Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

О МЕХАНИЗМАХ РАДИОПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ БИОГЕННЫХ АМИНОВ

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "О МЕХАНИЗМАХ РАДИОПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ БИОГЕННЫХ АМИНОВ"



V МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА

И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ'УНИВЕРСИТЕТ;нменн,М. В. ЛОМОНОСОВА

■ V: " Биологический факультет' ч ..'■' • .. ; / ' На правах рукописи '

ЖАМСАРАНО ВА Сэсэгма Дашиевна

О МЕХАНИЗМАХ РАДИО ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ БИОГЕННЫХ АМИНОВ

/ 03.00.02 - биофизика /

Авт.о реферат \1

диссертации на соискание ученой степени . кандидата биологических наук ~ _ *

Москва—1975

МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА и ОРДЕНА ПУДОВОГО КРАСНОГО

ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ _имеаи М.В.ДШОНОСОВА_

БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

На оравах рукописи

ЖАМСАРАНОВА Сэсэгыа Дашиевяа

О МЕХАНИЗМАХ РАЛЯОПРОФМАКТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВШ

БИОГЕННЫХ АМИНОВ (. * )

/ оз.оо.сг - би&^сжа / »

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологически! наук

Москва - 1975

Диссертационная работа дополнена в лаборатория радиационной биофизики (эав.лабораторией профессор Ю.Б.Кудряшов> кафедры биофизика .(зав.кафедрой профессор Б.Н.Тарусов) Биологического факультета Московского Государственного Университета имени Ц.В,Ломоносова•

Научные руководители

доктор биологических наук,

старший научный сотрудник Е.Н.Гончаренко

кандидат биологических наук,

старший научный сотрудник А.С.Соболев

Официальные ошоневта

доктор биологических наук,

профессор В.В.Будшщкая

доктор биологических ааук А.Н.Тарасенко

Ведущее предприятие - Институт химической физика АН СССР. Автореферат разослан ™/<3" Ьгиы&лО. 1976 г.

Защита соотонтся " /чая._ 1976 г.

в /¿Г часов на заседании специализированного физиодого-Оиохи-ыического Ученого совета зоологического отделения Биологического факультета МГУ по адресу: 117234, Цосква £-234, Ленинские гора, ИГУ, Биологический факультет.

С диссертацией шокно ознакомиться в библиотеке факультета.

Ученый секретарь

. Н. С. Александрова

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время известно большое количество веществ, обладавших радиодрофилактнческой эффективностью. Существует ряд гипотез, объясняющих механизм действия радиопротекторов непосредственной защитой биосубстрата или действие» протектора на первичные продукты радиолиза. Работы Длександера, Бака (С1£е.капо1ег, е£ а£. , 1955). Эмануэля (1963). БурлаковоЙ в Эмануэля (1960), Тарусова (1962) об антирадикальном а антиокислительном механизме действия радиопротекторов, Эльдьярна и Пала (^Ес^игл , Р/к£, 1956) о способности радиопротекторов образовывать смешанные дисульфиды а др. свидетельствуют о- важной роли непосредственного взаимодействия с биосубстратом в механизме защити от лучевого поражения. Однако в последнее время все большее признавав получает представление, объясняющее механизм действия радиопротекторов теми биохимическими изменениями, которые возникают в условиях противолучевой защиты. Так, Бак и Алексаадер {басу. 0.£ехалЫег ( 1954) предложили гипотезу "биохимического шока". Работами Романцева и др. (1963 а,б, Романдев, Блохина. 1966) показано, что радиопротек-торн способны переводить радиочувствительные биохимические системы (контрольные механизмы биосинтеза ДНК, ядерное фоофорилирование, окислительное фоофорилирование в митохондриях и др.) в состояние повышенной радиорезистентности. Граевский (1966, 1969) выдвинул гипотезу о важной роли в радиочувствительности организмов эндогенных тиолов.

Согласно представление Кудрятова а Гончаревко (1966-1969) в результате введения животным радиопрофилантических веществ в период их наибольшей противолучевой активности возникает фон

повышенной paдиорезистентвосги, создаваемый, по мнение авторов» за счет изменения уровня эндогенных биологически аитавных веществ: уменьшения уровня радиосенсябшшза торов лидидной природа и увеличения содержания эвдогенннх радиопротекторов, в частности, серотонина, гистамина, дофамина.

Кан известно! эти биогенные амина при введении их животным обладает выраженным радиопрофилактичесюш эффектом Herve,

1953; Grag eta£t 1952; 3acqt 1954; Prasad, von. Woert , 1954). Однако механизм их противолучевой защиты до сих вор оста- ' ется невыясненным. Серотоник, дофамав, гнетамин обладают широким спектром физиологического действия, в частности, вазокоястриктор-ными свойствами. Многие авторы объясняли защиту серотовином, дофамином и гисташвоы "фармакологической" гипоксией. Однако за последнее десятилетие появились многочисленные факты, свидетельствующие о наличии "клеточной*1 компоненты в радаозащитном аффекте аминов. В литературе имеется большое количество данных о защите таких объектов и систем, где не может лроявиться фармакологическое действие биогенных аминов. Наибольшее количество работ относится к серо тонину. Показано, что серотонан защищает VitiCL fQ.&CL { loseron. at а£, I9&4), хромосомы в культуре тканей человека (Дубинин, Дубинина, 1964), планарии Я)аде.а/а tigr/псц ¿а.диа:г-do- Figиегаз, V/£&}£oioS-P;efont\ 1967) и др. Обнаружена защита гистаминок дрожжевых клеток (Бриеднс, 1971), эритроцитов

В связи с этим целью данной работы явилось изучение механизмов "клеточной" защити биогенных аминов, причем в работе основное внимание уделено влиянию биогенннх шипов яа эндогенные радио-

сенсибилизатора - перекиси дияядов и ва образование их в процессе переписного окдсления.

Материал и метода исследования

В экспериментах бнля использована белые беспородные крыса, крысы ливаи Бистар, а также эритроциты человека. Ойлучение проводили на рентгеновской установке РШ-1Х (180 кв. 15 ыа. без фильтров, мощность дозе) 900 р/мин при облучении растворов ^-каротина и 2 кр/ыин при облучении эритроцитов) биологического факультета МГУ.

В опытах на животных и в раде модельных опытов были использована серотонш креатиняясульфат в дозе 60 мг/мг и 5-I0"4 М; гпстаыин солянокислые - 130 мг/кг а М, дофамин соляно-

кислый - 90 кг/кг а 5-1СГ4 М, соответственно.

Степень радиационного поражения эритроцитов изучали методом кислотных аритрограмм (Гнтельзоя, Терсков, 1959) на установке с автоматической регистрацией процесса гемолиза (Леев и др., 1970). В качестве модели продуктов окисления липидов использовали окисленную током воздуха в течение 24 часов олеиновую кислоту (при £ - 60°С. в темнота)*

В опытах по изучению радкодиза Jt> -каротина в растворах окисленной олеиновой кислота (ООК), а также для исследования его окисления без облучения р -каротин. ООК и препараты растворяла в смеси: подкисленный бутаиод - бензол.

Содержание серо тонина в тканях и растворах с ООК определяли по методу Богданского и др. ( Hbogola.nSkietоЕt 1956), содержание гистанина - по методу, описанному Сдвнфрендсы (1965); до-

фамин - по Карлсону ( Cdrtson , 1963, 1965). Перфузию сосудов тонкой кашки крыс раствором Рингера (для теплокровных) проводили по методу Дембека и др. ( Le/n6e.(ik eioft хэб5).

Гидроперекиси линолевой кислоты (ШЛК) получали по методу Кристоферсена (Christothers ел. г 1968). Уровень диеновых коньюгатов в гидроперекисях жирных кислот исследовали спектро-фотометрически С 0'Вг/еп% 1969).

Разделение продуктов взаимодействия серотонина и дофамина с продуктами окисления олеиновой кислоты проводили методом тонкослойной Хроматография , H.a.£deve^t I96I; щталь, 1965).

Уровень продуктов перекисного окисления лшшдов (ЛЬО) тканей в макросом определяли полярографическим методом (Кудряюов, 1966; Гончаренко и др., 1963), а гемолитическую активность ЛПО -методом кислотных эритрограмм СГительзон. Тероков, 1959), в модификации Кудряшова и Какушишой (1959), Фракцию макросом слизистой тонкой кишки крнс получала методом градиентного центрифугирования до Хайни и Збарскому (Hynie , Z, Sons А с , 1970), Все процедуры проводили при (+2)-(+4°) С- Содержание белка в микросомах определяли по Лоури и др., ( Lokir^t. et а£ t 1951). Исследование процессов HAJffittj-зависимого и аскорбат-зависимого процессов перекисного окисления лшшдов проводилось по Александровой (1971) и Владимирову и Арчакову (1972), Для отщепления окисленных жирных кислот от фоофолипидов использовали фоофолипазу А2 (КФ 3.1.4) К Long. , Penny. , 1967 в модификации Wcuy., 7Пс Cay, , 1968), НАДФН^-Цитохром с - редуктазную активность в микросомах слизистой тонкой кишки крыс определяли по восстановлению феррицитохроыа с I SoOocclscl et a£t 1967) в присутствии НАДОНу-генерирущеа, системы (Владимиров, Арчаков, 1972).

Супероксиддиомутазу (эритрокупреин) выделяли из бачьих эритроцитов С \Afeseret а£, 1971). В работе бшш использованы две модельные система генерации супероксидвого анион-радияала: ксантиноксидазаксавтин ( Bea.ucha.mp, Гг/Ыоу/сА . 1971) г феназинметосульфат - НАДН2 ( М'зЛ ¡кг/пс е1 а.£ , 1972). Генерацию супероксидного аниов-радидала оценивали по восстановлению нлтросинего тетразолия по Бошану и Фридовичу.(ЗеоисЛо/п^ РпсСоу/ск , 1971).

Все данные обрабатывали статистически, достоверность оценивали до критерии Стьюдента.

Результаты исследования и обсуждение

£55ЙИйв_щ »ритдодитдх

Учитывая противоречивость представлений о механизме защиты биогенными аминами, ма попытались подучить собственные данные о возможности радвопрофидактического действия аминов на клеточном уровне.

*Бами была исследована способность серотонина, дофамина и гкстамива оказывать радиопрофилактическое действие на эритроцитах человека. Время достижения 50^-ного гемолиза нормальных, необдуманных эритроцитов составляло в условиях данного оаыта 4,1±0,1 (эритроциты, отмытые от инкубационной среды) и 4*210,1 (веотмытыв эритроциты) кия.Отмыванне эритроцитов не приводило к сокращению времени 50£-ного гемолиза в случае инкубации их о гкстаминок и несколько сокращало время гемолиза после отмывания инкубационной среда, содержащей серотонин и дофамин.

Действие ионизирутадей радиации приводило к уменьшении устойчивости эритроцитов к действию гемолигика (врема достижения 50|2-но-го гемолиза отмытых эритроцитов 2,5±0,I мин в неотмытых эритроцитов 2,7±0,1 шш), & присутствие биогенных аминов в момент облучения в инкубационной среде увеличивало время 50^-ного гемолиза (в присутствии серотояива 3,2±0,1 ыив. р ^ 0,001; дофамина -3,1±0,1 мин, р L 0,05; гистамина - 3,3 ± 0,1 мин, р 0,001),

Полученные давние свидетельствует о том, что серотонан, дофамин и гистамия оказывают радиозапштное действие на эритроцитах человека. Отмывание эритроцитов от содержащихся в инкубационной среде радиопротекторов перед облучением или не меняет (для серотонина 3,3±0,1 шш р <0,001), или несколько снижает (для гистамина 3,0±0,1 мин р-^ 0.01 в дофамина 2,8±0,1 мин р<0,05) Эффект защиты, однако не приводит к полному его исчезновении.

Несмотря на имеющиеся данные о защите биогенными аминами объектов и систем, на которых не может проявиться вазоковстршс-торный эффект, некоторые авторы полагают, что на уровне организма раддопрофилактическое действие амийов ве связано с зашитой клеток, т.к. радиозащитное действие аминов может быть снято фармакологическими антагонистами ( Ю/ Siefan-o, j964i Жеребчеако, 1971).

Наибольшее количество исследования с применением фармакологических антагонистов проведено с серотоняном ( усхлЫ&л Зг&лМ., ße&ött, 1958: 1ап$ел.с£ог//е£а£ 1959- Уал alen. Bre/zA,

Haas, 1961). Согласно данным ваа дан Брейка и Хаас ( vün. Ыеп. ЬгелА, //aas,

1961) антагонист серотонина В0&-148 снимал радио защитны Я эффект, ее пеняя уровень серотонина в исследованных тканях. Из 9тих данных бил сделан вввод о той. что тканевой серотовин не влияет на радиочувствительность организма. Однако в этих опытах не учитывался возраставший после вндзления серогонина уровень амина в крови ( 0<хгга.И//ь/ , Уа.£ге££/\ Х965>, по»тому можно полагать, что измеренное содерканле серотонина представляло сушу содерканяя этого анина в тканях и крови.

В наших опытах с диэтяламидом лизвргиновой кислоты (ДДК) -фармакологическими антаговнстои серотонина, снимающим его радно-защитиое действие (ш Ыеа ВгепА , 1959; уапсйел.

&ге/г£ г 1961), мы асследовали уровень серотонина в

предварительно перфувированной ткани. Исследование проводили на тонкой кишке - органе, активно участвующем в обмене серотонина и защищаемом этим амином от.действия ионизирующей радиации ( 7/?си&п е/а£ 1963; уиЛа* &огег # 19в9; овакимов я др., 1970). Введение серотонина в дозе 20 иг/кг, вызывающей радиозащитный эффект, увеличивало по сравнению с нормой уровень се^ ротоЕива в тонкой кишка более* чем в 2 раза. Этот подъем значительно подавлялся предварительной инъекцией ДЛК (20 мкг).

Сравнение наших данных с литературными позволяет предположить. что снятие радиозаивтного действия амина предварительный введением его антагонистов может быть связано как со снижением эффекта диркуляторяой гипоксии, так в с уменьшением уровня авжк генного амина в тканях.

Таким образом, на основании наших опытов, а также литературных денных можно предположить, что защитное действие биогенных аминов обусловлено на только системным ответом целостного орта-

низма млекопитающих (вазоконстрикцией), но осуществляется непосредственно а не клеточном уровне.

3. Изгч£ще_влизадя_биО£в£Нйх_амяао£ на^уровеаь_цводув-дерз^вдндго ^кисдедиз дирщо^ одца^ах _ и

Исследования, проведенные в лаборатория радиационной биофизики показали, что после введения различных раднопротекторов в тканях животных возрастает уровень серотонина, дофамина, гис-тамяна я уменьшается содержание продуктов оерекисяого окисления лишдов, обладающих радиосенсибвлизирующим действием (Кудрятов, Гончаренко, 1969). Многочисленные эксперименты указывают на связь комплекса этих изменений с проявлением защитного действия радиопротекторов. Ранее указывалось, что продукты перекисного окисления лилидов оказывают радиосенсибидизируюдае действие на животных и на ряде модельных систем (Деев, 1970; Саркисян, 1970; Вилшан, 1969; Лабзина, 1969; Г)эаевская, 1970) и уменьшение уровня эндогенных дипидных радиосенсибилизаторов - ЛП0 влечет за собой увеличение устойчивости организма в действию ионизирующей радиации (Кудрятов, Гончаренко, 1969; Кудрятов, 1972). Было доказано, что введение радиопротекторов, относящихся к различным классам химических соединений, приводит к уменьшению содержания продуктов окисления высших ненасыщенных жирных кислот. Мы предположили, что возможным механизмом радиозащитвого действия биогенных аминов может бить влияние их на уровень ЛПО.

Проведенные эксперименты показали, что введение радиопро-фидектвческях доз биогенных аминов вызывает уменьшение геыолнти-

ческой активности и содержания продуктов перекисного окисления липидов через 15 иин после введения препаратов, то есть в период максимальной радиорезистентности. Спустя 4,6 часов после инъекции серотонива активность и содержание ЛПО возвращались к норке. В эти сроки, как известно, радиопрофилактический эффект серотонина не обнаруживается.

Полученные данные позволили предположить, что снижение уровня аминов, например, серотонина может повлечь за собой возрастание содержания ЛПО в тканях. Снижение концентрации аминов в тканях можно достичь ингибированием ферментов их образования или катаболизма. Серотовин представлял особый интерес как наиболее активная амин и хороню известен ингибитор метаболизма серото-нана-л-хлорфенилаланин (л. -ХФА). специфически снижающий уровень его в тканях. Показано, что/1-хдорфенилаланин (^^££¿£/£/",1967) ингибирует тридтофангидроксилазу, катализирующую образование 5-овситриятофана. Превращение триптофана в 5-окситриптофан-лими-таруший этап биосинтеза серотонина ( (та.гга£Ь'а.( , 1Э65). Из литературных (/£ое, Ц/елАТ/п^/г., 1968) и наших данных следует, что через 48 часов после введения /1-ХФА наблюдавт-ся значительное снижение уровня серотонина в тканях крыс. Нами было показано, что уменьшение содержания серотонина приводит к возрастании уровня продуктов перекисного окисления липидов. причем особенно значительному в тонкой кишке и семенниках (на 32% и ЗС££, соответственно, по сравнению с контролем). Подученные данные свидетельствуют о способности эндогенного серотонина влиять на уровень ЛПО в органах и тканях животных*

Таким образом, одним из механизмов радиопрофилактического действия биогенных аминов может быть уменьшение содержания

эндогенных шедши радиосенсибшшэаторов в тканях животных.

деде^^щгд окзззедаа д додельлщ

В связи с полученными данными ло влиянию биогенных аминов на' уровень продуктов перекисного окисления липядов в тканях представляло интерес выяснить, чем обусловлен этот эффект. Для изучения механизма влияния серотоника, дофамина и гисташша на уровень ЛПО был проведен ряд модельных опытов, -

Как уже отмечалось, ЛПО обладают радиосенсибилизирующим эффектом на животных и на ряде объектов в систем. В частности окисленная олеиновая кислота (ООК) — модель липидных радиосенси-бидизаторов (Кудрятов, 1966) усиливает разрушение ^-каротина при действии радиации (Бадтбарэдас, 1967). Нами также обнаружено значительное разрушение ^-каротина в растворах ООК при действии ионизирующей радиации. Добавление в эти раствора серотопина и дофамина в концентрации 5-КГ4 и существенно снижало разрушающее действие ООК нар -каротин. Гистамин в такой же концентрации подобного эффекта не вызывал.

Ори инкубации с ООК ^-каротин окислялся и без облучения. И в этом случае ^-каротин разрушался в меньшей степени, если в раствор добавляли серотонин и дофамин. М). Гистаиин в

эквимолярной концентрации не влиял на разрушение £ -каротина. Это позволило предположить, что защита серотонином и дофамином

-каротина от разрушающего действия ООК может быть связана о непосредственным влиянием аминов на перекиси.

Действительно, как показали наш опыты, инкубация серотовина

или дофамина с 00К проводила к уменьшение уровня перекисей, одре-делнемого полярографическим методом и методом иодометрического титрования* Гистамин не обладал подобным действием. О возможности яеяосредствеавого взаимодействия амидов с продуктами переписного окисления лирядов свидетельствует и.тот факт, что уровень серотонина и дофамина в инкубационной среде снижался. Поскольку нами обнаружена убыль ашшов и ЛИО после инкубации дофамина и серотонина с ООН. представляло интерес разделить продукты их взаимодействия. Тонкослойная хроматография солянокислого экстракта реакционной смеси позволила обнаружить 8 продуктов индодьяой природы, образующихся ори взаимодействии серотонина с ООК в 3 продукта - при инкубации дофамина с- 00К.

Можно было бы предположить, что уменьшение перекисей в наших опытах связано с разрывом углеродного скелета жирной кислота, которое наблюдается ори разрушении перекисей в частности под действием ионов железа или геминового железа ( 0/Ь/Уел, ¿¡И£е . 1969). Разрушение углеродного скелета легко обнаружить по изменению уровня диеновых конъюгатов ( О ^/5гь 1969). Опыты с гидроперекисями ланолевой кислоты показали, что количество диеновых конъюгатов не меняется во времени под влиянием дофамина а серотонина, поэтому можно полагать, что уменьшение уровня перекисей в ООК не связано с разрывом углеродной цепи самой жирной кислоты.

Известно, что некоторые амины образуют конъюгаты с органическими перекисями (Исио^^ 1969). Ыы попытались выяснить яе образупт ли серотониа и дофамин кояыогатов с ООК. Нами не было обнаружено достоверного изменения оптического поглощения в

области, характерной для серотошша и дофамина, что позволяет, по-видимому, всклочить образование коаьвгатов. Таким образом, уменьшение перекисей в ваших опытах я одновременная убыль аминов не связаны вн с разрывом углеродного скелета жирной кио* лота, ви с образованием кояьпгатов биогенных аминов с 00R,

Результаты вышеизложенных экспериментов, проведенных на моделях, позволяют заключить, что одним из механизмов влияния евро-то ни на и дофамина на уровень ЛПО является непосредственное взаимодействие с продуктами перекисного окисления липидов, в результате чего уменьшается их уровень в системе.

5. i] с£ладов а ня е_вл1ЩБля_б и 0£в£ ан

дадядод то^щоы хров£е

Обнаружив снижение биогенными аминами уровня ЛПО в модельных системах необходимо было выяснить, имеет ли место данный эффект на субклеточном уровне. Кроме того, важно было исследовать. влияют ли биогенные амины на ншщиирование перекисного окисления. Нами исследовалась лидопероксияапвя в микросомах слизистой тонкой гкрри крыс, поскольку в этой радиочувствительной ткани ранее было обнаружено наиболее выраженное снижение ЛПО при введении животным биогенных аминов. Из вашх данных следует, что 10 мин инкубация макросом вызывает увеличение содержания ЛПО в несколько, раз как в Н&ДЗ&^-завясимой, так я в аскорбат-зависимой системах, по сравнению о контролем (без инкубации) . Добавление в инкубационную среду серотонина и дофамина (5-ICP* Ю приводило к значительному снижению образования ЛПО. Гистамин (5*1СГ^ Ы) обладал меньшим аффектом.

Результаты этих опытов свидетельствуют о той, что и на субклеточном уровне биогенные амины уменьшают содержание продуктов лерекнсного окисления ненасыщенных парных кислот. Возможно, снижение образования перекисей связано с прямым взаимодействием с перекисями лшшдов исследуемых биогенных аминов, подобно тому, что наблюдается в модельных опытах. Однако, по-видимому, одним непосредственным взаимодействием с перекисями ненасыщенных жирных кислот не исчерпывается эффект, по крайней мере, серотонина в случае ферментативной систему лероксидации, поскольку известно, что серотонин тормозит окисление НАДй^ микросомами иечени ( 1964). Показано, что реакции перекио-

ного окисления лшшдов осуществляются в НЛДОН2-завяснмой цепи транспорта электронов ( Оггелш£ 1964; С/ПС/ГО. &а£,

1965; Владимиров, Арчаков, 1972). Первым компонентом этой цепи является НАДФИ^ специфичный флавопротеиКШШз-цитохром-с-редук-таза. Поэтому важно было исследовать влияние биогенных аминов на активность этого фермента. Нами обнаружено уменьшение под влиянием серотонена (5.1СГ4 М) ЕАДьНд-цитохром-о-редуктазной активности в микросомах слизистой тонкой кишки крыс; в отличие -от серотонина, гистамин в аквимоллрной концентрации не влиял на скорость восстановления цитохрома с. Исследовать влияние дофамина на НА Д№2-цитохроы-с-редуктаэную активность оказалось невозможным, поскольку дофамин обладал способностью непосредственно восстанавливать цитохром с.

Недавние исследования Оста, Педерсоаа и др. авторов ( Реа[ег&о/1, Q.¿/st , Х972 а, в) показали, что ферментативное лзрекисное окисление липидов связано с образованием супероксидного анион-радикала и именно НАДФВ -цитохром о-редук-

таза генерирует этот анион-радикал. Наш опыт на мякросомах слизистой тонкой кишки крыс подтверждают факт генерирования О^- * Об образовании супероксидного анион-радикала судили но восстановлению аитросинего тетразоляя и по иигибарованшо этого процесса супероксиддисыутазо2 . Однако пероксидация лшшдов не обусловлена непосредственным действием *02- на мембранные липиды, поскольку добавление супероксиддисыутазы к ыикросомам слизистой тонкой кишки в наших опытах и к микросомам печени ( Гоа^ Т1сш~1ол е£ а£, 1973) не ингибировало НАДШ^-зависи-мое перекисвое окисление. Полагают, что липопероксидация связана с образованием из супероксидного анион-радикала активных продуктов: синглетного кислорода (102). возникающего в результате дисмуташш 'Од" ( Ре.с£&гЗО/\ Q.t/st ь 1973). а такие радикалов Ш* образующихся при взаимодействии и (или) ионов железа с Н2о2 ( Ропд. /Сио-1ап ейа£, 1973).

В связи с полученными данными важно было исследовать не связано ли подавление ферментативного переокисления аминами с уменьшением концентрации супероксидного анион-радикала в инкубационной среде. Были использованы две модельные системы генерации радикала '02~: ксантиноксидаза-ксантин. феназянметосулъфат-НАД^. Добавление в среду серо тонина и дофашша в тех хэ коек центрациях, в которых они ингибировада пероксидацию лшшдов микросом тормозило накопление фэрыазана и. соответственно, генерации супероксидного анион-радикала. Гистамин не влиял на уровень 'О^ Обнаруженный эффект серотонина и дофамина, по-видимому, нельзя объяснить ингибированием ксантиноксидаэы, так как и при неферментативной генерации *02~ действие этих аминов

имело качественно сходна! характер.

На основании получениях результатов можно предположить, что перехват серотоником в дофамином супароксидного анион-радикала является одним из механизмов ингибированиа этими аминами переписного окисления липпдов в микросомах. Объяснение влияния гнетами на на уровень перекисей липидов в микросомах представляется затруднительным. Можно лишь предположить, что торможение пероксидации гистамином неспецифическое, за счет "монополизации*' НАДШ^-зависимой цепи транспорта электронов при его гидро-ксилировании.

Экспериментальный материал, приведенный в данной работе дает дополнительные аргументы в пользу "клеточной" компоненты в радиозащитном эффекте биогенных аминов. Исследуя конкретные механизмы радиопрофилактического действия биогенных аминов удалось показать, что одним из механизмов клеточной защиты может быть уменьшение уровня продуктов перекасного окисления липидов в органах и тканях животных, что ведет к увеличению устойчивости организма к действию ионизирующей радиации (Кудряшов, Гончаренко, 1969). Этот аффект, по-видимому, с одной стороны, связан с непосредственным взаимодействием аминов с перекисями липидов. С другой стороны, биогенные амины ингнбируют процесс вероксидации липидов и одной из причин этого действия может быть торможение инициирования перекисного окисления.

выводы

1. Биогенные амина - сэрогониа, дофамин, гисташш защищают изолированные клетки (эритроциты человека), на которых не может проявиться "фармакологическое" действие аминов.

2. Фармакологический антагонист серотонина (диэтиламид лизе ргиновой кислоты), снимащий его радио защитное действие, препятствует накоплению серотонина в тканях после введения се-ротонина-креатининсульфата крысам.

3. 5 период наибольшей радиоустойчявоста животных, вызванной введением биогенных аминов в радиозащитных дозах, уменьшается содержание и активность продуктов перекисного окисления дипидов в тканях.

4. Уменьшение содержании серотонина в тканях в результате введения я-ХФА-ингибитора биосинтеза серотонина ведет к увеличению уровня ЛПО.

5. Серотовия в дофамин в опытах ¿а м/гс защищают ^З-каро-тин от действия ионизирующей радиации в растворах ООН, а также от разрушающего действия окисленной олеиновой кислоты без облучения.

6. Обнаружено уменьшение уровне продуктов перекисного окисления и убыль аминов в реакционной смеси после инкубации серо-. тонина и дофамина с ООН. С помощью тонкослойной хроматографии удалось выявить продукте их взаимодействуя.

7. Биогенные амина препятствуют накоплению продуктов окио-ления липидов в процессе НАДФ&^-зависимого я аско рбат-зависимого

перекисного окисления, протекающего в микро сомах слизистой тонкой кишки крае*

8, Показано, что серотовин ингибирует НАДй^-цитохром-с-ре-дуктазу, первый фермент в цепи НАДШ^-зависимого трансаорта электронов.

л

9, Обнаружено, что микросомы слизистой тонкой кишки крас генерируют супероксидаий анион-радикал. Показано, что в модельных системах генерации супероксидного анион-радикала (ксаатив-оксидаза-ксантин, феаазиныетосульфвт-НАД32) серотовин и дофамин уменьшают концентрации 1

ДО, На основании проведенных опытов предполагается, что радиозащитное действие биогенных аминов может быть связано с их влиянием на уровень эндогенных липидных радиосенсибилизаторов дав за счет непосредственного их взаимодеиствия с перекисями ненасыщенных жирных кислот, так и в результате торможения инициирования перекисного окисления липидов.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1, Роль эндогенных веществ в создании фона повышенной радиорезистентности. Сообщение 3. О роли эндогенного серотонина, "Радиобиология", 1974, т.14, вып.1, стр.78.

2. Роль эндогенных веществ в создании фона повышенной радиорезистентности. Сообщение 6. Изучение влияния серогонана

на процесс образования продуктов окисления липидов в микросомах слизистой тонкой кишки. "Радиобиология" 1974. Т.14, вып.З, стр.353,

3. Роль эндогенных веществ в создании фона повышенной радиорезистентности. Сообщение 7. Исследование влияния дофамина и гисташша на лшшдные радиосенсибилизаторы. "Радиобиология" 1975, т. /¿Г , выл. & , етр.б^?.

4. Исследование влияния редиозашитных биогенных аминов на перекисное окисление липидов в микросомах слизистой тонкой кишки крыс. ДАН СССР, 1975, ч*222. № 2 , стр.23(3

5. Поэтапный отчет по теме хоз.договора * 87 с Институтом Биофизики АН СССР: "Биохимические механизмы метаболической перестройки, модифицирующей лучевое поражение" за 1971-1972 гг.

6. То же за 1973-1974 гг.

7. О механизмах радиопрофилактического действия серотони-на. Б сборнике: "О механизмах природной и модифицированной радиочувствительности организмов к поражающему действию ионизирующей радиации". Ш.. Изд-во ЫГУ, 1974, стр.34 .

8; 0 механизмах радиоэащитного действия серотонина* Тезисы 1-й Радиобиологической конференции социалистических стран. Шпиндлерув Млна-Бедржихов (ЧССР), 1974. стр.3/6.

3ак>234

Тир.200

ШИ

ИЗИЭСХ.