.

196. Microbiological applications: A laboratory manual in general microbiology. 8th edn. / Ed. by H.J. Benson. McGraw-Hill Companies, 2001. - 478 p.

197. Mille-Lindblom C., Fischer H., Tranvik L.J. Antagonism between bacteria and fungi: substrate competition and a possible tradeoff between fungal growth and tolerance towards bacteria // Oikos. 2006. - Vol. 13. - P. 233-242.

198. Miyazaki S., Boush M.G., MatsumuraF. Microbial degradation of chlorobenzilate (ethyl 4,4'-dichlorobenzilate) and chloropropylate (isopropyl 4,4'-dichlorobenzilate) // J. Agric. Food Chem. 1970. - Vol. 18. -№ 1. - P. 87-91.

199. Mochida K., Nakamura Т., Li W.X., Ozoe Y. Purification of extracellular aryl acylamidase from a coryneform bacterium, strain A-l // J. Pestic. Sci. 1993. -№ 18.-P. 211-216.

200. Modern soil microbiology. 2nd edn. / Ed. by J.D. van Elsas, J.K. Jansson, J.T. Trevors. Wellington: CRC Press, 2007. - 646 p.

201. Moen M.A., Hammel K.E. Lipid peroxidation by the mangane peroxidase of Phanerochaete chrysosporium is the basis for phenanthre oxidation by the intact fungus // Appl. Environm. Microbiol. 1994. - Vol. 60 - P. 1956-1961.

202. Moharram A.M., Abdel-Malek A.Y., Abdel-Kader M.I.A., Omar S.O. Effect of three pesticides on nitrogen content of some soil fungi // J. of Islamic Academy of Sci. 1994. - Vol. 7. - № 2. - P. 82-87.

203. Molecular biology of Pseudomonas / Ed. by T. Nakazawa, K. Furukawa, D. Haas, S. Silver. ASM Press, 1996. - 526 p.

204. Moore J.K., Braymer H.D., Larson A.D. Isolation of Pseudomonas sp. which utilizes the phosphate herbicide glyphosate // Appl. Environm. Microbiol. -1983. -Vol. 46. -№ 2. P. 319-320.

205. Moorman T.B. A review of pesticide effects on microorganisms and microbial processes related to soil fertility // J. Prod. Agric. 1989. - № 2. - P. 1423.

206. Mulbry W.W., Karns J.S. Parathion hydrolase specified by the Flavobacterium opd gene relationship between the gene and protein 11 J. Bacterid. 1989. № 171. - P. 6740-6746.

207. Naar Z. Effect of cadmium, nickel and zinc on the antagonistic activity of Trichoderma spp.against Pythium irregulare buisman II Acta Phytopathologica et Entomologica Hungarica. 2006. - Vol. 41. - № 3-4. - P. 193-202.

208. Nelson M.J., Montgomery S.O., Pritchard P.H. Trichloroethylene metabolism by mircroorganisms that degradate aromatic compounds // Appl. Evironm. Microbiol. 1988. - Vol. 54. - № 2. - P. 604-606.

209. Nicholson P.S., HirschP.R. The effects of pesticides on diversity of culturable soil bacteria // J. of Appl. Microbiol. 1998. - Vol. 84. - P. 551-558.

210. Niewadomska A., Sawicka A. Effect of carbendasim, imazetapir and thiram on nitrogenase activity, number of microorganisms in soil and yield of hybrid lucerne (Medicago media L.) // Polish J. of Environm. Studies. 2002. - Vol. 6. -P. 737-744.

211. Nishino S.F., Spain J.C. Degradation of nitrobenzene by a Pseudomonas pseudocaligenes //Appl. Environm. Microbiol. 1993. -№ 59. - P. 2520-2525.

212. Nowak A. Mikrobiologia. A.R.Szczecin, 1998. - 122 c.

213. Onet A. Study of the effect of some pesticides on soil microorganisms // International Symposia Risk Factors for Environment and Food Safety & Natural

214. Resources and Sustainable Development, Faculty of Environmental Protection, November 6-7 Oradea, 2009. P. 1086-1089.

215. Osman K.A., Ibrahim G.H., Askar A.I., Aba Alkhail A.R.A. Biodegradation kinetics of dicofol by selected microorganisms // Pesticide Biochem. and Physiology.-2008.-Vol. 91.-P. 180-185.

216. Oyamada M., Kuwatsuka S. Reduction mechanism of the nitro group of chlornitrofen, a diphenyl ether herbicide in flooded soils // J. Pestic. Sci.-- 1989. -№ 14.-P. 321-327.

217. Pandey S., Singh D.K. Total bacterial and fungal population after chlorpyrifos and quinalphos treatments in groundnut {Arachis hypogea L.) soil // Chemosphere. 2004. - Vol. 55. - P. 197-205.

218. Papagianni M. Fungial morphology and metabolite production in submergedmycelial processes // Biotechnol. Advances. Vol. 22. - № 3. - P. 189259.

219. Papagianni M. Quantification of fractal nature of mycelial aggregation in Aspergillus niger submerged cultures // Microbial Cell Factories. 2004. - Vol. 5. - Issue 1. - P. 3.

220. Parker L.W., Doxtader K.G. Kinetics of microbial decomposition of 2,4-D in soil // J. Environ. Qual. 1982. - № 11. - P. 679-684.

221. Parshilcov I.A., Moody J.D., Freeman J.P., Williams A.J., Heinze T.M., Sutherland J.B. Formation of conjugates from ciprofloxacin and norfloxaxin in cultures of Trichoderma viride II Mycology. 2002. - Vol. 94. - № 1. - P. 1-5.

222. Paul G.C., Thomas C.R. Characterization of mycelial morphology using image analysis // Adv. Biochem. Biotechnol. 1998. - Vol. 60. - P. 1-60.

223. Pazouki M., Panda T. Understanding the morphology of fungi // Bioprocess and Biosystems Engineering. 2000. - Vol. 22. - № 2. - P. 127-143.

224. Pesticide risk assessment in rice paddies: theory and practice / Ed. by E. Carpi, D.G. Karpouzas. Elsevier, 2008. - 255 p.

225. Physiology of fungi / Ed. by M. Madan, K.S. Thind. New Delhi: A.P.H. Pub., 1998.-240 p.

226. Plant biochemistry / Ed. by P.M. Dey, J.B. Harborne. Elsevier, 1997. -554 p.

227. Plant-bacteria interactions: strategies and techniques to promote plant growth // Ed. by I. Ahmad, J. Pichtel, S. Hayat. Wiley: VCH, 2008. - 310 p.

228. Pointing S.B. Feasibility of bioremediation by white-rot fungi // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2001. - Vol. 57. - P. 20-33.

229. Practical environmental bioremediation / Ed. by R.B. King, G.M. Long, J.K. Sheldon. Lewis Publishers, 1998. - 184 p.

230. Providenti M.A., Lee H., Trevors J.T. Selected factors limiting the microbial degradation of recalcitrant compound // J. Ind. Microbiol. 1993. - Vol. 12. — P. 379-395.

231. Pseudomonas / Ed. by T.C. Montie. Springer, 1998. - 335 p.

232. Pseudomonas: model organism, pathogen, cell factory / Ed. by B.H.A. Rehm. Wiley: VCH, 2008. - 402 p.

233. Haas R., Tsivunchyk O., Steinbach K., Low E., Scheibner K., Hofrichter M. Conversion of adamsite (phenarsarzin chloride) by fungal manganese peroxidase // Appl. Environm. Microbiol. 2004. - Vol. 63. -№ 5. - p. 564-566.

234. Rahden-Staron I., CzeczotH., Kowalska-Loth B. The ability of thiram to inhibit eukariotic topoisomerase II and to damage DNA // Acta Biochimica Polonica. 1993. - Vol. 40. - P. 51-53.

235. Rai J.P.N. Effect of long-term 2,4-D application on soil microbial populations//Biol. Fertil. Soils. 1992.-Vol. 13. - P. 427-431.

236. Rainbolt C., Hanson В., ShresthaA., ShanerD. Simazine degradation rates in central valley soils with annual or no simazine use histories // Western Society of Weed Sci. 2009. - P. 104.

237. Ramanand R., Balba M.T., Duffy J. Reductive deholagenation of chlorinated benzenez and toluenes under metonogenic conditions // Appl. Eviron. Microbiol. -1993.-Vol. 59.-№ 10.-P. 3266-3272.

238. Ratcliff A.W., Busse M.D., Shestak C.J. Changes in microbial community structure following herbicide (glyphosate) additions to forest soils // Appl. Soil Ecology. 2006. - Vol. 34. - P. 114-124.

239. Reddy G.V.B., Joshi D.K., Gold M.H. Degradation of chlorophenoxyacetic acids by the lignin-degrading fungus Dichomitus squalens И Microbiology. 1993. - № 143.-P. 2353-2360.

240. Richardson L.T. The persistence of thiram in soil and its relationship to the microbiological balance and damping-off control // Canad. J. Bot. 1954. -Vol. 32.-P. 335-346.

241. Richardson M. Pesticides friend or foe? // Water Sci. Technol. - 1998. -Vol. 37.-P. 19-25.

242. Riley P.S., Behal F.J. Amino acid-naphthylamide hydrolysis by Pseudomonas aeruginosa arylamidase // J. Bacteriol. 1971. - № 108. - P. 809816.

243. Rudramurthy H.V., Gurumurthy B.R. Dynamics of soil microflora in different land use systems // Katanaka J. of Agric. Sci. 2007. - Vol. 20. — № 1. — P. 131-132.

244. Sabdono A., Radjasa O.K. Phylogenetic diversity of organophosphorus pesticide-degradation coral bacteria from mid-west coast of Indonesia // Biothechnology. -2008. -№ 7. P. 694-701.

245. Saikia N., Gopal M. Biodegradation of b-cyfluthrin by fungi // J. Agr. Food Chem.-2004.-Vol. 52.-P. 1220-1223.

246. Sandmann E.R.L.C., Loos M.A. Enumeration of 2,4-D-degrading microorganisms in soils and crop plant rhizospheres using indicator media; highpopulations associated with sugarcane // Chemosphere. 1984. - Vol. 13. -P. 1073-1084.

247. Santiago R., De Prado R., Franco A.R. Biodegradation of simazine in olive fields // Commun. Agric. Appl. Biol. Sci. 2003. - Vol. 63. - P. 408-413.

248. SawickaA., SelwetM. Effect of active ingredients on Rhizobium and Bradyrhizobium legume dinitrogen fixation // Polish J. of Environm.l Studies. -1998. Vol. 7. - №. 5 - P. 317-320.

249. Scow R.S., Simkins S., Alexander M. Kinetics of mineralization of organic compounds at low concentration in soil // Appl. Environm. Microbiol. -1986. -№ 51.-P. 1028-4035.

250. Secondary metabolites in soil ecology / Ed. by P. Karlovsky. Springer, 2008.-293 p.

251. Seghers D., Verthe K., Reheul D., Bulcke R., Siciliano S.D., Verstraete W., Top E.M. Effect of long-term herbicide applications on the bacterial community structure and function in an agricultural soil // FEMS Microbiol. Ecol. 2003. -№46.-P. 139-146.

252. ShapirN., Mongodin E.F., Sadowsky M.J., Daugherty S.C., Nelson K.E., Wackett L.P. Evolution of catabolic pathways: genomic insights into microbial s-triazine metabolism // J. of Bacteriol. 2007. - Vol. 189. - P. 674-682.

253. Sharma V.K., Aulakh J.S., Malik A.K. Thiram: degradation, applications and analytical methods // J. Environ. Monit. 2003. -Vol. 5. - P. 717-723.

254. Shimabukuro R.H. Detoxication of herbicides // Weed Physiology. 1985. -№2.-P. 215-240.

255. Shirkot C.L., Shirkot P., Guptak K.G. Isolation from soil and growth characteristics of the tetramethyltiuram disulfide (TMTD) degradation stain of Pseudomonas aeruginosa II J. of Evironm. Sci. and Health, Part A:

256. Toxic/Hazardous Substance and Environmental Engineering. — 1994. .Vol. 29. -P. 605-614.

257. Singh H.B., Singh D.P. From biological control to bioactive metabolites: Prospects with Trichoderma for safe human food I I Pertanika J. Trop. Agric. Sci. — 2009.-Vol 32.-№ l.-P. 99-110.

258. Smith A.E., Phatak S.C., Emmatty D.A. Metribuzin metabolism by tomato cultivars with low, medium, and high levels of tolerance to metribuzin // Pestic. Biochem. Physiol. 1989. - № 35. - P. 284-290.

259. Smith D., Alvey S., Crowley D.E. Cooperative catabolic pathways within an atrazine-degrading enrichment culture isolated from soil // FEMS Microbiol. Ecol. -2005.-Vol. 53,-№2.-P. 265-273.

260. Soil ecotoxicology / Ed. by J. Tarradellas, G. Bitton, D. Rossel. -Wellington: CRC Lewis Publishers, 1997. 360 p.

261. Soil pollution: origin, monitoring and remediation / Ed. by I.A. Mirsal. -Springer, 2004. 252 p.

262. Soils and groundwater pollution and remediation: Asia, Africa, and Oceania / Ed. by P.M. Huang, I. Karam. Wellington: CRC Press, 2000. -386 p.

263. Soskic M., Plavsic D., Trinajstic N. Inhibition of the Hill's reaction by 2-methylthio-4,6-bis (monoalkylamino)-l,3,5-triazines A QSAR study // J. Mol. Struct. 1997.-Vol. 394.-P. 57-65.

264. Soulas G., Codaccioni P., Fournier J.-C. Chloroform fumigation technique as a means of determing the size of specialized soil microbial population application to pesticide degradation microorganisms // Soil Biol. Biochem. — 1984. -№ 16.-P. 497-501.

265. Stenersen J. Chemical Pesticides: Mode of action and toxicology. -Wellington: CRC Press, 2004. 276 p.

266. Strandberg M.T., Scott-Fordsmand J.J. Field effects of simazine at lower trophic levels a review // The Science of The Total Environment. - 2002. -Vol. 296. - Issues 1-3. - P. 117-137.

267. Strigacova J., Chovanec P., Liptaj Т., Hudecova D., Tursky Т., Simkovic M., Varecka L. Glutamate decarboxylase activity in Trichoderma viride conidia and developing mycelia // Arch. Microbiol. 2001. - Vol. 175. - № 1. -P. 32-40.

268. Suzuki T.J. Methylation and hydroxylation of pentachlorophenol by Mycobacterium sp. isolated from soil // J. Pestic. Sci. 1983. - № 8. - P. 419-428.

269. Taiwo L.B., Oso B.A. The Influence of some pesticides on soil microbial flora in relation to changes in nutrient level, rock phosphate solubilization and P-release under laboratory conditions // Agric. Ecosystem & Environm. 1997. -Vol. 65.-P. 59-68.

270. Tate R.L., Alexander M. Formation of dimethylamine and diethylamine in soil treated with pesticides // Soil Sci. 1974. - № 118. - P. 317-321.

271. Thomas C.R. Image analysis: putting filamentous microorganisms in picture // Trends Biotechnol. 1992. - Vol. 10. - P. 343-348.

272. Thyssen N. Pesticides in groundwater: an European overview // 5th International HCH and pesticides forum. Basque country, 25-27 June 1998. Bilbao, Spain.-P. 45-55.

273. Trichoderma and Gliocladium Vol. 2: Enzymes, biological control and commercial application / Ed. by G.E. Harman, C.P. Kubicek, CRC Press, 1998. -393 p.

274. Tu C.M. Utilization and degradation of lindane by soil microorganisms // Arch. Microbiol. 1976. - Vol. 108. - № 3. - P. 259-263.

275. Tweedy B.G., Loeppy C., Ross J.A. Metabolism of 3-(pbromophenyl)-l-methoxy-1-methylurea (metobromuron) by selected soil microorganisms // Science. 1970. - № 168. - P. 482-483.

276. Urakami Т., KomagataK. Cellular fatty acid composition and coenzyme Q system in Gram-negative methanol-utilizing bacteria // J. Gen. Appl. Microbiol. -1979.-Vol. 25.-P. 343-360.

277. ValenzulaJ., Buman U., Cespedes R., PadillaL., Gonzales B. Degradation of chlorophenols by Alcaligenes eutrophus JMP 132 (pJP 4) in bleached Kraft Mill Effluent // Appl. Environm. Microbiol. 1997. - Vol. 63. - № 1. - P. 227-232.

278. Valli К., Gold M.H. Degradation of 2,4-dichlorophenol by the lignin-degrading fungus Phanerochaete chrysosporium II J. Bacteriol. 1991. - № 173. — P. 345-352.

279. Van AkenB., Agathos S.N. Transformation of nitroaromatic compounds by manganese (III) in the presence of oxalate and oxygen // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2002. - Vol. 58.-P. 345-351.

280. Van Eerd L.I., Hoagland R.E., Hall J.C. Pesticides metabolism in plants and microorganisms // Weed Science. 2003. - № 51. - P. 472-495.

281. Virag D., Kiss A. Comparative study of accessibility of distinctive pesticides // J. Environ. Sci. Health B. 2009. - Vol. 44. - P. 69-75.

282. Wackett L.P., Sadowsky M.J., Martinez В., ShapirN. Biodegradation of atrazine and related s-triazine compounds: from enzymes to field studies // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2002. - Vol. 58. - P. 39-45.

283. Walker A., Parekh N.R., Roberts S.J., Welch S.J. Evidence for the enhanced biodegradation of napomide in soil // Pesticide Sci. 1993. - № 39. - P. 55-60.

284. Wauchope R.D., Buttler T.M., Hornsby A.G., Augustijn-Beckers P.W.M., Burt J.P. The SCS/ARS/CES pesticide properties database for environmental decision-making Rev // Environ. Contam. Toxicol. 1992. - Vol. 123. - P. 1-155.

285. Whittaker R.H. Dominance and diversity in land plant communities // Science. 1965.- Vol. 147. - P. 250-260.

286. Wodageneh A. Obsolete pesticides: problems / Prevention and disposal // 5th International HCH and pesticides forum. Basque country, 25-27 June 1998. Bilbao, Spain.-P. 21-27.

287. Wyszkowska J. Microbiological properties of soil contaminated with the herbicide Treflan 480 EC // Polish J. Natur. Sci. 2002. - Vol. 10. - № 1. - S. 71 -77.

288. Xiao-YanS., Qing-Tao S., Shu-TaoX., Xiu-Lan C., Cai-Yun S., Yu-Zhong Z. Broad-spectrum antimicrobial activity and high stability of trichokonins from Trichoderma koningii SMF2 against plant pathogens // Microbiol. Lett.-2006.-Vol. 260.-№ l.-P. 119-125.

289. Yarden O., Katan J., Aharonson N., Ben-Yephen Y. Delayed and enhanced degradation of benomyl and carbendazim in disinfested and fungicide-treated soils // Phytopathology.- 1985. Vol. 75. - P. 763-767.

290. Yoshioka H., Nagasawa Т., Yamada H. Purification and characterization of aryl acylamidase from Nocardia globerula II Eur. J. Biochem. 1991. - № 199. -P. 17-24.

291. Yoshioka P.M. Misidentification of the Bray-Curtis similarity index // Mar. Ecol. Prog. 2008. - Vol. 368. - P. 309-310.

292. Zablotowicz R.M., Hoagland R.E., Locke M.A., Hickey W.J. Glutathione-S-transferase activity and metabolism of glutathione conjugates by rhizosphere bacteria//Appl. Environm. Microbiol. 1995. - № 61. - P. 1054-1060.

293. Zablotowicz R.M., Hoagland R.E., Staddon W.J., Locke M.A. Effects of pH on chemical stability and de-esterification of fenoxaprop-ethyl by purified enzymes, bacterial extracts, and soils // J. Agric. Food Chem. 2000. - № 48. -P. 4711-4716.

294. Zablotowicz R.M., Leung K.T, Alber Т., CassidyM.B., Trevors J.T., Lee H., Veldhuis L., Hall J.C. Degradation of 2,4-dinitriphenol and selected nitroaromatic compounds Sphinogomonas sp. UG30 // Can. J. Microbiol. 1999. — №45.-P. 840-848.

295. Znidarsic P., Pavko A. The morphology of filamentous fungi in submerged cultivation as bioprocess parameter // Food technol. Biotechnol. — 2001. — Vol. 39. № 3. - P. 237-257.

Информация о работе

Колупаев, Алексей Вячеславович
кандидата биологических наук
Киров, 2010
ВАК 03.02.03

Диссертация

Почвенные микроорганизмы-биодеструкторы органических пестицидов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы