Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Особенности эпизоотологии и профилактики туберкулеза и паразитозов маралов в Горном Алтае

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Особенности эпизоотологии и профилактики туберкулеза и паразитозов маралов в Горном Алтае"

На правах рукописи /

Боранбаев Андрей Вячеславович

ОСОБЕННОСТИ ЭПИЗООТОЛОГИИ И ПРОФИЛАКТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА И ПАРАЗИТОЗОВ МАРАЛОВ В ГОРНОМ АЛТАЕ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1: ......:лз

Ои

Новосибирск - 2013

005061736

Работа выполнена в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор

Луницын Василий Герасимович

Официальные оппоненты: Донченко Николай Александрович,

доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник, ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии, директор;

Колычев Николай Матвеевич,

доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет им. А.П. Столыпина», профессор кафедры

Ведущая организация - ГНУ Всероссийский научно-исследовательский

институт бруцеллеза и туберкулеза животных Ро ссельхоз академии

Защита состоится «02» июля 2013 г. в 10-00 часов на заседании диссертационного совета Д 006.045.01 при ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская обл., Новосибирский р-н, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ а/я 8; тел./факс (383)348-44-62, E-mail: dis.ievsidv@list.ru

С диссертацией можно ознакомиться в Сибирской научной сельскохозяйственной библиотеке Россельхозакадемии.

Автореферат разослан 9-У мая 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

¿ЯР5-"-

Г.М. Стеблева

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. В Республике Алтай и горных районах Алтайского края на 140 маралофермах содержится свыше 80 тысяч маралов. Регион ежегодно производит свыше 50 тонн консервированных пантов. Продуктивность маралов зависит не только от условий содержания, кормления животных, их наследственности, в равной мере от состояния здоровья (В.Г. Луницын, 2011).

Содержание маралов в неволе, высокая концентрация на пастбищах, отсутствие естественного отбора, совместное содержание с другими видами сельскохозяйственных животных на раннем этапе одомашнивания в частных маральниках - все это способствовало распространению среди оленей болезней, встречающихся у других видов сельскохозяйственных животных.

К таким инфекциям относится и туберкулез маралов, который широко освещен в работах В.Г. Луницына, A.C. Донченко (1994); Г.И. Шаманского (1930); Н.М. Колычева (1992), но для осуществления профилактических мероприятий на маралофермах Горного Алтая необходимо знать некоторые особенности протекания инфекции в данной местности (пути выделения, факторы передачи, пути заражения маралов при туберкулезе, сроки выживания М. bovis в почве).

В литературе имеется ряд источников о взаимоотношении гельминтов и бактерий, об их способности к инокуляции в организме различных животных (К.И. Скрябин, 1923; Д.И. Панасюк, 1969; Б.Е. Курашливи, 1975; М.М. Шах-мурзова, 1984; Е. Molvoz, L. Labinet, 1918 и др.) в результате чего отмечается осложнение патологического процесса и клиническое течение болезней. В свою очередь в литературе нет данных о персистировании гельминтами микобакгерий туберкулеза у маралов, что и послужило основанием для наших исследований.

Видовой состав гельминтов у маралов был определен многими авторами (Э.И. Прядко, 1976; М.П. Любимов, 1976; В.Г. Луницын, 2000; Е.В. Шуклина, 2007; Н.С. Пегрусева, Н.М. Бессонова, В.А. Марченко, Е.А. Ефремова, 2006, А.И. Бахтушкина, 2010). Нам необходимо уточнить видовой состав паразитозов у маралов в Горном Алтае на момент исследования по двум причинам: 1) изменение экстенс и интенсэффективности тех или иных паразитозов из-за применения широкого ассортимента противопаразитарных препаратов в мараловодческих хозяйствах; 2) при постоянном использовании одних и тех же препаратов снижается их эффективность по отношению к гельминтам.

Цель и задачи исследования. Цель исследования - изучить особенности распространения туберкулеза и паразитозов у маралов в Горном Алтае с апробацией новых средств терапии и профилактики. Для решения данной цели были поставлены следующие задачи:

> выяснить пути выделения, факторы передачи и пути заражения маралов при туберкулезе, определить сроки выживания М. bovis в почве маралоферм и апробировать новые дезинфицирующие средства;

> усовершенствовать твердые питательные среды, для культивирования микобактерий с использованием продуктов переработки сырья мараловодства;

> выяснить роль гельминтов в персистировании микобактерий туберкулеза у маралов;

> определить видовой состав, степень распространения паразитозов в мараловодческих хозяйствах и изучить эффективность антгельминтиков: клозан-тин-20%, норомектин и альвет при смешанной ассоциативной инвазии маралов.

Научная новизна. Определены пути выделения, фаеторы передачи и пути заражения маралов возбудителем туберкулеза; впервые выяснена роль гельминтов в персистировании микобактерий туберкулеза у маралов; усовершенствованы твердые питательные среды для культивирования М. bovis с введением в основу продуктов переработки продукции мараловодства; определена эффективность дезинфицирующих средств (вироцид, бэби дез ультра, бромосепт-50) по отношению к М. bovis в почве маралоферм; изучена противопаразитарная эффективность 3-х антгельминтиков в производственных условиях, один из которых ранее не использовался в мараловодстве.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическое значение работы заключается в определении особенностей эпизоотологии туберкулеза и паразитозов у маралов в Горном Алтае; персистировании гельминтами микобактерий туберкулеза; в обосновании эффективности дезинфицирующих препаратов по отношению к М. bovis в почве маралоферм и антгельминтиков у маралов; в описании состава твердых питательных сред и получении знаний об ускоренном культивировании микобактерий туберкулеза. Полученные результаты должны учитываться при проведении дальнейших научных исследований. По материалам результатов исследований разработаны и внедрены методические рекомендации «Диагностика и меры борьбы с гельминто-зами маралов», утвержденные ученым советом ГНУ ВНИИПО Россельхозака-демии (протокол № 11 от 25 октября 2010 года) и НТС Управления ветеринарии Администрации Алтайского края (протокол № 14 от 12 ноября 2010 года). Наставление «Сборник ветеринарно-санитарных правил по производству, заготовке и консервированию продукции пантового оленеводства», утвержденное ученым советом ГНУ ВНИИПО Россельхозакадемии (протокол № 15 от 18.03.2011) НТС Управления ветеринарии Администрации Алтайского края (протокол № 15 от 08.04.2011) и НТС Министерства сельского хозяйства Республики Алтай (протокол №3 от 21.04.2011).

Личный вклад. Представленная диссертационная работа является результатом 3-летних научных исследований автора. Исследования по распространению и профилактики туберкулеза и паразитозов у маралов в Горном Алтае проведены самостоятельно. Статьи, написанные в соавторстве, включают более 80% материалов исследований соискателя.

Апробация работы. Результаты исследований доложены и обсуждены на Международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию со дня основания Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (п. Краснообск, 28-29 октября 2010 г.), V Международной научно-практической конференции «Аграрная наука - сельскому хозяйству» (Барнаул, 2010), III Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы сельского хозяйства горных территорий» (Горно-Алтайск, 1-4 июня

2011 г.), научно-практической конференции, посвященной 50-летию факультета ветеринарной медицины АГАУ (Барнаул, 11-13 октября 2012 г.), на ученых советах ГНУ ВНИИПО Россельхозакадемии (2010-2012), НТС управления ветеринарии Администрации Алтайского края и Министерства сельского хозяйства Республики Алтай (2010, 2011).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации отражены в 10 научных работах, в том числе 3 - в журнале, рекомендованном ВАК Минобразования РФ («Вестник Алтайского государственного аграрного университета»), а также в трудах международных конференций. Научные исследования, изложенные в диссертации, являются составной частью научных программ ГНУ ВНИИПО Россельхозакадемии и приведены в соответствии с планом НИР (тема 08.01.08).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 133 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложений. Диссертационная работа иллюстрирована 20 рисунками и содержит 14 таблиц. Библиографический список включает 184 источника, в том числе 32 — иностранных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

- пути выделения и факторы передачи при туберкулезе маралов;

- пути заражения маралов возбудителем туберкулеза;

- сроки выживания М. bovis в почве маралоферм;

- эффективность новых дезинфицирующих средств в отношении М. bovis, почв зимников;

- усовершенствованные твердые питательные среды для культивирования М. bovis;

- особенности распространения и проявления паразитозов маралов;

- эффективность антгельминтиков при ассоциативной инвазии маралов.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнена в лаборатории заразных болезней Государственного научного учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства, а также в мараловодческих хозяйствах Алтайского края и Республике Алтай в 2009-2012 годах.

Для определения путей выделения возбудителя туберкулеза по результатам прижизненной и послеубойной диагностики от животных, выбракованных по продуктивности, упитанности, экстерьерным признакам или реагирующих на ППД туберкулин для млекопитающих, провели отбор 131 пробы биологических тканей и экскретов (трахеальная слизь - 39, слюна - 38, моча — 8, химус -28, фекалии - 11, молоко - 7 проб). Для выявления факторов передачи при туберкулезе отобрали материал из объектов внешней среды в количестве 72 проб (почва - 24, остатки кормов - 19, смывы с кормушек - 16, соскобы с панторезного станка - 4, вода - 9 проб). Для выяснения путей заражения туберкулезом

маралов осуществляли послеубойное вскрытие 1015 животных (203 рогача, 607 маралух, 121 сайков и 84 саюшек), органы исследовали по методике М.С. Жакова (1977) - особое внимание уделяли осмотру внутренних органов (легкие, печень, почки, кишечник, селезенка), серозных покровов грудной и брюшной полостей, лимфатических узлов (предлопаточных, средостенных, бронхиальных, заглоточных, подчелюстных, околоушных, мезентериальных, портальных и др.). Биоматериал исследовали, руководствуясь «Наставлением по диагностике туберкулеза животных», утвержденным Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации 2002 года.

Перед посевом отобранный биоматериал (319 проб) обрабатывали методом Гона-Левенштейна-Сумиоши.

Посев обработанного материала осуществляли на плотные питательные среды Финн-2 и Левенштейна-Йенсена. Каждую пробу высевали в 10 пробирок (5:5) вышеуказанных сред путем втирания биоматериала по поверхности питательной среды. Пробирки закрывали резиновыми пробками и помещали в термостат при температуре 37-38°С, посевы просматривали через каждые три дня. С выросших колоний готовили мазки, которые окрашивали по Циль-Нильсену, проводили их микроскопию с описанием. Наблюдали за посевами в течение 3-х месяцев.

Дополнительно для выделения возбудителя туберкулеза от маралов биоматериал посевной суспензии вводили подкожно в дозе 1,5 мл в область паха 43 морским свинкам массой по 350 г, исследованных предварительно внутри-кожно ППД-туберкулином для млекопитающих в дозе 25 ME в объеме 0,1 мл с отрицательным результатом.

При изучении выживаемости в почве маралоферм М. bovis, изолированных от маралов, использовали отобранную с маральников обыкновенную черноземную почву, помещенную в контейнеры (1,5-литровые пластиковые бутылки) в количестве 24 штук из расчета на 2 года по одному контейнеру в месяц. Почву контаминировали двухмиллиардной взвесью культур М. bovis из расчета 0,1 мл на 1 г субстрата и поместили в естественные условия. Суспензию для заражения почвы готовили из выращенной бактериологической массы (культур мико-бактерий) путем переноса бактериальной петлей колоний микобактерий в пробирки со стерильным физиологическим раствором в объеме 10 мл. Количество микобактерий определяли по стандарту мутности (ОСО 42-28-85-04) ГИСК им. Л.А. Тарасевича на 10 ед. Подробно схема опыта размещена в соответствующем разделе диссертационной работы. Отобранные пробы обрабатывали по методу Гона-Левенштейна-Сумиоши (с применением 18%-ного раствора серной кислоты), с последующим посевом на плотные питательные среды Финн-2 и Левенштейна-Йенсена и биопробой на морских свинках.

Для определения роли гельминтов в персистировании микобактерий туберкулеза у маралов, от животных, на вскрытии которых диагностировали туберкулезные изменения и гельминтозы, с помощью неполных гельминтологических вскрытий по Скрябину отобрали 6 проб биологического материала для исследований: 2 легких, пораженных туберкулезом+диктиокаулезом, 2 печени - туберкулезом+дикроцелиозом, 2 легких - туберкулезом+эхинококкозом.

Феномен персистирования микрофлоры в гельминтах изучали с помощью бактериологического метода исследования поверхности гельминтов и их гомо-генизата. При этом производили посев полученного гомогенизата на плотные питательные среды Финн-2 и Левенштейна-Йенсена и осуществляли заражение морских свинок.

При изучении эффективности дезинфицирующих средств вироцид, бэби дез ультра, бромосепт-50, используемых для санации почв зимников марало-ферм при туберкулезе, применяли в следующих концентрациях и дозировках: вироцид 0,5%, 2,5%-ный раствор с нормой расхода по инструкции 0,5 л/м2 и экспериментально применяемый объем 17,7 л/м2 (100 мл на бутылку) - распространялся на все дезинфектанты для более глубокого проникновения в почву; бэби дез ультра 10%, 50%-ный раствор с нормой расхода 0,2 л/м2; бромосепт-50 1%, 5%-ный раствор с нормой расхода 0,3 л/м2.

Пробы почвы, обработанные дезинфектантами, подвергали бактериологическому исследованию по вышеизложенным методам.

Для усовершенствования питательных сред при культивировании микобак-терий использовали яичные среды Финн-2, Левенштейна-Йенсена. С этой целью в указанные питательные среды вводили пантолизаты и экстракты из порошка хвостов марала. Выращивание первичных культур микобактерий туберкулеза осуществляли согласно «Наставления по диагностике туберкулеза», 2002. Питательная среда с пантолизатом представлена следующим соотношением компонентов, мл: солевая основа - 1000; яичная масса — 1700-1000; пан-толизат - 300-1000; 2%-ный раствор малахитовой зелени - 33. Пантолизат готовили экстракцией смеси пантового шрота и воды в соотношении шрот : вода 1:4 - 1:5, температура процесса 98-99°С под давлением 1,5 атм. в течение 34 часов. Питательную среду с добавлением экстракта порошка хвостов марала готовили следующим образом: сначала, согласно «Наставлению по диагностике туберкулеза», приготовили солевой раствор среды Левенштейна-Йенсена, состоящий из калия фосфорнокислого - 2,4 г; магния сернокислого — 0,3 г; магния лимоннокислого - 0,6 г; аспарагина - 3,6 г; глицерин — 12 мл; воды дистиллированной -до 500 мл, далее добавили 100 мл экстракта из порошка^хвостов марала и остальные ингредиенты, составляющие среду Левенштейна-Йенсена.

Инвазионные болезни маралов в Горном Алтае диагносцировали с помощью методов неполных гельминтологических вскрытий по Скрябину. Исследовали 1015 маралов, из них 324 самцов и 691 самок (203 рогача, 607 маралух, 121 сайков и 84 саюшек) во время убоя на бойне. Животные были привезены из 3-х районов 4-х хозяйств: Шебалинский район - ПСК «Барагаш» 55 маралов: 7 самцов и 48 самок; «Дъектиек» 298 животных: 56 самцов и 242 самки; Усть-Канский район — СПК «Яконур» 23 марала: 16 самцов и 7 самок; Чарышский район - ФГУП «Новоталицкое»: 265 самцов и 375 самок.

Наряду с гельминтологическими вскрытиями отобрали 1328 проб фекалий для копрологического исследования из прямой кишки маралов при убое и от свежевыделенных фекалий в зимниках. Копрологический материал был отобран у маралов из 6 районов 16-и хозяйств: Майминский район — ОАО «Ка-рым», ООО «БСХП»; Онгудайский район - ОАО «Племхоз Тсньгинский», «На-

дежда»; Усть-Канский район - СПК «Талица», ООО «Нива», СПК «ІІконур»; Шебалинский район - ГУП СВХ «Оленевод», АЭХ СО РАН, ПСК «Барагаш», ЗАО «Дектиек»; Усть-Коксинский район - СПК «Абайский», СПК «Нижне-Уймонский», ЗАО «Верхний-Уймон», ЗАО «Курдюм»; Чарышский район -ФГУП «Новоталицкое». Пробы помещали в целлофановые пакетики и подписывали. Исследование отобранных проб проводили флотационным методом с насыщенным раствором нитрата аммония (плотность раствора 1300) по Г.А. Котельникову, по методу Вайда.

Для апробирования новых средств терапии и профилактики инвазионных болезней маралов применяли клозантин-20%, норомекган и альвет. Сравнительное испытание этих препаратов осуществляли в опытных и производственных условиях при спонтанной ассоциативной инвазии у животных.

Эффективность клозантина-20% изучали на спонтанно инвазированных 60 маралах рогачах и 130 маралятах 2011 года рождения в ноябре-декабре 2011 года, принадлежащих ООО «Строй Газ-Тур». Препарат вводили в дозе 0,5 мл/20 кг массы тела однократно внутримышечно в область лопатки. Перед опытом от маралов рогачей и маралят отобрали копрологический материал для исследования по 10 проб и провели гельминтологическое вскрытие 8-й маралов рогачей. В течение 5 суток за опытными животными вели клиническое наблюдение. Контрольная группа (10 рогачей и 10 маралят) лечению не подвергалась.

Учет лечебно-профилактической эффективности проводили по результатам копрологических исследований (п = 40 - 10 проб рогачи опытные, 10 проб рогачи контрольные, 10 проб маралята опытные, 10 проб маралята контрольные) и гельминтологических вскрытий 8-й маралов рогачей через 30 дней после обработки.

Испытание норомектина осуществляли на 30 спонтанно инвазированных перворожках, в марте 2012 года, также принадлежащих вышеуказанному предприятию. Антгельминтик вводили в дозе 1 мл на 50 кг массы животного (200 мкг ивермектина на 1 кг массы) однократно, подкожно в область лопатки. Перед использованием антгельминтика отобрали копрологический материал в количестве 10 проб от маралов. В течение 5 суток за опытными животными вели клиническое наблюдение. Контрольная группа (п = 10) обработкам не подвергалась. Учет эффективности проводили по результатам копрологических исследований (п = 20 - 10 проб от опытной группы, 10 - от контрольной) и гельминтологического вскрытия 1-го опытного животного через 30 дней после обработки.

Препарат альвет применяли в марте 2012 года на маралах, принадлежащих ФГУП «Новоталицкое». Лечебно-профилактическую эффективность антгельминтика определяли на 1500 рогачах массой 300-310 кг и 800 маралухах массой 210-220 кг. Препарат маралам задавали групповым способом в смеси с концентрированными кормами однократно в дозе 5,0 г на 100 кг массы животного (рогачам - 15 г на голову, маралухам - 12 г на голову). Контрольная группа (10 рогачей и 10 маралух) дегельминтизации не подвергалась. Перед применением альвета отобрали копрологический материал для исследования в количестве 20 проб (10 проб от рогачей, 10 — от маралух).

Учет противопаразитарной эффективности осуществляли по результатам копрологических исследований (п = 40) через 30 дней после обработки (10 проб от рогачей опытной группы, 10 - от рогачей контрольной, 10 - матки опытные, 10 - матки контроль).

Оценку эффективности препаратов проводили по общепринятой методике с подсчетом показателей экстенсэффекгивности (ЭЭ) - количество маралов, полностью освободившихся от личинок (%), и интенсэффективности (ИЭ) - количество погибших личинок в процентах к количеству найденных.

Полученные данные подвергались стандартной статистической обработке на персональном компьютере INTEL PENTIUM IV в операционной системе Windows ХР с помощью программ Microsoft Word, Microsoft Excel, Adobe Photoshop 7.0, Paint.

2.2 Результаты исследований

2.2.1 Пути выделения и факторы передачи микобактерий при туберкулезе маралов

При посеве 203 проб отобранного биоматериала изолировали 38 культур. Первичный рост микобактерий наблюдался на 14-88-й дни. Культуры микобактерий были изолированы из следующих проб: слюны - 2, трахеальной слизи -12, химуса - 9, смывов с кормушек - 1, почвы - 7, фекалии - 2, мочи — 2, молока - 1, остатков кормов - 2. Результаты первичного роста и данные биопроб отражены в таблице 1.

Таблица 1 - Результаты культурально-морфологических и биологических исследований биоматериапа ____

№ п/п Вид материала Количество проб Количество изолированных культур Первичный рост, сут. Падеж морских свинок, сут. Первичный рост культур из биопробы

1. Слюна 38 2 (5,3%) 64,5±0,7 41,5±2,1 69,0±1,4

2. Трахеальная слизь 39 12 (30,8%) 51,6±7,8 40,0±2,7 48,9±6,7

3. Химус 28 9 (32,1%) 73,7±9,4 52,5±7,2 36,0±2,2

4. Смыв с кормушек 16 1 (6,3%) 14,5±0,7 46,5±0,7 54,5±0,7

5. Почва 24 7(29,1%) 4б,4±7,4 29,3±1,3 41,0±0,7

6. Фекалии 11 2(18,2%) 13,5±0,7 Убили чб Змее. -

7. Моча 8 2 (25,0%) 14,0±1,4 43,5±0,7 -

8. Молоко 7 1 (14,3%) 13,5±0,7 45,5±0,7 53,5±0,7

9. Корма 19 2(10,5%) 30,0±7Д 39,0±1,4 2б,5±2,1

10. Соскобы с панторезного станка 4 - - Убили ч/з 3 мес.

11. Вода 9 - - Убили ч/зЗ мес. -

Таким образом, М. bovis из организма маралов выделяются в окружающую среду посредством: слюны - 5,3%, трахеальной слизи - 30,8%, фекалий -18,2%, мочи - 25,0%, молока - 14,3%. Факторами передачи туберкулеза на ма-ралофермах являются: кормушки - 6,3%, почва - 29,2%, остатки корма - 10,5%.

2.2.2 Пути заражения маралов возбудителем туберкулеза

Для определения путей заражения маралов возбудителем туберкулеза осуществили постмортальное вскрытие 1015 маралов (203 рогача, 607 маралух, 121 сайков и 84 саюшек). Характерные для туберкулеза изменения обнаружили у 74 маралов (26 рогачей, 28 маралух, 20 голов сайков и саюшек), от которых отобрали биоматериал для исследования. Из них у 7 (9,5%) пантовых оленей наблюдали изменения в печени и брыжеечных лимфатических узлах, у 5 (6,8%) - в печени и портальных лимфатических узлах, у 30 (40,5%) голов - брыжеечные лимфатические узлы. На поверхности и внутри печени констатировали творожистые инкапсулированные бугорки размером до 1 см округлой формы и увеличение брыжеечных лимфатических узлов - поверхность- их беловато-серого цвета, тестоватой консистенции, при вскрытии выделяется сметанооб-разная масса бело-желтого оттенка.

У 26 (35,1%) маралов регистрировали два вида поражений легкого с одновременным изменением средостенных лимфатических узлов. В первом случае только в диафрагмальной доли легких, в толще органа, прощупывались уплотненные участки до 5 см величиной, плотной консистенции с творожистым содержимым, во втором случае на поверхности и в толще всей паренхимы легкого - уплотненные участки величиной 0,5-1,0 см, плотной консистенции, вросшие в окружающую ткань, с творожистым содержимым. У 6 (8,1%) маралов наблюдали генерализованную форму туберкулеза с поражением печени, лимфатических узлов, легкого, селезенки, почек.

По результатам проведения постмортальных и бактериологических исследований считаем основными путями заражения маралов туберкулезом: алиментарный (56,8%) (наблюдали изменения, характерные для туберкулеза в печени, брыжеечных и портальных лимфатических узлах) и аэрогенный (35,1%) (поражены легкие и средостенные лимфатические узлы). В то же время у (8,1%) маралов регистрировали генерализованную форму туберкулеза с поражением практически всех органов и лимфатических узлов.

2.23 Сроки выживаемости М. bovis, изолированных от маралов в почве маралоферм

Контейнеры с почвой разместили в естественных условиях под решеткой. Каждый месяц брали по одному контейнеру с зараженной почвой и отбирали на поверхности и глубине (5 см, 10 см, 15 см) пробы для исследования на наличие М. bovis. Для простоты отбора проб в каждый контейнер предварительно поместили по 4 пробки с привязанными к ним веревками заполненными землей, контаминированной двухмиллиардной взвесью культур М. bovis по 10 гр. на вышеуказанных уровнях контроля.

При проведении данного опыта осуществили посев 64 проб почвы за 16 месяцев, при этом изолировали 53 культуры.

Рост М. bovis на питательных средах наблюдали: из проб почв с поверхности в течение 15-и месяцев; с глубины 5 см - 14 месяцев; из проб с 10 и 15 см -12 месяцев.

При проведении биологической пробы морские свинки пали после 4-, 5- и 9-го месяцев исследования контаминированных проб почвы с характерными для туберкулеза изменениями, а спустя 10 месяцев - падежа и изменений не наблюдали, хотя рост культур М. bovis на питательных средах после 10 месяцев присутствовал. В свою очередь это свидетельствует о том, что вирулентные свойства М. bovis сохранялись в течение 9 месяцев.

В результате изучения сроков выживаемости М. bovis, изолированных от маралов в почве маралоферм выяснили, что на поверхности микобактерии сохраняют свою жизнеспособность в течение 15 месяцев, глубине 5 см - 14 месяцев, 10 и 15 см - 12 месяцев. В свою очередь вирулентность микобактерии сохраняли в течение 9 месяцев.

2.2.4 Эффективность дезинфицирующих средств бромосепт-50,

бэби дез ультра и вироцид для санации почв зимников маралоферм

при туберкулезе

При посеве 108 проб почвы, обработанных исследуемыми дезинфицирующими средствами, были получены следующие результаты: 50%-ный раствор бэби дез ультра при экспозиции 1, 2, 3 часа и объемом используемого раствора 17,7 л/м2 уничтожает М. bovis на поверхности почвы, а в нижних слоях микобактерии остаются живы. Дезинфицирующие растворы вироцида 0,5%, 2,5%, бромосепта-50 1%, 5% и бэби дез ультра 10% при исследовании не оказали воздействия на М. bovis.

Морские свинки, инфицированные суспензией из проб почвы, контамини-рованной М. bovis, обработанной дезинфектантом бэби дез ультра 50% с экспозицией 3 часа на поверхности почвы, дала отрицательный результат (оставались живы в течение 3-х месяцев, без характерных при туберкулезе изменений). В остальных случаях лабораторные животные пали на 31-47-й дни, при вскрытии наблюдали изменения в виде язвы на месте введения, увеличение регионарного лимфатического узла, в некоторых случаях наблюдали характерное при туберкулезе поражение печени.

Из результатов определения эффективности дезинфицирующих средств (вироцид, бэби дез ультра, бромосепт-50) для санации почв зимников маралоферм при туберкулезе, следует, что представленные выше растворы даже с увеличенной в 5 раз концентрацией и нормой объема раствора с 0,2-0,5 до 17,7 л/м не оказали губительного воздействия на М. bovis, за исключением бэби дез ультра 50%, при использовании которого наблюдали отсутствие микобактерий на поверхности почвы.

2.2.5 Совершенствование питательных сред для культивирования микобактерий

Для культивирования микобактерий применяли 2 усовершенствованные питательные среды: 1-я - с заменой яичной массы в среде Финн-2 пантолизатом из пантового шрота на 15, 25 и 50%; 2-я - с добавлением экстракта из хвостов марала в питательную среду Левенштейна-Йенсена. В проведении опыта ис-

пользовали питательные среды Финн-2 (контроль) прототип, Финн-2 с панто-лизатом (15%)и1-й опыт, (25%) 2-й опыт, (50%) 3-й опыт, по прототипу (среда Левенштейна-Иенсена) и среда с добавлением экстракта из хвостов марала. Для посевов использовали культуры M.flavescens (атипичные) и М. bovis.

Замена 15,25 и 50% яичной массы на пантолизат существенно повлияла на улучшение ростовых качеств при выращивании М. bovis и микобакгерий из биоматериала от морской свинки. При выращивании M.flavescens (являющейся одной из многочисленных в количественном отношении микобактерий, изолированных из биоматериала маралов (18,8%) и обуславливающих сенсибилизацию животных к туберкулину) ростовые качества среды не уступают данным показателям среды Финн-2 (контроль).

Сроки появления первичных культур М. bovis были одинаковы на всех испытуемых средах (6 суток), однако на среде Финн-2 первичный рост на 6-е сутки был отмечен лишь в 6 пробирках из 10 (60%), как и на модифицированной среде при 50%-ной замене яичной массы на пантолизат (3-я опытная среда), в то время как на 1- и 2-й опытных средах (при 15- и 25%-ной замене) первичный рост на 6 сутки наблюдался в 8 пробирках из 10 (80%). В дальнейшем во всех 40 пробирках происходил интенсивный рост колоний, однако сроки накопления бактериальной массы в 1- и 2-й опытных группах были значительно меньше.

Высокая результативность опытных сред наблюдалась и при изоляции М. bovis из биоматериала от морской свинки (органы с характерными изменениями). Интенсивный рост культур был обнаружен на 5 (21-16) суток раньше на 3 опытной среде при наличии 95 точечных колоний и на 6 суток раньше на 1 и 2 опытных средах при наличии 140 и 136 точечных колоний, в отличие от прототипа (среда Финн-2), где на 26-е сутки насчитывалось всего 87 колоний.

В другом случае среда Левенштейна-Йенсена (контроль) характеризовалась следующими данными: первичный рост наблюдался на 20-е сутки; интенсивность роста колоний с диаметром 2 мм и выше - 1,1-2 мм - 1, до 1 мм - 2,3; размер колоний в % с диаметром 2 мм и выше 5, 1-2 мм - 1,2, до 1 мм - 93,8; рост культур составит 42 пробирки - 70%. На среде с экстрактом хвостов марала: первичный рост наблюдался на 5-е сутки; интенсивность роста колоний с диаметром 2 мм и выше — 1, 1-2 мм - 3,18, до 1 мм - 32,4; размер колоний в % диаметром 2 мм и выше - 0,6, 1-2 мм - 5,34, до 1 мм - 94,1; рост культур -57 пробирок - 95%.

Таким образом, замена яичной массы среды Финн-2 на пантолизат существенно повлияла на улучшение ростовых качеств при выращивании М. bovis. В свою очередь опытные среды с 15-25%-ной заменой яичной массы на пантолизат заметно стимулируют рост микобактерий, повышая информативность питательной среды. Использование 50%-ной замены яичной массы в питательной среде считается нецелесообразно т.к. показатели роста на опытной среде были хотя и несколько выше, но очень близки к показателям среды Финн-2. В свою очередь показатели первичного роста питательной среды с экстрактом из хвостов марала превосходит среду Левенштейна-Иенсена в 4 раза, поскольку рост колоний микобактерий туберкулеза бычьего вида в субкультуре на этой среде обнаружен уже на 5-й день, в то время как в контроле — на 20-е сутки. Исполь-

зование представленных сред для культивирования микобактерий при бактериологической диагностике туберкулеза позволяет сократить на 25% сроки изоляции микобактерий туберкулеза и сэкономить сырье на 15-50%.

2.2.6 Результаты исследований гельминтов на носительство микобактерий

При определении роли гельминтов в персистировании микобактерий туберкулеза у маралов отобрали 6 проб биологического материала для исследований: 2 легких, пораженных туберкулезом+дикгиокаулезом, 2 печени — туберку-лезом+дикроцелиозом, 2 легких - туберкулезом+эхинококкозом. Феномен пер-систирования микрофлоры в гельминтах изучали с помощью исследования поверхности гельминтов и их гомогенизата.

Из 18-ти проб посеянного биоматериала во всех случаях бьши выделены культуры М. bovis.

В пробах из пораженных легких маралов первичный рост культур наблюдали на 43-61-й дни в виде единичных, отдельных колоний, размером 1-2 мм, с ровными краями, гладкой, влажной поверхностью, S-формы, выпуклым рельефом, слизистой консистенцией, кремового цвета.

В посевах из смывов и гомогегизата с диктиокаул первичный рост культур регистрировали на 48-53-й дни - отдельные колонии, среднего размера диаметр 1-2 мм, поверхность гладкая, влажная, рельеф выпуклый, кремового цвета.

При посеве проб пораженной печени первичный рост культур наблюдали на 47-, 58-й дни в виде отдельных, одиночных колоний, размером 2-3 мм, с гладкой, влажной поверхностью, S-формы, выпуклым рельефом, слизистой консистенцией кремового цвета.

В пробах из смывов, гомогенизата дикроцелий и эхинококков первичный рост фиксировали на 44-81-й дни в виде отдельных, одиночных колоний, размером 1-2 мм, с гладкой, влажной поверхностью, S-формы, выпуклым рельефом, слизистой консистенцией, кремового цвета.

Из выросших колоний сделали мазки и окрасили по Циль-Нильсеку с последующей микроскопией. При этом в поле зрения микроскопа наблюдали бактерии палочковидной формы, расположенные скоплениями и одиночно, палочки короткие, толстые, прямые, концы ровные, зернистость не выражена, красного цвета.

Все зараженные морские свинки пали после проведения биопробы. Это свидетельствует о том, что на поверхности и внутри гельминтов присутствуют микобактерии. Так, у 4 морских свинок, зараженных суспензией из смывов и гомогенизата диктиокаул, павших на 31-41-й дни, при вскрытии отмечали на месте введения язву, увеличенные регионарные лимфатические узлы - размер 1,5-1,8 см, в печени точечные вкрапления белого цвета.

Оставшиеся 8 лабораторных животных, зараженных суспензией из смывов, гомогенизата дикроцелий и эхинококков, пали на 29-44-й дни с характерными при туберкулезе изменениями.

При посеве на плотные питательные среды Финн-2 и Левенштейна-Йенсена биоматериала из пораженных органов от морских свинок: первичный рост наблюдали на 55-72-й дни - одиночные колонии, размером 1-2 мм, поверхность гладкая, влажная, Б-формы, колонии выпуклые, консистенция слизистая, цвет кремовый. Из культур сделали мазки и окрасили по Циль-Нильсену с последующей микроскопией. При этом наблюдали бактерии палочковидной и в меньшей степени кокковой формы, расположенные скоплениями и одиночно, палочки длинные, тонкие, прямые, концы ровные, зернистость не выражена, красного цвета.

По материалам проведенных бактериологических исследований выяснили, что гельминты и их личинки локализуются в пораженных туберкулезом внутренних органах маралов, содержат как на поверхности, так и внутри микобак-терии, что подтверждает их инокуляторное действие.

2.2.7 Распространение паразитозов у маралов в Горном Алтае, апробирование новых средств терапии и профилактики

По результатам полных и неполных гельминтологических вскрытий маралов из маралоферм Горного Алтая отмечали как моноинвазию, так и ассоциативную инвазию двумя-тремя видами паразитов в организме одного животного.

Самки маралов в большей степени поражены дикроцелиями и личинками подкожного овода. Также встречались смешенные инвазии, представленные: дикроцелиями, личинками подкожного овода и сетарий; личинками подкожного овода и сетарий; дикроцелий и эхинококков; дикроцелий и сетарий; дикро-целий, личинками подкожного овода и эхинококков; дикроцелий, личинками подкожного овода и цистицерков; дикроцелий и ашвортий.

У самцов маралов при паразитологическом вскрытии наблюдали шесть видов моноинвазий (дикроцелиоз, гиподерматоз, диктиокаулез, эхинококкоз, ашвортиоз, цистицеркоз) из которых дикроцелиоз и гиподерматоз встречались у животных всех исследуемых хозяйств. В свою очередь зафиксировали восемь вариантов ассоциативной инвазии, где дикроцелиями и личинками подкожного овода поражено большее количество маралов. В остальных семи вариантах ассоциаций наблюдали единичные случаи инвазирования: дикроцелии и сетарии; диктиокаулы и сетарии; диктиокаулы и дикроцелии; дикроцелии и эхинококки; дикроцелии, сетарии и диктиокаулы; дикроцелии, личинки подкожного овода и сетарии; дикроцелии, личинки подкожного овода и эхинококки.

По данным копрологических исследований 1328 проб фекалий диагностировали следующие инвазии: элафостронгилез, эймериоз, желудочно-кишечные стронгилятозы, трихоцефалез, мониезиоз. Результаты отражены в таблице 2.

Для профилактики и терапии инвазионных болезней маралов при смешанных инвазиях применяли клозантин 20%, норомектин и альвет, при этом необходимо было определить эффективность данных препаратов, как в опытных, так и в производственных условиях при естественной смешанной инвазии маралов.

Таблица 2 - Результаты копрологических исследований маралов в Горном Алтае

Название хозяйства Мара лы 9/cJ Экстенсивные и интенсивные показатели инвазии (%, экз.)

Элафостронтилез ЖКС Трихоце-фалез Эймериоз Мониезиоз

ЭИ ИИ ЭИ ИИ ЭИ ИИ ЭИ ИИ ЭИ ИИ

пек «Барагаш» ? 34,3 1,4±0,5 34,3 5,7±4,2 34,3 1,4±0,5 - - - -

с? 16,6 1,0±1,1 33,3 1,0±0,9 - - - - - -

СПК «Яконур» ? 28,6 65,7±53,8 28,6 0,3±0 х 28,6 2,4±2,4 - - - -

с? 26,7 9,5±8,3 6,7 0,1±0,1 6,7 0,5±0,5 - - - -

ЗАО «Дъектиек» ? 53,8 65,2±26,8 27,3 1,2±0^ - - 0,8 0,01±0,01 - -

с? 5,3 85,6±80,8 31,6 2,5±U 10,5 4,4±4Д - - - -

ОПХ «Новота-лицкое» ? 50,0 30,1±15,6 50,0 1,1 ±0,7 - 12,7 1,7±1,2 5,5 8,3±3,6

с? 85,7 11,1±7,0 37,5 0,6±0,4 24,0 3,8±1,3 - - - -

ОАО «Карым» ? 50,0 159,9*120,3 33,3 0,1±0,1 - - - - - -

в 22,2 7,2±5,7 33,3 0,8±0,6 - - - - - -

ООО «БСХП» ? 22,2 0,8±0,8 - - - - - - - -

<? 33,3 5,8±4,2 33,3 0,3±0,2

СПК «Племхоз Теньгин-ский» ? 54,5 40,0±31,9 9,0 0,2i0.2 - - - - - -

в 20,0 O^iO.l

КХ «Надежда» ? 44,4 46Д±43,6 20,0 0,1±0,1 - - - - - -

с? 77,7 36,9±11,2 10,0 0,7±0,4 20,0 5,0±3,7 - - - -

ООО «Нива» ¥ 30,0 10,4±7,7 10,0 0,5±0,5 - - - - - -

в 20,0 8,2±3,4 10,0 0,3±0,3 - - - - - -

АЭХСО РАН ч 70,0 242,7±84,6 - - - - - - - -

с? 60,0 144,5±85,2 - - - - - - - -

СПК «Абайский» ? 66,6 27,7±12,4 11,0 0,1±0,1 - - - - -

с? 55,5 12,7±6,17 22,2 0,4±0,31 - - - - - -

СПК «Ниж не- Уймонский» $ 10,0 7,8±8,2 - - - - - - -

в 20,0 1,2±1,1 10,0 0,1±0,1 10,0 0,1±0,1

ЗАО «Верх-ний-Уймон» 9 50,0 5,0±1,3 10,0 0,1±0,1 - - - - - -

с? 40,0 9,4±9,1 10,0 0,1±0,1 - - - - - -

ЗАО «Курдюм» ? 90,0 36,7±12,8 20,0 0,1±0,1 10,0 0,1 ±0,1 20,0 0,2±0,1 - -

л 55,5 16,4±13,4 55,5 0,3±0,18 - - - - - -

СПК «Талица» ? 50,0 24,0±10,9 10,0 0,1±0,1 10,0 0д±0,1 - - - -

в 33,3 4,6±2,9 8.3 0,1±0,1 8,3 0,1±0,1 - - - -

«- » отсутствие яиц и личинок в пробе.

Результаты эффективности антгельминтного препарата клозантин 20% отражены в таблице 3.

Экстенсэффективность при дикроцеллиозе у рогачей составила 87,5%, а интенсэффективность - 70,7%; при кишечных стронгилятозах у рогачей экстенсэффективность - 75%, интенсэффективность - 84,2%, у маралят - 50и 44% соответственно, при элафостронгилезе экстенсэффективность у рогачей составила 67% и интенсэффективность - 71,1%, у маралят - 30 и 53,7% соответственно. ЭЭ и ИЭ при гиподерматозе у рогачей - 100%.

Таблица 3 — Результаты копрологических и гельминтологических исследований маралов до и после обработок препаратом клозантин 20%

Вид гельминтоза и количество проб Экстенсивные (%) / интенсивные (экз.) показатели инвазии по половозрастным группам

рогачи маралята

до обработок контрольная группа после обработок опьпгная гр. до обработок контрольная группа после обработок опытная гр.

Кишечные стронгилятозы (п=10) 20/ 1,5±1,1 40/ 7,6±4,5 10/ 1,2±1,2* 10/1,3±1,3 20/ 2,5±1,8 10/ 1,4±1,4*

Элафостронгилез (п=10) 40/ 33,б±14,8 60/ 97,0±39,4 20/ 28,7± 21,4* 100/ 1411,3±375,5 100/1615,2± 362,8 70/ 748,4± 204,84*

Дикроцелиоз (п=8) Вскрытие не проводили 100/ 256,0±52,4 12,5/ 75,0±80,2* Вскрытие не проводили

Гиподерматоз (п=8) 50/ 9,5±4,2 -

*р< 0,05, **р< 0,01, ***р< 0,001 - разница статистически достоверна, в сравнении с контрольной группой.

Испытание норомектина проводили на естественно инвазированных маралах - перворожках, в марте 2012 года. Данные лечебно-профилактической эффективности препарата норомектин отражены в таблице 4.

Таблица 4 — Результаты копрологических и гельминтологических исследований сайков до и после обработок препаратом норомектин__

Время отбора проб и группа животных Кишечные стронгилятозы Элафостронгилез Дикроцелиоз

ЭИ% ИИэкз ЭИ% ИИ экз ЭИ% ИИ экз

До обработок 20 1,0±0,7 100 136,2±39,9 - -

Контрольная гр. 30 2,0±1,1 100 356,0±60,9 - -

После обработок опытная гр. 10 0,2±0,2* 10 0,4±0,4*** 100 156,0

*р< 0,05, **р< 0,01,*** р< 0,001 - разница статистически достоверна, в сравнении с контрольной группой.

Экстенсэффективность при кишечных стронгилятозах составила 66% при интенсзффективности 90%, при элафостронгилезе 90% и 99,9% соответственно. На дикроцелий препарат не оказал антгельминтного воздействия.

Противогельминтный препарат широкого спектра действия альвет применяли в производственных условиях при естественной инвазии маралов в марте 2012 года на 1500 рогачах 800 маралухах. Результаты копрологических исследований отражены в таблице 5.

Таблица 5 - Результаты копрологических исследований маралов до и после обработки препаратом альвет__

Экстенсивные (%) / интенсивные (экз.) показатели инвазии ___по половозрастным группам_

Вид гельминтоза и количество проб рогачи маралухи

до обработок контрольная группа после обработок опытная гр. до обработок контрольная группа после обработок опытная гр.

Кишечные 70/ 80/ 30/ 40/ 60/ 20/

стронг-ы (п=10) 3,4±1,0 4,0±1,3 1,0±0,6* 2,2±1,2 3,4±1,3 1,0±0,8*

Элафостронги-лез (п=10) 80/ 97,6±34,2 90/ 207,3±96,3 40/ 65,4±31,8 # 70/ 69,5±25,5 80/ 212,3±75,6 30/ 56,0±39,8 *

*р< 0,05, **р< 0,01, ***р< 0,001 - разница статистически достоверна, в сравнении с контрольной группой.

Экстенсэффективность по отношению к кишечным стронгилятозам у рогачей составила 62,5%, интенсэффективность - 75%, у маралух - 67% и 70,6% соответственно. Экстенсэффективность при элафостронгилезе у рогачей — 56%, ИЭ - 68,5%, у маралух ЭЭ - 62,5%, ИЭ - 73,6%.

3 Выводы

1. Основными путями выделения микобактерий из организма марала в окружающую среду являются: слюна (5,26%), трахеальная слизь (30,77%), химус (32,14%), фекалии (18,2%), моча (25%), молоко (14,29%). Факторами передачи возбудителя туберкулеза на мараловодческих фермах служат контаминирован-ные микобактериями туберкулеза кормушки (6,25%), почва (29,17%) и корма (10,5%).

2. Основные пути заражения маралов: алиментарный 56,8% (наблюдали изменения, характерные для туберкулеза в печени, брыжеечных и портальных лимфатических узлах); аэрогенный 35,1% (поражены легкие и средостенные лимфатические узлы). У 8,1% маралов регистрировали генерализованную форму туберкулеза с поражением большинства органов и лимфатических узлов.

3. В почве маралоферм М. bovis остаются жизнеспособными в течение: 15 месяцев - на поверхности; 14 месяцев - глубине 5 см; 12 месяцев - на уровне 10 и 15 см, вирулентные свойства утрачивают спустя 9 месяцев.

4. При обработке почвы вироцидом 0,5%, 2,5%; бэби дез ультра 10%; бро-мосептом-50 1%, 5%-ными растворами с экспозицией 1, 2, 3 часа с увеличенным объемом до 17,7 л/м2, а также с регламентированной нормой инструкцией дезинфицирующих средств 0,2-0,5 л/м2, М. bovis сохраняют свою жизнеспособность на поверхности и глубине (5 см, 10 см, 15 см, 20 см).

Раствор бэби дез ультра 50% с экспозицией 1, 2, 3 часа оказал бактерицидное действие на М. bovis, находящихся на поверхности почвы.

5. Использование усовершенствованных плотных питательных сред для культивирования микобактерий при бактериологической диагностике туберку-

леза с заменой на 15,25 и 50% пантолизатом из пантового шрота яичной массы в среде Финн-2 и среда Левенштейна-Йенсена на основе экстракта из хвостов марала позволяет сократить на 25% сроки изоляции микобакгерий туберкулеза и сэкономить традиционное сырье на 15-50%.

6. Дикроцелии, диктиокаулы и эхинококки, локализуясь в пораженных туберкулезом органах маралов, содержат как на поверхности, так и внутри мико-бактерии, что подтверждает их персистенцию.

7. У маралов Горного Алтая зарегистрированы: дикроцелиоз, гиподерматоз, сетариоз, диктиокаулез, эхинококкоз, цистицеркоз, элафостронгилез, эймериоз, желудочно-кишечные стронгилятозы, трихоцефалез, мониезиоз. Наблюдали как моноинвазию, представленную шестью видами паразитов, так и ассоциативную, включающую в себя 11 разновидностей сочетания вышеперечисленных заболеваний и выраженную двумя (4 ассоциации), тремя (7 ассоциаций) видами паразитов у одного животного. Экстенсэффективносгь клозантина 20% составила от 30 до 100% при интенсэффективности от 44 до 100%; норомектина -соответственно, от 66 до 90% и от 90 до 99,9%; альвета - от 56 до 67% и от 68,5 до 75%. Препарат норомектин не эффективен при дикроцеллиозе. Разница в эффективности обусловлена биологическими циклами гельминтозов и половозрастными группами маралов.

4 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. При туберкулезе дезинфекцию почвы рекомендуем проводить раствором дезинфектанта бэби дез ультра с 50%-ной концентрацией и экспозицией 1, 2, 3 часа на поверхности почвы согласно наставлению «Сборник ветеринарно-санитарных правил по производству, заготовке и консервированию продукции пантового оленеводства», утвержденному ученым советом ГНУ ВНИИПО Рос-сельхозакадемии (протокол № 15 от 18.03.2011), к внедрению в мараловодческие хозяйства НТС управления ветеринарии Администрации Алтайского края (протокол № 15 от 08.04.2011) и НТС Министерства сельского хозяйства Республики Алтай (протокол №3 от 21.04.2011).

2. В целях более ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза рекомендуем применять питательные среды Фин-2 с заменой яичной массы 15 и 25% на пантолизат и с экстрактом из хвостов марала по прототипу Левенштейна-Йенсена.

3. Для проведения осенней и весенней профилактической дегельминтизации маралов при ассоциативной инвазии рекомендуем применение клозантина

20% - в дозе 0,5 мл на 20 кг массы животного; норомектин — в дозе 1 мл на 50 кг массы животного; альвет — в дозе 5,0 г на 100 кг массы животного, в соответствии с методическими рекомендациями «Диагностика и меры борьбы с гельминтозами маралов», утвержденными ученым советом ГНУ ВНИИПО Рос-сельхозакадемии (протокол № 11 от 25 октября 2010 г.), НТС управления ветеринарии администрации Алтайского края (протокол № 14 от 12 ноября 2010 г.).

5 СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Боранбаев, A.B. Изучение путей выделения и факторов передачи возбудителя туберкулеза у маралов / В.Г. Луницын, A.B. Боранбаев // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. - 2010. - № 7. -С. 50-54.

2. Боранбаев, A.B. Мониторинг паразитарных болезней маралов в Алтайском крае и Республике Алтай / A.B. Боранбаев, И.А. Кравченко // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. — 2011. — №12. -С. 69-72.

3. Боранбаев, A.B. Эффективность дезинфицирующих средств для санации почв зимников маралоферм при туберкулезе / A.B. Боранбаев, В.Г. Луницын, Ю.Н. Романцева // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. - 2012. - № 10. - С. 100-103.

4. Боранбаев, A.B. Усовершенствование питательных сред для бактериологической диагностики туберкулеза / В.Г. Луницын, A.B. Боранбаев // Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири: матер. Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 70-летию со дня основания института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (пос. Краснообск, 28-29 октября). - Новосибирск, 2010. - С. 91-98.

5. Боранбаев, A.B. Эпизоотология нематодозов маралов Чарышского района Алтайского края / A.B. Боранбаев, И.А. Кравченко // Аграрная наука -сельскому хозяйству: матер.V Междунар. науч.-практ. конф. (17-18 марта). -Барнаул, 2010. - Кн. 3. - С. 308-310.

6. Боранбаев, A.B. Результаты изучения основных путей выделения, факторов передачи и путей заражения при туберкулезе маралов / A.B. Боранбаев, В.Г. Луницын, Ю.Н. Романцева // Актуальные проблемы сельского хозяйства горных территорий: матер. III Междунар. науч.-практ. конф. (1-4 июня). — Горно-Алтайск, 2011.-С. 134-141.

7. Боранбаев, A.B. Характеристика культур микобактерий изолированных от маралов Горного Алтая / В.Г. Луницын, Ю.Н. Романцева, A.B. Боранбаев // Актуальные проблемы сельского хозяйства горных территорий: матер. III Междунар. научно-практ. конф. (1-4 июня). - Горно-Алтайск, 2011. - С. 266-269.

8. Боранбаев, A.B. Типирование атипичных микобактерий у маралов /

B.Г. Луницын, A.B. Боранбаев, Ю.Н. Романцева // Проблемы пантового оленеводства и пути их решения: сб. науч. тр. ВНИИПО. - Барнаул, 2011. - Т. 6. —

C. 246-251.

9. Боранбаев, A.B. Апробирование новых средств терапии и профилактики гельминтозных заболеваний маралов / A.B. Боранбаев, И.А. Кравченко // Юбилейная научно-практическая конференция: матер, науч.-практ. конф., посвящ. 50-летию факультета ветеринарной медицины АГАУ (11-13 октября). - Барнаул, 2012.-С. 11-15.

10. Боранбаев, A.B. Роль гельминтов в персистировании микобактерий туберкулеза у маралов / A.B. Боранбаев // Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых: матер. Междунар. науч.-практ. конф. молодых ученых, посвященной 10-летию ее проведения (пос. Краснообск, 20 апреля). - Новосибирск, 2012. - С. 98-102.

Подписано в печать 17.05.2013 г. Формат 60x84/16. Бумага для множительных аппаратов. Печать ризографная. Гарнитура «Times New Roman». Усл.-печ. л. 1. Тираж 100 экз. Заказ № £.

РИОАГАУ 656049, г. Барнаул, пр. Красноармейский, 98 тел. 62-84-26

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Боранбаев, Андрей Вячеславович, Барнаул

ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ

ПАНТОВОГО ОЛЕНЕВОДСТВА РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК (ГНУ ВНИИПО РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ)

П4201

На правах рукописи

Боранбаев Андрей Вячеславович

ОСОБЕННОСТИ ЭПИЗООТОЛОГИИ И ПРОФИЛАКТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА И ПАРАЗИТОЗОВ МАРАЛОВ В ГОРНОМ АЛТАЕ

06.02.02 - «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология»

ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель -доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Луницын

Василий Герасимович

Барнаул -2013

Содержание

Стр

Введение 3

1 Обзор литературы 9

1.1 Особенности эпизоотологии туберкулеза пантовых оленей, характеристика микобактерий, усовершенствование лабораторной диагностики 9

1.2 Дезинфекционные мероприятия при туберкулезе 24

1.3 Паразитозы маралов их распространение, средства терапии и профилактики 27

2 Собственные исследования 37

2.1 Материалы и методы исследования 37

2.2 Результаты исследований 50

2.2.1 Пути выделения и факторы передачи микобактерий при туберкулезе маралов 50

2.2.2 Пути заражения маралов возбудителем туберкулеза 63

2.2.3 Сроки выживаемости М. bovis изолированных от маралов в

почве маралоферм 68

2.2.4 Эффективность дезинфицирующих средств бромосепт-50, бэби дез-ультра и вироцид для санации почв зимников маралоферм

при туберкулезе 73

2.2.5 Совершенствование питательных сред для культивирования микобактерий 77

2.2.6 Результаты исследования гельминтов на носительство микобактерий 81

2.2.7 Распространение паразитозов у маралов в Горном Алтае, апробирование новых средств терапии и профилактики 84

3 Обсуждение результатов исследований 100

4 Выводы 112

5 Практические предложения 114

6 Библиографический список 115 Приложение 133

Введение

Актуальность темы. Пантовое оленеводство сравнительно молодая отрасль, зародившаяся в России во второй половине XIX века. Отрасль в Алтайском крае и Республике Алтай (далее Горный Алтай) стремительно развивается и занимает одно из лидирующих мест в сельском хозяйстве региона. В Горном Алтае на 140 маралофермах содержится свыше 80 тысяч маралов. В регионе ежегодно производят более 50 тонн консервированных пантов. Продуктивность маралов зависит не только от условий содержания, кормления животных, их наследственности, в равной мере от состояния здоровья (Луницын В.Г., 2011).

Для маралов характерен дикий нрав, стадность, сезонные биологические ритмы. Постоянный и интенсивный процесс антропогенного воздействия на пантовых оленей с целью их доместикации повлек за собой и негативные последствия. Содержание маралов в неволе, высокая концентрация на пастбищах, отсутствие естественного отбора, совместное содержание с другими видами сельскохозяйственных животных на раннем этапе одомашнивания в частных маральниках - все это способствовало распространению среди оленей болезней, встречающихся у других видов сельскохозяйственных животных.

В настоящее время одной из самых серьезных бактериальных болезней, поражающих пантовых оленей является туберкулез, он наносит не только значительный ущерб отрасли, но и создает большую угрозу в сохранении этой популяции животных. В литературе описано множество исследований по туберкулезу и казалось бы, что все уже известно по данной инфекции, но существуют особенности характерные для каждой местности (климат, почва, атмосферное давление, высота, проведение зооветеринарных мероприятий и др.), которые непосредственно влияют на эпизоотический процесс. В свою очередь для проведения профилактических мероприятий нам необходимо знать некоторые особенности протекания инфекции на маралофермах

Горного Алтая (пути выделения, факторы передачи, пути заражения маралов при туберкулезе, сроки выживания М. bovis в почве).

Маралы в зимний период содержатся на ограниченных огороженных сетчатой изгородью выгулах (зимниках), а не в капитальных дворах, как например крупный рогатый скот. Одним из важных факторов передачи туберкулеза в данном случае является контаминированная микобактериями почва зимников. Пребывание микобактерий в почве не проходит для них бесследно - становятся более устойчивыми, однако на определенном отрезке времени они создают угрозу заражения здоровых животных (Колычев Н.М., 1992).

В этой связи большая роль отводится для дезинфекции - прерывания передачи возбудителя инфекции в эпизоотической цепи. На маралофермах нет возможности и целесообразности в проведении дезинфекции парков из-за большой их площади. Хотя зимники, предстанки, разбивочные коридоры, где скапливаются большое количество маралов, нуждаются в проведении систематических, качественных дезинфекций, для того, чтобы прервать механизм передачи возбудителя туберкулеза. В свою очередь микобактерии бычьего вида становятся из года в год более устойчивыми к существующим дезинфицирующим средствам (Жанузаков Н.Ж., и др., 1983).

Использование яичных питательных сред для выращивания первичных культур микобактерий туберкулеза характеризуется большим расходом сырья, являющееся одним из основных продуктов питания человека. Кроме этого в связи с эволюционной изменчивостью возбудителя, бесконтрольным применением лекарственных средств и биопрепаратов снизилась информативность бактериологических исследований при туберкулезе (Луницын В.Г., Донченко A.C., 1994). Тем самым необходимо усовершенствовать твердые питательные среды для более результативного культивирования микобактерий.

Взаимосвязь гельминтов и микроорганизмов привлекла внимание исследователей в конце 70-х годов 19 столетия. Так, на необходимость

детального изучения взаимоотношений гельминтов и бактерий в организме животных и человека еще в начале 20 века указывал К.И. Скрябин (1923).

От взаимоотношений гельминтов, бактерий и вирусов в организме животных зависит глубина патологических процессов и тяжесть клинического течения болезни. Отмечается роль инвазионного процесса в запуске механизмов инфекции. В литературе нет данных об взаимоотношении микобактерий и гельминтов в организме маралов, тем самым вопрос о выяснении роли гельминтов в персистировании микобактерий туберкулеза у маралов является открытым, что и послужило основанием для наших исследований.

Из выше представленного видно, что одомашнивание маралов ведет к распространению среди них различных заболеваний свойственных сельскохозяйственным животным, одни из которых - гельминтозы. По данным Э.И. Прядко (1976) у оленевых зарегистрировано 206 видов гельминтов, у маралов паразитирует 61. Любимов М.П., (1976) указывает на наличие у них 41 паразита. Среди маралов в европейской части России выявлено 39 видов, в Казахстане - 37, в Сибири - 35, на Дальнем Востоке -14 (Луницын В.Г., 1998). К настоящему времени уточнен видовой состав гельминтофауны маралов в хозяйствах Алтайского края и Республики Алтай (Шуклина Е.В., 2007, Петрусева Н.С., Бессонова Н.М., Марченко В.А., Ефремова Е.А. 2006, Бахтушкина А.И. 2010). По материалам изучения гельминтофауны (Луницын В.Г., 2000) среди маралов обнаружены: гиподерматоз, бикаулез, элафостронгилез, сетариоз, диктиокаулез, стронгилятозы пищеварительного тракта. Вышеуказанные болезни чаще проявляются в виде смешанной инвазии. Ассоциативные гельминтозы протекают в тяжелой форме, в результате наблюдается падеж (7-14% поголовья) и вынужденный убой (3-7% животных), снижается пантовая продуктивность на 9-12% и выход приплода на 30-40% (Тетерин В.В., 1991). Необходимо уточнить видовой состав гельминтов у маралов Горного Алтая,

так как он мог быть изменен из-за использования широкого ассортимента противопаразитарных препаратов в мараловодческих хозяйствах.

Для профилактики и терапии гельминтозов у животных, используется большой ассортимент высокоэффективных средств отечественного и импортного производства. В настоящее время в ветеринарной практике пантового оленеводства применяются препараты из группы макроциклических лактонов. Они обладают широким спектром действия и позволяют при однократном введении освободить организм животного от большинства гельминтов. По мнению М.Ю. Тишкова (2007), Е.В. Шуклиной (2007) использование одних и тех же препаратов, с одинаковым действующим веществом, в течение длительного времени снижает их эффективность, соответственно необходимо периодически производить замену ДВ и препарата соответственно, что мы и сделали применив ранее не испытанные в мараловодстве препараты.

Цель и задачи исследования. Цель исследования - изучить особенности эпизоотологии туберкулеза и паразитозов у маралов в Горном Алтае, с апробацией новых средств терапии и профилактики. Для решения данной цели были поставлены следующие задачи:

> выяснить пути выделения, факторы передачи и пути заражения маралов при туберкулезе, определить сроки выживания М. bovis в почве маралоферм и апробировать новые дезинфицирующие средства;

> усовершенствовать твердые питательные среды, для культивирования микобактерий с использованием продуктов переработки сырья мараловодства;

> выяснить роль гельминтов в персистировании микобактерий туберкулеза у маралов;

> определить видовой состав, степень распространения паразитозов в мараловодческих хозяйствах и изучить эффективность антгельминтиков: клозантин-20%, норомектин и альвет при смешанной ассоциативной инвазии маралов.

Научная новизна. Определены пути выделения, факторы передачи и пути заражения маралов возбудителем туберкулеза; впервые выяснена роль гельминтов в персистировании микобактерий туберкулеза у маралов; усовершенствованы твердые питательные среды для культивирования М. bovis с введением в их основу продуктов переработки продукции мараловодства; определена эффективность дезинфицирующих средств (Вироцид, Бэби Дез Ультра, Бромосепт - 50) по отношению к М. bovis в почве маралоферм; изучена противопаразитарная эффективность 3-х антгельминтиков в производственных условиях, один из которых ранее не использовался в мараловодстве.

Практическая значимость работы. По материалам результатов исследований разработаны и внедрены методические рекомендации «Диагностика и меры борьбы с гельминтозами маралов» утвержденные ученым советом ГНУ ВНИИПО Россельхозакадемии (протокол № 11 от 25 октября 2010 года) и НТС Управления ветеринарии администрации Алтайского края (протокол № 14 от 12 ноября 2010 года). Наставление «Сборник ветеринарно-санитарных правил по производству, заготовке и консервированию продукции пантового оленеводства» утвержденные и рекомендованые к изданию ученым советом ГНУ ВНИИПО Россельхозакадемии (протокол № 15 от 18.03.2011), к внедрению в мараловодческие хозяйства НТС: управления ветеринарии Администрации Алтайского края (протокол № 15 от 08.04.2011) и НТС Министерства сельского хозяйства Республики Алтай (протокол №3 от 21.04.2011).

Апробация работы. Результаты исследований доложены, обсуждены и одобрены на Международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию со дня основания института эксперементальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (п. Краснообск, 28-29 октября 2010 г.), на V Международной научно-практической конференции «Аграрная наука - сельскому хозяйству» (Барнаул, 2010), III Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы сельского хозяйства

горных территорий» (Горно-Алтайск, 1-4 июня 2011), Научно-практической конференции посвященной 50-летию факультета ветеринарной медицины АГАУ (Барнаул, 11-13 октября 2012 г.), на ученых советах ГНУ ВНИИПО Россельхозакадемии (2010-2012), НТС управления ветеринарии Администрации Алтайского края и Министерства сельского хозяйства Республики Алтай (2010, 2011).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации отражены в 10 научных работах, в том числе - три в журналах рекомендованных ВАК Минобразования РФ «Вестник Алтайского государственного аграрного университета», а также в трудах международных конференций. Научные исследования, изложенные в диссертации, являются составной частью научных программ ГНУ ВНИИПО Россельхозакадемии и приведены в соответствии с планом НИР (тема 08.01.08).

Основные положения выносимые на защиту:

- пути выделения и факторы передачи при туберкулезе маралов;

- пути заражения маралов возбудителем туберкулеза;

- сроки выживания М. bovis в почве маралоферм;

- эффективность новых дезинфицирующих средств в отношении М. bovis, почв зимников;

усовершенствованные твердые питательные среды для культивирования М. bovis;

- особенности распространения и проявления паразитозов маралов;

- эффективность антгельминтиков при ассоциативной инвазии маралов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 133

страницах компьютерного текста и состоит из: введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложения. Диссертационная работа иллюстрирована 20 рисунками и содержит 14 таблиц. Библиографический список включает 184 источников, в том числе 32 иностранных авторов.

1. Обзор литературы 1.1. Особенности эпизоотологии туберкулеза пантовых оленей, характеристика микобактерий, усовершенствование лабораторной

диагностики

Инфекционные болезни занимают особое место в патологии животных, представляют большую опасность по причине массовости поражения животных и тенденции к широкому территориальному распространению, нанося при этом значительный ущерб. Из трехсот нозологических единиц инфекционных болезней животных пантовые олени восприимчивы к ящуру, актиномикозу, лептоспирозу, трихофитии, сибирской язве, бешенству, эмфизематозному карбункулу, пастереллезу, туберкулезу, бруцеллезу, некробактериозу и инфекционной анаэробной энтеротоксимии (Луницын В.Г., 2004).

Туберкулез (Tuberculosis) - хронически протекающая инфекционная болезнь пантовых оленей, характеризующаяся образованием в различных органах и лимфатических узлах специфических узелков - туберкулов, склонных больше к гнойному расплавлению, нежели к творожистому распаду. Инфекция от животных может передаться человеку (Луницын, 1998).

Туберкулез пантовых оленей и его столь значительное распространение можно рассматривать в связи с их одомашниванием. Так первоначальным источником возбудителя инфекции ссылаясь на историю возникновения отрасли и характера получения продукции (пантов) является больной туберкулезом крупный рогатый скот. На первоначальном этапе доместикации пантовые олени содержались на скотных дворах вместе с другими животными без учета площади выпаса. Панты у рогачей срезали не в панторезном станке (его не было), а на земле, перед этим их гоняли до тех пор, пока животное, запалившись, само ложилось. Эти факторы (наличие инфицирующего начала, снижение резистентности, воздействие стрессовых

факторов) способствовали восприимчивости пантовых оленей к возбудителю туберкулеза (Луницын В.Г. и др., 1991).

Основными причинами широкого распространения туберкулеза среди пантовых оленей являлось то, что в пантовом оленеводстве до 1985 года не выбраковывали старых и клинически больных туберкулезом рогачей, их не изолировали и до летального исхода содержали в общих стадах, что способствовало инфицированию окружающей среды. Такие животные являлись основным источником возбудителя туберкулеза, в дикой природе в этом случае действуют законы естественного отбора (слабые и больные животные уничтожались бы хищниками) (Луницын В.Г. и др., 1991).

Существование М. bovis инфекции у диких оленей было общепризнанным, хотя сообщения о туберкулезе встречаются довольно редко. Впервые туберкулез у оленей был зарегистрирован в 1892 году Синьялом (Цит. по Т. Uyadhyaya et. al., 1986).

Первое сообщение о туберкулезе маралов сделал Шаманский Г.И. (1931).

В 1941 году Циро сообщил, что ему удалось выделить туберкулезную культуру от четырех павших и убитых маралов Карагайского оленеводческого совхоза.

Гаврилова В.П., (1953), Акулова В.П., (1967, 1968) занимались изучением гистологических изменений в органах маралов, павших от туберкулеза, и обосновали патогенез болезни.

Более значительные исследования по диагностике туберкулеза маралов и патолого-анатомической картины болезни провели Б.А. Никаноров (1970, 1971) и А.И. Молев (1982).

Большой вклад в изучение туберкулеза маралов внесли ученые Казахстана под руководством профессора B.C. Федосеева (1982). Дюсембаев К.Б. (1973) занимался изучением серологических реакций и их применением для диагностики туберкулеза. Рубцова И.Н., Кириленко Н.Г., (1976),

Капустин JI. А., (1974) акцентировали свое внимание на вопросах эпизоотологии и мерах борьбы с болезнью.

Были изучены особенности эпизоотологии туберкулеза маралов, клинические и патолого-анатомические измен