Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Оптимизация методов контроля и коррекции иммунного статуса при туберкулезе и лейкозе крупного рогатого скота

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Оптимизация методов контроля и коррекции иммунного статуса при туберкулезе и лейкозе крупного рогатого скота"

На правах рукописи

484Уи ю

ВЛАСЕНКО Василий Сергеевич

ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДОВ КОНТРОЛЯ И КОРРЕКЦИИ ИММУННОГО СТАТУСА ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ И ЛЕЙКОЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

'"»»го

п

Казань-2011

4849018

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте бруцеллеза и туберкулеза животных Россельхозакадемии

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Бажин Михаил Аристоклевич

Официальные оппоненты:

- доктор ветеринарных наук, профессор Садыков Н.С.;

- доктор ветеринарных наук, профессор Сафин М.А.;

- доктор биологических наук Букова Н.К.

Ведущая организация: - Уральский научно-исследовательский ветеринарный институт РАСХН (г. Екатеринбург).

Защита состоится «28» июня 2011 г. в « 1000» часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при Федеральном центре токсикологической и радиационной безопасности животных (420075, Россия, Казань, Научный гор.-2)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального центра токсикологической и радиационной безопасности животных

Автореферат разослан «_»_2010 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, к.в.н.

Степанов В.И.

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Туберкулез до настоящего времени остается одним из самых распространенных зооантропонозных заболеваний, передающегося от больных животных человеку, и в зонах распространения причиняет огромный социальный и экономический ущерб. Несмотря на достигнутое значительное улучшение эпизоотической обстановки в стране некоторые ее регионы остаются неблагополучными по туберкулезу крупного рогатого скота и, в связи с этим, не исключена возможность заноса возбудителя этого заболевания в хозяйства благополучных зон (A.C. Донченко, В.Н. Донченко, 1994; В.Г. Ощеп-ков, 2001, 2007; Ю.И. Смолянинов с соавт., 2003; А.Х. Найманов с соавт., 2009; Н.М. Колычев, 2010 и др.).

В системе мер борьбы с туберкулезом особое место отводится иммунодиагностике и иммунопрофилактике. Вопросы совершенствования методов и средств специфической профилактики обстоятельно освещены в нашей стране в научных трудах М.Н. Верещагина (1926), П.П. Вишневского (1927), В.Н. Матвеева (1936), A.M. Говорова (1954), H.A. Александрова (1975), Х.К. Гизату-лина, М.А. Сафина (1980), М.А. Сафина (1982, 1983, 1985), Д.Д. Новака (1984), Б .Я. Хайхина с соавт. (1984), А.И. Кузина (1987), A.C. Донченко (1983, 1995), H.A. Донченко (2008) и других ученых. Данные многих научных исследований и результаты практического применения вакцинопрофилакгики в общем комплексе противотуберкулезных мер указывают на довольно высокую ее эффективность. Применяемая живая вакцина БЦЖ, позволяет сократить сроки оздоровления ферм с меньшими материальными затратами, однако при этом создаются трудности в диагностике туберкулеза (длительные поствакцинальные реакции на взрослом скоте).

Необходимость в ряде угрожаемых и неблагополучных по туберкулезу хозяйств создания у животных перманентного (постоянного) противотуберкулезного иммунитета (в течение 4-6 лет) без длительного проявления кожной сенсибилизации требует создания новых экологически безопасных молекулярных вакцин.

Одной из наиболее важных задач иммунологии является поиск путей и средств целенаправленной регуляции иммуногенеза. Для более эффективного восстановления реактивности у животных можно использовать специфические иммуномодуляторы, позитивно воздействующие на систему иммунитета и не осложняющие контроль за туберкулезной инфекцией в стадах. Такие молекулярные препараты могут быть созданы на основе конъюгации антигенов, выделенных из вакцинного штамма БЦЖ, с полимеразной матрицей.

Разработка новых молекулярных вакцин и иммуномодуляторов и способов их применения в животноводстве обязывает вести контроль за здоровьем животных. Наиболее информативные в этом плане иммунологические методы оценки. Следовательно, оптимизировать существующие иммунологические методы с целью контроля и коррекции иммунного статуса, а также при изучении инфекционной патологии животных перспективно.

Лейкоз крупного рогатого скота в настоящее время распространен во многих субъектах Российской Федерации и составляет в структуре инфекционных

заболеваний 62,7%. Ежегодно регистрируют несколько тысяч неблагополучных пунктов, в которых выявляют более 1,2 млн. особей, зараженных вирусом лейкоза крупного рогатого скота, из них до 100 тыс. - в гематологической стадии, лейкоза (П.Н. Смирнов с соавт., 1992; М.И. Гулюкин с соавт., 2002, 2005; Ю.П. Смирнов с соавт., 2008).

Изучение иммунологических аспектов при инфекции ВЛКРС и лейкозе крупного рогатого скота остается весьма актуальной проблемой ветеринарной лейкозологии и необходимо для объективной оценки при проведении диагностических исследований на лейкоз.

Не вызывает сомнения тот факт, что возникновение нарушений функций иммунной системы является одним из патогенетических механизмов при возникновении туберкулеза и лейкоза крупного рогатого скота. Однако при изучении иммунного статуса существенные изменения уровней иммунологических показателей отмечаются лишь у части больных, при этом по уровням отдельных параметров какие-либо закономерные нарушения в иммунной системе выявить не удается. Контроль за изменениями может осуществляться с помощью математического моделирования состояний, сущность которого состоит в том, что в системе выделяются несколько доминирующих для того или иного состояния компонентов и создают на их основе математическую модель, которая представляет собой уравнение или систему уравнений, связывающие несколько показателей в единое целое (Г.И. Марчук, Р.В. Петров, 1982; Г.И. Марчук, JI.H. Белых, 1986). В настоящее время имеются различные подходы по созданию интегральных показателей иммунного статуса и методов прогнозирования заболевания.

Поскольку в основе функционирования любой системы лежат связи между ее компонентами, для изучения иммунной системы Р.В. Петровым с соавт. (1983) был предложен дискретно-динамический подход, базирующийся на оценке иммунного статуса с позиции взаимосвязей между параметрами.

В последующем на основе выявленных сочетаний параметров с различными взаимосвязями в иммунной системе, составляют дифференциально-прогностические таблицы, с помощью которых прогнозируют формирование протективного иммунитета или патологии (М.А. Бажин, 1995).

Создание таких таблиц и в целом комплексное многоплановое исследование иммунного статуса крупного рогатого скота при туберкулезе и лейкозе на основе взаимосвязей актуальны и полученные в этом плане новые знания могут быть использованы при оценке развития инфекционного процесса и прогноза течения заболевания.

Цель и задачи исследования. Цель исследований состояла в оптимизации существующих и разработке новых методов контроля и коррекции иммунного статуса при туберкулезе и лейкозе крупного рогатого скота.

Для достижения намеченной цели были определены следующие задачи:

- разработать способ оценки иммунного статуса привитых животных, объективно отражающий состояние клеточного иммунитета;

- оценить противотуберкулезный иммунитет на основе взаимосвязей в системе иммунитета здоровых, вакцинированных БЦЖ, реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих и больных туберкулезом животных;

- разработать систему иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза с применением БЦЖ и молекулярной вакцины ТБЦ-2;

- разработать технологию изготовления специфического иммуномодули-рующего средства на основе антигенов микобактерий вакцинного штамма БЦЖ и полиэлектролитов и определить его протективные свойства в опытах на лабораторных животных и крупном рогатом скоте;

- разработать приемлемые для практического использования методы оценки иммунного статуса у крупного рогатого скота при лейкозе.

Связь исследований с научной программой. Диссертация выполнена в соответствии с тематическими планами НИР ВНИИБТЖ 02.01.08. «Разработать новые методы иммунологической защиты животных на основе применения молекулярных препаратов и методов оценки иммунологических феноменов» (2000-2005 гг.); 08.01.04. «Создать систему иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза с применением молекулярных вакцин. Выявить моле-кулярно-генетические аспекты паразитохозяинных отношений при туберкулезе животных и обосновать ускоренную диагностику с учетом изменчивости свойств возбудителя» (2006-2010 гг.); 08.01.05. «Провести сравнительную оценку существующих и новых методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота и усовершенствовать противолейкозные мероприятия» (2006-2010 гг.).

Научная новизна и теоретическая значимость. Впервые были изучены взаимосвязи между иммунологическими показателями (количеством нейтрофи-лов, основных форм лимфоцитов и их функциональной активностью) у здоровых, вакцинированных БЦЖ, реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих и больных туберкулезом животных. На основании проведенного иммунологического исследования с помощью дискретно-динамического метода математического анализа был разработан способ оценки иммунитета у вакцинированного молодняка крупного рогатого скота.

Модифицирована оценка функциональной активности нейтрофилов в реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест), за счет ускоренного метода визуализации. Предлагаемый способ позволяет уменьшить объем исследования крови, материальные затраты, повышает точность, а также дает возможность одновременно провести подсчет общего количества лейкоцитов.

Впервые разработаны условия применения белково-целлюлозного комплекса ТБЦ-2 в сочетании с БЦЖ на крупном рогатом скоте и дана оценка иммунного статуса животных на основе взаимосвязей в системе иммунитета.

Предлагаемая система иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза позволяет создавать у животных перманентный протективный иммунитет, что уменьшит сроки оздоровления ферм и снизит риск реинфекции в оздоровленных стадах.

Разработан способ оценки иммуномодулирующих препаратов, позволяющий тестировать способность известных или новых иммуномодулирующих средств восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность. Научная новизна разработки заключается в экспериментальной индукции иммунологической толерантности у морских свинок ПДД-туберкулином и восстановление утраченной реактивности с помощью изучаемых иммуномодуляторов.

Это достигается за счет последующей иммунизации животных вакциной БЦЖ, затем экспериментального заражения вирулентной культурой микобахтерий и на основе патологоанатомических исследований оценке препарата.

Разработана технология получения протективных специфических средств микробного происхождения из комплекса антигенов разрушенной культуры БЦЖ и неприродных полиэлектролитов. Установлено, что наиболее перспективным конъюгатом является составленный на основе комплекса антигенов разрушенной культуры БЦЖ, инкубированный с формалином, и конъюгирова-ный с ПВП в соотношении 1 мг/мл белка комплекса антигенов и 600 мг ПВП.

Разработанная технология изготовления специфического иммуномодуля-тора позволяет создавать препараты, способные восстанавливать у морских свинок утраченную иммунологическую реактивность и усиливать протектив-ные свойства вакцины БЦЖ.

Впервые изучены взаимосвязи у потомства, полученного от здоровых и коров-матерей, носителей ВЛКРС, а также у крупного рогатого скота с разной степенью компрометации к лейкозу между иммунологическими показателями.

Установлено, что наиболее стабильным признаком в иммунной системе у инфицированного или больного лейкозом крупного рогатого скота, свидетельствующим об иммунной недостаточности, является изменение общего числа лимфоцитов и Т-лимфоцитов с рецептором к эритроцитам барана.

Научная новизна исследований подтверждена 6 патентами РФ и 1 решением о выдаче патента: «Способ оценки иммунитета привитого молодняка крупного рогатого скота» №2257913 от 10.08.2005; «Способ профилактики туберкулеза» №2266753 от 27.12.2005; «Способ оценки иммуномодулирующих препаратов» №2354401 от 10.05.2009; «Способ получения специфического иммуно-модулятора» №2366455 от 10.09.2009; «Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота» №2379683 от 20.01.2010; «Способ оценки иммунного статуса крупного рогатого скота при лейкозе» №2408018 от 27 декабря 2010; «Способ определения функциональной активности нейтрофилов по реакции восстановления нитросинего тетразолия» (решение о выдаче патента на заявку №2009117416 от 5 мая 2010 г.).

Изобретению «Способ получения специфического иммуномодулятора» Отделом пищевой промышленности и биотехнологии Федерального института промышленной собственности (ФГУ ФИПС) дана высокая оценка, и оно внесено в базу «Перспективные изобретения». Информация о разработке опубликована в журнале Интеллектуальная собственность (промышленная собственность). - 2010. - №5. - С. 67.

Результаты исследований вносят существенный вклад в теорию функционирования иммунной системы во взаимосвязи параметров ее составляющих и более глубокое понимание сущности иммуно- и патогенеза туберкулеза и лейкоза животных. Полученные данные могут быть использованы не только в научно-исследовательской работе, но и в учебном процессе вузов.

Практическая значимость и внедрение результатов исследований.

Результаты научных исследований использованы для разработки методических рекомендаций, утвержденных на федеральном и региональном уровнях:

- по дискретно-динамическому анализу в оценке иммунитета;

- по методам оценки противотуберкулезного иммунитета у крупного рогатого скота на основе взаимосвязей в системе иммунитета;

- по системе противоэпизоотических мероприятий по профилактике и ликвидации хронических болезней животных;

- по оценке иммуномодулирующих свойств препаратов на их способность восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность;

- по оценке иммунного статуса у крупного рогатого скота при лейкозе.

Материалы по разработке системы иммунной захциты крупного рогатого

скота от туберкулеза с применением БЦЖ и молекулярной вакцины ТБЦ-2, рассмотрены и одобрены НТС Главного управления сельского хозяйства администрации Омской области, протокол №6 от 29.11.2002 г.

Разработаны технические условия, временное наставление по применению специфического иммуномодулятора микробного происхождения (КИМ-М), временный регламент по изготовлению лабораторного образца иммуномодули-рующего средства (2010 г.).

Основные теоретические положения и экспериментальные данные, изложенные в диссертационной работе и монографии «Иммунология, микробиология, эпизоотология бруцеллеза и туберкулеза животных», используются в программах обучения студентов по курсам микробиологии, иммунологии и патофизиологии на факультете ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Уральская государственная сельскохозяйственная академия»; по курсам микробиологии, иммунологии и эпизоотологии в Институте биотехнологии и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Тюменская государственная сельскохозяйственная академия».

Получены: золотая медаль «Innovations for investments to the future» «Центра Международного Делового Сотрудничества» Американо-Российского Делового Союза (ARBU) за «Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота» (2010 г.); медаль «Лауреат конкурса Золотой микроскоп» за монографию «Иммунология, микробиология, эпизоотология бруцеллеза и туберкулеза животных» (2007 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Методы оценки иммунного статуса молодняка крупного рогатого скота, привитого вакциной БЦЖ;

2. Материалы по изучению взаимосвязей в системе иммунитета у здоровых, вакцинированных БЦЖ, реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих и больных туберкулезом животных;

3. Особенности системы иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза с последовательным применением живой вакцины БЦЖ и молекулярной ТБЦ-2;

4. Технология изготовления специфического иммуномодулятора и степень его влияния на иммунный статус лабораторных животных и молодняка крупного рогатого скота;

5. Методы оценки иммунного статуса у крупного рогатого скота инфицированного ВЛКРС и больного лейкозом.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета Всероссийского научно-исследовательского института бруцеллеза и туберкулеза животных (Омск, 2000-2010), Всероссийской научной конференции по проблемам хронических инфекций (Омск, 2001), научно-практической конференции ОмГАУ (2001), Международной научной конференции посвященной 175-летию аграрной науки Сибири «Эпизоотология диагностика и профилактика хронических инфекционных болезней животных» (Омск, 2003), Международной научной конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики туберкулеза животных» (Москва, 2003), Международной научно-практической конференции посвященной 35-летаю СО РАСХН «Эпизоотология, патология и ветеринарно-санитарные мероприятия при инфекционных болезнях животных» (Омск, 2004), Международной научно-практической конференции посвященной 100-летию со дня рождения И.Г. Кондюрина «Актуальные вопросы микробиологии и инфекционной патологии животных» (Омск, 2004), 4-й межрегиональной научно-практической конференции посвященной 100-летию со дня рождения И.В. Окунцова «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Омск, 2005), Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы обеспечения ветеринарного благополучия животноводства» (Ялта, 2005), Международном научно-практическом конгрессе «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Санкт-Петербург, 2005), Международном симпозиуме, посвященном 45-летию образования ФГУ ФЦГРБ - ВНИВИ «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань, 2005), научно-практической конференции, посвященной 75-летию кафедр инфекционных болезней взрослых и детей ОмГМА «Актуальные вопросы инфекционной патологии» (Омск, 2005), 5-й межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных» (Омск, 2006), б-й межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ «Патология сельскохозяйственных животных и пути ее профилактики» (Омск, 2007), межрегиональной научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири» (Омск, 2007), 7-й межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 180-летию аграрной науки Сибири «Диагностика, лечение и профилактика болезней животных в условиях Сибири и Урала» (Омск, 2008), Х1-Й Международной научно-практической конференции «Развитие АПК Азиатских территорий» (Новосибирск, 2008), Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических зооантропонозных инфекций» (Омск, 2009), 8-й межрегиональной научно-практической конференции «Патология продуктивных и непродуктивных животных, рыб и птиц» (Омск, 2009), X Международной научно-практической конференции, посвященной памяти А.В. Копырина «Актуальные проблемы инфекционных и незаразных патологий животных» (Омск, 2010), Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инновационного развития ветеринарной науки и практики» (Алматы, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 48 научных работ, в том числе 9 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ (журналы Ветеринарная патология - 3, Ветеринария и Кормление - 3, Сибирский вестник сельскохозяйственной науки - 2, Достижения науки и техники АПК — 1), монография, методические рекомендации и патенты РФ на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 279 страницах, иллюстрирована 62 таблицами, 11 рисунками. Включает обзор литературы, материал и методы исследования, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, заключение, выводы, практические предложения, список литературы, содержащий 456 источников, в том числе 90 иностранных авторов, приложение.

Личный вклад соискателя. Работа выполнена соискателем самостоятельно, участие соавторов отражено в совместно изданных научных статьях. В выполнении отдельных этапов работы принимали участие: к.б.н. Ю.И. Папула, к.в.н. А.Н. Новиков, сотрудники ВНИИБТЖ Т.С. Дудоладова, Е.М. Шулико.

Автор приносит глубокую благодарность за оказание научно-методической помощи научному консультанту д.в.н., профессору М.А. Бажину, директору ВНИИБТЖ заслуженному деятелю науки РФ, д.в.н., профессору В.Г. Ощепко-ву, за научное руководство в аспирантуре д.в.н. H.A. Донченко.

2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в отделе проблем туберкулеза Всероссийского научно-исследовательского института бруцеллеза и туберкулеза животных секторе иммунитета и специфической профилактики туберкулеза и в хозяйствах Омской и Новосибирской областей в период 2000-2010 гг.

Объектом исследования являлись 10 тыс. гол. крупного рогатого скота разного возраста и пола, периферическая кровь и сыворотка крови 968 гол. молодняка крупного рогатого скота, нетелей и коров из благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйств, а также из неблагополучных по лейкозу хозяйств. В опытах с заражением культурой возбудителя бычьего вида использовано 189 морских свинок массой 350-400 г. ^

Лабораторных животных содержали в условиях вивария, кормление осуществляли согласно нормам рациона для лабораторных животных (Т.Е. Батрак, A.M. Кудрин, 1979). За подопытными животными вели постоянное наблюдение, в опыт брали только клинически здоровых животных. Для экспериментального заражения лабораторных животных использовали микобактерии вирулентного штамма 14 М. bovis. При анализе протективных свойств противотуберкулезных препаратов на морских свинках применяли метод С.И. Гельберг, Е.А. Финкель (1959), для оценки напряженности иммунитета использовали индекс защиты, предложенный А.И. Тогуновой (1951).

Иммунизацию животных осуществляли вакциной БЦЖ и белково-целлюлозным комплексом ТБЦ-2, приготовленным по методу М.А. Бажина с соавт. (2003). В эксперименте на морских свинках были использованы иммуно-корректоры различных классов: левамизол, полиоксидоний, ронколейкин, по-ливинилпирролидон, тималин в дозах, соответствующих инструкции по их

применению. Аллергические исследования проводили ПЦЦ-туберкулином для млекопитающих производства Курской биофабрики.

Комплекс антигенов для конъюгации с полиэлектролитами выделяли из вакцинного штамма БЦЖ, разрушенного ультразвуком на аппарате УЗДН-1 (22-35 кГц, 60-70 Вт/см2 в течение 30 мин), полученную взвесь центрифугировали и в надосадочной жидкости определяли содержание белка, способом, основанным на использовании красителя бромфенолового синего (Е.В. Лехтцинд, Д.А. Эль-горт, 1987). В объем антигенного комплекса добавляли 37%-ный или 40%-ный медицинский формальдегид, затем реакционную смесь инкубировали в термостате при 37° С и конъюгировали с поливинилпирролидоном.

Число Т-лимфоцитов определяли с помощью спонтанного розепсообразова-ния с эритроцитами барана (Е-рок); Т-киллеров - непрямого глобулинового ро-зеткообразования с эритроцитами быка (ЕА-рок); Т-антиген-реактивных лимфоцитов - туберкулинового розеткообразования с эритроцитами быка, адсорбировавшими ППД-туберкулин (ЕТ-рок); Т-антиген-реактивных лимфоцитов к вирусу лейкоза крупного рогатого скота с эритроцитами быка, адсорбировавшими антиген вируса лейкоза (ЕАГ-рок); В-лимфоцитов - комплементарного розеткообразования с эритроцитами быка (Г.Ф. Коромыслов с соавт., 1980; М.А. Бажин с соавт., 1989). Уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) методом осаждения полиэтиленглюколем (ПЭГ) с молекулярной массой 6000 (Ю.А. Гриневич, А.Н. Алферов, 1981). Функциональное состояние ней-трофилов оценивали в тесте с нитросиним тетразолием (HCT) визуальным цитохимическим методом (В.Г. Савватеева, A.B. Кочкин, 1988) в нашей модификации, а также фотометрическим методом в спонтанном без нагрузки и стимулированном с использованием вакцины БЦЖ с последующим подсчетом коэффициента стимуляции К ст. (К ст. HCT = оптическая плотность в стимулированных лунках / оптическая плотность в лунках без стимуляции) (М.А. Годков, В.Ю. Зинкин, 2003). Постановку реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) проводили по Е. Bloemence et al. (1989) с использованием микрокультур цельной крови с ППД-туберкулином и ФГА без выделения лимфоцитов. Окраску мазков крови, подсчет лейкоцитов и выведение лейкоцитарной формулы проводили по общепринятым методикам.

Для выявления серопозитивных животных - носителей вируса лейкоза крупного рогатого скота применяли реакцию иммунодиффузии (РИД) в соответствии с Методическими указаниями по диагностике лейкоза крупного рогатого скота, утвержденными ДВ МСХ РФ (М., 2000).

Серологические исследования (РИД, ЦИК) проведены на поголовье крупного рогатого скота разных возрастных групп из благополучных и неблагополучных по лейкозу хозяйств. Всего исследовано 458 животных. Для выявления больных лейкозом животных применяли гематологический метод исследования. Лейкоформулу определяли при помощи микроскопирования мазков крови. Показатель абсолютного количества лимфоцитов оценивали по «лейкозному ключу» (Методические указания по диагностике лейкоза крупного рогатого скота, М., 2000).

Биометрическую обработку цифрового материала экспериментальных исследований проводили с помощью программы одно- и многофакторного корре-

ляционного и регрессионного анализов, составленной на основе данных В.Ю. Урбаха (1964), А.Т. Усовича, П.Т. Лебедева (1970), а также одним из вариантов регрессионного метода - дискретно-динамическим анализом. Для оценки существенности различий между двумя средними величинами Мх и Му использовали 1:-критерий по Стьюденту.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Оценка иммунного статуса животных

3.1.1 Разработка принципов и критериев оценки иммунного статуса у животных на основе дискретно-динамического анализа

Для оценки иммунного статуса 20-ти гол. молодняка крупного рогатого скота в возрасте 15-17 мес., привитого вакциной БЦЖ месяцем ранее, определили число иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании (тыс/мкл). Описание иммунного статуса привитого молодняка крупного рогатого скота 15-17-ти месячного возраста проводили в сравнении с непривитыми животными этой же возрастной группы (30 гол.).

Установлено, что у молодняка, привитого БЦЖ, по отношению к интактным животным происходит снижение количества всех иммунокомпетентных клеток, однако достоверного различия достигает лишь изменение числа Т-лимфоцитов (1,53±0,18, 2,35±0,10; Р<0,001). Изменения только в количестве иммунокомпетентных клеток, вызванные введением БЦЖ, не позволяют объективно оценить эффективность вакцинации у животных, поэтому были исследованы корреляционные связи клеточно-иммунологических показателей.

Корреляционные связи у привитого БЦЖ молодняка крупного рогатого скота усиливаются и характеризуются как прямые тесные, тогда как у интактного молодняка они либо прямые средние, либо прямые и обратные слабые.

Несмотря на получение новых сведений, достичь цели по оценке иммунитета, определяя только корреляционные связи, у животных не представилось возможным. Поэтому для решения поставленной задачи провели дискретно-динамический анализ иммунологических параметров. По условию метода животных, привитых БЦЖ, разделили на 3 приблизительно равные группы по значениям базисного параметра (Т-лимфоциты): 1-е минимальными значениями базисного параметра, 2-е максимальными значениями и 3 - со средними (в дальнейшем не учитывалась). В 1 и 2 группах рассчитали средние значения остальных (вариабельных) параметров и с помощью вариационной статистики изучили достоверность их различий. В случаях, когда средние значения вариабельного параметра в группах с минимальными и максимальными значениями базисного параметра достоверно (Р<0,05) различаются, констатируют наличие взаимосвязей между ними. Взаимосвязь положительна, если при увеличении базисного параметра уровень вариабельного также увеличивается; отрицательна, если при увеличении базисного параметра уровень вариабельного снижается. При этом каждый из изучаемых параметров брали в качестве базисного, в которых вели подобный анализ с помощью вариационной статистики. Аналогичному анализу были подвергнуты иммунологические параметры интактного молодняка крупного рогатого скота.

Изучение фрагментов иммунной системы в большинстве случаев при выявлении сочетаний параметров с высокой степенью достоверности дает возможность дифференцированно описать иммунный статус опытных животных.

Результаты оценки иммунного статуса животных опытных групп с использованием дискретно-динамического анализа показали, что вакцина БЦЖ в иммунной системе молодняка крупного рогатого скота усиливает взаимосвязи иммунологических параметров и увеличивает число сочетаний.

С целью автоматизации и исключения субъективизма дискретно-динамического анализа была разработана программа для ПК. Программа помогает разделить исследуемых животных на подгруппы с минимальным и максимальным значением параметров с установкой стабильности границ базиса, а затем провести статистическую обработку цифрового материала в подгруппах, отобрать значимые сочетания параметров по ^критерию Стьюдента и построить дифференциально-прогностические таблицы. Эти таблицы позволяют оценить участие отдельных иммунокомпетентных клеток в противотуберкулезном иммунитете или пригодность тех или других методов для определения клеточного иммунитета.

На основании выявленных достоверно различающихся (Р<0,05) значимых сочетаний параметров с помощью компьютерной программы составили дифференциально-прогностическую таблицу (табл. 1).

Таблица 1. - Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у интактного и привитого БЦЖ молодняка крупного рогатого скота, в возрасте 15-17 мес., тыс./мкл_____

№ п/п Сочетание: базис (вариабельный параметр) п Г - критерий по Стьюден-ту базис вариабельный

Интактные

1 Т-киллеры (Т-антиген-реактивные лимфоциты) 30 2,95 <1,28 <0,87

2 Т-антиген-реактивные лимфоциты (Т-киллеры) 2,60 <1,13 <1,47

Количество животных с высокой активностью иммунокомпетентных клеток 7 23,33%

Привитые БЦЖ

1 В-лимфоциты (нейтрофилы) 3,53 >1,40 >1,22

2 В-лимфоциты (Т-киллеры) 3,06 >1,40 >1,66

3 Т-киллеры (нейтрофилы) 2,77 >1,50 >1,88

4 Т-лимфоциты (Т-киллеры) 20 2,76 <1,09 <0,99

5' Т-антиген-реактивные лимфоциты (Т-киллеры) 2,72 <0,69 <0,99

6 Т-лимфоциты (нейтрофилы) 2,60 <1,09 <0,96

7 Т-антиген-реактивные лимфоциты (нейтрофилы) 2,55 <0,69 <0,96

8 В-лимфоциты (Т-лимфоциты) 2,41 >1,40 >2,10

Количество животных с высокой активностью иммунокомпетентных клеток 14 70%

В дифференциально-прогностической таблице по оценке иммунного статуса у интактного молодняка установлено 2 значимых сочетания параметров (табл. 1). Так, Т-киллеры, как в качестве базисного, так и в качестве вариабельного параметра с высокой степенью достоверности взаимосвязаны с Т-антиген-реактивными лимфоцитами.

Число значимых сочетаний у привитых БЦЖ животных увеличивается до 8 по сравнению с интактными. Изучение числа связей каждого определяемого показателя с другими позволило установить, что наибольшим их числом обладают Т-киллеры (1 раз в качестве базисного и 3 раза в качестве вариабельного) и нейтрофилы (4 раза в качестве вариабельного), наименьшим числом - Т-антиген-реактивные лимфоциты (2). Это свидетельствует о функциональном напряжении иммунной системы за счёт потребности подключения большего количества взаимосвязей её структурных компонентов по сравнению с интактными животными.

В дальнейшем, используя значения базисного и вариабельного параметров таблицы, оценивали каждого животного исследуемой группы по всем значимым сочетаниям параметров. Если показатели числа иммунокомпетентных клеток животного соответствуют хотя бы одному из сочетаний (базисного, вариабельного) таблицы, такие животные признаются с высокой активностью иммунокомпетентных клеток. В этом случае животные могут противостоять естественному заражению возбудителем туберкулеза в условиях неблагополучной фермы. Таким способом проводили отбор животных по всем сочетаниям параметров и определили 14 животных (70 %) с высокой активностью иммунокомпетентных клеток в условиях неблагополучной по туберкулезу крупного рогатого скота ферме.

Проводя подобный анализ дифференциально-прогностической таблицы по оценке иммунитета у интактных животных, было установлено 23,33% животных с высокой активностью иммунокомпетентных клеток.

По результатам исследований можно заключить, что иммунизация вакциной БЦЖ усиливает взаимосвязи иммунологических параметров в иммунной системе молодняка крупного рогатого скота и увеличивает, число сочетаний. Метод дискретно-динамического анализа и разработанная на его основе дифференциально-прогностическая таблица позволяет установить значимые (Р<0,05) сочетания показателей активности клеток крови, указывающих на уровень противотуберкулезного иммунитета у привитых животных.

3.2 Оценка противотуберкулезного иммунитета

3.2.1 Иммунный статус у интактных и инфицированных М. bovis морских свинок

С целью оценки иммунного статуса в крови 20-ти интактных морских свинок и 20-ти через 30 суток после инфицирования M.bovis шт. 14 в дозе 0,0001 мг определили число иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании (тыс/мкл), функциональную активность лимфоцитов в реакции бласттрансфор-мации лимфоцитов (РБТЛ) в спонтанном и стимулированном ППД-

туберкулином для млекопитающих и фитогемагглютинином (ФГА) вариантах (имп/мин) и функциональную активность нейтрофилов в тесте с нитросиним тетразолием (HCT) в спонтанном и стимулированном ПЦЦ-туберкулином для млекопитающих и БЦЖ вариантах в %.

Анализируя средние значения иммунологических параметров, установили, что у морских свинок, инфицированных M.bovis, отмечено достоверное увеличение количества иммунокомпетентных клеток, за исключением Т-лимфоцитов, число которых уменьшается.

По результатам исследования в РБТЛ отмечено, что у животных, инфицированных M.bovis, была выражена пролиферация лимфоцитов на ППД-туберкулин и ФГА (РБТЛппд, РБТЛФГа), а также установлено увеличение уровня спонтанного синтеза ДНК лимфоцитов (РБТЛспонт.)-

Уровень функциональной активности нейтрофилов у морских свинок, инфицированных М. bovis, также увеличивался, как в спонтанном варианте (НСТспонт.), так и после стимуляции ППД-туберкулином и БЦЖ (НСТппд, НСТбцж)-

Затем, исследовав корреляционные связи иммунологических параметров, у интактных морских свинок выявили 1 тесную корреляционную связь между РБТЛспонт. и РБТЛппд 0"=0,79). Также отметили 11 прямых и обратных связей средней силы и 43 слабой силы из 55-ти возможных. У инфицированных животных определили тесные корреляционные связи между числом Т-киллеров и B-лимфоцитов, числом B-лимфоцитов и Т-антиген-реактивных лимфоцитов, а также между НСТСпонт. и НСТппд.

Исследование опытных групп дискретно-динамическим анализом позволило установить, что у инфицированных животных возникает иммунопатология -иммунологический дисбаланс, характеризующийся резким изменением направления и интенсивности связей. Наиболее выраженное изменение направления и интенсивности связей между компонентами иммунной системы отмечалось при базисе НСТппд, нейтрофилы, Т-лимфоциты и Т-киллеры.

Также установлено, что важнейшим критерием. системы служит степень ее связанности, которая представляет собой число достоверных взаимосвязей между параметрами иммунной системы. Так, в состоянии нормы у интактных морских свинок уровень связанности компонентов иммунной системы достаточно низок, на что указывают только 3 достоверных пары сочетаний. Инфицирование морских свинок М. bovis приводит к изменению характера взаимосвязей (11 достоверных пар сочетаний).

Таким образом, каждое из состояний характеризовалось определенным типом связанности различных клеток периферической крови; характер такой связанности отражает особенности иммунной системы при различных состояниях организма.

В дальнейшем, используя дифференциально-прогностическую таблицу, составленную на основе выявленных с высокой степенью достоверности сочетаний, оценивали каждого животного. В результате было выявлено 25 % среди интактных животных и 5% среди инфицированных М. bovis с высокой активностью иммунокомпетентных клеток.

В итоге удалось выявить 19 из 20-ти (95%) морских свинок с низкой активностью иммунокомпетентных клеток (отсутствием иммунитета), что полностью подтвердилось последующим патологоанатомическим исследованием, с использованием схемы Г.И. Гельберга и Е:А. Финкель (1959). Так, степень пора-женности внутренних органов у всех 19-ти животных варьировала от 8 до 9 баллов, в то время как у единственной морской свинки с высокой активностью иммунокомпетентных клеток этот показатель составил 6 баллов.

Таким образом, анализ дифференциально-прогностической таблицы позволяет утверждать, что иммунная система животных, инфицированных М. bovis, находится в состоянии функционального напряжения, которое приводит к потребности подключения большего количества взаимосвязей и снижению количества животных с высокой активностью иммунокомпетентных клеток. У ин-тактных морских свинок число статистически достоверных взаимосвязей между параметрами находится на низком уровне.

3.2.2 Анализ взаимосвязей в системе иммунитета у молодняка крупного рогатого скота, привитого вакциной БЦЖ

Для изучения взаимосвязей иммунологических параметров в крови молодняка крупного рогатого скота, привитого вакциной БЦЖ в возрасте до 20-ти дней, в разные возрастные периоды (у 20-ти животных в возрасте 4-5 мес., у 20-ти животных в возрасте 9-11 мес. и 20-ти в возрасте 15-17 мес.) определили число иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании (тыс/мкл).

Содержание всех иммунокомпетентных клеток у животных к 9-11-ти месячному возрасту по отношению к количеству у телят в возрасте 4-5-ти мес. увеличивается, однако достоверных изменений (Р<0,05) достигает только число Т-киллеров, B-лимфоцитов и Т-антиген-реактивных лимфоцитов. У животных в возрасте 15-17 мес. наблюдается с высокой степенью достоверности увеличение числа Т-лимфоцитов, Т-киллеров и В-лимфоцитов.

Затем исследовали корреляционные связи иммунологических параметров у привитых телят и установили их ослабление к 15-17 мес.

Результаты исследований иммунной системы у привитого молодняка крупного рогатого скота с использованием дискретно-динамического анализа показали, что взаимосвязи обнаруживаются преимущественно у телят в возрасте 4-5 мес. (15 пар сочетаний), к 9-11-ти мес. их количество снижается (10 пар), а к 1517-ти мес. отмечается дальнейшее снижение их числа (4 пары).

На основании выявленных со степенью достоверности (Р<0,05) значимых сочетаний параметров составили дифференциально-прогностические таблицы и оценивали каждого животного исследуемых групп по всем значимым сочетаниям параметров.

В результате анализа дифференциально-прогностических таблиц были выявлены из числа телят, привитых БЦЖ до 20-ти дней, в возрасте 4-5 мес. - 70% животных с высокой активностью иммунокомпетентных клеток, в возрасте 911 мес. - 50% и в возрасте 15-17 мес. - 30%______

Следовательно, анализ дифференциально-прогностических таблиц подтвердил, что у молодняка крупного рогатого скота в возрасте 15-17 мес., привитого

вакциной БЦЖ в раннем возрасте, количество статистически достоверных взаимосвязей между параметрами находится на низком уровне (спокойное функционирование иммунной системы). У животных до 9-11-месячного возраста иммунная система находится в состоянии функционального напряжения (активной работы), о чем свидетельствует высокий уровень числа взаимосвязей.

3.2.3 Иммунный статус у коров, нереагирующих и реагирующих на ПЦЦ-туберкулин и привитых вакциной БЦЖ

Провели сравнительное изучение иммунного статуса крупного рогатого скота реагирующего на ППД-туберкулин для млекопитающих (ЗАО «Азовское» Азовского района, благополучное по туберкулезу крупного рогатого скота, при контрольно-диагностическом убое туберкулеза не установлено, а при бактериологическом исследовании биоматериала выделены культуры атипичных мико-бактерий), привитого вакциной БЦЖ (через 8 мес. после вакцинации) (ОПХ СибМИС «Сосновское» Таврического района, благополучное по туберкулезу крупного рогатого скота) и реагирующих на ППД-туберкулин (ООО «Алексе-евское» Горьковского района, неблагополучное по туберкулезу, у большинства животных при контрольно-диагностическом убое обнаружены изменения характерные для туберкулеза). Описание иммунного статуса коров опытных групп проводили в сравнении с нереагирующими на ППД-туберкулин из благополучного хозяйства ЗАО «Азовское» Азовского района (контроль).

Определили число иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании (тыс/мкл), функциональную активность лимфоцитов в РБТЛ в спонтанном и стимулированном ФГА вариантах (ими/мин) и функциональную активность нейтрофилов в тесте с нитросиним тетразолием в спонтанном и стимулированном БЦЖ вариантах в %.

Анализ числа иммунокомпетентных клеток в периферической крови показал, что у привитых БЦЖ коров по сравнению с нереагирующими на ППД-туберкулин коровами с высокой степенью достоверности увеличивается количество Т-, В-лимфоцитов, Т-киллеров и Т-антиген-реактивных лимфоцитов, а также выражена пролиферация лимфоцитов на ФГА. Содержание нейтрофилов и уровень функциональной активности нейтрофилов в спонтанном и стимулированном БЦЖ вариантах достоверно уменьшается.

У животных из благополучного хозяйства, реагирующих на ППД-туберкулин, по сравнению с контролем наблюдается уменьшение числа нейтрофилов и Т-лимфоцитов (соответственно: Р<0,05; Р<0,01), а также уровня пролиферации лимфоцитов на ФГА и уровня функциональной активности нейтрофилов в спонтанном и стимулированном БЦЖ вариантах.

Отмечено достоверное увеличение числа Т-киллеров и В-лимфоцитов и уменьшение числа нейтрофилов у реагирующих на ППД-туберкулин коров из неблагополучного хозяйства по отношению к нереагирующим. По результатам исследования в РБТЛ и НСТ-тесте установили уменьшение уровня спонтанного синтеза ДНК лимфоцитов и пролиферации лимфоцитов на ФГА (РБТЛспонг.>

РБТЛфгд) и уровня функциональной активности нейтрофилов в спонтанном и стимулированном БЦЖ вариантах (НСТСпонт.> НСТБщг)-

Дискретно-динамический анализ позволил отметить, что трансформация уровней вариабельных параметров в подгруппах с максимальными и минимальными значениями базисных у коров опытных групп по сравнению с нереа-гирующими на ППД-туберкулин животными сопровождается изменением интенсивности и направления взаимосвязи с отрицательных на положительные, а также с положительных на отрицательные. Причем интенсивность взаимосвязей наиболее выражена у животных, реагирующих на ППД-туберкулин, из неблагополучного хозяйства, чуть слабее у привитых БЦЖ и наименее - у реагирующих на ППД-туберкулин из благополучного хозяйства.

Также установлено, что у нереагирующего на туберкулин крупного рогатого скота количество статистически достоверных взаимосвязей между показателями клеточного иммунитета находится на низком уровне. У коров, привитых вакциной БЦЖ и реагирующих на ППД-туберкулин, иммунная система находится в состоянии функционального напряжения, в результате чего повышается количество взаимосвязей.

В дальнейшем, с помощью дифференциально-прогностических таблиц оценивали каждого животного исследуемых групп по всем значимым сочетаниям параметров. В результате выявлено из числа коров, нереагируюших на ППД-туберкулин 15 % животных с высокой активностью иммунокомпетентных клеток, из числа привитых БЦЖ - 75 %, из числа реагирующих на туберкулин из благополучного хозяйства - 50 % и из числа реагирующих на туберкулин из неблагополучного хозяйства - 40 %. Среди 13-ти животных, реагирующих на ППД-туберкулин из неблагополучного хозяйства, у которых при патологоана-томическом исследовании установлены изменения туберкулезного характера, 3 (23 %) оказались в числе с повышенной активностью иммунокомпетентных клеток, а у других 10-ти (77 %) активность иммунокомпетентных клеток была крайне низкой.

Значительная численность животных с высокой активностью иммунокомпетентных клеток среди реагирующих на туберкулин из благополучного хозяйства, связана с персистенцией у животных атипичных микобактерий, которые создают иммунитет определенной силы.

Таким образом, вакцина БЦЖ в иммунной системе крупного рогатого скота усиливает взаимосвязи иммунологических параметров и увеличивает число их сочетаний. Увеличение числа значимых сочетаний у реагирующих коров из неблагополучного хозяйства обусловлено адаптационной перестройкой в иммунной системе, связанной с развитием туберкулеза.

3.3 Разработка системы иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза с применением БЦЖ и молекулярной вакцины ТБЦ-2

В настоящее время необходимость использования протекгивных экологически безопасных бесклеточных вакцин против инфекционных болезней является общепризнанной. Наиболее перспективной концепцией конструирования таких вакцин может быть конъюгация иммуногенной фракции, выделенной из

вакцинных бактерий, с матрицей, создающей в организме животного депо специфического иммуногена. Предполагается, что такой комплекс в системе иммунитета имитирует живую вакцину, способствует накоплению значительного количества клеток иммунной памяти, которые в последующем организуют защиту животного от возбудителя. Все это убедило нас о необходимости разработки системы иммунной защиты крупного рогатого скота с применением БЦЖ и молекулярной вакцины ТБЦ-2.

3.3.1 Реакции клеточного иммунитета у морских свинок, иммунизированных вакциной БЦЖ и белково-целлюлозным комплексом ТБЦ-2

Для изучения иммуномодулирующих свойств БЦЖ и белково-целлюлозного комплекса (ТБЦ-2) предварительно провели опыт на 15 морских свинках, которых разделили на 3 группы. 1-я группа - 5-ти морским свинкам ввели вакцину БЦЖ в дозе 0,1 мг, 2-я группа — 5-ти морским свинкам инъектировали подкожно белково-целлюлозный комплекс в дозе 125 мкг белка, 3-я - контрольная. Через 60 суток после вакцинации животных всех групп заразили подкожно M.bovis штамма 14 в дозе 0,0001 мг. Через 30 суток после заражения морских свинок усыпили ингаляционным наркозом для проведения патологоанатомиче-ского исследования, используя схему Г.И. Гельберга, Е.А. Финкеля (1959). Кровь у морских свинок брали до и на 30, 60 сутки после вакцинации, а также на 15 и 30 сутки после заражения.

В периферической крови морских свинок определили число иммунокомпе-тентных клеток в абсолютном содержании (тыс/мкл), функциональную активность лимфоцитов в реакции бласттрансформации лимфоцитов (имп/мин) в спонтанном и стимулированном ППД-туберкулином для млекопитающих и ФГА вариантах, а также функциональную активность нейтрофилов в тесте с нитросиним тетразолием в спонтанном и стимулированном БЦЖ вариантах.

Инокуляция препарата в организм экспериментальных животных вызывает комплекс иммунологических реакций, которые не имеют существенных различий с клеточными реакциями на вакцинацию БЦЖ. Так, введение БЦЖ и белково-целлюлозного комплекса ТБЦ-2 у морских свинок по сравнению с контрольной группой характеризуется резким снижением в периферической крови животных числа наиболее активных иммунокомпетентных клеток (Т-, В-лимфоцитов, Т-киллеров), в то время как уровень пролиферации лимфоцитов на ППД-туберкулин и ФГА к 60-м суткам после вакцинации увеличивается.

Через 15 суток после заражения М. bovis в 1-й и 2-й группах отмечается увеличение числа нейтрофилов, Т-лимфоцитов и Т-антиген-реактивных лимфоцитов, уровня функциональной активности нейтрофилов в НСТ-тесте, стимулированном ППД-туберкулином и БЦЖ, уровня спонтанного синтеза ДНК лимфоцитов и пролиферации лимфоцитов на ППД-туберкулин, в то время как уровень пролиферации лимфоцитов на ФГА снижается.

Через 30 суток после заражения М. bovis в 1-й и 2-й группах наблюдается увеличение числа нейтрофилов, Т-киллеров, Т-антиген-реактивных лимфоцитов, уровня пролиферации лимфоцитов на ППД-туберкулин и ФГА, а также снижение уровня функциональной активности нейтрофилов в НСТ-тесте, стимулированном ЕЦД-туберкулином.

Таким образом, вакцинация как БЦЖ, гак и ТБЦ-2 в организме морских свинок вызывает комплекс сходных иммунологических реакций по типу воспалительной реакции.

При анализе результатов патологоанатомического исследования морских свинок определяли показатель интенсивности поражений, используя схему Г.И. Гельберга, Е.А. Финкеля (1959), а для оценки напряженности иммунитета применяли индекс защиты, предложенный А.И. Тогуновой (1951).

Показатель интенсивности туберкулезных поражений у морских свинок в 1-й и 2-й группах соответственно равен 1,20±0,73; 3,80±0,49, тогда как в контрольной группе он составил 7,40±0,60, т.е. в 6 раз больше, чем в группе, привитых БЦЖ и в 1,9 раза больше, чем в группе привитых ТБЦ-2.

Белково-целлюлозный комплекс ТБЦ-2 обладает протективными свойствами, но более низкими, чем у вакцины БЦЖ. Так, индекс защиты у морских свинок в 2-ой группе равен 48 %, тогда как во 1-ой группе он составил 84 %.

3.3.2 Взаимосвязи в системе иммунитета у морских свинок, иммунизированных вакциной БЦЖ и белково-целлюлозным комплексом ТБЦ-2

С целью оценки иммунного статуса с помощью дискретно-динамического анализа в крови 20-ти морских свинок до вакцинации, 20-ти - через 60 суток после вакцинации БЦЖ, 20-ти - через 60 суток после введения ТБЦ-2, 20-ти -через 30 суток после инфицирования М. bovis, иммунизированных: БЦЖ, и 20-ти - через 30 суток после инфицирования М. bovis, иммунизированных ТБЦ-2, определили число иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании (тыс/мкл), функциональную активность лимфоцитов в реакции бласттрансфор-мации лимфоцитов в спонтанном и стимулированном ППД-туберкулином для млекопитающих и фитогемагглютинином (ФГА) вариантах (ими/мин) и функциональную активность нейтрофилов в тесте с нитросиним тетразолием в спонтанном и стимулированном ППД-туберкулином для млекопитающих и БЦЖ вариантах в %.

Анализ средних значений иммунологических параметров показал, что у морских свинок, привитых БЦЖ, по сравнению с животными до вакцинации отмечается увеличение количества иммунокомпетентных клеток, кроме Т-антиген-реактивных лимфоцитов, концентрация в крови которых уменьшается, в то же время наблюдается достоверное (Р<0,05) снижение числа иммунокомпетентных клеток в крови морских свинок после введения ТБЦ-2, за исключением нейтрофилов, содержание в крови которых существенно не меняется.

По результатам исследования в РБТЛ отмечено, что у морских свинок, иммунизированных БЦЖ, была выражена пролиферация лимфоцитов на ППД-туберкулин и ФГА, а также установлено достоверное снижение уровня спонтанного синтеза ДНК лимфоцитов. У животных, вакцинированных ТБЦ-2, отмечено лишь достоверное снижение пролиферации лимфоцитов на ФГА.

У животных, инфицированных М. bovis, через 60 суток после иммунизации БЦЖ в сравнении с невакцинированными морскими свинками статистически значимых различий в числе иммунокомпетентных клеток не обнаружено. У морских свинок, инфицированных М. bovis, через 60 суток после иммунизации

ТБЦ-2 отмечено достоверное уменьшение количества В-лимфоцитов и Т-антиген-реакхивных лимфоцитов, а также увеличение числа нейтрофилов.

По результатам исследования в РБТЛ и НСТ-тесте установлено увеличение уровня спонтанного синтеза ДНК лимфоцитов и пролиферации лимфоцитов на ППД-туберкулин для млекопитающих, достоверное увеличение уровня функциональной активности нейтрофилов в спонтанном и стимулированном ППД-туберкулином и БЦЖ вариантах, тогда как уровень пролиферации лимфоцитов на ФГА достоверно уменьшается.

На следующем этапе исследований провели дискретно-динамический анализ иммунологических параметров. Было проанализировано по 110 взаимосвязей между иммунологическими показателями в каждый срок исследования животных.

У морских свинок перед вакцинацией выявлено 8 достоверных взаимосвязей, вакцинированных БЦЖ - 14, иммунизированных ТБЦ-2 - 12, у инфицированных через 60 суток после введения БЦЖ - 14 и у инфицированных через 60 суток после иммунизации ТБЦ-2 - 11 пар сочетаний.

На основании выявленных со степенью достоверности (Р<0,05) значимых сочетаний параметров составили дифференциально-прогностические таблицы.

В дифференциально-прогностической таблице по оценке иммунного статуса у морских свинок перед иммунизацией представлено 8 значимых сочетаний параметров. Изучение числа связей каждого определяемого показателя с другими позволило установить, что наибольшей долей участия обладают Т-лимфоциты (2 раза в качестве базисного и 1 раз в качестве вариабельного параметров), наименьшей -В-лимфоциты, НСТспонт. и НСТщд (по одному разу).

Адаптационная перестройка иммунной системы, вызванная иммунизацией БЦЖ, сопровождается увеличением числа значимых сочетаний по сравнению с группой животных перед вакцинацией, при этом наибольшим их количеством обладают также Т-лимфоциты (3 раза в качестве базисного и 2 раза в качестве вариабельного параметров), наименьшим - нейтрофилы и РБТЛппд (по 1 разу). Это свидетельствует о функциональном напряжении иммунной системы за счёт потребности подключения большего количества взаимосвязей её структурных компонентов по сравнению со спокойным функционированием у морских свинок перед введением вакцинных препаратов.

Число значимых сочетаний у морских свинок, иммунизированных ТБЦ-2, по сравнению с интактными увеличивается до 12, что также свидетельствует о функциональном напряжении иммунной системы. Наибольшим числом стали обладать Т-киллеры и РБТЛфГА (4).

Уровень сопряженности (связанности) компонентов иммунной системы у животных, инфицированных М.Ьо^тэ, через 60 суток после вакцинации БЦЖ не изменяется и также составляет 14 значимых сочетаний. Наибольшую активность имеют В-лимфоциты 5 (2 раза в качестве базисного и 3 раза в качестве вариабельного), а наименьшую - нейтрофилы (1).

У морских свинок, инфицированных М.Ьоу1б, через 60 суток после вакцинации ТБЦ-2 уровень сопряженности компонентов иммунной системы также находится почти на прежнем уровне и составляет 11 значимых сочетаний. Изуче-

ние числа связей каждого определяемого показателя с другими позволило установить, что наибольшим участием обладают Т-киллеры, НСТспонт. и РБТЛдпд (по 4 раза), наименьшим - нейтрофилы (1), Т-антиген-реактивные лимфоциты (1) и НСТбцк (1)-

В дальнейшем, используя значения базисного и вариабельного параметров дифференциально-прогностических таблиц, оценивали каждого животного исследуемых групп по соответствию интервалов показателей числа иммуноком-петентных клеток хотя бы одному из сочетаний таблицы для выявления морских свинок с высокой активностью иммунокомпетентных клеток.

В результате было определено по 65 % морских свинок с высокой активностью иммунокомпетентных клеток у иммунизированных вакциной БЦЖ и бел-ково-целлюлозным комплексом ТБЦ-2. Среди интактных животных таких выявлено всего лишь 5 %. С помощью дифференциально-прогностических таблиц у инфицированных M.bovis через 60 суток после введения БЦЖ и ТБЦ-2 установлено соответственно 40 (8 из 20-ти) и 45 (9из 20-ти) % морских свинок с высокой активностью иммунокомпетентных клеток.

Меньшее число животных с высокой активностью после заражения привитых БЦЖ объясняется широкими колебаниями степени пораженности (от 0 до 4 баллов). Так, при патологоанатомическом исследовании 6 из 8-и морских свинок с высокой активностью клеток из числа инфицированных через 60 суток после введения БЦЖ противостояли экспериментальному заражению. В тоже время среди инфицированных после введения ТБЦ-2 степень пораженности внутренних органов у всех 20-ти животных находилась на близком по значениям уровню (3-5 балла по схеме Г.И. Гельберга и Е.А. Финкель).

На основании анализа дифференциально-прогностических таблиц можно заключить, что у морских свинок перед вакцинацией количество статистически достоверных взаимосвязей между параметрами находится на низком уровне (спокойное функционирование иммунной системы). В период активной работы (иммунизация БЦЖ, ТБЦ-2 и последующее инфицирование М. bovis) юс количество значительно повышается.

Следовательно, иммунизация вакциной БЦЖ и белково-целлюлозным комплексом ТБЦ-2 повышает уровень связанности структурных компонентов иммунной системы, увеличивает количество морских свинок с высокой активностью иммунокомпетентных клеток до 65 % через 60 суток после вакцинации. Последующее инфицирование вирулентной культурой М. bovis сохраняет функциональное напряжение иммунной системы, однако уменьшает число животных с высокой активностью иммунокомпетентных клеток (соответственно: до 40 % у вакцинированных БЦЖ и до 45 % у вакцинированных ТБЦ-2).

3.3.3 Разработка схемы профилактики туберкулеза с применением БЦЖ и белково-целлюлозного комплекса ТБЦ-2

Разработанная схема специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота испытана на базе ОАО ОПХ СибМИС с применением живой противотуберкулезной вакцины БЦЖ и белково-целлюлозного комплекса ТБЦ-2, технология изготовления второй разработана во ВНИИБТЖ. Вакцина ТБЦ-2 изготавливается из культуры вакцинного штамма БЦЖ, разрушенной ультра-

звуком. Препарат выпускают во флаконах, он представляет собой жидкость, состоящую из взвеси в физиологическом растворе целлюлозной матрицы с прикрепленными химическим путем на ее поверхности белковыми антигенами БЦЖ.

Опыты, проведенные на морских свинках, показали, что белково-целлюлозные комплексы обладают протективными свойствами, но более низкими, чем у вакцины БЦЖ, что послужило основанием использовать белково-целлюлозный комплекс для ревакцинации взрослого поголовья.

Для проведения опыта на крупном рогатом скоте отобрали 20 телок и в возрасте 10-20 дней привили вакциной БЦЖ в кожу шеи по 1 мг (1-я группа). Для контроля также отобрали 20 телок в возрасте до 20-ти дней, которым вакцину БЦЖ не вводили (2-я группа). Затем через 45 суток после иммунизации телят обеих групп исследовали на туберкулез с помощью однократной ППД-туберкулиновой пробы, больных среди привитых животных считали по утолщению кожной складки на 15 мм и выше (М.А. Бажин, В.Л. Солодовников, 1993) и среди не привитых телят по утолщению кожной складки на 3 мм и выше (Наставление по применению (ППД) туберкулинов для млекопитающих и птиц. Утверждено Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ от 16.02.1999 года).

В систему специфической профилактики туберкулеза включен способ прижизненной поствакцинальной оценки иммунитета у привитых животных: с этой целью определяют в периферической крови число иммунокомпетентных клеток и их взаимосвязи дискретно-динамическим анализом. С помощью специальной программы для ПК составляют дифференциально-прогностические таблицы, позволяющие оценить иммунный статус животных, привитых противотуберкулезными препаратами, и оценивают степень защищенности от заболевания животного и стада в целом: до 40 % животных в стаде с высокой активностью иммунокомпетентных клеток отмечают низкий уровень защищенности; от 40 до 70 % - средний уровень; от 70 % и выше - высокий уровень защищенности. Описанный способ позволяет оценить поствакцинальный иммунитет у животных в стаде и установить сроки последующей ревакцинации.

В результате исследований установили высокую активность иммунокомпетентных клеток у 70 % животных, вакцинированных в возрасте до 20-ти дней, через 4-5 мес. после иммунизации вакциной БЦЖ, у 50 % животных через 9-11 мес. и у 30 % животных через 15-17 мес.

Результаты этих исследований убедили в необходимости проведения реим-мунизации телок в возрасте 12-14 мес. вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 1 мг на одно животное.

Иммунный статус у животных после ревакцинации БЦЖ определяли также с помощью дискретно-динамического анализа. Выявили у 70 % животных повышенную активность иммунокомпетентных клеток через 6 мес. и у 15 % животных через 14 мес. после ревакцинации. Также было установлено уменьшенное число взаимосвязей в системе иммунитета, что явилось основанием провести реиммунизацию коров белково-целлюлозным комплексом ТБЦ-2.

Последующую реиммунизадию коров опытной группы провели через 14 мес. бесклеточной вакциной ТБЦ-2. Перед реиммунизацией животных исследовали туберкулиновой аллергической пробой и установили, что у всех коров кожная реакция на ППД-туберкулин отсутствовала. Коровам опытной группы вакцину ТБЦ-2 ввели подкожно в дозе 6 мг белка на одно животное.

Через 6 мес. после введения вакцины ТБЦ-2 животных исследовали туберкулиновой аллергической пробой и оценку иммунного статуса коров провели дискретно-динамическим анализом. Туберкулиновой аллергической реакции у коров не обнаружено. Среди реиммунизированных вакциной ТБЦ-2, у 12 из 20 коров (60 %) установили повышенную активность иммунокомпетентных клеток. Аналогичные исследования коров проведены через 9 мес. после реиммуни-зации вакциной ТБЦ-2. Животных, реагирующих на ППД-туберкулин, не выявлено.

Следовательно, реиммунизация вакциной ТБЦ-2 повышает число устойчивых животных от заболевания туберкулезом и позволяет контролировать стадо крупного рогатого скота на туберкулез аллергической реакцией 2 раза в год (через 6 месяцев после ревакцинации). В последующем по результатам дискретно-динамического анализа ревакцинацию провели еще дважды с интервалом 12 месяцев, что позволило в условиях неблагополучной по туберкулезу крупного рогатого скота ферме сохранить благополучие стада более 9 лет (срок наблюдения).

Таким образом, в эксперименте разработана схема вакцинации крупного рогатого скота, позволяющая создавать у животных перманентный протективный иммунитет, этим самым повысить профилактический эффект.

Такая схема профилактики была апробирована с положительным результатом в условиях 3-х неблагополучных по туберкулезу хозяйств Омской области.

3.4 Технология изготовления специфического иммуномодулирующего средства КИМ-М

3.4.1 Разработка способа оценки иммуномодулирующих препаратов

" Составление иммунограммы для определения иммунного статуса и оценки эффективности иммуномодулирующих средств является трудоёмким и дорогостоящим исследованием. Также при оценке иммунного статуса нельзя не учитывать, что одно и то же состояние организма или любой его системы может быть достигнуто множеством вариантов сочетаний параметров отдельных компонентов. Какой вариант будет реализован в каждом конкретном случае, зависит не только от генетических особенностей индивида, но и от набора внешних факторов - закономерных и случайных, благоприятных и неблагоприятных. Это положение также затрудняет более объективную оценку иммуномодули-рующей эффективности изучаемых препаратов. Все это послужило основанием к разработке способа оценки иммуномодулирующих препаратов на их способность восстанавливать у животных утраченную иммунологическую реактивность.

3.4.1.1 Индукция иммунологической толерантности у морских свинок.

На первом этапе был проведен опыт по определению продолжительности состояния иммунологической толерантности у животных, вызванной ППД-туберкулином для млекопитающих.

С целью индукции у морских свинок иммунологической толерантности 20-ти животным вводили аллерген - ППД-туберкулин для млекопитающих подкожно в дозе 1,5 мл. Затем 20 морских свинок разделили на 5 групп по 4 в каждой. Животных 1-й группы иммунизировали вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 0,1 мг в 0,1 мл физиологического раствора на 3 сутки после толерогенной обработки; 2-й - через 7 суток; 3-й - через 14 суток; 4-й - через 21 сутки; 5-й -через 28 суток. Дополнительно 5 морских свинок (6-я группа) вакцинировали БЦЖ без предварительной толерогенной обработки. Всех морских свинок исследовали ППД-туберкулином через 30 суток после вакцинации.

Результаты кожной аллергической реакции на ППД-туберкулин для млекопитающих показаны в таблице 2.

Таблица 2. - Кожная аллергическая реакция у морских свинок на вакцину БЦЖ после толерогенной обработки__

Группы животных Количество животных Сроки введения БЦЖ животным после толерогенной обработки, сутки Кожная реакция на ППД-туберкулин через 30 суток после вакцинации, мм

Реагирующих животных М±ш

1 4 через 3 - -

2 4 7 - -

3 4 14 - -

4 4 21 2 6,25±3,66

5 4 28 3 10,0±3,56

6 5 за 30 суток до исследования ППД-туберкулином 5 16,4±3,47

Из таблицы 2 видно, что у морских свинок восстановление утраченной иммунологической реактивности начинается с 21 суток после толерогенной обра-' ботки. В течение первых двух недель после индукции иммунологической толерантности морские свинки не отвечали на вакцину БЦЖ кожной аллергической реакцией на ППД-туберкулин для млекопитающих. Следовательно, в эти сроки можно испытывать препараты на способность устранения у животных толерантного состояния. Таким образом, оптимальным сроком иммунизации БЦЖ являются 7-14-е сутки после индукции толерантности ППД-туберкулином.

3.4.1.2 Испытание иммуномодулирующих средств и их оценка

Следующим этапом исследований стало испытание широко известных в ветеринарной практике иммуномодуляторов (ронколейкина, тималина, полиокси-дония и др.) с помощью определения числа иммунокомпетентных клеток, а также оценки способности их восстанавливать утраченную реактивность.

С этой целью 25-ти морским свинкам ввели толероген (ППД-туберкулин как описано выше) и разделили на 5 групп: 1-я группа - 5-ти морским свинкам

через 3 дня после толерогенной обработки подкожно инъецировали ронколей-кин трижды с интервалом 24 часа в дозе по 3,5 тыс. ЕД 0,2 мл физиологического раствора (общая доза на животное - 10,5 тыс. ЕД); 2-я - 5 животным ввели внутримышечно полиоксидоний трижды по 0,06 мг 0,2 мл физиологического раствора (общая доза на животное 0,18 мг); 3-я - 5-ти животным сделали инъекцию поливинилпирролидона (ПВП) по 5 мг на животное в 1 мл физиологического раствора; 4-я - 5 животным внутримышечно инъецировали тималин трижды по 0,2 мг в 0,1 мл физиологического раствора (общая доза на животное 0,6 мг); 5-я - 5 животным подкожно ввели левамизол трижды по 0,5 мг в 0,5 мл физиологического раствора (общая доза на животное 1,5 мг) (кратность и дозы препаратов соответствуют инструкции по их применению). Через 10 суток после инъекции иммуномодуляторов морских свинок иммунизировали вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 0,1 мг 0,1 мл физиологического раствора; 6-я группа - 5 здоровых интактных морских свинок также были привиты вакциной БЦЖ; 1-я — 4 интактные морские свинки, которых инфицировали вирулентной культурой М. bovis подкожно в дозе 0,0001 мг в 1 мл физиологического раствора. Одновременно инфицировали морских свинок всех опытных групп.

Иммуномодулирующие свойства препаратов изучали с помощью оценки иммунного статуса по определению в крови морских свинок наиболее активных иммунокомпетентных клеток (Т-, В- лимфоцитов, лимфоцитов-киллеров, Т-антиген-реактивных лимфоцитов и нейтрофилов). Отбор проб крови проводили через 30 суток после иммунизации и 30 суток после экспериментального заражения. Концентрацию иммунокомпетентных клеток в крови определяли в абсолютном содержании (тыс./мкл).

Иммунологическая перестройка в организме морских свинок через 30 суток после вакцинации сопровождалась увеличением числа иммунокомпетентных клеток, особенно это касалось Т-лимфоцитов у животных всех групп, кроме 5-й и 6-й группы.

Через 30 суток после инфицирования также отмечали рост у морских свинок количества Т-лимфоцитов, однако достоверных различий оно достигало у животных, которым вводили ронколейкин и вакцину БЦЖ.

Оценку иммуномодулирующих препаратов можно проводить, определяя наиболее активные в иммунном ответе иммунокомпетентные клетки, это затрудняет тестировать эффективность каждого иммуномодулирующего средства в сравнительном аспекте.

Для оценки иммуномодулирующих препаратов использовали этих же морских свинок, которых через 30 суток после инфицирования усыпили эфирным наркозом, провели патологоанатомические исследования и оценили степень пораженности внутренних органов животных и индекс защиты по схеме Г.И. Гельберга и Е.А. Финкеля (1959): сначала определили в количественных показателях интенсивность распространения поражения туберкулезного характера каждой опытной и контрольной морской свинки. Показатель поражений оценивали от 0 до 9. Так, показатель поражений в 1-й группе составил: 3,0,0,3,0; во 2-й - 3,3,3,4; в 3-й группе - 4,4,4,3,0; в 4-й группе - 4,4,3,0; в 5-й группе -4,3,0,3,4; в 6-й группе - 0,0,5,3,3 и в 7-й группе - 4,4,8,7.

Затем установили средний показатель поражения для каждой опытной группы животных путем вычисления средних арифметических величин из индивидуальных показателей. Так, показатель интенсивности поражений 1-й группы составил 1,2; 2-й - 3,25; 3-й - 3,0; 4-й - 2,75; 5-й - 2,80; 6-й - 2,2 и 7-й -5,75.

Для оценки напряженности иммунитета применили индекс защиты, предложенный А.И. Тогуновой (1951). Из среднего показателя интенсивности поражения контрольной группы вычитали такой же показатель, установленный для опытной группы. Затем полученный остаток, взятый в процентах, разделили на средний показатель интенсивности поражения контрольной группы. Например, индекс защиты в 1-й группе составил 79%; во 2-й группе - 43%.

По результатам оценки установлено, что ронколейкин является наиболее эффективным препаратом для восстановления иммунологической реактивности (индекс защиты 79%), несколько уступали ему тималин (52%), левамизол (51%), ПВП и полиоксидоний (соответственно: 48 и 43%).

3.4.2 Изготовление специфического иммуномодулятора

Вакцина БЦЖ, применяемая в настоящее время с целью профилактики туберкулеза, стимулирует одновременно естественную резистентность организма, а также используется для специфической патогенетической терапии больных туберкулезом легких. Стимулирующие свойства вакцины БЦЖ послужили основанием для приготовления из отдельных фракций разрушенных микобакте-рий БЦЖ иммуномодулирующих средств.

3.4.2.1 Получение антигенного комплекса из вакцинного штамма БЦЖ

С целью получения антигенного комплекса нами была проведена следующая работа. Произвели посев вакцинного штамма БЦЖ на жидкую синтетическую среду Сотона. Вакцинный штамм культивировали в конических колбах емкостью 0,5-1,0 л при температуре 37° С в течение 2-3-х недель. Выросшую бактериальную массу собирали и трижды отмывали стерильным физиологическим раствором, центрифугировали в течение 20 минут при 3 тыс. об/мин. Отмытую бактериальную массу ресуспендировали в стерильном физиологическом растворе из расчета 1:5 (1,0 г бактериальной массы и 5 мл физиологического раствора). Флаконы с суспензией бактериальных клеток помещали на 24 часа на шутгель-аппарат при комнатной температуре.

Суспензию бактериальных клеток подвергали ультразвуковой дезинтеграции на аппарате УЗДН-1 (22-35 кГц, 60-70 Вт/см2 в течение 30 мин), полученную взвесь центрифугировали 30 мин при 15000 об/мин. Надосадочную жидкость сливали. Количество белка в надосадочной жидкости определяли на фо-тоэлектроколориметре с использованием красителя бромфенолового синего (БФС).

В объем антигенного комплекса (99,3 мл) добавляли 37%-ного медицинского формальдегида 0,7 мл или 40%-ного - 0,6 мл. Реакционную смесь инкубировали в термостате при 37°С в течение 5-9 дней, конъюгировали с поливинил-пирролидоном молекулярной массой 12600±2700, концентрацию которого до-

вели на 1 мг/мл белка 600 мг ПВП (1:600). В 100 мг/мл белка после инкубирования постепенно частями добавляли ПВП, размешивая на магнитной мешалке при комнатной температуре, вновь измеряли содержание белка, довели дозу по содержанию белка на кг массы животного. Реакционную смесь разливали во флаконы и стерилизовали на установке АСИС при 80°С в течение 30 мин и в стерильном боксе закрывали пробками. В результате получили комплексный иммуномодулятор микробного происхождения (КИМ-М).

3.4.2.2 Испытание иммуномодулирующих и протективных свойств препаратов на морских свинках

Для оценки способности антигенных комплексов восстанавливать у морских свинок утраченную иммунологическую реактивность был проведен опыт по следующей схеме. С целью индукции толерантности 16 морским свинкам ввели ППД-туберкулин для млекопитающих, инкубированный с раствором формалина, подкожно в дозе 1,3 мл и разделили животных по 4 в каждой группе: через 5 суток после индукции толерантности 4-м морским свинкам инъек-тировали комплекс антигенов БЦЖ (КАГ-БЦЖ) подкожно в дозе 500 мкг белка (1-я группа); 4-м — комплекс антигенов БЦЖ, инкубированный с раствором формалина (КАГ-БЦЖ-Ф) подкожно в дозе 500 мкг белка (2-я ipynna); 4-м животным ввели комплекс антигенов БЦЖ, инкубированный с формалином и конъюгированный с поливинилпирролидоном (КАГ-БЦЖ-Ф-ПВП), подкожно в дозе 500 мкг белка (3-я группа); 4-м - инъектировали иммуномодулирующее средство (В.Н, Ласкавый, В.В. Рыбин патент РФ RU №2034542, кл. А 61К 31/305, 1995) подкожно в дозе 1,3 мл (4-я группа). 4 здоровые морские свинки служили в качестве контроля (5-я группа).

Морских свинок первых 4-х групп через 7 суток после введения изучаемых препаратов привили вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 100 мкг в 0,1 мл и через 30 суток после иммунизации животных всех групп заразили вирулентной культурой М. bovis штамм 14 подкожно в дозе 0,0001 мг/мл и через 30 суток подвергли эвтаназии и проводили патологоанатомические исследования.

Провели оценку иммуномодулирующих свойств препаратов на их способность восстанавливать иммунологическую - реактивность у морских свинок. Наиболее высокая способность восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность у морских свинок установлена у препарата, изготовленного из комплекса антигенов БЦЖ, инкубированного с формалином и конъюгиро-ванного с ПВП (3-я группа): степень пораженности органов - 1,75±0,75 баллов; индекс защиты - 80%, тогда как у комплекса антигенов БЦЖ (1-я группа), соответственно: 4,0±0,00; 53,8%. Несколько выше эта способность у известного иммуномодулирующего средства (В.Н. Ласкавый, В.В. Рыбин), соответственно: 3,66±0,66; 57,7% (4-я группа). Способность восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность у препарата, изготовленного из комплекса антигенов БЦЖ, инкубированного с формалином несколько выше, соответственно: 2,66±0,66; 69,3% (2-я группа).

По результатам опыта из трех синтезированных иммуномодуляторов с целью изучения иммуногенных свойств был взят как наиболее эффективный пре-

парат, изготовленный из комплекса антигенов БЦЖ, инкубированного с формалином и конъюгированного с ПВП (АГ-БЦЖ-Ф-ПВП), и в сравнении с имеющимся и вакциной БЦЖ были определены иммуногенные и протективные свойства.

С этой целью 29 морских свинок разделили на 6 групп: 5-ти морским свинкам изучаемый препарат (АГ-БЦЖ-Ф-ПВП) ввели в дозе 500 мюг белка в 1,0 мл (1-я группа); 5-ти этот же препарат в дозе 1000 мкг белка в 1,0 мл (2-я группа); 5-ти этот же препарат ввели в дозе 1500 мкг белка в 1,5 мл (3-я группа); 5-ти морским свинкам инъектировали белково-целлюлозный комплекс ТБЦ-2 в дозе 500 мкг в 0,5 мл белка (4-я группа); 5-ти - ввели вакцину БЦЖ внутрикожно в дозе 100 мкг в 0,1 мл физиологического раствора (5-я группа); 4 морские свинки использовали в качестве контроля (6-я группа). Через 30 суток морских свинок всех групп инфицировали М. bovis шт. 14 подкожно в дозе 0,0001 мкг и еще через 30 суток подвергли эвнатазии для проведения патологоанатомиче-ских исследований.

Результаты исследований показали, что вакцина БЦЖ наиболее активно защищает морских свинок от экспериментального заражения: степень поражен-ности - 1,8±0,75 и индекс защиты 79%; затем АГ-БЦЖ-Ф-ПВП в дозе 500 мкг, соответственно 3,33±0,33, 61%; ниже протективные свойства у ТБЦ-2 в дозе 500 мкг, соответственно 4,2±0,20, 50%.

3.4.2.3 Испытание препарата на молодняке крупного рогатого скота

Для дальнейшего испытания на телятах был отобран конъюгат, изготовленный из комплекса антигенов БЦЖ, инкубированный с формалином и конъюги-рованный с ПВП (АГ-БЦЖ-Ф ПВП).

С целью выяснения способности этого коньюгата усиливать протективные свойства вакцины БЦЖ провели опыт по следующей схеме. В опыт взяли 60 телят в возрасте от 10 до 20 дней и разделили их на 3 группы: 20-ти телятам ввели изучаемый препарат подкожно в дозе 20 мкг белка на кг массы животного (0,8-1,0 мг белка на животное) в 1,0 мл (1-я группа). Через 30 суток этих животных привили вакциной БЦЖ в дозе 1 мг в 0,2 мл. Других 20 телят аналогичного возраста иммунизировали также вакциной БЦЖ (2-я группа) и 20 телят использовали в качестве контроля (3-я группа). Через 4 мес. у животных всех групп отобрали венозную кровь, в которой определили концентрацию нейтро-филов, Т-лимфоцитов, Т-киллеров, Т-антиген-реактивных лимфоцитов и В-лимфоцитов.

Содержание всех иммунокомпетентных клеток у телят, привитых вакциной БЦЖ после введения препарата, достоверно выше, чем у контрольных животных, особенно выше количество Т-лимфоцитов, Т-киллеров, Т-антиген-реактивных лимфоцитов и нейтрофилов (Р<0,001). Повышенное число иммунокомпетентных клеток установлено также у телят, привитых только вакциной БЦЖ.

Результаты оценки иммунного статуса опытных групп с использованием дискретно-динамического анализа показали, что введение препарата молодняку крупного рогатого скота перед вакцинацией БЦЖ в значительной степени уси-

ливает сопряженность (связанность) компонентов иммунной системы. Так, у интактного молодняка определено 3 пары значимых сочетаний, у вакцинированных БЦЖ - 8 и вакцинированных БЦЖ, после введения препарата - 10 пар сочетаний.

На основании выявленных достоверных сочетаний параметров составили дифференциально-прогностическую таблицу (табл. 3).

В таблице 3 у интактного молодняка крупного рогатого скота представлено 3 значимых сочетания параметров. Так, нейтрофилы в качестве вариабельного параметра взаимосвязаны с Т-киллерами, Т-антиген-реактивными лимфоцитами и В-лимфоцитами.

Таблица 3. - Дифференциально-прогностическая таблица для оценки иммунитета у молодняка крупного рогатого скота, тыс/мкл ___

№ п/п Сочетание: базис (вариабельный параметр) п 1> критерий по Стью-денту базис вариабельный

Интактпные

1 Т-киллеры (нейтрофилы) 2,57 <0,42 <0,84

2 Т-антиген-реактивные лимф, (нейтрофилы) 20 2,50 <0,05 <0,72

3 В-лимфоциты (нейтрофилы) 2,41 <0,70 <0,46

Количество иммунных животных в процентах 6 30%

Привитые вакциной БЦЖ

1 В-лимфоциты (Т-киллеры) 4,48 >4,30 >8,60

2 Нейтрофилы (Т-антиген-реактивные лимфоциты) 4,27 <1,90 <0,45

3 В-лимфоциты (Т-лимфоциты) 3,69 >4,30 >4,63

4 Т-киллеры (В-лимфоциты) 20 3,55 >6,71 >4,89

5 Т-антиген-реактивные лимфоциты (Т-лимф.) 3,44 >1,11 >2,85

6 Т-лимфоциты (В-лимфоциты) 3,33 >3,16 >3,44

7 Т-киллеры (Т-лимфоциты) 3,09 >6,71 >2,84

8 Т-антиген-реактивные лимфоциты (нейтрофилы) 2,90 >1Д1 >4,68

Количество иммунных животных в процентах 14 70%

Привитые вакциной БЦЖ после введения конъюгата

1 Т-антиген-реакгивные лимфоциты (нейтрофилы) 6,53 <0,89 >2,73

2 Нейтрофилы (Т-антиген-реактивные лимфоциты) 4,77 >5,96 <1,46

3 Т-киллеры (В-лимфоциты) 3,25 <4,31 <2,01

4 Т-кшшеры (Т-антиген-реактивные лимфоциты) 3,25 <4,31 <1,04

5 Т-антиген-реактивные лимфоциты (Т-киллеры) 20 2,94 <0,89 <5,35

6 Т-антиген-реактивные лимфоциты (Т-лимф.) 2,91 <0,89 <2,94

7 Нейтрофилы (Т-лимфоциты) 2,80 >5,96 <3,70

8 Т-лимфоциты (нейтрофилы) 2,74 <3,12 >3,52

9 В-лимфоциты (Т-киллеры) 2,57 <1,54 <6,07

10 Нейтрофилы (Т-киллеры) 2,36 >5,96 >6,32

Количество иммунных животных в процентах 16 80%

Число значимых сочетаний у животных, привитых только вакциной БЦЖ, по сравнению со здоровыми увеличивается до 8, что свидетельствует о функциональном напряжении иммунной системы. Наибольшим числом связей определяемых показателей с другими обладают Т-лимфоциты (1 раз в качестве базисного и 3 раза в качестве вариабельного параметров) и В-лимфоциты (по 2 раза в качестве базисного и вариабельного параметров), наименьшим (2) - ней-трофилы.

У молодняка, привитого вакциной БЦЖ, после введения изучаемого препарата уровень связанности структурных компонентов иммунной системы увеличивается до 10 сочетаний. При этом наибольшим числом характеризуются ней-трофилы, Т-киллеры и Т-антиген-реактивные лимфоциты (по 5 сочетаний), наименьшим - В-лимфоциты (2).

Далее, используя дифференциально-прогностическую таблицу, оценивали каждое животное исследуемых групп по всем значимым сочетаниям параметров. Согласно результатам анализа высокой активностью иммунокомпетентных клеток характеризовались 30 % интактных животных, 70% - привитых БЦЖ и 80% - привитых БЦЖ после введения конъюгата.

Следовательно, с увеличением числа значимых сочетаний параметров повышается степень защищенности животных против туберкулеза. У телят, привитых только БЦЖ и после введения БЦЖ и конъюгата, иммунная система находится в состоянии функционального напряжения (активной работы), в то время как у интактного молодняка крупного рогатого скота количество статистически достоверных взаимосвязей между параметрами составляет только 3 сочетания (спокойное функционирование иммунной системы).

3.5 Оценка иммунного статуса у крупного рогатого скота при лейкозе

3.5.1 Иммунный статус у здорового и родившегося от матерей-вирусоносителей молодняка крупного рогатого скота

Для сравнительного изучения взаимосвязей между иммунологическими показателями у потомства, полученного от здоровых и коров-матерей, носителей ВЛКРС был проведен следующий опыт. В крови молодняка крупного рогатого скота, родившегося от матерей-вирусоносителей, в разные возрастные периоды определили число иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании (тыс/мкл), в сыворотке крови определили концентрацию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в у.е., а также оценили функциональное состояние нейтрофилов в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ) в спонтанном без нагрузки и стимулированном с последующим подсчетом коэффициента стимуляции К ст. (К ст НСТ = оптическая плотность в стимулированных лунках / оптическая плотность в лунках без стимуляции). Описание иммунного статуса молодняка крупного рогатого скота 1-2, 5-6 и 12-14-ти месячного возраста, родившихся от матерей-вирусоносителей, проводили в сравнении со здоровыми этих же возрастных групп (по 20 голов в каждой возрастной группе).

Анализ средних показателей иммунологических параметров показал, что количественный состав иммунокомпетентных клеток в крови здоровых и родившихся от матерей-вирусоносителей телят имеет существенные различия. Так,

количество нейтрофилов, Т-, В-лимфоцитов и Т-антиген-реактивных лимфоцитов у телят в возрасте 1-2 мес., родившихся от матерей-вирусоносителей, по отношению к количеству у здоровых телят этого же возраста достоверно (Р<0,05) снижается, в то время как К ст. НСТ повышается.

У молодняка в возрасте 5-6 мес. достоверному увеличению подвержено содержание Т-лимфоцитов, Т-киллеров и Т-антиген-реактивных лимфоцитов. Также отмечается повышение К ст. НСТ и концентрации ЦИК. Количество нейтрофилов и В-лимфоцитов также увеличивается, однако не достигает существенного различия.

Зарегистрировано резкое увеличение (Р<0,001) числа Т-киллеров и К ст. НСТ у молодняка в возрасте 12-14 мес.

Дискретно-динамический анализ, проведенный в дальнейшем, позволил установить, что изменения уровней вариабельных параметров в подгруппах с максимальными и минимальными значениями базисного параметра ЦИК у телят 1-2-месячного возраста, родившихся от матерей-вирусоносителей, по сравнению со здоровыми сопровождаются сменой направления связей с отрицательных на положительные и наоборот.

Исследование телят в возрасте 5-6 мес., полученных от инфицированных матерей, выявило более резкие отклонения во взаимосвязях между иммунологическими параметрами, которые можно рассматривать как показатели наличия иммунного дисбаланса, способствующего прогрессированию патологических процессов. Так, наиболее выраженные отклонения, характеризующиеся изменением направления и интенсивности связей, наблюдались при базисе ЦИК, В-лимфоциты, К ст. НСТ, нейтрофилы и Т-антиген-реактивные лимфоциты.

У молодняка крупного рогатого скота в возрасте 12-14 мес., родившегося от матерей-вирусоносителей, изменения интенсивности и направления связей доминировали при базисе нейтрофилы, Т-киллеры, К ст. НСТ, ЦИК, В-лимфоциты и Т-антиген-реактивные лимфоциты.

Также установлено, что у телят, полученн£к от матерей носителей вируса лейкоза, количество статистически достоверных взаимосвязей между параметрами в возрасте 1-2 и 5-6 мес. принципиально не отличается от таковых у здоровых животных. В возрасте 12-14 мес. у молодняка, родившихся матерей-вирусоносителей, количество взаимосвязей увеличивается.

На основании выявленных со степенью достоверности (Р<0,05) значимых сочетаний параметров составили дифференциально-прогностические таблицы и оценивали каждого животного исследуемых групп по всем значимым сочетаниям параметров.

В результате анализа дифференциально-прогностических таблиц было установлено 25 % среди здорового молодняка крупного рогатого скота в возрасте 12 мес. и 20 % в возрасте 5-6 мес. с высокой активностью иммунокомпетентных клеток. У телят, родившихся от матерей-вирусоносителей, в возрасте 1-2 и 5-6 мес. выявлено по 15 % и в возрасте 12-14 мес. 5 % с высокой активностью иммунокомпетентных клеток.

Таким образом, можно заключить, что у телят, родившихся от инфицированных матерей, к 12-14 месячному возрасту формируется функциональное

напряжение иммунной системы, которое характеризуется увеличением числа взаимосвязей по сравнению со здоровым молодняком крупного рогатого скота, а также незначительным (5%) количеством животных с высокой активностью иммунокомпетентных клеток.

3.5.2 Иммунный статус у здорового, инфицированного ВЛКРС и больного лейкозом крупного рогатого скота

Для оценки иммунного статуса отобрали 60 голов крупного рогатого скота, которых разделили на 3 группы. 1-ю группу составили 20 голов интактного (здорового) крупного рогатого скота. 2-ю группу - 20 носителей вируса лейкоза КРС (РИД-положительных на лейкоз) и 3-ю - 20 больных, выявленных гематологическим способом. В периферической крови определили содержание иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании (тыс/мкл), количество циркулирующих иммунных комплексов в условных единицах (у.е.) и функциональную активность нейтрофилов в тесте с нитросиним тетразолием в спонтанном и стимулированном вариантах с последующим подсчетом коэффициента стимуляции (К ст. НСТ).

У животных-вирусоносителей наблюдается достоверное повышение концентрации Т-киллеров, В-лимфоцитов, Т-антиген-реактивных лимфоцитов и ЦИК, в то время как число Т-лимфоцитов снижается. В группе больных животных отмечается увеличение количества Т-лимфоцитов, Т-киллеров, В-лимфоцитов, Т-антиген-реактивных лимфоцитов и ЦИК.

Применение дискретно-динамического анализа в оценке иммунного статуса носителей ВЛКРС и больных лейкозом животных выявило отклонения, характеризующиеся резким изменением направления и интенсивности связей. Кроме того, установлено, что в состоянии нормы у здорового крупного рогатого скота уровень связанности компонентов иммунной системы достаточно низок, с развитием патологического процесса у носителей ВЛКРС и больных лейкозом происходит адаптационная перестройка иммунной системы, обуславливающая изменение характера взаимосвязей.

На основании выявленных достоверных взаимосвязей составили дифференциально-прогностическую таблицу, которая позволяет выявить животных с функциональным напряжением иммунной системы или с наличием иммунной недостаточности, вызванной вирусом лейкоза крупного скота.

Отмечено 1 значимое сочетание параметров у здоровых коров. Так, Т-антиген-реактивные лимфоциты в качестве базисного параметра взаимосвязаны с нейтрофилами.

Количество значимых сочетаний у животных-вирусоносителей по сравнению со здоровыми увеличивается до 10 (в 10 раз). Изучение числа связей каждого определяемого показателя с другими позволило установить, что наибольшей долей участия обладают Т-киллеры и Т-антиген-реактивные лимфоциты (по 3 раза в качестве базисного и вариабельного параметров), наименьшей - Т-лимфоциты (4) и В-лимфоциты (4). Это свидетельствует о функциональном напряжении иммунной системы за счёт потребности подключения большего ко-

личества взаимосвязей её структурных компонентов по сравнению со спокойным функционированием (здоровые животные).

У больных животных число значимых сочетаний по сравнению со здоровыми увеличивается до 12, что также свидетельствует о функциональном напряжении иммунной системы. Устанавливается много отличительных специфических связей. Наибольшей активностью стали обладать К ст. HCT (6) й В-лимфоциты (6).

Затем вычислили коэффициент сопряженности (КС) у здорового, РИД-положительного и больного лейкозом крупного рогатого скота по формуле:

_ количество достоверных связей

КС.---

количество возможных связей

КС у здоровых составил 0,02, у носителей ВЛКРС - 0,24 и у больных лейкозом коров 0,28.

Таким образом, малое число взаимосвязей изученных иммунологических показателей, а, следовательно, низкое значение коэффициента сопряженности (КС = 0,02) - свидетельство спокойного функционирования иммунной системы (более высокого уровня здоровья), большее число и значение КС от 0,24 и выше - признак функционального напряжения иммунной системы.

В дальнейшем, используя значения базисного и вариабельного параметров таблицы, оценивали каждого животного исследуемых групп по всем значимым сочетаниям параметров. Если показатели числа иммунокомпетентных клеток животного соответствовали интервалам хотя бы одного из сочетаний (базисного, вариабельного) таблицы, таких животных признавали с функциональным напряжением иммунной системы или с наличием иммунной недостаточности, вызванной вирусом лейкоза крупного скота.

Проводя подобный анализ иммунологических параметров дифференциально-прогностической таблицы по оценке иммунного статуса, было определено 90 % среди больных животных и 55 % среди носителей ВЛКРС с функциональным напряжением иммунной системы. Среди здоровых с функциональным напряжением иммунной системы не выявлено.

Используя дискретно-динамический принцип оценки иммунного статуса и известные методы диагностики лейкоза (серологический и гематологический) в нескольких хозяйствах, неблагополучных по лейкозу крупного рогатого скота, было исследовано 118 голов крупного рогатого скота (табл. 4).

Таблица 4. - Результаты оценки иммунного статуса у животных из ферм, неблагополучных по лейкозу крупного рогатого скота__

Серологические исследования

Количество животных

Выявлено дискретно-динамическим анализом

здоровых

с функциональным напряжением

в%

РИД(-) РИД(+)

в т.ч. гематологически

больные_

Всего

40 78

37 118

31 9

40

9

69

37 78

22,5 85,5

100 66,1

Из таблицы 4 видно, что дискретно-динамический принцип оценки иммунного статуса при лейкозе крупного рогатого скота позволил выявить 78 животных с функциональным напряжением иммунной системы, вызванным вирусом лейкоза (66,1 % от общего числа), что подтвердило диагноз у всех 37-ми коров с гемограммой, характерной для гематологической стадии лейкоза, а также у 69-ти из 78-ми (85,5 %) у носителей ВЛКРС. Кроме того, удалось дополнительно выявить 9 из 40 РИД-отрицательных животных (22,5%) с недостаточностью иммунной системы в условиях неблагополучной фермы. Необходимо отметить, что во всех исследованных группах КС варьировал от 0,31 до 0,38.

Таким образом, дискретно-динамический принцип оценки иммунного статуса дает возможность обнаружить до 100 % животных с гемограммой, характерной для гематологической стадии лейкоза, и на 22,5 % больше среди РИД-отрицательных животных с иммунной недостаточностью в условиях неблагополучной по лейкозу крупного рогатого скота фермы.

3.5.3 Способ выявления крупного рогатого скота с повышенным риском к заболеванию лейкозом

Были проведены исследования по определению коэффициента отношения процентного содержания лимфоцитов к различным субпопуляциям лимфоцитов (Т-, В-лимфоциты, Т-антиген-реактивные лимфоциты и Т-киллеры) для установления наиболее стабильного признака, отражающего иммунный статус животных.

Установлено, что коэффициент отношения (К0) лимфоцитов к Т-кшшерам у носителей вируса лейкоза и больных по отношению к здоровым коровам не достигает существенной разницы (Р>0,05). Ко лимфоцитов к В-лимфоцитам у животных-вирусоносителей уменьшается, тогда как у больных увеличивается. К0 лимфоцитов к Т-антиген-реактивным лимфоцитам у животных-вирусоносителей с высокой степенью достоверности уменьшается, а у больных не достигает статистически значимых различий. Наиболее стабильным признаком является процентное отношение числа лимфоцитов к числу Т-лимфоцитов.

Анализируя иммунологические параметры каждого отдельного животного установили, что отношение лимфоцитов к Т-лимфоцитам среди здоровых не превышает 3,5, среди вирусоносителей - от 4,3 и выше и среди больных варьирует от 4,88 до 16,4,

Отношение лимфоцитов к В-лимфоцитам среди здоровых и инфицированных не имеет существенных различий и варьирует от 0,77 до 4,55, в то время как у большинства больных это отношение увеличивается. Отношение лимфоцитов к Т-киллерам и лимфоцитов к Т-лимфоцитам, распознающим антигены вируса лейкоза, среди здоровых, носителей вируса лейкоза и больных животных находится в одних пределах и не представляется возможным выделить какой-либо признак различий.

Следовательно, наиболее стабильным признаком в иммунной системе больных и животных-вирусоносителей, свидетельствующим об иммунной недостаточности, является изменение общего числа лимфоцитов и Т-лимфоцитов с рецептором к эритроцитам барана.

В дальнейшем в условиях хозяйства, неблагополучного по лейкозу крупного рогатого скота, исследовали телят, полученных от матерей-вирусоносителей, в возрасте до 2-х мес., 4-6 мес., 12-14 мес. в сравнении с телятами этих же возрастных групп из благополучного по лейкозу крупного рогатого скота хозяйства. Телята всех возрастных групп не реагировали в РИД. В крови определяли коэффициент отношения процентного содержания лимфоцитов к Т-лимфоцитам.

Коэффициент отношения содержания лимфоцитов к числу Т-лимфоцитов у 11-ти из 15-ти животных (73 %) в возрасте до 2-х мес. из неблагополучного хозяйства составил от 4,68 и выше. Эту группу телят относить к числу с повышенным риском к заболеванию лейкозом преждевременно из-за материнских колостральных антител к вирусу лейкоза, присутствие их в крови блокирует рецепторы Т-л1гмфоцитов к эритроцитам барана и препятствует розеткообразо-. ванию. У 15-ти телят этой же возрастной группы из благополучного хозяйства этот коэффициент варьировал в пределах от 1,07 до 2,35 и указывал на отсутствие у животных вируса лейкоза.

В возрасте 4-6 мес. у одного из 15-ти животных, полученных от матерей-вирусоносителей, коэффициент отношения составил 17,0, у остальных до 3,42. В дальнейшем этих телят подвергли гематологическому методу исследования и выявили того же самого животного, что подтвердило диагноз. У 15-ти телят из благополучного хозяйства коэффициент отношения находился в пределах от 1,08 до 3,6 и указывал на отсутствие у животных вируса лейкоза.

У 14 животных в возрасте 12-14 мес. из неблагополучного хозяйства коэффициент отношения составил от 4,35 и выше (93,3 %). Дальнейшее гематологическое исследование позволило выявить 7 больных, из числа этих 14-ти животных. У 15-ти телят этого же возраста из благополучного хозяйства коэффициент отношения варьировал в пределах от 1,10 до 2,31.

Также были исследованы 20 коров, которые содержались в пункте по передержке инфицированного вирусом лейкоза крупного рогатого скота, заражение которого было выявлено серологически (РИД). Коэффициент отношения содержания лимфоцитов к числу Т-лимфоцитов у 18-ти коров составил от 4,31 до 41,5, что свидетельствовало о повышенном риске к заболеванию лейкозом, у 2-х - 2,96 и 2,62 соответственно. В последующем при исследовании гематологическим методом диагноз на лейкоз подтвержден у 11-ти коров. У 20-ти коров из благополучного хозяйства это отношение варьировало в пределах от 2,50 до 3,93.

Таким образом, увеличение коэффициента отношения общего числа лимфоцитов к числу Т-лимфоцитов с рецептором к эритроцитам барана указывает на иммунную недостаточность и является наиболее стабильным признаком в иммунной системе вирусоносителей или больных лейкозом крупного рогатого скота. Если коэффициент отношения < 4,2, то животное считают здоровым, если коэффициент отношения > 4,3, то животное признается с повышенным риском к заболеванию лейкозом.

4 ВЫВОДЫ

1. Разработаны и оптимизированы методы контроля и коррекции иммунного статуса у крупного рогатого скота, основанные на применении иммунологических методов исследования, дискретно-динамического анализа, оценке имму-номодулирующих и протективных свойств известных и вновь синтезируемых биологических препаратов. Программное обеспечение анализа иммунологических параметров уменьшает затраты времени в 20 раз и составляет 5-10 минут.

2. Иммунный статус у молодняка крупного рогатого скота, привитого вакциной БЦЖ в возрасте до 20-ти дней, характеризуется увеличением в крови числа иммунокомпетентных клеток в 1,3-3,8 раза. К 9-11-ти месячному возрасту уменьшилось и составило: Т-лимфоцитов (1,05±0,08 тыс/мкл); Т-киллеров (2,35±0,18 тыс/мкл); В-лимфоцитов (2,37±0,21 тыс/мкл); Т-антиген-реактивных лимфоцитов (0,79±0,10 тыс/мкл); нейтрофилов (1,92±0,26 тыс/мкл) и сохранилось на этом уровне до 15-17-ти месячного возраста.

3. Установлены методом дискретно-динамического анализа и разработанной на его основе дифференциально-прогностической таблицы значимые в оценке противотуберкулезного иммунитета (Р<0,05) сочетания показателей активности иммунокомпетентных клеток крови. Иммунизация вакциной БЦЖ усиливает в системе иммунитета крупного рогатого скота взаимосвязи иммунологических параметров и увеличивает число их сочетаний.

4. Экспериментальными исследованиями с использованием дифференциально-прогностических таблиц и значимых сочетаний параметров (базис, вариабельный) выявлены из числа телят, привитых БЦЖ до 20-ти дней, в возрасте 45 месяцев 70 % иммунных животных, в возрасте 9-11 месяцев 50 % и в возрасте 15-17 месяцев 3 0 % иммунных животных.

5. Разработана система иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза, предусматривающая первичную иммунизацию молодняка в возрасте 1020 суток вакциной БЦЖ, реиммунизацшо в возрасте 15-17 мес. также вакциной БЦЖ, а все последующие противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 через каждые 12 мес. до оздоровления фермы (хозяйства). Контроль иммунного и инфекционного статуса привитых животных проводят туберкулиновой аллергической пробой через 6 мес.

6. Разработан метод оценки иммуномодулирующей способности препаратов, включающий индукцию толерантности ПГЩ-туберкулином для млекопитающих, восстановление утраченной реактивности изучаемым средством, иммунизацию БЦЖ на способность противостоять экспериментальному заражению возбудителем туберкулеза и по результатам патологоанатомического исследования оценку иммуномодуляторов по индексу защиты: от 100% до 67% — высокая способность иммуномодуляции, 66-43% средняя, от 42% и меньше - низкая.

7. Предложена новая технология изготовления специфических средств на основе комплекса антигенов микобактерий вакцинного штамма БЦЖ и поливи-нилпирролидона (ПВП), позволяющая создавать препараты, способные восстанавливать у животных утраченную иммунологическую реактивность, устранять

вторичные иммунодефицита и усиливать протективные свойства вакцины БЦЖ.

8. Иммуномодулятор, составленный нами на основе комплекса антигенов микобактерий БЦЖ, инкубированный с формалином, и конъюгированый с ПВП в соотношении 1 мг/мл белка комплекса антигенов к 600 мг ПВП наиболее перспективный. Специфический иммуномодулятор усиливает протективные свойства вакцины БЦЖ, о чем свидетельствует увеличение количества взаимосвязей в системе иммунитета и числа телят с высокой активностью иммунокомпетент-ных клеток, выявленных с помощью дискретно-динамического анализа.

9. Разработан иммунологический метод для выявления больного и инфицированного вирусом лейкоза крупного рогатого скота, основанный на оценке функционального состояния Т-лимфоцитов в реакции спонтанного розеткооб-разования. Этот метод позволяет выявлять на 46,66 % больше животных, имеющих иммуно-клеточные изменения в организме, свойственные лейкозу крупного рогатого скота, тем самым повышает достоверность диагностики инфекции в совокупности с традиционными методами. Пригоден для оперативной оценки инфекционного статуса и для прогнозирования эпизоотического процесса лейкоза в стаде.

10. Комплексная оценка иммунного статуса крупного рогатого скота при лейкозе включает определение концентрации нейтрофилов, Т-лимфоцитов, Т-антиген-реактивных лимфоцитов, В-лимфоцитов, количество ЦИК, оценку функционального состояния нейтрофилов в НСТ-тесте. С помощью компьютерной программы выделяют те сочетания параметров, которые присущи здоровым, инфицированным и больным лейкозом животным, вычисляют коэффи-

/т1 количество достоверных связей т-г

циент сопряженности (КС) по формуле: КС =---. При

количество возможных связей

КС равном или превышающем значение 0,24 считают признаком функционального напряжения иммунной системы..

11. Оценка иммунного статуса крупного рогатого скота с помощью дискретно-динамического анализа иммунокомпетентных клеток позволяет в неблагополучных. по лейкозу стадах выявить до 100 % животных с гемограммой, характерной для гематологической стадии лейкоза, и до 22,5 % из числа РИД-отрицательных животных с иммунной недостаточностью. Способ может быть использован для более точной иммунно-эпизоотологической и прогностической оценки состояния стада крупного рогатого скота по лейкозу.

12. Число сочетаний иммунологических параметров со степенью достоверности (Р<0,05) является важнейшим критерием, характеризующим спокойное или напряженное состояние иммунной системы. Иммунный статус крупного рогатого скота больного туберкулезом характеризуется увеличением количества таких сочетаний в 6,5 раз, а носителей ВЛКРС и больных лейкозом животных в 10 раз и выше по сравнению с интактными животными.

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты научных исследований использованы для разработки 5 методических рекомендаций, утвержденных на федеральном и региональном уровнях:

1. «Дискретно-динамический анализ в оценке иммунитета» (одобрены решением подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины СО РАСХН, протокол № 5 от 21 июня 2005 г.).

2. «Методы оценки противотуберкулезного иммунитета у крупного рогатого скота на основе взаимосвязей в системе иммунитета: перспектива использования в ветеринарии» (одобрены решением подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины СО РАСХН, протокол № 5 от 10 января 2003 г.).

3. «Комплекс противоэпизоотических мероприятий по профилактике и ликвидации хронических болезней животных» (одобрены секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Омской области, протокол №9 от 15 ноября 2008 г.).

4. «Оценка иммунного статуса у крупного рогатого скота при лейкозе» (одобрены решением секции «Инфекционная патология» отделения ветеринарной медицины РАСХН, протокол № 4 от 13 ноября 2009 г.).

5. «Оценка иммуномодулирующих свойств препаратов на их способность восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность» (одобрены решением секции «Инфекционная патология» отделения ветеринарной медицины РАСХН, протокол № 2 от 19 апреля 2010 г.).

6. Монография «Иммунология, микробиология, эпизоотология бруцеллеза и туберкулеза животных» написана с учетом результатов проведенных исследований, может быть использована в научно-исследовательских учреждениях при разработке тематических планов научно-исследовательских работ, а также в учебном процессе ВУЗов ветеринарного и общебиологического профиля.

СПИСОК

опубликованных работ по теме диссертации Статьи в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК

Минобрнауки РФ для публикации основных результатов диссертации

1. Бажин, М.А. Иммунопрофилактика в комплексе противотуберкулезных мероприятий / М.А. Бажин, Ю.И. Смолянинов, В.Г. Ощепков, H.H. Кощеев,

A.Н. Новиков, B.C. Власенко, A.C. Куварин // Ветеринарная патология. - № 1-2.-2004.-С. 139-142.

2. Власенко, B.C. Перспектива использования дискретно-динамического принципа оценки иммунного статуса в ветеринарии / B.C. Власенко, М.А. Бажин, А.Н. Новиков // Ветеринарная патология. - 2005. - № 3. - С. 90-94.

3. Власенко, B.C. Оценка иммуномодулирующих свойств препаратов на их способность восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность /

B.C. Власенко, М.А. Бажин, А.Н. Новиков, Е.М. Шулико // Ветеринарная патология. - 2007. - № з. _ с. 195-199.

4. Власенко, B.C. Выявление животных с повышенным риском к заболеванию вирусом лейкоза крупного рогатого скота / B.C. Власенко, Т.С. Дудоладо-ва, М.А. Бажин, А.Н. Новиков // Ветеринария и кормление. - 2008. - №4. - С. 89.

5. Власенко, B.C. Иммуномодулирующие свойства препаратов, изготовленных на основе антигенов вакцинного штамма БЦЖ и полиэлектролитов / B.C. Власенко, М.А. Бажин, А.Н. Новиков, Е.М. Шулико // Сиб. вестник с.-х. науки. - 2008. - №10. — С.68-73.

6. Власенко, B.C. Оценка иммуномодулирующей способности известных и вновь синтезируемых препаратов / B.C. Власенко, М.А. Бажин, А.Н. Новиков // Ветеринария и кормление. - 2009. - №4. - С. 18-19.

7. Пацула, Ю.И. Ускоренный метод визуализации восстановленного нитро-синего тетразолия для оценки функциональной активности нейтрофилов / Ю.И. Пацула, B.C. Власенко // Ветеринария и кормление. - 2009. - №4. - С. 20-21.

8. Власенко, B.C. Оценка иммунного статуса крупного рогатого скота при лейкозе / B.C. Власенко, М.А. Бажин // Сиб. вестник с.-х. науки. - 2009. - №9. -С. 64-69.

9. Власенко, B.C. Иммуностимулирующие свойства конъюгатов, изготовленных на основе антигенов БЦЖ с поливинилпирролидоном / B.C. Власенко, Е.М. Шулико, С.Ю. Петров, М.А. Бажин, А.Н. Новиков // Достижения науки и техники АПК. - 2009. - № 12. - С. 47-50.

Патенты

10. Пат. 2257913 Российская Федерация, МПК7 А61К 39/00, G01N 33/53. Способ оценки иммунитета привитого молодняка крупного рогатого скота / Бажин М.А., Донченко H.A., Власенко B.C., Новиков А.Н., Шамов В.В.; заявитель и патентообладатель Всерос. науч.-исслед. ин-т бруцеллеза и туберкулеза животных. — N2 2003101186; заявл. 16.01.03; опубл. 10.08.05, Бюл. № 22.-16 с.

И. Пат. 2266753 Российская Федерация, МПК7 А61К 39/04. Способ профилактики туберкулеза / Бажин М.А., Ощепков В.Г., Новиков А.Н., Власенко B.C., Темиркалин Т.Т.; заявитель и патентообладатель Всерос. науч.-исслед. ин-т бруцеллеза и туберкулеза животных. - № 2004111058; заявл. 12.04.04; опубл. 27.12.05, Бюл. №36.-6 с.

12. Пат. 2354401 Российская Федерация, МПК А61К 39/04, A61D 99/00. Способ оценки иммуномодулирующих препаратов / Бажин М.А., Власенко B.C., Новиков А.Н.; заявитель и патентообладатель Всерос. науч.-исслед. ин-т бруцеллеза и туберкулеза животных. - № 2007128669; заявл. 25.07.07; опубл.

10.05.09, Бюл. № 13.-7 с.

13. Пат. 2366455 Российская Федерация, МПК А61К 39/04, C12N 1/20, C12R 1/32. Способ получения специфического иммуномодулятора / Бажин М.А., Власенко B.C., Новиков А.Н., Неворотова Г.П., Шулико Е.М., Реутова Т.С.; заявитель и патентообладатели: Министерство сельского хозяйства и продовольствия Омской области, Всерос. науч.-исслед. ин-т бруцеллеза и туберкулеза животных. -№ 2007139594; заявл. 25.10.07; опубл. 10.09.09, Бюл. № 25. - 8 с.

14. Пат. 2379683 Российская Федерация, МПК G01N 33/48. Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота / Бажин М.А., Власенко B.C., Дудоладо-ва Т.С., Новиков А.Н.; заявитель и патентообладатель Всерос. науч.-исслед. ин-т бруцеллеза и туберкулеза животных. - № 2008122655; заявл. 04.06.08; опубл.

20.01.10, Бюл. №2.-6 с.

15. Пат. 2408018 Российская Федерация, МПК G01N 33/48. Способ оценки иммунного статуса крупного рогатого скота при лейкозе / Власенко B.C., Око-лелов В.И., Бажин М.А., Новиков А.Н.; заявитель и патентообладатель Всерос. науч.-исслед. ин-т бруцеллеза и туберкулеза животных. - № 2008150888; заявл.

22.12.08, опубл. 27.12.2010, Бюл. № 36. - 9 с.

16. Способ определения функциональной активности нейтрофилов по реакции восстановления нитросинего тетразолия / Пацула Ю.И., Власенко B.C., заявитель и патентообладатели Всерос. науч.- исслед. ин-т бруцеллеза и туберкулеза животных, Муниципальное учреждение здравоохранения Городская детская клиническая больница №2 имени В.П. Бисяриной. - № 2009117416; заявл.

07.05.09, опубл. 27.03.2011, Бюл. №9. - 5 с. (решение о выдаче патента на заявку №2009117416 от 5 мая 2010 г.)

Монография, рекомендации

17. Колычев, Н.М. Иммунология, микробиология, эпизоотология бруцеллеза и туберкулеза животных: монография / Н.М. Колычев, М.А. Бажин, A.A. Новицкий, B.C. Власенко. - Омск: Изд-во ФГОУ ВПО ОмГАУ, 2007. - 377 с.

18. Бажин, М.А. Методы оценки противотуберкулезного иммунитета у крупного рогатого скота на основе взаимосвязей в системе иммунитета: перспектива использования в ветеринарии: методические рекомендации / М.А. Бажин, H.A. Донченко, B.C. Власенко, А.Н. Новиков. - РАСХН. Сиб. отд-ние. ГНУ ВНИИБТЖ, ГНУ ИЭВСиДВ. - Омск, 2005. - 13 с.

19. Бажин, М.А. Дискретно-динамический анализ в оценке иммунитета: методические рекомендации / М.А. Бажин, B.C. Власенко, А.Н. Новиков, Ю.И. Пацула. - СО РАСХН. ВНИИБТЖ. - Омск, 2005. - 24 с.

20. Ощепков, В.Г. Комплекс противоэпизоотических мероприятий по профилактике и ликвидации хронических болезней животных: методические рекомендации / В.Г. Ощепков, М.А. Бажин, JI.B. Дегтяренко, В.Ф. Бордюг; Н.С. Бо-ганец, JI.A. Таллер, А.Н. Новиков, B.C. Власенко и др. — СО Россельхозакаде-мии. ВНИИБТЖ. - Омск, 2008. - 36 с.

21. Власенко, B.C. Оценка иммунного статуса у крупного рогатого скота при лейкозе: методические рекомендации / B.C. Власенко, М.А. Бажин, Т.С. Дудо-ладова, А.Н. Новиков, В.А. Мироненко. - ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакаде-мии; ГНУ СО Россельхозакадемии. - Омск, 2010. - 31 с.

22. Бажин, М.А. Оценка иммуномодулируюгцих свойств препаратов на их способность восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность / М.А. Бажин, B.C. Власенко, А.Н. Новиков, Е.М. Шулико. - ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии; ГНУ СО Россельхозакадемии. - Омск, 2010. - 12 с.

Работы, опубликованные в сборниках научных трудов, материалах конференций и других изданиях

23. Власенко, B.C. Взаимосвязи в системе иммунитета у интакгаых и привитых вакциной БЦЖ телят /B.C. Власенко, М.А. Бажин // Инфекционная патология животных: Сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. - Омск, 2001. - С. 198-202.

24. Власенко, B.C. Дискретно-динамический анализ в оценке противотуберкулезного иммунитета у молодняка крупного рогатого скота / B.C. Власенко, В.В. Шамов // Научное обеспечение АПК Сибири, Монголии, Казахстана, Беларуси и Башкортостана: Матер. 5-ой Междунар. науч.- практ. конф. (Абакан, 10-12 июля 2002 г.) / РАСХН. Сиб. отд-ние. - Новосибирск, 2002. - С. 382-384.

25. Бажин, М.А. Составление дифференциально-прогностических таблиц на основе дискретно-динамического принципа оценки иммунного статуса / М.А. Бажин, B.C. Власенко, А.Н. Новиков // Эпизоотология, диагностика и профилактика хронических инфекционных болезней животных: Матер. Междунар. науч. конф. посвященной 175-летию аграрной науки Сибири (Омск, 24-26 июня 2003 г.): сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. - Омск, 2.003. - С. 97-108.

26. Власенко, B.C. Оценка иммунного статуса интактных и привитых вакциной БЦЖ животных с помощью дифференциально-прогностических таблиц / B.C. Власенко, М.А. Бажин // Эпизоотология, диагностика и профилактика хронических инфекционных болезней животных: Матер. Междунар. науч. конф. посвященной 175-летию аграрной науки Сибири (Омск, 24-26 июня 2003 г.): сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. - Омск, 2003. - С. 109-115.

27. Власенко, B.C. Оценка иммунного статуса молодняка крупного рогатого скота, привитого БЦЖ, на основе взаимосвязей в системе иммунитета / B.C. Власенко, М.А. Бажин // Там же. - С. 116-122.

28. Власенко, B.C. Дискретно-динамический принцип оценки иммунного статуса животных / B.C. Власенко // Эпизоотология, патология и ветеринарно-санитарные мероприятия при инфекционных болезнях животных: Матер. Междунар. науч.-практич. конф. посвященной 35-летию СО РАСХН: сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. - Омск, 2004. - С. 22-27.

29. Власенко, B.C. Взаимосвязи в системе иммунитета у здорового, реагирующего и больного туберкулезом крупного рогатого скота / B.C. Власенко, М.А. Бажин, A.C. Куварин, А.Н. Новиков, В.Ф. Бордюг // Эпизоотология, патология и ветеринарно-санитарные мероприятия при инфекционных болезнях животных: Матер. Междунар. науч.-практич. конф. посвященной 35-летию СО РАСХН: сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. - Омск, 2004. - С. 28-33.

30. Бажин, М.А. Вакцинопрофилактика в комплексе противотуберкулезных мероприятий / М.А. Бажин, B.C. Власенко, A.C. Куварин, А.Н. Новиков // Мат. Междунар. науч.-практ. конф., посвященной 100-летию со дня рождения И.Г. Кондюрина / ФГОУ ОмГАУ. - Омск, 2004. - С. 345-350.

31. Власенко B.C. Математическое моделирование в иммунологии / B.C. Власенко // Мат. Междунар. науч.-практ. конф., посвященной 100-летию со дня рождения И.Г. Кондюрина / ФГОУ ОмГАУ. - Омск, 2004. - С. 361-365.

32. Бажин, М.А. Взаимосвязи в системе иммунитета у морских свинок, инфицированных различными видами микобактерий / М.А. Бажин, В.А. Шкурин, B.C. Власенко, A.C. Куварин, А.Н. Новиков // Мат. 4-й межрег. науч.-практ. конф., посвященной 100-летию со дня рождения И.В. Окунцова: сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. - Омск, 2005. - С. 28-32.

33. Куварин, A.C. Иммунный статус у коров, нереагируюгцих и реагирующих на ППД-туберкулин и привитых вакциной БЦЖ / A.C. Куварин, А.Н. Но-

виков, М.А. Бажин, B.C. Власенко // Ветеринарна медицина: Межвщ. темат. наук. 36ipHHK.- XapKiB, 2005. - T. 1. - С. 627-631.

34. Бажин, М.А. Микобактериозы крупного рогатого скота и их профилактика / М.А. Бажин, Ю.И. Смолянинов, H.H. Кощеев, В.Ф. Бордюг, B.C. Власенко // Тезисы докладов Междунар. науч.-практ. конгресса (актуальные проблемы ветеринарной медицины 29-30 августа 2005 г), Спб., 2005. - С. 44-45.

35. Власенко, B.C. Функционирование иммунной системы у интактного и привитого вакциной БЦЖ крупного рогатого скота / B.C. Власенко, М.А. Бажин, А.Н. Новиков, A.B. Миронов // Аграрная наука сельскохозяйственному производству Сибири, Монголии, Казахстана и Кыргызстана: Матер. 8-ой Междунар. науч.- практ. конф. (Барнаул, 26-28 июля 2005 г.) / РАСХН. Сиб. отд-ние,- Новосибирск, 2005. - Т. 2. - С. 252-254.

36. Власенко, B.C. Оценка иммунного статуса коров, привитых БЦЖ, ин-тактных и больных туберкулезом / B.C. Власенко, А.Н. Новиков, М.А. Бажин // Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний: Матер. Междунар. симпозиума, посвященного 45-летию образования ФГУ ФЦТРБ - ВНИВИ (2830 ноября 2005 года) / Казань, 2005. - Т. 2. - С. 80-83.

37. Пацула, Ю.И. Реакции клеточного иммунитета у морских свинок при экспериментальном микобактериозе / Ю.И. Пацула, B.C. Власенко, А.Н. Новиков, М.А. Бажин, A.C. Куварин // Актуальные вопросы инфекционной патологии: Матер, юбилейной науч.-практ. конф., посвященной 75-летию кафедр инфекционных болезней взрослых и детей ОмГМА (Омск, 20-21 декабря 2005 г) / Омский научный вестник. - 2005. - № 4 (Приложение к Вып. 33). - С. 89-90.

38. Бажин, М.А. Клеточные реакции у морских свинок, инфицированных различными видами микобактерий / М.А. Бажин, B.C. Власенко, A.C. Куварин, А.Н. Новиков, Ю.И. Пацула, H.H. Кощеев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных: Матер. 5-й межрег. науч.-практ. конф.: сб. науч. тр. / Омск, 2006. — С. 15-18.

39. Власенко, B.C. Динамика содержания иммунологических параметров и их взаимосвязи в системе иммунитета крупного рогатого скота, привитого вакциной БЦЖ / B.C. Власенко, A.B. Миронов, М.А. Бажин, А.Н. Новиков, C.B. Савицкий // Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных: Матер. 5-й межрег. науч.-практ. конф.: сб. науч. тр. / Омск, 2006. - С. 42-47.

40. Власенко, B.C. Анализ взаимосвязей в системе иммунитета молодняка крупного рогатого скота, привитого вакциной БЦЖ / B.C. Власенко, А.Н. Новиков, М.А. Бажин, C.B. Савицкий // Патология сельскохозяйственных животных и пути ее профилактики: Матер. 6-й межрег. науч.-практ. конф. посвященные 85-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ. Вып. 2. - Омск, 2007. - С. 51-54.

41. Власенко, B.C. Методы контроля активной фазы иммунного ответа / B.C. Власенко // Матер, межрегиональной науч.-практ. конф. «Дни иммунологии в Сибири» (Омск, 26-28 сентября 2007 г) / Омский научный вестник. - 2007. - № 3 (Приложение 2). - С. 328-330.

42. Власенко, B.C. Реакции клеточного иммунитета у морских свинок на введение антигенных комплексов / B.C. Власенко, А.Н. Новиков, М.А. Бажин, Ю.И. Пацула // Диагностика, лечение и профилактика болезней животных в условиях Сибири и Урала: Матер. 7-й межрег. науч.-практ. конф., посвященной 180-летию аграрной науки Сибири. - Омск, 2008. - С. 78-81.

43. Власенко, B.C. Иммунный статус инфицированного вирусом лейкоза крупного рогатого скота / B.C. Власенко, Т.С. Дудоладова, М.А. Бажин, А.Н. Новиков, В.А. Мироненко // Развитие АПК Азиатских территорий: Тр. Х1-й Междунар. науч.-практ. конф. (Новосибирск, 25-27 июня 2008 г.) / Россельхо-закадемия. Сиб. отд-ние. - Новосибирск, 2008. - Т. П. - С. 48-51.

44. Бажин, М.А. Протективные свойства конъюгатов, приготовленных на основе антигенов БЦЖ и синтетических полиэлектролитов / М.А. Бажин, B.C. Власенко, А.Н. Новиков, Е.М. Шулико, С.Ю. Петров // Современные проблемы диагностики и профилактики хронических зооантропонозных инфекций: Матер. Всерос. науч.-практ. конф. — Омск, 2009. - С. 99-102.

45. Власенко, B.C. Функциональное состояние иммунной системы у коров, нереагирующих и реагирующих на ППД-туберкулин и привитых БЦЖ / B.C. Власенко, Ю.И. Пацула, В.А. Мироненко // Современные проблемы диагностики и профилактики хронических зооантропонозных инфекций: Матер. Всерос. науч.-практ. конф. — Омск, 2009. - С. 112-116.

46. Власенко, B.C. Иммунный статус у здорового и родившегося от матерей, инфицированных вирусом лейкоза, молодняка крупного рогатого скота / B.C. Власенко, Т.С. Дудоладова, М.А. Бажин, А.Н. Новиков, В.А. Мироненко // Патология продуктивных и непродуктивных животных, рыб и птиц: Матер. 8-й межрег. науч.-практ. конф. - Омск, 2009. - С. 23-29.

47. Власенко, B.C. Характеристика иммунного статуса морских свинок, инфицированных М. bovis / B.C. Власенко // Актуальные проблемы инновационного развития ветеринарной науки и практики: Матер. Междунар. науч.-практ. конф., посвященной 105-летию КазНИВИ (Алматы, 16-17 сентября 2010 г.). — Алматы, 2010. - Т. 56. - С. 95-99.

48. Власенко, B.C. Иммунологические изменения у инфицированного вирусом лейкоза и больного лейкозом крупного рогатого скота / B.C. Власенко // Актуальные проблемы инфекционных и незаразных патологий животных: Матер. X Междунар. науч.-практ. конф. (Омск, 21-22 сентября 2010 г.). — Омск, 2010.-С. 209-212.

Типография ОмГУПСа, 2011. Тираж 100 экз. Заказ 288. 644046, г. Омск, пр. Маркса, 35.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Власенко, Василий Сергеевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Структура иммунной системы и ее функции.

1.2. Основные принципы работы иммунной системы.

1.3. Взаимосвязи в системе иммунитета.

1.4. Гиперчувствительность замедленного типа в противотуберкулезном иммунитете.

1.4.1. Механизм противомикробного иммунитета.

1.5. Иммунопрофилактика в комплексе противотуберкулезных мероприятий.

1.6. Иммунологическая толерантность.

1.7. Иммунная недостаточность.

1.7.1. Коррекция иммунной недостаточности.

1.8. Лейкоз крупного рогатого скота и современные методы его диагностики.

1.8.1. Иммунная недостаточность при лейкозе.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Оптимизация методов контроля и коррекции иммунного статуса при туберкулезе и лейкозе крупного рогатого скота"

Туберкулез до настоящего времени остается одним из самых распространенных зооантропонозных заболеваний, передающегося от больных животных человеку, и в зонах распространения причиняет огромный социальный и экономический ущерб. Несмотря на достигнутое значительное улучшение эпизоотической обстановки в стране некоторые ее регионы остаются неблагополучными по туберкулезу крупного рогатого скота и, в связи с этим, не исключена возможность заноса возбудителя этого заболевания в хозяйства благополучных зон (A.C. Донченко, В.Н. Донченко, 1994; В.Г. Ощепков, 2001, 2007; Ю.И. Смолянинов с соавт., 2003; А.Х. Найманов с соавт., 2009; Н.М. Колычев, 2010 и др.).

В системе мер борьбы с туберкулезом особое место отводится иммунодиагностике и иммунопрофилактике. Вопросы совершенствования методов и средств специфической профилактики обстоятельно освещены в нашей стране в научных трудах М.Н. Верещагина (1926), П.П. Вишневского (1927), В.Н. Матвеева (1936), A.M. Говорова (1954), H.A. Александрова (1975), Х.К. Гиза-тулина, М.А. Сафина (1980), М.А. Сафина (1982, 1983, 1985), Д.Д. Новака (1984), Б .Я. Хайкина с соавт. (1984), А.И. Кузина (1987), A.C. Донченко (1983, 1995), H.A. Донченко (2008) и других ученых. Данные многих научных исследований и результаты практического применения вакцинопрофи-лактики в общем комплексе противотуберкулезных мер указывают на довольно высокую ее эффективность. Применяемая живая вакцина БЦЖ, позволяет сократить сроки оздоровления ферм с меньшими материальными затратами, однако при этом создаются трудности в диагностике туберкулеза (длительные поствакцинальиые реакции на взрослом скоте).

Необходимость в ряде угрожаемых и неблагополучных по туберкулезу хозяйств создания у животных перманентного (постоянного) противотуберкулезного иммунитета (в течение 4-6 лет) без длительного проявления кожной сенсибилизации требует создания новых экологически безопасных молекулярных вакцин.

Одной из наиболее важных задач иммунологии является поиск путей и средств целенаправленной регуляции иммуногенеза. Для более эффективного восстановления реактивности у животных можно использовать специфические иммуномодуляторы, позитивно воздействующие на систему иммунитета и не осложняющие контроль за туберкулезной инфекцией в стадах. Такие молекулярные препараты могут быть созданы на основе конъюгации антигенов, выделенных из вакцинного штамма БЦЖ, с полимеразной матрицей.

Разработка новых молекулярных вакцин и иммуномодуляторов и способов их применения в животноводстве обязывает вести контроль за здоровьем животных. Наиболее информативные в этом плане иммунологические методы оценки. Следовательно, оптимизировать существующие иммунологические методы с целью контроля и коррекции иммунного статуса, а также при изучении инфекционной патологии животных перспективно.

Лейкоз крупного рогатого скота в настоящее время распространен во многих субъектах Российской Федерации и составляет в структуре инфекционных заболеваний 62,7%. Ежегодно регистрируют несколько тысяч неблагополучных пунктов, в которых выявляют более 1,2 млн. особей, зараженных вирусом лейкоза крупного рогатого скота, из них до 100 тыс. - в гематологической стадии лейкоза (П.Н. Смирнов с соавт., 1992; М.И. Гулюкин с соавт., 2002, 2005; Ю.П. Смирнов с соавт., 2008).

Изучение иммунологических аспектов при инфекции ВЛКРС и лейкозе крупного рогатого скота остается весьма актуальной проблемой ветеринарной лейкозологии и необходимо для объективной оценки при проведении диагностических исследований на лейкоз.

Не вызывает сомнения тот факт, что возникновение нарушений функций иммунной системы является одним из патогенетических механизмов при возникновении туберкулеза и лейкоза крупного рогатого скота. Однако при изучении иммунного статуса существенные изменения уровней иммунологических показателей отмечаются лишь у части больных, при этом по уровням отдельных параметров какие-либо закономерные нарушения в иммунной системе выявить не удается. Контроль за изменениями может осуществляться с помощью математического моделирования состояний, сущность которого состоит в том, что в системе выделяются несколько доминирующих для того или иного состояния компонентов и создают на их основе математическую модель, которая представляет собой уравнение или систему уравнений, связывающие несколько показателей в единое целое (Г.И. Марчук, Р.В. Петров, 1982; Г.И. Марчук, JI.H. Белых, 1986). В настоящее время имеются различные подходы по созданию интегральных показателей иммунного статуса и методов прогнозирования заболевания.

Поскольку в основе функционирования любой системы лежат связи между ее компонентами, для изучения иммунной системы Р.В. Петровым с со-авт. (1983) был предложен дискретно-динамический подход, базирующийся на оценке иммунного статуса с позиции взаимосвязей между параметрами.

В последующем на основе выявленных сочетаний параметров с различными взаимосвязями в иммунной системе, составляют дифференциально-прогностические таблицы, с помощью которых прогнозируют формирование протективного иммунитета или патологии (М.А. Бажин, 1995).

Создание таких таблиц и в целом комплексное многоплановое исследование иммунного статуса крупного рогатого скота при туберкулезе и лейкозе на основе взаимосвязей актуальны и полученные в этом плане новые знания могут быть использованы при оценке развития инфекционного процесса и прогноза течения заболевания.

Цель и задачи исследования. Цель исследований состояла в оптимизации существующих и разработке новых методов контроля и коррекции иммунного статуса при туберкулезе и лейкозе крупного рогатого скота.

Для достижения намеченной цели были определены следующие задачи:

- разработать способ оценки иммунного статуса привитых животных, объективно отражающий состояние клеточного иммунитета;

- оценить противотуберкулезный иммунитет на основе взаимосвязей в системе иммунитета здоровых, вакцинированных БЦЖ, реагирующих на

ППД-туберкулин для млекопитающих и больных туберкулезом животных;

- разработать систему иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза с применением БЦЖ и молекулярной вакцины ТБЦ-2;

- разработать технологию изготовления специфического иммуномодули-рующего средства на основе антигенов микобактерий вакцинного штамма БЦЖ и полиэлектролитов и определить его протективные свойства в опытах на лабораторных животных и крупном рогатом скоте;

- разработать1 приемлемые для практического использования методы оценки иммунного статуса у крупного рогатого скота при лейкозе.

Связь исследований с научной программой. Диссертация выполнена в соответствии с тематическими планами НИР ВНИИБТЖ 02.01.08. «Разработать новые методы иммунологической защиты животных на основе применения молекулярных препаратов и методов оценки иммунологических феноменов» (2000-2005 гг.); 08.01.04. «Создать систему иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза с применением молекулярных вакцин. Выявить молекулярно-генетические аспекты паразитохозяинных отношений при туберкулезе животных и обосновать ускоренную диагностику с учетом изменчивости свойств возбудителя» (2006-2010 гг.); 08.01.05. «Провести сравнительную оценку существующих и новых методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота и усовершенствовать противолейкозные мероприятия» (2006-2010 гг.).

Научная новизна и теоретическая значимость. Впервые были изучены взаимосвязи между иммунологическими показателями (количеством ней-трофилов, основных форм лимфоцитов и их функциональной активностью) у здоровых, вакцинированных БЦЖ, реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих и больных туберкулезом животных. На основании проведенного иммунологического исследования с помощью дискретно-динамического метода математического анализа был разработан способ оценки иммунитета у вакцинированного молодняка крупного рогатого скота.

Модифицирована оценка функциональной активности нейтрофилов в реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест), за счет ускоренного метода визуализации. Предлагаемый способ позволяет уменьшить объем исследования крови, материальные затраты, повышает точность, а также дает возможность одновременно провести подсчет общего количества лейкоцитов.

Впервые разработаны условия применения белково-целлюлозного комплекса ТБЦ-2 в сочетании с БЦЖ на крупном рогатом скоте и дана оценка иммунного статуса животных на основе взаимосвязей в системе иммунитета.

Предлагаемая система иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза позволяет создавать у животных перманентный протективный иммунитет, что уменьшит сроки оздоровления ферм и снизит риск реинфекции в оздоровленных стадах.

Разработан способ оценки иммуномодулирующих препаратов, позволяющий тестировать способность известных или новых иммуномодулирующих средств восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность. Научная новизна разработки заключается в экспериментальной индукции иммунологической толерантности у морских свинок ППД-туберкулином и восстановление утраченной реактивности с помощью изучаемых иммуномо-дуляторов. Это достигается за счет последующей иммунизации животных вакциной БЦЖ, затем экспериментального заражения вирулентной культурой микобактерий и на основе патологоанатомических исследований оценке препарата.

Разработана технология получения протективных специфических средств микробного происхождения из комплекса антигенов разрушенной культуры БЦЖ и неприродных полиэлектролитов. Установлено, что наиболее перспективным конъюгатом является составленный на основе комплекса антигенов разрушенной культуры БЦЖ, инкубированный с формалином, и конъюгиро-ваный с ПВП в соотношении 1 мг/мл белка комплекса антигенов и 600 мг ПВП.

Разработанная технология изготовления специфического иммуномоду-лятора позволяет создавать препараты, способные восстанавливать у морских свинок утраченную иммунологическую реактивность и усиливать протек-тивные свойства вакцины БЦЖ.

Впервые изучены взаимосвязи у потомства, полученного от здоровых и коров-матерей, носителей ВЛКРС, а также у крупного рогатого скота с разной степенью компрометации к лейкозу между иммунологическими показателями.

Установлено, что наиболее стабильным признаком в иммунной системе у инфицированного или больного лейкозом крупного рогатого скота, свидетельствующим об иммунной недостаточности, является изменение общего числа лимфоцитов и Т-лимфоцитов с рецептором к эритроцитам барана.

Научная новизна исследований подтверждена 6 патентами РФ и 1 решением о выдаче патента: «Способ оценки иммунитета привитого молодняка крупного рогатого скота» №2257913 от 10.08.2005; «Способ профилактики туберкулеза» №2266753 от 27.12.2005; «Способ оценки иммуномодулирую-щих препаратов» №2354401 от 10.05.2009; «Способ получения специфического иммуномодулятора» №2366455 от 10.09.2009; «Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота» №2379683 от 20.01.2010; «Способ оценки иммунного статуса крупного рогатого скота при лейкозе» №2408018 от 27.12.2010; «Способ определения функциональной активности нейтрофилов по реакции восстановления нитросинего тетразолия» (решение о выдаче патента на заявку №2009117416 от 5 мая 2010 г.).

Изобретению «Способ получения специфического иммуномодулятора» Отделом пищевой промышленности и биотехнологии Федерального института промышленной собственности (ФГУ ФИПС) дана высокая оценка, и оно внесено в базу «Перспективные изобретения». Информация о разработке опубликована в журнале Интеллектуальная собственность (промышленная собственность). - 2010. - №5. - С. 67.

Результаты исследований вносят существенный вклад в теорию функционирования иммунной системы во взаимосвязи параметров ее составляющих и более глубокое понимание сущности иммуно- и патогенеза туберкулеза и лейкоза животных. Полученные данные могут быть использованы не только в научно-исследовательской работе, но и в учебном процессе вузов.

Практическая значимость и внедрение результатов исследований.

Результаты научных исследований использованы для разработки методических рекомендаций, утвержденных на федеральном и региональном уровнях:

- по дискретно-динамическому анализу в оценке иммунитета;

- по методам оценки противотуберкулезного иммунитета у крупного рогатого скота на основе взаимосвязей в системе иммунитета;

- по системе противоэпизоотических мероприятий по профилактике и ликвидации хронических болезней животных;

- по оценке иммуномодулирующих свойств препаратов на их способность восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность;

- по оценке иммунного статуса у крупного рогатого скота при лейкозе.

Материалы по разработке системы иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза с применением БЦЖ и молекулярной вакцины ТБЦ-2, рассмотрены и одобрены НТС Главного управления сельского хозяйства администрации Омской области, протокол №6 от 29.11.2002 г.

Разработаны технические условия, временное наставление по применению специфического иммуномодулятора микробного происхождения (КИМ-М), временный регламент по изготовлению лабораторного образца иммуно-модулирующего средства (2010 г.).

Основные теоретические положения и экспериментальные данные, изложенные в диссертационной работе и монографии «Иммунология, микробиология, эпизоотология бруцеллеза и туберкулеза животных», используются в программах обучения студентов по курсам микробиологии, иммунологии и патофизиологии на факультете ветеринарной медицины ФГОУ ВПО

Уральская государственная сельскохозяйственная академия»; по курсам микробиологии, иммунологии и эпизоотологии в Институте биотехнологии и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Тюменская государственная сельскохозяйственная академия».

Получены: золотая медаль «Innovations for investments to the future» «Центра Международного Делового Сотрудничества» Американо-Российского Делового Союза (ARBU) за «Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота» (2010 г.); медаль «Лауреат конкурса Золотой микроскоп» за монографию «Иммунология, микробиология, эпизоотология бруцеллеза и туберкулеза животных» (2007 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Методы оценки иммунного статуса молодняка крупного рогатого скота, привитого вакциной БЦЖ;

2. Материалы по изучению взаимосвязей в системе иммунитета у здоровых, вакцинированных БЦЖ, реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих и больных туберкулезом животных;

3. Особенности системы иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза с последовательным применением живой вакцины БЦЖ и молекулярной ТБЦ-2;

4. Технология изготовления специфического иммуномодулятора и степень его влияния на иммунный статус лабораторных животных и молодняка крупного рогатого скота;

5. Методы оценки иммунного статуса у крупного рогатого скота инфицированного BJIKPC и больного лейкозом.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета Всероссийского научно-исследовательского института бруцеллеза и туберкулеза животных (Омск, 2000-2010), Всероссийской научной конференции по проблемам хронических инфекций (Омск, 2001), научно-практической конференции ОмГАУ (2001), Международной научной конференции посвященной 175-летию аграрной науки Сибири «Эпизоотология диагностика и профилактика хронических инфекционных болезней животных» (Омск, 2003), Международной научной конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики туберкулеза животных» (Москва, 2003), Международной научно-практической конференции посвященной 35-летию СО РАСХН «Эпизоотология, патология и ветеринарно-санитарные мероприятия при инфекционных болезнях животных» (Омск, 2004), Международной научно-практической конференции посвященной 100-летию со дня рождения И.Г. Кондюрина «Актуальные вопросы микробиологии и инфекционной патологии животных» (Омск, 2004), 4-й межрегиональной научно-практической конференции посвященной 100-летию со дня рождения И.В. Окунцова «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Омск, 2005), Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы обеспечения ветеринарного благополучия животноводства» (Ялта, 2005), Международном научно-практическом,конгрессе «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Санкт-Петербург, 2005), Международном симпозиуме, посвященном 45-летию образования ФГУ ФЦТРБ - ВНИВИ «Научные основы обеспечения защиты животных от эко-токсикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань, 2005), научно-практической конференции, посвященной 75-летию кафедр инфекционных болезней взрослых и детей ОмГМА «Актуальные вопросы инфекционной патологии» (Омск, 2005), 5-й межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных» (Омск, 2006), 6-й межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию СибНРГОИ-ВЫИИБТЖ «Патология сельскохозяйственных животных и пути ее профилактики» (Омск, 2007), межрегиональной научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири» (Омск, 2007), 7-й межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 180-летию аграрной науки Сибири «Диагностика, лечение и профилактика болезней животных в условиях Сибири и Урала» (Омск, 2008), Х1-й Международной научно-практической конференции «Развитие АПК Азиатских территорий» (Ново

13 сибирск, 2008), Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических зооантропоноз-ных инфекций» (Омск, 2009), 8-й межрегиональной научно-практической конференции «Патология продуктивных и непродуктивных животных, рыб и птиц» (Омск, 2009), X Международной научно-практической конференции, посвященной памяти A.B. Копырина «Актуальные проблемы инфекционных и незаразных патологий животных» (Омск, 2010), Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инновационного развития ветеринарной науки и практики» (Алматы, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 48 научных работ, в том числе 9 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ (журналы Ветеринарная патология — 3, Ветеринария и Кормление - 3, Сибирский вестник сельскохозяйственной науки - 2, Достижения науки и техники АПК - 1), монография, методические рекомендации и патенты РФ на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 279 страницах, иллюстрирована 62 таблицами, 11 рисунками. Включает обзор литературы, материал и методы исследования, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, заключение, выводы, практические предложения, список литературы, содержащий 456 источников, в том числе 90 иностранных авторов, приложение.

Личный вклад соискателя. Работа выполнена соискателем самостоятельно, участие соавторов отражено в совместно изданных научных статьях. В выполнении отдельных этапов работы принимали участие: к.б.н. Ю.И. Па-цула, к.в.н. А.Н. Новиков, сотрудники ВНИИБТЖ Т.С. Дудоладова, Е.М. Шулико.

Автор приносит глубокую благодарность за оказание научно-методической помощи научному консультанту д.в.н., профессору М.А. Бажину, директору ВНИИБТЖ заслуженному деятелю науки РФ, д.в.н., профессору В.Г. Ощепкову, за научное руководство в аспирантуре д.в.н., H.A. Донченко.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Власенко, Василий Сергеевич

выводы

1 .Разработаны и оптимизированы методы контроля и коррекции иммунного статуса у крупного рогатого скота, основанные на применении иммунологических методов исследования, дискретно-динамического анализа, оценке иммуномодулирующих и протективных свойств известных и вновь синтезируемых биологических препаратов. Программное обеспечение анализа иммунологических параметров уменьшает затраты времени в 20 раз и составляет 5-10 минут.

2. Иммунный статус у молодняка крупного рогатого скота, привитого вакциной БЦЖ в возрасте до 20-ти дней, характеризуется увеличением в крови числа иммунокомпетентных клеток в 1,3-3,8 раза. К 9-11-ти месячному возрасту уменьшилось и составило: Т-лимфоцитов (1,05±0,08 тыс/мкл); Т-киллеров (2,35±0,18 тыс/мкл); В-лимфоцитов (2,37±0,21 тыс/мкл); Т-антиген-реактивных лимфоцитов (0,79±0,10 тыс/мкл); нейтрофилов (1,92±0,26 тыс/мкл) и сохранилось на этом уровне до 15-17-ти месячного возраста.

3. Установлены методом дискретно-динамического анализа и разработанной на его основе дифференциально-прогностической таблицы значимые в оценке противотуберкулезного иммунитета (Р<0,05) сочетания показателей активности иммунокомпетентных клеток крови. Иммунизация вакциной БЦЖ усиливает в системе иммунитета крупного рогатого скота взаимосвязи иммунологических параметров и увеличивает число их сочетаний.

4. Экспериментальными исследованиями с использованием дифференциально-прогностических таблиц и значимых сочетаний параметров (базис, вариабельный) выявлены из числа телят, привитых БЦЖ до 20-ти дней, в возрасте 4-5 месяцев 70 % иммунных животных, в возрасте 9-11 месяцев 50 % и в возрасте 15-17 месяцев 30 % иммунных животных.

5. Разработана система иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза, предусматривающая первичную иммунизацию молодняка в возрасте 10-20 суток вакциной БЦЖ, реиммунизацию в возрасте 15-17 мес. также вакциной БЦЖ, а все последующие противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 через каждые 12 мес. до оздоровления фермы (хозяйства). Контроль иммунного и инфекционного статуса привитых животных проводят туберкулиновой аллергической пробой через 6 мес.

6. Разработан метод оценки иммупомодулирующей способности препаратов, включающий индукцию толерантности ППД-туберкулином для млекопитающих, восстановление утраченной реактивности изучаемым средством, иммунизацию БЦЖ на способность противостоять экспериментальному заражению возбудителем туберкулеза и по результатам патологоанатомическо-го исследования оценку иммуномодуляторов по индексу защиты: от 100% до 67% - высокая способность иммуномодуляции, 66-43% средняя, от 42% и меньше - низкая.

7. Предложена новая технология изготовления специфических средств на основе комплекса антигенов микобактерий вакцинного штамма БЦЖ и поли-винилпирролидона (ПВП), позволяющая создавать препараты, способные восстанавливать у животных утраченную иммунологическую реактивность, устранять вторичные иммунодефицита и усиливать протективные свойства вакцины БЦЖ.

8. Иммуномодулятор, составленный нами на основе комплекса антигенов микобактерий БЦЖ, инкубированный с формалином, и конъюгированый с ПВП в соотношении 1 мг/мл белка комплекса антигенов к 600 мг ПВП наиболее перспективный. Специфический иммуномодулятор усиливает протективные свойства вакцины БЦЖ, о чем свидетельствует увеличение количества взаимосвязей в системе иммунитета и числа телят с высокой активностью иммунокомпетентных клеток, выявленных с помощью дискретно-динамического анализа.

9. Разработан иммунологический метод для выявления больного и инфицированного вирусом лейкоза крупного рогатого скота, основанный на оценке функционального состояния Т-лимфоцитов в реакции спонтанного розет-кообразования. Этот метод позволяет выявлять на 46,66 % больше животных, имеющих иммуно-клеточные изменения в организме, свойственные лейкозу крупного рогатого скота, тем самым повышает достоверность диагностики инфекции в совокупности с традиционными методами. Пригоден для оперативной оценки инфекционного статуса и для прогнозирования эпизоотического процесса лейкоза в стаде.

Ю.Комплексная оценка иммунного статуса крупного рогатого скота при лейкозе включает определение концентрации нейтрофилов, Т-лимфоцитов, Т-антиген-реактивных лимфоцитов, В-лимфоцитов, количество ЦИК, оценку функционального состояния нейтрофилов в НСТ-тесте. С помощью компьютерной программы выделяют те сочетания параметров, которые присущи здоровым, инфицированным, и больным лейкозом животным, вычисляют коэффициент сопряженности (КС) по формуле: количество достоверных связей ЛГГЛ

КС —---. При КС равном или превышающем значеколичество возможных связей ние 0,24 считают признаком функционального напряжения иммунной системы.

11. Оценка иммунного статуса крупного рогатого скота с помощью дискретно-динамического анализа иммунокомпетентных клеток позволяет в неблагополучных по лейкозу стадах выявить до 100 % животных с гемограммой, характерной для гематологической стадии лейкоза, и до 22,5 % из числа РИД-отрицательных животных с иммунной недостаточностью. Способ может быть использован для более точной иммунно-эпизоотологической и прогностической оценки состояния стада крупного рогатого скота по лейкозу.

12. Число сочетаний иммунологических параметров со степенью достоверности (Р<0,05) является важнейшим критерием, характеризующим спокойное или напряженное состояние иммунной системы. Иммунный статус крупного рогатого скота больного туберкулезом характеризуется увеличением количества таких сочетаний в 6,5 раз, а носителей ВЛКРС и больных лейкозом животных в10 раз и выше по сравнению с интактными животными.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты научных исследований использованы для разработки 5 методических рекомендаций, утвержденных на федеральном и региональном уровнях:

1. «Дискретно-динамический анализ в оценке иммунитета» (одобрены решением подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины СО РАСХН, протокол № 5 от 21 июня 2005 г.).

2. «Методы оценки противотуберкулезного иммунитета у крупного рогатого скота на основе взаимосвязей в системе иммунитета: перспектива использования в ветеринарии» (одобрены решением подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины СО РАСХН, протокол № 5 от 10 января 2003 г.).

3. «Комплекс противоэпизоотических мероприятий по профилактике и ликвидации хронических болезней животных» (одобрены секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Омской области, протокол №9 о г 15 ноября 2008ч\).

4. «Оценка иммунного статуса у крупного рогатого скота при лейкозе» (одобрены решением секции «Инфекционная патология» отделения ветеринарной медицины РАСХН, протокол № 4 от 13 ноября 2009 г.).

5. «Оценка иммуномодулирующих свойств препаратов на их способность восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность» и одобрены решением секции «Инфекционная патология» отделения ветеринарной медицины РАСХН, протокол № 2 от 19 апреля 2010 г.).

6. Монография «Иммунология, микробиология, эпизоотология бруцеллеза и туберкулеза животных» написана с учетом результатов проведенных исследований, может быть использована в научно-исследовательских учреждениях при разработке тематических планов научно-исследовательских работ, а также в учебном процессе ВУЗов ветеринарного и общебиологического профиля.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании полученных результатов исследований впервые разработаны:

1. Способ оценки иммунитета привитого молодняка крупного рогатого скота, сущность которого состоит в том, что на основе дифференциально-прогностической таблицы, составленной с помощью автоматизированного программой для ПК дискретно-динамического анализа, выделяют те сочетания параметров, которые присущи привитым животным. По значениям базисного и вариабельного параметров дифференциально-прогностической таблицы определяют соответствие их исследуемому животному. Оценивают степень защищенности от заболевания животного и стада в целом: до 40 % отмечают низкий уровень защищенности, 40-70 % - средний уровень, 70 % и выше - высокий уровень защищенности.

Важным преимуществом дискретно-динамического принципа оценки иммунного статуса является практическая ценность. Изучение взаимосвязей между параметрами дает возможность дифференцировать различные состояния организма животных в норме и при патологии. На основе выявления сочетаний параметров с различными взаимосвязями представляется возможным составление дифференциальных таблиц, позволяющих осуществлять оценку иммунного статуса интактных, иммунизированных и зараженных животных.

Используя разработанный способ оценки иммунного статуса можно вести контроль за испытанием новых препаратов, результатами терапевтического воздействия при туберкулезе и других инфекционных болезнях сельскохозяйственных животных, определять и исправлять иммунодефицитные состояния животных, устанавливать сроки и очередность иммунозначимых манипуляций, тестировать применение лекарственных средств и лечебных процедур, определять другие иммунологические параметры как в системе, так и в межсистемах, а также параметры неспецифической защиты.

2. Система специфической профилактики для защиты телок и коров от заболевания туберкулезом на фермах, оздоровление которых проведено методом полной замены скомпрометированного по этой инфекции поголовья здоровым.

Способ профилактики осуществляется иммунизацией вакциной БЦЖ телят в возрасте до 20 суток, реиммунизацией вакциной БЦЖ телок в возрасте 15-17 месяцев, затем нереагирующих животных на ППД-туберкулин дополнительно иммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 в дозе 5-7 мг белка на одно животное. Последующие реиммунизации вакциной ТБЦ-2 проводят через каждые 12 месяцев в течение 4-6 лет (время возможной реинфекции). Контроль иммунного и инфекционного статуса привитых животных осуществляется аллергической туберкулиновой пробой через каждые 6 месяцев.

3. Способ оценки иммуномодулирующих препаратов, сущность которого состоит в том, что индуцируют иммунологическую толерантность аллергеном (ППД-туберкулин для млекопитающих) у морских свинок подкожно в дозе 1,3-1,8 мл на животное, через 3-5 суток парентерально вводят изучаемый иммуномодулирующий препарат для восстановления утраченной иммунологической реактивности в расчете на 1 кг массы животного в 0,2-1 мл физиологического раствора, через 7-10 суток морских свинок иммунизируют вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 0,1 мг в 0,1 мл физиологического раствора, через 30 суток заражают вирулентной культурой микобактерий М.Ьоу1б подкожно в дозе 0,0001 мг, через 30 суток морских свинок подвергают эвтаназии и по результатам патологоанатомического исследования оценивают иммуномодулирующие свойства изучаемых препаратов по индексу защиты -от 100 % до 67 % - высокая способность иммуномодуляции, 66-43 % - средняя, от 42 % - низкая.

Предложенный способ повышает точность, снижает трудоемкость и материальные затраты. На одно исследование 30 морских свинок предлагаемым способом материальные затраты без учета стоимости лабораторных животных и их содержания составили 1200 рублей, в то время как материальные затраты на изучение иммуномодулирующих свойств препаратов с оценкой иммунного статуса: подсчет общего числа лейкоцитов, выведение лейкоцитарной формулы крови, определение общего количества Т-лимфоцитов и их субпопуляций, определение общего числа В-лимфоцитов составляют в расчете на одно исследование 30 лабораторных животных 12000 руб., что в 10 раз выше предлагаемого способа (по ценам практических лабораторий иммунологических исследований).

4. Технология изготовления специфических средств на основе комплекса антигенов вакцинного-штамма БЦЖ и неприродных полиэлектролитов, которая позволяет создавать препараты, способные восстанавливать у морских свинок утраченную иммунологическую реактивность и усиливать протек-тивные свойства вакцины БЦЖ. Наиболее перспективным конъюгатом для дальнейшего изучения является составленный на основе комплекса антигенов разрушенной культуры БЦЖ, инкубированной с формалином, и конъю-гироваиной с ПВП в соотношении 1 мг/мл белка комплекса антигенов и 600 мг ПВП.

5. Способ оценки иммунного статуса при лейкозе крупного рогатого скота, основанный на том, что по значениям базисного и вариабельного параметров дифференциально-прогностической таблицы, составленной с помощью дискретно-динамического анализа, выделяют животных с функциональным напряжением иммунной системы, вызванным вирусом лейкоза крупного рогатого скота.

Он позволяет выявить до 100 % животных с гемограммой, характерной для гематологической стадии лейкоза и на 22,5 % больше животных с иммунной недостаточностью, вызванной вирусом лейкоза крупного рогатого скота в условиях неблагополучной фермы. Он является достаточно достоверным, точным, и позволяет вести контроль за развитием инфекции в стаде. В перспективе может быть использован при оценке развития инфекционного процесса и прогноза инфекции и лейкоза крупного рогатого скота.

6. Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота, сущность которого состоит в том, что у РИД-положительных животных определяют в крови процентное содержание общего числа лимфоцитов и Т-лимфоцигов методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана и вычисляют коэффициент отношения (К0). Увеличение этого коэффициента указывает на иммунную недостаточность и является наиболее стабильным признаком в иммунной системе носителей ВЛКРС и больных лейкозом животных. При К0 равном 4,3 и более животное считают больным и с повышенным риском к заболеванию ВЛКРС и выводят из стада. Этот способ позволяет выявлять на 46,6 % больше животных, имеющих иммунно-клеточные изменения в организме, свойственные лейкозу крупного рогатого скота и может быть использован в качестве дополнительного иммунологического метода диагностики.

Таким образом, в результате проведенных исследований оптимизированы существующие и разработаны новые методы контроля и коррекции иммунного статуса при туберкулезе и лейкозе крупного рогатого скота.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора биологических наук, Власенко, Василий Сергеевич, Омск

1. Абелев, Г.И. Эмбриональный сывороточный а-глобулин при злокачественных опухолях / Г.И. Абелев // Вестн. АМН СССР. — 1970. - №7. -С. 49-57.

2. Абелев, Г.И. Иммунология злокачественных опухолей / Г.И. Абелев // Вестн. АМН СССР. 1974. - №2. - С. 23-29.

3. Авакаянц, Б.М. Клиническая фитология, фитотерапия и профилактика болезней животных / Б.М. Авакаянц. — М., 2000. — 144 с.

4. Авербах, М.М. Иммунология и иммунопатология туберкулеза / М.М. Авербах. М.: Медицина, 1976. - 311 с.

5. Аверкина, Р.Ф. Сравнительное изучение антигенных свойств тканей животных различных видов на разных стадиях развития / Р.Ф. Аверкина // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1956. - Вып. 41. - №2. - С. 70-73.

6. Авилов, В.М. Проблемы оздоровления крупного рогатого скота от лейкоза / В.М. Авилов, В.М. Нахмансон // Ветеринария. 1995. - №11. -С. 3-6.

7. Агеев, А.К. Т- и В-лимфоциты. Распределение в организме. Функционально-морфологическая характеристика и значение / А.К. Агеев // Арх. патологии. 1976. - Т. XXVIII. - №12. - С. 3-11.

8. Александров, И.Д. Т- и В-активины и протективные свойства вакцины БЦЖ / И.Д. Александров, И.П. Хабузов, Н.С. Ладан // Ветеринария. -2000.-№1. С. 23-28.

9. Александрова, А.Е. Место средств патогенетической направленности действия в терапии туберкулеза / А.Е. Александрова // Патогенетическая терапия легочного и внелегочного туберкулеза. — Л, 1987. С. 11-18.

10. Аликин, Ю.С. Стимуляторы неспецифической резистентности на основе РНК для ветеринарной медицины: автореф. дис. . д-ра биол. наук / Ю.С. Аликин. Новосибирск, 1998. - 44 с.

11. Алмазов, В.А. Физиология лейкоцитов человека / В.А. Алмазов, Б.В. Афанасьев, А.Ю. Зарицкий и др. Л.: Наука. - 1979. -230 с.

12. Апатенко, В.М. Иммунодефицит у животных / В.М. Апатенко // Ветеринария. 1992. - №5. - С. 29-30.

13. Арустамова, Е.Л. Корреляционные связи при латентном течении волчаночного нефрита / Е.Л. Арустамова, Х.И. Янбаева // Тер. арх. 1983. -№4.-С. 106-108.

14. Бажин, М.А. Проявление иммунологической памяти у телят при туберкулезе / М.А. Бажин, Б.Я. Хайкин, В.А. Зубакин // Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных: сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние. Новосибирск, 1983. - С. 29-33.

15. Бажин, М.А. Методы оценки Т- и В-систем иммунитета у крупного рогатого скота при бруцеллезе и туберкулезе: методические рекомендации / М.А. Бажин, В.А. Мироненко, С.К. Переходова и др. // ВАСХНИЛ. ВНИИБТЖ. Омск, 1989. - 37 с.

16. Бажин, М.А. Иммуногенные и протективные свойства иммобили-зированных на целлюлозной матрице антигенов микобактерий / М.А. Бажин, В.В. Шамов // Актуальные проблемы бруцеллеза и туберкулеза животных: сб. науч. тр. / ВНИИБТЖ. Омск, 2000. - С. 61-66.

17. Бажин, М.А. Анализ взаимосвязей в системе иммунитета крупного рогатого скота / М.А. Бажин, B.C. Власенко, В.В. Шамов // Матер. Всерос. науч. конф. по проблемам хронических инфекций: Сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. -Омск, 2001.-С. 147-155.

18. Басова, Н.Ю. Применение гормонов тимуса для коррекции иммунологической реактивности телят / Н.Ю. Басова // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Воронеж, 2002. - С. 127-129.

19. Батрак, Т.Е. Дозирование лекарственных средств экспериментальным животным / Г.Е. Батрак, А.Н. Кудрин. М.: Медицина, 1979. - С. 158-159.

20. Беклемешев, Н.Д. Иммунопатология и иммунорегуляция / Н.Д. Беклемешев. М.: Медицина, 1986. - 256 с.

21. Бекчентаев, А.Э. Опыт применения тимогена козлятам при гипотрофии / А.Э. Бекчентаев, В.М. Мешков // Актуальные вопросы ветеринарии: сб. науч. тр. — Оренбург, 1997. С. 45-47.

22. Брондз, Б.Д. Субпопуляции Т-лимфоцитов человека и их супрес-сорные функции / Б.Д. Брондз//Тер. арх. 1980. -№9.-С. 120-132.

23. Бузлама, B.C. Влияние синтетических олигопептидов на процессы анаболизма, кроветворение и иммунитет у животных / B.C. Бузлама, И.В. Трутаев, C.B. Шабунин// Ветеринария. 2007. - №1. - С. 46-49.

24. Буковская^ С.Н. Динамика соотношения популяций лимфоцитов периферической крови людей при иммунизации различными вакцинами против клещевого энцефалита / С.Н. Буковская, Л.Г. Карпович, М.С. Воробьева //ЖМЭИ,- 1983. №7. -С. 77-81.

25. Бусол, В.А. Тест-система для выявления ВЛКРС полимеразной цепной реакцией / В.А. Бусол, О.Ю. Лиманская, А.П. Лиманский, В.И. Цым-бал // Ветеринария. 1999. - №6. - С. 27-30.

26. Быкова, С.Ю. Течение туберкулеза у морских свинок на фоне инфицирования атипичными микобактериями: автореф. дис. . канд. ветеринар. наук / С.Ю. Быкова. -М., 1994. 23 с.

27. Васильева, Г.И. Кооперативное взаимодействие моно- и поли-нуклеарных фагоцитов, опосредованное моно- и нейтрофилокинами / Г.И. Васильева, И.А. Иванова, С.Ю. Тюкавина // Иммунология. — 2000. №5. - С. 11-17.

28. Вейсман, M.JT. Введение в иммунологию / M.J1. Вейсман, JT.E. Худ, У.Б. Вуд. М., 1983.- 160 с.

29. Вейсфейлер, Ю.К. Биология и изменчивость микобактерий туберкулеза и атипичных микобактерий / Ю.К. Вейсфейлер. — Будапешт: Изд-во АН Венгрии, 1975. 335 с.

30. Верещагин, М.Н. Клиническое наблюдение над телятами, вакцинированными штаммом БЦЖ / М.Н. Верещагин, В.М. Аристовский, H.H. Благовещенский // Сб. тр. Казан, туб. комиссии. Казань, 1926. - Т. 1. - С. 31-36.

31. Верховский, O.A. Иммуноферментный анализ в диагностике лейкоза крупного рогатого скота / O.A. Верховский, В.В. Цибезов, М.В. Баландина, И.В. Непоклонова // Ветеринария. 2002. - №12. - С. 8-10.

32. Вишневский, П.П. Диагностика и профилактика туберкулеза / П.П. Вишневский // Практическая ветеринария. 1927. - №9. - 33 с.

33. Вишневский, П.П. Результаты опытов с БЦЖ на мелких лабораторных животных и крупном рогатом скоте / П.П. Вишневский // Вестн. соврем. ветеринарии. 1928. - №4. - С. 22.

34. Владимиров, A.B. Эффективность иммуномодуляторов при гипотрофии щенков песцов / A.B. Владимиров // Ветеринария. 2005. - №3. - С. 56.

35. Воронин, Е.С. Влияние разных доз Т-активина на иммунологический статус телят / Е.С. Воронин, В.Н. Денисенко, Г.Н. Печникова и др. // Ветеринария. 1990. -№5.-С. 51-53.

36. Воронин, Е.С. Иммунология / Е.С. Воронин, A.M. Петров, М.М. Серых, Д.А. Дервишов. М.: Колос-Пресс, 2002. - 408 с.

37. Вышелесский, С.Н. Частная эпизоотология / С.Н. Вышелесский. — М.: Сельхозгиз, 1940. С. 89-113.

38. Гаан, В.И. Влияние совместного введения вакцины БЦЖ с имму-номодуляторами и нейролептиков на специфическую и неспецифическую резистентность пантовых оленей: автореф. дис. . канд. ветеринар, наук / В.И. Гаан. Барнаул, 2001. - 21 с.

39. Галактионов, В.Г. Графические модели в иммунологии / В.Г. Галактионов. М., 1986. - 240 с.

40. Галактионов, В.Г. Иммунология / В.Г. Галактионов. — М.: Изд-во МГУ, 1998.-480 с.

41. Галлеев, Р.Ф. Колостральный иммунитет у телят у телят, родившихся от лейкозных коров / Р.Ф. Галлеев // Тр. ВИЭВ. 1983. - Т. 58. - С. 134-136.

42. Гельберг, С.И. К методике экспериментального изучения имму-ногенных свойств противотуберкулезных вакцин и эффективности методов их применения / С.И. Гельберг, Е.А. Финкель // Пробл. туберкулеза. 1959. -№2. - С. 80-84.

43. Герберт, У.Д. Ветеринарная иммунология / У.Д. Герберт. М., 1974.-311 с.

44. Гергерт, В.Я. Цитокины при туберкулезе / В.Я. Гергерт, М.М. Авербах и др. // Вестник РАМН. 1995. - №7. - С. 33-37.

45. Гергерт, В.Я. Цитокины в иммунопатогенезе туберкулеза легких /

46. B.Я. Гергерт, Г.А. Космиади, З.П. Абрамова // Пробл. туберкулеза. 1995. -№2. - С. 32-34.

47. Гизатуллин, Х.Г. Профилактика туберкулеза вакциной БЦЖ / Х.Г. Гизатуллин, М.А. Сафин // Учен. зап. КГВИ. Казань, 1973. - Т. 115.1. C. 211-213.

48. Гизатуллин, Х.Г. Профилактика туберкулеза у телят вакциной БЦЖ / Х.Г. Гизатуллин, М.Т. Нигматулин, М.А. Сафин // Учен. зап. КГВИ. -Казань, 1974.-Т. 115.-С. 211-213.

49. Гизатуллин, Х.Г. Выделение L-форм микобактерий из штамма БЦЖ / Х.Г. Гизатуллин, М.А. Сафин, М.В. Харитонов // Ветеринария. 1979. -№11.-С. 28-29.

50. Говалло, В.Н. Иммунитет к трансплантантам и опухолям / В.Н. Говалло. Киев, 1977. - 385 с.

51. Говоров, A.M. Разработка мероприятий по профилактике туберкулеза крупного рогатого скота / A.M. Говоров // Науч. тр. / УНИИЭВ. Киев, 1952.-С. 31-32.

52. Говоров, A.M. Разработка мероприятий по специфической профилактике туберкулеза крупного рогатого скота / A.M. Говоров // Науч. тр. / УНИИЭВ. Киев, 1954. - Т. 21. - С. 82-90.

53. Гриневич, Ю.А. Определение иммунных комплексов в крови онкологически больных / Ю.А. Гриневич, А.Н. Алферов // Лаб. дело. 1981. -№8. - С. 493-496.

54. Гулюкин, М.И. Результаты серологических и морфофункцио-нальных исследований крови телят от инфицированных вирусом лейкоза и больных лимфолейкозом матерей / М.И. Гулюкин, Л.Г. Бурба, Л.А. Иванова //Ветеринария. 1985.-№11.-С. 32-38.

55. Гулюкин, М.И. Общие и частные аспекты эпизоотологии лейкоза крупного рогатого скота / М.И. Гулюкин, Н.В. Замараева, Н.В. Баркова, С.М. Пау // Тр. ВИЭВ. М., 1999. - Т. 72. - С. 22-25.

56. Гулюкин, М.И. Состояние и перспективы борьбы с лейкозом крупного рогатого скота / М.И. Гулюкин // Ветеринария. 1999. - №12. — С. 3-8.

57. Гулюкин, М.И. Разработка эффективных мероприятий против лейкоза крупного рогатого скота / М.И. Гулюкин, JI.A. Иванова и др. // Ветеринария. 2002.-№12. - С. 3-8.

58. Гурвич, А.Е. Использование целлюлозных матриц в иммунохимии / А.Е. Гурвич // Иммуносорбенты и их использование в биотехнологии. — М„ 1986.-С. 3-22.

59. Гурвич, А.Е. Усиление иммуногенности белков пугем их присоединения к целлюлозной матрице / А.Е. Гурвич, A.A. Корунова, Д.А. Эльгот // Иммуномодуляторы: сб. тр. Центр. НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова. М., 1987. - С. 67-76.

60. Гусева, Е.В. Иммуностимуляторы / Е.В. Гусева, В.И. Балихина. -Владимир, 1994. 36 с.

61. Двоеглазов, Н.Г. Оценка эффективности различных методов диагностики инфекции вируса лейкоза крупного рогатого скота: автореф, дис. . канд. ветеринар, наук / Н.Г. Двоеглазов. Новосибирск, 2009. - 20 с.1. V I

62. Де Дюв, К. Путешествие в мир живой клетки / К. Де Дюв. — М.: Мир. 1987.-256 с.

63. Дидовец, С.Р. Опыт борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота в Украинской ССР / С.Р. Дидовец, Ю.Я. Кассич, А.Т. Борзяк // Матер. Всесоюзн. науч. конф. Омск, 1980. - С. 71-73.

64. Долгих, В.Т. Основы иммунопатологии: учебное пособие / В.Т. Долгих. Ростов н/Д: Феникс, 2007. - 320 с.

65. Дондоладзе, М.Б. Анализ диагностической значимости модификации поверхности Т-клеток при лимфопролиферативных заболеваниях / М.Б. Дондоладзе, A.A. Ярилин, Н.З. Пирадашвили // Иммунология. 1986. -№2. - С. 66-68.

66. Донник, И.М. Экология и здоровье животных / И.М. Донник, П.Н. Смирнов. Екатеринбург: Издательско-редакционное агентство УТК, 2001.-331 с.

67. Донник, И.М. Эффективность проведения оздоровительных про-тиволейкозных мероприятий: научно-практические рекомендации / И.М. Донник и др. Екатеринбург: Уральское изд-во, 2006. - 82 с.

68. Донник, И.М. Повышение эффективности диагностики лейкоза крупного рогатого скота в техногенно загрязненных территориях / И.М. Донник, Б.М. Коритняк, М.Ю. Кадочников, E.H. Беспамятных // Аграрный вестник Урала. 2007. - №3. - 28-30.

69. Донченко, A.C. Принципы организации и проведения мер борьбы и профилактики туберкулеза крупного рогатого скота / A.C. Донченко // Сибирский вестник с.-х. науки. 1983. — №1. - С. 67-71.

70. Донченко, A.C. Основные научные положения проблемы оздоровления крупного рогатого скота от туберкулеза / A.C. Донченко // Туберкулез крупного рогатого скота и меры борьбы с ним: сб. науч. тр. ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. Новосибирск, 1986. - С. 11-16.

71. Донченко, A.C. Применение биологически активных веществ в качестве иммуномодуляторов в ветеринарии и медицине: обзор литературы /

72. A.C. Донченко, Ю.С. Аликин, В.Н. Донченко. ВАСХНИЛ. Сиб. Отд-ние. ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 1989. - 44 с.

73. Донченко, A.C. Туберкулез крупного рогатого скота, верблюдов, яков, овец и пантовых оленей / A.C. Донченко, В.Н. Донченко. РАСХН. Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 1994. - 354 с.

74. Донченко, A.C. Основные научные положения организации мероприятий по профилактике и борьбе с туберкулезом крупного рогатого скота в регионе Сибири и их практическое значение / A.C. Донченко // Тез. Докл. НПК. Новосибирск, 1995. - С. 6-7.

75. Донченко, A.C. Повышение протективных свойств вакцины БЦЖ с помощью иммуномодуляторов / A.C. Донченко, H.A. Донченко,

76. B.Н. Донченко // Проблемы стабилизации и развития сельского хозяйства Казахстана, Сибири и Монголии. Новосибирск, 2000. - С. 168-170.

77. Донченко, A.C. Патологическая роль иммунных комплексов при лейкозе крупного рогатого скота / A.C. Донченко, С.И. Логинов, В.В. Табака-ев // Вестн. РАСХН. 2001. -№1. - С. 74-77.

78. Донченко, A.C. Научные и практические основы профилактики и ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота /A.C. Донченко, H.A. Донченко // Сиб. вестн. с.-х. науки. 2004. -№3. - С. 81-88.

79. Донченко, В.Н. Теория и практика повышения протективных свойств противотуберкулезной вакцины БЦЖ с помощью иммуномодулято-ров / В.Н. Донченко, A.C. Донченко, Г.П. Протодъяконова и др. // Тез. докл. -Новосибирск, 1991.-С. 131-132.

80. Донченко, H.A. Усовершенствование средств и методов диагностики и профилактики туберкулеза крупного рогатого скота: автореф. дис. . докт. ветеринар, наук / H.A. Донченко. Новосибирск, 2008. — 36 с.

81. Дробот, Е.В. Гетерогенность популяции BJIKPC в Новосибирской области / Е.В. Дробот, П.Н. Смирнов, Е.А. Дурыманова и др. // Вестник РАСХН. 2007. - № 1. - С. 82-84.

82. Ездакова, И.Ю. Корреляционный анализ иммунологических показателей при введении имммунотропных препаратов / И.Ю. Ездакова // Вет-корм. 2009. - №2. - С. 18-19.

83. Елисеева, М.Ф. Состояние лимфоидного звена иммунитета у юных спортсменов-пловцов, прошедших стимуляцию биологической активности / М.Ф. Елисеева, H.A. Ивко, H.A. Парамонова, A.A. Михеев // Физическая культура (Детский тренер). 2005. - №6. - С. 28-34.

84. Елькин, A.B. Комплексное лечение прогрессирующего туберкулеза легких с применением ронколейкина / A.B. Елькин, Б.Е. Кноринг и др. — СПб.: Изд-во С.- Петерб. ун-та, 2002. 104 с.

85. Елькин, A.B. Интерлейкины: клинико-экспериментальное обоснование применения в комплексном лечении туберкулеза: пособие для врачей / A.B. Елькин, JI.A. Иванова и др. СПб., 2005. — 30 с.

86. Емельяненко, П.А. Корреляционно-регрессионный анализ влияния гуморальных факторов естественной резистентности на бактериальную активность сыворотки крови новорожденных телят / П.А. Емельяненко // Докл. ВАСХНИЛ. 1979. - №7. - С. 35-37.

87. Еремеев, В.В. Новая противотуберкулезная вакцина: мечта или реальность? / В.В. Еремеев // Пробл. туберкулеза. 2001. — №1. - . С. 53-55.

88. Ерин, А.Н. Механизмы инактивации микроорганизмов фагоцитами / А.Н. Ерин, Е.Д. Прищепов и др. // ЖМЭИ. 1983. - №12. - С. 3-9.

89. Ершов, Ф.И. Продукция интерферона при использовании индукторов разной природы / Ф.И. Ершов, H.H. Носик, Э.Б. Тазулахова // Бюл. экс-перим. биол. медицины. 1983. - №2. - С. 66-68.

90. Жумашев, A.C. Специфическая профилактика туберкулеза крупного рогатого скота / А.С Жумашев // Науч. техн. бюл. СО ВАСХНИЛ. -1985. -№32. С.27-30.

91. Земсков, A.M. Итоги применения нуклеината натрия как имму-нокорректора / A.M. Земсков, Г.Г. Соломахин и др. // Компоненты нуклеиновых кислот: тез. докл. YII Всесоюз. симпоз. по целенаправленному изысканию лекарственных веществ. Рига, 1989. - С. 96-97.

92. Земсков, В.М. Низкомолекулярпая РНК — перспективный имму-номодулятор / В.М. Земсков, A.M. Земсков // Иммуномодуляторы: сб. тр. / Центр. НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова. М., 1987. — С. 55-66.

93. Змушко, Е.И. Клиническая иммунология: руководство для врачей / Е.И. Змушко, Е.С. Белозеров, Ю.А. Митин. СПб.: Питер, 2001. - 576 с. — (Серия «Современная медицина»).

94. Зубакин, В.А. Разработка оптимальной схемы специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота: автореф. дис. . канд. ветеринар, наук / В.А. Зубакин. Новосибирск, 1989. - 19 с.

95. Иванова, Т.А. Влияние тималина на иммунобиологическую реактивность норок-гипотрофиков / Т.А. Иванова // Сб. науч. тр. ЛВИ. Л., 1988. -С. 21-23.

96. Игнатов, П.Е. Иммунитет и инфекция / П.Е. Игнатов. М.: Время, 2002.-352 с.

97. Иггибаев, Х.М. Специфическая профилактика туберкулеза телят медицинской вакциной БЦЖ / Х.М. Илибаев, Б.Б. Бисенов // Вопросы взаимосвязи туберкулеза человека и животных. Алма-Ата, 1981. - С. 95-100.

98. Ильина, Н.И. Синдром вторичной иммунной недостаточности (протоколы диагностики и лечения) / Н.И. Ильина, Т.В. Латышева, Б.В. Пи-негин, Н.Х. Сетдикова // Иммунология. 2000. - №5. - С. 8-9.

99. Ильчевич, Н.В. Антитела и регуляция функций организма / Н.В. Ильчевич, Н.И. Лисяный, Р.И. Янчий. Киев, 1986. - 248 с.

100. Исмагилова, А.Ф. Иммунный статус животных. Возможности коррекции иммунодефицитных состояний новыми производными глицирри-зиновой кислоты / А.Ф. Исмагилова, Г.В. Базекин. Уфа: БГАУ, 2001. - 157 с.

101. Исхаков, О.З. Вакцина БЦЖ в комплексе противотуберкулезных мероприятий / О.З. Исхаков, В.Ф. Пылинин // Ветеринария. 1985. - №8. - С. 7-9.

102. Калимуллин, Ф.Х. Коррекция тималином иммунодефицитного состояния: автореф. дис. . канд. ветеринар, наук / Ф.Х. Калимуллин. — Щелково, 2003.-24 с.

103. Кантор, X. Иммунология / X. Кантор. М.: Мир, 1987. - С. 93114.

104. Караулов, A.B. Клиническая иммунология и аллергология: учебное пособие / Под ред. A.B. Караулова. — М.: Медицинское информационное агентство, 2002. 651 с.

105. Карачунский, М.А. Особенности клеточного иммунитета при туберкулезе легких у больных сахарным диабетом / М.А. Карачунский, В.Я. Гергерт, О.Б. Яковлева // Пробл. туберкулеза. 1997. — №6. - С. 59-60.

106. Кассич, Ю.Я. Рецидивы туберкулеза / Ю.Я. Кассич, И.К. Целла-риус, А.Е. Тесля и др. // Ветеринария. 1981. — №4. - С. 38-39.

107. Кассич, Ю.Я. Совершенствование и сравнительное изучение методов обработки материала, отобранного из объектов внешней среды для культуральной диагностики туберкулеза / Ю.Я. Кассич, П.М. Тихонов // Ветеринария. Киев, 1984. - Вып. 54. - С. 16-18.

108. Кассич, Ю.Я. Туберкулез животных и меры борьбы с ним / Ю.Я. Кассич, А.Т. Борзяк, А.Ф. Кочмарский. —Киев: Урожай, 1990. 304 с.

109. Каулен, Д.Р. Влияние гуморальных факторов, Т-лимфоцитов и инфекционных агентов на дифференцировку стволовых клеток и иммуногенез / Д.Р. Каулен, A.B. Санин // Итоги науки и техники. Сер. иммунология. - 1982.-Т. 10.-С. 54-79.

110. Кашкин, К.П. Иммунная реактивность организма и антибиотическая терапия / К.П. Кашкин, З.О. Караев. JL, 1984. - 200 с.

111. Киборт, Р.В. Взаимосвязи в иммунной системе у носителей Staphylococcus aureus / Р.В. Киборт, К.А. Лебедев, И.Д. Понякина // ЖМЭИ. -1984.-№4. -С. 93-97.

112. Кириллов, Н.К. Перспективы использования иммуностимуляторов при болезнях молодняка / Н.К. Кириллов, Ф.П. Петрянкип // Ветеринария сельскохозяйственных животных. — 2005. — №4. — С. 58-59.

113. Кноринг, Б.Е. Оценка иммунного статуса больных туберкулезом с учетом патогенетических особенностей заболевания / Б.Е. Кноринг // Пробл. туберкулеза. 1995. -№1. - С. 18-21.

114. Кноринг, Б.Е. Особенности иммунного статуса больных туберкулезом легких и его роль в диагностике, прогнозировании течения и иммуно-коррекции терапии: автореф. дис. . д-ра мед. наук / Б.Е. Кноринг. — СПб., 1996.

115. Кноринг, Б.Е. Определение состояния иммунитета и уровня ци-токинов для оценки течения туберкулеза легких / Б.Е. Кноринг, Н.М. Чужова и др. СПб., 1998. - (Пособие для врачей и научных работников, работающих в области фтизиатрии).

116. Кованда, С.И. Заболеваемость телят туберкулезом / С.И. Ковапда, В.Н. Василевский // Ветеринария. — 1977. №7. - С. 51-53.

117. Когосова, Л.С. Эффективность применения тималина в комплексном лечении больных туберкулезом легких / Л.С. Когосова, Е.Ф. Чер-нушенко // Пробл. туберкулеза. 1990. - №10. - С. 29-32.

118. Колокшанский, В.А. Динамика аллергических реакций у телят, вакцинированных БЦЖ / В.А. Колокшанский // Сб. тр. ЛВИ. Л., 1953. - Т. 5.-С. 68-72.

119. Кондауров, Б.И. Количественное определение иммуноглобулинов в сыворотке крови крупного рогатого скота и овец / Б.И. Кондауров, В.М. Чекишев // Сиб. вестн. е.- х. науки. 1971. — №4. — С. 79-83.

120. Коромыслов, Г.Ф. Методические рекомендации по биохимическим и иммунохимическим методам исследования клеток, их компонентов и других биологических субстратов / Г.Ф. Коромыслов, B.JL Солодовников и др. ВАСХНИЛ. - М., 1980. - 39 с.

121. Коромыслов, Г.Ф. Разработка программ профилактики и ликвидации наиболее опасных болезней животных / Г.Ф. Коромыслов // Науч. тр. ВИЭВ.-М., 1982.-Т. 55.-С. 3-10.

122. Коромыслов, Г.Ф. Применение иммуностимуляторов в ветеринарии / Г.Ф. Коромыслов, Д.Д. Полоз, H.H. Крюков и др. // Тр. ВИЭВ. М., 1985.-Т. 62.-С. 3-7.

123. Кравец, А.Т. Применение телятам вакцины БЦЖ / А.Т. Кравец, В.Н. Зебрев, В.А. Зубакин // Диагностика и профилактика инфекции сельскохозяйственных животных : сб. науч. тр. ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. -Новосибирск, 1981. С. 32-34.

124. Красочко, П.А. Иммунология: учеб. пособие / Под ред. П.А. Кра-сочко, Н.Д. Лисова. Минск «Аверсэв», 2005. - 128 с.

125. Крикун, В. А. Научно-практическое значение вирусо-иммуногенетической теории В.П. Шишкова в изучении лейкоза крупного рогатого скота (к 70-летию со дня рождения) / В.А. Крикун, М.И. Гулюкин // Тр. ВИЭВ. М., 1999. - Т. 72. - С. 12-15.

126. Крикун, В.А. Лейкоз крупного рогатого скота и иммунологическая толерантность / В.А. Крикун // Ветеринария. — 2002. — №6. — С. 7-9.

127. Крифукс, О.И. Особенности модификации Е-рецепторов на Т-димфоцитах периферической крови больных рожей / О.И. Крифукс, И.Г. Цой // Иммунология. 1988. - №2. - С. 76-79.

128. Крячко, О.В. Нагрузочные тесты показатель перспективности назначения иммуномодуляторов при бронхопневмонии поросят / О.В. Крячко // Ветеринария. - 1999. - №3. - С. 36-38.

129. Крячко, О.В. Применение пептидных биорегуляторов при бронхопневмонии поросят / О.В. Крячко // Ветеринария сельскохозяйственных животных.-2007.-№12.-С. 51-53.

130. Кудрявцева, Т.П. Лейкоз животных / Т.П. Кудрявцева. М: Рос-сельхозиздат, 1980. - 158 с.

131. Кузин, А.И. Оздоровление животноводческих хозяйств от туберкулеза / А.И. Кузин. М., 1987. - 137 с.

132. Кузнецова, М.А. Фармакогнозия / М.А. Кузнецова, И.З. Рыбачук. М., Медицина, 1993. - 448 с.

133. Кульберг, А.Я. Регуляция иммунного ответа / А.Я. Кульберг. -М.: Мир. 1986.-224 с.

134. Купер, Э. Сравнительная иммунология / Э. Купер. М.: Мир. — 1980.-422 с.

135. Куриленко, А.Н. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных / А.Н. Куриленко, B.JT. Крупальник. М.: Колос, 2001.- 144 с.

136. Кцоян, JI.A. Дискретно-динамический анализ иммунного статуса детей дошкольного возраста, больных рецидивирующим и астматическим бронхитом / JI.A. Кцоян, В.Б. Акунц // Иммунология. — 1986. №5. - С. 6063.

137. Латышев, A.C. Опыт оздоровления ферм крупного рогатого скота методом замены неблагополучных стад / A.C. Латышев // Науч. тр. Новосиб. НИВС. Новосибирск, 1971.-Вып. 4.-С. 184-189.

138. Лебедев, К.А. Т- и В- популяции лимфоцитов при врожденных иммунодефицитах / К.А. Лебедев, Р.В. Петров, Ю.М. Лопухин и др. // Вестн. АМН СССР. 1976. -№10. -С. 86-91.

139. Лебедев, К.А. Количественная характеристика Т- и В- системы иммунитета у здоровых людей разных возрастных групп / К.А. Лебедев, Р.В. Петров, Ю.М. Лопухин // ЖМЭИ. 1977. - №2. - С. 130-134.

140. Лебедев, К.А. Иммунная система при ремиссиях простого хронического бронхита (дискретный анализ взаимосвязи показателей T-, В-, А-систем иммунитета) / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина, И.С. Петрухин // Иммунология. 1984. - №1. - С. 61-65.

141. Лебедев, К.А. Новый метод составления диагностических таблиц на основе дискретно-динамического принципа оценки иммунного статуса / К.А. Лебедев, В.А. Бабайцев // Иммунология. 1986. - №5. - С. 53-56.

142. Лебедев, К.А. Дискретно-динамический анализ — новый подход к оценке иммунного статуса человека / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. - Иммунология. — 1986. - Т. 15. - С. 64-91.

143. Лебедев, К.А. Возрастные особенности баланса иммунной системы в норме и при патологии / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина, P.P. Валмет // Физиология человека. 1986. - №6. - С. 922-931.

144. Лебедев, К.А. Общий синдром иммунологической недостаточности / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. -Иммунология. - 1988а. - Т. 22. - С. 147.

145. Лебедев, К.А. Иммунный статус человека / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина, B.C. Авдеева // Физиология человека. — 1989а. — Т. 15. №1. - С. 131.

146. Лебедев, К.А. Иммунный статус человека / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина, B.C. Авдеева // Физиология человека. — 19896. Т. 15. - №12. - С. 121.

147. Лебедев, К.А. Системное представление о спокойном и активном функционировании иммунной системы / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина, B.C. Авдеева // Успехи современной биологии. 1991. — Т. 111.- Вып. 2. - С. 229245.

148. Лебедев, К.А. Иммунная недостаточность (выявление и лечение) / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина. М: Медицинская книга, Н. Новгород: Издательство НГМА, 2003. - 443 с.

149. Лебенгарц, Я.З. Взаимодействие нейроэндокринной, иммунной систем и кормления / Я.З. Лебенгарц // С.-х. биология. 1991. - №2. - С. 143150.

150. Лебенгарц, Я.З. Продуктивность, метаболизм, иммунологическая реактивность крупного рогатого скота в зависимости от факторов кормления /Я.З. Лебенгарц // С.-х. биология. 1992. -№6. - С. 96-106.

151. Лехтциид, Е.В. Приготовление иммупосорбентов на основе суспензии диальдегидцеллюлозы / Е.В. Лехтцинд, Д.А. Эльгорт // Иммуносорбенты и их использование в биотехнологии: сб. науч. тр. НИИЭМ им. Гамалеи. -М., 1987.-С. 92-95.

152. Лиманский, А.П. Молекулярно-генетические методы — основа программ по искоренению лейкоза крупного рогатого скота / А.П. Лиманский, О.Ю. Лиманская // Биотехнология. — 2001. — №3. — С. 40-50.

153. Лобуи, Дж. Современная гематология и онкология / Дж. Лобуи,

154. A.C. Гордон и др. М., 1983. - 312 с.

155. Логинов, С.И. Системный эколого-эпизоотологический анализ совокупного риска развития лейкоза крупного рогатого скота: автореф. дис. . д-ра биол. наук / С.И. Логинов. Новосибирск, 2005. - 45 с.

156. Лозовой, В.П. О законах распределения иммунологических показателей / В.П. Лозовой, В.В. Губарев, E.H. Наумова, Т.В. Елисеева // Иммунология. 1989. - №2. - С. 50-53.

157. Лютинский, С.И. Пептидные иммунорегуляторы в лечении гипотрофии молодняка разных животных / С.И. Лютинский // Сб. науч. тр. -СПб., 1993.-С. 46.

158. Ляпон, А.О. Изучение Т-лимфоцитов периферической крови методом спонтанных и активных «розеток» с применением левамизола / А.О. Ляпон, К.А. Лебедев, А.Л. Машкиллейсон // Бюл. экспер. биол. 1980. - №5. -С. 630-632.

159. Манько, В.М. Субпопуляции лимфоцитов и их взаимодействия /

160. B.М. Манько // Журн. Всесоюзн. хим. общ-ва им Д.И. Менделеева. 1982. -Т. 27. -№4. - С. 389-397.

161. Манько, В.M. Иммуномодуляция: история, тенденции развития, современное состояние и перспективы / В.М. Манько, Р.В. Петров, P.M. Хаитов // Иммунология. 2002. -№3. - С. 132-138.

162. Мартма, О.В. О возбудителях и течении микобактериоза / О.В. Мартма, К.К. Тяхнас // Туберкулез крупного рогатого скота и меры борьбы с ним: сб. науч. тр. ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. — Новосибирск, 1986. С. 96-100.

163. Марчук, Г.И. Математическое моделирование в иммунологии / Г.И. Марчук, Р.В. Петров // Журн. Всесоюзн. хим. общ-ва им. Д.И. Менделеева. 1982. - Т. 27. - №4. - С. 371-379.

164. Марчук, Г.И. Математические модели в иммунологии и медицине / Г.И. Марчук, Л.Н. Белых. М.: Мир, 1986. - 310 с.

165. Маслянко, Р.П. Структура и функция иммуноглобулинов у животных / Р.П. Маслянко // Сельскохоз. биол. 1973. - T. YIII. - №6. - С. 868872.

166. Матвеев, В.Н. Опыт вакцинации туберкулеза по методу Кальмет-та-Герена / В.Н. Матвеев // Тез. докл. на IV пленуме ветсекции ВАСХНИЛ. -М., 1936.-С. 15.

167. Маянский, А.Н. Реактивность нейтрофила / А.Н. Маянский, А.Н. Галиуллин. Казань: Изд-во Казан, ун-та. — 1984. - 158 с.

168. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск, 1989. - 245 с.

169. Маянский, А.Н. Апоптоз нейтрофилов / А.Н. Маянский, H.A. Маянский // Иммунология. 1999. - №6. - С. 11-20.

170. Маянский, H.A. Апоптоз экссудативных нейтрофилов человека / H.A. Маянский, М.И. Заславская, А.Н. Маянский // Иммунология. 2000. -№2.-С. 11-13.

171. Менделенко, М.М. Динамика и взаимосвязь иммунологических показателей у здоровых детей 1-6 лет / М.М. Менделенко, М.Л. Литвинов, ГН. Горбунова, Л.Н. Хахалин // Иммунология. 1989. - №5. - С. 41-45.

172. Методические указания по диагностике лейкоза крупного скота / Департамент ветеринарии, Минсельхоз России. — 2000. — №13-7-2/2130.

173. Мироненко, В.А. Т- и B-системы иммунитета у телят после введения малых доз бруцелл / В.А. Мироненко, Б.И. Кондауров // Тр. ВИЭВ. -М., 1983.-Т. 57.-С. 97-100.

174. Мирошник, O.A. Иммуномодуляторы в России: справочник / O.A. Мирошник, Ю.В. Редькин. 2-е изд. испр. и доп. — Омск: изд-во ГП Омская областная типография, 2006. — 432 с.

175. Митинская, JI.A. Из истории применения вакцины БЦЖ / JI.A. Митинская // Пробл. туберкулеза. — 2001. №1. - С. 53-55.

176. Михайленко, A.A. Роль корреляционных взаимосвязей в оценке функциональных возможностей иммунной системы / A.A. Михайленко, Т.А. Федотова // Иммунология. 2000. - №6. - С. 59-61.

177. Михайлов, И.Б. Современные иммуностимуляторы / И.Б. Михайлов//Мир медицины. 1999.-№1-2.-С. 15-17.

178. Михайлова, З.М. Содержание иммуноглобулинов и лизоцима в ротоглоточном и бронхиальном секрете у детей страдающих хроническими бронхолегочными процессами / З.М. Михайлова, Г.А. Михеева, P.A. Добровольская // Иммунология. 1983. — №4. - С. 71-76.

179. Михайлова, З.М. Становление иммунной системы и состояние иммунологической реактивности при патологических процессах у детей / З.М. Михайлова // Вестн. АМН СССР. 1985. - №6. - С. 7-12.

180. Мишин, В.Ю. Состояние процессов активации Т-лимфоцитов и их регуляторных субпопуляций у больных туберкулезом легких /В.Ю. Мишин, A.C. Павлюк, JI.B. Ковальчук // Пробл. туберкулеза. 1996. - №1. - С. 38-40.

181. Моркунас, А.Б. Количество иммуноглобулинов сыворотки крови при лейкозе крупного рогатого скота / А.Б. Моркунас, Ю.К. Пешкус, Л.Б. Са-даускас // Проблемы ветеринарной иммунологии. М.: Агропромиздат, 1985. -С. 64-67.

182. Морозов, В.Г. Пептидные тимомиметики / В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон, В.В. Малинин. СПб.: Наука, 2000. - 158 с.

183. Мотузко, Н.С. Профилактика первого возрастного иммунодефицита ягнят / Н.С. Мотузко // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: материалы междунар. конф. Воронеж, 2002. - С. 434435.

184. Наймапов, А.Х. Определение у-интерферона для диагностики туберкулеза / А.Х. Найманов, O.A. Верховский, O.A. Савицкая и др. // Ветеринария. 2004. - №6. - С. 19-22.

185. Наставление по применению вакцины БЦЖ при туберкулезе крупного рогатого скота / ГУВ МСХ СССР, 22.02.1985 г.

186. Нахмансон, В.М. Лейкоз крупного рогатого скота / В.М. Нахман-сон М.: Агропромиздат, 1986. - 221 с.

187. Неприна, Г.С. Модификация Е-рецепторов циркулирующих Т-лимфоцитов в норме и при онкологических заболеваниях / Г.С. Неприна, Е.С. Пантелеева, A.A. Ярилин, П.П. Филатов // Иммунология. 1986. - №6. - С. 62-65.

188. Неустроев, М.П. Изучение динамики содержания Т- и В-лимфоцитов в крови овец / М.П. Неустроев // Вопросы краевой патологии животных в Якутии: науч. тр. Якут. НИИСХ. Якутск, 1980. - Вып. 22. - С. 49-54.

189. Никифорова, В.Л. Показатели естественной резистентности организма крупного рогатого скота инфицированного вирусом лейкоза / В.Л. Никифорова//Тр. ВИЭВ.-М., 1999.-Т. 72.-С. 103-108.

190. Новак, Д.Д. Туберкулез крупного рогатого скота / Д.Д. Новак. — Алма-Ата, 1984.- 160 с.

191. Новик, A.A. Синдром хронической усталости и иммунной дисфункции / A.A. Новик, В.Н. Цыган, Н.Х. Дулатова и др. СПб.: ВМедА, 2001.- 104 с.

192. Новиков, А.Н. Схема профилактики туберкулеза крупного рогатого скота с использованием БЦЖ и туберкулезной бесклеточной вакцины: автореф. дис. . канд. ветеринар, наук / А.Н. Новиков. Омск, 2003. - 17 с.

193. Обуховский, Б.П. Вакцинация телят против туберкулеза по методу Кальметта-Герена / Б.П. Обуховский, А.И. Пашковский // Вопросы туберкулеза. 1929. -№11. - С. 15-18.

194. Овдиенко, Н.П. Противотуберкулезная резистентность, индуцированная микобактериями БЦЖ и фракцией их оболочек / Н.П. Овдиенко,

195. B.А. Горбатов, B.C. Гутин // Труды ВИЭВ. 1984. - Т. 61. - С. 41-44.

196. Орлянкин, Б.Г. Современная классификация ретровирусов / Б.Г. Орлянкин // Бюл. Всерос. НИИ эксперим. ветеринарии. 1996. - Вып. 77.1. C. 36.

197. Орлянкин, Б.Г. Классификация ретровирусов и характеристика вируса лейкоза крупного рогатого скота / Б.Г. Орлянкин, М.И. Гулюкин, Н.В. Замараева, К.Ю. Кунаков // Ветеринария. 2000. - №5. - С. 17-19.

198. Осидзе, Д.Ф. Перспективы применения интерферона и индукторов интерферона в ветеринарии / Д.Ф. Осидзе, A.B. Селиванов, К.Н; Груздев // Тез. докл. X регион, симпозиум соц. стран по интерферону. — Юрмала, 5-10 сентября. М.; Рига, 1988. - С. 94-95.

199. Пальцев,,М:А. Методологические вопросы взаимосвязей методов исследования в патологии / М.А. Пальцев // Арх. пат. — 1986. №12. - С. 3-6.

200. Пат. 2034542 Российская Федерация, МПК А 61 К 31/305. Имму-номодулирующее средство / В.Н. Ласкавый, В.В. Рыбин 95119203/14; за-явл. 21.11.1995; опубл. 27.04.1997.

201. Пат. 2112543 Российская Федерация, МПК6 А 61 К 39/04, А 61 К 47/48. Иммуномодулирующее лекарственное средство / А.Г. Хоменко, Р.В. Петров, P.M. Хаитов и др. №96119399/14; заявл. 26.09.1996; опубл. 10.06.1998.

202. Пат. 2188655 Российская Федерация, МПК А 61 К 35/26, А 61 К 35/28, А 61 К 39/39. Способ профилактики лейкоза крупного рогатого скота / И.Д. Александров, Е.С. Воронин.; №2000104287/13; заявл. 24.02.00; опубл. 10.09.02; Бюл. №13.

203. Пацула, Ю.И. Количество Т- и В-лимфоцитов в крови телят после введения вакцинных бруцелл / Ю.И. Пацула // Материалы Всесоюзн. науч. конф. Омск, 1980.-С. 198-200.

204. Пацула, Ю.И. Имуномониторинг при экспериментальном бруцеллезе крупного рогатого скота и лабораторных мышей: автореф. дис. . канд. биол. наук / Ю.И. Пацула. — Омск, 2000. 23 с.

205. Петров, Р.В. Т- и В-лимфоциты / Р.В. Петров, А.Н. Чередеев // Успехи современной биологии. 1974. - Т. 77. - Вып. I. - С. 90-104.

206. Петров, Р.В. Иммунология и иммуногенетика / Р.В. Петров. М.: Медицина, 1976.-333 с.

207. Петров, Р.В. Лимфоциты-супрессоры B-ряда В-супрессоры / Р.В.»Петров, P.M. Хаитов // Успехи современной биологии. - 1981. - Т. 91. -Вып. I,-С. 8-28.

208. Петров, Р.В. Рецепторы и фагоцитарная активность нейтрофилов при острых хирургических заболеваниях органов брюшной полости / Р.В. Петров, А.Н. Чередеев, А.З. Цховребова // Иммунология. — 1982. №4. - С. 63-66.

209. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. М.: Медицина, 1983. -368 с.

210. Петров, Р.В. Регуляция функции иммунной системы / Р.В. Петров // Арх. патологии. 1983. - Т. 45. - №4. - С. 3-11.

211. Петров, Р.В. Иммуногенетика и искусственные антигены / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, Р.И. Атауллаханов. М.: Медицина, 1983.-256 с.

212. Петров, P.B. Диагностика иммунопатологических состояний на основании оценки дисбаланса в функционировании компонентов иммунной системы / Р.В. Петров, К.А. Лебедев // Иммунология. — 1984. №6. - С. 3843.

213. Петров, Р.В. Оценка иммунологического статуса человека с учетом корреляционных взаимодействий между отдельными показателями / Р.В. Петров, Л.В. Ковальчук, H.A. Константинов // ЖМЭИ. 1985. - №3. - С. 6167.

214. Петров, Р.В. Я или не Я. Иммунологические мобили / Р.В. Петров. М.: Молодая гвардия, 1987. - 303 с.

215. Петров, Р.В. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 1994. - №6. - С. 6-9.

216. Петров, Р.В. Искусственные антигены и вакцины / Р.В. Петров, P.M. Хаитов.-М., 1998.

217. Петрова, И.В. Иммунологический дисбаланс при различных формах псориаза / И.В. Петрова, И.В. Амирова // Иммунология. 1984. - № 6. - С. 74-76.

218. Петрова, И.В. Иммунокоррекция, профилактика гнойно-септических осложнений / И.В. Петрова, Г.М. Соловьев, C.B. Ковалев. М.: Медицина, 1987. - 160 с.

219. Петрухин, И.С. Оценка иммунного статуса у больных хроническим бронхитов в фазе ремиссии в процессе профилактического лечения ле-вамизолом и стафиллококковой вакциной / И.С. Петрухин, И.Д. Понякина // ЖМЭИ. 1986. - №6. - С. 55-58.

220. Пешкус, Ю.К. Иммунные комплексы сыворотки крови крупного рогатого скота при лейкозе / Ю.К. Пешкус, В.И. Жилайтис, В.И. Тамошюнас //Проблемы ветеринарной иммунологии. -М.: Агропромиздат, 1985. С. 6770.

221. Пионтковский, В.И. Эффективность противотуберкулезной вакцины БЦЖ / В.И. Пионтковский, Д.П. Бахтин // Вестн. с.-х. науки Казахстана. 1982.-№10.-С. 73-77.

222. Пионтковский, В.И. Усовершенствование мер профилактики и ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота / В.И. Пионтковский // Тр. ВИЭВ / ВНИИ экспериментальной ветеринарии. — 1984. — Т. 61. С. 49-55.

223. Пионтковский, В.И. Профилактика и меры борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота / В.И. Пионтковский, Д.П. Бахтин // Вест. с.-х. науки Казахстана. 1987. — №6. - С. 57-61.

224. Покровский, В.И. Приобретенный иммунитет и инфекционный процесс / В.И. Покровский, М.М. Авербах, В.И. Литвинов. М., 1979. - 289 с.

225. Покровский, В.И. Иммунология инфекционного процесса / В.И. Покровский, С.П. Гордиенко, В.И. Литвинов. М.: Медицина, 1993. - 306 с.

226. Пол У. Иммунология: в 3 т. / У. Пол. М.: Мир, 1987. - Т. 1. -476 с.

227. Понякина, И.Д. Характеристика регрессионных взаимосвязей между иммунными реакциями к разным штаммам стафиллококка при хронических воспалительных заболеваниях дыхательных путей / И.Д. Понякина, Г.Д. Турчанинова // ЖМЭИ. 1984. - №5. - С. 92-95.

228. Понякина, И.Д. Характеристика иммунного статуса при острой пневмонии (взаимоотношение параметров Т-, В- и А-систем иммунитета) / И.Д. Понякина, С.П. Белинский, К.А. Лебедев и др. // Вестн. АМН СССР. -1985,-№7. -С. 40-44.

229. Понякина, И.Д. Прогнозирование эффективного профилактического лечения у больных хроническим бронхитом на основании оценки иммунного статуса / И.Д. Понякина, В.В. Андронов, O.E. Скворцова // Иммунология. 1986. - №5. - С. 56-60.

230. Понякина, И.Д. Классификация типов и причин иммунной недостаточности / И.Д. Понякина, К.А. Лебедев // Физ. человека. — 2003. Т. 29. — №3. - С. 147.

231. Правила по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота / Приказ №359 от 11 мая 1999 г.

232. Придыбайло, Н.Д. Иммунодефицита у сельскохозяйственных животных и птиц, профилактика и лечение их иммуномодуляторами / Н.Д. Придыбайло. М, 1991. - 44 с.

233. Прохватилова, Л.Б. Применение ПЦР для раннего обнаружения провируса лейкоза крупного рогатого скота у экспериментально инфицированных животных / Л.Б. Прохватилова, С.Н. Колосов, А.И. Ломакин и др. // Ветеринария. -2001. №8. - С. 17-21.

234. Прудников, С.И. Оптимизация системы противоэпизоотических мероприятий в промышленном свиноводстве: дис. .д-ра ветеринар, наук / С.И. Прудников. Новосибирск, 1996. - 436 с.

235. Решетников, И.С. Тимус северного оленя / И.С. Решетников, J1.H. Владимиров. М.: ИКЦ Академкнига, 2002. - 238 с.

236. Ройт, А. Основы иммунологии / А. Ройт. М.: «Мир», 1991. - 327с.

237. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. Пер. с англ. - М.: Мир, 2000. - 592 с.

238. Романова, Р.Ю. Иммунологическое значение фракций микобак-терий, полученных с помощью ультрацентрирования / Р.Ю. Романова, В.П. Павлова // В кн.: Основные направления повышения борьбы с туберкулезом.- М.: Медицина, 1975. С. 318-325.

239. Романова, Р.Ю. Использование дифференциального ультрацентрифугирования для выделения субклеточных компонентов микобактерий туберкулеза/Р.Ю. Романова//Пробл. туберкулеза. 1981,-№7.-С. 54-56.

240. Романова, Р.Ю. Использование антигена клеточных стенок мико-бактериий БЦЖ для определения противотуберкулезных антител / Р.Ю. Романова и др. // Материалы докл. Всерос. науч.- практ. конф. — Пермь, >1993. -с-С. 104-105.

241. Самуйленко, А.Я. Инфекционная патология животных. В 2-х т. / Под ред. А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьева, Е.А. Непоклонова, Е.С. Воронина. М., ИКЦ «Академкнига», 2006.

242. Саньков, А.Н. Лекарственные травы Оренбуржья / А.Н. Саньков.- Оренбург, 2001.-352 с.

243. Сапин, М.Р. Иммунная система человека / М.Р. Сапин, Л.Е. Эти-ген. М.: Медицина, 1996. - 304 с.

244. Сафин, М.А. Эффективность вакцинации телят БЦЖ в хозяйствах, длительно неблагополучных по туберкулезу / М.А. Сафин, Х.Г. Гизатул-лин, М.В. Харитонов // Тез. науч.- произв. конф. по туберкулезу. Минск, 1977.-С. 34-37.

245. Сафин, М.А. Иммунопрофилактика туберкулеза крупного рогатого скота вакциной БЦЖ / М.А. Сафин // Сб. науч. тр. КГВИ. Казань, 1981. — Т. 138. — С.32-38.

246. Сафин, М.А. Вакцина БЦЖ и противотуберкулезные мероприятия / М.А. Сафин // Ветеринария. 1982. - №11. - С. 39-40.

247. Сафин, М.А. Проблема специфической профилактики туберкулеза у крупного рогатого скота / М.А. Сафин // Актуальные вопросы эпизоотологии. Казань, 1983. - С. 14-15.

248. Сафин, М.А. Результаты экспериментального изучения вакцины БЦЖ на молодняке крупного рогатого скота / М.А. Сафин, P.A. Хамзин // Науч. техн. бюл. СО ВАСХНИЛ. Новосибирск, 1985. - №32. - С. 30-32.

249. Сафин, М.А. Значение специфической профилактики в комплексе противотуберкулезных мероприятий / М.А. Сафин, Ф.Г. Акберов, P.A. Хамзин // Меры борьбы с хроническими инфекциями в животноводческих комплексах: сб. науч. тр. КГВИ. Казань, 1986. - С. 23-27.

250. Сафин, М.А. Вакцина БЦЖ и ее эффективность в общем комплексе противотуберкулезных мероприятий / М.А. Сафин // Совершенствование систем и методов в борьбе с бруцеллезом и туберкулезом животных / ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. Новосибирск, 1987. - С. 152-157.

251. Сафин, М.А. Повышение протективных свойств вакцины БЦЖ с помощью иммуномодуляторов / М.А. Сафин, P.C. Сибгатуллин, Ф.Г. Акберов // Пробл. инфекц. и инваз. болезней в животноводстве на соврем, этапе. -М., 1999.-С. 55-57

252. Селиванов, A.B. Изучение пероральной иммунизации телят против туберкулеза вакциной БЦЖ / A.B. Селиванов, Э.Д. Лакман // Учен. зап. КГВИ. Казань, 1970. - Т. 104. - С. 98-102.

253. Сизякина, Л.П. Справочник по клинической иммунологии / Л.П. Сизякина, И.И. Андреева. Ростов-на-Дону, 2005. - 448 с.

254. Сискинд, Г.У. Иммунологическая толерантность / Под редакцией У. Пола // Иммунология. М.: Мир, 1988. - Т. 2. - С. 363-395.

255. Смирнов, B.C. Иммунодефицитаые состояния / Под общ. ред. B.C. Смирнова, И.С. Фрейдлин. СПб.: Фолиант, 2000. - 668 с.

256. Смирнов, B.C. Тимоген в животноводстве и ветеринарии / B.C. Смирнов. СПб, 2004. - 37 с.

257. Смирнов, П.Н. Проблема лейкоза животных / П.Н. Смирнов, А.Г. Незавитин, В.В. Смирнова и др. — Новосибирск: Советская Сибирь, 1992. — 476 с.

258. Смирнов, П.Н. Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири / П.Н. Смирнов, В.В. Храмцов, С.И. Джупина и др. Новосибирск, 1995.-257 с.

259. Смирнов, П.Н. Практические аспекты лейкоза крупного рогатого скота / П.Н. Смирнов, В.В. Храмцов, В.В. Смирнова // Ветеринария. 1998. -№8. - С. 6-8.

260. Смирнов, Ю.П. Эпизоотология и профилактика лейкоза крупного рогатого скота / Ю.П. Смирнов, A.B. Жаркова, А.И. Ерзутов и др. // Вестник РАСХН. 2008. -№1. — С. 75-76.

261. Смолянинов, Ю.И. Экономическая эффективность замены неблагополучного по туберкулезу поголовья крупного рогатого скота / Ю.И. Смолянинов // Науч. тр. СибНИВИ. Омск, 1978. - Вып. 32. - С. 60-64.

262. Смолянинов, Ю.И. Специфическая профилактика туберкулеза у молодняка крупного рогатого скота / Ю.И. Смолянинов, H.H. Кощеев // Инфекционная патология животных: сб. науч. тр. Омск, 2001. - С. 168-170.

263. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным растениям / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. М.: VITA, 1993. - 512 с.

264. Солодовников, В.JI. Т- и B-системы при туберкулезе крупного рогатого скота и овец: автореф. дис. . канд. биол. наук / В.Л. Солодовников. -М, 1983.-23 с.

265. Сохин, A.A. Прикладная иммунология / A.A. Сохин. — Киев, 1984.-320 с.

266. Спиридонов, Г.Н. Значение иммуномодуляторов в повышении противотуберкулезной устойчивости / Г.Н. Спиридонов // Достижение ветеринарной и зоотехнической науки в животноводстве: тез. докл. респ. науч.-произв. конф. Казань, 1988. - 30 с.

267. Спиридонов, Г.Н. Влияние иммуномодуляторов на иммуногенез у телят, привитых вакциной БЦЖ / Г.Н. Спиридонов, М.А. Сафин // Вопросы борьбы с туберкулезом людей и животных. — Ташкент, 1990. — С. 170-171.

268. Способ диагностики активиости туберкулеза у детей: а.с. №1387991 СССР: МКИЗ А 61 В 10/00 / В.Г. Саватеева, A.B. Кочкин (СССР). -№4072368/28-14; заявл. 26.05.86; опубл. 15.14.88; Бюл. №14. 2 с.

269. Степанов, A.B. Дрожжевые рекомбинантные препараты цитоки-нов. Итоги и перспективы применения в инфектологии при опасных инфекционных заболеваниях / A.B. Степанов, В.М. Добрынин и др. СПб.: ЗАО изд-во Скиф, 2005. - 92 с.

270. Степанов, A.B. Перспективы применения ронколейкина в качестве адъювантов вакцин / A.B. Степанов, Л.П. Свиридов, В.М. Добрынин и др. -СПб., 2006.-45 с.

271. Столяров, И.Д. Иммунодиагностика и иммунокоррекция в клинической практике / Под общ. ред. И.Д. Столярова. СПб.: Сотис, 1999. -176 с.

272. Суровас, В.М. Иммунологическое изучение Т- и B-лимфоцитов у коров в норме и при хроническом лимфолейкозе / В.М. Суровас, В.И. Тамо-шюнас // Цитология. 1986. - Т. 28. - №4. - С. 438-442.

273. Тамошюнас, В.И. Иммунологическая характеристика Т- и В-лимфоцитов крупного рогатого скота при лимфолейкозе: автореф. дис. . д-ра биол. наук / В.И. Тамошюнас. — М., 1985. — 34 с.

274. Тогуиова, А.И. Иммуногенные свойства сухой вакцины БЦЖ / А.И. Тогунова, E.H. Лещинская и др. // Бюл. ин-та туберкулеза АМН СССР. -1951.-№1.- С. 27-33.

275. Топурия, Г.М. Радиационные иммунодефицита и их коррекция / Г.М. Топурия. Оренбург, 2003. - 140 с.

276. Топурия, Л.Ю. Препараты для стимулирования, воспроизводства и повышения продуктивности коров / Л.Ю. Топурия // Молочное и мясное скотоводство. 2004. - №4. - С. 19.

277. Топурия, Л.Ю. Фармакокоррекция иммунодефицитных состояний у животных / Л.Ю. Топурия // Актуальные вопросы микробиологии и инфекционной патологии животных: Материалы науч.-произв. конф. Омск, 2004.-С. 440-443.

278. Топурия, Л.Ю. Влияние олетима на воспроизводительную функцию самок и сохранность поросят / Л.Ю. Топурия // Ветеринария. — 2006. -№11. -С. 34-37.

279. Топурия, Л.Ю. Недостаточность иммунной системы и ее коррекция при бронхопневмонии телят / Л.Ю. Топурия // Известия ОГАУ. 2006. -№1. - С. 87-89.

280. Топурия, Л.Ю. Фармакокоррекция иммунодефицитных состояний у животных / Л.Ю. Топурия, A.A. Стадников, Г.М. Топурия. — Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 2008. — 176 с.

281. Тотолян, A.A. Клетки иммунной системы / A.A. Тотолян, И.С. Фрейдлин. Спб.: Наука, 2000. - Т. 1-2. - 231 с.

282. Урбан, В.П. Диагноз и мероприятия при туберкулезе крупного рогатого скота / В.П. Урбан // Материалы 10-й науч.- произв. конф. вет. специалистов. Петрозаводск, 1973. - С. 12-14.

283. Урбан, В.П. Проблемы профилактики и меры борьбы с туберкулезом и бруцеллезом / В.П. Урбан, П.С. Уласевич, В.Е. Щуревский // Развитие молочного и мясного скотоводства в СССР: Науч. тр. ВАСХНИЛ. М.: Колос, 1980.-С. 12-14.

284. Урбах, В.Ю. Биометрические методы (статистическая обработка опытных данных в биологии, сельском хозяйстве и медицине) / В.Ю. Урбах. -М.: Наука, 1964.-416 с.

285. Усович, А.Т. Применение математической статистики при обработке экспериментальных данных в ветеринарии / А.Т. Усович, П.Т. Лебедев. -Омск, 1970.-44 с.

286. Федоров, Ю.Н. Выделение иммуноглобулинов из сыворотки крови и молозива овцематок / Ю.Н. Федоров // Бюл. ВИЭВ. 1979. - Вып. 34. -С. 18-21.

287. Федоров, Ю.Н. Количественная характеристика иммуноглобулинов овец / Ю.Н. Федоров // Докл. ВАСХНИЛ. 1981. - №4. - С. 33-34.

288. Федоров, Ю.Н. Получение моноспецифических сывороток против иммуноглобулинов классов G, М и А овцы / Ю.Н. Федоров, М.Ю. Горбунова, С.О. Кадыров // Ветеринария. 1983. - №1. - С. 26-27.

289. Федоров, Ю.Н. Иммунодефициты домашних животных / Ю.Н. Федоров, O.A. Верховский. М., 1996. - 95 с.

290. Федоров, Ю.Н. Основы иммунологии и иммунопатологии собак / Ю.Н. Федоров, O.A. Верховский, И.В. Слугин. М.: Издательско-информационный центр ООО «ИНФОРМ-12», 2000. - 248 с.

291. Федоров, Ю.Н. Иммунокоррекция: применение и механизм действия иммуномодулирующих препаратов / Ю.Н. Федоров // Ветеринария. — 2005.-№2.-С. 3-6.

292. Федоров, Ю.Н. Иммунодефициты крупного рогатого скота / Ю.Н. Федоров // Ветеринария. 2006. - №1. - С. 3-6.

293. Фонталин, JI.H. Иммунологическая толерантность / Л.Н. Фонта-лин, Л.А. Певницкий. М., 1978. - 312 с.

294. Фрейдлин, И.С. Иммунная система и её дефекты: руководство для врачей / И.С. Фрейдлин. СПб., 1998. - 113 с.

295. Фрейдлин, И.С. Клетки иммунной системы / И.С. Фрейдлин, A.A. Тотолян. С-Пб.: Наука, 2001. - Т. 3-5. - 390 с.

296. Фриденштейн, А.Я. Клеточные основы иммунитета / А.Я. Фри-денштейн, И.Л. Чертков. М., 1969. - 256 с.

297. Фримель, X. Основы иммунологии / X. Фримель, И. Брок. М., 1986.-254 с.

298. Фролов, А.Ф. Генетический контроль иммунологической толерантности к бактериальным полисахаридам / А.Ф. Фролов, В.А. Борисов // Иммунология. 1982. - №3. - С. 63-67.

299. Хаитов, P.M. Современные иммуномодуляторы: основные принципы их применения / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2000. -№5.-С. 4-7.

300. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. М.: Медицина, 2000. - 432 с.

301. Хаитов, P.M. Современные представления о защите организма от инфекции / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин//Иммунология. — 2000. №1. —С. 6164.

302. Хаитов, P.M. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2003. - №4. -С. 196-203.

303. Хайкин, Б.Я. Химиопрофилактические свойства изониазида и иммунизирующая активность вакцины БЦЖ при туберкулезе норок: автореф. дис. . канд. ветеринар, наук / Б.Я. Хайкин. — Троицк, 1970. 18 с.

304. Хайкин, Б.Я. Аллергизирующие свойства вакцины БЦЖ при различных фазах и методах введения / Б.Я. Хайкин, А.Т. Кравец, В.А. Зубакин // Инфекционные болезни с.-х животных / ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. Новосибирск, 1984.-С. 7-13.

305. Хайкин, Б.Я. Профилактическая эффективность вакцины БЦЖ при разных схемах ее применения / Б.Я. Хайкин, В.А. Зубакин // Методы диагностики и профилактики бруцеллеза и туберкулеза животных: сб. науч. тр. -Омск, 1988.-С. 69-78.

306. Хоменко, И.С. Течение деструктивного туберкулеза легких у больных с иммунодефицитом: автореф. дис. . д-ра мед. наук / И.С. Хоменко.-М., 1993.

307. Хонина, H.A. Особенности иммунитета у больных с различными формами туберкулеза легких / H.A. Хонина, С.Д. Никонов, C.B. Шпилевский и др. // Пробл. туберкулеза. 2000. - №1. - С. 30-32.

308. Храмцов, В.В. Факторы, повышающие риск заболевания крупного рогатого скота лейкозом / В.В. Храмцов // Этиология, патогенез и вопросы эпизоотологии лейкоза крупного рогатого скота. Новосибирск, 1987. - С. 57-62.

309. Храмцов, В.В. Факторы, определяющие особенности распространения лейкоза крупного рогатого скота /В.В. Храмцов // Особенности эпизоот. процесса и профилактика болезней на пром. комплексах. Новосибирск, 1988.-С. 52-58.

310. Храмцов, В.В. Экологическое неблагополучие отдельных территорий Уральского региона как фактор, повышающий риск заболевания крупного рогатого скота лейкозом / В.В. Храмцов, B.C. Федоров, И.М. Донник // Тр. Свердл. НИВС. 1995. - Вып. 10. - С. 58-61.

311. Царев, Ю.П. Уровень Т- и В-лимфоцитов крови телят от больных лейкозом коров и экспериментально инфицированных ВЛКРС / Ю.П. Царев // Науч.-техн. бюл. ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. - 1985. - Т. 25. - С. 49-54.

312. Цыганок, С.С. Дискретно-динамический анализ показателей иммунитета дерматологически больных / С.С. Цыганок, А.П. Парахонский // Успехи современного естествознания. -2003. №12. — С. 72.

313. Чекишев, В.М. Приготовление бивалентных антисывороток к иммуноглобулинам крупного рогатого скота / В.М. Чекишев, Б.И. Кондау-ров, М.А. Бажин // Сиб. вестн. с. х. науки. - 1973. - С. 72-74.

314. Чередеев, А.Н. Общие вопросы патологии / А.Н. Чередеев. М., 1976.-T. 4.-С. 124-160.

315. Шабалин, В.Н. Клиническая иммуногематология / В.Н. Шабалин, Л.Д. Серова. Л.: Медицина, 1988. - 312 с.

316. Шамов, В.В. Технология изготовления белково-целлюлозных комплексов из микобактерий и их иммуногенные свойства: автореф. дис. . канд. биол. наук/В.В. Шамов. — Новосибирск, 2001. 18 с.

317. Шахов, А.Г. Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях / А.Г. Шахов // Ветеринарная патология. 2003. - №5. - С. 6-7.

318. Шемеровская, Т.Г. Сравнительное изучение иммуногенных и то-лерогенных свойств препаратов иммуноглобулинов в зависимости от их молекулярного состава / Т.Г. Шемеровская, В.В. Немов, И.А. Киселева, Б.Н. Софронов // Иммунология. 1982. — №4. — С. 60-63.

319. Шишков, В.П. Лейкозы животных / В.П. Шишков // Онкология. -1977.-№9.-С. 6-46.

320. Шишков, В.П. Лейкозы и злокачественные опухоли животных / Под ред. В.П. Шишкова, Л.Г. Бурбы. М.: Агропромиздат, 1988. - 400 с.

321. Шкуратова, И.А. Клинический и иммунобиохимический статус продуктивных животных в условиях техногенного загрязнения / И.А. Шкуратова, А.Д. Шушарин // Известия ОГАУ. 2004. -№3. - С. 131-133.

322. Шор, P.P. Различия взаимосвязей иммунологических параметров у здоровых девочек и мальчиков подросткового периода / P.P. Шор. М.А. Жуковский, К.А. Лебедев // Педиатрия. 1987а. - №7. - С. 110.

323. Шор, P.P. Иммунный статус у детей с различными формами диффузного токсического зоба / P.P. Шор, М.А. Жуковский, К.А. Лебедев // Педиатрия. 19876. - №7. - С. 24.

324. Щуревский, В.Е. Значение вакцинации в профилактике туберкулеза крупного рогатого скота / В.Е. Щуревский // Бюл. ВИЭВ. — М., 1983. -Вып. 51.-С. 8-10.

325. Яковлев, Г.М. Резистентность, стресс, регуляция / Г.М. Яковлев, B.C. Новикова, В.Х. Хавинсон. Л.: Наука, 1990. - 238 с.

326. Ярилин, A.A. Основы иммунологии / A.A. Ярилин. М.: Медицина, 1999.-608 с.

327. Beier, D. Possibilities and limitations for use of the polymerase chain reaction (PCR) in the diagnosis of bovine leukemia virus (BLV) / D. Beier, P. Blankenstein, H. Fechner // Dtsch. Tierarztl. Wochenschr. — 1998. Vol. 105. - P. 408-412.

328. Bell, G.J. Mathematical model of clonal selection and antibodi production / G.J. Bell // J. Theor. Biol. 1971. - Vol. 33. - P. 379-398.

329. Bielefeldt-Ohmann, H. Demonstration of bovine viral diarrhea virus in peripheral blood mononuclear cells of persistently, clinically normal cattle / H. Bielefeldt-Ohmann, L. Ronsholt, B. Bloch // J. general. Virol. 1987. - Vol. 6. - N7. -P. 1971-1982.

330. Billingham, R.E. Actively aquired Tolerance of foreign cells / R.E. Billingham, L. Brent, P.B. Medawar // Nature. 1953. - N1-72. - P. 603-606.

331. Bloemence, E. Whole-blood lymphocyte cultures / E. Bloemence, M.T.Z. Ross//J. Immunol. Methods.- 1989.-Vol. 122. N2.-P. 161-167.

332. Bretscher, P.A. An integration of B and T lymphocytes in immune activation / P.A. Bretscher // B and T cells in immune recognition. 1978. - P. 457484.

333. Briggs, R.E. Effects of infection with parainfluenza-3 virus and infections bovine rhinotracheitis virus on neutrophil functions in calves / R.E. Briggs, M. Kenrli, G.H. Frank// Amer. J. Veter. Res. 1988. -N5. - P. 682-686.

334. Bruner, K. the tymus as primary site for antigen-specific T suppressor cells in neonatally induced tolerance to bovine serum albumin / K. Bruner, H.G. Opitz, E. Kolsch // Immunology. 1982. - Vol. 162. - N3. - P. 221 -228.

335. Butler, J.E. Bovine immunoglobulins: A review / J.E. Butler // J. Dairy Sei. 1969.-N52.-P. 1895-1909.

336. Butler, J.E. Synthesis and distribution of immunoglobulins / J.E. Butler // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1973. - Vol. 163. - N7. - Ch. 2. - P. 795-800.

337. Cheneau, G. Essaie preliminaries climmunisation des Zebus delebege extonsif contre la tuberculose / G. Cheneau, J. Blancou, H. Serres // Rev. Elev. Med. Vet. Paystrop. 1973. - Vol. 3 6. - P. 141 -145.

338. Cheneau, G. Valeuse comparies du BCG vivanton the et du bacille de Koch tripaine dans limmunisation des Zebus contre la tuberculose / G. Cheneau, J. Blancou // Rev. Elev. Med. Vet. Paystrop. 1975. - Vol. 28. - P. 1 -7.

339. Cinader, B. Acquired immune tolerance to human albumin and the response to subseguent injections of diazo human albumin / B. Cinader, J.M. Dubert // J. Exp. Pathol. 1955. - N36. - P. 515-529.

340. Curtis, J. Immunoglobulin quantitation in sow serum, Colostrums and milk and the serum of young pigs / J. Curtis, F. Bourne // Biochim. Biophys. Acta. 1971.-Vol. 236.-Nl.-P. 319-332.

341. Dannenberg, A.M. Immune mechanisms in the pathogenesis of pulmonary tuberculosis / A.M. Dannenberg // Rev. Infect. Dis. — 1989. Vol. 11. — N2.-P. 369-378.

342. De Lima, G. Untersuchungen über die Zahl der B und T Lymphozyten von gesunden leukoseverdachtigen und leukosekranken kindern der Deutschen Schwarzbunten / G. De Lima, E. Mitsherlich // Zentr. Bl. Vet. Med. - 1973. -Bd. 20.-H. 3.-S. 665-684.

343. Derry, J.M. Isolation of a novel seen mutated in Wiskott-Aldrich syndrome / J.M. Derry, H.D. Ochs, U. Francke // Cell. 1994. - Vol. 78. - N4. - P. 635-644.

344. Dresser, D.W. Specific inhibition of antibody production. I. Protein-overloading paralysis / D.W. Dresser // Immunology. — 1962. — Vol. 5. P. 161168; 378-388.

345. Dresser, D.W. Tolerance induction as model for cell differentiation / D.W. Dresser // Brit. Med. Bull. 1976. - Vol. 32.-P. 147-151.

346. Dutton, R.W. T-lymphocyte subsets and interaction / R.W. Dutton // Fed. Proc. 1980. - Vol. 39. - N13. - P. 3109.

347. Ellaner, J.I. Immunologic aspects of mycobacterial infections / J.I. Ellner, R.S. Wallis // Rev. Infec. Diaseases. 1989. - Vol. 11. - Suppl. - N2. - P. 455-459.

348. Esteban, E. N. Characterization of the blood lymphocyte population in cattle infected with the bovine leukemia virus / E.N. Esteban, R.M. Thorn, J.F. Ferrer // Cancer Research. 1985. - Vol. 45. - N7. - P. 3225-3230.

349. Forschner, E. Ablaufbestimmende Einflus parameter, deren Auswirkungen auf die Testsicherheit und praxisgerechte olufmethoden / E. Forschner, D. Heiseke // Tierarztl. Umsch, 1988. T. 43. - N12. - S. 786-796.

350. Frost, H. The effect of antigen on the output of recirculating T and B cells from single lymph nodes / H. Frost // Cell. Immunol. 1987. - Vol. 37. - N2. - P. 390-396.

351. Ghosh, A. Immunological studies on pulmonary tuberculosis: A preliminary report / A. Ghosh, J.M. Ghosh, S.K. Saha // Ind. J. Med. Sei. 1989. -Vol. 43.-N10.-P. 270-273.

352. Goren, M.B. Immunoreactive substances of mycobacteria / M.B. Goren // Amer. Rev. Resp. Dis. 1982. - Vol. 125. - N3. - P. 50-69.

353. Grange, J.M. The specificity of the humoral immune response to soluble mycobacterial antigens in tuberculosis / J.M. Grange, J. Gibson, A. Batty // Tubercul.- 1980.-Vol. 61.-N3.-P. 153-156.

354. Greinert, U. Immunologische parameter bei lungentuberculose / U. Greinert, M. Ernst, H. Haas, M. Schlaak // Pneumologie. 1990. - Bd. 44. - N1. -P. 493-494.

355. Grewal, A.S. Characterisation of surface receptors on bovine leucocytes / A.S. Grewal, B.T. Rouse, L.A. Babiuk // Int. Arch. Allergy appl. Immune. -1978.-N56.-P. 289-300.

356. Grey, H.M. Antigen processing and presentation to T-cells / H.M. Grey, R. Chesnut // Immunol. Today. 1985. - Vol. 6. - N3. - P. 101-106.

357. Heuman, A.M. Tolerance induction in mice selected for high or low antibody responsiveness / A.M. Heuman, C. Stiffel // J. Immunogenet. 1980. -Vol. 7.-N4.-P. 349-358.

358. Holscher, C. The power of combinatorial immunology: IL-12 and IL-12-related dimeric cytokines in infections diseases / C. Holscher // Med. Microbiol. Immunol.-2004.-Vol. 193.-P. 1-17.

359. Jacobs, R.M. Inhibition of lymphocyte blastogenesis by sera from cows with lymphosarcoma / R.M. Jacobs, V.E.O. Valli, B.N. Wilkie // Am. J. Vet. Res. 1980.-N41.-P. 372-376.

360. Janeway, C.A. Immunobiology. / C.A. Janeway, P. Travers, S. Hunt, M. Walport // The Immune System in Health and Disease. New York, London, 1997.

361. Jorgensen, J. Experemental infection with Mycobacterium avium, serotype 2, in pigs, 5. The immunizing effect of BCG vaccine against M. avium infection / J. Jorgensen, M. Prave // Acta Vet. Scand. 1978. - Vol. 19. - N3. - P. 430-440.

362. Kajikawa, O. Use of alphanaphthye acetate esterase staining to identify T lymphocytes in cattle / O. Kajikawa, H. Koyama, T. Yoshikana et al. // Amer. J. Vet. Research. 1983.-Vol. 44,-N8.-P. 1549-1552.

363. Kendall, S. Inside the thymus / S. Kendall // Immunol. Today. 1984. -Vol. 5.-N5.-P. 83-84.

364. Klintevall, К. Bovine leukemia virus: Rapid detection of proviral DNA by nested PCR in blood and organs of experimentally infected calves / K. Klintevall, A. Ballagi-Pordany, K. Naslund et al. // Vet Microbiol. 1994. - Vol. 42.-P. 191-204.

365. Kostiala, A.A. Immunological memory in tuberculosis. II. Mediators of protective immunity, delayed hypersensitivity and macrophage migration inhibition in central lymph / A.A. Kostiala, M.I. Lefford, D.D. McGregor // Cell. Immunol. 1978.-N41.-P. 9-15.

366. Leg, S.T. Macrophage T-cell in interaction. I. The uptake by cells of Fc-receptors released from macrophages / S.T. Leg, F. Paraskovas // Cell. Immunol. 1978. -Vol. 40. -№1.-P. 141-153.

367. Lenzini, L. Immune complexes in the spectrum of tuberculosis / L. Lenzini, P. Rotolli, L. Rotolli // Tubercul. 1981. - Vol. 62. - N3. - P. 169-173.

368. Licursi, M. Genetic heterogeneity among bovine leukemia virus genotypes and its relation to humoral responses in hosts / M. Licursi et al. // Virus Research. 2002. - Vol. 86.-N1/2.-P. 101-110.

369. Ma, X. Innate immunity: impact on the adaptive immune response / X. Ma, G. Trinchieri // Adv. Immunol. 2001. - Vol. 79. - P. 55.

370. MacDonald, D.M. Lymphocyte receptors / D.M. MacDonald // Br. J. Derm. 1982. -N107. - Suppl. 23. - P. 69-89.

371. Makinodan, T. Immunologic basis for susceptibility to infection in the aged / T. Makinodan, S. James, T. Inamizu, Chang Mei-Ping // Gerontology (Schweiz). 1984. - Vol. 30. - N5. - P. 279-289.

372. Marchalonis, J. Evolutionary immunobiology and problem of T-cell receptor / J. Marchalonis, G. Warr, L. Ruben // Develop. Сотр. Immunol. 1978. -Vol. 2.-N2.-P. 203-218.

373. Maurice E. Hamilton Allergy and immunology secrets / Под редакцией M. Нагуа, М.Э. Гершвин. Пер. с англ. М.: Изд-во Бином, 2004. 2004. -320 с.

374. Mc Fadden, G. Host-related immunomodulators encoded by poxviruses and herpes viruses / G. Mc Fadden, P.M. Murphy // Curr. Opin. Microbiol. — 2000.-Vol. 3.-P. 371-378.

375. Meiron, R. Humoral and cellular responses in calves experimentally infected wirth bovine leukemia virus (BLV) / R. Meiron et. al. // Vet. immunol. and immunopathol. 1985. - Vol. 9. - P. 105-114.

376. Merle, A. Etat actuel de la lutte contre la tuberkulose bovine Extrait du Belletin de i off / A. Merle//Epizooties. 1955.-Vol. 43.-P. 11-12.

377. Minis, C.A. Viral pathogenesis and immunology / C.A. Minis, D.O. White. Oxford: Blackwell Sci. Publ., 1984. - 300 p.

378. Mitchison, N.A. Induction of immunological paralysis in two zones of dosage /N.A. Mitchison // Proc. Roy. Soc. Biol. 1964. - Vol. 161. - P. 275-292.

379. Mitchell, J. Mechanisms of induction of immunological tolerance. I. Localization of tolerance-inducing antigen / J. Mitchell, G. Nossal // Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. 1966. - Vol. 44. - P. 211-223.

380. Mores, R. Control of bovine tuberculosis in Maloni by the use of BCG vaccination / R. Mores //Vet. Rec. 1972. - Vol. 10. -N15. -P.428-429.

381. Murphy, F.A. Physical heterogeneity of bovine Y-globulins: characterisation of yM and yG-globulins / F.A. Murphy, J.W. Osebold, O. Aalund // Arch. Biophys.- 1965.-N112.-P. 126-136.

382. Nakanjshi, H. Identification of bovine T- and B-lymphocytes in normal peripheral blood, lymph nodes and spleen / H. Nakanjshi, H. Koyama, O. Ka-jikawa, H. Saito // Jap. J. Vet Sci. 1983. - Vol. 45. - №1,- P. 97-102.

383. Nathan, C.F. Current concepts: The macrophage as an effector cell / C.F. Nathan, H.W. Murray, L.A. Coch // N. Engl. J. Med. 1980. - N303. - P. 622-626.

384. Nowacki, W. Identyfikacja limfocytow TIB bydla / W. Nowacki // Weterynaria. 1982. - Vol. XL. -N40. -P. 145-165.

385. Orme, I.M. Immune response to atypical mycobacteria: immunecom-petence of heavily infected mice measured in vitro fails to substantiate immunosuppression data obtained in vitro / I.M. Orme, E.M. Collins // Infect. Immun. — 1984.-Vol. 43.-P. 32-37.

386. Orme, I.M. Cytokine secretion by CD4+ T-lymphocytes acquired in response to Mycobacterium tuberculosis infection / I.M. Orme, A.D. Roberts // J. Immunol. 1993.-Vol. 151.-Nl.-P. 518.

387. Owen, R.D. Erythrocyte antigens and tolerance phenomena / R.D. Owen // Proc. R. Soc. London. Ser. B. 1956. - Vol. 146. - P. 8-18.

388. Pan, J.C. Spectrum of ovine immunoglobulins / J.C. Pan, A.M. Kaplan, R.L. Morter, M.J. Freeman // Proc. Soc. Exptl. Biol. Med. 1968. - Vol. 129. -N3.-P. 867-870.

389. Paul, P. Enumeration of T cells, B cells and monocytes in the peripheral blood of normal and lymphocytotic cattle / P. Paul, D. Senogles, J.D. Mus-coplat // Clin. Experimental Immunol. 1979. - Vol. 39. - N2. - P. 306-316.

390. Paul, W.E. Fundamental immunology / W.E. Paul. — N.-Y.: Lippincott -Raven, 1999.-360 p.

391. Perumal, V.R. Immunological studies of tuberculosis / V.R. Perumal // Indian J. Tubercul. 1981. - Vol. 28. -N2. - P. 58-76.

392. Rabinovich, M. Phagocytis recognition / In: Mononuclear phagocytes ed. by R. Van Furth / M. Rabinovich // Blackwell Scientific Publications. Oxford, 1970.-P. 299-313.

393. Raff, M. T- and B-lymphocytes and immune responses / M. Raff // Nature. 1973. - Vol. 242. -N5392. - P. 19-23.

394. Robbins, J.B. The catabolism of protein antigens in newborn and maturing rabbits / J.B. Robbins, D.V. Eitzman, R.T. Smith // J. Exptl. Med. 1963. -N118.-P. 959-974.

395. Roche, P.W. BCG vaccination against tuberculosis: Past disappointments and future hopes / P.W. Roche, J.A. Triccas, N. Winter // Trends Microbiol.- 1995.-Vol. 3.-N.10.-P. 397-401.

396. Sagata, N. Complete nucleotide sequence of the genome of bovine leukemia virus: its evolutionary relationship to other retroviruses / N. Sagata, T. Yasunaga et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1985. - Vol. 82. - N3. - P. 677681.

397. Samelson, L.E. Expression of genes of the T-cell antigen receptor complex in precursor thymocytes / L.E. Samelson, T. Lindsten // Nature. 1985. -Vol. 315.-N19.-P. 765-768.

398. Schaaf-Lafontains, N. Suppressot T-cells / N. Schaaf-Lafontains, G. Degiovani//Path. Res. Pract. 1981.-N171.-P. 159-172.

399. Shenker, B.J. Immunotoxic effects of mercuric compounds on human lymphocytes and monocytes suppression of T-cell activation / B.J. Shenker, C. Rooney, L. Vitale, J.M. Shapiro // Immunopharmacol. Immunotoxicol. - 1992. -Vol. 14.-N3.-P. 539-553.

400. Shifflet, J. More help required on T and B cells / J. Shifflet // Nature.- 1985. Vol. 316. - N6028. - P. 490.

401. Splitter, G.A. Collaboration of bovine T-lymphocytes and macrophages in T-lymphocyte response to Brucella abortus / G.A. Splitter, K.M. Everlith // Infect, and immunol. 1986. - Vol. 51. -N3. - P. 776-783.

402. Stewart, R.I. Functional immunology for the practitioner: asquired immunity / R.I. Stewart // The S.A. Journal of contining medical education. -1985. Vol. 3. -N9. - P. 105-117.

403. Tizard, J. Veterinary Immunology / J. Tizard. Philadelphia, London, Toronto, 1987.-350 p.

404. Tortolerra, D. Viral subversion or the immune system / D. Tortolerra, B.E. Gewurz, M.H. Furman et al. // Ann. Rev. Immunol. 2000. - Vol. 18. - P. 861-962.

405. Trainin, Z. IgG and IgM antibodies in normal and leukaemic cattle / Z. Trainin et al. // J. Comp. Pathol. 1976. - Vol. 86. - N4. - P. 571-580.

406. Trautwein, G. Immunosystem und immunpathologische reaction des Rindes / G. Trautwein // Der pract. Tierarzt. 1985. - Bd. 66. — Sondernummer. — S. 95-106.

407. Van Furth, R. Current view on the mononuclear phagocyte system / R. Van Furth//Immunobiology. 1982.-Vol. 161.-P. 178-185.

408. Wallington, E. An experiment to challenge the resistance to tuberculosis ib BCG. Vaccinated cattle in Malawi / E. Wallington, D. Ellwood // Br. vet. J. -1972.-Vol. 128.-N2.-P. 541-551.

409. Weiland, E. Frequency of surface immunoglobulin bearing blood lymphocytes in cattle affected with bovine leucosis / E. Weiland, O.C. Straub // Research Vet. Sci. 1975. - Vol. 19.-N1.-P. 100-102.

410. Yoffey, J.M. Lymphatics, Lymph and the Lymphomyeloid Complex / J.M. Yoffey, F.C. Courtice. Academic Press, Inc., New York, 1970.

411. Zembala, M. Inhibitory T cell / M. Zembala // In: Progress in immunology. -Vol. 3. -New-York, 1974. P. 39-355.