Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Некоторые аспекты механизма иммунитета при экспериментальном эхинококкозе овец и пути его коррекции

ВАК РФ 03.00.20, Гельминтология

Автореферат диссертации по теме "Некоторые аспекты механизма иммунитета при экспериментальном эхинококкозе овец и пути его коррекции"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НЩ ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛВДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСШГГ ГЕЛзМИИТОЛО]'! имени академика К.И. СКРЯЕЧ1; А

ГЛУХОБА Людмила Игоревна

НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ МЕХАНИЗМА ИММУНИТЕТА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЗХИНОКОККОЗЕ ОБЩ И ПЛ'И ЕГО КОРРЕКЦИИ

Специальность 03.00.20 - Гельминтология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарии с наук

На правах рукописи

Научный руководитель -доктор ветеринарных наук профессор Даугалиева 1.'/,

Моекза - 199£

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени К.И. Скрябина.

Научный щковэдитель: доктор ветеринарных наук, профессор -Даугалиева Э.Х.

Официальные оппоненты: до;;тор ветеринарных наук

Успенский A.B.

доктор биологических наук Полетаева О.Г.

Ведущая организация - Еелоцерковокий сельскохозяйственный институт.

Защита диссертации состоится "¡^Ф^ ¿ЛуССЬсР 1992 г.

в '{О часов на заседании специализированного совета

Д-020.04.01 при Всероссийском научно-исследовательскоу институте гельминтологии имени академика К.И. Скрябина.

Адрес: П7259, Москва, Б. Черемушкинская ул., 28. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС. Автореферат разослан 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

М.К. Вертинская

ВВВД2НИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Гельминтоза сельскохозяйственных животных имеют широкое распространена и наносят значительный экономический ущерб животноводству. Среди множества гельмгато-зов эхинококков мелкого рогатого скота занимает одно из ведущих мест по распространенности и наносимому иы экономическому ущербу (П.П.Вибэ, 1961, 1975; В.Ф.Никитин, 1968; K.Poljdorde, 1977, 1963; В.И.Шамхалов, 1980, 1988; В.Т. Раыгзанов, IS82 и др.).

В последние годы по гельминтозам, в той числе и по эхино-коккозу, выполнен ряд работ, имеющих большое теоретическое и практическое значение в расшфровкэ механизма иммунитета и новых подходов в лечении и профилактике этих заболеваний (H.H. Озерецковская, i'979; Е.С.Лейкина, В.С.Е^иов, IS84; А.И.Ббарс-кий, 1985; Э.Х.Даугалиева, К.Г.Курочника, В.В.Филиппов, 1991 и др.).

Многочисленные опыты на экспериментальных моделях и наблюдения за больными животными показали, что лри паразитарных болезнях играют большую роль вторичные иммунодефицита (ВИД). Оказалось, что паразиты, в том числе эхинококки, могут вызывать супрессию нормального иммунного ответа и таким путем подавлять защитные механизмы хозяина, направленные как против их собственных антигенов (гомологичная супрессия), так и антигенов других, инфицирующих организм, агентов (H.H.Озерецковская, 1976, 1979; Е.С.Лейкина, 1976, 1978а,б, 1934; Э.Г.Полетаева, 1983; А.С.Бессонов, РЛ.Пенькова, I98-+; Э.Х.Даугалиева с со-авт., 1985-1991; А.И.Збарский, 1985). .

При эхинококкозах нарушения иммунного состояния хозяина и механизмы этого явления изучены не достаточно, ¡¡озду тем эти вопросы имеют большое значение для решения таких ванных задач, как создание специфической профилактики и, на основе ее, коррекции иммунного состояния.

Все вышесказанное и лослуяило основанием для проведения исследований по изучению механизма иммунного ответа на ¡¡лоточном уровне при заракэнии ишзотиых ларлальноЛ стадией эхнпокок-ка и осуществления фэнотипической коррекции г ;ащ л я о:- о оти'лп.

НУДЬ ИССЛЕДОВАНИЙ - изучить и охарактеризовать процессы, . протекающие в мммувноП системе при экспериментальном эхинококком мелкого рогатого скота на клеточном и гуморальном уровнях, ¡голодовать возможность коррекции иммунного ответа с помощь» лои'ьюгкрованнюс препаратов Н-Поливак-1, и Н-Поливак-2.

глДАЧИ ИССДУДОВАИГ'.Л:

- изучать кинетику Е-РОК и ЕАС-ГОК в периферической крови оьзц, экспериментально зараженных эхинококком;

- исследовать фагоцитарную активность макрофагов;

- изучить специфический иммунный ответ в развитии боле ни;

- охарактеризовать основные закономерности клеточного и гуморального иммунного ответа при эхинококкозе овец;

- определить протективнме свойства коньюгированных препаратов, Н-Поливак-1 и Н-Поливак-2.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые в эксперименте изучены гумораль-наа и клеточные механизмы иммунитета при экспериментальной эхинококкозе овец.-Установлено, что стимуляция иммунного ответа за счот высокоактившЕс макрофагов начинается со 120 по 270-й дань после заражения, супрессия Т- и. В-лим^одитов начинается на 45-60-й дш после зарагсения и продолжается до 360-го дня (конец наблюдения). Специфический иммунный ответ при экспери-гл1яо;;ъко;.1 эхинококкозе регистрировался с 50 по 560-н день в РИГА и ИФР. Впервые установлено, что кокъюгпрованные препараты К-Логивак-1 к Н-Г1оливак-2 обладают протективными свойствами и повышают иммунный статус организма.

П{У,ХТГ,ЧЕС:Ш! ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Результат исследований включемгв I. "Методические рекомендации по изучению механизма иммунитета при гельминтоаах и определению иммуногенных слоиста препаратов", утвзрадонныо Отделением ветеринарной ме-ди|;ин11 ВАСлНКЛ 5.02.1990 года; 2. "¡методические рекомендации по применению иммуностимуляторов для профилактики гельминтозом и лошшешы резистентности кивотних", утверлденньгх БАСХНИЛ ;,8.38.19->0 года".

|1Стю.-:дщ:я, аИ::осжц:!-:дг1 НА РА. ЙТУ:

I. Оценка изменений (],уикщ:оийЛьао!; акпиностп Б-РОЯ, МС~ РОК. и макрофагов в периферической крови ягнят при экспери'мён-■1 *длх,иои зх1-ло::оккозз.

2. Кинетика специ^к lecKira антитзл при экспериментально!* э:п;нококкозе овец.

3. Иммуногвнные и протективныв свойства кштгирояжни? препаратов Н-Лоливак-I и Н-Полива:с-2.

АПРОБАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ. Материалы диссертации долой, чим:

1. На конференции молодых учзннх ЬИГИС (Москва, 1990).

2. На научно-производственной конференции "Современное сои-тояниз и перспективы оздорогления хозяйств от эхинококкоза и цисуицеркоза" (Караганда, 1590).

3; На заседаниях Ученого Совэ1а БИГИС (Москва, 1Э9С, 1991).

ПУБЛИКАЦИИ. Материалы исследований йПубликованы в четырех работах.

СБ'Ш h СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертации изложена на страницах машинописного теьста. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих раздел "материалы и кетоды", четыре раздела собственных «элспврьаенталышх данных, обсуждения результатов, общих выводов, практического использования результатов, списка литературы, содержащего отечественных и иностранных источников. Pa6cia иллюстрирована таблицами и рисунками, Приложонйь на ^ страницах.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЩОШЩ Материалы к методй

Работа выполнена в лаборатории иммунояогкй и 1'зиетики ВИГИС, на экспериментальной 5азе Курилово, УзНйВИ й Кграган-динской НИВС.

Изучение механизма иммунитета при экспериментальном эхШ'о-коккозе, иммуногвнные и протактивные свойства коныогирОвакных препаратов Н-Поливак-I и Н-Полилак-З провели в 5-и опытах на 119 ягнятах текущего года рождения породы финский ландрао, каракульской и полутонкорунной.

Клинико-гематологическиэ и иммунологические исследования проводили на 3, 7, .10, 15, 30, 45, 50, 90, 120, 150, 130, 210, 240, 270, 300, 330, 360 дни после заражения.

Для оценки состояния Т- и В-систей иммунитета и ;,:а:;ро:,агоз использовали методы В- ЫАО-розеткообр?зований ч восстановления ййтросг.иого тзтразолм-ЙСТ-'геся.

Ыононуклеарныэ клетки для количественной оценки Т- и В-лим^оцитов выделяли по .методу о.Воушп (1968). Определение количества Т-лимдоцитов проводили в реакции спонтанного розетко-образования по методу м.Лопав! еь п1. (1972). Идентификацию В-лимфоцитов проводили по методу Н.Е.Мепйез вt а1. (1973). При нагружении бараньих эритроцитов антителами в среде комплемента и постановке реакции КАС-розоткообразэвания пользовались методическим подходом д.К.Новикова и В.И.Новиковой (1976, 1979).

Фагоцитарную способность моноцитов определяли по методу А.йейа1 (1974) в модификации В.Я.Шатрова (1985). Реакцию непрямой гзмагглютинации проводили по методу к.Ма1Ъегв (1987), л нашей модификации, реакцию иымуноферментного анализа по методу Рг1те11 (1961). Для заражения животных использовали культуру онкосфзр эхинококков от собак, убитых на 60-70-И дни после пнвазирования их протосколексаии. ¿из^еспособность яиц проверяли но Камаловой.

Иатзматико-статистическая.обработка проводилась по Е.А. ..Ьринику (1980).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1. Характеристика иммунного ответа при экспериментальном эхинококкозе овец • ' Под ог том находилось десять ягнят 2-3-х месячного возраста породи минский ландрас. Подопытных животных распределили на группы по пять ягнят в каддой: I группа - опытная, нивотных поразили онкосферами эхинококков в количестве ЮОСО + 200 эк-ме!.:пляров на одну голову, 2 группа - контрольная. Продолжительность оп.иа составила 365 дней.

При исследовании общего числа лейкоцитов у нгнпт до зара-< они.! яз было обнарунепо достоверного отличия мзйду опытной и контрольной группами: 9,55 + 0,15 - в первой группе и 8,96 + 0,35 тыс./мкл - во второй. Увеличение числа лейкоцитов у под-опыт;. 1.x животных наблюдалось уке на 3-й сутки до 12,2 + 0,12 тис./-jv.il. В период с 90 по 120 дни количество лейкоцитов было и пределах. 13,57 + 0,16 - 13,9 + 0,12 тыс./мкл, с 240-го дня количество лейкоцитов постепенно снижалось и допло до 11,6 + и, " :с. /мкл к 360-му дни исследовании.

- аинмикз Т-лимфоцитов в первые 3-7 дней не наблюдалось д«» -ту •• -рао« различие у «сивогних оп.чтио; и контрольно/, групп.

Резкое увеличение функциональной активности Т-лимфоцитов в опытной группа ягнят с 50,67 + 1,88 до 59,67 + 1,5372 приходилось на 15-30-й дни после заражения. Рост абсолютного количества Т-лимфоцитов отмечали также на 15-ЗОй дни - 3,5-. + 0,16 -3,92 + 0,17 тыс./мкл. Количество Т-лиы$оцитов в контрольной группа в эти дни составило соответственно 2,22 + 0,11 - 2,27 + 0,09 тыс./мкл. Начиная с 45-го дня, содержание Е-РОК в крови овец начало снижаться, и к концу исследований (360-й день) процентный уровень Е-РОН достиг своего минимального значения: 41,5 + 0,5%, что существенно- отличалось от показаний в контрольной группе - 49 + 0,5/5. Однако большого разрыва в показаниях абсолютного количества Г-лимфоцитов в опытной и контрольной группах (2,24 + 0,11 и 2,21 + 0,09 тыс./мкл соответственно) не было, что по-видимому связано с увеличением общего числа лейкоцитов в I мкл крови - 11,67 + 0,16 тыс./мкл - в опытной и 9,61 + 0,27 тыс./мкл - в контрольной группах.

В первые 45 дней послз заражения отмечали повышенное содержание В-лимфоцатов в опытной группе ягнят, что в среднем составило - 27,3 + 0,29,5.

С 45-60-го дня наблюдалась тэнденциг с снижению содержания ЕАС-РОК, которая продолжалась до 180-го дня (19,67 ± 0,85$ - в опытной группе и 25,5 + 0,58$ - в контрольной), а 210-го дня содержание ЕАС-РОК у подопытных ягнят постепенно повышалось, и к концу исследований (360-й день) почти достигло уровня контрольной группы (22,85 + 0,24$ и 23,25 + 0,5$ соответственно).

Исходный уровень фагоцитарных клеток колебался в пределах: 23,83 + 1,03/з- 25,С 5 + 0,65$. Достоверное повышение малоактивных макре' чгов до 31,5 + 0,5$ наблюдали на 30-й день после заражения у животных в опытной группе. Повышенное содернанпо малоактивных макрофагов отмечали до 300-го дня эксперимента с небольшими колебаниями в сторону увеличения до 43,5 + 0,5$, в то время как уровень фагоцитарных клеток контрольной группы не превышал 27,5 + 0,5 $ в течение вег о опит а.

Количество высокоактивных макрофагов повышалось на 30-45-1; день после заражения до 6,66 _+ 0,2972, в то время как процент клеток в контрольной группе п с оставил 2,5 + 0,5. ¡¿ж. . 'альноа количество высокоактивных макрофагов фиксировали со И'.-го но

270-И день послз заражения, процент юс был от 9,23 + 0,5 до 10,08 + 0,29.

. Титр специфичеоких антител в сыворотке крови незараяенных лшвотннх составлял 0,8 + 0,0Э1ое2. У животных опытной группы уровень специфических антител повысился на 30-й день после заражения до 2,1 + 0,031ое2. Концентрация их в пределах 5,8 + ОД - 7,1 + 0,Шоег фиксировалась в период с 60-го по 210-й день эксперимента, К 360-му дню титр специфических антител снизился до 3,0 ± 0,011о22. Подобные результаты получены и ¿ри изучении динамики специфических антител в ПФР. Максимальней уровень ангитед у подопытных животных в ИФР приходился также на 60-180га су?кк - 2,715 + 0,08 - 2,373 ± 0,15.

Гельаингологичзское вскрытиа нивотних показало, что все животные опытной группы были заражены и количество пузырей составляло от 40-а до 87-и, а легкие и печень контрольных животных бьиц чиотае. Таким образом, полученные данные порволяют заключать, что у ягнят, зараженных онкосфераыи е::инококков в дозе 10000 + 200 экземпляров, супрессия Т-лимфоцитов зырааана в период миграции и роста паразита (с 30-го по 360-й дни), что по всей Беракнозти» связано с изменением состава популяции лимфоцитов и макрофагов, благоприятствующее проявлению их суп-рессорной активности,

2.2« Изучение возможности коррекции иммунного ответа при

экспериментальном эхинокохкозе В данном эксперименте мы изучили возможность использования иммуностимулятора с антигеном и конъюгировачного препарата Н-Поливак при экспериментальной эхинококкозе для повышения иммунного статуса и профилактики эхинококкоза. С этой целью под опыт было взято 25 егият 2-3-х месячного возраста, которых по принципу аналогов разделили на 5 групп по следующей схеме: ягнятам первой группы (4 головы) ввели коиъюгированный препарат Н-Поливак в дозе 5 мг на голову; четырем ягнятам второй группы - конъюгиро-ванный препарат Н-Полцвак в дозе 10 мг на голову; четырем ягнятам третьей группа ввели коиьюгиро^анни:'! препарат нэ основе нового иммуностимулятора в дозе 10 .мг на голову и И-Пол;щак в дозе 5 ¿¡г на голову; ягнятам четвертой группы головы) ввели по 10 иг градекса и ¡.о \ мл эхкдококкового антигена (иодер;;.й)!;;з

белка I мг в I мл); ягнята пятой группы (4 М>!$>!в10 служили контролем зараженным.

Ягнята шестой группы - чистый контроль (5 голов).

Все препараты вводили подкожно, дважды, с интервалом в 21 день. Через 14 дней после повторной иммунизации нивотные были зараяены онкосферами эхинококков в дозе 10000 + 200 экземпляров. Продолжительность опыта составила 415 дней.

Для определения протективных свойств препаратов убой животных проводили на 185-й, 305-й и 415-й дни. Результаты вскрытия приведены в таблице.

Результаты вскрытия подопытных и контрольных животных

Количество и размер лйрв'Оцист эхинококка

Группы | 185-й день ; 305-а дейъ 415-й д-нь

I 3 экземпл. 0,5-1,0 мы 4-6 экэзмйл-. 1,0-2*0 Ш II экземпл. 0,5-2,5 ми

2 9-13 экземпл. 1,0-1,5 мм 8 экземйй* 1,0-2,5 йй ^ 12 экземпл. 2,0-2,5 мм

3 3-4 экземпл. 1,0-1,5 мм . 5 экз'емлл4 1,0-2,5 мм 1'4 экземпл. 2»0-?,3 мм

4 10 экземпл. 1,0-1,5 мм 9-14 экззмйй-.-2,0-315 мй ££ экземпл. 21'7-4,5 мм

Контроль зараженный 52 экземпл. 4,- -5,5 т 77-80 экземйЯ! 6*1>?»0 мм 146 экземпл. б»0-9)0 мм

Таким образом, наилучшими проективными свойствами обладает конъюгированный препарат Н-Полйвай в дозе 5 мг на Голову.

Введение экспериментальным йивотным различных препаратов по-разному влияло на организм животных. Результаты исследований йойазали» что число .Т-ликфоцщ J у иммунизированных ниво4-нь!х вь1^0 значительно выше по сравнению с их содержанием з контрольна УР^Шё* .у аИвотных первой группы послч ы'/;;,еш:л прзПаШ?а нахщййй Т-лимфоцитов до 53*125 + а

то время как фоновое значение составляло 43,25 + 0,25%. Повторное введение препарата вызвало вновь увеличение В-РОК до 64*0 ± 0,46$- В течение 10-ти дней после заражения констатировали тондйнции к повышению этого показателя до 63,9 + 0,125$. С' 95-го дня отмечали снижение количества Е-РОК, но оно достоверно било вьше уровня колгрольнюс животных до 415-го дня н&блю-дзний. Анализируя данные Е-РОК у животных второй группы,заметили, что после первого введения препарата на 10-й день происходило незначительное увеличение Е-РОК с 50,75 + 0,ВЗ до 51,125 + 0,37$. Повторное введение препарата вызвало повышение В-РОИ на 7-й день до 64,376 + 0,31$. После заранения повышение Е-РОК ка 10-й дзкь достигло 59,45 + 0,125$. Кинетика показателей Е-РОК третьей группы овец позволила заключить, что повторное ¿ведение препарата повысило количество Т-лимфоцитов на 7-й день до 61,125 ± 0,24$ и на 10-й день после заранения до 58,25 ^ 0,52$, при фоновом значении,- 52,25 0,83$. В показаниях четвертой группы прослеживалась та кз тенденция к увеличению показателей поело повторного введения и после заражения.

Исследуя Е-РОК у ягнм пятой группы, отмечали повышение показателя до 10-го дня посла заражения, в дальнейшем наблюдалось неуклонное снижение показателя до 40,38 + 0,18$. Количество Т-лимфоцитов у ягнят контрольной группы колебалось от 46,625 + 0,31 до 51,375 + 0,89Д> на протяжении периода исследований.

Исследуя кинетику абсолютного количества Т-лим^оцитов у ягнят подопытных групп яивотных,можно сказать, что в каждой группе эти показатели увеличивались в различной степени, как после первого введения препарата, так к после повторного введения. Та.ч, к примеру, з первой группе ка 7-й день количество Т-лиафоцитов после повторного введения препарата составило 4,08 + 0,04 тыс./м!сл, а во второй - 3,5 + 0,07 тыс, Д:кл. Необходимо отметить, что разнив различия з показателях ос'-'.аго количества лейкоцитов привели к большому разрыву в ¡.оказаниях абсолютного количества лимфоцитов. Начиная с 95-го дн.! исследований происходило снижение как относительного, так и абсолктиого количества В-РСК у всех подопытных ягнят. Показании контрольной гру<шы находились в пределах физиологической норг:.:.

При изучении функциональной активности й-лкцокиго» в

реакции комплементарного розеткообразования установлено, что в первой группе на IO-а сутки пссла первого введения препарата количество Е4С-Р0К было достоверно лае, чем в контрольной -группе и составило 28,0 + 0,4% и 23,63 + 0,ЗГ;.а соответственно. На 7-й день после повторного введения препарата количество ЕАС-РОК составило 32,13 + 0 29$. После заражения, в течение 10-ти дней,количество ЕАС-РОК увеличилось до 34,625 + 0,15$, з дальнейшем констатировали снияениз этих показателей до уровня контроля. Количество 5AG-P0S не Л15-Й день исследований составило в первой группе 25,5 + 0,38;5.

Подобная рэакция со сторона ^-лимфоцитов отмечена наш и во второй группе животных.

Анализ данных с количестве ЕАС-РОК в третье'! группа отразил общую гендечциэ увеличения количества этих клеток на 10-й день после первого введения препарата до 28,25 + о,и на 7-й день после повторного введения до 32,25 + 0,12$. Однако после заракения^увеличенив ЕАС-РОК было недостоверным - .27,63 + 0,125$ при 26,0 + 0,29$ в контроле. При сравнительном изучении количественных показателей, отражающих рацепторную активность Б-лимфоцитов, у животных четвертой группы отмечено увеличение ЕАС-РОК до 28,5 + 0,35$ на 10-й дзнь после первого введения преперата. На 7-й дзнь после повторного введешь; препарата этот показатель увеличился до 34,38 + 0,1?%, увеличение ЕАС-РОК на 10-й день после зараяеяия достигло 28,125 + 0,37$. У животных пятой группы показатель ЕАС-РОК на 10-Й день был 28,5 + 0,125$. При исследовании крови на 95-й, 185-й, 305-й и 415-й дни установлена тенденция к снижению ЕАС-РОК до 24,0 + 0,12$ у всех подопытных ягнят. Показания контрольной группы колебались в прзделах 22,125 + 0,14 - 25,26 0,25$.

Изучение фонового уровня абсолютного количества Е-лимфо-цитов выявило общую закономерность к увеличению абсолютного количества ЕАС-РОК в четырех группах животных.

Результаты определения титров специфических антитзл в РИГА показали, что в контрольной незараженной группе величина среднего геометрического титра в сыворотке крови не превышала 1,1 + 0,1 - 1,6 + 0,2iog2.

В cuB.opoiKs кровк ягнят первой группы уровень титров антител был достоверно вы.из контроля с 7-го дня после введения пре-парата-3,2 + 0,5log2 и продолжался до 305-го дня опыта (3,3 + 0,21og2 >,

В сыворотке крови ягнят второй группы достоверное увеличение титров,_ по сравнении с нзЗаракенным контролем, установлено с 10-го дня после иммунизации до 185-го дня исследований. Максимальное количество среднего геометрического тигра в сыворотке крови ягнят второй группы наблюдали на 95-й день опыта 6,9 + 0,4log2.. В сыворотке крови ягнят третьей группы увеличение титров регистрировали с 10-го дня по 95-й день опыта. Максимальное количество антител у этих ягнят мы фиксировали на 95-й день-

± O.Jiogg .Увеличение среднего геометрического титра в сыворотке крови ягнят четвертой группы отмечали на 10-й день-3,5 + 0,2\о&г. Максимальное количество среднего геометрического титра у этих нивотных приходилось на 95-й день. У кивотных пятой. группы титры антител увеличивались постепенно и к концу исследований достигали 6,61 + 0,0llog2.

У яшвотнга первой группы на 10-й день после заражения увеличение титров антител в ИФР фиксировали на уровне 1,898 + 0,02. На 60-й и 150-й дни после заражения этот показатель дос-товзрно отличался от фонового значения. К концу исследований титр антител снизился до 1,205 + 0,03.

У Еив.отних второй группы увеличение показателей количества антител было значительно меньше, хотя и достаточно высокое. Максимальное значение титра антител в период опита составляло 2,303 ± 0,02., при фоновом значении 0,844 + ^,05. К концу исследований значение показаний составляло 1,101 + 0,01.

У яивотных третьей группы увеличение титра антител происходило на 7-й день после заралзния - 1,844 + 0,05. Максимальное значение их фиксировалось на 60-й день после заражения -2,205 + 0,С2. На "415-й день (предел наблюдений) значение этого показ атпгш снизилось до 1,210 + 0,UI.

В покор'цшях четвертой группы .¿i:..cпровали достоверное по-вшшиие титров на 7-й дунь после зараодшя до 270-го дня. Цак-скнаиьноз значение цх. отвечали на 150-15 день к реле зярз.чышя

Исследуя показатели пятой группы, отмечали ил уклонное повышение антител до 305-го дня после заражения.

Уровень антител контрольной группы ягнят (шестой) составил 0,705 + 0,03 - 0,944 + 0,04.

Таким образом, введение животным конъюгировон го препарата Н-Поливак и иммуностимулятора градекса с АГ из ;шшокок~ ков вызывает повышение иммунного статуса животных и снимет приживаемость гельминтов. Однако, справедливости ради, следует отметить, что препарат Н-Поливак обладает более вирзжешшми иимуногенними и протоктивкими свойствами, поэтому последующи работу мы проводили только с препаратом Н-Поливак различных серий.

2.3. Определение иимуногашых и протективных свойств конъюгированного препарата Н-Поливак при экспериментальном зхинококкозе овец

Опыт был проведен в опытном хозяйстве "Курилово" на 12-ти ягнятах 2,5-3-х месячного возраста, породы финский ландрас, которых разбили на 3 группы по принципу аналогов: ягнятам первой группы (5 голов) ввели конъюгированный препарат Н-Поливак в дозе 5 мг на голову, подкожно. Ilpenapai вводили двавды;о интервалом 21 день. Заражение животных происходило на 14-й день после повторного введения препарата. Доза заражения -10000 + 200 экземпляров на голову; ягнята второй гру: и (3 головы) били заражены онкосфераии эхинококков в дозе IuüUü + 200 онкосфэр на голову; ягнята третьей группы (4 головы) служили чистым контролем.

Продолжительность опыта - 360 дней.

Анализ получен-"ix данных позволяет заметить, что титры специфически антител в сыворотка крови ягнят первой группы с Х5-го дня после заражения неуклонно повышались вплоть до 210-го дня - 6,9 + 0,0?iog2. Максимальное значение отмечали на 45-й и 60-й дни - 7,5 ± 0,021og2.B дальнейшем титры антител снижались и к 360-му дню (предел исследований) составили 2,9 t 0,1 iog2, что значительно превышало "ri0B0Hb антител контрольной группы (нэзаражэнной). В сыворотка крови второй группы жиьот-них титры антител увеличивались о _45-го до 240-го для после заражения. Максимальное значение фиксировалось н 2IC i день -

- i4 -

V,i 0,Ü3iog2. Далее наблюдали сншхение тигра специфических (шгнтсл до 4,9 ± 0,01iog2. 'У ягнят контрольной группы уровень шшп'С'л на про лишал 0,8 + 0,05 - 1,5 + 0,05iog2.

Ь ПФР, начиная с 30-го дня после заражения, установлено по-jo!,i!iiиг.о показаний у ягнят парной группы до 1,725 + 0,12 и ;;,0ВЗ + 0,07 ни 45-й день. До конца исследований у ягнят порции группы показатели экстинкции были достоверно выше, чем у ащ.отннх контрольной группы.

'J животных второй группы количество антител достоверно подымалось, начиная с 30-го дня после заражении - 1,668 + 0,06. ,i!ii:'jiiM'j«biioö .значение фиксировалось на 75-Й дань - 2,715 + 0,08, к окончанию опыта средний уровень антител снизился до 2,002 + и, (ü.

После окончания опыта все подопытные животные были убиты с дальнейшим гельминтологическим вскрытием. При покрытии у яг-ннт 11014)011 группы обнаружили от 2 до 7 эхинококковых ларвоцист, р-чпыаром • 2- 3 мм. Во второй группа количество ларвоцист эхинококка достигало 45-98 экземпляров размером 5- 7 мы.

У ливотнмх контрольной группы ларвоцист обнаружены но

были.

Таким образом, конъюгированный препарат Н-Поливак в дозе '5 :.;г ни голову двукратно обладает имыуноганными и протактивны-1ш свойство .и, сникая интенсивность инвазии и замедляя рост ларвоцист.

2.4. Влияние вакцинации на иммунобиологическую реактивность ягнят, экспериментально зараженных онкосферами •эхинококков

С этой целью была испытана конъюгированная вакцина Н-Поливав серии I и 2. Опыт проведен в подсобном хозяйстве ВИГИС "Курилоьо" на 22-х ягнятах 3-4-х месячного возраста породы цчшский лаидрас. Перед началом опыта все животные были дегель-минтизировани 22/>-ньщ панакур-гранулнтом в дозе 100 мг/кг, дважды,с интервалом 10 дней. Через 15 дней посла второй дегельминтизации животные были разделены четыре группы по следую-аой схеме: восьми ягнятам первой группы вводили подкоино конъ-мсировашшй препарат Н-Поливак-I в дозе 5 мг на голову; ягнятам в рой группы (7 голов) ввели конъюгированный препарат

Н-Поливак-2 в доза 5 иг на голову подконно; ягнята третьей группы (3 голови) использовались в качестве зараженного ко! роли; ягнята четвертой группы (4 головы) заражению не подвергались и служили контролем, дивотнш перьой и второй групп кон^ю-гированные препараты вводили дважды,с интервалом 21 день. Через 14 дней после повторной иммунизации ягнята I, 2 и 3-ей групп были подвергнуты заражению онкосферами эхинококков в дозе МиОО + 200 экземпляров на голову.

Продолжительность опыта 395 дней.

В кинетике лейкоцитов у кивотншс первой группи наблюдали на 7-й день после первого введения препарата увеличение лейкоцитов о 8,86 + 0,31 до 11,16 + 0,15 тыс./шел. На 15-й день после первично! введения препарата общее число лейкоцитов в крови этих ягнят было ниже фонового значения - 7,68 + 0,84 тыс./мкл.

У ливотных второй группы увеличение лейкоцитов отмечали уже на 3-11 день после введения с Р 65 + 0,52 до 9,54 + 0,09 тис./шел, а к 15-му дню количество их снизилось до 8,36 + 0,81 тыс. /мкл.

На 3-й день после заражения у ягнят перьой и второй групп выявлено увеличение общего числа лейкоцитов до 10,16 + 0,3? I 11,3 0,11 тыс./мкл соотвзтстве. ло. С 30-го по 45-й день после заражения отмечали увеличение числа лейкоцитов до 13,86 + 0,1 - в первой группе и 13,16 + 0,22 тыс./мкл - во второй группе. На 120-й - 151>-й дни вновь фиксировалось повышение числа лейкоцитов до 14, ! + 0,38 - в первой группе и постепенное снижение показателей до фоновых - 9,78 + 0,24 к концу исследований (360-й день после заражения).

У животньас третьей пуппы ало постепенное увеличение обце-го числа лз:: ->цитов до 210-го дня послз заражения (245-й день исследований) - 15,05 + 0,5 тыс./мкл, а затем произошло незначительное снг..:.зние этого показателя и к концу опыта значение его достигло 11,67 + 0,16 тис,/мкл,

У .тавотных четвертой группы покаг'.чтель лейкоцитов колебался в пределах - 8,48 + 0,35 - 9,71 + С,И7 тыс./мкл.

Процент В-РОК на 7-й день после первого введения препарата у ягнят первой группы увеличился до 55,66 + 0,63, на 15-й день исследований эт 1 показатель снизился до 50,79 + 0,54^. "а 3-й

дань после повторного введения препарата фиксировали вновь повышение содержания S-P0K до 52,76 + 0,33$, однако оно не было достаточно отличимый от показателя контрольной группы - 52,25 + 0,29$. На 7-й день процент Е-РОК у этих же ягнят достигал 63,21 + 0,86, а на 10-й день этот показатель снизился до 52,21 + 1,44;4. После заражения наблюдалась неуклонная тенденция к увеличению этого показателя до 180-го дня после заражения (215-., день наблюдений), а затем происходило постепенное снижение В-РОИ вплоть до конца эксперимента (395-й день) и составляло 50,25 ± 0,63%.

У животных второй группы наблюдали аналогичную картину.

Еьучая результаты, полученные ь третьей группе животных, следует отметить, что после заражения на 10-й день произошло резкое увеличение функциональной активности Т-лимфоцитов до 59,67 ± 0,77/5. С 45-го дня происходило неуклонное снижение активности Т-лимфоцитов, минимальное значение приходилось на 395-й день наблюдений (предел наблюдений) - 41,5 + 0,5/5, в отличие от контрольной группы, где показатель этот равнялся 49,0 + 0,5%. Говоря о кинетике абсолютного количества Е-РОК необходимо отметить, что она коррелировала с показателями относительного их количества и, начиная с 10-го дня после заражения, ci чения количества Е-РОК колебались в пределах 3,06 + 0,02 4,35 + 0,02 тыс./мкл у ягнят первой и второй групп, что достоверно отличалось от показателей контрольной группы, где значения Е-РОК были от 1,40 £ 0,07 до 2,48 + 0,02 тыс./мкл. ■

Анализируя полученные данные, можно сказать, что в результате двукратного введения препаратов Н-Поливак-l и Н-Полиьак-2 повышалась функциональная активность Т-системы, в то время как у животных, которым препарат не вводили, отмечалась супрессия иммунного ответа, продолжавшаяся вплоть до окончания исследо-вакп (395-й день).

Процентное соде;- :ание активных В-клзток у ягнят кон дольной группы не превыиало 21,9 + 0,2% - Я5,ЗВ + 0,41$ в течение всего скс римента.

У животных первой группы на 7-tt день после первого введении препарата констатировали достоверное увеличение SAC-РОК с ¿5,71 t 0,51 до 29,0 + 0,31%. Б пзркод & 10-го по 15-il день

отмечено опаяете ЕАС-РОК до 25,14 + 0,28%. С 7-го дня после заражения констатировали увеличение"активности КАС-РОК, продолжающееся до 150-го дня исследований. С 180-го дня происходило снииенле ЕАС-РОК до уроЕня контрольных (22,83 + 0,£ и 23,25 + 0,ЬЙ соответственно).

Анализируя кинетику ЕАС-РОК у нивотлкх второй группы отмечаем, что процент активных В-клеток был несколько ня;::е, чем у яивотных первой группы.

У животных третьей группы в первые 45 дней после заражения происходило повышение функциональной активности üAC-РОК до 27,3 +0,29?, а с 60-го по 180-Е день отмечала снижение ЕАС-РОК до 19",67 + û 35%. Процент ЕАС-РОК у животных этой группы составил к концу исследований 22,8 + 0,24$.

Сопоставление результатов; отражающих относительное количество ¿АС-РОК в крови подопытных яивотнцх первой и второй групп, свидетельствует о несущественной разнице в показателях В-клеток на 150-й день после заражения, где процент ÜAC-POX в первой группе составил 31,29 + 0,59, а во второй группе -33,86 + 0,41.

Проведенный нами до начала "ссперлмзята подсчет количества активных г.акроуагов е крови ягнят не выявил достоверного различия кекду их показателями ео всех группах животных и составлял 2¿,5 +0,5 - 27,5 + С ,5/5.

Количество а'^жяцх г":акро;,агов у ;;;лвоишх neproíi группы па 7—;¡ день после ззрекешш резко увеличилось до 33,33 + 0,52%, что говорит о, довольно высоко:! активности клеточного звена иммунитета. Д2л»ие;'.з!ш. исследования выявили тенденции к увеличению этого показателя до ¿L-ro дня после заражения. Па SO-i: день чг.сло í¡:v:h';iíix ;,:а2:ро.агев составило 44,С8 + G,33;'ú. В последуя чае дна надоддяа неуклоаноз снк,:.'.ец:;е- ¡:СТ.-поло::;итслытх клеток r-ялоть до конца асслецогаиШЬ. Z ягдаг; теороГ. группы c.i:¡..:o¡::ivi úkííxjíüx ...SKi-o^roE »¡ролеходпло а- дня. после з:'ок;::е;;лл. С дееко оно било ?.:зпее вцре •..«: :л,, чем у- ягнят. первой, хчуиш'. :ip.j цз/чеп-.:! шЕ-песз^а внтлгнше *.шфо Jaros ;; лгкт? T^'jí'ic.! гранах: ¡.г исходила гооголерное ах повышенно на ¿и-.' ..оо.те яо 3¿,i + 0,5/.'. Лотналшое со цгр-иь;^ ::с::ро. rira .¡родол;.:?лось до ЗС^-го

посла заражения у ягнят этой группы. Максимальное значение фиксировали на 240-й день после заражения - 43,5 + 0,5$. К концу опыта зтот показатель снизился до уровня контрольно? группы - 24,43 ± 0,68 и 25,38 + 0,25$ соответственно.

При изучения кинетики высокоактивных макрофагов у ягнят первой и второй групп после заражения констатировали стабильное повышение НСТ-положительных клеток до 150-го дня исследований.

К концу исследований количество высокоактивных макрофагов было несколько выше у ягнят первой и второй групп по сравнению с третьей группой и составляло 5,43 + 0,35$ и 4,625 + 0,42,¿.

Заражение животных первой группы сопровождалось повышением титров специфических антител ухе на 30-й день исследований до 8,9 + 0,I4iog2. Максимальное значение этого показателя фиксировали на 60-й день после заражении - 9,G + 0,liog2. Затем шло постепенное снижение титров антител до 6,0 _t 0, Iiog2 на 120-Й день после заражения, к 395-му дню исследований титры специфических антител доходили до 2,9 + 0,09log2. В сыворотке крови ягнят второй группы увеличение титров антител фиксировали в те ке дни, что и у ягнят первой группы. Наибольший титр отмечали на 45-й день после заражения - 7,85 + 0,I5iOg2. На 120-й день титр антител снизился до 5,5 + 0,06iog2.

Титр специфических антител в сыворотке крови животных трэтьей группы к 60-¡>¡y дню после заражения увеличился до 6,5 + 0,0llog2. На 150-й день исследования титр антител был в пределах 6,0 + 0,2 - 6,3 ¿ 0,2log2. £ дальнейшем фиксировали постепенное снижение титров антител.

Определение кинетики специфических антител в ИФР у животных первой группы на 10-й день после первого введения препарата показало статистически значимое изменение количественные показателей экстинкции антител до 1,544 + 0,13. Поело повторной иммунизации увеличение этого показателя достигло 1,575 t 0,02. В дальнейшем до 305-го дня показания титров антител в ИФР были достоверно выше значений контрольной группы и колебались в пределах 1,41 + 0,05 - 1,919 + 0,12. К концу исследований (395-й день) показатели экстинкции равнялись 1,205 + 0,02.

У 2K30THLX второй группы увеличение значения экстинкции

фиксировалось с 10-го дня поело первой иммунизации - 2,143 + 0,16 и до 275-го дня титр антител колебался в пределах 1,476 + 0,04 - 1,884 + 0,08. К концу исследований этот показатель равнялся 1,104 + 0,09. Результаты определения средних значений титра антител у животных: третьей группе показали достоверное отличие от показаний контрольной группы, начиная с 30-го дня после заражения - 1,668 + 0,06. Ь'аксшалъноэ увеличение титров фиксировалось на 75-й день после заражения - 2,715 + 0,08. К концу исследований количество антител равнялось,2,002 + 0,02.

Через 395 дней после начала эксперимента был произведен убой подопытных животных с последующим гельминтологическим вскрытием. У животных первой группы количество эхинококковых ларвоцист колебалось в пределах от I до 9, размером 0,3-0,4 мм.

Количество' ларвоцист эхинококков у животных второй группы колебалось от 4 до Й, размером 2- 4 ми.

В контрольной группе количество ларвоцист эхинококков составило от 49 до 81 экземпляра , размером 5- 9 им.

У животлих контрольной группы ларвоцкети ке обнаружили.

Таким образои, конъагированная вакцина серии Н-Поливак-1 и Н-Полизак-2 в дозе 5 иг на животное обладает протектизными свойствами пр.ч экспериментальном эхикококкозе,

2.5. Испытание вакцины Л-11оливак з производственных условиях

Опыт был проведен на 75-и ягнятах 4-5-и месячного возраста на базе совхоза "Кояндшский" ¿гэндибулагского района Казахстана.

/..пвотш/.е оилп взвеиени, забиркозани, из них било сформировано 5 группы ио принципу аналогов: ягнятам первой группы ввели кон-ьпгироваиний препарат к-11ол:;вак-1 в дозе 5 иг на голову;' яги та ъторо.1 группы ввели конъюгированный препарат И-Яолввая-з в до::.: 5 мг на голову; ягнята третьей группы слу-

контролем.

;¡родо::.".т¡.мьиость опыта составила 360 ддз.М.

ь пиргод «заду дзукя кммулизацкяии, а спустя два недели посла подгорной, »пышыэ содержались в условия:: стационара'. 'I ч-»з ;к) с начала опыта тшхогш.з были выпуцзны на паст-

биде. В течение опыта проводились-диагностические вскрытия на 180-й, 270-й и 360-й дни опыта,по 5-Ю-голов из каждой группы. Результаты вскрытия представлены в таблице»

й группы

Количество и размер ларвоцист

180-й день

270-й Дййь ■ 360-й день

0-3 экз. 0,5-1,5 мм

1-3 эта» 1,0-3,0 ми

1-5 экз. 3,0-4,0 мм

0-4 экз. 1,0-2,5 мм

0-3 экз» 1,5-3,0 мм

1-4 экз. 2,5-3,5 мм

контроль

13-22 экз. 2,0-5,5 .мм

19-25 экз. .4,0-6,8 мм

15-35 экз. 5,7-9,0 мм

I

2

Полученные результаты позволяют сделать заключение, что конъюгированный. препарат Н-Поливак в дозе 5 ыг обладает про-теюйвнши свойствами.

ОБСУЖДЕНИЕ

Анализируя материалы собственных исследований и литературных данных, можно констатировать, что развитие иммунного ответа при гельминтозах обеспечивается множеством разнообразных клеточных и гуморальных специфических и неспецифических факторов иммунитета. Пути их кооперации на разных стадиях форыир вания ишлун' •эго ответа не одинаковы* Гельминты в большинстве своем язляытся имиунодепрзссантанй, вызывают снижение ишунно-го статуса и резистентности организма яивотных.

В наших исследованиях у ягняФ, экспериментально зараженных иккосферами Эхинококков на проявлении всего периода исследований отмечали лейкоцитоз с доа?авёрныы повышением уровня' лейкоцитов. Лейкоцитоз при гельшнтоаах ошечали и другие ав~ тс^ы (Ь.Х>.;аугалиева, 1967, 19?1, 1979; О-Г»Полетаева, 1983$ Я...!.Якубовский, 1987; Н.Н.ОзерёЦйовская, 1976, 1985; Е.СЛеЙ-1973, 1976 и др.). ОднайО исследователи констатировали ;;о:то рноз увеличение лейкоцитов в основном в период «игра-

ции паразитов. Нами же лейкоцитоз отмечен на протяжении всего периода исследований (365 дней). На на'а взгляд, это в первую очередь связано с особенностями цикла развития паразита, г-чк как личинки эхинококка оказывают механическое, токсичзское к аллергическое действие на протяжении всей жизни животного.

Анализ изменений общего количества Т-лимфоцитов в крови ягнят, подвергшихся зараненш, начиная с 3-их по 395-е сутки наблюдений требует дифференциального подхода, вследствие различной по атепени выраженности реакции со стороны Т-клеточной системы иммунитета. Так, у больных япвотных была выявлена тенденция к увеличению относительного и абсолютного содеряанчн Т-лимфоцитов в первые 30 дней инзазки, сменяющееся снижением их количества до конца исследований по сравнению с этим показателем в контроле. Данный факт указывает на избирательное воздействие механизмов супрессии на Т-клетки. Это подтверждается резким угнетением у больных неспзцифической функциональной активности Т-лимфоцитов при стимуляции ФГА по сравнению со здоровыми (А.И.Збаракий, 1985). Зто свидетельствует о том, что продукты кигнедеятельности личиночных стадий эхинококкоз оказывают непосредственное или опосредованное супрессирующее действие на Т-систему хозяина. Угнетение Т- системы отмечено и при других гельминтозах, Так, уменьшение числа циркулирующих Т-лимфоцитов установлено у животных, пораненных филяриатсзамк (A.Dasgupta et al., 1978} A.Gajianana et al., 1981), трихинеллезом (Boron-Kaczmarska et al,, 1979), кишечным шистосомозоп (J.a.M.Machado el; al,, 1978), L'ohho полагать, что феномен супрессии Т-сиотемы иммунитета относится к числу общих закономерностей, характеризующих формирование взаимоотнопений в системе хозяин-паразит при гзльминтозах.

Обобщая полученные результаты мокно предполагать, что супрессия иммунной системы организма хозяина, вызываемая гельминтами, с одно.; стороны ,.;о;.%ет рассматриваться как причина возможности их длительного зьживання, с другой стороны, как причина нарушений Cilmíiiohxhlix отношений других сочленов биоценоза. Биологически;: смысл возникновении г.ммуносупрессик при гельминтоз;.';; - устоиозлеипо равновесия в системе парпзкт-хозяш с дз;:ьэ сол!гл;о:шл :• „знвд&я.гиш.поига гельминтов, однако, это

равновесие сгладывается за счет нарушения другого равновесия -сгалбдонтных отношений в системе канрооргшизм-даразят (В.Н.Лесков и до., 1977, I97S, 1381).

Таким образом, подученные наш дшшые позволяют сделать вывод о том, что особенность и динашка патологического процесса при эхлноксккоге тесно коррелирует о динамикой показат лен ¿лунной системы хозяина. Состояние иммунной систеш и угнетение её функциональной активности под непосредственным или опосредованным воздействием продуктов жизнедеятельности паразита находит отражение в клиническом течении заболевания.

Lai/iH выявлена прямая корреляционная связь ыезду тяжестью клинических проявлений болезни и степенью иммуносупрессии Т-н В-с::леы. Ьто позволяет рекомендовать использование ыетодов изучения тленного статуса зеракениых жиеотных для оценки тя-кеотп течения и исхода при эхшококкозах, а также указывает на необходимость разработки систеш профилактики при эхаиокок-козе. Изучение иммунобиологической реактивности организма ягнят предполагало анализ .иммунного ответа животных на уровне трах клеточных систем, которые обеспечивают реализацию иммунных регкцай: Т-, В- и макрофагальной састемы.

Основную прогектавнузо роль при большинстве инфекционных заболеваний, как известно, играют какрофагальше ¡шетки, обладающие значительны/; набором биологически активных вецеотв, необходимых в защите от микробов (R.A.Campbell, IS 76).

В свете современных представлений о механизме формиров' ния и регул^ии иммунного ответа колено сделать вывод, что в понижении активности моноцитов и макрофагов крови ягнят, подвергшихся заражению, определенную роль могут играть супрессор-ные клетки лшфоидной системы, индуцируемые ентигенши суб-стац.-лями гельминтов (G.Maclcaness, 1971; J.R.Davia, 1975). ло мере развития гел: 'латознсго процесса, на фоне оолабл~.;ия хелцерыой функции шатунокомпетентных клеток, меняется харак-теп гзс.п:.г-еязи между организмом хозяина и паразитами. Общая 01 .•ллп'хЗ.аыю-ЕосстапоЕит'елышя активность макрофагов, иссле-ь реакции иСТ-теста показала, что'активность макрофаге:, киоть дс 300-го д.'ш исследования. Активация :•.-::;.!:г.акро;&гоэ ниблюлзлссь на ЗО-ib-:! душ после

заражения, а максимальное количество их отмечалось со 180-хj по 270-й день после заражения.

Кинетика абсолютного количества B-лимфоцитов, обеспечивающая проявление гуморального иммунного ответа, при всем своем разнообразии, имела общую тенденцию увеличения их количество до 45-и дней и снижение уровня этих клеток в крови ягнят, подвергшихся заражению, до 240-го дня после заражения. В свете сказанного большой интерес представляют работы Z.Ali-Khan, R.Siboo (1982) и D.A.Cox et al. (1984), в которых обосновывается предположение о том, что АГ эхинококка вызывают поликло-нальную стии^ляцию В-клеток. В результате этой стимуляции начинают активно вырабатываться антитела низкой авидности, относящиеся к классам IgM и IgG1. По данный Ali-Khan, R.Sihoo (1982) к четырнадцатой педеле после заражения шлей линии с 57bi/6j многокамерный эхинокок ш 92;$ общего количества антител находилось на igGi. ■

Увеличение количества B-лимфоцитов на первоначальном этапе наблюдали K.Karmanska, L.Michalska (1978, 1981) - при экспериментальном заражении мышей Tri^hinella spiralis; C.Jonnst^ne et al. (1981) при экспериментальном аскаридозе мьшей.

Ряд авторов констатировали з период миграции личиночных стадий активацию не только Т-, но и Вгсистзш (О.Г.Полетаева, 1978; L.Boroskova et al., 1962; M.Beniova et al., 1284).

Об активации ¿-системы на начальном этапе развития болезни сообщают Ю.Вовченко (1981) - при экспериментальном аскари-диозе цыплят, В.В.Бурик (1982) - при эзофагостомозе свиней, И.А.Гаджиева (1986) - пр- ниппостронгилезе шазй, И. С.Каныгина (1989) - npi. диктиокаулезе овец.

Объяснение разнообразию проявления иммунобиологической реактивности .-ливотнпх в ходе эксперимента можно найти в том, что возбудитель, проникаин в организм хозяина, застает иммунную систему, в зависимости от изиологиче :ого состояния, в активном состоянии или покое. В связи с этим в литературе имеются сведения о снижении акт юности ^акторов клеточного иммунитета при гельмгчтозах ( V.P.Pashuk et al., 1980; R.Genta et al., 1983; Т.К.¿-аксои с соавторами, 1985).

"изучение гу-оралыюго иммунитета в РИГА показало усиление

продукцич антител о ЗО-го дня после заражения. Титр антител был повышен до конца исследований (360-415-й дни). Наши данные подтверждаются работами Р.С.Еульца (1964, 1966), М.Чанко-вич, P.1.1'1с1.:агкловсй (IS69), Л.И.Степанковской (1975), И.К.Ту-ЫОЛЬОИОЙ (IS75), R.M.Mateaaian et al. (1975) И др.

Гиперпродукция специфических; антител и продолжительная стимуляция антигенами создают благоприятнее условия для образования иммунных комплексов, играющих роль супрессоров для T-c»!cts.mi: (Э.А.Кашуба с соавт», 1985; н.ыапаитша, J286).

¿торт: этапом нашей работы явилось изыскание средств и путал позыаения резистентности ягнят против эхинококкоза. Ь результате нащих исследований было установлено, что при введении в организм вакцин Н-Поливак-I и Н-Иоливак-2 происходит активизация лки&оидиой системы. При это;.! необходимо отметить, что эффект стимуляции отмечается как в Т-сиосеыэ, так и в ¿-системе.

Данные последних исследований о хлэточных механизмах кмпупопотенцпируюцего действия синтетических полконов говорят о способности полконов-стиыуляторов активировать метаболизм и функционирование ¿-клеток, Т-хелперов, макрофагов и такие, в свою очередь, супрессорных Т-лиыфоцитов (Р.В.Петров, 1988).

Отсюда !до!ино сделать вывод о том, что воздействие антигена ¡:а изпеиение лимфоцитарной с истеки in vitro- происходит за счет полимерных свойств полиэлектролиюв (P.tl.Хаитов с соавт., IS86).

В результате вакцинации животньк Отмечалась тенденция к поъь.шению активности Т-скстэыы уже на 7-й день после первого ввздеоя препарата до 53,125 + U,24/S, Второй подъем активации наблюдался уже на 3-й день после повторного введения препарата дс 64,0 г С,46$. Ьто свидетельствует о наличии в крови нгнат клзток памяти, которое способствуют более сильному ответу и>.::^'гдНой системы. Происходит системное перераспределение лимфоцитов, ьключаюцеэ выход клзток из вйлочйовой келезы, се-лочи'ки, лимфоузлов, поступление их в чоивйий мозг и рыхлую созд;:ш;талы:/г> ткань (Щ.П.Ьшош, 1983).

а нас их опытах введение опкое.фер в оргшшзм квотного лосло вакцинации повысило активность лиы^циаарной системы

вплоть до 240-го дня поело заражения. Процент Т-лимфоцитов был максимально высок на 180-й день после заражения - 63,07 + 0,56/5. (опыт I). В динамике В-лшкфоцитов променивалась та кз тенденция к увеличению процента до 34,29 + 0,29/5 на 150-й день после заражения»

Полученные данные по усилению иммунного ответа после введения препарата подтверждаются зскрытиел. Гак, после введения кощюгирозаниого препарата Н-Поливак-1 в дозе 5 кг на голову ИЭ составила 95,4$;. при использовании Н-Полкпак-1 в дозе 1С мг на голову ИЭ составила 5Такгм образом, моано сделать вывод о том, что конъюгированный препарат Н-Поливак-1 в дозе 5 мг более эффективен. При использовании конъюгированного препарата Н-Лоливак-2 в дозе 5 ыг на голову ИЭ составила 95,5/», а в дозе 10 мг на голову ИЗ составила 88,7/5.

ВЫВОДЫ

1. Иинунннц ответ при экспериментальном эхинококкозе овец характеризуется многофакторностью и зависит от фазы развития паразита.

2. Заражение животных онкосфераш эхинококков сопровождается достоверный увеличением количества лейкоцитов с пиком лейкоцитоза на 60-11 и 120-й дни инвазии до 15,22 + 0,19 тыс./ыкл.

3. Активация Г-систеш иммунитета при эхинококкозе в первые 30 дней инвазии сменяется стабильной супрессией до конца наблюдений. Относительное количество Г-лимфоцитов изменяется аналогично их абсолютному числу.

4. Экспериментальное заражение животных сопровождаемся повышенным содержанием В-лим+оцитов в первые 45 дней до 27,3 + 0,29/5 и снижением их количества до 19,67 + С,85?5 до 210-го дня исследовали>1. Кинетика процесса ангителообразования коррелировала с кинетикой образования ¿-лимфоцитов.

5. Активация низкоавидных макрофагов приходилась с 60-го до 300-го дня в пределах 35,5 + 0,5 - 43,5 + 0,5;.5, а высоко-аввдких - с 90-го до 240-го дня исслбдоъаниН » пределах 7,83 + 0,29 - 9,36 + 0,1?,]').

6. ¿авдша И-Полизак-1 и Н-Полпвак-2 в дезе 5 и 10 мг па ~:и.стное, &зодвлноо два/да с интервалом 21 день, оо'лада!-® к:.'-

¡¿уногзнными 1! протзктивньыи свойствами.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Материалы работы вошли в:

1. "Методические рекомендации по применению иммуностимуляторов для профилактики гельыинтозов и повышения резистентности тавотных",- одобренные рабочей комиссией "Паразитологии и профилактика инвазионных болззпей животных" и утвержденные ВАСХНЙЛ 2Ь августа 1990 г.

2. "Методические рекомендации по изучению механизма иммунитета при гельминтоза* и определению иммуногеннкх свойств препаратов, одобренные Ученым Советок ВЛГИС 30 марта 1990 г.

и утверздэнныо ВАСХКИЛ 5 сентября 1990 г,

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Глухова Л.И. Динамика макрофагов при экспериментальном эхинококкозе овец // Тезисы докладов научно-практической конференции "Современное состояние и перспективы оздоровления ■хозяйств от эхинококкоза", г.Караганда, - Ц. - 1990. - с.43.

2. Глухова Л.И. Динамика Т- и В-лимфоцитов при экспериментальном эхинококкезэ овец // Тезиоы докладов Всесоюзной научно-технцческой конференции "Созроменные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной и клеточной инженерии в ветери-нарьой медицине", г.Нижний Новгород, - М. - 1990. - С.36.

3. Глухова Л.И. Оценка Т- и В-систем иммунитета после вакцинаци:; ягнят против эхинококкоза // Бюллетень ВИГУС. -1990. - вып. 54.

4. Глухова Л.П. Определение протективных и иммуногенных свойств вакцины Н-Поливак при экспериментальном эхииококкозе// Тезисы докладов Всесоюзной научно-технической конференции "Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохоэяйствен-шас животных", Москва, - 1991. - с.91.