Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Нуклеазные активности антител и лактоферрина молока человека

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Канышкова, Татьяна Геннадьевна

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8 ЗАЩИТНЫЕ ФАКТОРЫ МОЛОКА ЧЕЛОВЕКА

1.1. Клетки молока

1.2. Гормоны и факторы роста

1.3. Олигосахариды, липиды и жирные кислоты

1.4. Нуклеиновые кислоты

1.5. Основные защитные факторы молока белковой природы

1.5.1. а-Лактальбумин

1.5.2. Лизоцим

1.5.3. Интерфероны

1.5.4. Комплемент

1.5.5. Лактоферрин и иммуноглобулины - мажорные защитные белки молока

1.6. Лактоферрин 16 1.6.1. Биологические функции лактоферрина

1.7. Антитела 22 1.7.1. Биологические функции антител молока

1.8. Каталитические антитела

1.8.1. Природные абзимы при аутоиммунных патологиях

1.8.2. Природные абзимы с протеазной активностью

1.8.3. Природные абзимы, катализирующие гидролиз нуклеиновых кислот

1.8.4. Исследования структуры активного центра ДНК-гидролизующих антител

1.8.5. Природные абзимы молока человека

1.8.6. Роль природных абзимов в организме

1.8.7. Возможные причины генерации природных абзимов

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ

2.2. МЕТОДЫ

2.2.1. Выделение иммуноглобулинов из человеческого молока

2.2.2. "Кислотный шок" препаратов антител

2.2.3. Получение фрагментов АТ

2.2.3.1. Получение и очистка Р(аЬ)г-фрагмента ^О

2.2.3.2. Получение и очистка РаЬ-фрагмента 1«(}

2.2.3.3. Получение и очистка РаЬ-фрагмента з^А

2.2.3.4. Разделение субъединиц антител на ДНК-целлюлозе

2.2.4. Выделение ЛФ из молока

2.2.5. Получение Ре3+-ЛФ

2.2.6. Ограниченный протеолиз ЛФ трипсином

2.2.7. Ограниченный протеолиз ЛФ бромцианом

2.2.8. Анализ сродства АТ и ЛФ к ДНК с помощью аффинной хроматографии белков 47 на ДНК-целлюлозе

2.2.9. Электрофоретический анализ белков

2.2.10. Электрофоретический анализ белков методом двумерного электрофореза в 48 ПААГ

2.2.11. Получение и очистка 5'-[ Р]-меченых олигонуклеотидов

2.2.12. Получение производных олигонуклеотидов

2.2.12.1. Получение 2',3'-диальдегидного производного олигонуклеотидов

2.2.12.2. Получение 4-диметиламинопиридиниевого производного олигонуклеотидов

2.2.13. Модификация АТ и ЛФ химически активными производными 50 олигонуклеотидов

2.2.13.1. Модификация белков 2',3'-диальдегидным производным олигонуклеотидов

2.2.13.2. Модификация белков 4-диметиламинопиридиниевым производным 50 олигонуклеотидов

2.2.14. Методы определения нуклеазной активности антител и лактоферрина

2.2.14.1. Определение активности АТ и ЛФ в реакции гидролиза ДНК фага X и ДНК 51 плазмид рВ11-322, рВЯ-327 и риС

2.2.14.2. Определение активности АТ и ЛФ в реакции гидролиза олигонуклеотидов

2.2.14.3. Гидролиз сСМР

2.2.14.4. Гидролиз т уНго транскриптов тРНК препаратами антител

2.2.15. Определение кинетических параметров реакции гидролиза

2.2.16. Тестирование ДНК- и РНК-гидролизующей активности белков гп нйи

2.2.17. Спектрофлуориметрическое определение сродства ЛФ к ДНК

2.2.18. Определение сродства ОМ к ЛФ методом ретардации в ПААГ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Выделение иммуноглобулинов из молока

3.1.1. Гель-фильтрация AT в условиях "кислотного шока"

3.1.2. Взаимодействие антител молока с ДНК-целлюлозой

3.2. Проверка эффективности схемы выделения НК-гидролизующих абзимов

3.3. Взаимодействие абзимов с аффинными сорбентами

3.4. Локализация НК-связывающего/НК-гидролизующего центра антител

3.4.1. Каталитическая активность Fab-фрагментов IgG и slgA

3.4.2. Аффинная модификация антител с помощью реакционноспособных аналогов 77 олигонуклеотидов

3.4.3. Каталитическая функция легкой цепи антител

3.4.4. Анализ ДНК- и РНК-гидролизующей активности антител in situ

3.4.5. Определение типа легких цепей ДНК- и РНК-гидролизующих абзимов молока

3.5. Субстратная специфичность реакции гидролиза ДНК и РНК с помощью абзимов

3.6. ДНК-гидролизующая активность абзимов

3.6.1. Зависимость ДНК-гидролизующей активности AT от рН

3.6.2. Зависимость активности абзимов от ионов двухвалентных металлов

3.7. РНК-гидролизующая активность абзимов

3.8. Кинетические характеристики реакции гидролиза олигонуклеотидов с помощью 95 абзимов

3.9. Нуклеазы молока неиммуноглобулиновой природы

3.10. Выделение лактоферрина 103 3.10.1. Аффинная хроматография ЛФ на Blue Sepharose

3.11. Взаимодействие ЛФ с ДНК-целлюлозой

3.12. "Кислотный шок" ЛФ

3.13. Тестирование активности ЛФ in situ

3.14. ДНК-гидролизующая активность ЛФ

3.15. Локазизация ДНК- и РНК-связывающих центров ЛФ

3.16. Определение сродства ЛФ к олигонуклеотидам

3.17. Взаимодействие ON-связывающих центров ЛФ с некоторыми полианионами

3.18. Кинетические характеристики реакции гидролиза олигонуклеотидов с помощью 122 ЛФ

3.19. Активация ДНК-гидролизующей функции ЛФ под действием низкомолекулярных лигандов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Нуклеазные активности антител и лактоферрина молока человека"

Иммунная система высших организмов играет важнейшую роль в их защите от патогенного влияния окружающей среды. Центральную роль в этом процессе выполняют антитела, основной функцией которых является взаимодействие со специфическими антигенами, приводящее к нейтрализации токсинов, чужеродных микроорганизмов и т. д. Однако исследования последних десятилетий привели к открытию новой функции иммуноглобулинов - их способности катализировать большое число различных химических реакций. Теоретическая основа данного явления была заложена еще Л. Полингом в 1948 г., однако для практического подтверждения его гипотезы потребовалось не одно десятилетие. В настоящее время абзимология — область биохимии, изучающая каталитические антитела, является интенсивно развивающимся направлением науки, а число известных примеров химических превращений, катализируемых абзимами (каталитическими антителами), приближается к ста. Субстратная специфичность абзимов в ряде случаев выше, чем ферментов, описаны примеры каталитических антител, которые способны катализировать химические реакции с эффективностью близкой к эффективности обычных ферментов, катализирующих аналогичные реакции. Более того, существуют примеры получения абзимов, для которых нет природных ферментативных аналогов. В связи с этим, дизайн антител с заданной каталитической специфичностью имеет огромный спектр возможностей в биотехнологии и медицине.

Новые перспективы в области абзимологии возникли с открытием в 1989 году природных каталитических антител. За последнее десятилетие в литературе были описаны природные абзимы, гидролизующие пептиды, белки и нуклеиновые кислоты. Такие антитела присутствуют в значительных количествах у пациентов, страдающих аутоиммунными патологиями: астмой, системной красной волчанкой, полиартритом, ревматоидным артритом, аутоиммунным тиреоидитом, рассеянным склерозом; а также гепатитом, лейкемией и ВИЧ - заболеваниями, сопровождающимися тяжелыми поражениями иммунной системы. Индукцию абзимов связывают с аутоиммунными процессами (т.е. с механизмами индукции антител к собственным антигенам).

До недавнего времени возможность существования каталитических антител у человека в отсутствие каких-либо аутоиммунных заболеваний вызывала большие сомнения ввиду отсутствия явных факторов иммунизации (или аутоиммунизации). Согласно классическим представлениям иммунологии, наличие таких факторов является обязательным условием появления специфических антител. Однако, уже в 1991 году были опубликованы первые сообщения о существовании антител с протеинкиназной активностью в молоке здоровых по медицинским показаниям рожениц, а недавно были описаны абзимы молока, гидролизующие нуклеозидтри-, ди- и монофосфаты.

Полученные данные поставили ряд новых вопросов о механизмах функционирования иммунной системы человека. В принципе, можно найти некоторое сходство состояний организма при аутоиммунном процессе и организма женщин в период беременности и лактации. Однако же, в отличие от особого иммунного статуса женщин в период беременности и лактации, истинные аутоиммунные процессы характеризуются хроническим течением и в настоящее время практически не поддаются полному излечению. В связи с этим, исследования, связанные с изучением свойств антител молока человека, безусловно являются актуальными. Развитие подобных работ может привести не только к нахождению новых путей регуляции жизнедеятельности клеток при различных заболеваниях, но и получению новых лекарственных средств.

Целью настоящей работы являлось исследование антител, способных гидролизовать нуклеиновые кислоты, и белков молока человека неиммуноглобулиновой природы с нуклеазной активностью. В ходе ее выполнения впервые были выделены и охарактеризованы ДНК- и РНК-гидролизующие ^О и э^А молока человека, а так же доказано, что каталитическая активность является их собственным свойством. Проведен поиск и охарактеризованы белки молока, гидролизующие нуклеиновые кислоты. Впервые показано, что мажорной нуклеазой молока является лактоферрин. Проведены исследования его ДНК- и РНК-гидролизующих свойств в сравнении с таковыми для абзимов.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ЗАЩИТНЫЕ ФАКТОРЫ МОЛОКА ЧЕЛОВЕКА

Молоко человека исключительно уникально по своему составу. Наряду с moho-, олиго- и полисахаридами, витаминами и витаминоподобными соединениями, минеральными солями и микроэлементами оно содержит различные ферменты, нуклеиновые кислоты и нуклеотиды, гормоны и гормоно-подобные соединения, факторы роста и дифференцировки клеток и, наконец, комплекс так называемых защитных факторов, к числу которых относятся иммуноглобулины, лактоферрин, лизоцим, интерферон, лактопероксидаза, бифидогенный фактор, ускоряющий рост бифидобактерий и ингибирующий колонизацию кишечника кишечной палочкой, и большое число жизнеспособных клеток.

Роль Сахаров, витаминов, гормонов, микроэлементов, минеральных солей, содержащихся в грудном молоке, достаточно очевидна. Казеин, а-лактальбумин, а также moho-, олиго- и полисахариды ответственны за питательную функцию: их расщепление приводит к образованию аминокислот и олигосахаридов, которые, в основном, используются для синтеза новых биополимеров, необходимых растущему организму ребенка.

Белковый состав молока весьма сложен, происхождение отдельных его компонентов разнообразно. Некоторые белки секретируются собственными клетками молочной железы. К этой группе белков относят ос-, р- и у-казеины, (3-лактоглобулин и а-лактальбумин. Наличие целого ряда неспецифических белков обусловлено частичной потерей клетками железы собственных структурных и ферментативных элементов. Помимо этого, группа белков, синтезируемых за пределами молочной железы, доставляется в молоко током крови, и они проникают в просвет авеол. Механизм такого транспорта, в целом, все еще не нашел удовлетворительного объяснения. Гемато-молочный барьер обладает уникальным свойством - с одной стороны, он достаточно проницаем, чтобы допустить проникновение крупных белковых молекул (иммуноглобулины, альбумин и некоторые другие), но, в то же время, обеспечивает высокую избирательность переноса. Например, он не пропускает сахарозу и инсулин, но проницаем для некоторых лейкоцитарных клеток. Кроме того, барьер поддерживает необходимый балланс белков и низкомолекулярных соединений (гормонов, Сахаров, нуклеотидов и некоторых других компонентов) между молоком и кровью. В совокупности все эти данные указывают на чрезвычайно сложный и комплексный механизм "фильтрации" биомолекул через гемато-молочный барьер.

Помимо питательной, важнейшей функцией материнского молока является защитная. Целый комплекс различных факторов ответственен за данную роль. Однако основу защитной функции составляют белковые компоненты молока, среди которых главная роль отводится его мажорным гликопротеинам - иммуноглобулинам (антителам) и лактоферрину. Именно они, благодаря широкому спектру своих функциональных возможностей, обеспечивают защиту организма новорожденного в период первых месяцев жизни [1, 2,3].

1.1. Клетки молока

Клетки молозива (так называют раннее молоко) и молока были впервые описаны А. Донне еще в 1844 году. Он, однако, оказался неспособен распознать их клеточную природу и назвал их «corpuscles». Приблизительно 20 лет спустя Бейгел доказал клеточную природу «корпускул» А. Донне. Тем не менее, исследование клеток молока было отложено на многие годы. Только в 1966 году (т.е. более, чем через 120 лет после открытия А. Донне) появились первые публикации о функциональной природе этих клеток. Было обнаружено, что общее

5 7 количество клеток молозива варьирует в диапазоне 10-10 /мл, что лишь незначительно ниже их концентрации в крови. С увеличением срока лактации общее количество клеток уменьшается и к 2-3 месяцам лактации составляет 104 - 2* 105/мл. На ранней стадии лактационного периода около половины клеток составляют макрофаги, 40 - 50% -полиморфноядерные нейтрофилы и ~ 5 - 10% - лимфоциты. Зрелое молоко содержит уже 85% макрофагов и лишь 10% малых лимфоцитов.

Молочные клетки имеют ряд морфологических особенностей по сравнению с клетками крови. Так, например, нейтрофилы молока значительно менее подвижны, и более устойчивы к хемотаксическим агентам, чем нейтрофилы крови. Макрофаги молока, в свою очередь, характеризуются значительно более высокой подвижностью, чем их аналоги в крови. Помимо этого, клетки молока, как правило, несут на своей поверхности специфические маркеры, отличающиеся от таковых для аналогичных клеток крови. Наконец, мононуклеарные клетки молока способны продуцировать различные цитокины в ответ на стимуляцию in vitro.

Лимфоциты молока

Около 80% лимфоцитов молока составляют Т-лимфоциты. Представители этого типа клеток молока способны к ответу на различные патогены бактериальной и вирусной природы. Было обнаружено, что основную массу Т-клеток молока составляют зрелые Т-лимфоциты. Так, они несут на поверхности фенотипические маркеры, например к HLA-DR антигену и высокоаффинные рецепторы к интерлейкину-2. Интересно, что при этом Т-клетки крови определенного донора могут быть резистентными к тем патогенам, которые вызывают Т-клеточный ответ в молоке. Относительно функций В-лимфоцитов молока известно, что они способны продуцировать IgA и IgM в ответ на антигенную стимуляцию. Лимфоциты молока, так же как и макрофаги, способны продуцировать как in vitro, так и in vivo различного рода лимфокины.

Судьба клеток молока при прохождении через кишечный тракт новорожденного может быть различна. До сих пор не существует единого мнения по поводу того, обеспечивают ли клетки молока матери только локальную защиту кишечника ребенка, или же возможны другие варианты. Авторами некоторых немногочисленных работ было показано, что некоторые типы клеток молока способны не только адгезировать на поверхности кишечного эпителия и персистировать там около 60 часов, но и мигрировать через эпителиальную поверхность в кровоток реципиента [2].

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Канышкова, Татьяна Геннадьевна

5. ВЫВОДЫ

1. Впервые показано, что IgG и slgA молока здоровых доноров катализируют гидролиз ДНК и РНК. На основании общепринятых и разработанных в данной работе критериев доказано, что эти активности являются собственным свойством антител (AT). Удельная активность абзимов зависит от индивидуума, но в целом активность IgG выше, чем slgA. С помощью ряда методов показано, что каталитический центр IgG- и sIgA-абзимов расположен на легких цепях молекул антител, причем преимущественно к-типа.

2. Показано, что ДНК и РНК-гидролизующие IgG и slgA характеризуются выраженными, но близкими оптимумами рН (7.0-7.5), подобными зависимостями скоростей реакций от ионов одно- и двухвалентных металлов, высоким, как и в случае аутоиммунных AT, сродством к субстратам, которое на 1-2 поряда выше сродства этих субстратов к классическим ДНКазам и РНКазам. Обнаружены существенные отличия абзимов молока от классических ДНКаз и РНКаз и ДНК- и РНК-гидролизующих AT при аутоиммунных патологиях. Высказаны предположения о возможной биологической функции, природе и основных причинах генерации ДНК- и РНК-абзимов в человеческом молоке.

3. Проведен поиск нуклеаз молока с помощью тестирования нуклеазных активностей in situ. Обнаруженные в молоке нуклеазы являются абзимами или описанными ранее ферментами за исключением лактоферрина (ЛФ). Впервые показано, что ЛФ - это уникальная ДНКаза человека, активируемая АТР и NAD и содержащая два антикооперативных центра для связывания нуклеиновых кислот, только один из которых ответственен за его ДНК- и РНК-гидролизующие функции. Показано, что центр высокого сродства ЛФ к нуклеиновым кислотам расположен в N-домене белковой глобулы.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В течение долгого времени защитные свойства молока человека привлекают к себе внимание большого числа исследователей. Многими авторами отмечалась важнейшая роль так называемых иммунных факторов, мажорными белковыми компонентами которых являются иммуноглобулины и лактоферрин. Родство белков этих двух семейств, по-видимому, неслучайно и обусловлено не столь структурным, сколько функциональным сходством. И антитела, и лактоферрин способны проявлять множество функционально различных, но биологически значимых свойств. Вполне вероятно, что именно такая полифункциональность мажорных белков молока и обеспечивает его защитные свойства.

Одним из наиболее интригующих вопросов абзимологии является причина возникновения антител-ферментов. До сих пор не ясно, какую роль выполняют абзимы -являются ли они одним из поражающих факторов, или же, напротив - это своего рода защитная реакция организма на внешние и/или внутренние патологические изменения. Основные механизмы генерации антител-ферментов к настоящему времени хорошо изучены в экспериментах с моноклональными антителами (так называемыми неприродными или «индуцируемыми» абзимами). Однако возможность реализации того или иного варианта in vivo, в случае с природными поликлональными абзимами оценить достаточно сложно. Одним из способов генерации абзимов может быть антиидиотипический механизм (см. главу «Обзор литературы»), В рамках данной теории антигеном, запускающим продукцию первичных антител, является «обычный» фермент (в данном случае - нуклеаза). Вторая принципиальная возможность - возникновение абзимов непосредственно к ДНК или РНК, в результате чего именно нуклеиновые кислоты и будут подвергаться каталитической трансформации с помощью каталитических антител. Генерация абзимов-нуклеаз может быть вызвана и презентацией в организме комплексов нуклеиновых кислот (НК) с некоторыми белками. Если структура НК в них деформирована или напряжена, то это приведет к генерации абзимов, способных расщеплять нуклеиновые кислоты.

При выборе механизма возникновения абзимов-нуклеаз у человека важно проводить параллельные исследования каталитических свойств антител при патологиях иммунной системы и в отсутствие таковых. Казалось бы, что может быть общего между аутоиммунным заболеванием и состоянием беременности? Однако же существует ряд общих параметров, по которым можно проследить сходство состояния иммунной системы при аутоиммунных расстройствах с состоянием иммунной системы женщин при беременности и в послеродовой период. Одним из таких параметров является увеличение в кровотоке титра внеклеточной ДНК. Этот процесс характерен практически для любого аутоиммунного заболевания [163, 164], и аналогичная картина наблюдается в течение 1 триместра беременности у здоровых женщин [165, 166]. Кроме того, при аутоиммунных патологиях в организме больного происходит массовая гибель клеток по механизму апоптоза. Результаты недавних исследований показывают, что сходные процессы происходят у беременных в последний триместр, непосредственно перед родами [167]. Можно предположить, что «дисбаланс» нуклеиновых кислот в организме может приводить к пролиферации клонов В-лимфицитов, способных продуцировать антитела-нуклеазы - абзимы, которые будут способствовать выведению избытка нуклеиновых кислот из кровотока.

В целом, можно сделать вывод, что в каталитической активности антител заложена основа защитного потенциала иммунной системы в особых случаях - таких как беременность и лактация, и аутоиммунные патологии. Суммируя вышеизложенное, есть основания полагать, что результаты исследований в данном направлении будут положены в основу новых представлений фундаментального характера о биологических функциях антител и действии иммунной системы живых организмов.

Лактоферрин называют вторым по значимости, после антител, среди защитных факторов молока [2, 3]. Он достаточно хорошо изучен со многих точек зрения. ЛФ является регулятором концентрации свободных инов железа в крови и секретах, белком, связывающим различные ДНК (включая специфические), и который способен проникать в ядра клеток и активировать транскрипцию [59]; одна из изоферментных форм ЛФ гидролизует РНК [40].

В данной работе впервые показано, что человеческий ЛФ способен также гидролизовать ДНК, являясь уникальной по своим свойствам нуклеазой, которая активируется с помощью АТР и NAD. Полученные в работе и литературные данные позволяют считать, что ЛФ существует в виде мономерных и различных олигомерных форм и представлен в клетках рядом изоферментных форм, что, в совокупности, обеспечивают его исключительно широкие полифункциональные свойства. По-видимому, именно полифункциональность ЛФ является основой его биологической функции - эффективного неспецифического протектора клеток.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Канышкова, Татьяна Геннадьевна, Новосибирск

1. Mestecky, J., Russell, M.W. Passive and active protection against disorders of the gut (1998) Vet. Quarterly, 20(3), S83-S87.

2. Xanthou, M. Immune protection of human milk (1998) Biol. Neonate, 74, 121-133.

3. Hanson, L.A. Breastfeeding provides passive and likely long-lasting active immunity (1998) Annal Allerg. Asth. Immunol., 81, 523-537.

4. Thorell, L., Sjoberg, L.B., Hernell, O. Nucleotides in human milk: sources and metabolism by newborn infant (1996) Pediatr. Res., 40 (6), 845-852.

5. Leach, J.L., Baxter, J.H., Molitor, B.E., Ramstack, M.B., Masor, M.L. Total potentially available nucleosides of human milk by stage of lactation (1995) Am. Clin. Nutr., 61 (6), 12241230.

6. Страйер Л. Биохимия (1985) M: Мир, 2, 255-277.

7. Uauy, R., Stringel, G, Thomas, R., Quan, R. Effect of diatary nucleosides on growth and maturation of the developing gut in the rat (1990) J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr., 10, 497-503.

8. Carver, J. Diatary nucleotides: cellular immune, interstinal and hepatic system effects (1994) J. Nutr., 1 (29), 144S-148S.

9. Van Buren, C.T., Kim, E., Kulkami, A.D., Fanslow, W.C. and Rudolph F.B. Diatary nucleotides, a requirement for helper/inducer T-lymphocytes (1985) Transplantation, 40, 694699.

10. Kulkami, A.D., Fanslow, W.C., Rudolph, F.B. and Van Buren, C.T. Effect of diatary nucleotides on response to bacterial infections (1986) JPEN, 10, 169-169.

11. Rudolph, F.B., Kulkami, A.D., Schandle, V.B. and Van Buren, C.T. Involovment of dietary nucleotides in T-lymphocyte function (1984) Adv. Exp. Med., 165, 175-179.

12. Carver, J.D., Cox, W.I., Barness, L.A. Dietary nucleotide effects upon murine natural killer cell activity and macrophage activation (1990) JPEN, 14, 18-22.

13. Gil, A., Corral, E., Martinez, A., Molina, J.A. Effects of the addition of nucleotides to an adapted milk formula on the microbial pattern of faeces in ar term newborn infants (1986) J. Clin. Nutr. Gastroenterol., 1, 127-133.

14. De-Lucchi, C., Pita, M.L., Faus, M.J., Molina, J.A. Uauy, R., Gilo, A. Effects of dietary nucleotides of the fatty acid composition of erythrocyte membrane lipids in term infants (1987) J. Pediatr. Gastrointerol. Nutr., 6, 568-572.

15. Gil, A. Lozano, E., De-Lucchi, C., Maldonado, J. Molina, J.A., Pita, M.L. Changes in the fatty acids profiles of plasma lipid fractions induced by dietary nucleotides upon lipoprotein pattern of newborn infants (1988) Eur. J. Clin. Nutr., 42, 473-480.

16. Carver, J.D., Pimentel, D., Cox, W.I., Barness, L.A. Dietary nucleotides effect upon immune function in infants (1991) Pediatrics, 88, 359-342.

17. Pickering, L.K, Granoff, D.M, Erickson, J.R, Masor, M.L, Cordle, C.T, Schaller, J.P, Winship, T.R, Paule, C.L, Hilty, M.D. Modulation of the immune system by human milk and infant formula containing nucleotides (1998) Pediatrics, 101(2), 242-249.

18. Schlom, J., Spiegelman, S. and Moore, D. Detection of high-molecular-weight RNA in particles from human milk( 1972) Science, 175, 542-544.

19. Hakansson, A., Zhivotovsky, В., Orrenius, S., Sabharwal, H., Svanborg, C. Apoptosis induced by a human milk protein (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92(17), 8064-8068.

20. Грачев И.И., Попов C.M., Скопичев В.Г. Цитофизиология секреции молока (1976) Ленинград, "Наука", 87-199.

21. Aumaitre, A., Seve, В. Nutritional importance of colostrum in the piglet (1978) Ann. Rech. Vet., 9(2), 181-192.

22. Watanabe, Т., Nagura, Н., Watanabe, К., Brown, W.R. The binding of human milk lactoferrin to immunoglobulin A (1984) FEBS Lett., 168(2), 203-207.

23. Levay, P.F., Viljoen, M. Lactoferrin: a general review (1995) Haematologica, 80(3), 252-267.

24. Отт В.Д., Дюкарева С.В., Мельников О.Р. Лактоферрин и перспективы его использования в алиментарной профилактике анемий (1993) Вопр. Питания, 1, 6-13.

25. Davidson, L.A., Lonnerdal, В. Specific binding of lactoferrin to brush-border membrane: ontogeny and effect of glycan chain (1988) Am. J. Physiol., 254(4), G580-G585.

26. Birgens, H. Lactoferrin in plasma measured by an ELISA technique: evidence that plasma lactoferrin is an indicator of neutrophil turnover and bone marrow activity in acute leukaemia (1985) Scand. J. Haematol., 34(4), 326-331.

27. Hansen, N.E., Malmquist, J., Thorell, J. Plasma myeloperoxidase and lactoferrin measured by radioimmunoassay: relations to neutrophil kinetics (1975) Acta med. scand., 198, 437-443.

28. Bennett, R.M., Bagby, G.C., Davis, J. Calcium-dependent polymerization of lactoferrin (1981) Biochem. Biophys. Res. Commun, 101(1), 88-95.

29. Bagby, G.C.Jr., Bennett, R.M. Feedback regulation of granulopoiesis: polymerization of lactoferrin abrogates its ability to inhibit CSA production (1982) Blood, 60(1), 108-112.

30. Mantel, С., Miyazawa, К., Broxmeyer, H.E. Physical characteristics and polymerization during iron saturation of lactoferrin, a myelopoietic regulatory molecule with suppressor activity (1994) Adv. Exp. Med. Biol., 357, 121-132.

31. Семенов Д.В., Канышкова Т.Г., Акимжанов A.M., Бунева B.H., Невинский Г.А. Взаимодействие лактоферрина молока человека сАТР (1998) Биохимия, 63(8), 1107-1115.

32. Sousa, M., Brock, J.H., Iron in immunity. Cancer and Inflammation (1989) John Wiley & Sons.

33. Ellison, R. Т., Giehl, T.J.and Laforce, F M. Damage of the outer membrane of enteric gramnegative bacteria by lactoferrin and transferrin (1988) Infect. Immun., 56, 2774-2780.

34. McAbee, D.D., Esbensen, K. Binding and endocytosis of apo- and holo-lactoferrin by isolated rat hepatocytes (1991) J. Biol. Chem., 266(35), 23624-23631.

35. Bagby, G.C.Jr. Regulation of granulopoiesis: the lactoferrin controversy (1989) Blood Cells, 15(2), 386-399.

36. Galbraith, P.R. Effects of lactoferrin on human granulopoiesis in vitro (1986) Clin. Invest. Med., 9(1), 1-5.

37. Damiens, E., Mazurier, J., el Yazidi, I., Masson, M., Duthille, I., Spik, G., Boilly-Marer, Y. Effects of human lactoferrin on NK cell cytotoxicity against haematopoietic and epithelial tumour cells (1998) Biochim. Biophys. Acta, 1402(3), 277-287.

38. Kijlstra, A. The role of lactoferrin in the nonspecific immune response on the ocular surface (1990) Reg. Immunol., 3(4), 193-197.

39. Adamik, В., Zimecki, M., Wlaszczyk, A., Berezowicz, P., Kubler, A. Lactoferrin effects on the in Vitro immune response in critically ill patients (1998) Arch. Immunol. Ther. Exp., 46(3), 169-176.

40. Baveye, S, Elass, E, Mazurier, J, Spik, G, Legrand, D. Lactoferrin: a multifunctional glycoprotein involved in the modulation of the inflammatory process (1999) Clin Chem Lab Med., 37(3), 281-286.

41. Zhang, W., Lachmann, P.J. Neutrophil lactoferrin release induced by IgA immune complexes can be mediated either by Fc alpha receptors or by complement receptors through different pathways (1996) J. Immunol., 156(7), 2599-2606.

42. Yi, M., Kaneko, S., Yu, D.Y., Murakami, S. Hepatitis C virus envelope proteins bind lactoferrin (1997) J. Virol., 71(8), 5997-6002.

43. Swart, P.J., Kuipers, E.M., Smit, C., Van Der Strate, B.W., Harmsen, M.C., Meijer, D.K. Lactoferrin. Antiviral activity of lactoferrin (1998) Adv. Exp. Med. Biol., 443, 205-213.

44. Marchetti, M., Longhi, C., Conte, M.P., Pisani, S., Valenti, P., Seganti, L. Lactoferrin inhibits herpes simplex virus type 1 adsorption to Vero cells (1996) Antiviral Res., 29, 221-231.

45. Mann, D.M., Romm, E., Migliorini, M. Deleniation of the glycosaminoglican-binding site in the human inflamatory response protein lactoferrin (1994) J. Biol. Chem., 269, 23661-23667.

46. Bi, B.Y., Liu, J.L., Legrand, D., Roche, A.C., Capron, M., Spik, G., Mazurier, J. Internalization of human lactoferrin by the Jurkat human lymphoblastic T-cell line (1996) Eur. J. Cell. Biol., 69(3), 288-296.

47. Tomita, M., Takase, M., Wakabayashi, H., Bellamy, W. Antimicrobial peptides of lactoferrin (1994) Adv. Exp. Med. Biol., 357, 209-218.

48. Kuwata, H., Yip, T.T., Yamauchi, K., Teraguchi, S., Hayasawa, H., Tomita, M., Hutchens, T.W. The survival of ingested lactoferrin in the gastrointestinal tract of adult mice (1998) Biochem. J., 334(2), 321-323.

49. Devi A.S., Das, M.R., Pandit, M.W. Lactoferrin contains structural motifs of ribonuclease (1994) Biochim. Biophys. Acta, 1205, 275-281.

50. He, J., Furmanski, P. Sequence specificity and transcriptional activation in the binding of lactoferrin to DNA (1995) Nature, 373(6516), 721-724.

51. Fleet, J.C. A new role for lactoferrin: DNA binding and transcription activation (1995) Nutr. Rev., 53(8), 226-227.

52. Baeuerle, P. A. Transcriptional activators. Enter a polypeptide messenger (1995) Nature, 373, 661-662.

53. Hanson, L.A., Carlsson, B., Cruz, J.R. in Immunology of Breast milk (Ogra, P.L. and Dayton, D.H., eds). 1979, Raven Press., New York, 145-157.

54. Mestecky, J., Russell, M.W., Jackson, S., Brown, T.A. The human IgA system: a reassessment (1986) Clin. Immunol. Immunopathol., 40(1), 105-114.

55. Mazanec, M.B., Nedrud, J.G., Kaetzel, C.S., Lamm, M.E. A three-tiered view of the role of IgG in mucosal defense (1993) Immunol. Today, 14, 430-435.

56. Gregory, R.L., Kindle, J.С., Hobbs, L.C., Filler, S.J., Malmstrom, H.S. Function of anti-Streptococcus mutans antibodies: inhibition of virulence factors and enzyme neutralization (1990) Oral Microbiol. Immunol., 5(4), 181-188.

57. Литмен Г., Гуд P. Иммуноглобулины, 1981, Москва, «Мир», 104-111.

58. Zaman, S., Carlsson, В., Morikawa, A., Jeansson, S., Narayanan, I., Thiringer, K., Jalil, F., Hanson, L.A. Poliovirus antibody titres, relative affinity, and neutralising capacity in maternal milk (1993) Arch. Dis. Child, 68(2), 198-201.

59. Hjelt, K., Grauballe, P.C., Nielsen, O.H., Schiotz, P.O., Krasilnikoff, P.A. Rotavirus antibodies in the mother and her breast-fed infant (1985) J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr., 4(3), 414-420.

60. Miranda, R., Saravia, N.G., Ackerman, R., Murphy, N., Berman, S., McMurray, D.N. Effect of maternal nutritional status on immunological substances in human colostrum and milk (1983) Am. J. Clin. Nutr., 37(4), 632-640.

61. Englund, J., Glezen, W.P., Piedra, P.A. Maternal immunization against viral disease (1998) Vaccine, 16(14-15), 1456-1463.

62. Gregory, R.L., Filler, S.J. Protective secretory immunoglobulin A antibodies in humans following oral immunization with Streptococcus mutans (1987) Infect. Immun., 55(10), 24092415.

63. Kit, Yu.Ya., Kim, A.A., Sidorov, V.N. Affinity-purified secretory immunoglobulin A possesses the ability tophosphorylate human milk casein (1991) Biomed. Science, 2, 201-205.

64. Kit, Y.Ya., Semenov, D.V., Nevinsky, G.A. Phosphorylation of different human milk proteins by human catalytic secretory immunoglobulin A (1996) Biochem. Mol. Biol. Int., 39(3), 521-527.

65. Pauling, L. Molecular basis of biological specificity (1948) Am. Sci., 36, 51.

66. Pollack, S.T., Jacobs, J.F., Schultz, P.G. Selective chemical catalysis by an antibody (1986) Science, 234, 1570-1573.

67. Thomas, N.R Hapten design for the generation of catalytic antibodies (1994) Appl. Biochem. Biotechn., 47, 345-372.

68. Tramontano, A., Janda, K.D., Lerner, R.A. Catalytic antibodies (1986) Science, 234, 15661570.

69. Paul, S., Voile, D.J., Beach, C.M., Johnson, D.R., Dowell, M., Massey, R.J. Catalytic hydrolysis of vasoactive intestinal peptide by human autoantibody (1989) Science, 244, 11581162.

70. Paul, S., Mei, S., Mody, В., Eklund, S.H., Beach, C.M., Massey, R.J., Hamel, F. Cleavage of vasoactive intestinal peptide at multiple sites by autoantibodies (1991) J. Biol. Chem., 266, 16128-16134.

71. Mei, S., Mody, В., Eklund, S.H., Paul, S. Vasoactive intestinal peptide hydrolysis by antibody light chains (1991) J. Biol. Chem., 266, 15571-15574.

72. Paul, S., Sun, M., Mody, R., Tewary, H.K., Stemmer, P., Massey, R.J., Gianferrara, Т., Mehrotra, S., Dreyer, Т., Meldal, M. Peptidolytic monoclonal antibody elicited by a neuropeptide (1992) J. Biol. Chem., 267, 13142-13145.

73. Gao, Q.S., Sun, M., Tyutyulkova, S., Webster, D., Rees, A., Tramontano, A., Massey, R.J., Paul, S. Molecular cloning of a proteolytic antibody light chain (1994) J. Biol. Chem., 269, 32389-32393.

74. Li, L., Paul, S., Tyutyulkova, S., Kazatchkine, M. D., Kaveil, S. Catalytic activity of anti-thyroglobulin antibodies (1995) J. Immunol., 154, 3328 3332.

75. Jerne, N.K. Towards a network theory of the immune system (1974) Ann. Immunol., 125, 373-398.

76. Shuster, A. M., Gololobov, G.V., Kvashuk, O.A., Bogomolova, A.E., Smirnov, I.V., Gabibov, A.G. DNA hydrolyzing autoantibodies (1992) Science, 256, 665-667.

77. Шустер A.M., Гололобов Г.В., Квашук О.А., Габибов А.Г. Антиидиотипические и природные каталитически активные антитела (1991) Молекуляр. Биология, 25, 593-601.

78. Gabibov, A.G., Gololobov, G.V., Makarevich, O.I., Schourov, D.V., Chernova, E.A., Yadav, R.P. DNA-hydrolyzing autoantibodies (1994) Appl. Biochem. Biotechnol., 47, 293-302.

79. Щуров Д.В., Макфевич О.И., Лопаева О.А., Бунева В.Н., Невииский Г.А., Габибов А.Г. Взаимодействие ДНК-гидролизующих аутоантител с низкомолекулярными субстратами (1994) Доклады РАН, 337, 407-410

80. Гололобов А.В. Взаимодействие ДНК-белок при аутоиммунном процессе (1992) Автореф. дисс. на соискание уч. степ, к.х.н., Москва, РАН ИМБ им. В.А.Энгельгардта.

81. Бунева В.Н., Андриевская O.A., Романникова И.В., Гололобов Г.В., Ядав Р.П., Ямковой В.И., Невинский Г.А. Взаимодействие каталитически активных антител с олигорибонуклеотидами (1994) Молекул, биология, 28, 738-743.

82. Барановский А.Г., Матюшин В.Г., Власов A.B., Забара В.Г., Наумов В.А., Жьеже Р., Бунева В.Н., Невинский Г.А. ДНК- и РНК- гидролизующие антитела из крови больных различными формами вирусного гепатита (1997) Биохимия, 62, 1598-1607.

83. Gololobov, G.V., Mikhalap, S.V., Starov, A.V., Kolesnikov, A.F., Gabibov, A.G. DNAprotein complexes. Natural targets for DNA-hydrolyzing antibodies (1994) Appl. Biochem. Biotechn., 47(2/3), 305-315.

84. Андриевская O.A. РНК-гидролизующие антитела из сыворотки крови больных системной красной волчанкой (1998) Диссертация на соискание уч. степени канд. хим. наук, Новосибирск.

85. Андриевская O.A., Бунева В.Н., Забара В.Г., Наумов В.А., Ямковой В.И., Невинский Г.А. Иммуноглобулины класса М из сыворотки крови больных системной красной волчанкой эффективно расщепляют РНК (1998) Молекуляр. биология, 32(5), 908-915.

86. Андриевская O.A., Канышкова Т.Г., Ямковой В.П., Бунева В.Н., Невинский Г.А. Моноклональные антитела к ДНК лучше гидролизуют РНК, чем ДНК (1997) Доклады РАН, 355(3), 401-403.

87. Щуров Д. В. Каталитические антитела (1997) Мол.биология,. 32(1), 5-15.

88. Семенов Д.В., Канышкова Т.Г., Кит Ю.А., Хлиманков Д.Ю., Акимжанов A.M., Горбунов Д.А., Бунева В.Н., Невинский Г.А. Иммуноглобулины класса G человека гидролизуют нуклеотиды (1998) Биохимия, 63(8), 1097-1106.

89. Семенов Д.В. Нуклеотид-гидролизующие антитела и лактоферрин молока человека (1998) Диссертация на соискание уч. ст. канд. хим. наук, Новосибирск.

90. Paul, S. Catalytic activity of anti-ground state antibodies, antibody subunits, and human autoantibodies (1994) Appl. Biochem. Biotechn., 47(2/3), 241-255.

91. Генералов И. И., Новиков Д. К. Поликлоналъные каталитические антитела и их возможное биологическое значение (1998) Усп. совр. биологии, 118(2), 178-193.

92. Puzzetti, A., Madaio, M. P., Bellese, G., Migliorini, P. Anti-DNA antibodies bind to DNase I (1995) J. Exp. Med., 181, 1797-1804.

93. Aotsuka, S., Funahashi, Т., Tani, N., Okawa-Takatsuji, M., Kinoshita, M., Yokohari, R. Adsorption of anti-dsDNA antibodies by immobilizedpolyanionic compounds (1990) Clin. Exptl. Immunol., 79(2), 215-220.

94. Wing, M.G. The molecular basis for a polyspecific antibody (1995) Clin. Exptl. Immunol., 99(3), 313-315.

95. Diamond, В., Scharff, M.D. Somatic mutation of the T15 heavy chain gives rise to an antibody with autoantibody specificity (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81(18), 5841-5844.

96. Зарытова В. Ф., Иванова Е. М., Романенко В. П. Синтез олигонуклеотидов в хлороформе триэфирным методом (1985) Биоорг. химия, 11(6), 815-820.

97. Мудраковская А. В., Ямковой В. И. Препаративное получение гомоолигорибонуклеотидов, терминированных 5'-фосфатом (1990) Ферменты микроорганизмов и деградация биополимеров, М.: ВНИИСЭТИ, 199-206.

98. Handbook of Biochemistry and Molecular Biology. Nucleic Acides (1975) v. 1, N. Y.: CRC Press, 589.

99. Иммунологические методы под ред. Г. Фримеля (1987) М., Медицина, 421-423.

100. Harlow, Е., Lane, D. Antibodies: A laboratory manual (1988) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., 630- 631.

101. Nevinsky, G.A., Ankilova, V.N., Lavrik, O.I., Mkrtchyan, Z.S., Nersesosa, L.S., Akopyan, J.I. Functional non-identity of creatine kinase subunits of rabbit skeletal muscle (1982) FEBS Lett., 149, 36-40.

102. Mazurier, J., Spik, G. Comparative study of the iron-binding properties of human transferrins. I Complete and sequential iron saturation and desaturation of the lactotransferrin (1980) Biochim. Biophys. Acta, 629, 399-408.

103. Mazurier, J., Spik, G., Montreuil, J. Isolation and characterization of the cyanogen bromide fragments from human lactotransferrin (1974) FEBS Lett., 48, 262-265.

104. Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of head of bacteriophage T4 (1970) Nature, 227, 680-685.

105. Merril, C.R., Goldman, D., van Keuren, M.L. Gel protein stains: silver stain (1984) Methods Enzymol., 104, 441-447.

106. Suelter, C.H. A particial guide to enzymology (1985) Biochemistry: A series of monographs, 164-166.

107. Towbin, H., Staehelin, Т., Gordon, J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications (1976) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 9, 4350-4356.

108. Goldfarb, M.F., Savadove, M.S., Inman, J.A. Two-dimensional electrophoretic analysis of human milk proteins (1989) Electrophoresis, 10, 67-70.

109. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование (1984) М., "Мир", 132.

110. Невинский Г.А., Газарянц М.Г., Мкртчан З.С. Аффинная модификация креатинкиназы из скелетных мышц кролика с помощью 2', 3 '-диальдегидных производных ATPuADP (1983) Биоорг. Химия, 9(4), 487-495.

111. Бунева В.Н., Годовикова Т.С., Зарытова В.Ф. Модификация РНКазы 5'-фосфо-Ы-метилимидазолидными производными ди- и олигодезоксирибонуклеотидов (1986) Биоорг. химия, 12(7), 906-910.

112. Crook, Е.М., Mathias, А.Р., Rabin, B.R (1960) Biochem. J., 74, 234-238.

113. Perret, V., Garcia, A., Puglisi, J.D., Grosjean, H., Ebel, J.-P., Florentz, C., Giege, R. Conformation in solution of yeast tRNAasp transcripts deprived of modified nucleotides (1990) Biochimie, 72, 735-744.

114. Власов A.B. Природные каталитические антитела человека и синтетические аналоги активного центра РНКазы А как инструменты исследования структуры РНК (1999) Диссертация на соискание уч. степени канд. хим. наук, Новосибирск.

115. Келети Т. Основы ферментативной кинетики (1990) М., "Мир", 131-135.

116. Rosenthal, A.L., Lacks, S.A. Nuclease detection in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (1977) Anal. Biochem., 80(1), 76-90.

117. Фершт Э. Структура и механизм действия ферментов (1980) Москва, "Мир", 191-210.

118. Balint, J. R., and Ikeda, Jr. Y Isolation of human and canine IgM utilizing protein A affinity chromatography. (1981) Immunological communications, 10, 533-540.

119. Grey, H.M., Abel, C.A., Yount, W.J., Kunkel, H.G. A subclass of human gamma-A-globulins (gamma-A2) which lacks the disulfied bonds linking heavy and light chains (1968) J. Exp. Med., 128, 1223-1236.

120. Косик О.Г. Физико-химические особенности IgA, IgM, IgG сыворотки крови здоровых людей (1991) Иммунология, М., "Медицина", 1, 21-23.

121. Koshland, М.Е. Structure and function of the J chain (1975) Adv. Immunol., 20, 41-67.

122. Simpson, D.A., Hausinger, R.P., Mulks, M.H. Purification, characterization, and comparison of the immunoglobulin A1 proteases of Neisseria gonorrhoeae (1988) J. Bacterid., 170(4), 1866-1873.

123. Manheimer-Lory, A., Irigoyen, M., Gaynor, В., Monhian, R., Splaver, A., Diamond, B. Analysis of V kappa I and V lambda II light chain genes in the expressed B-cell repertoire (1995) Ann. NY Acad. Sci., 764, 301-311.

124. Manheimer-Lory, A., Monhian, R., Splaver, A., Gaynor, В., Diamond, B. Analysis of V kappa I germline genes from an SLE patient and expressed autoantibodies (1995) Autoimmunity, 20(4), 259-265.

125. Bensimon, C., Chastagner, P., Zouali, M. Human lupus anti-DNA autoantibodies undergo essentially primary V kappa gene rearrangements (1994) EMBO, 13, 2951-2962.

126. Akagi, K., Yamanaka, M., Murai, K.,Omae, T. Purification and properties of acid ribonuclease from human serum and leucocytes (1978) Cancer Res., 38, 2163-2167.

127. Шапот B.C., Нуклеазы, 1968, Москва, "Медицина", 212.

128. Ramaswamy, H., Swamy, Ch.V.B., and Das, M.R. Purification and characterization of a high molecular weight ribonuclease from human milk (1993) J. Biol. Chem., 268, 4181- 4187.

129. Vlassov, A., Florentz, C., Heim, M., Naumov, V., Buneva, V., Nevinsky, G., Giege, R. Characterization and selectivity of catalytic antibodies from human serum with RNase actitity (1998) Nucleic Acids Res., 26, 5243-5250.

130. Власов A.B., Андриевская О.А., Канышкова Т.Г., Барановский А.Г., Наумов В.А., Бреусов А.А., Жьеже Р., Бунева В.Н., Невинский Г.А. РНК-гидролизующие антитела из крови больных системной красной волчанкой (1997) Биохимия, 62, 556-562.

131. Glukhov, В.М., Ierusalimskii, А.P., Salganik, R.I. Ribonuclease therapy for tick-borne encephalitis (1968) Zh. Nevropatol. Psikhiatr., 68, 361-365.

132. Zaman, S., Carlsson, В., Morikawa, A., Jeansson, S., Narayanan, I., Thiringer, K., Jalil, F., Hanson, L.A. Poliovirus antibody titres, relative affinity, and neutralising capacity in maternal milk (1993) Arch. Dis. Child, 68(2), 198-201.

133. Numazaki, К Human cytomegalovirus infection of breast milk (1997) FEMS Immunol. Med. Microbiol., 18(2), 91-98.

134. Goldfarb, J. Breastfeeding. AIDS and other infectious diseases (1993) Clin. Perinatal., 20(1), 225-243.

135. Hamprecht, K., Vochem, M., Baumeister, A., Boniek, M., Speer, C.P., Jahn, G. Detection of cytomegaloviral DNA in human milk cells and cell free milk whey by nested PCR (1998) J. Virol. Methods, 70, 167-176.

136. May, J.T. Antimicrobial factors and microbial contaminants in human milk: recent studies (1994) J. Paediatr. Child. Health, 30(6), 470-475.

137. Gudding, R. DNAses in milk and blood sera from different species (1979) Acta Vet. Scand., 20, 404-416.

138. Власов В.В., Грачев М.А., Лаврик О.И. Аффинная модификация биополимеров (под ред. Кнорре Д.Г.) 1983, Новосибирск, "Наука", 243.

139. Yanagawa, Н., Ogawa, Y., Miyakawa, A., Egami, F.J. DNase A, a poly(dA) andpoly(dT)-specific deoxyribonuclease from Achatina fulica. Purification and characterization (1981) Biochem. (Tokyo), 90(5), 1463-1478.

140. Steinman, C.R. Circulating DNA in Systemic Lupus Erythematotus (1984) J. Clin. Invest., 73, 832-841.

141. Казаков В.И., Божков В.М., Линде В.А., Репина М.А., Михайлов В.М. Внеклеточная ДНК в крови беременных женщин (1995) Цитология, 37, 232-235.

142. Thomas, M.R., Williamson, R., Craft, I., Rodeck, C.H. The time of appearance, and quantitation, of fetal DNA in the maternal circulation (1994) Ann. N.Y. Acad. Sci., 731, 217225.

143. Автор глубоко благодарен научным руководителям Г. А. Невинскому и В. Н. Буневой за четкую организацию исследований, постоянную помощь и поддержку на всех этапах работы.

144. Автор искренне признателен О. А. Андриевской, А. В. Власову, Д. В. Семенову, Ю. Я. Киту, А. Г. Барановскому, Д. Ю. Хлиманкову, А. В. Галъвита (НИБХ СО РАН), Л. Р. Бреусовой (МДКБ N 5, г. Новосибирск) за оказанную в работе помощь.