Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности стандартизации экспериментальных животных, используемых для контроля качества вакцинных препаратов

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Особенности стандартизации экспериментальных животных, используемых для контроля качества вакцинных препаратов"

На правах рукописи

- 9 т 1397

ПОСТНОВА Маргарита Викторовна

ОСОБЕННОСТИ СТАНДАРТИЗАЦИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ,

ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ

03.00.07 — микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ВОЛГОГРАД 1997

Работа выполнена в Волгшрадском научно-исследовательском противочумном институте.

Научный руководитель: доктор медицинских наук, академик

РЭА, профессор Н.Г. Тихонов.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, член-корреспондент

PATH, профессор А.К. Адамов; кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Г.М. Сергеева.

Ведущая организация: Ставропольский научно-исследовательский

противочумный институт.

Зашита диссертации состоится

1997 г. в ic/ часов на заседании диссертационного совета Д 074.32.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Российском научно-исследовательском противочумном институте "Микроб" (г. Саратов, Университетская, 46).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института "Микроб".

Автореферат разослан & сЯ 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор

Г. А Корнеев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Совершенствование здравоохранения, дальнейшее развитие новых направлений биологии, биотехнологии, а также производства и испытания новых биологических и химтогерапевтических препаратов предусматривает проведение многочисленных экспериментов На биологических объектах. Прогресс в данных областях науки предъявляет новые, повышенные требования к качеству лабораторных животных, используемых как универсальный биологический тест при испытаниях иммунобиологических препаратов. Научные основы оценки качества вакцин, несмотря на большой фактический материал, накопленный в этой области на международной и национальном уровнях, только начинают формироваться. Сумма знаний о различных свойствах вакцинных препаратов при введении человеку и животным хотя и отличается большим многообразием, роль биологических методов контроля при этом остается одной из главных. Для решения проблемы стандартизации в биологии особое значение приобретает глубокий анализ генопшнческих факторов и некоторых переменных величин, влияющих на реактивность организма и другие его морфофункционалыше параметры. Кроме того, фенотипические характеристики лабораторных животных также могут определять ответную реакцию на раздражитель.

Стандартность животных зависит от сочетания эндогенных и экзогенных факторов. Отсутствие контроля каждого их этих составляющих может привести к их чрезмерным проявлениям, что способно вызвать структурIго-функционалышс нарушения в организме. Поэтому для достижения адекватной стандартизации животных, используемых для контроля качества вакцинных препаратов, необходимо научное исследование данной проблемы.

В связи с разнообразием биологических препаратов становится очевидным, что методы их испытания также должны быть многообразными. Но при этом общим обязательным требошшем при испытании вакцин всегда будет являться определение их безвредности, реактогенности и специфической активности. Ог-

дельные, фундаментальные исследования, посвященные вопросам контроля гш-мунобиологических препаратов и их испытания на лабораторных животных, в основном затрагивают какой-либо обособленный аспект данной проблемы. Так, например, основные требования к организации производства бактерийных препаратов, а также принципы их стандартизации и контроля представлены в работах С.Г. Дзагурова "Принципы контроля вирусных и бактерийных препаратов" (1978) и П.Н. Бургасова "Руководство по вакцинному и сывороточному делу" (1978). Вопросы экспериментальной работы с использованием биомоделей и основные принципы стандартизации лабораторных животных изложены в монографиях И.П. Западиюка с соавторами "Лабораторные животные" (1983) и L.F.M. van Zuthen et al. "Principles oflaboratory animal science" (1993).

Однако в перечисленных руководствах и монографиях ощущается отсутствие четких, дифференцированных методов, приемлемых для использования в реальных условиях практической работы и позволяющих целенаправленно стандартизировать лабораторных животных для научных а производственных целей.

Таким образом, научно-методическое обеспечение комплексной оценки животных, используемых в процессе контроля качества иммунобиологических препаратов, является актуальной проблемой. Дальнейшее изучение и внедрение элементов, составляющих стройную концепцию и суть стандартизации лабораторных животных, имеют значение для развития принципов стандартности.

Цель работы Цель диссертационного исследования заключалась в разработке комплексной системы стандартизации экспериментальных животных, используемых для контроля качества вакпташх препаратов.

Задачи исследования. При выполнении работы решались следующие задачи :

1) исследовать степень влияния паразитарного статуса и биоритмологических особенностей лабораторных животных па качество оценки вакцинных препаратов;

2) изучить биометрические характеристики ноцицепгавной реактивности как показателя уровня общей неспецифичесхой реактивности организма биопробных животных;

3) определить возможность использования уровня общей неспсцифической реактивности организма в качестве интегрального показателя стандартизации экспериментальных животных;

4) оптимизировать целенаправленный отбор биопробных животных для оценки безвредности, реакгогенности и специфической активности вакцинных препаратов;

5) разработать систему комплексной стандартизации биолробных животных и изучить её в сравнении с традиционными методами отбора.

Научная новизна. Показана целесообразность контроля паразитарного синуса и учета циркадианной организации у животных, используемых для оценки качества вакцинных препаратов. Определены биометрические особенности ноцн-пеггпяшой реактивности как показателя уровня общей неспсцифической реактивности организма. Выявлена взаимосвязь типологических особенностей нервной системы животных с уровнем общей неспецифической реактивности организма. Предложены целевые критерии стандартизации биопробных животных для оценки безвредности, реакгогенности и специфической активности вакцинных препаратов. Разработан системный, комплексный подход к стандартизации биопробных животных.

Практическая ценность. Впервые предлагается дифференцированный подход к отбору биопробных животных в зависимости от конкретных задач опытов, что позволяет повысить качество оценки вакцинных препаратов. Применение интегрального показателя функционального состояния организма — уровня общей неспецифической реактивности организма — в качестве критерия стандартизации биопробных животных упрощает процедуру отбора особей с заданными физиологическими и иммунологическими характеристиками с целью их дальнейшего использования при оценке вакцинных препаратов.

По результатам работы составлены "Методические рекомендации хю оптимизации схем иммунизации кроликов-продуцентов иммунных сывороток", одобренные Ученым Советом ВолгНИПЧИ (протокол № 3 от 28.12.95 г.) и утвержденные директором института 14.03.96 г., и "Методические рекомендации по оптимизации отбора экспериментальных животных для выполнения различных иммунологических, токсикологических и физиологических исследований", одобренные Ученым Советом (протокол № 12 от 27.11.96 г.) и утвержденные заместителем директора института, д.м.н., профессором А.В. Липнпшаш 25.12.96 г.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Международном симпозиуме "Идеи Пастера в борьбе с инфекциями" (С.-Петербург, 1995); на Международной конференции "Гомеостаз и инфекционный процесс" (Саратов, 1996). Диссертация обсуждена и одобрена на межлабораторной научной конференции Волгоградского научно-исследовательского противочумного института. 1996.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, подана заявка на изобретение, имеется 1 рационализаторское предложение.

Основные положения, выносимые на. зашргу

1. Новые данные по изучению паразитарного статуса лабораторных животных и его влияние на их стандартность.

2. Доказательства циркадианной организации иммунной системы, являющейся важным фактором обеспечения специфического антителообразова-ния у экспериментальных животных.

3. Результаты, свидетельствующие о необходимости целенаправленного отбора подопытных животных при оценке безвредности, реактогенносги и специфической активности вакцинных препаратов.

4. Доказательства целесообразности использования уровня общей неспецифической реактивности организма в качестве интегрального, генетически обусловленного критерия стандартизации экспериментальных животных.

5. Разработанная система комплексной стандартизации биопробных животных.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 157 страницах машинописи, иллюстрирована 16 рисунхами и 15 таблицами. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов и библиографического указателя, включающего 267 источников, в том числе 48 зарубежных. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Экспериментальная часть работы выполнена на традиционных видах лабораторных животных: белых и линейных (BALB/c) мышах (Mus musculus L.) — 295 шт., белых крысах (Rattus horvc gicus) — 98 шт., золотистых хомячках (Mesocricetus auiatus) — 80 шт., морских свинках (Cavia) — 206 шт., кроликах (Oryctolagus cuniculus) породы "Советская шиншилла" — 400 шт. Все животные были получены из стоков, разводимых в питомнике ВолгНИПЧИ. В качестве антигенов использовали Б С А, инактивировшшые клетки возбудителя мелиоидоза, вытяжку из острил (Passalurus ambiduus). Заражение животных осуществляли возбудителями сапа, туляремии и чумы. Токсическое воздействие моделировали стафилококковым (S. aucrus) экзотоксином н сальмонеяпезным (S. typhimurium) эндотоксином. При изучении циркадиашюй организации иммунной системы вакцинацию проводили чумной живой сухой и туляремийной химической вакцинами.

Паразитарное заражение осуществляли яйцами остриц кролика (Passalurus ambiguus) и клешем мышиного лодкожнлка (Prorergatcs sumplex Jyrrell). Паразитарный статус определяли с учетом методических указаний МЗ СССР "Требования к качеству конвенциональных лабораторных мышей" (1987).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Первый этап исследований был посвящен оценке существующих методов стандартизации животных, используемых для контроля вакцинных препаратов. Влияние микробиологического и генетического статуса на организм лабораторных животных достаточно велико. С целью подтверждения возможного влияния микробной интоксикации на антнтелопродуцирующую способность были выполнены исследования на мышах, отобранных по общепринятым критериям. У животных опытной группы предварительно моделировали стафилококковую интоксикацию. Затем всех животных опытных и контрольных групп иммунизиро-

вали БСА с последующим определением титров специфических антител. При этом выявлено иммуносупрессивное действие интоксикации стафилококковым экзотоксином на формирование первичного иммунного отвста(титры антител у контрольной группы животных были выше по сравнению с опытной группой).

Таким образом, подтверждена целесообразность микробиологической стандартизации биопробных животных.

При изучении особенностей антителообразовагаы у инбредных и неинбред-ньгх животных одного вида были выполнены исследования на белых и линейных (ВАЬВ/с) мышах. Испытуемые антигены выбирались с учетом их эукариотнога и прокариотнош происхождения: (БСА и инакпшированные клетки возбудителя мелиондоза). Результаты исследований показали, во-первых, достоверное превышение титров антител у линейных мышей по сравнению с аутбредными особями. Во-вторых, отмечено отсутствие больших колебаний вариабельности результатов определения титров антител как у линейных животных, так и у аутбредных. Эго, видимо, можно объяснить достаточной фепопшичсской однородностью стока белых мышей. Таким образом, при иммунологических исследованиях полноценно мсиут быть использованы животные с различным генетическим статусом.

Использование общепринятых методов оценки качества лабораторных животных (микробиологический и генетический статус) не отражает паразитарного их состояния. В результате изучения влияния паразитарного статуса на особсшго-сти иммуногенеза было установлено, что антигелообразующая способность зависит от продолжительности и интенсивности инвазионного воздействия. При этом кратковременное и незначительное паразитарное воздействие влекло за собой им-муностимуляшпо, а длительное и чрезвычайное приводило к иммуносупрсссии. Необходимо отметить, что как в первом, так и во втором случаях искажались ис-тшшые результаты иммунологических экспериментов. Следовательно, кишечная и кожная инвазии существенным образом влияют на формирование первичного иммунного ответа, что свидетельствует о целесообразности рекомендовать этот критерий стандартизации биопробных животных.

Следующим этапом исследований явилось выявление наиболее информативных, ярко выражешгых и простых показателей, отражающих во времени готовность организма к восприятию антигенного материала н соответственно к адекватному иммунному ответу.

Работа выполнялась в осенне-зимний период на традиционных видах лабораторных животных обоего пола (мыши, крысы, хомячки, морские свинки, кролики). Для изучения были выбраны наиболее часто используемые показатели имму-нограмм: общее количество лейкоцитов, абсолютное содержание лимфоцитов, фагоцитарное число и процент фагоцитирующих полиморфоядерных лейкоцитов, а также лейкоцитарная формула. Установлено, что наиболее значимый размах изучаемых показателей п течение суток наблюдался в содержании общего количества лейкоцитов (15% для мышей и кроликов, 28 — для белых крыс, 40% — для золотистых хомячков н морских свинок). Акрофаза данного показателя у белых крыс и морских свинок приходилась на вечерние часы, у белых мышей и кроликов — па раннее утро, а у золотистых хомячков — на поддет.. Батифаза у белых крыс приходилась на вторую половину ночи, у морских свинок и кроликов — на поддень, у ' белых мышей — на вечерние часы, а у золотистых хомячков — на раннее утро. Динамика абсолютного количества лимфоцитов повторяла профиль суммарного содержания лейкоцитов. Процент фагоцитирующих полиморфоядерных лейкоцитов и фагоцитарный индекс на протяжении суток у всех исследуемых видов животных существенно не изменялись. Анализ лейкоцитарной формулы выявил стабильность соотношения форменных элементов у белых мышей и белых крыс. Для кроликов и золотистых хомячков было характерным повышение к полудню, а для морских свинок — к вечерним часам относительного содержания лимфоцитов. Из остальных клеток белой крови только сегменгоядерные нейтрофилы имели тенденцию к обратно пропорциональному изменению своего соотношения по сравнению с лимфоцитами.

Определение оптимального времени иммунизации выполняли на белых мышах и кроликах. Эти виды животных противоположны друг другу по суточному образу жизни. В качестве антигена использовали п оптимальных иммунизирующих

дозах Б С А. Животных иммунизировали в разное время суток. Иммунный ответ оценивали по высоте титров антител к БСА и ИФА. Полученные результаты выявили определшшую зависимость антятелообразования от времени введения анти-гашого материала. При этом было установлено оптимальное время иммунизации: для кроликов 12.00 ч, а мышей— 16.00 ч.

Динамика содержания лейкоцитов крови и результаты по определению титров антител, после иммунизации позволили показать, что оптимальное время введения антигена практически совпало с батифазой содержания лейкоцитов как у кроликов, так и у мышей.

Кроме этого, рассчитав адаптационный показатель ( отношение процентного содержания лимфоцитов крови к содержанию сегмснтоядерных нейтрофилов), являющийся отражением адаптационного состояния организма, было установлено, что его акрофаза соответствует оптимальному времени введеши антигенного материала и батифазс содержания лейкогштов (рис. 1).

Адаптационным показатель,

Время дня. часы

Рис.1. Сочетание дневной динамики содержания лейкоцитов и адаптационного показателя у кроликов с оптимальным временем антигенного воздействия

В качестве следующего критерия стандартизации биопробных животных был изучен показатель уровня, общей неспецифической реактивности организма (УОНРО), который определяет физиологические, иммунологические и нейрогу-моральные особенности животных. Для определения величины УОНРО использовали уровень ноцицептивной реактивности, учитывая, что болевая реакция является интегративным критерием и она обусловлена всеми основными структурами ЦНС. Кроме того, величина УОНРО имеет возрастную стабильность и мало подвержена изменениям во времени.

С целью изучения закономерностей варьирования ноцицептивной реактивности у животных был проведён соответствующий биометрический анализ. В результате получены эмпирическая и вычисленная по нормальному закону кривые распределения порога болевой чувствительности популяции кроликов (рис. 2),

Установлено, что животные изученной популяции образуют непрерывный ряд различий по порогу болевой чувствительности, и вид кривых на рис. 2 подтверждает общебиалогическую закономерность варьирования данного показателя.

Оценка безвредности препаратов производится на основании определения острой и подосгрой токсичности. Острая токсичность выявляется по результатам гибели или выживания животных. Для определения влияния показателя УОНРО на проявление острой токсичности были выполнены соответствующие эксперименты. В качестве биомодели использовались крысы. Всем животным одномоментно вводили эндотоксин Salmonella typhiinurium в дозе 3 мг/кг, что соответствует расчетной величине DCL. Затем ежечасно, в течение суток, проводили индивидуальный учет павших особей.

В результате проведенных исследований установлена определенная зависимость выживаемости и продолжительности жизни подопытных животных от величины УОНРО. Время жизни индивидов с высоким показателем УОНРО составило 13,3 ± 2,37 часа, со средней величиной УОНРО — 16,3 ± 2,74 часа, а с низким значением УОНРО — 19,0 + 2,24 часа (рис. 3).

Другим показателем безвредности вакцинных препаратов, отражающим степень подострой токсичности, является изменение массы тела биопробных животных. С целью изучения особенностей влияния величины УОНРО на динамику массы тела у белых мышей при подосгром токсическом воздействии были проведены следующие наблюдения. Животных, огобрашшх по величине УОНРО, распределили по группам. Затем всем мышам опышых групп одномоментно, внугри-брюшинно ввели МДД стафилококкового экзотоксина (Б.ащеш). Животным контрольных групп вводили соответствующий объем 0,85% раствора хлорида натрия.

Количество особей _ в стоке,%

О 2 9172533414057 66 73 79

Порог болевой ЧувСТППСЛЫЮСП!

Рис .2. Эмпирическая (1) и вычисленная по нормальному закону (2) кривые распределения порога болевой чувствительности популяции кроликов, разводимой в ВолгНИПЧИ

Выжим емость

Время,

О

8 10 12 14 16 18 20 22 24

Рпс.З. Динамика гибели белых крыс в зависимости от УОНРО при воздействии сальмонеллёзного эндотоксина в БСЬ. Условные обозначения:

- высокая величина УОНРО;

— — — — средняя величина УОНРО; ....... низкая величина УОНРО.

В результате проведённых исследований были выявлены определешше особенности динамики живой массы животных опытных и контрольных групп в зависимости от величины УОНРО (рис. 4).

Таким образом, с целью повышения чувствительности оценки подосгрой токсичности бактерийных вакцинных препаратов целесообразным является при постановке биопроб использовать животных, отличающихся высоким значением УОНРО.

При производстве вакцин их качество оценивается частотой и выраженностью поствакцинальных реакций, т.е. их реакгогенноегью. Основными контрольными показателями реактогенносги являются общая температурная реакция организма и воспалительная реакция на месте аппликации препарата.

Изучив особенности развития температурных реакций у кроликов в зависимости от величины УОНРО, выявили, что повышенной чувствительностью к пи-рогеналу отличались особи с низким показателем УОНРО. Введение пирогенала в количестве 1МПД вызывало повышение температуры у животных с высоким значением УОНРО на 0,23'С, у особей со средним показателем УОНРО — на 0,52°С

Живая масса, г

Рис.4. Динамика изменения живой массы белых мышей, распределенных по величине УОНРО, до и после воздействия МДД стафилококкового экзотоксина.

Условные обозначения:

■ высокая величина УОНРО.

---- средняя величина УОНРО.

....... низкая величина УОНРО.

введение токсина.

и у кроликов с низкой величиной УОНРО — на 1,10'С (рис. 5). Изучение реак-тогенносги препаратов по развитию и интенсивности местных реакций. В опытах использовались кролики. В качестве контрольного реакгогенного препарата был выбран ПАФ, позволяющий в зависимости от дозы введения моделировать весь спектр местных кожных реакций — си незначительного воспаления до развития язв. В результате наблюдений было установлено, что на 3-4-й день после внутрккожного введения ПАФ в 10 точек тела у кроликов, дифференцированных по величине УОНРО, на месте аппликации наблюдались различные кожные реакции (см. табл.1).

Температура

Время, часы

Рпс.5. Влияние величины УОНРО на формирование температурных реакций у кроликов при введении 1МПД пирогенала:

---высокая величина УОНРО.

..... средняя величина УОНРО.

- низкая величина УОНРО.

Таким образом, для оценки реакгогенности по выраженности местных реакций будет целесообразно использовать животных с высоким показателем УОНРО, а для ко1проля пирогенности — применять особей с низким значением УОНРО.

Таблица 1

ЗавЕСИмостъ разветви местных реакций от величины УОНРО лабораторных животных при введении ПАФ в различных дозах

Величина Объем ПАФ. мл

УОНРО 0.05 0,1 0,15

Высокая +++ ++++

Средняя + +++

Низкая - + ++

Примечание: — отсутствие реакции; ++• кожное уплотнение;

т гиперемия; +++ сгерилы ¡ый абсцесс; +++1- свищевой абсцесс.

Производство вакцинных препаратов предусматривает контроль их специфической активности на биопробных животных. Предназначенные для контрольного заражения дозы тест-культур должны строго соответствовать П^р, а в некоторых случаях — МЬЭ. Для выявления индивидуальной резистентности биопробных животных к бактериальному заражению от величины УОНРО были проведены исследования на золотистых хомячках. Животных внутрибрюшинно заражали различными дозами возбудителя сапа.

В результате проведенных исследований были выявлены определенные особенности выживаемости золотистых хомячков в зависимости от величины УОНРО и дозы заражения. Установлено, что от высоких доз заражения возбудителем сапа в первую очередь погибают особи, характеризующиеся средним и низким значением УОНРО. и гибель их отмечается в более короткие сроки. В то же время индивиды, отличающиеся высоким показателем УОНРО, проявляют большую устойчивость к высоким дозам заражения этим возбудителем. При заражении низкими дозами возбудителя сана в первую очередь погибают животные с высокой величиной УОНРО.

С целью изучения влияния величины УОНРО на точность и объективность определения специфической активности вакцин по величине прогекгивного эффекта были выполнены исследования на белых мышах.

Животных иммунизировали чумной живой вакциной, на 20-е сутки у них в ИФА определяли тигры специфических сывороточных антител. Затем производили заражение всех (иммунных и шггактных) животных вирулентным штаммом чумного микроба. После заражения наблюдали за интенсивностью их гибели. Установлено, что при максимальных дозах заражения преимущественная гибель икгакткых животных наступала у особей с низкой величиной УОНРО, а при минимальных дозах заражения гибли животные с высоким показателем УОНРО. Выживаемость иммунных белых мышей находилась в прямой зависимости от величины титров специфических антител. Антятелопродукция также находилась в зависимости огг показателя УОНРО.

Дополнительно, по аналогичной схеме, были выполнены опыты на морских свинках. Животных подкожно иммунизировали чумной живой вакциной, на 20-е сутки у них в РПГА определяли титры сывороточных специфических антител. Затем всех морских свинок заразили вирулентным штаммом чумного микроба. Полученные при этом результаты свидетельствовали о наличии той же самой зависимости продолжительности жизни зараженных интакгаых животных возбудителем чумы в дозе, равной ОСЬ, от величины УОНРО.

С целью подтверждения выявленных закономерностей были проведены исследования на белых мышах с использованием для иммунизации химической ту' ляремийной вакцины. В ходе опытов была доказана ранее выявленная зависимость.

Таким образом, обобщая результаты экспериментов, направленных на выявление взаимосвязи величины УОНРО с закономерностями выживаемости животных при заражении вирулентными штаммами возбудителен чумы и туляремии и особенностями обеспечения специфической защиты организма, можно отмстить, Что особи с высоким значением УОНРО обладают пониженной резистентностью к низким и повышенной устойчивостью к высоким дозам бактериального заражения. Индивиды, характеризующиеся низким показателем УОНРО, наиболее резистентны к низким и наименее — к высоким дозам микробного воздействия. Животные со средним значением УОНРО занимают промежуточное положение по чувствительности как к высоким, так и к низким дозам заражения. После иммунизации животных зависимость их выживаемости от величины УОНРО при заражении обусловлена особенностями антителообразования. Антателообра-зование, в свою очередь, также находится в определенной зависимости от величины УОНРО (рис. 6).

Заключительный этап работы посвящен обобщению полученных данных и разработке системы комплексной стандартизации биопробных животных. В результате систематизации подходов к отбору биопробных животных, используемых при оценке качества вакцинных препаратов, определены наиболее информа-

тивные, наименее травматичные и легко вьшолнимые методы тестирования, отражающие комплекс основных показателей стандартизации (табл. 2). В рекомендуемой системе оценки животных важное место отводится определению величины УОНРО. Введение этого теста в систему отбора животных позволяет обеспечить стандартность поголовья биопробных особей. Качественные же лабораторные животные, в свою очередь, позволяют более точно характеризовать стандартность вакцинных препаратов (см. табл. 3).

10о

90

«о

70 <0 50 40 30 10 10

"Вившюсп

, - 'Агтиоарадоци

9.5"

-11.5-

-15.5"

" Не-

высокая Средняя Низок

величина величина величина

УОНРО УОНРО УОНРО

ТшрАТИФА (обр. вел. х)

«ООО 7000 (000 5000 4000 3000 2000 1000

ПБЧ(В)

РеЬ.6. Зависимость выживаемости и антителопродукции от величины УОНРО у белых мышей, вакцинированных химической туляре-мийной вакциной, при заражении возбудителем туляремии в ОСЬ

Комплексная схема, включающая основные оценочные показатели стандартизация биопроб пых жижгпшх

1 Критерии качества вакцинных препаратов

Показатели стандартизации животных Безвредность Реактогегаюсть Специфическая активность

Генетический статус - - +

Микробиологический статус - - +

Паразитарный статус - - +

Циркадианная организация + - +

УОНРО + + -г

Примечание. - отсутствие необходимости тестирования; + обязательное тестирование.

Рекомендуемая величина УОНРО (шопробвых животных, используемых при оценке качества вакцинных препаратов

Величина УОНРО Безвредность Реакгогенносгь Специфическая активность

Острая Подосграя . Общая Местная Иммуно-генность Выживаемость

Высокая + + - + + -г

Средняя - - - - + + •

Низкая - - + - + +

Таблица 4

Границы порога болевой чувствительности, определяющее величину УОНРО

№ Вид Порог болевой чувствительности (Вольты)

п/п животных высокий средний низкий

1 Мыши 9,5 - J 2,4 12,5 -15,4 15,5- 18,4

2 Крысы 17,5 - 20,4 20,5 - 23,4 23,5- 26,4

3 Золотые хомячки 16,3 - 20,4 20,5 - 24,6 24,7 - 28,S

4 Морские свинки 10,1 - 15,4 15,5-20,8 20,9 - 26,2

5 Кролики 2,0 - 25,0 26,0 - 49.0 50,0 - 73,0

Примечание. Величина порога болевой чувствительности находится в обратно пропорциональной зависимости or величины УОНРО.

Обобщив результаты собственных исследований, предлагаем для дифференциации лабораторных животных по величине УОНРО применять сведения рабочей табл. 4.

Введение этого теста в систему отбора животных позволяет более точно охарактеризовать качество вакцинных препаратов.

ВЫВОДЫ

1. Доказано, что в систему стандартизации биопробных животных необходимо ввести учет их паразитарного статуса. При незначительном, кратковременном воздействии эндо- и эктопаразитов наблюдалось двукратное повышение анти-телопродукшш к Б С А, а при длительном, хроническом паразитарном воздействии отмечалась иммуносунрессия (титры антител соответственно находились на уровне 429+96 и 98+65 при контроле 193+48).

2. Установлена целесообразность определения циркадианной организации иммунной системы с выявлением оптимального времени введения антигенного материала. Оптимальным временем иммунизации животных с дневным образом жизни является 12.00 ч, а для ночных — 16.00 ч.

3 . Биометрически подтверждены обшебиологические закономерности распреде-

ления показателя болевой чувствительности как критерия уровня общей неспецифической реактивности организма.

4 . Определена возможность применения уровня общей неспецифической реак-

тивности организма в качестве интегрального, универсального показателя стандартизации биопробных животных (особей с низкой величиной УОНРО, средним значением УОНРО и высоким показателем УОНРО). 5. Впервые предложен принцип дифференцированного подбора подопыпшх животных, характеризующийся адекватной величиной уровня общей неспецифической реактивности организма при определении качества вакцинных препаратов. Разработана эффективная универсальная система комплексной стандартизации биопробных животных.

6. Установлено, что лабораторные животные с высокой величиной УОНРО могут быть использованы при. определении безвредности, реакгогенносга и специфической активности вакцин. Особей же со средним и низким значение« УОНРО целесообразно использовать лишь при оценке специфической активности препаратов.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Необходимость учета циркадианной динамики показателей иммунограмм при работе с экспериментальными животными / Мулик А.Б.,Тихонов Н.Г., Попова B.C., Постнова М.В. // Актуальные вопросы профилактики чумы и других инфекционных заболеваний: Материалы науч.-практ. конф. Ставрополь, 1994. С. 65.

2. Особенности стандартизации экспериментальных животных, используемых для контроля иммуногенности вакцин / Постнова М.В., Тихонов Н.Г., Мулик А.Б., Ахмедов А.Н. // Идеи Пасгера п борьбе с инфекциями: Материалы междунар. симпоз. С.-Петербург, 1995. С.41.

3. Взаимосвязь некоторых биохимических показателей с уровнем общей реактивности организма / Мулик А.Б., Тихонов Н.Г., Постнова М.В., Зайцев В.Г. // Экспериментальная биология и медицина: Материалы межвуз. конф. Волгоград, 1995. С.8.

4. Метод стандартизации лабораторных животных для определения LDj„ химических веществ и микробных возбудителей / Тихонов Н.Г., Мулик А.Б., Постнова М.В., Савченко С.Т. // Новые материалы и методы в медицине. Волгоград, 1995. Т.51. Вып. 2. С.5-7.

s. Прогнозирование резистентности 1фыс к микробным токсинам по уровню общей реактивности организма / Мулик А.Б., Тихонов Н.Г., Постнова М.В., Новочадов В.В. // Новые материалы и методы в медицине. Волгоград, 1995. Т.51. Вьш.2. С.68-69.

6. Изучение влияния уровня общей реактивности организма на специфиче-. ское антителообразование у белых мышей при иммунизации антигеном эу-кариотного происхождения / Тихонов Н.Г., Мулик А.Б., Постнова М.В., Ахмедов А.Н. // Идеи И.И.Мечникова и развитие современного естествознания: Материалы междунар. конф. Харьков, 1995. С.299-300.

7. Тихонов Н.Г., Мулих А.Б., Постнова М.В. Особенности формирования иммунного ответа у белых мышей к антигену эукариотного происхождения // Экспериментальная биология» медицина,Материалы межвуз. конф. Волгоград, 1995. С. 19.

а. Тихонов Н.Г., Мулик А.Б., Посгаова М.В. Особенности влияния генетического статуса биопробных животных на результаты оценки иммуногенности вакцин // Гомеостаз и инфекционный процесс: Тез. докл. межцунар. конф. 4.2. Саратов, 1996. С.256.

9. Мулик А.Б., Тихонов Н.Г., Постнова М.В. Болевая чувствительность как отражение уровня общей неспецифической реактивности органщма // Гомеостаз и инфекционный процесс: Тез. докл. межцунар. конф. 4.2. Саратов. 1996. С. 187.

10. Тихонов Н.Г., Мулик А.Б., Постнова М.В. Особенности влияния генетического статуса биопробных животных на результаты оценки иммуногенности вакцин // Гомеостаз и инфекционный процесс: Тез. докл. междунар. конф. 4.2. Саратов, 1996. С.256.

11. Mulik A.B., Tikhonov N.G., Postnova M.V. Influence of the level of general nonspecific reactivity on reprobuctive activity of laboratory animals in a breebing colony//Laboratomue Zhyvotnye. 1996.Vol.VI,№J. P. 165-167.

12. Необходимость учета времени антигенного воздействия при оценке развития иммунного ответа / Тихонов Н.Г., Мулик А.Б., Постнова М.В., Тем-кин О.Э. // Эколого-эпидемиологический надзор за природно-очаговыми инфекциями в Северном Прихаспии. Астрахань, 1996. С.192-193.

13. Мулик А.Б., Тихонов Н.Г.. Постнова М.В. Оптимизация оценки безвредности вакцинных препаратов // Материалы VII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. Т.2. Москва, 28-31 янв. 1997. С. 125-126.