Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности структурных изменений в тканях и системах Diphylobothrium Latum (L., 1758; Luhe, 1910) на некоторых стадиях онтогенеза после применения антигельминтиков и токсических веществ

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Особенности структурных изменений в тканях и системах Diphylobothrium Latum (L., 1758; Luhe, 1910) на некоторых стадиях онтогенеза после применения антигельминтиков и токсических веществ"

ГОСКОМСАНЭПИДНАДЗОР ПРИ ПРЕЗИДЕНТЕ И)

ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ИНСТИТУТ МЕДИЦИНСКОЙ ПАРАЗИТОЛОГИИ И ТРОПИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЫ ш.Е.И.МАРЦИНОВСКОГО

На правах рукописи

МОЛОДОЖНИКОЕА Наталья Михайловна

ОСОБЕННОСТИ СТРУКТУШиХ ИЗМЕНЕНИЙ В ТКАНЯХ И СИСТЕМАХ щрнхыовотшхш latum ( Ъ .,1758; ¿щз ,1910) НА НЕКОТОРЫХ СТАДИЯХ ОНТОГЕНЕЗА ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ АНШЕЛЬ-МИНТЖОВ И ТОКСИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ

03.00.19 - Паразитология

АВТОРЕФЕРАТ Диссартацав на со«сканив ученой степэнн кандидата биологических наук

Москва, 1Ь)92

Работа вшолнена в Московской медвдшсхой акадешн ил. И.М.Сеченова

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор,чдан-корр.АМН РФ Богоявленский Ю.К.

доктор медицинских наук, профессор Чебшев Н.В.

Официальные оппоненты: член-корр.АЩ РФ, профессор Лисенко А.Я.

хандидат медицинских наук.стврсшй научный сотрудник Плвдева ГЛ.

Ведущая организация: Минский медицинский институт ИЗ К>

Защита состоится "¿Х.-3 * (¿.г.т. в "^^чао. на заседании специализированного совета Д.074.39.01 в Иаституто медицинской паразитологии в тропическое медицины яы.В.И.Марци-новскогс 119830, г.Ыосхвд, Г-435, Ы.Пнроговсхая ул., дом 20

С диссертацией можно ознакомиться в Онблиотегй института. Автореферат разослан " ■ * / Ш 1992 г.

Учены» секретарь специализированного совета .

Фролова А.А,

■t

Актуальность .ггоойтемц. Лечение к профилактика гальминтозов не теряют актуальности дал практического здравоохранения и вете-ряиарж и ло настоящего времени. Вопроси эпидемиологии, химиотерапии, патогенеза дифаллоботриозов являются составной частью 06-щесоззной прографи по разработке и внедрению методов и средств, обоспечяшвпах стойкое ветеринарное благополучие сельскохозяйст-вешшх пгвотнях, охрану населения от болезней, общих для тело-Бака В Я1В0Т1ШХ.

В гааей стране пройтег.а дифгллоботряоза приобрела особое са-татарко-зпядемяодогпчсское и паразитодогическое значение в связи с обострением гельминтологической ситуации в результате воздействия человека на скруиавсота среду. Особую опасность в этом отношении представляет строительство гидросооружений я преобразование водгаж пагастралсЗ, внэываицак при несоблюдении необходимых мер профнактики формирование новых очагов дифиллоботряоза (в Поволжье, Новосибирской области, по берегам крупных рек Сибири). Болькое значеаяе имеет тагсхз 'пряток неигиунного населения в районы прашЕяснного освоения лошгс территорий, обуславливающий ухудаеике эаедекиояогяческой ситуации в природко-очаговнх зооно-заз:. УстсЯ'ткзость этих очагов во многом определяется лентецом строки,? - DJphyllobothriua latus ' , который вызывает опасное гзбелеваняе человека к гэтвоттк, обостряя гелигинтологическуа си-тзгаця» 2 ректонах.

Oäiss.: из совремоша цетодов борьбы с дафшгоботриозом является хпглотерашя, основная задала которой - изыскание против паразитов и одновременно малотокекчша: для хозяина лекарственных препаратов, прсяятстздквдпс распространении инвазии в охрукашей ерзде. Эта задача стача сп;э более актуальной в настоящее врет, пас каику стаял появляться сообщения о гознпкковении устойчивости паразитов х скропо пржеющиклоя'ранее антигелы,шитикам (Kelly, 1979),

Наряду с изучением взрослых (пеяезозрелше) паразитов валю о ■ значение .имеет изучайте сЕобсиноапнугкх стадий (яйцо, корацидай) в связи с антропогегаам воздействием на них токсикантов промышленного п сельскохозяйственного производства, без чего невозможно понять эпотегжиопггеекпе особенности диднллоботриоэа и рацио-

нальпо стро::ть борьбу с stím заболеванием.

Настоящее исследование является фрагментом дш«а гагадавцх исследований, которые проводятся на кафедре ' биологии ША до. К.М.Ссчекова, восвявюшшх азупенк» сгруктурта п вуш-асгоналышх 1:зкснел!:й, юзнккакетх и тканях геташтоа и органов :сс хозяев после применения различных антагсдиштиков. Подобные исследования позволяют оценить ой§екгкшость дейстак окгагеяьязйяшх . препаратов, рекомендовать наиболее пряеале«(7» Я®* .кюпевдяяов лекдрствешега) »¡©рад я разработать подходы к юс иаяраашвюаду ' синтезу.

Поскольку данная работа вносит о^оделенкаЯ зетад в ссолэ-

oiIftoKT3Eioa зодхтц касоления оч паразитарных болезней. актуальность ее вяолке оча.Блдна.

цУдь я задзод ксатодохюнггй« Цез» paca?,» tísco яге следа'zsissa улвтраструктуриай оргагциацзх «canes полого-зрелого Eiphyaio- , bothriua la. tus в карме a после ддоикзшя cssspasKsnsssK препаратов - фена сала ( »ato к тарохо лсиатазуе:.какг э СНГ), ща азхвшггеля (препарата висояой 5ф£ектнзнгс?з и сзфокого епкеуз дсйствая), алъбеидазата (сравнительно ксвого» я^роаеххжггого -здтшяюиагаса), а такзе з устааоачисп: с^еявкз /вогдеЯашга ряда токсикантов: хлорофоса - то;:сйканга еедьсяогс хс-зяйсею* ' фенаяа - расаросрранезшого соксшсакга лрв щ?«сёяешш стве, серной кесяоты - особенно акздазшо подобное влзааяе eíssí ствие зокяслшгя водоемов при звадслеизя.кяопая догдэй ш -хях-ночние стадии, (яйце/ зеораэддай) этого яарззвта.' -,

Пра проведении ассяедозанса Сиги ооезг&х&о.- gxs&hs&o "адата: ■■.''.

1. Определить кизнеспоео&югтв явц'параздта, продает гздуп-деняя из шк'коравддоов, и аявааконнос^ь soi ic soassU-•ствяя указанию: токсикантов. . ..

2. Изучеть особениосгл догдогаикогэ строен»: •тзгу.^екта, oo-«зтачаежпй етокудатурх, ' парашам, окскрогоршй и репройуктквгю! систем э нор;.:е._

3. Устсаковягь ctecesb структурен 'взмеяеаяй s якаяях а системах половозрелых гелышхов после воздействия ра,злгашх до езоецу химическому составу ангагельиянтшеов а опытах la vivo н in vitre.

Научная новизна. Подучены новао данные о влиянии ряда токсикантов прсватшишого и сельскохозяйстззгаюго производства - р-ра серией 1ИСЛ0ТЦ, хлорофоса» фонола па казнеспособность яиц п ко-рздддаев л2лггзца ппрокого. •

Получена српгияадышэ дсияшз, касахпаес.т ультратопкой организация тзгуишта, сслаетгеской ^скулатура, парензвмы, экскре-торюй'п РЗСРОДУХТЗЕЯСЯ 02СГ0М цестода DiphrUobothriwi latua я Hor;¿e.

Изучена дяиагыяа удатраструктуршос ззмзиеялЯ а ткашп а сгстетлах паразита доела прзгеаеаая гштигедшингнкх препаратов -фжасала, прижал толя, атьйевдазола э спатах in vlvotf ^ vitro. Нсгйодьзэз мздайогвЕй да ультрас?ру1«уру оказал аятагвлшиатик ояьйапдозод. .

Enep&us показана яоропззетЕгесть пепользоаашт антигелыгак-гкса адвбеплзгола- препарата группы бек5п.адкзолов нематецад-пого ягЗсякм: пр де§зялойо1раозе.

Прэдунчоскоо. зя^чаказ. Вззуямаса ясатодоэани.? до'свободео-гзяота? стад;®!! яозвожют- еяеавть Езразигологическув ситуадяв я рогяозо» йодьсрлге^ся е!гсрояогвшквог воздзйстшв, a такге вкс-г*а»ть ¡федзюстаягз о гегггоэ$остл яздоодгя етевевв вявазврован-пости ара уггаззя детгельяого ипяоплсиая токсикантов

г» «

газултл'з'л? as3Styssrsotni9JooKoc3?eox2s: ясслэдоваияй ткакей

»ípiiyllobothri«» lata t» viv¡> ti in vitro дополняют

огг',1';;"1 ©3 сК'1>кт"гпоог:з ".sMotsh." шгаг&доаппоюа; показнваот стсатяг-. ctninyinar а тапз да»? вэзмозяоета крогво-

бйрога?ь "oSpasmwws."пез п&оборот "гоейлажгоегь" ио^Тадоги-«»Екг r.SívVjcjssiajxvjx прз кездейеегвз того ют кг.огз сооддоизм.

1« Horas asían« о кзазш ?спсаш»ов - раствора сертой кле-ЛШ1, г&оро£ссз а Резола па яизаесзооойаость езобогяояавущзг ста-

дай (яйцо, корацкдий) Diphyllobothrium lutura.

2. Данные о 1.'лкг;оструктуре органов и тканей Diphyllobothriura latum е норме.

■ 3. Оригинальные данные о шарос труитурпьЕС изменениях тканей и систем Oiphyilobcthriiun intu.T. после воздействия фенасалом, празкквактслсм к альбендазодсм.

Результаты исследований долояенц на X съезде Всесоюзного общества гелысштологоз (Москва, 1839}. Диссертация апробирована на заседании кафедры биологии ЬШ им. К.Ы.Сеченова 18. мая I9S0 года (Москва) и на заседании Специализированной комиссии по предварительной экспертизе диссертаций при 1-ШпТЛ ¡п.;. Е.1!.;.:апцш;овекого 26 февраля ISS2 года (Мсс;:ьл).

материалам дассертащш опубликовано 3 работы. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена ш 194 страгацах машинописного текста в включает: вгедпние, обзор литературы, г-гтергол к методику исследований, результата исследова-- :шй и их обсуждение, выводы, практические рекомевдзггга и гголло-зеняя. Работа иллюстрирована IC6 элсктрашомнкроскопяческззди фотографиями, трачя схема:®, I графиком, 7 тайгацз!.га. Список литература содержит 175 работ, из них 80 отечественных и 95 зарубежных источников.

2. ШШШ И М5Г0ДША.

¡Объектом исследования явилась цестода Diphyllobothriiei latun ( L., 1758),семейства Diphyllabothriidae (I-vu, 19JO), КОТОрг'Л б половозрелой форме паразитирует в просвете тс-шой кита; человека и ¡еиютакс.

2.1. Свободаогивущпе стадии (яйцо, корацидий)

Культуру яиц из стробилы цесгода получали да общепринятой методике. .Зрелые яйца, а затем и коращцги иш;убировзлн в воде, подкисленной серной кислотой до рН=3.5, а такие в растворах фенола с концентра5 яг/л и хлорофоса с концентраipci: 6 мг/л.

Величины соответствует предельно допустима для орган«.жг реально встречающемся концентрациям в природных годах. Контролем служчли яйца и корацидаи, развивавшиеся в отстоянной водопроводной воде. Опыты проводились при температуре порядка 23°.

Наряду с лабораторными экспериментами проведены опиты по ¡лгкубл-щш лиц и керададиев в естественной среде ш участках PuSinicicoro водохранилища, загрязненных перечисленными токсикантами.

2.2. Полоаозрелые гельминты

Qmmi проводили ira золотистых хомячках масоой 20-30 грашов -отшщаргаой бяомодсая дофяллойотриоза. В оштах о онтагелглотглгимн препарата™ in vivo гшоояшх зараналн гиерацеркоидзми лекте-т широкого. После заражения одной группе зверьков пороралыго вводив! фенасал из раочога 1000 мг/кг, второй группе взодеии празин-вантель из расчета 25 мг/кг и третьей - am, бонда зол ICD мг/кг. Четвертуй группу составили незараяекшз хомячкя, Через 1,2,4 часа янвогкшс декагошгровали,' содержащихся в них цеотод извлекали и фиксировали для последующей электронной микроскопии.

В опытах in vitro червей, извлеченных из хомячков, помещали в растворы Рингера дои цестод с концентрациями: фсшасалаЮОО мгД, празиквантеля 25 мг/л, альбендазола 100 да/л. И?а«у0адая гелдаш-тов при 37° составляла в каядом опыте 1,2,4 часа, поело чого следовала фиксация. В экспериментах использовали 160 хомячков.

Для электронномикроскопического исследования объекты фиксировали в 2.5% глютаральдегиде и 1% растворе четырехокисн осшш, разведешшх 0.1 М р-ром фосфатного, буфера (pH - 7.2-7.4), затем дегидратировали в спиртах и абсолютном ацетоне. Пооло дегидратации объекты заключала в смесь эпоксидных смол эпон-аралдкт. Уль-тратонкке срезы получали на ультрамккрогош 1KB. Срезы контрастировали раствором уранвлацетата и цитратом свинца по Рейнальд-су, а затем просматривали в просвечивающая трансмиссионный электронный шжроскол Jem—100 С, Такжа иошш>зовали сканирующий электронный мшсроскоп Jsu-253 для изучения поверхностной струк~ туры сколекса и стробилы лентеца широкого как в норме, так и после воздействия антигельминтяков. Посла проводки объекты ззыоу-швали cnocoöoi.t "критической точки", наклеивали нитролаком на специальные столики и нагтяли золотом.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСЩЕШШ

3.1. Воздействие токсикантов на свободколшвувдш стадии (яйцо, корацидай) В условиях наших экспериментов 83.3"¿ лш, помоиентк в члетун

воду (контроль), образовали корг-талько развитые эмбрионы. Раствори токсикантов замс-гумли развитие корацидкев на 1-2 суток к визы-вплк их массовую г;:бсль. Tai:, в растворе сопкой кислоты (рН=3.5) ,~о вилугдския яогацкдкел рпэвкюлось ляль 5б?0 эмбрионов; в р-ре фонола (5 мг/л) - 70.G;í, в р-ре хлорофоса (6 мг/л) - 49.6Í. Поело ш'-думонкл в р-rax кзучавшззсся токсикантов корацкдии гибли в течение нескольких секунд. В прлродшк' условиях длительность со-орэВЙЯКЯ КОГч11К;~'ОВ УВСЛИЧЙВЗСТСЯ НЭ 3-4 ДНЯ JJ3-31 низкой темпе- ' рэтури вода в водоеме. Помещение яиц в золу Ри&тского водохранилища, ззггязнсинуэ хозяйственной деятельность» человека: I) Шоке-jjhhcxhí! плес - лро.-лккеннне стоки (фенол), 2) река Сейшз - сель-скохозяйствашнс стоки (хлорофос), 3) озера Дарвинского Государственного заповедника - аткосфсрние осадки (серная кислота рИ-3.5) вызывало 59.4Í и 39.гибель эмбрионов в первш: двух случаях и вляутшенке Л1шь 55.7£ корацвдаев в последнем. В контроле (чистая вода) в;яод корахеллев составил 83.Ж". Таким образом, наш установлено, что растворы токсических веществ, встречаачкх-. ся б природшк водах, замедляют развитие яиц цестода и вызывают гибель значительной га части. Наиболее сильное влияние на кизне-споссбкость яиц (в лабораторных к сстесгвешшх условиях) оказал псстицид хлорофос, употребляемый дан борьби с црадншя насекомшп в сельском хозяйстве. В целом, наши дайте вполне согласуются с результата:® других авторов (В.К.Ходакова, I9S8j Л.И.Прокопенко, и др., IS75; В.К.Ходакова, 1976).

3.2. Злентронноь'лжроскошгческие исследования т-.зней и систем Diphjriiotothrium latían поело применения алтигелышшшх препаратов

' Пгаздквзнтель. В течение воздействия препарата на цестоду in vivo происходили следующие процессы: через I час леитецы иохавались п^ряпленнщи к стенке ккаечг теа, а морфологические изменения не обнаруживались: через 2 часа диигйтгл:.::ая эктппность червей «писалась, но они оставались прикрепленными. На сколексе и стробиле появлялись капли секрета, особенно крупные на сколск-се около ботрии. В тегуменгальннх клетках увеличивалось количество цистерн гравдлярного эндоплазштического ретикулума и появлялись участки цитоплазмы, свободные от рибосом: через 4 часа гель-

минты откреплялись и продвигались к анусу, ботрип сколекса становились плохо различимыми, гранулы секрета увеличивались в размерах и на иейке появлялась поперечная исчерчсниость. На поверхности стробилы образовывались многочисленные выпячивания наружной адголлазмы тегумента, висогой до 5 шм, с некоторых участков исчезали микротрихии. Слой клеток тегумента несколько разрыши-оя. В тегументэлъных клетках еще больше, чем при 2-х часовом воздействия становилось цистерн гранулярного эвдошгазмзтического ретикулума, появлялись вакуоли с электрошопрозрачным содеряголым диаметром 0.7 шал, увеличивалось количество участков цитоплазмы, свободных от рибосом, появлялись миеликовые сг.ггуры. В клетках желточников оставалось мало гликогена. Воздействие празиквантеля на цестоду in vitro в течение первого часа приводило к утолщении в сокращению длины стробилы паразита, движения прекращались. На поверхности тела появлялись выпячивания наружной цитоплазмы тегумента, внутри цитошгазштичсского слоя образовывались отдельные полости. Клеточный слой несколько разрыхлялся. Через 2 часа та отдельных участках поверхности тела уменьшалось количество шкротриэспй, полости внутри цитоштазматпческого слоя увеличивались а числе и размере, клеточный слой более интенсивно разрыхлялся п набухал. В клетках тегумента увеличивалось количество цистерн гранулярного эндопла зштического реитулума и митохондрий. 2 клетках яелточников такке бшг гипертрофирован гранулярный эадоллазштичесяий ретлнулум. Через 4 часа воздействия анти-ГеЛЫЯПКИКа наблюдалась ДССТробклЯЦИЯ Diphyllobothriwn latum. На поверхности тела становилось еще меньше, чем при 2-х часовом воздействии мшротрихий и появлялись выпячивания наружной цитоплазмы тегумента, которые имели ввд "пузырей" на тонкой ноже, диаметром до 4.5 мкм, многие бшш открыты во внешнюю среду. Полости в штоплазмагическом слое увеличивались в числе и размере, некоторые открывались во внешнюю среду. Клеточный слой сильно разрыхлялся (в глубину до 80 мкм). В клетках тегумента наблюдалось локальное расширение цистерн гранулярного эндоплазматичес-кого ретикулума (до 0.35 мкм в диаметре), многие митохондрии имели катрико с пониженной электронной плотностью. В яелточных клетках продолжалась гипертрофия гранулярного эндоплазматическо-го ретикулума, его цистерны образовывали концентрические структуры, занимающие значительный объем. Количество гликогена несколько уменьшалось.

¿©ЙВШШИ' В течение воздействия препарата на цестоду in vivo пуглгсводили сдеетвдие процессы: через I час влияния - ïcjik.otitu оотпвг.яись прикрепленными к ctciíko кишечника, двига-" тельная ахтитаеть л с изменялась. На поверхности тела появля-'•гтисъ цеболыдю выпячивания наружной иитоплазш тегуиента. Через 5 таса после введения альбевдазола несколько ослабевала плотность прикрепления лентецов к кишечнику, движения их замедлялись. На поверхности стробилы бшю заметно увеличение числа в размеров выпячиваний иаружой цитоплазмы тегумокта. На некоторых участках поверхности уменьшалось количество никротрихий. В тегуиентачьшк метках увеличивалось количество цистерн гранулярного зидоилазизялеского ретикулумя, число митохондрий увеличивалось, а ¡и ьатрикс просветлялся. Кроме того, появлялись свободные от рибосом участки цитоплазмы, В келточных клетках так;е бич гипертрофирован гранулярный эндоплазгатический ретикулуы. Через 4 часа гельминты откреплялись от стенки кишеч-тлха, ко еще оставались ка месте своей обычной локализации. Движения паразитов бшш очень вялыми. Ка поверхности тела было о6~ каружено больше «отчество шоголовастных выпячиваний наружной цитоплазмы тегумеита высотой до 5.5 шш «'шириной до ? ш. На некоторые участках поверхности полностью отсутствовали ыикротри-х:;л. Б клетках тзгумента еще более интенсивно, чем при 2-часовом воздействии был гипертрофирован гранулярный звдоилазштичес-киЯ ретихулум, цистерны которого локально раздувались, достигая а диаметре O.I5 мш. Появлялись отдельные вакуоли с электронно-прозрачным содеркишд. Увеличивалось ксличес !:о участков цитоплазм, лишенных рибосом. Количество митохондрий также возрастало, их матрико еще более просветлялся и набухал. В клетках тегукента когадо было наблюдать аутофагосоглы. В ядре i .»дерззалось ■ более значительное, чем в контроле, количество конденсированного хроматика. Б ядршасе было заметно разделение гранулярного и фи<5-рахяяркого компонентов - сегрегац:ш'я,";)ышсового материала. В лаис^лшлс- псявлллись известковые тела диаметром до 12 мкм. В клетках желточгагков более сильно, чем при воздействии альоенда-. зола в течение 2-х часов, был гипертрофирован гранулярный эндо-плазматичесхий рстикулугл. Его цистерны объединялись в группы из концентрических и параллельных мембран. Действие альбендазола in vitio в течение первого часа приводило к утолщению и укорачивайте стробил'! Dipbyllobothriuiro íattm.Движения гельминтов при

отом довольно бистро прекращались. С кокоторпх участков поверхности тала исчезал;? мякротхчпспи. В слое кчрртаой цстопдззш то-гумента образовываясь небольшие полости с атектрошгоирозрз чта содсргжпш. Клеточный слой разрыхлялся, особенно в периферической части. Объем мелсклетсчного пространства здесь бия сравним с объемом отростков тегументальншс /легок. 3 сс.'пк метках увеличивалось количество цистерн гранулярного эвдоплазкаткчесного ре-тикулука и появлялись ыязлиновке фигуры. Через 2 часа после внесения альбендазола в сроду на поверхности тата цестодн узагичи-валось количество и размера участков, лияеших мшерогркетй, а также увеличивалось количество и объем полостей в слое яаруяноЯ цитоплазмы тегу!,тента. Разрыхление клеточного слоя прогрессировало: это явленно наблюдалось на большей глубине, чем при часовом воздействии. Объем мешелеточного пространства а периферической области превышал объем клеток. В самих клетках становилось еще больше цистерн гранулярного евдоплазматаческого ретикулуиа, образовывались вакуоли о электрошопрозрачннм содернимим, а ми-еяиновые фигуры увеличиваешь в числе и размере. В яелточных клетках также происходило усиленное развитие гранулярного эндо-плазматического ретикулуш, цистерна которого образовывали концентрические и параллельные структуры. Через 4 часа воздействия альбендазода на цестоду с поверхности червя практически полностью исчезали мик^отрихии. В (шрутной цитоплазме полости достигали 1/4 толщины слоя. Мышечные пучки, лежащие под базальной мембраной, довольно сильно разрцхлллись. Батсе глубоко леяавде пучки изменялись в меньшей степени. Клеточний слой разрыхлялся на значительную глубину, при этом объем межклеточного пространства существенно превшал объем самих клеток. В '.метках тегумента по сравнению о 2-х часовым воздействием увеличивалось количество вакуолей о электроинопрозрачпш содершо.шм. Также становилось больше цистерн гранулярного эндоплазма тического ретикулума, часть которых локально раздувалась. В клетка); появлялись крупные ауто-фагосомы, содержащие различного рода пузырьки, мембранн, фибриллы, гранулы, рибосомы, В желточных клетках еще более, чем при воздействии в течение 2-х часов был гипертрофирован гранулярный эндоплазма тичееккй ретикулум, концентрические структуры которого занимали практически весь объем клетки. Содержание гликогена уменьшалось, а гранулы секрета принимали неправильную форму и

становились кольче,

•.Оеппоад. ' Воздействие на цестоду in vivo в течение I часа не s приводило к откреплению цестод от стенки кишечника, двпгатель-шя-активность практически не изменялась. Цря помоци электронной мщюскопии но бато обнаружено морфологических изменений поверхности п тканей':цвстоди. Через 2 часа после введения фонасала несколько ослабевала платность прикрепления цестод к кишечнику золотистого хомячка, двигательная активность сник-лась. На поверхности стробилы не было отмечено изменений. Интактнь¡ми оставались такйе'вд'топлазматическиЯ л клеточный слой тегумепта. Лшь в тегумелгалъ1шх'"хяеясах несколько увеличивалось количество цистерн гранулярного эвдоплазматического ретикулума и появлялись отдельные" ьмёлйкхвые фигурн, Через 4 часа действия пятигельыинт-ного преп'а^а'тапцеЬ'тода оказывались открепленншп от стенки кишечника л несколько' продвинувашися к анусу, движения паразитов были вллгг.с!. ' Мололо готескио изменения наблюдались только в клетках тегумонта'и келточникоа. Так в. клетках те^плента большее,чем при 2-х часовом воздействии, получал развитие гранулярный эндоплазма тичеекпй рстикулуи, цистерны которого локально раздувались, достигая з поперечнике 0.4 мкм, появлялись вакуоли с электроино-црозрачигл содеркимкм, свободные от рибосом участки цитоплазм, увеличивалось количество шелшовых фигур, появлялись крупные (до 2.1 ыкм в диаметре) аугрфагосомы. В клетках аелточникоа бил несколько гипертрофирован гранулярный экдоплазматичсский реткку-лум, образовывавший концентрические структура. Пря действии фена-сала in vitro в течение первого часа строб;.:и Diphyllotothri-um la цд^кора чивались « утолдались, ■ затем скручивались, в спираль и уплотнялись, а движения прекращались. На поверхности тела появлялась участки без микротргхий. Б слое наружной цпто лазмн те-tv/iACHia образовывались полости с гомогенным содержимым, а клеточ-иш" слой расрихл.чюя; Особенно сильно этот процесс затрагивал его периферическую часть. В клетках тегу энта увеличивалось количество цистерн гранулярного эвдоплазматического регихулума. Подобный процесс происходил и в клетках желточщжов.

Через 2 часа после помещения цестод в среду с фензеалом их стробилы снова становились мягкими, но движения не восстанавливались. Количество и размеры участков поверхности, лише га; их мик-ротрихий, по сравнении о часовым воздействием увеличивалось.

- и -

Возрастало также число л объем полостей в цатошгаэматическом слое. Клеточный слой разрыхлялся сильнее: объем мсяклеточного пространства увеличивался и бал сравним о объемом тегументальных клеток. Глубина разрыхления такяе возрастала, достигая области яелточни-ксв. Б тегумеиталыгах клетках бия сильнее гипертрофирован гранулярной эндоплазкапгчссклй реттсуяум. D них появлялись электронно-прозрачные вакуоли, а в паренхиме - известковые тела. В клетках яелточнЕКов такхе сильнее, чей при часовом воздействии фенасалом бия гипертрофирован гранулярный ондоплагматаческнй ретикулум, цнстер'ш которого образовывали концентрические и параллельные структури. Через 4 часа воздействия фенасалом на цестоду. наблюдалось начало дестробиляцпн, задняя часть тела распадалась на отдельные фрагменты. Значительная часть поверхности лишалась иикро-трпхий. СохраниЕшеся шпсротрихни были расположены отдельными пучкавд и почти все в той или иной степени деформированы. Количество полостей в слое наружной цитоплазм увел!гчаЕэлссь, наиболее крупные достигал:! в длину 1/5 толщины слоя. Клеточный алой бш разрвслен сильнее, чем при 2-х часовом воздействии я глубже - практически га всю толщину тела. Степень разрыхления оказалась практически одинаковой на разных уровнях: объем межклеточного пространства бил примерно равен объезд клеточных элементов. 3 клетках тегуг.ента бал еде более гштзнспвно гипертрофирован гра-щлярныа оияоплазттпческпй ретикулуи - его ковдептраческио циа»-терян зашаши практически весь объем цитоплазмы, исключая ядрах увеличивалось количество электронпопрозрачннх вэ5:уолей и значительно уменьшалось число митохондрий. В паренхиме увеличивалось, количество известковых тел. В желточных клетках, как и в тегу-менталышх, еще батсе интенсивно развивался гранулярный эндоплае-г.'лтлческгП ретикулум, количество гранул гликогена несколько уиекмшось.

3.3. Сраиштеяыгцй анализ воздействия антнгелыашпшх препаратов Ha Diphyllobothrium latum -

Четырехчасовое воздействие празгосваителя, фенасала и альбонда зола приводило к откреплению цестоды от стенки кишечника золотистого хомячка. Однако, если после применения празиквантелл и фенасала гельминты уre несколько продвигались к выходу из кявгеч-ника, то при действии альбендазола они еще оставались на месте,

что позволяет предлалсетть о белее раннем откреплении цестод под влижом пралгкмнтеля я <|енасала.

hLZlZHi. Нарзду1 а рщлэткии в кмлчостве и интенсивности структуряк KGMC"oitiifl лептеда хирокого пол воздействием трех кепепьзуемщ. на;хи «нт1тельшглтн!а препаратов in vivo существуют п отлитая во времени ас лгохновекия этих изменений. Прездс всего сбрадас? на себя шимэкяе близкое по времени начало образования сходах структуршсс изменения, возннкаияш после применения всех трех аптугс^лъмлнтцков^

К упокялутцм структурном нарушениям можно отнести гппертро-фяческоо развитие гранулярного звдоллаэматичссхого рстикулума в клетках тегумекта через 2 часа после зледеккл препаратов, а также недалекие злектронноирограчиих вакуолей через 4 часа после введения препаратов.

При срашемя? структурных нзтувени1.!, возникающие в тканях цостоди при действии трех используслых наш; аитигаткитихою в тзчонпи 4-х часов, обращает ur¡ себя внякашго наличие только дзух общих элементов ¡.'.орфологкчес1;их изкенеича, возникающих у цесто-да иод влиянием всех трех аитигельминтиков - гипертрофия гранулярного эндоплазшгкчсского регэтулума в тстумгнта'гьшя клетках к появление в них электроннопрозрачннх вакуолей (таблица I). Кроме того, яразиквантель вызывал характерное только, для его действия уменьшение количества гликогена в клетках яслточннков, а альбендазол - появление известковых г ел, конденсат® хроматина в ядрах тегументалыт клеток, сегрегацию кх ядриаек и набухазмо митохондрий. Наименьшие изменения в тканях исследуемой цостоды происходит под воздействием фенасала. При этом обнаруживается , лишь гипертрофия гранулярного эндопяазшгаческого рстикулума в тегумектальних клетках, появление в клх электроннопрозрачных вакуолей, шелиновш: фигур и аутофагосок, а такхе гипертрофия гра-нулярнох'о анцйпЛй31«т;г:со::сгс ротдаучу*« в гселточниках.

Празиквантель и альбекдаэол вызывают образование выпячиваний наружной цитоплазмы, эрозию микротркхнй, разрыхление клеточного слоя, гипертрофию ГЭР, а также появление электроннопрозрачных вакуолей. При этом воздействие альбендазола приводит к более интенсивным изменениям поверхности тгла цестода - образованию выпячиваний наружной цитоплазмы и эрозии микротряхий. Празнквздтель

Тайтацэ I

Элемента патологи: лентеца етрского: ¡а интенсивность и время начала образования

в опытах 1п у!го

Выпячивания на- Эрозия микро- Разрыхление Гипертрофия ГЭР Электронно- Миелиноиые ручной цитоплазма трихий клеточного в клетках тегу- прозрачные йкгуш

слоя манта вакуоли

П 4

А

44-

■н-

++

2

2

+ 4 + 4 + 4

+

+

Изменение што- Аухофагосомы хондрий

Гипертрофия Уменьаение ксст- Известковые Конденсация 1 ГЭР еедточ- чсстез гл*.*когена тела хроматина, никоа сагрегацвя

....... _. длрндкз__

Б Ф А

2(4)

+

+

4 4

- 444 ++

2

Примечание. Я - празиквантель, О - фенасал, А -альбендазоч. Степень интенсивности патологии: + - слабая, -н- - средняя, +++ - сильная, - - отсутствие патологии; цифры - время образования изменений ультраструктуры в часах.

обуславливает большую степень разрыхления клеточного слоя. Ичут-ршметочиие so изменения находятся примерно на одном уровне: гипертрофия гранулярного эвдоглазкаткческого ретикулут/д, появление аутофагосом и олекзроннопрозрачннх вакуолей.

Сопоставляя получеюше данные .по воздействие цракекешшх т-к; препаратов на цсстоду, можно заключить, что празшматсль оказывает такое же терапевтическое действие, как и йена сад, ко вызывает более значительные морфологические изменения. В своз очередь альбендазод оказывает Солее сильное влияние на клеточные органоиды гельминта по сравнена» с фвшэ салом, а терапевтическое действие первого било менее значительно. Морфслогаческно изменения, вызываемые празаккштелеы и ольбендазодом, во многом схоки.

Как ш уке отвечала ранее, нанменыаез влияние ш морфология тканей Dlphyllobothíiuin latura оказывает фсйасал» Из таблицы Г видно, что'четыре из пяти структурно изменений появляются только на поздних стадиях эксперимента. Шшзчешв cocíaвяяезе юяько гипертрофическое развитие гранулярного эвдокдаекатического рети-кулума, которое наблюдается через 2 часа после зюздейсмазя антл-геяьмннгкка. Пять общас'дяя празикаантедя в альСсидазаи' птоз патологии гельминта, рассматрошшх с точки зрения врадени их появления, демонстрируют имíкую корреляцию - интенсивность развития того шш иного измешия, зшгеиг от времезш воздействия. Так, если в таблице X интенсивность образования и размеры выпячиваний наружной цитоплазмы показана большей для альбендазока, то из той же таблицы явствует, что а возникает эти ешимшия раньше. Аналогично - эрозия микротрнхий. Гипертрофя гранулярного эвдоплазматичеокого ретккулума в клет:сах тагумепта и злсгст-^ронноярозрачные вакуоли отмечается через 4 часа после введения обоях антигельюштиков. Причем степень развития гранулярного эндоплазштического ретикулума бшш близкой.

В то ке время несколько большее разрыхление клеточного слоя, возникающее после применения празиквантеля, не цуижисчуёчнг заьп-сико'.-тй интенсивности изменений от времени воздействия, посколю-15т у.и самом деле объем межклеточного пространства по отношении к объему клеток в обоих опытах бшш примерно одинаковы (по визуальной оценке). Однако следует отметить, что при применения празиквантеля разрыхление обнаруживается на значительно большей

глубине. Последнее мохег быть легко объяснено тем, что под воздействием празшвангедя упомянутое разрыхление на самом дола началось несколько ранее, чем при действии альбендазола в проме-аутке медду 2-х часовш и 4-х часовым применением препарата.

При оценке результатов воздействия празикгантеля слезет заметить, что миелиновке фигуры возникаю? ранее, что наблюдается и с аутофагосоадми при воздействии фопаезла и атьбендязола. Гипертрофии гранулярного ондсплазглтаческого ретикулума келточнпков, однако, альбендазол вызшее? ранило,

Обравдет на себя внимание такая де-галь: изменения, характерные только для действия одного антагелькннтного препарата, наблюдаются только после 4-х часового воздействия. Они заключаются в уменьшений количества гликогена пря действии цразиквантеля, конденсации хрематика я сегрегации ящшжа при действии альбендазо-ла. ' • ■

И если в таблице I изменения митохондрий под воздействием альбевдазола отмечаются после двух часов, то следует уточнить, как явствует из текста данной работы,что ко второму часу воздействия препарата набладалось лист, увеличение тесла митохондрий, а их непосредственное изменение все-таки было заметно только в конце опыта. Поогоьог в таблице 2 ш помечаем сведештя по обоим срокам начала изменений,

la vitro. ' Шмп установлено, что через 4 часа после воздействия прэзгасхантсля я фена сала стробила начинала распадаться, а через 4,6 часа после применения упомянутых антигельминтиков начинается кесбрзтгмнй.некроз тканей. В опыта с альбендазолом дестробиляция лентеца и некроз иаблкдаится на 0.5 часа, позже. Данные о структурных изменена^ в ткзкях цеогода под воздействием трех используемых актагсльмштот'.оз предстаашш а- таблице 2. Мы' выделяем аесть обэдх элементов патологии: эрозия микротрихий, образование полостей в цитоллаз?,этическом слое, разрыхление клеточного слоя, гипертрофия гранулярного эндоюгазгатяческого ретикулума в клетках тегумента, гипертрофия граэдяярНого эндсплазматического ретикулума келточников и уменьшение количества гликогена. Из всех отмеченных изменений только уменьшение количества гликогена является примерно одинаковы- дал всех тух опытов. Эрозия микротрихпй отмечается наиболее п гецсишой при действии альбендазола, нес-

Таблица 2

Элементы патология лентеца широкого: их интенсивность и время начала образования

а опытах in vitro

Выпячивания на- Эрозия микро- Разрыхление Полости в ка- Гипертрофия Электронно- Мие-ружной цитоплазмы трихий меточного руяной цито- ГЭР в клёт- прозрачные липовые

слоя плазме ках тегумента вакуоля фпурк

п +4+ I •++ 2 + I +++ I + I - - -

ф - +++ I X ++ I +++ Г ++ 2 -

А - +++ I +++ I ++ I ++ I + ' 2 ■н- I

Изменения митохондрий Аутофзгосомы Гипертрофия ГЭР желточ-шпсов Уменьшение количества гликогена Известковые тела Разрыхление мнпга; Изменение гранул секрета

П + 4 _ ++ 2 + 4 - - - - -

Ф + - ■н- I + 4 •н- V, У - - -

А - - + 4 +++ 2 + 4 - + 4 + 4

Примечание. Обозначения те Ее, что в табл.1.

колько меньше при действии фенасала и еще менте - празиквантеля. , Для разрыхления неточного олоя характерна такая же закономерность. Размеры полостей в цйтошшзматичсском слое становятся наибольшими под влиянием празиквантеля и примерно одинаковыми при воздействии других' антательитпгаков. Гранулярный эадоплззматитес-Kiiit ретикулум в клетках тегумента niphyliobothrivm in turn получает. наибольшее развитие при использовании фенасала и наименьшее -при применении празиквантеля. Обращает на себя внимание, что об-, разование выпячиваний наружной цитоплазмы тегумента характерно . только для воздействия празиквантеля, злзктрошюпрозрачннх вакуолей - после применения фенасала и адьбецдазола, а известковых телец под воздействием фенасала. Кроме ioro, альбендазол вызывает разрыхление мышечных лучков и изменение цтарш гранул секрета.

Анализируя полученные нами данные, необходимо отметить, что наибольшие изменения ультраструктурной организации тканей цесто-да происходят под влиянием альбеидазола: эрозия микротряхий, разрыхление клеточного слоя - наиболее интенсивное, наибольшая гипертрофия гранулярного эндогшзматического ретккулума. Результаты воздействия празиквантеля и фенасала на ткани лентеца широкого более или менее сходны мевду собой и менее выраяены по сравнению со структурными нарушениями тех же тканей после применения альбендззола. В то ке время, как ш это отмечали ранее, дестро-Силяция тела цестоды и некроз ее тканей после воздействия празиквантеля и фенасала начинаются примерно на 0.5 часа раньше, чем после применения альбендазола.

Наряду со структурными отличиями и интенсивностью изменений структуры цестоды под воздействием трех изученных антигельммнт-ных препаратов in vitro существуют и отличия во времени возникновения этих изменений. Лршше о времени возникновения тех плд иных изменений нродстаалены в таблице 2. Из шести обеих для всех трех пгимеиекише лнгагелы.'штгасов элементов патологии цестоды четцро происходят одновременно: появление полостей в наружной цитоплазмо, га заиление ¡'лоточного слоя и гипертрофия гранулярного ондошя аттического ротикулуш л клетках тегумента найязодают-ся во всех 3 опытах через I чао поело воздействия препаратов, а уменьшение содершш гликогони - чорчз 4 часа.

Эрозия шкротрахиР починеотся г .окольно позже под влиянием празиквантеля и, соот.. '..'ствешю, степень эрозии ниже, чем таковая,

возникавшая под влиянием фенасала и альбевдазола. В отношении гипертрофия гранулярного эндошгазматического ретикулуыа келточна-ков следует отмстить, что хотя при действии фенасала этот элемент патологии появляется раньше, чем при действии празиквантеля и ель-Осидазода, но в последнем случае гипертрофия проявляется в большей степени.

3 отличие от воздействия на цестоду in vivo при использовании антигельминтиков in vitro четкой зависимости степени повреаде-ния структур л тканей ш не обнаружили. Общая тенденция, естественно, сохраняется, но не так явно, как в опытах in vivo. Из таблицы 2 явствует, что образование полостей при применении всех трех антигельминтиков происходит в одно время. Данные таблицы 2 указывают на большую интенсивность этого процесса при обработке цестоды празиквантелем. Разрыхление клеточного слоя также отмечается в одно время, тем не менее при применения празиквантеля оно было наименьшим, а после введения альбездазела - наибольшим. Диалогичная картина наблюдается с гипертрофией гранулярного эндоллаз-матичеокого ретикулума техументальнше клеток -.наименьшее развитие вызывает иразикваитель, наибольшую - феиасал.- Нам какется, 1 что такое несоответствие высказанное ранее для условий in vivo положению о зависимости интенсивности структурных изменений от времени воздействия антигелшинтика связано с тем, что промежутки времени, через которые ш вводами препараты, слишком велики для детального изучения динамики патологического процесса у Mphyiio-Ъогьгиш latun. Действительно, если учесть, что гельшктц in vivo через 4 часа после применения.препаратов остается вполне жизнеспособными, a in vitro за это время практически погибают, то ото значит, что мы каблвдаля развитие патологии in vitro сильно скатое во времени. Так, если предположить, что in vivo цес-тода погибает за 24 часа, то изучение структурных изменений in vitro через 1,2 и 4 часа после начала воздействия препарата с физиологической точки зрения должно соигвею^ьевать структурам нарушениям, имеющим место in vivo приблизительно через 6,12 и 24 часа после введения препаратов.

1а.:ш образом, в опытах in vivo , беря материал через от-носитьушго меньше отрезки времени, мы получили более стройную картину развития патологического процесса. И некоторое несоответствие степени проявления того шш иного элемента патологии in vitro д зависимости от времени воздейегг ч антигелы.яштика

нам казется связано именно со сроками проведенных исследований.

В пасса опытах изменения, происходила!е под влиянием всех трех антигельмлнтикоз in vitro были гораздо более интенсивными, чем in vivo, последнее мы объясняем тем, что гельминты сразу же начинают поглодать аптагельшгатнк с максимальной скоростью, по-схольку концентрация препарата в среде постоянная. В опытах in vivo не, даже если предположить, что антигельмантик равномерно распределяется по всему телу животного, з силу малой растворимое-, та лекарственного средства, концентрация его в кишечнике будет существенно меньшей, чем з искусственной среде. Кроне того, сро-зу .те с проникновением его в кишечник ватлкается всасывание в кровь, и з скором времени - выведение из организма. Чтобы достичь в кшечлшее концентрации апгигеяьшнтика такой же, как в условиях in vitro, необходимо применить до su, суцествмшо лровн-иащие терапевтическую, что моксг неблагоприятно оказаться на организме хозяина.

В u в о д ы

1. Растворы токсикантов (серная кислота, хлорофос, фенол) в концентрациях,реально встречающихся в природных условиях, вызываю? МЭССОЗуЯ гибель зародышей Diphyllobothriwn latum и задэр-■тававт на 1-Я суток развитие вшивших. После зилупления вес ко-рацздии гибли.

2. Инкубация яиц лентеца широкого в.природной воде, содерпа-¡дей токсиканты (серная га слота, хлорофос, фенол) приводила к табели большего числа зародышей, чем в лабораторных опытах, мо-делкрутацих сходные условнг.

3. Воздействие аитигелъминтньк препаратов (празиквантеля, альбецдазеига, фенасала) па Diphyiiofcothriim latum в условиях in vivo И Хп vitro приводило к схолии физиологическим и морфологическим изменениям: откреплению цестод, потери подвижности, сохранению тела, образованию выпячиваний наружной цитоплазмы те-гумента, эрозия иткрогрлхий, разрыхлении клеточного слоя, гипертрофия гранулярного эндоплазматкческого рятпкулума в клетках те-хумента и желточшков, появлению г.желинових фигур и аутофагосом.

4. Отличия в воздействии на цсстоду изученных ангигеяьминти-ков состоят в интенсивности развит' г тех или иных изменений, во вреиени их появления > з наличии некоторых особенных элементов

патологии. Наиболее устойчивой к воздействию антигельмиктиков оказалась репродуктивная система.

5. Отлачия в воздействии антигелшинтшос препаратов на лен-теца широкого в условиях ¿n vivo и ln vltro заключаются, главным образом, в более раннем появления и более интенсивном развитии морфологических изменений в условиях in vitro.

6. Наиболее значительные изменения как ViV0 , так в in vitro происходили под воздействием апьбендазола, наименьше - фекасала.

7. Нематоцид альбевдазол оказался весьма активным в огноше» НИИ цестода Biphyllobothriuin latum В, ПО-ВИДИМОМУ, может успешно применяться при цестодозах.

практические даошщции

Наш данные о преимущество антигедшинтика альбендазола перед другими препаратами по степени воздействия на ткани и системы цестоды Diphyiiobothrium latum свидетельствуют о целесообразности проведения дальнейшего екслерлыенгального и фармакологического изучения »того препарата для расширения лекарственных средств, используемых при цестодозах.

Исследования влияния токсикантов на свободнохивущие стадии (яйцо, корацидий) позволяет прогнозировать изменение паразито-логической ситуации в регионе, подварпдемуся антропогенному воздействию.

шедшие результатов исследований в практику

Вззультагы исследований на свободногшвущах стадиях используются при характеристике современной ситуация со дифиддоботрлсау в* составлении прогнозов со ее изменению в водохранилищах бассейна Волги В ЙШИШ ИМ.Б.И.тарЦИИШикш-и ítuix О ЬйвДрйпйО . "угКННй ПО морфофункциональной организации цестода используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий по теме "Паразитология" на кафедрах биологии рада медицинских инсти-- тутов ч ¡одтвергдено актом).

СГИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

I.Молодей 1ШСОЕЯ Н.М. Сканирующее злсктронношкроскопическов исследогаш1в покровов лентеца широкого и/п.

¿a/u/rt в hojv'.'J к под воздействием Фенасала. - Тезисы конференции Всесоюзного сйцасгса гельминтологов,Москва,1989, с.88.

2 Molodo,;nlkova H И., Yolodin A,V.

the elcotron-mloroucopy etydy of the action of praziquo.nt.hel on th« tequfflcntot ceetod DLphillobothrlum latum in vivo. /11 Cangreeu Interr.s'Uonal de Faraoi tolo^ie International Congr<soe of Pap»citolo¿y , Parla , 1990; P.1055

3.Молодоюихова H.M.,Володин А.В.,Бакулина H.Г. Действие альбен-дазола на лентеця широкого. -Медицинская паразитология и паразитарные болезга, 1991, 1б,с.4б.