Патогенетическое обоснование подходов к применению цитокинов в ранней терапии комбинированных поражений

Ремизов, Дмитрий Васильевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Патогенетическое обоснование подходов к применению цитокинов в ранней терапии комбинированных поражений
ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Патогенетическое обоснование подходов к применению цитокинов в ранней терапии комбинированных поражений"

ОЛ

На правах рукописи

РЕМИЗОВ Дмитрий Васильевич

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПОДХОДОВ К ПРИМЕНЕНИЮ ЦИТОКИНОВ В РАННЕЙ ТЕРАПИИ КОМБИНИРОВАННЫХ ПОРАЖЕНИЙ

03.00.16 — Экология

14.00.16— Патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2000

lia принт p\ htmiií и

РЕМИЗОВ ДмшриН Васильевич

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПОДХОДОВ 1С ПРИМЕНЕНИИ) НИТОКИНОВ В РАННЕЙ ТЕРАПИИ КОМБИНИРОВАННЫХ ПОРАЖЕНИЙ

03 00 16 - Экология 11 00.16- Патологическая ({иппология

АВТОРЕФЕРАТ шгсерчакин па сопсканне ученой степени Küiiiiiiyiaia биологических наук

( 'aiiici-Петерб) рг 2000

Работа выполнена в Научно-исследовательском иисгит) 1С военной медицины МО 1'Ф

Научный руководитель:

доктор медицинских наук ЮРКЕВИЧ К).В.

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук ЧИГАРЕВА Н.Г. Доктор медицинских наук КУЗНЕЦОВ С.И.

Ведущее учреждение: I ЦНИИ Министерства обороны РФ

Защита диссертации состоится 08 июня 2000 г. в 13 часов на заседании Диссертационного совета КР 106.05.15 в НИИ военной медицины МО РФ (195043, Санкт-Петербург, ул. Лесопарковая, 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ военной медицины МО РФ.

Автореферат разослан «_» апреля 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук профессор \/ г ЛОПАТИН С.А.

г " V* "

ОЬЩЛЯ ХАРАК ТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность нсследонання. Резкий рост риска техногенных аварий и катастроф определил в последние годы новое направление в экологии, обобщенное понятием безопасность жизнедеятельности (Довгуша В В. с соавт., 1995; Агаджанян H.A. с соавт., 1998). Медико-биологические аспекты обеспечения данного вида экологической безопасности в аварийных условиях предполагают целенаправленное совершенствование средств медицинской помощи, применение которых рассчитано на чрезвычайные ситуации (Куценко С.А., Ле-геза В.И., 1994; Маник D.M. с соавт., 1994; Дмитриева Т.Б., Гончаров С.Ф., 1998). При этом учитывается высокая вероятность появления в очагах экологических бедствий различных вариантов комбинированных поражений, частота случаев которых может достигать 30 - 75 % (Фурдуй Ф.И. с соавт., 1985; Fpio-хин H.A., Алексеев Г.И., 1990; Гончаров С.Ф., 1997). Особо актуальной остается проблема ранней терапии комбинированных радиант.онных и химических поражений как патологии, присущей техногенным авариям на объектах атом-нон энергетики и химических предприятиях, а также боевым действиям с применением ядерного и химическою оружия (Куценко С.А. с соавт., 1994; Нечаев 1 А., Фаршазов М.Н., 1994; Владимиров В Г. с соавт., 1997).

Один из путей повышения эффективности раннего лечения комбинированных поражений может бьпь основан на современных представлениях об адаптационных возможностях системы иммунитета, во многом определяющей уровень резистентности организма, а также механизмах иммунных нарушений нрн экстремальных воздействиях (Долгушин И.И. с соавт., 1989; Александров В 11, 1993; Хаитов P.M. с соавг. 1995). Известно, что патогенез комбинированных радиационных поражений в значительной мере обусловлен недостаточностью механизмов иммунного реагирования (Цыб А.Ф., Бригун А.И., 1989; Bow-eis (I.J., 1997). При этом вклад радиационного компонента комбинированной травмы и иммунодепрессию является, как правило, доминирующим (Будаюв PC., 1982: Расулев Б К , 1988; Мама-тжапов Т.М., 1992). Выраженное модифицирующее влияние на пмм^нореамикносм. орташпма оказывают высокоток-

сичные вещества, в частности, обладающие алкилирующими свойстами (( ci ко ГШ. с соавг., 1989; Сидоренко Г.И с соавт., 1989; Caiapon С Т с соаш , 1994; Довтуша В В. с соавт., 1995). Разбивающаяся при отравлении пиритом гипоплазия и аплазия лимфоиднои ткани и костною мозга приводит к быстрому снижению иммунного статуса, что также может выступать в качестве ведущего фактора отягощения различных патологических состояний (Луйк A.M. 1974; Козяков с соавт., 1994). Однако до настоящею времени закономерности формирования иммунных адаптационных реакций в ранний период комбинированных радиационных и химических поражений изучены недостаточно. На основании имеющихся сведений не представляется возможным оценить значимость нарушений иммунологических сдвигов в патогенезе комбинированных травм, а, следовательно, обосновать принципы патогенетически оправданной иммунокоррекции. Реальный подход к решению этого вопроса открывается на основе использования эндогенных факторов межклеточных взаимодействий (цитокинов) в качестве биологических зондов направленной регуляции гемо-иммуиопоэза, воспаления, иммунного ответа (Вядро М.М., Навашин С М., 1989; Рождественский Л.М., 1997; Ярилин А.А., 1997). Применительно к проблеме изучения механизмов иммуносупрессии и путей их коррекции при травматических повреждениях, осложненных проявлениями гематологического синдрома радиационной и химической этиологии, можно предположить, что наиболее перспективными для экспериментальной проработки будут эндогенные иммуномодуляторы интерлейкин-ip и интерлейкин-2. Интерлейкин-ip -ключевой медиатор «цитокиновой сети», важнейший регулятор пролиферации стволовых кроветворных клеток, обладающий выраженным стимулирующим действием на восстановительные процессы кроветворения после облучения, а также химиотерапии (Кетлинский С.А. с соавт., 1992; Dinarello С.А., 1984; Neta R. et al., 1987). Интерлейкин-2 способен замещать хелперную функцию Т-клеток, обеспечивая быстрое нарастание иммунного ответа, что находит подтверждение в исследованиях по коррекции посттравматического иммунодефицита/Пивоварова Л.П., 1999; Kendall A.S., 1993; Tsybin J.N. et al., 19Q7). В связи

с. |),H|)jhoiKoii oiciuei ьенпых препарат» па основе рекомбинантного интерлей-kiiiki l|i (fciaiieiikiiii) и И1перлейкнна-2 (1'онколейкнн) такие исследования moisi преде|;ш.1Я1ь не юлмсо научный, но и практический ишерес. Аргументированные доказательства целесообразности применения данных нитокинов в ранней тер.пиит комбинированных радиационных и химических поражений отсу1-cmyioi.

Пс и, тч.к-ижанпя. Экспериментально изучить закономерности формировании иммунных адаптационных реакций при механической травме, модифицированной действием радиационного и химического факторов, а также па-101 снешчески обосновать подходы к применению ишерлейкинов-1 и -2 в ранней терапии комбинированных радиационно-механических и мехаио-чимичсскнх поражений.

Чатами шчмсдонаиич:

1. Н)уч1пь реакции иммунной системы в ранний период механической фавмы, модифицированной острым гамма-облучением, а также отравлением ипритом.

2. Определить особенное(и иммунорегуляторного действия интерлейки-11.ч-1 (Î при механической гравме, осложненной проявлениями костно-мозговсто синдрома радиационной и химической этиологии.

3 ( (пенни, значимость замещения хелперной функции Т-клеток интер-|| iii.iiiioM 2 в ранний период комбинированного радиационно-механического и mi-\uiii>-\iimh4cckoiо поражений.

Научная нонтна н практическая значимость исследования. Получе-iii I tuiPiie данные о закономерностях изменений адаптационных реакций системы имм \ ни 1 е Iа н ранний период механической травмы, модифицированной m ipi.iM рдтпационным поражением, а также действием алкилирующего агента. \VIд11"м 'по Iамма-облученне, а также отравление ипритом в дозах, блт-ш; I- 11ктпе.ича.шапim. усиливают иммунную недостаточность, обусловлен-hvmi •ii-v.iiiHMi-i-Koii компрсссионн'н! ipanMoîi. Отличительными особенностями l-i' I ta \ 1>.<ч"'ii.iv ьармашов комбинированных поражений, предопределяю-

uwMii неблагоприяшып исход, являются развшие нммунодефишпа наншио-пенического типа с выраженном миелодепрессией, угнетением лимфопоэза. а iакже подавление Т-клетчноопосредованпых и фашцшарных механизмом резистентности. Доказана патогенетическая значимость иммунных нарушений раннею периода комбинированных травм на уровне 'Г-хелперов - иидукгоров клеточного иммунитета. Впервые получены данные о негативном влиянии но-справмашческой пкшвании продукции фактора некроза онколей в реализации радиотерапевтического действия интерлейкпна-ф. Обоснованы подходы к ранней терапии комбинированных поражений путем замещения хелперной функции Т-лимфоиитов иптерлейкином-2.

Впервые определены особенности иммунных нарушений в раннем периоде комбинированных радиационных и химических поражений, что открывает перспективы исследований по разработке терапевтических мероприятий при данной патологии и вносит вклад в общую теорию патогенеза комбинированных поражений. Установлены параметры иммунологической активности ин-терлейкина-ip и интерлейкина-2 в ранний период механической травмы, модифицированной действием радиационного и химического факторов. Доказана перспективность использования интерлейкина-2 для иммунокоррекции комбинированных радиационно-механических и механо-химических поражений.

Положения, выносимые на защиту:

1. Угнетение Т-клеточных регуляторных механизмов, а также снижение кроветворной функции костного мозга являются ведущими папменегическимн факторами формирования иммунных расстройств раннего посгтравматического периода, осложненного воздействием на организм проникающей радиации и алкшшрующего агента.

2. Интерлейкин-1|3 в радиотерапевгических дозах оказывает негативное влияние на тяжесть проявлений механического компонента комбинированного радиационного и химического поражений, опосредуя усиление продукции фактора некроза опухолей.

3. Коррекция хелперной функции Т-лимфоциюи нн1ерлейкином-2 пре-пяплнуег разшпшо дефнпша клетчноопоередованиош иммунитета, обееие-•1Ипая уоончивость ор1анпзма и ранний период радиашюнно-механического и м ехано-хим и ческою поражении.

Апробация работы. Основные материала диссершции доложены и об суждсны па XIII научной конференции молодых ученых академии (СПб, ВМе-д\, 1996), III Всероссийском съезде но радиационным исследованиям (N1 1997), Всеармейской научной конференции «Актуальные вопроси военно-полевой терапии» (СПб., 1997), Всероссийской конференции «Проблемы про-пшолучевой защиты» (М , 1998), научно-практической конференции «Актуальные проблемы и перспективы развития военной медицины» (СПб, 1998) Материалы диссертации нашли отражение в 6 научных публикациях. Основные результаты исследования реализованы в трех отчетах но плановым темам НИР

Структура и обьем лиссергаинп. Работа изложена на 161 странице машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, грех Iлап собснзенпых исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка лшерагурм. Диссертация иллюстрирована 18 таблицами, К) рисунками. Список литературы содержит 215 источников, из них 127 о|счес1веиныч и 88 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Общая характеристика экспериментального материала. Эксперимсн ил проверены на 988 нелинейных половозрелых белых мышах - самцах и 51) инородных мытах самцах линии (СНА х С ,7 В1)Р1 массой 16,0 - 18,0 г Жи-1Ю1ПЫХ получали из пиюмника «Рапполово» (С.-11е1ербур|). В течение двух ноель после получения животных вылержнвали в карантине.

Моделирование комбинированного ралиационно-механичеекою псь ШГ£ё!11Ш.1!££МШ' Ри-ппшноинып компонент КРМП моделировали путем общею олпо|.раи1'||о Iамма обручения мышей па установке 111 УР I и дозах, Олимп к I ролно'ичатшмм (6./> 6,75 Гр) Мощность дозы соо.твлм'ы

1.3 Гр/мин. Механический комнонеш KI'MII моделировали путем начоженип мышам на мяжие 1каии задних конечностей зажимов с металлическими и/та-сшнками (Кулагин 13.К., 1963).) Продолжительность к(<мнрсссии составпяла 1.0 -- 1,5 ч, чти обеспечивало летальность 30 40 "ó жнвошых 1равма наносилась через 10 15 мин после облучения.

Моделирование комбинированно!о мсхано-химнчссиого поражения осуществляли путем подкожной зафавки мышей сернистым ипритом в до «ах ЛД к, - ЛД in (Козяков В.П. с соавг., 1904) с последующим нанесением компрессионной травмы. Интервал времени между отравлением и механическим воздействием составлял 20 - 30 мин.

Наблюдение за животными осуществляли в течение 30-суг после воздействия. Тяжесть течения комбинированной травмы оценивали по выживаемости и средней продолжительности жизни подопытных животных.

Методы оценкн состояния иммунной системы. Иммунологические исследования включали определение основных характеристик клеточного и гуморального иммунного ответа, функциональной активности фагоцитов, количества клеток лейкоцитарного ряда, концентрации в сыворотке крови провоспалительных цитокинов. Определяли относительную массу тимуса (Дн-тоненко В.Т. с соавг., 1986), спеиень формирования реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) на эритроциты барана (Беляков И.М. с соавг, 1992), число антителообразующих клеток (ДОК) в селезенке по Jeme N.K. и Nordin A.A. (1963), окислительно-восстановительную активность перитонеаль-ных макрофагов (Lokaj J., Oburcova Р., 1975), количество лейкоцитов в периферической крови (Неменова Ю.М., 1972), активность фактора некроза опухолей (ФНО-а) в сыворотке крови (Hogan М.М., Vogel S.N., 1988). Исследования проводили через 1 и 3 сут после воздействия.

Препараты цитокинов. В ходе исследования оценивали иммупорегуля-торггое действие интерлейкина-ф (ИЛ-Iß) и интерлейкина-2 (ИЛ-2) человека Использовали рекомбниантные ИЛ-Iß производства ГПИИ ОЧБ (Санкт-Петербург) и ИЛ-2 производства ООО «БИОГНХ» (Санкт-Петербург). Доза

Таблица

Общая характеристика исследований

задачи исследования

Экспериментальные модели

Исследуемые показатели

Методы исследования

! Сроки иссле- i

! дования после ¡ воздействия

i Количество ¡

животных

Число лейкоцитов в

Изучение реакций им- ! Ралиационно-мунной системы в оан- I механическое ний период комбиниро- I поражение

ванных | острое гамма-облучение

Метод подсчета

в камере Горяева периферической крови ¡ (НеменоваЮ ^_ ,972)

1. 3 cvt

поражении

Оценка иммуномодули- ¡ i руюшего эффекта интер-! лейкина-113 в ранний пе- j риод ;

чомбинированных I поражений i

(ЛД

40-71! 1Ü /

: Оценка иммуномодули- | ¡ рующего эффекта интер- ¡ лейкима-2 в ранний пери-{ од

комбинированных ! поражений I

механическая компрессионная травма (продолжительность компрессии 1,0- 1,5 ч)

Механо-химическое поражение

острое отравление ипритом (ЛД 16-50.30)

механическая компрессионная травма (продолжительность компрессии 1,0- 1,5 ч)

! Выживаемость и сред- Í няя продолжительность жизни животных

Ежедневный учет гибели животных

В течение ЗОсуг

124

590

¡Определение относитель-: | Весовой индекс тимуса 1 ной массы тимуса (Анточ 1.3 сут : 190 ¡ненко В.Т. с соавт . 1986): ! 1

Количество АОК в ce- i _ . Метод локального гемо-лезенке при иммуниза- .. |лиза в геле агарозы (Jeme ции эритроцитами оа- |rk и Nordm А.А., 19Ó3) рана ; 1 сут ; 150 i

Определение местной Интенсивность реакции _ 1 г воспалительной реакции | , | ГЗТ при иммунизации , ,.., г ! сут 90 г - - I (Беляков И.М с соавт., ' эритроцитами барана ! , ! ; 1 1992) |

Окислительно- I Тетразолиевый метод восстановительная ак- | (Lokaj l.. OburcovaР., тивность .»«крофагов ! 1975) 1,3 сут 114 i

Активность ФНО в сыворотке крови Цитотоксический метод I i (Hogan М М., Vogel S.N.,| 1, 3 суг | 244 1988) i i

! Всего: 1502

ИЛ-1Р составляла 0,05 мг/кг, ИЛ-2 - 25000 - 250000 МЕ/кг. Цшокины шадлиим в 0,2 мл изотонического раствора внугрибрюшинно в различные сроки до (72 -24 ч), а также после (0,5 -72 ч) воздействия ([»акторов.

Общая схема экспериментов представлена в табл. 1.

Полученные результаты обрабатывали методами вариационной статистки с использованием (-критерия Стьюдеша. ЛД>п токсиканта определяли с помощью иробит-анализа (Беленький М.А., 1963). Для выполнения статистических функций использовали пакет прикладных программ СЗй версии 3.1 (Ки-реев О.В. с соавт., 1997).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ Иммунологические реакции в ранний период комбинированных поражений.

Ответная реакция иммунной системы на комбинированное радиационное поражение имела существенные отличия по сравнению с изменениями, возникающими при облучении и механической травме в отдельности (табл. 2).

Нанесение механической травмы одновременно с облучением не приводило к характерному для травмированных животных лейкоцитозу. Количество лейкоцитов в крови через 1 сут после КРМП было значительно снижено (1,4 ± 0,12 107л) и соответствовало степени лейкопении у облученных животных. Через 3 сут после КРМП наблюдалось дальнейшее прогрессирование постлучевой лейкопении.

Доминирующее влияние лучевого компонента на иммунологические проявления комбинированной травмы заметно отражалось на состоянии лимфоид-ного аппарата. Через 1 сут после компрессии мягких тканей снижение относительной массы тимуса по сравнению с контролем составляло 50 % (р < 0,05). У мышей, которым наносили травму на фоне облучения, относительная масса тимуса соответствовала значениям, полученных в опытах на животных с «чистым» облучением, и была на 34 % (р < 0,05) ниже, чем при изолированном ме-

1аолииа -

Иммунологические сдвиги через 1 сут после комбинированного оадиаиионно-механического поражения у мышей

Показатели I лейкоцитов в 1 крови ( 10'/л)

I НСТ-активность

Количество I ! количество

Масса тимуса , ., АОК/селезенку , „,, , _

(весовой индекс)! ( ю1) реакции, %) таоолическии ре-

I ЛПС"

ГЗТ (индекс | макрофагов (ме-1 индУш«юванная !

зерв, %)

активность ФНО-сс| в сыворотке крови!

СЕд/мл)

Контроль (интактные)

7.5 ± 0.83

0.12 ±0.01

32.8 ±5.3 I 33.6 = 3.6

50.0 ± 4.2

<80

1 компрессионная I

травма (1 ч) I

.25 ± 0.6*

I | ! 5120*

0.06 ±0.004* | 14.4 ±3.9* | 21.3 ± 1,7* | 11,8 ±0.9* | Ш60Т5120)

Облучение (6.75 Го)

12.9 ±0.34*,**

0.04 ± 0.003*,** I 2.6 ± 0.8*,** 16.2 ± 1,4*,** I 36.6 ± 3,4*,**

160** ! (80-г-160)

КРМП 11.4 ±0.12*.**

0.04 ± 0.003*.** I 1,1 ±0.4*,** \ 14.1 ± 1.2*.** I 6,4±0,5*,** !

5120* (5120+102401

Каждая группа состояла из 6 - 10 мышеи.

* - различия достоверны (р < 0,05) по сравнению с контролем (интактные;;

** - различия достоверны (р < 0,05) по сравнению с группой животных, подвергнутых компрессионной травме.

ханическом славлеиии. Аналогичные изменения были установлены спустя 3 сут после КРМП.

Снижение массы тимуса отчетливо коррелировало с депрессией аигите-логенеза. Степень уменьшения образования АОК в селезенке при иммунизации мышей эритроцитами барана через 1 сут после облучения была значительнее (в 5,5 раза, р < 0,05) по сравнению с компрессионной травмой. Комбинированное радиационно-механическое воздействие приводило в этот срок к подавлению иммунного ответа у мышей, как и изолированное облучение.

Наряду с ингибированием гуморального иммунного ответа на тимусзави-симый антиген, в ранний период КРМП наблюдались аналогичные сдвиги в реакциях клеточного иммунитета. Комбинированное воздействие механического и радиационного факторов сопровождалось к исходу первых суток угнетением формирования ГЗТ, также сопоставимым с показателями у облученных животных.

Подавлению реакции ГЗТ при КРМП соответствовало более выраженное по сравнению с механической травмой ограничение метаболического потенциала макрофагов.

В то же время, отличия в реакции организма на механическую травму, обусловленные радиационным фактором, не были доминирующими при оценке продукции провоспалительных цитокинов. К исходу первых суток после компрессии мягких тканей в сыворотке крови регистрировался высокий уровень ЛПС-иидуцированной активности ФИО. При КРМП концентрация ФИО в системном кровотоке в этот срок соответствовала значениям, установленным у мышей с изолированной компрессионной травмой.

Следовательно, отличительной особенностью патологических изменений раннего периода КРМП является более выраженное по сравнению с механической травмой угнетение инициирующих антителогенез клеточных, в том числе Т-клеточных взаимодействий, обусловленное пострадиационной шпонлазией

коспнно мозга и 1 имуса, а также высокая активность цитокин-продуцирующих структур, ответственных за формирование системного воспалительного ответа.

Установленные изменения иммунного реагирования могут иметь отношение к отягощению исходов поражения. Эксперименты показали, что изолированная компрессионная травма сопровождалась гибелью 30 % мышей. Летальные исходы регистрировались в первые 7 сут после сдавления. Комбинация облучения с механической травмой обусловливала в этот период смертность 50 % животных. В последующие сроки летальность мышей с КРМП достигала 70 %.

К аналогичным негативным изменениям в иммунной системе приводила затравка мышей сернистым ипритом. При этом определялся отчетливый дозо-зависимын характер иммунодепрессивного действия токсиканта. Угнетение иммунного ответа наблюдалось при затравке мышей ипритом в дозе ЛД 16. В первые 3 сут после его введения продукция АОК была снижена более чем на 30 - 40 % (р < 0,05). С увеличением затравочной дозы иприта до ЛД ?о степень подавления иммунного ответа существенно возрастала. После введения токсиканта в среднелетальной дозе продукция АОК на тимусзависимый антиген снижалась в течение первых 3 сут боле чем на 54 - 80 % (р < 0,05), в целом соответ-ст вуя результатам, установленным на модели среднелетапьного радиационного поражения.

Угнетение гуморального иммунного ответа отчетливо коррелировало с динамикой снижения массы тимуса. В условиях отравления ипритом в средне-летальной дозе степень редукции тимуса к исходу 3 сут достигала 70 % (р < 0,05).

Следовательно, одним из звеньев патогенеза ипритного отравления является раннее развитие иммунной недостаточности по клеточному и гуморальному гипу, что соответствует представлениям о радиомиметическом действии иприта и его производных (Луйк А.И., 1974; СошПег ,1.-Р.е1 а1., 1990). Есть основания полагать, чго установленный характер повреждений в иммунной системе

также будет являться одним из факторов отягощения механической травмы Действительно, как и на модели KPMIT, сосшяние мышей, иодвер! нутых механическому (¡давлению мягких тканей на фоне за i райки иириюм, было значи телыш тяжелее по сравнению с изолированной травмой Компрессионная трав ма в комбинации с отравлением ипритом в дозе ЛД зн сопровождалось в первые 7 сут после воздействия повышением летальности с 40 % до 70 %.

Полученные результаты позволяют заключить, что усыновленные проявления иммунодспрессии радиационной и химической этиологии могут существенно отягощать течение механической травмы. Тем не менее, при очевидном вкладе каждого из механизмов иммунной дисфункции в танатогенез рассматриваемых вариантов комбинированных поражений, представлялось необходи мым оценить значимость основных иммуполот ических нарушений в проявле шш синдрома взаимного отягощения. Петь основания полшать, что для решения этой задачи патогенетически оправданным будет использование иммунорс-гуля горных свойств таких цитокинов, как нигерленкин-1 (¡ и интерленкин-2 (Кетлинский С.А., 1998, 1999; Рождественский Л.М., 1997, 1999; Смирно» МП , 1998, 1999).

Пммуиомодулирутшцие эффекты нигерлейктн1а-1|1 и раннем периоде комбинированных поражений

В условиях изолированною облугчения мышей в дозе 6,75 Гр ИЛ-1|! обла дал как профилактическим, так и лечебным эффектом, чш соответствует дан ним о радиопротективных и радио терапевт ических свойствах данною цитокп на (Рогачева С.А., Симбнрцев А.С., 1997; Рождественский JI.M, 1997, 1948. Чигарева Н.Г., 1998). Однократная внутрибркшншная иньекння HJM|3 мышам за 24 - 72 ч до облучения повышала выживаемость с 30 % до 60 80 % Оптимальный интервал лечебного применения Ш1-1[) составлял 2 6ч после радиационного воздействия Эффект питокппа составлял при эюм в срелнем 30 % Молифиппруюшсе дейеттше Ш1-1|1 при КРМИ су шепвеино отличалось oí >ф

фекта, наблюдаемого у облученных животных. Однократная профилактическая иньекнич мышам ИЛ-11) за 24 - 72 ч до воздействия не влияла на устойчивость животных в ранние сроки после КРМП, однако предупреждала гибель 40 - 50 % мышей, в период проявления лучевого компонента КРМП. В контрольной группе к 30 сут наблюдения выживало не более 20 % мышей. В то же время, терапевтическое введение животным ИЛ-ф в дозе, эффективной для раннего лечения острого лучевого поражения, не только не повышало, а, напротив, су-шест пенно отягощало течение и исход комбинированной радиационной травмы. Отрицательный прогноз для жизни практически не зависел от сроков применения ИЛ-ф (0,5 - 24 ч). Во всех случаях уже в первые 7 сут после КРМП наблюдалось снижение выживаемости мышей с 50 % до 10 - 20 %. В последующие сроки погибали все оставшиеся животные. Отрицательное действие ИЛ-ф при введении в ранние сроки после КРМП, вероятно, связано с особенностями ответной реакции организма на тяжелое механическое повреждение. Известно, чго инициация воспалительных реакций, индуцируемых ИЛ-1, может привести к усугублению посправматической иммуносупрессии (Сачек М.Г. с соавт., 1994; Пивоварова Л.II. с соавт., 1996). Эксперименты показали, что использование ИЛ-ф в ранние сроки после механической травмы, как и в случае моделирования КРМП, усиливало летальность мышей с 40 % до 70 - 80 %. На этом основании следует предположить, что ИЛ-ф одновременно с активацией темоиммунопоэза индуцирует усиление посправматической острофазовой реакции организма, в том числе секрецию провоспалительных нитокннов, усугубляя характерные для нерадиационного компонента КРП метаболические и сосудистые расстройства (Будагов Р.С., 1992; Ульянова Л.Г1 с соапт., 1997). Анализ влияния ИЛ-ф на содержание лейкоцитов, а также активность ФИО в периферической крови мышей, подвергнутых компрессионной травме и КРМП, подтвердил это предположение. Было установлено, что в условиях механической травмы, облучения и КРМП ИЛ-ф обеспечивал 'Мобилизацию лейкоцн юв п системную циркуляцию (рис. 1).

20 18

Я1

1 14 I 12

1 10

8 8

§ б

I 4

11,4.

0.2

16Л

12,)

компрессионная травма

■ ИЛ-1

□ 0,9 % раствор N¿01

3 8 V

{ГГ;:1 2 2

" -г-

оолучсние

2,6 Ь*

1.4

КРМП

Рис. 1. Влияние интерлейкина-1|) на количество лейкоцитов в крови мышей через 1 сут после компрессионной травмы, облучения и КРМ11.

В ю же время, наряду с проявлением лейкошпмобилизующих своисш, под влиянием Ш1-1|3 наблюдались выраженные изменения активности ФИО. При введении ИЛ-1Р через 6 ч после механической травмы и КРМП активность ФИО в сыворотке крови к исходу первых суюк достигала значений, более чем в 2 раза (р < 0,05) превышающих уровень у пораженных живо I пых, не получавших цитокин (табл. 3).

Таким образом, реализация лейкоцишобилизуюшем активной и ИЛ-1|3 ь условиях КРМП нивелируемся одновременной индукцией нровоспалшельныч циюкинов, чю имеет непосредственное отношение к панненетическим механизмам отягощения рассматриваемого варианта комбинированною поражения Совершенно очевидно, что, несмотря на радиотерапевшчеекий эффект Ш1-1|). ею применение в качестве средства раннею лечения рациапионных поражений в комбинации с механической травмой противопоказано

Таблица 3

МПС <ин,туцпронанн;1я активность ФПС) п сыворотке крови мышей через 1 | после компрессионном травмы и К1'МП при введении ннтерлейкина-ф

Варнанил опытов Активность ФИО, Ед/мл

Итерлейкин-ф 0,9 % раствор NaCI

омпрессисшнач травма 4 облучение 10240 ♦ (5120-10240) 5120 (2560+5120)

<омпрессионн;ш травма 10240 * (10240= 20480) 5120 (2560 f 10240)

Контроль (интактные) <80 <80

В скобках значения доверительною ин-ервала медианы мри вероятности 95 %. *- различия достоверны (р < 0,05) по - р мнению с группой мышеи, получавших в анплот ичный срок солевой изотони':' ский раствор.

Данное положение полностью подтвердилось результатами оценки эф-■ективносш ИЛ-1[! в ранний период компрессионной травмы, осложненной притнон интоксикацией. Введение цитокина п первые часы после затравки ышей ипритом повышало выживаемость мышей на 20 %, а также увеличивало редшою продолжительность жизни животных с 5,5 сут до 7,0 сут (р < 0,05). [рнменсние ИЛ-ф в ранние сроки после ипритного отравления в комбинанин с ехлничссгсой компрессионной травмой, как и в случае его использования па юме КРМП, сопровождалось усилением гибели животных. Инъекции ИЛ-ф в ервые 4 ч после травмы и отравления увеличивали число летальных исходов а 20 - 30 "о. а также вдвое сокращали продолжительность жизни потибших мшей.

Полученные результаты позволяют заключить, что коррекция проявле-ий гематологического синдрома радиационной и химической этиологии ни-грленкнном-ф п дозах, эффективных для стимуляции воесгановлемит коепто-озговою кроветворения, отягощает течение раннего периода кпмбинпровяп-ои травмы. Одним из патогенетических механизмов, участвующих в развитии гнзнеопаснмх расстройств, является усиление под влиянием ИЛ-ф активности

щпокинов, опосредующих острофазовую реакцию органпша на повреждение Изучение иммуномодулнруютцих эффектов ИЛ-1|1 в раннем периоде KI'MIl 1 механо-химической травмы свидетельствует о бе »условном про)пнопокалашк к использованию данного цитокина в схемах раннего лечения комбинирован них поражений, сопровождающихся избыточной продукцией провосналшелт, т, 1 к цишкипов, в частности, фактора некроза опухолей.

Иммуномодулнрумщне эффек ма ингерлейнтша-2 и раннем периоде комбинированны* поражений

Иные результаты были получены при оценке иммуномодулпрующич зф фекюв ИЛ-2. В условиях среднелеталыюго облучения ИЛ-2 в огличие от ИЛ Iß радиопрофилактическим действием не обладал. Применение ИЛ-2 после об лучения также оказалось малоэффективным. Вполне очевидно, что при остром радиационном поражении активация роста Т-клеток является недостаточной для усиления продукции иммунорегуляторных факторов, контролирующих восстановление пула стволовых кроветворных клеток. Вероятно, иммуномол) лирующее действие ИЛ-2 будет в наибольшей степени проявляться при патолч гических состояниях, сопряженных с преимущественным подавлением 1 клеточного звена иммунного реагирования. Как показали эксперименты, дну кратная инъекция ИЛ-2 через 0,5 и 4 ч после механической компрессии мжкнч тканей обеспечивала значительное повышение выживаемости мышей. Степень формирования устойчивости достигала 90 %, чю на 40 % выше по сравнению с показателями у травмированных животных, получавших солевой изотоннче ской раствор. Таким образом, применение основного индуктора Т-клеточжно иммунитета - интерлейкина-2 в ранний период механической травмы способ авует восстановлению функциональной активности Т-лимфоцито» и, в первую очередь, Т-хелиеров 1 типа, что находит отражение в ряде pa6oi (Крылов К М с соавт., 1997; Ливоварова Л И, 1999; Rohr F., Iratchei N., 1992). Максимальный эффект ИЛ-2 установлен в дозе, используемой в целях ранней терапии ра

тианионного поражения. Можно предположить, что нммуномодулиру томите >ффс(пм ИЛ-2 п условиях одновременного воздействия лучевою и механическою факторов будут сохранять черты сходства, характерные для адаптационных реакций ортанизма на вветение ннтокнна при изолированных повреждени-<1х, а. следовательно зависеть от периода рашития комбинированной травмы. Гепльтаты и ¡учения эффективности ИЛ-2 на модели КРМП подтвердили это предположение. Применение ИЛ-2 в ранний период радиационно-механического поражения, в отличие от ИЛ-ф, приводило к снижению числа летальных исходов. Как и в условиях изолированных вошенствий, оптимальные результаты раннею лечения получены при двукратном введении цигокина в первые часы после КРМП. Такое использование ИЛ-2 обеспечивало максимальную устойчивость животных (100 %) в период преобладания механическою компонента комбинированного поражения и не оказывало существенного влияния на динамику гибели в период преобладания лучевого компонента. Высокая степень защиты цитокином раннего периода КРМП определяла увеличение выживаемости животных к периоду восстановления.

Таким образом, применение ИЛ-2 обеспечивает реальную возможность улучшения течения и исходов КРМП. Можно предположить, что в ранний период КРМП терапевтический эффект ИЛ-2 реализуется посредством компенсации механизмов, общих по патогенезу с постгравматическими изменениями и мало связаны с коррекцией нарушений, обусловленных радиационным фактором. Как показали эксперименты, в условиях КРМП ИЛ-2 не изменял лейкоцитарную реакцию мышеи в первые 3 сут после КРМП и компрессионной травмы. Применение тштокина после механической травмы и КРМП также не отражалось на уровне продукции опухоленекротизирующего фактора. В то же вре-ич, ИЛ-2 в значительной степени препятствовал редукции тканевых структур гимуса. угнетению клеточного и гуморального иммунного огвета, а также ме-шболической активности макрофагоп (рис. 2).

оесовои индекс

АОК/селезенка (10")

Таким обра юм, ИЛ-2 проявляет достаточно выраженную иммунологическою активность, тесно коррелирующую с его нротективным действием в условиях изолированной и осложненной облучением механической травмы. Несмотря на ограничение механизмов реализации корригирующего действия ИЛ-2 радиационным компонентом КРМП, отличительная особенность его иммуно-модулирующих свойств от ИЛ-ф заключается в возможности эффективного использования в схемах раннего лечения радиационно-механических поражений.

Результаты оценки эффективности ИЛ-2 на модели механо-химического поражения подтверждают этот вывод. Введение ИЛ-2 в ранние сроки после затравки ипритом, как и в случае изолированного гамма-облучения, не оказывало выраженного иммуномодулирующего действия, однако, отчетливо повышало устойчивость организма при комбинации ипритного отравления и механической травмы, что свидетельствует о значимости нарушений Т-хелперной активности лимфоцитов в патогенезе механо-химической травмы и целесообразности ее коррекции как вида патогенетической терапии.

В целом, результаты проведенных исследований показывают, что ИЛ-2 восстанавливает иммунную недостаточность, индуцированную комбинированным действием на организм повреждающих факторов механической, лучевой и химической природы. Существенно не изменяя проявления гематологического синдрома, замещение хелперной функции Т-лимфоцитов ИЛ-2 обеспечивает в период преобладания механического компонента комбинированной травмы компенсацию расстройств на уровне клеточных и гуморальных факторов иммунитета, а также метаболической активности макрофагов. Применение ИЛ-2 не сопровождается усилением посттравматической индукции провоспалитель-ных цитокинов, опосредующих острофазовую реакцию организма на повреждение. Это позволяет рассматривать препараты ИЛ-2 в качестве потенциальных средств ранней патогенетической коррекции иммунной недостаточности при

механических травмах, в том числе осложненных иммунодепрессивным деист вием факторов радиационной и химической этнологии.

ВЫВОДЫ

1. Экспериментально обоснован патогенетический принцип применена цитокинов в ранней терапии комбинированных поражений, вызванных денег внем на организм комплекса экстремальных экологических факторов.

2. Тяжелая механическая травма, нанесенная непосредственно после ьоз действия на организм проникающей радиации или отравления алкилнрутотцил агентом (иприт) в дозах, близких к среднелегальным, сопровождается усилением тяжести посттравматических расстройств В период преобладания проявлений механического компонента комбинированного поражения гибель живот ных увеличивается на 20-30 %, достигая 50-70 %.

3. Паготенез комбинированной травмы связан с нарушениями в иммунной системе. Иммунологические сдвиги раннего периода комбинированной радиационного (химического) поражения характеризуются угнетением посттравматической лейкоцитарной реакции, значительно более выраженной ш сравнению с неосложненной механической травмой редукцией тканевых структур тимуса, подавлением гиперчувствителытости замедленного пита и анпие-лообразования на тимусзависимый антиген, ограничением метаболическою резерва макрофагов.

4. Предопределяющая значимость иммунных расстройств раннею периода радиационно-механического (механо-хнмического) поражения принадлежит угнетению межклеточного взаимодействия на уровне Т-хелнеров - индукторов клеточного иммунитета, а также снижению кроветворной функции коеттшю мозта.

Компенсация дефицита клеточноопосредовапною иммунитета осуществляется путем активации продукции ниюкинов, ответственных за формирование системно! о воспалитечтнот о ответа.

5. Коррекция проявлений гематологического синдрома радиационной и нмической этиологии интерлеПкином-ip в дозах, эффективных для стимуля-ии восстановления костно-мозгового кроветворения, отягощает течение panel о периода комбинированной травмы. Выживаемость пораженных животных ри введении интерлейкина-1 р в первые сутки после воздействия снижается на

гмо%.

Одним из патогенетических механизмов, участвующих в развитии жиз-еоиаспых расстройств, является усиление под влиянием интерлейкина-1 р ак-твиосги клеточных структур, продуцирующих фактор некроза опухолей.

6. Перспективным способом ранней патогенетической коррекции меха-нческих травм, осложненных действием на организм проникающей радиации,

также алкилируюших агентов, является замещение хелперной функции Т-имфоцитов ишерлейкином-2. Существенно не изменяя уровень продукции пухоленекротизирутощего фаюора и степень выраженности лейкопении, ин-:рлсйкнн-2 препятствует угнетению клеточного и гуморального иммуитттета, а ткже моноцитарного механизма защиты, обеспечивая в период преобладания роявлений механического компонента комбинированной травмы устойчивость рганизма к повреждающим факторам.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Применение препаратов ингерлейкина-1 р в качестве средств раннего ечения костно-мозгового сшгдрома радиационной и химической этиологии ротивопоказано в случае комбинации этих поражений с тяжелой механнче-кой травмой.

2. Для эффектатного посстановлеггия иммунной недостаточности, инду-ированиой действием на организм комплекса факторов механической, лучевой

химической природы, перспективно использование средств на основе иитер-гйкина-2.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМИ ДПССКР ГАЦИП

1. Ронколейкнн в экспериментальной терапии эндотоксикоза при комби шфоиашюм радиациошю-мехаиическом поражении // Тезисы докладов XII науч. конф. молодых ученых академии. - СПб.: ВМедА, 19у6. - С. 63. (соаы Юабова ЕЮ)

2. Корригирующее действие шперлейкина-2 при иммунисупрсссни, ин дуцированной нлригом // Фундаментальные и прикладные проблемы соврс мешшн военной токсикологии: Сб. тез. 6-й Всеарм. науч. конф. 24-25 сенг. 199< I. - СПб., 1996. - С. 59 - 60. (соаьг. Юркевич Ю В., Куценко С.А., Сакфов С.Т Сергеев А. А )

3. Изучение характера иммунодепрессивного действия инрша в экспери менте // Фундаментальные и прикладные проблемы современной военной ток сикологии: Сб. тез. 6-й Всеарм. науч. конф 24-25 сент. 1996 г. - СПб., 1996. С. 140 141. (соавт. Юркевич Ю.В., Алексеева И.И., Хромов В Н., Сергеев А А.)

4. Эффективность цитокинов при остром отравлении ипритом в экспери меше // Актуальные вопросы военно-полевой терапии. - СПб.: ВМедА, 1997. -С. 148. (соавт. Юабова П.Ю. Юркевнч ЮВ, Владимирова О.О., Сатаров С I Сергеев А. А.)

5. Резистентность организма к компрессионной фавме па фоне радпаци 01И101 о поражения II Трети съезд по радиационным исследованиям, Москва 14-17 окг. 1997 г.: Тез. докл. - Нущино, 1997. - Т. 1. - С. 84 - 85. (соанг. Юрке вич Ю В, Юабова Н Ю )

6. Состояние иммунной системы при комбинированном раднацшшио механическом поражении // Актуальные проблемы и перспективы развит» военной медицины: - Науч ф / НИИ воен Медицины СПб., 1998 - Т. 1 - С 224 - 229 (соавт. Юркевич Ю Н , Юабова К Ю.)

20001. тип. АО «Нласшо.шмер* з.ЛУИ /¿¡у

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ремизов, Дмитрий Васильевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ ПРИМЕНЕНИЯ ЦИТОКИНОВ В РАННЕЙ ТЕРАПИИ КОМБИНИРОВАННЫХ ПОРАЖЕНИЙ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Механизмы развития иммунной недостаточности при действии на организм экологически неблагоприятных факторов и их комбинаций.

1.2. Иммунорегуляторные факторы в патогенезе комбинированных поражений.

1.3. Препараты ИЛ-1 и ИЛ-2 человека как возможные средства иммунокоррекции комбинированных поражений.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Лабораторные животные.

2.2. Препараты цитокинов.

2.3. Реактивы.

2.4. Питательные среды.

2.5. Моделирование комбинированного радиационное механического поражения.

2.6. Моделирование комбинированного механо-химического поражения.

2.7. Методы оценки иммунного статуса.

2.8. Методы статистической обработки экспериментальных данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ГЛАВА 3. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ В РАННИЙ

ПЕРИОД КОМБИНИРОВАННЫХ ПОРАЖЕНИЙ.

3.1. Комбинированное радиационно-механическое поражение.

3.2. Комбинированное механо-химическое поражение.

ГЛАВА 4. ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ ЭФФЕКТЫ

ИНТЕРЛЕЙКИНА- 1БЕТА В РАННЕМ ПЕРИОДЕ КОМБИНИРОВАННЫХ ПОРАЖЕНИЙ.

4.1. Комбинированное радиационно-механическое поражение.

4.2. Комбинированное механо-химическое поражение.

ГЛАВА 5. ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ ЭФФЕКТЫ

ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 В РАННЕМ ПЕРИОДЕ КОМБИНИРОВАННЫХ ПОРАЖЕНИЙ.

5.1. Комбинированное радиационно-механическое поражение.

5.2. Комбинированное механо-химическое поражение.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Патогенетическое обоснование подходов к применению цитокинов в ранней терапии комбинированных поражений"

Актуальность исследования. Резкий рост риска техногенных аварий и катастроф определил в последние годы новое направление в экологии, обобщенное понятием безопасность жизнедеятельности [2, 31]. Медико-биологические аспекты обеспечения данного вида экологической безопасности в аварийных условиях предполагают целенаправленное совершенствование средств медицинской помощи, применение которых рассчитано на чрезвычайные ситуации [30, 60, 63]. При этом учитывается высокая вероятность появления в очагах экологических бедствий различных вариантов комбинированных поражений, частота случаев которых может достигать 30 - 75 % [27, 53, 113]. Особо актуальной остается проблема ранней терапии комбинированных радиационных и химических поражений как патологии, присущей техногенным авариям на объектах атомной энергетики и химических предприятиях, а также боевым действиям с применением ядерного и химического оружия [21, 59, 72, 122].

Один из путей повышения эффективности раннего лечения комбинированных поражений может быть основан на современных представлениях об адаптационных возможностях системы иммунитета, во многом определяющей уровень резистентности организма, а также механизмах иммунных нарушений при экстремальных воздействиях [15, 55, 115]. Известно, что патогенез комбинированных радиационных поражений в значительной мере обусловлен недостаточностью механизмов иммунного реагирования [53, 76, 136]. При этом вклад радиационного компонента комбинированной травмы в иммунодепрес-сию является, как правило, доминирующим [18, 58, 62, 83,]. Выраженное модифицирующее влияние на иммунореактивность организма оказывают высокотоксичные вещества, в частности, обладающие алкилирующими свойствами [31, 96, 101, 102,]. Развивающаяся при отравлении ипритом гипоплазия и аплазия лимфоидной ткани и костного мозга приводит к быстрому снижению иммунного статуса, что также может выступать в качестве ведущего фактора отягощения различных патологических состояний [22, 37, 52, 61]. Однако до настоящего времени закономерности формирования иммунных адаптационных реакций в ранний период комбинированных радиационных и химических поражений изучены недостаточно. На основании имеющихся сведений не представляется возможным оценить значимость нарушений иммунологических сдвигов в патогенезе комбинированных травм, а, следовательно, обосновать принципы патогенетически оправданной иммунокоррекции. Реальный подход к решению этого вопроса открывается на основе использования эндогенных факторов межклеточных взаимодействий (цитокинов) в качестве биологических зондов направленной регуляции гемоиммунопоэза, воспаления, иммунного ответа [24, 91, 127]. Применительно к проблеме изучения механизмов имму-носупрессии и путей их коррекции при травматических повреждениях, осложненных проявлениями гематологического синдрома радиационной и химической этиологии, можно предположить, что наиболее перспективными для экспериментальной проработки будут эндогенные иммуномодуляторы интерлей-кин-1р и интерлейкин-2. Интерлейкин-1 (3 - ключевой медиатор «цитокиновой сети», важнейший регулятор пролиферации стволовых кроветворных клеток, обладающий выраженным стимулирующим действием на восстановительные процессы кроветворения после облучения, а также химиотерапии [46, 145,186]. Интерлейкин-2 способен замещать хелперную функцию Т-клеток, обеспечивая быстрое нарастание иммунного ответа, что находит подтверждение в исследованиях по коррекции посттравматического иммунодефицита [171, 206]. В связи с разработкой отечественных препаратов на основе рекомбинантного интер-лейкина-1 (3 (Беталейкин) и интерлейкина-2 (Ронколейкин) такие исследования могут представлять не только научный, но и практический интерес. Аргументированные доказательства целесообразности применения данных цитокинов в ранней терапии комбинированных радиационных и химических поражений отсутствуют.

Цель исследования. Целью работы явилось экспериментальное изучение закономерностей формирования иммунных адаптационных реакций при механической травме, модифицированной действием радиационного и химического факторов, а также патогенетическое обоснование подходов к применению ин-терлейкинов-1 и -2 в ранней терапии комбинированных радиационно-механических и механо-химических поражений.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

- изучить реакции иммунной системы в ранний период механической травмы, модифицированной острым гамма-облучением, а также отравлением ипритом;

- определить особенности иммунорегуляторного действия интерлейкина-1Р при механической травме, осложненной проявлениями костно-мозгового синдрома радиационной и химической этиологии;

- оценить значимость замещения хелперной функции Т-клеток интерлей-кином-2 в ранний период комбинированного радиационно-механического и ме-хано-химического поражений.

Научная новизна и практическая значимость исследования. Получены новые данные о закономерностях изменений адаптационных реакций системы иммунитета в ранний период механической травмы, модифицированной острым радиационным поражением, а также действием алкилирующего агента. Установлено, что гамма-облучение, а также отравление ипритом в дозах, близких к среднелетальным, усиливают иммунную недостаточность, обусловленную механической компрессионной травмой. Отличительными особенностями рассматриваемых вариантов комбинированных поражений, предопределяющими неблагоприятный исход, являются развитие иммунодефицита панцито-пенического типа с выраженной миелодепрессией, угнетением лимфопоэза, а также подавление Т-клеточноопосредованных и фагоцитарных механизмов резистентности. Доказана патогенетическая значимость иммунных нарушений раннего периода комбинированных травм на уровне Т-хелперов - индукторов клеточного иммунитета. Впервые получены данные о негативном влиянии посттравматической активации продукции фактора некроза опухолей в реализации радиотерапевтического действия интерлейкина-1(3. Обоснованы подходы к ранней терапии комбинированных поражений путем замещения хелперной функции Т-лимфоцитов интерлейкином-2.

Впервые определены особенности иммунных нарушений в раннем периоде комбинированных радиационных и химических поражений, что открывает перспективы исследований по разработке терапевтических мероприятий при данной патологии и вносит вклад в общую теорию патогенеза комбинированных поражений. Установлены параметры иммунологической активности ин-терлейкина-1р и интерлейкина-2 в ранний период механической травмы, модифицированной действием радиационного и химического факторов. Доказана перспективность использования интерлейкина-2 для иммунокоррекции комбинированных радиационно-механических и механо-химических поражений. и

Положения, выносимые на защиту:

1. Угнетение Т-клеточных ретуляторных механизмов, а также снижение кроветворной функции костного мозга являются ведущими патогенетическими факторами формирования иммунных расстройств раннего посттравматического периода, осложненного воздействием на организм проникающей радиации и алкилирующего агента.

2. Интерлейкин-1 р в радиотерапевтических дозах оказывает негативное влияние на тяжесть проявлений механического компонента комбинированного радиационного и химического поражений, опосредуя усиление продукции фактора некроза опухолей.

3. Коррекция хелперной функции Т-лимфоцитов интерлейкином-2 препятствует развитию дефицита клеточноопосредованного иммунитета, обеспечивая устойчивость организма в ранний период радиационно-механического и механо-химического поражений.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на XIII научной конференции молодых ученых академии (СПб, ВМедА, 1996), III Всероссийском съезде по радиационным исследованиям (М., 1997), Всеармейской научной конференции «Актуальные вопросы военно-полевой терапии» (СПб., 1997), Всероссийской конференции «Проблемы противолучевой защиты» (М., 1998), научно-практической конференции «Актуальные проблемы и перспективы развития военной медицины» (СПб, 1998). Материалы дис

Заключение Диссертация по теме "Экология", Ремизов, Дмитрий Васильевич

ВЫВОДЫ

1. Экспериментально обоснован патогенетический принцип применения цитокинов в ранней терапии комбинированных поражений, вызванных действием на организм комплекса экстремальных экологических факторов.

2. Тяжелая механическая травма, нанесенная непосредственно после воздействия на организм проникающей радиации или отравления алкилирую-щим агентом (иприт) в дозах, близких к среднелетальным, сопровождается усилением тяжести посттравматических расстройств. В период преобладания проявлений механического компонента комбинированного поражения гибель животных увеличивается на 20-30 %, достигая 50-70 %.

3. Патогенез комбинированной травмы связан с нарушениями в иммунной системе. Иммунологические сдвиги раннего периода комбинированного радиационного (химического) поражения характеризуются угнетением посттравматической лейкоцитарной реакции, значительно более выраженной по сравнению с неосложненной механической травмой редукцией тканевых структур тимуса, подавлением гиперчувствительности замедленного типа и антителообразования на тимусзависимый антиген, ограничением метаболического резерва макрофагов.

4. Предопределяющая значимость иммунных расстройств раннего периода радиационно-механическОго (механо-химического) поражения принадлежит угнетению межклеточного взаимодействия на уровне Т-хелперов - индукторов клеточного иммунитета, а также снижению кроветворной функции костного мозга.

Компенсация дефицита клеточноопосредованного иммунитета осуществляется путем активации продукции цитокинов, ответственных за формирование системного воспалительного ответа.

5. Коррекция проявлений гематологического синдрома радиационной и химической этиологии интерлейкином-1 (3 в дозах, эффективных для стимуляции восстановления костно-мозгового кроветворения, отягощает течение раннего периода комбинированной травмы. Выживаемость пораженных животных при введении интерлейкина-1 (3 в первые сутки после воздействия снижается на 30-40 %.

Одним из патогенетических механизмов, участвующих в развитии жиз-неопасных расстройств, является усиление под влиянием интерлейкина-1 (3 активности клеточных структур, продуцирующих фактор некроза опухолей.

129

6. Перспективным способом ранней патогенетической коррекции механических травм, осложненных действием на организм проникающей радиации, а также алкилирующих агентов, является замещение хелперной функции Т-лимфоцитов интерлейкином-2. Существенно не изменяя уровень продукции опухоленекротизирующего фактора и степень выраженности лейкопении, ин-терлейкин-2 препятствует угнетению клеточного и гуморального иммунитета, а также моноцитарного механизма защиты, обеспечивая в период преобладания проявлений механического компонента комбинированной травмы устойчивость организма к повреждающим факторам.

130

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Применение препаратов интерлейкина-13 в качестве средств раннего лечения костно-мозгового синдрома радиационной и химической этиологии противопоказано в случае комбинации этих поражений с тяжелой механической травмой.

2. Для эффективного восстановления иммунной недостаточности, индуцированной действием на организм комплекса факторов механической, лучевой и химической природы, перспективно использование средств на основе интер-лейкина-2.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ремизов, Дмитрий Васильевич, Санкт-Петербург

1. Абидов М.Т., Хохлов А.П., Нелюбов М.В., Сергиенко В.И. Роль макрофагов в патогенезе токсического синдрома// Эндогенные интоксикации: Тез. междунар. симп. 14-16 июня 1994 г. СПб., 1994.- С. 17-18.

2. Агаджанян H.A., Полунин И.Н., Турзин П.С., Ушаков И.Б. Экологическая безопасность человека и концепция выживания. М.; Астрахань: Изд-во Астрахан. гос. мед. академии. - 1998. - 85 с.

3. Александров В.Н. Патология иммунной системы при травме // Патол. физиология и эксперим. терапия.- 1982.- N 6.- С. 45-47.

4. Александров В.Н. Иммунная система в этиологии и патогенезе травматической болезни // Патофизиология экстремальных состояний.- СПб, 1993.- С. 32-36.

5. Александров В.Н., Пивоварова Л.П. Возможные механизмы нарушения регуляции функции микрофагоцитов при травматическом шоке // Нарушение механизмов регуляции и их коррекция,- М., 1989.-Т.2.-С. 699-700.

6. Анохин Ю.Н. Миграция лимфоцитов в организме в условиях внутреннего и внешнего облучения: Автореф. дис. . д-ра мед. наук.-Обнинск, 1981.19 с.

7. Антоненко В.Т., Лиссова З.И., Шевченко В.А. Влияние низкомолекулярного иммунорегуляторного фактора на формирование вторичных иммуно-дефицитов различного генеза // Иммунология и аллергия. Киев: Здоровье. -1986.-Вып. 20.-С. 86-88.

8. Банин В.В. Роль сосудистого эндотелия в патогенезе синдрома эндогенной интоксикации // Эндогенные интоксикации: Тез. междунар. симп. 1416 июня 1994 г. СПб., 1994.- С. 10-17.

9. Беленький М.А. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта.- Л.: Медицина, 1963.- 148 с.

10. Белобородов В.Б., Джексенбаев О.Ш. Эндотоксины грамотрицатель-ных бактерий, цитокины и концепция септического шока: современное состояние проблемы // Анестезиология и реаниматология.- 1991.- N 4.- С. 41-43.

11. Беловолова P.A. Посттравматические нарушения механизмов неспецифической резистентности, клеточных и гуморальных факторов иммунитета и их коррекция: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1992. - 36 с.

12. Беляков H.A., Симбирцев С.А. Респираторный дистресс-синдром. Ключевые патогенетические механизмы // Патофизиология экстремальных состояний." СПб., 1993.- С. 37-43.

13. Беляков И.М., Земсков В.М., Зажирей В.Д. Иммунокоррекция при экспериментальной ожоговой травме с помощью тимоптина // Иммунология. ¡992.-Л-4. С.22 25.

14. Бритун А.И., Макаров Г.Ф., Петров В.Н. Изменение неспецифических факторов иммунитета при глубоких термических ожогах на фоне облучения у крыс // Глубокие и обширные ожоги: Всесоюз. конф. по проблеме. М., 1979. -С. 54-55.

15. Будагов P.C. Ретикулоэндотелиальная система и резистентность организма к комбинированным радиационно-термическим поражениям // Комбинированные радиационные поражения.- Обнинск, 1984.- С. 73-78.

16. Будагов P.C. Обоснование методов профилактики и лечения токсико-инфекционных осложнений комбинированных радиационно-термических поражений // Мед. радиология. 1992. - Т. 37, № 9-10. - С. 41 - 44.

17. Будагов P.C. Структурные изменения в тимусе облученных животных, дополнительно подвергшихся термической травме // Радиобиология. -1982. Т. 22, вып. 2. - С. 278 - 279.

18. Будагов P.C., Будагова З.К. Изменение поглотительной способности ретикулоэндотелиальной системы при комбинированном радиационно-термическом поражении // Радиобиология. 1984. - Т.24, вып.З. - С. 383 - 385.

19. Вашетко Р.В., Масютин В.А., Бородай Е.А. Некоторые аспекты патологической анатомии и патогенеза осложнений разных периодов травматической болезни // Травма, шок, травматическая болезнь: Респ. сб. науч. тр.- СПб., 1993.-С. 32-37.

20. Владимиров В.Г., Гончаров С.Ф., Легеза В.И., Аветистов Г.М. Радиологические аспекты медицины катастроф. М.: Всерос. центр медицины катастроф "Защита", 1997. - 220 с.

21. Влияние иприта на иммунную систему // Зарубеж. воен. медицина.-1992.-N2.-С. 28-29.

22. Вядро М.М., Навашин С.М. Цитокины полифункциональные регуляторы защитных реакций в норме и при патологии // Антибиотики и химиотерапия.- 1989.- Т. 34, N 11С. 863-869.

23. Галкин A.A. Локомоторные свойства нейтрофилов и механизмы регуляции их движения // Успехи соврем, биологии. 1997. - № 6. - С. 690-703.

24. Генес B.C. Некоторые простые методы кибернетической обработки данных диагностических и физиологических исследований. М.: Наука, 1967.- 208 с.

25. Гончаров С.Ф. Современное состояние и перспективы развития Всероссийской службы медицины катастроф // Медицина катастроф. Служба медицины катастроф. 1997. - № 1. - С. 4-10.

26. Гринев М.И., Громов М.И., Цибин Ю.Н. и др. Интерлейкин-2 в комплексной детоксикационной терапии хирургического сепсиса // Анестезиология и реаниматология. 1994. - № 6. - С. 25-28.

27. Дмитриева Т.Б., Гончаров С.Ф. Всероссийская служба медицины катастроф //Воен. мед. журн. 1998. - № 1. - С. 14-23.

28. Довгуша В.В., Кудрин И.Д., Тихонов М.Н. Введение в военную экологию. СПб.: Воениздат, 1995. - 496 с.

29. Долгушин И.И. Иммунный ответ и пути его коррекции при экспериментальных травмах: Автореф. дис. . д-ра мед. наук.- Челябинск, 1980.- 38 с.

30. Долгушин И.И., Эберт Л.Я., Лифшиц Р.И. Иммунология травмы.-Свердловск: Б.и., 1989.- 188 с.

31. Заветная Г.Л., Берлакова Т.И., Ершова И.Н. и др. Приоритетные направления научных исследований по проблеме травматического шока // Травма, шок, травматическая болезнь: Респ. сб. науч. тр.- СПб, 1993.- С. 143-151.

32. Иванов A.A. Иммунокоррекция пострадиационного иммунодефицита с помощью иммуноглобулина // Первый Всесоюзный иммунологический съезд, Сочи, 15-17 нояб. 1989 г.-М., 1989. Т.1. - С. 312-313.

33. Клемпарская H.H., Горбунова Е.С., Добронравова H.H. Иммунотерапия экспериментальной острой лучевой болезни / Под ред. Н.Н.Клемпарской.-М.: Энергоиздат, 1981.- 102 с.

34. Кадагидзе З.Г. Цитокины и их использование в онкологии // Intern. J. Immunoreh. 1997. - N6. - P. 47-56.

35. Казначеев K.C. Механизмы развития цитокининдуцированного апоп-тоза // Гематология и трансфузиология 1999. - Т. 44, № 1. - С. 40-43.

36. Кашкин К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность // Клин. лаб. диагностика. 1999. - № 11. - С. 21-32.

37. Кетлинский С.А. Перспективы клинического применения рекомби-нантных цитокинов //Вестн. РАМН. 1993. - № 2. - С. 11-18.

38. Кетлинский С.А. Рекомбинантные цитокины // Мир медицины. 1998. - № 11-12.-С. 17-19.

39. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Иммунология для врача. СПб.: Гиппократ. - 1998. - 156 с.

40. Кетлинский С.А., Симбирцев A.C., Воробьев A.A. Эндогенные имму-номодуляторы.- СПб.: Гиппократ, 1992.- 256 с.

41. Киреев О.В., Кобзев A.C., Лядов В.Р. и др. Компьютерная биометрия: пакет CSS 3.1: Практикум по анализу данных / Под ред. В.Р. Лядова. СПб., 1997. - 156 с. (Информ. - аналит. б-ка; Вып.1).

42. Кириллова E.H. Влияние сублетального облучения и модифицирующих факторов на состояние иммунологических показателей у мышей в отдаленные сроки // Радиобиология.- 1984.- Т. 24, N 3.- С. 321-324.

43. Клемпарская H.H. Теоретическое и практическое значение результатов применения метода определения аутоантителопродуцирующих клеток у людей и животных // Проблемы аутоаллергии в практической медицине.- Таллин, 1975,- С. 3-5.

44. Кожевников B.C., Набиулин P.P., Лозовой В.П. Причины возникновения и роль иммунодефицита при травме // Вестн. АМН СССР. 1991. - № 12. -С.3-7.

45. Козлов В.А., Любимов Г.Ю., Вольский H.H. Активность цитохром Р-450 зависимых монооксигеназ и функции иммунокомпетентных клеток // Вестн. АМН СССР.- 1991.- N 12.- С. 8-12.

46. Комбинированные поражения / Под ред. И.А. Ерюхина, Г.И. Алексеева. Л.: ВМедА, 1990.- 86 с.

47. Комбинированные радиационные поражения: патогенез, диагностика и лечение // Зарубеж. воен. обозрение. 1997. - №1. - С. 24 - 29.

48. Комбинированные радиационные поражения: патогенез, клиника, лечение / Под ред. А.Ф. Цыба, М.Н. Фаршатова. М.: Медицина, 1993. - 285 с.

49. Конопляников А.Г. Радиобиология стволовых клеток. М.: Энерго-атомиздат, 1984. - 312 с.

50. Кулагин В.К. Материалы к патогенезу и терапии травматического шока // Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Л., 1961.-30 с.

51. Кулагин В.К. Перспективы разработки общей теории патогенеза комбинированных и сочетанных поражений // Патологическая физиология экстремальных состояний: Материалы Пленума правления Всесоюз. мед. о-ва патофизиологов. Томск, 1980. - С. 3-7.

52. Куценко С.А., Легеза В.И. Некоторые направления совершенствования медикаментозных средств, предназначенных для сохранения и восстановления боеспособности военнослужащих // Воен.- мед. журн. 1994. - № 2. - С. 57-59.

53. Луйк А.И. Исследование основных закономерностей поражения и восстановления системы крови при резорбтивном действии иприта // Материалы II конф. молодых ученых, 20-22 нояб. 1974 г.- Л., 1974.- С. 48-49.

54. Мамаджанов Т.М. Острая лучевая болезнь в комбинации с травмой печени (вопросы патогенеза, диагностики и лечения): Автореф. дис. . д-ра мед. наук.- Обнинск, 1992.- 39 с.

55. Маник В.М., Жиляев Е.Г., Иванченко A.B. Перспективы научных исследований по совершенствованию деятельности медицинской службы при авариях и катастрофах // Воен.- мед. журн. 1992. - № 3. - С. 4-8.

56. Мартынов Б.В. Патогенетическое обоснование иммунотерапии внутричерепных гнойно-воспалительных осложнений // Автореф. дис. . канд. мед. наук.-СПб., 1997.-22 с.

57. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. -Новосибирск: Наука, 1989.-344 с.

58. Маянский Д.Н. Современная эволюция идеи И.И. Мечникова о внут-рисосудистом воспалении // Иммунология. 1995. - № 4. - С. 8-14.

59. Медодические указания по отбору лекарственных средств и разработок на их основе новых методов лечения комбинированных радиационных поражений. М.; Обнинск: Б.и., 1991. - 13 с.

60. Методические материалы по экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытанию иммуномодулирующего действия фармакологических средств.- М.: Б.и., 1984,- 37 с.

61. Мишнев О.Д., Эттингер А.П., Щеголев А.И. и др. Количественное изучение активности дегидрогеназ гепатоцитов при системной эндотоксинемии // Бюл. эксперим. медицины 1995.- Т. 36, N 1.- С. 105-108.

62. Неменова Ю.М. Методы лабораторных клинических исследований.-М.: Медицина, 1972.- 424с.

63. Нестеренко B.C., Пискарев A.B. Изменение функций тонкой кишки крыс после радиационно-термического поражения // Радиобиология. 1983. - Т. 23, вып.З. - С. 404 - 406.

64. Нечаев Э.А., Фаршатов М.Н. Военная медицина и катастрофы мирного времени. М.: НИО "Квартет", 1994. - 320 с.

65. Никонова М.Ф., Тверскова Н.В., Ярилин A.A. Влияние фактора некроза опухолей на жизнеспособность и пролиферативную активность тимоци-тов // Иммунология.- 1991.- N 3.- С. 29-32.

66. Остапенко В.А. К патогенезу синдрома эндогенной интоксикации // Эндогенные интоксикации: Тез. междунар. симп. 14-16 июня 1994 г.- СПб., 1994.- С. 43-44.

67. Пальцев М.А. Цитокины и их роль в межклеточных взаимодействиях // Арх. патологии. 1996. - Т. 58, № 6. - С. 3-7.

68. Патогенез и лечение комбинированных радиационно-термических поражений / Под ред. А.Ф.Цыба, А.И.Бритуна.- М. Медицина, 1989.- 128 с.

69. Петров В.Н., Будагов P.C. Изменения уровня активности туморнекро-тического фактора в сыворотке крови после облучения и комбинированного радиационно-термического поражения // Радиац. биология. Радиоэкология. -1997.-Т. 37, вып. 1.- С. 30- 34.

70. Петров Р.В. Иммунология острого лучевого поражения.- М.: Гос-атомиздат, 1962.- 111 с.

71. Пивоварова Л.П., Арискина О.Б., Гуйда О.Г. Патогенетическая роль ИЛ-lß и ФНО-а в развитии осложнений шокогенной травмы // 1 конгр. патофизиологов России, Москва, 14-16 окт. 1996 г.: Тез. докл. -М., 1996. С. 125-126.

72. Потапнев М.П. Цитокиновая сеть нейтрофилов при воспалении // Иммунология. 1995. - № 4. - С. 34-40.

73. Потапнев М.П., Печковский Д.В. иммунорегуляция антимикробной активности нейтрофилов человека // Там же. 1995. - № 5. - С. 4-5.

74. Расулев Б.К. Взаимодействие иммунокомпетентных клеток при перитоните, индуцированном в облученном организме // Там же,- 1988.- N 1.- С. 80-83.

75. Расулев Б.К. Ранение живота с повреждением тонкой кишки при радиационном поражении организма в эксперименте (течение, морфо- и патогенез, лечение): Автореф. дис. . д-ра мед. наук.- Пермь, 1988.- 35 с.

76. Расулев Б.К. Иммунный ответ при течении перитонита на фоне облучения // Иммунология.- 1986.-N 6.- С. 81-82.

77. Редькин Ю.В., Соколова Т.Ф., Мирошкин O.A. Адаптивно-компенсаторные реакции системы иммунитета в патогенезе травматической болезни // Теоретические и практические аспекты проблемы травматического шока: Респ. сб. науч. тр.- JL: Б.и., 1991. С. 17-21.

78. Рогачева С.А. Лечебное дейстиве рекомбинантного иинтерлейкина-2 (ИЛ-2) человека при острой лучевой болезни в эксперименте // Радиац. биология. Радиоэкология. 1995. - Т. 35, вып. 2. - С. 237-243.

79. Рогачева С.А., Симбирцев A.C. Применение рекомбинантных интер-лейкинов-la и lß человека в качестве средств раннего лечения острой лучевой болезни в эксперименте // Там же. 1997. - Т. 37, вып. 1. - С. 61-67.

80. Рождественский Л.М. Интерлейкин-1 как средство экстренной противолучевой терапии и методологические вопросы предклинических исследований цитокинов // Проблемы противолучевой защиты: Материалы конф., Москва, 16-17 нояб. 1998 г. М., 1998,- С. 43-44.

81. Рождественский Л.М. Цитокины в аспекте патогенеза и терапии острого лучевого поражения // Радиац. Биология. Радиоэкология. 1997. - Т. 37, вып. 4.-С. 590-596.

82. Ронколейкин новые аспекты клинического применения: Материалы конф., Санкт-Петербург, 10 марта 1999 г. / СПб МАПО. - СПб., 1999. - 44 с.

83. Ронколейкин. Интерлейкин-2 человека рекомбинантный дрожжевой / Под ред. М.Н. Смирнова СПб., 1998. - 47 с.

84. Руководство по лечению комбинированных радиационных поражений на этапах медицинской эвакуации / Под ред. Е.А. Щербина. М.: Медицина, 1982.- 152 с.

85. Руководство по токсикологии отравляющих веществ / Под ред. А.И. Черкеса. Киев: Здоров'я, 1964.- 464 с.

86. Сачек М.Г., Косинец А.Н., Адаменко Г.П. Иммунологические аспекты хирургической инфекции.-Витебск, 1994,- 139 с.

87. Семенов В.А., Торбенко В.П., Ульянов М.И., Назаров В.А. Синдром длительного сдавления, осложненный острой лучевой болезнью.- М.: Медицина, 1974.-200 с.

88. Семина О.В., Семенец Т.И., Поверенный A.M. Интерлейкин-2 стимулирует колониеобразующую активность облученного in vitro костного мозга // Радиобиология. 1987. - Т. 27, вып. 3. - С. 381-384.

89. Сетко Н.П., Желудева Г.Н., Мазаева С.Г. О реакциях иммунной системы организма при комбинированном действии химических агентов // Гигиена и санитария.- 1989.- N 3.- С. 24-26.

90. Сидоренко Г.И., Федосеева В.Н., Шарецкий А.Н., Аристовская JI.B. Иммунотоксикология важнейшее направление исследований в гигиене окружающей среды // Там же.- 1989.- N 3.- С. 7-11.

91. Сидоров Д.А., Куценко С.А., Симбирцев A.C., Гребенюк А.Н. Перспективы применения рекомбинантного интерлейкина-lß для коррекции гематологического синдрома, индуцированного циклофосфаном // Там же. С. 157.

92. Симбирцев С.А., Беляков H.A. Патофизиологические аспекты эндогенных интоксикаций// Эндогенные интоксикации: Тез. междунар. симп., 14-16 июня 1994 г. СПб., 1994.- С. 5-9.

93. Торбинский A.M., Шиманко A.M. Лечение эндотоксикоза при генерализованной гнойной инфекции // Вестн. АМН СССР.- 19991.- N 7.- С. 40-42.

94. Ульянова Л.П., Кетлинский С.А., Будагов P.C. Исследование эффективности интерлейкина-lß при лечении комбинированных поражений // Там же. 1997. - т. 37, вып. 2. - С. 175-181.

95. Ульянова Л.П., Макаров Г.Ф. Резистентность к эндогенной и экзогенной инфекции при комбинированном радиационно-термическом поражении // Комбинированные радиационные поражения.-Обнинск, 1984.-С. 127-130.

96. Уманский М.А., Пинчук Л.Б., Пинчук В.Т. Синдром эндогенной интоксикации.-Киев: Наук, думка, 1979.-200 с.

97. Ухов А .Я., Федечко И.М., Нарепеха О.М., Елисеева С.И., Швайдец-кая Г.В. Иммунологические сдвиги в организме больных при множественных и сочетанных травмах // Клиническая хирургия. 1990. - № 4. - С. 8-9.

98. Фрейдлин И.С. Ключевая позиция макрофагов в цитокиновой регу-ляторной сети II Иммунология. 1996. - № 3. - С. 44-48.

99. Фур дуй Ф.И., Хайдарлиц С.Х., Мамалыга Л.М. Комбинированные воздействия на организм экстремальных факторов. Кишинев: Штиинца, 1985. - 140 с.

100. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Основные представления об иммуно-тропных лекарственных средствах // Иммунология. 1996. - № 6. - С. 4-9.

101. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. М.: Изд-во ВНИРО, 1995. - 219 с.

102. Хлоповская Е.И., Будагов P.C., Сухарева H.H. и др. Использование препаратов протозойного происхождения в качестве средств профилактики и ранней терапии КРП // Известия АН. Сер. Биологическая.- 1993.- N 2.- С. 227232.

103. Чухловин А.Б., Михайлова Н.Б., Афанасьев Б.В. // Радиационная биология. Радиоэкология. 1994. - Т. 34, вып. 4-5. - С. 537 - 543.

104. Шабашова Н.В. Лекции по клинической иммунологии. СПб.: Б. и., 1998. - 114 с.

105. Шанин В.Ю., Карпищенко А.И., Будко A.A. Возможности улучшения тканевого дыхания медикаментозными средствами при тяжелой сочетан-ной травме // Клин, медицина и патофизиология. 1996. - № 1. - С. 56-60.

106. Шляпников С.А., Бубнова H.A., Ерюхин И.А. Принцип цитокиновой терапии сепсис-синдрома // Вестн. хирургии им. И.И. Грекова. 1997. - Т. 156, №2.-С. 51-54.

107. Экологическая физиология человека. Адаптация человека к экстремальным условиям среды. М.: Наука, 1979. - 369 с.

108. Ярилин A.A. Действие ионизирующей радиации на лимфоциты (повреждающий и активирующий эффекты) // Иммунология 1988.- N 5.- С. 5-11.

109. Ярилин А.А. Клеточные основы действия ионизирующей радиации на иммунный ответ // Современные вопросы радиобиологии. М., 1980. - С.36-48.

110. Ярилин А.А. Радиация и иммунитет. Вмешательство ионизирующих излучений в ключевые иммунные процессы // Радиац. Биология. Радиоэкология. 1999. - Т. 39, вып. 1. - С. 181 - 189.

111. Ярилин А.А. Радиация и иммунитет. Современный взгляд на старые проблемы // Там же. 1997. - Т.37, вып. 4. - С. 597-603.

112. Ярилин А.А. Система цитокинов при иммунопатологии // Сб. тр. 1 Нац. конф. РААКИ. М., 1997. - С. 74-80.

113. Abraham Е., Lee R.L., Li-Han Chang. The role of interleukin-2 in hemor-rage-induced abnormalities of lymphocyte proliferation // Circ. Shock. -1986. Vol. 18.-P. 205-213.

114. Abraham E., Regan R., Li-Han Chang. Lack of effect of exogenous recombinant interleukin-2 on trauma-induced anormalities in lymphocyte proliferation // Crit. Care Med. -1986. Vol. 14, N 10. - P. 847-851.

115. Abraham E., Richmond N.J., Li-Han Chang. Effects of hemorragie on in-terleukin-1 production // Circ. Shock. 1988. - Vol. 25, - P. 33-40.

116. Aikawa N. Cytokine storm in the pathogenesis of multiple organ dysfunction syndrome associated with surgical insults //Nippon geka gakkai zasshi. 1996. -Vol. 97, N9. - P. 771 -777.

117. Ayala A., Urbanick: M.A., Herdon C.D., Chaudry I.N. Is sepsis induced apoptosis assocciated with macrophage dysfunction? // J. Trauma. 1995. - Vol 39, N 1. - P. 164-164.

118. Barbul A., Breslin R.J., Woodyard J.P., Wasserkrug H.L., Efron G. The effect of in vivo T-helper and T-suppressor lymphocyte depletion on wound healing //Ann. Surg. 1989.-N 4.-P. 479-483.

119. Bengtsson A. Cascade system activation in shock // Acta Anaesthesiol. Scand. Suppl. 1993. - Vol. 98. - P. 7-10.

120. Botha A.J, Moore F.A., Moore E.E. Early neutrophil sequestration after injury: a pathogenic mechanism for multiple organ failure // J. Trauma. 1995. - Vol. 39, N3. -P. 411-417.

121. Bowers G.J. The combined injury syndrom // Military Radiobiology / Ed. by J.J. Conklin, R.J. Walker. Orlando; San Diego: Acad. Press, 1997. - P.191-217.

122. Brown J.M., Grosso M.A. Harken A.H. Cytokines, sepsis and the surgeon // Surgery, Gynecology and Obstetrix. 1989. - Vol. 169. - P. 568-575.

123. Caty M.G., Guice K.S., Oldham K.T. et al. Evidence for Tumor Necrosis Factor-induced Pulmonary Microvascular Injury After Intestinal Ischemia-Reperfosion Injury // Ann. Surg. 1990. -Vol. 212, N 6.-P. 694-670.

124. Censini S., Bartalini M., Tagliabue A., Boraschi D. Interleukin-1 stimulates production of LTC 4 and other eicosanoids by macrophages // Lymphokine Res. 1989. - Vol. 8, N 2.-P. 107-114.

125. Cheadle W.G., Pemberton R.M., Robinson D. Lymphocyte subset responses to trauma and sepsis // J. Trauma. 1993. - Vol. 35, N 6.-P. 844-849.

126. Cheadle W.G., Wilson M., Hershman M.J., Bergamini D., Richardson DJ., Polk H.C. Comparison of trauma assessment scores and their use in prediction of infection and death // Ann. Surg. 1989. - Vol. 209, N 5. - P.541-543.

127. Christou N.V., McLean A.P.N., Meakins I.L. The biology of the immune response//JAMA. 1992.-Vol. 268, N20.-P. 2790-2796.

128. Coutelier J.-P., Lison p., Willems J. Les marqueurs lymphocytaries dans 1'evaluation du systeme immunitaire: reflexions a partird'une observation de patient expose a l'yperite // Ann. Med. Mil. Belg.- 1990.- Vol. 4.- P. 83-85.

129. Coutelier J.-P., Lison D., Simon O., Willems J. Effect of sulfur mustard on murine lymphocytes // Toxicol. Lett.-1991.- Vol. 59, N 4.- P. 143-148.

130. Dinarello C.A. Interleukin-1 // Rev. Infec. Dis.- 1984.-Vol. 6, N 1.-P. 1730-1732.

131. Dinarello Ch. A. Anti-cytokine strategics // Eur. Cytokine Netw.-1992.- Vol. 3,N 1.- P. 7-17.

132. Elkind M. Repair processis in radiation biology // Radiat. Res. 1984. -Vol.100, N4.-P. 425-433.

133. Erne N.K., Nordin A.A. Plaque formation by single antibody-producing cells // Science.- 1963.- Vol. 140, N 3 565.- P. 405-407.

134. Ertel E., Faist E., Nestle C. Dynamic of immunoglobulin synthesis after major trauma. Influence of recombinant lymphokines // Arch. Surg. 1989. - Vol. 124, N 12.-P. 1437-1442.

135. Ertel E., Faist E., Nestle C. Kinetics of inrterleukin-6 synthesis following major mechanical trauma // J. Surg. Res. 1990. - Vol. 48, N 6.-P. 622-628.

136. Faist E., Kupper Th.S., Baker Sh. Depression of cellular immunity after major injuri. Its association with immunomodulation // Arch. Surg. -1986. -Vol. 121, N9.-P 1000-1005.

137. Faist E., Licht K., Schinkel C. Gamma-interferon (g-IFN) driven monocytic cytokine release patterns ale highly differentiated and depend on inflammation induced states of cellular preactivation // J. Trauma. 1995. - Vol. 39, N l.-P. 163164.

138. Faist E., Newes A., Baker C.C., Strasser Th., Alkan S.S., Rieber P., Heberer G. Prostaglandin E 2 (PGE 2) dependet supression of interieukin-2 (IL-2) production in patients with major trauma// Ibid. - 1987. -Vol. 27, N 8. -P. 837-838.

139. Faist E., Newes A., Strasser Th., Walz A., Alkan S., Baker Ch., Ertel W., Heberer J. Alteration of monocyte function following major injury // Arch. Surg. -1988. Vol. 123, N 3. -P. 287-292.

140. Gadd M.A., Hansbourg J.F., Hoyt D.B., Ozkan N. Defective T-cell surface antigen axpression after mitogen stimulation // Ann. Surj. 1989. - N 1. - P. 112-118.

141. Gallicchio V.S., Hulette B.C., Messino M.J. et al Effect of varioces inter-leukins (IL-1, IL-2 and 11-3) on the in vitro radioproction of bone marrow progenitors (CFU-GM and CFU-MEG) //J. Biol. Resp. Mod. 1989. - Vol.8, P. 479-487.

142. Gardlund B., Sjolin J., Nilsson A. et al Plasma levels of cytokines in primary septic shock in humans: correlation with disease severity // J. Infect. Dis. -1995. Vol. 172, N 1. - P. 296-301.

143. Gaspari A.A., Jotse M.T., Rosenberg S.A. Dermatologie changes associated with IL-2 administrationn // JAMA. 1987. - Vol. 258, N 6. - P. 1624-1629.

144. Haak-Freudscho M., Young K.M., Czuprvnski Ch.J. Treatment of mice with human recombinant interleukin-2 augments resístanse to the facultative intracellular pathogen Listeria monocytogenes // Infect. Immun.- 1989.- Vol. 57, N 10.-P. 3014-3021.

145. Hensler T., Hecker H., Heeg K. Distinict mechanisms of immunosuppression as a consequence of major surgery // Ibid. 1997. - Vol. 65, N 6.-P. 2283-2291.

146. Hesse D.G., Tracey K.J., Fong I. Cytokine appearance in human en-dotoxemia and primate bacteremia // Surg. Gyneeol. Obstet.- 1988.- Vol. 166, N 6.-P. 147-153.

147. Hietanen T., Kellokumpu-Lehtine P., Pitkanen M. Action of recombinant interferons and IL-2 in modulating radiation effect on viability and cytotoxcity of large granular lymphocytes // Int. J. Radiat. Biol. 1995. - Vol. 67, P. 119-126.

148. Hirota M., Ogawa M. Immune response induced by surgical trauma // Nippon geka gakkai zasshi. 1996. - Vol. 97, N 9.-P. 721-725.

149. Hoch R.C., Rodriguez R., Manning T. Effects of accidental trauma on cytokine and endotoxin production // Crit. Care Mod. -1993. Vol. 21, N 6. - P. 839845.

150. Hogan M.M., Vogel S.N. Production of tumor necrosis factor by rlFN-7g 0-primed C3H/He 4j 0(L 4p Os 5d 0) macrophages requires the presence of lipid A associated proteins // J. Immunology.- 1988.- Vol. 141, N 2.- P. 4196-4202.

151. Kadar E., Sureda A., Mangues M.A. et al. Serum levels of G-CSF, IL-3, IL-6 and GM-CSF after a single intraperitoneal dose of rhG-CSF in Ithally irradiated B6D2F1 miee//Acta Haematol. 1997.-Vol. 98, N3.-P. 119-124.

152. Katakami Y., Nakao Y., Koizumi T. et al. Regulation of tumor necrosis factor production by mouse peritoneal macrophages: the role of cellular cyclic AMP // Immunology. 1988. - Vol. 64. - P. 719-724.

153. Keel M., Ecknauer E., Stocker R. Different pattern of local and systemic release of pro- and anti-inflammatory mediators in severely injured patients with chest trauma // J. Trauma. 1995. - Vol. 39.- N l.-P. 165-165.

154. Kendall A.S. Jowest dose IL-2 immunotherapy // Blood. 1993. - Vol.81, N 6. - P.1414-1423.

155. Klausner J.M., Morel N,, Paterson I.S. et al The rapid induction by inter-leukin-2 of pulmonary microvascular permeability // Ann. Surg. 1989. - Vol. 209, N l.-P. 119-128.

156. Kohl S., Loo L.S., Drath L.B., Cox O. Interleukin-2 protekts neonatal mice from lethal herpes simplex virus infection: A macrophage-mediated, inter-feron-induced mechanism// J. Infect. Dis. 1989.- Vol. 159, N2.- P. 239-248.

157. Krylov K.M., Pivovarova L.P., Smirnov M.N. et al. Roncoleukin in the threatment of severe burned patients // Abstr. of 5-th Scien. Meet. Europ. Soc. Chemother. Infect. Dis. Sn.-Pb., 1997. - 56 p.

158. Lesslauer W., Tabuchi H., Gentz M., Brockhaus M., Schlaeger E.J. Recombinant soluble TNF receptor proteins inhibit LPS-induced lethality in mice // Cytokine.- 1991.- Vol. 3, N 2.- P. 497-499.

159. Lokaj J., Oburkova P. Stanoveni tetrasoliumreductazove activity leuko-cyty (INT-test) //Immunologicky Zpravodaj.- 1975.- N 6.- P. 40-42.

160. Lowry S.F. Cytokine mediators of immunity and inflammation // Arch. Surg.- 1993. Vol.128, N 11. - P. 1235-1241.

161. MacVitti T.J. Theatry of radiation injury // Stem Cells. 1997. - Vol. 15, N2.-P. 263-268.

162. Meakins J.L. Surgeons, Surgery and Immunomodulation // Arch. Surg. -1991.-Vol. 126.-P. 494-498.

163. Messerschmidt O. Kombinierte StraHlenschader // Strahlenshtz Forsch. undPrax.-1980.-Bd21.-S. 193-206.

164. Michie H.R., Guillou P.J., Wilmore D.W. Tumor necrosis factor and bacterial sepsis // Brit. J. Surg.- 1989,- Vol. 76, N 3.- P. 670-671.

165. Michie H.R., Wilmore D.W. Sepsis and surgical sequlae (a hypothesis) // Arch. Surg. 1990.- Vol. 125, N4. - P. 531-536.

166. Miethke T. Supeantigen mediated shock: a cytokine release syndrome // Immunobiology. -1993. Vol. 188, N 3-4. - P. 270-284.

167. Migliorati J., Nicoletti 1., Nocentini J. Dexamethasone and interleukines modulate apoptosis of murine thymocytes and peripheral T-lymphocytes // Pharmacol. Res. 1994. - Vol. 30, N 1. -P. 43-52.

168. Neta R., Douches S.D., Oppenheim J.J. Inerleukin-1 is a radioprotector // J. Immunol. 1987. - Vol. 136, N3. - P.2483-2496.

169. O'Riordan M.G., Mannick J.A., Rodrick M.L. Cytokine response to surgery, trauma and burus // Clinical applications of cytokines role cytokines in pathogenesis, diagnosis and therapy / End by I.J. Oppenheim. New York Univ, Press, 1993.-P. 301-306.

170. Pape H.-C., Kotzerke J., Dwenger A. Reticuloendothelial system function, mediator release and endotoxemia after trauma // Circ. Shock. 1993. - Suppl. N. 2.-P. 62-62.

171. Patel R.I., Deen K.L, Youngs D. lnterleukin-6 is a prognostic indicator of outcome in severe intra-abdominal sepsis // Brit. J. Surg. 1994. - Vol. 81, N 9.-P. 1306-1308.

172. Pober J.S. TNF as an activator of vascular endothelium // Ann. Inst. Pasteur. Immunol. 1988. - Vol. 139, N 3. - P. 317-323.

173. Pons J., Gras G., Courberand S et al. Consequences of gama-irradiation on inflammatory cytokine regulation in human monocytes/macrophages // Jut. J. Radiat. Biol. 1997. - Vol. 71, N2. - P. 157 - 166.

174. Rodrick M.Z., Wood J.J;, O'Mahony J.B. Mechanisms of immunosupres-sion assoceateol with severe nonthermal traumatic injures in man: production of in-rterleukin-1 and 2 // J. Clin. Immunol. 1986. - Vol. 6. -P. 310-318.

175. Rohr A., Thatcher N. Clinical applications of interleukin-2 // Progr. Crowth Factor Res.- 1992.- Vol. 4.- P. 229-246.

176. Rose S., Marzi I. Pathophysiologic des Polytraumas // Zentralbl. Chir. -1996. Vol. 121, N 11.-P. 896-913.

177. Roumen R.M., Redl H., Schlag G. Inflammatory mediators in relation to the development of multiple organ failure in patients after severe blunt trauma // Crit. Care Med. -1995. -Vol. 23, N 3.-P. 474-480.

178. Sherry R.M., Cue J.I., Goddard J.K. Interleukin-10 is associated with the development of sepsis in trauma patients // J. Trauma. 1996. - Vol. 40, N 4.-P. 613616. - (Discussion P. 616-617).

179. Shimada M., Winchurch R.A., Belousif S., Robotham J.L. Effect of anesthesia and surgery on plasma cytokine levels // J. Crit. Care. 1993. - Vol. 8, N 2.-P. 109-116.

180. Shohsam S., Davenne D., Cady A.B., Dinarello C.A., Krueger J.M. Recombinant tumor necrosis factor and interleukin-1 enhance slom-wave sleep // Amer. J. Phisiol.- 1987.- Vol. 253, N 4.- P. 142-149.

181. Smialowicz R.J., Luebke R.W., Rogers M.M., Rowe D.G. Evaluation of the immunotoxic potential of chlordecone with comparison to cyclophosphamide// J. Toxicol. Environ. Health.- 1985.- Vol. 15, N 3.- P. 561-574.

182. SvobodaP., Kantorova 1., Ochmann J. Dynamics of interleukin-1, 2 and 6 and tumor necrosis factor alpha in multiple trauma patients // J. Trauma. 1994. -Vol. 36, N3. - P. 336-340.

183. Tang G.J. Similarity and synergy of trauma and sepsis: role of tumor necrosis factor-alpha and interleukin-6 (see comments) // Acta. Anaesthesiol. Sin. -1996. Vol. 34, N 3. - P. 141-149.

184. Teodorczyk-Injeyan J.A., Mc Ritchie D.I., Peters W.I, Lalani Sh., Girotti M.J. Expression and Secretion of IL-2 Receptor in Trauma Patients // Ann. Surg. -1990. Vol. 12, N 2. -P. 202-208.

185. Tsybin J.N., Tarelkina M.N., Gromov M.I., Rasumova N.K., Pivovarova L.P., Bubnova N.A. Immunoreabilitation is severe trauma and surgery with the ron-koleukin (human IL-2 from yeast) // Intern. J. Immunorehabilitation. 1997. - N 1. -Suppl.-P. 359-360.

186. Vinelli M., Ferrari F., Zanni V. Alterazioni del sistema immunitario cel-lulo-mediato nella sepsi post-traumatica // Minerva Anestesiol. 1994. - Vol. 60, N 3.-P. 87-94.

187. Watkins K.T., Duqrick P.S., Souba W.W. lnterieukin-6 and glucocoiti-coids Work to coordinate Augmented hepatic amino acid transport during trauma and sepsis//J. Trauma.-1993. -Vol. 35,N1.-P. 173-175.

188. West M.A., Li M., Close K. Preexposure to anoxia of septic stimul: dif-ferentialli regulate endotoxin (LPS) release of TNF, IL-6, nitric oxide and superoxide by macrophages // J. Trauma. 1993. - Vol. 35, N 1. - P. 173-173.

189. Willeins J.L. Clinical management of mustard gascasualties//Ann. Med. Mil. Belg.- 1989.- Suppl. 3.- P. 1-59.161

190. Winkelhake J.L., Gauny S.S. Human recombinant interleukin-2 as an experimental therapeutic // Pharmacological Reviews. 1990. - Vol. 42, N l.-P. 1-29.

191. Wood J.J. Inadequate interleikin-2 production // Ann. Surg. 1984. - Vol. 200.-P. 11-14.

192. Yao Y.M. Protective effect of monoclonal antibody of tumor necrosis factor-a for vital organs in a model suffering from intestinal ischemia reperfusion injury // Chung Hua Wai Ko Tsa Chin. 1993. -Vol. 31, N 8.-P. 497-500.

193. Yonermaru M., Stephens K.E., Yshizaka A. et al. Effects of tumor necrosis factor on PMN Chemotaxis, chemiluminescence and elastase activity // J. Lab. Clin. Med. -1989. -Vol. 114, N 6.-P. 674-682.

Информация о работе

Ремизов, Дмитрий Васильевич
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2000
ВАК 03.00.16

Диссертация

Патогенетическое обоснование подходов к применению цитокинов в ранней терапии комбинированных поражений - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы