Молекулярное маркирование ЦМС и генов восстановления фертильности риса (Oryza sativa L.)

Ахмадихах Асадоллах

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Молекулярное маркирование ЦМС и генов восстановления фертильности риса (Oryza sativa L.)
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Молекулярное маркирование ЦМС и генов восстановления фертильности риса (Oryza sativa L.)"

На правах pyj

АХМАДИХАХ АСАДОЛЛАХ

МОЛЕКУЛЯРНОЕ МАРКИРОВАНИЕ ЦМС И ГЕНОВ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ФЕРТИЛЬНОСГИ РИСА (Огутд sativa L.)

03.00.23 - Биотехнология 03.00.15 - Генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 2006

Работа выполнена на кафедре сельскохозяственной биотехнологии и в центре молекулярной биотехнологии Российского государственного аграрного университета - МСХА имени К.А.Тимирязева

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор B.C. Шевелуха кандидат биологических наук, Г.И. Карлов

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор С.А. Гостимский Кандидат биологических наук, А. Н. Игнатов

Ведущее предприятие: ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии РАСХН

Защита диссертации состоится" 3" июня 2006 г. в"// " часов на заседании диссертационного совета Д.220.043.10 при Российском государственном аграрном университете - МСХА имени К.А.Тимирязева по адресу: 127550, Москва, ул. Тимирязевская, д. 49.

С диссертацией можно ознакомится в Центральной научной библиотеке РГАУ-МСХА имени К.А.Тимирязева.

Автореферат разослан МЛ 2006]

Учёный секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

Е. А. Калашникова

Актуальность проблемы. В настоящее время рис является важнейшей продовольственной культурой для более чем половины населения мира. Его значение в продовольственной безопасности увеличивается даже в тех странах, где он не является основной зерновой культурой (РАО, 2005). Среди различных видов растений, на которых коммерчески используются гибриды Б], рис занимает ведущее место. Коммерческое использование гибридной технологии является > одним из самых важных применений генетики в сельском хозяйстве. Это имеет не только важное значение для продовольственной безопасности, но оказывает также пользу окружающей среде [Унтаат е1 а1., 2003]. , Так как рис - самоопылитель, гибридное семеноводство базируется на

системе цитоплазматической мужской стерильности (ЦМС) и использовании генов восстановления фертильности. Среди различных систем ЦМС риса, ЦМС \УА-типа наиболее распространена и используется в производстве приблизительно 90% гибрдиных семян риса [Ушпаш е1 а1., 2003]. Выявление различий линий с ЦМС и линий закрепителей, а также идентификация генов восстановления фертильности на основе ДНК маркирования - очень актуально, так как позволяет сократить затраты и ускорить создание таких линий. Идентификация молекулярных маркеров, сцепленных с ЦМС и с генами восстановления фертильности и изучение характерных особенностей, структуры генов восстановления фертильности также имеет очень большое значение.

Цели и задачи исследования. Целью нашей работы являлся поиск и идентификация новых молекулярных маркеров, сцепленных с ЦМС и с генами восстановления фертильности, создание генетической карты для локализации локусов восстановления фертильности ЦМС WA- типа и изучение характерных особеностей, структуры этих генов. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Идентифицировать молекулярные маркеры, сцепленные с ЦМС и позволяющие различать линии с ЦМС и линии закрепители.

2. Идентифицировать новые молекулярные маркеры, сцепленные с геном (генами) восстановления фертильности.

3. С помощью молекулярных маркеров идентифицировать локусы количественных признаков (С?ТЬ), контролирующих восстанавление фертильности в стрессовых условиях внешней среды.

4. Изучить структуру и организацию генов восстановления фертильности и определить возможный ген- кандидат восстановления фертильности ЦМС -

• типа.

Научная новизна и практическая ценность работы. Идентифицированы ЛАРО - маркеры, сцепленные с ЦМС, которые преобразованы в специфичные 8САЯ-маркеры, эффективные при идентификации генотипов ЦМС линий и линий

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА С.-Петербург

оэ гт&А1$С>

закрепителей. Секвенирован участок митохондриального гена nad4L в ЦМС линии и линии закрепителя. Анализ секвенированных последовательностей, позволяет сделать вывод о возможной роли митохондриального гена nad4L в проявлении ЦМС.

Идентифицированы и картированы молекулярные маркеры, сцепленные с геном RJ3 на коротком плече 1-ой хромосомы риса.

Идентифицированы и картированы молекулярные маркеры, сцепленные с геном восстановления фертильности R/5 на коротоком плече 10-ой хромосомы риса.

Идентифицированы и картированы молекулярные маркеры, тесно сцепленные с геном Rf4 на длином плече 10-ой хромосомы риса. Построена генетическая карта данного региона самая точная на настоящий момент

Установлена роль окражающей среды в экспрессии признака восстановления фертильности и локализованы два QTL- локуса на 1 -ой хромосоме риса, взаимодействующих друг с другом.

Выдвинута гипотеза «необходимости наличия критического числа (не менее 10) PPR- мотивов в генах восстановления фертильности для функционального проявлении данного признака».

Предложен комплексный подход классификации генов на основе первичной структуры белковой последовательности. На его основе выявлен наиболее вероятный ген - кандидат восстановления фертильности ЦМС WA-типа в лок\се Rf4 - последовательность ДНК, обозначеннная как RflB. Секвенирован участок гена - кандидата RflB в ЦМС линии и линии восстановителя. Обнаружено наличие мутации у ЦМС линии и выявлена возможная роль даннаго гена в контроле признака восстановления фертильности ЦМС WA-типа.

Апрабации результатов работы. Материалы диссертации были представлены на 4-ой конференции "Iran-Russian conference on agriculture and natural resources" (Иран, 2004), 3-ем конгрессе по биотехнологии "Biotechnology: the state of the art and future perspectives" (Москва, 2005), научном конгрессе "in vitro biology" (США, 2005), 8-ой научной конференции "Plant variations and plant genome dynamics" (Германия, 2005), 4-ой конференции " regional biotechnology" (Иран, 2005), 1-ом международном конгрессе "biotechnology" (Иран, 2005), 13-ой коференции иранских исследователей в Европе (IRCE) (Вликобритания, 2005), 2-ой международной конференции "qPCR" (Германия, 2005), 2-ой коференции "Biotechnology and bioinformatics" (США, 2005), международной конференции "Bioscience: from genes to systems" (Шотландия, 2005), Международной научной конференции, посвященной 140-летию Российского государственного аграрного университета - МСХА имени К.А. Тимирязева (Москва, 2006), научном конгрессе "in vitro biology" (США, 2006), 9-ом когрессе "Genetics" (Иран, 2006).

Публикации результатов исследования. По теме диссертации опубликованы 15 печатных работ.

Структура и объём диссертации. Материалы диссертации изложены на 161 страницах машинописного текста и включает 35 рисунков и 24 таблицы Диссертация состоит из разделов «Введение», «Материалы и методы», «Результаты и обсуждение», «Выводы», «Список литературы» и «Приложение» Список литературы включет 253 наименований, из них 224 иностранных.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе был использован следующий растителный материал: ЦМС линии риса Neda-A, IR67017-180-2-1-2-A, Usen-A, IR68897-A и их соответствующие фертильные аналоги (линии закрепители) Neda-B, IR67017-180-2-1-2-B, Usen-B, IR68897-B, 7 линий восстановителей фертильности IR24, IR28, Amoll, Amol2, IR36, IR62030 и IR60966, и F2 популяции скрещиваний 7 линий восстановителей фертильности с ЦМС линей Neda-A.

Растительный материал выращивали в полевых условиях (на севере Ирана) или в пленочной теплице (селекционой станции РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева) в 2003-2005 гг.

Фертильность пыльцы оценивали методом окрашивания пыльцы ДНК выделяли из молодых листев по методу Saghai-Maroof и др. (1984) с некоторыми модификациями.

Для маркирования ЦМС и картирования генов восстановления фертильности и изучения их структуры использовали метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). В работе были использованы 39 SSR- маркеров и 34 RAPD-маркера (Operon, USA) Праймеры, использованные для картирования были подобраны на основе микросателитной карты риса (McCouch et al., 2002). Новые праймеры (32 праймера) разрабатывали при помощи компьютерной программы РптегЗ 0 Амплификацю проводили на амплификатере «Терцик» ("ДНК-технология", Москва).

Клонирование ДНК фрагментов проводили по инструкциям фирмы Promega (USA) Секвенирование фрагментов было проведено фирмой Силекс-М (Москва).

Обработку данных по расщеплению и расчет генетических расстояний проводили с помощью пакета MapMaker/EXP 3.0 (Lincoln et al., 1992). Для анализа сцепления по отдельным маркерам, частота рекомбинации между маркером и Rf локусом была рассчитана, используя метод максимального правдоподобия (Allard, 1956).

Картирование QTL - локусов проводили методами картирования по отдельным маркерам и множественно-интервального картирования при помощи компьютерной

программы Win QTL Cartographer 2.5 (Wang et al., 2005).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Идентификация молекулярных маркеров, сцепленных с цитоплазматической мужской стерильностью WA- типа риса

Для идентификации молекулярных маркеров, различающих генотипы ЦМС линий и линий закрепителей, были разработаны 4 специфичных праймера (SCARmtO 1F и R, SCARmt02F и R), на основе учатков митохондриальной последовательности AY187000 и AY181205 (Yang et al., 2002). Одна пара специфичных праймеров SC ARmtO IF и R при ПЦР дала ко-доминантные фрагменты, различающие генотипы ЦМС линии и линии закрепителя (рис. 1).__

Neda IR67017 Usen IR68897 SNSNSNSN

Рис 1. Образцы ПЦР - амплификации праймером SCARmtOl. (S- ЦМС, N-Закрепитель).

Амплифицированные фрагменты с использованием SCARmtOl на ДНК линий Neda-A, IR68897-A и IR68897-B были успешно секвенированы. Результаты секвенирования показывают, что фрагмент ДНК у линий закрепителей на 6-7 п.н длинее чем у ЦМС линий (рис. 2). Сравнение секвенированной последовательности локуса SCARmtOl у ЦМС линии "Neda-A" с последовательностями ДНК базы данных ГенБанк показало, что данная последовательность почти польностью (96%) гомологична участку митохондриальной последовательности риса линии 93-11 (подвида indica) и линии Nipponbare (подвида japónica), а также участку (42 п.н) митохондриальной последовательности пшеницы (Triticum aestivum), участку (42 п.н) митохондриальной последовательности гена tRNA-Asp (tmD-GUC) Elytrigia elongate и участку (45 п.н) митохондриальной последовательности табака (Nicotiana tabacum).

>»»>>>»»»>>>>»>»

AGAGGGAGCAGCTñAAGCAACTGATGCGGTTAATACA.ATAGTAGTGATACCrACATACC<~ f¡r

I I I M 1 I I 1 И I И И I III IIIII I II II I I I I I I 4 I 1IIIIII III I I И I í II > AG AGGGAGCAGrTAAAGCAACTGA'p3CGGTTAAT-CAA TAGTAGT GATACCAC AT АСС Г с -

I ¡ lililí lililí Mil Iii)' II 4 I II I I I I I I I 1 4 I

AG/ ~GGAr"fAGCTAAAGCAAnff'GATGrGGTTAAm-CAATAGTAGTGATACCrA

TG""CC"AT jCTTTAl GCCAA--GGAAGTGAGAGCACCTGGrrTTGAATATGTAG GTTCGA^ 1 I I I Ч И 4 4 11 I I 4 h I I I II I Ч I 4 II I Ч I Ч I I I 1 4 1 ""CGCCTATGCTTTArGCCCAAGGGAAGTGAGAGCACCTGGTTTGAATATGTAGGTTO^AT <■

II II I I II Ii I I I I I I I I II I II Ч Ч I I I I I Ч Ч Ч I I I I 114

. г-ггтрт-гтт-; TGCAA- -GGAAGTGÄCAGGf CCTGG Г1 TGAATA"GTAGGTTC A"

An"TGG-ÄAGCAGCAG-ATAGGTTT-TAG-TGAAAG-ATGGGCTTG"--TTTCrAA " '

I I I I I I I I i I I II I I I I II 4 II I I I I 4 l Iii , С - AC'^GAA-GCAGCAC ArAGGTT~-TAG-TGAAAGA-TGGGC','"G^--T AA /

I I I l I I 1 I I I I i I I I I I I II II II I I Ii I I I I I I I I I

AC "7 " C'"GGü_AAGGAGr'AGTAIAGGT1""GTAGT'T,GAAAGAATGGCCTTGT^,rTTCA'' AA in TAAGT ICTATTGCTTTGACACATTT AGTATATAACTGAATAGAAAACGGAATAAAAGCGGA 2 32

I I I II I I I I I I I I I I I I I II I I I II I I I I I I I I I I I I I I I I I II I И II II I I I I I I I i I I

TAAGTTCTATTGCTTTGACACATTTAGTATATAACTGAATAGAAAACGGAATAAAAGCGGA 2 ' 3

I I 1 I I i II I I ' I I I I I I I I I 1 I h Ч IIIIЧ IIIIII II IIII I II I 1 I I I I I I I I Ч

TAAGTTCTATTGCTTTGACACATTTAGTATATAACTGAATAGAAAACGGAATAAAAGCGGA 2 39

TAAGATAGCGTATTAGGCCGACAAGTAGGAAGCA 2 66 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I II I I I TAAGATAGCGTATTAGGCCGACAAGTAGGAAGCA 2 67 I I I I I I I I I I I I I I I II I I I I I I l I I I I I И I I I T AAGATAGCGT ATTAGGCCGACAAGTAGGAAGCA 273

Рис. 2. Сравнение митохондриальных фрагментов 2-х ЦМС линий (Neda-A и IR68897-A) и линии закрепителя (IR68897-B), амплифицированных парой SCAR-праймеров SCARmtOl. »>: прямой праймер; «<: обратной праймер.

1.1. RAPD-анализ

В RAPD- анализе, 4 из 34 прайм еров выявили полиморфизм между линией ЦМС Neda-A и ее фертильным аналогом закрепителя Neda-B. Праймеры ОРА09, OPA 14, ОРС02 и ОРС05, с высокой воспроизводимостью выявляли полиморфные фрагменты между двумя изогенными линиями. ОРА09 и OPA 14 амплифицировали специфичные фрагменты для стерильной линии, длинной -200 п.н и -800 п.н, соответственно. Однако ОРС02 и ОРС05, амплифицировали один полиморфный фрагмент (-270 нп и -500 нп) только у ЦМС линии Neda-A. Для идентификации RAPD маркеров и их ассоциации с цитоплазмой мужской стерильностью, ДНК от стерильных линий и их линий закрепителей была амплифицирована с 4 полиморфными RAPD -праймерами. Только один RAPD-праймер (ОРС05) амплифицировал фрагмент, размером -500 п.н, специфичный для 4-х линий ЦМС (рис. 3).

Чег|д А 1

¡ 1 lafgj-- о

и »- а

TR6-PJ A fj

г В г

-Ja А 12" " с "А

- J Г С-" 1

Neda А 112

IR68897 А 173

I»egR97 в 179

4e.a S 233

IR66897 A 2J4

IP68897 В 240

Рис. 3. Образцы ПЦР- амлификации RAPD-праймером ОРС05. PI: Neda-A и В, Р9. IR67017-180-2-1 -2-А и В; PIO: Usen-A и В; Pli: IR68897-A и В. Стрелкой показан полиморфный бэнд.

При амлификации ДНК 4-х ЦМС линий и линий закрепителей с использованием комбинации RAPD- праймеров серии А (ОРА01-04) и серии В (ОРВ02-04), всего 12, пара праймеров ОРА01-ОРВ04 выявила полиморфизм между ЦМС линиями и линиями закрепителями. Комбинация OPA01-OPBÛ4 амплифицировала полиморфный фрагмент размером -370 п.н, специфичный для ЦМС линий (рис. 4)._

M Neila 11(67017 tscn I H(.XX97 CMS N CMS N CMS N CMS N

Рис. 4. Образцы ПЦР- амлификации комбинации RAPD-праймеров ОРА01-ОРВ04 1.2. Создание SCAR- маркеров

Полиморфные RAPD- маркеры ОРС055оо и А01-В04370 были использованы для клонирования. Только RAPD- маркер А01-В0437о был успешно клонирван и секвенирован (рис. 5).

Сравнение секвенированной последовательности локуса А01-В04з7о, специфичного для ЦМС линии с последовательностями ДНК базы данных ГенБанк показало, что данная последовательность почти польностью (372/376;

99%) гомологична участку митохондриальной последовательности риса линии 9311 (подвида indica) и линии Nipponbare (подвида japónica), а также участку 5'-конца митохондриального гена nad4L риса (347/350 п.н; 99%), участку (351/376 п.н; 93%) митохондриальной последовательности псевдогена rpsl9-nad4L пшеницы и участку (36 п.н) митохондриальной последовательности кукурузы (Zea mays).

1 CAGGCCCTTC AATGCCTCCC TCCGGTATCC ACTAACTCGG AAGAGCTATT CATAAGGTTT 61 TCTGGCTGAC TGTGAGGACA CCTCTGCATC CCAGGGAGCA GACCGCTCCC CCGGAAGCTG 121 TGGTCAGTCA AGAGCGGCAT CCGAATCCCG CTCCAATCCC TGGAGCGGCC GCGGAAGCAG 181 CAGAACCCTC CTTCTTTTTC TTGGGAGGGA AACGACCTCT CTCTCTTTGA AAGGAAACTT 241 CTCTACAAAA GGCCCGCGCC TGTCACGCCC AGATTCTGGA CACATTGCGT GATATTACTC 301 GAAGAATGGA GAGGAGCTCC ATGAAGAAGA TCTATCGCAC CATGCTTGAT TTCATGTTGA 361 GCCGACTCCA GTCCAA

Рис. 5. 5'-3" последовательность RAPD- фрагмент A01-B04370.

На основе секвенированной последовательности локуса А01-В0437о и фланкирующих ее митохондриальных последовательностей (линии 93-11), были разработаны 6 специфичных праймеров: три прямых- и три обратных. Возможные комбинации синтезированных SCAR- праймеров показали различную эффективность при идентификации ЦМС линий и линий закрепителей (рис. 6)

Пара специфичных праймеров SCARmt03F - R при ПЦР дала ко-доминантные фрагменты, различающие генотипы ЦМС линии и линии закрепителя (рис. 6). Амплифицированный фрагмент праймерами SCARmt03F - R у всех ЦМС линий был длинее, чем у линий закрепителей (рис. 6).

03f-r 04f-r о 5 f- r

cms n cms n cms n

Рис. 6. Образцы ПЦР - амплификации SCAR- праймерами, разработанными на основе последовательности локуса А01-В04з7о. (N- линии закрепителя).

Фрагменты, амплифицированные парой SCARmt03F-R у ЦМС линии Neda-А и линии закрепителя Neda-B былы использованы для прямого секвенирования (рис 7). Сравнение секвенированной последовательности этого локуса с последовательностями ДНК базы данных ГенБанк показало, что фрагмент ЦМС линии гомологичен участку 5'- конца митохондриального гена nad4L риса (349/354 п н, 98%), а фрагмент линии закрепителя - также гомологичен участку

5'- конца митохондриального гена пас!4Ъ риса (353/354 п.н; 99%).

н.<1»в 1

н.<ил 61

И*<1аВ 118

Н«4жА 121

177

ВайаА 181

Н*Ш 237

Н*а*А 241

Н«<1аВ 297

И«д«А 301

Наш 357

н.а»А 361

Н«с1аВ 417

Н«<1жА 421

ССКССТССйХ-ТОеттСССАТССОССАССАйССССТТСЛАТСССТСССТСССС-ХТССЛ. МИШИН II II I II II I II II II ! II II I II II III 11 II I II 11 III I 11111 (Хсссстссштсостссс^тамхшсс^сапсмтссстссстсссстАтссл

П^СТС!К^ЛОТЖ1ТС*-ЛА0СТТТ1С1СССТ5*СТСТ(;ЛССА(:ЛСС1СТССАТСС

IмII.......I11I11II II11II Ш IIIII11I1111IIIII11 I IIII I III1

СТ^СТС СЙ<^|1ЕСТХПСАТЛАЮТТТТС1СССТй1СТСТ1;А(;(;АСАССТСТССАТСС

11 11 11 11 I 11 IIIIIIIIII11II11 I II 11 I 11 11 I 11 11 11 I 11 11 IIIIII И II

ТССАЖТСССТССХСССОССССССАЛЛСХСАХСХСАХСССТССТТСТТТТТСТТСССА&СС II II I II III II ПИ I II II I II II II I II II I II II I II II II I II II ШИ III II ТССАХТССС100АИ^ССССССХ»СС*0*АСАС^СССТССТТСТТ7ТТС1ТС^АССС

ЛС(^ССТС1СТСТСТ1Т1а1АА«Ж^СТТСТСТХП1А^СССС<^СЖСТС1С*СССССА IIIIIIIIIIII11IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII111IIIIIII М№сстстстстстттаииииаа)«^тстстхаши11хетскастстсдс(^сл.

«ПСТ(И»СЛСАТ1теСТ№1*11ХСТС1СА(1С1АТ<ИАСЛСа1;СТССАТСЛАОМ(»

IIIIIIIIIIIIIIIIIIIII11111IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII11111IIIII

САГТСТОТЛСА1:АТ1СССТа1ТАТТАСТСТСЛА.аААТ«;АЙ*ЕаАССТССАТОААСМСЛ.

1!11Н1111111мшм111|111111м I тми ниншитп

СФВ04

ССТСА 421

11111

ССТСА 425

Рис. 7. Сравнение митохондриальных фрагментов ЦМС линии (А-линии: №(1а-А) и линии закрепителя (Ыеёа-В), амплифицированных парой БСАЯ-праймеров БСАЯтЮЗГ-Я в локусе ОРА01-ОРВ04.

Сравнение секвенированных последовательностей локуса ЯСАЯтЮЗ у ЦМС линии Ыес1а-А и её линии закрепителя Ыес1а-В показало, что у линии закрепителя в данной последовательности произошли делеции (4 п.н в разных местах) и замены оснований (4 п.н) в том числе 2 в сайте отжига ЯАРП-маркера ОРВ04. Поэтому из-за отсувствия полной комплементарности локуса сайта ЛАРВ-маркера ОРВ04 у линий закрепителей, при ПЦР с комбинацей пары праймеров ОРА01-ОРВ04 данный фрагмент (-370 п.н) не амплифицируется (рис. 7; также см. рис 4). Наличие таких мутатцей указывает на возможную роль гена па(34Ь в проявлении ЦМС \¥А- типа у риса.

2. Тип наследования фертильности

Тест на определение фертильности пыльцы показал, что отцовские линии 1Я24, 11128, ГО36, 11162030, 11160966, Ашо11 и Ашо12 являются сильными линиями восстанавителями, так как они польностью восстанавливали фертильность полученных гибридов Б, (табл. 1).

Анализ расщепления Р2 популяций показал соответствие 3 (фертильных): 1

(стерильное) растений, что указывет на моногенный контроль восстановления фертильности в соответствующих отцовских линиях. Однако, в ¥2 популяции скрещивания №<1а-А/П124 выделено 15 (фертильных):1 (стерильное) растений, что указывет на существование двух независимых доминантных генов восстановления фертильности в отцовской линии. В Г2 популяции скрещивания №с!а-АЛЮ6, выращенной в Иране выделено 3 (фертильных):1 (стерильное), а в теплице РГАУ-МСХА - 9 (фертильных):7 (стерильных) растений, что указывет на возможное существование двух генов, взаимодействующих комплементарно в стрессовых условиях (табл. 1).

фертильность пыльцы (%)

скрещивание (Среднее значение ± БЕ)

Рх Расщепление

Ыес1а-А/П124 87.6 ±2.19 77.7 ± 4.08" (Х215:1=0.2Г5)

Ыес1а-А/П128 85.5 ± 1.64 64.4 ± 5.09а (Х23:,=0.002"5)

Кеёа-А/тЗб 86.3 ±2.25 61.8 ± 5.27а 49.3± 5.04ь (Х23:,=0.08П8) (Х29:7=2.Юп8)

Ыес1а-А/т.62030 84.7 ±1.96 52.7± 5.46ь (Х2з:,=2.5Г8)

1Че(1а-А/ГО.6096б 81.8 ± 1.74 59.4 ± 5.42° (Х23:1=0.29П5)

№<1а-А/Ато11 83.9 ± 1.39 69.8 ± 4.92" (Х23;1=0.98п5)

Neda-A/Aшol2 85.5 ±2.15 65.6 ± 4.63а (Х2з:,=0.29п?)

'иь: выращенная в Иране и в Москве, соответственно."8: недостоверное на 5% уровне. 8Е= стандартная ошибка.

3. Картирование гена восстановления фертильности действующего в нормальных условиях в популяции №(Да-А х ГО36

В Р2 популяции скрещивания Ыес1а-А х ГО36, выращенной в полевых условиях на севере Ирана, выделено 143 фертильных и 50 стерильных растений, что соответствует соотношению 3:1 (х2факт= 0.08, х205= 3.84; табл. ]) и указывает на моногенный контроль восстановления фертильности.

Маркеры 1Ш171, ЯМ3773, КМ311, 1Ш6100, 11М6128 и АВ443 (на 10-ой хромосоме), 1Ш1, Я0140 и 1Ш7180 (на 1-ой хромосоме) и 11М1335, ЯМ1209 и 1Ш3555 (на 7-ой хромосоме) показали полиморфизм между Кеёа-А и ГО.36 Однако, ВБА-анализ показал, что два вБЯ маркера - ЯМ1 и 1Ш7180, и Ш^ЪР-ИЦР маркер, 1Ю140, на 1-ой хромосоме обнаружили полиморфизм между стерильными и фертильными группами. Эти маркеры были картированы в Р2 популяции и было рассчитано их растояние до гена Я/3 составляющие 2.7, 2.0 и 25.0 сМ, соответственно (рис. 8).

SMI ROI 40 ДО RM7180

-м—I-ь

Рис. 8. Генетическая карта Rf3 - региона на 1-ой хромосоме риса. 4. Обнаружение OTL-локусов восстановления Фертильности в стрессовых условиях внешней среды

Аномальное расщепление наблюдалось в F? популяции скрещивания Neda-A х IR36, выращенной в теплице селекционной станции РГАУ-МСХА, в г. Москве (табл. 1). Расщепление в F2 соответствовало соотношению 9:7 (х2факт= 2.Ю; х2 05 3.84, табл. 1), что указывает на участие двух генов, взаимодействующих комплементарно в стрессовых условиях.

4.1. Множественно-интервальное картирование OTL-локусов восстановления фертильности

Два главных QTL-локуса (M-QTLs) было обнаружено для восстановления фертильности в изучаемой популяции с достаточно высокими LOD порогами. Первый QTL (qFerl-1) с LOD> 18 находится близко от RG140, и второй (qFerl-2) с относительно низким LOD порогом (LOD=2.96) близко от RM7180 на 1-ой хромосоме (табл. 2, рис. 9). Эти два M-QTL, соответственно, ограничиваются интервалами между маркерами RG140-RM7180/р/г и RM7180/р/г -RM6100d.

Таблица 2. Параметры, полученные методом MIM, для каждого QTL-локуса.

QTL Ближайший маркер LOD QTL Pos Len Ve (%) Эффект d/a

а d а(%) d(%)

qFerl-1 RG140 18 85 10 3 90 61 9 40 47 4 87 62 1 56 0 12

qFerl-2 RM7180 2 96 36 4 54 43 8 -19 20 57 44 -119 38 2 -2 99

Сумма 21 81 93 97

Pos= позиция QTL, Len= длина QTL, Ve = обуславливающий процент от общей изменчивости, а~ аддитивный, d= доминантный, d/a= степень доминирования

Множественно-интервальное картирование (MIM) показало, что qFerl-1 об>словливает -62 %, и qFerl-2, -44 % от общей изменчивости признака. qFerl-1 имеет более высокий аддитивный эффект, чем его доминирующий эффект Это свидетельствует о том, что действия этого QTL аддитивное (d/a = 0.12), и напротив, qFerl-2 имеет относительно средний отрицательный аддитивный эффект и высокий доминирующий эффект на признак, что указывает действия этого QTL как сверхдоминирование в противоположном направлении от первого QTL (d/a = -2.99). В целом, эти два QTL обусловливают ~94% от общей изменчивости признака восстановления фертильности (табл. 2).

Рис. 9. Графический результат обнаружения самых вероятных QTL-локусов, вызывающих восстановление фертильности методом MIM. 4.2. Анализ взаимодействия между обнаруженными QTL-локусами (I-QTLs)

Результаты MIM показали, что два обнаруженных QTL, имеют достоверное аддитивное взаимодействие друг с другом. Но, это взаимодействие имеет отрицательный эффект (-59.3%) на экспрессию признака в стрессовых условиях, так, что число стерильных растений в F2 популяции увеличивается. Только этой причиной возможно объяснить отклонение наследования признака от соотношения 3:1.

5. Идентификация и локализация гена RfS и сцепленных с ним ДНК-маркеров в популяции Neda-A х IR62030

На этой популяции маркеры локусов Rß- и Rf4- генов не выявили полиморфизм между двумя стерильными и фертильными группами растений F2.

Только, SSR- маркер RM311 сцепленный с локусом Rß- гена показал полиморфизм между Neda-A и IR62030. Этот маркер не только выявил полиморфизм между стерильной и фертильной группами растений, но и также продемонстрировал высокую корреляцию с геном восстановления фертильности в

F2 популяции. Анализ сцепления показал, расстояние SSR маркера RM311 до Rf5 составило 2.9 сМ (рис. 10).

Результаты картирования с использованием SSR- маркера RM171 показали, что он находится на расстоянии 40.5 сМ от RM311. Расстояние RM 171 до Л/5- гена составило 37.6 сМ (рис. 10).

RM311 RM 171

Chr.10 S -1-J-1-

j*— 29 —- 376 -

Рис. 10. Генетическая карта Rfi - региона на кротком плече 10-ой хромосоме риса в популяции F2 скрещивания Neda-A/IR62030.

6. Идентификация и локализация гена Rf4 и сцепленных с ним ДНК-маркеров в популяции Neda-A х Amoll

6.1. Идентификация гена Rf4 у линии Amoll и картирование региона Rf4- гена

Дня обнаружения гена восстановления фертильности у Amoll, на первом этапе, отобрати 21 микросателитный праймер и RFLP- ПЦР маркер RG140 Среди них, семь маркеров выявили полиморфизм между Neda-A и Amoll Микросстелитные маркеры RM228, RM171, RM5841 и RM304 на длинном плече 10-ой хромосомы не только показали полиморфизм между Neda-A и Amoll. но и также показати сцепление с геном восстановления фертильности Rf4 Расстояния лвух самых близких SSR маркеров. RM171 и RM304, от Rf4 были 3 2 сМ и 2 1 сМ, соо!вегственно (рис.11 и 12).

Так как Rf4 ген был картирован между этими маркерами, нами были выбраны дополнительные SSR- маркеры на генетической карте риса [McCouch et al., 2002] и разработаны новые праймеры на основе последовательностей ДНК в этом регионе.

Праймеры, созданные на основе RflA-последовательности (SPRFA01-03), не выявляли полиморфизм между родительскими линиями даже после рестрикции с 14 рестриктазами (CAPS- маркеры). Однако BS А- анализ с другими маркерами показал, что один SSR маркер, RM6737, находится в этом регионе и был тесно сцеплен с Rf4 геном на расстоянии 1.6 сМ (табл. 3, рис. 12).

Кроме вышеупомянутых маркеров, два разработанных нами праймера на основе последовательности ABl 10443, называнные АВ443 F и R, обнаружили полиморфизм между двумя родителями и амплифицировали два полиморфных фрагментов ДНК, специфичных для стерильной линии, размерами -400 и -500 п.н, соответственно. Они были тесно сцеплены с рецессивным г/4- аллелем (рис 11 ) на расстоянии -0.5 и 1.03 сМ, соответственно (табл. 3, рис. 11 и 12).

Таблица 3. Частоты рекомбинации и генетические расстояния между

маркерными локусами и локусом.

Частота Частота Генетическое ьоэ

Локус рекомбинации рекомбинации (%) расстояние (сМ) порог

(%)в среды всех

стерильной гомозиготных

группе растений

1Ш228 13.28 12.25 12.77 13.86

ЯМ5841 7.03 6.63 6.67 19.41

ЯМ171 3.13 3.06 3.16 23.76

ЯМ304 2.34 2.04 2.05 25.28

ЯМ6737 1.56 1.53 1.55 26.14

АВ443-500 0.51 1.03 1.03 27.07

АВ443-400 0.0 0.51 0.51 28.13

Р1 Р2 Вв ВГ

Рис 11. ПЦР- амплификация маркера 11М171 (слева) и АВ443 (справа) у двух родительских линий, двух стерильных и фертильных групп и 8 гомозиготных стерильных и фертильных растений ¥2 популяции. Р1, ЦМС- линия Ыеаа-А; Р2, фертильный родитель Ашо11.

о г-

ей

а:

(О 1 ЧО 1 1/"> 1 1/1

о -о

Рис 12. Высоко- разрещающее картирование Я/4 гена на длинном плече 10-ой хромосомы риса.

6.2. Физическая локализация Д/У- гена

Для определения физической локализации Я/4- гена и сцепленных с ним маркеров

использовали пакет BLASTN в базе данных геномной последовательности ДНК сорта 93-11. Этот поиск дал возможность идентификации контигов, несущих сцепленные с ним маркеры от маркера RM6737 на одной стороне (центромерной) до маркера АВ443 на другой (теломерной). Сравнение последовательностей праймеров SSR- маркера RM6737 и праймеров АВ443 с последовательностью сорта 93-11 показало, что последовательности прамеров SSR- маркера RM6737 находятся в Ctg030205, а последовательности прамеров АВ443 в Ctg030228 (рис. 13). Физическая карта, построенная на основе этих данных состояла из 15 контигов, охватывая -206 т.п.н подвида indica риса.

Так как общей характерной особенностью Rf- генов растений является кодирование пентатрикопептидного (PPR) белка, имеющего в своём N-конце последовательность, необходимую для транспорта в митохондрию (Bentolila. 2003; Akagi et al., 2004), этот регион был проанализирован на наличие таких генов компьютерными пакетами MitoProt II и Pfam 11.0.

Результаты этого анализа показали, что среди 45 генов в этом регионе, только пять генов, включая (MFCC036677, C)sIFCC036680, C>sIFCC036693, OsIFCC036694 и OsIFCC036695, соответственно, на контигах Ctg30207, Ctg30216, Ctg30225, Ctg30225 и Ctg30227 удовлетворяли критериям характерным для Rf-генов (рис.13).

RM6737-*--206 kbp-К АВ443

Contig- 30205; . 30207 ..30216 Gene OsIFCD036677 OsIFCD036680

30225

.... 30227

30228

OSIFCD036693 OsIFCD036694 05lFCD03í¡69S

Num ofPPRs И PPR 5 PPR 16 PPR 14 PPR 16 PPR

Рис.13. Структура фрагмента ДНК, несущего маркеры, сцепленные с Rf4- геном на

10-ой хромосоме риса подвида indica. 7. Классификация генов, находящихся в ДНК фрагменте, несущем молекулярные маркеры, сцепленные с геном восстановления фертильности ЦМС WA- типа

Как доказано исследователями [Bentolila, 2003; Akagi et al., 2004] все гены восстановления фертильности (кроме Rf2 гена у кукурузы) кодируют PPR-содержащий белок с высокой вероятностью экспорта в митохондрию и имеют в N-конце полипептида последовательность, необходимую для транспорта в митохондрию. У риса имеются -600 генов, кодирующих PPR- содержащие белки (Wang et al., 2006), функции которых неизвестна. Все эти гены не могут быть генами восстановления фертильности. Классификация генов, на основе их

¡^•^^ЙВ^ЕЬ^Ч«* 1« у. [5 й {« Ц* § ^ ^ 5 ** ^ ^

СГ> и~> -гГ

¡<-N1 ОО ---а> Ш

Г—-* _»

<о «55 л ю ^ <

о—» го го «т-> го (_Ъ

О О О О о 1т!

ьо СУ — С ■ — од и-1 м- и/-, о~> г-— Сэ оо

{ г»-, ^— ^ СГ\ гч; ^о ».о — О"» О"» во Г-»» О"* —- <-•->

$ Со Со Со чо «.о «В (О £5 £8 Го '

Рис 14. Графический результат обнаружения мотивов комбинацей программ

МЕМЕ-МА8Т.

структуры и организации при помощи компьютерных программ и баз данных-полезный метод для классификации генов.

В нашей работе, в базе данных ~90 генов были идентифицированы в регионе между SSR- маркерами RM304 и RM1108. Из них, 32 гена имели в N-конце белка последовательность, необходимую для транспора в митохондрию и только 25 имели >50% вероятности экспорта в митохондрию. В дальнейшем использовали эти 25 генов и два гена линии IR24, RflB и RflA (RflA - ген восстанавления фертильности ЦМС ВТ-типа, который был недавно клонирован [Komori et al, 2003; Akagi et al., 2004]), в качестве контроля. Эти гены были проанализированы програмным обеспечением MEME, и его результаты суммированы с использованием программного обеспечения MAST (рис.14). При комбинировании программных обеспечений MEME и MAST, был идентифицирован 71 мотив. Затем, изучаемые гены классифицировали UPGMA - методом на основе наличия или отсутствия и частоты полученных мотивов.

Gene OBIFCC...

25 ---+

Рис 15. Распределения изученных генов (ПРвМА - методом), находящихся между БЗК-маркерами ИМ304 и КМ 1108 на дленом плече 10-ой хромосоме риса.

Результаты классификации представлены на рис.15. Гены кластеризовались в две группы, А и В. 6 генов кластеризовались с Я/1А, группа А, которую можно разделить на 3 подгруппы.

Для дальнейшего изучения мы провели поиск известных белковых мотивов, лежащих в основе функции всех 92 генов. Для этого, использовали базу данных Р£аш, которая идентифицирует структуру белков. Из 92 изучаемых генов, распологаемых в этом регионе, только 10 имели РРЯ-содержащий белок. Частота встречаемости РРЯ- мотивов в зависимости от гена варировала (табл. 6).

Таблица 6. Частота встречаемости РРИ- мотивов в белковой последовательности.___

Ген Частота встречаемости РРЯ- мотивов Класс Ген Частота встречаемости РРИ- мотивов Класс

ЯП А 16 А-1 Ов1ГСС036694 14 А-2

ЯЛВ 14 А-2 ОзШСС036695 16 А-1

ОвШССОЗббвО 5 В-1 Оз1РСС036710 10 А-3

051РСС036677 11 А-3 Оз1РСС036720 3 В-1

(ЫРСС036693 16 А-1 08ПСС036721 3 В-1

Сравнение дендрограмы рис. 15 с данными табл. 6 показывает, что 8 РРЯ-содержащих генов сорта 93-11 плюс два РРЛ-содержащих гена линии 11124 (табл. 6) группировались в два различных класса (группа А и группа В-1; рис. 15), из них, 6 генов кластеризовались с ранее клонированным геном восстановления фертильности ЦМС ВТ- типа, Щ1А, и 3 кластеризовались в группе В-1.

Сравнение дендрограмы рис. 15 с данными в табл. 6 указывает, что частота встречаемости РРЯ- мотивов увеличена у 7 генов (5 от линии 93-11, 2 от линии 11124), которые кластеризовались в группе А (А-1, А-2 и А-3), по сравнению с 3-мя генами, кластеризованными в группе В-1. Как минимум 10 РРЯ- мотивов имеются в генах группы А, а в генах группы В-1, максимум 5. Это позволяет выдвинуть гипотезу, что "наличие достаточно многих (не менее 10) РР11- мотивов необходимо для функционального проявления генов восстановления фертильности".

8. Идентификация наиболее вероятного гена - кандидата восстановления фертильности ЦМС \¥А-типа

Для идентификации самых вероятных генов - кандидатов восстановления фертильности ЦМС \¥А- типа, мы сравнивали результаты предложенного метода классификации, с результатами картирования генов восстановления фертильности различных систем ЦМС.

1) Ген восстановления фертильности Rfl для ЦМС ВТ был картирован между двумя RFLP- маркерами С1361 и S12564 (Komori et al., 2003)] и клонирован несколькими группами (Kazama et al., 2003; Komori et al., 2004; Akagi et al., 2004)] Akagi и др. описали этот ген как Rfl А (рис. 16В).

2) Два гена восстановления фертильности ЦМС HL были картированы на длинном плече 10-ой хромосомы риса (Liu et al., 2004). Rf5 был картирован между двумя SSR маркерами RM1108 и RM3150, a Rfó(t) между SSR маркером RM6737 и RAPD маркером SBD07 (рис. 16 В).

3) Ген восстановления фертильности Rf4 для ЦМС WA- типа был картирован между двумя маркерами Y3-8 (0.9 сМ) и Y1-10 (3.2 сМ) (Zhang et al., 2002). Y3-8 совпадает с местоположением SSR маркера RM171, и Y1-10 совпадает с местоположением SSR маркера RM304 (Wang et al., 2006).

s: a ж a (= s

Rf4 (WA)

Rf6(t) (HL)

ОI о i i

¡tj¡ i (Bit

4 <4

Rf5 (HL)

§1

33 <3

«3

Рис.16. Сравнение результатов классификации, проведенной нами (А), с результатами картирования некоторых Rf- генов различных систем ЦМС на длином плече 10-ой хромосомы риса (В).

4) В нашей работе результаты картирования в Р2 популяции Ыеёа-А X Ашо11, показали, что ген восстановления фертильности ЦМС WA также расположен в

данном регионе, что соответствует данным Zhang и др. (2002). Мы картировали Rf4 ген между RM304 и RM171, и при более точном картировании между RM6737 и АВ443-400 (рис. 16В)

Как показано на рис. 16В, в данном регионе (от RM304 до RM1108) среди 90 генов, только восемь генов кодируют белок с несколькими тандемными PPR-мотивами. Однако, результаты классификации белков изучаемых генов как показано на рис. 16А, показали, что только пять генов принадлежат классу Rf-генов (класс А в рис. 16А).

Класс А-1 состоит из двух генов OsIFCC036693 и C)sIFCC036695, классифицируемых с RflA (9311- аналог C>sIFCC036695). Поэтому, этот класс можно определить как ЦМС ВТ- класс. Класс А-3 состоит из двух генов OsIFCC036677 и C)sIFCC036710, где картированы Rf5- и Rf6(t)- гены для ЦМС HL. соответственно [Liu et al., 2004]. Поэтому, этот класс можно определить как ЦМС HL- класс. Оставшийся ген, OsIFCC036694, кластеризован с его IR24- аналогом, RflB, в классе А-2. Поэтому, этот класс можно определить как ЦМС WA- класс

На основе сравнений между результатами экспериментов картирования и результатами разработанного нового метода классификации, можно делать вывод, что RflB (или его аналог у линии 93-11, OsIFCC036694) - самый вероятный ген -кандидат восстановления фертильности ЦМС WA- типа. В дополнение к этому выводу, в этом подходе также было возможно идентифицировать самые вероятные гены - кандидаты восстановления фертильности ЦМС HL- типа Поэтому OsIFFC036677 и OsIFCC036710 - самые вероятные гены - кандидаты для генов Rf5 и Rf6(t), соответственно.

9. Изучение роли гена- кандидата RflB в проявлении восстановления фертильности

Для изучения возможной роли RflB- гена в проявлении признака восстановления фертильности, былы созданы специфичные праймеры (табл. 7) на основе его последовательности у линии IR24 (АВ110443 в ГенБанк).

Название 5'-3' последовательность

A(F) atgtggtgtcgtacagcaccg

A(R) gcacaatactattatatgtcatgca

B(F) tgagcagatgatcgatgaagga

B(R) gttctgaaacatccgaagtgcat

В ПЦР- анализе с парой А- праймеров, ДНК фрагмент, амплифицированный на фертильных линиях Н124 и Ато11, был длинее на ~10 п.н, чем у ЦМС линии Ыес1а-А (рис.17). Однако, в случае пары В-праймеров, полиморфизм не

наблюдался. В случае комбинации А-В праймеров, амплифицировались полиморфные фрагменты между А- линией и линиями восстановителями (рис 17).

А ( F ) ~A(R)

cms т r2-4 /imol 1 м

в (fr') -b(r)__а ( f ) -B(r)

:у. ГР24 Axcll М I j--I кг-

Рис. 17. ПЦР- амплификация специфичными праймерами RflB- гена.

NedaA 1

Amoll 1

NedaA 54

Amoll 60

NedaA 10B

Amoll 118

NedaA 168

akoii 176

ДНК фрагменты, амплифицированные на ДНК трёх линий парой А-праймеров былы успешно секвенированы (рис. 18).

СТА—CCGGCTTGTTCAAGTGGGGG-TTCGG-ACAAAG-CTTACAG-T-ACATACACATG III llllllllllllllllllll Hill IIIIII lllllll I IIIIII IUI CTACGCCGGCTTGTTCAAGTGGGGGCTTCGGCACAAAGGCTTACAGCTCACATAC-CATG

-AAATG-CTTG-AGCAGAGGGAT-TTCTACCAGAATGT—GTGACCTTACAACTCTATTA

iiiii ii i immun it iiniiiiiii iiiii iimimim

TAAATGTCTGGTAGCAGAGGGATCTT-TACCAOAATGTCTGTGAC-TTACAACACTATTG TTCGCTGCCCTTGTGCAAGGCTCAAGCTATGGACAAGGCCATGGAGGTACTTAACACCAT

I lllllll III IIIIIIII III I1 III III I II I I III II II I I I III I I I I II

T-CGCTGCC-TTGTGCAAGGCTCAAGCTATGGATAAGGCCATGGATGTACTTAATAGGAT GGTTAAGAATGGTGTCATGCCTGATTOCATGACATATAAT-GTATTTGTGC 2 17

III III 111111 11111111 III III 111111 III III III 1111 III

GGTTAAGAATGGAGTCATGCCCGATTGCATGACATATAATAGTATTTGTGC 22 6

Рис. 18. Сравнение секвенированных последовательностей локуса А- праймеров, специфичных гену RflB, линий Neda-А (ЦМС) и Amoll.

Сравнение секвенированной последовательности этого локуса с последовательностями ДНК базы данных ГенБанк показало, что ДНК фрагмент ЦМС линии гомологичен участку (197/226 п.н; 87%) гена RflB риса линии 1R24, MTC-IOR, Minghui63. Сравнение секвенированных последовательностей локуса А- праймеров у линии Neda-A и линий восстановителей Amoll и IR24 показало, что у ЦМС линии в данной последовательности произошло несколько делеций (в разных местах), вставки и замены оснований, но количество делеций больше чем вставки и поэтому ДНК фрагмент ЦМС линии короче на 9 п.н по сравнению с фрагментом линии Amoll (рис. 18).

Наличие таких мутаций в изучаемом локусе А- праймеров, а также наличие

других возможных мутаций в последовательности данного гена (как показано в рис.17 при комбинации двух праймеров), в конечном счёте вызывает сдвиг открытой рамки считывания, и синтезу дефектного белка у ЦМС линии.

Полученные выше нами результаты указывают на возможную роль гена RflB в контроле экспрессии признака восстановления фертильносги ЦМС WA-типа. Данный ген скорее всего можно считать геном - кандидатом, контролирущим восстановление фертильности ЦМС в WA-системе.

Структура данного гена показана на рис. 19. Сигнальная последовательность, необходимая для транспорта белка в митохондрию ноходится в N-конце. В состав гена - кандидата RflB входят 3 мотива: мотив 3 в N-конце, мотив 1, 17 копий, 16 из которых тандемно расположены в последовательности гена, и мотив 4 в С- конце.

HABRA A5RAAGALR5E GSIQGRGGRAGGSGGGAEDАННУF Moti£3

Hotifl

HFS LE ASTAS L FID L L SGGKYQE YHR FL РЕК YKS F Hoti£4

RflB RF

H0TIF1

.H...G..PD..TVH.LI.GLCK.GR..EA..LF. .HVK. GV. PDVVTYHILI.GLCK. GRLEDAHELL. EIÍVKH GCKPNVITYNIIIHGYC KE GRHD E AHE L FH

Рис 19 (А) Структура гена - кандидата (Я/1 В) восстановления фертильности ЦМС WA-типa. Оснавания, одинаковые с консенсусным мотивом 1, показаны темно-серым цветом. (В) консенсусный мотив данного гена, консенсусный мотив класса генов восстановления фертильности (ЯБ) и мотив 1 показаны в нижной части.

выводы

1 В митохондриальной последовательности ДНК риса выявлен полиморфизм, на основе которого при помощи молекулярных маркеров можно различать генотипы ЦМС линий и линий закрепителей. Для выявления генотипов ЦМС линий и линий закрепителей созданы специфичные SCAR- маркеры.

2. Секвенирован участок митохондриального гена nad4L ЦМС линии и линии < закрепителя. Анализ секвенированных последовательностей, позволяет сделать вывод о возможной роли митохондриального гена nad4L в проявлении ЦМС.

3. Наследование признака восстановления фертильности системы ЦМС WA-типа контролируется более чем двумя генами, расположенными в разных хромосомах риса.

4 Ген восстановления фертильности R/3 картирован на коротком плече 1-ой хромосомы риса линии IR36, между разработанным нами RFLP- ПЦР маркером RG140 и SSR- маркером RM7180.

5. Ген восстановления фертильности Rf5 картирован на коротком плече 10-ой хромосомы риса линии 1R62030, между SSR- маркерами RM311 и RM171.

6. Ген восстановления фертильности Rf4 картирован на длином плече 10-ой хромосом*|риса линии Amoll, между SSR- маркером RM6737 на расстоянии 1.6 сМ и разработанным нами STS- маркером АВ443 на расстоянии 0.5 сМ.

7 Наследование признака восстановления фертильности системы ЦМС WA-типа при скрещивании ЦМС линии (Neda-A) с линией восстановителем (IR36) в стрессовых условиях внешней среды отклоняется от соотношения 31 и составляет 9'7; определены два QTL- локуса на 1-ой хромосоме риса, отвечающие за проявление этого признака и взаимодействующие друг с другом.

8. Разработан метод классификации генов на основе первичной структуры белков. Этим методом можно различать гены восстановления фертильности, действующие в разных ЦМС системах.

9. Выдвинута гипотеза «необходимости наличия критического числа (не менее 10) PPR- мотивов в генах восстановления фертильности для функционального проявления данного признака».

10 Идентифицирован ген - кандидат RflB - в Rf4- локусе восстановления фертильности ЦМС WA- типа. Получены экспериментальные данные, указывающие на возможную роль этого гена в контроле экспрессии *

признака восстановления фертильности ЦМС WA- типа.

РЕКОМЕНДАЦИИ

Рекомендуется использовать:

- разработанные митохондриальные SCAR- маркеры для выявления генотипов ЦМС линий и линий закрепителей при создании гетерозисных гибридов риса и для идентификации новых линий закрепителей.

- идентифицированные линии восстановители фертильности в селекционных программах создания гибридного риса.

- идентифицированные маркеры генов восстановления фертильности для идентификации потенциальных линий восстановителей, а также при переносе генов восстановления фертильности в интересующие линии, имеющие высокую комбинационную способность.

- разработанный нами метод классификации генов на основе первичной структуры белков для выявления генов - кандидатов восстановления фертильности риса и других растений.

- оценить комбинационную способность линий восстановителей IR24, IR28, IR36, IR62030, IR60966, Amoll и Ато12 на гетерозис.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ахмадихах А., Шевелуха В. С., Карлов Г. И. Изучение наследования восстановления фертильности риса ЦМС WA - типа. // Материалы 4-ой межу народной конференции "Иран-Россия по Аграрным Наукам и Природным Ресурсам", 2004. Шахр-Корд, Иран, С.5-11 (перевод с английского).

2. Ахмадихах А., Шевелуха В. С., Карлов Г. И. Использование SSR маркеров генов восстановления фертпльности (Rf) для генотипирования линий риса. // Материалы 3-го Московского международного конгресса "Биотехнология: состояние и перспективы развития", 2005. Москва, Россия, С.244 (перевод с английского).

3 Ахмадихах А., Шевелуха В. С., Карлов Г. И. Картирование гена восстановления фертильности (Rf3) для ЦМС WA - типа. // Материалы научной конференции "m vitro Биология", 2005. Мариланд, США, С.41 (перевод с английского).

4. Ахмадихах А., Шевелуха В. С., Карлов Г. И. Тип наследование и картирование гена восстановления фертильности ЦМС WA- типа риса линии IR28. // Материалы 8-ой научной конференции "Генетическая изменчивость и геномная динамика растений", 2005. Гатерзлебен, Германия, С.67 (перевод с английского).

5. Ахмадихах А. Изучение структуры и организации генов восстановления фертильности растений. // Материалы 4-ого регионального конгресса "Биотехнология", 2005. Керман, Иран, С.128 (перевод с английского).

6. Ахмадихах А., Шевелуха В. С., Карлов Г. И. Ассоциация молекулярных

маркеров с 2 генами восстановления фертильности в расщепляющихся популяциях риса. // Материалы 1-го международного конгресса "Биотехнология", 2005. Тегеран, Иран, С. 158 (перевод с английского).

7. Ахмадихах А., Шевелуха В. С., Карлов Г. И. Создание и идентификация новых молекулярных маркеров, расщепляющихся с Rfî геном риса. // Материалы 13-ой Иранской научой конференции в Европе (IRCE), 2005. Лидз, Великобритания, С. 72-73 (перевод с английского).

8 Ахмадихах А. Новая и быстрая методика выделения ДНК. // Материалы 2-ой международной конференции "qPCR", 2005. Германия, С.23 (перевод с английского).

9 Ахмадихах А. Идентификация и динамика генов восстановления фертильности растений // Материалы 2-ой симпозиумы "Биотехнология и Биоинформатика", 2005. Колорадо, США, С.55 (перевод с английского).

10 Ахмадихах А. Изучение структуры и динамики генов восстановления фертильности (Rf), взаимодействующих с различными ЦМС системами. // Материалы международной конференции "Биосаенс: от генов к системам",

2005. Глазго, Шотланд, С.91 (перевод с английского).

11 Ахмадихах А., Шевелуха В. С., Карлов Г. И. Картирование локусов количественных признаков (QTL), контролирующих восстановление фертильности у риса в стрессовых условиях внешней среды. // Материалы межународной научной конференции, посвященной Российского государственного аграрного университета - МСХА имени К.А. Тимирязева,

2006. Москва (в печати).

12. Ахмадихах А., Карлов Г. И., Шевелуха В. С. Идентификация и клонирование маркеров, сцепленных с ЦМС WA- типа риса. // Материалы научной конференции "in vitro Биология", 2006. Миннесота, США, С.47 (перевод с английского).

13. Ахмадихах А., Шевелуха В. С., Карлов Г. И. Идентификация гена восстановления фертильности с частичным эффектом для ЦМС WA- типа риса с использованием SSR- маркеров. // Материалы 9-ой Иранской конференции "Генетика", 2006. Тегеран, Иран, С.7 (перевод с английского).

14. Ахмадихах А., Карлов Г. И., Шевелуха В. С. Идентификация новых молекулярных маркеров, сцепленных с ЦМС WA- типа риса. // Материалы 9-ой Иранской конференции "Генетика", 2006. Тегеран, Иран, С. 10 (перевод с английского).

15 Ahmadikhah A., Karlov G.I. (2006) Molecular Mapping of the Fertility -Restoration Gene Rf4 for WA-Cytoplasmic Male Sterility in Rice (Молекулярное картирование гена восстановления фертильности Rf4 для ЦМС WA- типа риса) // Plant Breeding, Vol.125, Iss.3 (в печати).

1,5 печ. л.

Зак. 357.

Тир. 100 экз.

Центр оперативной полиграфии ФГОУ ВПО РГАУ - МСХА им. К. А. Тимирязева 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 44

'HSfeO

1 980

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ахмадихах Асадоллах

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Рис.

1.2. Ботаническая характеристика риса.

1.3. Генетическая характеристика риса.

1.4. Системы мужской стерильности.

1.4.1. Цитоплазматическая мужская стерильность.

1.4.2. Генетическая мужская стерильность, чувствительная к окружающей среде (EGMS).

1.4.3. Химически индуцированная мужская стерильность.

1.5. Биохимические и цитогенетические особенности растений с

1.6. Механизм развития ЦМС у растений.

1.7. Влияние стерильной цитоплазмы на различные признаки.

1.8. Производство гибридного риса.

1.9. Молекулярные особенности генов ЦМС.

1.10. Восстановление фертильности.

1.10.1. Генетический контроль восстановления фертильности.

1.10.2. Генетика популяции восстановителей.

1.10.3. Механизм восстановления.

1.11. Молекулярные маркеры.

1.11.1 .ДНК-маркеры.

1.11.1.1. RAPD- маркеры.

1.11.1.2. STS- маркеры.

1.11.1.2.1. CAPS-маркеры.

1.11.1.2.2. SSR-маркеры.

1.11.1.2.3. SCAR- маркеры.

1.12. Селекция с помощью маркеров (MAS).

1.13. Генетические карты сцепления.

1.14. Методы картирования локусов количественных признаков.

ГЛАВА2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Исходный материал.

2.2. Изучаемые признаки.

2.2.1. Фертильность пыльцы и озерненность метелки.

2.2.2 Высота растений и цвет рыльца.

2.3. Выделение ДНК риса для ПЦР-анализа.

2.4. Амплификация SSR- маркеров.

2.5. Синтез и создание новых праймеров.

2.6. CAPS-маркеры.

2.7. Выявления полиморфизма митохондриальной ДНК между ЦМС линиями и их закрепителями ЦМС.

2.7.1. Амплификация ДНК SCAR- праймерами.

2.7.2. Амплификация ДНК RAPD-методом.

2.8. Выделение фрагментов ДНК и секвенирование.

2.9. Клонирование ДНК фрагментов.

2.9.1. Лигирование ДНК фрагментов в pGEM®-T вектор.

2.9.2. Трансформация компетентных клеток.

2.10. BSA- анализ.

2.11. Анализ сцепления.

2.12. Картирование локусов количественных признаков (QTL).

2.13. Изучение характерных особенностей и структуры генов восстановления фертильности.

2.13.1. Изучение характерных особенностей и структуры рнее клонированных генов восстановления фертильности у разных растений.

2.13.2 Классификация генов, находящихся в ДНК фрагменте, несущем молекулярные маркеры, сцепленные с геном восстановления фертильности.

ГЛАВАЗ. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Идентификация молекулярных маркеров, сцепленных с цитоплазматической мужской стерильностью WA-типа риса.

3.1.1. Создание SCAR- маркеров.

3.1.2. RAPD- анализ.

3.1.3. Преобразование RAPD- маркеров в специфичные SCAR-маркеры.

3.2. Тип наследования фертильности.

3.3. Влияние стерильной цитоплазмы (ЦМС) на различные признаки.

3.4. BSA-анализ.

3.5. Картирование гена восстановления фертильности Rf3, действующего в нормальных условиях в популяции Neda-A х IR36.

3.6. Обнаружение QTL-локусов восстановления фертильности в стрессовых условиях внешней среды.

3.6.1. Выявление QTL-локусов с главными эффектами.

3.6.1.1. Выявление QTL-локусов методом картирования по отдельным маркерам.

3.6.1.2. Множественно-интервальное картирование QTL-локусов восстановления фертильности.

3.6.2. Анализ взаимодействия между обнаруженными QTL-локусами (I-QTLs).

3.7. Идентификация и локализация гена Rf4 и сцепленных с ним ДНК-маркеров в популяции Neda-A х IR24.

3.8. Идентификация и локализация гена Rf4 и сцепленных с ним ДНК-маркеров в популяции Neda-A х IR28.

3.9. Идентификация и локализация гена R/5 и сцепленных с ним ДНК-маркеров в популяции Neda-A х IR62030.

3.10. Картирование гена R/4 в популяции Neda-A х Amoll.

3.10.1. Обнаружение Rf4 гена у Amoll и картирование региона R/4-гена.

3.10.2. Подробное картирование региона R/4 гена.

3.10.3. Физическая локализация фрагмента, несущего R/4- ген и сцепленные с ним маркеры.

3.11. Изучение характерных особенностей и структуры генов восстановления фертильности.

3.11.1. Классификация ранее кпонированныех генов восстановления фертильности разных растений.

3.11.2. Классификация генов, находящихся в ДНК фрагменте, несущем молекулярные маркеры, сцепленные с геном восстановления фертильности ЦМС WA риса.

3.12. Идентификация наиболее вероятного гена - кандидата восстановления фертильности ЦМС WA- типа.

3.13. Изучение роли гена - кандидата RflB в проявлении восстановления фертильности.

ВЫВОДЫ.

РЕКОМЕНДАЦИИ.

БЛАГОДАРНОСТИ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярное маркирование ЦМС и генов восстановления фертильности риса (Oryza sativa L.)"

Актуальность проблемы. Поиск молекулярных маркеров для решения задач по изучению и картированию экономически важных генов высших растений представляет одну из важных и актуальных задач селекции и генетики [Tingey et al, 1992; Tanksley, 1993; Yu et al, 1995]. В последние десятилетия молекулярные маркеры нашли очень широкое применение в различных областях генетических исследований [Caetano-Anolles, 1993; Mohan et al., 1997]. Наличие большого числа молекулярных маркеров, распределенных по всему геному, дает возможность эффективно картировать интересующие исследователей гены. Молекулярные маркеры позволяют избежать в генетическом анализе проблем, связанных с взаимодействием разных локусов [Tanksley, 1993; Yu et al, 1995].

Молекулярные маркеры широко используют для исследования сомаклональной изменчивости [Кокаева и др., 1997; Осипова и др., 2001], точной и быстрой паспортизации различных видов и сортов растений [Multani and Lion, 1995; Журавлев и др., 1996; Sanchez-Escribano et al, 1999; Кочиева и др, 2003], идентификации соматических гибридов [Гавриленко и др, 1994; Дорохов и Клоке, 1997], для изучения филогенетического родства [Gonzales and Ferrer, 1993; Lanza et al, 1997; Chowdari et al, 1998].

Молекулярные маркеры значительно облегчают процесс клонирования генов [Tanksley et al, 1995; Mohan et al, 1997], а также важны при изучении полигенных локусов количественных признаков (QTL) [Tanksley, 1993; Van der Knaap et al, 2002].

Для изучения организации геномов растений генетики используют самые разные объекты, имеющие как чисто теоретическое значение (легкость проведения генетических исследований и хорошая изученность), так и практическое значение (важность для сельскохозяйственного использования). К таким, широко используемым генетическим объектам, можно отнести и рис.

Рис (Oryza sativa L.) является важной сельскохозяйственной культурой и удобной моделью для генетических исследований. Рис выращивается как продовольственная культура. Жизнь около половины населения мира зависит от этой культуры. Среди различных видов растений, на которых коммерчески используются гибриды Fj, рис занимает ведущее место. Коммерческое использование гибридной технологии является одним из самых важных применений генетики в сельском хозяйстве. Это имеет не только важное значение для продовольственной безопасности, но оказывает также пользу окружающей среде [Virmani et al., 2003].

В настоящее время опубликованы карты хромосом риса, содержащие молекулярные маркеры [McCouch. et al., 2002]. Благодаря использованию молекулярных маркеров удалось создать «интегрированую» карту хромосом риса [Kishimoto et al., 1993], объединившую морфологические и молекулярные локусы. Большое число работ по картированию генов с применением молекулярных маркеров у риса посвящены изучению восстановления фертильности [Zhang et al, 1995 , 1997 and 2002; Zhuang et al, 2001 и 2002; He et al, 2002; Jing et al, 2001; Yao et al, 1997], но из-за сложности фенотипического проявления, наличия нескольких ЦМС- систем риса -значение многих генов и генов модификаторов в экспрессии признака точно не идентифицированы. Работ по клонированию генов восстановления фертильности риса немного [Kazama, Toriyama, 2003; Komori et al., 2003; Akagi et al., 2004]. Характерные особенности и структура генов восстановления фертильности, особенно у ЦМС WA-типа, не достаточно изучены. Поэтому требуется дополнительный поиск новых морфологических и молекулярных маркеров, их локализация и изучение характерных особенностей, структуры генов восстановления фертильности.

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы являлся поиск и идентификация новых молекулярных маркеров, сцепленных с ЦМС и с генами восстановления фертильности, создание генетической карты для локализации важных локусов восстановления фертильности ЦМС WA- типа и изучение характерных особенностей, структуры этих генов. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

2. Идентифицировать новые молекулярные маркеры, сцепленные с геном (генами) восстановления фертильности.

3. С помощью молекулярных маркеров идентифицировать локусы' количественных признаков (QTL), контролирующие восстановление фертильности в стрессовых условиях внешней среды.

4. Изучить структуру и организацию генов восстановления фертильности и определить возможный ген- кандидат восстановления фертильности ЦМС WA -типа.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Ахмадихах Асадоллах

ВЫВОДЫ

1- В митохондриальной последовательности ДНК риса выявлен полиморфизм, на основе которого при помощи молекулярных маркеров можно различать генотипы ЦМС линий и линий закрепителей. Для выявления генотипов ЦМС линий и линий закрепителей созданы специфичные SCAR- маркеры.

2- Секвенирован участок митохондриального гена nad4L ЦМС линии и линии закрепителя. Анализ секвенированных последовательностей, позволяет сделать вывод о возможной роли митохондриального гена nad4L в проявлении ЦМС.

3- Наследование признака восстановления фертильности системы ЦМС WA- типа контролируется более чем двумя генами, расположенными в разных хромосомах риса.

4- Ген восстановления фертильности RJ3 картирован на коротком плече 1-ой хромосомы риса линии IR36, между разработанным нами RFLP-ПЦР маркером RG140 и SSR- маркером RM7180.

5- Ген восстановления фертильности Rf5 картирован на коротком плече 10-ой хромосомы риса линии IR62030, между SSR- маркерами RM311 и RM171.

6- Ген восстановления фертильности Rf4 картирован на длинном плече 10-ой хромосомы риса линии Amoll, между SSR- маркером RM6737 на расстоянии 1.6 сМ и разработанным нами STS- маркером АВ443 на расстоянии 0.5 сМ.

7- Наследование признака восстановления фертильности системы ЦМС WA- типа при скрещивании ЦМС линии (Neda-A) с линией восстановителем (IR36) в стрессовых условиях внешней среды отклоняется от соотношения 3:1 и составляет 9:7; определены два QTLлокуса на 1-ой хромосоме риса, отвечающие за проявление этого признака и взаимодействующие друг с другом.

8- Разработан метод классификации генов на основе первичной структуры белков. Этим методом можно различать гены восстановления фертильности, действующие в разных ЦМС системах.

9- Выдвинута гипотеза «необходимости наличия критического числа (не менее 10) PPR- мотивов в генах восстановления фертильности для функционального проявления данного признака».

10- Идентифицирован ген - кандидат Rfl В в Rf4- локусе восстановления фертильности ЦМС WA- типа. Получены экспериментальные данные, указывающие на возможную роль этого гена в контроле экспрессии признака восстановления фертильности ЦМС WA- типа.

РЕКОМЕНДАЦИИ

Рекомендуется использовать:

- оценить комбинационную способность линий восстановителей IR24, IR28, IR36, IR62030, IR60966, Amoll и Ато12 на гетерозис.

БЛАГОДАРНОСТИ

Глубокую признательность автор выражает своим научным руководителям, заведующему кафедрой е.- х биотехнологии РГАУ-МСХА имени К.А.Тимирязева, академику РАСХН, д.б.н. проф. B.C. Шевелухе, и руководителю центра молекулярной биотехнологии РГАУ-МСХА имени К.А.Тимирязева, к.б.н. Г.И. Карлову за огромную помощь при проведении исследований, консультацию и обсуждении результатов и подготовке диссертационной работы.

Автор выражает искреннюю благодарность сотрудникам центра молекулярной биотехнологии РГАУ-МСХА имени К.А.Тимирязева, ст.н.сотр. Г.Н. Андреевой, к.б.н. И.А. Фесенко, к.б.н. Т.В. Даниловой, М.Ю. Куклеву, А.Н. Сахаровой, за помощь и поддержку.

Автор благодарит всех преподавателей, сотрудников и стажеров кафедры с.-х биотехнологии РГАУ-МСХА имени К.А.Тимирязева, проф. д.б.н. Л.И. Хрусталеву, проф. д.б.н. Н.Б. Пронину, проф. д.б.н. Е.А. Калашникову, ст.н.сотр. Н.П. Карсукину, проф. д.б.н. В.М. Ковалева.

Автор выражает благодарность директору селекционной станции РГАУ-МСХА имени К.А.Тимирязева Г.Ф. Монахосу за обеспечение возможности проведения полевых опытов и доценту кафедры генетики РГАУ-МСХА имени К.А.Тимирязева А.А. Соловьеву за консультации и критические замечания при подготовке текста диссертации.

Автор выражает глубокую признательность замечательному преподавателю Н.Н. Багатеревой за доброту, терпение и огромную помощь при изучении русского языка.

Автор выражает глубокую признательность сотрудникам деканата по работе с иностранными учащимися за помощь и подготовку дакументов.

Автор также благодарит всех друзей и коллег Камал Гасеми Безди, Али Хесами, Муса Хесам, Сайд Яздани, Масуд Алипана, Давуд Ганбариан, Мердад Фатоллаеи, Реза Мусави и Джафари за помощь, поддержку и дружеское отношение.

Искреннюю благодарность автор выражает своей семье, супруге Лейла Найерипасанд за любовь, терпение, доброту и понимание.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ахмадихах Асадоллах, Москва

1. Борисенко JI.P., Дмитриева Г.А., Ильяшенко Г.А., Савченко Н.И. Ультраструктурные и функциональные особенности пыльников линий озимой пшеницы с мужской стерильностью. // Цитология и генетика, 1982, Т. 16, №3, с. 30-34.

2. Вахрушева Э.И., Франковская М.Т. Наследование стерильности и фертильности в С-типе ЦМС у кукурузы. // Доклады ВАСХНИЛ, 1984, № 4, с. 5-7.

3. Гавриленко Т.А., Дорохов Д.Б., Никуленкова Т.В. Характеристика межродовых соматических гибридов томата Lycopersicon Esculentum Mill, и неклубеньковых видов картофеля серии Etuberosa. // Генетика, 1994, Т. 30, № 12, с. 1605-1615.

4. Гостимский С.А., Кокаева З.Г., Боброва В.К. Использование молекулярных маркеров для анализа генома растений. // Генетика, 1999, Т. 35, № 11, с. 1538-1549.

5. Дмитриева А.Н., Борисенко JI.P., Савченко Н.И. Биохимические и цитогенетические особенности 4 цитоплазматической мужской стерильности озимой пшеницы. -Киев: Наук, думка, 1983. -119 с.

6. Дорохов Д.Б., Клоке Э. Быстрая и экономичная технология RAPD анализа растительных геномов. // Генетика, 1997, Т. 33, № 4, с. 443-450.

7. Журавлев Ю.Н., Козыренко М.М., Артюкова Е.В., Реунова Г.Д., Музарок

8. Т.И., Еляков Г.Б. ПЦР-генетическое типирование женьшеня с использованием произвольных праймеров. // Доклады Академии Наук, 1996, Т. 349, №1, с. 111-114.

9. Ковеза О.В. Идентификация, клонирование и исследование молекулярных маркеров генома гороха. // Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук, 2003, Изд-во МГУ, Москва.

10. Кокаева З.Г., Боброва В.К., Петрова Т.В., Гостимский С.А., Троицкий А.В. Генетический полиморфизм сортов, линий и мутантов гороха по данным RAPD-анализа. // Генетика, 1997, Т. 34, № 6, с. 771-777.

11. Крупнов В.А. Генная и цитоплазматическая мужская стерильность растений. М.: Колос. 1973. -С. 277.

12. Купцов Н.С. Электронномикроскопическое изучение пыльников разных форм сахарной свелы в ходе микроспорогенеза и гаметогенеза. / Автореф. дис. канд. наук/К. 1972. с. 17.

13. Малышев СВ., Картель Н.А. Молекулярные маркеры в генетическом картировании растений. // Молекулярная биология, 1997, Т. 31, №62, с. 197-208.

14. Мальцева И.В., Шустин В.Г. Сравнение множественных молекулярных форм некоторых ферментов л у риса с ЦМС и фертильных образцов // Тезисы конф. молодых ученых-рисоводов. Краснодар, 1991, с. 22-23.

15. Нурбеков СИ. Влияние цитоплазмы с мужской стерильностью на проявление признаков качества зерна растений гибридов первого поколения. // Тезисы докл. совещания по пробл. генетики и селекции растений. Алма-Ата. 1979, с. 134.

16. Огородникова В.Ф. Структура тапетальных пленок пыльников Triticum aestivum L. и Avena sativa L. // Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции / JI. 1977, Т. 60, Вып. 2, с. 99-104.

17. Орел Л.И., Вахрушева Э.И. Фертильность пыльцы кукурузы с различным числом доминантных аллелей Rf и Rf при техасском типе ЦМС. // Цитоплазматическая мужская стерильность и селекция растений / Сб. научных трудов. -Киев: Наукова думка. 1979, с. 143-147.

18. Орел Л.И. Структурно-клеточные механизмы цитоплазматической и генной пыльцевой стерильности у растений. // Тезисы докл. 4 съезда Всес. общества генетиков и селекционеров, М. 1982, с. 174-175.

19. Осипова Е.С., Кокаева З.Г., Троицкий А.В., Долгих Ю.И., Шамина З.Б., Гостимский С.А. RAPD-анализ сомаклонов кукурузы. //Генетика, 2001, Т. 37, № 1, с. 91-96.

20. Палилова А.Н., Фомченко Н.С. Изменчивость активности митохонд-рий у растений с ЦМС в зависимости от состояния аллелей Rf-гена. // Изменчивость и отбор. Минск, 1980, с. 51-55.

21. Подольских А.Н. Влияние понижения температуры в период цветения на пустозерность риса. // Селекция и семеноводство, 1991, № 2, с. 25-27.

22. Подольских А.Н. О некоторых факторах, влияющих на величину перекрестного опыления у ЦМС-линий риса / С.-х. биология. Серия Биол.растений. 1992, № 5, с. 17-21.

23. Ралько В.П., Палилова А.Н. Экспрессия генов Rf у линий восстановителей фертильности и ЦМС у озимой пшеницы. // Тезисы докл. второго Всес. совещания по генетике развития. Ташкент, 1990, с. 139-140.

24. Сиволап Ю.М., Календарь Р.Н. Генетический полиморфизм ячменя, выявленный ПЦР с произвольными праймерами. // Генетика, 1995, Т. 31, № 10, с. 1358-1364

25. Турбин Н.В., Палилова А.Н., Фомченко Н.С. О механизмах действия генов Rf восстановления фертильности в цитоплазме т-типа у кукурузы. // Докл. АН СССР. 1983, Т. 272, № 6, с. 1469-1472.

26. Хавкин Э.Е. Молекулярная селекция растений: ДНК-технологии создания новых сортов сельскохозяйственных культур. // Сельскохозяйственная биология, 2003, №3, с. 26.

27. Чернышева В.Г., Шашина З.Б. Влияние ЦМС на индукцию эмбриогенной каллусной ткани кукурузы. // Генетика, 1990, Т. 26, № 8, с. 1435-1439.

28. Abad, A.R., Mehrtens B.J., Mackenzie S.A. Specific expression in reproductivetissues and fate of a mitochondrial sterility-associated protein in cytoplasmic male-sterile bean. // Plant Cell., 1995, Vol.7, p.271-285.

29. Ahmadikhah A., Nematzadeh Gh., Babaeian N., Nayyeripasand L.1.entification of new fertility restorer and cytoplasmic male sterility maintainer lines in rice. // 4th Symposium on Hybrid Rice. /14-17 may 2002, Hanoi, Vietnam, p. 125.

30. Akagi H., Yokozeki Y., Inagaki A., Nakamura A., Fujimura T. A co-dominant

31. DNA marker closely linked to the rice nuclear restorer gene, Rf-1, identified with inter-SSR fingerprinting. // Genome, 1996, Vol.39, p. 1205-1209.

32. Akagi H., Nakamura A., Yokozeki Y., Inagaki A., Takahashi H., Mori K.,

33. Fujimura T. Positional cloning of the rice Rf-1 gene, a restorer of BT-type cytoplasmic male sterility that encodes a mitochondria-targeting PPR protein. // Theor. Appl. Genet., 2004, Vol.108, p.1449-1457.

34. Balk, J., Leaver С J. The PET1-CMS mitochondrial mutation in sunflower isassociated with premature programmed cell death and cytochrome с release. // Plant Cell., 2001, Vol.13, №8, p. 1803-1818.

35. Barzen E., Stahl R., Fuchs E., Borchardt D.C., Salamini F. Development of coupling-repulsion-phase SCAR markers diagnostic for the sugar beet Rrl allele conferring resistance to rhizomania. // Molecular Breeding, 1997, Vol.3, p.231-238.

36. Baumbusch L.O., Sundal I.K., Hughes D.W., Galau G.A., Jakobsen K.S.

37. Efficient protocols for CAPS-based mapping in Arabidopsis. // Plant Mol. Biol. Rep., 2001. Vol.19, p.137-149.

38. Belhassen E., Atlan A., Couvet D., Gouyon P.H., Quetier F. Mitochondrialgenome of Thymus vulgaris L. (Labiate) is highly polymorphic between and among natural populations. I I Heredity, 1993, Vol.71, p.462-472.

39. Bentolila S., Alfonso A., Hanson M. A pentatricopeptide repeat-containinggene restores fertility to male-sterile plants. // Proc. Natl. Acad. Sci., 2002, Vol.99, p.10887-10892.

40. Bergman P., Edqvist J., Farbos I., Glimelius K. Malesterile tobacco displaysabnormal mitochondrial atpl transcript accumulation and reduced floral ATP/ADP ratio. //PlantMol. Biol., 2000, Vol.42, №3, p.531-544.

41. Bharaj T.S., Bains S.S., Sidhn G.S.,Gadneja M.R. Genetics of fertilityrestoration of "Wild Abortive" cytoplasmic male sterility in rice, Oryza sativa L. //Euphytica, 1991. Vol.56, №3, p.199-203.

42. Binelli G., Bucci G. A genetic linkage map of Picea abies Karst, based on

43. RAPD markers, as a tool in population genetics. // Theor. Appl. Genet., 1994, Vol.88, p.283-288.

44. Brown G., Formanova N., Jin H., Wargachuk R., Dendy C., Patil P., Laforest

45. M., Zhang J., Cheung W. Y., Landry B. S. The radish Rfo restorer gene of Ogura cytoplasmic male sterility encodes a protein with multiple pentatricopeptide repeats. // The Plant Journal, 2003, Vol.35, p.262-272.

46. Budar F., Touzet P., De Paepe R. The nucleo-mitochondrial conflict incytoplasmic male sterilities revisited. // Genetica, 2003, Vol.l 17, p. 3-16.

47. Caetano-Anolles, Amplifying G. DNA with arbitrary oligonucleotide primers. //

48. PCR Methods and Applications, 1993, Vol.3, p.85-94.

49. Chang T.T. The origin, evolution, cultivation, dissemination, and diversification of Asian and African rice. // Euphytica, 1976, Vol.25, p.425-441.

50. Chase C.D. Expression of CMS-unique and flanking mitochondrial DNAsequences in Phaseolus vulgaris L. // Curr. Genet., 1994, Vol.25, p.245-251.

51. Chen Y., Cai J., Lu H. Effect of CMS and nuclear-cytoplasmic interaction onhybrid rice yield. // J. Fujian Agr. Coll., 1987, Vol.l6, №3, p.l90-197.

52. Chen S, Lin X.H., Xu C.G., Zhang Q.F. Improvement of bacterial blightresistance of 'Minghui 63', an elite restorer line of hybrid rice, by molecular marker-assisted selection. // Crop Sci., 2000, Vol.40, p.239-244.

53. Chowdari K.V., Venkatachalam S.R., Davierwala A.P., Gupta V.S., Ranjekar

54. P.K., Govila O.P. Hybrid performance and genetic distance as revealed by the (GATA)4 microsatellite and RAPD markers in pearl millet. // Theor. Appl. Genet., 1998, Vol.97, p.163-169.

55. Chu G.E., Shinjyo C., Li G.S., Li H.W. Hybrid rice breeding. Ill Cytohistological investigation of pollen degeneration in anther of cytoplasmic male-sterile plants. //Japan J. Genetics, 1972. Vol.47, №3, p.179-183.

56. Claros M.G., Vincens P. Computational method to predict mitochondriallyimported proteins and their targeting sequences. // Eur. J. Biochem., 1996, Vol.241, p.779-786.

57. Coburn J.R., Temnykh S.V., Paul E.M., McCouch S.R. Design and applicationof microsatellite marker panels for semiautomated genotyping of rice (Oryza sativa L.). // Crop Sci., 2002, Vol.42, p.2092-2099.

58. Colhoun C.W., Steer M.W. Microsporogenesis and the mechanism ofcytoplasmic male sterility in maize. // Ann. Bot., 1981, Vol.48, №4, p.417-424.

59. Conley C.A., Hanson M.R. Tissue-specific expression in plant mitochondria. //

60. Plant Cell., 1994, Vol.6, p.85-91.

61. Cui X.Q., Wise R.P., Schnable P.S. The rfi nuclear restorer gene of malesterile, T-cytoplasm maize. // Science, 1996, Vol.272, p.1334-1336.

62. Danilova T.V., Karlov G.I. Application of inter simple sequence repeat (ISSR)polymorphism for detection of sex-specific molecular markers in hop (Hmulus lupulus L.). // Euphytica, 2006. in press.

63. Darvasi A., Soller M. Optimum spacing of genetic markers fordetermining linkage between marker loci and quantitative trait loci. // Theor. Appl. Genet., 1994, Vol.89, p.351-357.

64. Darvasi A., Weinreb A., Minke V., Weller J.I., Soller M. Detectingmarker-QTL linkage and estimating QTL gene effect and map location using a saturated genetic map. // Genetics, 1993, Vol.134, p.943 -951.

65. Davierwala A.P, Reddy A.P.K., Lagu M.D., Ranjekar P.K., Gupta V.S. Markerassisted selection of bacterial blight resistance genes in rice. // Biochem. Genet., 2001, Vol. 39, p.261-278.

66. Dax E., Livneh O., AUskevicius E., Edelbaum O., Kedar N., Gavish N., Milo

67. J., Geffen A., Blumenthal A., Rabinowitch H.D., Sela I. A SCAR marker linked to the ToMV resistance gene, Tm22, in tomato. // Euphytica, 1998, Vol. 101, p.73-77.

68. De Paepe R., Forchioni A., Chetrit P., Vedel F. Specific mitochondrial proteinsin pollen: presence of an additional ATP synthase beta subunit. // Proc. Natl. Acad. Sci., 1993, Vol.90, №13, p.5934-5938.

69. Deng Z., Huang S., Xiao S.Y., Gmitter F.G. Development andcharacterization of SCAR markers linked to the citrus tristeza virus ^ resistance gene from Poncirus trifoliata. // Genome, 1997, Vol.40, p.697-704.

70. Dewey R.E., Levings C.S.I.I.I., Timothy D.H. Novel recombinations in themaize mitochondrial genome produce a unique transcription in the Texas male-sterile cytoplasm. // Cell., 1986, Vol.44, p.439-449.

71. Dewey R.E., Timothy D.H., Levings C.S.I.I.I. A mitochondrial proteinassociated with cytoplasmic male sterility in the T cytoplasm of maize. // Proc. Natl. Aead. Sci., 1987, Vol.84, p.5374-5378.

72. Dickinson H.G. Organelle selection during flowering plant gametogenesis. //

73. The chondriome chloroplast and mitochondrial genomes / London, 1986, Щ1 p.37-60.

74. Dill C.L.,Wise R.P., Schnable P.S. RJS and RJ* mediate unique T-Kr/yitranscript accumulation, revealing a conserved motif associated with RNA processing arid restoration of pollen fertility in T-cytoplasm maize. //

75. Genetics, 1997, Vol.147, p.1367-1379.

76. Done A.A., Whittington W.J. The restoration of male fertility in F1 wheathybrids //Ann. Appl. Biol., 1978. Vol. 89, № 3, p. 489-493 90.

77. Edwards M.D., Stuber C.W., Wendel J.F. Molecular- marker facilitatedinvestigations of quantitative trait loci in maize. I. Numbers, genomic distribution, and types of gene action. // Genetics, 1987, Vol.116, p. 113-125.

78. Farbos I., Mouras A., Bereterbide A., Glimelius K. Defective cell proliferationin the floral meristem of alloplasmic plants of Nicotiana tabacum leads to abnormal floral organ development and male sterility. I I Plant J., 2001, Vol.26, №2, p.131-142.

79. FAO. //FAO STAT Database, 2005. FAO, Rome.

80. Giese H., Holm-Jensen A.G., Mathiassen H., Kjaer В., Rasmussen S.K., Bay

81. H., Jensen J. Distribution of RAPD markers on a linkage map of barley. // Hereditas, 1994, Vol.120, p.267-273.

82. Goff S.A., Ricke D., Lan Т.Н., Presting G., Wang R.L., Dunn M., Glazebrook

83. J., Sessions A., Oeller P., Varma H., Hadley D., Hutchinson D., Martin C., Katagiri F., Lange B.M., Moughamer Т., Xia Y., Budworth P., Zhong J.P., Щ' Miguel Т., Paszkowski U., Zhang S.P., Colbert M., Sun W.L., Chen L.L.,

84. Cooper В., Park S., Wood T.C., Mao L., Quail P., Wing R., Dean R., Yu Y.S., Zharkikh A., Shen R., Sahasrabudhe S., Thomas A., Cannings R., Gutin A., Pruss D., Reid J., Tavtigian S., Mitchell J., Eldredge G., Scholl Т.,

85. Miller R.M., Bhatnagar S., Adey N., Rubano Т., Tusneem N., Robinson R., Feldhaus J., Macalma Т., Oliphant A., Briggs S. A draft sequence of the rice genome (Oryza sativa L. ssp. japonica). // Science, 2002, Vol.296, p.92-100.

86. Gonzalez J.M., Ferrer E. Random amplified polymorphic DNA analysis inHordeum species. // Genome, 1993, Vol.38, p.1029-1031.

87. Guadagnuolo R., Savova-Bianchi D., Felber F. Specific genetic markers for wheat, spelt and four wild relatives : comparison of isozymes, RAPD and wheat microsatellites. // Genome, 2001, Vol.44, №4, p.610-621.

88. Hahn V., Blankenhorn K., Schwall M., Melchinger A.E. Relationships amongearly European maize inbreds: III. Genetic diversity revealed with RAPD markers and comparison with RFLP and Pedigree data. // Maydica, 1995, Vol.40, p.299-310.

89. Hakansson G., Glimelius K. and Bonnett H. Respiration in cells andmitochondria of male-sterile Nicotiana spp. // Plant Physiol., 1990, Vol.93. №2. p.367-373.

90. Haley C.S., Knott S.A. A simple regression method for mappingquantitative trait loci in line crosses using flanking markers. // Heredity, 1992, Vol.69, p.315-324.

91. Hallden C, Hansen M., Nilsson N.O., Hjerdin A., Sail T. Competition assource of errors in RAPD analysis. // Theor. Appl. Genet., 1996, Vol.93, p.l 185-1192.

92. Hanson M.R., Sutton C.A., Lu B. Plant organelle gene expression: altered by

93. RNA editing. // Trends Plant Sci., 1996, vol.1, p.57-64.

94. He G.H., Wang W.M., Liu G.Q., Hou L., Xiao Y.H. et al. Mapping of twofertility-restoring gene for WA cytoplasmic male sterility in minghui63 using SSR markers. // Acta Genet. Sinica, 2002, Vol.29, №9, p.798-802.

95. He S., Lyznik A., Mackenzie S. Pollen fertility restoration by nuclear gene Fr in

96. CMS bean: nuclear-directed alteration of a mitochondrial population. // Genetics, 1995, Vol.139, p.955-962.

97. Hedley C.L., Ambrose M.J. In: The Pea Crop (Eds. P.D. Hebblethwaite, M.C.

98. Heath & T.C.K. Dawkins). // Butteworths, London, 1985.

99. Hernandez P., Dorado G., Cabrera A., Laurie D.A., Snape J.W., Martin

100. A. Rapid verification of wheat-Hordeum introgressions by direct staining of SCAR, STS, and SSR amplicons. // Genome, 2002, Vol.45, p. 198-203.

101. Hicks M., Adams D., O'Keefe S., Macdonald E., Hodgetts R. Thedevelopment of RAPD and microsatellite markers in lodgepole pine (Pinus contorta var. latifolia). // Genome, 1998, Vol.41, p.797-805.

102. Hittalmani S., Parco A., Mew T.V., Zeigler R.S., Huang N. Fine mapping and

103. DNA marker-assisted pyramiding of the three major genes for blast resistance in rice. // Theor. Appl. Genet., 2000, Vol.100, p. 1121-1128.

104. Hospital F., Chevalet C., Mulsant P. Using markers in gene introgressionbreeding programs. // Genetics, 1992, Vol.132, p. 1199-1210.

105. Howad W., Kempken F. Cell type-specific loss of atp6 RNA editing incytoplasmic male sterile Sorghum bicolor. // Proc. Nail. Acad. Sci., 1997, Vol.94, p.l 1090-11095.

106. Huang N., Angeles E.R., Domingo J., Magpantay G., Singh S., Zhang G.,

107. Kumaravadivel N., Bennett J., Khush G.S. Pyramiding of bacterial blight resistance genes in rice: marker-assisted selection using RFLP and PCR. // Theor. Appl. Genet., 1997, Vol.95, p.313-320.

108. Inoue Т., Zhong H.S., Miyao A., Ashikawa I., Monna L., Fukuoka S., Miyadera

109. N., Nagamura Y., Kurata N., Sasaki Т., Minobe Y. Sequence-tagged sites (STSs) as standard landmarkers in the rice genome. // Theor. Appl. Genet., 1994, Vol.89, p.728-734.

110. IRRI. Report of the meeting to discuss coordination of rice RFLP mapping. //1991. In: Rice Genetics II. / Manila, Philippines, p.815.

111. Irzykowska L., Wolko В., Swiecicki W.K. The genetic linkage map of pea

112. Pisum sativum L.) based on molecular, biochemical and morphological markers. //Pisum Genetics, 2001, Vol.33, p.13-18.

113. Iwabuchi M., Koizuka J., Shimamoto K. Processing followed by completeediting of an altered atp6 RNA restores fertility of cytoplasmic male sterile rice. //EMBO J., 1993, Vol.12, p.1437-1446.

114. Jansen R.C., Stam P. High resolution of quantitative traits into multiple loci viainterval mapping. // Genetics, 1994, Vol.136, p.1447-1455.

115. Jean M., Brotyn G.G., Landry B.S. Genetic mapping of nuclear fertilityrestorjer genes for the 'Polima' cytoplasmic male sterility in canola (Brassica nafifis Li), using DNA markers. // Theor. Appl. Genet., 1997, Vol.95, p.321-328.

116. Jiang C., Sink K.C. RAPD and SCAR markers linked to the sex expression locus M in asparagus. //Euphytica, 1997, Vol.94, p.229-333.

117. Jing R., Li X., Yi P., Zhu Y. Mapping fertility-restoring genes of rice WAcytoplasmic male sterility using SSLP markers. // Bot. Bull. Acad. Sin., 2001, Vol.42, p. 167-171.

118. Jones C.J., Edwards K.J., Castaglione S., Winfield M.O., Sale F., Van de Wiel

119. Jung G., Ariyarathne H.M., Coyne D.P. Nienhuis J. Mapping QTL for Bacterial Brown Spot Resistance under Natural Infection in Field and Seedling Stem Inoculation in Growth Chamber in Common Bean. // Crop Sci., 2003, Vol.43, p.350-357.

120. Kadowaki K., Suzuki T. Kazama S. A chimeric gene containing the 5" portionof atp6 is associated with cytoplasmic male-sterility of rice. // Mol. Gen. Genet., 1990, Vol.224, №1, p. 10-16.

121. Kalman L., Parducz A. Pinter L. The cytoplasmic male sterility in maize:fertility restoration and histology of anther development.//Maydica, 1982, Vol.27, №l,p.l-10.

122. Kamps T.L., McCarty D.R. Chase C.D. Gametophyte genetics in Zea mays L.:dominance of a restoration-of-fertility allele (Rfl) in diploid pollen. // Genetics, 1996, Vol.142, p.1001-1007.

123. Karp A., Kresovich S., Bhat K.V., Ayada W.G. Hodgkin T. Molecular tools inplant genetic resources conservation: a guide to the technologies. // IPGRI technical bulletin, 1997, №2. / International Plant Genetic Resources Institute, Rome, Italy.

124. Kaul M.L.H. Male sterility in higher plants. // Amsterdam, 1991, p.385.

125. Kazama Т., Toriyama K. A pentatricopeptide repeat-containing gene that promotes the processing of aberrant apt6 RNA of cytoplasmic male-sterile rice. // FEBS Lett., 2003, Vol.544, p.99-102.

126. Kennell J.C. Pring D.R. Initiation and processing of atp6, urfl03 and ORF221transcripts from mitochondria of T-cytoplasm maize. // Mol. Gen. Genet., 1989, Vol.216, p. 16-24.

127. Kishimoto N., Shimosaka E., Matsuura S. Saito A. A current RFLP linkagemap of rice: Alignment of the molecular map with the classical map. // Rice Genet. Newslet., 1993, Vol.9, p.38-40.

128. Kitagawa J., Posluszny U., Gerrath J.M. Wolyn D.J. Developmental and morphological analyses of homeotic cytoplasmic male sterile and fertile carrot flowers. // Sex Plant Reprod., 1994, Vol.7, p.41-50.

129. Komori Т., Yamamoto Т., Takemori N., Kashihara M., Matsushima H. et al.

130. Fine genetic mapping of the nuclear gene, Rf-1, that restores the BT-type cytoplasmic male sterility in rice (Oryza sativa L.) by PCR-based markers. // Euphytica, 2003, Vol.129, p.241-247.

131. Konieczny A., Ausubel F.M. A procedure for mapping Arabidopsis mutationsusing co-dominant ecotype-specific PCR-based markers. // Plant J., 1993, Vol.4, p.403-410.

132. Korol A.B., Ronin Y.I. Nevo E. Approximate analysis of QTL- environmentinteraction with no limits on the number of environments. // Genetics, 1998, Vol.148, p.2015-2028.

133. Kruglyak L., Lander E.S. A nonparametric approach for mapping quantitativetrait loci. // Genetics, 1995, Vol.139, p.1421-1428.

134. Kruleva M.M., Korol A.B., Dankov T.D., Skorpan V.A. Preygel J.A. Theeffect of genotype x cytoplasm interaction on meiotic behaviour of maize chromosomes // Genome, 1992, Vol.35, №4, p.653-658.

135. Koizuka N., Fujimoto H., Sakai T. Imamura J. Translational control of ORF125 expression by a radish fertility restoration gene in Brassica napus kosena CMS cybrids, p.83-86 in Plant Mitochondria: From Gene to

136. Function, edited by. I.M. Moller, P. Gardestrom, K. Glimelius & E. Glaser. // Backhuys Publishers, 1998, Leiden.

137. Kumari S.L. Fertility restoration studies in four WA CMS lines of rice. // Int. Rice Res. Notes, 1998, Vol.23, №1, p.25-26.

138. Lalanne E., Mathieu C., Vedel F., De Paepe R. Tissue specific expression ofgenes encoding isoforms of the mitochondrial ATPase beta subunit in Nicotiana sylvestris. //Plant Mol. Biol., 1998, Vol.38, №5, p.885-888.

139. Lander E.S., Green P., Abrahamson J., Barlow A., Daly M.J., Lincoln S.J., Newburg L. MAPMAKER: An interactive computer package for constructing primary genetic linkage mapsof experimental and natural populations. // Genomics, 1987, Vol.l, p. 174-181.

140. Lander E.S., Botstein D. Mapping mendelian factors underlying quantitativetraits using RFLP linkage maps. // Genetics, 1989, Vol.121, p.185-199.

141. Lanza L.L.B., de Souza C.L., Ottoboni L.M.M., Vieira M.L.C., de Souza

142. A.P. Genetic distance of inbred lines and prediction of maize single-cross performance using RAPD markers. // Theor. Appl. Genet., 1997, Vol.94, №8, p. 1023-1030.

143. Laroche A., Demeke Т., Gaudet D.A., Puchalski В., Frick M., McKenzie R.

144. Development of a PCR marker for rapid identification of the Bt-10 gene for common bunt resistance in wheat. // Genome, 2000, Vol.43, p.217-223.

145. Laucou V., Haurogne K., Ellis N., Rameau C. Genetic mapping in pea. 1. RAPD-based genetic linkage map of Pisum Sativum. // Theor. Appl. Genet., 1998, Vol.97, p.905-915.

146. Laver H.K., Reynolds S.J., Moneger F., Leaver С J. Mitochondrial genomeorganization and expression associated with cytoplasmic male sterility in sunflower (Helianthus annuus). //Plant J., 1991, Vol.1, №2, p.185-193.

147. Lazareva N.M. Ultrastructural investigation of cell pathology in microsporogenesis of CMS tabaccoes. // Embriology and seed reproduction: XI Intern. Symp., Leningrad, 1990, p.90.

148. Lebreton C.M., Visscher P.M., Haley C.S., Semikhodskii A., Quarrie S.A., Anonparametric bootstrap method for testing close linkage vs. pleiotropy of coincident quantitative trait loci. // Genetics, 1998, Vol.150, p.931-943.

149. Lee S.L.J., Warmke H.E. Organelle size and number in fertile and Tcytoplasmic male sterile corn. //Am. J. Bot., 1979, Vol.66, p.141-148.

150. Levings C.S.R. Thoughts on cytoplasmic male sterility in maize. // Plant Cell.,1993, Vol.5, p.1285-1290.

151. Li X., Deng L. The cytological and histological investigation of the abortiveprocess // Genie male-sterile wheat / Beijing, Amsterdam, 1987, p.47-60.

152. Li Y. Pedigree-analyses of fertility restorer genes inheritance in IR24. // Sci.agr. sin., 1985, №1, p.24-31.

153. Liang K., Yang R., Wang N., Chen Q. Comparative study of CMS-lines andmaintainers used in hybrid rice breeding // J. Fujian Agr. Coll., 1991, Vol.20, №4, p.367-371.

154. Lincoln S.E., Daly M.J., Lander E.S. Mapping genes controlling quantitativetraits using MAPMAKER/QTL version 1.1. A tutorial and reference manual. // A Whitehead Institute for Biomedical Research Technical Report,1993.

155. Litt M., Luty J.A. A hypervariable microsatellite revealed by in vitro amplification of a dinucleotide repeat within the cardiac muscle actin gene. // Am. J. Hum. Genet., 1989, Vol.44, p.397-401.

156. Liu F., Cui X., Horner H.T., Weiner H., Schnable P.S. Mitochondrial aldehydedehydrogenase activity is required for male fertility in maize. // Plant Cell., 2001, Vol.13, №5, p. 1063-1078.

157. Liu G., Lu G., Zeng L., Wang G.L. Two broad-spectrum blast resistancegenes, Pi9(t) and Pi2(t), are physically linked on rice chromosome 6. // Mol. Genet. Genomics, 2002, Vol.267, p.472-80.

158. Liu X.Q., Xu X., Tan Y.P., Li S.Q., Hu J. et al. Inheritance and molecularmapping of two fertility-restoring loci for Honglian gametophytic cytoplasmic male sterility in rice (Oryza sativaL.). // Mol. Genet. Genomics, 2004, Vol.271, №5, p.586-94.

159. Lu Y.G., Rutger J.N. Anther and pollen characteristics of induced geneticmale sterile mutants in rice (Oryza sativa L.) // Environ, and Exp. Bot., 1984, Vol.24, №3, p.209-218.

160. Lukowitz W., Gillmor C.S., Scheible W.R. Positional cloning in Arabidopsis.

161. Why it feels good to have a genome initiative working for you. // Plant Physiol., 2000, Vol.123, p.795-805.

162. Mackenzie S., Chose C. Fertility restoration is associated with loss of antherportion of the mitochondrial genome in cytoplasmic male-sterile common bean // Plant Cell., 1990, Vol.2, №9, p.905-912.

163. Mackill D.J., Ni J. Molecular mapping and marker assisted selection formajor-gene traits in rice. In: Khush GS, Brar DS, Hardy B, eds. Rice genetics IV. // Los Banos (Philippines), 2001, International Rice Research Institute. p.137-151.

164. Maekawa M., Kinoshita Т., Takahashi M. New fertility restoration genesinteracting with boro-cms for male sterility in rice // Mem. Fac. Agr. Hokkaido Univ., 1980, Vol.12, №2, p.89-100.

165. Mano Y., Sayed-Tabatabaei B.E., Graner A., Blake Т., Takaiura F., Oka S.,

166. Komatsuda T. Map construction of sequence-tagged sites (STSs) in barley (Hordeum vulgare L.). Theor. Appl. Genet., 1999, Vol.98, p.937-946.

167. Manzanares-Dauleux M.J., Barret P., Thomas G. Development of pathotipe specific SCAR marker in Plasmodiophora brassicae. II Europen Journal of Plant Pathology, 2000, Vol.106, p.781-787.

168. Marchler-Bauer A., Bryant S.H. CD-Search: protein domain annotations onthe fly. // Nucleic Acids Res., 2004, Vol.32, p.327-331.

169. Marienfeld J.R., Unseld M., Brandt P., Brennicke A. Mosaic open readingframes in the Arabidopsis thaliana mitochondrial genome. // Biol. Chem., 1997, Vol.378, №8, p.859-862.

170. Martin J.A., Crawford J.H. Several types of sterility in Capricum frutescens. //

171. Proc. Am. Soc. Hort. Sci., 1951, Vol.57, p.335-338.

172. McCouch S.R., Kochert G., Yu Z.H., Wang Z.Y., Khush G.S., Coffman W.R.,

173. Tanksley S.D. Molecular mapping of rice chromosomes. // Theor. Appl. Genet., 1988, Vol.76, p.815-829.

174. McCouch S.R., Chen X.L., Panaud O., Temnykh S., Xu Y.B., Cho Y.G.,

175. Huang N., Ishii Т., Blair M. Microsatellite marker development, mapping and applications in rice genetics and breeding. // Plant Mol. Biol., 1997, Vol.35, p.89-99.

176. McCouch S.R., Teytelman L., Xu Y., Lobos K.B., Clare K., Walton M., Fu В.,

177. Maghirang R., Li Z., Zing Y., Zhang Q., Kono I., Yano M., Fjellstrom R., DeClerck G., Schneider D., Cartinhour S., Ware D., Stein L. Development and mapping of 2240 new SSR markers for rice (Oryza sativa L.). // DNA

178. Res., 2002, Vol.9, p. 199-207.

179. McCouch S.R., Kochert G., Yu Z.H., Wang Z.Y., Khush G.S., Coffman W.R.,

180. Tanksley S.D. Molecular mapping of rice chromosomes. // Theor. Appl. Genet., 1988, Vol.76, p.815-829.

181. Menassa R., L'Homme Y., Brown G.G. Posttranscriptional and developmentalregulation of a CMS associated mitochondrial gene region by a nuclear restorer gene. // Plant J., 1999, Vol.17, №5, p.491-499.

182. Messeguer R., Ganal M., de Vicente M.C., Young N.D., Bolkan H., Tanksley

183. S.D. High resolution RFLP map around the root knot nematode resistance gene (Mi) in tomato. // Theor. Appl. Genet., 1991, Vol.82, p.529-536.

184. Mikami T. Genes of male sterility and fertility restoration in higher plants. //

185. Karaku to Seibucu, 1981, Vol.29, №11, p.711-720.

186. Mohan M., Nair S., Bhagwat A., Krishna T.G., Yano. M. Genome mapping, molecular markers and marker-assisted selection in crop plants. // Mol. Breeding, 1997, Vol.3, p.87-103.

187. Moneger F., Smart C.J., Leaver C.J. Nuclear restoration of cytoplasmic malesterility in sunflower is associated with the tissue-specific regulation of a novel mitochondrial gene. // EMBO J., 1994, Vol.13, p.8-17.

188. Muken H.S., Sharma H.L. Effect WA male sterile cytoplasm in rice // Trop.

189. Sci., 1993, Vol.33, №2, p.209-212.

190. Multani D.S., Lyon B.R. Genetic fingerprinting of Australian cotton cultivars with RAPD markers. // Genome, 1995, Vol.38, p. 1005-1008.

191. Nazarenko L.A., Bhatnagar S.K., Hohman R.J. A closed tube formatfor amplification and detection of DNA based on energy transfer. // Nucleic Acids Res., 1997, Vol.25, p.2516-2521.

192. Newbury H.J., Ford-Lloyd B.V. The use of RAPD for assessing variation in plants. // Plant Growth Regulation, 1993, Vol.12, p.43-51.

193. Nivison H.T., Hanson M.R. Identification of a mitochondrial protein associated with cytoplasmic male sterility in petunia. // Plant Cell., 1989, Vol.l, №ll,p.l 121-1130.

194. Olson M., Hood L., Cantor C., Botstein D. A common language for physicalmapping of the human genome. // Science, 1989, Vol.245, p.1434-1435.

195. Op den Camp R.G., Kuhlemeier C. Aldehyde dehydrogenase in tobacco pollen. // Plant Mol. Biol., 1997, Vol.35, №3, p.355-365.

196. Palmer J.D., Adams K.L., Cho Y., Parkinson C.L., Qiu Y.L., Song K. Dynamic evolution of plant mitochondrial genomes: mobile genes and introns and highly variable mutation rates. // Proc. Natl. Acad. Sci., 2000, Vol.97, №13, p.6960-6966.

197. Paniego N., Echaide M., Munoz M., Fernandez L., Torales S.M., Faccio P.,

198. Fuxan I., Carrera M., Zandomeni R., Suarez E.Y., Hopp H.E. Microsatellite isolation and characterization in sunflower (Helianthus annuus L.). // Genome, 2002, Vol.45, №1, p.34-43.

199. Pradhan S., Ratho S., Jachuck PJ. Stability of pollen sterility in cytoplasmicgenetic male sterile lines in rice // Proc. Indian Acad. Sci. Plant Sci., 1990, Vol.l0, №2, p.101-105.

200. Raj K.G., Siddiq E.A. Genetics of fertility restoration and biochemical basis ofmale sterility-fertility restoration system in rice. // RGN, 1984, Vol.l, p. 103104.

201. Raj K.G, Virmani S.S. Allelism test for restorer genes of six promising IRrestorer lines. // Rice Genet. Newslett., 1987, Vol.3., p.23-24.

202. Rao Y.S. Cytological investigation rice plant with cytoplasmic male sterility //

203. Nat. Sci. J. Hunan Norm. Univ., 1987, Vol.10, №4, p.87-92.

204. Rao Y.S. Cytological studies in cytoplasmic male sterile lines // Int. Symp. on

205. Hybrid Rice / Changsha, Hunan, China, 1986, p.7-10.

206. Ratho S.N., Pande K. Isolation of maintainers and restorers for three differentmale sterile lines. // Intern. Rice Res. Newslett., 1985, Vol.10, №6, p.9.

207. Ribaut J.M., Hoisington D. Marker-assisted selection: new tools and strategies. //Trends Plant Sci., 1998, Vol.3, p.236-239.

208. Roder M.S., Plaschke J., Konig S.U., Borner A., Sorrells M.E., Tanksley S.D.,

209. Ganal M.W. Abundance, variability and chromosomal location microsatellites in wheat. //MoL Gen. Genet., 1995, Vol.246, p.327-333.

210. Rus-Kortekaas V., Smulder M.J.M., Arens P., Vosman V. Direct comparisionof levels of genetic variation in tomato detected by a GACA- containing micro satellite probe and by random amplified polymorphic DNA. // Genome, 1994, Vol.37, p.375-381.

211. Saghai-Maroof M.A., Soliman K.M., Jorgensen R.A., Allard R.W. Ribosomal

212. DNA spacer-length polymorphism in barley: Mendelian inheritance, chromosomal location and population dynamics. // Proc. Natl. Acad. Sci., 1984, Vol.81, p.8014-8018.

213. Saliba-Colombani V., Causse M., Gervais L., Philouze J. Efficiency of RFLP, RAPD and AFLP markers for the construction of an intraspecific map of the tomato genome. Genome, 2000, Vol.43, p.29-40.

214. Sanchez de la Hoz M.P., Davila J.A., Loarce Y., Ferrer E. Simple sequencerepeat primers used in polymerase chain reaction amplifications to study genetic diversity in barley. // Genome, 1996, Vol.39, p. 112-117.

215. Sanchez-Escribano E.M., Martin J.P., Carreno J., Cenis J.L. Use of sequence-tagged microsatellite site markers for characterizing table grapecultivars. I I Genome, 1999, Vol.42, p.87-93.

216. Sanchez A.C., Brar D.S., Huang N., Li Z., Khush G.S. Sequence tagged sitemarker-assisted selection for three bacterial blight resistance genes in rice. // Crop Sci., 2000, Vol.40, p.792-797.

217. Sarria R., Lyznik A., Vallejos C.E., Mackenzie S.A. A cytoplasmic male sterility-associated mitochondrial peptide in common bean is post-translationally regulated. //Plant Cell., 1998, Vol.10, p. 1217-1228.

218. Sasaki M., Nishiyama K. Cytoplasmic male-fertility-restoring gene mutationin wheat // EWAC Neslett., 1974, №4, p.78-79.

219. Sax K. The association of size differences with seed-coat pattern and pigmentation in Phaseolus vulgaris. // Genetics, 1923, Vol.8, p.552-560.

220. Schnable P.S., Wise R.P. Recovery of heritable, transposon-induced, mutantalleles of the rf2 nuclear restorer of T-cytoplasm maize. // Genetics, 1994, Vol.136, p.l 171-1185.

221. Schnable P.S., Wise R.P. The molecular basis of cytoplasmic male sterilityand fertility restoration. // Trends in plant Sci., 1998, Vol.3, №5, p. 175-180.

222. Shi M.S. Preliminary report of breeding and utilization of late japonica naturaldouble purpose line. // J. Hubei Agric. Sci., 1981, Vol.7, p/1-3.

223. Shi M/S. The discovery and the study of the photosensitive recessive malesterile rice {Oryza sativa L. subsp. japonica). II Sci. Agric. Sin., 1985, Vol.2, p.44-48.

224. Shinjyo C. Distribution of male sterility inducing cytoplasm and fertility restoring genes in rice // Japan J. Genet., 1972, Vol.47, №4, p.237-243.

225. Shinjyo C, Omura T. Cytoplasmic-genetic male sterility in cultivated rice,

226. Oryza sativa L. I. Fertilities of Fl, F2 and offsprings obtained from their mutual reciprocal back-crosses and segregation of completely male sterile plants // Jap. J. Breed., 1966, Vol.16, p. 179-180.

227. Singh S., Vipen S. Normal regulation of stamen development and male sterility in tomato // Plant Physiol., 1993, Vol.102, №1, p.65.

228. Small I.D., Peeters N. The PPR motif a TPR-related motif prevalent in plantorganellar proteins. // Trends Biochem. Sci., 2000, Vol.25, p.46-47.

229. Smart C.J., Moneger F., Leaver C.J. Cell-specific regulation of gene expression in mitochondria during anther development in sunflower. // Plant Cell., 1994, Vol.6, p.811-825.

230. Soller M., Brody T. On the power of experimental designs for the detection oflinkagebetween marker loci and quantitative loci in crosses between inbred lines. // Theor. Appl. Genet., 1976, Vol.47, p.35-39.

231. Song M.T., Kim J.K., Choe Z.R. Effects of chemicals on inducing grain sterility of rice. // Korean J. Crop Sci., 1990, Vol.35, №4, p.309-314.

232. Song J., Hedgcoth C. Influence of nuclear background on transcription of achimeric gene (<orf256) and coxl in fertile and cytoplasmic male sterile wheats. // Genome, 1994, Vol.37, №2, p.203-209.

233. Tadege M., Kuhlemeier C. Aerobic fermentation during tobacco pollen development. // Plant Mol. Biol., 1997, Vol.35, №3, p.343-354.

234. Tanksley S.D., Ganal M.W., Martin G.B. Chromosome landing: a paradigmfor map-based gene cloning in plants with large genomes. // Trends Genet., 1995, Vol.1 l,p.63-68.

235. Tanksley S.D. Mapping polygenes. //Annu. Rev. Genet., 1993, Vol.27, p.205233.

236. Tanksley S.D., Ahn N., Causse M., Coffman W.R., Fulton Т., McCouch S.R.,

237. Second G., Tai Т., Wang Z.Y., Wu K.S., Yu. Z.H. RFLP mapping of the rice genome. In: Rice Genetics II. // IRRI, 1991, Manila, Philippines, p.435-442.

238. Tautz D. Hypervariability of simple sequence repeats as a general source forpolymorphic DNA. //Nuc. Ac. Res., 1989, Vol.17, p. 6463.

239. Temnykh S., DeClerck, Lukashova A., Lipovich L., Cartinhour S., McCouch

240. S.R. Computational and experimental analysis of microsatellites in rice (Oryza sativa L.). Frequency, length variation, transposon associations, and genetic marker potential. // Genome Res., 2001, Vol.11, p. 1441-1452

241. Timothy L.B., Gribskov M. Combining evidence using p-values: applicationto sequence homology searches. // Bioinformatics, 1998, Vol.14, p.48-54.

242. Tingey, S.V., Rafalski J.A., Villiams J.G.K. Genetic analysis with RAPDmarkers. In: Applications of RAPD technology to plant breeding: Selected papers from the Joint Plant Breeding Symposia Series. // Minneapolis, Minnesota, USA, 1992 November 1,.

243. Tinker N.A., Mather D.E. Methods for QTL analysis with progeny replicatedin multiple environments. // J. QTL, 1995a, (http://probe.nalusda.gov: 8000/otherdocs /jqtl/jqtl 1995-01).

244. Tinker N.A., Mather D.E. MQTL: software for simplified composite intervalmapping of QTL in multiple environments. // J. QTL, 1995b, (http://probe.nalusda.gov: 8000/otherdocs/jqtl/l995-02).

245. Van Damme J.M.M. Gynodioecy in Plantago lanceolata L. II. Inheritance ofthree male sterility types. //Heredity, 1983, Vol.50, p.253-273.

246. Van der Knapp E., Lippman Z.B., Tanksley S.D. Extremely elongated tomatofruit controlled by four quantitative trait loci with epistatic interactions. // Theor. Appl. Genet., 2002, Vol.104, p.241-247.

247. Vidakovic M. Genetics of fertility restoration in cytoplasmic male sterility ofthe C-type (cmsC) in maize (Zea mays L.). // Maydica, 1988, Vol.33, №1, p.51-64.

248. Virk A.S., Bran J.S., Mangot B.K. Cytoplasmic differentiation using nearisonuclear polycytoplasmic male sterile lines in pearl millet. // Euphytica, 1993, Vol.67, №1-2, p.127-134.

249. Virmani S.S., Siddiq E.A., Muralidharan K. Advances in hybrid rice technology. // Proc. 3rd Int.Symp. on Hybrid Rice, 1998,IRRI, p. 129.

250. Virmani S.S., Sun Z.X., Мои T.M., Jauhar АН A., Mao C.X. Two-line Hybridrice breeding manual. / Los Banos (Philippines), 2003, International Rice Research Institute.

251. Wang C., Tong Y. Study of sterile cytoplasm genetic influence in rice hybrids

252. Acta Agron. Sinica., 1990, Vol.16, №4, p.335-341.

253. Wang G. RFLP mapping of major and minor genes for blast resistance in adurably resistance rice cultivar. // PhD dissertation, 1992, IRRI, P.O. Box 933, Manila, Philippines.

254. Wang S., Basten C.J., Zeng Z.-B. Windows QTL Cartographer 2.5. / Department of Statistics, North Carolina State University, 2005, Raleigh, NC. (http://statgen.ncsu.edu/qtlcart/WQTLCart.htm).

255. Wang J., Jong S. Changing of anther microstructure in rice with fotoperiodsensitive genetic male sterility. // Acta Agron. Sinica, 1992, Vol.18, №2, p.132-136.

256. Ward S., Johnson A. Cytoplasmic male sterility in quinoa // Euphytica, 1992,1. Vol.66, №3, p.217-223.

257. Waugh R., Powell W. Using RAPD markers for crop improvement. // Trendsin biotechnology, 1992, Vol. 10, p. 186-192.

258. Weber J.L., May P.E. Abundant class of human DNA polymorhisms whichcan be typed using the polymerare chain reaction. // Am. J. Hum. Genet., 1989, Vol.44, p.388-396.

259. Weeden N.F., Swiecicki W.K., Timmerman G., Ambrose M. Guidelines forfuture mapping studies in Pisum. // Pisum Genet., 1993, Vol.25, p. 13-14.

260. Welsh J., Mc Clelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitraryprimers. //Nucl. Acids Res., 1990, Vol.19, p.303-306.

261. Wen L.Y., Chase C.D. Mitochondrial gene expression in developing male gametophytes of male-fertile and S male-sterile maize. Sex. // Plant Reprod., 1999, Vol.1 l,p.323-330.

262. Whitkus R., Doebley J., Lee M. Comparative genome mapping of sorghumand maize. // Genetics, 1992, Vol.132, p. 119-1130.

263. Williams J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.J., Rafalski J.A., Tingey S.V. DNApolymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucl. Acids Res., 1990, Vol.18, p.6531-6535.

264. Wise R.P., Bronson C.R., Schnable P.S., Horner H.T. The genetics, pathologyand molecular biology of T-cytoplasm male sterility in maize. // Adv. Agron., 1999a, Vol.65, p.79-131.

265. Wise R.P., Dill C.L., Schnable P.S. Mutator-induced mutations of the rfl micleafvfertility restorer of T-cytoplasm maize alter the accumulation of 1-urfl3 mitocftiondrial transcripts. // Genetics, 1996, Vol.143, p.1383-1394.

266. Wise R.P., Gobelman-Werner К., Pei D., Dill C.L., Schnable P.S. Mitochondrial transcript processing and restoration of male fertility in T-cytoplasm maize. // J. Hered., 1999b, Vol.90, №3, p.380-385.

267. Wolstenholme D.R., Fauron C.M.R. Mitochondrial genome organization, p.1.59, in: Advances in Cellular and Molecular Biology of Plants: The Molecular Biology of Plant Mitochondria. // Kluwer Academic Publishers, 1995, Boston, №3.

268. Yang J., Wang X., Zhao C., Xiang Т., Li L. Cloning and sequencing offragments associated with cytoplasm male sterility of rice. // Acta Genet. Sinica, 2002, Vol.29, p.808-813.

269. Yang R.C., Liu K.M., Lu H.R. The effect of the Gam-male-sterile cytoplasmof rice on Fi generation. // Sci. agric. sinica., 1992, Vol.3, p.1-5.

270. Yao F.Y., Xu C.G., Yu S.B., Li J.X., Gao Y.J., Li X.H., Zhang Q.F. Mappingand genetic analysis of two fertility restorer loci in the wild-abortive cytoplasmic male sterility system of rice (Oryza sativa L.). // Euphytica, 1997, Vol.98, p. 183-187.

271. Yin, X., Stam P., Dourleijn C.J., Kropff M.J., Schapendonk Ad H.C.M. Cropmodeling, QTL mapping, and their complementary role in plant beeding. // Agronomy J., 2003, Vol.95, p.90-98.

272. Young J., Virmani S.S. Inheritance of fertility restoration in a rice cross. //

273. Rice Genet. Newslett., 1984, Vol.l, p. 102-103.

274. Young N.D., Tanksley S.D. Restriction fragment length polymorphism mapsand the concept of graphical genotypes. // Theor. Appl. Genet., 1989, Vol.77, p.95-101.

275. Yu H.-G., Muszynski M.G., Dawe R.K. The maize homologue of the cellcycle checkpoint protein MAD2 reveals kinetochore substructure and contrasting mitotic and meiotic localization patterns. // J. Cell Biol., 1999, Vol.145, p.425-435.

276. Yu L., Ray J.D., O'Toole J.C., Nguyen H.T. Use of wax-petrolatum layers tosimulate compacted soil for screening rice (Oryza sativa L.) root penetration ability. // Crop Sci., 1995, Vol.35, p.684-687.

277. Zeng, Z-B. Precision mapping of quantitative trait loci. // Genetics, 1994, Vol.136, p.1457-1468.

278. Zhang G., Lu G., Huang N. Molecular analysis of introgressed chromosomalsegments in a set of near-isogenic lines of rice for fertility-restoring genes. // RGN, 1995, Vol.11, p. 147.

279. Zhang Q., Bharaj T.S., Virmani S.S., Huang H. Mapping of the Rf-3 nuclearfertility restoring gene for WA cytoplasmic male sterility in rice using RAPD and RFLP markers. // Theor. Appl. Genet., 1997, Vol.94, p.27-33.

280. Zhang Q., Huang N. Mapping and molecular marker-based genetic analysisfor efficient hybrid rice breeding, p.20. In: Virmani S.S., Siddiq E.A., Muralidharan K. Advances in hybrid rice technology. // Proc. 3rd Int.Symp. on Hybrid Rice, 1998, IRRI.

281. Zhang Q.Y., Liu Y.G., Zhang G.Q., Mei M.T. Molecular mapping of thefertility restorer gene Rf-4 for WA cytoplasmic male sterility in rice. // Acta Genet. Sinica, 2002, Vol.29, p. 1001-1004.

282. Zhang W., Shen Z. Genetic analyses of fertility restoration genes in some ricecultivars // Acta agron. Sinica, 1987, Vol.13, №2, p.97-101.

283. Zhu L.H., Chen Y., Xu Y.B., Xu J.C., Cai H.W., Ling Z.Z. Construction of amolecular map of rice and gene mapping using a double haploid population of a cross between Indica and Japonica varieties. // Rice Genet. Newslett., 1994, Vol.10, p.27-33.

284. Zhu Y., Yang D., Lu J., Zhang X., Fu В., Mei O. Genetic studying and usingof photoperiod-sensitive male sterile rice. // J. Wuhan Univ. Natur. Sci. Ed., 1992, №2, p.112-118.

285. Zhuang J.Y., Fan Y.Y., Wu J.L., Rao Z.M., Xia Y.W., Zheng K.L. Mappinggenes for rice CMS-WA fertility restoration. // Acta Genet. Sinica, 2001, Vol.28, №2, p. 129-134.

Информация о работе

Ахмадихах Асадоллах
кандидата биологических наук
Москва, 2006
ВАК 03.00.23

Диссертация

Молекулярное маркирование ЦМС и генов восстановления фертильности риса (Oryza sativa L.) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы