Ответ генетически нестабильной сперматогенной системы ускоренно стареющих мышей линии SAMP1 на мутагенное воздействие

Кулибин, Андрей Юрьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Ответ генетически нестабильной сперматогенной системы ускоренно стареющих мышей линии SAMP1 на мутагенное воздействие
ВАК РФ 03.00.30, Биология развития, эмбриология

Автореферат диссертации по теме "Ответ генетически нестабильной сперматогенной системы ускоренно стареющих мышей линии SAMP1 на мутагенное воздействие"

На правах рукописи УДК 576.591

КУЛИБИН АНДРЕЙ ЮРЬЕВИЧ

ОТВЕТ ГЕНЕТИЧЕСКИ НЕСТАБИЛЬНОЙ СПЕРМАТОГЕННОЙ СИСТЕМЫ УСКОРЕННО СТАРЕЮЩИХ МЫШЕЙ ЛИНИИ 8АМР1 НА МУТАГЕННОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ

03.00.30 — биология развития, эмбриология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Москва 2006

Работа выполнена на кафедре эмбриологии Биологического факультета Московского Государственного Университета им. М.В. Ломоносова.

Научный руководитель:

доктор биологических наук

С.Т. Захидов

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук доктор медицинских наук, профессор

Е.И. Домарацкая А.А.Иванов

Ведущая организация:

Санкт-Петербургский Государственный Университет

Защита диссертации состоится 21 ноября 2006г в 15 ч 30 мин на заседании Диссертационного Совета Д.501.001.52 при Московском Государственном Университете по адресу: 119992, Москва, Ленинские горы, д.1 корп. 12, Биологический факультет МГУ, ауд. М-1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова.

Автореферат разослан__2006 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета, . >

кандидат биологических наук А-"^—'—" Калистратова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Сперматогенез — высокопродуктивный, многофазный, имеющий строгую пространственно-временную организацию биологический процесс, регуляция которого очень сложно организована. Актуальность его всестороннего изучения очевидна. Кроме того, система развития мужских половых клеток представляет собой удобную модель для изучения разных проблем экспериментальной эмбриологии, клеточной биологии, генетики, биологии размножения.

Несмотря на то, что многие фундаментальные закономерности процессов становления, развитая и дифференцировки сперматогенных клеток уже хорошо изучены на всех уровнях организации живого, исследовательская активность в области мужского гаметогенеза продолжает оставаться очень высокой. Это связано не только с чисто познавательным интересом к этой узловой проблеме биологии, но диктуется необходимостью решения постоянно расширяющегося круга актуальных практических задач, имеющих большое медико-биологическое и социальное значение. А именно — преодоление мужского бесплодия, изучение последствий действия повреждающих факторов окружающей среды, в том числе фактора времени, химиотерапии, а также усовершенствование методов искусственного оплодотворения, криоконсервации, трансплантации половых клеток, эффективного управления размножением сельскохозяйственных животных и вредных насекомых (Рузен-Ранге, 1980; МсСаггеу, 1998; Захидов, 1998; Hovatta, 2001; Khorram et al., 2001; Brinster, 2002; Hardy et al., 2002; Gosden, Nagano, 2002; Liu, Handelsman, 2003).

Ускоренно стареющие мыши SAM (senescence-accelerated mouse), проявляющие все признаки раннего физиологического угасания, были получены японскими исследователями (Takeda et al., 1981, 1994, 1997) путем близкородственного скрещивания и длительного отбора мышей линии AKR/J, страдающих наследственной формой вирусной лейкемии. В последние годы линии мутантных ускоренно стареющих мышей широко используются как модель для изучения механизмов, лежащих в основе нормального старения и его патологических форм, причин возникновения возрастных старческих болезней, а также для проверки эффективности средств, направленных на улучшение качества жизни и ее продление (Takeda et al., 1997; Захидов, 2003). Уникальной особенностью мышей линий SAM, выгодно отличающей их от других моделей ускоренного старения (Takeda et al., 1981; Troen, 2003; Warner, Sierra, 2003), является передача признака ускоренного старения по наследству.

Предыдущие комплексные исследования сперматогенеза у ускоренно

стареющих мышей SAM, в том числе мышей линии SAMP1 (senescence-accelerated mouse prone), создали надежную основу для развертывания широких экспериментальных исследований (Гордеева и др., 2001; Захидов и др., 1999, 2001, 2002; Гопко и др., 2003; Кулибин и др., 2005). Сперматогенная система мышей линии SAMP1, склонных к ускоренному старению, имеет свои специфические особенности, основной среди которых является сочетание сравнительно нормального течения сперматогенного процесса с высоким уровнем генетической нестабильности, значительно превышающим интенсивность спонтанного, естественного мутагенеза у нормально стареющих животных (Захидов и др., 2001, 2002, 2005).

До сих пор никто не анализировал перспективу развития мужских половых клеток у ускоренно стареющих мышей линии SAMP1 после мутагенного вмешательства. Между тем, важность таких исследований не вызывает сомнения, поскольку многое реальное в структуре строго детерминированного сперматогенного процесса остается закрытым для прямых наблюдений. Экспериментальный мутагенез позволяет глубоко проникнуть в сущность многих генетических и биологических явлений, индуцировать аномальное течение морфогенетических процессов и нарушение их рефляции. На этом фоне можно увидеть и познать закономерности, действующие только в условиях катастрофических изменений в строении и функционировании сложных биологических систем, неопределенности и нестабильности их развития.

Ранее было показано (Захидов,-1993; Захидов, Гордеева, 1998; Захидов и др., 1999), что в гонадах грызунов под влиянием генетически активных соединений разворачиваются два процесса - разрушительный, ведущий к появлению большого числа генетически аномальных клеток и массивной клеточной гибели, и созидательный, восстанавливающий нормальное течение сперматогенеза за счет пула стволовых сперматогониальных клеток; удалось впервые показать способность к пролиферации высокодифференцированных клеток Сертоли (Захидов и др., 1995), что принципиально меняет представления не только о свойствах данной клеточной популяции, но и о возможных путях восстановления сперматогенеза.

В этой связи исследования сперматогенеза у мышей SAMP1, развивающихся по механизму ускоренного старения, проводимые на базе химического мутагенеза, имеют огромную познавательную ценность. Они, в частности, дают возможность достичь результатов, отвечающих на принципиальный вопрос: будет ли после мутагенного воздействия динамически неустойчивая сперматогенная система «вдвойне мутантна» или и без того чрезвычайно высокий уровень генетической нестабильности преодолеть не удастся.

Лели и задачи работы. Цель настоящей работы — изучение динамики сперматогенеза у мышей линии SAMP1, склонных к ускоренному старению, подвергшихся однократному воздействию модельного мутагена дипина.

Цель исследования предусматривает решение следующих основных задач:

• Изучение особенностей индуцированного мутагенеза в системе развития мужских половых клеток.

• Количественная характеристика сперматогенных клеток различных типов и фолликулярных клеток Сертоли.

• Изучение особенностей строения сперматогенного эпителия.

• Цитоспектрофотометрический анализ содержания ДНК в мейотических и постмейотических клетках.

• Изучение пролиферативной активности клеток Сертоли.

Научная новизна работы. Впервые с помощью системного подхода изучена динамика развития генетически нестабильной сперматогенной системы у мутантных ускоренно стареющих мышей линии SAMP1 после мутагенного вмешательства.

Впервые показано, что у ускоренно стареющих мышей процессы хаотизации и распада сперматогенной системы, происходящие под действием дипина в генетически активной дозе, не носят необратимого характера. Мужские половые клетки сохраняют способность развиваться в условиях нарастающей хромосомной нестабильности в стволовых сперматогониях.

Впервые показана способность к пролиферации клеток Сертоли у ускоренно стареющих мышей в ответ на повреждающее сперматогенез действие мутагена.

Впервые установлено, что одним из источников регенерации сперматогенной системы в условиях индуцированного химического мутагенеза являются предшественники стволовых сперматогониев и клеток Сертоли, расположенные в сети семенника (rete testis).

Практическая иепность работы. Материалы диссертации могут быть использованы в курсах лекций по эмбриологии, биологии размножения и геронтологии для студентов университетов и медицинских вузов, а также при составлении методических пособий к курсам лекций по гистологии тканей в норме и при патологии.

Результаты настоящей работы представляют интерес для врачей — андрологов и специалистов в области репродуктивных технологий.

/iпробаиия работы. Материалы диссертации докладывались на Всероссийской научной конференции «Гистологическая наука в России в начале XXI века:

итоги, задачи, перспективы» (Москва, 2003), на Всероссийской конференции молодых исследователей «Физиология и медицина» (Москва, 2005), на конференции "Биология стволовых клеток: фундаментальные аспекты" (Москва, 2005), на семинарах кафедры эмбриологии МГУ и Института биологии развития им. Н.К.Кольцова РАН.

По материалам диссертации опубликовано 6 работ.

Структура работы. Диссертация состоит из введения, четырех глав обзора литературы, описания материала и методов исследования, семи глав собственных результатов исследования, обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 141 странице машинописного текста, содержит 24 рисунка, шесть таблиц. В списке цитированной литературы упомянуто 402 работ, из них 55 отечественных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Объекты исследований. В работе использованы половозрелые мыши линии БАМР1 (86 самцов) в возрасте 3-4 мес. В эксперименте со сравнительной оценкой пролиферативной активности популяции клеток Сертоли были использованы также половозрелые мыши-гибриды П (СВА*С57/В16) (7 самцов).

Постановка эксперимента, Отобранных для эксперимента самцов разделили на контрольную и опытную группы. Опытным животным однократно внутрибрюшинно вводили 0.2 мл дипина (разбавленного в 5% диметилсульфоксиде (ДМСО)) из расчета 30 мг/кг веса животного. Контрольным животным также однократно внутрибрюшинно инъецировали 0.2 мл 5% ДМСО. Забой животных производили путем дислокации шейных позвонков на 3, 7, 14, 21,28, 35, 56 и 100 сут после инъекции.

Фиксаиия материала, приготовление и окрашивание препаратов. Для цитогенети-ческого и количественного цитохимического изучения один из извлеченных семенников, разрезали пополам и готовили отпечатки сперматогенных клеток. Препараты фиксировали в 10% забуференном растворе формалина (рН 7.2) в течение 10-15 мин. После отмывали в проточной воде высушивали на воздухе и окрашивали по Фельгену в стандартных условиях: гидролиз в 5N НС1 при 37*С в течение 12 мин с последующим окрашиванием в реактиве Шиффа в течение одного часа при комнатной температуре.

Для гистологического исследования половинки семенника фиксировали в растворе Буэна в течение 4 сут. После проведения по спиртам восходящей концентрации и ксилолу, заливали в парафиновые блоки. Готовили срезы толщиной 5 мкм, высушивали и окрашивали гематоксилин-эозином по методу Эрлиха.

Для количественного анализа сперматогенеза целый семенник помещали в уксусно-глицириновую смесь на 2-3 нед. Затем гонады механически разрушали и суспендировали; полученную суспензию сперматогенных клеток анализировали в камере Горяева с помощью фазово-контрастного устройства при общем ув. 400*.

Д/икроядерный тест. Изучение интенсивности мутационного процесса в сперматогенезе у мышей проводили с помощью метода учета сперматогониальных и мейотических микроядерных аберраций, сигнализирующих о наступлении грубых изменений в структуре хромосомного материала.

Для определения частоты встречаемости клеток с микроядрами подсчитывали 300-500 сперматогониев и не менее 1000 округлых сперматид от каждого животного. Число генетически аномальных клеток выражали в промилле.

Метод учета аномалий форм головок спермиев (АФГС). В последние годы мутагенез широко изучается с помощью метода учета АФГС. Увеличение частоты встречаемости аберрантных гамет на терминальных стадиях развития рассматривается как результат генных мутаций и/или микроделеций, возникающих в клетках базального компартмента (сперматогониев и ранних сперматоцитов). Частоту встречаемости сперматозоидов с морфологически аномальными головками определяли на 28 и 100 сут фиксации; для этого подсчитывали не менее 300 клеток от каждого животного и долю АФГС выражали в процентах.

Цитоспектрофотометрия. Количественное определение содержания ДНК-фуксина на 3 и 100 сут после введения дипина (у контрольных и подопытных мышей) в ядрах пахитенных сперматоцитов, округлых сперматид и тестикулярных сперматозоидов проводили с помощью метода прямой сканирующей денситометрии (при длине волны >>.=540 нм). Для этого был использован микроденситометр Виккерс-М86 (Англия). Количество ДНК-фуксина измеряли дифференциальным методом, вычитая из интегральной плотности объекта интегральную плотность фона такой же площади (Агроскин и др., 1976).

А вторадиография. Ранее было показано, что одним из следствий однократного введения дипина на сперматогенез является резкое увеличение числа клеток Сертоли (Захидови др., 1995; Гордееваи др., 2001; Маршаки др., 2002). Для оценки способности к пролиферации клеток Сертоли контрольным и подопытным мышам линии 8АМР1 и мышам-гибридам П (СВА*С57/В16) на 14 сут эксперимента однократно водили Н3-тимидин из расчета 1 мкг/г веса (37 кБр/г). Через 1 ч мышей забивали, извлекали семенники и готовили отпечатки сперматогенных клеток по уже описанной выше

схеме. Препараты затем окрашивали по Фельгену и покрывали эмульсией тип M (НИИ Химфото). Экспозицию проводили в течение 1 мес при 4°С.

Статистическая обработка Данныхг, Весь полученный цифровой материал обрабатывался с помощью статистического пакета STATISTICA 6.0. При оценке достоверности различий средних, использовали параметрический критерий Стьюдента и непараметрический критерий Вилкоксона при стандартном уровне значимости р<0.05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

/, Цитогенетический анализ развивающихся сперматогенных клеток.

Результаты цитогенетического анализа представлены на рис. 1.

Видно, что у мышей, подвергшихся однократному воздействию дипина, частота встречаемости сперматогониев с микроядрами на 3-28 и 56 сут фиксации почти не изменяется по сравнению с контролем. И, наоборот, частота мутантных форм в популяции сперматогониальных клеток на 35 и 100 сут последействия резко возрастает и статистически достоверно превышает контрольные значения.

Далее из рис. 1 видно, что у подопытных мышей частота встречаемости округлых сперматид с микроядерными аберрациями на 3, 7 сут не выходит далеко за пределы установленного для этих животных уровня спонтанного мутагенеза, но достоверно возрастает на 14 сут фиксации. На 21-35 сут после начала эксперимента частота встречаемости аберрантных округлых сперматид не отличалась от контроля. Статистически достоверное превышение частоты встречаемости ранних постмейотических клеток со следами хромосомных поломок над контролем вновь наблюдалась на 56 и 100 сут, причем в последнем случае эффект воздействия мутагена проявился особенно сильно.

Использованный в работе тест на аномалии форм головок спермиев показал (таблица 1), что ira 28 сут фиксации в гонадах подопытных мышей частота

Таблица 1. Частота встречаемости тестикулярных спермиев с аномальными формами головок (в %) у мышей БАМР1 контрольной и подопытной групп.

Сроки фиксации | АФГС, х ± тх |

(сутки) Г" Контроль Опыт

28 | 4.0 ±0.8 13.3 ±2.0*

100 S 2.7 ±0.2 2.4 ± 0.4

Примечание: *—различия по сравнению с контролем статистически достоверны

при р<0.05.

Рис. 1. Динамика изменений частоты встречаемости сперматогеннъгх клеток с микроядрами у контрольных и подопытных мышей 8АМР1. СПЕРМАТОГОНИИ

о.

Си К

м о н и

о «

к &

60 %а 55 50 45 40 -35 -30 -25 20 -15 -10 -5

□Контроль □Опыт

гЪ

«Й-

гЬ

50 %0 □ Контроль

я о.

о: о

о. «

о м о н <и

о ч

я сг

45 -40 -35 -30 -25 -20 15 -10 5

□Опыт

14 21 28

Сутки фиксации

ОКРУГЛЫЕ СПЕРМАТИДЫ

0 -г

100 *

100

3 7 14 21 28

Сутки фиксации

Примечание: * — различия по сравнению с контролем статистически достоверны при р<0.05; вертикальные линии показывают стандартную ошибку среднего.

встречаемости аберрантных форм в популяции тестикулярных спермиев увеличивается в 3 раза по сравнению с контролем, а на 100 сут последействия снижается до уровня, свойственного уровню спонтанного мутагенеза. Тот факт, что на 28 сут после начала эксперимента число морфологически аномальных гамет значительно возрастает, подтверждает, что клетки, находящиеся в момент воздействия мутагенов на стадии

Рис. 2. Многообразие головок спермиев у мышей БАМР!, возникшее под влиянием мутагена дипина.

Обозначение: Н~ норма.

активного премейотического синтеза ДНК (прелептотены-лептотены) проявляют повышенную генетическую чувствительность.

Весь спектр морфологически аномальных ядер спермиев, выявленный в семенниках мышей 8АМР1, подвергшихся геннотоксическому эффекту дипина, представлен на рис. 2.

II. Количественный анализ клеток сперматогенного эпителия.

Результаты подсчетов числа сперматогенных клеток различных типов, а также клеток Сертоли у мышей контрольной и подопытной групп на разных сроках фиксации представлены в таблице 2.

На 3 сут после введения самцам дипина число сперматогониев, пахитенных сперматоцитов и округлых сперматид достоверно меньше, чем в контроле, тогда как снижение числа тестикулярных спермиев и клеток Сертоли не существенно. На 7 сут фиксации в семенниках подопытных животных только число сперматогониев статистически значимо отличалось от контроля. Повреждающий эффект наиболее ярко проявился на 14 сут последействия, о чем свидетельствует практически полное отсутствие в образцах семенников сперматогониев, пахитенных сперматоцитов и клеток Сертоли; снижение числа округлых сперматид и морфологически сформировавшихся спермиев было не столь катастрофично. Между тем у части изученных животных число округлых сперматид и клеток Сертоли достигало нулевых значений. На 21 сут после действия дипина значительно возрастало число сперматогониев, тестикулярных

Таблица 2. Количественный состав клеток сперматогенного эпителия у мышей БАМР! контрольной и опытной групп (* 106).

Сроки фиксации (сутки) " Число жив. Типы клеток, х ± mх

СГ ПС ОС СП КС

Контроль 3 4 5.0 ± 0.2 4.7 ±0.2 21.2 ±0.3 19.3 ± 0.3 2.2 ±0.1

7 5 7.5 ± 0.6 6.1 ±0.8 19.0 ± 1.5 17.0 ± 1.8 2.6 ±0.3

14 5 6.4 ± 0.6 6.1 ±0.4 20.5 ± 1.2 22.4 ± 1.2 2.0 ± 0.3

21 4 6.1 ±0.4 6.7 ±0.9 21.5 ± 1.4 22.2 ± 1.7 2.2 ± 0.3

28 5 5.1 ±0.4 4.2 ± 0.4 19.5 ± 2.4 17.8 ± 1.8 2.0 ± 0.2

35 4 5.1 ±0.5 3.2 ±0.4 15.7 ± 1.3 13.6 ± 1.2 1.7 ±0.3

56 4 6.0 ± 0.3 4.7 ± 0.5 18.2 ±0.9 17.6 ± 1.1 2.3 ± 0.4

100 4 4.3 ± 0.3 2.5 ± 0.3 13.0 ± 1.0 12.0 ± 1.0 0.9 ± 0.2

Опыт 3 4 3.9 ±0.1* 3.3 ±0.1* 18.2 ±0.4* 17.6 ±0.4 1.8 ± 0.1

7 4 5.2 ± 0.5* 4.9 ± 0.6 15.5 ± 1.0 14.6 ± 1.0 1.8 ±0.4

14 7 1.4 ±0.3* 1.1 ±0.2* 5.9 ± 1.2* 9.4 ± 0.8* 0.5 ±0.1*

21 4 4.1 ±0.2* 1.2 ±0.2* 6.8 ± 0.5* 18.5 ±0.6 2.4 ±0.2

28 4 ¡4.2 ±0.5 1.4 ±0.3* 3.0 ±0.4* 7.6 ± 0.7* 1.7 ±0.3

35 4 2.9 ± 0.3* 1.2 ±0.3* 1.3 ±0.3* 1.5 ±0.4* 0.9 ±0.2

56 4 3.7 ± 0.6* 4.8 ± 0.5 14.4 ± 1.1* 13.3 ±0.9* 2.2 ±0.4

100 7 3.5 ±0.3 2.3 ± 0.3 10.5 ± 0.6 11.0 ±0.6 1.2 ±0.2

Примечание: СГ — сперматогонии, ПС — пахитенные сперматоциты, ОС—округлые сперматиды, СП — сперматозоиды, КС —клетки Сертоли, * — различия по сравнению с контролем статистически достоверны при р<0.05.

спермиев и клеток Сертоли. На 28 сут в семенниках подопытных мышей пул постмейотических клеток вновь резко уменьшался по сравнению с контролем. На 35 сут последействия сумарное число всех изученных типов клеток достигает минимального значения, по сравнению с предыдущими сроками фиксации. На 56 сут фиксации у мышей, подвергшихся мутагенному воздействию, наблюдается увеличение числа сперматогониальных, мейотических, постмейотических клеток и клеток Сертоли. Через 100 сут с начала эксперимента число клеток всех изученных типов в семенниках подопытных и контрольных мышей уже не различалось.

III. Содержание ДНК-фуксина в сперматогенных клетках.

Цигоспектрофотометрическое изучение содержания ДНК-фуксина в сперматогенных клетках контрольных и подопытных мышей SAMP1, результаты которого представлены в таблице 3, показало, что через 3 дня после введения животным

Таблица 3. Содержание ДНК-фуксина (у. е.) в сперматогенных клетках контрольных и подвергшихся воздействию дипина мышей.

б Сроки фиксации Типы клеток, х ±

I (сутки) ПС ОС ТСП

1 Контроль 3 416.1 ± 16.1 94.7 ± 3.5 89.9 ± 1.7

100 1 372.4 ±5.5 94.9 ± 1.4 74.7 ±2.0

| Опыт 3 361.7 ±7.3* 90.4 ±3.8 73.7 ± 2.0*

100 1 370.2 ±5.2 94.0 ± 4.2 70.8 ±1.0 |

Примечание: ПС — пахитенные сперматоциты, ОС—округлые сперматиды, ТСП — тестикулярные сперматозоиды, * —различия по сравнению с контролем статистически достоверны прир<0.05.

дипина количество ДНК в пахитенных сперматоцитах и тестикулярных спермиях было достоверно ниже, чем в контроле; в то время как, содержание ДНК в округлых сперматидах соответствовало теоретически ожидаемому гаплоидному уровню (различия по сравнению с контролем недостоверны). На 100 сут эксперимента различий между контролем и опытом по всем типам изученных клеток не было обнаружено.

IV. Гистологический анализ структуры сперматогенного эпителия.

На рис. 3. показаны структурные эффекты влияния дипина на сперматогенез мышей БАМР1 в разное время после начала эксперимента.

Гистологическая картина сперматогенеза у контрольных мышей линии БАМР1 практически на веем протяжении эксперимента была близка к таковой у нормально стареющих мышей в норме (рис. ЗА); и лишь на 100 сут последействия у этих животных появляется большое число канальцев со значительными нарушениями морфологии сперматогенного эпителия (результаты не показаны).

В опыте на 3 и 7 сут фиксации структура сперматогенного эпителия сохраняет вполне нормальный упорядоченный вид. В большинстве случаев дифференцирующиеся половые клетки разных генераций располагаются сравнительно правильными концентрическими слоями вокруг просвета канальцев (рис. ЗБ).

На 14 сут последействия у подопытных мышей сперматогенный эпителий сильно редуцирован: практически полностью отсутствуют клетки мейотического ряда, редко встречаются сперматогонии, причем в некоторых канальцах они вовсе отсутствуют; превалируют популяции округлых сперматид и клеток Сертоли (рис. ЗВ).

На 21 сут в эксперименте нарушения морфологии сперматогенного эпителия носили еще более выраженный характер, чем на 14 сут фиксации (рис. ЗГ). Обширные

пласты мейотических и постмейотических клеток отслаивались от стенки канальца и/или слущивались в просвет. В некоторых участках сперматогенного эпителия отсутствовали все типы клеток, кроме клеток Сертоли и сперматогониев.

У подопытных животных структурные нарушения сперматогенеза были максимальными на 28 сут фиксации: нормальное течение сперматогенного процесса было нарушено во всех без исключения канальцах. Первое, что бросается в глаза — отсутствие в большинстве канальцев тех или иных типов сперматогенных клеток: можно выделить канальцы, содержащие только клетки Сертоли, или только клетки Сертоли и сперматогонии (рис. ЗЕ), канальцы без мейотических клеток, или канальцы без сперматид и спермиев (рис. ЗД).

На35 сут последействия во многих канальцах отмечено появление большого числа сперматогониев, встречаются пахитенные сперматоциты, а также округлые сперматиды и спермин. Между тем в большинстве канальцев сперматогенная система проявляет все признаки беспорядочного и регрессивного развития (рис. 33), а в некоторых канальцах процессы дегенерации заходят так далеко, что исчезают все следы сперматогенеза.

На 56 день фиксации в канальцах у подопытных животных прогрессивные положительные процессы преобладают над регрессивными, отрицательными. Целостность сперматогенного эпителия в основных чертах восстанавливается (результаты не показаны).

На 100 сут после действия дипина регенерация сперматогенной системы у подопытных самцов завершалась формированием семенных канальцев по структуре сперматогенного эпителия не отличающихся от контроля (рис. ЗИ). Важно отметить, что у подопытных самцов, как и у контрольных самцов этого же срока фиксации, отмечено большоечисло канальцев с полностью разрушенной структурой (результаты не показаны).

В ряде случаев на срезах семенников подопытных мышей вблизи от rete testis выявились новообразованные молодые семенные канальцы, содержащие клетки похожие на гоноциты и молодые клетки Сертоли (рис. ЗЖ).

V. Изучение пролиферативной активности клеток Сертоли. Как показало авторадиографическое исследование, у подопытных самцов линии SAMP1, в отличие от контроля, на отпечатках семенников среди интерфазных клеток Сертоли встречались ядра, меченные Н3-тимидином (рис.4А,Б). Кроме того, на срезах были обнаружены единичные митотические фигуры клеток Сертоли (рис. 4В). У подопытных мышей-гибридов СВА*С57/В16 пролиферативная активность этих клеток была более высокой.

V V *

*« ч и,

- Ч - V V.

• Ь.*»«- « 1 Л » •ЧТ-Я»""

л41*^ *

г*,

^ * ♦ * ^ » »

* V** «С ** * *

* » .л« V* ** „ *

•. * * ^ЧгЛ . *

~ . л Ч

7^:.% А.-.»»^ «й-к * - * * »

* л *

* 4 ** V 4 $ ' у ^л^Нч

к;..; ■ ....

у - С

-ч. А ** -

чг « < Л к * .£»»«

МП

^ч

ч - > *, .. - ; -о" * чо

г- -л ^ '«V . « ^ - ^

„

'я*

4 »

I. * * * ° «V и ^ < >. Ч

Л;6' С"- -

Ъ , ' * .' * г

^ 9 N »•*

* ^ » » „ ' ; » V.

ч. Л >

¡»Л » *» ч

/ *

ч -V

- Л1»

л, Ч, ' „ ' - ^ ' -

л*

,, и/-'.- 100

*, . \:

, *

^ 11

* \

я .«• • ~

. СК

■■ ■>• ^ » л

* ^ л ч * > ч >

л- / >

"4« N , « » ••

•ч

' Л

: - V

1"Ч

Ч ■

, * / V «

# 11 " « „

л > -'Л1)) Ч

"" *» 1 I > I г

"V » у.

V ^ * ** . к

»«Л% «Г ♦•«• > г «

л \ л * * ~

т - *, * ?> ^ ^ I/.

- 41 *» #«V > «Т , -

Ч ^ V * х» "

\ * > / »«л1 ^

Рис. 3. Срезы семенников контрольных — А и подопытных — Б-Имышей. Б— 7 сут. В —14 сут. Г, Ж-21 сут.Д, Е — 28 сут, 3 — 35 сут, И— 100 сут фиксации. Обозначения: * — ядра клеток Сертоли, § — каналец, содержащий только удлиняющиеся сперматиды и клетки Сертоли, # — участок канальца, содержащий только клетки Сертоли и сперматогонии, f — каналец без мейотических клеток,

- Ж*4 « « 5

-л V*»

ш»

гГ

* * * ч Ч*

Л- ^

" ч • - £ а*?

* • « • ' , ' ! *>

«с!4-- *

«. ^ + /

* • ; » ч Ч", . д» • * ч

► V" А ¿ттг^Г"^ Л* * '

г ♦ 1, * *» V ЮЗ ' •« » » *

• * '5,:

» *ГУТ» ~ ♦ »- » »

♦V. -■ч*- Л«4?

к* -СКч! л

-;"4-! ■» л*

«.Ч* * " /Ч* »**

'».и

• с * ■ •чв)-'^^

ДСЭ ^

* « -« ^ * ,

\ *• # «V 4 »»1 >>

" Л '>',» »Л.«.'» » »% ж ^

* • Л» 4 « • »\ «5 ^

•IV'..,

« ¿V «»

V» ? К«.

¡мЖ.

: Л Л -.УК

«¿'»'»¿л-Ь-

М'П ^ и' * ^ "¡.

■ А* 4% V¿, ии

/ — каналец без поспшейотических клеток, ДСЭ — дезорганизация сперматогенного эпителия, МК — каналец похожий на молодой, МП — межклеточные пространства, ОТ— отслоение сперматогенного эпителия, ПС — ядра похищенных сперматоцитов, СГ ~ ядра сперматогониев, СК — слущивание сперматогенных клеток в просвет канальца, ЦВ — цитоплазматические вакуоли.

Рис. 4. Ядра пролиферирующих и интерфазных клеток Сертоли на отпечатках (А,Б) и срезах (В) семенников подопытных мышей линии ЭАМР!.

Обозначения: * - интерфазные ядра клеток Сертоли, ДКС - деление клетки Сертоли.

Известно (Müller, Streffer, 1994), что в норме в гонадах самцов млекопитающих число клеток с микроядерными аберрациями обычно не превышает 2-4%о, но увеличивается в 5-10 раз при индуцированном радиационном или химическом мутагенезе (Lähdetie et al., 1986; Allen et al., 1994, 1996; Kunugita et al., 2002). У ускоренно стареющих мышей линий SAM развитие половых клеток происходит на фоне высокой частоты спонтанных микроядерных аберраций, которая приближается к уровню индуцированного мутагенеза (Гопко и др., 2003; Гордеева, 2000; Захидов и др., 2001, 2002). Результаты настоящей работы подтверждают эти данные: у контрольных животных на всех сроках фиксации частота сперматогониев и округлых сперматид с хромосомными нарушениями не опускалась ниже 7%о, а в среднем составляла 14.5%о.

Отсутствие у мышей SAMP1 выраженного цитогенетического (микроядерного) эффекта в популяции сперматогониев с 3 по 28 сут после действия дипина скорее всего связано с угнетающим действием этого высокоактивного молекулярного мутагена на развитие стволовых и активно пролиферирующих клеток, с остановкой последних на разных фазах митотического цикла, и последующей элиминацией большого числа клеток вследствие глубоких, необратимых нарушений в структуре их генетического аппарата. В то же время, достоверное увеличение

ОБСУЖДЕНИЕ

доли генетически аномальных форм в популяции сперматогониев у подопытных мышей на 35 сут эксперимента, вероятно, является следствием, очищения стволового компартмента от наиболее дефектных клеток; оставшиеся же после отбора сперматогонии, хотя и несут хромосомные нарушения, сохраняют способность к дифференцировке.

Неодинаковая частота выхода округлых сперматид с микроядрами на 3, 7 и 14 сут фиксации говорит о различной генетической чувствительности мейотических клеток, которые в момент воздействия дипина, согласно кинетике сперматогенеза у мышей, находились, соответственно, на стадиях мейотических делений, средней пахитены и прелептотены-лептотены. Более высокая восприимчивость последних по сравнению с продвинутыми в развитии мейоцитами связана, вероятно, с проходящей в них репликацией и, следовательно, с большей доступностью ДНК для взаимодействия с мутагеном. Тест на аномалии форм головок спермиев на 28 сут фиксации отчасти подтверждает это положение.

Тот факт, что у подопытных мышей на 35-100 сут существенно увеличивается частота микроядерных форм в популяции округлых сперматид, может быть следствием либо увеличения доли генетически аберрантных стволовых клеток, и/илч нарушения механизмов клеточного отбора в процессе дифференцировки сперматогониев. Однако скачки частот сперматогониальных и мейотических микроядер на отдаленных сроках последействия свидетельствуют в пользу первого предположения. Похоже самые пластичные, базисные структуры сперматогенной системы, а именно стволовые клетки, подвергшись воздействию дипина, получили дополнительную порцию генетической нестабильности, которая, как известно (Захидов, 2004), усиливает мутационную составляющую.

Первое, что открывается при анализе результатов количественного и гистоморфологического исследования сперматогенеза у подопытных животных - это фактически полное несоответствие этих результатов между собой у некоторых самцов на 14 сут после мутагенного вмешательства. Так, если в суспензии клеток, полученной при механическом разрушении гонад, округлые сперматиды и клетки Сертоли отсутствовали, то на гистологических срезах они довольно легко выявлялись в большом числе. Скорее всего, это является следствием того, что химический мутаген дипин, наделенный большим потенциалом разрушения, нарушает структуру клеток и ядер, что делает их неустойчивыми к механическим воздействиям.

Далее, исходя из данных по кинетике сперматогенеза у мышей (Ту^бЫсЬ,

1986) следует, что, обнаруженные на 14 сут фиксации сперматогонии несут свое происхождение от поврежденных дипином стволовых клеток. Таким образом, гибель значительного числа сперматогониев к данному моменту времени является еще одним доказательством того, что дипин усилил генетическую нестабильность стволовых клеток, наследственные структуры которых и так наделены повышенной мутабильностью (Захидов и др., 2002; Гопко и др., 2003). Усиление генетической нестабильности, как известно, влечет за собой продукцию аномальных белков и ферментов, что, в свою очередь, приводит к гибели наиболее чувствительных клеток. Однако быстрая репопуляция семенников дифференцирующимися сперматогониальными клетками уже на 28 сут эксперимента свидетельствует о высокой пролиферативной активности сохранивших целостность стволовых клеток. Такое поведение стволовых сперматогониев, является ответной реакцией на массовую гибель дифференцирующихся половых клеток и было отмечено при воздействии различных химических мутагенов и радиации (Oakberg, 1975; Erick-son, 1985; van Beek et al., 1990; Jiang, 1998; Kanatsu-Shinohara et al., 2003). Повышенная пролиферация стволовых сперматогониев снижается на 35 сут.

Среди дифференцирующихся сперматогенных клеток, у подопытных самцов линии SAMP1, наиболее восприимчивыми к воздействию мутагена оказались сперматогонии типа А2.4. Только этим, по-видимому, можно объяснить резкое снижение общего числа сперматогониев на 3 сут эксперимента, практически в 2 раза по сравнению с контролем, а также еще более значительное уменьшение числа пахитенных сперматоцитов и округлых сперматид, соответственно, на 14 и 21 сут фиксации. Значительная потеря половых клеток на этой стадии дифференцировки сперматогониев продолжается еще примерно 7 нед с момента воздействия, на это указывает тот факт, что восстановление числа пахитенных сперматоцитов до уровня контроля происходит только на 56 сут эксперимента. Гибель большого числа половых клеток в сперматогониальном компартменте в целом широко распространенное явление (Lu et al., 1979; Erickson, 1985; Meistrich, 1993; Захидов 1993; Захидов и др., 1994; Nakagawa et al., 1997; Seaman et al., 2005) и рассматривается как один из механизмов элиминации генетически аберрантных половых клеток. Отсюда вполне понятно, что за массовую гибель дифференцирующихся сперматогониев после 3 сут с начала эксперимента повинны возникшие в стволовых клетках мутации.

Картина хаотизации упорядоченной структуры сперматогенного эпителия на 14-35 сут последействия хорошо согласуется с массовой элиминацией клеток в это

время. Самыми частыми структурными нарушениями в поврежденных дипином семенниках были отслоения и слущивания половых клеток в просвет канальца, а также образование пространств между ними. По-видимому, эти процессы происходят в результате разрушения адгезивных контактов (adherens junctions) между половыми клетками и клетками Сертоли, из-за уменьшения мутагеном стероидогенной функции клеток Лейдига, или непосредственного воздействия на клетки Сертоли, что косвенно доказывается их повышенной "хрупкостью" на 14 сут фиксации. Другой возможной причиной этих аномалий у подопытных самцов может быть деление дифференцированных клеток Сертоли. Возможность перехода этой, в норме стабильной популяции клеток, к пролиферации при некоторых патологических состояниях (Zhang et al., 2004, 2006; Chaudhary et al., 2005), а также после действия дипина на мышей-гибридов (Захидов и др., 1995; Гордеева и др., 2001; Маршак и др., 2002) сейчас хорошо доказана. Воздействие дипина на мышей-гибридов приводило к увеличению числа клеток Сертоли у этих животных на 14 и 21 сут фиксации в 2 раза по сравнению с контролем. В настоящей работе в течение всего эксперимента число этих клеток практически не увеличивалось по сравнению с контролем. Тем не менее, на гистологических срезах семенников, мы встречали единичные митозы этих клеток и, на отпечатках окрашенных по Фельгену, меченные Н3-тимидином ядра. Возможным объяснением отсутствия количественного выражения массивной пролиферации клеток Сертолив наших результатах является гибель большей ихчасти, скорее всего в Gj или G2 периодах клеточного цикла, т.е. еще до вступления в митоз, от полученных после воздействия мутагена сильных генетических повреждений.

Нарушение развития мужских половых клеток происходило и в профазе I мейоза. Здесь наиболее чувствительными клетками оказались сперматоциты на стадии ранней пахитены, о чем свидетельствует сравнительно низкое число продвинутых в развитии клеток (средние и поздние пахитены) на 3 сут фиксации. Количественное определение содержание ДНК-фуксина в пахитенных сперматоцитах на 3 сут последействия подтверждает это предположение. В то же время, число пахитенных сперматоцитов и округлых сперматид на 7 сут не отличается от такового в контроле, что говорит о резистентности к воздействию дипина, соответственно, прелептотенных-зиготенных сперматоцитов и сперматоцитов на стадии поздней пахитены. Судя потому, что число ранних постмейотических клеток у подопытных мышей на 3 сут и тестикулярных спермиев в течение первой недели эксперимента значительно не изменялось, а на второй неделе число последних уменьшалось по

сравнению с контролем более чем в 2 раза можно заключить, что дипин не оказывал цитотоксического действия на спермии и удлиняющиеся и округлые сперматиды, но в то же время приводил к гибели делящихся сперматодитов. Эти наши наблюдения хорошо коррелируют с результатами полученными другими авторами при исследовании действия на сперматогенез радиации и алкилирующих агентов (Oak-berg, 1975; Erickson, 1985; Lu, Meistrich 1979; Meistrich et al., 1982; Meistrich, 1993; Codrington et al., 2004).

Количественное восстановление сперматогенеза у ускоренно стареющих мышей после однократного введения дипина начинает проявляться на 56 сут последействия. Первым свидетельством этого является повышение числа сперматогониальных клеток до максимального уровня, после 28 сут, у мышей подвергшихся действию дипина. К 56 сут фиксации число пахитенных сперматоцитов достигает нормы, что говорит о нормализации развития клеток в сперматогониальном компартменте. Полное же восстановление пулов всех типов клеток происходит только к 100 сут эксперимента, но при этом общее число этих клеток не достигает такового на 3 сут после воздействия дипина. В результатах количественного анализа сперматогеного эпителия контрольных мышей линии SAMP1 также обращает на себя внимание достоверное, в сравнении с 3 сут, снижение числа всех типов клеток, регистрируемое на 100 сут фиксации. Необходимо отметить, что к последнему сроку фиксации подопытные и контрольные самцы достигают критического, для этих ускоренно стареющих животных, возраста 6-7 мес, когда в семенниках мышей SAMP1 начинают преобладать семенные канальцы с нарушенным течением сперматогенеза. Эффект этот временный, у мышей из следующих возрастных групп структура сперматогенного эпителия восстанавливается (Гордеева, 2000; Захидов и др., 2001). Гистологическая характеристика сперматогенеза как у подопытных, так и контрольных самцов на 100 сут эксперимента полностью согласуется с этими данными: часть канальцев имеет нормальную структуру и в то же время есть много семенных канальцев с полностью разрушенным сперматогенным эпителием. Таким образом, к концу эксперимента у подопытных животных происходит не только количественное восстановление сперматогенного эпителия, но и его организация полностью соответствует той, какая характерна для мышей SAMP1 в возрасте 6-7 мес. Это дает возможность заключить, что этап временной дезорганизации сперматогенного эпителия, ранее не описанный как фаза его онтогенетического развития у других линий животных, строго детерминирован для сперматогенной

системы мышей линии SAMP1, является ее характерной особенностью. Если учесть, что у этих животных после 7 мес в большинстве случаев репродуктивная способность существенно снижается (Hosokawa et. al., 1997; Takeda et. al., 1997), то дальнейшее изучение механизмов регрессии сперматогенеза в этот период может оказаться плодотворным для понимания причин развития мужской стерильности.

Как видно из полученных результатов, хаотизация и распад сперматогенной системы у мышей линии SAMP1 под действием дипина не носят необратимого характера. Разрушениявнутриканальцевыхпространствстимулируютпролиферацию и дифференцировку стволовых сперматогониальных клеток. Благодаря активности последних старые дифференцированные канальцы довольно быстро пополняются половыми клетками новых поколений.

Еще одно важное наблюдение, сделанное в настоящей работе, состоит в том, что в ситуации, когда возникает угроза распада семенных канальцев, приходят в движение клеточные элементы rete testis, дающие начало молодым канальцам с гоноцитами и молодыми клетками Сертоли. Аналогичное явление было описано ранее при изучении семенников у крыс, подвергшихся локальному рентгеновскому облучению (Курносова, Райцина, 1987) и у мышей-долгожителей, склонных к ускоренному старению (Кулибин и др., 2005). Все это говорит о весьма большом запасе прочности зародышевого пути. .;

Суммируя данные количественного и гистологического анализов, можно заключить, что в восстановлении нарушенной мутагеном сперматогенной системы у ускоренно стареющих мышей принимают участие оба известных источника регенерации сперматогенного эпителия: стволовые клетки, расположенные на базальной мембране семенных канальцев, как это было отмечено у мышей-гибридов, подвергшихся действию дипина (Захидов, 1993; Захидов и др., 1994), и предшественники сперматогенных клеток и клеток Сертоли, расположенные в rete testis. Существенно, что второй из указанных источников у животных с нормальной продолжительностью жизни включается только в случае практически полного нарушения сперматогенеза (Курносова, Райцина, 1987).

выводы

1. Генетическая чувствительность к действию дипина развивающихся сперматогенных клеток у ускоренно стареющих мышей линии SAMP1 неодинакова. Наиболее уязвимыми оказались профазные сперматоциты (стадия прелептотены-лептотены) и стволовые сперматогонии.

2. Хромосомные повреждения, индуцированные в клетках стволового компартмента, носят необратимый характер. Количество сперматогониальных и мейотических микроядерных аберраций на отдаленных сроках последействия (35-100 сут фиксации) существенно превышает уровень спонтанной хромосомной мутабильности.

3. Регрессивные количественные и морфологические изменения в сперматогенном эпителии после мутагенного вмешательства развиваются постепенно: только на 28 и 35 сут фиксации клеточные потери и дезорганизация системы развития мужских половых клеток достигают пика. Восстановление сперматогенеза в большинстве канальцев происходит на 56 сут последействия.

4. Повышенную цитотоксическую чувствительность к действию мутагена проявили часть стволовых клеток, сперматогонии типа А 2.4, сперматоциты на стадии ранней пахитены и диплотены-диакинеза; более устойчивыми оказались сперматогонии типа Apr-Aaj, сперматоциты на стадии прелептотены-зиготены, поздней пахитены, а также округлые, удлиняющиеся сперматиды и спермии. Массивная гибель половых клеток приводит к усилению пролиферации уцелевших стволовых сперматогониев.

5. Восстановление сперматогенной системы происходит за счет деятельности двух систем регенерации: стволовых сперматогониальных клеток и клеточных элементов сети семенника (rete testis).

6. Появление у подопытных мышей линии SAMP1 в популяции клеток Сертоли единичных митотических фигур и меченных Н3-тимидином ядер указывает на способность этих высокодифференцированных клеток к пролиферации. Эта тенденция выражена значительно слабее, чем у мышей, развивающихся по механизму нормального физиологического старения.

7. Усиление генетической нестабильности стволовых сперматогониальных клеток в результате мутагенного воздействия не приводит к необратимой дезинтеграции

структуры сперматогенного эпителия. В конечной точке эксперимента (100 сут фиксации) количественная, морфологическая и цитохимическая картина сперматогенеза принципиально не отличается от контроля.

8. У контрольных и подопытных животных в возрасте 6-7 мес одинаково наступает фаза дезорганизации сперматогенного эпителия, что доказывает ее детерминированность для сперматогенного процесса у ускоренно стареющих мышей.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кулибин А.Ю., Захидов С.Т. Морфологические изменения сперматогенного эпителия у ускоренно стареющих мышей SAMP1 в ответ на действие химического мутагена дипина//ТезисыВсероссийскойнау мной конференции «Гистологическая наука в России в начале XXI века: итоги, задачи, перспективы». Москва. 2003. С.234.

2. Кулибин А.Ю. Цитогенетические изменения сперматогенных клеток у мышей линии SAMP1 (Senescence-accelerated mouse prone) под влиянием химического мутагена дипина // Тезисы Всероссийской конференции молодых исследователей «Физиология и медицина». Москва. 2005. С.61.

3. Кулибин А.Ю., Захидов С.Т. Нарастай ие потенциал ьн ых генети ческих поврежден и й в стволовых клетках и развитие сперматогенного процесса у ускоренно стареющих мышей SAMP1 после мутагенного вмешательства//Тезисы конференции "Биология стволовых клеток: фундаментальные аспекты". Москва. 2005. С.42-43.

4. Маршак Т. Л., Кулибин А.Ю., Захидов С.Т. Источники регенерации сперматогенного

эпителия у мышей // Тезисы конференции "Биология стволовых клеток: фундаментальные аспекты". Москва. 2005. С.46-48.

5. Захидов С.Т., Кулибин А.Ю. Усиление генетической нестабильности сперматогенной системы у ускоренно стареющих мышей SAMP1 под влиянием модельного мутагена дипина//ДАН. 2006. Т.407. №3. С.411-413.

6. Кулибин А.Ю., Захидов С.Т., Маршак Т. Л., Сабу ринаИ.Н. 2006. Экспериментальное изучение динамики сперматогенеза у ускоренно стареющих мышей SAMP1 // ДАН. 2006. Т.410. №6. С.835-838.

^-vv..........., ..........

Принято к исполнению 16/10/2006 Исполнено 17/10/2006

Заказ № 755 Тираж: 75экз.

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 Москва, Варшавское ш., 36 (495) 975-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кулибин, Андрей Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Сперматогенез у млекопитающих.

1.1.1. Происхождение и развитие половых клеток.

1.1.2. Стволовые сперматогониальные клетки.

1.1.3. Развитие мужских половых клеток в базальном (сперматогониальном) компартменте.

1.1.4. Стадия роста половых клеток или мейоз.

1.1.5. Спермиогенез: процесс постмейотического созревания мужских половых клеток.

1.1.6. Роль клеток Сертоли и Лейдига в поддержании развития половых клеток и регуляция сперматогенного процесса.

1.2. Биологическая модель ускоренного старения.

1.3. Особенности сперматогенного процесса у ускоренно стареющих мышей линий SAM.

1.4. Биологические эффекты дипина.

II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

11.1. Постановка эксперимента.

11.2. Фиксация материала, приготовление и окраска препаратов.

11.3. Цитогенетические методы

11.3.1. Метод учета сперматогониальных и мейотических микроядер (микроядерный тест).

11.3.2. Метод учета аномалий форм головок спермиев.

11.4. Цитоспектрофотометрический анализ.

11.5. Авторадиография.

11.6. Статистическая обработка данных.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

111.1. Динамика изменения веса животных.

111.2. Динамика изменения массы гонад.

111.3. Цитогенетический анализ сперматогенеза

III.3.1. Морфология ядерных и хромосомных нарушений в развивающихся сперматогенных клетках.

III.3.2. Оценка частоты возникновения микроядерных аберраций в сперматогониальных клетках и округлых сперматидах.

III.3.3. Оценка частоты встречаемости тестикулярных спермиев с морфологически аномальными головками.

111.4. Количественный анализ клеток сперматогенного эпителия.

111.5. Цитоспектрофотометрический анализ содержания ДНК-фуксина в спермато генных клетках.

111.6. Сравнительное изучение пролиферативной активности клеток Сертоли.

111.7. Гистологический анализ структуры сперматогенного эпителия.

IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

V ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Ответ генетически нестабильной сперматогенной системы ускоренно стареющих мышей линии SAMP1 на мутагенное воздействие"

Сперматогенез - высокопродуктивный, многофазный, имеющий строгую пространственно-временную организацию биологический процесс, регуляция которого очень сложно организована. Актуальность его всестороннего изучения очевидна. Кроме того, система развития МПК представляет собой удобную модель для изучения разных проблем экспериментальной эмбриологии, клеточной биологии, генетики, биологии размножения.

Несмотря на то, что многие фундаментальные закономерности процессов становления, развития, размножения, роста и созревания сперматогенных клеток уже хорошо изучены на всех уровнях организации живого, исследовательская активность в области мужского гаметогенеза продолжает оставаться очень высокой. Это связано не только с чисто познавательным интересом к этой узловой проблеме биологии, но диктуется необходимостью решения постоянно расширяющегося круга актуальных практических задач, имеющих большое медико-биологическое и социальное значение. А именно - преодоление мужского бесплодия, изучение последствий действия повреждающих факторов окружающей среды, в том числе фактора времени, химиотерапии, а также усовершенствование методов искусственного оплодотворения, криоконсервации, трансплантации половых клеток, эффективного управления размножением сельскохозяйственных животных и вредных насекомых (Рузен-Ранге, 1980; Hecht, 1998; McCarrey, 1998; Захидов, 1998; Hovatta, 2001; Khor-ram et al., 2001; Meachem et al., 2001; Brinster, 2002; Hardy et al., 2002; Gosden, Nagano, 2002; Liu, Handelsman, 2003).

Ускоренно стареющие мыши SAM (senescence-accelerated mouse), проявляющие все признаки раннего физиологического угасания, были получены японскими исследователями (Takedaetal., 1981,1994,1997а,б) путем близкородственного скрещивания и длительного отбора мышей линии AKR/J, страдающих наследственной формой вирусной лейкемии. В последние годы линии мутантных ускоренно стареющих мышей широко используются как модель для изучения механизмов, лежащих в основе нормального старения и его патологических форм, причин возникновения возрастных старческих болезней, а также для проверки эффективности средств, направленных на улучшение качества жизни и ее продление (Takeda et al., 1997а,b; Захидов, 2003). Уникальной особенностью мышей линий SAM, выгодно отличающей их от других моделей ускоренного старения (Takeda et al., 1981; Troen, 2003; Warner, Sierra, 2003), является передача признака ускоренного старения по наследству.

Предыдущие онтогенетические исследования сперматогенеза у ускоренно стареющих мышей SAM, в том числе мышей линии SAMP1 (senescence-accelerated mouse prone), создали надежную основу для развертывания широких экспериментальных исследований (Гордеева и др., 2001; Захидов и др., 1999, 2001а,б, 20026; Гопко и др., 2003; Кулибин и др., 2005). Сперматогенная система мышей линии 8АМР1, склонных к ускоренному старению, имеет свои специфические особенности, основной среди которых является сочетание сравнительно нормального течения сперматогенного процесса с высоким уровнем генетической нестабильности, значительно превышающим интенсивность спонтанного, естественного мутагенеза у нормально стареющих животных (Захидов и др., 2001а, 20026, 2005).

До сих пор никто не анализировал перспективу развития МПК у ускоренно стареющих мышей линии 8АМР1 после мутагенного вмешательства. Между тем, важность таких исследований не вызывает сомнения, поскольку многое реальное в структуре строго детерминированного сперматогенного процесса остается закрытым для прямых наблюдений. Экспериментальный мутагенез позволяет глубоко проникнуть в сущность многих генетических и биологических явлений, индуцировать аномальное течение морфогенетических процессов и нарушение их регуляции. На этом фоне можно увидеть и познать закономерности, действующие только в условиях катастрофических изменений в строении и функционировании сложных биологических систем, неопределенности и нестабильности их развития.

Ранее было показано (Захидов, 1993; Захидов, Гордеева, 1998; Захидов и др., 1999), что в гонадах грызунов под влиянием генетически активных соединений разворачиваются два процесса- разрушительный, ведущий к появлению большого числа генетически аномальных клеток и массивной клеточной гибели, и созидательный, восстанавливающий нормальное течение сперматогенеза за счет пула стволовых сперматогониальных клеток; удалось впервые показать способность к пролиферации высокодифференцированных клеток Сертоли (Захидов и др., 1995), что принципиально меняет представления не только о свойствах данной клеточной популяции, но и о возможных путях восстановления сперматогенеза.

В этой связи исследования сперматогенеза у мышей 8АМР1, развивающихся по механизму ускоренного старения, проводимые на базе химического мутагенеза, имеют огромную познавательную ценность. Они, в частности, дают возможность достичь результатов, отвечающих на принципиальный вопрос: будет ли после мутагенного воздействия динамически неустойчивая сперматогенная система «вдвойне мутантна» или и без того чрезвычайно высокий уровень генетической нестабильности преодолеть не удастся.

Цель настоящей работы - изучение динамики сперматогенеза у мышей линии 8АМР1, склонных к ускоренному старению, подвергшихся однократному воздействию модельного мутагена дипина.

Цель исследования предусматривает решение следующих основных задач:

• Изучение особенностей индуцированного мутагенеза в системе развития мужских половых клеток.

• Количественная характеристика сперматогенных клеток различных типов и фолликулярных клеток Сертоли.

• Изучение особенностей строения сперматогенного эпителия.

• Цитоспектрофотометрический анализ содержания ДНК в мейотических и постмейоти-ческих клетках.

• Сравнительное изучение пролиферативной активности клеток Сертоли.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биология развития, эмбриология", Кулибин, Андрей Юрьевич

1. Генетическая чувствительность к действию дипина развивающихся сперматогенных

клеток у ускоренно стареющих мышей линии SAMP1 неодинакова. Наиболее уязвимыми

оказались профазные сперматоциты (стадия прелептотены-лептотены) и стволовые

сперматогонии. 2. Хромосомные повреждения, индуцированные в клетках стволового компартмента, носят

необратимый характер. Количество сперматогониальных и мейотических микроядерных

аберраций на отдаленных сроках последействия (35-100 сут фиксации) существенно

превышает уровень спонтанной хромосомной мутабильности. 3. Регрессивные количественные и морфологические изменения в сперматогенном

эпителии после мутагенного вмешательства развиваются постепенно: только на 28 и 35

сут фиксации клеточные потери и дезорганизация системы развития мужских половых

клеток достигают пика. Восстановление сперматогенеза в большинстве канальцев

происходит на 56 сут последействия. 4. Повышенную цитотоксическую чувствительность к действию мутагена проявили часть

стволовых клеток, сперматогонии типа А.2-^, сперматоциты на стадии ранней пахитены

и диплотены-диакинеза; более устойчивыми оказались сперматогонии типа Арг-АаЬ

сперматоциты на стадии прелептотены-зиготены, поздней пахитены, а также округлые,

удлиняющиеся сперматиды и спермии. Массивная гибель половых клеток приводит к усилению пролиферации уцелевших

стволовых сперматогониев. 5. Восстановление сперматогенной системы происходит за счет деятельности двух систем

регенерации: стволовых сперматогониальных клеток и клеточных элементов сети

семенника (rete testis). 6. Появление у подопытных мышей линии SAMP1 в популяции клеток Сертоли

единичных митотических фигур и меченных №-тимидином ядер указывает на

способность этих высокодифференцированных клеток к пролиферации. Эта тенденция

выражена значительно слабее, чем у мышей, развивающихся по механизму нормального

физиологического старения. 7. Усиление генетической нестабильности стволовых сперматогониальных клеток в

результате мутагенного воздействия не приводит к необратимой дезинтеграции

структуры сперматогенного эпителия. В конечной точке эксперимента (100 сут

фиксации) количественная, морфологическая и цитохимическая картина сперматогенеза

принципиально не отличается от контроля. 8. У контрольных и подопытных животных в возрасте 6-7 мес одинаково наступает фаза

дезорганизации сперматогенного эпителия, что доказывает ее детерминированность для

сперматогенного процесса у ускоренно стареющих мышей.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кулибин, Андрей Юрьевич, Москва

1. Агроскин J1.C, Бродский В .Я., Бабаян Г.В. Стандарт в цитофотометрии // Цитология. 1976. Т.18. С. 512-521.

2. Болдырев А.А., Юнева М.О., Сорокина Г.Г., и др. Антиоксидантные системы в тканях мышей линии SAM (Senescence Accelerated Mice), характеризующиеся ускоренным процессом старения// Биохимия. 2001. Т.66. №10. С.1430-1437.

3. ГабаеваН.С. О строении и функциях фолликулярного эпителия семенников позвоночных // в кн. Современные проблемы сперматогенеза, М.: Наука. 1982. С.108-159.

4. Гопко А.В. Изучение сперматогенеза у мышей с ускоренным старением // Автореф. Дис. Канд. Биол. Наук. М.: МГУ. 2005.

5. Гопко А.В., Захидов С.Т., Маршак T.JL, и др. Генетическая нестабильность мужских половых клеток у мышей-долгожителей SAMP1, склонных к ускоренному старению // Док. РАН. 2003. Т.392. №2. С.267-270.

6. Гордеева О.Ф. Особенности развития мужских половых клеток у ускоренно стареющих мышей линии SAM (senescence-accelerated mouse) //Автореф. Дис. Канд. Биол. Наук. М.: МГУ. 2000.

7. Данилова JI.B. Сперматогонии, сперматоциты, сперматиды // в кн. Современные проблемы сперматогенеза. М.: Наука. 1982. С.25-72.

8. Домарацкая Е.И., Буеверова Э.И., Паюшина О.Д., Старостин В.И. Повреждение алкилирующим препаратом дипином кроветворных и стромальных клеток костного мозга // Изв. РАН. Сер. Биол. 2005. №3. С.267-272.

9. Егоров Е.Е., Семёнова И.В., Караченцев Д.Н., и др. Корреляция выживаемости эмбриональных фибробластов и их пролиферативного потенциала с продолжительностью жизни мышей различных линий // Биологические мембраны. 2000. Т.17. С.685-688.

10. Захидов С.Т. Процессы нормального и атипичного сперматогенеза у животных// Автореф. Дис. Докт. Биол. Наук. М.: МГУ. 1993.

11. Захидов С.Т. Современные достижения в исследованиях проблемы сперматогенеза // Проблемы репродуктивной биологии в трудах профессора С.И. Кулаева и его последователей. М.: МГУ. 1998. С.234-259.

12. Захидов С.Т. Генетическая теория старения // в кн. Синергетика. М.: МГУ, труды семинара. 1999а. Т.2. С.185-193.

13. Захидов С.Т. Развитие с ускоренным старением // в кн. Синергетика. М.: МГУ, труды семинара. 2003. Т.6. С.155-161.

14. Захидов С.Т. Специфика процессов хаотизации самоорганизации в системах генетического мира // "Синергетика в решении проблем человечества XXI века — диалог школ": материалы международного симпозиума. 2004.

15. Захидов С.Т., Гопко А.В., Маршак Т.Л., и др. Количественные закономерности мутационного процесса в сперматогенезе мышей линий SAM (senescence-accelerated mouse) // Биологические механизмы старения, IV международный симпозиум, Харьков. 2000. С.86.

16. Захидов С.Т., Гопко А.В., Семенова M.JL, и др. Карнозин как фактор, модифицирующий частоту встречаемости генетически аномальных половых клеток в семенниках ускоренно стареющих мышей SAM // Бюлл. Эксп. Биол. и Мед. 2002а. Т.134. №7. С.89-92.

17. Захидов С.Т., Гордеева О.Ф. Особенности развития мужских половых клеток у мышей, подвергшихся действию химических мутагенов дипина и нитрозометилмочевины (НММ) в пренатальном периоде // Док. РАН, 1998. Т.362. №1. С.127-129.

18. Захидов СТ., Гордеева О.Ф., Маршак Т.Л. Биологическая модель ускоренного старения. I. Темп спонтанного мутационного процесса в сперматогенезе у мышей линии SAM (senescence-accelerated mouse) // Изв. РАН. Сер. Биол. 2001а. №1. С.23-30.

19. Захидов С.Т., Маршак Т.Л., Голиченков В.А. Возможность перехода высоко дифференцированных клеток Сертоли к пролиферации после действия химических мутагенов // Док. РАН. 1995. Т.344. №5. С.692-694.

20. Захидов С.Т., Маршак Т.Л., Урываева И.В., и др. Цитогенетические аберрации в клетках печени и сперматогенного эпителия у ускоренно стареющих мышей линий SAMP1 и SAMR1 // Онтогенез. 20026. Т.ЗЗ. №6. С.444-456.

21. Захидов С.Т., Маршак Т.Л., Хода Х.А. Махран, Голиченков В.А. Влияние химических мутагенов на свойства хроматина сперматогенных клеток мышей // Изв. РАН. Сер. Биол.1994а. №5. С.725-731.

22. Захидов С.Т, Паранюшкина Л.П, Хода Х.А. Махран, Эль-Саед Касем Абдель-Хади, Голиченков В.А. Влияние химических мутагенов на сперматогенез млекопитающих. Цитогенетический анализ // Изв. РАН. Сер. Биол. 19946. №3. С.353-362.

23. Захидов С.Т, Паранюшкина Л.П, Хода Х.А. Махран, Эль-Саед Касем Абдель-Хади, Голиченков В.А. Влияние химических мутагенов на сперматогенез млекопитающих. Количественная оценка // Изв. РАН. Сер. Биол. 1994в. №6. С.870-879.

24. Захидов С.Т, Семенова M.JT, Гордеева О.Ф, Беляева A.A. Сперматогенез у мышей линии SAMP1, склонных к ускоренному старению // Док. РАН. 1999. Т.365. С.403-405.

25. Комфорт А. Биология старения, М.: Мир. 1967. 395 с.

26. Корочкин Л.И. Молекулярно-генетические основы детерминации пола // в кн. Введение в генетику развития. М.: Наука. 1999. С.210-228.

27. Корочкин Л.И. Детерминация пола и ее молекулярно-генетические основы // в кн. Биология индивидуального развития. М.:МГУ. 2002. С.216-233.

28. Костомарова A.A., Князева Е.Ф. Транскрипция и трансляция в сперматогенезе // в кн. Современные проблемы сперматогенеза, М.: Наука. 1982. С.160-190.

29. Кулибин А.Ю, Захидов С.Т, Маршак Т.Л, Гопко A.B., Михалева Я.Ю, Семенова М.Л. Изучение сперматогенной структуры у мышей-долгожителей SAMP1, склонных к ускоренному старению // Док. РАН. 2005. Т. 404. №6. С.971-975.

30. Курносова Т.Р, Райцина С.С. Деструкция и регенерация семенных канальцев после локального рентгеновского облучения семенников половозрелых крыс // Онтогенез. 1987. Т.18. №2. С.183-191.

31. Маршак ТЛ, Делоне Г.В, Урываева И.В. Особенности организации ядрышкового аппарата в диплоидных и полиплоидных ядрах новообразованных гепатоцитов при дипиновом канцерогенезе // Онтогенез. 1997. Т.28. №6. С.451-457.

32. Маршак Т.Л, КрыловаТ.Ю, Захидов С.Т. Особенности организации ядер клеток Сертоли после действия дипина//Цитология. 2002. Т.44. №9. С.890-891.

33. Проценко Л.Д, Булкина З.П. Дипин // в кн. Химия и фармакология синтетических противоопухолевых препаратов. Киев: Наукова думка. 1985. С.128-136.

34. РайцинаС.С.Гематотестикулярныйбарьер//вкн. Современные проблемы сперматогенеза. М.: Наука. 1982а. С.191-224.

35. Райцина С.С. Происхождение и развитие половых клеток // в кн. Современные проблемы сперматогенеза. М.: Наука. 19826. С.5-24.

36. Райцина С.С. Цикл сперматогенного эпителия и кинетика сперматогенеза у млекопитающих // в кн. Современные проблемы сперматогенеза. М.: Наука. 1982в.С.73-107.

37. Райцина С.С. Гематотестикулярный барьер и его роль в сохранении генетической информации в половых клетках // в кн. Сперматогенез и структурные основы его регуляции. М.: Наука. 1985а. С.20-45.

38. Райцина С.С. Деструкция семенных канальцев при действии повреждающих факторов на семенники млекопитающих // в кн. Сперматогенез и структурные основы его регуляции. М.: Наука. 19856. С.82-104.

39. Райцина С.С. Репродуктивная стратегия при возникновении и развитии половых клеток // в кн. Сперматогенез и структурные основы его регуляции. М.: Наука. 1985в. С. 5-19.

40. Райцина С.С. Сперматогенез, особенности дифференцировки клеток семенника и их регенерационные потенции // в кн. Сперматогенез и структурные основы его регуляции. М.: Наука. 1985г. С.137-168.

41. Романова JI.K. Регуляция восстановительных процессов, М.: Ун-т. 1984. 209 с.

42. Рузен-Ранге Э. Сперматогонии и динамика сперматогенеза // в кн. Сперматогенез у животных. М.: Мир. 1980. С.169-181.

43. Самуилов В.Д., Олескин A.B., Лагунова Е.М. и др. Программируемая клеточная смерть // Электронная библиотека каф. Физиологии микроорганизмов (http://l.cellimm.bio.msu. ru/ebocs/samuilov-2.html). 2002. C.l-29.

44. Смирнов А.Ф. Молекулярно-генетические механизмы первичной детерминации пола у млекопитающих // Сор. Обр. Журн. 1997. №1. С.26-34.

45. Урываева И.В., Делоне Г.В., Маршак Т.Л. Развитие ядерных аномалий и цитомегалической дегенерации при повреждении генома в клетках печени // Док. РАН. 1996а. Т.348. №5. С.703-705.

46. Урываева И.В., Маршак Т.Л., Делоне Г.В. Клеточные циклы в процессе переживания клеток печени после потенциально летального повреждения генома дипином // Бюлл. Экспер. Биол. 19966. Т.122. №9. С.353-355.

47. Урываева И.В., Маршак Т.Л., Захидов С.Т., и др. Накопление с возрастом микроядерных аберраций в клетках печени ускоренно стареющих мышей линий SAM // Док. РАН. 1999. Т.368. С.703-705.

48. Урываева И.В., Фактор В.М. Образование аберрантных полиплоидных гепатоцитов приодействии алкилирующего препарата дипина и стимуляции пролиферации // Цитология. 1982. Т.24. №8. С.911-918.

49. Урываева И.В., Фактор В.М. Полная смена клеточного состава паренхимы печени после воздействия дипина и частичной резекции // Бюлл. Экспер. Биол. 1988. Т.105. №1. С.77-80.

50. Урываева И.В., Фактор В.М., Бродский В.Я. Влияние алкилирующего агента дипина на индуцированную пролиферацию гепатоцитов. II. Увеличение периода синтеза ДНК // Цитология. 1979. Т.21. №6. С.678-685.

51. Фактор В.М., Елисеева Н.А., Тамахина А.Я. Влияние алкилирующего канцерогена дипина на пролиферацию, уровень развития полиплоидии и образование микроядер в популяции исходных и вновь образованных гепатоцитов // Изв. РАН. Сер. Биол. 1992. №6. С.821-834.

52. Фактор В.М., Урываева И.В., Соколова А.С., Чернов В.А., Бродский В .Я. Влияние алкилирующего агента дипина на индуцированную пролиферацию гепатоцитов. I. Кинетика клеточной популяции // Цитология. 1979, Т.21. №5. С.541-547.

53. Aguilar-Mahecha A., Hales B.F., Robaire В. Acute cyclophosphamide exposure has germ cell specific effects on the expression of stress response genes during rat spermatogenesis // Mol. Reprod. Dev. 2001. V.60. P.302-311.

54. Aguilar-Mahecha A., Hales B.F., Robaire B. Chronic cyclophosphamide treatment alters the expression of stress response genes in rat male germ cells // Biol. Reprod. 2002. V.66. P.1024-1032.

55. Aitken R.J., Krausz C. Oxidative stress, DNA damage and the Y chromosome // Reproduction. 2001. V.122. №4. P.497-506.

56. Alberts В., Bray D., Lewis J., et al. Meiosis // In. Molecular biology of the cell, New York, London: Gat land Publishing Inc. 1994. P.1014-1021.

57. D'Alessio A., Riccioli A., Lauretti P. et al. Testicular FasL is expressed by sperm cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. V.98. №6. P.3316-3321.

58. Allan D.J., Harmon B.V., Kerr J.F.R. Cell death in spermatogenesis // In. Perspectives on mammalian cell death (ed. Potten C.S.). Oxford.: Oxford University Press. 1987. P.229-258.

59. Allan D.J., Harmon B.V., Roberts S.A. Spermatogonial apoptosis has three morphologically recognizable phases and shows no circadian rhythm during normal spermatogenesis in the rat // Cell Prolif. 1992. V.25. P.241-250.

60. Allen J.W., Collins B.W., Evansky P.A. Spermatid micronucleus analyses of trichloroethylene and chloral hydrate effects in mice // Mutat. Res. 1994. V.323. P.81-88.

61. Allen J.W., Collins B.W., Setzer R.W. Spermatid micronucleus analyses of aging effects in hamsters // Mutat. Res. 1996. V.316. P.261-266.

62. Anawalt B.D., Bebb R.A., Matsumoto A.M. et al. Serum inhibin В levels reflect Sertoli cell function in normal men and men with testicular dysfunction // Clin. Endocrinol. Metab. 1996. V.81. №9. P.3341-3345.

63. Arshami J., Ruttle J.L. Effects of diets containing gossypol on spermatogenic tissues of yangbulls // Theriogenology. 1988. V.30. №3. P.507-516.

64. Baarends W.M., van der Laan R., Grootegoed J.A. DNA repair mechanisms and gametogenesis // Reproduction. 2001. V.121. P.31-39.

65. Balaban R.S., Nemoto S„ Finkel T. Mitochondria, oxidants, and aging // Cell. 2005. V.120. P.483-495.

66. Barone R, D'Agostino A., Aguanno S., DAlessio A. Sertoli cell modulates MA A induced apoptosis of germ cells throughout voltage-operated calcium channels // FASEB. 2004. V.18. P.353-354.

67. Barqawi A., Trummer H., Meacham R. Effect of prolonged cryptorchidism on germ cell apoptosis and testicular sperm count // Asian J. Androl. 2004. V.6. №1. P.47-51.

68. Bellamy O.C. p53 and apoptosis // Apoptosis. 1997. V.53. №3. P.522-538.

69. Bellve A.R. Introduction: The male germ cell; origin, migration, proliferation and differentiation // Cell & Dev. Biol. 1998. V.9. P.379-371.

70. Beumer T.L., Kiyokawa H., Roepers-Gajadien H.L. et al. Regulatory role of p27kipl in the mouse and human testis // Endocrinology. 1999. V.140. P.1834-1840.

71. Beumer T.L., Roepers-Gajadien H.L., Gademan I.S. et al. The role of the tumor suppressor p53 in spermatogenesis // Cell Death Differ. 1998. V.5. №.8. P.669-677.

72. Beumer T.L., Roepers-Gajadien H.L., Gademan I.S. et al. Apoptosis regulation in the testis: involvement of Bcl-2 family members // Mol. Reprod. Dev. 2000a. V.56. №3. P.353-359.

73. Beumer T.L., Roepers-Gajadien H.L., Gademan I.S., Kal H.B., de Rooij D.G. Involvement of the D-type cyclins in germ cell proliferation and differentiation in the mouse testis // Biol. Reprod. 2000b. V.63. P.1893-1898.

74. Billig H., Chun S.Y., Eisenhauer K., Hsueh A.J. Gonadal cell apoptosis: hormone-regulated cell demise // Hum. Reprod. Update. 1996. V.2. №2. P.103-117.

75. Birkhead T.R., Pellatt E.J., Brekke P., Yeates R., Castillo-Juarez H. Genetic effects on sperm design in the zebra finch // Nature. 2005. V.434., P.383-387.

76. Blanco-Rodriguez J. A matter of death and life: the significance of germ cell death during spermatogenesis // Int. J. Androl. 1998. V.21. P.236-248.

77. Bianco-Rodriguez J. DNA replication and germ cell apoptosis during spermatogenesis in the cat // J. Androl. 2002a. V.23. №4. P.484-490.

78. Bianco-Rodriguez J. DNA replication and germ cell apoptosis during spermatogenesis in the rabbit // J. Androl. 2002b. V.23. P.182-187.

79. Boekelheide K. Mechanisms of toxic damage to spermatogenesis // Natl. Cancer Inst. Monogr. 2005. V.34. P.6-8.

80. Boekelheide K„ Fleming S.L, Johnson K.J, Patel S.R, Schoenfeld H.A. Role of Sertoli cells in injury-associated testicular germ cell apoptosis // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 2000. V.225. №2. P.105-115.

81. Boussouar F, Benahmed M. Lactate and energy metabolism in male germ cells // Trends. Endocrinol. Metab. 2004. V.15. №7. P.345-350.

82. Brinster R.L. Germline Stem Cell Transplantation and Transgenesis // Science. 2002. V.296. P.2174-2176.

83. Brinster R.L, Avarbock M.R. Germline transmission of donor haplotype following spermatogonia! transplantation //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. V.91. №24. P.11303-11307.

84. Brock W.A, Trostle P.K, Meistrich M.L. Meiotic synthesis of testis histones in the rat // Proc. Nati. Acad. Sci. USA. 1980. V.77. №1. P.371-375.

85. Brown R. Proteins of the Bcl-2 family // Apoptosis. 1997. V.53. №3. P.466-477.

86. Buageaw A, Sukhwani M, Ben-Yehudah A. et al. GDNF family receptor alphal phenotype of spermatogonial stem cells in immature mouse testes // Biol. Reprod. 2005. V.73. P.1011-1016.

87. Calogero A.E, De Palma A, Grazioso C, et al. 2001. Aneuploidy rate in spermatozoa of selected men with abnormal semen parameters // Biol. Reprod. 2001. V.16. №6. P.1172-1179.

88. Carlson B.M. Human embryology and developmental biology 3ed. Pub. Mosby Inc. 2004. P.527.

89. Cerda M.C., Berrios S., Fernandez-Donoso R., Garagna S., Redi C. Organization of complex nuclear domains in somatic mouse cells // Biol. Cell. 1999. V.91. №1. P.55-65.

90. Chang C., Chen Y.-T., Yeh S.-D. et al. Infertility with defective spermatogenesis and hypotes-tosteronemia in male mice lacking the androgen receptor in Sertoli cells // PNAS. 2004. V.101. №18. P.6876-6881.

91. Chapín R.E., Dutton S.L., Ross M.D., Sumrell B.M., Lamb J.C. 4th. The effects of ethylene glycol monomethyl ether on testicular histology in F344 rats // J. Androl. 1984. V.5. №5. P.369-380.

92. Chaudhary J., Cupp A.S., Skinner M.K. Role of basic-helix-loop-helix transcription factors in Sertoli cell differentiation: identification of an E-box response element in the transferring promoter//Endocrinology. 1997. V.138. №2. P.667-675.

93. Chen Ch., Ouyang W., Grigural V. et al. ERM is required for transcriptional control of the spermatogonial stem cell niche // Nature. 2005. V.436. P.1030-1034.

94. Chen H. Luo L. Zirkin B.R. Leydig cell structure and function during aging // In.: "The Leydig cell" (eds. A.H. Payne, M.P. Hardy, and L.D. Russell). 1996a. P.221-230.

95. Chen H., Hardy M., Zirkin B.R. Age-related decreases in Leydig cell testosterone production are not restored by exposure to LH in vitro // Endocrinology. 2002. V.143. №5. P.1637-1642.

96. Chen H., Huntaniemi I., Zirkin B.R. Depletion and repopulation of Leydig cells in the testes of aging Brown Norway rats // Endocrinology. 1996b. V.137. №8. P.3447-3452.

97. Chen H., Zirkin, B.R. Long-term suppression of Leydig cell steroidogenesis prevents Leydig cell aging // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V.96. P.14877-14881.

98. Cheng C.Y. Mruk D.D. Cell junction dynamics in the testis: Sertoli-germ cell interactions and male contraceptive development // Phys. Rev. 2002. V.82. P.825-874.

99. Lu C.C., Meistrich M.L. Cytotoxic effects of chemotherapeutic drags on mouse testis cells // Cancer Res. 1979. V.39. P.3575-3582.

100. Chiarini-Garcia H., Hornick J.R., Griswold M.D., Russell L.D. Distribution of type A spermatogonia in the mouse is not random // Biol. Reprod. 2001a. V.65. P.l 179-1185.

101. Chiarini-Garcia H., Russell L.D. High-resolution light microscopic characterization of mouse spermatogonia // Biol. Reprod. 2001b. V.65. P.1170-1178.

102. Chiarini-Garcia H., Russell L.D. Characterization of mouse spermatogonia by transmissionelectron microscopy // Reproduction. 2002. V.123. R567-577.

103. Chiarini-Garcia H., Raymer A.M., Russell L.D. Non-random distribution of spermatogonia in rats: evidence of niches in the seminiferous tubules // Reproduction. 2003. V.126. R669-680.

104. Cho C., Jung-Ha H., Willis W.D. et al. Protamine 2 deficiency leads to sperm DNA damage and embryo death in mice//Biol. Reprod. 2003. V.69. P.211-217.

105. Choi Y.J., Ok D.W., Kwon D.N. et al. Murine male germ cell apoptosis induced by busulfan treatment correlates with loss of c-Kit-expression in a Fas/FasL- and p53-independent manner // FEBS Lett. 2004. V.575. P.41-51.

106. Chung S.S.W., Wolgemuth D.J. Role of retinoid signaling in the regulation of spermatogenesis // Cytogenet. Genome Res. 2004. V.105. №2-4. P.189-202.

107. Clermont Y. Bustos-Obregon E. Re-examination of spermatogonial renewal in the rat by means of seminiferous tubules mounted "in toto" // Am. J. Anat. 1968. V.122. P.237-248.

108. Clermont Y. Kinetics of spermatogenesis in mammals: seminiferous epithelium cycle and spermatogonial renewal //Physiol. Rev. 1972. V.52. P.198-236.

109. Clermont Y., Perey B. Quantitative study of the cell population of the seminiferous tubules in immature rats // Am. J. Anat. 1957. V.100. P.241-267.

110. Cobb J., Handel M.N. Dynamics of meiotic prophase I during spermatogenesis: from pairing to division // Cell & Dev. Biol. 1998. V.9. P.445-450.

111. Codrington A.M., Hales B.F., Robaire B. Spermatogenic germ cell phase-specific DNA damage following cyclophosphamide exposure // J. Androl. 2004. V.25, №3. P.354-362.

112. Cooke S.P., Eroschenko V.P. Inhibitory effects of technical grade methoxychlor on development of neonatal male mouse reproductive organs // Biol. Reprod. 1990. V.42. P.585-596.

113. Curtsinger J.W., Fukui H.H., Khazaeli A. et al. Genetic variation and aging // Annu. Rev. Genet. 1995. V.29. P.553-575.

114. Curtis H.J. Biological mechanism underlying the aging process // Science. 1963. V.141. P.686-694.

115. Dadoune J.-P. The nuclear status of human sperm cells // Micron. 1995. V.26. №4. P.323-345.

116. Dadoune J.-P. Expression of mammalian spermatozoal nucleoproteins // Microsc. Res. Tech. 2003. V.61. №1. P.56-75.

117. Dakouane M., Bicchieray L., Bergere M. et al. A histomorphometric and cytogenetic study of testis from men 29-102 years old // Fertil. Steril. 2005. V.83. №4. P.923-928.

118. Darszon A., Labarca P., Nishigaki T., Espinosa F. Ion channels in sperm physiology // Physiol. Rev. 1999. V.79. №2. P.481-510.

119. Dix D.J., Allen J.W., Collins B.W., et al. Targeted gene disruption of Hsp70-2 results in failed meiosis, germ cell apoptosis, and male infertility // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V.93. №8.P.3264-3268.

120. Dix D.J., Allen J.W., Collins B.W., et al. HSP70-2 is required for desynapsis of synaptonemal complexes during meiotic prophase in juvenile and adult mouse spermatocytes // Development. 1997. V.124. №22. P.4595-4603.

121. Dobrinski I., Avarbock M.R., Brinster R.L. Transplantation of germ cells from rabbits and dogs into mouse testes //Biol. Reprod. 1999. V.61. P.1331-1339.

122. O'Donnell L., Robertson K.M., Jones M.E., Simson E.R. Estrogen and spermatogenesis // Endoer. Rev. 2001. V.22. №3. P.289-318.

123. Eddy E.M. HSP70-2 heat-shock protein of mouse spermatogenic cells // J. Exp. Zool. 1998. V.282. №1-2. P.261-271.

124. Eddy E.M. Role of heat shock protein HSP70-2 in spermatogenesis // Rev. Reprod. 1999. V.4. №1. P.23-30.

125. Elangovan N., Chiou T.-J., Tzeng W.-F., Chu S.-T. Cyclophosphamide treatment causes impairment of sperm and its fertilizing ability in mice // Toxicology. 2006. V.222. P.60-70.

126. Erickson B.H. Effects of ionizing radiation and chemicals on mammalian reproduction // Vet. Hum. Toxicol. 1985. V.27. №5. P.409-416.

127. Faktor V.M., Uryvaeva I.V., Sokolova A.S., Chernov V.A., Brodsky W. Ya. Kinetics of cellular proliferation in regenerating mouse liver pretreated with the alkylating drug dipin // Virchows Arch. B Cell Path. 1980. V.33. P.187-197.

128. Farini D., Scaldaferri M.L., Iona S. et al. Growth factors sustain primordial germ cell survival, proliferation and entering into meiosis in the absence of somatic cells // Dev. Biol. 2005. V.285. №1. P.49-56.

129. Feng L.X., Ravindranath N., Dym M. Stem cell factor/c-Kit up-regulates cyclin D3 and promotes cell cycle progression via the phosphoinositide 3-kinase/p70 S6 kinase pathway in spermatogonia // Biol. Chem. 2000. V.275. P.25572-25576.

130. Filippini A., Riccioli A., Padula F. et al. Control and impairment of immune privilege in the testis and in semen //Hum. Reprod. Update. 2001. V.7. №5. P.444-449.

131. Finch C., Tanzi R. Genetics of aging // Science. 1997. V.278. P.407-411.

132. Franca L.R., Avelar G.F., Almeida F.F.L. Spermatogenesis and sperm transit through the epididymis in mammals with emphasis on pigs // Theriogenology. 2005. V.63. P.300-318.

133. Franca L.R., Ghosh S, Ye S.-J., Russell L.D. Surface and surface-to-volume relationships of theSertoli cell during the cycle of the seminiferous epithelium in the rat // Biol. Reprod. 1993. V.49. P.1215-1228.

134. Franca L.R, Ogawa T, Avarbock M.R, et al. Germ cell genotype controls cell cycle during spermatogenesis in the rat // Biol. Reprod. 1998. V.59. P.1371-1377.

135. Freire R, Mirguia J.R, Tarsounas M. et al. Human and mouse homologs of S. pombe radl and Saccaromyces cerevisae RAD17: linkage to checkpoint control and mammalian meiosis // Genes Dev. 1998. V.12. P.2560-2573.

136. Fromm M.F. Importance of P-glycoprotein at blood-tissue barriers // Trends. Pharmacol. Sci. 2004. V.25. №8. P.423-429.

137. Furuchi T, Masuko K, Nishimune Y, et al. Inhibition of testicular germ cell apoptosis and differentiation in mice misexpressing Bcl-2 in spermatogonia//Development. 1996. V.122. P.1703-1709.

138. Gatti J.L, Castella S, Dacheux F. et al. Post-testicular sperm environment and fertility // Anim. Reprod. Sci. 2004. V.82-83. P.321-339.

139. Generoso W.M, Cain K.T, Krishna M, Sheu C.W, Gryder R.M. Heritable translocation and dominant-lethal mutation induction with ethylene oxide in mice // Mutat. Res. 1980. V.73. P.133-142.

140. Gilbert S.F. Developmental Biology 6th ed. // Sunderland (MA): Sinauer Associates, Inc. 2000.

141. Ginsburg M, Snow M.H, McLaren A. Primordial germ cells in the mouse embryo during gas-trulation//Development. 1990. V.110. P.521-528.

142. Ghabriel M.N, Lu J.J, Hermanis G, Zhu C, Setchell B.P. Expression of a blood-brain barrier-specific antigen in the reproductive tract of the male rat // Reproduction. 2002. V.123. №3. P.389-397.

143. Gonzalez-Melendi P, Beven A, Boudonck K. et al. The nucleus: a highly organized but dynamic structure // J. Microsc. 2000. V.198. Pt. 3. P.199-207.

144. Gorczynska-Fjailing E. The role of calcium in signal transduction processes in Sertoli cells // Reprod. Biol. 2004. V.4. №3. P.219-241.

145. Grimes S.R. Testis-specific transcriptional control // Gene. 2004. V.343. P.ll-22.

146. Griswold M.D. The central role of Sertoli cells in spermatogenesis // Cell Dev. Biol. 1998. V.9. P.411-416.

147. Guo Z., Toichi E., Hosono M., et al. Genetic analysis of lifespan in hybrid progeny derived from the SAMP1 mouse strain with accelerated senescence // Mech. Aging Dev. 2000. V.118. P.35-44.

148. Haider S.G. Cell biology of Leydig cells in the testis // Int. Rev. Cytol. 2004. V.233. P.181-241.

149. Hales D.B. Testicular macrophage modulation of Leydig cell steroidogenesis // Reprod. Immunol. 2002. V.57. №1-2. P.3-18.

150. Hamer G., Roepers-Gajadein H.L., Gademan I.S., Kal H.B., de Rooij D.J. Intercellular bridges and apoptosis in clones of male germ cells // Internat. J. Androl. 2003. V.26. P.348-353.

151. Handel M.A., Cobb J., Eaker S. What are the spermatocytes requirements for successful mei-otic division? // J. Exp. Zool. 1999. V.285. №3. P.243-250.

152. Handel M.A., Sun F. Regulation of meiotic cell divisions and determination of gamete quality: impact of reproductive toxins // Seminars in reproductive medicine. 2005. V.23. №3. P.212-221.

153. Hardy K., Wright C., Rice S. et al. Future developments in assisted reproduction in humans // Reproduction. 2002. V.123. P.171-183.

154. Hayashi M., Nashida K., Endoh D., Okui T. Production of age-related DNA strand breakage in brain cells of senescence-accelerated prone (SAMP1) mouse // Exp. Anim. 2003. V.52. №4. P.353-357.

155. Haywood M,, Spaliviero J., Jimemez M. et al. Sertoli and germ cell development in hypogo-nadal (hpg) mice expressing transgenic follicle-stimulating hormone alone or in combination with testosterone //Endocrinology. 2003. V.144. P.509-517.

156. He P., Yasumoto K. Dietary butylated hydroxytoluene counteracts with paraquat to reduce the rate of hepatic DNA single strand breaks in senescence-accelerated mice // Mech. Aging Dev. 1994. V.76. P.43-48.

157. Hecht N.B. Regulation of 'haploid expressed genes' in male germ cells // J. Reprod. Fert. 1990. V.88. P.679-693.

158. Higuchi K., Wang J., Kitagawa K., et al. Accelerated senile amyloidosis induced by amyloido-genic Apoa-II gene shortens the life span of mice but does not accelerate the rate of senescence //J. Gerontol. 1996. V.51. P.295-302.

159. Jahnukainen K, Chrysis D., Hou M. et al. Increased apoptosis occurring during the first wave of spermatogenesis is stage-specific and primarily affects midpachytene spermatocytes in the rat testis // Biol. Reprod. 2004. V.70. P.290-296.

160. Jazwinski S.M. Longevity, genes, and aging: a view provided by a genetic model system // Exp. Gerontol. 1999. V.34. P.l-6.

161. Jazwinski S.M. Aging and longevity genes // Acta Bioch. Polonica. 2000. V.47. №2. P.269-279.

162. Jiang F.-X. Behavior of spermatogonia following recovery from busulfan treatment in the rat // Anat. Embryol. 1998. V.198. P.53-61.

163. Jin D.Y, Spencer F, Jeang K.T. Human T cell leukemia virus type 1 oncoprotein Tax targets the human mitotic checkpoint protein MAD1 // Cell. 1998. V.93. №i. p.81-91.

164. Johnson R.S, Spiegelman B.M, Papaioannou V. Pleiotropic effects of a null mutation in the c-fos proto-oncogene // Cell. 1992. V.71. P.577-586.

165. Johnson T.E. Genetic influences on aging // Exp. Gerontol. 1997. V.32. P.ll-22.

166. Johnston D.S, Russell L.D, Griswold M.D. Advances in spermatogonial stem cell transplantation // Rev. Reprod. 2000. V.5. P.183-188.

167. Jones L.S, Berndtson W.E. A quantitative study of Sertoli cell and germ cell populations as related to sexual development and aging in the stallion // Biol. Reprod. 1986. V.35. №1. P.138-48.

168. Kanatsu-Shinohara M, Inoue K, Lee J. Generation of pluripotent stem cells from neonatal mouse testis // Cell. 2004. V.119. P.1001-1012.

169. Kanatsu-Shinohara M, Miki H, Inoue K. et al. Germline niche transplantation restores fertility in infertile mice // Hum. Reprod. 2005. V.20. №9. P.2376-2382.

170. Kanatsu-Shinohara M., Toyokuni S, Morimoto et al. Functional assessment of self-renewal activity of male germline stem cells following cytotoxic damage and serial transplantation // Biol. Reprod. 2003. V.68. P.1801-1807.

171. Kasai S, Chuma S., Motoyama N, Nakatsuji N. Haploinsufficiency of Bcl-x leads to male-specific defects in fetal germ cells: differential regulation of germ cell apoptosis between the sexes //Dev. Biol. 2003. V.264. №1. P.202-216.

172. Kashiwabara S, Noguchi J, Zhuang T. et al. Regulation of spermatogenesis by testis-specific, cytoplasmic poly(A)polymerase TPAP // Science. 2002. V.298. P.1999-2002.

173. Kawasaki Y. Nakagawa A. Nagaosa K. et al. Phosphatidylserine binding of class B scavengerreceptor type I, a phagocytosis receptor of testicular Sertoli cells // J. Biol. Chem. 2002. V.277. №30. P.27559-27566.

174. Kenyon C. The plasticity of aging: insights from long-lived mutants // Cell. 2005. V.120. P.449-460.

175. Khorram O, Patrizio P., Wang C., Swerdlow R. Reproductive technologies for male infertility // J. of Clin. Endocr. & Metab. 2001. V.86. №6. P.2373-2379.

176. Kiger A.A., Fuller M.T. Male germ-line stem cells // In. Stem Cell Biology. Cold Spring Harbor Laboratory Press. 2001. P.149-187.

177. Kimmins S., Sassone-Corsi P. Chromatin remodeling and epigenetic features of germ cells // Nature. 2005. V.434. P.583-588.

178. Kimura M., Itoh N., Takagi S. et al. Balance of apoptosis and proliferation of germ cells related to spermatogenesis in aged men // J. Androl. 2003. V.24. №2. P.185-191.

179. Kiousis D. Kising chromosomes // Nature. 2005. V.435. P.579-580.

180. Kirkwood T.B.L. Understanding the odd science of aging // Cell. 2005. V.120. P.437-447.

181. Kleene K.C. A possible meiotic function of the peculiar patterns of gene expression in mammalian spermatogenic cells // Mechan. Dev. 2001. V.106. P.3-23.

182. Koji T. Male germ cell death in mouse testes: possible involvement of Fas and Fas ligand // Med. Electron. Microsc. 2001. V.34. P.213-222.

183. Koji T., Hishikawa Y. Germ cell apoptosis and its molecular trigger in the mouse testis // Arch. Histol. Cytol. 2003. V.66. №1. P.l-16.

184. Koji T., Hishikawa Y., Ando H. et al. Expression of Fas and Fas ligand in normal and ischemia-reperfusion testes: involvement of the Fas system in the induction of germ cell apoptosis in the damaged mouse testis // Biol. Reprod. 2001. V.64. P.946-954.

185. Kramer P.H. CD95's deadly mission in the immune system // Nature. 2000. V.407. P.789-795.

186. Kubota H., Avarbock M.R., Brinster R.L. Culture conditions and single growth factors affect fate determination of mouse spermatogonia! stem cells // Biol. Reprod. 2004. V.71. P.722-731.

187. Kunugita N., Kakihara H., Kawamoto T., Norimura T. Micronuclei induced by low dose rate irradiation in early spermatids of p53 null and wild mice // J. Radiat. Res. (Tokyo). 2002. V.43. P.205-207.

188. Kuro-o M., Matsumura Y., Aizawa H., et al. Mutation of the mouse Klotho gene leads to a syndrome resembling ageing // Nature. 1998. V.390. P.45-51.

189. Kuro-o M. Disease model: human aging // Trends in Mol. Med. 2001. V.7. P.179-181.

190. Kuriyama K., Kitamura T., Yokoi K. yt al. Evaluation of testicular toxicity and sperm morphology in rats treated with methyl methanesulphonate (MMS) // J. Reprod. Develop. 2005. V.51. №5. P.657-667.

191. Lawson K.A., Hage W.J. Clonal analysis of the origin of primordial germ cells in the mouse // Ciba Found. Symp. 1994. V.182. P.68-84.

192. Lawson K.A., Dunn N.R., Roelen B.A. et al. Bmp4 is required for the generation of primordial germ cells in the mouse embryo // Genes Dev. 1999. V.13. P.424-436.

193. Leblond C.P., Clermont Y. Spermatogenesis in rat, mouse, hamster and ginea pig as revealed by the "periodic acid-fuchsin sulfurous acid" technique // Am. J. Anat. 1952. V.90. P.167-215.

194. Lee J., Richburg J.H., Shipp E.B., et al. The Fas system, a regulator of testicular germ cell apoptosis, is differentially up-regulated in Sertoli cell versus germ cell injury of the testis // Endocrinology. 1999. V.140. №2. P.852-858.

195. Lee J., Richburg J.H., Younkin S.C., Boekelheide K. The Fas system is a key regulator germ cell apoptosis in the testis // Endocrinology. 1997. V.138. P.2081-2088.

196. Leslie E.M., Deeley R.G., Cole S.P. Multidrug resistance proteins: role of P-glycoprotein, MRP1, MRP2, and BCRP (ABCG2) in tissue defense // Toxicol. Appl. Pharmacol. 2005. V.204. №3. P.216-237.

197. Liu P.Y., Handelsman D.J. The present and future state of hormonal treatment for male infertility // Hum. Reprod. Upd. 2003. V.9. No.l. P.9-23.

198. Lombard D.B., Chua K.F., Mostoslavsky R., et al. DNA repair, genome stability, and aging // Cell. 2005. V.120. P.497-512.

199. Loveland K.L, Schlatt S. Stem cell factor and c-Kit in the mammalian testis: lessons originating from mother nature's gene knockouts // Endocrinology. 1997. V.153. P.337-344.

200. Lu C.C., Meistrich M.L. Cytotoxic effects of chemotherapeutic drugs on mouse testis cells // Cane. Res. 1979. V.39. P.3575-3582.

201. Luetjens C.M., Weinbauer G.F., Wistuba J. Primate spermatogenesis: new insights into comparative testicular organization, spermatogenic efficiency and endocrine control // Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 2005. V.80. №3. P.475-488.

202. Lui W.Y., Mruk D., Lee W.M., Cheng C.Y. Adherens junction dynamics in the testis and spermatogenesis // J. Androl. 2003a. V.24. №1. P.l-14.

203. Lui W.Y., Mruk D., Lee W.M., Cheng C.Y Sertoli cell tight junction dynamics: their regulation during spermatogenesis // Biol. Reprod. 2003b. V.68. №4 P.1087-1097.

204. Mahmoud A., Kiss P., Vanhoorne M., De Bacquer D., Comhaire F. Is inhibin B involved in the toxic effect of lead on male reproduction? // Int. J. Androl. 2005. V.28. №3. P.150-155.

205. Maier B., Gluba W., Bernier B. et al. Modulation of mammalian life span by the short isoform of p53 // Genes Dev. 2004. V.18. P.306-319.

206. Manicardi G.C., Tombacco A., Bizzaro D., Bianchi U., Bianchi P.G., Sakkas D. DNA strand breaks in ejaculated human spermatozoa: comparison of susceptibility to the nick translation and terminal transferase assays // Histochem. J. 1998. V.30. P.33-39.

207. Matter B., Schmid W. Trenimon-induced chromosomal damage in bone-marrow cells of six mammalian species, evaluated by the micronucleus test // Matat. Res. 1971. V.12. №4. P.417-425.

208. McClearn G.E. Biogerontologic theories // Exp. Gerontol. 1997. V.32. P.3-10.

209. McGuinnes M.P., Griswold M.D. Interaction between Sertoli cells and germ cells in the testis // Dev. Biol. 1994. V.5. P.61-66.

210. McLachlan R.I., Wreford N.G., O'Donnell L., de Kretser D.M., Robertson D.M. The endocrine regulation of spermatogenesis: independent roles for testosterone and FSH // Endocrinology. 1996. V.148. №1. P.l-9.

211. McLaren A. Mammalian germ cells: birth, sex, and immortality // Cell Struct. Funct. 2001. V.26. P.l 19-122.

212. McLean D.J., Friel P.J., Johnston D.S., Griswold M.D. Characterization of spermatogonial stem cell maturation and differentiation in neonatal mice // Biol. Reprod. 2003. V.69. P.2085-2091.

213. McMurray C.T., Kortun I.V. Repair in haploid male germ cells occurs late in differentiation as chromatin is condensing // Chromosoma. 2003. V.lll. №8. P.505-508.

214. McVicar C.M., McClure N., Williamson K. et al. Incidence of Fas positivity and deoxyribonucleic acid double-stranded breaks in human ejaculated sperm // Fertil. Steril. 2004. V.81. P.767-774.

215. Meachem S., von Schonfeldt V., Schlatt S. Spermatogonia: stem cells with a great perspective // Reprodaction. 2001. V.121. R825-834.

216. Medras M., Trzmiel A., Grabowski M., Bohdanowicz-Pawlak A., Zagodzka E. Inhibin B a marker of the function of male gonad // Ginekol. Pol. 2005. V.76. №6. P.484-490.

217. Medvedev Z.A. An attempt at a rational classification of theories of aging // Biol. Rev. 1990. V.65. P.375-398.

218. Meistrich M.L. Critical components of testicular function and sensitivity to disruption // Biol. Reprod. 1986a. V.34. P.17-28.

219. Meistrich M.L. Relationship between spermatogonial stem cell survival and testis functionafter cytotoxic therapy II Br. J. Cancer. 1986b. V.53. №7. P.89-101.

220. Meistrich M.L. Evaluation of reproductive toxicity by testicular sperm head counts // J. Am. Coll. Toxic. 1989. V.8, №3. P.551-567.

221. Meistrich M.L. Effects of chemotherapy and radiotherapy on spermatogenesis // Eur. Urol. 1993. V.23. №1 P.136-141. discussion 142.

222. Meistrich M.L. Hormonal stimulation of the recovery of spermatogenesis following chemo- or radiotherapy//APMIS. 1998. V.106. №1. P.37-45. discussion P.45-46.

223. Meistrich M.L., Finch M., da Cuncha M.F. et al. Damaging effects of fourteen chemotherapeu-tic drugs on mouse testis cells // Cane. Res. 1982. V.42. P.122-131.

224. Meistrich M.L., Goldstein L.S., Wyrobeck A.J. Long-term infertility and dominant lethal mutations in male mice treated with adriamycin // Mutat. Res. 1985. V.152. P.53-65.

225. Meistrich M.L., Mohapatra B., Shirley C.R., Zhao M. Roles of transition nuclear proteins in spermiogenesis // Chromosoma. 2003. V.lll. №8 P.483-488.

226. Meistrich MX., Shetty G. Suppression of testosterone stimulates recovery of spermatogenesis after cancer treatment//Inter. J. Androl. 2003. V.26. P.141-146.

227. Meistrich M.L., Wilson G., Kangasniemi M., Huntaniemi I. Mechanism of protection of rat spermatogenesis by hormonal pretreatment: stimulation of spermatogonial differentiation after irradiation // J. Androl. 2000. V.21. №3. P.464-469.

228. Meistrich M.L., Wilson G., Zhang Y., Kurdoglu B., Terry N.H. Protection from procarbazine-induced testicular damage by hormonal pretreatment does not involve arrest of spermatogonial proliferation// Cancer Res. 1997. V.57. №6. P.1091-1097.

229. Melaine N., Lienard M.O., Dorval I. et al. Multidrug resistance genes and p-glycoprotein in the testis of the rat, mouse, Guinea pig, and human // Biol. Reprod. 2002. V.67. №6. P.1699-1707.

230. Mendis-Handagama S.M., Ariyaratne H.B. Differentiation of the adult Leydig cell population in the postnatal testis // Biol. Reprod. 2001. V.65. №3. P.660-671.

231. Mendis-Handagama S.M., Ariyaratne H.B. Effects of thyroid hormones on Leydig cells in the postnatal testis // Histol. Histopathol. 2004. V.19. №3. P.985-997.

232. Miyamoto H., Manabe N., Akjyama Y., et al. A morphometric study of spermatogenesis in the testes of mice of a senescence accelerated strain // Experientia. 1994. V.50. P.880-811.

233. Molyneaux K.A., Stallock J., Schaible K., Wylie C. Time-lapse analysis of living mouse germ cell migration // Dev. Biol. 2001. V.240. P.488-498.

234. Monesi V. Autoradiographic study of DNA synthesis and the cell cycle in spermatogonia and spermatocites of mouse testis using tritiated thymidine // J. Cell. Biol. 1962. V.14. P.l-18.

235. Morales E., Horn R., Pastor L.M. et al. Involution of seminiferous tubules in aged hamsters: an ultrastructural, immunohistochemical and quantitative morphological study // Histol. Histopathol. 2004. V.19. №2. P.445-455.

236. Morales E, Pastor L.M., Horn R. et al. Effect of ageing on the proliferation and apoptosis of testicular germ cells in the Syrian hamster Mesocricetus auratus // Reprod. Fertil. Dev. 2003. V.15. №1-2. P.89-98.

237. Mruk D.D., Cheng C.Y. Sertoli-Sertoli and Sertoli-germ cell interactions and their significance in germ cell movement in the seminiferous epithelium during spermatogenesis // Endocrinol. Rev. 2004. Y.25. №5. P.747-806.

238. Müller W.-U, Streffer C. Micronucleus assays // In. Advances in mutogenetic research (ed. G. Obe). 1994. V.5. P.3-135.

239. Nagano M.C. Spermatogonial transplantation // In. Gardner D.K, Lane M, Watson A.J. (eds,), A Laboratory Guide to the Mammalian Embryo, Oxford: Oxford University Press. 2004. P.334-351.

240. Nagano M.C, Avarbock M.R, Brinster R.L. Pattern and Kinetics of Mouse Donor Spermatogonial Stem Cell Colonization in Recipient Testes // Biol. Reprod. 1999. V.60. P.1429-1436.

241. Nagano R, Tabata S, Nakanishi Y. et al. Reproliferation and relocation of mouse male germ cells (gonocytes) during prespermatogenesis // Anat. Ree. 2000. V.258. P.210-230.

242. Nakagawa S, NakamuraN, Fujioka M, Mori C. Spermatogenic cell apoptosis induced by mitomycin c in the mouse testis // Toxicol. Appied Pharmacol. 1997. V.147. P.204-213.

243. Nakanishi Y, Shiratsuchi A. Phagocytic removal of apoptotic spermatogenic cells by Sertoli cells: mechanisms and consequences // Biol. Pharm. Bull. 2004. V.27. №1. P.13-16.

244. Nandi S, Banerjee P, Zirkin B. Germ cell apoptosis in the testes of Sprague Dawley rats following testosterone withdrawal by ethane 1,2-dimethanesulfonate administration: relationship to FAS? // Biol. Reprod. 1999. V.61. P.70-75.

245. Oakberg E.F. A description of spermatogenesis in the mouse and its use in analysis of the cycle of the seminiferous epithelium // Am. J. Anat. 1956a. V.99. P.391-414.

246. Oakberg E.F. Duration of spermatogenesis in the mouse and timing of stages of the cycle of the seminiferous epithelium // Am. J. Anat. 1956b. V.99. P.507-519.

247. Oakberg E.F. Spermatogonial stem-cell renewal in the mouse // Anat. Ree, 1971. V.169. P.515-532.

248. Oakberg E.F. Effects of radiation on the testis // In. Handbook of physiology (eds. Greep R.O, Astwood E.B.). Sect. 7: Endocrinology. 1975. V.5. P.233-261.

249. Oakberg E.F, Hackins C. Spermatogonial stem cell renewal in the mouse as revealed by H3-thy-midine labeling and irradiation // In. Stem cell of renewing cell populations. Cambridge: Akad. Press. 1976. P.287-302.

250. Ogawa T, Ohmura M, Yumura Y, Sawada H, Kubota Y. Expansion of Murine SpermatogonialStem Cells Through Serial Transplantation // Biol. Reprod. 2003. V.68. P.316-322.

251. Offer H., Zurer I., Banfalvi G. et al. p53 modulates base excision repair activity in a cell cycle-specific manner after genotoxic stress // Cancer Res. 2001. V.61. P.86-96.

252. Ohbo K., Yoshida S., Ohmura M. et al. Identification and characterization of stem cells in prepubertal spermatogenesis in mice // Dev. Biol. 2003. V.258. P.209-225.

253. Ohta H., Aizawa S., Nishimune Y. Functional analysis of the p53 gene in apoptosis induced by heat stress or loss of stem cell factor signaling in mouse male germ cells // Biol. Reprod. 2003. V.68. №6. P.2249-2254.

254. Ohta H., Yomogida K., Dohmae K., Nishimune Y. Regulation of proliferation and differentiation in spermatogonial stem cells: the role of c-Kit and its ligand SCF // Development. 2000 V.127. №10. P.2125-2131.

255. Page S.L., Hawley R.S. The Genetics and molecular biology of the synaptonemal complex // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 2004. V.20. P.525-558.

256. Paniagua R.; Nistal M., Saez F. J., Fraile B. Ultrastructure of the aging human testis // Electron. Microsc. Tech. 1991. V.19. №2. P.241-260.

257. Park P.C., De Boni U. Dynamics of structure-function relationships in interphase nuclei // Life Sci. 1999.V.64. №19. P.1703-1718.

258. Perek N., Denoyer D. The multidrug resistance mechanisms and their interactions with the radiopharmaceutical probes used for an in vivo detection // Curr. Drug. Metab. 2002. V.3. №1. P.97-113.

259. Pierantoni R., Cobellis G., Meccariello R., Fasano S. Evolutionary aspects of cellular communication in the vertebrate hypothalamo-hypophysio-gonadalaxis // Int. Rev. Cytol. 2002. V.218. P. 69-141.

260. Pierik F.H., Burdorf A., de Jong F.H., Weber R.F. Inhibin B: a novel marker of spermatogenesis //Ann. Med. 2003. V.35. №1. P.12-20.

261. Plant T.M., Marshall G.R. The functional significance of FSH in spermatogenesis and the control of its secretion in male primates // Endocrine Rev. 2001. V.22. №6. P.764-786.

262. Print C.G., Loveland K.L. Germ cell suicide: new insights into apoptosis during spermatogenesis // BioEssays. 2000. V.22. №5. P.423-429.

263. Print C.G., Loveland K.L., Gibson L. et al. Apoptosis regulator bcl-w is essential for spermatogenesis but appears otherwise redundant // Proc. Natl. Acad. Sci. 1998. V.95. P.12421-12431.

264. Ram Sairam M., Krishnamurthy H. The role of follicle-stimulating hormone in spermatogenesis: lessons from knockout animal models // Archiv. Med. Res. 2001. V.32. R601-608.

265. Ren H.P., Russell L.D. Clonal development of interconnected germ cells in the rat and its relationship to the segmental and subsegmental organization of spermatogenesis // Am. J. Anat. 1991. V.192. №2. P.121-128.

266. Richburg J.H., Johnson K.J., Schoenfeld H.A., Meistrich M.L., Dix D.J. Defining the cellular and molecular mechanisms of toxicant action in the testis // Toxicol. Lett. 2002. V.135. JN°3. P.167-183.

267. Rinchik E.M., Bangham J.W., Hunsicker P.R., et al. Genetic and molecular analysis of chloram-bucil-induced germ-line mutations in the mouse // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. V.87. №4. P.1416-1420.

268. Riou L., Bastos H., Lassalle B. et al. The telomerase activity of adult mouse testis resides in the spermatogonial alpha6-integrin-positive side population enriched in germinal stem cells // Endocrinology. 2005. V.146. №9. P.3926-3932.

269. Ross G.M. Induction of cell death by radiotherapy // Endocrine-Related Cancer. 1999. V.6. P.41-44.

270. Rossi P., Sette C., Dolci S., Geremia R. Role of c-kit in mammalian spermatogenesis // Endocrinol. Invest. 2000. V.23. №9. P.609-615.

271. Rucker E.B. 3rd, Dierisseau P., Wagner K.U. et al. Bcl-x and Bax regulate mouse primordial germ cell survival and apoptosis during embryogenesis // Mol. Endocrinol. 2000. V.14. N°7. P.1038-1052.

272. Russell L.D., Chiarini-Garcia H., Korsmeyer S.J., Knudson C.M. Bax-dependent spermatogonia apoptosis is required for testicular development and spermatogenesis // Biol. Reprod. 2002. V.66. №4. P.950-958.

273. Russell L.B., Hunsicker P.R., Cacheiro N.L., Bangham J.W., Russell W.L, Shelby M.D. Chlorambucil effectively induces deletion mutations in mouse germ cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. V.86. P.3704-3708.

274. Russell L.D., Russell J.A. Short-term morphological response of the rat testis to administration of five chemotherapeutic agents // Am. J. Anat. 1991. V.192. №2. P.142-168.

275. Russell L.D., Russell J.A., MacGregor G.R., et al. Linkage of manchette microtubules to the nuclear envelope and observations of the role of the manchette in nuclear shaping during sper-miogenesis in rodents //Am. J. Anat. 1991. V.192. №2. P.97-120.

276. Saffman E.E., Lasko P. Germline development in vertebrates and invertebrates // Cell Mol. Life Sci. 1999. V.55. №8-9. P.1141-1163.

277. Sailer B.L., Jost L.K., Evenson D.P. Mammalian sperm DNA susceptibility to in situ denatur-ation associated with the presence of DNA strand breaks as measured by the terminal deoxy-nucleotidyl transferase assay // J. Androl. 1995. V.16. P.80-87.

278. Sakkas D., Mariethoz E., Manicardi G., et al. Origin of DNA damage in ejaculated human spermatozoa // Rev. Reprod. 1999. V.4. P.31-37.

279. Sakkas D., Seli E., Manicardi G.C. et al. The presence of abnormal spermatozoa in the ejaculate: did apoptosis fail?//Hum. Fertil. (Camb). 2004. V.7. №2. P.99-103.

280. Sassone-Corsi P. Unique chromatine remodeling and transcriptional regulation in spermatogenesis // Science. 2002. V.296. P.2176-2178.

281. Sawhney P., Giammona C.J., Meistrich M.L., Richburg J.H. Cisplatin-induced long-term failure of spermatogenesis in adult C57/B1/6J mice // J. Androl. 2005. V.26. №1. P.136-145.

282. Sega G.A, Owens J.G. Methylation of DNA and protamine by methyl methanesulfonate in the germ cells of male mice //Mutat. Res. 1983. V.lll. P.227-244.

283. Selva D.M., Tirado O.M., Toran M. et al. Meiotic arrest and germ cell apoptosis in androgen-binding protein transgenic mice // Endocrinology. 2000. V.141. P.l 168-1178.

284. Sette C., Dolci S., Geremia R., Rossi P. The role of stem cell factor and of alternative c-kit gene products in the establishment, maintenance and function of germ cells // Int. J. Dev. Biol. 2000. V.44. P.599-608.

285. Schoenfeld H.A., Hall S.J., Boekelheide K. Continuously proliferative stem germ cells partially repopulate the aged, atrophic rat testis after gonadotropin-releasing hormone agonist therapy // Biol. Reprod. 2001. V.64. P.1273-1282.

286. Schrans-Stassen B.H, Saunders P.T, Cooke H.J, de Rooij D.G. Nature of the spermatogenic arrest in DazF- mice // Biol. Reprod. 2001. V.65. №3. P.771-776.

287. Schwartz D, Goldfinger N, Kam Z, Rotter V. p53 controls low DNA damage-dependent pre-meiotic checkpoint and facilitates DNA repair during spermatogenesis // Cell Growth Differ. 1999. V.10. №10. P.665-75.

288. Sharpe R.M, McKinnell C, Kivlin C, Fisher J.S. Proliferation and functional maturation of Sertoli cells, and their relevance to disorders of testis function in adulthood // Reproduction. 2003. V.125. №6. P.769-784.

289. Shimura M, Tanaka Y, Nakamura S, et al. Micronuclei formation and aneuploidy induced by Vpr, an accessory gene of human immunodeficiency virus type 1 // FASEB J. 1999. V.13. №6. P.621-637.

290. Shinohara T, Orwig K.E, Avarbock M.R, Brinster R.L. Restoration of spermatogenesis in infertile mice by Sertoli cell transplantation // Biol. Reprod. 2003. V.68. P.1064-1071.

291. Shirley C.R, Hayashi S, Mounsey S, Yanagimachi R, Meistrich M.L. Abnormalities and reduced reproductive potential of sperm from Tnpl- and Tnp2-null double mutant mice // Biol. Reprod. 2004. V.71. №4 P.1220-1229.

292. Sinha-Hikim A.P, Lue Y, Diaz-Romero M. et al. Deciphering the pathways of germ cell apoptosis in the testis // Steroid Biochem. Mol. Biol. 2003. V.85. P.175-182.

293. Sinha-Hikim A.P, Swerdloff R.S. Hormonal and genetic control of germ cell apoptosis in the testis // Rev. Reprod. 1999. V.4. №1. P.38-47.

294. Sinha A, Rao A.R. Induction of shape abnormality and unscheduled DNA synthesis by areco-line in the germ cells of mice // Mutat. Res. 1985. V.158. P.189-192.

295. Siu M.K, Cheng C.Y. Dynamic cross-talk between cells and the extracellular matrix in the testis // Bioessays. 2004. V.26. №9. P.978-992.

296. Speed R.R, Taggart M, Cooke H.J. Spermatogenesis in testes of Dazl null mice after transplantation of wild-type germ cells // Reproduction. 2003. V.126. P.599-604.

297. Sriraman V, Anbalagan M, Rao A.J. Hormonal regulation of Leydig cell proliferation and differentiation in rodent testis: a dynamic interplay between gonadotrophins and testicular factors // Reprod. Biomed. Online. 2005. V.ll. №4. P.507-518.

298. Steger K. Haploid spermatids exhibit translationally repressed mRNAs // Anat. Embryol. (Berl). 2001. V.203. №5. P.323-334.

299. Steiner R.A. Bremner W.J. Clifton D.K. Dorsa D.M. Reduced pulsatile luteinizing hormone andtestosterone secretion with aging in the male rat // Biol. Reprod. 1984. V.31. R251-258.

300. Sutton K.A. Molecular mechanisms involved in the differentiation of spermatogenic stem cells // Rev. Reprod. 2000. V.5. P.93-98.

301. Suzuki N., Withers H.R. Exponential decrease during aging and random lifetime of mouse spermatogonial stem cells // Science. 1978. V.202. P.1214-1215.

302. Swain A., Lovell-Badge R. Mammalian sex determination: a molecular drama // Genes & Dev. 1999. V.13. P.755-767.

303. Syed V., Hecht N.B. Disruption of germ cell-Sertoli cell interactions leads to spermatogenic defects // Mol. Cell Endocrinol. 2002. V.186. №2. P.155-157.

304. Szekely A.M., Chen Y.-H., Zhang C. et al. Werner protein recruits DNA polymerase 8 to the nucleolus //PNAS. 2000. V.97. №.21. P.11365-11370.

305. Szilard L. On the nature of the aging process // PNAS. 1959. V.45. P.30-45.

306. Takeda T., Hosokawa M., Takeshita S., et al. A new murine model of accelerated senescence // Mech. Aging Dev. 1981. V.17. P.183-194.

307. Takeda T., Hosokawa M., Huguchi K. Senescence-accelerated mouse (SAM). A novel murine model of aging // In. The SAM model of senescence (ed. Takeda T.). Amsterdam-London-New York-Tokyo.: Excerpta Medica. 1994. P.15-22.

308. Takeda T., Hosokawa M., Higuchi K. Senescence-accelerated mouse (SAM): a novel murine model of senescence // Exp. Gerontol. 1997a. V.32. P.105-109.

309. Takeda T., Matsushita T., Kurozumi M., et al. Pathobiology of the senescence-accelerated mouse (SAM) //Exp. Gerontol. 1997b. V.32. P.117-127.

310. Tanaka H., Baba T. Gene expression in spermiogenesis // CMLS. Cell. Mol. Life Sci. 2005. V.62. P.344-354.

311. Tegelenbosch R., de Rooij D.A. Quantitative study of spermatogonial multiplication stem cell renewal in the C3H/101F1 hybrid mouse // Mutat. Res. 1993. V.290. P.193-200.

312. Thomas N.S., Ennis S., Sharp A.J. et al. Maternal sex chromosome non-disjunction: evidence for X chromosome-specific risk factors // Hum. Mol. Genet. 2001. V.10. №3. P.243-250.

313. Toppari J., Lahdetie J., Harkonen P., et al. Mutagen effects on rat seminiferous tubules in vitro: induction of meiotic micronuclei by adriamycin // Mutat. Res. 1986. V.171. P.149-156.

314. Wolgemuth D.J., Rhee K., Wu S., Ravnik S.E. Genetic control of mitosis, meiosis and cellular differentiation during mammalian spermatogenesis // Reprod. Fertil. Dev. 1995. V.7. №4. P.669-683.

315. Wong K.-K., Maser R.S., Bachoo R.M. et al. Telomere dysfunction and Atm deficiency compromises organ homeostasis and accelerates ageing // Nature. 2003. V.421. P.643-648.

316. Woolveridge I., de Boer-Brouwer M., Taylor M.F. et al. Apoptosis in the rat spermatogenic epithelium following androgen withdrawal: changes in apoptosis-related genes // Biol. Reprod. 1999. V.60. P.461-470.

317. Wyllie A.H. Apoptosis: brief survey // Apoptosis. 1997. V.53. №3. P.451-455.

318. Wyrobek A.J., Bruce W. The induction of sperm-shape abnormalities in mice and humans // Chemical mutagens, V.5, Plenum press, N. Y. London. 1978. P. 258-286.

319. Wyrobek A.J., Watchmaker G., Gordon L. An evaluation of sperm tests as indicators of Germ-cell damage in men exposed to chemical or physical agents // Teratogenesis, Carcinogenesis, and Mutagenesis. 1984. V.4. P.83-107.

320. Xia C., Higuchi K., Shimizu M., et al. Genetic typing of the senescence-accelerated mouse (SAM) strains with microsatellite markers // Mamm. Genome. 1999. V.10. P.235-238.

321. Xu B., Kim S.-T., Lim D.-S., Kastan M.B. Two molecularly distinct G2/M checkpoints are induced by ionizing irradiation // Mol. Cell. Biol. 2002. V.22. №4. P.1049-1059.

322. Yan W., Samson M., Jegou B., Toppari J. Bcl-w forms complexes with Bax and Bak, and elevated ratios of Bax/Bcl-w and Bak/Bcl-w correspond to spermatogonial and spermatocyte apoptosis in the testis //Mol. Endocrinol. 2000a. V.14. №5. P.682-699.

323. Yan W., Suominen J., Toppari J. Stem cell factor protects germ cells from apoptosis in vitro // J. Cell Sci. 2000b. V.113 №1. P.161-168.

324. Yin Y., Stahl B.C., DeWolf W.C., Morgentaler F. P53 mediated germ cell quality control in spermatogenesis //Devel. Biol. 1998. V.204. P.165-171.

325. Ying Y., Liu X.M., Marble A. et al. Requirement of Bmp8b for the generation of primordial germ cells in the mouse // Mol. Endocrinol. 2000. V.14. P.1053-1063.

326. Ying Y., Qi X., Zhao G.Q. Induction of primordial germ cells from murine epiblasts by syner-getic action of Bmp4 and Bmp8b signaling pathways // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. V.98. P.7858-7862.

327. Ying Y., Zhao G.Q. Cooperation of endoderm derived Bmp2 and extraembryonic ectoderm-derived Bmp4 in primordial germ cell generation in the mouse // Dev. Biol. 2001. V.232. P.484-492.

328. Young K.A., Zirkin B.R., Nelson R J. Testicular regression in response to food restriction and short photoperiod in white-footed mice (Peromyscus leucopus) is mediated by apoptosis // Biol.Reprod. 2000. V.62. №2. P.347-354.

329. Zhao G, Garbers D.L. Male germ cell specification and differentiation // Dev. Cell. 2002. V.2. P.537-547.

330. Zhao M, Shirley C.R, Hayashi S. et al. Transition nuclear proteins are required for normal chromatin condensation and functional sperm development // Genesis. 2004. V.38. №4. P.200-213.

331. Zhao M, Shirley C.R, Mounsey S, Meistrich M.L. Nucleoprotein transitions during spermio-genesis in mice with transition nuclear protein Tnpl and Tnp2 mutations // Biol, Reprod. 2004. V.71. №3. P.1016-1025.

332. Zhang R.D, Wen X.H, Kong L.S. et al. A quantitative (stereological) study of the effects of experimental unilateral cryptorchidism and subsequent orchiopexy on spermatogenesis in adult rabbit testis // Reproduction. 2002. V.124. P.95-105.

333. Zhang X.S, Ebata K.T, Robaire B, Nagano M.C. Aging of Male Germ Line Stem Cells in Mice // Biol. Reprod. 2006a. V.74. №1. P.119-124.

334. Zhang X, Yamamoto N, Soramoto S, Takenaka I. Cisplatin-induced germ cell apoptosis in mouse testis // Archiv. Androl. 2001. V.46. P.43-49.

335. Zhang X.S, Zhang Z.H, Jin X. et al. Dedifferentiation of adult monkey Sertoli cells through activation of ERK1/2 kinase induced by heat treatment // Endocrinology. 2006b. V.143. №3. P.1237-1245.

336. Zhang Z.H, Hu Z.Y, Song X.X. et al. Disrupted expression of intermediate filaments in the testis of rhesus monkey after experimental cryptorchidism // Int. J. Androl. 2004. V.27. №4. P.234-239.

337. Zhang Z.H, Renfree M.B, Short R.V. Successful Intra- and Interspecific Male Germ Cell Transplantation in the Rat // Biol. Reprod. 2003. V.68. P.961-967.

338. Zirkin B.R, Chen H. Regulation of Leydig cell steroidogenic function during aging // Biol. Reprod. 2000. V.63. №4. P.977-981.

Информация о работе

Кулибин, Андрей Юрьевич
кандидата биологических наук
Москва, 2006
ВАК 03.00.30

Диссертация

Ответ генетически нестабильной сперматогенной системы ускоренно стареющих мышей линии SAMP1 на мутагенное воздействие - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы