Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Новые аспекты локализации и регуляции содержания люлиберина в гипоталамусе и висцеральных органах крысы

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Цибезов, Валерий Владимирович

ВВ1ЭДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. функции гипофизотропных гормонов гипоталамуса

2. Гипоталамическая регуляция репродуктивной функции

2.1. Роль гипоталамуса и люлиберина в гипотала-мо-гипофизарной системе

2.2. Локализация люлиберина в гипоталамусе

2.3. Регуляция содержания и секреции люлиберина в гипоталамусе

2.3.1. Участие половых стероидных гормонов и ЛГ в регуляции содержания люлиберина в гипоталамусе

2.3.2. Катехолашны и ацетилхолин в регуляции содержания люлиберина в гипоталамусе

2.3.3. Опиоидные пептиды в гипоталамо-гипофизарной системе

2.4. Биосинтез и деградация люлиберина в гипоталамусе

3. Внегипоталамическая локализация и экстрагипо-таламические функции гипоталамических гормонов

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

I. Радиоиммунологический метод определения люлиберина

1.1. Получение антисыворотки к люлиберину.

1.2. Получение люлиберина.

1.3. Определение удельной радиоактивности

251 ] люлиберина.

1.4. Определение рабочего разведения антисыворотки

1.5. Анализ люлиберина в гипоталамусе

1.6. Анализ люлиберина в висцеральных органах.

2. Получение биологического материала для определения люлиберина в гипоталамусе

2.1. Животные

2.2. Получение фрагментов гипоталамуса.

2.3. Контроль интактности аркуатных ядер во фрагментах гипоталамуса.

2.4. Экстракция люлиберина из фрагментов гипоталамуса для радиоиммунологического анализа.

3. Определение иммунореактивного люлиберина в висцеральных органах.

3.1. Получение экстрактов висцеральных органов и подготовка образцов к анализу.

3.2. Хроматография экстрактов висцеральных органов.

4. Ферментативная инактивация люлиберина в висцеральных органах.

4.1. Получение гомогенатов ткани для определения пептидазной активности.

4.2. Методы определения пептидазной активности

4.3. Определение ингибирования деградации люлиберина факторами пептидной природы

4.4. Определение оптимума рН ферментативной деградации [125;е] люлиберина.

4.5. Определение активности пепткдазы сердца в зависимости от ионного состава среды.

4.6. Условия хроматографии и диализа гомогената сердца.

4.7. Определение ингибирующего эффекта люлиберина на деградацию [^1] люлиберина в присутствии ионов Са

4.8. Определение влияния ингибиторов протеаз на активность люлиберин-разрушающего фермента сердца.

4.9. Определение молекулярной массы люлиберин-разрушающего ферлента из сердца.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЩЩНИЕ.

1. Латерализация люлиберина в гипоталамусе

2. Люлиберин в висцеральных органах крысы.

3. Ферментативная инактивация люлиберина в висцеральных органах крысы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Новые аспекты локализации и регуляции содержания люлиберина в гипоталамусе и висцеральных органах крысы"

В течение последнего десятилетия одним из наиболее перспективных направлений биохимии и физиологии стало изучение нового класса биологически активных соединений пептидной природы - ней-ропептидов. К этой группе относятся пептидные гормоны гипоталамуса, опиоидные пептиды, субстанция Р, нейротензин и другие. Нейро-пептиды локализованы в различных отделах ЦНС, некоторых периферических органах и отличаются высокой биологической активностью и полифункциональностью.

Отдельную группу нейропептидов представляют соединения пептидной природы, впервые обнаруженные в гипоталамусе и обеспечивающие центральный контроль деятельности висцеральных органов посредством регуляции секреции и синтеза тропных гормонов гипофиза. По функциональной роли эти пептиды являются некрогормонами. В настоящее время имеются указания о существовании девяти гипота-ламических нейрогормонов, из которых наиболее изучены тиролибе-рин (рилизинг гормон тиреотропного гормона, ТЕГ), люлиберин (ри-лизинг гормон лютеинизирующего гормона, ЛГ-РГ), соматостатин (ин-гибирующий гормон гормона роста), соматолиберин (рилизинг гормон гормона роста), кортиколиберин (кортикотропин-рилизинг гормон, КЕТ). Указанные пептиды были выделены в чистом виде из гипоталамуса различных животных, установлена их первичная структура и осуществлен химический синтез. Успешно развиваются работы, касающиеся регуляции этими соединениями секреции и синтеза гормонов передней доли гипофиза.

Однако, как уже отмечалось, для большинства нейропептидов характерна полифункциональность, т.е. участие в самых разнообразных процессах жизнедеятельности организма. Не являются исключением и гипоталамические пептиды. Действительно, по последним данным, роль этих соединений не ограничена регуляцией тропных функций гипофиза, а места их локализации выходят за пределы не только гипоталамуса, но и центральной нервной системы (ЦНС). Высказывается предположение, что вне гипоталамуса "гипоталамические" нейропеп-тиды могут выполнять функции нейромедиаторов и/или нейромодулято-ров. Таким образом, возникает еще одно направление в изучении этих соединений - поиск их экстрагипофизарных функций, а также внегипоталамической локализации в организме.

Одним из представителей гипоталамических нейропешгидов является люлиберин. Долгое время исследования этого соединения проводили в рамках изучения его классической гормональной функции -центральной регуляции репродуктивной системы на уровне контроля секреции и синтеза гипофизарных гонадотропинов - лютеинизирующе-го и фолликулостимулирующего гормонов. Соответственно, в этом аспекте изучали и локализацию люлиберина в гипоталамусе. Однако, несмотря на достаточно подробную информацию о распределении и функциональном значении люлиберина в различных зонах гипоталамуса, некоторые стороны этого вопроса остаются неисследованными.

Недавно были обнаружены нейральные связи между гипоталамусом и половыми железами, обеспечивающие, по всей видимости, центральную экстрагипофизарную регуляцию деятельности гонад. Возникает вопрос, не участвуют ли в нейральных связях гипоталамус - гонады нейроны гипоталамуса, содержащие люлиберин ? Если это действительно так, то односторонняя гонадоэктомия должна привести к преимущественному изменению содержания пептида только в одной половине гипоталамуса. Этот факт явится подтверждением предположения об участии гипоталамического люлиберина в системе нейральнол регуляции деятельности гонад.

Гипоталамус, однако, не является единственным местом локализации люлиберина. Имеются указания о наличии этого пептида и в других областях ЦНС, но в значительно меньших количествах, чем в гипоталамусе. Что касается распределения пептида вне ЦНС, то этот вопрос практически не изучен. Вместе с тем, это становится актуальным в свете последних данных об экстрагипофизарных эффектах люлиберина на висцеральные органы. Недавно было обнаружено, что экзогенный люлиберин в опытах ш оказывает прямое действие на гонады, влияет на секрецию инсулина в поджелудочной железе, а также изменяет ряд физиологических и биохимических параметров деятельности сердца. Эти данные указывают н а то, что в висцеральных органах может присутствовать эндогенный люлиберин, выполняющий функцию нейромедиатора или нейромодулятора. Однако, наличие эндогенного люлиберина в висцеральных органах до настоящей работы не было показано. Положительное решение этого вопроса позволит поновому взглянуть на участие люлиберина в регуляции висцеральных органов и даст основание для изучения новой функции пептида как нейромедиатора или локально действующего гормона.

В висцеральных органах были также обнаружены ферменты, разрушающие люлиберин в опытах /а/ у/тдо , но их функциональное значение остается неясным. Присутствие люлиберин-разрушающих ферментов в висцеральных органах было бы оправданным при наличии в этих органах эндогенного люлиберина: эти ферменты могли бы принимать участие в расщеплении пептида, выполняющего функцию нейромедиатора. Таким образом, два этих вопроса - наличие люлиберина и ферментов его деградации - являются принципиальными для понимания биологической роли этого пептида в висцеральных органах.

С учетом изложенных соображений, целью настоящей работы является изучение особенностей локализации и функциональной роли люлиберина, не связанных с его гормональным действием.

В первой части настоящего исследования была поставлена задача изучения распределения люлиберина в левых и правых половинах гипоталамуса у интактных и подвергнутых односторонней кастрации самцов крыс. Показано, что содержание люлиберина в левых и правых половинах гипоталамуса интактных крыс различается, причем, степень и направление асимметрии зависят от линии лабораторных животных: для крыс линии Вистар характерно повышенное содержание люлиберина в правой половине гипоталамуса, а для беспородных крыс - в левой. Асимметрия люлиберина меняется при односторонней кастрации и стрессе. Удаление правого тестикула практически не изменяет распределения люлиберина между половинами гипоталамуса, а левосторонняя кастрация приводит к значительному снижению уровня пептида в правой половине. Полученные результаты подтверждают предположение о том, что между левым и правым тестикулом и конт-ралатеральными половинами гипоталамуса существуют регуляторные ней-ральные взаимодействия, а изменение содержания люлиберина в левых и правых половинах гипоталамуса свидетельствуют об участии нейронов, содержащих люлиберин в этих взаимодействиях.

Вторая задача настоящей работы заключалась в определении эндогенного люлиберина в висцеральных органах - сердце, печени, почках, надпочечниках и кишечнике крысы. Нам удалось показать, что во всех перечисленных органах присутствует соединение, по иммунологическим и хроматографическим свойствам подобное гипотала-мическому люлиберину. Не исключено, что в регуляции деятельности висцеральных органов может принимать участие эндогенное люлиберин-подобное соединение, возможно, выполняющее функцию нейромедиато-ра и/или нейромодулятора.

Известно, что действие нейромедиаторов прекращается на синалтическом уровне вследствие разрушения специальны?.® регулятор-ными ферментами. Как уже отмечалось, в висцеральных органах присутствуют ферменты, разрушающие экзогенный люлиберин в опытах Ш у/тяс т Исходя из наших данных о наличии люлиберина в висцеральных органах, можно предположить, что одной из функций этих ферментов является деградация эндогенного люлиберина, а также других нейромедиаторов пептидной природы. В следующем разделе настоящей работы предпринята попытка охарактеризовать биохимические свойства люлиберин-разрушащих ферментов висцеральных органов, в частности, сердца и сравнить их с аналогичными ферментами гипоталамуса.

В процессе работы было установлено, что люли берин-разру-шающие ферменты из сердца, печени и гипоталамуса крысы обладают одинаковой субстратной специфичностью и близкими значениями таких биохимических параметров как молекулярная масса, оптимум рН, чувствительность к ингибиторам и др. Для люлиберин-разрушающего

2+ фермента из сердца показана аллостерическая регуляция ионами Са , что свидетельствует о функциональной роли фермента в регуляции уровня люлиберина и других пептидов в этом органе.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ I. Структура и функции гипофизотропных гормонов гипоталамуса

Основной функцией гипофиза является секреция гормонов, регулирующих деятельность эндокринных желез и висцеральных органов. Гипофиз находится в тесной морфологической связи с гипоталамусом, образуя гипоталамо-гипофизарную систему. Долгое время механизмы функциональной связи между элементами этой системы оставались неясными. В 40-х годах было установлено, что повреждение или разрушение гипофизарной ножки, связывающей гипоталамус и гипофиз, приводит к ослаблению гормональных функций передней доли гипофиза /8/. Однако, нейральные связи между гипоталамусом и гипофизом крайне ограничены и их разрушение в результате такой операции не могло быть причиной значительных изменений функционирования гипофиза. Из этих данных следовал вывод, что гипоталамический контроль секреции гипофизарных горюнов осуществляется скорее гуморальным, чем нейралъным способом. Харрис /101/ высказал предположение о существовании особых веществ, образующихся в гипоталамусе, которые попадая в гипофиз, стимулируют секрецию гипофизарных гормонов. Подтверждением этого предположения стали данные о стимуляции экстрактами гипоталамуса высвобождения адренокортикотроп-ного гормона (АКТГ) из изолированных гипофизов крысы /211/. Впос-ледствие оказалось, что гипоталамические экстракты способны не только стимулировать, но и ингибировать секрецию других гормонов гипофиза. Вещества, содежащиеся в гипоталамусе и модулирующие секрецию гипофизарных гормонов были названы рилизинг факторами, если они стимулируют высвобождение соответствующего гормона гипофиза или ингибирувдими факторами - в случае угнетения секреции гипофизарного гормона /76,99,211,215/.

Гипофизотропные факторы гипоталамуса обладают высокой биологической активностью и специфичностью, поэтому в настоящее время их относят к гормонам /25,215/. В 1975 году по рекомендации ИЮПАК были предложены новые названия гипоталамических гормонов, которые образуются добавлением окончания "-либерин" к названиям соответствующих гипофизарных гормонов (для рилизинг гормонов) или "-статин" - для ингибирующих гормонов.

Имеются данные о существовании девяти гипоталамических гормонов, контролирующих секрецию гормонов гипофиза /25/.

К настоящему времени установлены структуры тиролиберина, люлиберина, соматолиберина, соматостатина и кортиколиберина /99, 239,215,238,255/.

Эти гормоны являются олигопептидами и могут быть получены путем химического синтеза в количестве, достаточным для физиологических и биохимических экспериментов. С разработкой приемов химического синтеза гипофизотропных гормонов появилась возможность применения таких точных и высокочувствительных методов их определения как радиоиммунологический анализ (РИА), иммуногистохими-ческий метод, жидкостная хроматография высокого давления (ЖХВД).

При помощи этих методов было показано, что рилизинг-гормо-ны локализованы, в основном, в клетках туберо-инфундибулярной области гипоталамуса, то есть в аркуатных, вентромедиальных, дорсомедиальных ядрах и срединном возвышении. Аксоны большинства таких клеток оканчиваются в наружной части срединного возвышения на капиллярах первичной сети портальной системы гипофиза. Таким образом, наружная часть срединного возвышения является областью перехода гипоталамических гормонов в гипофиз, где они модулирутот секрецию соответствующих гормонов гипофиза.

Основные функции рилизинг- и ингибирующих гормонов были установлены с применением грубых гипоталамических экстрактов. На основании полученных данных была выдвинута так называемая "унитарная концепция", согласно которой, один гипоталамический фактор модулирует секрецию одного гипофизарного гормона /25/. Эта концепция нашла отражение и в названиях гипоталамических гормонов. Однако при использовании синтетических препаратов было показано, что функциональная роль этих соединений гораздо шире. Так тиролиберин, помимо стимуляции выброса тиреотропного гормона, усиливает секрецию пролактина и гормона роста /85.267/, а также стицулирует выброс гормонов нейрогипофиза - вазопрессина и окситоцина /258/. Со-матостатин ингибирует не только базаяьную, но и стимулировэнную некоторыми соединениями секрецию гормона роста /55,166,241/. Кроме того, соматостатин снижает индуцированную тиролиберином секрецию тиреотропного гормона /99,216/. Кортиколиберин стимулирует не только секрецию АКТГ, но и (Ь -эндорфина, р> -липотропина и ^ -меланотропина /43,238,255/. Люлиберин также стимулирует секрецию двух гормонов - лютеинизирующего и фолликулостимулирующего гормонов /216/. Таким образом, унитарная концепция действия гипоталамических гормонов не получила экспериментального подтверждения.

Более того, оказалось, что значительная часть "гипоталамических" пептидов локализована вне гипоаталамуса в различных отделах ЦНС и на периферии, где они выполняют функции, не связанные с регуляцией секреции гипофизарных гормонов. Так тиролиберин принимает участие в процессах терморегуляции /176/, регуляции двигательной активности /66/, а также модулирует действие некоторых фармакологических агентов на ЦНС и обладает антидепрессивной активностью /202,203/. Соматостатин, в отличие от тиро-либерина, оказывает на ЦНС депрессивное действие /122,157/. Предполагается, что в данном случае пептиды выполняют роль нейроме-диаторов и/или нейромодуляторов /157,214/.

Высокая биологическая активность и полифункциональность ставит гипоталамические нейропептиды в ряд наиболее интересных объектов современной биохимии мозга. В следующих разделах предлагаемого обзора будут подробно рассмотрены классические функции и свойства одного из рилизинг гормонов - люлиберина.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Цибезов, Валерий Владимирович

ВЫВОДЫ

1. Показано асимметричное распределение люлиберина между левыми и правыми половинами гипоталамуса крысы. Величина и направление асимметрии зависят от линии лабораторных животных: у крыс линии Вистар содержание люлиберина в правой половине гипоталамуса в среднем в 1.7 раз выше, чем в левой; у беспородных белых крыс содержание люлиберина в левой половине гипоталамуса в 1.4 раза превышает содержание в правой половине.

2. У крыс лиши Вистар асимметрия люлиберина максимальна в утренние часы (10.00-12.00) и минимальна - в вечерние (22.00-24.00).

3. Односторонняя кастрация влияет на асимметрию люлиберина у крыс линии Вистар: при удалении правого тестикула содержание люлиберина в левых и правых половинах гипоталамуса практически не изменяется. Левосторонняя кастрация приводит к уменьшению содержания люлиберина в правой половине гипоталамуса, но не изменяет в левой.

4. У беспородных белых крыс, подвергнутых холодовому стрессу, содержание люлиберина в правой половине гипоталамуса повышается, а в левой остается неизменным.

5. В сердце, печени, почках, надпочечниках и двенадцатиперстной кишке крысы обнаружено соединение, обладающее сходными с лкь либерином иммунохимическими и хроматографическими свойствами. Содержание фактора в указанных органах соответственно 46.6, 666, 460, 1.5, и 230 пг/орган. В форменных элементах крови люлиберин не обнаружен.

6. Показано, что расщепляющие люлиберин пептидазы гипоталамуса, сердца и печени не отличаются по субстратной специфичности.

7. Показано, что расщепляющие люлиберин пептидаза из сердца крысы имеет оптимум рН=7.2-8.0, молекулярную массу около 100000 Д и является сулъфгидрильным металлоферментом, а ее активность увеличивается на 50% в присутствии 5хш~%1 Са^+. Кальций, по-видимому, является аялостерическим регулятором активности фермента.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Люлиберин является одним из главшх звеньев в системе гормональной регуляции репродуктивной функции. За относительно короткий период, прошедший со времени установления структуры гормона удалось достаточно полно изучить важнейшие места его локализации в ЦНС и выяснить тонкие механизмы участия этого пептида в функционировании системы гипоталамус - гипофиз - гонады. Установлено, что местами максимальной концентрации люлиберина являются аркуатные ядра, срединное возвышение и преоптическая область. По существующим представлениям, комплекс аркуатные ядра - срединное возвышение обеспечивает тоническую, а преоптическая область - циклическую секрецию люлиберина в портатьную систему гипофиза. Были выявлены основные нейральные (катехоламинергическая система и система опиоидные пептиды - опиатные рецепторы) и гуморальные (половые стероидные гормоны) механизмы регуляции содержания и секреции гипоталамического люлиберина, а также особенности взаимодействия гормона с гипофизом. Таким образом, вопросы распределения, регуляции и функциональной роли люлиберина как гипоталамического нейрогормона в настоящее 'время изучены достаточно подробно.

В последние годы начинает интенсивно развиваться изучение новых аспектов локализации и функции пептидных гормонов гипоталамуса, в частности, люлиберина. Показано наличие люлиберина в поджелудочной железе крысы /225/ и в плаценте человека /127,232/, а также прямое влияние пептида на физиологические параметры некоторых висцеральных органов - поджелудочной железы /134/, гонад /102,109, 159/ и сердца /12-15/. Такие эффекты, по всей вероятности, осуществляются экстрагипофизарным путем и не связаны с классической ней-рогормональной функцией этого пептида. Высказывается предположение, что люлиберин может выступать не только в качестве нейрогормона, но и нейромедиатора и/или нейромодулятора. В пользу этого предположения говорят данные о наличии люлиберин-содержащих нейронов за пределами гипоталамуса /132,153,171,200,221,265/ и о его локализации в нервных терминалях симпатических ганглиев, откуда он секре-тируется при деполяризующих концентрациях ионов К+ /265,266/. Однако, изучение экстрагипофизарных функций и внегипоталамической локализации люлиберина находится пока в самых началышх стадиях. В то же время ясно, что определение новых функций люлиберина требует и новых теоретических предпосылок и методических подходов.

В первой части настоящей работы предпринята попытка выявления новых функций люлиберина в гипоталамусе, отличных от участия в регуляции секреции и синтеза гонадотропных гормонов гипофиза. Для выявления такой функции мы исходили из данных о возможности нейралышх связей между гипоталамусом и гонадами /81,82,83/. В случае участия в этих связях гипоталамического люлиберина, их одностороннее разрушение в результате односторонней кастрации должно прежде всего отражаться на содержании пептида в одной из половин гипоталамуса. Результаты наших экспериментов свидетельствуют о том, что изменение уровня люлиберина в левых и правых половинах гипоталамуса зависят от стороны кастрации: правосторонняя кастрация не влияет на распределение люлиберина между половинами гипоталамуса, а в случае левосторонней кастрации значительно снижается уровень пептида в правой половине. Секреция люлиберина из гипоталамуса при этом, по-видимому, не изменяется: уровень ЛГ в крови одинаков как при лево- так и при правосторонней кастрации. Таким образом, изменение уровня люлиберина в левых и правых половинах гипоталамуса при односторонней кастрации не связано с гормональной функцией пептида. Возможно, люлиберин в данном случае выполняет функцию нейромедиатора в нейральных связях гипоталамус - гонады.

Сейчас становится очевидным, что разделение биологически активных веществ на нейрогормоны и нейромедиаторы достаточно условно. Действительно, одно и то же соединение способно выполнять гормональную или нейромедиаторную функцию в зависимости от конечной точки его действия после выброса из клетки: нейромедиаторы взаимодействуют с постсинаптической мембраной соседнего аксона, обеспечивая проведение нервного импульса, а нейрогормоны поступают непосредственно в кровь, регулирую деятельность органов-мишеней гуморальным путем. Кроме того, нейроэндокринные клетки часто содержат несколько соединений, один из которых выполняют функции нейрогор-монов, а другие - нейромедиаторов. Как отмечает Б.В.Алешин, "тер-минали отростков нейросекреторных клеток отличаются от пресинапти-ческих окончаний типических нейронов только тем, что содержат наряду с синалтическими пузырьками также элементарные гранулы белкового (пептидного) секрета" /2/. Из сказанного следует, что нейромеди-аторная функция люлиберина может проявляться в тех люлиберин-содер-жащих нейронах, которые не имеют прямых контактов ни с кровеносными сосудами портальной системы гипофиза, ни с полостью третьего желудочка. Полученные наш данные позволяют рассматривать нейраль-ные связи гипоталамус - гонады как одну из таких систем, где люли-берин выполняет функцию нейромедиатора.

Асимметричное распределение люлиберина отмечено также у ин-тактных животных. Степень и направление этой асимметрии зависят от линии крыс и изменяются не только при односторонней кастрации, но и в течение суток, а также при стрессе, то есть, асимметрия лю -либерина в гипоталамусе связана с физиологическим состоянием животных. Возможно, асимметричное распределение люлиберина связано с его нейромедиаторной функцией. Действительно, асимметричное распределение нейромедиаторов обнаружено и в ряде других областей ЦНС. Так, асимметрия дофамина характерна для нигростриарных структур головного мозга крысы /88,268/, а латерализация норадреналина показана в таламусе крысы /189/ и человека /188/. Кроме того, асимметрия дофамина зависит от времени суток /87/, пола /50,52/ и линии лабораторных животных /52/, то есть имеет функциональное значение. Таким образом, асимметричное распределение нейромедиаторов в ЦНС не является, по-видимому, исключительным явлением и имеет определенный биологический смысл. Возможно, асимметрия нейромедиаторов и, соответственно, нейральных связей лево- и правосторонних симметричных структур ЦНС служит основой такого известного феномена как функциональная асимметрия головного мозга.

В следующем разделе работы рассмотрен еще один малоизученный аспект локализации люлиберина - наличие пептида в различных висцеральных органах. Необходимость такого исследования вытекала из уже упоминавшихся данных об экстрагипофизарной действии люлиберина на висцеральные органы. Факт наличия в висцеральных органах специфических рецепторов к лгалиберину /165/, говорит о том , что модуляция пептидом деятельности периферических органов является физиологическим эффектом этого соединения. Мы попытались ответить на вопрос о том, не моделирует ж экзогенный люлиберин эффекты эндогенного соединения, близкого по структуре или идентичного гипота-ламическому пептиду ? С помощью радиоиммунологического анализа было показано, что в сердце, печени, почках, надпочечниках и двенадцатиперстной кишке крысы присутствует фактор, по иммунохимическин и хроматографическим свойствам, подобный гипоталамическому люлибе-рину. Ранее люлиберин был обнаружен в поджелудочной железе крысы и плаценте человека. Другие гипоталамические нейрогормоны - сома-тостатин и тиролиберин обнаружены в некоторых областях ЦНС и желудочно-кишечном тракте /33,38,145,167,220/, а гипофизарный гормон

Ж1 найден в сердце, печени, легких, почках и ряде других висцеральных органах крысы, где его содержание изменяется под действием экзогенного люлиберина /16/. В связи с этим, факт наличия на периферии соединений, основными местами локализации которых до недавнего вре-, мени считались гипоталамус и гипофиз, позволяет ставить вопрос об их новых функциях в организме и является обоснованием для поиска этих функций.

Если наличие люлиберина в висцеральных органах имеет физиологическое значение, то должны существовать механизмы, регулирующие содержание пептида в этих органах. Одним из наиболее распространенных механизмов регуляции физиологически активных соединений в местах их локализации является ферментативная инактивация. Известно, что в гипоталамусе и некоторых висцеральных органах содержатся ферменты, разрушающие люлиберин /92,244/. Однако, если в гипоталамусе наличие таких ферментов биологически оправданно, то их роль в висцеральных органах оставалась неясной. Полученные нами данные о присутствии люлиберина в периферических органах позволяют предполагать, что функция люлиберин-разрушащих ферментов в этих органах заклкъ чается в регуляции эндогенного люлиберина. Следующий раздел работы посвящен изучению свойств таких ферментов.

При сравнении субстратной специфичности пептидаз гипоталамуса, печени и сердца показано сходство их кинетических характеристик. Биохимические свойства люлиберин-разрушающих ферментов из сердца (оптимум рН, влияние ингибиторов и ионного состава среды на активность фермента) оказались по целому ряду показателей сходными со свойствами гипоталамических ферментов. По-видимому, в деградации люлиберина в различных органах принимают участие ферменты, близкие по структуре и функциям. Пептидаза из сердца, расщепляющая люлиберин, является сложным регуляторным ферментом, активность которого зависит от концентрации ионов Са2+ и субстрата (люлиберина). Учитывая гипотетическую нейромедиаторную функцию люлиберина висцеральных органов, можно предположить, что люлиберин-ра.зрушающие ферменты, присутствующие в этих органах, принимают участие в регуляции уровня люлиберина на периферии.

Уже в первых работах, посвященных изучению люлиберина, высказывались предположения о возможных областях его практического применения /61,99,168,213,215/. В первую очередь речь идет об использовании люлиберина и его биологически активных аналогов в медицинской практике для лечения некоторых расстройств репродуктивной системы. Большие надежды возлагаются и на применение люлиберина длярегуляции репродуктивной функции сельскохозяйственных животных /22/. Наши данные о возможных экстрагипофизарных функциях люлиберина позволяют искать подходы к изучению люлиберина как потенциального лекарственного препарата для лечения заболеваний периферических органов. Конечно, это не ближайшая перспектива, однако, полученные результаты дают обоснованные предпосылки для дальнейшего, более глубокого и целенаправленного изучения новых функций люлиберина как в ЦНС, так и на периферии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Цибезов, Валерий Владимирович, Москва

1. Акмаев И.Г. Структурные основы механизмов регуляции эндокринных функций.-М., Наук а, 1979, с.136-138.

2. Алешин Б,В. Гистофизиология гипоталзмо-гипофизарной системы. -М., Наука, 1971, 439 с.

3. Ашмарин И.П., Еропкин М.Ю., Ковалева Т.А., Рожанец В.В. Олигопептиды мозга анальгетики, стимуляторы памяти и сна,-Мол. Биол., 1978, т.12, с.965-979.

4. Бабичев В.Н. Нейрогуморальная регуляция овариального цикла.-М., Медицина, 1984, 240 с.

5. Бабичев В.Н., Самсонова В.М., Макарян Р.Л. Роль половых гормонов в осуществлении влияния моноаминов на содержание люлиберина в гипоталамусе.- Бюлл. эксп. биол. мед., 1982, т.93 (5), с.18-20.

6. Баев В.В., Мирошников А.И., Бакалкин Г.Я., Комиссарова E.H., Исаченков В.А. Синтез и биологическая активность люлиберина и его аналогов,- Биоорган, химия, 1978, т.4(4), с.489-499.

7. Бакалкин Г.Я., Ярыгин К.Н., Исаченков В.А. Два варианта ра-диоиш^унохимического метода определения ЛГ-рилизинг фактора (ЛГ-РФ). Распределение ЛГ-РФ в некоторых гипоталамических структурах.- Пробл. эндокринол., 1976, т.22(6), с.72-76.

8. Баранов В.Г., Пропп М.В. Гипоталамическая регуляция функций гипофиза и периферических эндокринных желез.- В кн.: Физиология эндокринной системы.- Л., Наука, 1979, с.507-554.

9. Вундер П.А. Эндокринология пола.- М., Наука, 1980, 272 с.

10. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты.- М., Мир, 1966, 576 с.

11. Дмитриев А.Д., Савелова Н.В., Исаченков В.А. Фактор из пи~ неальных органов крыс и крупного рогатого скота, иммунохимически и биологически родственный люлиберину.- Пробл. эндо-кринол., 1980, т.26(1), с.47-52.

12. ИсаченковВ.А., Бакалкпн Г.Я., Кравцов Г.М., Комиссарова E.H., Побудил Н.И. Кордиотропное действие люлиберина. Взаимодействие с сарколеммальной мембраной сердца крысы.- Биохимия, 1979, т.44, с.387-393.

13. Кравцов Г.М., Исаченков В.А. Действие люлиберина на активность Ка,К-АТФазы сарколеммы сердца крысы.- Билл, эксп, биол. мед.,1979, т.87, с.222-224.

14. Кравцов Г.М., Исаченков В.А., Евтеева Т.В. Влияние ЛГ-РГ (люлиберина) гипоталамуса на электрическую активность изолированного сердца ркысы.- Физиол. журн. СССР, 1979, т.65, с.133-137.

15. Кривошеев О.Г., Исаченков В.А., Набатчикова H.A., Бадосов Е.П. Иммунореактивный лютеинизирующий гормон в ЦНС и периферических тканях гипофизэктомированных крыс.- Пробл. эндокринол., 1982, т.28(1), с.58-64.

16. Лабри Ф., Друэн Ж., де Лин А., Фермен I., Бардан Н., Белан-же А. Гормоны гипоталамуса и рецепторы гипофиза.- В кн.: Взаимодействие гормонов с рецепторами.- М., Мир, 1979,с.108-129.

17. Лосева Л.А., Дегтярь В.Г., Исаченков В.А. Роль 5<*-андро-стан-3(Ъ ,17р> -диола в осуществлении обратной связи между гонадами и гипоталамо-гипофизарной системой орхидэктомированных взрослых крыс,- Вопр. мед. химии, 1980, т.3(3), с.398-402.

18. Орлов G.H. Механизмы регуляции внутриклеточного распределения кальция,- У си. совр. биол., 1981, т.92, №1(4), с.19-34.

19. Панков 10.А. Гормоны гипофиза.- В кн.: Биохимия гормонов и гормональной регуляции.- М., Наука, 1976, с.44-92.

20. Пивоваров А.С., Беспалова Ж.Д., Бакалкин Г.Я. Торможение электрической активности зрительной коры левого и правого полушарий энкефалинами.- Докл. АН СССР, 1981, т.261(1), с.240-244.

21. Прокофьев М.И. Регуляция размножения сельскохозяйственных животных.- Л., Наука, 1983, 246 с.

22. Сахаров Д.А. Генеалогия нейронов.- М., Наука, 1974, 184 с.

23. Смагин В.Г., Виноградов В.А., Булгаков С.А. Лиганды опиат-ных рецепторов: гастроэнтерологические аспекты.- М., Наука, 1983, 272 с.

24. Юдаев Н.А., Утешева З.Ф. Гормоны гипоталамуса.- В кн.: Биохимия гормонов и гормональной регуляции.- М., Наука, 1976, с.11-43.

25. Adams Т.Е., Wagner Т., Sawer H.R., ITett Т.М. GnRH interaction with anterior pituitary. 2. Cyclic AMP as an intracellular mediator in the GnRH activated gonadotrophs. -Biol.Reproduction, 1979, v.21, p.735-747.

26. Advis J.P., Krause J.E., McKelvy J.P. Luteinizing hormone releasing hormone peptidase activities in the female rats: characterization by an assay based on high-performance liquid chromatography. Anal.Biochem., 1982, v.125, p.41-49*

27. Al-Jobore A., Confogalis B. Difference of EGTA on the apparent 0a2+-affinity of Mg2+-dependent Ca2+-stimulated ATP-ase in human erythrocyte membrane. Biochem.Biophys.Acta, 1981, v.645, p.1-9.

28. Alpert L.C., Brawer J.R., Jackson J.M., Reichlin S. Localization of LHRH in neurons in frog brain (Rana pipiens and

29. Rana caesbiana). Endocrinology, 1976, v.98, p.910-921.

30. Alumets J., Sundler P., Hakanson R. Distribution, ontogeny and ultrastructure of somatostatin immunoreactive cells in the pancreas and gut. Cell Tissue Res., 1977, v.185,p.465-479.

31. Ammos II., Schally A.V. Purification amino acid compssition and N-terminus of the hypothalamic luteinizing hormone releasing hormone of ovine origin. Biochem.Biophys.Res.Comm., 1971, v.44, p.205-207.

32. Andrews P.O., Ilines C.M., Dixon J.E. Characterization of proline endopeptidase from rat brain. Biochemistry, 1980, v.19, p.5494-5500.

33. Anopyan J.N., Arulunyan A.A., Oganisyan A.I., Laittia A., Galoyan A.A. Breakdown of hypothalamic peptides by hypothalamic neutral endopeptidase. J.Neurochem., 1979» v. 32, p.629-631.

34. Araki S., Toran-Allerand C.D., Ferin M., Vandle Viller R. Immunoreactive gonadotropin-releasing hormone (GnRH) during maturation in the rat: ontogeny of regional hypothalamic differences. Endocrinology, 1975, v.97, p.693-697.

35. Asai T., Wakabayashi IC. Changes of hypothalamic LHRH content during the rat estrous cycle. Endocrinology Japan, 1975, v.22, p.319-326.

36. Baba Y., Matsuo H., Schally A.V. Structure of porcine LH and PSH releasing hormone. 2. Conformation of the proposed structure by conventional sequential analysis. Biochem. Biophys.Res.Comm., 1971, v.44, p.459-463.

37. Backer B.L., Dermody W.C., Reel J.R. Distribution of gonadotropin-releasing hormone in the rat brain as observed with immunocytochemistry. Endocrinology, 1975, v.97, p.125-135.

38. Bakalkin G.Ya., Krivosheev O.G., Stolyarov G.M. Postural asymmetry in rats induced by stress and pain stimuli. -Life Sci., 1982, v.30, p.779-783.

39. Barnett P.K., Sohn J., Reichlin S., Jackson J.M.D. Three luteinizing hormone releasing hormone like substances in a teleost fish brain: none identifical with the mammalian LHRH decapeptide. Biochem.Biophys.Res.Comm., 1982, v.105, p.209-216.

40. Barraclough C.A., Sawyer C.H. Inhibition of the release of pituitary ovulatory hormone in the rat by morphine. Endocrinology, 1955, v.57, p.329-334.

41. Barry J. Characterization and topography of LHRH neurons in the rat brain. Ueurosci.Lett., 1976, v.2, p.201-205.

42. Barry J., Dubois IvI.P., Poulain P. LRF producing cells in the mammalian hypothalamus. A fluorescent antibody study. Z. Zelloforsch., 1973, v.146, p.351-366.

43. Bauer K., Knisatschek H., Horsthemke B., Sievers J. Proteolytic enzymes and neuropeptide metabolism. In: Neuropeptides: Biochemical and Physiological Studies, 1981, Churchill Livingstone, Edinburg, p.151-172.

44. Becker J.B., Robinson T.E., Lorenz K.A. Sex differences and estrous cycle variations in amphetamine-elicited rotational behavior. Eur.J.Pharmacol., 1982, v.80, p.65-72.

45. Blank M.S., Panerai A.I., Preisen H.G. Effects of naloxone of luteinizing hormone and prolactin in serum of rats. J. Endocrinol., 1980, v.85, p.307-315«

46. Brown M., Vale W. Central nervous system effects of hypothalamic peptides. Endocrinology, 1975, v.96, p.1333-1336.

47. Brown IvI., Vale W. Growth hormone release in the rat: effects of somatostatin and thyrotropin releasing factor. Endocrinology, 1975, v. 97, p.1151-1156.

48. Burgus R., Butcher M., Ammos M., Ling N. et al. Primary structure of the ovine hypothalamic luteinizing hormone releasing factor. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1972, v.69, p.278-282.

49. Chazov E.I., Bakalkin G.Ya., Yarygin K.N., Trushina E.D., Titov M.I., Smirnov V.N. Encephalins induced asymmetrical effects on posture in the rats. Experientia, 1981, v.37, p.887-888.

50. Cheung W.Y. Calmodulin. Science, 1980, v.207, p.19-21.

51. Cicero T.J., Badger T.M., Wilcox C.E., Bell R.D., Meyer E.R. Morphine decreases luteinizing hormone by an action of the hypothalamic-pituitary axis. J.Pharmacol.Exp.Ther., 1977, v.203, p.548-555.

52. Cicero T.J., Meyer E.R., Gabriel S.M., Bell R.D., Wilcox C.E. Morphine exerts testosterone like effects in the hypothalamus of the castrated male rats. Brain.Res., 1980, v. 202, p.151-164.

53. Clayton R.N. Hypothalamic releasing hormones: therapeuticus potential of gonadotropin-releasing hormone: a review. -Quarterly J.Med., 1984, v.209, p.17-27.

54. Conn P.M., Rogers D.C. Gonadotropin release from pituitary cultures following activation of endogenous ion channel. -Endocrinology, 1980, v.1-7, p.2133-2140.

55. Conn P.M., Rogers D.C., Sheffild T. Inhibition of gonadotropin-releasing hormone-stimulated luteinizing hormone release by pimozide: evidence for a site of action after calcium mobilization. Endocrinology, 1981, v.109, p.1122-1126.

56. Corbin A. Pituitary and plasma LH of ovariectomized rats with median eminence implants of LH. Endocrinology, 1966, v.78, p.893-896.

57. Curtis A., Pink J. A high molecular weight precursor of luteinizing hormone releasing hormone from rat hypothalamus. -Endocrinology, 1983, v.112, p.390-392.

58. David M.A., Praschini P., Martini L. Control of LH secretion: role of a "schort" feedback mechanism. Endocrinology, 1966, v.78, p. 55-60.

59. Davis J.C., Farese R.V., Clark M.R. Gonadotropin releasing hormone (GnRH) stimulates phosphatidylinositol metabolism in rat granullosa cells: mechanism of action of GnRH.

60. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1983, v.80, p.2049-2053.

61. Dockrey G.J., Gregory R.A. Relations between neuropeptides and gut hormones. Proc.R.Soc.Lond., 1980, v.210, p.151-164.

62. Fink G. The development of the releasing factor concept. -Clinical Endocrinology, 1976, v.5 Suppl., p.245s-260s.

63. Fujimuto W.Y. Somatostatin inhibition of glucose-, tolbut-, amide-, theophilline-, cytochalsin-, and calcium stimulated insulin release in monolayer cultures of rat endocrine pancreas. Endocrinology, 1975, v.97, p.1494-1500.

64. Gerendai I., Halaz B. Participation of a pure neuronal mechanism in the control of gonadal functions. Andrologia, 1981, v.13, p.275-282.

65. Gerendai I., Racz K. Significant differences in the RNA-syn-thesing activity between two sides of the hypothalamic arcuate nucleus following unilateral orchidectomy. Acta, Biol.Acad.Sci. Hung., 1975, v.26, p.229-231.

66. Gerendai I., Rotstein W.H., Marchetti B., Kordon S., Scapa-gnini U. Unilateral overiectomy-induced luteinizing hormone releasing hormone changes in two halves of the mediobasal hypothalamus. Ueurosci.Lett., 1978, v.9, p.333-336.

67. Gerendai I., Rotsztejn W., Marchetti B., Scapagnini U. LHRH content changes in the mediobasal hypothalamus after unilateral ovariectomy. In: Neuroendocrinology: biological and clinical aspects, 1979, Academic Press, N.Y., p.365-369.

68. Gibbons J.M., Mitnick M., Cheffo V. In vitro biosynthesis TSH- and LH-releasing factors by the human placenta. Am. J.Obst.Gynecol., 1975, v.121, p.127-131.

69. Glick S.D., Cox R.D. Hoctural rotation in normal rats: correlation with amphetamine-rotation and effects of nigrostrial lesions. Brain Res., 1978, v.150, p.149-161.

70. Glick S.D., Jerussi T.P. , Cox R.L. , Flescher L.H. Pre- and postsynaptic actions of apomorphine differentiation "by rotatory effects in normal rats. Arch.Int.Pharmacodyn., 1977, v.225, p.303-307.

71. Glick S.D., Jerussi T.P. , Fleischer L.H. Turning in circles: the neuropharmacology of rotation. Life Sci., 1976, v.18, p.889-896.

72. Glick S.P., Jerussi T.P., Waters D.H., Green J.P. Amphetamine-induced changes in the striatal dopamine and acetylcholine levels and relationship to rotation (circling behavior) in rats. Biochem.Pharmacol., 1974, v.23, p.3223-3225*

73. Gomez-Pan A., Reed J.D., Albimus M., Shaw B., Hall R. et al. Direct inhibition of gastric acid and pepsin secretion by growth hormone release inhibiting hormone in cat. Lancet, 1975, v.l (7912), p.888-890.

74. Griffits E.C. Peptidase inactivation of hypothalamic releasing hormones. Hormone Res., 1976, v.7, p.179-191.

75. Griffits E.C., Hooper K.C. Changes hypothalamic peptidase activity during the estrous cycle in the adult female rat. Acta Endocrinol. (Copenhagen), 1973, v.74, p.41-48.

76. Griffits E.C., Hooper K.C., Hopkinson C.P.M. Evidence for an enzymic component in the rat hypothalamus capable of inactivating luteinizing hormone releasing hormone. Acta Endocrinol. (Copenhagen), 1973, v.74, p.49-55*

77. Griffits E.C., Hooper K.C., Jeffcoate S.L., Holland D.T. The presence of peptidases in the rat hypothalamus inactivating luteinizing hormone releasing hormone (LHRH). -Acta Endocrinol. (Copenhagen), 1974, v.77, p.453-442.

78. Griffits E.C., Hooper K.C., Jeffcoate S.L., Holland D.T. The effects of gonadoectomy and gonadal steroids on the activity of hypothalamic peptidases inactivating luteinizing hormone releasing hormone (LHRH). Brain.Res., 1975, v.88, p.384-388.

79. Griffita E.C., Kelly J.A., Forbes R. The role of enzymic degradation of brain peptides in neuroendocrine control. Ins "Brain peptides: a new endocrinology", 1979, Elsevier/North-Hollana, Amsterdam, p.197-209.

80. Gross D.S. Effect of castration and steroid replacement on immunoreactive gonadotropin releasing hormone in the hypothalamus and preoptic area. Endocrinology, 1980, v.106, p.1442-1450.

81. Guillemin R. Peptides in the brain: a new endocrinology of the neuron. Science, 1978, v.202(4366), p.390-402.

82. Hall R.W. , Steinberg E. Synthesis of LHRH by rat hypothalamic tissue in vitro. 1. Use of specific antibody to LHRH for immunoprecipitation. Neuroendocrinology, 1976, v.21, p.111-119.

83. Harris G.W. Neural control of the pituitary gland. -Eduard Arnold, London, 1961, 298 p.

84. Heber D., Bhasin S., Swerdloff R.S. Extrapituitary effects of GnRH agonist and testicular GnRH-like peptide. Arch. Androl., 1982, v.9, p.71-72.

85. Hersh L.B., McKelvy J.F. Enzymes involved in the degradation of thyrotropin releasing hormone (TRH) and luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) in bovine brain. -Brain Res., 1979, v.168, p.553-557.

86. Horsthemke B., Knisatchek H. , Rivier J., Sandow J., Bauer K. Degradation of luteinizing hormone releasing hormone and analogs by adenohypophyseal peptidases. -Biochem.Biophys.Res.Comm., 1981, v.100, p.753-759.

87. Hsuech A.J.M., Erickson G.R. Extrapituitary action of gonadotropin releasing hormonei direct inhibition of ovarian steroidogenesis. Science, 1979, v.204(4395), p. 854-855.

88. Hsuech A.J.W., Erickson G.R. Extrapituitary inhibition of testicular function by luteinizing hormone-releasing hormone. Nature, 1979, v.281, p.66-67.

89. Hsuech A.J.W., Ling N.C. Effect of an antagonistic analog of gonadotropin releasing hormone upon ovarian granulosa cell function. Life Sci., 1979, v.25, p.1223-1230.

90. Jerussi T.P., Glick S.D. Amphetamine-induced rotation in normal rats without lesions. Neuropharmacology, 1974, v.13, p.283-286.

91. Kalra P.S., Kalpa S.P. Discriminative effects of testosterone on hypothalamic luteinizing hormone-releasing hormone levels and luteinizing hormone secretion in castrated male rats: analysis of dose and duration characteristics.

92. Endocrinology, 1982, v.Ill, p.24-29.

93. Kastin A.J., Olson R.D., Schally A.V., Coy D.H. CNS effects of peripherally administered "brain peptides. Life Sci. , 1979, v.25, p.401-414.

94. Kauru M., Xoshihisa H., Takashi M., Matsuo E., Yoshitaka T., Masao I., Kenji K., Hisayuki M. Isolation and characterization of chicken hypothalamic luteinizing hormone releasing hormone. Biochem.Biophys.Res.Comm., 1982, v.107, p.820-827.

95. Kawakami M., Kubo K., Uemura T., Nagase M. Evidence for the existence of extra-hypophyseal neural mechanisms controlling ovarian steroid secretion. J.Steroid Biochem. , 1979, v.ll, p.1001-1005.

96. Kerdelhue B., Palkovits M., Karteczi M., Reinberg A. Cir-kadian variation in substance P, LHRH, TRH contents in hypothalamic and extrahypothalamic brain nuclei of adult male rats. Brain Res., 1981, v.206, p.405-413.

97. Khodr G.S., Siler-Khodr T.M. Studies of LRF in pregnancy: Levels in maternal, placental, amniotic and fetal tissues. Endocrinology, 1977, v.100, p.335-340.

98. Khodr G.S., Siler-Khodr T.M. Localization of luteinizing hormone-releasing factor in the human placenta. Fertility and Sterility, 1978, v.29, p.523-526.

99. Khodr G.S., Siler-Khodr T.M. The effect of luteinizing hormone-releasing factor on human chorionic gonadotropinsecretion. Fertility and Sterility, 1978, v.30, p.301-304.

100. King J.A., Millar R.P. Comparative aspects of luteinizing hormone releasing hormone structure and function in vertebrate phylogeny. Endocrinology, 1980, v.106, p.707-717.

101. Klier M., Shusdziarra V. , Pfeiffer E.F. Effect of luteinizing hormone releasing hormone upon insulin release from rat islets in vitro. FEBS Lett., 1980, v.121, p.363-364.

102. Knisatschek H., Bauer K. Characterization of "thyroliberin deaminating enzyme" as a post-proline-cleaving enzyme.-J.Biol.Chem., 1979, v.254, p.10936-10943.

103. Kobayashi R.M., Lu K.N., Moore R.I., Yen S.S.C. Regional distribution of hypothalamic LHRH in proestrous rats: effects of ovariectomy and estrogen replacement. Endocrinology, 1978, v.102 , p.98-105

104. Koch I., Baram T., Chobsieng P., Fridkin M. Enzymic degradation of luteinizing hormone-releasing hormone (LHRH) by hypothalamic tissue. Biochem.Biophys.Res.Comm., 1974,v. 61, p.95-103.

105. Kochman K., Kerdelhue B., Ostrowska A., Chomicka L., Doman-ski E., Jutisz M. Biosynthesis in vitro of gonadotropin releasing hormone in hypothalamus of normal and ovariecto-mized rats. Bol.Cell.Endocrinol., 1982, v.25, p.193-202.

106. Kochman K., Kerdelhue B., Zor Ü., Jutisz M. Studies of enzymatic degradation of luteinizing hormone releasing hormone by different tissues. FEBS Lett., 1975, v.50, p.190-194.

107. Koida M., Walter R. Post-proline cleaving enzyme: purification of this endopeptidase by affinity chromatography. J.Biol.Chem., 1976, v.251, p.7593-7599.

108. Koning J., Tijssen A., van Dieten J., van Rees G. Effect2+of Ca deprivation on release of luteinizing hormone induced by luteinizing hormone releasing hormone from female rat pituitary gland in vitro. J.Endocrinol., 1982, v.94, p.11-20.

109. Krause J.E. , Advis J.P. , McKelvy J. p. In vitro biosynthesis of hypothalamic luteinizing hormone releasing hormone in individual free-running rats. Endocrinology, 1982, v.lll, p.344-346.

110. Kubek M.J., Lorincz M.A., Wilber J.P. The identification of thyrotropin releasing hormone (TRH) in hypothalamic and extrahypothalamic loci of the human nervous system. -Brain.Res., 1977, v.126, p.196-200.

111. Kubek M.J., Wilber J.F., Leesthma J.E. The identification of gonadotropin-releasing hormone in hypothalamic and extrahypothalamic loci in the human nervous system. Horm. Metab.Res•, 1979, v.11, p.26-29.

112. Kubiak T., Lundanes E., Rampold G. , Folkers K. Models of a prohormone of the luteinizing hormone-releasing hormone (LHRH) and enzymatic conversion of these models to LHRH.- J.Appl.Biochem., 1981, v.3, p.351-361.

113. Kuhl H., Rosniatowski C., Taubert H. Effect of sex hormones on LHRH degrading hypothalamic enzyme system during estrous cycle in rats. Endocrinol.Exp., 1979, v.13, p.29-38.

114. Kuhl H., Taubert H. Inactivation of luteinizing hormone releasing hormone by rat hypothalamic L-Cysteine arylamidase.- Acta Endocrinol.(Copenhagen), 1975, v.78, p.634-648.

115. Kuhl H., Taubert H. Short loop mechanism of luteinizing hormone: LH stimulates hypothalamic L-Cysteine arylamidase to inactivate LI-IRH in the rat hypothalamus. Acta Endocrinol. (Copenhagen), 1975, v.78, p.649-663.

116. Kuroghima A., Ishida X., Bowers C.I., Schally A.V. Stimulation of release of follicle stimulating hormone by hypothalamic extract in vitro and in vivo. Endocrinology, 1975, v.76, p.614-619.

117. Libertun C. , Timiaras S., Kragt C. Sexual differences in the hypothalamic cholinergic system before and after puberty: inductory effect of testosterone. Neuroendocri-nology, 1973, v.12, p.73-85.

118. Liposits Z. , Setalo G. Destending luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) nerve fibers to the midbrain of the rats. Neurosci.Lett., 1980, v.20, p.1-4.

119. Lowry O.H., Rosenbrough N. J., Parr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J.Biol. Chern., 1951, v.193, p.265-267.

120. Luft R., Efendic s., Hokfeldt t. Somatostatin both hormone and neurotransmitter. - Diabetologia, 1978, v.14,p.1-13.

121. Lundquist J., Suddler F., Ahren B., Aluments J., Hakanson R. Somatostatin, pancreatic polypeptide, substance P and neurotensin: cellular distribution and effects on stimulated insulin in the mouse. Endocrinology, 1979, v.104, p. 832-838.

122. Magoffin D.A., Erickson G.F. Mechanism by which GnRH inhibits androgen synthesis directly in ovarian interstitial cells. Mol.Cell.Endocrinol., 1982, v.27, p.191-198.

123. Marian J., Conn P.M. Subcellular localization of the receptor for gonadotropin releasing hormone in pituitary and ovarian tissue. Endocrinology, 1983» v.112, p.104-112.

124. Marks N. Biodégradation of hormonally active peptides in the central nervous system. In; "Subcellular mechanisms in reproductive endocrinology", 1976, Elsevier, Amsterdam, p.129-147.

125. Marshall J.C., Scheakspear R.A., Odell W.D. LHRH-pituitary plasma membranes binding: the presence specific binding sites in other tissues. Clin.Endocrinol., 1976, v.5,p.671-677.

126. Martin J.B., Andet J., Sandders A. Effects of somatostatin and hypothalamic ventromedial lesions on a GH release induced by morphine. Endocrinology, 1975, v.97, p.839-847.

127. Martino E., Lernmark A., Seo H., Steiner D.F. , Refetoff S. High concentration of thyrotropin releasing hormone in pancreatic islets. Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1978, v.75,p.4265-4267.

128. McCann S.M. LH-releasing hormone past, present and future. - Folia Endocrinol.Jap., 1982, v.58, p.259-271.

129. McCann S.H. , Talesnik A. , Friedman H.M. LH-releasing activity in hypothalamic extracts. Proc.Soc.Exp.Biol.Med., I960, v.104, p.432-434.

130. Means A.R., Dedman J.R. Calmodulin: an intracellular calcium receptor. Nature, 1980, v.285, p.73-75»

131. Merchenthaller J., Gores T., Setalo G. , Perutz P., Flerko B. Gonadotropin-releasing hormone (GnRH) neurons and pathways in the rat brain. Cell Tissue Res., 1984, v.237,p.15-29.

132. Millar R.P., Achelt C., Rossier G. Higher molecular weight immunoreactive species of luteinizing hormone releasing hormone: possible precursors of the hormone. Biochem. Biophys.Res.Comm., 1977, v.74, p.720-731.

133. Moss R.L. , McCann S.M., Dudley C.A. Releasing hormones and sexual behavior. Progr.Brain Res., 1975, v.42, p.37-46.

134. Myers R.D., Metcaff G., Rice J.C. Identification by microinjection of TRH-sensitive sites in the cat's brain stem that mediate respiratory, temperature and other autonomic changes. Brain Res., 1977, v.126, p.105-115.

135. Myslobodsky M., Rosen J. Hemispheric asymmetry of pentame-thylenetetrasol-induced wave-soike dischanges and motor imbalance in rats. Epilepsia, 1979, v.20, p.377-386.

136. Myslobodsky M., Shavit Y. Hemispheric asymmetry of visual evoken potentials with motor imbalance in rats. Brain Res., 1978, v.157, p.356-359.

137. Nakono H., Kimura F., Fawesett C.P., McCann S.M. Evidence for the involvement of c-GMP in the regulation of gonadotropin release. Endocrinology, 1978, v.103, p.1527-1533«

138. Nallar R., McCann S.M. Luteinizing hormone releasing activity in plasma of hypophysectomized rats. Endocrinology, 1965, v.76, p.272-275.

139. Naor Z. , Koch Y., Chobsieng R., Zor U. Pituitary cyclic amp production and mechanism of luteinizing hormone production. FEBS Lett., 1975, v.58, p.318-321.

140. Nicolics K., Czoke B., Keri G., Teplan J. Gonadotropin releasing hormone (GnRH) is not degraded by intact pituitary tissue in vitro. Biochem.Biophys.Res.Comm., 1983, v. 114, p.1028-1035.

141. Noe B.D. , Fletcher D.J., Baner G.E., Weir G.C., Patel Y. Somatostatin biosynthesis occurs in pancreatic islets. -Endocrinology, 1978, v.102, p.1675-1685.

142. Oke A., Keller R., Mefford J., Adams R.N. Lateralization of norepinephrin in human thalamus. Science, 1978, v.200, p.1411-1413.

143. Oke A., Lewis R., Adams R.N. Hemispheric asymmetry of norepinephrin distribution in rat thalamus. Brain Res., 1980, v.188, p.269-272.

144. Oliver C., Eskay R.L., Ben-Jonathan N., Porter J.C. Distribution of TRH in rat brain. Endocrinology, 1974, v.95,p.540-546.

145. Oliver C., Mical R.C., Porter J.C. Hypothalamic-pituitary vasculature. Evidence for retrograde blood flow in the pituitary stalk. Endocrinology, 1977, v.101, p.598-604.

146. Palkovits M., Arimura A., Brownstein M., Schally A.V., Saavedra J.M. Luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) content on the hypothalamic nuclei in rat. Endocrinology, 1974, v.95, p.554-558.

147. Palkovits M., Mezey E., Ambach G., Kivovics P. Neural and vascular connections between organum vasculosum laminae terminalis and preoptic nuclei. In: "Brain-endocrine interaction", 1978, v.3, Karger, Basel, p.302-312.

148. Parker R.C., Foreman M.M., Porter J.C. Subcellular localization of luteinizing hormone releasing hormone degrading activity in the hypothalamus. Brain Res., 1979, v.174,p.221-229. '

149. Parker R.C. , Neaves W.B. , Barnea A., Porter J.C. Studies of the subsinaptosomal localization of luteinizing hormone releasing hormone in the rat hypothalamus. Endocrinology, 1978, v.102, p.1167-1175.

150. Parvizi N., Ellendorff P. -Endorphin alters luteinizing hormone secretion via the amygdala but not hypothalamus. -Nature, 1980, v.286, p.812-813.

151. Patel J.C., Reichlin S. Somatostatin in hypothalamus, ex-trahypothalamic brain and peripheral tissue of rat brain. Endocrinology, 1978, v.102, p.523-530.

152. Pearse A.G.E. , Takor T.T. Neuroendocrine embryology and the APUD concept. Clin.Endocrinol*, 1976, v.5 (Suppl.), p. 229s-244s.

153. Phelps C.P., Krieg J., Sawyer C.H. Spontaneous and electro-chemically stimulated changes in plasma LH in the female rat following hypothalamic deafferentation. Brain Res., 1976, v.101, p.239-249.

154. Phillips H.S., Ho b. t., Linner J.G. Ultrastructural localization of LHRH- imrnun ore active synapses in the hamster accessory olfactory bulb. Brain Res., 1982, v.246, p. 193-204.

155. Piva F. , Limonta P., Martini L. Role of the organum vascu-losum laminae terminalis in the control of gonadotropin secretion in rats. J.Endocrinol., 1982, v.93, p.355-364«

156. Rotsztegn W.N., Charli J.L., Pattou E., Epelbaum J.E., Kordon C. In vitro release luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) from rat mediobasal hypothalamus: effect of potassium, calcium and dopamine. Endocrinology, 1976,v.99, p.1663-1667.

157. Rotsztein W.N., Charli J.L., Pattou E., Kordon C. Stimulation by dopamine of luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) release from mediobasal hypothalamus in male rats. -Endocrinology, 1977, v.101, p.1475-1483.

158. Rotsztein W.N., Druova S.V., Pattou E., Kordon C. Effect of morphine on the basal and dopamine-induced release of LHRH from mediobasal hypothalamus fragments in vitro. -Eur.J.Pharmacol., 1978, v.50, p.285-289.

159. Rotsztein W.N., Druova S.V., Pattou E., Kordon C. Met-enke-phalin inhibits in vitro dopamine-induced LHRH release from mediobasal hypothalamus of male rats. Nature, 1978, v.274, p.281-282.

160. Rotstene (Rotsztejn) W.N. , Druova S.V., Pollard H., Soko-loff P., Pattou E., Kordon C. Further evidence for the existence of opiate binding sites on neurosecretory LHRHmediobasal hypothalamus terminalis. J.Pharmacol,, 1982, v.80, p.131-141.

161. Saffran M., Schally A. Release corticotropin by anterior pituitary tissue in vitro. Can.J.Biochem.Physiol., 1955, V.33, p.408-415.

162. Sandow J. Clinical application of the LHRH and its analogues. Clinical.Endocrinol., 1983, v.18, p.571-592.

163. Schaeffer J.M., Brownstein M.J. Ontogeny of TRH-like material in several regions of the rat brain. Brain Res., 1980, v.182, p.207-210.

164. Schally A.V. Aspects of the hypothalamic regulation of the pituitary gland. Science, 1978, v.202, p.18-28.

165. Schally A.V., Arimura A., Kastin A.J., Matsuo H. et al. Gonadotropin releasing hormone: one polypeptide regulates secretion of luteinizing and follicle-stimulating hormones. Science, 1971, v.178, p.1036-1038.

166. Schally A.V., Baba Y., Redding T.W., Matsuo H., Arimura A. Further studies on the enzymatic and chemical inactivation of hypothalamic PSH-RH. ITeuroendocrinology, 1971, v.8, p.347-358.

167. Schally A.V., Bowers C.Y. Purification of leuteinizing hormone releasing factor from bovine hypothalamus. Endocrinology, 1964, v.75, p.608-614.

168. Schambaugh G., Kubek M., Wilber J. Thyrotropin-releasing hormone activity in human placenta. J.Clin.Endocrinol., Metab., 1979, v.48, p.483-486.

169. Schwanzel-Fukuda M., Silverman A. The nervus terminalis of the guinea pig: a new luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) neuronal system. J.Comp.Heurol., 1980, v.191, p.213-225.

170. Schwartz W.J., Gunn R.H., Sharp F.R., Evarts E.V. Unilateral electrolytic lesions of the substantia nigra cause contralateral circling in rats. Brain Res., 1976, v.105, p.358-361.

171. Selmanoff U.K. The lateral and medial median eminence: distribution of dopamine, norepinerphine and LHRH and the effect of prolactin on catecholamine turnover. Endocrinology, 1981, v.108, p.1716-1722.

172. Selmanoff M.K., Wise P.M., Barraclough C.A. Regional distribution of LHRH in rat brain determined by microdissection and RIA. Brain Res., 1980, v.192, p.421-429.

173. Seppala M., Wahlstrom T., Leppaluto J. Luteinizing hormone releasing factor (LRF)-like immunoreactivity in rat pancreatic islet cells. Life Sci., 1979, v.25, p.1489-1496.

174. Setalo G., Vigh S., Schally A.V., Arimura A., Flerko B. LHRH-containing neural elements in the rat hypothalamus. -Endocrinology, 1975, v.96, p.132-142.

175. Sharpe R.M., Eraser H.M., Cooper J., Rommerts P.P. Sertoly--Leyding cells communication via LHRH-like factor. Nature, 1981, v.290, p.785-787.

176. Shin S.H., Howit G. Effect of castration on LH and LHRH in male rats. J.Endocrinol., 1975, v.65, p.447-448.

177. Shin S.H., Howit C., Milligan J.V. A paradoxal castration effect on LHRH levels in male rat hypothalamus and serum. Life Sci., 1974, v.14, p.2491-2496.

178. Shiviers B., Harlan R., Morell J., Plaff D. Immunocytoche-mica.1 localization of luteinizing hormone releasing hormone in male and female rat brains. Quantitative studies of the effect of gonadal steroids. Keuroendocrinology, 1983, v.36, p.1-12.

179. Siler-Khodr T.M., Khodr G. Luteinizing hormone releasing factor content in human placenta. Am.J.Obstet.Gynecol., 1978, v.130, p.216-219.

180. Silverman A.J., Krey L.C., Zimmerman E.A. A comparative study of the luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) neuronal network in mammals. Biol.Reprod., 1979, v.20, p.98-110.

181. Simantov R., Kuhar M.J., Uhr G.R., Snyder S.H. Opioid peptide encephalin: immunocytochemical mapping in the central nervous system. Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1977, v.74, p. 2167-2169.

182. Simpkins J.W., Kalra S.P. Blockade of progesterone-induced increase in hypothalamic luteinizing hormone-releasing hormone levels and serum gonadotropins by intrahypothalamic implantation of 6-hydroxydopamine. Brain Res., 1979, v. 170, p.475-482.

183. Snyder G.D., Bleasdale J.E. Effect of LHRH on incorpora32tion of ^ P-ortophosphate onto phosphatidylinositol by dispersed anterior pituitary cells. Mol.Cell.Endocrinol., 1982,' v.28, p.55-63.

184. Spiess J., Rivier J., Rivier C., Vale W. Primary structure of corticotropin releasing factor from ovine hypothalamus. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1981, v.78, p.6517-6521.

185. Spiess J., Rivier J., Vale W. Characterization of rat hypothalamic growth hormone-releasing factor. Nature, 1983, v.303, p.532-535.

186. Spona J. LHRH stimulated gonadotropin release mediated by two distinct pituitary receptors. PEBS Lett., 1973, v.35, p.59-62.

187. Stachura M.E. Interaction somatostatin inhibition and dibu-tyryl cyclic AMP or potassium stimulation of growth hormone release from perfused rat pituitarios. Endocrinology, 1977, v.101, p.1044-1053.

188. Suszkiv J.B., Brecher A.S. Brain aminoacyl arylamidase. Further purification of the soluble bovine enzyme and studies on substrate specificity and possible active-aite residues. Biochemistry, 1970, v.9, p.4008-4017.

189. Sutherland E. Studies of the mechanism of hormone action. -Science, 1972, v.177, p.401-408.

190. Swift A.D., Grighton P.B. Relative activity plasma elimination and tissue degradation of synthetic luteinizing hormonereleasing hormone and certain of its analogues. J.Endocrinol., 1979» v.80, p.141-152.

191. Swift A.D., Grighton D.B. The effect of certain steroid hormones on the activity of ovine hypothalamic luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) degrading enz ymes. -PEBS Lett., 1979, v.100, p.110-112.

192. Szabo G., Endroczi E. The need of protein synthesis for the effect of LHRH on the cAMP level in the anterior pituitary in vitro. Acta Physiol.Acad.Sci.Hung., 1981, v.58, p. 189-195.

193. Takahashi T., Yoshikawa M., Honda S., Shigesane K., Sato Y. Distribution and excretion of or "^C-luteinizing hormone releasing hormone. Pharmacometries, 1974, v.8, p. 1319-1333.

194. Tate A.C., Swift A.D. The effect of sex steroids on the degradation of LHRH by hypothalamic homogenates. Acta Endocrinol., 1981, v.98, p.321-325.

195. Tramu G., Leonardelli J. Immunohistochemical localization of enkephalins in median eminence and adenohypophysis. -Brain Res., 1979, v.168, p.457-464.

196. Ungerstedt U. 6-hydroxydopamine induced degeneration of central monoamine neurons. Eur.J.Pharmacol., 1968, v.5» p.107-110.

197. Ungerstedt U. Postsynaptic supersensitivity after after 6-0H-dopamine induced degeneration of the nigrostriatal dopamine system. Acta Physiol.Scand., 1971, Suppl. 367, p.69-93.

198. Vale W., Brazeau P., Rivier C., Brown H. et al. Somatostatin. Rec.Progr.Horm.Res., 1975, v.31, p.365-397.

199. Vale W., Spiess J., Rivier C., Rivier J. Characterization of a 41-residue ovine hypothalamic peptide that stimulates secretion of corticotropin and p> -endorphin. Science, 1981, v.213, p.1934-1937.

200. Watanabe K. Regional differences in the development of luteinizing hormone releasing hormone nerve endings in the rat. Endocrinology, 1980, v.106, p.139-144.

201. Weiner R.J., Pattou E., Kerdelhue B., Kordon C. Differential effect of hypothalamic deafferentation upon LHRH in the median eminence and oranum vasculosum of the lamina terminalis. Endocrinology, 1975, v.97, p.1597-1600.

202. Weitzman E., Eiremark H., Glatz T., Fisher D.A. Thyrotropin-releasing hormone stimulates release of arginine vasop-pressin and oxytocin in vitro. Endocrinology, 1979, v. 104, p.904-907.

203. Wender T., Kerdelhue B., Halasz B. Short-term effects of the lesion of the OVLT on hypothalamic LHRH and serum LH, FSH and prolactin in adult female rats. Neuroendocrino-logy, 1979, v.29, p.276-280.

204. Wheaton J.E., Krulich L., McCann S.M. Localization of luteinizing hormone releasing hormone in the preoptic area and hypothalamus of the rat using radioimmunoassay. Endocrinology, 1975, v. 97, p.30-38.

205. Wiegant V.M., Zwiers H., Gispen W.H. Neuropeptides, brain cAMP and phosphoproteins. Pharmacol.Ther., 1981, v.12, p.463-490.

206. Wilk S., Pears S., Orlowski IvI. Identification and partial purification of a calcium-sensitive neutral endopeptidase from bovine pituitaries. Life Sci., 1979, v.24, p.467-464.

207. Williams J.A. Stimulation of 45Ca2+ efflux from rat pituitary by LHRH and other pituitary stimulators. J.Physiol., 1976, v.260, p.105-110.

208. Yan L.Y., Yan Y.N. Role of an LHRH like peptide as a neurotransmitters in sympathic ganglia of the frog. Fed.Proc., 1981, v.40, p.2560-2564.

209. Yan Y.N., Yan L.Y. A peptide as a possible transmitter in sympathic ganglia of the frog. Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1979, v.76, p.1501-1505.267« Zanini A., Giannittasio G., De Camilli P., Panerai A.,

210. Muller E., Meldolesi J. Studies on rat pituitary homografs. 1. In vitro biosynthesis and release of growth hormone and prolactin. Endocrinology, 1979, v.104, p.226-236.

211. Zimmerberg B., Glick S.D., Jerussi T.P. Neurochemical correlate of a spatial preference in rat. Science, 1974, v.185, p.623-625.