Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ПЕКТОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ CLOSTRIDIUM PELSINEUM ШТ.5, МАЦЕРИРУЮЩИЕ СТЕБЛИ ЛЬНА

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "ПЕКТОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ CLOSTRIDIUM PELSINEUM ШТ.5, МАЦЕРИРУЮЩИЕ СТЕБЛИ ЛЬНА"

АКАДЕМИЯ НАУК СССР ордена ЛЕНИНА ИНСТИТУТ ШСГСИШШ «м. А. Н. БАХА

На правах рукппясв

Л.С, Каожтонова

ПБКТОЛИТИЧБСКИЕ ¿КРИЕНТЫ СШЗТВХРПШ УКЬБИГШМ аг.5, МАЩТИРШМЕ СТЕБЛИ ЛЬНА

(Специальность - биологическая химия)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1973

дкдомиа Hint gücp.

OPZBHA ШИШ ИЫСЛГГП ООШШ ш. Д . Я. ЕШ

На врвваг домжам

Х.С. Нападаем,

ФВРжнты дляурттд miTHWI

(Свадоя&аовть SM - 4воптчваки пит)

Ci.OOJDM. .

квropefepu

MMWpTlKT t НА МИЖММ JVHOi ОТ «SM«

нядшп бявяогжчвшах мук

А- 2Ч?>>5 . cv^i

U ося м - 1973

Рвбота мшошев* в мборшорая ферментных ареваратоа Оржаиа 1вашш Инотатута баохшш ам. А.Н.Бях» AU ООСР вся рувомдоаои доктор* Оаошптоых ваув, профессоре Р.В. ФВНШООВОЙ Я шла..жат» бношгжчеемх муш, от а рее го •адчаого оотрудня» РОДИОНОВСЙ i.A.

Офяаминне оппоавнтн: доктор сельскохозяйственных наук МВТЛШЯШН I.B. . дштор баоюгвчесхк наук ГР1ЧВВА U.M.

На офтмммА отвыв работа яадрааяева в ал от ату г Иавробяомлш AÖ СССР. \\ .V

Автореферат мевсюя ¡Л&фЛ^ ' ., 1978 г.

Зцт жвссврташи соотоатеа " ~ uJirbfSsJ? 1973 г. шж lamvnu Ученого вм«т« Срдвяа Явная« Ияотагута ваохашаа IM. А.Н.Баха АН СССГ (Моехм В-71, ЯенанекаЯ вросавжт, 33).

а двооартецввЯ можно ояиаяоматьсд • бвбжвот*«® Инотвгута

гтт» сагетАръ, жжндмет бвожогпесхах наук

(Н.И.Дьячков) -

В В ВДВ н и в-

А

■ , . ■ - ... ■■ • . /г • ■■'

* Культуре дьоа является соецкалиэвроваяиов отрамью : се »с* о го хоэлйства Белоруссвш, которая производит около 23% товарного обора волокна в стран«. ■''"'■

.Таюмюесяоа ¡.вьяяиое вокжво получает в процессе кочкх стебле! льна. Пряночяе шла «ярооргалшэаа мацерируетт корову» паре нишу, разрушая о поиощыо □вктол»т«черк«х фвр«*вптов

вектяаовыв вецветва, еоадквяпаве ^бяяи« пучк* с ожружа'гсяшя

' --¡у : ■ > « г-- ■.-..■; . •; ? •->

тяаяяыя. .;: . : '

С вымачаваених в оровзводстоепнихусжовяяхстебжвй дьвв : .а £0СР Завесско! Н*Ф» (1955) Сала виделена'анаэробная в3а»тв- * рая аоаггЮШя г«1в1п«ш вт.б;1Эта культура отлвчалась высокой споообяостью иацврвровать ^твЗлк льяа. Прживнеяаееа прааочкв льна сокрашяо продолхвтельяость иацерацжя, вовыша- -.во выход ж качество волокна. ■.■■-:. .

Поскольку процесс маце ре для вавясвг от состава ■ струк- ■ туры мвялеточного ветства среяяявнхпластяяов раствтельных тканей в .»взываетсякомплексе* Ферментов рвзлачяых някроорга-пвзмов, раэвжваппяхея ва ст "1лях яма. яэучепжв состава сре-•дяяяцх плаотяяск-а расщеплявши ах ферментов я в метел тем о о-нови им путем,. когорнЙ помет правеете к вопманюо процесса *а-лцарациа..^ ' „ '-, ■

: : В поелвднве годы.Сим проведены работы о» получен*» выое-яоочияввнн! пектолятвчаскях Ферментов в выявлению ах способное!» мигрировать растятельвыеткаяв.Вчастяостя.внм ооаа-ааяо, что очиченине препарат» вндо-оочгахактуронаяи (•ядо-ОГ)

■ - D - .-v„

ШшВрЯруст паренхимы» ткяна рестенкй (oasukl •t»i;,>1967j¡; "■■■■.f'tvfiíV^^'iwjeeeBwejaiíirti'-ee'TrtetMk»; 1971) вояу~ : ' чш яз плесневых rptOoB Aspergiilu« гомогенную пежттн-траяо- ; емжаяаэу (ТТГЭЧ сяэцифЕчнул ивыескоэтервфйшфовлвноЯ иол»----Жую пвктанв ш способною вацяряровать ияогке раэтвтвжьныэ

т*ааа. . .л ■ ' .'ЛР-'-'Л '. ■■■":■.

В* ваетмйвр'время установлено,: что бахтерак ве образует V ферментов* расдеоляпцх глхжозмГые смаа пола остью втерв^я-* "г .Шфоваьлойвоаекулн поктина, - ягчжметилгедажтуроваэиЧПМП ," и п вжт як-тран z-з димвпазы (ПТЭ) . - , " * :

-ь;Соояв:огяр«т«я Аг-биршеймом (Alt) в г tóelo, 19бо) трвно-^-.^ эжжмяяат 1вного путк растаслюнщ? гюхтлдовых.ле;веств0ыло убь- -• дателып водтввртдово^.что-у бактв-рнй главную рель вметябо- " » • imaae o^xi ваяв«* вэиеетв1 «грея« аетгат-траяс-вжюишазыДПКТЗ) ' специф|чны» к наэ?врафяциров«шр<Г чвога пвктява или * аекто-• ' В0Й ЯШС10тв-' (»«Л^ ТЯ№в&ву19+0> st«vr'*t4 Moren, 19б2)^ " ; : 'У анаэробны* пвктяяраецвпяяишт б»т*рж& 1Йякто*»т*чвсгг? ^ ' -фермевтч почтя не яэучентл.' ■■ —, .■'■

гЛя> ' Поэтому цель Heweí> работы-состоял» р гои^ чтоун «эучятвГ ¡

tíoife аетааьио'пакгояиячвекяе.фвривят№ проязвоезтвеивого • • ' пиния ci? f«l«ls»n», найтя, опти*а*БПые услоечя «х бйоеяяте- ■ la, ^получ ть дтж ферменты в выесисвочжгаенйом соотаящя» oxft- ; - v трактер«эовать кх основные свойства я выявить елоообвоеть ферментов мвооряровагь стебля льна« ■ : "

Г!" * - -Z

i/илтетды И МЕТОДЫ

. В качестве продуфнтапехтохжтячесхях ферментов вржп-;адм анаэробнуюбажтерЕЮ С1ов1г1<Иив Г«1а1п«ия шт.:.; 5» Ср®" -дд разнообразных пектянораахагаидях мжкроорганязмов втот

штамм оОяадах нажбоямеЯ способностью иацеряроватьоаренхя»-' .:• вне- ткан я стеблей хьйв." ' •у- ^ "

' . Лутеи расовва суспапзаж спор на тверд7ю крахма1о~«мж»~ : аадую сред? методоы преивдьныхраэведеняа я посаедугвиго жы-.раджванял бактерия в макроаяавростатах со »ег"ойккв," првл»о- " ■ «оняов" Дудой (1966)* подучены кохояк1 часто* г^лътуры байте-»"

' ряя я оахсаны ее морфологические свойства. \ . Кухьтуру бактаряЯ выраожвам па разработанной ваш среде сявдуюцвго состава (г^Ь.лактовл - 20;'пвжтжн'свввжовжч-Ч

. ■ „к

ГН2Р04 -.3, reel - 1, 5, дроыаво* акстредт'

НИЙ - 10, (KH44,jHP04 - 4i tgBPO^- 7, 1USO4 - o,25,"-WSQ^ -- оявдн.г овлоу -

-J0»5, асхорйеновая'кясл10та - 0,5.ь ' - i^-1 > ' ~ . 4 • -Ъ aei(вторых oflOTdj: выраашваажв провой« яа среда e ци-"вши стебхямж ж неснояьк9 вждояаианеняоЯ. мжяервхьновсред» Betepa (1935). Еантеряя вцращяваля в дятрових жожбах ЯП сятжмтроаих бутижях в анаэробных условжях ара температур» 37 °С. Продолжив Л ЬП ОСТЬ вы'ращиай ЖЯбЗ час» .J' /Л. г-

*"Прж жзученжж ро«ж отдельных компонентов пттатвмлоЗ*срв7

- *ы:в-бжоежнтеае пежтоджткчесжжх ферментов d« f«i»ln«i2a' до- . -яеаяжоов:вяаянже некоторых простых сахаровна бяоекятв» фер-

центов, вежтжна,■,■добавхяавого в качеотве жнхужтора, а тысг» л жя1яяже *он1мйтрааа1двухвашв|евйого фосфата аммовяя,Кито- :

- pitt охазаюл^хупика ясточияхом вворгаяжчесжогоаяотаяфоо-Фора. - "-"' ' -■ ' ••.. "'• ■■'.v.- ' '

HcttTps^Kr* Kli-Cl ; шштй Л, /ач'гД0?

t 4 J

- г -

Для полу пеняя фильтрата культура*содержание колб цзн-^ трв^угяроваляпря 3000 « >« дяаялзсвадя проты д*«илларовал~,-^ '„;--■ - ной воды в течеяеедвух суток. В^ пржготовлепной таиия сйра- . -

зш бесклеточяо* фяяьтрате определяли вхтдвность шстоххтя- ' :"десмх. фврвавв»»*^^ , ■ .. ■ '

- , ^ : Дхя пожучепяя формептного препарата вндп кепктаяы раз- ' . , яжчяыв ; едосовы, ооаждешш белка «з кухьтуралькоЯ жлдзоста;- ' •'у.;Г" .

осаадвня5 четырь>1я;обг««а*« отяяового спирта, двумя объема**)-7 / ~ -■V .язоаропвловогоТспярга, двуыя обгемшиссеттояо я "сернокислым, - *,' '* * - взаоаяем вря погпоа васыавВЕЯ.-.НаявольсяЯ выход Фермента в -вышвньтеЯоотерей актявност я/бызвряоо «ученая препарата оел- ^ ждаяявм;»тяяовым спмртом. Этотепособ осажден «л и вряяаяял»' •

■ л" д1я:получвяжя ферментного препарата на оврвоЯ стадия очяст-

ы* Колячеотво белка определял* по методу Лоуря. Перед опре- •• % . двмяяеи фериеятатявпой актявяостя препарат дяалазоваля оро-: > т*в фго«иллироа аяно{Гво;ш в' течение ?далвняя •;•.••' >

. . от.гнвго^яояо»>метадл6в... ■ ' -. . ~.

С^Лрмродв ивцвряруюиих фермаятов ж,соотав июждеточвого. -Х^цёства средня на хояастян ок разных растительных тяавпЯ -

' аедостаточяоясны. ^«тератзре имеются даяние;о то*», что »>. ' соетав средявйых пвастннж наряду о'метяловкм &£яро»поляга+- " . -дажтурововой кколоты входят:гешодэллюлоэы (арабах, галажтан, - 'г.--. 1 ~ " .ксялан£ -глгааны ягбел», ГТоэтому,мы олреде лял ч наряду¡с-г "Х/'р^'.^ ";, ^ актяваостьп-нектолятяческих,ферментов,-'певтянэстеразы (Пэ), о-'"?3* ;. .;■■ . оояагалалтуровазы (ПГ), пектвт-траке-эламяяазыЛПКТЭ) .я мг»-*/. "С

• ' цэряругаей сяособностя-алгивность гемяао/.яолаз (арабйнлзн,^:; ;-7

'гвладтачазц к-кмдечпзн).." гпллюдаз' (С^ я Сд'ферментов) и прс 1 . У " г'"

Ч•- —

.у»

,. - ■ .. . .."л I I ' + >

~ ' . те««. СуОстратамажхя оаредела.чмгаглтохжтачэс*вх ферментов !

V е.. " -ciyxaia: пехтовая хвохота (ОлеЛаехвв аввод im. ревхтыов), _'-'ае содврхадад метокавхышх групп; пвхтхя еввхховвчный О t^-* штокеххьянх груав, разяым 2t, в стапавы» втврядон

Л кацхв 15í; немацк.жЛ пежтал schaoharí* (KUnohaa), содерхшцв

>' • - ивтмсахьаых груав а иящвВ степень атаряфжхвцм

83¡j£¡ B»tmt Ванжа ÍS9Í 8терафшада1)| оо17чеаниХ вутм« ив'тк~ .1дрсванхяпвктово» к«еsota по методу Морохдя, Бе1эра*1вв-1

■-■ ' ■ -■.'..■.' ■ ■ -' - .'-т. - . .Т."-.;- -■■■. Î - ;

; ; ка (1933) i Кореях* в Л., uta (1934). Два оаредвванвя гемаце»-: лсиа ирвмеиалв'«ра0аа аз севкловвчяогожока, ra'xAT.ïaa ■> м- : мян ллкяа, кевжая вэ Еивлачноа солоны, дхя оэОтдаем - обе»-хнренчое хлопковое воютчо, КПД со степенью вохгаеряаяшиг 34?, "а^етепввьх>ааш«ен*ябб(Э,дхя промаказы -"««ею. * "

д>я оарв^вженяя ежтавноств авкти!»стврв8ы (ГТЭ) всполъз»> . валя ывтод Квртвда "(1в^ам,1951)7 "осао1давн1Й м в»прары»-аш тжтроэанав о, 1 в Ваон карйсассаиных групп, осво<3оадяй>- г мхвя ара двветвав фермеята'ра выеокоэтврв^вцвровайЯыЯ Рва- . - тем. Дхя обнвруюная актавноста ТО веоодь'эоважя так»" "пвавч- f -

Выв" ^вгод Джягяя" (musí*.«ttí.;,'1955); " \ " .

Ныгив помгв£«ктуровван (ПГ), гмдрохвтЕЧесхв рвсч»- ' ai£I)apftc(-l(4 ГЯХЖОВЯДНЦО СВЯЗИ neXTOBOt"XKCXOTUl мктклв,

определял* ао споеобноста ку»ьтуражьао8 яхдксств'а првсаратм ферма at os ope pH 5снхжать влгкостьрвствороаоогхасао мвт(ь-ху Вхтиера, опкеаняого Родкояовой H.A. x sp, в>вв* - ' ^

хэтевать сохврхш(кв родупхруояях >бявотвгв идхуб*джовво8 СКВ—, са, опрвл9дявмьи двнатроса»ац»»ояы>» мят од ом Maxxepe (HU1«í, :

Пектат-трвяс-йммянаэу (ТМТЭ) опроцеыии, пряиняя методы Альбвроейма Оаъ«£оЬ«1ш,19бо) л Иьстоиа (¿«лье, 19«о)»г ■■. основанные ла язйврея»» с псмсхд»» спектрофотометре венвешпев-. вых продуктов расвепявмя оектавой кислоты, вогласвпзах оввт " пра235 ви * отрашовяых совдкненвЯ, образухяяхся при реахца» Ввснавваых ш йвнасшпенчых ояятогвкштурояядов о т»обар<Звту£х>-»ой кксл/утоЯ. Количество схрааеяпы1 веществ хэиэриля во погло-аряав «« света прж 653 ю» я 510 ни. :.

ч Сооаойво«* фёраентоъ мац&ртровать ткан» шумней карго--фожя жстеблвйлытопредезддк по методу, разработанное? Все-оовааым »нстятутои сеяьскохоэяймввяяой «аяроб«о*огк» (1962)« 'й Ьргано1виг»<ж*. •: - : V ■ "'■'■".'„'"■ ' ".*..'V ■

,-Г-О геиядамютавшй еатяьнест» суд»*» по способном» фер~'(; - мента раещважмгьгвшяявивюзи (хсяяаи, араба»; гавактап) да 'рвдуцарутои вея«« (■Ш.«г, 1951)? '; . _ .*"" V. ^ ЛМ' -V ** Опрвдеяеяяв даякпкояятетеской аямачосгя проводия дяуыя >: мвтодакя:по осахарввапдаму.действ»» я» шщвм волокно а ео

р*эхлх&£С!вцг действ»» иа карбалсвмвтил*юю«у (Ропояов* « : хр.; 1966)»..-., • . , . "./ ^

\ Содеряаняв врогеаэн опрвдвляли иетодои Аисояа а модк(»--«шиа Лвтровой ИХ. » . Вявшяайтв И.И» (19б6>.

' Дхя.оареАвяеняк ахтшяостл пектоитячвскм фвривнтов <5н-■г** водовра»и оптю»аяьрнв уояовжя, -.'коясрптрассия фвршвята,

стбстрата, содвртавйе (Явутваявптннк яаткоиов и определенное ; .-/энач-йив :; Г: ■ / Механизш-двйггтмия ГКТЭ « ПГ характеризовал» двумз мстояя-

• ... ; ■. - & - ..„ ■ ; . ■ ■

' " ... 1) путем сраъяонвя у из визе пая вяягостя растворв пвхт»-> »о* кяодота а^гчубшш еэ 'раоовплвйяя (опредедяемогопо вара-; огаявв рвдусяруозях.групп, изиврлшнх.с помочы) ддяжтросадт-:-цалового ветода), в кнкубагчоииой cueca в стаадартяых усгохадг «pea б *zn» 10 ман, 15 мяя, 30 иян, 1 чао я 24 чае* пряЭТ^Ь* Y 2)с пс«ски>п пат ода хромат огребла на букагедаучад* /дрста раетапяенля пактов ой хвслоти через опрэдзлекяив орсжл '• игауйашж. реакционно* cueoa.Y ;г 4 ■ v Y^'^'Y1 ; ■

РаздегвнЕв-и очжж1у.ШТЭ,и;ОТ' сюуп9ствля*«1»тос0а Éo--вмбтнвоЗ хроматографа* на кояонке с карбеасш»тяхц»яхзх»*.> scZ (ККЦ) я гегь-Сллътрсиизй чэрээ свфадекс .0-200¿ . . -. Иосюдоваяив говогеввссти очищовных првпарато» ШГГЭ я \ПГ проводил* с поиошь»:эдектрсфореза в оолшсряяашцз&в г*» -: 'же во методу Деежса<Гат1в,- 19Í4) .'KOpacreßiiatorMtala» Y;t9í4) . в модафпши* Гияшанова' и - дп.(1967). - ; V¡

.V П. ПЕКТОТОТИЧЕСКИЯ ФВЙгСНТй А|ЦЭГОБН03| BMCTSFWl

. /.Д..-;, ;; Y. . . '

г'3. I Cl. falainaqívv ст.5 каюгбылпо лучен, кз музея вулату? Y Белорусского научно-веслодогательского аяетггута тсЕОтаивсЗ я 'да гково ромам н п ости ' в 1969 г . ; где " ета; jt у «ьтурадвзддера-валась'на жясяоЗ яроетэвоЯсредво крапяаявкя сйоаикаиа. * . Y'- Иэученив морЬологвчссках в бяохямяческчх сЬсЯств бгкю--- рад, очащзнясй ст сопутствувщих форм, соказаво,'-что ксслэд,*»^ 'У "мая пультура в^'егвтатЕМШ состояаав кшет видоанаочакх: яда * соедяквнгшх в короткяа цепочкяааючвк со ктутякаш1;^* вара. тряхяального тйпа.^Червз 15-20 час. раэзатия ска'о<3 разует' '

грш^лазу -запасное вещество углеводного характера, а'через 30-36 часов развитая культуры наступает лродасз сосрсобраао- ■ ваижя"илсстрадаального типа.-На твёрдых средах Ге1в1пеии Л ет.5- образует округлые,1 слегка вытянутое белые коаойаж с -глад-х кой "ровной плотной поверхность». На хаджах средах с:м>кяны*д, кршшвншш сноошшыя я на среда со сгерильячм картофзсеы;йах-\ терпя растетхороао'э внсоксмояса жадкоо та; : При эт ом, в от-, «пае' от типичных ат&ммов л; Iлил^ , втот йтв»ш ора расте ^ на картофеле сЛразуе'т |жадтого пигиента,. В процесса роста ' •вразвятаяна хялкв'х средах накапливает масляную в уксуснуг г ■ ухе ЛОТЫ. V " '...., '¿г : • "/С Ч>';: •^ : '

Прд Ессаддован»* способности бектеркя рролуцироветь те у -' яля вице фе рие нты Д у становзеп о ¡^ что' в :состав ферйен тной си- ' ' '".Г стемы сд.^ -ГЛ^птав ^ ш*.5; не входят ферменты темкда хлпжаздс^;/ го ' -Гкоипл^са протваэа (^Йэ век-' -- ^

^тохнтжчесяях ферментов 'отсутствует1 пектинэствреза,: подшетсв- *. ' ■О г,.*ахтуронааа д пектин-транс-бпишшаза. П(жазаяо, .что в куль-туральноЯжадкостя я в выдё и£ я на х н^ не в Препаратах обнарута-

и ря аяку бааав' рчотво ра фе рке нтн ого в ре парата я ку льту раль-. ; аоК; «якяостя с.пектовоЯ кяолотоЯ проясходяло сявягниа вязко- '

- / стя, обраэовляиэ-рёжушфуткх вецеств н веиасыиениих продун-

: 1 -V-Л1 Г..' —■ ' ■

тол расщеп левая пехтовай хяслоты. аоглог^ппих свет пря 235 вм,

г'■■ ;-.= > ' ', ; .••:• •' ■

'ооречелеш1ых^оп*1ша4льаых^^твлачяна^^рН (дай ПГ^оптжму» дей-... • ^

- : ^;етваа пра рО 5-6 е> -. трвс Су$ере > а кяя ЛКТЭ опт^м' дей- '; : .

' ^¿твая > пом с^фаре врк ри в). Кроме того, обнаружен«, что "А* " Л*.

-,1 - 1 -

• - * —л

' : оба фйрыенга спевдфичяык пеэтвриЗицировакиоЯ частя молвкуян • * пектина: чем выше степень мврифакацги ссктяно, тем няхв била

* -актявность ПГ я ПКТЭ» Напектрию со степеньвэтерифякацкя 99% I ^(нектин Еякка}:оба фермен—х соЕсем' на;проявляет активности.

- -Было изучено действие сас1г в концентрациях 0*0005 и; / •

0,00гм, '0,002 И,1 '0,00211^ 0,004 «, в такяв 0,002 и ЭДТА^яа ■ штявность ПГ я ШТЭ С1. Ге1а±п*ия тт*5. Обнаружено, что все • ,;с?аиЕ«яем(га ковцентрацвн;са<х1^ швЕвагровала ПКТЭпо наяболь-ЕЕж аятивность фермента навете»®«'. пря вовцентрации сас1г О'^^Й.^ЭДТАвкоидантрашадО^^КстгяЗярово^ШТЭ.'Эгя концевтраияЕ Свс1г '.* ЭЦГА иа влияли на вктявнесть'ПГ. , • +Л«я того»чт оба установить, каков механизм расщепления неятовоА кислоты ГТГя ПСТЭ^-нвупорядочевинаялп-конпввоЙ, -■ яэучалипродесс ферментативного расщеплеаая пектовоЯ-киоготы . в®* вн^уб&цяя ее о ферментом.пря рЯ5и.рН.8путем определены - содержания продуктов трвяс-эляиинатйеного разив пяаняя н реду-<'■' цярушях веществ червэ 5', 10, 15, 30.я СО мянут. (таблида 1). *

• 'ч--,Анализ вредставявнннх ка1тых показывает,"что.пря рН 5 в" /.'•■ течение первых 60 «янут ПлТЗ почти неактивна; ГТроцесо расяпе11- '

■ яеняй пектовой кислота ко :редущ|ругш51х мщеетв протекает в те-ченяе часа при р)1;5.пря деПствпя ПГ;более,быстро,' чем оря рв

■ Ч .в, 1 т. е ^ при де йствяи ПКТЗ . Пос яе Г10 мяч де йст вия ПГ на суб- . .

* ^ . -::х ^ й - • • * ^ - -

■ страт¡ ;впзкость О,эд-ного; раствора пектовоЗ гвсяогн падает ва .

54%, пря этом пектовая киолота,расивпдяется : до редуцярушвх• ; д вещестБ на 7,7?логичные ;» резу яьтатн получеяи пря рН 8, № ; '' - Г ¿¿шльн ОН'Я ЛЯ '-¿е ВсТЭ^ГПКТЭ Эт я ' дааяие; указывает^ на, то, *»о У ' я пря .5 оря -уччстдя.ПГ, и оря ря в пря учасгяя 7ШЭ

' -г* ' > " . 1 . ■ , . ' - '

ЛЯ

\ »

■vi-if"' '

• • ; • " ' s » ~'j¡, ■ • .s •"• Л> ! ^ Aft ► • • - - . '£ vï, s • . ». ' - j 4 Л il.

' . ■ л- .:■.'■' S-"' r'.'rf- . 1 .. ..-• , V . ;

' V t У • l

■4 '

■ Ы

T'

r >-ï.

С

■....'■':■-. j?,,;,-y;! * ■J■ " ■ •••■ PR 5' ' V'-S/- • Г = •• pH 8 .f -j .i..-

p л/в . о Л ь e n't «;<£'; -л Время в щгнгтах ! -^Б^емя В »ÜWSX

ft' 15 -зо 60 5 10 lb 30 60 ; J

V ■ • г..- -.г - • •• • 3' • б ? ? 9 . .10 11

i . CpezTsra трепс-эхаамв-.тихого расяюояенгя в; 'сдшоах оаической-; Я^ОТШКТ* оря _235; ЯН >, : о< ? 0- Ч.;. V.- V i 0 0,003 0,023' » : -íVí; 0,025 / P.CÖ2 ъч ¡■/."Л ■-,.■*-г - Т 0,10 0,1В •• */. . 0,28j

г РекуцзЕрутв'.вгщастБа'.' - »' кг ■ гашатурсиавсЯ 1 МСЛУ»Ы - 0,62 v.J. ' , I-,'..' > 0,7 0,9 1,000 s 2,650 o;s8Ó 'ДнК' 0,660 0,92 1,05 1,3) t

з; SpotSBtnawRM «ко* : ста. « иакскмагьлого . 1 20,60 t i. i'Г'■■■,> t.-' V1 54,0 ÓJ- &M 89,500 100,00 23^00 - " ív •. 40t00 44,00 '•^-ч' .V aotoo .100

V Dpcasat, recaen юям ^ л neiToBoS laewra ao »аегреяадрегузгр/в-1 ,сзх взгэста ; '¿к-га ■6,SO '-Xi. i 11,3 i : i 13,200 43.SC '. ; * 1.2С0 - '•• • 4 6,070 V. Í ' ■ • 7,40 ¿t'. '. . V. . 9,80 14,4

Alf'. ^ "

- -i ■ ■ -»f.- V. , ■■■■. .

• IV. - - . ■■» .. .■

■ V. (

." ■ '■■-'■л -'í1' ■. v-

Wi-ilM- ,

; PfiRTOBOft киолотн происходит, по-видимому,» результате неуп>-

■■'■ - '''■■"'г -f- "Г"' i ' ■ Ч"-..

рядоченяого fteadoii)- действияферментов.О подобном механяэ-У ме действия ТТКТЭ яТТГ свидетельствует так га^ результаты оореде-" у; 'ления продуктов Фермеягатр^н ого. расщепления сехтовой ItV&Rtmi -

- методом хроматография на бумаге»'- J:-,"; -Л" . * ■ '

> Изу че н ие^пр одолжите льн ост и культявированняс1» 4feleineu» шт,5 псйшзало, что анаяробная бактепия синтезирует я активно выделяет в охружащую жида ость; ПКТЗ и АГпрйвыршпиваняя на разных'средах в период спорообразо^шш культурш^на сянтвтя-ческой среде - через 63.часа роста культурн, на среде,с лькя-НЫМ1 енопехамй- через 48 часов; ' Ч;' •;у*. ; ' ;

у Изучено влияние раэляччкк источников'углерода набяооия- " .тез нектолитическнх ферментов: пектина с разной степенью зм-* , р»$икащг, глпсозы^лактозн, галок*уроновой хяолсты й естественного субстрата - стебле» льна (тебя; 2)\ '; . .Приведенные хданние покаэнвают, что бактерия очень плохо растет на среде о выеокометсш>ялнроьаннмм~ пектином^ которая' • она "не"способна расцеплять,и образует в втях условиях: лишь'небольшое количество ПКТЭ, Культурахеротораававается я выде-; дяет в среду ферменты на свекловичном пектине о низким содер-ханяем метшсоияьных групп;; Хороший рост идостаточно, виоокий - - уровень бя осинте яапект о литичеек ахфе рне пт ов наблгдается в»;.

средах,' где в качестве единственного яеточииха-углврода бня* ч-; .применены лактоза или глгкоза.Заменав.ерепв'глтоэы в лих— vтозы'пектином не ъ«зваяо резкого увеличения-активности ПКТЭ s

- несколько"счяулги образование ПГ. Тот факт, что на.-глиюзв по сравнен«?» с-гндуктсгом свекловичном пектином биоеянтеа оекто-

. ..• %:литическах фермтмтпв умзиьпшется;лить незначительно» указывает

- яа кокститу т ввчу к.: n р лроду: ПКТЭ л:ГГГ. ' *";

■ v f- ■ ■■

^artaaqa 2

^В'дяяняа^ разл»чян£ источнкков угле рода:«: на бхосяяте s

гвектохятячеевах ферментов шт. 5

ю V* Иоточнякя ■'■^V угварода-. -, . ■!íí:--'-,r.¡ . Содэр-яавяе - '• Я, Ш- Активность феомеятоа (вд/их)

Пвктат- транс- аххыл- на sa Поляга-лакту- ■ ронаэа иацеря-рую&в ант явность m

- ' .-V - v - 3. 4:"-> 5 ' 6 7

"1ьчяны« ci -б ib'.' 2,0; ' 5,4 0,630 595,0 5,5

2. . пак-мш автрус.*: ; - СййДоЬваа ) - ' еЗгГиерЬфйкацна ' ' ^ Л. * 0,5 i,o 0 Í vJ"; 5,3

3. Пв5\.дсввкяов. V15% «тери&вкяцва . 0,5 5,0 0,200 146,0 5,S

4. i * гГавахтуроаоваа , . ' 0,б" ' 0,023 о 5,4

б". 2,0 3¿0 0,400 110,5 4,9

6, -Ужшю^Ш:- 1.0 ; 3,2 0,330 62,0 5.V

7. Лактоза + пекгяя свекла».'' -, 2,0,. ; 0,5. 10,5 ;0,?0О 350,0 *iB

е. ' Глпсоэа + -пектяя свехяов. ^ 0,1 , ;0,б 3,8 ' 0,300 192,0 5,4

■Vt'■:'■■■ f- f.

^f^.^äjo. подсщеи« воивермим* данные Ианиаллаяа, яотори* но-" í-sasaj; ' чт ¿'аиавробныебектерья образует йнлуцярувиыв пвжтол»- ^ ^ тячвоаье фвр^птя''то»ько аа орвдах о1юят*яо»« явя полвгахах- -, ^'Ттуроновой río ют ой. На средах хе с.глхжоэоА в качестве едя»- ■ ; ОтБваного'1сточвЕКа уперода фвр«*йнтн не синтезируются (Мао-. ' : r'alixen, 197Ó); •>•• ; :

~ ^ -Уточнвао.учте увеямчвняе (вн<)г ЕР04 с 2гг/л до 4 г/*, ■'■"г танка янвееяяа'дрожяавого экстракта в аскорбиновой кислоты ^, J Л вадвчвотвв 0,5 г/л,уон*яяо бяосянтеэ пектолягячеслвж фа^аавя-;

товсК ;*i«in«ua шт.5.

' г ' - - ■ • -/

На основе проведенной "работы П<ГП0Дб0ру компонентов 01-татвпноК cpiÄM.'iCBOöoffcT^rmat актяв'нощу/Сяоотктвау^ПКГЭ.« v Пг, 0ыяа раэрв0отана ср9д1ся9душего состава (г/ж):лакто-: ,' .эа - 20| оектвя - loj,(BH4)2 ЕЮ^ - 4$ "вЗОд - 0>г?1 КН^РО^ »'7; lad - 1; JeSOj . - следа; CaCOj - 3; .дрожжевой мсстрект • 0,5$ аскорбшовая кнолетаУ- 0,Sj pH среды -6,5. Это дало возможность,повисать,активность ПКТЭ В 8,L pß- ; ( аа * увеличите выход ферментного аппарата .с вдинаод обмиа ■ вбраэ^Посравненвю с приызняемой ранее^синтетической средей.*'

■; ■' •-; "шдвгонив' и очиста сЕктотаттеских. фбидвнтов ... .

' ' ' -'-. ' с*'» 'msiHTOM шт.5'' у,,' -у'"У ч ■"

Г ■ ^ ^v — '- -УYf ^YJ;-Л.ГУУ¿С-"~ -Г' ■

Препарат ферментов из культуральноР хидкосткJ С1'* falal-»«м»,- ffir.5 выде ля ли осаддвнлеи 4 объемами охлаждвнн ог о в гma-i вого спирта, гэд^кж предварительные опыты показали аацияь-] аую;потерю активности получаемых ферментов пря есаядвяка атю» растворителем. уч:-,'-' УУ УУ.'ч"'".^.."^''-^.' У.';УУ -. Г ';^ Полученные препараты.подвергались хроматограФйи на ко- У лошсеЬЩ-целлвяозой.чтопом^

' При элвции. препарата ацетатным буфером 0,001 И вря рН5 . аяюнр'авалось 97^ нанесенного,белка. Этот белок не обладал на-^ • цзрируюшей а шктoimrической ■ актявноотьо. ПргБКлгчёяка ллной-вого градиента эяюцяя (0,001 К - 0,7 1!. ацетатный б^фЕР, РН 5) ; происходила элгцяя я разделеяае ПГ я ПКТЭ -(paci Фраяада, содержание ПГ, вчк:* вались5 при'Градиепте:элшяи 0,125 - 0,325T4i ¡".'«'содержали пеэяачатеяьяое количество ПКТЭ jt ксхед-

аого),.Фракшт,-пройвляшие ПКТЭ-активность,' вымывались Dpa,;

• 0,53.• О»? U а содержа»» 6% ПГ. На етои зтаае опвстки удвль-^ гяш'ш(таВнооть ПГ возроола в 21,9 рааау а ПКТЭ - в 49 раз. Пря | i , -у иou вигод ПГ 0оставляя2б,1%а ПКТЭ - 5,3í"(ta6i.3, 4). ' =

■соде ржащиа ПКТЭ аПГ, ко и центряровая и уварвва- 1 * л^ нжемна роторной вакуумной выпарке, дяалязовадя протяв дястял- V ; ированпоЯ водЫ'я наноси»« jm; колонку; в сефадексом о~2оо для . -дальквйше* очяотая (табяицы Э,- 4)». ' ' . , Г

j г/лря хроматографжя 'иа ко ловя во 'оефадексotro?200)-фpakotü, - ' , -.содержащие ПКТЭ ¿отделялся ~баялаотп|Авеектявный~ белок, соста- ' вляаджЯ ffí% от нвяесанн ого на колоику. Инажтивацкя Фе рмвята на г/ _ атоа'втапе очаетна не; проке ходя ла.'Удв л ьнаяажтжвя ост ь' ПКТЭ . 00 сравнена» о исходной культуральяой вастостьлвозрветала а г '

225 раз,^Полученная пектат-транс-элимаяаз* ^ ве ео да ржава пра- . Д*-- '■", 4 "иеоя оолагалактуроназм (таблица 3» рас.2). '/¿Л

Г УпареннывфрахцмяПГ после КЧ-делямозы бил» нанесены на > - оефадекв огоо. ' Пря го ль-фаяьтрациа от Фермента отделялось '

■?0,1Й не«тявного, балтастного^(йлка я йв'.ваблк>далось янактя-vV; Í

;вааяя фврмевта*. Фардант Ешпел двуия ииквмя '{фракция 42 я45),- .

. , Удельная активность Фракция 42яочросла в 21В,7 раза, в фрак- -•* ':. ■'

- - Сяж 45-%125 раз по оравненир е' удэлыюй активностью исходят»' • ' культура»ьн¿4 вдавоста»*:П о лу чен hi» фракца впо лигалалтуроиЬзы: ' "

, 'не содержала примееа пектат-транс-ълииаиаэа (рис.3, табл.4). . г -

После рвэдолавяяХк'очисткк фёрноатоатна^сефадвксе с-гоо^; V; ' ' фраяц^й; ■оодертавде ШСТО:я: JJIVУ^Р*®?«5 í^9»0,2 мл, > .v';.-:

содержащих 100 у.:;^*ка,;аяаляэйровали.методомдяскового' ажек- ----к

- - трофореза в яоляааряламкдиом годе , дяа опреявленкя гомогеяоо- - , ; ■

V; "стя. Высокоочяхенная ПКТЭ пря влектроФореав была однородна, I как пря'квелом,'тая я "оря щелочном зниченяях ptf (ркв.4), а

: • ' • ' - ' - ■ г , « ^ " -j1

: ° .Г ■ ^

V 1 г

, I ;

- ■' ■ -. -■ "'>' '''■■.. »¡--'К'». '■ ■х-'

-.-.,■ ¿Д д'л >Таб«да З:' . Очаети оектат^рвас-гимгяава1: ,_с1»г«1»1й«а .

к* а/л Этапы \ • .".Г-. ' Ч ^ г ^. . ■ Объем-' (и*) Баляс ■ " Пеягаг-трано- эшшаза ; ■ • турояааа иошее коли-честно вдяши

Общее'' ло— яичемво -■единиц-'. активност: - ;; белка) УЕсии^Яйе удеаьноЗ -еитивво--сти Шг

1" • 2 3 • ' ' 4- ■ - 5 - ■ * -V 6 • ■ 5 >7. ■ -•■ е.. _ - 9 • '

1 Куктуральааяиа--костъ (дааывовая- -ТЙШ* .'«ч-у.г: '> 7260 ЪГ . V 1466400 " 201,4 ^' ■ ■'■• • „ 100,о", ■ >2430 ;■'.'-!

2 , V. » 0,001 К анетатаого буфера .'■■-■ У'-*, *г* 'г ... 1000 • 1400 500000 1 357.0. $■ г ' . ^ 111 1.7 * ■■•■'л.1. .'■ '.'•' >- - \ ч ''2000.

3 Посипрооусканм/ черев НЙЦ_ , -»рак им 176-191 5,6 К". 7,8 . Г : 7а>ю 10000^0 '' :«49,0 5,3

Л • / • Поме «^-фмьгрв- ■ цичвре» «уфадэад . -4*200 ■ • ■1 ,-"-фрокш 24-30 16,8 .■"*-■' ■ 'V 1,8 •'/:77000 ■ - 45300,0., 9 • • 1 * • Г •' . •'• : 1 224,9 .- •:..• 5,2 • -¿:' ' \ чу • ■' л,!" ,....■.:* ------

л Л «г-.. ■

I

■-V'"- " '[,.Табжада_4 ' [Очаетха помкшиуроаазц с1о«М4ищ Мйадад да. 5. .

г— 1 № |п/о ! ' 1 1 ————————г? ■ Этапы отяетк1;■ . Общий' объем (ил) Бе юс («г); Г'- '. Похнгвлак туроваза Нектат-т^аяо-зли- . ..'■! иояячя

' Общее количество- еди- V НИВ Уеехьвая ■ ахт«1ност1 (ед/мг. бвлха) Увеличение УдельаоЯ' йКТИВВОСИ Выход (*) качество . едаахц '

» 2 -■■■■■ : - ■ 3 4 5 ■ [_■ б 7 8' 9 : 10

1 .Культуральная жидкость ..(даалиэованпая) • • У* 7800,0 7290,09 2340,0 0,32 ■ ■: - 100,090 1466400 100,00

2 Феоивтанй препарат, дяэлязовалкыа против . Супера, 1000,0 1400,00 2000,.) 1,42 4,40 . 85,400 500000 '34,20

3 ; После, оропусдавая через' Й5Ц ^рекояа 150-1ЯЗ • 300,0 -Ал' ■ -06,00 1 * . ■■■ ц' ' .600,0' ..■■-у.- I-.-- 21,67 . "25,700 " 16080 . . • 1,17 '

4 После гель-фзльтрацкя на сефадвкое 0>290: V: - • Фракам 42 ■ 1- ■; ■ . 2,8 ■■4 '- ; 0,40 .28,0/ ' 70,00 ' 218,70' . .'• 1,900 щ.. л-ч- .

5 Фрехпда <5 ■ / г 2,8 к) * -0,56 , 'V 22,4 40,00 125,00 0,957 , 0 ■ 0 ,-.-'

■)

гулехоочюзвпмая CT:npa pa <(3 c(x«a4ja a3;*pex eeoîaEai Фр»«г:

' .'цяй* ■ :п-/ V, ^ад^йч^ Л vr-' -, . :

.*. Схздовательао,врвэуяьтатё'рз«а»вйа ж отиотхя врог>:...'

рата ферментов«.; тйажш^ет.

';.' »»звитрофорзтичэсхи гсмогеннои состьдпзи.а та* охазаиюь га' '-г ■■■■'.:!■■■■'■' ■ ■-.-■— ■■.-v.:-,-; ■ ; ■ ■ , . . ■■ -

i' мрагеявой« ;'. ■■■■ rV/iC '. ; ''»'' :-.''''■

s'

wí

' v

■ г Hi,.

't 1

m й

v» -Ч Я

K'f f/ ■■te

1 У í; a '--щ-

. V'Î^C

s * .'"-v. fe-î m

••¿л' y.' _

• -i*.• -с—

•V': ■ - ■: -л"

i-1

/■•.¿¿Li ■

ttjt;'* - * ■

- ' ' 'îfЛ* . :

•• • + Ж<Л:- Т^' > .г. - •. / .; . 1 ■■ . iivf^v- . ■.■ ■...:■ ■■

V г ^ , -

Peo,''4;';,;. - >'

- . v.-.?' . .. •• ' - - •-- . .

"■';ч; '/"y a) »хокиыЗ п peaapay г ( Í800jf 'feo») - -1'

.>''• * Т.; л..;.- :... -Г- Í ■■'.■•■.. ^ .. .-.-...г

■■V'""' ¡VJ») - очязвявааПГ(lO&jf■ V'<■;1 ^'- ' '

V Эмиш выдмвяая х оч нотки ПКТЭ в^

вида ct*»i .(©я, вдва -V -

' Г". -í; ¡"Ni

• ; i8 - " •: . •• Схема выделеняя я очясткя пзятат-траяс-элздагяазн а-

помгадактурЬяаза cioetriaiu» í»1»ibW и. 5-ФЯДЬТСЙТ ж;мьт?даяьвой ДЕЙДКОСТ» г ^

v

Г-**»-.»- •

- Дантррфугй.ров&н»» не* ЭОГР ..

' i , •' "ч у/ Я ' * Í

, i ■■ . • ..

фяхьтрат г осадой от—

J V . брасиаает- '• •

оххажденяе до ,+4^U a' ■-.-.■ * : Vi ■ ■'. ' . ч. . '-■ '■■'».■,

осаягеш» 4-мя обмма- - v^..«; .'. ' :

tu етяловэго еаярта .¿"7■ ■■'■'■■ ''

надосаяочная жлдаость - í " осадок высутяваетсз ; .,

отбрасывается . ■ -\» вакуум-эксикаторе

.---.■..■■'■'' . '..•■.» растворяется s —.■

• ацетатном буфере ■* . ..

• '. • - V - - v ¿ v л.' r

".4 ■-V; ' - аантояФтгаоовайяе - •

'■"■'■'...-' J *V.'-;. V ;ОС84ШК-'отбра-Ч ' '

амосадочная v; ашавшуа■ '

:■-;■. хядаооть '•.. . - - v<'v • rw«r» -У-':■"■>■

| дяаяя8 протяв буфера ; . : '• ' \

»ш • ' •*/..

J жроштогра^яя яа КОД^'1;'. .

-.■>яшв«Е9 a-jnapBBaBEe^^v-v^XíU..."" - '

WÍ амнял U4 '' Л ~ flAA 7, -, , сЧ'1"

гвя^яльтрацяя.на.^гоо

' . ' '.s:"'-------- "

высок оочяше н ныв п рэпаратм ЩТЭ^ я ГГ V.- t ^ ■ 4

Для определения молекулярного веса ПТ и ПНТЭ был ясоог*-V эовая метод Эндрюса, описанный*у Яетерыана (1970), оеномяни? па еравнепял объема алсзхя бежа, молекулярный вео хотерс-о „ яаэбходгыо определит ^¿объемами влвцм белков ийвиотвого ко» -■■гзнуляряогэ взса. Результаты определения модекуляряоговеса -представлены на рнсукквб.Согласно вояученни» данным/мола: кугяряыЯ Бвссектат-траяс-влшвназы - 105000," оождгпдактуро-даэы 1' (фракция 42) - 33650, Ооаягажактуронааы О1 (фрвхсм 45)

У- - ^ЩШЙР 4-г ■

; • • • *■■ • Тч<-уу=^:

^^ • с ■

у.;. " л; 'V *

' ЛЬмХ(

' ' - У' ■ '

у ' ' ; 'У . определение ^иекуляряоговвсаШТ&я ПГ: "■;■'*■ -. УФияоэратран:- 900000 . ^ ;УУ; У У У' 'УЛ;-У;' , "" . у •• 2.Фоо^рв»эа'Б димер - 200000У. • У .У- ■ УУ . 3, Пектат-транс-элаыянаэа- 108000. ' - / - 4."Альбумяв ооа - 97000 ;.. - ■.-*:.

: • ' - Сывороточный альбумин человека - 68000 " -• <' - . Полигваактуронааа 1 - 33650 'У-' '"-'

й7.Химотрвпсияоген- 25000 .. 'УУ^' '■ . . '

6. Повягалактурояааа ТТ - 239Э0

- го -

■■ л, *

л*

цг. свойства виажоотапБнных псттлт-yf^i^ д^раы'' - ■

,11в «ТврвПРНнМ.гзДВШ|"(1"СВ1и«, ТвибЬя, 1964 { Korea, Ямвдо, St*rr, 1968{ Г«т» Te»¿ho, t97t) 1ИТЭ "беягерй гувт api оеючных 8пачвнЕЯ* ЭД (pH 8-9) . СоГйьаяо кашки язв--" ази/ излокяаямья ьхтягность ГКТЭвзучаеийЯбкхгеряж телга яабящмтоя пра ря е^Б. Пря ^ ^ ^Р^вят яв ект^а* "■ л

¿хтавпооть ИГ Wpesnsa <2 о 45 доб&ях яяалогячдье кря-'1да)бымкакбодым1 пря ptf 5»- с ja погкяоаэкхя so pH 9 в под' »лачяавняя среда до pH 8 ПГ вала кеектазко. . : у - Негодное кзшвнаясв яхтявяостя.ПГ в з&всоккоетя от IH-' орэдо яахлвгся характерней особенность») ПГ ияо«* юлкрооргяк Besaos (Вмвао, Btarr, 1966; Ог*ьа *tal;,1S66}Cb«rfrooftr. / vt9S6t B«r«Jb, T»al, 1S70); .'■'■". ■ ■ . " """Г"' !

■ * : Акт явность 1ГОЭ, кагпоказакянадг яевявхюаквя, - ззишеят V' .er йргдутствял в рзакцЬояноЗсмася двухвалентных гатдояов. Пежакшо,7что' CdOl¿, кпс12, coeijí; с*аг, З^^о^уввдкчивают \ ьхтаьяссгь фвриаата, а В*С12, E«ßla» taci2, веса^оэДО) подавиотт вктемоеть пхтэ. навбольйее^аятквирсваянв^ пкгэ ¿pchjjsojut b ;"-*.' орасутстхяд 04саг. 6,001 мэдта eñcktksxpyer фе-раоят. j ^

."В пр от газ п о юхя ость "ПХТЭ ¿вухвалеяткке- патясяа к ЗД7А fté BitMa на вятввноот^ ПГ,: л -

V;. '• Пра вдучвам субстратной спецвфячност« ПКГЭ » КГ обна- -, pjjBHo, что оба внссАоочяамваь'х фермгнта, квк я ясходяел ку1**,урааьлач «дяоеть, яаяболееехтявяынамнтовой квалс- , -«,« не проявляют свое го действяя иа пояностьо этержЬяюро-> ваавом neKTiho (Ьектяя' Яянна 99* эте рифнкацяи) Í ■.. : ' •

Високоочищентга ТЖТЭ 1 ПГ обладали способностью иацвря-рааать.лубядув оарввяшу стеблей льна. По результате« мккро-хяшгаесяях аяаляэов мота о сделать вывод " чт о* зу чае «не фар-меодгсаособаы .расщеаяять лектян средичйыУ*авьеткаок клеток ...у пвренимн; оиру»гауис лубяноЯсучок, л «е^ затрагивать' овнга-~ ян, едлвавапаше лубяные волокна;„г.т ■

^ Кроме того» способаость;высокоочяшениого гомогейиого дре-паратаШПЭ расщеплять ватявянЯ пахткя в^стебхях льяа (рю46): позволяет наи предпояожягь, чтомотекужа,пектача парепхЛиаой ' *каяя стебле« льна"иязкоатерйфицшроваяа.О няаяот содархавяя СНдО Ч4»1!() в стеблях яы»а сообдое? Эрлях (цят. ш;. Цяооапя-

ИзучеКи Глубины; расдаплэяяя субстрата выеоиоо-чвщвнпюв ^ раотворвмя ШГТЭ'я ГО* вясхоэ*ш5трячйсжпм*отодси я по'яахьояе* нкх> реяуцвруваях ввивслв'показываетчто пря падения вявкоста на 50% от ¿аксямального вроясходят распад вахтовой кислотн а " случав ШТЭ на'г,06^Г а в 'ояуадв ш* - па 6,8%. Это рвя' •водтверкдавт.^чте оба ферваита расщепляет йектову» кяалогу 8« упорядочении^ ("гетто*") ■ способом я относятся ж вню-ферхал»

■ * г .■5,,--" "г ..:'■■ .. "

о неупорядочвнпсждайствия ПКТЭ я^ЯГгсвбрятреаультеты

явучвнад продуктоя раедапдвад'вввт4'ВоЯ кяолога методом хро-, иптогрофаи яа Сужаге.ОЗнаруияо^'ЧТоередя продуктов расда-плвяяя .суСст рвта- в пв рвыв 5-ЭО ияяут ястречавтся'*'Твт ршв ря, трвмерн.^шмвры,Гйлжтуройовой*яа"рлг»*м#.Я:Ив^ , три - и дягадакт:,- ррновне кислоты- С последнее ; от БО^дейстВяя

к'ЛШ'-^гЧ

Рис. 6-8 .

Срв*ствб*я льна; ¿швуввровавоагоел в воле 3 часа..,

' ■ ■. V ■ ■ ; „ ■■■■■ ■

пр* ■ »

. Рео^ 6-6 -- . ." ; Срв» ствбЖА'ЖЬпа, обработанного ПКТЭ (аякубшпи 3 чаеаприЭТ'Ь)

. ВЫВОДИ • ' - .---.v "^

\ ^Изучены пектолятвческве Ферменты анаэробной, бактерая cioetrldtua •ibous ют ' 5,. применявшейся в производствен- г •.",""• них условиях мочкядля-получеяня льняного волокна, Установне-•не, что эта бактергя расщеплязтпектяновыевецества как гядро-

V .лятяческя, так И.злхмяпатяэно, образуя пектет-траве-эляаиппгу , ,

■ ■ ■ , 'В поя ягалак ту рон азу .■?•■■ ■''^/.v-v,ji - . .уч* 1

■ 2. Раэработан'состав полусянт от ячесвой питательиой среда, обеспечяващий васоякй уровень бяосянтеза ПКТЭ Я ПГ. Ево-

'"'/ ■' слнтез КХТЭ на подобранной намя среде увелячиваетоя в 8 раз, ПГ -'в 1,5 pas» по сравнен«» Ô биосинтезомва первояачальао взятой среде.'. ..;.;.

^ 3. Интенсивный ■ Оиосянтез* пвятолитячвскях"ферментов про-; -исходят яа~ глдоозе^ш .тиктозв^ примвняёмих в качестве едяйст-> веяных источников углерода. Введевяе в среду вместо-глхжоэн ■■ лактозы пектява не вызывает значительного увеяяченилбгоегя-теза, что указывает паконетвтутяввуюпряроду ПКТЭ я ПГ. '' : '

".. ^ . 4.'Установлено, что'наибольшее количество пелтоиитвтеелв* ферментов образуется яперводепорообрвэованкя культура после 63 часов роста на разработанной намя среде. -, • .

' " 5. Путем нояообмеНяойхроютографяяпаКМ да л л с лозе, ге» ; Фильтрация на сефадексе^о-ЯХ) проведено Фгчжоиояяровавке я *.■,.>■ очястка пектолятяческих фвfweнтов Oli f «lelneua * шт. бi В pe- j{ - г

■ 1 эультат^^ПКТЭ бнля очяаена в 225 раз. в получена в злекгро^ор«-

.¿V'.'ЧяческяГгоиогечноч с ост оя пяя. ПГ пряге л ь^фя льтраця я я" воч о-,

.■ :pCW3î"ioK" хроматография »лпяровалась в виде двух фралгии»*_фр87г- ¿^î

V -. п^ч.'Дрн'ч-рчяе!'!!!« в 218 раз.' фракция П - в 125 раз/t-" . "

'.■/■■■*. "'ч -Ч'г. г- ".-'-Г •• :

^ • „ "sjk'l ' .. V,, -F- . .1 ... -tr* ^ ."'V,. ** . • *t

i'' ' f-

Была изучены некоторые свойства высокоочищенних ферментов; ' ' / .. ' ■ ;

\а1 хек ПКТЭ, тек обе фракции ПГ быляелеавФячны к нв-вуерифвалроваялой частямолекули пектина. Она билянаяболев аятовны вв центовой кислоте, ызиее активны на частично &те-рифяцмрованном аектяае я ве действовал* на полностью отерифа-

пэрованный пекткв( .... ......, 4 _ . .

б) ШТЭ а оба компонента ГГГ действовала явупорддочев— " пш1 способом, то-есть оредставляля собой бвдо-ШТЭ я эняо-ПГ^

а) рй-опт яму и действия обеях фракций вядо-ПГ л в хил В|Щ рН 5,0, анло-ПКТЭ - прв рн 8,5| ^ .

г) активность вндо-ШТЭ стимулировалась явухвалентвы-

17. Л "т . ' ^ 4

ня чатжжаиа 0,001 и . С4++, Мю**, Со*'1', Са** а яягябяровалась 0,001 и ЭХХА.,- Ва++, . Активность эндо-ПГ ве явме-

яялась в присутствия.двухвалентных катионов( , ; :

*д> методом гель-фальтрацяа на сефадексе о-гоо ояреда-леи модекуяарвыЙ вес эндо-ПКТЭ, равный 105000, ПГ 1 - 33650, ЛГ П - 23960«; . . .. ." ■ -

По мере очиотка м&шрярушая способность" ферментов ооотве*ствевно возрастала. Высокоочищенниа препараты ПКТЭ я 1 '"НГ разрушали ватавный пектин стеблей льна. • 8.'Поскольку с1; г*1»1ю»ав тт. 5 на изучаемой среде ве , образует: да длюломтячасявх ферментов, кевкайазы, арабаяазы, 1 галахтаяазы, протеазы, - ферментов, которые могла бы вызвать : мадараоа»'растительных тканей, можно сде*ат.ь"8Екгсченвз, что •биктархямацарярует парвихяму стеб лей льна с освобождением хублаых.пучзюв приучлстии вндо-пежтат--транс-элимияаа« и »н-/М^мгаламурбаам., - ." .'-К-'.-"г г>.

- ' .. - 25 -- -■" ' — •• . '

- •• . - ч.:> ■„-: . Л;-

■ 7-". Слкош petfo»^ V .!-••. ..■■.■ ■

' ~ ооубляковаявих по матераалам двссвртацяв: •.^

.*'. ■ * . "•" '*'•. ' v • .'<. • : <.* • •'• 1 •->. .... •

• 1. Каовтопова Л.С., 1968« . Иеолвяовш!«« яомоявкса веятолвт*-?

С " ческах ферментов оря комбянярованнои^авробно-аиавроЛ»

, ^ нов способе мочяя дпв, , Тезисы даклада .на Всесодопс^в-

г-: ^ - со&екяяяя оо'бяозянтвау ферм&пгов мяярооргавгз«о» я

- '; ; Vü " - П|.хмвнеиял яхв варопои хо»яййт5вв 'Тбяляся.. '

■ U Капитонова ji.C.y® 1970.''V Вляяяяе хямячвекях параметров 6pW . т.- да ма фермеятокавопленяе вря раз«чннх способах моякя " - яьиа, Фвявояогяв в^бяохямкя мяяроопганчзмм*" Иэд. '-'',. ■ ■■ .•' "Наука'я /в хнида* t ?*Вянск,• стр.73.:.;>V.> -д^

/ .ЗР. Капятоковаг Л .С., Родвопова IKA., Фениксов» Р.В., 1972, ГТектояитяческев фврмаятв felelnenairr. - 1Тря-. 'г' «*•'•>• ~ *-.:. кяадяая баохяаяя я*якро0яологяя,8, Б, 539« ;

- ■ 4. Родяонова ТТ.А., Капитонова JI.СФенякоова Р, В., 1972,

• " Мавдрируппяе феоментысх; Г«1»1и«аи, Докхады АН CQCF, * • • • - го?, 2, 466. ' ' ' '-г:': '.$'.''••

; Каявтояевв Родяонова Н.А., Феняксова Р.В., -1971,

Вяоеяятее якроорганявмамя твдрряаз а траяо-алямяаая,' разрушаглих пектяновне вепеотга я вызмвапшхх кадара-шпо растительной ткаяи, Таэясн докяада аа 1У емвдв - ^ ' : Всесоюзного микробяологячесяого о13щеетва( секцял тех: нячесяой мйробяоиогвя, Мянсй/-:-6. Капнт«)ова Л.С., Родионо^д'Н.А., Фея|тсова Р.В.,_ Вмдвле-

- : л^-; яие; очй-тка «.с?ойства пвктат^трано-алямняаэц oí; ^ - " . felpineue, ГЛохямяя (в печатя). .

■ ........ л ... — - ^ . ■ . ^ _ iV.

•7HatepiAjní работ докяаагаалюь: на Ввеооеэяом ео»«п»им . , (по баос*ягв»у фвршлягов нпроОрганжмов л прюинвнил «х а я»^ родпам *вая*от«г)в г. Тб'дмоя, 1968, i . ;

.»в 1Геъ*ада Всвсаюавого^ржвйбиоюгачлсиого 'ежистая> . iC'Мял cae, 1971, . . 1 • ■ ^ *

; - ва Между яародяом еийпоэвумч по йчричптацщ* в Яполяя, 19/3. '* : ' ' ' . " * • ■'■■;. iv; г .

Г г ; ¿ . f ¿

V.-V f-

ttP'150 "