Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Особенности аммиачной интоксикации рыб в интенсивной аквакультуре
ВАК РФ 03.00.10, Ихтиология

Автореферат диссертации по теме "Особенности аммиачной интоксикации рыб в интенсивной аквакультуре"

На правах рукописи

АБРОСИМОВА ЕКАТЕРИНА БОРИСОВНА

ОСОБЕННОСТИ АММИАЧНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ РЫБ В ИНТЕНСИВНОЙ АКВАКУЛЬТУРЕ

Специальность 03.00.10 - Ихтиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Астрахань, 2009

003476744

Работа выполнена на кафедре «Водные биоресурсы и аквакультура» филиала ГОУВПО «Московский государственный университет технологий и управления» в г. Ростове-на-Дону (РО ГОУВПО МГУТУ)

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Стрельников Виктор Владимирович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Пономарева Елена Николаевна

доктор биологических наук Металлов Геннадий Федорович

Ведущая организация: Краснодарский научно-исследовательский

институт рыбного хозяйства (КрасНИИРХ)

Защита состоится «¿7» г. в _часов_минут на заседа-

нии Диссертационного Совета Д.307.001.05 при Астраханском государственном техническом университете по адресу: 414025, РФ, Астраханская область, г. Астрахань, ул. Татищева, 16 Факс: 8 (8512) 54 91 03

С диссертацией можно познакомиться в библиотеке Астраханского государственного технического университета

Автореферат разослан «_»_200 г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета Д.307.001.05 к.б.н., доцент

Э.И. Мелякина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Особенностью современного интенсивного рыбоводства является высокая концентрация производства. Она обеспечивается высокой плотностью посадки, применением физиологически полноценных комбикормов и целенаправленным формированием водной среды. Однако нарушение нормальных процессов нитрификации в условиях повышенной температуры, ухудшения санитарно-гигиенических условий в рыбоводных емкостях из-за высоких плотностей посадок, снижения уровня растворимого в воде кислорода и вероятного изменения направленности обмена веществ у рыб способствует незаразному некрозу жабр, при котором гибнет до 80 % выращиваемых особей (Лопухина, 1969; Щелкунов, 1988). Доказано, что незаразный некроз жабр у рыб возникает в результате токсикоза организма аммиаком экзогенного и эндогенного происхождения (ЗсЬгескепЬасЬ, Зрагщеп-Ьег& 1978; Щелкунов, 1988).

Несмотря на известную природу причин возникновения незаразного некроза жабр, достаточно эффективных методов его лечения и профилактики еще не разработано. До сих пор остается нерешенной проблема, связанная с особенностями метаболизма рыб, которая усугубляется условиями при интенсивном выращивании, нестабильных климатических и гидрохимических условиях. Кроме того, на смену разработке методов лечения болезней приходит направление, предусматривающее сохранение здоровья объектов аквакульту-ры на протяжении всего периода выращивания путем разработки методов (или технологий), предупреждающих развитие заболеваний. В связи с этим необходимо изучение физиологических и биохимических изменений в организме рыб на тканевом и клеточном уровне при патологиях, что позволит разработать новые более эффективные подходы к выращиванию рыб.

Цель и задачи исследований. Основная цель настоящей работы заключалась в выявлении изменений физиолого-биохимического статуса и метаболизма рыб (на примере бестера) при аммиачной интоксикации и разработке рационального кормления, способствующего нивелированию неблагоприятных факторов внешней и внутренней среды.

Для достижения этой цели ставились следующие задачи:

- изучить влияние аммиачной интоксикации на темп роста, выживаемость, упитанность и направленность общего обмена веществ;

- выявить изменения липидного и жирнокислотного обмена при аммиачной интоксикации;

- определить влияние аммиачной интоксикации на активность перекис-ного окисления липидов;

- изучить влияние аммиачной интоксикации на активность оксидегидро-

геназ;

- изучить влияние аммиачной интоксикации на активность фосфатаз и липазы;

- изучить изменения состава крови при аммиачной интоксикации;

- изучить физиологическое действие кормовой липидной добавки при некрозе жабр аммиачной природы и установить оптимальное ее количество в рационе рыб.

Научная новизна. Впервые определено изменение баланса эссенциаль-ных жирных кислот соЗ и соб ряда при аммиачной интоксикации молоди бес-тера. Установлено, что при данном заболевании существенно снижается уровень соЗ при активном расходовании на поддержание гомеостаза эйкозапен-таеновой (20:5), докозапентаеновой (22:5) и докозагексаеновой (22:6) жирных кислот. Выявлено снижение активности витамина А с преобладанием суммы мононенасыщенных кислот 20:1 и 22:1 и уменьшением уровня полиненасыщенной кислоты 22:6. Показано, что при аммиачной интоксикации повышаются энерготраты организма и в обмен веществ включаются мембранные ли-пиды.

Впервые определено, что при аммиачной интоксикации нарушается динамическое равновесие процессов свободнорадикального окисления, снижается активность дегидрогеназ - лактатдегидрогеназы, малатдегидрогеназы и сукцинатдегидрогеназы, а также кислых и щелочных фосфатаз, липазы. Изменяется картина крови в сторону увеличения фагоцитарных клеток, а также в 2 раза уровня аммиака. Установлено, что для предотвращения аммиачной интоксикации и, как следствие, некроза жабр, целесообразно вводить в рацион рыб специальную кормовую липидную добавку в количестве 2 %, основным физиологическим действием которой является нормализация процессов метабо-

лизма рыб, в том числе уровня аммиака в крови, тем самым, устраняя причину заболевания.

Практическая значимость работы определяется возможностью повышения эффективности выращивания рыб за счет профилактики аммиачной интоксикации и поражения жабр, особенно в условиях высокой интенсификации выращивания.

Обогащение рациона рыб кормовой липидной добавкой способствует не только снижению потерь рыбоводной продукции в случае заболевания, но и их предупреждению при проведении профилактического кормления, а также хорошему физиологическому состоянию рыб. Результаты наших исследований подтверждены производственными испытаниями.

Апробация работы. Материалы диссертации представлялись, обсуждались и докладывались на Международной научной конференции «Состояние и перспективы развития фермерского рыбоводства аридной зоны» (г. Азов, 2006), ГУ Международной научно-практической конференции «Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития», (Астрахань, 2006), на Международной научной конференции «Наука, техника и высшее образование» (Аура, Мальта, 2007), II Международной научной конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины (Ростов-на-Дону, 2008), а также на заседаниях кафедр «Водные биоресурсы» и «Биоэкологи и ихтиологии» МГУТУ.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и приложения (акты производственных испытаний). Список цитируемой литературы включает 191 работу, из которых 38 на иностранных языках. Работа иллюстрирована 24 рисунками и 20 таблицами.

1. НЕЗАРАЗНЫЙ ЖАБЕРНЫЙ НЕКРОЗ КАК СЛЕДСТВИЕ АММИАЧНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ (аналитический обзор)

В данной главе освещена история изучения незаразного некроза жабр рыб аммиачной природы, клиника и причины заболевания. Обсуждены пути

образования и экскреции аммиака в организме рыб, традиционные методы профилактики и терапии данного заболевания. Обзор литературных данных источников показал, что, несмотря на установленные факторы, провоцирующие заболевание рыб некрозом жабр, а также разработанные методы профилактики и лечения, вспышки жаберного некроза аммиачной природы происходят регулярно в различных хозяйствах. Однако вопросы, связанные с нарушением физиологического и биохимического статуса рыб при данном заболевании, имеющих существенное значение для его профилактики изучены недостаточно или совсем не затрагивались.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Сбор материала, данных и опыты проводили в течение 2004-2007 гг. на Донском ОРЗ, ОНЦП «БИОС», ЗАО «Казачка» и Новочеркасском рыбокомбинате, Бессергеневском рыбоводном заводе. Объектами исследования послужили мальки и сеголетки межвидового гибрида - бестера. Данный выбор обусловлен его традиционностью в качестве объекта товарной аквакультуры в России.

Исследования проводили в условиях научно-производственного эксперимента, при которых экстремальные факторы действуют комплексно, что позволяет наиболее реально оценить изменения в организме рыб при заболеваниях и лечении. Схема и основные направления исследований приведены на рис. 1.

Выбор липидной добавки был обусловлен тем, что она оказывает антистрессовое действие и способствует стабилизации процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в организме рыб (Абросимов, Абросимова, 2004; Абросимова, Абросимов, 2007).

Влияние аммиачного интоксикоза, вызывающего поражение жабр, на физиологическое состояние бестера и липидной добавки в качестве терапевтического и профилактического средства оценивали по рыбоводно-биологическим и физиолого-биохимическим показателям.

Рыбоводпо-биологические исследования. Изучали весовой рост, выживаемость, упитанность по Фультону (КУФ), затраты кормов на единицу при-

роста, эффективность использования протеина и энергии на прирост, накопление различных групп органических и минеральных веществ, а также энергии в теле рыб по общепринятым методикам (Щербина, 1983).

Направления исследований

Профилактика

I

Изменения физиолого-биохимического статуса рыб при аммиачном токсикозе

Терапия

I

Кормление специализированными кормами

Оценка реакции рыб на аммиачный токсикоз, профилактику и терапию

Рыбоводно-биологические исследования

Темп роста Выживаемость Упитанность

ЗИП и эиэ-

Физиолого-биохимические исследования

Химический статус

Изменения обмена веществ

Гематологический статус

ПОЛ и антиоксидантная система

Производственная проверка оптимального варианта корма

I

Предложения к использованию производству V *

■М ¡.и/- - /

Рис. 1. Схема и основные направления исследований ЭИП* - эффективность использования протеина и ЭИЭ - эффективность использования энергии

Физиолого- биохимические исследования.

Общий химический анализ кормов и рыб проводили по стандартным методикам (Щербина, 1983). Для разделения липидов на классы использовали метод тонкослойной хроматографии (Шталь, 1965), с предварительным экстрагированием их по Фолчу (Folch et all., 1957).

Холестерин определяли по методу Либермана-Бурхарда в модификации С. Илька, эфиры холестерина - с использованием дигитонина (Ilea, 1962), глицеринов - по цветной реакции с хромотроповой кислотой, НЭЖК - колориметрически (Yang Jeun-Sing, Biggs, 1971), липоидного фосфора - по Исао с соавторами (Isao et all., 1967).

Жирные кислоты определяли методом газожидкостной хроматографии на хроматографе «ЦВЕТ-5».

Содержание диеновых конъюгатов (ДК) оценивали по характерному для них ультрафиолетовому спектру поглощения раствора липидов, малонового диальдегида (МДА) - по Коробейниковой (1989), основания Шиффа (ОШ) -по спектрам флуоресценции растворов липидов в хлороформе. Определение активности СОД проводили гидроксиламиновым методом (Yasuhira, 1983), а-токоферола - флуорометрическим методом (Taylor, 1980), витамина А - колориметрическим методом в тканях (Сагг, Prince, 1926), витамина С - по Тильман с соавторами (Tillman et all., 1932), активность лактатдегидрогеназы -по методу Зумермана и Вестейна (Zimmerman H.I., Weistein H.J., 1966), малат-дегидрогеназы - по методу Амелунга с соавторами (Amelung D et all, 1966), сукцинатдегидрогеназы - по методу Сонтула с соавторами (Sontull et all, 1968).

Активность щелочной и кислой фосфатазы определяли методом по Бес-сею, Лоури (Щеклик и др., 1966), липазы - по скорости гидролиза трибутири-на (Yang Jeun-Sing, Biggs, 1971).

Кровь для анализа брали из хвостовой артерии. Концентрацию гемоглобина определяли по Сали, величину гематокрита - на центрифуге Шкляра. Мазки фиксировали и окрашивали по Паппенгейму. Клетки крови идентифицировали по классификации Н.Т. Ивановой (1970, 1983).

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помо,-щью прикладной компьютерной программы «Excel».

В рыбоводно-биологических анализах использовано 1025 рыб. Проведено 1122 биохимических определения, в том числе, общих анализов тела рыб - 352, фракционного состава липидов, в том числе фосфолипидов - 364, жирных кислот - 25, продуктов ПОЛ - 96, антиоксидантов - 64, витаминов - 62, ферментов - 159, гематологических анализов - 122. Испытано 3 варианта комбикормов, отличающихся количеством введенной липидной добавки.

В тексте, таблицах и рисунках приняты следующие обозначения:

ОЛ - общие липиды; ФЛ - фосфолипиды, ТАГ - триацилглицерины, X -холестерин; ЭХ - эфиры холестерина; МАГ - моноацилглицерины; ДАГ - диа-цилглицерины; НЭЖК - неэстерифицированные жирные кислоты; ИФ - ино-зитфосфатиды; ЛФХ - лизофосфатидилхолины; СФМ - сфингомиелины; ФХ -фосфатидилхолины; ФС - фосфатидилсерины; ФЭА - фосфатидилэтанолами-ны; К+ПГФ - кардиолипины+полиглицерофосфатиды; СОД - супероксид-дисмутаза.

3. ИЗМЕНЕНИЕ ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКОГО СТАТУСА РЫБ ПРИ АММИАЧНОМ ИНТОКСИКОЗЕ

3.1. Рост и общий обмен веществ.

Сравнительная характеристика молоди бестера после 123 суток выращивания выявила достоверное отставание темпа роста больных некрозом жабр рыб в 2 раза при меньшем на 13,5% коэффициенте упитанности по сравнению со здоровыми. На метаболическом уровне значимые изменения отмечены по всем компонентам пластических веществ. Отмечено угнетение синтеза белка более чем в 2 раза, липидов - более чем в 11 раз, минеральных веществ - почти на 20%, и энергии - почти в 3 раза и повышении концентрации углеводов в 1,9 раза (рис. 2).

В стрессовых ситуациях, когда энергетические траты организма повышаются на поддержание гомеостаза, повышается интенсивность глюконеоге-неза. В этот процесс вовлекаются протеины и липиды, в ходе которого они используются для синтеза углеводов (Весельский, 1976; Бурлаченко, 2007). Вероятно, подобные изменения происходят и у рыб при аммиачном токсикозе. Причем в большей степени расходуются липиды.

Сухое в-во Протеин

Липиды

□ Больная

Углеводы Минерал, в- Энергия ва

■ Здоровая

Рис. 2. Концентрация пластических веществ и энергии в единице прироста больной молоди бестера, % от контроля (контроль принят за 100 %)

3.2. Липидный, жирнокислотный и энергетический обмен.

Известно, что при изменениях условий внешней и внутренней среды в адаптационных реакциях организма существенное значение имеют липиды. При этом в обеспечении нормализации функционирования организма животных ведущими являются фосфолипиды и высшие полиненасыщенные жирные кислоты ряда соЗ и соб, в частности, 18:3, 20:5, 22:5, 22:6, 18:2 и 20:4.

Сравнительный анализ общих липидов и фосфолипидов бестера выявил существенные различия в их количественном соотношении у больной и здоровой молоди (табл. 1).

Таблица 1

Состав общих липидов и фосфолипидов молоди бестера, %

Общие липиды, % липидов Фосфолипиды, % фосфолипидов

Показатели Опыт Контроль Показатели Опыт Контроль

ТАГ 65,3±0,86 56,3+0,72 ИФ 1,2±0,04 3,1±0,11

ФЛ 1б,1±0,37 24,6+0,41 ЛФХ 2,5±0,14 2,2±0,13

X 7,5±0,04 8,1+0,1 СФМ 12,6+0,42 7,8+0,21

ЭХ 4,3±0,14 6,8±0,06 ФХ 42,4±4,43 54,3±0,72

МАГ 1,6±0,14 0,4+0,01 ФС 8,4±0,04 7,8±0,11

ДАГ 2,1±0,14 0,9+0,03 ФЭА 32,8±0,28 24,3±0,29

НЭЖК 3,1+0,11 2,9±0,12 К+ПГФ 0,1 0,5±0,01

У больных рыб уровень ТАГ и НЭЖК повысился почти на 15 и 7 %, МАГ - 4 раза, ДАГ - более чем 2 раза, а ФЛ и ЭХ уменьшился более чем на 34 и X - на 7,5 %. У больных рыб уровень ЛФХ почти на 14%, ФЭА - на 35%, а СФМ - на 62 % был выше по сравнению со здоровыми. Одновременно у больных рыб уменьшилось содержание ИФ почти в 2,5 раза, ФХ - на 22% и К+ПГФ на 80%. Согласно ЕЛО. Саутина (1989) и Г.Ф. Лесковой (2001) эти изменения в обмене веществ указывают на ослабление антиоксидантных систем и снижение резистентности организма в энергетическом отношении и, соответственно, об ухудшении физиологического статуса рыб при аммиачной интоксикации. Причем в энергетический обмен вовлекаются мембранные ли-пиды, что подтверждается показателями липидного обмена - уменьшением соотношения ФЛ/ТАГ и ФХ/ФЭА более чем на 40 %, при одновременном повышении на ту же величину коэффициента Дьердии.

Существенные количественные изменения отмечены в составе жирных кислот ряда шЗ и саб. У больной молоди по сравнению со здоровыми рыбами повышается уровень шб кислот и снижается содержание соЗ кислот (рис. 3).

220

200

180

160

2 140

с;

о. к 120

X

о * 100

80

60

40

20

0

Контроль

ш

£шЗ 18:3 шЗ 20:5 шЗ 22:5 и)3 22:6 шЗ £ш6 18:2 шб 20:4 шб

□ О Л

□ ФЛ

Рис. 3. Изменения содержания некоторых жирных кислот у больной молоди бестера, % к контролю (контроль принят за 100 %): ОЛ - общие липиды, ФЛ - фосфолипиды

Так, сумма со6 кислот в общих липидах и фосфолипидах больных рыб соответственно в 1,9 и 2,0 раза была больше, а сумма соЗ кислот - на 46 и 50 % меньше по сравнению со здоровой молодью.

Количественные изменения суммы саб кислот у больных рыб обусловлены в основном повышением уровня 18:2 и 20:4 жирных кислот в 1,8 и 1,5 раза в общих липидах и 1,7 и 1,6 раз в фосфолипидах.

Снижение уровня суммы юЗ кислот в общих липидах и фосфолипидах в значительной степени обусловлено уменьшением содержания жирных кислот 18:3 в 5 раз, 20:5 - 1,4-1,6 раза, 22:5 - более чем в 2 раза и 22:6 - 1,7 -1,8 раза по сравнению со здоровыми рыбами. Отмеченные изменения количества жирных кислот определили и соотношение шЗ/юб, которое у больной молоди более чем в 3,5 раза было меньше, чем у здоровой.

Существенное снижение у больных рыб высоконенасыщенных жирных кислот соЗ ряда, являющихся протекторами экстремального состояния, свидетельствует о повышенных их тратах в процессе обмена веществ на поддержание антиоксидантного равновесия организма (Саутин, 1989; Абросимов, 2004).

Анализ накопления отдельных липидов у больной молоди бестера показал снижение данного показателя у них более чем в 4,5 раза. Эти изменения свидетельствуют о нарушениях в структурной организации мембран митохондрий, в частности, в регуляции активности ферментных систем дыхательной цепи (Карагезян и др., 1990).

3.3. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная система.

Наряду с биохимическими изменениями, адекватно отражающими физиологическое состояние организма, важными являются показатели ПОЛ, активность антиоксидантной и ферментативной систем.

Анализ состояния ПОЛ у молоди бестера показал повышение активности данного процесса при поражении жабр. Так, у больных рыб существенно повысился уровень гидроперекисей: ДК более чем на 37 %, МДА - на 54 % и ОШ - на 64 %. Одновременно у них понизилась активность СОД более чем на 20 %, а также содержание а -токоферола - почти на 23 %, витамина С - на 33 % и витамина А - в 2 раза (рис. 4).

ДК МДА ОШ СОД а- Витамин А Витамин С

токоферол

□ Больная ■ Здоровая

Рис. 4. Изменения уровня гидроперекисей, антиоксидантов и витаминов у больной молоди бестера, % к контролю (контроль принят за 100 %): ДК - диеновые конъюгаты, МДА - малоновый диальдегид, ОШ - основания Шиффа

Снижение содержания витамина А в 2 раза у больных рыб согласуется также с более низким у них в 1,7-1,8 раз уровнем 22:6 жирной кислоты.

Известно, что аммиачная интоксикация влияет на организм рыб на клеточном уровне, воздействуя на клеточные структуры и нарушая процессы клеточного и тканевого дыхания, т.к. аммиак при избыточном содержании связывает некоторые кислоты, являющиеся субстратами цикла Кребса. Как следствие изменяется активность оксидегидрогеназ. При некрозе жабр у молоди бестера наблюдается снижение активности: лактатдегидрогеназы в 1,8, малатдегидроге-назы в 2,3 и сукцинатдегидрогеназы в 2,8 раз (табл. 2).

Таблица 2

Активность некоторых оксидегидрогеназ у молоди бестера, (мкМ ЫАОН х мг белка / мин) х 10~2

Ферменты Больная Здоровая

Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) 17,1±0,2 30,1±1,0

Малатдегидрогеназа 20,3±0,4 47,2+0,3

Сукцинатдегидрогеназа (СДГ) 10,1±0,4 28,6±0,8

СДГ/ЛДГ 0,6 0,9

Соответственно соотношение СДГ/ЛДГ уменьшается в 1,5 раза. Вследствие этих изменений нарушаются реакции гликолиза и глюконеогенеза, син-

тез жирных кислот, что подтверждается нашими данными снижения уровня последних, особенно полиненасыщенных жирных кислот шЗ ряда (Абросимова, Абросимова, 2006). Можно предположить, что при этом у рыб нарушается ферментно-транспортный конвейер, что подтверждается повышением активности кислой фосфатазы в печени и кишечнике в 1,5 раза, щелочной фосфата-зы - соответственно в 1,9 и 1,6 раз, и снижением активности липазы в 1,8 раз.

Полученные данные об активации процессов ПОЛ, изменении уровня анти-оксидантов и активности оксидегидрогеназ, фосфатаз и липазы позволяют предположить профилактику и, возможно, терапию данного заболевания за счет дополнительного введения в рацион рыб препаратов, способных сорбировать эндогенный аммиак и компенсировать повышенные энергозатраты. Важным элементом при этом является поддержание антиоксидантной системы на должном уровне.

3.4. Гематологические показатели.

По результатам наших исследований уровень аммиака в крови больных рыб более чем в 2 раза превышал данный показатель по сравнению с здоровой, при понижении содержания гемоглобина на 25,6 %, что, вероятно, связано со снижением интенсивности дыхания в связи с заболеванием жабр и, соответственно, уровня обмена веществ, что подтверждается литературными данными (Остроумова, 1957; Ассман, 1960).

Доминирующими реакциями крови рыб при аммиачной интоксикации были - снижение эритропоэза на 43 %, увеличение в лейкоцитарной формуле доли нейтрофилов в 1,8 и эозинофидов в 1,5 раза, уменьшение числа лимфоцитов на 30 %, что также подтверждается литературными данными при патологии рыб (Ассман, 1960; Вихляева, 2000; Абросимова, 2006).

4. АНАЛИЗ И ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРИ АММИАЧНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

Изучение процессов происходящих при развитии жаберного некроза, вызванного аммиачной интоксикацией, позволяют правильно понять молекулярный механизм возникновения и протекания патологии, и, следовательно, изыскать пути оптимизации лечебно-профилактических мероприятий. Особое вни-

мание мы уделили изменениям в содержании пластических веществ, так как они отражают степень участия в метаболизме при рассматриваемой патологии.

Отставание больных рыб в темпе роста свидетельствует о нарушении пластического обмена и, прежде всего, синтеза белка. В этом случае аминокислоты используются в липонеогенезе, глюконеогенезе или энергетическом обмене (Сошеу, 1975; Хоар и др., 1983; Щербина, Гамыгин, 2006). Поэтому увеличение содержания протеина в кормах для нормализации обменных процессов нецелесообразно, так как будет способствовать более интенсивному накоплению эндогенного аммиака в организме рыб и усиливать развитие жаберного некроза.

Повышенное содержание углеводов у больных рыб свидетельствует о незначительном их вовлечении в энергетический обмен, что подтверждается снижением активности лактатдегидрогеназы. В то же время происходит повышение интенсивности глюконеогенеза, что отражается в снижении содержания протеинов и липидов у больной молоди. В связи с этим отсутствует возможность восполнения энергетических потребностей рыб с жаберной патологией за счет введения в корм углеводных компонентов.

Изучение липидного статуса показало, что у больных рыб наблюдаются изменения во всех липидных фракциях, что отражает глубокие изменения в метаболизме. Анализ динамики липидного обмена молоди бестера с поражением жабр показал следующее:

- происходит интенсивное расходование липидов, вызванное компенсаторными реакциями организма на действие аммиака;

- в энергетический обмен включаются фракции структурных липидов, содержащие полиеновые жирные кислоты.

Рыбы обладают ограниченной способностью к синтезу жирных кислот и состав липидов в их организме определяется количеством и качеством поступающей пищи. (Гершанович и др., 1991). Доказано, что среди полиеновых кислот особую роль играет самая ненасыщенная из них - 22:6 соЗ. Недостаточность этой кислоты приводит к резкому снижению устойчивости рыб к экстремальным воздействиям (Шульман, 1990).

Важной характеристикой липидов рыб является соотношение шЗ/ юб кислот. В норме этот показатель для осетровых рыб составляет 1,3-1,5 (Абросимова, 1997). Ввиду отмеченных изменений отношение шЗ/шб у рыб больных

некрозом жабр было существенно (более чем в 2 раза) ниже физиологической нормы. Полученные результаты можно рассматривать как свидетельство патофизиологических перестроек в организме больных рыб.

Таким образом, в результате реакции организма на аммиачный токсикоз и поражение жабр у больных рыб повышаются энерготраты за счет мембранных липидов. Причем наиболее уязвимыми являются фосфолипидный и жир-нокислотный обмен, в частности линоленового ряда, а также антиоксидантная система. Можно предположить, что с целью профилактики и лечения незаразного некроза жабр и, соответственно, для нормализации клеточного метаболизма целесообразно обогащать рацион рыб липидами с преимущественным содержанием жирных кислот озЗ ряда и антиоксидантами. Таким компонентом, как нам представляется, является кормовая липидная добавка, содержащая до 20 % фосфолипидов, около 56 % полиеновых жирных кислот, в том числе 40 % соЗ кислот при соотношении соЗ/соб равном 2,1 и 2,5 мг/кг каротина - антиоксиданта и предшественника витамина А.

5. ПРОФИЛАКТИКА АММИАЧНОГО ИНТОКСИКОЗА РЫБ

ИЛЕЧЕНИЕ

5.1. Результаты профилактики.

Изучение возможности профилактики аммиачной интоксикации у молоди бестера проводили, используя 3 количественных уровня липидной добавки (ЛД) по следующей схеме (рис. 5).

Молодь бестера

1 вариант К +1 % ЛД

I

Кормление

I

2 вариант К + 2 % ЛД

I

3 вариант К + 3%ЛД

Контроль (К)

Рис. 5. Схема опыта по профилактике аммиачной интоксикации

В опытных кормах рыбий жир заменяли соответствующим количеством липидной добавки (ЛД). Экспериментальное кормление проводили в условиях по многим параметрам превышающим технологические нормы, в частности более высокой температуры и рН, повышенным уровнем 1ЧН3 и нитритов, низким уровнем фосфатов, Си и - выше ПДК и т.д. При отборе молоди бестера мы руководствовались методом групп-аналогов, в связи с чем, различия начальной массы рыб по вариантам были незначительными (табл. 3).

Таблица 3

Рыбоводно-биологические показатели бестера при выращивании

на кормах с различным содержанием липидной добавки_

Показатели Варианты кормов

1 2 3 Контроль

Масса, г:

начальная 3,25+0,24 3,31+0,30 3,57±0,25 3,3210,29

конечная 133,35+5,56 169,9617,52 170,98±8,33 129,10+11,59

Темп роста, г/сут. 1,74 2,22 2,23 1,68

Выживаемость, % 85 87 88 79

Заболевшие рыбы, % 2 0 0 32

КУФ 0,57±0,01 0,59±0,01 0,60±0,01 0,5310,02

Затраты корма, г/г прироста 1,2 1,1 1,1 1,4

ЭИП, % 32,72 35,51 зз';б9 26,78

ЭИЭ, % 32,37 38,35 37,98 25,59

Введение в рацион липидной добавки способствовало повышению темпа роста молоди бестера до 33 % , выживаемости - до 11,4% и упитанности -до 13,2 %. Кормовые затраты снизились на 0,2-0,3 ед„ повысилась конверсия корма. Лучшие результаты были в 2 варианте, где ЭИП и ЭИЭ более чем на 33 % были выше, чем в контроле. При добавлении к корму 1 % липидной добавки количество заболевших рыб уменьшилось в 16 раз, а при 2 и 3 % - все рыбы были здоровы.

Следовательно, 2 и 3% липидного препарата в составе рациона при ухудшении условий содержания рыб оказывает профилактическое действие при аммиачной интоксикации.

5.2. Результаты лечения.

Для восполнения дефицита эссенциальных жирных соЗ кислот и стабилизации антиоксидантной защиты в рацион бестера вводили липидный препа-

рат в количестве 2 % с учетом равнозначности ее действия с вводом 3 % ли-пидной добавки при профилактике некроза жабр. При отборе молоди бестера в данном эксперименте мы также руководствовались методом групп-аналогов. Лечебное кормление проводили по следующей схеме (рис. 6).

Рис. 6. Схема опыта по лечению некроза жабр молоди бестера

5.2.1. Липидныц, жирнокислотный и энергетический обмен сеголеток бестера после лечения.

При визуальном осмотре через 15 суток кормления у больных рыб отмечали выздоровление жабр (жабры очистились от некротической ткани и приобрели свойственный им темно-красный цвет), В этот же период гибель больных рыб была единичной. В дальнейшем потерь молоди не наблюдали.

Как показали результаты наших исследований, через 35 суток по завершении лечебного кормления у больных сеголеток бестера существенно (от 3 до 4 раз) снизился уровень МАГ, ДАГ и НЭЖК и, в меньшей степени, ТАГ. Изменения отмечены и в фосфолипидном спектре: значительно повысился уровень ИФ и ФС (почти в 2 раза) и К+ПГФ (в 7 раз). В целом липидный состав рыб после лечебного кормления указывает на стабилизацию липидного обмена (табл. 4), что отражено и в его показателях, которые составили: ФЛ/ТАГ- 0,6, коэффициент Дьердии - 0,3 и ФХ/ФЭА - 0,4, в контроле соответственно 0,7, 0,3 и 0,5.

И

Кормление

Больные - К + 2 % ЛД

^ Здоровые - Контроль (К)

Таблица 4

Состав общих липидов и фосфолипидов молоди бестера

после лечебного кормления

Общие липиды, % липидов Фосфолипиды, % фосфолипидов

Показатели Опыт Контроль Показатели Опыт Контроль

ТАГ 50,4±1,5 45,1 ±0,6 ИФ 2,7 ±0,14 1,8±0,1

ФЛ 29,8+0,1 28,9+0,5 ЛФХ 2,2±0,04 2,5±0,1

X 9,7±0,2 10+0,2 СФМ 9,2±0,65 7,7±0,3

ЭХ 7,9+0,3 7+0,7 ФХ 56,5±0,92 56,7±0,6

МАГ 0,7±0,04 1,7±0,2 ФС 4,4+0,14 5,1 ±0,3

ДАГ 0,7±0,1 2,6±0,1 ФЭА 24,3+0,71 25,4+0,4

НЭЖК 0,8±0,3 5,3+0,7 К+ПГФ 0,7±0,04 0,5±0,04

Наряду с положительной динамикой общего липидного обмена у молоди после лечебного кормления отметилось улучшение жирнокислотного статуса. Об этом свидетельствуют хотя и небольшое, но превышающее уровень 20:5, 22:5 и 22:6 кислот в контроле на 11,6; 5,6 и 6 % соответственно (рис. 7).

140 120 100 -80 60

Контооль

ХшЗ 18:3 шЗ 20:5 шЗ 22:5 ыЗ 22:6 и>3 1ш6 18:2 шб 20:4 шб

аол ОФЛ

Рис. 7. Изменения содержания некоторых жирных кислот у молоди бестера после лечебного кормления, % к контролю

(контроль принят за 100 %)

В положительную сторону изменился баланс между юЗ и соб кислотами, который после лечебного кормления был на уровне контрольных сеголеток и

составил 1,8-2,3 ед.

Полученные результаты после лечебного кормления сеголеток бестера свидетельствуют о нормальном протекании обменных процессов с преобладанием синтеза над расходом на энергетические нужды структурных липидов и эссенциальных жирных кислот шЗ и шб, повышении устойчивости клеточных мембран и снижении уровня образования свободных радикалов и, соответственно ПОЛ.

5.2.2. Состояние процессов переписного окисления липидов у сеголеток бестера после лечения.

Нормализация липидного и жирнокислотного обмена у сеголеток после лечебного кормления и, соответственно, улучшение их физиологического состояния может свидетельствовать о стабилизации у них процессов ПОЛ. Это подтверждается снижением активности гидроперекисей, уровень которых у сеголеток после лечебного кормления был близок контрольной молоди. При этом активность антиоксидантов повысилась более чем: СОД - на 17 %, а-токоферола - на 38 %, витамина А - на 12 % и С - на 41 % (рис. 8).

ДК ЦДА 0111 СОД а-токоферол Вот. А Вит. С

□ Больная ■ Здоровая

Рис. 8. Изменения уровня гидроперекисей, антиоксидантов и витаминов у молоди бестера после лечебного кормления, % к контролю (контроль принят за 100 %):

Повышение содержания витамина А определяется введением в рацион рыб р-каротина в составе липидной добавки и повышением относительного

содержания суммы жирных кислот 20:5+22:6, а также 22:6.

Об улучшении физиологического состояния сеголеток и стабилизации ПОЛ после лечебного кормления свидетельствует также увеличение активности оксидегидрогеназ: лактатдегидрогеназы более чем в 1,6 раза, малатдегид-рогеназы и сукцинатдегидрогеназы почти в 2, 5 и 3 раза, соответственно (табл. 5).

Таблица 5

Активность некоторых оксидегидрогеназ у молоди бестера после

лечебного кормления, (мкМ КАОН х мг белка / мин) х 10~2

Ферменты Опыт Контроль

Лактатдегндрогеназа (ЛДГ) 28,6±0,2 30,6+1,0

Малатдегидрогеназа 49,2±0,4 50,6±0,3

Сукцинатдегидрогеназа (СДГ) 29,4±0,4 30,2±0,8

СДГ/ЛДГ 1,02 0,99

Соотношение СДГ/ЛДГ у опытных и контрольных рыб соответствовало физиологической норме 1), что и свидетельствует о равновесии внутреннего окислительно-восстановительного цикла гликолиза и электроннотранс-портной дыхательной цепи в цикле Кребса.

Приведенные данные о состоянии перекисного окисления липидов у сеголеток бестера после лечебного кормления указывают на снижение у них аммиачной интоксикации, следствием чего является улучшение их физиологического состояния и, соответственно, выздоровление.

5.2.3. Состояние крови сеголеток бестера после лечения.

После лечебного кормления у сеголеток бестера отмечены положительные изменения состава крови: содержание аммиака уменьшилось до 2,0 мг/ дм3 (у здоровых - 2,2 мг/дм3), повысился уровень гемоглобина при отличиях от контроля не более чем на 3,5 %. По показателю гематокрита обе группы молоди практически не отличались. Повысилась у них интенсивность эритро-поэза в 2,2 раза, отличаясь от контроля на уровне 10 %, возросло количество лейкоцитов почти на 46 % и уменьшилось в 2 раза число нейтрофилов. Несмотря на некоторые отличия, которые, по-видимому, являются следствием нарушения функции жабр в период болезни и длительного восстановительного периода, показатели красной и белой крови у обеих групп рыб соответство-

вали физиологической норме.

Таким образом, кормовая липидная добавка в количестве 2 % в составе корма способствует выздоровлению сеголеток бестера, улучшению их липид-ного и жирнокислотного статуса и состоянию крови. Следовательно, в соответствующих количествах она может использоваться как в профилактических целях, так и в качестве лечебного средства при поражении жабр от аммиачного токсикоза.

ВЫВОДЫ

Проведенное исследование физиолого-биохимического статуса молоди бестера при аммиачной интоксикации было направлено на определение наиболее значимых изменений в организме рыб с целью предупреждение и лечения этой патологии в условиях рыбоводных хозяйств.

Основные выводы диссертационной работы заключаются в следующем:

1. При аммиачной интоксикации и, как следствие, поражении жабр у молоди бестера достоверно снижается темп роста, упитанность, пластический обмен и выживаемость.

2. При некрозе жабр аммиачной природы у молоди снижается накопление и концентрация питательных веществ и энергии в теле, что указывает на дефицит энергии у больных рыб и компенсаторные реакции за счет использования липидов.

3. У больной молоди развивается дисбаланс процессов гидролиза и синтеза отдельных липидных фракций, о чем свидетельствуют основные показатели липидного обмена: соотношение фосфолипиды/триацилглицерины и фосфатидилхолины/фосфатидилэтаноламины уменьшается более чем на 40 %, коэффициент Дьердии увеличивается на 42 %.

4. У больных рыб для поддержания гомеостаза внутренней среды организма преимущественно используются высоконенасыщенные жирные кислоты линоленовая, эйкозапентаеновая, докозапентаеновая и докозагексаеновая, относительное содержание которых снижается соответственно в 5; 1,5; 2 и 1,8 раз. Нарушается баланс шЗ и юб кислот, соотношение которых (мЗ/юб) уменьшается более чем в 3 раза, составляя в общих липидах и фосфолипидах 0,4-0,5, что свидетельствует о неудовлетворительном физиологическом со-

стоянии рыб.

5. У рыб при жаберном некрозе, вызванном аммиачной интоксикацией, повышается активность перекисного окисления липидов, что подтверждается повышением уровня гидроперекисей и снижением активности антиоксидант-ной системы и оксидегидрогеназ, а также баланса между сукцинатдегидроге-назой и лактатдегидрогеназой, т.е. нарушениями в цикле Кребса. Понижается также активность фосфатаз и липазы.

6. Доминирующими реакциями крови при поражении жабр вследствие аммиачной интоксикации являются снижение эритропоэза, увеличение в лейкоцитарной формуле доли нейтрофилов и эозинофилов, уменьшение числа лимфоцитов.

7. Для профилактики аммиачной интоксикации и лечения жабр целесообразно вводить в состав рациона 2 % липидной добавки, которая оказывает следующие биологические и физиолого-биохимические эффекты:

- выздоровление жабр - очищение от некротической ткани и восстановление свойственного им темно-красного цвета в течение 2-х недель;

- повышение темпа роста, выживаемости и упитанности, а также конверсии корма на пластический обмен;

- нормализация липидного и жирнокислотного обмена, восстановление баланса жирных кислот линоленового и линолевого рядов, соответствующего физиологической норме для осетровых рыб;

- стабилизация активности перекисного окисления липидов с тенденцией уменьшения его продуктов на фоне повышенного уровня естественных ан-тиоксидантов и активности дегидрогеназ, фосфатаз и липазы;

- нормализация состава крови: повышение содержания гемоглобина и интенсивности эритропоэза, увеличение числа лимфоцитов и снижение доли нейтрофилов и эозинофилов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для повышения результативности выращивания молоди рыб, в том числе при искусственном воспроизводстве, за счет предупреждения аммиачной интоксикации и лечения жабр рекомендуем:

- кормовую липидную добавку, содержащую до 20 % фосфолипидов, около 56 % полиеновых жирных кислот, в том числе 40 % юЗ при соотношении соЗ/соб равном 2,1 и 2,5 мг/кг ß-каротина, в качестве средства для профилактики аммиачной интоксикации и терапии незаразного жаберного некроза;

- в корм для молоди рыб вводить 2 % кормовой липидной добавки при замене соответствующего количества других жиров;

- для улучшения физиологического состояния рыб, повышения резистентности к заболеваниям и повышения адаптационной пластичности к неблагоприятным условиям использовать липидную добавку в качестве постоянного компонента комбикормов.

Список печатных работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Абросимова Е.Б., Абросимова К.С. Диагностическое значение физио-лого-биохимических показателей при некоторых заболеваниях рыб//Сб. научных тр. «Наука, техника и высшее образование: проблемы и тенденции развития»: Изд-во Ростовского ун-та, 2006.- С. 187-194.

2. Абросимова H.A., Абросимова Е.Б. Изменение направленности ли-пидного обмена молоди бестера при жаберном некрозе// Материалы докладов IY международной научно-практической конференции «Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития. Астрахань, 13-15 марта 2006 г.». Астрахань: изд-во ВНИРО, 2006,- С. 219-222.

3. Абросимова Е.Б. Влияние аммиака в крови бестера на ее состояние// Актуальные проблемы современной науки и образования: Межвузовский сборник научных трудов.- Ростов-на-Дону: Изд-во Рост. Ун-та, 2006,- С. 205207.

4. Абросимова Е.Б. Профилактика жаберного некроза в условиях интенсивного рыбоводства// Состояние и перспективы развития фермерского рыбоводства аридной зоны: Тезисы докладов международной научной конференции (г. Азов, 6-8 июня 2006 г.).- Ростов-на-Дону: Изд. ЮНЦ РАН, 2006.- С. 911.

5. Абросимова Е.Б., Абросимова К.С. Значение питания в лечении и профилактике заболеваний, вызванных нарушением технологий и стрессами// Сб. научных тр. «Наука, техника и высшее образование: проблемы и тенден-

ции развития»/ Под ред. проф. Мозолина В.П., проф. Голубенко А.Л.- Изд-во РСЭИ, 2008,- С. 147-150.

6. Абросимова Е.Б. О некоторых проблемах фермерских рыбоводных хозяйств юга России// Труды ХШ Международной научно-практической конференции «Стратегия развития пищевой промышленности», 27-28 ноября 2007 года, выпуск 12, том 2,- М.: ООО «Газета «Авоська», 2007,- С. 3-6.

7. Абросимова Е.Б., Тарасов Е.К. Особенности гемопоэза при некрозе жабр сеголеток бестера/ Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины: Материалы 2-й Междунар. научн. конференции, Ростов-на-Дону, 8-10 октября 2008 г.- Ростов-на-Дону: Изд. ЮФУ, 2008,- С. 14-15.

8*. Абросимова Е.Б. Направленность обмена веществ при некрозе жабр у молоди бестера// Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион, естественные науки.- 2009,- № 2.- С. 82-84.

9*. Абросимов С.С., Абросимова Е.Б. Показатели липидного и жирно-кислотного обмена молоди бестера при некрозе жабр/ Труды Кубанского гос. Аграрного университета.- 2009.- № 1 (16).- С. 149-153.

10*. Абросимов С.С., Абросимова Е.Б. Физиологические и биохимические изменения у осетровых рыб при жаберном некрозе/ Труды Кубанского гос. Аграрного университета.- 2009,- № 2 (17). - С. 103-107.

11. Абросимова Е.Б. Незаразный жаберный некроз: профилактика и лечение/ Актуальные проблемы современной науки и образования: межвузовский сборник научных трудов,- Ростов н/Д: Изд-во ЮФУ, 2009.- С. 387-392.

Примечание: * - публикации в журналах, рекомендованных ВАК.

Подписано в печать 13.07.2009 г. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать цифровая. Объем 1,0 усл. печ. л. Тираж 100. Заказ № 29/07. Отпечатано в типографии ООО «Диапазон». 344011, г. Ростов-на-Дону, пер. Островского, 124 Лиц. ПЛД № 65-116 от 29.09.1997 г.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Абросимова, Екатерина Борисовна

ВВЕДЕНИЕ.

1. НЕЗАРАЗНЫЙ ЖАБЕРНЫЙ НЕКРОЗ КАК СЛЕДСТВИЕ АММИАЧНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ (АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР).

1.1. История изучения некроза жабр рыб.

1.2. Факторы, способствующие развитию незаразного некроза жабр у рыб.

1.3. Клиническая картина некроза жабр рыб при аммиачной интоксикации.

1.4. Образование и экскреция аммиака в организме рыб.

1.5. Традиционные методы профилактики и терапии некроза жабр рыб при аммиачной интоксикации.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. ИЗМЕНЕНИЕ ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКОГО

СТАТУСА РЫБ ПРИ АММИАЧНОМ ИНТОКСИКОЗЕ.

3.1. Рост и общий обмен веществ.

3.2. Липидный, жирнокислотный и энергетический обмен.

3.3. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная система.

3.4. Гематологические показатели.

4. АНАЛИЗ И ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРИ АММИАЧНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ.

5. ПРОФИЛАКТИКА АММИАЧНОГО ИНТОКСИКОЗА РЫБ И

ЛЕЧЕНИЕ.

5.1. Результаты профилактики.

5.2. Результаты лечения.

5.2.1. Липидный, жирнокислотный и энергетический обмен сеголеток бестера после лечения.

5.2.2. Состояние процессов перекисного окисления липидов у сеголеток бестера после лечения.

5.2.3. Состояние крови сеголеток бестера после лечения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности аммиачной интоксикации рыб в интенсивной аквакультуре"

Актуальность проблемы. В настоящее время развитие промысловой добычи различных видов рыб достигло такого уровня, что, несмотря на всё возрастающие технические возможности промышленного рыболовства, объемы вылова в последние годы увеличиваются незначительно, а в отдельных бассейнах наблюдается даже некоторое снижение. Это связано как с достижением пределов возможных промысловых уловов, обусловленных численностью природных популяций добываемых видов, так и со снижением численности самих популяций. Особенно это относится к наиболее ценным видам рыб.

Снижение запасов промысловых рыб происходит под давлением антропогенного фактора, который приводит к нарушению природных экосистем, вследствие их загрязнения, строительства гидротехнических сооружений на пути миграций, активного освоения мест нереста и др. Несмотря на все принимаемые меры по восстановлению естественных запасов рыб перелома в ситуации пока не наступает. В связи с этим необходимость развития и усовершенствования технологий аквакультуры, в том числе искусственного воспроизводства рыб, а также их товарного выращивания является задачей, которую необходимо решать уже в настоящее время.

О государственной значимости развития аквакультуры «свидетельствуют ряд совещаний, проводимых в рамках комиссии Правительства Российской Федерации по вопросам агропромышленного и рыбохозяйственного комплекса, а также: приказ Минсельхоза России от 20.02.2006 № 45 «О развитии рыбоводства и рыболовства во внутренних водоемах Российской Федерации»; протокол заседания коллегии Минсельхоза России от 30.05.2006 № 6 «О мерах по развитию аквакультуры в Российской Федерации»; протокол совещания у первого заместителя Председателя Правительства Российской Федерации, г. Астрахань, 25 сентября 2006 г. и много других мероприятий. С 2007 года Аквакультура включена в приоритетный национальный проект

Развитие АПК» (цит. по Ю.П. Мамонтову и А.И. Литвиненко, 2007), а также в программный документ «Стратегия развития аквакультуры в Российской Федерации на период до 2020 года» (принято на заседании Минсельхоза России по рыбохозяйственному комплексу, протокол № 12 от 15.03.07 г.). Несмотря на временные трудности в экономической ситуации страны, и в связи с этим, возможной задержкой в реализации государственной программы развития аквакультуры, необходимость этих работ очевидна.

Говоря об актуальности работ по восстановлению численности естественных популяций рыб и увеличению масштаба товарной рыбной продукции, необходимо отметить, что работа в этом направлении ведется в течение многих лет.

Основная задача рыбоводных хозяйств — вырастить здоровую молодь и качественную товарную продукцию в наибольшем количестве, используя наименьшие площади. Таким образом, интенсификация деятельности связана в первую очередь с повышением плотностей посадок рыб на единицу площади рыбоводной емкости. Это необходимое условие влечет за собой усложнение рыбоводных процессов.

К настоящему времени в Российской Федерации разработаны биотехнологии воспроизводства и товарного выращивания осетровых, лососевых и карповых рыб, которые позволяют получать качественную рыбоводную продукцию как за счет оптимизации условий среды, так и физиологически полноценного кормления (Канидьев, 1984; Виноградов, 1985; Бондаренко и др., 1995; Абросимова, 1997; Гамыгин и др., 1999; Васильева и др, 2000; Ко-коза, 2002; Пономарев, Пономарева, 2003; Козлов и др., 2004; Щербина, Гамыгин, 2006 и др.).

Однако на рыбоводных предприятиях существует ряд проблем, настоятельно требующих решения для получения устойчивых результатов, как при искусственном воспроизводстве, так и товарном выращивании рыб. До сих пор остается нерешенной проблема, связанная с особенностями метаболизма рыб, которая усугубляется условиями выращивания при высоких плотностях посадок, нестабильных климатических и гидрохимических условиях.

Суть проблемы состоит в том, что конечным продуктом азотистого обмена у рыб является аммиак — высокотоксичное вещество, повышенное содержание которого, как в воде, так и в организме рыб приводит к поражению дыхательного аппарата рыб и развитию заболевания, получившего название незаразный жаберный некроз. Для южных регионов частые вспышки этого заболевания среди разных объектов аквакультуры, как в условиях индустриальных заводов, так и в прудовых хозяйствах связаны с тем, что уровень концентрации аммиака в воде напрямую зависит от ее температуры. В хозяйствах юга России токсический некроз жабр чаще отмечается в летний период, когда температура воды повышается более 26 "С.

Нарушение нормальных процессов нитрификации в прудах и прудах-отстойниках в условиях повышенной температуры, ухудшение санитарно-гигиенических условий в бассейнах или иных малых рыбоводных емкостях, снижение уровня растворимого в воде кислорода и вероятное изменение направленности обмена веществ у рыб способствует аммиачной интоксикации и поражению жабр, при котором гибнет до 80 % выращиваемых особей (Лопухина, 1969; Щелкунов, 1988).

Несмотря на известную аммиачную природу причин возникновения незаразного некроза жабр, достаточно эффективных методов его лечения и предупреждения еще не разработано. В заводских условиях основным способом предупреждения развития жаберного некроза является постоянный контроль содержания аммонийного азота в воде и регулирование проточности воды для поддержания оптимального гидрохимического режима. В прудовых хозяйствах для нормализации гидрохимических показателей воды и профилактики возникновения заболевания широко применяется внесение извести в водоемы. Но эти методы не учитывают физиологические особенности метаболизма рыб и не могут вылечить уже заболевшую рыбу, а применение извести, зачастую, усугубляет течение болезни. Лучшие результаты получены для молоди осетровых рыб при введении в искусственные корма природных цеолитов (Лобзакова, 2000; Панчихина, 2001). Однако в настоящее время использование природных цеолитов затруднено по ряду экономических и технических проблем, в первую очередь, из-за стоимости перевозки.

Причиной поиска новых методов профилактики и лечения аммиачной интоксикации и, как следствие, незаразного жаберного некроза является не только отсутствие действенных мер, но и то, что в настоящее время в рыбоводстве происходит переориентация приоритетов в подходах борьбы с болезнями в аквакультуре. На смену разработке методов лечения болезней приходит направление, предусматривающее сохранение здоровья объектов аква-культуры на протяжении всего периода выращивания путем разработки методов (или технологий), предупреждающих развитие заболеваний. В связи с этим необходимо изучение физиологических и биохимических изменений в организме рыб на тканевом и клеточном уровне при патологиях, что позволит разработать новые более эффективные подходы к выращиванию рыб.

В настоящее время действенным в решении данной проблемы является рациональное кормление, предусматривающее применение, в первую очередь, кормов, которые бы способствовали оптимальному протеканию всех физиологических и биохимических процессов в организме рыб, обеспечивая необходимыми компонентами все реакции метаболизма (Абросимова, Абросимов, 2004; Абросимов, 2008).

Цель и задачи исследований. Основная цель настоящей работы заключалась в выявлении изменений физиолого-биохимического статуса и метаболизма рыб (на примере бестера) при заболевании незаразным некрозом жабр, спровоцированным аммиачной интоксикацией, и на этой основе в разработке рационального кормления, способствующего нивелированию неблагоприятных факторов внешней и внутренней среды.

Для достижения этой цели ставились следующие задачи: - изучить влияние аммиачной интоксикации на темп роста, выживаемость, упитанность и направленность общего обмена веществ;

- выявить изменения липидного и жирнокислотного обмена при аммиачной интоксикации;

- определить влияние аммиачной интоксикации на активность перекис-ного окисления липидов;

- изучить влияние аммиачной интоксикации на активность оксидегид-рогеназ;

- изучить влияние аммиачной интоксикации на активность фосфатаз и липазы;

- изучить изменения состава крови при аммиачной интоксикации;

- изучить физиологическое действие кормовой липидной добавки при некрозе жабр аммиачной природы и установить оптимальное ее количество в рационе рыб.

Научная новизна. Впервые определено изменение баланса эссециаль-ных жирных кислот соЗ и юб ряда при аммиачной интоксикации молоди бес-тера. Установлено, что при данном заболевании существенно снижается уровень юЗ при активном расходовании на поддержание гомеостаза эйкозапен-таеновой (20:5), докозапентаеновой (22:5) и докозагексаеновой (22:6) жирных кислот. Выявлено снижение активности витамина А с преобладанием суммы мононенасыщенных кислот 20:1 и 22:1 и уменьшением уровня полиненасыщенной кислоты 22:6.

Показано, что при аммиачной интоксикации повышаются энерготраты организма и в обмен веществ включаются мембранные липиды.

Впервые определено, что при аммиачной интоксикации нарушается динамическое равновесие процессов свободнорадикального окисления, снижается активность таких оксидегидрогеназ как лактатдегидрогеназа, малат-дегидрогеназа и сукцинатдегидрогеназа, а также кислых и щелочных фосфатаз, липазы. Изменяется картина крови в сторону увеличения фагоцитарных клеток. Определено, что уровень аммиака в крови больной молоди бестера более чем в 2 раза превышает данный показатель по сравнению с здоровой.

Установлено, что для предотвращения некроза жабр, вызванного аммиачной интоксикацией, целесообразно вводить в рацион рыб специальную кормовую липидную добавку в количестве 2 %, основным физиологическим действием которой является нормализация процессов метаболизма рыб, в том числе уровня аммиака в крови, тем самым, устраняя причину заболевания.

Практическая значимость работы определяется возможностью повышения эффективности выращивания рыб за счет профилактики аммиачной интоксикации и поражения жабр, особенно в условиях высокой интенсификации выращивания.

Обогащение рациона рыб кормовой липидной добавкой способствует не только снижению потерь рыбоводной продукции в случае заболевания, но и их предупреждению при проведении профилактического кормления, а также хорошему физиологическому состоянию рыб, что подтверждается данными темпа роста, выживаемости, показателями крови, липидным и жирно-кислотным статусом. Результаты наших исследований подтверждены производственными испытаниями.

Апробация работы. Материалы диссертации представлялись, обсуждались и докладывались на Международной научной конференции «Состояние и перспективы развития фермерского рыбоводства аридной зоны» (г. Азов, 2006), IY Международной научно-практической конференции «Аква-культура осетровых рыб: достижения и перспективы развития», (Астрахань, 2006), на Международной научной конференции «Наука, техника и высшее образование» (Аура, Мальта, 2007), II Международной научной конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины (Ростов-на-Дону, 2008), а также на заседаниях кафедр «Водные биоресурсы» и «Биоэкология и ихтиология» МГУТУ.

Публикации. Основные материалы и положения диссертации изложены в 11 печатных работах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и приложения (акты производственных испытаний). Список цитируемой литературы включает 191 работу, из которых 38 на иностранных языках. Работа иллюстрирована 24 рисунками и 20 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Ихтиология", Абросимова, Екатерина Борисовна

Основные выводы диссертационной работы заключаются в следующем:

1. При аммиачной интоксикации и, как следствие, поражении жабр у молоди бестера в зависимости от длительности заболевания темп роста достоверно снижается от 30 % до 2 раз, упитанность - на 10 %, пластический обмен - более чем в 2 раза и выживаемость — от 9 до 50 % и более.

2. При некрозе жабр аммиачной природы у молоди в теле снижается накопление питательных веществ и энергии более чем в 5 раз, и концентрация - более чем в 2 раза, что указывает на дефицит энергии у больных рыб и компенсаторные реакции за счет использования липидов.

3. У больной молоди развивается дисбаланс процессов гидролиза и синтеза отдельных липидных фракций, о чем свидетельствуют основные показатели липидного обмена: соотношение фосфолипиды/триацилглицерины и фосфатидилхолины/фосфатидилэтаноламины уменьшаются более чем на 40 %, коэффициент Дьердии увеличивается на 42 %.

4. У больных рыб для поддержания гомеостаза внутренней среды организма преимущественно используются высоконенасыщенные жирные кислоты линоленовая, эйкозапентаеновая, докозапентаеновая и докозагексаеновая, относительное содержание которых снижается соответственно в 5; 1,5; 2 и 1,8 раз. Нарушается баланс соЗ и соб кислот, соотношение которых (ооЗ/соб) уменьшается более чем в 3 раза, составляя в общих липидах и фосфолипидах 0,4-0,5, что свидетельствует о неудовлетворительном физиологическом состоянии рыб.

5. У рыб при жаберном некрозе, вызванном аммиачной интоксикацией, повышается активность перекисного окисления липидов, что подтверждается повышением уровня гидроперекисей и снижением активности антиоксидант-ной системы и оксидегидрогеназ, а также баланса между сукцинатдегидрогеназой и лактатдегидрогеназой, т.е. нарушениями в цикле Кребса. Понижается также активность фосфатаз и липазы.

6. Доминирующими реакциями крови при поражении жабр вследствие аммиачной интоксикации являются снижение эритропоэза, увеличение в лейкоцитарной формуле доли нейтрофилов и эозинофилов, уменьшение числа лимфоцитов.

7. Для профилактики аммиачной интоксикации и лечения жабр целесообразно вводить в состав рациона 2 % липидной добавки, которая оказывает следующие биологические и физиолого-биохимические эффекты:

- выздоровление жабр - очищение от некротической ткани и восстановление свойственного им темно-красного цвета в течение 2-х недель;

- повышение темпа роста, выживаемости и упитанности, а также конверсии корма на пластический обмен;

- нормализация липидного и жирнокислотного обмена, восстановление баланса жирных кислот линоленового и линолевого рядов, соответствующего физиологической норме для осетровых рыб;

- стабилизация активности перекисного окисления липидов с тенденцией уменьшения его продуктов на фоне повышенного уровня естественных антиоксидантов и активности дегидрогеназ, фосфатаз и липазы;

- нормализация состава крови: повышение содержания гемоглобина и интенсивности эритропоэза, увеличение числа лимфоцитов и снижение доли нейтрофилов и эозинофилов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для повышения результативности выращивания молоди рыб, в том числе при искусственном воспроизводстве, за счет предупреждения и лечения в случае заболевания, особенно, в условиях неблагоприятных для роста и развития (высокие температуры и рН, дефицита кислорода, повышенного фона аммиака и нитритов и других факторов, способствующих аммиачной интоксикации й заболеванию некрозом жабр) рекомендуем:

- кормовую липидную добавку (очищенное льняное масло+препарат Р-каротина в соотношении 8:1), содержащую до 20 % фосфолипидов, около 56 % полиеновых жирных кислот, в том числе 40 % кислот соЗ ряда при соотношении юЗ/соб не менее 2 ед. и 2,5 мг/кг Р-каротина, в качестве средства для профилактики аммиачной интоксикации и терапии незаразного жаберного некроза;

- в корм для молоди рыб вводить 2 % кормовой липидной добавки при замене соответствующего количества других жиров;

- для улучшения физиологического состояния рыб, повышения резистентности к заболеваниям и повышения адаптационной пластичности неблагоприятным условиям использовать липидную добавку в качестве постоянного компонента комбикормов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Абросимова, Екатерина Борисовна, Астрахань

1. Абросимов С.С., Бирюкова А.А. Оценка цеолитов как пищевого осетроводства// Тезисы докладов первой научно-практической конференции «Проблемы современного товарного осетроводства» 24-25 марта 1999 г. -Астрахань, 1999.- С. 87-89.

2. Абросимов С.С., Хлебнова Е.Ю. Изменение липидного и жирнокис-лотного обмена при некоторых заболеваниях рыб// Известия Высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Естеств. науки. № 9 (21). Ростов-на-Дону, 2004. - С. 56-60.

3. Абросимов С.С. Стабилизация свободнорадикального окисления липидов у молоди Acipenser stellatus при интенсивном выращива-нии//Научный журнал. Тр. Кубанского гос. аграрного ун-та, 2008 Вып. 3 (12).- С. 77-81.

4. Абросимов С.С., Абросимова Е.Б. Показатели липидного и жирно-кислотного обмена молоди бестера при некрозе жабр./ Труды Кубанского гос. Аграрного университета.- 2009.- № 1 (16).- С. 149-153.

5. Абросимова Н.А. Корма и кормление молоди осетровых рыб в индустриальной аквакультуре// Диссертация в виде научного доклада на соискание ученой степени д.б.н.- М.: ВНИИ1 IPX, 1997.- 76 с.

6. Абросимова Н.А., Абросимов С.С., Саенко Е.М. Кормовое сырье и добавки для объектов аквакультуры.- Ростов-на-Дону:«Эверест», 2005.-144 с.

7. Абросимова Е.Б. Влияние аммиака в крови бестера на ее состояние/Актуальные проблемы современной науки и образования: Межвуз. сб. научн. тр. Ростов-на-Дону: изд-во РГУ, 2006. - С. 205-207.

8. Абросимова Е.Б., Абросимова К.С. Диагностическое значение физиолого-биохимических показателей при некоторых заболеваниях рыб//Сб. научных тр. «Наука, техника и высшее образование: проблемы и тенденции развития»: изд-во РГУ, 2006. С. 187-194.

9. Абросимова Н.А., Абросимов С.С. Кормовая добавка для рыб// Патент на изобретение № 2310338. 2007 г.

10. Абросимова Е.Б. Направленность обмена веществ при некрозе жабр у молоди бестера// Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Естественные науки.- 2009.- № 2.- С. 82-84.

11. Алексеенко А.В. Роль метаболитов сфингомиелинового цикла в проведение сигналов пролиферации, дифференцировки и смерти клеток// Биологические мембраны.- 1999.- Т. 6.- № 2.- С. 242.

12. Алимова Е.К., Аствацатурьян А.Т., Жаров А.В. Избранные лекции по биохимии липидов. Ростов-на Дону, 1974 С. 52-61.

13. Алимова Е.К., Аствацатурьян JT.T., Жаров JT.B. Липиды и жирные кислоты в норме и при ряде патологических состояний. М.: «Медицина». -1975.-С. 110.

14. Андроников С.Б., Иванов Э.В., Лукина Т.М., Шестерин И.С. Методика определения токсичности водной среды по изменениям жаберного аппарата рыб/ Избранные труды ВНИИПРХ (в четырех томах).- Дмитров: «Север Подмосковья», 2002.- Кн. 1.- Т. 1-2.- С. 509-512.

15. Апазиди JI.X. Жаберная гниль карпа и меры борьбы с ней/ Сб. Рыбная промышленность.- М., I960.- № 55.- С. 47-49.

16. Апазиди Л.Х. Жаберная гниль у карпа в некоторых рыбхозах РСФСР/ Сб. тр. ВНИИПРХ.- М.: ВНИИПРХ, 1961.- Т. 10.- С. 24-28.

17. Ассман А.В. Некоторые данные о влиянии различных условий питания на морфологический состав крови сазана/ Вопросы ихтиологии, 1960. -Вып. 15. С. 148-165.

18. Ахмеров А.Х. О природе бранхионекроза рыб. В кн.: Совещание по болезням рыб (тезисы докладов).- Л., 1957.- С. 7-8.

19. Ахмедов А.А. Активность сукцинатдегидрогеназы — биохимический тест при отравлении рыб// Методы ихтиотоксикологических исследований.- Л., 1987.- С. 9-10.

20. Балаховский С.Д., Балаховский И.С.// Методы клинического анализа крови.- М., 1953.

21. Баранов С. А. и др. Незаразная форма жаберного некроза -проявление экологического токсикоза// Тез. докл. семинара. О новых и передовых методах борьбы с болезнями рыб в рыбоводных хозяйствах Минрыб-хоза СССР. М., 1977. - С. 12-15.

22. Бауэр О.Н., Мусселиус В.А., Стрелков Ю.А. Болезни прудовых рыб,- М.: Колос, 1969.- 332 с.

23. Бауэр О.Н., Мусселиус В.А., Николаева В.М., Стрелков Ю.А. Их-тиопатология.- М.: Пищевая промышленность, 1977.- 430 с.

24. Биологический энциклопедический словарь/ Гл. ред. М.С. Гиляров. Редкол.: А.А. Баев, Г.Г. Винберг, Г.А. Заварзин и др. М.: Сов. Энциклопедия, 1986.-831 с.

25. Биохимические методы исследований в клинике: Справочник под ред. проф. Покровского.- М.: Высшая школа, 1969. 294 с.

26. Богдан В.В., Немова Н.Н., Руоколайнен Т.Р. Влияние ртути на состав липидов печени и мышц окуня Perca Fluviatilis // Вопросы ихтиологии -2002. Т. 42. - № 2. - С. 259-263.

27. Бондаренко Л.Г., Скляров В .Я., Бахарева А.А., Хаблюк В.В. К вопросу о потребностях осетровых в витаминах группы В// Международный симпозиум по марикультуре. Тезисы докладов. Краснодар-Небуг. М.: ВНИРО, 1995.-С. 48-50.

28. Бурлакова Е.Б., Алексеенко А.В., Аристархова С.А. и др. Механизмы реактивации липидзависимых ферментов при патологических состояниях// Липиды биологических мембран.- Ташкент, 1982. С. 16-23.

29. Бурлакова Е.Б., Сторожок Н.М., Храпова Н.Г. Исследование роли функциональных групп в действии фосфолипидов как синергистов окисления// Биологические мембраны. 1990. - Т. 7.- № 6.- С. 612-617.

30. Бурлакова Е.Б., Аристархова С.А., Федорова Л.В., Шелудченко Н.И., Шишкина Л. Н. Роль липидов в процессе передачи информации в клетке//Биологические науки. 1991.- Т. 333.- Вып. 9. - С. 21-24.

31. Бурлаченко И.В. Теоретические и прикладные аспекты повышения резистентности осетровых рыб в аквакультуре// Автореф. дисс. док. биол. наук.- М.: 2007. ВНИРО. - 46 с.

32. Ванятинский В.Ф., Мирзоева Л.М., Поддубная А.В. Болезни рыб.-М.: Пищевая промышленность, 1979.- С. 218-220.

33. Васильева Л.М., Пономарев С.В., Судакова Н.В. Кормление осетровых рыб в индустриальной аквакультуре.- Астрахань: Волга, 2000.- 86 с.

34. Васнецов В.В. Этапы развития костистых рыб // Тр. АН СССР. Очерки по общим вопросам ихтиологии. 1957. - С. 56-72.

35. Вербицкая И.Н., Гусева Н.В., Лаптев В.И., Мусселиус В.А. Основные болезни прудовых рыб.- М.: Колос, 1972.- 72 с.

36. Виноградов Г.А., Матей В.Е., Даль Е.С. Влияние Са на минеральный обмен и ультраструктуру жабр у пресноводных рыб// Реакция гидробио-нтов на загрязнение. М.: Наука, 1983.- С. 199-206.

37. Виноградов В. К. Биологические основы разведения и выращивания растительноядных рыб и новых объектов акклиматизации// Автореферат на соиск. уч. ст. д. б. н. М., 1985. - С. 72.

38. Вихляева И.А. Показатели крови молоди осетровых при жаберном заболевании// Международная конференция «Осетроводство на рубеже 21 века». Тезисы докладов. Астрахань: изд-во КаспНИРХ, 2000. - С. 129.

39. Вихман А.А. Иммунофизиологический статус рыб — объектов аква-культуры/ Избранные труды ВНИИПРХ (в четырех томах).- Дмитров: «Север Подмосковья», 2002.- Кн. 1.- Т. 1-2.- С. 462-466.

40. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М., 1972. — 143 с.

41. Гершанович А.Д., Пегасов В.А., Шатуновский М.И. Экология и физиология молоди осетровых.- М.: Агропромиздат, 1987.- 215 с.

42. Гершанович А.Д., Ланин В.И., Шатуновский М.И. Особенности обмена липидов у рыб // Успехи современной биологии.- 1991.- Т. 111.- вып. 2.-С. 207-219.

43. Головин П.П. Стресс у рыб/ Избранные труды ВНИИПРХ (в четырех томах).- Дмитров: «Север Подмосковья», 2002.- Кн. 1.- Т. 1-2.- С. 456458.

44. Головина Н.А. К морфологии клеток белой крови двухлетних карпов //Тр. ВНИИПРХ. М.: Пищевая промышленность, 1976. - Т. 26. - С. 116120.

45. Головина Н.А. Морфологический анализ клеток крови карпа в норме и заболеваниях. Автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. биол. наук.- М., 1977.- 24 с.

46. Головина Н.А., Тромбицкий И.Д. Гематология прудовых рыб. -Кишинев: Штиинца, 1989.-159 с.

47. Головнев Л.Н., Екельчик Р.З. О выделении возбудителя жаберного некроза карпа и его свойствах/ В сб. трудов ВНИИПРХ: Паразиты, болезни рыб и их профилактика,- М.: Пищевая промышленность, 1978.- Т. 27.- С. 5865.

48. Голодец Г.Г. Состав крови выращиваемой молоди осетра, леща и судака// Вопросы ихтиологии, 1954. Вып.2. - С. 114-119.

49. Грибанов Г.А. Особенности структуры и биологическая роль лизо-фосфолипидов// Вопросы медицинской химии.- 1991. — С. 2-10.

50. Драбкина Б.М. Физиологическая оценка (по показателям крови) молоди осетра, выращиваемой в искусственных условиях // Тр. Саратовского отдел. Касп. фил. ВНИРО. Саратов, 1953. - Т.2. - С. 173-185.

51. Житенева Л.Д., Полтавцева Т.Г., Рудницкая О.А. Атлас нормальных и патологически измененных клеток крови рыб. Ростов н/Д: Кн. изд-во, 1989.- 112 с.

52. Житенева Л.Д., Рудницкая О.А., Калюжная Т.И. Эколого-гематологические характеристики некоторых видов рыб // Справочник.- Ростов на - Дону: «Молот», 1997. - 152 с.

53. Житенева Л.Д. Экологические закономерности ихтиогематологии. — Ростов-на-Дону: АзНИИРХ, 1999.-37 с.

54. Иванов Э.В., Кинг А.Г., Мирзоева Л.М., Шестерин И.С. Экспериментальное моделирование экологических условий, приводящих к жаберному некрозу карпа/Жур. Рыбное хозяйство, 1976.- № 1.- С. 25-26.

55. Иванова Н.Т. Материалы к морфологии крови рыб. — Ростов-на-Дону: РГПИ, 1970. 136 с.

56. Иванова Н.Т. Атлас клеток крови рыб. Сравнительная морфология и классификация форменных элементов крови рыб. — М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983. — 193 с.

57. Калашников Г.Н. Состав крови осетровых рыб в связи с обменом на различных стадиях полового цикла: Уч. зап. МГУ / Гидробиология. Вып. 33.- 1939.- Т. 33.-С. 65-103.

58. Канаев А.И. Словарь-справочник ихтиопатолога.- М.: Росагропром-издат, 1988.-304 с.

59. Канидьев А.Н. «Биологические основы искусственного развития лососевых рыб». -М.: Легкая и пищевая промышленность,!984.- 216 с.

60. Капитонов А.Б., Грибанов Г.А., Акарова Э.А., Бондарева Е.В., Кулакова С.Н. Изменение липидного состава мембран митохондрий в ходе сук-цинатоксидазной реакции// Клиническая лабораторная диагностика.- 1990.-№ 3.- С. 56.

61. Карагезян К.Г., Овсепян Л.М., Адонц К.Г. Окислительные процессы и обмен фосфолипидов в мембранных структурах гепатоцитов при аллок-сановом диабете// Клиническая лабораторная диагностика.- М., 1990.- № 4. -С. 10.

62. Кесельман М.Л., Милютина Н.П., Кузнецова Л.Я., Ракитский В.Н. Свободнорадикальные процессы в механизме действия и диагностике пести-цидной интоксикации ихтиофауны,- Ростов н/Д: Изд-во «Гефест», 1997. С. 120.

63. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. СПб: Питер Ком, 1999.- 512 с.

64. Кожемякин Л.А., Коростовцев Д.С., Королева Т.Р. Циклический аденозин-3,5-монофосфат в организмах и тканях в процессе адаптации организма к экстремальным воздействиям// Бюллетень экспериментальной биологии медицины 1977.- № 11.- С. 567-568.

65. Козлов Ю.П., Данилов B.C., Каган В.Е., Ситковский М.В. Свобод-норадикальное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Изд-во МГУ, 1972.-88 с.

66. Козлов В.И., Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Аквакульту-ра.- М.: МГУТУ, 2004. 433 с.

67. Кокоза А.А. Состояние искусственного воспроизводства осетровых в Волго-Каспийском регионе и меры по его интенсификации/ Дис. на соиск. учен. степ, д-ра биол. наук. — М., 2002. 288 с.

68. Констатинов А.С., Пелипенко М.Ю. О возможности использования цеолитов для удаления токсических продуктов азотистого обмена у рыб// Вопросы ихтиологии. 1983.- т. 23, вып. 6. С. 1040-1042.

69. Коробейникова Э.Н. Модификация определения перекисного окисления липидов в реакции с тиобарбитуровой кислотой// Лабораторное дело.-1989.-№7.- С. 8-10.

70. Крепе Е.М. Липиды клеточных мембран.- Ленинград: «Наука», 1981.-С. 116-122.

71. Кулов Г. Эпизоотологическое состояние рыб в ГДР и задачи их-тиопатологических исследований// Рыба, болезни и среда в европейской поликультуре: Сб. докл. международ, семинара. Сарваш, Венгрия. - 1981. - С. 618-527.

72. Лескова Г.Ф. Роль нарушений липидного обмена в патогенезе гем-морагического шока и пути их коррекции.// Успехи современной биологии — 2001.-Т.121.- №1.- С. 79-90.

73. Линник В.Я., Мамыш Т.И., Лаговская B.C. Этиология жаберного заболевания рыб в Белоруссии// 1 Всесоюзный симпозиум по инфекционным болезням рыб. Тезисы докладов. М., 1972.- С. 65-67.

74. Линник В.Я., Мамыш Т.И. Жаберное заболевание карпа и его профилактика/ Науч.-техн. информация по сельскому хозяйству. М. - 1975. - № 3. - С. 24-26.

75. Лопухина A.M. Материалы по этиологии и эпизоотологии жаберного заболевания карпа/ Известия ГосНИОРХ. Инфекционные болезни рыб и борьба с ними.- Л.: ГосНИОРХ, 1969.- Т. 69.- С. 124-137.

76. Лукьяненко В.И. Общая ихтиотоксикология. 2-е изд. перераб. и доп. - М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983. - 320 с.

77. Ляйман Э.М. Курс болезней рыб.- М.: Высшая школа, 1966.- 325 с.

78. Малер Г., Кордес Ю. Основы биологической химии: Пер. с англ/ под ред. Баева А.А.- М.: Мир, 1970.- 567 с.

79. Малик Э., Олах Я. Влияние качества воды и корма на содержание NH4 -N в крови карпов //Рыба, болезни и среда в европейской поликультуре: -Сб. докл. международ, семинара. Сарваш, Венгрия, 1981. - С. 354-370.

80. Маликова Е.М. О необходимости физиологического контроля при искусственном выращивании молоди лососевых на рыбоводных заводах // Труды ВНИРО.- М., 1977.- Т. 126.- С. 89-94.

81. Мамонтов Ю.П., Литвиненко А.И. Аквакультура в пресноводных водоемах России. Тюмень: ФГУП Госрыбцентр, 2007. - 35 с.

82. Мамыш Т.Н., Линник В.Я. Использование реакции гемагглютина-ции при жаберном заболевании рыб. В кн.: 6 Всесоюзное совещание по болезням и паразитам рыб (тезисы докладов).- Л., 1974.- С. 159-162.

83. Марченко A.M. Микозы рыб и причины их возникновения// Труды Зоол. ин-та АН СССР: Вопросы паразитологии и патологии рыб.- Л.: Зоол. ин-т АН СССР, 1987.- Т. 171.- С. 82-90.

84. Масленникова Е.И. Профилактика жаберного заболевания карпа при выращивании в садках // Вопросы рыбного хозяйства Белоруссии.-Вып.11.- Минск: Ураджай, 1975 С. 187-189.

85. Метелев В.В., Канаев А.И., Дзасохова Н.Г. Водная токсикология.-М.: Колос, 1971.- С. 79-84.

86. Мусселиус В.А., Чернышев З.А. О возможных путях передачи жаберного заболевания карпа/ Сборник научных трудов ВНИИПРХ. Интенсификация прудового рыбоводства.- М., 1974.- (вып. 11).- С. 288-296.

87. Мусселиус В.А., Вихман А.А., Иванова Н.С., Мирзоева Л.М., Под-дубная А.В. Жаберный некроз карпа/ Рыбное хозяйство, 1976.- № 1.- С. 2224.

88. Мусселиус В.А. Жаберный некроз карпа. В кн.: Рыба, болезни и среда в европейской поликультуре.- Сарваш, Венгрия; 1981.- С. 449-460.

89. Муселиус В.А. Борьба с болезнями рыб в промышленном рыбоводстве: В сб. науч. тр. ВНИИПРХ «Комплексная интенсификация товарного рыбоводства».- М.: Изд-во ВНИИПРХ, 1982.- С. 60-78.

90. Нагайцев А.В., Новицкий С.В, Новицкая Т.В., Вавилкин Д.А., Се-ребров В.Ю. Соотношение компонентов сфингомиелинового цикла и состав липидов у больных вирусными гепатитами// Клиническая лабораторная диагностика, 2002. № 8. - С. 3-5.

91. Нусенбаум Л.М. О клетках крови эмбрионов и личинок лосося // Докл. АН СССР. 1954.- Т.97.- № 3.- С. 555-557.

92. Олах Я., Фаркаш Й., Енеи Г., Енеи Ж., Малик Э. Роль стресса в бактериальном жаберном некрозе карпа/ В сб. ин-та рыборазведения, Сарваш, ВНР: «Болезни и паразиты рыб в тепловодном рыбном хозяйстве».-Душанбе: Дониш, 1988.- С. 37-42.

93. Олифан В.И. Закономерность возрастных изменений в физиологии личинок и мальков рыб и их значение для рыбоводства // Теоретические основы рыбоводства. М.: Наука, 1965. - С. 155-164.

94. Осетров B.C. Справочник по болезням рыб.- М.: Колос, 1978.- 398с.

95. Остроумова И.Н. Показатели крови и кроветворения в онтогенезе рыб. Изв. ГосНИОРХ, 1957. - Т. 43.- № 3. - 69 с.

96. Остроумова И.Н. Влияние разных кормов на кровь и кроветворение у ранней молоди семги // Известия ГосНИОРХ.- JL: ГосНИОРХ, 1964.- Т. -С. 98-107.

97. Панчихина Ж.А. Рыбоводно-биологическая эффективность природных цеолитов в комбикормах для молоди бестера/ Дис. на соиск. ст. к.б.н.- Ростов-на-Дону, 2001.- 100 с.

98. Петрусевич Ю.М., Коссова Г.В., Колье О.Р. Сверхслабые свечения в биологии. М.: Наука, 1972. 133 с.

99. Пономарев С.В., Пономарева Е.Н. Биологические основы разведения осетровых и лососевых рыб на интенсивной основе: Моногр. / Астрахан. Гос. Тех. Ун-т. Астрахань: Изд-во АГТУ, 2003. - 256 с.

100. Попкова Т.И., Щелкунов И.С. Выделение вируса от карпов, больных жаберным некрозом.- Рыбное хозяйство, 1978.- № 7.- С. 34-38.

101. Проссер JI. Сравнительная физиология животных: перевод с англ./ Под ред. JI. Проссера.- М.: Мир, 1977.- 509 с.

102. Пучков Н.В. Физиология рыб.- М.: Пищепромиздат, 1954.- 371 с.

103. Ржавская Ф.М. Жиры рыб и морских млекопитающих.- М.: Пищевая промышленность, 1976.- С. 204-223.

104. Рипатти П.О., Рабинович A.JI. О роли докозагексаеновой кислоты в биологических мембранах // Тез. докл. IV Всесоюзн. конф. по эколог, физиологии и биохимии рыб.- Вильнюс, 1986.- С. 203-204.

105. Ромер А., Парсонс Т. Анатомия позвоночных: в 2-х т. Т. 2: Пер. с англ.- М.: Мир, 1992.- С. 39-56.

106. Саутин Е. Ю. Проблема регуляции адаптационных изменений ли-погенеза, липолиза и транспорта липидов у рыб // Успехи современной биологии. 1989. Т. 107. Вып. 1. - С. 131-149.

107. Сборник инструкций и нормативно-методических указаний по промышленному разведению осетровых рыб в Каспийском и Азовском бассейнах. М, 1986.- С. 263.

108. Семенова Н.В., Триленко В.А. Об этиологии жаберного заболевания карпа/ Тезисы докл. VI Всес. Совещания по болезням и паразитам рыб.-М., 1974.-С. 226-229.

109. Сергеева Н.Т., Жданов Ю.И., Котельникова JI.A. Обмен жирных кислот и индивидуальных фосфолипидов у форели, выращиваемой на комбикормах РГМ-5В и РГМ-13В//Биологические основы рационального кормления рыб. М., 1986.-С. 132-140.

110. Сидоров B.C. Экологическая биохимия рыб. Липиды.- Л.: Наука, 1983.- 240 с.

111. Смирнова Л.И. Изменение картины крови у рыб при пищеварении // Вопр. ихтиол. 1965.- Т.5. - Вып. 1 (34).- С. 149-156.

112. Смит Л.С. Введение в физиологию рыб/ Перевод с англ. В.И. Лапина.- М.: Агропромиздат, 1986.- 168 с.

113. Соколов В.В., Грибова И.А. Гематологические показатели здорового человека. М.: Медицина, 1972. - 104 с.

114. Сорвачев К.Ф. Основы биохимии питания рыб. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982.- 247 с.

115. Стратегия развития аквакультуры в Российской Федерации на период до 2020 г. -М.: Росинформагротех, 2007.- 34 с.

116. Строганов Н.С. Методика определения аммиака при изучении обмена веществ у рыб/ Сб. статей «Руководство по методике исследований физиологии рыб»/ Под ред. Е.Н. Павловского.- М.: Изд-во АН СССР, 1962.- С. 127-133.

117. Строганов Н.С. Акклиматизация и выращивание осетровых рыб в прудах.- М.: Изд-во МГУ, 1968.- 377 с.

118. Титов В.Н. Становление в филогенезе поглощения клетками жирных кислот//Успехи современной биологии. — 1999. — Т. 119.- № 6. — С. 578589.

119. Успенская А.В. Влияние Dactylogyrus vastator Nybelin на организм карпа.- Зоологический журнал, 1961.- Т. 40.- Вып.1.- С. 67-72.

120. Хоар У., Рендолл Д., Бретт Дж. Биоэнергетика и рост рыб: Пер. с англ.- М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983.- 407 с.

121. Цхакая Н.Ш., Квашали Н.Ф. Японский опыт по использованию природных цеолитов.- Тбилиси: Мецниереба, 1985.- С. 85-92.

122. Чуйно Ф.Е. Влияние круглогодичной эксплуатации прудов на развитие бранхионекроза у карпа и на рыбоводные показатели// Проблемы развития рыбоводства в Белорусской ССР и Прибалтийских республиках. Тез. докл. научно-практич. конф. Минск, 1981.- С. 88-89.

123. Шабалина А.А., Князева Л.М. Изменение количества гемоглобина в крови радужной форели в зависимости от рациона, возраста, веса и стадии зрелости // Изв. ГосНИОРХ. 1969.- Т.68.- С. 136-141.

124. Шестерин И.С., Розова Т.Л., Богданова Л.А., Глазачева И.В., Иванов Э.В./ Инструкция по химическому анализу воды прудов.- М.: ВНИИ!IPX, 1984.- 50 с.

125. Шилина Н.М., Конь И.Я. / Вопросы детской диетологии, 2003. Т. 1.- № 4. - С. 53-57.

126. Шталь Э. Хроматография в тонких слоях.- М.: Мир, 1965.- 633 с.

127. Шульман Г. Е., Юнева Т. В. Докозагексаеновая кислота и ненасыщенность липидов у рыб.// Гидробиологический журнал.-1990.- Т. 26.- № 6.-С. 50-55.

128. Щелкунова Т.И., Щелкунов И.С. Некоторые свойства вируса, выделенного от карпов, больных некрозом жабр/ Тезисы докл. VII Всесоюзного совещания по болезням рыб.- Л., 1979.- С. 119.

129. Щелкунов И.С. Некроз жабр рыб/ Рыбное хозяйство: экспресс-информация.- М: ЦНИИТЭИРХ, 1988.- № 4.- 22 с.

130. Щелкунов И. С. и др. Иридовирус карпа: вирулентность и связь с некрозом жабр.// Вопр. рыбн. хоз-ва Белоруссии. Минск; Ураджай, 1988; Вып. XXIV. - С. 120-130.

131. Щербина А.К. Болезни рыб.- К.: Урожай, 1973.- С. 137-188.

132. Щербина М.А. Методические указания по физиологической оценке питательности кормов для рыб. М: ВАСХНИИЛ, 1983.- 83 с.

133. Щербина М.А., Гамыгин Е.А. Кормление рыб в пресноводной ак-вакультуре.- М.: Изд-во ВНИРО, 2006.- 360 с.

134. Abrosimova N.A., Abrosimov S.S., Biryukova А.А. Gill necrosis in sturgeons prevention and healing. Extended Abstracts 4th International Symposium on Sturgeon. Oshkosh, Wisconsin, USA, 2001. P. 14.

135. Bekesi L. et al. Studies on gill necrosis complex// Fish, Pathogens and Environment in European Polyculture. The proc. Intern, seminar. Szarvas, Hungary, 1981.-P. 461-465.

136. Brockway O.K. Metabolic products and their effects // Prog. Fish-Cult, 1950. V.12. - № 3. - P. 127-129.

137. Burrows R.E. Effects of accumulated excretory products on hatchery -reared salmonids// U.S. Dept. Intern. Fish and Wildlife Service Res. Rep. 1964. -N66.-P. 1-12.

138. Carr F.H., Prince E.A. Color reactions attributed to vitamin A//Bi-ochem.- 1926.-Vol.20.- P. 497-500.

139. Cowey C.B. Aspects of protein utilization by fish.- Proc. Nutr. Soc.-1975.-№ 34.-P. 57-63.

140. Farkas J. Filamentous Flavobacterium sp. isolated from fish with gill diseases in cold water//Aquaculture. 1985. - V. 44. - N 1. - P. 1-10.

141. Flis J. Anatomic-histopathological changes induced in carp (Cyprinus carpio L.) by ammonia water. I. Effects of toxic concentrations; II. Effects of sublethal concentrations// Acta Hydrobiologica. 1968. - V. 10. - N 2. - P. 205-224, 225-238.

142. Fijan N. Bolestii neprijatelji riba// Sladkovodno ribarstvo. — Zagreb-Jumena: Ribozajednica, 1982. P. 439-513.

143. Folch J., Less M., Sloane K., Stanley Z. A Simple method for the isolation and pyrification of total lipids from animal tissues // J. Biol. Chem. 1957. -Vol. 226.-№ i.p. 497-510.

144. Golovin P. P., Golovina N. A. Candidomicosis in young fish. 8 Intern, conf. «Diseases offish and shellfish» Book Abstracts. Palma de Mallorca, Spain. 1995.-P. 31.

145. Hudson B.J.F., Mahgoul S.E.O // J. Sci. Food Agric.- 1981.- V.32.- P.208.

146. Ilea S. Ges. inn Med.- 1962.- V. 17.- № 2.- P. 83.

147. Isao Schuja, Hiroca Hond, Bunyc Maruc// Agr. and Biol. Chem., 1967.-№31.-P. 1.

148. Kanazawa A.//Nutrition and feeding in fish.- L.: Acad. Press, 1985.- P.280.

149. Kocyiowski B. Choroby ryb powstajace w zwiasky z nawozeniem sta-wow// Gospodarka rybna.- 1970.- № 8.- P. 3-5.

150. Kocyiowski B. Wplyw czynnikow srodowisrowych na zapalenie zgor-zelinowe skrzeli karpia. Gospodarka rybna, 1972.- № 1.- P. 9-11.

151. Kovacs-Gayer E. Histopathological differential diagnosis of gill changes with special aspect of gill necrosis// Fish, Pathogens and Environment in European Polyculture: The proc. Intern, seminar. Szarvas, Hungary, 1981. - P. 493-505.

152. Maetz J. Fihs gills: mechanisms of salt transfer in freshwater and sea water// Phil. Trans. Roy. Soc.- London, 1971.- P. 209-249.

153. Miaczynski T.B. Viral diseases and diseases of uncertain etiology in fish in Poland// Ann. N.Y.Acad. Sci. 1965. - V. 126. - P. 620-628.

154. Olah J. et al. Kopoltyunekrozis. Kornyezet stressz, korokozo. Szarvas, Hungary, 1982. - 348 p.

155. Peters G., Hoffmann R., Klinger H. Environment-induced gill disease of cultured rainbow trout (Salrno gairdneri)/ Aquaculture. 1984. - V. 38. - N 1. -P. 105-126.

156. Sauberlich E., Schreckenbach K. Produktion einsommeriger Karofen (Ki) mit technischer Beluftung in Kuhteich Torgau und ihr Einfluss auf den Ge-sundheitszustand der Fische// Z. Binnenfisch. DDR, 1982. Bd 29. - H. 7. - P. 201203.

157. Sontull A.D., Ancon G.D., Amelio V. Mitochondrial enzymes (succinic dehydrogenase and cytochrome oxydase) activittes and free carnitine levels in te-leostea and selachian skeletal muscle// Rev int. Ceanorg. Med., 1998.- P. 91-92.

158. Schreckenbach K., Spangenberg R., Krug S. Die Ursache der Kiemen-nekrose. Zeitscher. Binnenfischerei DDR, 1975.- № 9.- P. 257-288.

159. Schreckenbach K., Spangenberg R. PH-Wert-abhangige Ammoniak-vergiftungen bei Fishen und Moglichkeiten ihrer Beeinflussung // Z. Binnenfish. DDR.- 1978.- Bd. 25.- H. 4.- P. 115-122.

160. Spangenberg R. Orientierende Untersuchungen uber das Vorkommen von Myxobakterien bei der Kiemennekrose das Karpfenq//Z. Binnenfisch. DDR. -1975. Bd 22. - H. 4. - P. 121-127.

161. Stickney R.R., Shumway S.E. Occurrens of cellulose activity in the stomachs of fishes.- Fish Biology.- 1974.- № 6.- P. 779-790.

162. Svobodova Z. et al. Taxikologie vodnfch zivocichft. CSSR, 1987.232 p.

163. Takeuchi Т., Watanabe T.//Bull. Japan. Soc. Sci. Fish.- 1982.- V.48.-№9.-P. 1307.

164. Taylor S.L., Lamden M.P., Tappel A.L. Sensitive Fluoremtric Metod for Tissue Tocopherol analys// Lipids.-1980.- Vol.10.- N 6.- P. 407-412.

165. Tillman J., Hersch P., Jackisch J. Peduction capaeity of plant foodstuffs and the relation to vitamin C. 3. Quantity of reduction substance in Various frueits and vegetables.- Z. Lebensmitt.- Untersuch., 1932.- Bd. 63.- P. 241267.

166. Wagner K., Schneider G., Thener D. Zum Wert der Ammoniak bes-timmung nach Muller-Beissenhirtz in der Leberdiagnostik// Das deutsche Gesund-heit, 1968.- № 52.- P. 2459-2462.

167. Wakabayashi H., Iwado T. Effects of a bacterial gill disease on the respiratory functions of juvenile rainbow trout. Fish and Shellfish Pathology. -London: AP, 1985. - P. 153-160.

168. Watanabe T. Lipid nutrition of fish// Сотр. Bochem. Phisiol.- 1982.-Vol. 73.-P. 3-15.

169. Witala В., Gasionek J., Zielonka M. Wstespne obserwage nad chrobo-toworczosig Sporowca Dermocystidium. Gospodarka rybna, 1971.- № 10.- P. 910.

170. Yang Jeun-Sing, Biggs H.J. Rapid reliable method for measuring serum lipase activity// Clin. Chem. -1971.- V.17.- N 6.- P. 512- 518.

171. Yasuhira Kono. Generation of Superoxid radical during Antioxidation of Hydroxylamine and assay for SOD // Biochemistry and Biophys , 1983.- Vol. 186.-N6.-P. 119-195.