Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Пептиды-иммуномодуляторы как регуляторы сократительной активности лимфатических сосудов теплокровных

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Пептиды-иммуномодуляторы как регуляторы сократительной активности лимфатических сосудов теплокровных"

МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА, ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ И ОРДЕНА ОКТЯБРЬСКОЙ РЕВОЛЮЦИИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им М.В. Ломоносова Биологический факультет

На правах рукописи

САНЖИЕВА ЛЮДМИЛА ЩШШОВНА

Уда 612.42:577.112:612,017 . ©

ПтТЙДЫЧШУНОМОДУЛЯТОРЫ КАК регуляторы сократительнЗй АКТИВНОСТИ ЛИМФАТИЧЕСКИХ СОСУДОВ ТЕПЛОКРОВНЫХ

03.00.13 - физиология человека и животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

иэскъэ, 1ЭЭ2

Работа выполнена на кафэдре физиологии человека и животных ' Биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова

Заведующий кафедрой - академик РАМН И.П. Ашмарин.

Научные руководители:

академик РАМН, профессор И.П. Ашмарин

кандидат биологических наук, н.с. Т.В. Лэлекова

Официальные оппоненты: доктор биологических наук O.A. Гомазков доктор биологических наук С.А. Титов

Ведущее учреждение: Институт обцей патологии и патологической физиологии Р1Ш.

Защита состоится 1992 г. в 14 час.00 мин.

на заседании Специализированного Совета Д:053.05.35 в Московском

Москва, II9899,

государственном университете по адресу: Ленинские гори МГУ, Биологический факультет.

С диссертацией можно ■ ознакомиться в Биологического факультета МГУ.

Автореферат разослан " 1992 г.

/

библиотеке

Ученый секретарь Совета кандидат биологических наук

А

Б.А. Умарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

о

Актуальность проблем и. Лимфатическая истема позвоночных - один из вэяяейших элементов системы подержания гомеостаза организма. Функции- лимфатической системы ногообразны - гемопоэт1гческаяр защитно-фильтрационная, обменил, резервуарная, пропульсивная и, наконец, иммунопоэтическая. i патогенезе некоторых заболеваний сердечно-сосудастой системы, ¡apymeinifl иммунного статуса организма важное значение имеет из-юнегою системного и органного лимфотока в результате нарушений юстных и центральных механизмов их регуляции. Однако система >е гулядаи скорости лимфотока изучена недостаточно. Степки лимфатических сосудов содержат активные нервные и мышечные элементы, >твэтственные за пропускную способность сосуда, а также эпители-иьние клетки, реапгрующие па физиологически активные вещества, хзразующиеся в организма и циркулирующие в сосудистом русле. В ос числе находятся ^егуляторние пептида. Как универсальные носители биологической информации, пептида участвуют в регуляции scex функций организма, межсистемшх взаимодействиях - в том шсле мезкду нервной и иммунной систомами. Роль подавлящэго 5олыиинства регуляторвшх пептидов в функционировании лимфатичес-сой системы в целом, а также в сократительной и пропульсивной способности лимфососудов практически не изучена. Известны работы, в которых рассматривается участие некоторых пептидов, в регуляции сократительной активности лимфатических сосудов (Лобаче-за, 1976; Панченков и др., 1976; Хугаова, 1980-1990; Зверев, [984; Топорова, 1989; Azuma et al, 1983; Ohhashi et al.,1983; ?ortes et al., 1989; Foy et al., 1989). В последние ГОДЫ все 5олее широкое применение в практической медицине находят пептиды -иммуномодулягоры, проявляющие активность в очень низких дозах и пиленные токсического действия на организм. Представляется целесообразным изучение роли этих пептидов в регуляции функций лимфатических сосудов. Предполагается оценить вклад некоторых представителей разных групп пептидов, обладающих в той или той сте-юни иммуномодуляторкыми свойствами в механизм регуляции системы димфатических сосудов, используя метод прижизненной Сиомикроско-ши сосудов Орыкейки крыс, один из методов качественной оценки скорости лимфотока.

Цель и задачи исследования. Целью .настоящей работы было изучение регуляторных пептидов модулирующих функции лимфатических сосудов брыжейки тонкой кишки белой крысы, а также выяснение возможных механизмов их действия на сократительную активность сосудов. В соответствии < целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. В условиях' in vivo оценить эффективные концентрацш классических вазорегуляторов - норадреналииа, дофамина, серото-нина, вызывающие изменение авторитмической активности лимфатических сосудов.

2. Исследовать влияние некоторых представителей разны: груш регуляторных пептидов, обладающих в той или иной-мере им-муномодуляторными свойствами на сократительную активность лимфатических сосудов.

3. Выявить наиболее эффективные пептиды, модулирующие функции лимфатических сосудов и исследовать "роль этих пептидов i возможных механизмах регуляции сократительной активности лимфатических сосудов.

Научная новизна результатов. В работе впервые исследовано влияние некоторых ^егуляторни; пептидов на сократительную активность лимфатических сосудов брыжейки тонкой кишки белой крысы в условиях in vivo.

- Из исследованных веществ пептидной и непептидной природы обнаружены два наиболее эффективных стимулятора^ сократимости лимфатических сосудов - тиролиберин и дефенсин, действующие при минимальных концентрациях: 10 ■ - I0"14 М, а также один ингибито] сократимости лимфатических сосудов - тафцин, подавляющий сократимость при минимальных концентрациях: I0"12 - Ю-10 М. Вакн< отметить, что минимальные действующие концентрации этих пэптидо] близки или даже ниже, известных из литературы, концентраций их i плазме крови - эндогенного ТРГ: ICf -I0-IIM (Oliver et al. 1974) и тафцина: I0"6-I0-7 М (Чшенс, Веретенникова, 1980) концентрации дефенсина не известны.

- Установлено, что активирующее влияние тиролиберина на сократительную 'активность лимфатических сосудов опосредуется стимуляцией адренергических структур.

- Первотные клинические исследования тиролиберина показали ег( эффективность при лечении больных с острым панкреатитом.

2

• Впервые показано, что пептида-иммуномодуляторы (интерлейкин-1, ?имоптин и фрагменты тимозина а.^) мдгут модулировать сократительную активность лимфатических сосудов: стимулировать - в низ-

т т —а

сих концентрациях - 10 М) и угнетать -в высоких концен-

трациях (Ю-7 - Ю"5 М). о

- Получены данные об особенностях действия адреномиметиков на лимфатические сосуда в прижизненных условиях.

Теоретическое и практическое злачен и э. Полученные данные позволяют более полно представить нервные и гуморальные пути регуляции сократительной активности лимфатических сосудов, а также раскрывают механизмы действия некоторых фармакологических веществ на лимфатические сосуды. Знание изменений сократительной активности лимфатических сосудов под влиянием пептидных препаратов даэт возможность разработки новых путей целенаправленного медикаментозного воздействия при лечении различных патологически состояний лимфатической системы. Пептиды - тиролиберин, 'тафщш и дефенсин представляются кандидатами на позицию ведущих регуляторов сократительной активности'лимфатических сосудов; причем тиролиберин и тафцин выступают как физиологические антагонисты. Результаты работы используются в процессе обучения студентов IV курса кафедры физиологии человека и животных в курсе "Лимфообращение"

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на'конференции молодых ученых и специалистов КазГУ, посвященной 55-летию университета (Алма-Ата,1989), на Всесоюзной конференции "Механизмы действия медиаторов и гормонов на эффзкторные клетки (Суздаль,1989), на IV Всесоюзном симпозиуме "Венозное кровообращение и лимфообращение" (Алма-Ата, 1989), на Всесоюзном симпозиуме "Применение малых регуляторных пептидов в анестезиологии и интенсивной терапии" (Институт хирургии им.А.В.Вишневского, Москва, 1991), на международном конгрессе по ультра малым дозам (Бордо, Франция, 1990) и на заседании кафедры физиологии человека и животных Биологического факультета (ЛГУ в 1989-1991 гг.

Струк'тура и объем д.и ссертации.» Диссертация состоит из введения, обзора литература (2 главы),

■ 3

описания методов исследования, изложения, полученных результата! и их обсуждения (4 главы), а также заключения, выводов и списке использованной литературы. Работа изложена на 184 страницах машинописного текста, содержит 2 таблицы и 34 рисунка. Список литературы включает А%£ источников, из них ЮС отечествешшх и /<$0 зарубежных авторов.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены в острых опытах на 1500 белых беспородных крысах-самцах, массой 150-230 г, наркотизированных внутримышечным введением нембутала (50 мг/кг). Применялась-методика прижизненной Оиомикроскопии (Чернух и др., 1975). Объектом для исследований служили лимфатические сосуда брыжейки тонкой кишки. Регистрацию сократительной активности лимфатических сосудов осуществляли методом фотометрии, разработанном в лаборатории общей патологии микроциркуляции института общей патологии и патологической физиологии РАМН (Александров, Хугаева, 1989). Регистрация ритмичного изменения оптической плотности соответствовала частоте сокращений стенки лимфатического сосуда. Другим регистрируемым параметром был размах сократительных движений стенки сосуда, который определяли как разницу диаметра сосуда в расслабленном и сокращенном состоянии и выражали в Ж по отношению к максимальному диаметру. Диаметр сосуда измеряли с помощью окуляр-микрометра. Третьим регистрируемым параметром была активация ранее молчащих сосудов.

Действие веществ на сократительную активность лимфатических сосудов изучалось при поверхностной аппликации на сосуда брыжейки или при внутривенном введении через катетер, вставленный в бедренную вену. Контролем эф£ективности действия исследуемых веществ служило внутривенное введение или аппликация физиологического раствора в тех же объемах, что и исследуемые препараты. Все пептиды растворялись в физиологическом растворе. С целью контроля корректности разведения пептидов в диапазоне малых доз (начиная с Ю-11 М) был проведен контроль рг.зведений с использованием изотопной метки.

Каждую исследуемую концентрацию вещества исследовали, в среднем, на 10 препаратах брыжеек. Полученные данные обрабатывали методами вариационной статистики с расчетом достоверности

4

различий по критерию Стьюдонта и с использованием непарометри-ческих методов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Действие адреномиметиков на сократительные свойства лимфати-чг'/'-.их сосудов в прижизненных условиях. Вопрос о регуляции кате-холпминами и серотонином сосудистого тонуса и сократительной активности лимфатических сосудов рассматривался многими исследователями и при разных условиях. Однако, действие этих вазорогу-ляторов на сократительные свойства лимфатических сосудов в условиях прижизненной биомикроскогаш практически не изучалось. Нами было получено, что основным э<£фектом норадреналина, дофамина и серотошша, несмотря на некоторые различия в их действии, является активирующее влияние на- сократительную активность мезентериальных лимфатических сосудов крысы, независимо от спо-,е соба введения. По увеличению частоты и размаха сократительных движений стенки лимфатических сосудов активность препаратов возрастала в ряду серотонин-дофамин-норадреналин. Однако, по минимальным действующим концентрациям активность возростала в следующем порядке: дофамин (б-Ю-7 М) - серотошш (2"10~9 М) -нор-адренал1ш (0,6"Ю~У М). При этом серотошш и норадреналин активировали не только спонтанно активные, но и 40 - 60% неактивных сосудов, вовлекая их в сократительный акт. Дофамин обладал этим качеством лишь в концентрациях 6"1СГ5, 6"Ю-4 М. Длительность действия этих веществ, в среднем, составила 20-30 минут.

Механизмы действия норадреналина на сократительную активность лимфатических сосудов мы изучали, применяя агонисты и антагонисты адренорецепторовгнеспецифический а-блокатор фентоламин (1Ч0-6 М), орблокатор празозин (1-10~7 М), сц-блокатор йохим-Оин (1'10""ь М), а-агонист изопротеренол (I* 10 М), р-блокатор пропранолол (Ю-ь М). Так, экспериментальный материал показал, что все вида влияний норадреналина на сократительную активность• лимфатических сосудов осуществляется через посредство адрвноре-цепторов, что согласуется с данными литературы (Майе е1 а1., 1989), полу иными на изолированных лимфатических сосудах быка, где р-рецепторам отводится ингибирущая, а а - стимулирующая роль в адренергической регуляции сократительной активности лимфатических сосудов. Стимуляцию сокращений при предъявлении

5

с^-блокатора, можно, по-видимому, объяснить ингибированием авто регуляторного механизма обратной связи, которое осуществляете при участии пресинаптических а^-рецепторов (Allen et al., 1988 MoHale, 1990).

В этой же серии экспериментов наш изучалось влияние н сократительную активность лимфатических сосудов деривата дофами на - сальсолинола, обладающего также некоторой опиоидной актт ностыо (Соколова и др., 1990). Он, также как и предыдущие веще ства, оказывал стимулирующее влияние на сократительную актиг ность лимфатических сосудов, однако, действующие концентрат1 его были значительно ниже. Пороговой концентрацией .сальсолинолг вызывавшей увеличение частоты сокращений, являлась 0.6Ч0-12 Ь Для сальсолинола было характерно констрикторное действ!- .а та! .же активация спонтанно неактивных сосудов.

Таким образом, экспериментальный материал позволяс отметить, что лимфатические сосуды брыжейки крысы облада» высокой чувствительностью к вдреномиметическим препаратам. Р( зультаты экспериментов с агонистами и антагонистами адренореце! торов подтверждают данные литературы, что в регулящ сократительной деятельности лимфатических сосудов участвуют а ß-адренорецепгоры.

2. Влияние некоторых регуляторных пептидов на сократительн, активность лимфатических сосудов брыжейки крысы. Нами провед ряд экспериментов по изучению действия некоторых регуляторн пептидов, обладающих в той или иной степени иммуномодулирущи свойствами на, сократительную активность лимфатических сосуд брыжейки крысы.

Такие вазоактивные пептида, с разнообразным спектр физиологического воздействия, как аргинил-вазопрессин (АВП), т и его аналоги - двзглициламид-аргинил-вазопрэссин (ДГАВП дезамино-Д-аргинил-вазопресеин (ДДАВП). лизил-вазопрессин оказывали незначительное, стимулирующее влияние на сократител ную активность лимфатических сосудов в диапазоне доз от 1"10 г/кг до I!10"--г/кг при внутривенном введении и при аппликации концентрациях от Ю-* до 1СГ5 М.Наиболее активным среди вещее этой группы был ДДАВП. Следует отметить, что при внутривенв введении препараты этой группы обладали более выраженным стш лирующим действием на сократимость мезентериальных лимфатическ

юсудов, при этом увеличивалась длительность эффекта и наблюдаюсь возрастание частоты сокращений;, и размаха сократительных цзикений стенки сосуда. Подобным же действием на сократимость тимфатических сосудов обладал окситоцин в дозах I'I0~I0-I'I0-4 Укг. Так, при внутривенном введении окситоцина х> дозе I'IO-9 .VKr наблюдалось увеличение частоты и размаха сократительных овижений стенки сосуда на 22% и 20%.соответственно, лизил-вазо-прессина - на 20% обоих параметров, АВП - на 24% и 255!, ДГАВП -на 29% и 25%, ДЦАВП - на 39% частоты и 30% размаха сократительных движений стенки сосудов (п=ю, во всех случаях). Высокие дозы этих препаратов (I•10~6-1"10~4 г/кг) вызывали также изменение проницаемости сопутствующихокровеносных микрососудов, замедление скорости кровотока и постепенное торможение сократимости лимфатических сосудов.

Сравнительно высокие эффективные концентрации вещества Р: при аппликации - 0,8'Х0"9 - 0,8"10~4 M и при внутривенном введении - I'I0~6-I'T0~'l г/кг, вызывали довольно значительное увеличение частоты сокращений лимфатических сосудов (до 60%), но при этом размах сократительных движений стенки сосуда снижался, в среднем, на 18%. В высоких концентрациях (O.Ö'IO-4 и 0,8'Ю-3 М) вещество Р вызывало констрикцшо лимфатических сосудов на 33% (п=13), исчезающую после отмывки физиологическим раствором. При внутривенном введении констрикторный эффект был менее выражен и позже развивался. При более низких концентрациях (<0,8'I0-5 М) констрикторный эффект не наблюдался, . а наоборот, наряду с 'уменьшением размаха сократительных движений стенки сосуда, сохранялся максимальный диаметр сосуда в расслабленном состоянии.

Таким образом, физиологически активные вещества с широким спектром физиологического действия - вазопрессин и окситоцин, а также вещество Р являются эффективно действующими субстанциями в отношении микроциркуляторного русла, в том числе и лимфатической системы брыжейки крысы. Вазопрессин и его аналоги и окситоцин оказывают стимулирующее действие на частоту и размах сократительных движений стешш лимфатических сосудов, тогда как вещество Р оказывает положительный хронотропный и отрицательный инотропный г 5ект на лимфатические сосуда.

7

3. Пептиды-иммуномодуляторы - модуляторы сократительно? активности мезентериальных лимфатических сосудов крнсы. Известно, что система лимфатических сосудов является носителем г проводником факторов гуморального и клеточного иммунитета. Е этой связи наибольший интерес для исследований представляло изучение влияния пептидов-иммуномодуляторов на сократительную активность лимфатических сосудов. Так, установлено, что пептиды-иммуномодуляторы: интерлейкин-1, тимоптин и три фрагмента тимо-зина с^ оказывают модулирующее действие и на сократительную, активность лимфатических сосудов, т.е. в низких концентрациям

ТО О

(10 -10 а М) они стимулируют активность сосудов, а в высокш (10~7-10_® М) - приводят к слабому расширению сосуда и угнетении сократимости. Надо отметить, что действие пептидов этой группь носило локальный характер, т.е. эффект стимуляции распостранялс? на участок исс?л§дуемого сосуда или сосуд в целом, не затрагивая сосудистое русло всей брыжейки и не вызывая активности спонтаннс неактивных сосудов.

Из исследованных пептидов более активным оказался фрагмент тимозина а1 19-23, наиболее близко расположенный к активному центру молекулы, затем в порядке уменьшения эффективности можнс назвать фрагменты 13-20, 17-20, тимоптин и интерлейкин-1.

Обращает на себя внимание, что минимальные эффективные

—ТТ -12

концентрации этих пептидов 10 -10 М, т.е. приближаются * физиологическим концентрациям, характерным для регуляторнш пептидов этого типа. Можно предполагать, что некоторые ис обнаруженных эффектов могут иметь место в организме после ограниченного протеолиза молекул-предшественников (сМрепв, 1983), обеспечивая оперативную локальную регуляцию функщй лимфатических сосудов, применительно к изменениям функционально! нагрузки. •

Сильным подавляющим действием на сократительную активное« лимфатических сосудов обладал тафцин - эффективные концентрации его от 2"Ю-12-2*10-4 М. При аппликации его наблюдала« вазодилятация и' одновременное подавление спонтанной активности сосуда, в некоторых случаях необратимое. На рис. I. приведет примеры этой серии. Как видно из рисунка, тафцин во всех случая* оказывал сосудорасширительное действие и подавление сократимоста сосудов. Эти данные согласуются с известными из . литературь 'фактами о миотропном действии тафцина на гладкие мышцы, а также

10.02 ПМ

б IIта гпишвдшгш.

т 2 пМ

^ 200 пМ I

V '

Рис. I. Тормозное действие тафцина на сократительную

активность лимфатических сосудов брыжейки, а - аппликация тафцина в концентрации 0 - аппликация тафцина в концентрации 2* Ю-9 М; в - аппликация тафцина в концентрации 2"10~7 М; г контроль (аппликация физиологического раствора). Стрелка вверх - момент аппликации препарата. Калибровка 10 с.

способности тафцина регулировать. соотношение универсальных внутриклеточных посредников возбудимости, а этот аспект его действия обязательно связан с. функционированием пейсмекэрных образований (Чипенс и др., 1980).

Следует отметить, что тафцин - единственный из рассмотренных наш пептидов обладает только ингибирувдим действием на сократительную активность лимфатических сосудов во всем диапазоне действувдих концентраций.

Весьма выраженным действием на сократительную активность лимфатических сосудов брыжейки обладал дефенсин - неферментный катионшй пептид из нэйтрофилов, обладающий сильной антимикробной активностью и способностью увеличивать проницаемость клеточных мембран и сосудистыХ|стенок, который выявляется в плазме при возникновении патологического процесса (Кокряков, 1988). Действие дефенсина проявлялось в высоких разведениях препарата и

Лвло продолжительность от 3-х минут до Д-х часов. При аппликации эффективные концентрации вещества составили от 2.5'Ю-15 М

—тт -Т?

до 2.5-10 11 М, а дозы при внутривенном введении - ПО г/кг

- 1-Ю"10 г/кг. Независимо от способа введения действующие концентрации дефенсина приводили к увеличению частоты сокращения спонтанно активных сосудов в 2-3 раза и запуску спонтанно неактивных сосудов. Возрастал также размах сократительных движении стенки сосуда примерно на 20Ж по сравнению с нормой. При концентрациях выше 2.5"Ю-11 М не только проявляется стимулирующее действие препарата на лимфатические сосуды, но становятся очевидными и изменения в проницаемости сопутствующих кровеносны? сосудов - появляются участки кровоизлияния.

4.' Тиролиберин - один из наиболее эффективных стимуляторо; сократительной активности лимфатических сосудов. Среди изученные нами веществ пептидной и непептидной природа наиболее мощньи действием на сократительную активность лимфатических сосудо! обладал тиротропин-рилизинг-гормон - тиролиберин (ТРГ). Эффективные концентрации вещества при аппликации составили 2.8'10~1Е

- 2.8"Ю-4 М, а дозы при внутривенном введении - от г/ю до 1'10~5 г/кг. Основным эффектом ТРГ, независимо ■ от способ! введения и концентрации, было увеличение частоты сокращений, I среднем, в 2.5-3 раза. Ответ возникал через 10-30 с посл( аппликации или через 2-3 минуты после внутривенного введения I длился от 1.5 минут до 3-х часов. Типичный эффект тиролибериш на сократимость лимфатических сосудов брыжейки крысы показан ш

■рисунке 2. В данном опыте ТРГ в концентрации 2.8'Ю"14 М ] течение примерно 40 минут индуцировал и поддерживал усиленна! ритм частоты сокращений сосуда. Имел место почти .троекратны! прирост. Как правило эффект ТРГ развивался в следуюце! последовательности: на предъявление вещества сосуд отвечал первоначальным расширением просвета сосуда. с частыми и мелким! сокращениями стенок (см. рис.26), этот период длился в разны: опытах от 10 до 70 секунд. Вслед за этим кратковременно расширением сосуда и первичной "гиперактивацией" сосудисто) стенки1 просходшю активное сужение просвета сосуда с одновремен 1шм нарастанием мощности и особенно частоты сокращений сосудистой стенки. Длительность эффекта ТРГ при различных концентрация; составляла от 1.5 минут до 3-х часов.

[ш^ви*«!!«;.

.кюшшнш.^

Рис. 2. Действие ТРГ (2.8"1(Г*4 М) на сократительную активность лимфатических сосудов брыжейки крысы, а - контроль (аппликация физиологического раствора); 0 - 1-4 минуты действия ТРГ; в - 5-9 минуты; г - 41-45 минуты действия ТРГ, Стрелка вверх - 'момент аппликации ТРГ. Калибровка Юс'.

Особенно демонстративно действие ТРГ проявлялось на сосудах •исходно спонтанно неактивных. ТРГ был способен вызывать сокращения сосуда и поддерживать на достаточно высоком уровне в течение нескольких десятков минут.

Действие тиролиберина на сократительную активность лимфатических сосудов было изучено нами и на другом объекте - изолированном лимфангионе брыжейки быка. Работа проводилась на кафедре физиологии Ленинградского санитарно-гигиенического медицинского института. Электрическая и сократительная активность гладкомы-шечных клеток лимфатических сосудов регистрировалась с помощью методики модифицированного одиночного сахарозного мостика (Лобов. 1984). Было установлено, что " лимфатические сосуды брыжейки быка, также как и лимфатические сосуда брыжейки крысы высокочувствительны к действию тиролиберина. При этом диапазон действующих концентраций ТРГ был расширен до 1'10-18 М. На рис. 3. представлен опыт действия ТРГ в концентрации 1'10~17 М. Как видно из рисунка после включения протока с ТРГ частота сокращений возросла в 4 рааа.

Таким образом, столь мощный сократительный эффект, наблюдаемый

15омг 1 50 мг

^-*--^----^ I 5 мв ~5С9К

Рис. 3. Действие ТРГ (1"10_17 М) на сократительную (А,а) и электрическую (Б,б) активность изолированных лимфатических сосудов брыжейки Оыка I - 1-12 минуты действия ТРГ; I* - 7-9 минуты действия ТРГ. Стрелка вверх - включение протока ТРГ, стрелка вниз - включение п^ртока с раствором КреСса.

нами как на лимфатических сосудах брыжейки крысы, так и на лимфатических сосудах брыжейки быка при действии низких концентраций ТРГ, позволяет предполагать, что это имеет место в норме I отражает истинный уровень действующих концентраций 'в крови, который способен модулировать сократительную функцю лимфатических сосудов в зависимости от функционального состоянш организма, увеличивая объем и скорость циркулирующей лимфы з; счет увеличения сократительной активности сокращающихся сосудо1 и вызывая активность спонтанно неактивных сосудов.

В связи с тем, что тиролиберин оказался одним из наиболе! мощных стимуляторов сократительной активности лимфатически; сосудов мы попыталисо исследовать возможные механизмы действие ТРГ на лимфатические сосуды. Для этого была предпринята серия < животными, которым с целью селективной деструкции дофаминсодер-жащих нейронов вводился нейротоксин - б-гидроксидофамин (60ВДА! Как показали результаты этой серии тиролиберин не оказыва. стимулирующего влияния на сократимость лимфатических сосудо] десимпатиз^рованных животных. Слбдовательно, были Ъсноваши считать, что стимулирующее действие- ТРГ на сократимоси • лимфатических сосудов связано с активацией адренореактивны; структур. Поэтому была поставлена серия, экспериментов п< изучению возможного участия ТРГ в активации адренорецепторо]

шмфатических сосудов с применением агонистов и антагонистов? |дренорецепторов. Так, эксперименты с применением р-агониста -[зопретеренола и р-антагониста - пропранолола показали, что симулирующее действие тиролиберина на сократительную активность шмфатических сосудов реализуется, по-видимому, Сез участия 1-рецепторов. Неспецифический а-Олокатор - фентоламин (1'1СГ6М), I также с^-Олокатор - празозин (1"1СГР М) полностью .снимали )еакцию увеличения частоты сокращений в ответ на применение ТРГ. [охимбин - селективный о^-антагонист приводил к дополнительной,. :тимуляцш частоты сокращений сосудов, активированных ТРР. Эти гезультаты, вероятно, свидетельствуют об активной роли а-рецеп-'оров в реализации стимулирующего эффекта ТРГ. Мы полагаем, что фирост стимулирующего эффекта ТРГ при с^-блокаде, возможно, :видетельствует о пресинаптическом действии ТРГ. В.Е.Клуша, 1984 'поминает о том, что ТРГ может понижать чувствительность авторе-(епторов к биогенным аминам и этим снимая отрицательную обратную :вязь стимулировать выброс биогенных , аминов. Доказательства 'частия . авторегулятйрного механизма обратной связи, через фесинаптическш с^-рецепторы, в регуляции сократительной ¡ктивности лимфатических сосудов приводятся МоНа1е (НсНа1е, 990).

Таким образом, наши данные полученные в результате изучения юйствия р- и а-агонистов и антагонистов, а также эксперименты 1а десимпатизированных животных позволяют считать, что точкой филожения действия ТРГ в целом организме является выброс 1едиатора, что вполне согласуется с существующими представления-и (Долженко, Комиссаров, 1982; Клуша, 1984; Тиок ег а1., 1979), ю для лимфатических сосудов впервые показано наш.

И в заключение, обобщая полученные результаты, следует :казать, что регуляторные пептиды как при внутривенном введении, :ак и при аппликации на брыжейку способны оказывать воздействие ¡а сократительную функцию лимфатических сосудов крысы. )днако, они значительно различаются по эффективным концентрациям [ характеру действия. Действующие концентрации наиболее активных ¡з них - ТРГ, .тафцина и дефенсина - значительно ниже, чем у [звестных вазоактивных препаратов, как катехоламины. Низкие )ффективные концентрации пептидов, способные стимулировать юкратительную функцию ^лимфатических сосудов и, по-видимому, 'силивакщие лимфоток, особенно привлекают тем, что не

затрагивают при этом функций многих других систем. Особенно очевидно вто в случае с ТРГ и дефенсином, которые сохраняют свои стимулирующие свойства при таких концентрациях и дозах, которые судя по известным литературным данным, не вызывают другга физиологических эффектов. Следовательно, такие пептиды как ТРГ, дефенсин и тафцин, представляются кандидатами на позицию ведущих регуляторов сократительной активности, лимфатических сосудов. Первичные клинические исследования ТРГ показали эффективное!! его для лечения болезней, связанных со скоростью тока лимфы (i частности, при лечении острого панкреатита).

ВЫВОДЫ

,' I. Известные вазоактивные биоамины - норадреналин, дофамгп и серотонин - стимулируют сократительную активност] лимфатических сосудов брыжейки интактшх крыс как npi аппликации, так и при внутривенном введении. Действш норадреналина на сократимость лимфатических сосудов был< обратимым, однако при концентрациях ICf5-I0~3 М спонтанна; активность угнеталась за счет констрикторного действия ш лимфатические сосуды. Сальсолинол, также обладает активирующи влиянием на моторику лимфатических сосудов брыжейки. Действующи! концентрации его (0.6"ICfI2-0.6'ICf4 М - при аппликации : j-.-jq-IQ_j.jq-4 г/кг _ jjpjj внутривенном введении) значительн ниже, чем у норадреналина и дофамина.

2. Аргинил-вазопрессин и его аналоги - дезглициламид арпшил-вазопрессин и дезамшю-Б-аргинил-вазопрессин, а такж лизил-вазопрессин и окситоцин - оказывают незначительно стимулирующее влияние сократительную активность лимфатически сосудов. Наиболее эффективным из пептидов этой группы являете дезамино-ц-аргинил-вазопрессин.

3. Положительный хронотропный и отрицательный инотропны эффект оказывает на лимфатические сосуды брыжейки вещество Р концентрациях 8'1СГ9-8'1СГ3 М.

4. В зависимости от концентрации оказывают стимулирующе или тормозное действие на сократительную активност лимфатических сосудов пептида-шмуномодуляторы: интерлейкин-1 тчоптин и фрагменты тимозина ají И0С-2Х58, ИОС-4276, «00-4277 Низкио концентрации этих пептидов (I0~I2-I0-8 М) увеличиван размах сократительных движений стенки сосуда и частот

14

-7 -R *

сокращений , в то врамя как высокие концентрации (10 -10 J М)' угнетают активность.

5. Выявлено, что регулягорные пептиды - ТРГ и дефенсин, зтимулируют сократимость мезенториальных лимфатических сосудов в концентрациях Х0_16-Ю"-Г4 М; а тафцин, напротив, подавляет сократимость в концентрациях I0~I2-I0~4 Высокочувствительны к тиролиберину и гладкомышечные клетки лимфангионов - быка. Гиролиберин вызывает активацию сокращений изолированных лимфангионов при Ю-*8 М. 0 „

6. Уровень концентраций ТРГ и тафцина, модулирующих в наших опытах сократительную активность лимфатических сосудов близок или ниже- такового, определяемых по литературным данным, в жидкостях организма. Это позволяет отнести ТРГ и тафцин к категории ведущих гуморальных регуляторов лимфотока сосудов брыжейки.

7. Стимулирующее действие тиролиберина опосредуется активацией адренергических структур.

8. . Тиролиберин' является перспективным препаратом для разработки новых сйособов лечения болезней, связанных со скоростью тока лимфы. Первичные клинические исследования показали его эффективность при остром панкреатите.

Список работ, опубликованных по теме диссертации. ■

1. Санжиева Л.Ц., Лелекова Т.В. ТРГ - стимулятор сократительной активности лимфатических сосудов. // Тез.докл.конф.мол. ученых и специалистов Казахского ГУ, посвящ.55-летию универ-та.

- Алма-Ата, - 1989. - С.18Г.

2. Лелекова Т.В., Санжиева Л.Ц., Ашмарин И.П. Действие регуляторных пептидов-иммуномодуляторов на сократимость лимфатических сосудов брыжейки красы. // Тез.докл.Всесоюзн.конф. "Механизмы действия медиаторов и гормонов на эффекторные клетки.

- Суздаль. - 1989. - C.I02.

3. Лелекова Т.В., Санжиева Л.Ц., Ашмарин И.П. Регуляторные пептиды - стимуляторы сократительной активности лимфатических сосудов. // Тез.докл.IV Всес.симпоз."Венозное кровообращение и лимфообращение". - Алма-Ата. - 1989. - 4.2. - С.13-14.

4. Lelekova T.V., Sanzhisva b.Ts., Asiinarin I.P. Thyrotrophin- releasing, hormone - a powerful stimulator of lymphatics vessel contraction in rat mesentery.//Biomed.scienoe.

-°1990. -7.1. - N.1. - P.99

5. Ашмарин И.П., Шиманко И.И., Лелекова Т.В., Лимарев В.М. Санжиева Л.Ц. Применение регуляторного пептида (РП) тиролиберинг в качестве лимфостимулятора в эксперименте и клинике. // Мат, Всесоюз.симп. "Применение малых регуляторных пептидов I анестезиологии и интенсивной терапии". - М. - 1991. - С.6-8.

6. Aslunarin I.P., Lelekova T.Y., Sanzliiera L.Ts. The effects of вогае regulatory peptides in femtomolar oonoentrationE of lymphatio vessels (LYs). // In: Ultra low closes (Ed.toj C.Doutremepuioh). - Taylor & Franois. - 1991. - P.11-16.

2 A i < ¡CO