Морфофункциональное состояние тимуса, цитокиновый профиль и клеточный иммунный статус при остром нарушении мозгового кровообращения

Сергеева, Светлана Павловна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфофункциональное состояние тимуса, цитокиновый профиль и клеточный иммунный статус при остром нарушении мозгового кровообращения
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональное состояние тимуса, цитокиновый профиль и клеточный иммунный статус при остром нарушении мозгового кровообращения"

На правах рукописи

СЕРГЕЕВА СВЕТЛАНА ПАВЛОВНА

Морфофункциональное состояние тимуса, цитокиновый профиль и клеточный иммунный статус при остром нарушении мозгового кровообращения

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 ОКТ 2009

Москва, 2009

003478303

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Московский медико-стоматологический университет Росздрава»

Научный руководитель: Доктор биологических наук,

профессор Ерофеева Людмила Михайловна

Официальные оппоненты:

член-корресподент РАМН, доктор медицинских наук,

профессор Боголепова Ирина Николаевна

член-корресподент РАЕН, доктор медицинских наук,

профессор Дубовая Татьяна Клеониковна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова Росздрава»

Защита диссертации состоится «22 » октября 2009 г. в /Г.ООна заседании диссертационного совета Д 212.203.08 при ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.8

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6

Автореферат разослан « » сентября 2009 г.

Ученый секретарь ( ^/#

диссертационного совета ^С Саврова Ольга Борисовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования

Проблема острых нарушений мозгового кровообращения (ОНМК) приобретает все большую медико-социальную значимость (Яхно H.H., Валенкова В.А., 1999; Котова О.В., 2000). Доказано, что в патогенезе ОНМК важную роль играют иммунные механизмы, но авторы расходятся во мнении относительно их влияния на течение заболевания и его исход (Hosomi N., Ban С., 2005; Blanco М., Castellanos М., 2005; Hallenbeck J., Zoppo G., 2006). Необходимо учитывать наличие тесной связи между механизмами повреждения и восстановления мозга (Семченко В.В., Степанов С.С., Боголепов H.H., 2008). В работах ряда авторов показано, что при повреждении гемато-энцефалического барьера реагирует Т-клеточное звено иммунитета (Tarkowski Е., Naver Н., 1996; Michael J., Shea А, 2007; Ziv Y., Finkelstein A., 2007). Выявлены изменения и в -гуморальном звене иммунитета (Tarkowski Е., Rosengren L. et al. 1995; Vila N., Castillo J., 2003). Определенное место в патогенезе ОНМК занимают неспецифические адаптивные реакции, развивающиеся за счет активации гипоталамо-гипофизарно-надпочечникового комплекса -адаптационный синдром (Селье Г., 1960). В частности они выражаются иммуносупрессией за счет ослабления Т-клеточного звена иммунитета (Dirnagl U., Klehmet J., 2007). Тимус - центральный орган иммуногенеза, от состояния и. активности которого во многом зависит не только выраженность защитных реакций всего организма, но и адаптация организма к окружающей среде (Сапин М.Р., Никитюк Д.Б., 2000; Ерофеева JIM., 2002). Благодаря большой серии работ К.В. Судакова и соавт. стало известно, что животные с разной устойчивостью к эмоциональному стрессу имеют существенные различия в содержании катехоламинов, ряда нейропептидов в ткани мозга и характеризуются различной степенью изменения органов стресс-маркеров, в том числе тимуса, в ответ на эмоциональный стресс (Коплик Е.В., Ганнушкина И.В.,

Судаков К.В., 1995; Судаков К.В. и соавт., 1998). На сегодняшний день остается не изученной взаимосвязь между специфическими и неспецифическими (реакциями на стресс) реакциями иммунной системы и ее центрального органа тимуса.

Из анализа литературы следует, что при имеющемся на сегодняшний день обилии экспериментальных работ и клинических исследований, посвященных иммунным механизмам развития ОНМК, ни одна не воссоздает целостной картины, происходящих в организме изменений, не показывает взаимосвязи между локальным и системным ответом, между специфическими и неспецифическими адаптивными реакциями. Отсутствуют данные относительно функциональной морфологии тимуса на фоне развития внутримозгового кровоизлияния (ВМК) в условиях эмоционального стресса и без него.

Цель исследования

Исследование изменений, происходящих в иммунной системе после острого нарушения мозгового кровообращения в эксперименте у животных и в клинике у пациентов.

Основные задачи исследования

1. Провести морфологическое и морфометрическое исследование тимуса крыс Вистар с разной прогностической устойчивостью к эмоциональному стрессу в различные сроки (1, 3 и 7 дней) после экспериментального внутримозгового кровоизлияния.

2. Провести морфологическое и морфометрическое исследование тимуса крыс Вистар с разной прогностической устойчивостью к эмоциональному стрессу в различные сроки (1, 3 и 7 дней) после экспериментального внутримозгового кровоизлияния на фоне воздействия стресса.

3. Исследовать динамику изменения абсолютного количества лимфоцитов, а так же относительного количества их отдельных видов (СБЗ+, СЭ4+, СБ8+, С020+, СБ 16+, СОЗ НЬА БЯ+) в периферической

крови пациентов, перенесших острое нарушение мозгового кровообращения.

4. Изучить в динамике содержание цитокинов (ФНО-а, ФНО-р, ИЛ-1Р, ИЛ-10 и ИФН-у) в крови пациентов, перенесших острое нарушение мозгового кровообращения.

5. Изучить динамику содержания нейроспецифического белка Б100В и АМА-М2 после острого нарушения мозгового кровообращения и выявить возможные зависимости.

6. Выявить клинико-морфологические параллели между изменениями в тимусе у крыс в эксперименте и в иммунном статусе у пациентов после острого нарушения мозгового кровообращения.

Научная новизна

Впервые подробно изучена динамика изменений морфофункционалъного состояния тимуса крыс после экспериментального внутримозгового кровоизлияния. Показано, что степень выраженности изменений зависит от типа поведения животных в тесте «Открытое поле», а также воздействия эмоционального стресса. Показана динамика показателей клеточного и гуморального звеньев иммунитета у пациентов после острого нарушения мозгового кровообращения. Выявлена зависимость содержания Б100В и АМА-М2 в периферической крови пациентов, что доказывает участие в патогенезе этого заболевания иммунных реакций против специфических белков мозга и фрагментов деструкции клеток. Проведены клинико-морфологические параллели, показывающие взаимное влияние механизмов стресс-реализующей системы, приводящих к иммунодефициту и механизмов иммунной системы, ведущих к развитию локального воспаления. Оценена роль иммунного ответа в повреждении ткани мозга, предложена динамическая модель патогенеза ОНМК, что может иметь значение для разработки новых патогенетичеки обоснованных схем лечения.

Научно-практическая ценность работы

Предложен новый подход комплексной оценки иммунного статуса у больных в остром периоде острого нарушения мозгового кровообращения, а так же иммунологические критерии прогнозирования течения данного заболевания. Результаты исследования указывают на необходимость учета реакции органов иммунной системы при ведении пациентов с острым нарушением мозгового кровообращения. Так же результаты исследования изменений в тимусе после острого нарушения мозгового кровообращения расширяют теоретические представления о закономерностях морфогенеза и роли тимуса в реактивности организма. Данные, полученные в работе, могут быть рекомендованы для включения в руководства и учебные пособия по морфологии, иммунологии, неврологии, а так же в курс лекций для студентов по названньм дисциплинам.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В патогенезе острого нарушения мозгового кровообращения значимое место занимают аутоиммунные и стресс-реализующие механизмы, которые тесно взаимосвязаны.

2. Животные с разным типом поведения в тесте «Открытое поле» реагируют на экспериментальное внутримозговое кровоизлияние с различной выраженностью изменений в тимусе. На выраженность изменений в тимусе влияет также факт стрессорного воздействия до операции по моделированию внутримозгового кровоизлияния.

3. После острого нарушения мозгового кровообращения уменьшается абсолютное содержание лимфоцитов, развивается относительный дефицит супрессорных влияний, активируются механизмы аутоаллергии.

4. Отдельные показатели иммунного статуса могут быть использованы для прогноза исхода острого нарушения мозгового кровообращения, для дифференциальной диагностики типа острого нарушения мозгового кровообращения эти показатели значения не имеют.

5. Уровни нейроспецифического белка S100P и антимитохондриальных антител повышены и коррелируют между собой у пациентов в остром периоде острого нарушения мозгового кровообращения.

Апробация работы

Результаты исследования доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы спортивной морфологии и генетики человека» (Москва, 2009), международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2008», «Ломоносов-2009» (Москва, 2008, 2009), научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Татьянин день» (Москва, 2008), IX конгрессе Международной ассоциации морфологов (Бухара, 2008)

Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, из них 4 в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, глав результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, библиографического указателя, состоящего из 83 работ отечественных и 129 работ зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 9 таблицами и 88 рисунками.

Материалы и методы исследования Экспериментальная часть работы выполнялась в НИИ нормальной физиологии им. П.К. Анохина РАМН и в лаборатории функциональной анатомии НИИ морфологии человека РАМН. Эксперименты проведены на крысах-самцах Вистар.

Перед опытом крысы содержались 10 дней в клетках по 10 особей в каждой при свободном доступе к воде и пище. Всех животных разделили

на две группы согласно их восприимчивости к эмоциональному стрессу (ЭС). Индивидуально-типологические особенности и прогностическую оценку устойчивости крыс к ЭС определяли по их поведению в тесте "Открытое Поле" (Коплик Е.В., 1995). На основании полученных результатов крысы были разделены на устойчивых (поведенчески активные), предрасположенных (пассивные) и средних (промежуточные). В работе использовали прогностически устойчивых и предрасположенных к стрессу крыс, всего 108 животных. Половине из них моделировали внутримозговое кровоизлияние (ВМК), половину -перед операцией по моделированию ВМК подвергали эмоциональному стрессорному воздействию, используя модель агрессивно-конфликтного поведения при 24-часовой фиксации крыс за хвосты (Юматов Е.А., 1986). ВМК моделировали по следующей методике: по стереотаксическим координатам, соответствующим левому хвостатому, ядру вводили 60 мкл аутокрови. Животных через 1, 3 и 7 дней после операции и оценки неврологического дефицита по специальной шкале Menzes, с использованием теста асимметричного использования передних конечностей, а так же теста поведения в углу выводили из эксперимента с помощью метода декапитации в соответствии с приказами Минвуза СССР №742 от 13.11.84 «Об утверждении правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» и №48 от 23.01.85 «О контроле за проведением работ с использованием экспериментальных животных». Параллельно с экспериментом проводился контроль. Сразу после декапитации у животных изымали тимус. Полученный материал фиксировали 10% нейтральным формалином, затем обезвоживали проведением через спирты повышающейся концентрации и заключали в парафин. Окрашивание полученных срезов тимуса проводили гематоксилином и эозином, пикрофуксином - для изучения изменений структуры органа. Для дифференцировки клеток использовали окраску

срезов азур-П-эозином. Так же использовали окраску толуидиновым синим (рН=6.5) для выявления тучных клеток.

Таблица 1

Общая схема эксперимента: группы животных

(по 6 животных в каждой группе)._

Субпопуляции Предрасположенные к ЭС Устойчивые к ЭС

животных

Экспериментальные Контроль ВМК ВМК + Контроль ВМК ВМК +

группы стресс стресс

Срок выведения из 1 3 7 1 3 7 1 3 7 1 3 7 1 3 7 1 3 7

эксперимента (сутки после ВМК)

Изучение микроскопического строения тимуса проводили при помощи бинокулярной лупы МБИ-1 методом точечного счета (Глаголев А.А., 1941) в модификации Стефанова С.Б. (1974), позволяющим в относительных величинах определить площади, занимаемые структурными компонентами органа (относительно общей площади среза). Поэтому для обозначения площади, занимаемой тем или иным структурным компонентом на срезе, использовали относительные единицы (отн. ед.). Для измерения применяли стандартную сетку с шагом в 1 мм. На гистологических срезах тимуса определяли площади, занимаемые соединительно-тканными структурами (капсула и междольковые перегородки), корковым веществом, мозговым веществом, тимическими тельцами, а также сосудами коры и мозгового вещества.

Для определения площадей структурных компонентов сетку накладывали на препарат, а затем путем случайных совпадений узлов сетки при ее перемещении на препарате производили подсчет измеряемых объектов. Измерение площадей проводили на трех срезах для каждого тимуса. На одном срезе выполняли 10 измерений. При расчетах относительной площади структурных компонентов за 100 отн.ед.

принимали всю площадь тимуса на срезе. Затем определяли отношения площадей различных структурных компонентов к площади среза.

При изучении цитоконструкции тимуса подсчет клеток проводили при увеличении окуляра хЮ, объектива - х90 под масляной иммерсией по методу Стефанова С.Б. (1974) с использованием двадцати пяти узловой морфометрической сетки (с шагом 10 мкм), вмонтированной в окуляр микроскопа. Клеточный состав определяли в следующих структурных компонентах тимуса: подкапсульная зона коркового вещества, центральная зона коркового вещества и мозговое вещество. Подсчитывали следующие виды клеток: эпителиоретикулярные клетки, лимфобласты, большие лимфоциты, средние лимфоциты, малые лимфоциты, незрелые и зрелые плазматические клетки, нейтрофилы, эозинофилы, макрофаги, клетки с фигурами митоза и деструктивно измененные клетки. Определяли абсолютное содержание всех встречавшихся видов клеточных элементов на единице площади, равной 880 мкм2. Затем вычисляли процентное содержание клеточных элементов на единице площади (880 мкм2). Полученные данные подвергали статистической обработке, включающей в себя подсчет среднеарифметических значений абсолютных и относительных величин (X) и их стандартного отклонения (S). Данные, полученные в результате морфометрических исследований, записывали в протоколы, а средние величины и их стандартные отклонения заносили в сводные таблицы. Достоверность отличий сравниваемых показателей оценивали по t-критерию Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990) и с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни (Стентон Глянц, 1998). Для удобства сравнения морфометрических данных, полученных в эксперименте с контролем, вычисляли процент от контроля. Этот индекс вычисляли по формуле: Хэ/ Хк*100%, где Хэ и Хк являются однотипными показателями в экспериментальной и контрольной группах животных. По этим данным были построены диаграммы. Графики были

построены по данным, полученным в результате определения абсолютных значений. Клиническая часть исследования

Характеристика обследованных пациентов и группы контроля представлена в таблице 2.

Карта клинического наблюдения включала: оценку состояния сознания по шкале Глазго, степени тяжести инсульта по шкале МН-МШв, общий анализ крови, цитокиновый профиль, клеточный иммунный статус. Состояние сознания пациентов оценивали по общепринятой шкале Глазго (Трошин В.Д. и соавт., 2000). Для объективизации степени тяжести состояния больных и выраженности неврологического дефицита при поступлении в стационар и в динамике ОНМК, а также для стандартизации клинического материала и проведения статистического анализа применяли шкалу степени тяжести инсульта американского института неврологических расстройств и инсульта

Таблица 2

Характеристика обследованных пациентов и группы контроля

№ п/п Тип ОНМК Число больных Пол Средний возраст

М Ж М±а

1 Острая церебральная ишемия 17 12 5 69±8

2 Острая церебральная геморрагия 8 3 5 77±5

3 Группа контроля 12 4 8 72±6

4 Всего 37 19 18 71±8

Критериями исключения из исследования были: балл по шкале Глазго ниже 15, тяжелая соматическая патология в стадии декомпенсации, повторное ОНМК, черепно-мозговая травма в анамнезе, воспалительные заболевания в стадии обострения, аутоиммунные, аллергические заболевания, нейродегенеративные заболевания.

С момента поступления в клинику, наряду с клиническим неврологическим обследованием всем больным проводили дополнительные клинико-лабораторные методы исследования: визуализация очагового поражения в головном мозге (KT или МРТ), исследование спинно-мозговой жидкости при необходимости с целью уточнения типа ОНМК, исследование основных клинических и биохимических показателей крови и мочи. При летальном исходе (женщина 79 лет) клинический диагноз подтверждался результатами патологоанатомического исследования.

Больные, включенные в исследование, получали комплексную терапию. Забор крови у больных проводили на 1, 7 и 21 сутки от начала заболевания в рамках общеклинического обследования. Группу контроля составили 12 практически здоровых добровольцев, сопоставимых с группой исследования по полу и возрасту, у которых проводили однократный забор крови.

Иммунологическое исследование включало фенотипирование субпопуляций лимфоцитов CD3+, CD4+, CD8+, CD20+, CD16+, CD3 HLA DR+ в периферической крови методом проточной цитофлюорометрии (цитофлюориметр Beckman Coulter Epix XL-MCL (Франция)) с использованием моноклональных антитетел («МедБиоСпектр», «Сорбент», Москва.) на 1, 7 и 21 сутки после ОНМК.

Определение содержания нейроспецифического белка SlOOß, а так же ФНО-а, ФНО-ß, ИЛ-lß, ИЛ-10 и ИФН-у и антимитохондриальных антител в сыворотке крови больных на 1, 7 и 21 сутки после проводили методом иммуноферментного анализа ELISA (Enzyme Linked

Immunoassay) с помощью стандартных тест систем (фирм Invitrogen, Bender MedSystems) и многоканального спектрофотометра Multiscan EX (Labsystems, Финляндия),

Статистическую обработку проводили параметрическими и непараметрическими методами. Корреляционный анализ проводили путем вычисления коэффициента ранговой корреляции Спирмена. Сравнительную динамику переменных, а также связь между несколькими независимыми и зависимым откликом оценивали с помощью дисперсионного анализа. Для всех тестов был выбран 5% уровень значимости.

Результаты исследования и их обсуждение 1. Экспериментальная часть исследования

Все крысы в соответствии с экспериментальной группой (таблица 1) до операции и на 1, 3 и 7 сутки после операции по моделированию ВМК перед выведением из эксперимента были обследованы при помощи стандартных тестов на наличие ожидаемого неврологического дефекта. Полученные в результате этого данные говорят о том, что использованный экспериментальный метод по моделированию ВМК дает стабильный результат, а так же о том, что от индивидуальных особенностей поведения, характеризующих различную прогностическую устойчивость крыс к эмоциональному стрессу, при прочих равных условиях достоверно зависит выраженность неврологического дефекта (р<0,01). Причем в группе животных с одинаковой прогностической устойчивостью к эмоциональному стрессу отмечалось достоверное увеличение среднего балла по шкале Menzes у животных, подвергавшихся перед операцией по моделированию ВМК эмоциональному стрессорному воздействию (р<0,05) (рис.1).

Экспериментальное внутримозговое кровоизлияние, как показало исследование весовых коэффициентов тимуса, является стрессорным воздействием, причем прогностически устойчивые к эмоциональному

стрессу животные реагируют с меньшим изменением веса тимуса по сравнению с прогностически предрасположенными к эмоциональному стрессу крысами (таблица 3). Полученные данные соответствуют данным Перцова В.И. и соавт. (1997), по которым иммерсионный эмоциональный стресс у крыс Август, Вистар и Вэг вызывал снижение относительной массы тимуса, наиболее выраженное у животных с низкой двигательной активностью в тесте «открытое поле».

Неврологический статус в баллах по шкале Мепгеэ у крыс с гемморагическим инсультом.

Неврологический статус в баллах по шкале Мепгезу крыс с гемморагическим инсультом после стрессорного воздействия.

Предрасположенные

[01 сутки ■ 3сутки □ 7сутки

Устойчивые Предрасположенные

| р 1 сутки ■ 3 сутки □ 7сутки ;

Рис. 1. Неврологический статус в баллах по шкале \lenzes у крыс Вистар после экспериментального ВМК и воздействия стресса

(** Р<0,01 по сравнению с устойчивыми к ЭС крысами, # Р<0,05 и ## Р<0,01 по сравнению с 1 сутками после инсульта).

Таблица 3

Индекс соотношения массы тимуса к массе тела (мг/100г) у крыс с различной эмоциональной резистентностью при экспериментальном внутримозговом кровоизлиянии

(*- Р<0,05, ** - Р<0,01 по отношению к контрольным крысам).

Контроль 1 сутки 3 сутки 7сутки

Устойчивые 140±5,1 89,9±2,6** 85,7±3,4** 94,15±8,8*

Предрасположенные 120±4,8 51,7±5,1** 78,2±7,1** 88,1±2,8*

Устойчивые+ ЭС 110,7±6 53,9±8,6** 43,48±4,1** 55,75±5,8**

Предрасположенные+ЭС 100±3,6 95,6±5,3 42,31±2,1** 76,36±4,2**

В тимусе крыс после экспериментального ВМК выявлены изменения в соотношении коркового и мозгового вещества, что наиболее наглядно отражают изменения корково-мозгового индекса (рис.2). Этот показатель достоверно уменьшался во всех экспериментальных группах. В некоторых случаях было отмечено стирание границ между корковым и мозговым веществом и в одном случае - инверсия слоев (крыса из группы предрасположенных к эмоциональному стрессу животных). Наиболее значительное уменьшение относительной площади коркового вещества было отмечено у прогностически устойчивых к эмоциональному стрессу животных, подвергавшихся перед ВМК стрессовому воздействию, оно составляло на 1 сутки 44,167±1,089 отн.ед., на 3 сутки 41,664±1,309 отн.ед., что соответственно на 28%, 32% меньше контрольных показателей и на 7 сутки стремилось к значению группы контроля 58,344±0,721 отн.ед.

140 120 100 80 60 40 20 0

Рис. 2. Изменение корково-мозгового индекса (соотношения объемных долей коркового и мозгового вещества тимуса крыс на гистологическом срезе) относительно соответствующих контролей (принятых за 100%) в разные сроки после экспериментального ВМК (%)•

По данным литературы стресс-синдром выражается иммуносупрессией, за счет ослабления Т-клеточного звена иммунитета (Dirnagl U. et al., 2007). Такую картину уменьшения количества лимфоцитов в тимусе мы наблюдали во все сроки эксперимента. Эти изменения происходили за счет высокодифференцированных форм. Динамика изменения количества деструктивно измененных клеток в корковом веществе тимуса крыс с разной прогностической устойчивостью к эмоциональному стрессу после ВМК была неоднозначной и не соответствовала динамике изменения количества малых и средних лимфоцитов (рис. 3). По данным Е.В. Воротниковой (1984) о влиянии эмоционального стресса на структурно-функциональные особенности тимуса, количество деструктивно измененных клеток заметно увеличивается через 2,5 часа после стрессового воздействия, через 10 часов фагоцитоз завершается. Следовательно, в нашем случае к 24 часам после ВМК мы и не должны были наблюдать увеличение количества деструктивно измененных клеток, при этом нельзя исключить и усиления миграционных процессов.

По нашему мнению уменьшение количества малых лимфоцитов в большей степени может быть вызвано ускорением клеточной дифференцировки малых кортикальных тимоцитов в медуллярные, либо усилением их миграции. В тоже время отмечалось увеличение количества бластов и больших лимфоцитов в подкапсулярной зоне и в целом в корковом веществе на фоне уменьшения доли митотически делящихся клеток (рис. 4).

Вышеуказанные изменения свидетельствует о стимуляции процессов иммиграции предшественников Т-лимфоцитов из костного мозга в подкапсулярную зону тимуса, об активации этапов дифференцировки в Т-лимфоцитов в подкапсулярном и корковом веществе, об усилении эмиграции медуллярных тимоцитов из тимуса. Сходная картина была описана в работах H.A. Юриной (1987) и Л.В. Волковой (1996).

Малые лимф. контроль

Деструктивн-j контроль

\т

1 3 7

Не стрессированные

1 3 7 Не стрессированные А

i -

\т

1 3 7

Стрессированные

; Малые лимф. контроль ; Деструетиви. Ш контроль

1 3 7

Стрессированные

Рис. 3. Количество малых лимфоцитов и деструктивно измененных клеток в корковом веществе тимуса прогностически устойчивых (А) и неустойчивых (В) к стрессу крыс на 1, 3, 7 сутки после ВМК и в контроле на единице площади 880 мкм2.

4,5

: Бласты ЗГ контроль : Б. лимф ЗЕ контроль [ Штотич. - ]•* контроль

1 3 7

Не стрессированные

г--.

••.....т.-

1 3 7

Стрессированные

с Бласты ZSL контроль ¿>Б. лимф. 2:контроль £ Митотич-Т- контроль

п,

ь-

1 3 7

Не стрессированные

Г"--...

1 3 7

Стрессированные

Рис. 4. Количество бластов, больших лимфоцитов, и клеток с картинами митоза в подкапсулярной зоне тимуса прогностически устойчивых (А) и неустойчивых (В) к стрессу крыс на 1, 3, 7 сутки после ВМК и в контроле на единице площади 880 мкм2

По данным Богдашина И.В. и соавт. (1991) тимус оказывает регулирующее влияние на гемопоэз при стрессе путем миграции в костный мозг специализированных клеток-регуляторов, которые вызывают гиперплазию костного мозга в кооперации с макрофагами.

Таким образом, на фоне инволютивных изменений в тимусе, отчетливо прослеживались и признаки увеличения его функциональной активности.

2.Клиническая часть исследования

При моделировании ВМК у животных, равно как и при развитии ОНМК у людей, происходит нарушение гемато-энцефалического барьера. Это приводит к попаданию нейроспецифических белков в кровь, на что мы вправе ожидать ответ иммунной системы. Известно, что сдвиги в иммунном статусе, вызванные инфекцией или иммунизацией, всегда сопровождаются системными изменениями гормонального статуса организма. В первые часы и дни после иммунизации изменяется уровень сывороточного и тканевого содержания кортикостероидов (Корнева Е.А.. Шхинек Э.К., 1988; МсСапп З.М.еХ а1., 1992). Считают, что эти гормональные перестройки, причинно связанные с антигенной стимуляцией, имеют приспособительное гомеостатическое значение и по механизмам обратных связей направлены в первую очередь на иммунорестрикцию, т.е. на предотвращение избыточной пролиферации стимулированных антигенами клонов Т- и В-лимфоцитов в условиях продолжающейся антигенной стимуляции (Чеботарев В.Ф., 1979).

Исходя из результатов экспериментального исследования и данных литературы, нами была сформулирована рабочая гипотеза о значимой роли в патогенезе ОНМК как стресс-реализующих, так и аутоиммунных механизмов.

Для проверки гипотезы нами была исследована динамика изменения клеточного иммунного статуса пациентов, перенесших ОНМК.

Динамика изменений субпопуляций Т-лимфоцитов соответствовала экспериментальным данным морфофункциональных изменений тимуса после ВМК. После ОНМК независимо от его типа у всех пациентов отмечено снижение абсолютного и относительного содержания лимфоцитов в периферической крови (рис. 5).

А В

Рис. 5. Абсолютное (109/л) (А) и относительное (%) (В) содержание лимфоцитов в периферической крови у пациентов после ОНМК на 1, 7 и 21 сутки и в группе контроля (К).

Не определялось достоверного изменения относительного количества СВЗ+ лимфоцитов при достоверном снижении их абсолютного содержания.

Можно выделить три основных механизма, которые приводят к снижению количества Т-клеток. Во-первых, глюкокортикоиды тормозят деление предшественников Т-лимфоцитов в профазе митоза в тимусе; во-вторых, ФНО-а, уровень которого как было выше указано повышается после инсульта, через повышение секреции адренокортикотропного гормона приводит к повышенной секреции глюкокортикоидов. Так же известно, что в зависимости от присутствия тех или иных, цитокинов ФНО-а может непосредственно контролировать пролиферацию Т-лимфоцнтов в тимусе (БЛаагесктпск Н., 1994; Ва$е1а I., БМтап О., 2000). Дефекты тимуса ведут к резкому угнетению Т-лимфоцитарного компонента иммунных взаимодействий и иммунодефициту,

протекающему по Т-типу, что «настраивает» иммунную систему на развитие аутоиммунных процессов.

Увеличение количества Т-лимфоцитов коэспрессирующих CD3 и HLA DR молекулы на своей поверхности является признаком повышения доли активированных клеток клеточной популяции СБЗ-лимфоцитов (Чепель Э. и соавт., 2008). На 1 сутки после ОНМК этот показатель был достоверно выше контрольного (р<0,05).

Относительный дефицит супрессорных влияний наблюдался у всех пациентов с ОНМК. В пользу такого вывода свидетельствует и тенденция к повышению иммунорегуляторного индекса (отношение содержания CD4+ к CD8+ лимфоцитов в периферической крови) после ОНМК (рис.6).

В развитии раннего иммунного ответа значительная роль принадлежит CD 16+ лимфоцитам, NK-клеткам. У пациентов с острой церебральной геморрагией показатели были достоверно выше контрольных во все сроки после ОНМК, на 1 и 7 достоверно выше, чем у пациентов с острой церебральной ишемией. Возможно, такие изменения связаны с более обширным поражением тканей, возникающем при геморрагическом инсульте. При оценке показателей В-клеточного звена иммунитета не было выявлено достоверных изменений.

4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5

Рис. 6. Иммунорегуляторный индекс (отношение содержания CD4+ к CD8+ лимфоцитов в периферической крови) пациентов с ОНМК на 1, 7 и 21 сутки и в группе контроля (К).

Таким образом, у больных с ОНМК на фоне падения абсолютного числа лимфоцитов, отмечался рост относительного содержания активированных СБЗ-НЬА РИ+ лимфоцитов, С04+ лимфоцитов, СБ20+ лимфоцитов, понижался уровень СБ8+, повышалось значение иммунорегуляторного индекса, что позволяет провести клинико-экспериментальные параллели и говорить об активации механизмов аутоаллергии на фоне иммуносупрессии.

Иммунобиохимическое исследование показало, что в периферической крови всех пациентов с ОНМК, независимо от его типа, происходит увеличение содержания провоспалительного цитокина ИЛ-1(3. При ретроспективном анализе был получен отрицательный результат: выраженность неврологического дефицита на 21 сутки не зависит от концентрации ИЛ-1(3 на первые, т.е. не является прогностическим признаком исхода заболевания (рис. 7А). Это в полной мере отражает функцию семейства цитокинов ИЛ-1: на уровне организма они обеспечивают «сигнал тревоги» и включают активацию нейроэндокринноиммунной системы, что свидетельствует в пользу данных о пусковой роли ИЛ-1|3 и в инициации ишемических событий (Платонова И.А., 2004).

Концентрация ФНО-а в периферической крови пациентов после ОНМК к концу острого периода была достоверно повышена (рис 7В). При ретроспективном анализе обнаружена прямая зависимость. Наши данные о неоднозначной роли ФНО-а в разные сроки после ОНМК согласуются с данными Журавлевой Е.Ю. (1998) об участии в инициации локального воспаления сразу после повреждения, а затем в восстановлении гомеостаза и ограничении воспалительных реакций.

Сходная картина получена при изучении динамики концентрации ФНО-р.

А В

Рис. 7. Содержание ИЛ-1Р (А) и ФНО-а (В) в периферической крови у пациентов после ОНМК на 1, 7 и 21 сутки и в группе контроля (К) (пг/мл).

Полученные результаты при исследовании концентрации ИЛ-10 в периферической крови пациентов с ОНМК не противоречат данным о том, что ИЛ-10 является ключевым регулятором иммунного ответа (рис. 8А). Его иммуносупрессивная роль в рефляции защитных реакций связана с контролем гиперактивации воспаления (Gazzinelli R. et al., 1996).

При исследовании содержания ИФН-у в периферической крови пациентов с ОНМК было отмечено достоверное увеличение показателя во все сроки исследования по сравнению с контрольным значением (рис. 8В). При ретроспективном анализе получен отрицательный результат -ИФН-у не может рассматриваться как прогностический критерий исхода острого периода ОНМК. Известно, что ИФН-у может обеспечивать сигнал, усиливающий пролиферацию и дифференцировку B-клеток, тем самым усиливая B-клеточный ответ, который индуцируется другими цитокинами, одновременно он может подавлять пролиферацию Т-лимфоцитов. Так же ИФН-у активирует CD8+ лимфоциты, вызывая повышение на их поверхности антигенов ГКГС II класса. В результате происходит активация цитотоксической и антигенпрезентирующей функции Т-лимфоцитов (Siegel J.P., 1988; Jelinek D.F. et al., 1986). Следовательно, полученные результаты при сопоставлении с

результатами динамики изменения концентрации других цитокинов говорят о развитии указанных эффектов в случае ОНМК.

30 28 26 24

14 12 10

Рис. 8. Содержание ИЛ-10 (А) и ИНФ-у (В) в периферической крови у пациентов после ОНМК на 1, 7 п 21 сутки и в группе контроля (К) (пг/мл).

Изменения гематоэнцефалического барьера происходят с первых минут острой фокальной ишемии и становятся наиболее выраженными через несколько часов после инсульта вследствие реализации сложного каскада микроциркуляторно-клеточных реакций, что приводит к проникновению нейроспецифических белков в кровь (Jong S. Kim, 1996; Delgado P., 2006). Утрата иммунной толерантности к белковым компонентам мозга влечет за собой аутоиммунную реакцию. Ряд работ демонстрирует увеличение антител к нейроспецифическим белкам в различные сроки после сосудистой катастрофы (Frenkel D., 2004). В нашем исследовании мы определяли содержание непосредственно самого белка S100P в периферической крови пациентов с ОНМК для оценки степени нарушения гемато-энцефалического барьера и проводили сопоставление с содержанием антимитохондриальных антител, которое показывало уровень реакции иммунной системы на продукты клеточной деструкции, образовавшихся в результате сосудистой катастрофы. Отмечено достоверное повышение уровня S100p в периферической крови,

наблюдалась прямая корреляция между уровнем неврологического дефекта в баллах по шкале NIH-NINDS и содержанием S 100(3 в крови пациентов (г=0,7, р<0,01) (рис.9А).

Содержание АМА-М2 коррелировало с уровнем неврологического дефекта в баллах по шкале NIH-NINDS (г=0,б, р<0,01) (рис.9В), а так же с уровнем S 100(3 (г=0,6, р<0,01). Из представленных данных можно сделать вывод о том, что в патогенезе ОНМК задействован иммунный ответ не только к нейроспецифическим белкам, в частности S 100(3, но и к неспецифическим продуктам деструкции клеток в результате сосудистой катастрофы.

1 7 21

É X

-I- i

Kf4 i т

Рис. 9. Содержание нейроспецифического белка S100p (пг/мл) (А) и АМА-М2 (МЕ/мл) (В) в периферической крови у пациентов после ОНМК на 1,7 и 21 сутки и в группе контроля (К).

Таким образом, при ОНМК на фоне общей депрессии иммунной системы, вызванной активацией стресс-реализующих механизмов, развиваются аутоиммунные процессы. Они направлены как на нейроспецифические белки, так и на неспецифические продукты деструкции клеток. Сначала активируется иммунный ответ по клеточному типу, здесь активную роль играют ИЛ-1|3, ФНО-а, ФНО-Р, ИНФ-у затем происходит переключение на гуморальный тип иммунного ответа, в чем задействованы ИЛ-10 и ИНФ-у.

Для решения вопроса о возможности дифференциальной диагностики типов ОНМК при помощи показателей иммунной системы был проведен кластерный анализ, в результате которого были выявлены группы пациентов с разными типами ОНМК: острой церебральной геморрагией и острой церебральной ишемией. Различия средних значений кластеров по следующим показателям были достоверны: балл по шкале МН-МЖ)8, содержание в периферической крови ФНО-а, ФНО-р , ИЛ-1|3, Э100|3, АМА-М2, СЭ16+. Учитывая, что все эти показатели зависят от величины очага поражения, следует заключить что дифференциальная диагностика типов ОНМК только по данным показателям иммунной системы невозможна. Однако показатели иммунного статуса пациентов целесообразно использовать для прогнозирования исхода острого нарушения мозгового кровообращения.

Выводы

1.В патогенезе острого нарушения мозгового кровообращения значимое место занимают аутоиммунные и адаптационные механизмы, которые тесно взаимосвязаны между собой. О чем свидетельствуют уменьшение величины корково-мозгового индекса на 1 и 3 сутки эксперимента, увеличение объемных долей, занимаемых сосудами коркового и мозгового вещества, усиление иммиграции предшественников Т-лимфоцитов в подкапсулярную зону, активация этапов дифференцировки Т-лимфоцитов в тимусе (на фоне уменьшения количества клеток с картинами митоза), интенсивная эмиграция и деструкция тимоцитов.

массы тимуса выявлено у прогностически предрасположенных к эмоциональному стрессу животных, подвергавшихся перед моделированием внутримозгового кровоизлияния стрессорному воздействию. У устойчивых к стрессу крыс менее выраженное уменьшение количества малых лимфоцитов и более выраженное увеличение малодифференцированных форм лимфоцитов в корковом веществе тимуса.

3.Реализация неспецифических адаптационных механизмов приводит к относительному дефициту супрессорных влияний. О чем свидетельствуют уменьшение общего количества клеток на единице площади тимуса, в различных экспериментальных группах крыс Вистар в условиях внутримозгового кровоизлияния, снижение абсолютного и относительного содержания лимфоцитов в периферической крови пациентов с острым нарушением мозгового кровообращения на 1 сутки после сосудистой катастрофы, увеличение относительного содержания активированных СПЗ-НЬА БШ- лимфоцитов в периферической крови пациентов на 1 сутки после острого нарушения мозгового кровообращения, повышение иммунорегуляторного индекса (отношение содержания С04+ к СВ8+ лимфоцитов в периферической крови) после острого нарушения мозгового кровообращения.

4.При развитии аутоаллергии в первую очередь разворачивается иммунный ответ по клеточному типу, затем происходит переключение на гуморальный тип. О чем свидетельствуют увеличение концентрации ИЛ-1Р, ФНО-а, ФНО-Р, ИНФ-у, относительного содержания активированных СБЗ-НЬА 011+ лимфоцитов в периферической крови пациентов на 1 сутки после острого нарушения мозгового кровообращения, а так же увеличение концентрации ИЛ-10 и снижения показателей клеточного иммунитета на 21 сутки.

5.Концентрация нейроспецифического белка 8100(3 в сыворотке крови повышена, зависит от тяжести острого нарушения мозгового

кровообращения и коррелирует с уровенем антимитохондриальных антител, что говорит о вкладе в иммунный ответ наряду с нейроспецифическими белками продуктов деструкции клеток в очаге поражения.

Практические рекомендации

Результаты проведенного исследования представляют научный и практический интерес для ученых и клиницистов, разрабатывающих новые методы диагностики и лечения острого нарушения мозгового кровообращения.

Полученные данные и использованная в экспериментальной части исследования модель могут найти применение при создании и доклиническом испытании новых схем лечения острого нарушения мозгового кровообращения.

Результаты исследования позволяют рекомендовать использование показателей иммунного статуса пациента для прогнозирования исхода острого нарушения мозгового кровообращения.

Внедрение результатов

Результаты исследования используются в лекциях и на практических занятиях кафедры гистологии, эмбриологии, цитологии ГОУ ВПО «МГМСУ Росздрава».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Морфологические изменения тимуса прогностически устойчивых к эмоциональному стрессу крыс в условиях экспериментального геморрагического инсульта. // Материалы VI международной научно-практической конференции «Студенческая медицинская наука XXI века». - Витебск, 2006. - С. 216-219.

2. Морфологические изменения тимуса крыс в условиях экспериментального геморрагического инсульта.// Материалы 55-ой итоговой студенческой научной сессии. - Москва, 2007. - С. 94.

3. Цитоархитектоника тимуса прогностически устойчивых к эмоциональному стрессу крыс при геморрагическом инсульте в эксперименте. // Морфология: материалы научно-практической конференции «Современные аспекты гистогенеза и вопросы преподавания гистологии в вузе», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.И. Фалина. - 2007. -№3, Т.131. - С. 91.

4. Морфологические изменения тимуса крыс в условиях экспериментального геморрагического инсульта. // Анналы ФПНПК.-Москва, 2007. - Том XIII. - С. 19-20.

5. Иммунные механизмы в развитии геморрагического инсульта. // Вестник Российской академии медицинских наук. - 200Е. - №11. - С. 47-49. (соавт. М.Р. Сапин, Л.М. Ерофеева, Е.В. Коплик).

6. Морфологические характеристики тимуса крыс в условиях экспериментального геморрагического инсульта. // Морфология. -2008. - №2, Т.133. - С. 45-46. (соавт. Ерофеева Л.М., Крапошин М.В., Коплик Е.В.)

7. Изменения тимуса крыс Вистар на фоне экспериментального геморрагического инсульта. // Медицина и качество жизни. - 2008. -№3. - С. 26. (соавт. Крапошин М.В.).

В. Тимус крыс Вистар с разной прогностической устойчивостью к эмоциональному стрессу в условиях экспериментального геморрагического инсульта. // Вестник Российской академии медицинских наук: тезисы докладов V Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». - 2008. - №11.- С. 398-399. (соавт. Крапошин М.В.).

9. Цитокины и ответ иммунной системы в условиях острого нарушения мозгового кровообращения. // Вестник ВГМУ.- 2009. - №1,Т.8.-С.5-11.

10. Содержание нейроспецифического белка БЮОЬ, клеточный иммунный статус и цитокиновый профиль в различные периоды после острого

нарушения мозгового кровообращения (ОНМК) // Сборник тезисов 3-ей международной научной конференции «Актуальные проблемы спортивной морфологии и генетики человека» - Москва, 2009. - С. 151-153. (соавт. Ерофеева Л.М., Гультяев М.М.).

11.Изменение показателей клеточного иммунного статуса в условиях острого нарушения мозгового кровообращения // Материалы Международной научной конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2009», секция фундаментальная медицина. - Москва, 2009 - С. 37.

Соискатель

С.П. Сергеева

Сергеева С.П.

Морфофункциопальное состояние тимуса, цитоки новый профиль и клеточный иммунный статус при остром нарушении мозгового кровообращения

Изучена динамика изменений морфофункционального состояния тимуса крыс с различной прогностической устойчивостью к эмоциональному стрессу после экспериментального внутримозгового кровоизлияния. Исследована динамика показателей клеточного и гуморального звеньев иммунитета у пациентов после острого нарушения мозгового кровообращения. Выявлена зависимость содержания S100(3 и АМА-М2 в периферической крови пациентов, что доказывает участие в патогенезе этого заболевания иммунных реакций против специфических белков мозга и фрагментов деструкции клеток. Показано, что в патогенезе острого нарушения мозгового кровообращения значимое место занимают аутоиммунные и адаптационные механизмы, которые тесно взаимосвязаны между собой.

Sergeeva S.P.

Morphofunctional changes of thymus, cytokine and cell immune response in stroke

The role played by immune and stress mechanisms in intracerebral hemorrhage was evaluated based on the studies of thymus structure and cell composition in rats showing different degree of tolerance to emotional stress. Clinical data showed a role for stress, inflammatory, innate immune and adaptive immune mechanisms in stroke. Biomarkers combination as predictors of stroke occurrence and prognosis was identified. It is explained that the products of brain cell stroke destruction play in autoimmune stroke progress mechanisms the same role as neurospecific proteins. It is concluded that both stereotype and autoimmune mechanisms are involved in the development of stroke.

Подписано в печать: 17.09.2009

Заказ № 2538 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499)788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Сергеева, Светлана Павловна

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Морфология и иммунологическая характеристика тимуса

1.2 Структурно-функциональные преобразования тимуса в ответ на стрессорные воздействия

1.3 Биология Т-лимфоцитов. Клеточный иммунный ответ

1.4 Роль стресс-реализующей системы в развитии острых нарушений мозгового кровообращения

1.5 Роль иммунной системы в развитии острых нарушений мозгового кровообращения

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.2 Методики экспериментальной части исследования

2.3 Методики клинического клинической части исследования

Глава 3. Собственные данные

3.1 Экспериментальная часть исследования

3.1.1. Структура и клеточный состав тимуса крыс Вистар в норме

3.1.2 Структура и клеточный состав тимуса крыс Вистар в условиях экспериментального внутр и мозгового кровоизлияния на 1, 3 и 7 сутки

3.2 Клиническая часть исследования

3.2.1 Характеристика обследованных больных с ОНМК 86 3.2.2 Клеточный иммунный статус в динамике у больных с острым нарушением мозгового кровообращения и в группе контроля

3.2.3 Цитокиновый профиль в динамике у больных с острым нарушением мозгового кровообращения и в группе контроля

3.2.4 Содержание нейроспецифического белка S 100(3 и антимитохондриальных антител в периферической крови у больных с острым нарушением мозгового кровообращения и в контрольной группе

Глава 4. Обсуждение Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональное состояние тимуса, цитокиновый профиль и клеточный иммунный статус при остром нарушении мозгового кровообращения"

Актуальность исследования

Проблема острых нарушений мозгового кровообращения (ОНМК) приобретает все большую медико-социальную значимость (Яхно Н.Н., Валенкова В.А., 1999; Котова О.В., 2000). Доказано, что в патогенезе ОНМК важную роль играют иммунные механизмы, но авторы расходятся» во мнении относительно их влияния на течение заболевания и его исход (Hosomi N., Ban С., 2005; Blanco М., Castellanos М.,„2005; Hallenbeck J., Zoppo G., 2006). Необходимо учитывать наличие тесной связи между механизмами повреждения и восстановления мозга (Семченко В.В., Степанов: С.С., Боголепов Н.Н., 2008). В работах ряда авторов показано, что при повреждении гемато-энцефалического барьера реагирует Т-клеточное звено иммунитета (Tarkowski Е., Naver Н., 1996; Michael J., Shea А, 2007; Ziv Y., Finkelstein A., 2007). Выявлены изменения и в гуморальном звене иммунитета (Tarkowski Е., Rosengren L. et al. 1995; Vila N., Castillo J., 2003). Определенное место в патогенезе ОНМК занимают неспецифические адаптивные реакции, развивающиеся за счет активации гипоталамо-гипофизарно-надпочечникового комплекса - адаптационный синдром (Селье Г., 1960). В частности они выражаются иммуносупрессией за счет ослабления Т-клеточного звена иммунитета (Dirnagl U., Klehmet J., 2007). Тимус — центральный орган иммуногенеза, от состояния и активности которого во многом зависит не только выраженность защитных реакций всего организма, но и адаптация организма к окружающей среде (Сапин М.Р., Никитюк Д.Б., 2000; Ерофеева JI.M., 2002). Благодаря большой серии работ К.В. Судакова и соавт. стало известно, что животные с разной устойчивостью к эмоциональному стрессу имеют существенные различия в содержании катехоламинов, ряда нейропептидов в ткани мозга и характеризуются различной степенью изменения органов стресс-маркеров, в том числе тимуса, в ответ на эмоциональный стресс (Коплик Е.В., Ганнушкина И.В., Судаков КВ., 1995; Судаков К.В. и соавт., 1998). На сегодняшний день остается не изученной взаимосвязь между специфическими и неспецифическими (реакциями на стресс) реакциями иммунной системы и ее центрального органа тимуса.

Из анализа литературы следует, что при имеющемся на сегодняшний день обилии экспериментальных работ и клинических исследований, посвященных иммунным механизмам развития ОНМК, ни одна не воссоздает целостной картины, происходящих в организме изменений, не показывает взаимосвязи между локальным и системным ответом, между специфическими и неспецифическими адаптивными реакциями. Отсутствуют данные относительно функциональной морфологии тимуса на фоне развития внутримозгового кровоизлияния в условиях эмоционального стресса и без него.

Цель исследования

Основные задачи исследования

3. Исследовать динамику изменения абсолютного количества лимфоцитов, а так же относительного количества их отдельных видов (CD3+, CD4+, CD8+, CD20+, CD 16+, CD3 HLA DR+) в периферической крови пациентов, перенесших острое нарушение мозгового кровообращения.

4. Изучить в динамике содержание цитокинов (ФНО-а, ФНО-(3, ИЛ-1Р, ИЛ-10 и ИФН-у) в крови пациентов, перенесших острое нарушение мозгового кровообращения.

5. Изучить динамику содержания нейроспецифического белка SlOOp и АМА-М2 после острого нарушения мозгового кровообращения и выявить возможные зависимости.

Научная новизна исследования

Впервые подробно изучена динамика изменений морфофункционального состояния тимуса крыс после экспериментального внутримозгового кровоизлияния. Показано, что степень выраженности изменений зависит от типа поведения животных в тесте «Открытое поле», а также воздействия эмоционального стресса. Показана динамика показателей клеточного и гуморального звеньев иммунитета у пациентов после острого нарушения мозгового кровообращения. Выявлена зависимость содержания S100P и АМА-М2 в периферической крови пациентов, что доказывает участие в патогенезе этого заболевания иммунных реакций против специфических белков мозга и фрагментов деструкции клеток. Проведены клинико-морфологические параллели, показывающие взаимное влияние механизмов стресс-реализующей системы, приводящих к иммунодефициту и механизмов иммунной системы, ведущих к развитию локального воспаления. Оценена роль иммунного ответа в повреждении ткани, мозга, предложена динамическая модель патогенеза ОНМК, что может иметь значение для разработки новых патогенетичеки обоснованных схем лечения.

Научно-практическая ценность работы

Основные положения, выносимые на защиту

Внедрение результатов работы в практику

Основные положения работы используются в учебном процессе кафедры гистологии, цитологии, эмбриологии ГОУ ВПО «МГМСУ Росздрава». По материалам работы опубликовано 11 научных работ. Материалы работы доложены и обсуждены на конференциях.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Сергеева, Светлана Павловна

Выводы

1.В патогенезе острого нарушения мозгового кровообращения значимое место занимают аутоиммунные и адаптационные механизмы, которые тесно взаимосвязаны между собой. О чем свидетельствуют уменьшение величины корково-мозгового индекса на 1 и, 3 сутки эксперимента,, увеличение объемных долей, занимаемых сосудами коркового и мозгового вещества, усиление иммиграции предшественников Т-лимфоцитов в подкапсулярную зону, активация этапов дифференцировки Т-лимфоцитов в тимусе (на фоне уменьшения, количества клеток с картинами митоза), интенсивная эмиграция и деструкция тимоцитов.

2.Устойчивые и предрасположенные к эмоциональному стрессу крысы Вистар реагируют на экспериментальное внутримозговое кровоизлияние с различной выраженностью изменений цитоархитектоники и клеточного состава» всех слоев тимуса. На выраженность изменений- в тимусе влияет также факт стрессорного воздействия^ до операции по моделированию внутримозгового кровоизлияния. Так, наиболее выраженное уменьшение массы тимуса выявлено у прогностически предрасположенных к эмоциональному стрессу животных, подвергавшихся перед моделированием внутримозгового кровоизлияния стрессорному воздействию. У устойчивых к стрессу крыс менее выраженное уменьшение количества малых лимфоцитов и более выраженное увеличение малодифференцированных форм лимфоцитов в корковом веществе тимуса.

3.Реализация неспецифических адаптационных механизмов приводит к относительному дефициту супрессорных влияний. О-чем свидетельствуют уменьшение общего количества клеток на единице площади тимуса, в различных экспериментальных группах крыс Вистар в условиях внутримозгового кровоизлияния, снижение абсолютного и относительного содержания лимфоцитов в периферической крови пациентов с острым нарушением мозгового кровообращения на 1 сутки после сосудистой катастрофы, увеличение относительного содержания активированных CD3-HLA DR+ лимфоцитов в периферической крови пациентов на 1 сутки после острого нарушения мозгового кровообращения, повышение иммунорегуляторного индекса (отношение содержания CD4+ к CD8+ лимфоцитов в периферической крови) после острого нарушения мозгового кровообращения.

4.При развитии аутоаллергии в первую очередь разворачивается иммунный ответ по клеточному типу, затем происходит переключение на гуморальный тип. О чем свидетельствуют увеличение концентрации ИЛ-ip, ФНО-а, ФНО-Р, ИНФ-у, относительного содержания активированных CD3-HLA DR+ лимфоцитов в периферической крови пациентов на 1 сутки после острого нарушения мозгового кровообращения, а так же увеличение концентрации ИЛ-10 и снижения показателей клеточного иммунитета на 21 сутки.

5.Концентрация нейроспецифического белка SlOOp в сыворотке крови повышена, зависит от тяжести острого нарушения мозгового кровообращения и коррелирует с уровнем антимитохондриальиых антител, что говорит о вкладе в иммунный ответ наряду с нейроспецифическими белками продуктов деструкции клеток в очаге поражения.

132

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Сергеева, Светлана Павловна, Москва

1. Абрамов В.В. Взаимозависимость функционирования иммунной и нервной систем. //Успехи современной биологии. 1991. - №6. - с.840-844.

2. Абрамов В.В. Принципы нейроиммунологии в эксперименте и клинике. //Иммунология. — 1995. №1. - с.11-15.

3. Аветикян Ш.Т. и др. О типологической систематизации адаптивных реакций (на примере антиортостатического воздействия) // Физиология человека.-1982.-Т. 8,N 1.-С. 132-137.

4. Агеев А.К. Гистопатология вилочковой железы человека. -JI. Медицина, 1973. — 128с.

5. Алферова В.В., Гусев Е.И., Гехт А.Б., и др. Изменение нейротропных аутоантител в остром периоде ишемического инсульта при различном исходе заболевания. //Материалы IX Всероссийского съезда,, неврологов. Ярославль. 2006. С. 362.

6. Аминова Г.Г. Цитоархитектоника разных зон тимуса крыс// Арх.анат.-1987. Т.93. -№11.- С.73-76.

7. Анохин П.К. Очерки физиологии функциональных систем. М. Медицина, 1975. 285с.

8. Ашмарин И.П., Стукалов П.В. Нейрохимия. 1996. М.: изд-во РАМН. -С. 47-98.

9. Березин В.Ф. Специфические белки нервной ткани /Киев, 1990. С. 45-50.

10. Ю.Бобова Л.П., Кузнецов С.Л., Сапрыкин В.П. Гистофизиология крови и органов кроветворения и иммуногенеза. М.: «Новая волна», 2003. - С. 115-124.

11. П.Богданова Е.Д., Каган В.Е., Кулиев И.Я., Меерсон Ф.З. и др. Активация перекисного окисления липидов в мозге и появление антител кмозговым антигенам при стрессе. Иммунология, 1981. - №2. — с.65-66.

12. Богдашин И.В., Дыгай Н.М., Шерстобоев Е.Ю. и др. Роль тимуса в регуляции синтеза цитокинов клетками костного мозга при стрессе. -Иммунология, 1991. №5. - С.30-33.

13. Варлоу Ч.П., Денис М.'С. и др. Инсульт. Практическое руководство,для ведения больных (пер. с англ.). — СПб: Политехника, 1998. — 242 с.

14. Н.Васильев А.Г., Чурилов Л.П. Иммунология и иммунопатология /СПб, 2006.-С. 124-138.

15. Виленский Б.С. Соматические осложнения инсульта: профилактика и лечение. //Неврологический журнал.-2003. Т.8, №3.- С.4-10.

16. Волкова Л.В. Морфофункциональные изменения в тимусе и селезенке при стрессовых воздействиях. Дисс.д.м.н. — М., 1996. — 186с.

17. П.Герасимова М.М. Коррекция аутоиммунных нарушений с помощью кортексина в остром периоде ишемического инсульта.; //Нейроиммунология, 2005. Том III. №2. С. 177-178.

18. Герасимова М.М., Медведева С.Л. Кпинико-иммунологичекие аспекты церебрального инсульта. //Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова (приложение «Инсульт»), 2003. Выпуск 9. С. 134.

19. Гриневич Ю.А., Чеботарев В.Ф. Иммунобиология гормонов тимуса. -Киев, Здоровье, 1989.

20. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга / М.: Медицина, 2001.-328 с.

21. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Изыкенова Г.А. и др. Изучение уровня аутоантител к глутаматным рецепторам в сыворотке крови у больных в остром периоде ишемического инсульта //Ж. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 1996. - №5. - с.68-72.

22. Ендолов В.В., Арцимович Н.Г. Толерантность к аутоантигенам и аутоиммунитет. Усп.совр.боил., 1984. — Т.97. - вып.З. - с.426-434.

23. Ерофеева JI.M., Краснов И.Б., Сапин М.Р. Структурно-функциональное состояние тимуса при адаптации крыс к условиям повышенной гравитации.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2003.- Т.35, №2. С.219.

24. Жданов Г.Н., Герасимова М.М. Иммунологические критерии в прогнозировании течения и исхода ишемического инсульта.// Неврологический журнал. — 2005. -Т. 10, №1. С.19-21.

25. Журавлева Е.Ю. Роль пептидергических нейротрансмиттерных систем в патогенезе и нейропротекторной терапии острого < ишемического инсульта (клинико-биохимическое исследование): Дисс .канд. мед. наук. -М.- 1998. -191с.

26. Ивановская Т.Е., Зайратьянс О.В., Леонова Л.В., Волощук И.Н. Патология тимуса у детей. М.:СОТИС, 1996. - с. 17-62.

27. Илюхина А.Ю. Динамика накопления аутоантител к глутаматным рецепторам NMDA-типа в крови больных в остром периоде церебрального инсульта, дисс. .к.м.н. 1998 г. СПб, 165 с.

28. Кветной И.М. и соавт., 2005

29. Кетлинский С. А., Симбирцев А.С. Цитокины. СПб: ООО «Издательство Фолиант», 2008. - 552с.

30. Ковалев И.Е., Полевая О.Ю. Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям. -М.:Наука, 1985. 304 с.

31. Коплик Е.В. Метод определения критерия устойчивости крыс к эмоциональному стрессу. // Вестник новых медицинских технологий 2002.- T.IX, №1.

32. Коплик Е.В., Щукин И. А., Мартынов М. Ю., Бондарюк Н.О. Роль стрессрезистентности в генезе экспериментальных геморрагических инсультов мозга. // Сборник тезисов 20 конгресса Физиологов России, 2007. С. 276-277.

33. Коплик Е.В. Прогностические поведенческие критерии и особенности мозгового кровотока у крыс с различной устойчивостью к эмоциональному стрессу // Физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 1995. - Т. 81, N 9. - С. 35-39.

34. Коплик Е.В., Салиева P.M., Горбунова А.В. Тест «открытого поля» как прогностический критерий устойчивости крыс линии Вистар к эмоциональному стрессу// Журнал высшей нервной деятельности. — 1995. Т.45. - Вып.4. - С.775-781.

35. Корнева Е.А. Иммунофизиология как новое научное направление: предпосылки и история развития / СПб.: Наука, 1993. С. 11-37.

36. Крыжановский Г.Н. Стресс и иммунитет. Вестник АМН СССР, 1985.- №8. с.3-12. '}

37. Магаева С.В., Морозов С.Г. Нейроиммунофизиология. М.: Изд-во ГУ НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН. — 2005. —-160с.

38. Малашхия Ю.А. и др. Мозг, как орган иммунитета// Журнал неврологии и психиатрии. — 1999. — N 9. — С. 62-65.

39. Малашхия Ю.А., Надарейшвили З.Г., Малашхия Н.Ю. и др. Мозг, как орган иммунитета. // Журнал неврологии и психиатрии. — 1999. №9. -С.62-65.

40. Меерсон Ф.З. Адаптационные реакции поврежденного организма. В кн.: Физиология адаптационных процессов. — М.: Наука, 1986. — С. 482490

41. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники, СПб: Медгиз, 1961,340с.

42. Микроскопическая техника. Руководство для врачей и лаборантов. Под ред. Д.С. Саркисова, Ю.Л. Перова, М: Медицина, 1996. 544 с.

43. Морозов С.Г. Антитела к- белкам* нервной ткани при нервных и психических заболеваниях (иммунохимическое и клинико-иммунологическое исследование): Дисс. .докт.мед.наук. — М., 1997.

44. Морозов С.Г., Гнеденко Б.Б., Панченко Л.Ф. и др. Аутоантитела к белкам ткани мозга при патологии нервной системы. //Нейрохимия. — 1996. Т.13, №2. - С.98-102.

45. Перцов В.И., Сосновский А.С., Пирогова Г.В. Влияние интерлейкина-1-бета на состояние тимуса, надпочечников и селезенки при иммерсионном эмоциональном, стрессе у крыс Август, Вистар и ВЭГ// Бюлл.экспер.биол.мед. 1997. - Т.124. - №7. - С.32-35.

46. Платонова И.А. Роль стресс-реализующей нейроиммунноэндокринной системы в патогенезе ишемического инсульта, Москва, 2004. Дисс. .канд. мед. наук. -234с.

47. Попова Э.Н., Коплик Е.В. Деструктивные и регенеративные изменения в сенсомоторной коре при экспериментальном геморрагическом инсульте у крыс с различной устойчивостью к эмоциональному стрессу. //Ж. Неврологический вестник. 2007. - Т.39, Вып.1. - С.213.

48. Ребенко Н'.М. Клинико-иммунологические особенности у больных, в остром периоде ишемического инсульта : автореферат дис. . кандидата медицинских наук. Новосибирск, 2004. - 24с.

49. Сапин М.Р., Никитюк Д.Б. Иммунная система, стресс и иммунодефицит.-Mi: «Джангар», 2000.-184 с.

50. Сапин М.Р., Этинген JI.E. Иммунная система человека. МгМедицина, 1996.-304 с.

51. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме: Пер. с англ. — М., 1960.

52. Семенов С.Ф., Коган Р.Д., Могилина Н.П. и др. Нейроиммунные реакции при эмоциональном стрессе у здорового человека. — Вестник -АМН СССР, 1985. №8. - С. 38-43.

53. Семченко В.В., Степанов G.C., Боголепов Н.Н. Синаптическая пластичность головного мозга. — Омск: Омская областная типография, 2008.-408 с.

54. Сергеев П.В., Шимановский H.JL, Петров В.И: Рецепторы физиологически активных веществ: Монография. Волгоград: издательство «Семь ветров», 1999. — С. 349 — 387.

55. Скворцова В.И., Насонов Е.А., Журавлева Е.Ю. и др. Клинико-иммунобиохимический мониторинг факторов локального воспаления вч 1остром периоде полушарного ишемического' инсульта. // Журнал неврологии и психиатрии. 1999. - №5. - С.27-31.

56. Скворцова В.И., Платонова И.А., Островцев И.В. и др. Влияние гомонов стрессреализующей системы на течение острого периода

57. J ишемического инсульта. // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С.

58. Корсакова. -2000. -№4. С. 22-27.

59. Стефанов С.Б. Морфометрическая сетка случайного шага как средство , ускоренного измерения элементов//Цитология. — 1974. №6 - с.85.

60. Стоянова О.В. Состояние адаптационно-компенсаторных систем организма в остром периоде инсультов. Дисс. канд. мед. наук. / Кубанская гос. Мед.акад.Краснодар. 1998. - 141 с.

61. Стоянова О.В. Состояние адаптационно-компенсаторных систем организма в остром периоде инсультов: Автореф. дисс. v .канд.мед.наук. — 1998. — С.23.

62. Судаков К.В. Индивидуальная устойчивость к эмоциональному . стрессу. -М.: Горизонт, 1998. -263 с.

63. Судаков К.В. Психоэмоциональный стресс: профилактика и реабилитация. Терапевтический архив. — 1997. - №1. - С.70-74.

64. Трошин В.Д., Густов А.В., Трошин О.В. Острые нарушения мозгового кровообращения. — Нижний Новгород, 2000. — С.440.

65. Труфакин В.А. Органы тимо-лимфатической системы. — Новосибирск. 1980.-165 с.

66. Труфакин В.А., Шмаков А.Н., 1991

67. Харченко В.П., Саркисов Д.С., Ветшев П.С., Галил-Оглы Г.А., Зайратьянц О.В. Болезни вил очковой железы // М.: «Триада-Х», 1998 -232 с.

68. Чепель Э., Хейни М., Мисбах С., Сновден Н. Основы клинической иммунологии/Перевод с англ. — 5-е изд. М.:ГЭОТАР-Медиа, 2008. — 416 с.

69. Чехонин В.П. и др. Моноклональные антитела в нейробиологии -Новосибирск, 1995.-С. 160-170.

70. Шалаев С.В. Морфология органов иммунной системы после некоторых экстремальных воздействий: Автореф. дисс. . .канд.мед.наук. 2002. — 25 с.

71. Юматов Е.А. Центральные нейрохимические механизмы устойчивости к эмоциональному стрессу: Автореф. Дисс. .д-ра мед.наук. — М., 1986.

72. Юматов Е.А., Певцова Е.И., Мезенцева JT.A. Физиологическая адекватная экспериментальная модель агрессии и эмоционального стресса. // Журнал высшей нервной деятельности им. И.М. Павлова. — 19881 Т.38, №1. - С.350 - 354.

73. Юрина Н.А. Антиген-независимые морфологические изменения в лимфоидных органах в условиях стресса и изменений гормонального -4 фона. — В кн. Функциональная морфология иммунной системы, Новосибирск: Наука, 1987. С. 95-108.

74. Ярилин А.А. Возрастные изменения тимуса и Т-лимфоцитов// Иммунология. 2003. - Т.24. - С. 117-194.

75. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. - 607с.

76. Ярилин А.А., Беляков И.М. Тимус как орган эндокринной системы//Иммунология. — 1996. №1. — С. 4-10.

77. Ярилин А.А., Пинчук В.Г., Гриневич Ю.А. Структура тимуса и дифференцировка Т-лимфоцитов. — Киев:Наукова думка, 1991. 244с.

78. Adams Н., Zoppo G., Alberts М. et al. Guidelines for the Early Management of Adults With Ischemic Stroke // Circulation. 2007 - N.115. - P.e478-e534.

79. Adcoc I.M., Ito K. Molecular mechanisms of corticosteroid actions// Monaldi Arch. Chest. Dis. 2000. - Vol.55, N3. - P.256-266.

80. Allan S., Rothwell N. Inflammation in central nervous system' injury. // Philos Trans R Soc Lond В Biol Sci. 2003. - N358. - P. 1669 -1677.

81. Amsten D., Kruisbeek A.M. Thymocyte selection: not by TCR alone. Immunol.Rev.//1998. — Vol.165. -P.209-229.

82. Andrejevic S., 1997 Andaluz N., Zuccarello M., Wagner R. Experimental animal models of intracerebral hemorrhage.//Neurosurg Clin N Am.- 2002. N13. - P. 385-393.

83. Andrew D., Aspinall R. IL-7 and not stem cell factor reverses both the increase in apoptosis and the decline in thymopoiesis seen in aged mice // Journal of Immunology 2001. - №166(3). - P. 1524-1530.

84. Angela Cenci M., Whishaw Ian« Q., Schllert T. Animal models of neurological deficits: how relevant is the rat? //Neuroscience. — 2002. — Vol.3, №5. P.576-578.

85. Angeli A., Masera R.C. et al. Modulation by cytokines of glucocorticoid action.// Ann.N.Y.Acad.Sci. 1999: - Vol. 876. - P.210-220.

86. Audebert H.J., Rott M.M., Eck Т., Haberl R.L. Systemic inflammatory response depends on initial stroke severity but is attenuated by successful thrombolysis. // Stroke. 2004. - N35. - P. 2128 -2133.

87. Aurell A., Rosengren L.E., Karlsson B. et al. Determination of S-100 and glial fibrillary acidic protein concentrations in cerebrospinal fluid after brain infarction. // Stroke. 1991. - N22. - P. 1254-1258.

88. Bacchetta R., Sartirana C., Levings M. Et al. Growth and expansion of human T regulatory type 1 cells are independent from TCR activation but require exogenous cytokines. // Eur. J. Immunol. 2002. — Vol.32. P.2237-2245.

89. Bae H., Yoon D., Lee J. et al. In-Hospital Medical Complications and Long-Term Mortality After Ischemic Stroke. // Stroke. 2005. - N.36. - P.2441-2445.

90. Baker C., Richards L.J., Dayan C.M. at al. Corticotropin-releasing hormone immunoreactivity in human T and В cell and macrophages:colocalization with arginine vasopressin. 2003. — Vol. 15., N11. - P. 1070 -1074

91. Balasingam V., Yong V. Attenuation of Astroglial Reactivity by Interleukin-10. // The Journal of Neuroscience. — 1996. — Vol.16, N.9. -P.2945-2955.

92. Batanero E, de Leeuw F.E., Jansen G.N., van Wichen D.F., Huber J., Schuurman H.J. The neural and neuro-endocrin component of the human thymus. II. Hormone immunoreactivity // Brain Behav. Immum 1992. -Vol.6.-N3.-P.249-264.

93. Bauer M.E. Stress, glucocorticoids and ageing of the immune system // Stress. 2005. - Vol. 8, N 1. - P. 69-83

94. Beetz A., Messer G., Oppel T.et all. Induction of interleukin-6 by ionizing radiation in a human epithelial cell line: control by corticosteroids//Int.J.Radiat.Biol. 1997. - Vol.72,N.l. - P.33-43.

95. Belayev L, Saul I, Curbelo К et al. Experimental intracerebral hemorrhage in the mouse: histological, behavioral, and hemodynamic characterization of a double-injection model. // Stroke. — 2003. N34. - P. 2221-2227.

96. Bennet A.R., Farley A., Blair N.F. et all. Identification and characterization of thymic epithelial progenitor cells// Immunity. 2002. -Vol.16. -P.803-814.

97. Bigio M., Yan H., Buist R. et al. Experimental Intracerebral Hemorrhage in Rats. // Stroke. 1996. - N.27. - P.2312-2320.

98. Bockman D.E. development of the thymus // Microsc. Res. Tech. -1997. Vol.38. -N.38. - P.209-215.

99. Bornstein N. Antibodies to brain antigens following stroke // Neurology. 2001. - N 56. - P. 529 -530.

100. Bowers S.L., Bilbo S.D., Dhabhar F.S. at al. Stressor-specific alterations in corticosterone and immune responses in mice // Brain Behav. Immun. 2008. - Vol. 22, N.l. - P. 105-113

101. Brelinska R., Ostalshka D., Paczkowska A et al. Histogenesis of the rat thymic medulla during first stages of development // Folia Histochem. Cytobiol. -2001. Vol.39. -N.2. -P: 197-198.

102. Brewer A., Kanagawa O., Sleckman P., Muglia J. Thymocyte Apoptosis Induced by T Cell Activation Is Mediated by Glucocorticoids In Vivo.// The Journal of Immunology. 2002. - № 169. - P. 1837-1843.

103. Bruse A.I., Boling W.W., Kindy M.S. et al. Altered neuronal and microglial responses to excitotocsic and ischemic brain injury in mice laking TNF receptors.// Nat. Med. 1996. - Vol.2. - P. 788-794.

104. Bruse-Keller A.J., Geddes J.W., Knapp P.E. et al. Anti-death properties of TNF against metabolic poisoning: mitochondrial stabilization by MnSOD.// J. Neuroimmunol. 1999. Vol. 93. - N1-2. - P. 53-71.

105. Bruunsgaard* H.} Pederson A.N., Schroll M. et al. Decreased natural killer cell activity is associated with atherosclerosis in elderly. // Exp. Gerontol. -2001. 37(1). -P.127-136.

106. Buttner Т., Weyers S.} Postert T. et al. S-100 protein: serum marker of focal brain damage after ischemic territorial MCA infarction. Stroke. -1997.-N28.-P. 1961-1965.

107. Call G.B., Husein O.F. et al. Bovine adrenal cells secrete interleukine-6 and tumor necrosis factor in vitro.// Gen.Comp.Endocrinol. 2000. — Vol.118.-N.2.-249-261.

108. Castellanos M.} Castillo J., Garcia M.M. et al. Inflammation-mediated damage in progressing lacunar infarctions: a potential therapeutic target. // Stroke. 2002. - N.33. - P.982-987.

109. Castillo J., Davalos A., Noya M. Progression of ischemic stroke and excitotoxic aminoacids. // Lancet. 1997. - N349. - P. 79-83.

110. Chamorro A., Hallenbeck J. The harms andbenefits of inflammatory and immune responses in vascular disease. // Stroke. 2006. - N37. — P. 291-293.

111. Chen G., Castro W., Chow H. et al. Clearance of 1251-Labeled Interleukin-6 from Brain into Blood Following Intracerebroventricular Injection in Rats. // Endocrinology. 1997. - Vol. 138, N.l 1. - P.4830-4836.

112. Chen J., Flurkey K., Harrison D.E. Mech. Ageing Dev. 2002; 123 (23): 145-153.

113. Choi B.H., Kim R.C. Exprestion of glial fibrillary acidic protein by immature oligodendroglia and its implications. // J. Neuroimmunol. 1985. - V.8 -P.215-235.

114. Concordet J.P., Ferry A. Physiological programmed cell death in thymocytes is induced by physical stress (exercise) // Am. J. Physiol. -1993. Vol.265. - N.3. - Pt.l. - P.626-629.

115. Cunningham R.T., Watt M., Winder J. McKinstry S. Serum neuron specific enolase as an indicator of stroke volume. Eur. J. Clin. Invest. 1996. -N26. — P. 298-303.

116. Dambinova S.A., Khounteev G.A. Blood Test Detecting Autoantibodies to N-Methyl-D-aspartate Neuroreceptors for Evaluation of Patients with Transient Ischemic Attack and Stroke // Clinical Chemistry. -2003. — N 10. P. 1752- 1762.

117. Davalos A., Toni D., Iweins F. Neurological deterioration in acute ischemic stroke: potential predictors and associated factors in the European Cooperative Acute Stroke Study (ECASS) I. // Stroke. 1999. - N30: - P. 2631-2636.

118. Delgado P., Sabin J. Plasma S100B Level After Acute Spontaneous Intracerebral Hemorrhage // Stroke. 2006. -N 37. - P. 2837-2839.

119. Dirnagl U., Klehmet J., Braun J.S. et al. Stroke-Induced Immunodepression: Experimental Evidence and Clinical Relevance. // Stroke. 2007. -N38. -P. 770-773.

120. Domingues-Gerpe L., Rey-Mendez M. Evolution of the thymus size in* response to phyhological and random events throughoutlife // Microsc. Res. Teh. 2003. - Vol.62. -N6. - P.464-476.

121. Domingues-Gerpe L., Rey-Mendez M. Time-course of the- murine lymphoid tissue involution during and following stressor exposure // Life Sci. 1997. - Vol. 61. - N. 10. - P. 1019-1027.

122. Dorian Bl, Garfinkel P. Stress, immunity and illness a review./ZPsychol. Medicine, 1987. - Vol.17. - P.393-407.

123. Edwards D.R., Yu-Wen Chen, Diringer M.N. Unified neurological stroke scale is valid in ischemic and hemorrhage stroke. //Stroke. 1995. -Vol.26, №10.-P.1852-1858.

124. Elencov I.J., Chrousos G.P. stress system organization, physiology and immunoregulation // Neuroimmunomodulation. - 2006. - Vol.13., N 5-6.-P. 257-267.

125. Elenkov I.J. Glucocorticoids and the Thl/Th2 balanse // Ann: N. Y. Acad. Sci.-2004.-Vol. 1024.-P.138-146.

126. Feuerstein G.Z., Liu Т., Barone F.C. Cytokines, inflammation and brain injury: role of tumor necrosis factor-alfa. // Brain Metab. Rev. 1994. -Vol.6.-P.341-360. 89,141

127. Flesher M., Nguyen K.T., Cotter C.S et al. Acute1 stressor exposure both suppresses acquired immunity and potentiates innate immunity // Am. J. Physiol. 1998. - Vol.275. -N3. -Pt.2. -P.870-878.

128. Foerch C. et al. Evaluation of serum S100B as a surrogate marker for long-term outcome and infarct volume in acute middle cerebral artery infarction // Archive Neurology. 2005. - N 62. - P. 1130 -1134.

129. Goya R.G., Bolognani F. Homeostasis, thymic hormones and' aging// Gerontology. 1999. - Vol.45 -P.174-178.

130. Grilli M., Barbieri I., Basudev H. Interleukin-10 modulates neuronal threshold of vulnerability to ischemic damage. // Eur J Neurosci. -2000. -N12.-P. 2265-2272.

131. Gunnett C.A., Berg D.J., Faraci F.M. Vascular effects of lipopolysaccharide are enhanced in interleukin-10-deficient mice. // Stroke. -1999.-N30.-P. 2191-2196.

132. Gutirres E.G., Blancs W.A., Kastin A.J. Murine tumor necrosis factor alfa is transported to brain in the mouse.//J. Neuroimmunol. — 1993. -Vol.47.-P.169-176.'

133. Hallenbeck J. et al. Immunomodulation Strategies for Preventing Vascular Disease of the Brain and Heart // Stroke. 2006. - №37. - P. 3035-3042.

134. Hammar J. Die Menschem Thymus. II Teil.// Z. Micr. Anat. Forschung. Leipzig, 1929:

135. Hardemark H-G., Ericsson N., Kotwica Z. et al. S-100 protein and neuron-specific enolase in CSF after experimental traumatic or focal ischemic brain damage. // J Neurosurg. 1989. - N71. - P. 727-731.

136. Holmin S., Mathiesen T. Intracerebral administration of interleukin-lbeta and induction of inflammation, apoptosis, and vasogenic edema. // J Neurosurg. 2000. - N92. - P. 108 -120.

137. Hosoi Т., Okuma Y., Nomura Y. Electrical stimulation of afferent vagus nerve induses IL-lbeta expression in the brain and activates HPA axis. // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Сотр. Physiol. 2000. - Vol.279. -N.l. -P.141-147.

138. Hua Y., Schallert Т., Keep R. et al. Behavioral Tests After Intracerebral Hemorrhage in the Rat. // Stroke. 2002. - N.33. - P.2478-2484.

139. Г. Jain R., Zwinckler, D. et al. Corticotropin- releasing factor modulates the immune response to stress in the rat // Endocrinology. 1991. - Volil28. -N3. -P.1329-1336.

140. Janossi.G.-, Bofil M., Treidosiewicz et al. Cellular differentiation of lymphoid subpopulations and their microenviroments in the humanthymus. In. The Human,Thymus. Ed. by H. Muller-Hermelink. Berlin etc., 1986. -P. 89-125.

141. Jelinek D.F., Splawski J.B., Lipsky P.E.//Eur. J.Immunol*.- 1986.-V.16.-N.8.-P.925.

142. Jersey J., Carmignac D., Barthlott T. et al. Brigitta Stockingerl Activation of CD8 T Cells by Antigen Expressed in the Pituitary Gland. //The Journal of Immunology 2002. - N.l69. - P.6753-67'59.

143. Kees L., Reinhard H. Differential aspects of cytokines- in the immunopathology of multiple sclerosis.//Neurology. 1995: - Vol. 45; -N.6. - Suppl.6. — P.4-5.

144. Kim J.S., Sung S. Y., Kim Y.H. Serial Measurement of Interleukin-6, Transforming Growth Factor-B, and S-100 Protein in Patients With Acute Stroke. 1996. -N27.-P. 1553-1557.

145. Kipnis J., Mizrahi Т., Hauben E. et al. Neuroprotective autoimmunity: naturally occurring CD4+GD25+ regulatory T cells suppress the ability to withstand injury to the central nervous system. // Proc Natl Acad Sci USA. -2002.-N99.-P. 15620-15625.

146. Kondoh Т., Lee S.H., Low W.S. //Neurosurgery. 1995. - V.37. N5. - P.948-954., Ahn S.S.,Gray-Alan P.N., Wood E.R. at al. // J Vascular Surgery. - 1995. - V.22, N2. - P. 135-141

147. Krajewski S., Mai J., Krajewska M. et al. Upregulation of Bax Protein Levels in Neurons following Cerebral Ischemia. // The Journal of Neuroscience. 1995. - Vol.15,N. 10. -P.6364-6376.

148. Kreutzberg G.V. Trands Neurosciense. 1996. - Vol.19. - N.8. - P. 312-318.

149. Kvetnoy I.M., Polyakova V.O., Trofimov A.V. et al. Hormonal function and proliferative activity of thymic cells in humans: immunocytochemical correlations // Neuroendocrinol. Lett. — 2003. -Vol.24. N.3-4. - P.263-268.

150. Liu Т., McDonnell P.C., Young P.R. et al. Interleukin-1 expression in ischemic rat brain. Stroke. - 1993. - N24. - P.1746-1752.

151. Liu T, Clark R.K., McDonnell P.C. et al. Tumor necrosis factor in ischemic neurons. Stroke. - 1994. - N25. - P. 1481-1488.

152. Laye S., Parnet P., Goujon E., Dantzer R. Peripheral administration of lipopolysacharide induses the expression of cytokine transcripts in,the brain and pituitaries of mice.// Mol. Brain. Res. 1994. - Vol.27. - P.157-162.

153. Lynch J. et al. Novel Diagnostic Test for Acute Stroke // Stroke. -2004.-N35.-P. 57-63.

154. Madden K.S., Felten D.L. Beta-adrenoreceptor blockade alters thymocyte differenciation in aged mice // Cell Mol. Biol. (Noisy-le-grand). -2001. Vol.47, N. 1. — P. 189-196

155. Malefyt R.W., Abrams J., Bennet B. et al. Interleukin-10 inhibits cytokine synthesis by human monocytes. // J Exp Med. 1991. - N174. - P. 1209-1220.

156. Marangos P.G., Zomzely-Neurath C., Goodwin F.K. Structural and functional properties of neuron specific protein (NSP) from rat, cat and human brain. //J. Neurochem. 1977. -V.28. -P.1097-1107.

157. Meisel C., Schwab J.M., Prass K. et al. Central nervous system injury-induced immune deficiency syndrome. // Nat Rev Neurosci. 2005 -N6. — P. 775-786.iepithelial Tumors. In: The Human Thymus Ed. By H.' Muller-Hermelink.

158. Berlin, etc., 1986. P. 207-269.

159. Nighoghossian N., Wiart M., Cakmak S. et al. Inflammatory Response After Ischemic Stroke: A USPIO-Enhanced MRI Study in Patients. // Stroke.1 -2007.-N38.-P. 303-307.

160. Nogawa S., Zhang F., Ross M. et al. Cyclo-Oxygenase-2 Gene Expression in Neurons Contributes to Ischemic Brain Damage. // The Journal ofNeuroscience. 1997. - Vol.17, N.8. -P.2746-2755.

161. Nossal G.J. Negative selection of lymphocytes // Cell. — 1994. -Vol.76. — N.2. — P.229-239.

162. Ooboshi H., Ibayashi S., Kitazono T. et al. Postischemic gene transfer of IL-10 protects against focal ischemia. // Stroke. 2002. - N33. - P. 346.

163. Padgett D.A., Glaser R. How stress influences the immune response // Trends Immunol. 2003. - Vol. 24. - N.8. - P.444-448.

164. Perini F., Morra M., Alecci M. et al. Temporal profile of serum antiinflammatory and pro-inflammatory interleukins in acute ischemic stroke patients. // Neurol Sci. 2001. - N22. - P.289-296.

165. Persson L., Hardemark H-G., Gustafsson J. et al. S-100 protein and neuron-specific enolase in cerebrospinal fluid and serum: markers of cell damage in human central nervous system. // Stroke. 1987. - N18. P. 911918.

166. Prass K., Scharff A. et al. Hypoxia-Induced Stroke Tolerance in the Mouse Is Mediated by Erythropoietin // Stroke. 2003. - N6. - P. 1434 -1439.5 150

167. Price C.J., Wang D., Menon D.K. Intrinsic activated microglia map to ;; the peri-infarct zone in the subacute phase of ischemic stroke. // Stroke. —2006.-N37.-P. 1749-1753.

168. Ranges G.E., Figari I.S., Espevik Т., Palladino M.A. Inhibition of cytotoxic T cell development by transforming growth factor 13 and reversal by recombinant tumor necrosis factor . // J Exp Med. 1987. - N166. - P. 991-998.

169. Romagnani S. Biology of human TH1 and TH2 cells. // Clin. Immunol. 1995. - Vol.15. -P.121-129.

170. Roncarolo M., Gregori S., Battaglia M. Et. Al. Interleukin-10-secreting type 1 regulatory T-cells in rodents and humans. // Immunol. Rev. 2006. - Vol.212. - P.28-50.

171. Rosengren L., Blomstrand C., Ekholm S. et al. Brain specific proteins in cerebrospinal fluid and serum after cerebral infarctions. // Eur J Neurol. — 1995. N2(suppl<2). - P.47.

172. Rothwell N.G., Hopkins S J. Cytokines and the central nervous system II: actions and mechanism of action.// Trends. Neurosci. 1995. - V.18. -P.130-136.

173. Schaarschmidt H., Prange H.W., Reiber H. Neuron specific enolase concentrations in blood as a prognostic parameter in cerebrovascular disease.// Stroke. 1994. -N25. - p. 558-565.

174. Schneider H., Pitossi F., Balschum D. et al. A neuromodulator role of interleukin-lbeta in the hippocampus.//Physiology. 1998. - Vol. 95. -P.7778-7783.

175. Serena J., Blanco M., Castellanos M. et al. The Prediction of Malignant Cerebral Infarction by Molecular Brain Barrier Disruption Markers. // Stroke. 2005. - N36. - P.1921-1926.

176. Shevach E.M. Regulatory T cells in autoimmmunity. // Annu Rev Immunol. 2000. - N18. - P. 423- 449.

177. Shalaby M.R., Aggarwal E. et al. Activation-, of human polymorphonuclear neutrophil functions by interferon-gamma and tumor necrosis factors./ J. Immunol., N135. - p. 2069-2073.

178. Shie F-S., Neely D., Maezawa I. Oxidized Low-Density Lipoprotein Is Present in Astrocytes Surrounding Cerebral Infarcts and Stimulates Astrocyte Interleukin-6 Secretion. // American Journal of Pathology. — 2004. Vol. 164, N4. - P. 1173-1181.

179. Siegel J.P.//Cell.Immunolody.-1988.-V.l 11.-N.2.-P.461.

180. Spera P.A., Ellison J.A., FeuersteinG.Z., Barone F.C. IL-10 reduces rat brain injury following focal stroke. //Neurosci Lett. 1998. -N251. - P. 189-192.

181. Spits H., de Waal Malefyt R. Functionalcharacterisation of human» IL-10.//Int. Arch. Allergy Immunol, 1992. Voi:99. -p.8-15. V

182. Stevens S.L., Bao J., Hollis J. The use of flow cytometry to evaluate temporal changes in inflammatory cells following focal cerebral ischemia in mice. // Brain Res. 2002. - N932. - P. 110-119:

183. Tait A.S., Butts C.L., Sternberg E.M: The role of glucocorticoids and progestins in inflammatory, autoimmune and infectious disease // J Leukoc. Biol. 2008. - Vol.84, N4. - P.924-931

184. Thanvi В., Treadwell S., Robinson T. Early neurological deterioration in acute ischaemic stroke: predictors, mechanisms and management. // Postgrad Med Journal 2008. -N.84. - P.412-417.

185. Todd R.D., Cianarello R.D. 1985

186. Varas A., Jime'nez E., Sacedo'n R. et al. Analysis of the Human Neonatal Thymus: Evidence for a Transient Thymic Involution. // The Journal of Immunology. 2000. - №164. - P.6260-6267.

187. Vila N., Castillo J., Davalos A. et al. Levels of Anti-Inflammatory Cytokines and Neurological Worsening in Acute Ischemic Stroke// Stroke. — 2003. -N.34. — P.671-675.

188. Vila N., Castillo J., Davalos A., Ghamorro A. Proinflammatory cytokines and early neurological worsening in ischemic stroke. // Stroke. 2001.-N31.-P. 2325-2329.

189. Vos P. et al. Glial and neuronal proteins in serum predict outcome after severe traumatic brain injury» // Neurology. 2004. - Nl 62. - P. 1303— 1310.

190. Wahl S.M., McCartney-Francis N., Mergenhagen S.E. Inflammatory and immunomodulatory roles of TGF-beta. // Immunol Today. 1989. -N10.-P. 258-261.

191. Wang C.X., Shuaib A. Involvement of inflammatory cytokines in central nervous system injury. // Prog Neurobiol. — 2002. N67. - P. 161— 172.

192. Wagoner N., Oh J-W., Repovic P. et al. Interleukin-6 (IL-6) Production by Astrocytes: Autocrine Regulation by IL-6 and the Soluble IL-6 Receptor //The Journal of Neuroscience -1999. Vol.19,N.13. - P.5236-5244.

193. Wagner R. Modeling Intracerebal Hemorrhage: Glutamate and Cytokines. // Stroke. 2007. - N38. - P. 753-758.

194. Wagner K., Dean C., Beiler S. et al. Rapid activation of proinflammatory signaling cascades in perihematomab brain regions in a porcine white matter intracerebral hemorrhage model. // J Cereb Blood Flow Metab. 2003. - N23(Suppl 1). - P. 277.

195. Welsh P., Lowe D., Chalmers J. et al. Associations of Proinflammatory Cytokines With the Risk of Recurrent Stroke. // Stroke. -2008. N39; - P. 2226-2230.

196. Whiteley W., Tseng M., Sandercock P. Blood Biomarkers in the Diagnosis of Ischemic Stroke: A Systematic Review. // Stroke. — 2008. -N39.-P. 2902-2909.

197. Woordroofe M.N. Cytokine production in the central nervous system.//Neurology. 1995. - Vol.45. -N.6. - P.227-232.

198. Wunderlich M. et al. Release of neurobiochemical markers of brain damage is related to the neurovascular status on admission and the site of arterial occlusion in acute ischemic stroke // Journal of Neurological Science. 2004. -N227. - P. 49-53.

199. Xi G., Keep R., Hoff T. Mechanisms of brain injury after intracerebral haemorrhage. // Lancet Neurol. 2006. - N5 — P. 53- 63.

200. Xue M., Del Bigio R. Intracerebral injection of autologous whole blood in rats: time course of inflammation and cell death. // Neurosci Lett.2000.- N283 -P. 230-232.

201. Yamada Y., Metoki N., Yoshida H. et al. Genetic Risk for Ischemic and Hemorrhagic Stroke. // Arteriosclerosis Thrombosis Vascular Biology. -2006. N.26 - P.1920-1925.

202. Yilmaz G., Arumugam T.V., Stokes K.Y., Granger D.N. Role of T lymphocytes and interferon-gamma in ischemic stroke. // Circulation. -2006.-N113.-P. 2105-2112.

203. Yoles E., Hauben E., Palgi O. et al. Protective Autoimmunity Is a Physiological Response to CNS Trauma. // The Journal of Neuroscience.2001.- Vol.21, N. 11. P.3740-3748.

204. Ziv Y., Finkelstein A., Geffen Y. et al. A Novel Immune-Based Therapy for Stroke Induces Neuroprotection and Supports Neurogenesis. // Stroke. 2007. - N38(part 2). - P. 774-782.

Информация о работе

Сергеева, Светлана Павловна
кандидата медицинских наук
Москва, 2009
ВАК 03.00.25

Диссертация

Морфофункциональное состояние тимуса, цитокиновый профиль и клеточный иммунный статус при остром нарушении мозгового кровообращения - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы