Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Оценка эффективности различных схем гормонального вызывания суперовуляции у коров-доноров при трансплантации

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Оценка эффективности различных схем гормонального вызывания суперовуляции у коров-доноров при трансплантации"



ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На правах рукописи УДК 612.646.02

Мальцева Ирина Валентиновна

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ СХЕМ ГОРМОНАЛЬНОГО ВЫЗЫВАНИЯ СУПЕРОВУЛЯЦИИ У КОРОВ-ДОНОРОВ ПРИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ

03.00.13 - Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровины Московской области 1989

Работа выполнена во Всесоюзны* ааутно-ассдедовательсксм институте животноводства.

Научный руководитель - доктор биологических наук,

профессор Н.К.Сергеев

Официальные оппоненты: доктор биологических наук А.Д.Бугров

кандидат биологачоских наук Н.Г.Коновалоз

Ведущее учреждение: Московская область, п. Лесные поляны (ШКИплег), Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела

Залита диссертации состоится п * 1/ЬЮЛЗ~ 198 9 т. в час. на заседании специализированного Совета

Д-020.16.02 по защите диссертации на соискание ученой стелена доктора наук при Всесоюзном научно-исследовательском институте гшвотноводства

Адрос института: 142012, Московская область, Подольсенё р-н, нос. Дубровяцы

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан '¿£ " 198 £_г.

Ученый секретарь спегдааяазированного совета кандидат биологических наук

и.й.ш5шгне

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность таботн. Решение задач аграрной политики, выработанной на ХХУП съезде КПСС и Продовольственной

с

программой до 1990 года позволит повысить уровень селекционной работы по совершенствованию племенных и продуктивных качеств высокоценных пород животных и обеспечить население про>

дуктами животноводства.

Трансплантация эмбрионов - один из генетических приемов селекции в животноводстве. Внедрение метода трансплантации эмбрионов в производство позволит существенно повысить темпы селекции высокопродуктивного молочного скота. Увеличение с помощью метода трансплантации эмбрионов коэффициента размножения в 2 или 5 раз (8-20 потомков от коровы) повышает селекционный эффект в 1,8-2,4 раза, соответственно.

Эффективность применения метода трансплантации в- селекция скота зависит но только от племенных и продуктивных качеств лашотных-допоров, но и от их способности к индуцировании суперовуляции, ввдел(. иа достаточного числа нормальных эмбрионов для пересадки п крноконсервировапия.

Известные способы гормонального вызывания суперовуляция у коров-допоров не дают возможности получать аэровуляцию у 30$ япвотных, а индуцирование высокой стопонз «ложествешюа овуляции но обеспечивает достаточного выхода нормальных зьй-рионов. При этом снижается индекс ошгадотворяемостя я;1дог-1д-ток, увеличивается число дегенерировшшых эибраоиов. Енсская вариабельность на гормональные препарата, проявление отрицательных факторов делают известные методы весьма пенэдеэшю:.

1.2. Недь исследований заключалась в освоении и усовершенствовании метода синхронизации половых цнклов коров-доноров и телок-роцигшентов, сравнительном изучении эффективности вызывания сунеровуляции у коров-доноров различными типами гонацотропииов; опрелелонии факторов, влияющих на показатели суперовуляцг.и и качество зародышей; изучении гормонального статуса у коров-доноров в день охоты и перед гормональной обработкой и связь ого с уровнем сунеровуляции и качеством эмбрионов.

1.3. Япд.ччи исследований:

1. Усовершенствовать метод синхронизации охоты у коров-доноров и телок-реципиентов; схемы гормонального вызывания сунеровуляции, обеспочиваххще реакцию яичников на гонацотро-пин у 90-95$ к получение нормальных эмбрионов у 75-60;i животных.

2. Изучать степень влияния разных схем гормонального вызывания суперовулкции у коров-доноров с учетом типа и дозы го-надотротша, разных сочетаний гормокальшяс пропарлтои, дня обработки на уровень супоровуляцпи.

3. Определить концентрацию прогестерона и эстрпдиола в кропи коров-доноров в день охоты и перед гормональной обработкой и возможную связь их с уровнем супороиуляции и качеством рмбрлоков.

1.4. Научная нотазпп робот» зшоазчавтея в опредодопни о.*«1ектавлоста гормонального вызывания супоровулящш с попользованном усовершенствованных схем обработку коров, выявлении ?:h-ho:';.:octi: суперовуляции от типа гонадотрошша и исходного гормонального профиля в крови коров-доноров.

1.5. Практическое значение работы состоит в том, что усовершенствованные схег.щ синхронизации охота и гормонального вызывания суперовуляции позволяют синхронизировать охоту у 80$ телок, получать сулеровуляцшз у 28% короз при чи£де овуляций до 10,0 и нормальных эмбрионов от 4,0 до 6,3 иа донора.

Работа выполнена, в соответствии с планом НЛР Б1Ш по теме 25.01.08 - "Разработать спбсоби разшюяения с.-х. гашот-тшх с использованием трансплантации вибрионов" (й гос.реги-стрэдш 81103762).

Апробация работы. Основные положения диссертации долопе-1ш и получили пологсгтелънув оценку: на ежегодных научных кон-фэреяциях отдела трансплантации омбряонов сельскохозяйственных глвотних; па Л конференции молодых ученых "Разработка методов биогакенерли в япеотпоеодствз дет совернонствованяя продуктивных и технологииэскях качеств сольскохозяйствшппс етвотяых (0-9 пеня), г.Пупкин, 1987 ; на 41 научно-методической конфзренцпи аспирантов и колодах учених "Ниоцсг^лка-ция лзвотноводства: проблем и пути решения" (26-27 !<лл), Дубрэвиш, 1988 ; на Республиканской научной коп^орегагад "Состояние и перспективы развития биотехнологии в животноводстве" (21-22 сентября), г.Харьков, 1988.

По маторнатам диссертации опубликованы 4 печатные р^ота,

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 83 страницах маппшописного текста, содержит 22 таблицы, 8 рисункоз. С:тисок литературы включает 134 палкекогадая, из них 97 на шостратшх языках.

2. материал и метод!/ исследований

Исследования проводили на коровах черно-пестрой породы 5-6 летного возраста в ОПХ "Шалово", ГАЗ "Потровскоо" Московской области, колхозе км.Ленина Тульской области, колхозе "Тер-вето" Латвийской ССР.

Для пересадки глубокозаморожонных эмбрионов синхронизацию охоты у толок швицкой породи проводили двукратно простаг-ландином "Эструкат" в дозе 500 лист без учета дня цикла. Повторная обработка проводилась на 11-Й день поело первой обработки.

Для синхронизации охотн у коров-доноров пород гормональной обработкой использовали простагландины "Эстрофан" (ЧССР) в дозе 500 мкг и препарат простагландинов ФЛПГ (СССР) в дозе 10 мл на донора.

Гормональное вызываний супоровуляции осуществляли с использованием стандартного СЗК (фоллигон) и ФСГ-п по 4 и 5 дневной схеме, а также с применением антисыворотки на C-.lv и препарата Ж' "Овогон-Тио".

Схемы обработки коров с применонием различию: гонадотро-пинов приведены в таблице 1 и 2.

3 наших исследованиях была испытана 4-х дневная схег-а гормональной обработки препаратом £СГ-п с использованном разных суточных доз.

Для огфеделешш эффективности гормонального вызшзагсш суперовуляции у коров использовали препарат íCT-n в сочетании с ЛГ ("Лутеоз;г?.:ан" производства КРБ и "Ово^он-Тио" производства СССР). "Лутеозиман" представляет cotíoü лиофнлизат, рас:вэр:аий в вода с активностью 1000 И Е so флаконе;

Таблица I

Последовательность обработки коров СЖ в сочетании с биологически активными веществами и антисывороткой

День астрального никла

Название препарата

Единица Цоза

измерения п£зларата

2 Витамин А

Витамин Е

о

10-12 ГСЖК (фоллигон) Витамин А Витамин Е

12-14 Лростагландин "Эстрофан"

14-16 Охота и осеменение

Антисыворотка + 2-е осеменение

21-23 Нехирургическое извлечение эмбрионов

ИЕ МГ

И Е М Е мг

мкг

ил

150000 100

2500

75000

50

500*

Таблица'2

Последовательность гормонального вызывания суперовуляции у коров гипофизарным гормоном ФСГ-п

День астрального цикла Название препарата Ецинхща измерения Доза препарата

8 ФСГ-п мг 10

9 ФСГ-п ш* 10

10 ФСГ-п иг 10

II ФСГ-п Простагландин "Эстрофан" кг шсг 10 500

12 ФСГ-п нг 10

13 20 Охота и осеменение Нехирургическое-извлечение эмбрионов

"Овогон-Тио" - сухой диофилизат в ампулах по 1000 И.Е. Препарат ЛГ вводили животным перед вторым осеменением в дозе 1500 И Е (табл. 3).

Таблица 3

Последовательность гормональной обработки коров препаратом ФСГ-п в сочетании о ЛГ

День астрального цикла Название препарата Единица измерения Доза препарата

8 ФСГ-п мг 10(5-5)

9 ФСГ-п мг 10(5-5)

10 ФСГ-п мг 10(5-5)

II ФСГ-п мг 10(5-5)

Прсстагландин "Эстрофан" мкг . 500

12 ФСГ-п мг 10(5-5)

13 Охота и I осеменение

14 "Лутаозимаи"+2 осеменение И Е 1500

20 Нехирургическое извлечение эмбрионов

Лдя определения гормонального профиля у коров брали кровь в день охоты и перед гормональной обработкой. Определенно прогестерона и эстрадиола в сыворотке крови проводили радио-галлунологичоским методом в лаборатории МВА и ВНИИГХЖа, Кроме того, прогестерон определяли и в молоке качественным методом с использованием набора реактивов " 1€№1$ " анг-

лийского производства. О наличии или отсутствии прогестерона судили по изменению цвета молока. Извлечение эмбрионов, оценку их качества и стадии развития осуществляли по методикам В11ла.

3. результаты исследований

3.1. Синхронизация охоты у коров-доноров и • . телок-реципиентов

, В настоящее время отработаны и широко использующая схемы синхронизации охоты у животных-реципиентов, основанны1- на вызывании преждевременной регрессии желтого тела с помощью простагландинов. Для этой цели п&роко используются простаглан-

дву1фатно с интервалом 10-11 дней между инъекциями.

Первая обработка вызывает лютеолизис только у животных с функционирующим желтым телом, которых обычно бывает в стаде около 50$ от общего числа. Во время второй обработки прос-тагландинами почти все животные имеют функционируотее желтое тело и до 90$ их проявляют охоту через 48-72 часа.

Первый этап обработки проводился в ноябре 1986 года. Было отобрано для синхронизации 500 телок случного возраста швицкой породы. Под обработку отобрали 477 .тавотных. Обработку проводили двукратно простаглалдином "Эструмат" в дозо 500 мкг, без учета дня цши?а. Отбор телок в охоте проводили по рефлексу неподвижности круглосуточно. Из 477 телок придло з охоту 367 (76,9$).не проявили признаков охоты НО телок (23,11»), были исключены из числа роципиентов 101 телка (27,6%). Эмбряо-ны бит пересажены 266 телкам на 7-8 день цикла.

По показатели приживляемо с ти не било достоверной разшпм ' между морулаш и бластодастама. Исследования на стельность провели через 3 месяца поело пересадки. Из 266 рэютшентов стельными стали 156 (58,6$) (табл. 4).

дин

или его аналоги, которые применяют однократно или

Таблица '1

Результаты синхронизации охоты у телок-реципиентов и пересадки эмбрионов (ноябрь 1986 г.)

Показатель Количество животных Процент

Обработано животных 477

Пришло в охоту 367 76,9

Но было желтых тол в яичниках 101 27,6

Пересажено эмбрионов 266

Стольных реципиентов 156 58,6

В том числе от пересадки:

морул 22 55

бластоциот 134 59,7

Второй этап работы бил проведен в фоврале 1987 года. Было отобрано ^76 телок. Эту группу также обрабатывали простаг-ландином. Первую обработку провели 26-27 января без учета дня полового цикла, на 11-й день обработку повторили Из 176 отобранных телок проявили признаки охоты 164 (93,2$).

Из 164 телок, пришедших в охоту, оказались непригодными для пересадки эмбрионов 62 животных (38,0$). Эти .тавотные были исключены из числа реципиентов. Эмбрионы были пересатаны 102 реципиентам и через 90 дней установлена стельность у 52 телок-реципиечтов (50,9$). Морулы бшш пересажены 26 реципиентам, из них стольными стали 13 телок (50Гр, бластоцисты -'■'6 реципиентам, стольных оказалось 39 телок (51,3^). Повторно

- II -

мбрионы были пересажены 34 телкам, стальными стали 16 47,0$).

Таким образом, сравнительные результаты синхронизации

1Хоты у толок-реципиентов в ноябре 198В года и феврале

о

987 года показали, что процент прихода телок в охоту после

зукратной обработки простагландином в ноябре был на 16,1%

иже, чем в феврале. Однако из числа пришедших в охоту, при-

о

'одних для пересадки в ноябре было на 10,4$ больше (72,4$ про-ив 62,0$). Приживлнемость эмбрионов в ноябре была на 4,7$ учше, чем в феврале.

Для синхронизации охоты у коров-доноров нами был исполь-ован простагландин "Эстрофан" (ЧССР) в дозе 500 ист и пре-арат ФЛПГ (СССР) в дозе 10 мл на донора о учетом дня цикла, онтролем служила группа коров, обработанная эстрафаном.

Данные таблицы 5 показывают, что препарат ФЛПГ по своему ействию не уступает известному простагландшгу аотрафрну, азница в действии простагландина ФЛПГ состояла в замедленном роявлэнии лютеолитического влияния. Так, при обработке эстрог аном через 48 часов пришли в охоту 12% и через 72 часа 18,7$ оров. В группе коров, обработанных ФЛПГ,' через 48 часов не ило коров в охоте -и только через 72 часа их било 755?, а через 6 часов - 15,6$. Число коров, но проявивших признаков охоты, сравниваемых группах било равным (табл. 5).

3.2. Результаты вызывания супоровуляции у коров гопа-дотропином СЯК в сочетании о антаоивсроткоЗ

Нестабильность супоровуляции макет бить обусловлена более ■

питолышм влиянием СЯК по сравнению о гипсфязарнаиа гормо.ча-

,1. Гонадотропин СЖК обладаот очень длительным (около 60 дней)

Таблица 5

Эффективность применения простагландинов для синхронизации охоты у коров-доноров

Нростагландин

Показатель "Эстрофан" (ЧССР) ФЛПГ (СССР)

п % п г.)

Обработано коров 32 - 32 -

Проявили признаки охоты 29 90,6 . 29 90,6

В том числе:

через 48 часов 23 71,0 - -

72 часа 6 18,7 24 75,0

96 часов - - 5 15,6

Не реагировали на " обработку 3 9,4 3 9,4

периодом полураспада в оргшшзыо животного. Пролонгированное действие СЯК является одним из негативных факторов, влияюпщх на результаты суиоровуляции. Чтобы исключить длительную стимуляцию гонадотропином и для получения предсказуемой реакции яичников была сделана попытка применить шписыворотку, которая прерывает дальнейшую стимуляцию растущих фолликулов в . яичниках. Это создает благоприятный фон для овуляции и ошго-дотворяемости яйцеклеток.

Установлено, что обработка антисывороткой в день охоты, т.е. через четыре дня после инъекции СЖК (опытная грушда), обеспечивает более высокую реакцию суперовуляцип в сравнении с швотшл.и, обработанными только СЖК. Так* в опытной группе реагировало суперовуляцией 81,4$ коров при среднем число овуляций 8,9 и нормальных эмбрионов на донора 4,0 (табл. С).

№

Таблица 6

Уровень суперовуляции и качество эмбрионов у коров, обработанных СЖК в сочетании с антисивороткой на гонадотропин

Г р у п п ц °

Показатель --

СЯК (¡Зхэллигон) СЖК+ацтк.онворотка

Обработано коров 45 О 70

Реагировало суперовуляцией (п-$) 44-97,7 57-81,4

Чиоло овуляций на донора 6,6±0,36 8,9±0,32

Положительных доноров по извлечению эмбрионов (п->) 36-81,6 52-91,2

Получено зародышей на донора 4,0±0,56 5,5±0,57

Из них: нормальных. 2,5±0,20 4,0±0,40

Процент от общего числа зародышей 62,5 72,7

В контрольной группе эти показатели были заметно шско и составили по числу овуляций 6,6 , зародышей 4,0 и нормальных эмбрионов - 2,5 на донора. От?,ючена разнгца в число положительных доноров по извлечении эмбрионов. В контроле этот показатель был равен 81,6?, в опытной группе он бил на 9,6;? Зольше и составил 91,2$.

Каша-либо различий в качество э?.гбрионов по группам яа-dothhx но выявлено. Наблюдалась только тенденция улучэекая качества эмбрионов в группе коров, обработанных СЯК в сочетшпст з антисквороткой. Так число хорошх ймбрионоз в этой групп«? доставило 30,2 против 29,5$ в контроле. С увеличением тесла эвуляцнй повыиалось число нормальных п дегенераровянпкх э.'г)?;го-:юв, снижалось количество неоплодотворонных яйцеклеток. Gilto-

- 14 -

дотворяемость их была выше у коров опытной группы (83,7%) по сравнению с контрольной (79,1$).

В опытах была определена эффективность обработки коров СЖК в сочетании с антисывороткой в сравнении о обработкой коров гипофизарным препаратом ФСГ-п.

После обработки СЖК в сочетании с антисывороткой реагировало суперовуляцией 81,4$ коров или на 19,6$ меньше по сравнению о обработкой гипофизарным фолликулостимулирутацим препаратом. Аналогичные данные были получены в число положительных доноров по извлечению?эмбрионов {91,2 против 95$), среднему числу извлеченных зародышей (5,5 против 7,5 ) и нормальных эмбрионов (4,0 против 6,2 на донора). Наблюдалось увеличение чиола нормальных и- догенорировашшх эмбрионов с повышением уровш овуляций. Приведенные данные свидетельствуют о существенном преимуществе ФСГ перед СЖК. Отмечена незначительная разница в число оплодотворённых яйцоклеток по группам коров (табл. 7).

В эксперименте было изучено влияние типа гопацотрошша и метода вызывания суперовулшиш на качество эмбрионов и их при-живляемость после нехирургической пересадит. Было исследовано 399 зародышей в группа с ФСГ и 314 в групп© с СЖК + антисыворотка.

Качество эмбрионов было несколько лучше у коров, обработанных ФИ', по сравнению с СЖ. 'Гак, в группо коров, обработанных ФСГ, 24,6/5 эмбрионов были отличного качества против 9,8$ в группе с СЖК ; гаже число хороших . и удовлетворительных вибрионов при почти равном »числе дегенорировап-ных (13,4 против 15,5) на донора и значительном числе неоплодотворенннх яйцеклеток (16,3 против 5,3^). Оклодо-

творяемость яйцеклеток составила в группо коров с .-СГ -94,7$, в группе с СдК - 83,

Таблица 7

Уровень суио.ровулящш к качество эмбрионов :грп обработке коров разные кокацотро'Г.шами

Гонадотропин Показатель -:--

2СТ СлК+дл гнс ьшоро тха

Обработано коров 60 70

Реагировало супоровултиеЖп-З!) 60-100,0 57-81,4

Число овуляций на донора 10±0,5 . 8,9±0,32

Оперировано животных 60 57

Положительных доноров по извлечению эмбрионов (п-%) 50-95,0 52-91,2

Число зародыпей на донора 7,5±0,7 5,5±0,57

о В том числе: нормальных дегенерировалпаа НеОПЛОДОТЕОрОНННХ . яйцеклеток 6,2±0,4 1,2*0,5 0,1-0,7 4,0^0,40 0,6±0,05 0,9^0,08

1

Эмбрион; отличного качества от коров, обработанных ОТГ, отличного и хорозаго качества от коров, обработанных СдКюнтисыгоротка.бнл;! пересажены 94 телкам-реципиентам нехирургическим методом. Получен высокий результат пргсклвля-емости эмбрионов корон норвоЛ грушш (81,2;3) п заметно меньше во второй трудно (53,5!?), что вероятно, объясняется качеством эмбрионов.

Применение актисквороткн на СЗС способствует полноценной овуляции.высокой Оплодотворяемостн яйцеклоток, улучшения качества эмбрионов по сравнению с СлК без алтисывороткп. Однако

обработка коров СКК с антасывороткой менее эффективна, чем обработка коров гапофазарным гормоном ОСТ-п.

3.3. Результаты вызывания суперовуляшш у коров

препаратом ФСГ-п в сочетании с лотешшэирущим гормоном (ЛГ)

Для получеггся болео высоких и стабильных результатов суперовуляции и снижения вариабельности в реакции яичников > очень перспективны?,! является применение, для этих целей фол-ликулостиыулируидего гормона гипофиза свиней (ФСГ-п) в соче-танш! с ЛГ в соотношении ФСГ к ЛГ 5:1. Добавочное введение ЛГ требуется для того, чтобы продублировать физиологический эндокринный профиль в течение фолликулярного роста. Оказалось, что совместное введете этих препаратов с-Зэспечивает более высокий уровень суперовуляши, улучпает качество змбр гонов и повышает оплодотворяемость яйцеклеток. Исследования были проведены в ГПЗ "Петровское" Московской области и колхозе "Тервете" Латвийской ССР.

В ГПЗ "Петровское" обработка препаратом .ФСГ-п обеспечивала супзровуляцию у всех коров без исключения при высоком числе овуляции по трем группам коров (11,2-13,3 и 11,3 овуляций на донора). Положительных доноров по извлечению эмбрионов было неодинаковое число и составило в контроле (ФСГ-п) -63,6%; в первой опытной группе (ФСГ-п + "Овогон-Тио") -87,5$; и во второй опытной группе (ФСГ-п + лутеозиман) -100^. Различные результаты бшш получены и в числе зародышей на донора (5,9; 6,3 и 10,5). Показатель числа зародышей от числа овуляций соотавил соответственно 52,6 ; 60,3 и 92,6$. Аналогичные различия били п по выходу нормальных эмбрионов в среднем на одного донора <3,2; 4,5 и 5,9).

Несколько другие результата были получены во втором опыте, приведенном в колхозе "Тервете" Латвийской ССР. В контроле реагировало суперовулянпей 90,9£ коров, в опыттсс группах их было меньше на 27,3 и 19,5?! соответственно (90,9 против 63,6 и 71,4л)• Положительных доноров по извлечению эмбрионов било в первой опытно!! группе Х0С£ , во птоуоЯ олнтно!! группе 70$ к в контрольной 81,1/.. Существенных различи!! в число овуляций и извлеченных зародиией на выявлено. Отмечено незначительное сжсярнне числа зародышей в группе короа второй опытной группи (6,3 против 7,В и 7,6). Аналогичные результаты били получены и в числе нормальных эмбрионов на донора (5 в контроле, 6,3 и 4,0 в опытных группах). Суммарные результат« по двум опытам в разных хозяйствах приведены_в таблице 8.

« Таблица Й

Уровень суперовуляили и качество эмбрионов у короа при применении препарата ССГ-п в сочетании, с ЛГ

■ Группы

Показатель «Г ССГ+"0во-гон-Тло" ФСГ + лгтеозю.ган

Обработано корон ол ■С 19 24

Гоагпропало сутюроруллцне,'! 21 15 20

(Гронент от числа обработанных 95,5 73,9 83,3

Положительных доноров по извлочоинп з^рионоп 15 14 17

Процент от числа оперированных 73,0 93,3 85,0

Число овуляций на донора оароднше!! на донора ! 1сpt.ia.ub!Iда эмбпионов

10,54,4 12,2±2,9 7,9±1,6 ?.6±0.Э 4,8*1,0 5,6±1,3

Ю,7±1,4 9,0±1,5 5,3±1,2

. Приведенные дайте 2-х опытов показывают, что применение ФСГ-п в сочетании с ЛГ способствует повышешш уровня суперовулящпи коров с 10,5 до 12,2?; увеличении выхода зародышей с 7,9 до 9,0 и нормальных эмбрионов с 4,8 до 5,6%; снижении числа неоплодотворошшх яйцеклеток с 1,4 до 0,3$ на донора.

3.4. Уровень суперовулящш и качество эмбрионов в зависимости от дозы ФСГ-л

Исследования были направлены на изучение действия разных доз ФСГ-п на уровень суперовуляции и качество эмбрионоь у коров. Испытано две дозы ССГ-п с началом обработки 8 и 10-го дня эстрального цикла. Одна группа коров получала 32 мг ФСТ-п в течение 4-х дней в одинаковой ажедневной дозе (8 мг), вторая - такую хе дозу (32 ыг), но по убывающей концентрации (12, 10, 8 и 2 мг) и третья груша коров - 50 мг в течение 5 дней с 8-го дня по 10 мг ежедневно (табл. 9).

Таблица 9

Результаты вызывания суперовуляции у коров

разными дозами препарата ФСГ-п

Лоза ФСГ-п (мг)____

Показатель 32 50

____центрации_

Обработано коров 21 21 22 •

Реагировало, суперовуляциой 21_1Ю 21_100 21-95,4

Число овуляций на донора' 10,9*0,94 10,2*0,76 8,6*0,97

Лимит ' 4-20 • 5-18 4-23

Коэффициент изменчивости^) 39,0 33,5 51,6

Положительных доноров по ?т от 9П

извлечению эмбрионов , с

'Число зародышей на донора.,. 10,850,94 7,3*0,82 4,8*1,45

Из них; нормальных . 5,6*0,47 5,5*0,82 4,5*1,45

догенерированных 3,7*0,94 1,1*0,17 0,3*0,07

неошгодотворенных яйцеклеток 1,6+0,5 0,7*0,17

Данные таблицы 9 показывают, что коровы ил разные дозы препарата одинаково реагировали супоровуляцией. Число овуляций на донора по группам составило 10,9; 10,2 и 8,6 на донора,соответственно. Отмечено увеличение коэ^Тткеита изменчивости в группе коров с высокой дозой $СГ (50 мг) и составил 51,6%. Число зароднзей на донора оказалось наименьшим в этой группе коров (4,8 против 10,8 я 7,3 ).

Аналогичные результаты бита получены и в число нормальных эмбрионов на донора (4,5 против 5,6 п 5,5 ). Однако в тротьой группе было зарегистрировано меньше догснорировшпшх . эмбрионов и отсутствие неоплодотвореннюГ яйцеклеток. Вероятно, это было связано не с дозой препарата, а с числом овуляций. Самое высокое число овуляций (10,9 ) баю у корен первой группы, у них же зарегистрировало п больсоо число до-, генерированных эмбрионов (3,7 " на донора).

( Из приведенных данных следует, что при вызывллли супер-ч.ауляшст препаратом ССГ-п, дозу ого моя;о уменьепть с 50 до 32 Мг. Прпменекно "СГ-п в дозо 32 от по убывающе!! котентря-цли не улучпяет показатели супоровулшега и выход пормалыпсс эмбрионов на донора, но и не усудзает их.

3.5. Конпентргиги прогестерона и эстрадпола в крова коров з день охоты и перед гормональной обработкой

Успех суперовуляториых обработок во многом зависит от гормонального статуса донора в день обработки. Оптимальным временем гормонального вызывания суперовуляцаи принято считать 8-12. дни полового цикла. Продолжительность полового цикла у животных различна и могут быть допущены ошибки в ппзуатеном определении охоты, поэтому определегаш состояшш

эндокринной функции яичников является надежным дополнительным ыотодом. Эндокринная функция яичников представлена определенной концентрацией прогестерона л эстрадиола в сыворотке крози в различные фазы цикла. с

Нами проведены исследования с целью определения оптимальных исходных концентраций прогестерона и эстрадпола в крови коров в день охоты и перед началом вызывания суперовуляцин (табл. 10). Было сделано сравнение исходных концентраций гормонов с показателя?,и числа овуляций, зародышей и нормальных эмбрионов. Гормональное вызывание суперовуляцин осуществляли гипофиз арными горконачга ФСГ-п и ФСГ-п в сочетают с ЛГ.

Таблица 10

Динамика накопления гормонов в крови коров-доноров

Гормоны

Показатель прогестерон_эстрадиол

в день на 8-10 в день на 8-10 охоты день цикла охоты день цикла

Концентрация, нг/мл 1,7±0,32 7,1±0,61 27,5*1,35 19,9*1,29

Лимит 0,5-2,60 3,8-8,20 21,8-29,43 17,3-22,0

Коэффициент изменчивости 44,7 21,4 11,8 16,0

- В зависимости от физиологического состояния коровы наблюдаются определенные изменения в уровне гормонов. Так, концентрация прогестерона во время эструса составила 1,7 нг/мл^ а в лптеальную фазу цикла 7,1 нг/мл. В уровне концентрации эстрадиола иабладалась обратная-завпсимость: увеличивалась концонт-рацшх, его во время оструса (27,5 нг/мл) и уменьшалась до

19,9 нг/мл на ß-IO день цикла. Коэ.^фнконт изменчивости по прогестерону во времл охоты бил относительно высоки! и составил 44,7^ и он был в два раза шта (21,4) на 8-10-Й день цикла.

Существенных различий в коэффициенте изменчив,>ст;: по эст-радиолу в разлячнно фазы полового-цикута но выявлено, отмочено снижение кошюнтршс.й эстрадисла на 8-10-й день цикла и ув<>-личенко показателя изменчивости.

В таблице II продставлонн результаты вызывания сулерову-ляцин в зависимости от исходной концентрации гормонов в крови коров. Животные обоих групп кколл приблизительно одинаковое cooTHoaomie концентрации прогестерона : эстрадиола на день обработки. Такой уровень концентрации горионов, вероятно, .является оптимальным доя доноров на день обработки, что подтверждается довольно высоким числом овуляций з обеих группах (14,7 и 14,2 ) при почта одинаковом лимите и коэффициенте из-

I

г ".ггчЙбостл по этому показателя.

\ 1.|Прлведоннке дшшыэ свцдотольствуэт, что при стабильной концентрации прогестерона (7 нг/мл) в крови коров пород обработкой мохно гярантировать получение высокого уровня овулящгй (до 15) и выход нормальных эмбрионов на донора (табл. 12).

Логонор;фованн!к эмбрионов в первой группе (ОСГ-п) было I,7±0,68 во второй (ФСГ-п + ЛГ) - 2,2±1,07 , иеоплодотво-реннкх яйцеклоток - 0,4 и 1,0 на донора, соотвотственко.

Высокая степень супгровуляцни дала возможность получать 79,8 и 73,нормальных эмбрионов или 8,3 л 8,8 на донора. Из них более 95;? отличного а хорошего качества при незначительном число (5,2 и 2,3;?') зародышей удовлетворительного1 качества.

Таблица II

Уровень еулеровуляции в зависимости от концентраций горлзноэ в крови коров-доноров перед гормональной обработкой

Показатель Гонадотропин

ФСГ-п ФСГ-п + ЛГ

Обработано коров В 5

Концентрация (кг/мя)

прогестерона 7,2*0,75 7,0*0,48

эстрадаола 20,8*1,59 19,3*1,00

Число овуляций на донора 14,7*2,37 14,2*3,23

Лимит 4-22 8-26

Коэффициент изменчивости {%) 42,6 50,9

Получено зародышей на донора 10,4*2,09 11,9*4,37

Лимит 4-18.. 1-26

Коэффициент изменчивости {%) 53,1 82,9

Таблица 12

Количество и качество зародышей в зависимости от гормонального профиля крови коров-доноров перед обработкой

Показатель -Г 0 Р М 9 И Н

ФСГ-п_ФСГ-ц ЛГ

Концентрация, нг/мл:прогестерон 7,2-0,75 7,0*0,48

эстрадиол 20,8*1,69 19,3*1,00

Число зародышей на донора 10,4*2,37 II,9*4,37

в том числе: нормальных/ 8,3-1,61 8,8*2,58

Процент от числа зародышей 79,8 73,9

из них отличных (а-%) 4,1-49,9 5,2-59,0

хороших 3,7-44,7 3,4-38,6

удовлетворительных 0,4-5,2 0,2-2,3

- 23 -

Показателем для ш;бора доноров в промежутке от 6 до 10 дня цикла является состояние активности долгого тела ялчпнко. Активность полтого тела оценивается концентрате;'! прогсстсрона, который можно определить количественны.'.: { з крови } и клчост-вошшм методами (а молоко).

Установлено, что качественный метод по окраске проб молока отраглот ексоноо содорканио прогестерона п крови коров, которое прямо связало с урспнем овуляций при гормональной обработке (табл. 13), Таг'., коровы с ярко-малиновой окраской проб

13

Сравнительное определенно прогссторона а крова и

молоко коров количественном а качественны« метода;.!!

Помор :<оро-ОЫ

Метод

Рада с и з от с гл ш ü количественный, Качественный / „ по окраске __'.-о .-cita_

Число овуляций

прогостсрсн зстрадлод прогестерон

«л 10,3 29,5 Ярко-млллнопая 22

II64 • 8,3 21,3 Ярко-малиновый 17

3037' 0,2 10,6 Ярко-маллн опт;:! 23

341 7,1 I¿>,7 Ярко->/для:' с п'?, 21

116 7,2 С i. ,3 Ярко-машювыЯ 16

етз 12,1 17,4 Ярко-ыалпнознй 12

83 5,1 21,1 Бледно-розовый 3

Ш 5,3 17,1 Бледно-розовый т

10 3,8 17,3 Бледно-розовый 4

121 3,9 21,3 Б-зз изменений -

725 3,4 20,7 Без изменений -

•:олока содсрчата от 7,1 до 12,1 ¡¡г/мл прогестерона. У таких сороз был самый высокий уровень супоровуляция, который коле-!ался от 12 до 2о овуляций. У коров с бледно-розовой окраской

проб молока хонцептрадая прогестерона была низкой и колебалась от 3,8 до 5,3 нг/мл, соответственно наблвдалась небольгое число (1-4) овуляций. При полном отсутствии изменений в окраске молока содержание прогестерона в крови составило от 3,4 до 3,9 и ко было в эткх случаях зарегистрировано овуляций. Приведенные дашше свидетельствуют, что при использовании лактк-рущих коров в качестве доноров эмбрионов метод качественного определения'прогестерона по окраске проб молока перед гормональным вызыванием суперовуляцкл когшо попользовать в практической трансплантации при отборе коров для этой цели.

ВЫВОДЫ

1. Двукратная обработка телок-реципиентов г.рэстагландппом "Зструмат" в дозе 500 мкг на гивотпое с интервалом 10 дней бет учета дгш цикла обеспечивает пр;асод в охоту животных до 80^ через 48 часов поело второй инъекции препарата. Однократная обработка коров-дсыоров на 11-12-й дан цгасла на фоне ССГ-п прос-таглалдинами "Эстрофад" (ЧССР) в дозе 500 ыкг и ОЛПГ (СССР) -10 аш на ствотноо, позволяет синхронизировать охоту у 90,6^ коров.

2. Включение в общую схему гормональной обработкой анти-спворотки на СЕК обеспечивает высокий уровень оплодотворяе-мостп яйцеклеток (до 83,7%) л выход нормальных эмбрионов (до 4) на донора при заметном улучшении пх качества.

3. Совместное применение гипофязарного фолликулостгалули-руидого гормона (ФСГ-п) с препаратом ЛГ способствует повышению числа овуляций у коров с 10,5 до 32. ,2, выходу нормальных эмбрионов о 4,0 до 5,6% и снижению числа неоплодотворенных яйцеклеток с 1,4 до ОД? на донора.

4. Сшконле лозы препарата ^СГ-п с 50 до 32 мг но умонь-шаот число коров, роапгрупхлх сулеровуляпис!'., урезонь овуллнпп и число нормальных с-мбрионов на донора. Применение препарат СКТ-п в дозе 32 мг по убывагсцой котщптрагзп но улу*т~л.-7 затоли супорогуляцпп и шгсод нормальных эмбрпоно«, но и но ухудшало их.

5. Установленл прямая сгяэь ко;к;онтр;пи:и пр^госторэна в кропи коров перед обработкой с числом овуляций к -мбрпоиап. При концентрации прогестерона в крон;: 7 нг/;« полгчепо до 15 овуляций а от 8,3 до 8,8 кормадыгнх эмбрионов на д.тюрл. ;>пт использования лэхтярувтк коров в качестве доноров эмбрионов мотод качественного определения прогос ;срона по окраске лроб молока перед гормональным выз!Еаниом супсровуляцпи с о г-кпд лет с результата;.:! количественного определения прогестерона и его мотао использовать п практической трансплантата: при отбор? кого;» для этой коли.

Для гог"ояг.^т>ного суп^рог.уллцнн у П::сокогсродук-

тивнчх короз ро::г.тг:г~г-отея кеггалмог-ать г л.то провара?

*'СГ-п в "ого 32 мг п еоютгляя с ,Т ("Огогон-Гло") п доз-: 1?03 '.1.?,. Прг. г.р-.:м2!?о".пг. стахтгртчлга ерлпарагп ОлК - нсглчьсо-глтт. г.лгпо! '"оттот::;,' Слл под птороо осемзнпяад. При отбор«! ко-р<т> ;у*.л логольг хап.-ч в к.-лестзо допоров эмбризкср применять ллтостг^?;:;;:! м.'т.гч с:;рлдг>ло::;,я прогестерона по окраске греб мелок" перрд гор'.т:;плы:ол обработкой.

Основные положения доссертацхл опубликованы в следующих

работах:

1. Лебедев В.»., Петряков й.Н., Мальцева И.В, Эффективность пересадки заморозенно-оттаяннкх эмбрионов у телок с синхронизированной охотой. / Применение метода трансплантации эмбрионов в солски;::: сельскохозяйственных .тавотных, - Бм-лето!гь научных работ, 89 выпуск. - п.Дубровицы, 1988. -

С.64-67. '

2. Лпепа Л.П., Мальцева И.В. Результаты гормонального выбывания суперовуляцш! у коров с использованием антисыворотки на СЕК. / Пр;п:енс!п:о метода трансплантации эмбрионов в со-лекцта сельскохозяйственных ^нвотных - Бюллетень научных работ, 89 выпуск. - п.Дубровицы. 1988. - С. 43-44

3. Мальцева Л.В. Результаты сулеровуляции у коров с использованием ФСГ-п в сочетании с ЛГ. / Сборник трудов НИИЖЛиП. Респ. научк» конф. Состояние и перспективы развития биотехнологии в Еивотноводстве (Тезисы докладов) 21-22 сентября. - Харьков. 11388 - С. 86-87.

4. Методические рекомендации по гормональному вызыванию суперовуляции у коров-доноров эмбрионов,.Сергеев Н.И., Пронин А.П., Смыслова Н.И., Мальцева И.В. - п.Дубровицы, 1988.

Типография ВНИИ животноводства. Ткраз 100 экз.