Перекисное окисление белков и содержание маркеров эндогенной интоксикации в крови лабораторных мышей после введения метилфосфоновой кислоты

Корепин, Антон Михайлович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Перекисное окисление белков и содержание маркеров эндогенной интоксикации в крови лабораторных мышей после введения метилфосфоновой кислоты
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Перекисное окисление белков и содержание маркеров эндогенной интоксикации в крови лабораторных мышей после введения метилфосфоновой кислоты"

у/

На правах рукописи

40ЦООИЧ

КОРЕПИН АНТОН МИХАЙЛОВИЧ

ПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ БЕЛКОВ И СОДЕРЖАНИЕ МАРКЕРОВ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ В КРОВИ ЛАБОРАТОРНЫХ МЫШЕЙ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ МЕТИЛФОСФОНОВОЙ КИСЛОТЫ

03.01.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ОЗОЕо 23.1

Нижний Новгород 2011

4843644

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Российский научный центр «Восстановительная травматология и ортопедия» имени академика Г.А. Илизарова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации и Межрегиональной лаборатории экотоксикологии филиала Государственного

учреждения «Территориальный государственный экологический фонд Курганской области» Регионального центра по обеспечению государственного экологического контроля и мониторинга объектов по хранению и уничтожению

химического оружия по Курганской области Научные руководители: доктор биологических наук

Лунёва Светлана Николаевна, кандидат химических наук Плотникова Ольга Михайловна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Конторщикова Клавдия Николаевна

ГОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия», г. Нижний Новгород,

доктор медицинских наук, профессор Львовская Елена Ивановна

ФГОУ ВПО «Уральский государственный университет физической культуры», г. Челябинск

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия», г. Челябинск

Защита диссертации состоится « 24 » февраля 2011 г. в_часов на

заседании диссертационного совета Д212.166.15 при Нижегородском государственном университете им. Н.И. Лобачевского по адресу: 603950, г. Нижний Новгород, пр. Гагарина, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Нижегородский государственный университет по адресу: 603950, г. Нижний Новгород, пр. Гагарина, 23.

Автореферат разослан «; » января 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного сощя=а,

кандидат биологических наук, доцент ш "—~Копылова

у Светлана Вячеславовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В настоящее время фосфорорганические соединения (ФОС) активно исследуются в ведущих научных центрах мира. Большинство известных ФОС являются веществами антропогенного характера, многие из них впервые были получены как сильнейшие пестициды (Кабачник,1962). Интерес к проблеме вызван, во-первых, широким использованием ФОС в промышленности (Мельников. 1997), медицине, быту и сельском хозяйстве (Нифантьев, 1996; Caroline, 1998), во-вторых, начавшимся в России уничтожением фосфорорганических отравляющих веществ (Холстов, 2004).

До недавнего времени в России насчитывалось порядка 40 тысяч тонн фосфорорганических отравляющих веществ (Белецкая, 1995). В Щучанском районе Курганской области, как и в Кировской области, в настоящее время функционирует завод по уничтожению химического оружия (ХО). В основе уничтожения ХО лежит технология химического взаимодействия ФОС (в Курганской области: зарин, зоман и V-газы) с органическими основаниями, например, моноэтаноламином или бутилатом калия (Белавинцев, 1999; Холстов, 2004). В результате реакции получаются метилфосфонаты -соответствующие соли и эфиры метилфосфоновой кислоты (МФК). Зарубежный опыт уничтожения ХО подтверждает возможность загрязнения метилфосфонатами природных сред (DeFrank, 2003; Frei, 1993; Munro, 1999). МФК была обнаружена спустя 10 лет после загрязнения сухой почвы на полигоне хранения ХО Дагуэй в штате Юта США (Савельева, 2002).

Существует ряд фосфорсодержащих пестицидов, содержащих в своем строении фрагмент МФК. Общеизвестный гербицид глифосат (с торговым наименованием «Раундап») в результате биохимической деградации в почвах преобразуется в производное МФК - аминометилфосфонат (Caroline, 1998), которое медленно гидролизуется до МФК. МФК объединяет большую гетерогенную по свойствам группу алкилфосфонатов, являясь ядром химического строения.

Уникальные свойства молекулы МФК, такие как бифильность. наличие малополярной связи С-Р, близкие фосфорной кислоте константы диссоциации могут приводить к ее неоднозначному поведению в биологических средах (Кононова, 2002; Мельников, 1987; Савельева, 2002). Ряд исследований, касающихся биоремедиации почв от ФОС, доказывают существование микроорганизмов использующих С-Р-лиазный ферментный комплекс для

расщепления МФК, что подтверждает возможность участия веществ со связью С-Р в метаболических процессах.

Вопрос влияния МФК на представителей растительного и животного мира практически не изучен. Существуют отдельные данные о влиянии МФК на рост и ферментативную активность растений (Огородникова, 2007; Серебрякова, 2007). Наличие разветвленной сети из углеводородных радикалов фосфолипидов на поверхности плазматических мембран позволяет предположить возможность специфического взаимодействия молекул МФК с плазмолеммой и интегральными белками. Не исключено проникновение МФК через гематоэнцефалический барьер (Ашмарин, 1999; Глебов, 1984).

Обладая специфическим строением н свойствами, МФК может оказывать влияние на процессы окислительной модификации белков и липидов, вызывая изменения в содержании продуктов перекисного окисления белков (ПОБ), также приводить к накоплению основных маркеров эндогенной интоксикации — олигопептидов (ОН) и веществ низкой и средней молекулярных масс (ВНСММ) в крови, по содержанию которых можно будет сделать выводы об участии МФК в процессах протеолиза или других путей белковой деградации.

Цель исследования: изучить влияние МФК на показатели перекисного окисления белков и эндогенной интоксикации при подкожном введении лабораторным мышам.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние подкожного введения МФК лабораторным мышам в дозе 2 мг/кг массы животного в зависимости от времени после инъекции растворов от 12 до 120 часов. Определить время максимального изменения значений изучаемых биохимических показателей крови у лабораторных мышеи после введения МФК.

2. Изучить особенности изменения содержания продуктов ПОБ и основных маркеров эндогенной иитоксикации в крови лабораторных мышей в зависимости от введения различных доз МФК (дозозависимый эффект) и определить дозы, оказывающие наибольшее влияние.

3. Оценить обратимость изменений изучаемых биохимических показателей крови лабораторных мышей вызываемых различными дозами МФК через 3-30 суток после однократного введения МФК.

4. Отметить наиболее информативные биохимические показатели, подтверждающие влияние МФК на организмы лабораторных мышей.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. МФК оказывает влияние на содержание общего белка и белковых фракций, маркеров эндогенной интоксикации: ВНСММ и ОП в крови лабораторных мышей, а также вызывает изменения в протекании процессов перекисного окисления белков. Причем, наибольшие изменения изучаемых биохимических показателей наблюдаются через 72 часа после введения МФК. А нормализация значений большинства показателей происходит через 120 часов после введения МФК в дозе 2 мг/кг массы животного.

2. МФК обладает ярко выраженным дозозависимым эффектом. При введении МФК в дозах 2, 10~3 мг/кг массы животного через 72 часа происходит ингибирование процессов окислительной модификации белков и активация белкового катаболизма, а в дозе 10"'5 мг/кг через 72 часа наблюдается усиление процессов ПОБ и возникновение синдрома эндогенной интоксикации. Через 30 суток после введения различных доз МФК самцам лабораторных мышей отмечается нормализация содержания маркеров эндогенной интоксикации.

Научная новизна исследования. МФК впервые рассматривается как потенциальное загрязняющее вещество природных сред, оказывающее влияние на организмы теплокровных животных.

Впервые изучено влияние МФК на ряд биохимических показателей крови теплокровных животных. Показано, что МФК оказывает достоверное влияние на биохимические показатели и обладает ярко выраженным дозозависимым эффектом.

Впервые обнаружено, что низкие дозы МФК оказывают воздействие на процессы окислительной модификации белков и катаболизма.

Впервые оценена чувствительность биохимических методов к введению МФК на уровне низких доз (10~15, 10~18 мг/кг массы животного). Показано, что через 72 часа после введения МФК в дозе 10'15 мг/кг массы животного происходит рост концентрации карбонильных производных белков (продуктов ПОБ), увеличение фракций ОП в плазме и ВНСММ в плазме и эритроцитах лабораторных мышей.

Научно-практическая значимость исследования, область внедрения.

Полученные результаты исследования акцентируют внимание на важности вопроса контроля уровня загрязнения метилфосфонатами действующих и бывших объектов уничтожения химического оружия, рациональности широкого использования фосфорсодержащих пестицидов на сельскохозяйственных угодьях.

Комплексное изучение влияния МФК на содержание продуктов ПОБ и маркеров эндогенной интоксикации в крови теплокровных животных позволило выделить эти показатели как наиболее информативные, которые в совокупности с рядом показателей других обменных процессов можно использовать в экологическом мониторинге животного мира для оценки уровня воздействия на теплокровные организмы фосфонатов и подобных загрязняющих веществ.

Интеграция данных об изменении изучаемых показателей под действием различных доз МФК в область клинико-диагностических исследований позволит использовать их в качестве одних из маркеров интоксикации человека и животных низкими дозами фосфорорганических отравляющих веществ.

Результаты проведенного исследования использовались для разработки аттестованной в Межрегиональной лаборатории экотоксикологии Регионального центра по обеспечению государственного экологического контроля и мониторинга объектов по хранению и уничтожению химического оружия по Курганской области (РЦ СГЭКиМ) «Методики выполнения измерений биохимических показателей в плазме (сыворотке) крови мелких теплокровных животных фотометрическим методом», свидетельство об аттестации ФГУП «УНИИМ» №224.11.03.052/2009 от 17.06.2009 г.

Апробация работы. Материалы диссертационного исследования доложены: на региональной конференции молодых ученых, посвященной году молодежи в России «Молодежный научный потенциал в инновационном развитии Уральского региона» (КГСХА, 2009); на VII всероссийской научно-практической конференции «Проблемы региональной экологии в условиях устойчивого развития» (Киров, 2009); на II всероссийской научно-практической конференции «Состояние окружающей среды и здоровье населения» (Курган, 2009); на региональной молодежной научно-практической конференции с международным участием «Экологобезопасные и ресурсосберегающие технологии и материалы» (Улан-Удэ, 2010); на всероссийской молодежной научной конференции с международным участием «Биология будущего: традиции и инновации» (Екатеринбург, 2010); на международной научно-практической конференции «Экология. Риск. Безопасность» (Курган, 2010); на международной конференции «Антропогенная трансформация природной среды» (Пермь, 2010).

Декларация личного участия автора. Экспериментальные исследования выполнялись автором лично. Обработка полученных данных, их интерпретация и оформление осуществлены автором самостоятельно.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ, которых 3 статьи опубликовано в изданиях, рекомендуемых ВАКом для публикации результатов кандидатских диссертаций.

Объем 11 структура работы. Работа изложена на 115 страницах машинописного текста, состоит из введения, 3 глав, заключения, практических рекомендаций, .выводов, списка литературы, 12 таблиц, 37 рисунков. Библиографический указатель включает 225 источников: из них 178 -отечественные, 47 - зарубежные. Диссертационное исследование выполнено по плану НИР Межрегиональной лаборатории экопжсикологии филиала ГУ «Экофонд» РЦ СГЭКиМ.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Исследования были проведены на белых лабораторных мышах линии СВА (540 животных) - самцах и самках в возрасте 2-х месяцев, массой 25±2 г.

Материалом исследования служили: плазма и эритроцитарпая масса крови. В ходе выполнения исследования применялись экспериментальные, биохимические и статистические .методы.

Для изучения влияния МФК на биохимические показатели белкового обмена лабораторные мыши были разбиты на группы и подгруппы животных. Схема эксперимента показана в таблице 1.

В ходе эксперимента опытным лабораторным мышам вводились нейтрализованные изотонические растворы МФК подкожно в брюшинной области объемом 0,04 мл одноразовым инсулиновым шприцем. Контрольным группам подкожно вводился физиологический раствор объемом эквивалентным опытной группе. Введение осуществлялось в первой половине дня.

Эвтаназия осуществлялась натощак методом декапитации в первой половине дня. Полученную цельную кровь центрифугировали при 3000 об/мин 10 мин для получения плазмы и эритроцитарнон массы.

Электрофоретическое разделение белковых фракций проводили на системе Paragon (Beckman, США); общий белок определяли спектрофотометрическим биуретовым методом Кингслея-Вейксельбаума; продукты ПОБ определяли в белковом осадке по реакции с 2,4-

динитрофенилгидразином при длинах волн 270 нм - альдегидфенилгидразоны (АФГ), 363 нм и 370 нм - кетонфенилгидразоны (КФГ); олигопептиды определяли в супернатанте методом Лоури, регистрируя оптическую плотность окрашенных комплексов при 750 нм; ВНСММ определяли в супернатанте путем регистрации спектра поглощения исследуемого раствора в зоне ультрафиолета в диапазоне 238-298 нм с шагом в 1 нм по методу МЛ. Малаховой (Малахова, 1987).

Статистическую обработку данных проводили с использованием критериев непараметрической статистики: при исключении выбросов использовали метод Титьена-Мура, проверяя минимум и максимум значений выборки; достоверность различий между двумя выборками определяли по W-критерию Вилкоксона-Манна-Уитни для независимых выборок. Результаты анализов усредняли с помощью медианы, на основании которой считали различия в процентах (%) опытных и контрольных групп. Факторный анализ проводили методом главных факторов, метод оценки общностей - анализ главных компонент (Гайдышев, 2001; Гланц, 1998). При статистической обработке результатов исследования был использован интегратор модульной программы Attestat 1.0 для программы Microsoft Excel, разработанный в лаборатории информационно-вычислительного центра ФГУН «РНЦ «ВТО» им. академика Г.А. Илизарова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации И.П. Гайдышевым.

Таблица 1.

Схема экспериментальной части исследования

I группа. Референтные значения 2 группа. Установление времени максимального изменения изучаемых биохимических показателей 3 группа. Изучение дозозависимого эффекта 4 группа. Изучение нормализации биохимических показателей

Иктактные группы, здоровые животные Опытные группы, введение МФК в дозе 2 мг/кг массы животного Контрольные группы, физиологический раствор Забор крови через "2 часа Опытные группы, введение МФК в дозах Ю'\ 10"55, мг/кг массы Контрольные группы, физиологический раствор

Время эксперимента Дозы МФК, мг/кг массы Опытные группы, введение МФК в различных дозах Контрольные группы, физиологический раствор Время эксперимента

12 часов V Ю особей 9 10 особей 1,0*10"3 г4 1 0 особей 3-е суток (данные из 2гр.) Л Ю особей 1.0*10'3 <5 10 особей

Л 10 особей Л 10 особей Л 10 особей Л 10 особей 1,0*10"15 (данные из 2 гр.)

20 особей 24 часов V 10 особей '[■ 10 особей 1,0*10"6 'у 10 особей 6 суток Л 10 особей 1,0* Ю*д Л 10 особей

Л Ю особей '10 особей Л 10 особей Л 10 особей 1,0*10*и

48 часов V 10 особей V10 особей 1,0* ю-9 10 особей 12 суток Л 10 особей 1,0*10'3 Л 10 особей

Л 10 особей Л 10 особей Л 10 особей V 20 особей Л 10 особей 1,0*10"15

72 часов V 10 особей V 10 особей 1,0*Í0'2 10 особей Л 20 особей 18 суток Л 10 особей 1,0*10"1

Л 10 особей Л 10 особей Л 10 особей Л 10 особей 1,0*10'15

Л 20 особей 96 часов у 10 особей ч' 10 особей 1,0*10"15 'у 10 особей 30 суток Л 10 особей 1,0*10"3

Л 10 особей TÍO особей Л 10 особей Л 10 особей 1,0*10""

120 часов V 10 особей ? 10 особей 1,0*10",й ? 10 особей Контроль 18, 30 суток не делался ввиду отсутствия достоверных отличий между предыдущими контрольными группами

Л 10 особей Л 10 особей г? 10 особей

40 мышей 240 мышей 160 мышей 100 мышей

Примечание: Л, 9 - самцы и самки лабораторных мышей. Контрольные и опытные группы лабораторных мышей содержались в стандартны*, однотипных условиях вивария, получали питание и воду в достаточном количестве. Эвтаназия осуществлялась методом декапитацки с соблюдением всех биоэтических правил.

Результаты собственного исследования и их обсуждение.

Результаты проведенного изучения показателей белкового обмена у лабораторных мышей через 12-120 часов после введения МФК в дозе 2 мг/кг показали, что наиболее значительные отклонения относительно контрольных групп с характерными половыми отличиями наблюдались через 12 и 72 часа.

Нами было обнаружено, что введение МФК вызывает изменения в содержании общего белка крови лабораторных мышей, а также в распределении белковых фракций.

У самцов наиболее часто отмечалась неспецифическая гиперпродукция а1-, а2-глобулинов через 12 часов; а1-, р-глобулинов максимально через 72 часа после введения МФК в дозе 2 мг/кг массы животного (см. рис. 1).

Рис. 1. Изменение содержания белковых фракций (в % относительно контрольных групп) в плазме самцов в зависимости от времени после введения МФК в дозе 2 мг/кг массы животного. Примечание. К - контрольная группа. Значения отличий в процентах указаны в случае статистически значимых различий при р<0,05.

В отличии от самцов, у самок через 12 часов после введения МФК наблюдалась гипер-у-глобулинемия на 22% сопровождаемая понижением а1-, р-глобулинов на 39% и 15%, соответственно, а через 72 часа был отмечен рост общего белка на 16%, за счет гиперпродукции а2-, р-глобулинов на 50% и 18%, соответственно, что сопровождалось увеличением концентрации альбумина в крови на 27% (см. рис. 2).

Наблюдалась нормализация содержания альбумина и глобулинов в крови самцов лабораторных мышей через 96 часов после введения МФК, за исключением сниженного содержания у-глобулинов на 35%. У самок через 96 часов отмечен рост содержания альбумина на 15%, сниженное содержание а1-, у-глобулинов на 18% и 25%, соответственно. Через 120 часов у самцов отличий от контрольных групп не наблюдалось, у самок была отмечена гипер-у-глобулинемия на 37%.

Рис. 2. Изменение содержания белковых фракций (в % относительно контрольных групп) в плазме самок в зависимости от времени после введения МФК. Примечание, см. рис. 1.

После введения МФК в дозе 2 мг/кг лабораторным мышам наблюдалось изменение содержания продуктов ПОБ и маркеров эндогенной интоксикации.

Через 12 часов после введения МФК у самцов отмечалось увеличение содержания продуктов ПОБ в виде роста АФГ на 18%, КФГ на 90%; наблюдали рост ОП в плазме на 24% и эритроцитах на 106%, ВНСММ (преимущественно катаболического происхождения) в плазме на 38% (см. рис. 3). У самок лабораторных мышей такого роста показателей отмечено не было, только концентрация ВНСММ в плазме увеличивалась на 11%. Кроме того, достоверно уменьшалось содержание АФГ на 14% и ВНСММ в эритроцитах на 19%.

Спустя 24 часа после введения МФК в дозе 2 мг/кг в крови самцов происходило увеличение ОП в плазме на 81% и снижение ВНСММ в эритроцитах на 32%; у самок - рост ОП в эритроцитах на 36%; подробные данные представлены на рис. 3.

Анализ крови через 48 часов после подкожной инъекции опытным группам мышей растворов МФК в дозе 2 мг/кг не показал больших изменений изучаемых показателей, однако следует указать на снижение ОП в эритроцитах у самцов и самок на 33% и 18% соответственно.

Через 72 часа после введения МФК наибольшие изменения биохимических показателей были отмечены у самок лабораторных мышей. Наблюдалось снижение АФГ и КФГ на 19% и 54%, соответственно, ВНСММ и ОП в плазме на 25% и 48%, соответственно; был зарегистрирован рост ВНСММ в эритроцитах на 2 7%. В крови самцов наибольшие изменения были отмечены для КФГ —снижение на 41% и ВНСММ в плазме - снижение на 17%.

Нормализация значений большинства изучаемых биохимических показателей нами наблюдалась через 96 и 120 часов после введения МФК в

дозе 2 мг/кг самцам и самкам лабораторных мышей, что фиксировалось по отсутствию достоверных отличий (см. рис. 3).

24 ч. 48 ч.

-•- Обшнй белок -О- ОП в плазме

-Й-АФГ -А-КФГ

ВНСММ в эритроцитах

Самцы

72 ч. 96 ч. 120 ч.

ОП в эритроцитах 43— ВНСММ в плазме

145 130 115

В?

|юо

s о к

S 85

136 /А

/ 122 \ Ш / / л\ 117

\ 84 / ^ *

82 \Л* /

W 52 //

\V7

------- 1 1 1 ■ ■ 1 ....

24 ч. 48 н.

О- ОГ1 в плазме ár-КФГ

72 ч.

96 ч. 120 ч.

ОП в эритроцитах -О- ВНСММ в плазме

К 12 ч.

- Общий белок -ЛФГ ВНСММ в эритроцитах

Самки

Рис. 3. Суммарная картина изменения значений показателей белкового обмена у самцов и самок лабораторных мышей в зависимости от времени после введения МФК в дозе 2 мг/кг относительно контрольных групп в %. Примечание: указаны значения достоверных отличий в % при р<0,05.

Нами был предложен коэффициент информативности Кь который рассчитывался по формуле (1):

а: - 21%- - ,,)

где 1%, - суммарный процент достоверных отличий через I часов после введения МФК (например, 72 ч.), - через 1-1 шаг часов (к примеру, 48 ч), £%г+] - через И-1 шаг часов (к примеру, 96 ч).

Расчет коэффициента позволил заключить, что максимальное отклонение значений изучаемых показателей относительно контрольных групп наблюдалось через 72 часа после подкожного введения МФК в дозе 2 мг/кг массы животного самцам и самкам лабораторных мышей (рис. 4).

Рис. 4. Изменение коэффициента информативности биохимических показателей в зависимости от времени после введения МФК в дозе 2 мг/кг массы животного группам самцов и самок лабораторных мышей относительно контрольных групп. Примечание. К1 - значение коэффициента информативности, тах - максимум К.[ на графике.

Проведенный факторный анализ полученных результатов показал наличие трех факторов влияния МФК на показатели крови самцов и самок лабораторных мышей, описывающих около 95% дисперсии. Обнаруженные отличия через 72 часа после введения МФК в дозе 2 мг/кг массы животного описывались факторами работы АОС, выведением эндотоксинов и сорбцией эндотоксинов эритроцитами.

По результатам исследования биохимических показателей после введения раствора МФК мышам в дозе 2 мг/кг через 12-120 часов было определено, что наибольшее отличие между биохимическими показателями крови опытных и контрольных групп лабораторных мышей наблюдалось спустя 72 часа после введения МФК. На рис. 5 показаны изменения концентрации ОБ, продуктов

ПОБ, ОП и ВНСММ в крови самцов и самок лабораторных мышей через 72 часа после введения МФК в дозе 2 мг/кг.

ОБ Л «I «2 Р 7 ОПпл. ОГЬр. АФГ КФГ Впл. Вэр 0 Самцы □ Самки

Рис. 5. Сравнительное изменение изучаемых биохимических показателей крови в % относительно контрольных групп самцов и самок через 72 часа после введения МФК в дозе 2 мг/кг. Примечание: ОБ - общий белок; А - альбумнн; а1, а2, р, у - фракции глобулинов; ОПпл., ОГЬр. - содержание ОП в плазме и эритроцитах; Впл., Вэр. - содержание ВНСММ в плазме и эритроцитах; АФГ, КФГ - фракции ПОБ. Представлены значения отличий в % в случае достоверных отличий при р<0,05.

При изучении влияния различных доз МФК при введении лабораторным мышам нами была отмечена разнонаправленность влияния высоких (2, 10"3 мг/кг массы животного) и низких (10"12, Ю-15 мг/кг массы животного) доз МФК.

Введение МФК в различных дозах лабораторным мышам приводило к небольшому изменению общего белка. Максимальное увеличение содержания общего белка происходило в крови самок на 16% при введении МФК в дозе 2 мг/кг и в крови самцов на 14% при введении МФК в дозе 10"12 мг/кг.

Изменения происходили также в качественном составе общего бежа (рис. 6). Было отмечено, что при введении самцам лабораторных мышей МФК в дозе 2 мг/кг наблюдалась гиперпродукция а1-, (3-глобулинов на 35% и 41%, соответственно. Подобным образом на содержание глобулинов оказывала МФК в дозе 10"15 мг/кг: рост а1-, а2-, р-глобулинов на 44%, 24%, 25%. соответственно. У самок также было отмечено увеличение фракции глобулинов при введении МФК в дозах 2, 10"®, 1(ГЬ мг/кг, при этом рост а2-глобулинов наблюдался на 50%, 112% и 34%, соответственно. Стоит отметить, что МФК оказала наибольшее влияние на распределение глобулинов в крови самцов при введении в дозе 10"15 мг/кг, самок при введении в дозе 2 мг/кг.

Самцы Самки

Рис. 6. Изменение содержания белковых фракций (в г/л) в плазме самцов и самок через 72 часа в зависимости от вводимых доз МФК. Примечание. К - контрольная группа. По оси абсцисс значения концентраций МФК в мг/кг массы животного. Указаны процентные отличия от контрольных групп в случае достоверных отличий при р<0,05.

На рис. 7 приведены данные изменения содержания продуктов ПОБ и .маркеров эндогенной интоксикации в крови самцов лабораторных мышей при введении различных доз МФК.

□ ОПлл. ¡3 ОПэр. □ АФГ ВКФГ ЯВНСММпл. ОВНСММэр.

Рис. 7. Изменение значений биохимических показателей самцов лабораторных мышей в % относительно контрольных групп через 72 часа после введения различных доз МФК. Примечание. Представлены значения отличий в % в случае достоверных отличий при р<0,05. По оси абсцисс указаны дозы МФК в мг/кг веса тела животного.

Увеличение содержания ОП в плазме и эритроцитах, свидетельствующее об усилении катаболических процессов, наблюдалось при введении МФК в дозах 10"3,104', 10'9,10~15 мг/кг массы животного. Максимальное увеличение ОП в плазме на 90% было отмечено при введении МФК в дозе 10~15 мг/кг, а в эритроцитах на 27%

при введении МФК в дозе 10"3 мг/кг массы животного.

Снижение КФГ на 72% наблюдалось при введении МФК в дозе 1СГ мг/кг, увеличение КФГ на 28% - при введении МФК в дозе 1(Г9 мг/кг. При инъекции раствора МФК в дозе 1СГ15 мг/кг самцам лабораторных мышей происходило повышение продуктов ПОБ и АФГ и КФГ на 35%, 77%, соответственно, указывающее на усиление процессов окислительной модификации белков.

Обращает на себя внимание' особенности изменения концентрации ВНСММ в плазме самцов лабораторных мышей. Достоверное снижение ВНСММ в плазме при введении доз МФК 2, 10"6, 10"12 мг/кг на 17%, 34%, 69%, соответственно, изменило тенденцию на рост на 47% (за счет роста продуктов катаболического происхождения на 206%), 37% при введении МФК в дозах 10'15, 10~18 мг/кг, соответственно. При этом ВНСММ в эритроцитах увеличивались на 20% при введении МФК в дозе 10"'5 мг/кг, уменьшалась на 15% при введении МФК в дозе 10"18 мг/кг массы животного (рис. 7).

У самок лабораторных мышей наибольшие отличия изучаемых показателей отмечались при введении МФК в дозе 10"3 мг/кг (рис. 8).

Рис. 8. Изменение значений биохимических показателей самок лабораторных мышей в % относительно контрольных групп через 72 часа после введения различных доз МФК. Примечание. Представлены значения отличий в % в случае достоверных отличий при р<0,05. По оси абсцисс указаны дозы МФК в мг/кг массы животного.

Как и у самцов происходило подобное увеличение ОП в плазме и эритроцитах на 21%, 29%, соответственно. Также наблюдалось уменьшение продуктов ПОБ (АФГ на 27%, КФГ на 79%) и снижение ВНСММ в плазме на 65%. В отличие от реакции организмов мышей при введении дозы МФК 2 мг/кг

массы животного произошло увеличение фракции ОП и более глубокие изменения в содержании продуктов ПОБ.

Подобно самцам происходило снижение ВНСММ в плазме при введении МФК в дозах 2, 10~3, 1(Г12 мг/кг массы на 25%, 65%, 76%, соответственно.

Введение МФК в дозе 10"'5 мг/кг массы животного самкам лабораторных мышей приводило к одновременном)' росту ОП в плазме на 30%, АФГ на 13% и ВНСММ в эритроцитах на 40%.

Расчетный индекс интоксикации (ИИ), который вычислялся по формуле: ИИ=ВНСММпл.х ОПпл.+ВНСММэр. х ОПэр. показал достоверное увеличение ИИ у самцов на 128% и у самок на 35% относительно контрольных групп при введении МФК в дозе 10"15 мг/кг, указывая на наличие наиболее выраженного синдрома эндогенной интоксикации у самцов.

МФК в дозе 10"18 мг/мл приводила к небольшому колебанию биохимических показателей, наблюдалась нормализация значений некоторых показателей крови, за исключением содержания ВНСММ в плазме и эритроцитах лабораторных мышей и продуктов ПОБ в крови самок.

Анализ полученных данных по воздействию различных доз МФК на организмы лабораторных мышей показал, что самцы более подвержены воздействию МФК, у которых наблюдался синдром эндогенной интоксикации через 72 часа после введения МФК в дозе 10"'5 мг/кг массы животного.

На рис. 9 показаны значения коэффициента информативности применительно к дозозависимому эксперименту.

Рис. 9. Изменение коэффициента информативности биохимических показателей в зависимости от вводимых доз МФК группам самцов и самок лабораторных мышей. Примечание, (ч - значение рассчитанного коэффициента информативности, 1, 2, 3 — максимальные значения на графике в порядке уменьшения.

Расчет К( позволил определить, что наибольшие отличия значений изучаемых показателей относительно контрольных групп наблюдались у самцов и самок лабораторных мышей при введении МФК в дозах 10"3, 10"', 10~15 мг/мл. Так как изменения изучаемых показателей крови были более выражены при введении МФК у самцов, мы сделали вывод о необходимости дальнейшего изучения однократного введения доз МФК 10'" и 10'" мг/кг самцам с целью определения необходимого времени для нормализации изучаемых показателей.

Изучение ведения МФК в дозах 10° и 10'15 мг/кг массы животного самцам лабораторных мышей позволило предположить протекание адаптивных процессов. На рис. 10 показаны наибольшие изменения изучаемых биохимических показателей после введения доз МФК самцам мышей.

160

140

120

§100 е-

о 80 х

° 60 о?

136

134

129

-1т

.1:

3 суток 12 суток 30 суток

□ ОПпл ЕЭОП эр □ АФГ ЁКФГ

10"' мг/кг

3 суток

□ оппл еопэр

12 cvtok 30 суток □ АФГ БКФГ ■ В пл

10"'5 мг/кг

Рис. 10. Изменение содержания наиболее информативных биохимических показателей через 3, 12 и 30 суток после введения МФК самцам в дозах 10°, 10"ь мг/кг массы животного в % относительно контрольных групп. Примечание: пл., эр., В - плазма, эритроциты, ВНСММ, соответственно. Указаны процентные отличия относительно контрольных групп при р<0,05.

Через 6 суток после введения МФК в дозах 10"\ 10"15 мг/кг массы животного наблюдалось снижение ОП в плазме на 14%, 22%, соответственно; снижение ОП в эритроцитах в среднем па 8%. Только после введения МФК в дозе 10~15 мг/кг спустя 6 суток мы отмечали рост ВНСММ в плазме на 44%. снижение ВНСММ в эритроцитах на 30%.

Через 12 суток после введения МФК в дозе 10"ь мг/кг массы животного отмечено повышение ОП в плазме и эритроцитах на 33% и 41%, соответственно и ВНСМСМ в плазме на 84%. Отличия в содержании маркеров эндогенной интоксикации в крови опытных и контрольных групп мышей минимизировались к 30 суткам после введения МФК. Как в дозе 10" мг/кг

массы животного, так и в дозе 10"15 мг/кг было отмечено небольшое достоверное увеличение ВНСММ в эритроцитах в среднем по дозам на 15%.

Спустя 18 суток после введения МФК только в дозе 10*3 мг/кг массы животного наблюдалось снижение ОП в плазме на 20%; 10"15 мг/кг -увеличение ВНСММ в плазме на 36%. В дозе 10"3 мг/кг, так и в дозе 10'15 мг/кг нами был отмечен рост ОП в эритроцитах в среднем на 17%; рост АФГ и КФГ в среднем на 12%, 29%, соответственно.

Изучение содержания продуктов ПОБ, позволило обнаружить активацию процессов окислительной модификации белков через 30 суток после введения МФК в дозах 10"3, 10"15 мг/кг: концентрация АФГ увеличивалась в среднем на 30%, КФГ увеличивалась только при введении МФК в дозе 10'15 мг/кг на 70%.

По изменению значений показателей было подтверждено более выраженное влияние МФК в дозе 10"15 мг/кг. Факт увеличения продуктов ПОБ через 30 суток после инъекции раствора МФК, вероятно, свидетельствовал об особенностях процессов АОС или о срыве адаптивных механизмов.

ВЫВОДЫ

1. МФК оказывает влияние на процессы перекисного окисления белков и содержание маркеров эндогенной интоксикации в крови белых лабораторных мышей. При подкожном введении МФК в дозе 2 мг/кг массы животного максимальное изменение изучаемых биохимических показателей наблюдается через 72 часа после введения.

2. МФК обладает ярко выраженным дозозависимым эффектом с наибольшим достоверным изменением содержания продуктов ПОБ и маркеров эндогенной интоксикации в крови лабораторных мышей после введения МФК в дозах 10"3, 10'15 мг/кг массы животного, действуя двумя основными путями. Первый путь воздействия носит регуляторный характер, приводит к усилению катаболических процессов и окислительной модификации белков, вызывая повышение содержания маркеров эндогенной интоксикации на 30-90% и продуктов ПОБ на 20-80%. Второй путь воздействия, реализуемый в высоких дозах МФК, приводит к нарушению мембранного транспорта, вызывает снижение содержания продуктов ПОБ и маркеров эндогенной интоксикации.

3. МФК в дозах 10'3, 10"15 мг/кг массы животного после однократного введения самцам лабораторных мышей вызывает обратимые изменения в содержании общего белка и маркеров эндогенной интоксикации в крови, о чем говорит нормализация изучаемых биохимических показателей через 30 суток

после введения МФК. Исключение составляют продукты ПОБ, концентрация которых в крови остается повышенной.

4. Для дальнейшего изучения в качестве биомаркеров присутствия ФОС в природных средах можно рекомендовать продукты ПОБ, так и ОП, ВНСММ в плазме как наиболее информативные показатели влияния МФК в совокупности с показателями других обменных процессов.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Оценка экотоксичности специфических загрязняющих веществ по изменению биохимических показателей живых организмов / О.М. Плотникова, A.M. Корепин, И.В. Дуплякина, H.H. Матвеев // Теоретическая и прикладная экология. Киров, 2008. №4. С. 42-47.

2. Изучение содержания общего белка и альбуминов у лабораторных мышей при интоксикации метилфосфоновой кислотой / О.М. Плотникова, A.M. Корепин // Состояние окружающей среды и здоровье населения : Мат. II Всерос. науч.-практ. конф. Курган, 2009. С. 45-47.

3. Small rodents as bioindicators for the buffer zone at the objects of storage and destruction of chemical weapons (Мелкие грызуны как биоиндикаторы в зонах защитных мероприятий объектов уничтожения химического оружия) / О.М. Плотникова, И.В. Дуплякина, A.M. Корепин, H.H. Матвеев, Б.И. Кудрин, А.Н. Евдокимов // BIOINDICATORS 17 (17,h International Conference on Environmentel Bioindicators: Book of Abstract). Moscow: MSU, 2009.P. 81.

4. Изучение содержания общего белка и олигопептидов у лабораторных мышей при интоксикации метилфосфоновой кислотой / A.M. Корепин, О.М. Плотникова, С.Н. Лунева // Проблемы региональной экологии в условиях устойчивого развития : Мат. Всерос. науч.-практ. конф. Киров, 2009. Вып.7, ч. 2, С. 58-60.

5. Корепин А.М. Изменение общего белка и белковых фракций плазмы мелких грызунов при интоксикации метилфосфонатом // Молодежный научный потенциал в инновационном развитии Уральского региона : Материалы региональной конференции молодых ученых, посвященной году молодежи в России. Курган : изд-во Курганской ГСХА, 2009. С. 103-105.

6. Свободнорадикальное окисления белков и липидов и энергетический обмен у лабораторных мышей при воздействии метилфосфонатов как специфических поллютантов / О.М. Плотникова, A.M. Корепин, H.H. Матвеев, И.В. Дуплякина, С.Н. Лунева II Бюллетень

Московского общества испытателей природы. Москва, 2009. Т. 114. Вып. 3. Ч. 3. С. 162-165.

7. Динамика содержания маркеров эндогенной интоксикации в крови при воздействии метилфосфоната на лабораторных мышей / A.M. Корешш, О.М. Плотникова // Экологобезопасные и ресурсосберегающие технологии и материалы : мат. per. мол. науч.-практ. конф. с меад. уч. Улан-Удэ : Изд-во Бурятского ун-та, 2010. С. 91-93.

8. Биохимические показатели лабораторных мышей в зависимости от времени интоксикации метилфосфонатом / О.М. Плотникова, H.H. Матвеев, A.M. Корепин, И.В. Дуплякина // Теоретическая и прикладная экология. Киров, 2010. № 1.С. 81-86.

9. Влияние метилфосфоната на белковый обмен лабораторных мышей на примере адаптации самцов к разовому введению различных доз / А.М. Корешш, О.М. Плотникова // Биология будущего: традиции и инновации : мат. всерос. мол. науч. конф. с меад. уч. Екатеринбург : Изд-во УРГУ, 2010. С. 138-139.

10. Влияние различных концентраций метилфосфоновой кислоты на содержание основных маркеров развития эндогенной интоксикации у самцов белых лабораторных мышей / A.M. Корепин, С.Н. Лунева, О.М. Плотникова // Экология. Риск. Безопасность : мат. per. науч.-практ. конф. Курган : Изд-во КГУ, 2010. Т. 2. С. 138-139.

11. К вопросу возможного влияния на мелких грызунов метилфосфонатов - особой группы веществ антропогенной природы / О.М. Плотникова, A.M. Корепин, H.H. Матвеев, И.В. Дуплякина // Антропогенная трансформация природной среды : мат. межд. конф. Пермь : Изд-во Пермского государственного университета, 2010. С. 133-140.

12. Динамика содержания общего белка и олигопептидов у лабораторных мышей при интоксикации метилфосфонатом / A.M. Корепин, О.М. Плотникова, С.Н. Лунева // Мат. XXI Съезда физиологического общества им. И.П. Павлова. Москва-Калуга : Типография ООО «БЭСТ-принт», 2010. С. 295.

13. Изучение содержания гликогена лабораторных мышей при введении метилфосфоновой кислоты / С.Н. Лунева, О.М. Плотникова, И.В. Савинова, H.H. Матвеев, A.M. Корепин // мат. науч.практ. конф. посвященной 200-летию со дня рождения Николая Ивановича Пирогова. Курган, 2010. С. 253-254.

14. Перекисное окисление белков и содержание маркеров эндогенной интоксикации при введении метилфосфоновой кислоты лабораторным мышам / С.Н. Лунева, О.М. Плотникова, A.M. Корепии, H.H. Матвеев, И.В. Савинова // мат. науч.практ. конф. посвященной 200-летию со дня рождения Николая Ивановича Пирогова. Курган, 2010. С. 254-256.

15. Влияние интоксикации метилфосфонатом на основные биохимические показатели метаболизма у лабораторных мышей / С.Н. Лунева, О.М. Плотникова, A.M. Корепии, H.H. Матвеев, И.В. Савинова // мат. науч.практ. конф. посвященной 200-летию со дня рождения Николая Ивановича Пирогова. Курган, 2010. С. 256-257.

16. Особенности влияния различных доз метилфосфоновой кислоты на основные биохимические показатели метаболизма лабораторных мышей / О.М. Плотникова, И.В. Савинова, H.H. Матвеев, A.M. Корепии, А.Н. Евдокимов, С.Н. Лунева // Вестник Челябинского государственного педагогического университета. Челябинск, 2011. №1. С. 325-334.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

• АОС - антиоксвдантная система;

• АФГ - алъдегидфенилгидразоны, фракция продуктов I ЮБ^о™.;

• АХЭ - ацетилхолинэстераза;

• ВНСММ - вещества низкой и средней молекулярных масс;

• ИИ - индекс интоксикации;

• КП - фракция ВНСММ катаболического происхождения;

• КФГ - кетондинитрофенилгидразоны, фракция продуктов ПОБ36М70ии;

• МФК - метилфосфоновая кислота;

• ОБ - общий белок;

• ОМБ — окислительная модификация белков;

• ОП - фракция олигопептидов;

• ПОБ - перекисное окисление белков;

• РЦ СГЭКиМ - Региональный центр по обеспечению государственного экологического контроля и мониторинга объектов по хранению и уничтожению химического оружия по Курганской области;

• СЕЭ - сорбционная емкость эритроцитов;

• ФОВ - фосфорорганическое отравляющие вещества;

• ФОС - фосфорорганические соединения;

• ФП - фосфорорганические пестициды;

• ХО - химическое оружие;

• ЭИ- эндогенная интоксикация.

КОРЕПИН АНТОН МИХАЙЛОВИЧ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 11.01.11 Формат 60x85/16 Объем 1,0 усл. печ. л. Тираж 100 экз. Бумага офсетная. Печать оперативная. Заказ 130

Отпечатано в типографии «ДАММИ» ИНН 4501144924 КПП 450101001 640028, г. Курган, пр. Машиностроителей, 13 «А»

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Корепин, Антон Михайлович

На правах рукописи

Корепин Антон Михайлович

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

03.01.04 - биохимия

Ю Ю ц

Научные руководители: д.б.н. С. Н. Лунёва к.х.н. О. М. Плотникова

Курган

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

• АОС - антиоксидантная система;

• АМФК - аминометилфсофоновая кислота;

• АФГ - альдегидфенилгидразоны, фракция продуктов ПОБ270нм;

• АХЭ -ацетилхолинэстераза;

• ВНСММ - вещества низкой и средней молекулярных масс;

• ИИ - индекс интоксикации;

• КП - фракция ВНСММ катаболического происхождения;

• КФГ - кетодинитрофенилгидразоны, фракция продуктов ПОБз6з+з70нм;

• МФК - метилфосфоновая кислота;

• ОБ - общий белок;

• ОМБ - окислительная модификация белков;

• ОП - фракция олигопептидов;

• ПОБ - перекисное окисление белков;

• СЕЭ - сорбционная емкость эритроцитов;

• ФОВ - фосфорорганические отравляющие вещества;

• ФОС - фосфорорганические соединения;

• ФП — фосфорорганические пестициды;

• ХО - химическое оружие.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Экологический аспект применения фосфорорганических токсикантов.

1.2 Некоторые аспекты изучения показателей белкового обмена характеризующих процессы перекисного окисления белков и эндогенной интоксикации.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Материалы и структура исследования.

2.2 Методы исследования.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Изменение показателей белкового обмена белых лабораторных мышей после введения метилфосфоновой кислоты в дозе 2 мг/кг массы животного.

3.2 Оценка влияния различных доз метилфосфоновой кислоты на биохимические показатели белкового обмена белых лабораторных мышей через 72 часа после введения.

3.3 Долговременный эксперимент. Изучение биохимических показателей крови в периоде от 6 до 30 суток после введения метилфосфоновой кислоты самцам лабораторных мышей.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Перекисное окисление белков и содержание маркеров эндогенной интоксикации в крови лабораторных мышей после введения метилфосфоновой кислоты"

Актуальность исследования

В настоящее время фосфорорганические соединения (ФОС) активно исследуются в ведущих научных центрах мира. Большинство известных ФОС являются веществами антропогенного характера, многие из них впервые были получены как сильнейшие пестициды [8, 58, 133]. Интерес к проблеме вызван, во-первых, широким использованием ФОС в промышленности [53, 59, 106, 148], медицине [59, 95, 135], быту и сельском хозяйстве, [184, 199, 200, 201], во-вторых, начавшимся в России уничтожением фосфорорганических отравляющих веществ (ФОБ) [50, 61, 166, 167,].

До недавнего времени в России насчитывалось порядка 40 тысяч тонн фосфорорганических отравляющих веществ [16, 158, 160]. В Щучанском районе Курганской области, как и на объекте «Марадыковский» Кировской области в настоящее время функционируют заводы по уничтожению химического оружия (ХО). В основе процесса уничтожения фосфорсодержащего ХО лежит технология химического взаимодействия ФОВ (нервнопаралитического действия: зарин, зоман и V-газы) с органическими основаниями, например, моноэтаноламином или бутилатом калия [15, 99, 165, 168]. В результате реакции получаются метилфосфонаты -соответствующие соли и эфиры метилфосфоновой кислоты (МФК). Зарубежный опыт уничтожения ХО подтверждает возможность загрязнения метилфосфонатами природных сред. МФК была обнаружена спустя 10 лет после загрязнения сухой почвы на полигоне хранения ХО Дагуэй в штате Юта США [188, 198,205, 223].

Существует ряд фосфорсодержащих пестицидов (ФП) в строении которых присутствует фрагмент МФК. Общеизвестный гербицид глифосат (с торговым наименованием «Раундап») в результате биохимической деградации в почвах преобразуется в производное МФК — аминометилфосфонат (АМФК) [184], которое медленно гидролизуется до МФК. МФК объединяет большую гетерогенную по свойствам группу алкилфосфонатов, являясь ядром химического строения.

Уникальные свойства молекулы МФК, такие как бифильность, наличие малополярной связи С-Р, близкие фосфорной кислоте константы диссоциации могут приводить к ее неоднозначному поведению в биологических средах [57, 95, 205, 223]. Ряд исследований, касающихся биоремедиации почв от ФОС, доказывают существование микроорганизмов использующих С-Р-лиазный ферментный комплекс (органофосфатгидролаза) для расщепления МФК, что подтверждает возможность участия веществ со связью С-Р в метаболических процессах [73, 90, 135, 172, 188, 198]

Вопрос влияния МФК на представителей растительного и животного мира практически не изучен. Существуют отдельные данные о влиянии МФК на рост и ферментативную активность растений [111, 142]. Наличие разветвленной сети из углеводородных радикалов фосфолипидов на поверхности плазматических мембран позволяет предположить о возможности специфического взаимодействия молекул МФК с плазмолеммой и интегральными белками. Не исключено проникновение МФК через гематоэнцефалический барьер [10, 36].

Обладая специфическим строением и свойствами, МФК может оказывать влияние на процессы окислительной модификации белков и липидов, вызывая изменения в содержании продуктов перекисного окисления белков (ПОБ), также приводить к накоплению основных маркеров эндогенной интоксикации — олигопептидов (ОП) и веществ низкой и средней молекулярных масс (ВНСММ) в крови, по содержанию которых можно будет сделать выводы об участии МФК в процессах протеолиза или других путей белковой деградации.

Цель исследования

Изучить влияние МФК на показатели перекисного окисления белков и эндогенной интоксикации при подкожном введении лабораторным мышам.

Задачи исследования

2. Изучить особенности изменения содержания продуктов ПОБ и основных маркеров эндогенной интоксикации в крови лабораторных мышей в зависимости от введения различных доз МФК (дозозависимый эффект) и определить дозы, оказывающие наибольшее влияние.

Основные положения, выносимые на защиту

1. МФК оказывает влияние на содержания общего белка и белковых фракций, маркеров эндогенной интоксикации: ВНСММ и ОП в крови лабораторных мышей, а также вызывает изменения в протекании процессов перекисного окисления белков. Причем, наибольшие изменения изучаемых биохимических показателей наблюдаются через 72 часа после введения МФК. А нормализация значений большинства показателей происходит через 120 часов после введения МФК в дозе 2 мг/кг массы животного.

2. МФК обладает ярко выраженным дозозависимым эффектом. При о введении МФК в дозах 2, 10" мг/кг массы животного через 72 часа происходит ингибирование процессов окислительной модификации белков и активация белкового катаболизма, а в дозе 10"э мг/кг массы животного через 72 часа наблюдается усиление процессов ПОБ и возникновение синдрома эндогенной интоксикации. Через 30 суток после введения различных доз

МФК самцам лабораторных мышей отмечается нормализация содержания маркеров эндогенной интоксикации.

Объекты исследования

Экспериментальная часть исследования осуществлялась на базе аккредитованной в Системе аккредитации аналитических лабораторий (СААЛ) на техническую компетентность в проведении биохимических исследований (аттестат аккредитации в системе СААЛ РОСС 1Ш.0001.517720 в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО/МЭК 170252006) Межрегиональной лаборатории экотоксикологии филиала Государственного учреждения «Территориального государственного экологического фонда Курганской области» Регионального центра по обеспечению государственного экологического контроля и мониторинга объектов по хранению и уничтожению химического оружия по Курганской области (РЦ СГЭКиМ), а также клинико-экспериментального лабораторного отдела Федерального государственного учреждения «Российского научного центра «Восстановительная травматология и ортопедия» им. акад. Г.А. Илизарова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Объектами исследования являлись 540 белых лабораторных мышей линии СВА в возрасте 2-х месяцев, массой 25±2 г.

Материалом исследования служили: плазма и эритроцитарная масса крови. В ходе выполнения исследования применялись экспериментальные, биохимические и статистические методы.

Лабораторные мыши содержались в стандартных условиях вивария и получали питание согласно «Санитарным правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментальных биологических клиник» от 06.01.73 г. [137]. Интактные, опытные и контрольные группы мышей содержались в однотипных изолированных друг от друга условиях (разные клетки), единовременно получали сбалансированное питание (зерновые смеси, крупы, корма животного происхождения и корнеплоды) и воду в достаточном количестве.

Все процедуры на лабораторных мышах и эвтаназию осуществляли в соответствии с требованиями «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (Страсбург, 18 марта 1986 г.) [49]; «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1993 г.) [93]; «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации» (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003) [109] и «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ МЗ № 755 от 12.03.1977) [108].

Научная новизна исследования

МФК впервые рассматривается как потенциальное загрязняющее вещество природных сред, оказывающее влияние на организмы теплокровных животных.

Впервые изучено влияние МФК на ряд биохимических показателей белкового обмена теплокровных животных. Показано, что МФК оказывает достоверное влияние на биохимические показатели и обладает ярко выраженным дозозависимым эффектом.

Впервые оценена чувствительность биохимических методов к введению МФК на уровне низких доз (10'15, 10"18 мг/кг массы животного). Показано, что введение МФК в дозе Ю-15 мг/кг массы животного вызывает рост концентрации карбонильных производных белков (продуктов ПОБ), увеличение фракций олигопептидов в плазме и ВНСММ в плазме и эритроцитах лабораторных мышей.

Практическая значимость исследования, область внедрения

Полученные результаты исследования акцентируют внимание на важности вопроса контроля уровня загрязнения метилфосфонатами действующих и бывших объектов уничтожения химического оружия, рациональности использования фосфорсодержащих пестицидов на сельскохозяйственных угодьях.

Комплексное изучение влияния МФК на содержание продуктов ПОБ и маркеров эндогенной интоксикации в крови теплокровных животных позволило выделить эти показатели как наиболее информативные, что в совокупности с рядом показателей других обменных процессов можно использовать в экологическом мониторинге животного мира для оценки уровня воздействия на теплокровные организмы фосфонатов и подобного рода загрязняющих веществ.

Интеграция данных об изменении изучаемых показателей под действием различных доз МФК в область клинико-диагностических г исследований позволит использовать их в качестве одних из маркеров интоксикации человека и животных низкими дозами фосфорорганических отравляющих веществ.

Результаты проведенного исследования использовались для разработки, аттестованной в Межрегиональной лаборатории экотоксикологии РЦ СГЭКиМ «Методики выполнения измерений биохимических показателей в плазме (сыворотке) крови мелких теплокровных животных фотометрическим методом», свидетельство об аттестации ФГУП «УНИИМ» № 224.11.03.052/2009 от 17.06.2009 г. [97].

Апробация работы

Материалы диссертационного исследования доложены: на региональной конференции молодых ученых, посвященной году молодежи в России «Молодежный научный потенциал в инновационном развитии Уральского региона» (КГСХА, 2009); на VII всероссийской научно-практической конференции «Проблемы региональной экологии в условиях устойчивого развития» (Киров, 2009); на II всероссийской научно-практической конференции «Состояние окружающей среды и здоровье населения» (Курган, 2009); на региональной молодежной научнопрактической конференции с международным участием «Экологобезопасные и ресурсосберегающие технологии и материалы» (Улан-Удэ, 2010); на всероссийской молодежной научной конференции с международным участием «Биология будущего: традиции и инновации» (Екатеринбург, 2010); на международной научно-практической конференции «Экология. Риск. Безопасность» (Курган, 2010); на международной конференции «Антропогенная трансформация природной среды» (Пермь, 2010).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ. Из печатных работ 3 опубликовано в изданиях, рекомендуемых ВАКом для публикации результатов кандидатских диссертаций.

Объем и структура работы

Работа изложена на 115 страницах машинописного текста, состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов, списка литературы, 12 таблиц, 37 рисунков. Библиографический указатель включает 225 источников: из них 178 - отечественные, 47 - зарубежные. Диссертационное исследование выполнено по плану НИР Межрегиональной лаборатории экотоксикологии филиала ГУ «Экофонд» РЦ СГЭКиМ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Корепин, Антон Михайлович

выводы

1. МФК оказывает достоверное влияние на процессы перекисного окисления белков и содержание маркеров эндогенной интоксикации в крови белых лабораторных мышей. При подкожном введении МФК в дозе 2 мг/кг массы животного максимальное изменение изучаемых биохимических показателей наблюдается через 72 часа после введения.

-I 1 ^ введения МФК в дозах 10 , 10 мг/кг массы животного, действуя двумя основными путями. Первый путь воздействия носит регуляторный характер, приводит к усилению катаболических процессов и окислительной модификации белков, вызывая повышение содержания маркеров эндогенной интоксикации на 30-90% и продуктов ПОБ на 20-80%. Второй путь воздействия, реализуемый в высоких дозах МФК, приводит к нарушению мембранного транспорта, вызывает снижение содержания продуктов ПОБ и маркеров эндогенной интоксикации.

3 |г

3. МФК в дозах 10°, Ю-13 мг/кг массы животного после однократного введения самцам вызывает обратимые изменения в содержании общего белка и маркеров эндогенной интоксикации в крови, о чем говорит нормализация большинства изучаемых показателей через 30 суток после введения МФК. Исключение составляют продукты ПОБ, концентрация которых в крови остается повышенной.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Вопрос ФОС затрагивает широкий спектр веществ разнообразного применения, о которых крайне мало информации находится в разделах токсикологии, медицины, биохимии, как и отсутствуют данные о влиянии этих веществ на растения и животных. Говоря о ФОС, чаще представляют вещества исключительно антропогенного характера, далекие по строению и физико-химическим свойствам от биогенных представителей, таких как нуклеиновые кислоты и аденозинтрифосфат [65, 122]. Ввиду выраженной биологической активности ряда представителей, например ингибиторов ацетилхолинэстеразы, ФОС стали использовать в роли отравляющих веществ, более известных как зарин, зоман, V-газы (ФОВ) и пестицидов -глифосат, дихлофос, актеллик [94, 95, 123, 167].

В результате биохимической деградации основными источниками МФК потенциально могут быть соединения содержащие фрагмент RP(0)(0R')2, среди которых, например, массовый пестицид - Раундап; продукты детоксикации ФОВ на объектах уничтожения ХО. Многочисленные физические методы не позволяют обнаруживать низкие концентрации подобных загрязняющих веществ, поэтому нельзя утверждать об их отсутствии в природных средах [98].

По результатам исследований на испытательном полигоне Дагуэй в штате Юта (США), после загрязнения сухой почвы МФК сохранилась на протяжении 10 лет. Устойчивость и специфичность веществ со связью С-Р позволяет использовать их в качестве маркеров антропогенной деятельности. МФК является одним из наименее изученных представителей ФОС в области биохимических исследований [24, 57, 67, 73, 175].

Полярные НО- и малополярные СН3-группы наделяют МФК бифильными свойствами, т.е. способностями жиро-, водорастворимых веществ, принимающих участие в клеточном метаболизме. Учитывая строение плазматических мембран, не исключена возможность взаимодействия МФК с фосфолипидным окружением бислоя, рецепторами, а также влияния на ряд внутриклеточных процессов [23, 39, 71, 74]. Следовательно, введение МФК может привести к изменению содержания продуктов ПОБ, ВНСММ и ОП в крови лабораторных мышей как маркеров окислительной модификации белков, катаболических процессов или, принято считать, эндогенной интоксикации. Поэтому для изучения влияния МФК на гомеостаз теплокровных животных нами были выбраны следующие показатели белкового обмена: ОБ и белковые фракции; продукты ПОБ в виде АФГ и КФГ в плазме; ОП, ВНСММ в плазме и эритроцитах.

Нами было проведено комплексное изучение влияния МФК на некоторые показатели белкового обмена лабораторных мышей. Для этого мы провели эксперимент, включающий несколько этапов.

1. Для установления референтных диапазонов данных по изучаемым биохимическим показателям была исследована кровь 40 интактных мышей по 20 особей каждого пола.

2. Для определения времени после инъекции характерного максимальному изменению значений биохимических показателей осуществлялось введение общепринятой терапевтической дозы МФК 2 мг/кг массы животного на различные временные промежутки (12, 24, 48, 72, 96, 120 часов) параллельно с контрольными группами (физиологический раствор). Было изучено 240 животных.

3. Для изучения особенностей изменения показателей белкового обмена лабораторных мышей в зависимости от введения различных доз МФК (дозозависимый эффект) проводился анализ крови 160 мышей после введения доз МФК: 10"3, 10"6, 10"9, 10"12, 10"15, 10"18 мг/кг массы животного.

4. Для проведения долговременного эксперимента с целью оценки необходимого времени для нормализации биохимических показателей лабораторных мышей проводилось изучение крови через 6, 12, 18, 30 суток после разового введения МФК в дозах 10"3, 10"15 мг/кг массы животного.

Анализ результатов проведенного изучения показателей белкового обмена у лабораторных мышей через 12-120 часов после введения МФК в дозе 2 мг/кг массы животного показал, что наиболее значительные отклонения относительно контрольных групп с характерными половыми отличиями наблюдались через 12 и 72 часа. Нами было обнаружено, что введение МФК вызывает изменения в распределении белковых фракций у • лабораторных мышей. У самцов наиболее часто отмечалась неспецифическая гиперпродукция а1-, а2- Р-глобулинов, максимально через 12 и 72 часа после введения МФК в дозе 2 мг/кг, а через 96 часов отмечалось достоверное снижение у-глобулинов. В отличии от самцов, у самок через 12 часов после введения МФК наблюдалась гипер-у-глобулинемия сопровождаемая понижением а1-, Р-глобулинов, а через 72 часа отмечена гиперпродукция глобулинов. Нами было предположено развитие острой реакции на введение МФК, сопровождающейся иммунным ответом организма. К 120 часам после введения МФК была отмечена нормализация содержания белковых фракций в крови лабораторных мышей.

Данные по содержанию продуктов ПОБ, ВНСММ и ОП в крови лабораторных мышей показали, что через 12 часов наблюдался достоверный рост содержания продуктов ПОБ, ОП в плазме и эритроцитах, ВНСММ (преимущественно катаболического происхождения) в плазме. Через 72 часа после введения МФК отмечалось снижение КФГ, ВНСММ в плазме. Подобная картина наблюдалась и у самок, но в отличие от самцов изменения через 72 часа после инъекции МФК были более глубокими, также отмечалось снижение ОП в плазме и эритроцитах.

Можно предположить, что в течение 12 часов после введения МФК в дозе 2 мг/кг наблюдается острая реакция в ответ на введение чужеродного соединения, как инициатора катаболических процессов, ОМБ, вызывающего рост концентрации продуктов ПОБ и появление эндотокиснов, при этом отмечалась большая выносливость самок к стрессу по сравнению с самцами.

Нами было предположено, что влияние МФК в дозе 2 мг/кг веса тела животного через 72 часа после введения заключалось в первоначальном взаимодействии МФК с липидным окружением клеточной мембраны (например, благодаря наличию бифильных свойств) приведшему к изменению конформации окружающих белковых и липидных молекул и нарушению проницаемости каналов обеспечивающих мембранный транспорт. Это могло привести к внутриклеточному накоплению продуктов белковой деградации и не поступлению их в кровоток, о чем и говорило снижение ОП и ВНСММ. Отмеченное снижение продуктов ПОБ возможно связано с ингибированием процессов свободнорадикального окисления за счет передачи электрона со свободных радикалов антиоксидантам (например, витамину Е).

Нами наблюдалась нормализация значений изучаемых биохимических показателей по отсутствию достоверных отличий большинства изучаемых показателей через 120 часов после введения МФК в дозе 2 мг/кг самцам и самкам лабораторных мышей.

Предложенный коэффициент информативности К1 показал, что максимальное отклонение значений изучаемых показателей относительно контрольных групп наблюдалось через 72 часа после подкожного введения МФК в дозе 2 мг/кг самцам и самкам лабораторных мышей.

Проведенный факторный анализ полученных результатов показал наличие трех факторов влияния МФК на показатели крови самцов и самок лабораторных мышей, описывающих около 95% дисперсии. Обнаруженные отличия через 72 часа после введения МФК в дозе 2 мг/кг описывались факторами работы АОС, выведением эндотоксинов и сорбцией эндотоксинов эритроцитами.

При введении различных доз МФК нами была отмечена

3 р разнонаправленность влияния высоких (2, 10" мг/кг) и низких (10" 10" мг/кг) доз МФК при наличии половых различий.

Введение МФК в дозе 10" мг/кг лабораторным мышам приводило к небольшому изменению общего белка, например, у самцов повышение ОБ происходило за счет гиперпродукции а 1-глобулинов на 39%. У самцов и самок было отмечено резкое снижение фракций ПОБ: АФГ на 72% и 79%, соответственно, КФГ на 27% у самок. Можно предположить, что процессы ОМБ вызывали более глубокие изменения в АОС самок лабораторных мышей. МФК в дозе 10" мг/кг также приводила к статистически значимому росту содержания ОП в плазме и эритроцитах лабораторных мышей максимально на 35% и к уменьшению концентрации ВНСММ только в плазме у самок на 65%. Аналогичные изменения происходили и при введении МФК в дозе 2 мг/кг, кроме роста фракции ОП, что согласуется с предположением о нарушении мембранного транспорта.

Было отмечено отсутствие влияния МФК в дозе

10"6 мг/кг на процессы

ОМБ лабораторных мышей за исключением небольшого снижения КФГ на 22% у самок. У самцов наблюдалось достоверное снижение ВНСММ в плазме на 34% и увеличение ОП в плазме и эритроцитах максимально на 22%. Введение представленной дозы МФК самкам привело только к росту концентрации ОП в эритроцитах на 44%. В отличие от самцов, накопление ОП только в эритроцитах самок, вероятно, было свидетельством нормального функционирования гликокаликса эритроцитов, как переносчиков образующихся эндотоксинов .

Подкожное введение раствора МФК в дозе

Ш9 мг/кг приводило к изменению общего белка в крови самцов за счет роста фракции (3-глобулинов на 23%, у самок за счет роста а2-глобулинов на 112%. При этом было отмечено повышение продуктов ПОБ в виде КФГ у самцов и самок лабораторных мышей в среднем на 30%, в то время как у самок наблюдалось снижение АФГ на 15%. Также у мышей отмечалось достоверное повышение

ОП в плазме в среднем на 40% и ВНСММ в эритроцитах на 20% в виде производных катаболического происхождения. Полученные данные, позволили предположить об усилении процессов белковой деградации и развитии синдрома эндогенной интоксикации на ранней стадии.

Наблюдалось снижение содержания ВНСММ в плазме самцов и самок

1 О на 69% и 76% после введения МФК в дозе 10" ~ мг/кг. Значения остальных биохимических показателей оставались в пределах нормы. Расчетный индекс интоксикации (ИИ) показал достоверное уменьшение ИИ в среднем на 35% относительно контрольных групп, что, возможно, было связано с нарушением азотного обмена в виде угнетения фоновых катаболических процессов.

Наибольшие изменения значений биохимических показателей белкового обмена мы наблюдали при введении самцам и самкам лабораторных мышей МФК в дозе 1015 мг/кг. Было отмечено увеличение продуктов ПОБ в виде АФГ и КФГ у самцов на 35% и 77% соответственно, у самок только АФГ на 13%, что свидетельствовало об интенсификации окисления биосубстратов. Наблюдалось истощение АОС у самцов, и была показана большая стойкость АОС у самок. Отмеченный рост фракции ОП в плазме самцов на 90% был более выражен, чем у самок (на 30%), что свидетельствовало о лучших адаптационных способностях самок. Резкое повышение уровня ОП в плазме самцов при небольшом изменении в эритроцитах свидетельствовало об усилении интоксикации при недостаточной детоксикационной функции печени. Также было отмечено увеличение фракции ВНСММ в плазме самцов на 47% (за счет роста продуктов КП на 206%) и эритроцитах на 20%. У самок наблюдался рост ВНСММ только в эритроцитах на 40%. Следует отметить увеличение доли веществ катаболического происхождения в пуле ВНСММ плазмы самок, согласно росту %КП на 78%. ИИ самцов возрастал на 128%, у самок на 35%, подтверждая выносливость самок к введению МФК в дозе 10"15 мг/кг. Полученные данные подтверждались результатами электрофореза белков крови, которые показали наличие гипер-а1-, а2-, (3-глобулинемии у самцов и рост фракции а2-глобулинов у самок, в пользу острофазовой реакции на введение МФК.

Мы пришли к выводу о том, что самцы более подвержены воздействию МФК. У самцов наблюдался «синдром эндогенной интоксикации». Коэффициент информативности показал, что наибольшие отличия значений изучаемых показателей относительно контрольных групп наблюдались у а самцов и самок лабораторных мышей при введении МФК в дозах 10°, 10" , Ю-15 мг/мл. Так как изменения показателей белкового обмена самцов были более выражены при введении МФК, был сделан вывод о необходимости дальнейшего изучения однократного введения доз МФК 10" и 10"15 мг/кг.

МФК в дозе 10"'8 мг/мл приводила к небольшому колебанию биохимических показателей, но уже наблюдалась тенденция к нормализации.

Долговременный эксперимент показал наличие процессов образования маркеров эндогенной интоксикации и перекисного окисления белков после

3 15 введения МФК в дозах 10" , 10" мг/кг, Наблюдалось повышение содержания ОП и ВНСМСМ в эритроцитах в среднем на 37% и 10% соответственно, и ВНСММ в плазме на 84% (в дозе 10"15 мг/кг). Отличия в содержании маркеров эндогенной интоксикации в крови опытных и контрольных групп мышей минимизировались к 30 суткам после введения доз МФК. Было только отмечено небольшое достоверное увеличение ВНСММ в эритроцитах в среднем по дозам на 15%, что нами также оценивалось как тенденция к нормализации значений.

Концентрация АФГ увеличивалась при введении доз МФК в среднем на 30%, фракция КФГ также увеличивалась, но через 30 суток был отмечен рост только при введении МФК в дозе 10"15 мг/кг на 70%. По изменению значений показателей было подтверждено более выраженное влияние МФК в дозе 10"15 мг/кг. Рост АФГ и КФГ через 30 суток после инъекции раствора МФК, вероятно, свидетельствовал о срыве адаптивных механизмов касающихся работы АОС.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Корепин, Антон Михайлович, Курган

1. Активация свободноадикального окисления эфферентное звено типовых патологических процессов / под ред. Н. П.Чесноковой, М. Ю. Ледванова. Саратов : Изд — во Саратов, мед. ун-та, 2006. 177 с.

2. Актуальные проблемы гемосорбции / Н. А. Федоров и др.. М., 1981. С. 123-128.

3. Александров В. Н., Емельянов В. И. Отравляющие вещества : учебное пособие. 2-е изд., доп. и перераб. М. : Воениздат, 1990. 27)1 с.

4. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине / под ред. Ю. А. Грызунова, Г. Е. Добрецова. М., 1994. С.131-134.

5. Альдебель M. М. Биохимические показатели крови почек крыс с экспериментальным хроническим гломерулонефритом : автореф. дис. . докт. наук. Спб., 2000.

6. Антиоксидантная активность сыворотки крови / Г. И. Клебанов и др. //Вест. Росс. Акад. мед. наук. 1999. № 2. С. 15-22.

7. Антонов Н. С. Химическое оружие на рубеже двух столетий. М. : Прогресс, 1994. 174 с.

8. Арбузов А. Е. Избранные труды. М. : АН СССР, 1952. 755 с.

9. Арутюнян А. В., Дубинина Е. Е., Зарубина H. Н. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты организма : методические указания. Спб., 2000. С. 34-37.

10. Ашмарин И. П., Каразеева Е. П. Нейропептиды // Биохимия мозга / под ред. И. П. Ашмарина, П. В. Стукалова, Н. Д. Ещенко. СПб. : Изд-во СПбГУ, 1999. С. 232-266.

11. Бак 3. Химическая передача нервного импульса. М. : Мир, 1977. 118 с.

12. Барабой В. А., Брехман И. И., Голотин В. Г. Перекисное окисление и стресс. СПб. : Наука, 1992. 148 с.

13. Барабой В. А., Орел В. Э., Карнаук И. И. Перекисное окисление и радиация. Киев. : Наукова думка, 1991. 252 с.

14. Барышников А. Ю., Шишкин Ю. В. Иммунологические проблемы апоптоза. М. : Эдиториал УРСС, 2002. 320 с.

15. Белавинцев М. А., Мишанов Л. В. Ообенности разрабатываемых технологий уничтожения химического оружия // Федеральные и региональные проблемы уничтожения химического оружия. М. : ВИНИТИ, 1999. № 1.С. 81-83.

16. Белецкая И. П., Новиков С. С. Химическое оружие в России // Вестник Российской академии наук. 1995. Т. 65. № 2. С. 99-111.

17. Белки // Химическая энциклопедия: в 5 т. / под ред. И. Л. Кнунянц. М. : Советская энциклопедия, 1988. Т. 5. 623 с.

18. Белокуров Ю. Н., Рыбачков В. В. Прогнозирование течения эндогенной интоксикации в неотложной хирургии // Вест, хирургии. 1991. № 6. С. 3-7.

19. Белоногов Р. Н., Титова Н. М. Изменение содержания карбонильных производных белков у больных раком легкого // Сибирский онкологический журнал. 2007. № 2. С. 20-21.

20. Беляков Н. А., Владыка А. С., Малахова М. Я. Концентрация в крови и биологическая активность молекул средней массы при критических состояниях // Анестезиология и реаниматология. 1987. № 3. С. 41-44.

21. Биохимия / под ред. Е. Е. Дубниной и др.. М., 2002. Т. 67. № 3. С. 413421.

22. Блюменфельд Л. А. Гемоглобин и обратимое присоединение кислорода. М. : Сов. наука, 1957. 140 с.

23. Введение в биохимию мембран // Биохимия мембран : учеб. пособие для биолог, и мед. спец. вузов / под ред. А. А. Болдырева. М. : Высш.шк., 1986. Т. 1. С. 77-78.

24. Вельтищев Ю. Е., Юрьева Э. А., Кудрин А. Н. Биологически активные фосфоновые кислоты и их производные // Хим.-фармацевт, журн. 1983. Т. 18. №3. С. 282-290.

25. Вершигора А. Е. Общая иммунология. Киев : Высшая школа, 1990. С.251.305, 367-469.

26. Владимиров Ю. А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН. 1998. № 7. С.43-51.

27. Военная токсикология и медицинская зашита от ядерного и химического оружия / под. ред. В. В. Жеглова. М. : Воениздат, 1992. 366 с.

28. Военная токсикология и токсикология экстремальных ситуаций : учебник / под ред. А. А. Бова, С. С. Горохова, В. Н. Яблонского. Мн. : БГМУ, 2005. 662 с.

29. Военная токсикология, радиология и медицинская защита : учебник / под ред. Н. В. Саватеева. JI. : BMA, 1987. 356 с.

30. Военная токсикология, радиология и медицинская защита : учебник / под ред. С. А. Куценко. СПб. : Фолиант, 2004. 528 с.

31. Вьюшина А. В.,Герасимова И. Г.,Флеров М. А. Перекисное окисление белков в сыворотке крови у пренатально стрессированных крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2004. Т. 138. № 7. С. 41-44.

32. Гайдышев И. П. Анализ и обработка данных : специальный справочник. СПб. : Питер, 2001. 752 с.

33. Гараев Р. С. Изыскание новых лекарственных средств в рядах фосфорорганических соединений // Казанский мед. журн. 2008. Т. 89. № 5. С. 585-598.

34. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М. : Практика, 1998. 459 с.

35. Глебов Р. Н. Мозг, синапсы и передача информации. М. : Знание, 1984. 64 с.

36. Голиков С. Н., Заугольников С. Д. Холинэстеразы и антихолинэстеразные вещества. J1.: Медицина, 1970. 382 с.

37. Гончарова Е. И., Пинаев Г. П. Белки цитоскелета эритроцитов // Цитология. 1988. Т. 30. № 1. С. 5-18.

38. Грабар П. И., Буртен П. Иммуноэлектрофоретический анализ. М. : Мир, 1953. С. 25-38.

39. Гублер Е. В., Генкин А. А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. Л. : Медицина, 1973. 141 с.

40. Гудим В. И., Сигалла П. И. Клиническое значение средних молекул в патогенезе нефрогенной анемии // Тер. архив. 1983. № 6. С. 78-82.

41. Диагностическая ценность определения средних молекул в плазме крови при нефрологических заболеваниях / Габриэлян Н. И. и др. // Клин. мед. 1981. Т. 59.№ ю. С. 38-42.

42. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты : пер. с англ. М. : Мир, 1982. Т. 1. 392 с.

43. Дубинина Е. Е. Антиоксидантная система плазмы крови // Укр. биохим. журнал. 1992. Т. 64. № 2. С. 3-14.

44. Дубинина Е. Е. Продукты метаболизма кислорода в функциональной активности клеток (жизнь и смерть, созидание и разрушение). Физиологические и клинико-биохимические аспекты. СПб. : Мед. Пресса, 2006. 397 с.

45. Дубинина Е. Е., Шугалей И. В. Окислительная модификация белков // Успехи современной биологии. 1993. № 1. С. 71-79.

46. Дэвени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки : пер. с англ. М. : Мир, 1976. 368 с.

47. Европейская конвенция по защите позвоночных животных,используемых для экспериментальных и других целей // Вопросы реконструктивной и пластической хирургии. 2003. № 4. С. 18-22.

48. Зайчик А. LLL, Чурилов JI. П. Основы общей патологии. Часть 2. Основы патохимии. СПб.: Элби, 2000. 688 с.

49. Зенков Н. К., Меньшикова Е. Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах // Успехи современной биологии. 1993. № 3. С. 286-296.

50. Ивков В. Г., Берестовский Г. Н. Липидный бислой биологических мембран. М. : Наука, 1982. 224 с.

51. Избранные лекции по медицине катастроф / под ред. С. В. Трифонова. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. 304 с.

52. Интегральная оценка эндогенной интоксикации у больных гнойным медиастинитом / С. Б. Матвеев и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 2008. № 8. С. 12-13.

53. Исследование продуктов превращений фосфорорганических отравляющих веществ методом газовой хроматографии масс-спектрометрии / Е. И. Савельева и др. // Рос. хим. ж. 2002. Т. 46. № 6. С. 83-91.

54. Кабачник М. И. Некоторые вопросы строения и реакционнойспособности фосфорорганических соединений // Химия и применение фосфорорганических соединений. М. : Наука, 1962. С. 24.

55. Каган Ю. С. Токсикология фосфорорганических пестицидов. М. : Медицина, 1977. 298 с.

56. Казимирко В. К., Мальцев В. И. Антиоксидантная система и ее функционирование в организме человека // Мед. Газета «Здоровье Украины». 2004. № 98.

57. Калинина Н. И. О нормативно-правовом обеспечении процесса уничтожения химического оружия // Федеральные и региональные проблемы уничтожения химического оружия. М. : ВИНИТИ, 1999. С. 15-23.

58. Камышников В. С. Карманный справочник врача по лабораторной диагностике. 2-е изд., доп. и перераб. М. : МЕДпресс-информ, 2007. 328 с.

59. Камышников В. С. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. М. : МЕДпресс-информ, 2004. 920 с.

60. Карякина Е. В., Белова' С. В. Молекулы средней массы как интегральный показатель метаболических нарушений // Клин, лаборат. диагностика. 2004. № 3. С. 3-7.

61. Каспаров А. А., Саноцкий И. В. Токсикометрия химических веществ, загрязняющих окружающую среду. М. : 1986. С. 10.

62. Кенйя М. В., Лукши А. И., Гуськов Е. П. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе // Успехи совр. биол. 1993. Т. ИЗ. №4. с. 456-469.

63. Кирби А., Уоррен С. Органическая химия фосфора. М. : Мир, 1971. 297 с.

64. Кислый Н. Д., Самгина Т. С., Макаров Н. Н. Динамика факторов неспецифической резистентности у больных хроническим алкоголизмом //Вестник РУДН. Сер. Терапия. 1999. № 1. С. 52-54.

65. Классические и современные представления о метаболическом синдроме. Часть 1. Критерии, эпидимиология, этиология / Ю. И. Строев и др. // Вестник Санкт-Петербурского университета. 2007. Т. 11. № 1.С. 3-15.

66. Ковалевский А. Н., Нифантьев О. Е. Замечания по скрининговому методу определения молекул средней массы // Лаб. дело. 1989. № 10. С. 35-39.

67. Кольман Я., Рем К.-Г. Наглядная биохимия. М. : Мир, 2000. С. 308-309.

68. Конвенция о запрещении разработки, производства, накопления и применения химического оружия и о его уничтожении. вЕ. 92-61926, Париж, 1993. 133 с.

69. Кононова С. В., Несмеянова М. А. Фосфонаты и их деградация микроорганизмами // Биохимия. 2002. Т. 67, № 2, С. 220-233.

70. Корбридж Д. Е. Фосфор. Основы химии, биохимии, технологии : пер. с англ. / под ред. Э. Е. Нифантьева. М.: Мир, 1982. 680 с.

71. Критерии оценки эндогенной интоксикации при ожоговой травме / С. Б. Матвеев и др. // Клин. лаб. диагн. 2003. № 10. С. 3-6.

72. Курс коллоидной химии : учеб. для вузов / под ред. Ю. Г. Фролова. 3-е изд'., стер., испр. М. : Альянс, 2004. 464 с.

73. Лабораторная диагностика нарушений обмена белков : учеб. пособие / под ред. В. В. Долгова, О. П. Шевченко. М. : РМАПО, 1997. 67 с.

74. Лабораторная диагностика эндоинтоксикации при хронических дерматозах / Т. В. Копытова и др. // Клин. лаб. диаг. 2000. № 1. С. 1416.

75. Левицкий Е. Л., Губский Ю. И. Свободнорадикальные повреждения ядерного генетического аппарата клетки // Укр. биохим. журн. 1994. Т. 66. №4. С. 18-30.

76. Ленинджер А. Основы биохимии: в 3 т. М. : Мир, 1985. Т. 3. 320 с.

77. Липидные мембраны при фазовых превращениях / В. Ф. Антонов, Е. Ю. Смирнова, Е. В. Шевченко. М.: Наука, 1992. 136 с.

78. Лозовой А. С., Арбузов А. Е. Мировоззрение, наука, жизнь. Казань : Татар, кн. изд-во, 1985. 240 с.

79. Луйк А. И., Лукьянчук В. Д. Сывороточный альбумин и биотранспорт ядов. М. : Медицина, 1984. 224 с.

80. Лукьянова Л. Д. Новые подходы к созданию антигипоксантов метаболического действия // Вестник РАМН. 1999. № 3. С. 18-25.

81. Майер К.-П. Гепатит и последствия гепатита. М. : ГЭОТАР Медицина, 1999. 432 с.

82. Малахова М. Я. Методы биохимической регистрации эндогенной интоксикации // Эфферентная терапия. 1995. Т. 1. № 2. С. 61-64.

83. Малахова М. Я. Эндогенная интоксикация как отражение компенсаторной перестройки обменных процессов в организме // Эфферентная терапия. 2000. Т. 6. № 4. С. 3-14.

84. Малахова М. Я., Зубаткина О. В., Совершаева С. Л. Оценка эндогенной интоксикации у населения, проживающего в различных экологических условиях севера и северо-запада России // Эфферентная терапия. 1998. Т. 4. № 2. С. 50-55.

85. Маржохова М. Ю., Желихажева Ж. М. Оценка синдрома эндогенной интоксикации при пищевых токсикоинфекциях // Клиническая лабораторная диагностика. 2009. № 1. С. 15-18.

86. Матыс С. В., Лауринавичюс К. С., Несмеянова М. А. Разложение метилфосфоновой кислоты и его физиологическая регуляция у Escherichia coli // Микробиология. 1996. № 4. С. 481-487.

87. Медицинская биохимия : лабораторный практикум / под ред. Н. А. Семиколеновой. Омск : Изд-во ОмГУ, 2005. 76 с.

88. Меерсон Ф. 3., Малышев И. Ю., Замотринский А. В. Генерализованное накопление стресс-белков при адаптации организма к стрессорным воздействиям // Бюл. экспер. биол. и медицины. 1993. Т. 116. № 10. С. 231-233.

89. Международные рекомендации по проведению медико-биологическихисследований с использованием животных // Ланималогия. 1993. № 1. С. 29.

90. Международные соглашения в области химического разоружения и проблема обеспечения безопасности уничтожения химического оружия / Г. Л. Агаджанов и др. // Российский химический журнал. 1993. Т. 37. № 3. С. 8-10.

91. Мельников Н. Н. Пестициды : Химия, технология и применение. М. : Химия, 1987. 712 с.

92. Меньшикова Е. Б. Зенков Н. К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Успехи совр. биологии. 1993. № 4. С. 442-455.

93. Методика выполнения измерений биохимических показателей в плазме . (сыворотке) крови мелких теплокровных животных фотометрическимметодом; свидетельство об аттестации МВИ № 22.11.03.052/2009. Курган : РЦ СГЭКиМ, 2009. 42 с.

94. Методика выполнения измерений содержания метилфосфоновой кислоты в почве газохроматографическим методом; свидетельство об аттестации МВИ №031-03-185-05. Саратов : ФГУ ГосНИИЭНП, 2005. 20 с.

95. Методы уничтожения фосфорорганических отравляющих веществ / В. А. Жданов и др. // Российский химический журнал. 1993. Т. 37. № 3. С. 22-25.

96. Мещишен И. Ф., Мироник О. В., Сокол А. М. Окислительная модификация белков как один из патогенетических механизмов развития вирусных гепатитов // Вестник научных достижений. Украина, 1999. № 1. С. 89-91.

97. Миллер Ю. И. Связывание ксенобиотиков альбумином сыворотки крови // Клин. лаб. диагн. 1993. № 1. С. 34-40.

98. Мироник О. В. Сравнение интенсивности окислительной модификации белков у больных острыми гепатитами В и С // Буков, мед. весн. 2001.2. С. 118-120.j

99. Модификация метода определения среднемолекулярных пептидов и его использование в детской хирургии / С. Н. Гисак и др. // Хирургия. 1998. № 12.С. 53-54.

100. Назаренко Г. И., Кишкун А. А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. 2-е изд., стереотипное. М. : Медицина, 2002. 544 с.

101. Несмеянов А. Н. Начала органической химии. 2-е изд., доп. и перераб. М.: Химия, 1975. 624 с.

102. Нифантьев Э. Е. Химия фосфорорганических соединений. М. : МГУ, 1971.352 с.

103. Нифантьев Э. Е., Кухарева Т. С. Обзор монографий и обзоров по химии фосфорорганических соединений. М. : Наука, 1989. 160 с.

104. Об утверждений правил лабораторной практики в Российской Федерации : приказ М-ва здравоохранения Рос. Федерации от 19.06.2003 № 267.

105. Общая токсикология / под ред. Б. А. Курляндского, В. А. Филова. М. : Медицина, 2002. 608 с.

106. Огородникова С. Ю., Головко Т. К., Ашихмина Т. Я. Реакции растений на действие метилфосфоновой кислоты продукта трансформации фосфорсодержащих отравляющих веществ // Теоретическая и прикладная экология. 2007. С. 50-55.

107. Окислительная модификация белков и олигопептидов у больных хроническими дерматозами с синдромом эндогенной интоксикации / Т. В. Копытова и др. // Фундаментальные исследования. 2009. № 6. С.25.29.

108. Окислительный метаболизм растущих животных при однократном введении несимметричного диметилгидразина / JT. Е. Муравлева и др. // Фундаментальные и прикладные исследования в медецине. 2007. № 12. С. 87-88.

109. Определение фракции молекул средней массы в сыворотке крови осаждением белков ТХУ и ультрафильтрацией / М. Я. Малахова и др. // Лабор. дело. 1987. № 3. С. 224-227.

110. Оразаев Н. Г. Методы оценки эндогенной интоксикации при гриппе. Нальчик, Изд-во Кабардино-Балкарского гос. ун-та, 2007. 98 с.

111. Осипович В. К., Туликова 3. А., Маркелов И. М. Сравнительная оценка экспресс методов определения средних молекул // Лаб. дело. 1987. № 3. С. 221-224.

112. Остерман Л. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: электрофорез и ультрацентрифугирование. М. : Наука, 1981. 288 с.

113. Оценка интоксикации организма по нарушению баланса между накоплением и связыванием токсинов в плазме крови / Гаврилов В. Б. и др. // Клин. лаб. диаг. 1999. № 2. С. 13-17.

114. Оценка устойчивости к оксидативному стрессу плазмы крови по уровню окисляемости белков и липидов при металлкатализируемом оксилении / Э. М. Бекман и др. // Бюл. эксп. биол. и медицины. 2006. Т. 142. №9. с. 268-271.

115. Парфенкова Г. А., Чернядьева И. Ф., Ситина В. К. Средние молекулы -маркер эндогенной интоксикации // Врачебное дело. 1987. № 4. С. 7277.

116. Пасечник И. Н. Окислительный стресс как компонент формирования критических состояний у хирургических больных : автореф. дис. . докт. мед. наук. М., 2004. 46 с.

117. Пеньковский В. В. Свободные радикалы соединений фосфора // Успехи химии. 1975. Т. 44. № 6. С. 969-1002.

118. Пинигин М. А. Состояние и перспективы количественной оценки влияния химического загрязнения на здоровье населения // Гигиена и санитария. 2001. № 5. С. 53-58.

119. Пищухина А. М. Острофазовые белки сыворотки и хламидийная инфекция при остром коронарном синдроме : дис. . канд. мед. наук. Астрахань, 2007. 125 с.

120. Повещенко А. Ф., Абрамов В. В., Козлов В. В. Цитокины факторы нейроэндокринной регуляции // Успехи Физиологических Наук. 2007. Т. 38. № 3. С. 40-46.

121. Показатели эндогенной интоксикации в оценке риска развития пневмонеий при острых отравлениях азалептином / С. Б. Матвеев и др. // Клинич. лаборат. диагностика. 2007. № 6. С. 28-30.

122. Показатели эндотоксикоза при отравлениях психотропными препаратами различной тяжести / Е. Д. Сыромятникова и др. // Клин, лаб. диагностика. 2004. № 12. С. 81.

123. Покровский В. М., Коротько Г. Ф. Физиология человека. М. : Медицина, 2007. 656 с.

124. Поляк М. С. Антибиотики группы фосфоновой кислоты // Антибиотики. 1987. Т. 32. № 1. С. 66-75.

125. Практикум по биохимии / под ред. С. Е. Северина, Г. А. Соловьевой. М. : Изд-во МГУ, 1989. 509 с.

126. Применение коплексонов в нефтедобывающей промышленности : Обзорная информ : реактивы и особо чистые вещества / Дятлова Н. М. и др.. М.: НИИТЭХим, 1983. 47 с.

127. Проскуряков В. А., Шмидт Л. И. Очистка сточных вод в химической промышленности. Л. : Химия, 1977. 464 с.

128. Пурдела Д., Вылчану Р. Химия органических соединений фосфора : пер. с рум. / под ред. М. И. Кабачника. М. : Химия, 1972. 752 с.

129. Различия в процессах перекисного окисления белков у беременных крыс, селективных по порогу возбудимости нервной системы / А. В.

130. Вьюшина и др. // Бюл. экспер. биол. и медицины. 2002. Т. 133. № 3. С. 292-296.

131. Руководство по гематологии : в 3 т. / под ред. А. И. Воробьева. 2-е изд., доп. и перераб. М. : Ньюдиамед, 1985. Т. 1. 280 с.

132. Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) // Глав. гос. врача СССР от 06.04.1973 № 1945-73.

133. Сартори М. Новое в химии боевых отравляющих веществ // Успехи химии. 1954. Т. 23. № 1. С. 60-83.

134. Свиридова С. П., Горожанская Э. Т., Мелконян А. Г. Среднемолекулярные пептиды у онкологических больных до операции и в раннем послеоперационном периоде // Анестезиология и реаниматология. 1987. № 5. С. 42-44.

135. Свободные радикалы в живых системах. Итоги науки и техники / Владимиров Ю. А. и др. // Биофизика. 1991. Т. 29. 250 с.

136. Свободные радикалы и восстановление повреждений ДНК в репарационно-дефектных клетках человека / Т. А. Лисицына и др. // Докл. РАН. 1999. Т. 365. № 2. С. 263-266.

137. Серебрякова Н. Н. Влияние ксенобиотиков на физиологию и биохимию листостебельных мхов // Вестник ОГУ. 2007. № 12. С. 71-75.

138. Сидоров П. И., Соловьев А. Г., Синицкая Е. Н. Эндотоксикоз при острых алкогольных психозах // Наркология. 2002. № 4. С. 16-21.

139. Системные фунгициды : пер. с англ. / под ред. Е. И. Андреева. М., 1975. С. 15-20.

140. Сокальский М. А., Сокальская Л. И., Татарников А. В. Утилизацияотравляющих веществ и полупродуктов их синтеза : получение на их основе ионообменных материалов для гидрометаллургии // Рос. хим. журн. 2001. Т. 45. № 5-6. С. 157-162.

141. Соколовский В. В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах неспецифической реакции организма на экстремальное воздействие // Вопр. мед химии. 1998. Т. 6, № 34. С. 2-11.

142. Сондерс Б. Химия и технология органических соединений фосфора и фтора. М. : Издатинлит, 1961. 376 с.

143. Состав для ингибирования солеотложений и коррозии : пат. 2115631 Рос. Федерация № 97113167/25 ; заявл. 30.07.97 ; опубл. 20.07.98.

144. Справочник по лабораторным методам исследования / под ред. Л.А. Даниловой. СПб. : Питер, 2003. 733 с.

145. Средние молекулы эндотоксины пептидной природы / С. Г. Галактионов и др. //Хим.-фарм. журн. 1983. № 11. С. 1286-1288.

146. Средние молекулы и их фракции при астраханской риккетсиозной лихорадке / А. А. Николаев и др. // Клин. лаб. диаг. 1999. № 6. С. 4142.

147. Средние молекулы и проблема эндогенной интоксикации при критических состояниях различной этиологии / под ред. А. С. Владыка и др. // Анестезиология и реаниматология. 1987. № 2. С. 37-41.

148. Степанов А. Отравляющие вещества // Журнал Всесоюзного химического общества им. Д. И. Менделеева. 1968. Т. 13. № 6. С. 580608.

149. Титов В. Н. Альбумин, транспорт насыщенных жирных кислот и метаболический стресс-синдорм // Клин. лаб. диаг. 1999. № 4. С. 3-11.

150. Титов В. Н. Экзогенные и эндогенные патологические факторы (патогены) как причина воспаления // Клин. лаб. диаг. 2004. № 5. С. 310.

151. Титов В. Н., Амелюшкина В. А. Электрофорез белков сыворотки крови. М. : Оптимум Пресс, 1994. 124 с.

152. Токсикологические последствия окислительной модификации белков при различных патологических состояниях / Ю. И. Губский и др. // Совр. пробл. токсикол. 2005. № 3. С. 20-26.

153. Уничтожение химического оружия. Безопасность и открытость. Вопросы и ответы. Бюллетень №31 // Химическое разоружение, открытый электронный журнал. 2009. URL: http://chemdisarm.ru/articles/824 (дата обращения 23.12.2009).

154. Фалл ер Дж. М., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки : руководство для врачей. М. : БИНОМ, 2006. 256 с.

155. Федоров JI. А. Химическое оружие в России : история, экология, политика. М. : Центр экологической политики России, 1994. 220 с.

156. Физиология человека : учеб. пособие для студентов мед. вузов / под ред. В. М. Покровского, Г. Ф. Коротько. 2-е изд., доп. и перераб. М. : Медицина, 2007. 656 с.

157. Фосфорорганические комплексоны / под ред. М. И. Кабачник и др. // Успехи химии. 1974. Т. 43. № 9. С. 1554-1574.

158. Фосфорсодержащие поверхностно-активные вещества: Темат. Обзор / Чистяков Б. Е. и др.. М. : ЦНИИТЭИ ИНП, 1979. 54 с.

159. Хамитова Р. Я., Шигапов Р. М. Современное состояние вопроса о влиянии пестицидов на здоровье людей // Казанский мед. Журнал.1999. № 1.С. 67-69.

160. Химическое разоружение. Технологии уничтожения отравляющих веществ / В. П. Капашин и др.. Саратов : Изд-во ГосУНЦ «Колледж»,2000. 143 с.

161. Химразоружение общая забота // Российская газета. Спецвыпуск — Химразоружение. Поэтапная ликвидация. 2009. № 5076 (252). С. 2.

162. Холстов В. И. Уничтожение химического оружия насущная необходимость и озабоченность // Вестник химического разоружения. 2004. № 1.С 1-2.

163. Холстов В. И., Кошелев В. М. Подходы к оценке технологийуничтожения химического оружия // Российский химический журнал. 1994. Т. 38. №2. С. 42-47.

164. Шевченко О. П. Белки острой фазы воспаления // Лаборатория. 1996. № 1.С. 3-6.

165. Шерлок LLL, Заболевания печени и желчных путей. М. : ГЭОТАР Медицина, 1999. 864 с.

166. Шкодич П. Е., Желтобрюхов В. Ф., Клаучек В. В. Эколого-гигиенические аспекты проблемы уничтожения химического оружия. Волгоград : Изд-во ВолГУ, 2004. 236 с.

167. Штамм бактерий Bacillus megaterium, предназначенный для деструкции фосфорорганических пестицидов : пат. 1735359 Рос. Федерация №4781535/13 ; заявл. 11.01.90 ; опубл. 23.05.92, Бюл. № 19.

168. Шугаев А. И., Абдулхаликов А. С. Эндогенная интоксикация при остром панкреатите и методы ее тестирования // Эфферентная терапия. 1998. Т. 4. №4. С. 10-14.

169. Щукин Е. Д., Перцов А. В., Амелина Е. А. Коллоидная химия. 3-е изд., доп. и перераб. М., 2004. 444 с.

170. Электрофорез в клинической лаборатории. М. : Реафарм, 2006. Т.1. 160 с.

171. Юделевич В. И., Комаров Е. В., Ионин Б. И. Фосфорорганические лекарственные препараты // Хим.-фармацевт. журн. 1985. Т. 20. № 6. С. 668-685.

172. A method for measuring oetanol: water partition coefficients of highly toxic organophosphorus compounds / Czerwinski S. E. et al. // Journal Biochem. Mol. Toxicol. 2006. v. 20. № 5. P. 241-246.

173. Bairoch A. The ENZYME database in 2000 // Nucleic Acids Research. 2000. v. 28. № l.P. 304-305.

174. Ballou S., Kushner I. C-reactive protein and the acute phase response // Adv. Intern. Med. 1992. v. 37. P. 313-336.

175. Bergstrom J., Furst P. Uremic toxins // Replacement of Renal Function by Dyalysis. Boston, 1983. P. 354-390.

176. Biochemistry. Biophysics / Hickey M. E. et al.. 1976. P. 172, 439.

177. Caroline C. Glyphosate (Roundup) // Journal of pesticide reform. 1998. v. 18. №3. P. 2.

178. Daruich J., Zirulnik F., Gimenez M. S.Effect of the herbicide glyphosate on enzymatic activity in pregnant rats and their fetuses // Environmental Research. 2001. v. 85. № 3. P. 226-231.

179. Dean R. T., Fu S., Stocker R. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation// Biochem. J. 1997. v. 324. P. 1-18.

180. Dean R. T., Hunt J. V., Grant A. J. Free radical damage to proteins: the influence of the relative localization of radical generation, antioxidants, and target proteins // Free Radical Biology & Medicine. 1991. v. 11. № 12. P. 161-165.

181. DeFrank J. J., Fry I. J., Earley J. P. Irvine R. L. Biodégradation of VX/Water Hydrolysate //U.S. Army Edgewood Chemical Biological Center Aberdeen Proving Ground. MD 21010-5424. 2003. P. 6.

182. Doumas B.T., Bayse D.D., Carter, R.J. A candidate reference method for determination of total protein in serum // I. Development and validation. Clin. Chem. 1981. v. 27. P. 1642-1650.

183. Drapier J. C., Bouton C. Modulation by nitric oxide of metalloprotein regulatory activities // BioEssays. 1999. v. 18. № 7. P. 549-556.

184. England K., Cotter T. G. Direct oxidative modifications of signallingproteins in mammalian cells and their effects on apoptosis // Redox Report. 2005. v. 10. № 5. P. 237-245.

185. Erickson H. P. Evolution of the cytoskeleton // Bioessays. 2007. v. 29. № 7. P. 668-677.

186. Eto M. Organophosphorus pesticides: organic and biological chemistiy. Cleveland: Ohio, 1974. P. 387.

187. Fest C., Schmidt K. J. The chemistry of organophosphorus pesticides. Berlin, 1973. P. 339.

188. Frei B. Natural antioxidants in human health and disease. Orlando, FL: Academic Press. 1993. P. 588.

189. Frei В., Gaziano J. M. Content of antioxidants, preformed lipid hydroperoxides and cholesterol as predictors of the susceptibility of human LDL to metal ion-dependent and independent oxidation // J. Lipid Res. 1993. v. 34. P. 2135-2145.

190. Frei В., Stocker R., Ames B. N. Antioxidant defenses and lipid peroxidation in human blood plasma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. v. 85. P. 97489752.

191. Fry I. J., DeFrank J. J., Earley J. P. Process biodégradation of hydrolyzed zarin by the GB2 microbial consortium // Proc. ERDEC Sci. Conf. Chem. Biol. Def. Res. 1998. P. 629-633.

192. Glyphosate and Standard Toxicology Studies // Monsanto Company, Backgrounder. 2002. P. 1-5. URL: http://monsanto.com/products/techandsafety/herbicidescipubs.asp (дата обращения: 23.05.2008).

193. Glyphosate. Herbicide factsheet // Journal of pesticide reform. 2004. v. 24. №4. P. 10-15.

194. Glyphosate. The Pesticide Manual // American chemical society. 1997. P. 56.

195. Grob D. Anticholinesterase intoxication in man and its treatment. Berlin : Springer Verlag. 1963. P. 989.

196. Grof J., Menyhart D. Non diffusible toxic polypeptides in urae-mic sera: a new group of uraemic toxins // Act. Chir. Asad. Sci. Hung. 1977. v. 18. № 3. P. 7-283.

197. Halliwell B., Gutteridge J. M. C. Lipid peroxidation, oxygen radicals, cell damage, and antioxidant therapy // Lancet. 1984. P. 1396-1398.

198. Identification of chemical-weapons-related compounds in decontamination solutions and other matrices by multiple chromatographic techniques / W. R.Creasy et al. // Journal of Chromatography A. 1997. v. 774. P. 253-263.

199. Increased levels of 4-hydroxynonenal modified proteins in plasma of children with autoimmune diseases / Crane T. et al. // Free Radical Biology & Medicine. 1997. v. 23. № 3. P. 357-360.

200. Jackson M. J. An overview of methods for assessment of free radical activity in biology//Proc. Nutr. Soc. 1999. v. 58. P. 1001-1006.

201. Krinsky N. L. Membrane antioxidants // Ann. NY. Acad. Sci. 1988. v. 551. P. 17-33.

202. Lambeth J. D. Nox enzymes, ROS, and chronic disease: an example of antagonistic pleiotropy // Free Radic Biol Med. 2007. v. 43. № 3. P. 332347.

203. Lin V., Garry V. Roundup inhibits steroidogenesis by disrupting steroidogenic acute regulatory (StAR) protein expression // Environ. Health Persp. 2000. v. 108. P. 769-776.

204. Material Safety Data Sheet, Methylphosphonic Acid. Danvers : MA: Thiokol/Ventron Division, 1980.

205. Pigeolit E., Corbiser P., Houbion A. Glutathione peroxidase, superoxide dismutase, and catalase inactivation by peroxides and oxygen derived free radicals // Mech. Ageing and Develop. 1990. v. 51. P. 283-297.

206. Piroddi M., Depunzio I., Calabrese V. Oxidatively-modified and glycated proteins as candidate pro-inflammatory toxins in uremia and dialysis patients // Amino Acids. 2007. v. 32. № 4. P. 573-592.

207. Protein degradation by the proteasome and its implications in aging / Friguet216.217.218.219.220.221. 222.223.224.

208. Tanahashi K., Imada A. Phagocytic activity and oxygen radicals production of neutrophils in patients with chronic renal failure // Nippon. Jinzo. Gakkai. Shi. 1991. v. 33. № 6. P. 565-574.

209. Verweij A., Boter H. L. Pesticide Science. 1976. № 7. p. 355-362. Wolff S.P., Dean R.T. Fragmentation of proteins by tree radicals and its effect on their susceptibility to enzymic hydrolysis // Biochem J. 1986. v. 234. №2. P. 399-403.

210. Young D.S., Harris E.T., Cotlove E. Biological and analytic components of variation in long-term studies of serum constituents in normal subjects //

211. Clin. Chem. 1971. v. 17. P.

Информация о работе

Корепин, Антон Михайлович
кандидата биологических наук
Курган, 2011
ВАК 03.01.04

Диссертация

Перекисное окисление белков и содержание маркеров эндогенной интоксикации в крови лабораторных мышей после введения метилфосфоновой кислоты - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы