Молекулярно-генетический анализ полиморфизма рода Aegilops L.

Горюнова, Светлана Валерьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Молекулярно-генетический анализ полиморфизма рода Aegilops L.
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-генетический анализ полиморфизма рода Aegilops L."

На правах рукописи

ГОРЮНОВА СВЕТЛАНА ВАЛЕРЬЕВНА

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПОЛИМОРФИЗМА РОДА АЕвИОРЭ I.

03.00.15 -генетика

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2005 ___________-----

О^ЗАТЕЛЬНЫИ

ВРСПЛ54 - ныи

ЭКЗЕМПЛЯР^

Работа выполнена в лаборатории генетики растений Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН.

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ

доктор биологических наук, профессор доктор биологических наук, доцент

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ

доктор биологических наук кандидат биологических наук

Виталий Анатольевич Пухальский Елена Зауровна Кочиева

Сергей Александрович Гостимский Ольга Александровна Огаркова

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Защита состоится «_»

2004 г. в

на

заседании Диссертационного совета Д 002.214.01 в Институте общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН по адресу: 119991, ГСП-1, Москва, ул. Губкина, 3. Факс: (095) 132-8962.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН.

Автореферат разослан «_»

2004 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета Кандидат биологических наук

Галина Николаевна Полухина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. Aegilops L. - род однолетних злаков трибы Triticeae Dum. На основании данных цитогенетического анализа у видов эгилопса выделяют семь основных типов генома: D, S, С, N, U, М и Т. При этом виды рода обладают геномами различного уровня плоидности (ди-, тетра- и гексаплоидный). Для рода Aegilops характерен сетчатый тип эволюции и полиплоидные виды рода представляют собой типичные аллополиплоиды. При этом наблюдается способность к обмену генетическим материалом между родственными видами, что сопровождается повышенной внутривидовой изменчивостью и, в ряде случаев, отсутствием четких границ между видами.

Виды рода Aegilops являются ближайшими родичами культурной пшеницы (Т. durum Dest. и Т. aestivum L.), и составляют основную часть вторичного генофонда пшеницы (род Triticum L.), при этом виды эгилопса секции Sitopsis и вид Aegilops tauschii считаются донорами соответственно В и D геномов культурной пшеницы Этот факт обусловил повышенный интерес к изучению видов Aegilops. Изучению рода способствовала возможность достаточно легкого получения гибридов, а также малое число и большой размер хромосом. Благодаря этому, на данный момент род Aegilops является одним из наиболее исследованных в семействе злаков как морфологически, так и методами цитогенетики (Жуковский, 1928; Eig, 1929; Kimber and Feldman, 1987; Slageren 1994; Kihara, 1954; Chennaveeraiah, 1960; Badaeva et al., 2002, 2004) Однако, несмотря на постоянный и длительный интерес к роду Aegilops, до сих пор не существует однозначного взгляда на систематику и эволюцию данного рода. Что касается исследования рода Aegilops с применением новейших молекулярных методов, его нельзя считать хорошо изученным, поскольку до сих пор молекулярный анализ рода затрагивал лишь некоторые области генома или отдельные виды эгилопса. В то же время достаточная охарактеризованность рода с точки зрения морфологии и цитогенетики, а также специфический характер эволюции в данной группе делают род Aegilops идеальным модельным объектом для изучения молекулярной изменчивости при сетчатой эволюции.

Цель работы. Основной целью работы был комплексный молекулярный анализ меж- и внутривидового полиморфизма, сравнение уровней вариабельности генома у диплоидных и аллоплоидных видов рода, определение границ видов, а также исследование родства геномов всех 26 видов рода Aegilops, с применением различных молекулярных методов анализа генома и сравнение полученных данных с данными морфологических и цитогенетических исследований. Для достижения поставленных целей решались следующие задачи:

1. Используя методы молекулярного анализа, маркирующие как уникальные, так и повторяющиеся участки генома (AFLP, RAPD, ISSR) определить уровни внутри- и межвидовой вариабельности у представителей рода Aegilops.

2. На основе комплексного молекулярного маркирования генома установить филогенетические связи между видами рода Aegilops.

3. Охарактеризовать последовательности внутренних транскрибируемых спейсерных участков (ITS], ITS2) рибосомной ДНК и гена 5.8S рРНК у видов рода Aegilops. Исследовать нуклеотидный полиморфизм данных последовательностей.

4. С помощью метода домен-наиравленного маркирования (DDP-profiling) исследовать полиморфизм последовательностей семейства генов резистентности

(RGA) в геноме эгилопса.

5. Исследовать полиморфизм нуклесггидных последовательностей одного из семейств генов запасных белков семян, а именно - генов гамма-глиадинов, у диплоидных видов группы Triticum-Aegilops, имеющих различные типы геномов.

Научная новизна. Впервые с использованием различных систем молекулярного маркирования проведен комплексный анализ генома всех 26 видов рода Aegilops L., для которого характерна сетчатая эволюция. На основе данных анализа определены уровни внутри- и межвидового полиморфизма и показаны существенные различия по геномной вариабельности у видов рода, а также определено родство геномов видов эгилопса. Полученные данные сопоставлены с данными о морфологической и цитогенетической изменчивости видов Aegilops и существующими системами рода.

На примере исследованных видов Aegilops впервые выявлен внутривидовой полиморфизм по последовательности внутренних транскрибируемых спейсеров (ITS) рибосомного оперона и гена 5,8S рРНК у диплоидных видов трибы Triticeae, а также полиморфизм ITS участка внутри одного образца.

Впервые проанализирован полиморфизм нуклеотидных последовательностей семейства генов гамма-глиадинов у диплоидных видов группы Triticum-Aegilops, представляющих все основные типы геномов, что позволило уточнить структуру данного семейства генов и предложить возможную схему эволюции основных типов гамма-глиадинов в геноме видов исследуемой группы.

Практическая значимость. Полученные данные об уровнях геномного полиморфизма видов рода Aegilops представляет практический интерес, поскольку виды эгилопса являются ближайшими родичами культурной пшеницы и используются в селекции как доноры хозяйственно-ценных признаков. Особую практическую значимость в связи с этим имеют результаты, касающиеся изменчивости таких семейств генов, как гены устойчивости и гамма-глиадиновые гены запасных белков эндосперма. Подобранные методы и праймеры, позволяющие наиболее эффективно выявлять меж- и внутривидовой полиморфизм у видов группы Triticum-Aegilops, могут быть использованы при создании новых и маркировании существующих коллекций генбанков. Кроме того, данная работа положила начало молекулярному маркированию коллекции Aegilops ВНИИР им. Н.И. Вавилова (Санкт-Петербург).

Апробация результатов работы. Материалы диссертации были представлены на 3-м съезде ВОГиС (Москва, 2004), на съезде МОГиС (Москва, 2003), на VIII Молодежной конференции ботаников в Санкт-Петербурге (2004), на международной конференции Allergy Matters 2004 (Wageningen, The Netherlands), на семинаре лаборатории генетики растений ИОГен им. Н.И. Вавилова РАН, на семинаре кафедры высших растений МГУ, на лабораторных и межлабораторных семинарах Plant Research International (PRT), (Wageningen, The Netherlands, 2003), на семинаре The Coeliac Disease Consortium (Leiden, The Netherlands, 2003).

По материалам диссертации опубликованы 4 статьи и 5 тезисов.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов и их

обсуждения, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на_

стр., и включает_таблиц и_рисунков. Список использованной литературы

содержит_наименований.

КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы

Всего было отобрано 248 образцов всех 26 видов рода Aegilops. Большинство образцов получены из коллекции Всероссийского Научно-исследовательского Института Растениеводства (Санкт-Петербург) и были любезно предоставлены нам к.б.н. H.H. Чикидой. Кроме образцов Aegilops, в анализ также были включены представители рода Triticum, а также образцы рода Hordeum. При отборе образцов руководствовались их географической приуроченностью с тем, чтобы максимально охватить ареал вида и, тем самым, попытаться наиболее полно охарактеризовать генетическую вариабельность каждого анализируемого вида. Для анализа генома Aegilops были использованы современные системы молекулярного маркирования, такие как AFLP, RAPD, ISSR, анализ полиморфизма нуклеотидных последовательностей семейств генов, а также метод домен-направленного маркирования, которые позволяют анализировать различные области генома.

Основные результаты исследований

Молекулярный анализ изменчивости и филогенетических связей группы близкородственных видов Aegilops, объединенных наличием D-генома. Для

RAPD-анализа были использованы 74 образца ДНК 6 видов эгилопсов с D геномом: Ае. tauschu (D), Ае. crassa (геном DX и DXD), Ае juvenalis (геном DXU), Ае vavilovii (DXS), Ае ventricosa (DN), Ае cylindrica (CD). Кроме того, для сравнения в анализ были взяты представители других видов эгилопсов Результаты проведенного RAPD-маркирования (получено 197 полиморфных фрагментов) показали, что наиболее полиморфным в данной группе является родительский диплоидный вид Ае tauschii. Для Ае tauschii выявлено также заметное разнообразие по характеру С-бэндинга (Badaeva et al., 2002). В то же время полиморфизм по морфологическим признакам внутри вида относительно невысок (Kimber and Feldman, 1987). Высокий уровень геномного разнообразия Ае tauschii, вероятно, отражает древнее происхождение этого вида, а также обширность его ареала и разнообразие условий произрастания. Уровень различий между образцами внутри аллополиплоидных видов Ае ventricosa, Ае cylindrica, Ае. crassa, Ае. vavilovii и Ае juvenalis был заметно меньшим. RAPD-анализ внутривидовых различий у родительских диплоидных и дочерних аллополиплоидных видов (483 полиморфных фрагмента) показал, что уровень различий между образцами вида Ае. ventricosa (геном DN) практически идентичен уровню различий между образцами одного из родительских видов - Ае uniaristata (геном N) и существенно меньше соответствующего показателя у вида Ае tauschii (D). В то же время уровень выявленных различий между образцами вида Ае cylindrica (CD) ощутимо меньше уровня различий между образцами обоих родительских видов: Ае. tauschii (D) и Ае. caudata (С).

Проведенный анализ филогенетических связей видов эгилопса с D геномом (788 полиморфных фрагментов) показал, что аллополиплоидные виды Ае ventricosa (DN), Ае. crassa (DX и DXD), Ае juvenalis (DXU), Ае vavilovii (DXS) образуют вместе с родительским диплоидным видом Ае. tauschii (D) отдельный полиморфный кластер, заметно обособленный от кластеров прочих видов (рис.1). Внутри данного кластера виды группируются в соответствии с типами геномов. Подкластер родительского диплоидного вида Ае. tauschii (геном D) близок к подкластеру дочернего аллотетраплоидного вида Ае. ventricosa (геном DN). Виды, имеющие в составе своих геномов D и X геном (Ае crassa (геномы DX и DXD), Ае juvenalis (геном DXU), Ае.

vavilovii (геном DXS)), образуют отдельный подкластер, при этом виды обособлены друг от друга, а тетраплоидные и гексаплоидные образцы Ае crassa образуют единую смешанную группу. Уровень различий между видами данного подкластера (Ае crassa, Ае juvenalis, Ае vavilovii) относительно невысок и вполне сопоставим с уровнем различий между отдельными представителями вида Ае tauschii, что говорит о сходстве геномов этих видов и в пользу возможной общности происхождения Это согласуется с тем что виды Ае crassa, Ае juvenalis Ае vavilovii также очень сходны морфологически (Kimber and Feldman, 1987), а также с представлениями о том, что тетраплоидная форма Ае crassa является предковой для гексаплоидных видов Ае juvenalis и Ае vavilovii и для гексаплоидной формы Ае. crassa (Badaeva et al., 2002; Zhang and Dvorak, 1992; Dubcovsky and Dvorak, 1995).

DX, DXD

DXU DXS

С CD

lau 840

tin II

^ lau 111 m vent

г !

jift

luv 66 vavil

mil 41 1ШГ can 411 com 412 htto 16 beldr 4П beldT IS

£ vaud

iP"

0,00

0,05

0,10

0,15

0,20

0,25

Генетические расстояния

Рис. 1. Дендрограмма генетических различий и филогенетических связей диплоидных видов рода Aegilops и аллоплоидных видов, имеющих в составе своего генома D геном

В отличие от остальных аллополиплолидов с D геномом, вид Ае cylindrica (CD геном) кластеризуется не с Ае tauschii (геном D), а с другим родительским видом Ае. caudata (геном С). При этом кластер видов Ае. cylindrica и Ае caudata значительно входит в более крупный кластер вместе с видами Ае umbellulata (геном U), Ае ovata (геном UM). Таким образом, геном CD Ае cylindrica имеет больше общего с С геномом вида Ае. caudata, чем с D геномом Ае tauschii, что также согласуется с данными анализа конъюгации хромосом в мейозе у гибридов, на основании которых виды Ае cylindrica и Ае. caudata выделяют в секцию Cylindropyrum, в то время как все прочие виды с D геномом относят к секции Vertebrata (Kihara, 1954).

Помимо анализа случайных последовательностей генома группы видов эгилопса с D-геномом, впервые был исследован полиморфизм такой адаптавно-значимой области генома, как семейство NBS-LRR-генов резистентности. Для характеристики разнообразия указанного семейства генов был использован метод RGA-маркирования (RGA-profiling), который представляет собой одну из модификаций метода домен-направленного маркирования (Van der Linden et al, 2004). Всего в анализ было включено 68 образцов ДНК видов рода Aegilops с D геномом и

родительских диплоидных видов и было получено 397 полиморфных ШЗА-фрагментов (рис. 2). Уровни внутривидового полиморфизма Подпоследовательностей у проанализированных видов заметно различались. Высоко полиморфные по данным ЯАРП-анализа диплоидные виды Ае шгаскН (Б) и Ае саш1а1а (С) характеризовались и довольно высокой вариабельностью Подпоследовательностей. Для вида же Ае итатмга, являвшегося мало полиморфным по данным ЯАРВ-анализа, при ЯСА-маркировании был также показан довольно низкий уровень внутривидовых различий. Что касается полиплоидных видов с О геномом, то по данным 1ЮА-маркирования для видов Ае су1Шпса, Ае ]тепаИз, Ае утИоуи был отмечен весьма низкий уровень внутривидовой вариабельности, в то же время виды Ае \entricosa и Ае сгазза характеризовались достаточно высоким уровнем внутривидового полиморфизма. По данным же КАРБ-анализа все они были низко полиморфными. гГТ?*"*

Рис 2. 1ША-спектры образцов полиплоидных видов с О геномом- Ае ущпсояа (геном ОМ), Ае су!тс!г1са (СО), Ае сгазза (ОХ ОХО), Ае ¿иуепаШ (ОХЩ Ае утИоуп (ОХв) и родительских диплоидных видов Ае ШшсИи (Б), Ае сашкЯа (С), Ае шгагШсаа (К).

I_II_I

!|1!Ш!Ш1!Ш!ШНШ11

_11-II_I

со

ОХ, 0X0, БХ8, охи ПК

Рис. 3. Дендрограмма генетических отличий представителей видов эгилопса с И геномом и диплоидных родительских видов Ае итап.Маю и Ае саис!саа, построенная методом ИРОМА, на основании данных ШЗА-маркирования

Данные RGA-анализа были также использованы для определения филогении последовательностей NBS-LRR семейства генов резистентности и их аналогов у видов эгилопса с D геномом. На построенной дендрограмме большинство образцов составляет видоспецифичные кластеры (рис. 3) Исключением в этом отношении является вид Ае crassa, некоторые представители которого оказались близки к кластерам родственных видов Ае juvenalis и Ае vavilovii, в то время как другие вошли в состав обособленных подкластеров. Кроме того, один образец вида Ае vavilovii (vavil41, и-571177) имел совершенно особый спектр RGA-последовательностей и представлял собой обособленную кладу в составе кластера видов Ае crassa, Ае. juvenalis и Ае vavilovii Таким образом, указанный кластер не был разделен на три подкластера, соответствующих каждому из трех видов, а имел более сложную организацию. Эти данные несколько расходятся с данными RAPD анализа, согласно которым образцы всех трех видов Ае crassa, Ае. juvenalis и Ае vavilovii входят в состав трех обособленных групп. В остальном, результаты RGA-анализа оказались схожими с данными RAPD анализа и на дендрограммах виды группировались сходным образом. Некоторые отличия данных RGA- и RAPD-маркирования, по всей видимости, отражают специфику эволюции семейства генов резистентности.

Анализ внутривидовой изменчивости и филогенетических связей видов Aegilops, содержащих U геном. Для молекулярного анализа группы видов эгилопса с U геномом были отобраны 114 образцов 8 полиплоидных видов, имеющие в составе своего аллоплоидного генома геном U - Ае triuncialis (геном UC), Ае columnaris (геном UX), Ае. biuncialis (UM), Ае ovata (UMj, Ае triaristata (UX), Ае. recta (UXN), Ае. kotschyi (US), Ае variabilis (US) и диплоидного вида Ае. umbellulata (U), который является донором U генома для данных видов.

Уровни выявляемого с помощью RAPD-маркирования (236 полиморфных фрагментов) внутривидового геномного полиморфизма у аллополиплоидных видов с U геномом различались. В отличие от полиплоидов D - геномной группы, большинство полиплоидных видов с U геномом характеризовалось значительным уровнем внутривидового полиморфизма. Так, виды Ае biuncialis, Ае columnaris, Ае. ovata, Ае. kotschyi, Ае. variabilis, Ае. triaristata и Ае recta по данным RAPD-анализа являются высоко полиморфными. Для видов Ае recta, Ае kotschyi, Ае variabilis, Ае. ovata и Ае triuncialis были выявлены образцы, значительно отличающиеся от прочих, что может являться следствием возможного гибридного происхождения данных образцов.

Интересные результаты были получены для пары видов Ае triaristata - Ае recta. Геномы этих двух видов различной плоидности по результатам RAPD анализа оказались весьма близкими, и, несмотря на присутствие в геноме Ае recta дополнительного генома N, не было выявлено строгих различий между геномами Ае triaristata (UX) и Ае. recta (UXN). Ае. triaristata и Ае. recta также очень сходны морфологически, и многими исследователями не рассматриваются как два самостоятельных вида (Eig 1929; Kihara 1954; Slageren, 1994; Witcombe 1983; Hammer, 1980). При этом тетраплоидный вид Ае triaristata (геном UX) считается предковой формой для гексаплоидного Ае recta (UXN) (Kimber and Feldman, 1987). Исходя из полученных результатов, можно предположить множественное независимое происхождение гексаплоидного вида Ае recta от различных значительно дивергировавших популяций предкового тетраплоидного вида Ае triaristata, либо же наличие гибридизации и обмена генетическим материалом между двумя этими видами.

Единственным исключением среди высоко полиморфных полиплоидных видов с U геномом можно считать Ае triuncialis (геном UC), который по данным проведенного RAPD-анализа имеет крайне низкий уровень внутривидовых различий а также является малополиморфным по данным дифференциального окрашивания хромосом и FISH (Бадаева, 2004). Этот результат кажется весьма интересным, учитывая ряд следующих фактов: Ае triuncialis обладает крайне широким спектром изменчивости по целому ряду морфологических признаков и большой экологической пластичностью, а ареал данного вида можно считать самым обширным среди видов рода - он охватывает значительную часть ареала рода и, кроме этого, был занесен и распространился в США (Kimber and Feldman, 1987). Помимо этого, Ае. triuncialis является единственным видом в группе Triticum-Aegilops, чьё множественное происхождение от независимых скрещиваний родительских диплоидов не вызывает сомнений и было установлено исходя из результатов анализа как цитоплазматического, так и ядерного геномов (Murai and Tsunewaki 1986; Vanichanon et al., 2003).

0 225 02 О 175 015 0125 01 0 075 0 05 0 025 0

и UM их, UXN UC US

пГ 1 1 imÎ -- h гЦ 1 пШп

Я РЕтОООсесЗЗЭЭЭссссс S и с о

** §§J5 эззроо-Б-Ь з з g а> га э —

К S S S о о и В В В "

LUI_II_II-II-1

Рис. 4. Дендрограмма межвидовых генетических различий диплоидных видов рода Aegilops и аллоплоидиых видов, имеющих в составе своего генома U геном.

При RAPD-анализе межвидового полиморфизма видов Aegilops с U геномом (1265 полиморфных фрагментов) было показано, что все образцы, относящиеся к одному виду, кластеризуются вместе (рис 4) Все образцы диплоидного вида Ае umbellulata и полиплоидных видов Ае triuncialis, Ае kotschyi, Ае variabilis, Ае ovata, Ае. biuncialis, Ае. triaristata, Ае recta и Ае. columnaris объединяются в обособленный полиморфный кластер, что вполне согласуется с морфологическими и цитогенетическими данными. Все эти виды объединяются наличием слабоизмененного U генома (Kihara, 1954) и, согласно гипотезе Д. Зохари и М. Фельдмана (Zohary and Feldman, 1962), составляют самую большую из трех естественных групп в комплексе Triticum-Aegilops. Виды этой группы

морфологически близки к донору «осевого» генома группы - виду Ае umbellulata и вместе с ним составляют секцию Polyeides (Kihara, 1954). Данный кластер, в свою очередь, разделяется на три основных подкластера в соответствии с типами геномов входящих в него видов Наиболее близкими видами по результатам RAPD анализа оказываются гексаплоидный вид Ае recta (геном UXN) и морфологически очень близкий предковый тетраплоид Ае triaristata (UX), различие между ними оказывается меньше, чем между видами Ае triaristata и Ае. columnaris, которые имеют одинаковый уровень плоидности и одинаковый тип генома - UX. Стоит отметить также, что по данным RAPD-анализа полиплоиды с геномной формулой на основе UX (Ае. columnaris, Ае recta и Ае triaristata) сильно отличаются от видов с UM геномом (Ае ovata и Ае biuncialis), хотя изначально для всех этих видов предполагался одинаковый тип генома (Kihara, 1954) Выявленное при использовании RAPD анализа сходство между UX и UC геномами может свидетельствовать о возможном участии С или близкого ему генома в формировании генома X.

Наиболее обособленными в пределах U-кластера в нашем исследовании оказались виды, обладающие US геномом - Ае kotschyi и Ае variabilis Данные виды несколько отличны от прочих видов с U геномом и по морфологии, на основании чего были выделены А. Эйгом в отдельную подсекцию Adhaerens, в то время как прочие виды с U геномом вошли в состав другой подсекции- Libera (Eig, 1929).

Единственным полиплоидом с U геномом, который не группировался вместе с остальными видами U группы, является вид Ае juvenalis, образующий обособленный подкластер вместе с предковым диплоидным видом Ае tauschii (D геном). Сходство Ае juvenalis с Ае. tauschii и другими D-геномными видами обсуждалось выше.

В отдельную задачу был выделен анализ внутривидовой изменчивости и межвидовых различий двух близкородственных аллотетраплоидных видов Ае. kotschyi и Ае variabilis. Проведенный анализ ITS последовательности рибосомного оперона не выявил значительных отличий между 26 проанализированными образцами видов Ае kotschyi и Ае. variabilis. Однако маркирование случайных последовательностей RAPD-, AFLP- и ISSR-методами выявило значительный внутривидовой геномный полиморфизм исследуемых видов. При этом применение методов RAPD и ISSR показало несколько меньший уровень внутривидовой вариабельности Ае kotschyi по сравнению с Ае. variabilis. Интересно, что Ае. variabilis является более полиморфным и по морфологическим данным (Eig, 1929; Kimber and Feldman, 1987), а также по данным RFLP-анализа повторяющихся последовательностей (Zang et al., 1992). Полученные данные показали относительно небольшой уровень межвидовых различий, а также выявили значительное количество уклоняющихся образцов, причем видовая принадлежность некоторых из них не очевидна и зависит от выбранного критерия (морфологический, цитогенетический, различные молекулярные методы).

Проведенный RGA-анализ 67 представителей рода Aegilops с U геномом (получено 424 полиморфных фрагмента) показал высокий уровень внутривидового полиморфизма последовательностей семейства генов резистентности у видов группы. На полученной RGA-дендрограмме (рис. 5) большинство образцов входят в состав видоспецифичных кластеров. Представители некоторых близких видов, таких как Ае kotschyi и Ае variabilis, образуют смешанные кластеры. Кроме того, для большинства видов были выявлены отдельные образцы, которые отличались от остальных представителей своего вида по представленности в их геноме RGA-последовательностей и образовывали отдельные ветви в составе кластеров близких

видов. Некоторые образцы оказались еще более обособленными. Так, например, образец Ьшпс904 (р1487282) вида Ае. ЫшпаШ имеет спектр 1ША-фрагментов сильно отличающийся от спектров всех других включенных в анализ образцов, и на дендрограмме выходит за пределы всего и-геномного кластера. По всей видимости, данные факты могут быть связаны с наличием гибридизации в исследуемой группе, которая происходит не только между видами с одним типом генома, но и между более удаленными. Кроме того, было показано, что филогения семейства генов устойчивости в и группе видов эгилопса несколько отличается от филогении адаптивно нейтральных уникальных и низкокопийных последовательностей, что, вероятно, объясняется специфической адаптивной направленностью эволюции генов резистентности.

их, UXN им их и uc US

Рис. 5 Дендрограмма, построенная по результатам кластерного анализа данных RGA-маркирования видов эгилопса с U геномом.

Молекулярный анализ полиморфизма и филогенетических отношений диплоидных видов эгилопса, обладающих S геномом. Для RAPD-анализа были взяты образцы ДНК 21 представителя всех 6 диплоидных видов Aegilops, имеющих S геном: Ае. speltoides, Ае. auscheri, Ае. searsii, Ае. bicornis, Ае. sharonensis и Ае. longissima. В результате проведенного маркирования было получено 246 полиморфных RAPD-фрагментов. Выявленные максимальные уровни различий между образцами внутри видов Ае bicornis, Ае. longissima, Ае sharonensis, Ае searsii были примерно одинаковы и равны уровню различий между кластерами видов Ае speltoides и Ае. auscheri, которые большинством исследователей объединяются в один вид - Ае. speltoides (Kihara 1954; Hammer, 1980; Chennaveeraiah, 1960; Slageren, 1994).

Различия между кластерами образцов Ае longissima и образцов Ае sharonensis, которые часто также считают подвидами одного вида - Ае longissima (Hammer, 1980; Chennaveeraiah, I960), соответствовали скорее межвидовому уровто. Таким образом, согласно данным проведенного молекулярного анализа виды Ае longissima и Ае sharonensis, вероятно, стоит рассматривать как самостоятельные, а Ае speltoides и Ае auscheri, скорее, объединять в один вид - Ае speltoides. Полученные результаты согласуются с большинством морфологических и цитогенетических данных (Kimber and Feldman, 1987; Friebe et al., 1993; Friebe and Gill 1996).

Subsection Truncata

Subsection Emarginata

SPELT406 -SPELT407 -SPELT408-AUSCH21 -AUSCH23 -Г BICOR1 -BICOR2 -BICOR3 -BICOR800 -BICOR202 -LONG14 -LONG15-LONG201 -L0NG808 -SHAR10-SHAR11 -SHAR12-SHAR13-SEAR5-SEAR7-, SEAR6 -

0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0 35 0,40

Рис 6 Дендрограмма генетических различий образцов диплоидных видов эгилопса с S геномом, построенная по результатам RAPD-маркирования методом UPGMA

На дендрограмме, построенной по результатам RAPD анализа (рис. 6), максимально обособленным является кластер образцов Ае. speltoides и Ае auscheri, что вполне согласуется с представлениями о наиболее древнем происхождении вида Ае speltoides s.l. и об его морфологической обособленности oí прочих видов секции. Следует отметить, что вид Ае speltoides s.l на основании морфологических данных был выделен А Эйгом (Eig, 1929) в отдельную подсекцию Truncata. Виды Ае searsii, Ае. bicornis, Ае sharonensis и Ае longissima формируют второй полиморфный кластер Образцы каждого из видов образуют видоспецифичные подкластеры. Наиболее обособлен подкластер вида Ае bicornis, наиболее близкими являются подкластеры образцов Ае. longissima и Ае. sharonensis.

Таким образом, при RAPD маркировании геномов видов эгилопса с S геномом было установлено, что все виды, обладающие данным типом генома, имеют приблизительно равные уровни внутривидовой вариабельности. При этом различия между кластерами Ае speltoides и Ае auscheri не превышали различий между образцами одного вида, а различия между кластерами образцов Ае longissima и Ае sharonensis были заметно выше, чем внутривидовые. Также было показано, что вид Ае speltoides является наиболее обособленным среди видов с S геномом

Анализ внутривидового полиморфизма диплоидных видов Ае. caudata, Ае. uniaristata, Ае. contosa, Ае. heldreichii и Ае. mutica методом RAPD. Проведенный анализ показал, что диплоидные виды рода значительно различаю 1ся по уровням внутривидового полиморфизма. Так, вид Ае. caudata является высоко полиморфным, вид Ае uniaristata имеет существенно меньший уровень внутривидовых различий. Для видов Ае comosa и Ае heldreichii, которые считаются наиболее близкими к виду Ае uniaristata, был выявлен очень высокий уровень внутривидовых отличий.

Меньший полиморфизм вида Ае. uniaristata, по сравнению с видами Ае. comosa и Ае. heldreichii, вероятно можно связать с тем, что Ае. uniaristata, по-видимому, является дочерним видом Ае. heldreichii. Стоит отметить, что на дендрограмме образцы Ае. comosa и Ае. heldreichii образуют смешанную группу. Этот результат, в принципе, согласуется с точкой зрения некоторых исследователей, которые не выделяют Ае. comosa и Ае. heldreichii в качестве самостоятельных видов (Eig, 1929; Slageren, 1994). Для вида Ае mutica также был показан высокий уровень внутривидовой изменчивости. Интересно, что вид Ае uniaristata, низко полиморфный по данным RAPD анализа, характеризуется также малой морфологической изменчивостью, в то время как виды Ае comosa, Ае heldreichii и Ае. mutica, высоко полиморфные по данным RAPD анализа, являются также очень полиморфными и по морфологическим признакам. Однако, вид Ае. caudata, для которого также был выявлен значительный внутривидовой полиморфизм по данным молекулярного маркирования, тем не менее, по морфологическим данным не очень изменчив. При этом не было показано зависимости между ареалом и уровнем изменчивости генома видов. Так, наиболее обширным ареалом из анализируемых диплоидных видов обладает Ае. caudata, для которого был показан высокий уровень внутривидовых различий, однако такие высокополиморфные виды, как Ае. comosa, Ае. heldreichii и Ае. mutica имеют заметно меньшие ареалы. В то же время, были выявлены существенные различия в уровнях полиморфизма для Ае. comosa, Ае heldreichii и Ае. mutica с одной стороны и Ае uniaristata, хотя все они имеют довольно небольшие ареалы.

Молекулярный анализ полиморфизма генома и филогенетических связей видов рода Aegilops.

Анализ полиморфизма и филогенетических отношений видов эгилопса с использованием AFLP. Для анализа полиморфизма генома рода Aegilops, а также для определения филогенетических отношений между видами рода был использован AFLP-метод, который позволяет маркировать обширную, преимущественно селективно нейтральную часть генома, представленную, главным образом, уникальными и умеренно повторяющимися последовательностями. В анализ были взяты образцы ДНК 63 представителей всех 26 видов рода Aegilops, а также образцы ДНК трех различных видов пшеницы (Т. топососсит, Т. durum, Т aestivum) и один образец ячменя. Образцы для AFLP анализа были отобраны на основании данных о внутривидовой изменчивости, полученных RAPD методом.

В результате проведенного AFLP анализа было выявлено 2144 полиморфных AFLP фрагмента и каждый вид и образец был охарактеризован специфичным спектром AFLP фрагментов (рис. 7).

Проведенный кластерный анализ (Ней-Ли, UPGMA, с последующим бутстрепированием) показал что образцы видов группы Triticum-Aegilops формируют четыре основных кластера (рис. 8), хорошо поддерживаемых бутстрепом (76-100%). Наиболее обособлен кластер (А), в который входят образцы различных видов пшеницы. Три оставшихся кластера сформированы представителями разных видов Aegilops. Первый из этих кластеров (S) включает в себя образцы видов секции Sitopsis. Во второй кластер входят два хорошо обособленных подкластера, первый из которых (D) включает в себя диплоидный вид Ае. tauschii, обладающий D геномом и дочерние аллополиплоидные виды Ае ventricosa (DN), Ае. crassa (DXD), Ае juvenalis (DXU) и Ае vavilovii (DXS). Второй подкластер (С) этого кластера включает в себя два вида, объединенных наличием С генома - диплоид Ае caudata и дочерний аллотетраплоид Ае. cylindrica (CD). Стоит отметить что, также как и по данным

; „ I ... | .-л-

л л

,8ч -8-4 1 1

! ' I ! 1 ' > !

I [ и 111111 и и П IН 11 И И И И ! П 1111! П 5 Ч 11 И П П 1 И 1 И И П П 11 и 3 Ч

Л_1Ы1_11_

с Т М и N

Рис. 8. Дендрсп-рамма построенная по результатам АРЬР-анализа видов рода Ае%Иор.ч и представителей рода ТгШсит. (Числа в точках ветвления показывают индекс бутстрепа.)

RAPD анализа, вид Ае. cylindrica, имея в составе своего генома D геном, обособлен от других полиплоидов с D геномом и более сходен с донором С генома - видом А е. caudata. На построенной по AFLP-данным дендрограмме объединение подкластера видов Ае caudata (С) и Ае cylindrica (CD) в один кластер с видами D группы обусловлено присутствием в геноме Ае. cylindrica D генома. При исключении же данного вида из кластерного анализа, Ае caudata входит в состав группы видов с U геномом, хотя и остается более дистанцированным от U генома, чем виды с М и N геномами. Таким образом, полученные данные свидетельствуют не только о большем родстве С генома с геномами М, N и U, чем с геномом D или S, но и о достаточных отличиях С генома от всех прочих, в том числе и от TJ генома. Этот результат интересен также в связи с тем, что в ранних исследованиях предполагалось значительное сходство между С и U геномами по цитогенетическим данным. Так, два этих генома в работе X. Кихары (Kihara, 1954) были обозначены одним символом - С.

Третий, наиболее крупный из всех, кластер состоит из двух главных подкластеров. В первый из них входят образцы диплоидных видов Ае. mutica (Т геном), Ае uniarislata (N геном), Ае comosa и Ае. heldreichu (М геном), причем наиболее обособленным является вид Ае mutica. Образцы вида Ае. uniaristata формируют отдельный подкластер, в то время как Ае comosa и Ае heldreichii, как и в случае RAPD-анализа, не обособленны друг от друга и входят в состав одного полиморфного подкластера. Также результаты AFLP-маркирования показали значительное сходство между видом Ае uniaristata (N геном) и видами Ае comosa и Ае heldreichii (М геном); различие между группой образцов Ае comosa и Ае heldreichii и образцами вида Ае uniaristata сопоставимо с различиями между некоторыми диплоидными видами с S геномом, или между полиплоидными видами с U геномом Сходство геномов Ае comosa и Ае. uniaristata было также показано на основании данных RFLP анализа повторяющихся ДНК последовательностей (Dvorak and Zhang, 1992), а на основании морфологических признаков они были отнесены к одной секции такими исследователями, как П.М. Жуковский и А Эйг (Жуковский, 1928; Eig, 1929). Второй подкластер образуют диплоидный вид Ае umbellulata и родственные ему полиплоиды - Ае columnaris, Ае biuncialis, Ае ovata, Ае triaristata, Ае recta, Ае triuncialis, Ае Icotschyi, Ае variabilis. В пределах этого кластера наиболее обособленным является кластер видов Ае kotschyi-Ae. variabilis, обладающих US геномом Еще одну обособленную кладу образуют представители вида Ае triuncialis (UC геном), который также несколько обособлен от прочих видов морфологически Последнее обусловило выделение данного вида П. М. Жуковским в отдельную секцию (1928). Прочие же виды группы - Ае umbellulata, Ае. columnaris, Ае biuncialis, Ае. ovata, Ае. triaristata, Ае recta кластеризуются совместно.

Таким образом, впервые был проведен AFLP-анализ всех видов рода Aegilops и по результатам маркирования было выделено несколько групп, каждая из которых включает в себя либо несколько видов с родственными диплоидными геномами, либо диплоидный и родственные ему полиплоидные виды. Также было выявлено заметное различие между С и U геномами.

Использование RAPT) системы молекулярного маркирования для определения филогении видов рода Aegilops. Дендрограмма, построенная по данным RAPD-анализа (было получено 1114 полиморфных фра1 ментов) в значительной степени схожа с AFLP-дендрограммой, и основные группы, на которые разделяются виды Aegilops остаются неизменными. Однако наблюдаются и некоторые различия. Так, стоит отметить, что по результатам RAPD-маркирования вид Ае mutica группируется не с U,

||IlÍÍIIIItIIIII?ffpiifpifl1Pifiiiii|f|jlfíilff¡f!!|l¡|S«? _II_JUUI_IUI_I

NT м с

Рис. 9. Дендрограмма, построенная по результатам кластерного анализ а данных 1ЮА- маркирования видов рода Лegilops

Табл.1. Внутривидовые генетические расстояния (р = и, где .1 - коэффициент Жаккарда), рассчитанные на основании данных АП,Р- и 1ША-анализа.

Вид AFLP RGA

Ав. speltoides 0,02-0,035 0,02-0,04

Ae.auschen 0,03 0,026

Ае longissima 0,015-0,023 0,02-0,033

Ае sbaronensis 0,007-0,014 0,007-0,026

Ае. bicorms 0,004-0,018 0,007-0,015

Ав searsu 0,009-0,011 0,013-0,032

Ав. tauschu 0,007-0,045 0,008-0,053

Ае ventncosa 0,011 0,021

Ае. crassa 0,012 0,04

Ае. vavilovu 0,002 0,002

Ае. juvenahs 0,008 0,011

Ав cylindnca 0,009 0,027

Ае caudata 0,014 0,015

Ае mutica 0,039 0,058

Ав heldreichii 0,03-0,036 0,08

Ае umanstata 0,024 0,063

Ав umbellulata 0,012 0,021

Ае. kotschyi 0,018 0,047

Ав. variabihs 0,037 0,068

Ав triuncialis 0,009 0,012

Ав. biuncialis 0,026-0,031 0,024-0,032

Ав ovata 0,011 0,009

Ав columnans 0,018-0,052 0,011-0,058

Ае. tnanstata 0,029 0,038

Ав recta 0,01-0,018 0,013-0,021

М и N-геномными видами, как при AFLP-анализе, а образует хорошо поддерживаемый бутетрепом (100%) кластер вместе с видами D группы. По всей видимости, геном Ае mutica стоит считать отличным от геномов прочих видов рода. Ае muíica обособлен от прочих видов эгилопса также и на основании морфологических признаков, и относится систематиками к отдельной монотипной секции или даже отдельному род} Amblyopyrum (Жуковский, 1928; Eig, 1929; Slageren, 1994). Однако в нашем исследовании не было получено данных о значительной обособленное^ Ае mutica от других видов рода Aegilops. Таким образом, по молекулярным данным Ае mutica вряд ли заслуживает выделения в обособленный род Amblyopyrum.

Анализ полиморфизма и филогении NBS-LRR семейства генов резистентности у видов рода Aegilops методом RGA-маркирования. Для исследования полиморфизма и филогении последовательностей семейства NBS-LRR генов резистентности у видов рода Aegilops были использованы те же образцы, что и при AFLP- анализе генома рода Aegilops. Это позволило сопоставить генетические расстояния, полученные при RGA- и AFLP-анализе и было показано, что полиморфизм последовательностей семейства генов устойчивости несколько выше по сравнению с нейтральными последовательностями, охарактеризованными с помощью метода AFLP (табл. 1). Всего при анализе было получено 576 полиморфных RGA-маркеров.

Что касается филогении последовательностей семейства генов резистентности, то в целом, она была сходна с таковой, построенной по результатам AFLP-маркирования (рис. 9). Наиболее принципиальными отличиями являются гораздо большая обособленность N-геномного вида Ае uniaristata отАе heldreichii (М геном) и Ае comosa (М), в то время как вид Ае mutica (Т геном) оказывается, наоборот более сходным с М-геномными видами. Кроме того, кластер видов с С-геномом (Ае caudata и Ае cylindrica) при RGA-анализе, также как и при RAPD маркировании, оказался более близким к кластеру видов с U геномом, в то время как при AFLP- анализе, виды с С геномом были более удалены от U-геномного кластера, чем виды Ае uniaristata, Ае heldreichii, Ае comosa и Ае mutica. Также наблюдались некоторые отлитая в кластеризации видов с U геномом и с S геномом.

В результате проведенного молекулярного маркирования геномов видов рода Aegilops было показано значительное сходство дендрограмм, построешгых по результатам AFLP- и RAPD- и RGA- анализа. Также был выявлен несколько больший полиморфизм последовательностей семейства генов устойчивости по сравнению с селективно-нейтральными последовательностями генома.

Анализ полиморфизма внутренних транскрибируемых спейсеров рибосомной ДНК у диплоидных видов Aegilops, имеющих различные типы генома. Исследование внутривидового полиморфизма и межвидовых различий последовательностей внутренних транскрибируемых спейсеров рибосомной ДНК у видов рода Aegilops было проведено на 22 образцах 5 диплоидных видов эгилопсов с различными типами геномов' Ае caudata (С шюм), Ае uniaristata (N геном), Ае heldreichii (геном М), Ае mutica (Т геном) и Ае tauschii (D геном). Были определены нуклеотидные последовательности фрагмента ITS рДНК, включающего ITS1 и ген 5 8S рРНК, а также частичную последовательность ITS2 отобранных для анализа образцов. Нуклеотидные последовательности были депонированы в базе данных GenBank. Общая длина выравнивания ITS составила 524 п н. При этом наблюдалась низкая вариабельность ITS последовательностей, и различия между последовательностями анализируемых образцов были крайне малы Всего было выявлено 26 вариабельных участков, 12 из которых информативны 15 вариабельных

участков найдены в ITS1 (длина выравнивания 221 п.н.), семь - в ITS2 (длина выравнивания 139 п.н.) (табл. 2.). Нуклеотидная последовательность гена 5.8S рРНК (164 п.н.), как и ожидалось, была высоко консервативной и содержала лишь четыре вариабельных участка Из общего количества выявленных 26 вариабельных участков 9 проявляли межвидовой полиморфизм, 16 -внутривидовой полиморфизм, а один характеризовался одновременно и внутри, и межвидовым полиморфизмом Анализ нуклеотидной последовательности ITS рДНК у исследуемых представителей рода Aegilops позволил выявить ряд видоспецифичных замен, причем у большинства видов подобные замены расположены в ITS 1 (рис. 10).

Табл 2 Характеристика нуклеотидных последовательностей ITSI, гена 5.8 S рРНК и ITS2 диплоидных видов Aegilops.

последовательность длина (П.Н.) Соде] эжание оснований (%) Число вариабельных сайтов (%) /число информативных сайтов

А С G Т

ITS1 221 20.1 34.1 28.2 17.7 15(6.8%) / 9

5.8 S 164 22.6 31.1 28.6 17.8 4(2.4%) / 0

ITS2 139 18.1 32.8 31.8 17.3 7(4.3%)/3

с aud 1 caud2 с au d 3

heldrl h e 1 d г 2 h e i d с 3

utl Mt! ra.it 3 au t 4

Ti -t 5

taol t a u2 tau3 taul t a u 5 t a u 6 t a u7 tauS

u n i а т 1 uniar2 u n 1 a r 3

Рис 10 Вариабельные сайты в последовательности ITS участка рДНК диплоидных видов Aegilops

Проведенный сравнительный анализ показал значительную консервативность фрагмента ITS рДНК у представителей рода Aegilops по сравнению с большинством растений других родов и семейств (Dubouzet and Shinoda, 1998; Dubouzet and Shinoda, 1999; Рыжова и др., 2002). Данные о низкой вариабельности ITS у представителей трибы Triticeae были получены ранее (Hsiao et al., 1995) и согласуются с представлениями об относительно недавнем происхождении Triticeae (Цвелев, 1976, 1987; Семихов, 1972). Интересно, что на фоне общей низкой вариабельности ITS у

Triticeae и малых различий между видами, внутривидовой полиморфизм был выявлен у большинства изученных нами видов Aegilops У видов Ае caudata, Ае heldreichii и Ае mutica был отмечен и полиморфизм ITS внутри одного образца. Полученные данные представляют интерес, поскольку ранее (Wang et al., 2000) ни у одного из диплоидных видов Aegilops внутривидового полиморфизма ITS не было выявлено Отсутствие внутривидового полиморфизма ITS у диплоидных представителей трибы Triticeae было показано даже в том случае, если анализировали образцы одного вида, взятые из географически удаленных точек (Hsiao et al., 1995). Полиморфизм ITS-последовательностей у видов Aegilops оказался недостаточным для достоверных филогенетических реконструкций, и на построенной методом максимальной экономии дендрограмме хорошо поддерживаются бутстрепом только видовые кластеры; кластеры же надвидового уровня бутстрепом не поддерживаются

Молекулярный анализ полиморфизма семейства генов гамма-глиадинов j видов рода Aegilops и Т. топососсит. Целью данной части работы явилось исследование полиморфизма одно из семейств генов запасных белков семян злаков -семейства генов гамма-глиадинов - у видов комплекса Triticum-Aegilops, имеющих различные геномы. Анализ семейства глиадиновых генов осуществлялся непосредственно сравнением их нуклеотидных последовательностей. Для анализа были отобраны образцы ДНК 7 диплоидных видов Aegilops и культурного диплоидного вида пшеницы Т топососсит. Таким образом, в исследовании были представлены все основные типы диплоидных геномов в группе Triticum-Aegilops.

Рис 11 Соотношение полученных различных последовательностей генов и псевдогенов гамма-глиадинов для разных видов эгилопса и вида пшеницы Т топососсит

Всего было проанализировано 384 клона, содержащих вставку РСЯ-продуктов, полученных с использованием гамма-глиадиновых праймеров. В результате проведенного анализа было показано, что из последовательностей вставок всех

вид

проанализированных 384 клонов гамма-глиадиновые гены были представлены 204 ДНК-последовательностями. Из полученных последовательностей гамма-глиадинов, 169 оказались различными. При этом число полученных для каждого из видов различных последовательностей было неодинаковым. Максимальное число (37 последовательностей) было получено для вида Ае umbellulata, минимальное (6) - для видаЛе tauschii). 143 последовательности, из которых 112 различных, представляли собой последовательности генов, а 61 (57 различных) - последовательности псевдогенов. Таким образом, количество псевдогенов составляло 33,7% от общего числа полученных различных последовательностей. По этому показателю семейство генов гамма-глиадинов заметно отличается от родственного ему семейства альфа-глиадиновых генов При анализе семейства генов альфа-глиадинов количество псевдогенов достигало 88,2% от общего количества полученных последовательностей (247 из 280). Ранее уже высказывалось мнение о том, что в семействе генов гамма-глиадинов, присутствуют только единичные псевдогены, в то время как для альфа-глиадинов характерен весьма значительный процент псевдогенов (Anderson, 2000). Однако в нашем исследовании число псевдогенов в семействе гамма-глиадинов оказалось большим, и составляло 1/3 от общего числа.

Интересно отметить, что выявленное соотношение последовательностей генов и псевдогенов гамма-глиадинов для разных видов заметно отличалось (рис. И). Так, половина всех полученных последовательностей вида Т monococcum оказалась последовательностями псевдогенов, в то время как для вида Ае. tauschii псевдогенов выявлено не было. Большая часть последовательностей псевдогенов содержит стоп-кодон, и гораздо меньшее их число характеризуется мутациями сдвига рамки считывания.

Рис. 12 Выравнивание нуклеотидных последовательностей !::?" семейства гамма-глиадинов вида Aegilops speltoides

При анализе для большинства проанализированных образцов было выявлено присутствие нескольких различных типов последовательностей (рис. 12). Такая картина, по всей видимости, объясняется наличием нескольких подсемейств генов гамма-глиадинов в геноме каждого вида, подобно тому, как это ранее было показано для генов альфа-глиадинов. По всей видимости, некоторые такие подсемейства представлены только генами, другие - исключительно псевдогенами, однако большая часть включает как гены, так и псевдогены. Длина полученных последовательностей гамма-глиадинов варьировала в пределах от 555 н. до 1020 н., причем распределение их по длине было не равномерным. Наиболее многочисленными оказались последовательности длиной 852 п.н., 840 п.н., 867 и 816 п.н., которые составляли 59,8 % от общего количества различных последовательностей.

Полученная нами картина кластеризации нуклеотидных последовательностей генов гамма-глиадинов и существующие представления об эволюции пшениц позволяют нам предположить возможную схему эволюции основных групп генов гамма-глиадинов (рис. 13).

ТгШсит топососсит А геном

Aegilops Пляски О геном

Рис. 13. Схема эволюции основных групп генов гамма-глиадинов.

Можно предположить существование у гипотетического общего предка пшениц и эгилопсов одного типа подсемейства гамма-глиадинов. Далее имеющийся локус гамма-глиадинов дуплицируется в геноме либо самого гипотетического предка, либо при обособлении групп собственно пшениц и эгилопсов.

Дальнейшая эволюция образовавшихся локусов гамма-глиадинов была независимой в каждой из групп. У обособившейся пшеницы оба глиадиновых семейства оказываются схожи друг с другом и похожи на гамма-глиадины предковой формы. У отделившихся эгилопсов одно из подсемейств (гяи2) приобретает существенные отличия от предкового типа и, соответственно, от другого подсемейства (гли!). При этом первоначально оба подсемейства имеют равную представленность в геноме.

Затем в группе эгилопсов параллельно, или же последовательно выделяются три основные эволюционные линии. Первая ведет к современному виду Ае ¡списки, при этом происходит увеличение количества гамма-глиадиновых последовательностей типа гли2 и исчезновение, либо сильное изменение, последовательностей типа гли/, которая исходно более близка к предковой. Вторая линия ведет к современному ввду Ае. вре1МйеЕ. В геноме этого вида сохраняется примерно равное соотношение между последовательностями гамма-глиадинов обоих типов. Третья линия дает начало остальным видам эгилопсов. При этом происходит увеличение количества последовательностей предкового типа гли1 и уменьшение количества, или исчезновение последовательностей второго типа гли2. Параллельно с этим, оба гамма-глиадиновых локуса эволюционируют независимо, в результате чего каждый дает начало новым подсемействам, которые в дальнейшем становятся видоспецифичными. Помимо этого, внутри геномов наблюдается расхождение паралогичных подсемейств гамма глиадинов.

Использование данных молекулярного маркирования для анализа систематики и эволюции рода Aegilops. Результаты проведенного молекулярного маркирования показывают существенное различие между видами рода Aegilops по уровням внутривидового геномного полиморфизма. При этом в нашем исследовании не наблюдается прямой взаимосвязи уровня геномного разнообразия и присущего виду типа опыления. Полученные данные показывают также, что в определении уровня внутривидовой изменчивости, по всей видимости, играет роль уровень плоидности генома Так, например, аллополиплоидные виды с В геномом являются менее полиморфными по сравнению с родительским диплоидным видом Ае. ЮшсМь Однако, влияние этого фактора не однозначно. Так, в нашем исследовании были получены результаты о низком уровне внутривидового полиморфизма по молекулярным маркерам у полиплоидных видов с Б геномом, в то время как, для большинства полиплоидов с и геномом (за исключением вида Ае МипсшШ) был характерен значительный внутривидовой полиморфизм. Интересно отметить, что подобные различия в характере внутривидовой изменчивости для видов эгилопса Э и II групп были показаны также с использованием цитогенетических методов (Бадаева, 2004). Выявленное отличие в уровнях полиморфизма у полиплоидов П-геномной и и-геномной групп достаточно интересно, так как для полиплоидных видов эгилопса в целом неоднократно отмечалась большая морфологическая и экологическая изменчивость. По-видимому, уровни внутривидового полиморфизма генома зависят от целого ряда факторов1 типа системы опыления, возраста вида и ареала, плоидности генома, характера образования полиплоида (происхождение от единичного, или от множественных скрещиваний) и от свойств самого генома вида.

Результаты проведенного нами молекулярного маркирования различных последовательностей генома позволили выделить в комплексе ТгШсит-Ае^Порь несколько обособленных групп видов, каждая из которых включает в себя либо виды с родственными диплоидными геномами, либо диплоидный вид и родственные ему

полиплоидные. Группа видов с А геномом, группа с S геномом и группа с D геномом являются обособленными друг от друга и от прочих, хотя за счет присутствия В генома в геноме полиплоидных видов пшениц, наблюдается некоторое сходство между А и S группами Группы видов с U, С, М и N геномами обнаруживают некоторое сходство друг с другом, хотя родство С и U геномов оказалось заметно меньшим, чем принято было считать. Чю касается представляющего последнюю выделенную группу вида Ае mutica, то, как уже было отмечено, положение его относительно видов других групп по результатам проведенного молекулярного анализа, также как и по морфологическим данным, неоднозначно, и требует дополнительного исследования.

Выделенные на основании данных молекулярного анализа группы видов, согласуются с положением Д. Зохари и М. Фельдмана (Zohary and Feldman, 1962) о существовании в пределах комплекса Triticum-Aegilops трех естественных полиплоидных комплексов, виды которых объединены наличием одного общего генома и связаны друг с другом посредством гибридизации и потока генов, что ; приводит к отсутствию четких разрывов на морфологическом уровне и к тому, что

каждый такой полиплоид, по существу, не является генетически изолированным от прочих видов комплекса. Выделенные нами с помощью молекулярных методов группы видов с D геномом, с U геномом и с А геномом (в которую входят представители рода Triticum) соответствуют охарактеризованным ранее Д. Зохари и М. Фельдманом (Zohary and Feldman, 1962) трем полиплоидным компелексам. Однако, Д. Зохари и М. Фельдманом в комплекс видов с D геномом был включен также вид Ае cylindrica, полученные же нами данные говорят о значительной обособленности данного вида от прочих видов с D геномом.

Помимо того, что группировка видов эгалопса по данным молекулярного анализа согласуется с цитогенетическими данными о геномном родстве видов, наблюдается также заметное соответствие выявленных групп таким таксономическим единицам, как секции, которые первоначально были выделены в роде Aegilops на основании результатов исследования морфологии. В последствии морфологические данные были дополнены данными цитогенетики, и приводимые в работе X. Кихары секции полностью соответствуют выделенным нами группам (Kihara, 1959) Сложившаяся ситуация, когда выделенные изначально на основании морфологических данных секции, представляют собой хорошо обособленные кластеры и по данным цитогентики, и по молекулярным данным, говорит в пользу реальности данных групп видов и неформального выделения секций в пределах рода Aegilops.

Сравнение выделенных на различных (морфологическом, цитогенетическом и молекулярном) уровнях групп видов Triticum-Aegilops с родами выделяемыми А. JIöbc (Löve, 1984) на основе геномных формул, выявило заметные разногласия В исследовании А. Лёве род Aegilops был разделен на 13 независимых родов, при этом в один род помещались виды, обладающие сходными геномами. Наблюдаемое противоречие между выделяемыми А Лёве исключительно на основе геномной формулы родами и выделяемыми прочими исследователями на основании морфологических, цитогенетических и молекулярных данных группами видов, обусловлено, на наш взгляд, совместной эволюцией геномов в составе аллоплоидного, а также и видов со сходными типами геномов.

Вероятно, в случае с полиплоидными видами (по крайней мере, в пределах группы Triticum-Aegilops) наиболее естественной таксономической единицей

надвидового уровня можно считать группу видов, включающую диплоидный вид и родственные ему полиплоидные, как это предполагалось Д. Зохари и М. Фельдманом (Zohary and Feldman, 1962). Однако, такое единство, на наш взгляд, обусловлено не только наличием гибридизации между родственными полиплоидами, но и вероятным специфическим изменением геномов в составе аллополиплоидного, которое может происходить, как было показано, уже на первых стадиях после формирования полиплоидов (в гибридах первого поколения и/или в первом поколении после удвоения хромосом) (Ozkan et al., 2001; Shaked et al., 2001; Belyaev et ai., 2000; Mizumoto et al., 2003). Как было установлено, направление этих процессов определяется преимущественно свойствами самих геномов (Salina et al., 2000). Кроме того, морфологическое сходство видов каждой группы может также быть обусловлено геном-снецифичной экспрессией некоторых генов, а также, вероятно, и доминированием продуктов генов одного из геномов. Имея в виду все эти процессы, протекающие при полиплоидизации, можно предположить, что именно свойства самого генома, общего для ряда полиплоидов (в нашем случае A, D или U генома), заставляют этот геном, войдя в состав аллополиплоидного, оставаться неизменным, и приводят к изменениям всех других сочетающихся с ним геномов. Таким образом, уже на первом этапе после образования полиплоидов может обеспечиваться большее сходство с донором постоянного генома, а, следовательно, и с другими полиплоидами, несущими тот же геном.

Однако, как было показано при исследовании растений рода Brassica, а также недавно произошедшего вида Spartina anglica, в некоторых случаях формирование полиплоидов не сопровождается существенными изменениями геномов (Axelsson et al., 2000; Baumel et al., 2002). Вероятно, в гаком случае является возможным возникновение нового аллополиплоида, который будет либо сильно отличаться от обоих родителей, так что не сможет быть включен в какой-либо родительский таксон, либо же будет представлять переходную форму, которая заполнит собой существовавший ранее разрыв между родительскими таксонами. Кроме того, к образованию форм, отличающихся от обоих родительских, может приводить и изменение геномов, поскольку при полиплоидизации также было показано на ранних этапах формирование «новых» признаков, не характерных для родительских форм, в том числе и таких эволюционно важных, как изменение времени цветения (Schranz and Osborn, 2000).

ВЫВОДЫ

1. Впервые с использованием различных молекулярных методов определены уровни меж- и внутривидового полиморфизма всех 26 видов рода Aegilops. Показано существенное различие между видами рода Aegilops по уровням внутривидового полиморфизма генома. Наиболее полиморфными являются диплоидные виды Ае tauschii, Ае comosa и Ае. heldreichii, Ае mutica, Ае. speltoides s.L, Ае caudata и полиплоидные виды с U геномом - Ае kotschyi, Ае. variabilis, Ае. columnaris, Ае biunciahs, Ае. ovata, Ае. triaristata, Ае. recta. Диплоидные виды Ае. uniaristata, Ае. imbellulata, Ае longissima, Ае. sharonensis, Ае. searsii, Ае. bicornis, полиплоидные виды с D геномом - Ае crassa, Ае juvenalis, Ае vavilovii, Ае ventricosa, Ае cylindrica, а также один из полиплоидных видов U-геномной группы - Ае triuncialis, - обладают более низким уровнем внутривидовых различий. Не наблюдалось полного соответствия между уровнем геномного полиморфизма вида и степенью внутривидовой вариабельности морфологических признаков.

2. В пределах рода Aegilops методами молекулярного маркирования выделено 6 групп, каждая из которых включает в себя либо виды с родственными диплоидными геномами, либо диплоидный вид и родственные ему полиплоиды

• группа, включающая 5 диплоидных видов, обладающих S геномом (Ае. speltoides s.l., Ае. longissima, Ае. sharonensis, Ае. searsii, Ае bicornis);

• группа, включающая 5 видов различного уровня плоидности, объединенных наличием D генома (Ае. tauschii, Ае crassa, Ае juvenalis, Ае vavilovii, Ае ventricosa);

• группа из 9 видов различно! о уровня плоидности, объединенных наличием U генома (Ае. umbellulata, Ае kotschyi, Ае variabilis, Ае. columnaris, Ае. biuncialis, Ае ovata, Ае. triaristata, Ае. recta, Ае triuncialis);

• виды Ае caudata и Ае cylindrica. обладающие С геномом;

• диплоидные виды с геномами М (Ае. comosa и Ае heldreichii) и N (Ае uniaristata)\

• вид Ае mutica, обладающий Т- типом генома

3. Группы видов Aegilops, выделенные по результатам молекулярного анализа, совпадают с большинством таксонов внутриродовой систематики, выделяемых разными авторами на основании морфологических и цитогенетических данных. Наблюдается практически полное соответствие полученных молекулярными методами данных системам рода Aegilops, которые были предложены X Кихарой (1954) и М.В. Слагереном (1994); более всего результатам проведенного молекулярного исследования противоречит система рода, предложенная А. Лёве (1984).

4. Охарактеризованы нуклеотидные последовательности внутренних транскрибируемых спейсерных участков (ITS 1, ITS2) рибосомного оперона и гена 5.8S рРНК у 22 образцов пяти диплоидных видов рода Aegilops, а также у 26 образцов двух аллополиплоидных видов Ае kotschyi и Ае. variabilis. Установлена низкая межвидовая вариабельность ITS-районов. Впервые выявлен внутривидовой полиморфизм ITS-последовательности у диплоидных видов рода Aegilops.

5. Впервые с помощью метода домен-направленного маркирования (DDP-profiling) охарактеризован полиморфизм семейства NBS-LRR генов резистентности у видов Aegilops', показано наличие высокого уровня изменчивости генов данного семейства, по сравнению с другими проанализированными последовательностями генома Aegilops.

6. Клонировано и секвенировано 204 последовательности одного из семейств генов запасных белков эндосперма злаков - генов гамма-глиадинов у 7 диплоидных видов группы Triticum-Aegilops с разными типами генома. Показано наличие в геноме нескольких подсемейств гамма-глиадинов; установлены межвидовые различия по соотношению последовательностей генов и пссвдогенов в геноме. На основании анализа полученных данных предложена возможная схема эволюции генов семейства гамма-глиадинов в группе Triticum-Aegilops.

ПУБЛИКАЦИИ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кочиева Е.З., Горюнова C.B., Поморцев A.A. RAPD - маркирование геномов представителей рода Hordeum. Генетика. 2001. Т.37. Ks 8. С.1088-1094.

2. Рыжова H.H., Горюнова C.B., Томилов A.A., Кочиева Е.З. Выявление двух типов внутренних транскрибируемых спейсдюв (ITS) рДНК в геноме представителей рода Capsicum. Доклады Академии Наук. 2002. Т. 38. №2. С.282-285.

3. Горюнова C.B., Чикида H.H. Молекулярное маркирование популяций видов Aegilops kotschyi и Aegilops variabilis Тезисы МОГиС. 2003. Т.1 С.58-59

4. Горюнова C.B., Кочиева Е.З., Чикида Н.Н, Пухальский В.А. RAPD анализ внутривидовой изменчивости и филогенетических связей видов эгилопса (Aegilops L.), содержащих D геном. Генетика. 2004. Т. 40. №5. С.642-651

5. Горюнова C.B., Salentijn Е, Smulders M. Полиморфизм аминокислотной последовательности альфа-глиадинов у представителя Aegilops tauschii. Тезисы докладов III съезда Вавиловского общества генетиков и селекционеров. Москва. 2004. Т.1. С. 164.

6. Горюнова C.B., Чикида H.H., Кочиева Е.З. Полиморфизм нуклеотидной последовательности ITS1 peí иона рДНК у 5 диплоидных видов рода Aegilops. Тезисы докладов III съезда Вавиловского общества генетиков и селекционеров. Москва. 2004. Т.1. С. 165.

7 Горюнова C.B., Кочиева Е.З. Анализ внутривидовой изменчивости и филогенетических связей видов Aegilops L. С D-геномом методом RAPD. Материалы VIII Молодежной конференции ботаников в Санкт-Петербурге. 2004. С.243.

8 Salentijn E.M.J, Goryunova S., Herpen T.W.J.M van , Schoot J. van der, Gilissen L.J.W.J., Soest L.J.M. van & M.J.M. Smulders. Alpha-gliadin variety among wheat genomes in relation to toxicity in Coeliac Disease. Allergy Matters! 2004. The International Conference of Allergy Prevention. Wageningen, The Netherlands. P 132.

9. Горюнова C.B., Чикида H.H., Gori M., Кочиева Е.З. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей внутренних транскрибируемых спейсеров рибосомных генов диплоидных видов эгилопса (Aegilops L.). Молекулярная биология. 2005. Т. 39. №2. С.193-197.

Напечатано с готового оригинал-макета

Издательство ООО "МАКС Пресс" Лицензия ИД N 00510 от 01.12.99 г. Подписано к печати 16.0S.200S г. Формат 60x90 1/16. Усл.печл.1,75. Тираж 100 экз. Заказ 299. Тел. 939-3890. Тел./факс 939-3891. 119992, ГСП-2, Москва, Ленинские горы, МГУ им. М.В. Ломоносова, 2-й учебный корпус, 627 к.

«Ч 3 1 33

РНБ Русский фонд

2006-4 10066

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Горюнова, Светлана Валерьевна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Характеристика рода Aegilops L. и существующие таксономические проблемы.

1.2. Роль полиплоидии в эволюции высших растений. Группа видов Aegilops-Triticum как типичный полиплоидный комплекс.

1.3. Изучение видов рода Aegilops.

1.4. Геном растений.

1.4.1. Уникальные последовательности генома растений.

1.4.2. Характеристика отдельных семейств генов растительного генома.

1.4.2.1. Семейство генов устойчивости растений.

1.4.2.2. Семейство генов запасных белков семян.

Глава 2. Материалы и методы.

Глава 3. Результаты и обсуждение. 63 3.1. Молекулярный анализ изменчивости и филогенетических связей видов Aegilops, имеющих D геном.

3.1.1. Анализ полиморфизма и филогенетических связей видов

Aegilops с D геномом методом RAPD.

3.1.1.1. RAPD-анализ уровней внутривидового полиморфизма видов

Aegilops с D геномом.

3.1.1.2 Анализ межвидового полиморфизма видов Aegilops с D геномом методом RAPD.

3.1.2. Молекулярный анализ полиморфизма семейства генов резистентности у представителей рода Aegilops, обладающих D геномом.

3.1.2.1. Характеристика полиморфизма NBS-LRR-семейства генов резистентности у видов Aegilops, обладающих D геномом.

3.1.2.2 Использование метода RGA-маркирования для определения филогении семейства генов устойчивости и их аналогов у видов Aegilops с D геномом.

3.2. Анализ внутривидовой изменчивости и филогенетических связей видов Aegilops, содержащих U геном.

3.2.1. RAPD-анализ полиморфизма и филогенетических связей видов Aegilops с U геномом.

3.2.1.1. RAPD-анализ уровней внутривидового полиморфизма видов Aegilops с U геномом.

3.2.1.2 Анализ межвидового полиморфизма среди видов

Aegilops с U геномом методом RAPD.

3.2.2. Молекулярный анализ внутривидовой изменчивости и межвидовых различий аллотетраплоидных видов Ае. kotschyi и Ае. variabilis.

3.2.2.1 RAPD-анализ внутривидовой изменчивости и межвидовых различий видов Ае. kotschyi и Ае. variabilis.

3.2.2.2 AFLP-анализ внутривидовой изменчивости и межвидовых различий видов Ае. kotschyi и Ае. variabilis.

3.2.2.3 ISSR-анализ внутривидовой изменчивости и межвидовых различий видов Ае. kotschyi и Ае. variabilis.

3.2.2.4 Анализ полиморфизма последовательности ITS района рДНКу видов Ае. kotschyi и Ае. variabilis.

3.2.3. Молекулярный анализ полиморфизма семейства генов резистентности у представителей рода Aegilops, обладающих

U геномом.

3.2.3.1. Характеристика полиморфизма NBS-LRR-семейства генов резистентности у представителей рода Aegilops, обладающих U геномом.

3.2.3.2 Использование метода RGA-маркирования для определения филогении семейства генов устойчивости и их аналогов у видов Aegilops с U геномом.

3.3. Молекулярный анализ полиморфизма и филогенетических отношений диплоидных видов эгилопса, обладающих S геномом. 107 3.3.1. RAPD-анализ изменчивости и филогенетических отношений диплоидных видов эгилопса, обладающих S геномом.

3.4. Анализ внутривидового полиморфизма диплоидных видов Ае. caudata, Ае. uniaristata, Ае. comosa, Ае. heldreichii и

Ае. mutica методом RAPD.

3. 5 Молекулярный анализ полиморфизма генома и филогенетических связей видов рода Aegilops.

3.5.1. Анализ полиморфизма и филогенетических отношений видов эгилопса с использованием AFLP.

3.5.1.1 Анализ внутривидового полиморфизма рода Aegilops, выявленного методом AFLP.

3.5.1.2 Использование AFLP- системы молекулярного маркирования для определения филогении видов рода Aegilops.

3.5.2. Использование RAPD-системы молекулярного маркирования для определения филогении видов рода Aegilops.

3.5.3. Анализ полиморфизма RGA - последовательностей и филогении семейства NBS-LRR генов резистентности у видов рода Aegilops.

3.5.4. Анализ полиморфизма внутренних транскрибируемых спейсеров рибосомной ДНК у диплоидных видов эгилопса, имеющих различные геномы.

3.5.5 Молекулярный анализ полиморфизма семейства генов гамма-глиадинов у видов рода Aegilops и Т. топососсит.

3.5.5.1 Анализ полиморфизма нуклеотидных последовательностей гамма-глиадинов в геноме отдельных видов.

3.5.5.2 Сравнительный анализ последовательностей генов гамма-глиадинов у диплоидных видов рода Aegilops и вида пшеницы Triticum топососсит.

3.6. Анализ взаимоотношений и сравнение межвидовой изменчивости видов группы Aegilops -Triticum и рода Hordeum методом RAPD.

3.7. Использование данных молекулярного маркирования для анализа систематики и эволюции рода Aegilops.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетический анализ полиморфизма рода Aegilops L."

Aegilops L- род однолетних злаков трибы Triticeae. На основании данных цитогенетического анализа у видов эгилопса выделяют семь основных типов генома: D, S, С, N, U, М и Т. При этом род Aegilops включает в себя виды с различным уровнем плоидности генома (диплоидный, тетраплоидный и гексаплоидный). Было показано, что полиплоидные виды рода представляют собой типичные аллополиплоиды и, таким образом, для рода Aegilops характерен сетчатый характер эволюции. Родственные виды способны обмениваться генетическим материалом, что приводит к повышенной внутривидовой изменчивости и, в ряде случаев, отсутствию четких границ между видами.

Виды Aegilops являются ближайшими родичами культурных пшениц Т. durum и Т. aestivum, и составляют основную часть так называемого вторичного генофонда пшеницы (Triticum L.). Помимо этого, виды эгилопса секции Sitopsis и Aegilops tauschii считаются донорами, соответственно, В и D геномов культурной пшеницы. Этот факт обусловил повышенный интерес к исследованию рода Aegilops. Изучению рода способствовала возможность достаточно легкого получения гибридов, а также малое число и большой размер хромосом у видов рода. Благодаря этому, на настоящий момент род Aegilops является одним из наиболее исследованных в семействе злаков как морфологически, так и методами цитогенетики. Однако, несмотря на постоянный и длительный интерес к роду Aegilops, до сих пор не существует однозначного взгляда на систематику и эволюцию данной группы. Что касается исследования рода с применением новейших молекулярных методов, на настоящий момент, его нельзя считать хорошо изученным, поскольку до сих пор молекулярный анализ рода затрагивал лишь отдельные области генома или отдельные виды эгилопса.

Достаточная охарактеризованность рода с точки зрения морфологии и цитогенетики, а также специфический характер эволюции в данной группе делает род Aegilops интересным объектом в качестве модельного таксона для изучения молекулярной изменчивости при сетчатой эволюции. Помимо этого, исследование видов эгилопса имеет прикладное значение вследствие их таксономической близости к культурной пшенице.

Глава 1. Обзор литературы.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Горюнова, Светлана Валерьевна

Выводы

1. Впервые с использованием различных молекулярных методов определены уровни меж- и внутривидового полиморфизма всех 26 видов рода Aegilops. Показано существенное различие между видами рода Aegilops по уровням внутривидового полиморфизма генома. Наиболее полиморфными являются диплоидные виды Ае. tauschii, Ае. comosa и Ае. heldreichii, Ае. mutica, Ае. speltoides s.l., Ае. caudata и полиплоидные виды с U геномом - Ае. kotschyi, Ае. variabilis, Ае. columnaris, Ае. biuncialis, Ае. ovata, Ае. triaristata, Ае. recta. Диплоидные виды Ае. uniaristata, Ае. umbellulata, Ае. longissima, Ае. sharonensis, Ае. searsii, Ае. bicornis, полиплоидные виды с D геномом - Ае. crassa, Ае. juvenalis, Ае. vavilovii, Ае. ventricosa, Ае. cylindrica, а также один из полиплоидных видов U-геномной группы - Ае. triuncialis, - обладают более низким уровнем внутривидовых различий. Не наблюдалось полного соответствия между уровнем геномного полиморфизма вида и степенью внутривидовой вариабельности морфологических признаков.

• группа, включающая 5 диплоидных видов, обладающих S геномом (Ае. speltoides s.l., Ае. longissima, Ае. sharonensis, Ае. searsii, Ае. bicornis)',

• группа, включающая 5 видов различного уровня плоидности, объединенных наличием D генома (Ае. tauschii, Ае. crassa, Ае. juvenalis, Ае. vavilovii, Ае. ventricosa)',

• группа из 9 видов различного уровня плоидности, объединенных наличием U генома (Ае. umbellulata, Ае. kotschyi, Ае. variabilis, Ае. columnaris, Ае. biuncialis, Ае. ovata, Ае. triaristata, Ае. recta, Ае. triuncialis)',

• виды Ае. caudata и Ае. cylindrica, обладающие С геномом;

• диплоидные виды с геномами М (Ае. comosa и Ае. heldreichii) и N (Ае. uniaristata)',

• вид Ае. mutica, обладающий Т- типом генома

3. Группы видов Aegilops, выделенные по результатам молекулярного анализа, совпадают с большинством таксонов внутриродовой систематики, выделяемых разными авторами на основании морфологических и цитогенетических данных. Наблюдается практически полное соответствие полученных молекулярными методами данных системам рода Aegilops, которые были предложены X. Кихарой (1954) и М.В. Слагереном (1994); более всего результатам проведенного молекулярного исследования противоречит система рода, предложенная А. Лёве (1984).

4. Охарактеризованы нуклеотидные последовательности внутренних транскрибируемых спейсерных участков (ITS1, ITS2) рибосомного оперона и гена 5.8S рРНК у 22 образцов пяти диплоидных видов рода Aegilops, а также у 26 образцов двух аллополиплоидных видов Ае. kotschyi и Ае. variabilis. Установлена низкая межвидовая вариабельность ITS-районов. Впервые выявлен внутривидовой полиморфизм ITS-последовательности у диплоидных видов рода Aegilops.

5. Впервые с помощью метода домеи-направленного маркирования (DDP-profiling) охарактеризован полиморфизм семейства NBS-LRR генов резистентности у видов Aegilops', показано наличие высокого уровня изменчивости генов данного семейства, по сравнению с другими проанализированными последовательностями генома Aegilops.

6. Клонировано и секвенировано 204 последовательности одного из семейств генов запасных белков эндосперма злаков - генов гамма-глиадинов у 8 диплоидных видов группы Triticum-Aegilops с разными типами генома. Показано наличие в геноме нескольких подсемейств гамма-глиадинов; установлены межвидовые различия по соотношению последовательностей генов и псевдогенов в геноме. На основании анализа полученных данных предложена возможная схема эволюции генов семейства гамма-глиадинов в группе Triticum-Aegilops.

Искренняя благодарность Е.З. Кочиевой и В.А. Пухальскому за терпеливое и конструктивное руководство работой, помощь в организации исследований и в интерпретации полученных результатов, Н.Н. Рыжовой за всестороннюю практическую помощь и обсуждение данных, Н.Н. Чикиде за предоставленный материал и информационную поддержку, Е.Д. Бадаевой за постоянное внимание, ценные замечания и предоставленный материал, В.Э. Скворцову за консультации в области таксономии и эволюционной теории, всем сотрудникам лаборатории генетики растений за постоянную разностороннюю поддержку, а также коллективу Department of Biodiversity and Identity, Plant Research International и, особенно, M. J. M. Smulders и E.M.J. Salentijn за предоставленную возможность выполнения существенной части работы в данной лаборатории, а также практическую помощь и руководство.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Горюнова, Светлана Валерьевна, Москва

1. Anderson O.D., Litts J.C., Gautier M.F., Greene F.C. Nucleic acid sequence and chromosome assignment of a wheat storage protein gene // Nucleic Acids Res. 1984. V. 12. P. 8129-8144.

2. Anderson O.D. Characterization of members of pseudogene subfamily of the wheat alpha-gliadin storage protein genes // Plant Molecular Biology. 1991. V. 16. P. 335-337.

3. Anderson O.D., Greene F.C. The a-gliadin gene family. II. DNA and protein sequences variation, subfamily structure, and origin of pseudogenes // Theor. Appl. Genet. 1997. V.95. P. 59-65.

4. Anderson O.D., Hsia C.C., Torres V. The wheat gamma-gliadin genes: Characterization of ten new sequences and further understanding of gamma-gliadin gene family structure // Theor. Appl. Genet. 2000. V. 103. P. 323-330.

5. Appels R, Francki M, Chibbar R. Advances in cereal functional genomics // Funct. Integr. Genomics. 2003. V. 3. P. 1-24.

6. Arabidopsis Genome Initiative. Analysis of the genome sequence of the flowering plant Arabidopsis thaliana // Nature. 2000. V. 408. P.796-815.

7. Autran J.C., Lew E. J.L., Nimmo C.C., Kasarda D.D. N-terminal amino sequencing of prolamins from wheat and related species // Nature. 1979. V. 282. P. 527529.

8. Autran, J.-C., Lew, E. J.-L., Nimmo, C.C., and Kasarda, D.D. N-terminal amino sequencing of prolamins from wheat and related species // Nature. 1979. V. 282. P. 527529.

9. Axelsson Т., Bowman C.M., Sharpe A.G., Lydiate D.L., Lagercrantz U. Amphidiploid Brassica juncea contains conserved progenitor genomes // Genome. 2000. V.43.P. 679-688.

10. Badaeva E.D., Friebe В., Gill B.S. Genome differentiation in Aegilops. 1. Distribution of highly repetitive DNA sequences on chromosomes of diploid species //Genome. 1996. V.39.P.293-306.

11. Badaeva E.D., Friebe В., Zoshchuk S.A., Zelenin A.V., Gill B.S. Molecular cytogenetic analysis of tetraploid and hexaploid Aegilops crassa II Chromosome Res. 1998. V.6. № 8. P. 629-637.

12. Badaeva E.D., Amosova A.V., Muravenko O.V., Samatadze Т.Е., Chikida N.N., Zelenin A.V., Friebe В., and Gill B.S. Genome differentiation in Aegilops. Evolution of the D-genome cluster II Plant Systematics and Evolution. 2002. V. 231. P. 163-190.

13. Badaeva E.D., Amosova A.V., Samatadze Т.Е., Zoshchuk S.A., Shostak N.G., Chikida N.N., Zelenin A.V., Raupp W.J., Friebe В., and Gill B.S. Genome differentiation m Aegilops. 4. Evolution of the U-genome cluster. Plant Syst. 2004. Evol. 246. P. 45-76.

14. Baker В., Zambryski P., Staskawicz В., Dinesh-Kumar S.P. Signaling in plant-microbe interactions // Science. 1997. V. 276. P. 726-733.

15. Baum B. R. Aphylogenetic analysis of the tribe Triticeae (Poaceae) based on morphological characters of the genera// Can. J. Bot. 1983. V. 61. P. 518-535.

16. Baumel A., Ainoche M., Kalendar R., Schulman A.H. Retrotransposons and genomic stability in populations of the young allopolyploid species Spartina anglica C. E. Hubbard (Poaceae) II Mol. Biol. 2002. Evol. 19. P. 1218-1227.

17. Belyayev A., Raskina O., Korol A., Nevo E. Coevolution of A and В genomes in allotetraploid Triticum dicoccoides И Genome. 2000. V. 43. P. 1021-1026.

18. Bennet M.D., Smith J.B. Nuclear DNA amounts in angiosperms // Philos. Trans. R. Soc. London Ser. 1991. В 334. P. 309-45.

19. Bennetzen J. L. The structure and evolution of angiosperm nuclear genomes // Current Opinion in Plant Biology. 1998. V. 1. P.103-108.

20. Berg K.H., Beitrag zur Genomanalyse in der Getreide-gruppe // Zuechter.1937. V. 9. P. 157-163.

21. Bietz, J.A., Huebner F.R., Sanderson J.E., and Wall J.S. Wheat gliadin homology revealed through N-terminal amino acid sequence analysis // Cereal Chem. 1977. V. 54. P. 1070-1083.

22. Bovvden W.M. Chromosome numbers in seven genera of the tribe Triticeae //Canadian Journal of Genetics and Cytolology. 1966. V. 8. P. 130-136.

23. Bushuk W., and Zillman R.R. Wheat cultivars identification by gliadin electrophoregrams. I. Apparatus method and nomenclature // Can. J. Plant Sci. 1978. V. 58. P.505-515.

24. Bushuk W., and Sapirstein H.D. Modified nomenclature for gliadins // In: Gluten Proteins 1990. W. Bushuk and R. Tkachuk, eds. Am. Assoc. Cereal Chem.: St. Paul, MN. 1991. P. 454-458.

25. Caicedo A.L., Schaal B.A., Kunkel B.N. Diversity and molecular evolution of the RPS2 resistance gene in Arabidopsis thaliana. II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V. 96. P. 302-306.

26. Caldwell K.S., Dvorak J. , Lagudah E.S. , Akhunov E. , Luo M.-C., Wolters P., Powell W. Sequence Polymorphism in Polyploid Wheat and Their D-Genome Diploid Ancestor// Genetics. 2004. V. 167. P. 941-947.

27. Catassi C., Ratsch I.M., Fabiani E., Rossini M., Bordicchia F., Candela F., Coppa G.V., Giorgi P.L. Coeliac disease in the year 2000: exploring the iceberg // Lancet 1994. V. 343. P. 200-203.

28. Chee P.W., Lavin M., and Talbert L. E. Molecular analysis of evolutionary patterns in U genome wild wheats // Genome. 1995. V. 38. P. 290-297.

29. Chen Q.F., Armstrong К. Genomic in situ hybridization in Avena sativa II Genome. I994.V. 37. P.607-6I2.

30. Chennaveeraiah M.A. Karyomorphologic and cytotaxonomic studies in Aegilops H Acta Horti Gotoburgensis. 1960. V. 23. № 4. P.85-178.

31. Clarke B.C, Mukai Y., Appels R. The Sec-1 locus on the short arm of chromosome IR of rye (Secale cereale) II Chromosoma. 1996. V. 105. P269-275.

32. Clegg M.T., Cummings M.P., Durbim M. The evolution of plant nuclear genes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997.V. 94. P. 7791-7798.

33. Collins N., Drake J., Ayliffe M., Sun Q., Ellis J., Hulbert S., Pryor T. Molecular Characterization of the Maize Rpl-D Rust Resistance Haplotype and Its Mutants // Plant Cell. 1999. V. 11. P. 1365-1376.

34. Comai L. Genetic and epigenetic interactions in allopolyploid plants // Plant Mol. Biol. 2000. V. 43. P. 387-399.

35. Cooley M.B., Pathirana S., Wu H.J., Kach-roo P., Klessig D.F. Members of the Arabidopsis HRT/RPP8 family of resistance genes confer resistance to both viral and oomycete pathogens // Plant Cell. 2000. V. 12. P.663-676.

36. D'Ovido R., Tanzarella O., Masci S., Lafiandra D., Porceddu E. RFLP and PCR analyses at Gli-1, Gli-2, Glu-1 and Glu-3 loci in cultivated and wild wheats // Hereditas. 1992. V. 116. P. 79-85.

37. D'Ovido R., Anderson O.D. PCR analysis to distinguissh between allels of a multigene family correlated with wheat bread-making quality // Theor. Appl. Genet. 1994. V. 88. P. 759-763.

38. Davis P.H. 12. Amblyopyrum Eig; 13. Aegilops L. // In: Flora of Turkey and the East Aegean Islands, V. 9 (Davis, P.H. ed.). Edinburgh at the University Press, Scotland. 1985. pp. 232-245.

39. Dubcovsky J. and J. Dvorak Genome identification of the Triticum crassum complex (Poaceae) with the restriction patterns of repeated nucleotide sequences // American Journal of Botany. 1995. V.82. N.l, P. 131-140.

40. Dubouzet J.G., Shinoda К. Phylogeny of Allium L. subg. Melanocrommyum (Webb et Berth.) Rouy based on DNA sequence analysis of the internal transcribed spacer region of nrDNA // Theor. Appl. Genet. 1998. V. 97. P. 541-549.

41. Dubouzet J.G., Shinoda K. Phylogenetic analysis of the internal transcribed spacer region of Japanese Lilium species // Theor. Appl. Genet. 1999. V. 98. P. 954-960.

42. Dupont F.M., Yensel W.H., Chan R., Kasarda D.D. Characterization of the IB-Type omega-Gliadins from Triticum aestivum Cultivar Butte // Cereal Chem. 2000. Y.77. P.607-614.

43. Dvorak J., Zhang H.-B. Reconstruction of the phylogeny of the genus Triticum from variation in repeated nucleotide sequences // Theor. Appl. Genet. 1992. V. 84. P. 419-429.

44. Dvorak J., Luo M.-C., Yang Z.-L. Restriction fragment length polymorphism and divergence in the genomic regions of high and low recombination in self-fertilizing and cross-fertilizing Aegilops species // Genetics. 1998a. V. 148. P. 423-434.

45. Dvorak J., Luo M.-C.,.Yang Z.-L, Zang H.-B. The structure of Aegilops tauschii genepool and evolution of hexaploid wheat // Theor. Appl Genet. 1998 b. V. 97. p. 657670.

46. Edwards S.K., Johonstone C., Thompson C. A simple and rapid method for the preparation of plant genomic DNA for PCR analyses. // Nucleic Acids Res. 1991. Y. 19(6). P. 1349.

47. Ehrlich P.R., Raven P.H. Differentiation of populations // Science. 1969. Y. 165. 1228-1232.

48. Eig A. Amblyopyrum Eig. A new genus separated from the genus Aegilops II Agricultural records. PZE Institute for Agricultural Natural History and Agricultural Research. 1929b. N. 2. P. 199-204.

49. Eig A. Monographisch-kritische Ubersicht der Gattung Aegilops II Feddes Repertorium Specierum novarum regni vegetabilis Beih. 1929a. Y. 55. P. 1-228.

50. Ellis J., Lawrence G., Ayliffe M., Anderson P., Collins N., Finnegan J., Frost D., Luck J., Pryor T. Advances in the molecular genetic analysis of the flax-flax rust interaction//Annu. Rev. Phytopathol. 1997. Y. 35. P. 271-291.

51. Ellis J.G., Lawrence G.J., Luck J.E., Dodds P.N. Identification of regions in alleles of the flax rust resistanse gene L that determine differences in gene-for-gene specificity.// Plant Cell. 1999. V. 11(3). P. 495-506.

52. Emme H. K. 1924. Die Resultate der zytologischen Untersuchungen einiger Aegilops-Arten // Zeitschr. Russ. Bot. Gesell. V. 8. P. 193-197.

53. Entwistle J., Knudsen S., Muller M., Cameron-Mills V. Amber codon suppression: the in vivo and in vitro analysis of two C-hordein genes from barley // Plant Mol Biol. 1991. V. 17. P.1217-1231.

54. Ewart, J. A. D. Slow triple-gliadin from Cappelle-Desprez // J. Sci. Food Agric. 1983. V. 34. P.653-656.

55. Faris J.D., Iiaen K.M., Gill B.S. Saturation mapping of a gene-rich recombination hot spot region in wheat// Genetics. 2000. V. 154 (2). P. 823-835.

56. Feldman M. The origin of cultivated wheat // In A Bonjean, W. Angus, eds, The World Wheat Book. Lavoisier Publishing. Paris. 2001.

57. Felsenstein J. Confidence limits on phylogenies: an approach using the bootstrap // Evolution. 1985. V. 39. P. 783-791.

58. Flor H.H. Current status of the gene-for-gene concept //Annu. Rev. Phytopathol. 1971. V 9. P. 275-296.

59. Friebe В., Tuleen N., Jiang J., Gill B. S. Standart karyotype of Triticum longissimum and its cytogenetic relationship with T. aestivum // Genome. 1993. V. 36. P. 731-742.

60. Friebe В., Gill B. S. Chromosome banding and genome analysis in diploid and cultivated polyploid wheats // In: Methods in genome analysis in plants, (P.P. Jauhar ed.), CRC Press, Boca Raton. 1996. pp 39-60.

61. Galili G., Feldman M. Intergenomic supression of endosperm protein genes in common wheat // Can. J. Genet. Cytol. 1984. V. 26. P. 651-656.

62. George E.K., Mearin M.L., Franken H.C., Houwen R.H., Hirasing R.A., Vandenbroucke J.P. Twenty years of childhood coeliac disease in the Netherlands: a rapidly increasing incidence? // Gut. 1997. V. 40. P. 61-66.

63. Gianibelli M. C., Larroque O. R., MacRitchie F., and Wrigley C. W. Biochemical, Genetic, and Molecular Characterization of Wheat Endosperm Proteins // American

64. Association of Cereal Chemists, Inc. 2001. http://www.aaccnet.org/cerealchemistry/ freearticle/gianibelli.pdf

65. Gill K.S., Gill B.S., Endo T.R., Boyko E.V. Identification and high density mapping of gene-rich regions in chromosome groupe 5 of wheat // Genetics. 1996. V. 143. P. 1001-1012.

66. Goldblatt P. Polyploidy in angiosperms: monocotyledons // In WH Lewis, ed, Polyploidy, Biological Relevance. Plenum Press, New York. 1980. P. 219-239.

67. Gottlieb L.D. Plant polyploidy: gene expression and genetic rebundancy // Heredity. 2003. V. 91. P. 91-92.

68. Grant M.R., Godiard L., Straube E., Ashfield Т., Levvald J., Sattler A., Innes R.W., Dangl J.L. Structure of the Arabidopsis RPM1 gene enabling dual specificity disease resistance.// Science. 1995. V.269. P. 843-846.

69. Grass Phylogeny Working Group, http://www.ftg.fiu.edu/grass/gpwg/ Grube R.C., Radwanski E.R., Jahn M. Comperative genetics of disease resistance within the Solanacae // Genetics. 2000. V. 155. P. 873-887

70. Guo M., Davis D., Birchler J.A. Dosage effects on gene expression in a maize ploidy series//Genetics. 1996. V. 142. P. 1349-1355.

71. Gupta P.K., and B.R. Baum. Nomenclature and related taxonomic issues in . wheats, triticales and some of their wild relatives // Taxon. 1986. V. 35. P. 144-149.

72. Halterman D., Zhou F., Wei F.,Wise R.P., Schulze-Lefert P. The MLA6 coiled-coil, NBS-LRR confers ^vrMot(5-dependent resistance specificity to Blumeria graminis f. sp. hordei in barley and wheat // Plant J. 2001. V. 25. P. 335-348.

73. Hammer К. Vorarbeiten zur monographischen Darstellung von Wildpflanzensortimenten: Aegilops L. // Kulturpflanze. 1980. V. 28. P. 33-180.

74. Harberd N.P., Bartels D., Thompson R.D. Analysis of the gliadin multigene loci in bread wheat using nullisomic-tetrasomic lines // Mol. Gen Genet. 1985. V. 198. P. 234242.

75. Harlan J.R., de Wet J.M. J. Toward a rational classification of cultivated plants // Taxon. 1971. V. 20. P. 509-517.

76. Hart G.E., Tuleen N.A. Characterizing and selecting alien genetic material in derivatives of wheat-alien species hybrids by analyses of isozyme variation // In: Sakamoto S. (ed.) Proc. 6th Int. Wheat Genet. Symp. Kyoto, Japan. 1983. P. 377-385.

77. Hasegawa, M., H. Kishino, and T. Yano. Dating the human-ape split by a molecular clock of mitochondrial DNA // Journal of Molecular Evolution. 1985. V. 22. P. 160-174.

78. Hsia C.C., Anderson O.D. Isolation and characterization of wheat-gliadin genes // Theor. Appl. Genet. 2001. V. 103. P 37-44.

79. Hsiao C., Chatterton N.J., Asay K.H., Jensen K.B. Phylogenetic relationships of 10 grass species: an assessment of phylogenetic utility of the internal transcribed spacer region in nuclear ribosomal DNA in monocots // Genome. 1994. V. 37. P. 112-120.

80. Hsiao C., Chatterton N.J., Asay K.H., Jensen K.B. Phylogenetic relationships of the monogenomic species of the wheat tribe, Triticeae (Poaceae), inferred from nuclear rDNA (internal transcribed spacer) sequences // Genome. 1995. V. 38. P. 211-223.

81. Jones D.A., Jones J.D.G. The role of leucine-rich repeat proteins in plant defences //Adv. Bot.Res. 1997. V. 24. P. 89-117.

82. Jones J.D.G. Putting knowledge of plant disease resistance genes to work //Curr. Opin. Plant Biol. 2001. V.4. P. 281-287.

83. Jorgensen J.H. Effect of three suppressors on the expression of powdery mildew resistance genes in barley // Genome. 1996. V. 39. P. 492-498.

84. Kagawa F. 1926/27. Cytological studies on Triticiun and Aegilops. I. Saize and shape of somatic chromosomes // La Cellule. V. 37. P. 229-323.

85. Kasarda D.D. Glutenin structure in relation to wheat quality // In Wheat is Unique. Y. Pomeranz, ed. Am. Assoc. Cereal Chem.: St. Paul, MN. 1989. P. 277-302.

86. Kasarda D.D., Autran J.C., Lew E.J.-L., Nimmo C.C., Shewry R.P. N-terminal amino acid sequences of omega-gliadins and omega-secalins; Implications for the evolution ofprolamin genes //Biochim. Biophys. Acta. 1983. V. 747. P. 138-150.

87. Kashkush K., Feldman M., Levy A.A. Gene loss, silencing and activation in a newly synthesized wheat allotetraploid// Genetics. 2002. V. 160. P. 1651-1659.

88. Kellogg E.A. Evolutionary history of the grasses // Plant Physiol. 200 l.V. 125. P. 1198-1205.

89. Kihara H. 1924. Cytologische und genetische Studien bei wichtigen Getreidearten mit besonderer Rucksicht auf das Verhalten der Chromosomen und die Sterilitet in den Bastarden // Mem. Coll. Sci. Kyoto Imp. Univ. Ser. В. V. 1. № 1. P. 1-200.

90. Kihara II. Genomanalyse bei Triticum und Aegilops. IX. Systematische Aufbau der Gattung Aegilops auf genomoanalytischer Grundlage // Cytologia. 1949. V. 14. P. 135-144.

91. Kihara H. Verwandtschaft der Aegilops Arten im Lichte der Genomanalyse. Ein Uberblick // Zuechter. 1940. V. 12. P. 49-62.

92. Kihara, H. Considerations on the evolution and distribution of Aegilops species based on the analyser-method // Cytologia. 1954. V.19. P. 336-357.

93. Kimber G., Tsunewaki K. Genome symbols and plasma types in the wheat group // Ann. Wheat Newsl. 1989. V. 35. P. 24-26.

94. Kimber G., Yen Y. Hybrids involving wheat relatives and autotetraploid Triticum umbeilulatum И Genome. 1989. V. 32. P. 1-5.

95. Kimber G., Zhao Y.H. The D genome of the Triticeae // Can.J.Genet.Cytol. 1983. V. 25. P. 581-589.

96. Kimber, G., Feldman, M. Wild Wheat, an introduction // Special Report 353, College of Agriculture, University of Missouri, Columbia. 1987. 146 pp.

97. Martins L., Oberprieler C., Hellwig. A phylogenetic analysis of Primulaceae s.l. based on internal transcribed spacer (ITS) DNA sequence data. Plant Syst. Evol. 2003. V. 237. P. 75-85.

98. Masoudi-Nejad A., Nasuda S., Kawabe A., Endo T.R. Molecular cloning, sequencing, and chromosome mapping of a 1 A-encoded co-type prolamin sequence from wheat// Genome. 2002. V. 45. P. 661-669.

99. Masterson J. Stomatal size in fossil plants: evidence for plyploidy in majority of angiosperms // Science. 1994. V. 264. P. 421-423.

100. Metakovsky E.V., Novoselskaya A.Yu., Kopus M.M., Sobko T.A., Sozinov A.A. Blocks of gliadin components in winter wheat detected by one-dimensional plyacrilamide gel electrophoresis // Theor. Appl. Genet. 1984a. V. 69. N. 1. P. 31-37.

101. Metakovsky E.V., Novoselskaya A.Y., Sozinov A.A. Genetic analysis of gliadin components in winter wheat using two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis // Theor. Appl. Genet. 1984b. V. 69. P. 31-37.

102. Metakovsky E.V., Akhmedov M.G., Sozinov A.A. Genetic analysis of gliadin-coding genes reveals gene clusters as well as single remote genes // Theor. Appl. Genet. 1986. V. 73. P.278-285.

103. Metakovsky E.V., Iakobashvili Z.A. Homology of chromosomes of Triticum macha Dek. et Men. and Triticum aestivum L. as shown with the help of genetic markers // Genome. 1990. V. 33. P. 755-757.

104. Metakovsky E.V. Gliadin allele identification in common wheat II. Catalogue of gliadin alleles in common wheat// J. Genet. Breed. 1991. V. 45. P. 325-344.

105. Metakovsky E.V., Baboev S.K. Polymorphism and inheritance of gliadin polypeptides in Т. топососсит L. //Theor. Appl. Genet. 1992. V. 84. P. 971-978.

106. Michelmore R.W. The impact zone: genomics and breeding for durable disease resistance.// Curr. Opin. Plant Biol. 2003. V.6 (4). P. 397-404.

107. Michelmore R.W., Meyers B.C. Clusters of resistance genes in plants evolve by divergent selection and a birth-and-death process. // Genome Res. 1998. V.8. P.1113-1130.

108. Miflin В .J., Field J.M., Shewry P.R. Cereal storage proteins and their effects on technological properties // In Seed Proteins, J. Daussant, J. Mosse, and J. Vaughan, eds (London: Academic Press). 1983. P. 255-319.

109. Miyashita N.T., Mori N., Tsunewaki K. Molecular variation in chloroplast DNA regions in ancestral species of wheat// Genetics. 1994. V.137. P. 883-889.

110. Mizumoto К., Takumi S., Ogihara Y., Nakamura C. Origin, dispersal and genomic structure of a low-copy-number hypervariable RFLP clone in Triticum and Aegilops species // Genes & Genetic Systems. 2003. V. 78. P. 291-300.

111. Monte J.V., De Nova P.J., Soler C. AFLP-based analysis to study genetic variability and relationships in the Spanish species of the genus Aegilops II Hereditas. 2001. V. 135(2-3). P. 233-8.

112. Moore G. Cereal chromosome structure, evolution, and pairing // Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 2000. V. 51. P. 195-222.

113. Moore R.C., Purugganan M.D. The early stages of duplicate gene evolution // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. V. 23:100 (26). P. 15682-15687.

114. Morel J.-B., Dangl J.L. The hypersensitive response and the induction of cell death in plants // Cell Death Differ. 1997. V. 4. P. 671-683.

115. Morris, R., Sears, E.R. The cytogenetics of wheat and its relatives // In: Wheat and wheat improvement (Quisenberry, K.S. and Reitz, L.P. eds;). American Society of Agronomy, Madison WI. 1967. P. 19-87.

116. Muller, S., and Wieser, H. Disulphide bonds of alpha-type gliadins // J. Cereal Sci. 1995. V. 22. P. 21-27.

117. Muller, S., and Wieser, H. The location of disulphide bonds in monomeric alpha-gliadins // J. Cereal Sci. 1997. V. 26. P. 169-176.

118. Murai K., Tsunewaki K. Molecular basis of genetic diversity among cytoplasms of Triticum and Aegilops species. IV. CtDNA variation in Ae. triuncialis II Heredity. 1986. V. 57. P. 335-339.

119. Nei M., Li W.-H. Mathematical model for studying genetic variation in terms of restriction endonucleases.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. V.76. P. 5269- 5273.

120. Nieto-Taladriz M.T., Carrillo J.M. Complexity of the Gli-АЗ locus in bread wheat //Plant Breed. 1996. 115:192-194.

121. Ogihara Y., Tsunewaki K. Diversity and evolution of chloroplast DNA in Triticum and Aegilops as revealed by restriction fragment analysis // Theor. Appl. Genet. 1988. V. 76. P. 321-332.

122. Okuno K., Ebana K, Noov B, Yoshida H. Genetic diversity of Central Asian and north Caucasian Aegilops species as revealed by RAPD markers // Genetic Resources and Crop Evolution. 1998. V.100. P. 1-6.

123. Ozkan H., Levy A.A., Feldman M. Alloploidy-induced rapid genome evolution in the wheat (Aegilops-Triticum) group // Plant Cell. 2001. V. 13. P. 1735-1747.

124. Pan Q., Wendel J., Fluhr R. Divergent evolution of plant NBS-LRR resistance gene homologues in Dicot and cereal genomes // J. Mol. Evol. 2000a. V. 50. P. 203-213.

125. Panstruga R., Buschges R., Piffanelli P., Schulze-Lefert P. A contiguous 60 Kb genomic stretch from barley reveals molecular evidence for gene islands in a monocot genome//Nucleic Acids Res. 1998. V. 26. P. 1056-1062.

126. Parniske M., Jones J.D.G. Recombination between diverged clusters of the tomato Cf-9 plant disease resistance gene family //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V. 96. P. 5850-5855.

127. Payne P.I., Holt L.M., Lawrence G.J., Law C.N. The genetics of gliadin and glutenin, the major storage proteins of the wheat endosperm // Qual. Plant. Food Hum. Nutr. 1982. V. 31. P. 229-241.

128. Percival J. Chromosome numbers in Aegilops // Nature. 1923. V. 3. P. 810.

129. Percival J. The morphology and cytology of some hybrids of Aegilops ovata L. x wheat//Journ. Genetics. 1926. V. 17. P. 49-68.

130. Pikaard C.S. Genomic change and gene silencing in polyploids // Trends Genet 2001. V. 17. P. 675-677.

131. Pogna N.E., Autran J.C., Mellini F., Lafiandra D., Feillet P. Chromosome IB-encoded gliadins and glutenin subunits in durum wheat: genetics and relationship to gluten strength II J. Cereal Sci. 1990. V. 11. P. 15-34.

132. Redaelli R., Pogna N.E., Dachkevitch Т., Cacciatori P., Biancardi A.M., Metakovsky E.V. Inheritance studies of the 1AS/1DS chromosome translocation in the bread-wheat variety Perzivan-I // J. Genet. Breed. 1992. V. 46. P. 253-262.

133. Reeves C.D., Okita T.W. Analyses of alpha/beta-gliadin genes from diploid and hexaploid wheats // Gene. 1987. V. 52. P. 257-266.

134. Reeves C.D., Okita T.W. Analyses of alpha/beta-type gliadin genes from diploid and hexaploid wheats // Gene. 1987. V. 52. P. 257-266.

135. Resta P., Zhang H.B., Dubkovsky J., Dvorak J. The origin of the genomes of Triticum biunciale, T. ovatum, T. neglectum, T. columnare, and T. rectum based on variation in repeated nucleotide sequences // Am. J. Bot. 1996. V. 83. P. 1556-1565.

136. Riely B.K., Martin G.B. Ancient origin of pathogen recognition specificity conferred by the tomato disease resistance gene Pto.ll Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. V.98(4). P.2059-2064.

137. Rodriguez-Quijano M., Carrillo J.M. Linkage map of prolamin loci GH-D4 and GH-D5 in hexaploid wheat//Plant Breed. 1996. V. 115. P. 189-191.

138. Rommens C.M., Kishore G.M. Exploiting the full potential of disease-resistance genes for agricultural use.//Curr. Opin. Biotechnol. 2000.V.11. P. 120-125.

139. Ronald P.C. Resistance gene evolution. // Curr. Opin. Plant Biol. 1998. V.l. P.294-298.

140. Sabelli P.A., Shewry P.R. Characterization and organization of gene families at the Gli-1 loci of bread and durum wheats by restriction fragment analysis // Theor. Appl." Genet. 1991. V. 83. P. 209-216.

141. Sandhu D., Champoux J.A., Bondareva S.N., Gill K.S. Identification and physical localization of useful genes and markers to a major gene-rich region on wheat group IS chromosomes // Genetics. 2001. V. 157. № 4. p. 1735-1747.

142. Sandhu D., Gill K.S. Gene-containing regions of wheat and the other grass genomes // Plant Physiol. 2002a. V. 128. P. 803-811.

143. Sandhu D., Gill K.S. Structural and functional organization of the 'ISO.8 gene-rich region in the Triticeae И Plant Mol. Biol. 2002b. V. 48. P. 791-804.

144. Sapirstein, H. D., and Bushuk, W. Computer-aided analysis of gliadin eleetrophoregrams. I. Improvement of precision of relative mobility determination by using a three reference band standardization // Cereal Chem. 1985. V. 62. P. 372-377.

145. Sax K., Sax H.J. 1924. Chromosome behavior in a genus cross // Genetics. V.9. P. 454-464.

146. Schranz M.E., Osborn T.C. Novel flowering time variation in the resynthesized polyploid Brassica napus II J. Hered. 2000. V. 91. P. 242-246.

147. Sears E.R. Chromosome pairing and fertility in hybrids and amphidiploids in the Triticinae //Missouri Agr. Exp. Sta. Res. Bull. 1941. 337. 20pp.

148. Sears E.R. The cytology and genetics of the wheatsand their relatives // Advances in Genetics. 1948. V. 2. P. 239-270.

149. Sears E.R. The aneuploids of common wheat // Missouri Agr. Exp. Sta. Res. Bull. 1954. 572. 59p.

150. Shaked H., Kashkush K., Ozkan H., Feldman M., Levy-A.A. Sequence elimination and cytosine methylation are rapid and reproducible responses of the genome to wide hybridization and allopolyploidy in wheat//Plant Cell. 2001. V. 13. P. 1749-1759.

151. Shewry P.R., Napier J.A., Tatham A.S. Seed Storage Proteins: Structures and Biosynthesis // The Plant Cell. 1995. V. 7. P. 945-956.

152. Shewry P.R., Tatham A.S. The prolamin storage proteins of cereal seeds: structure and evolution// Biochem J. 1990. V. 1;267(1). P. 1-12.

153. Shewry P.R. Plant storage proteins // Biol. Rev. 1995.V. 70. P. 375-426.

154. Shirasu K., Lahaye Т., Tan M.-W., Zhou F., Azevedo C., Schulze-Lefert P. A novel class of eucaryotic zinc-binding proteins is required for desease resistance signaling in barley and development in C. Elegans II Cell. 1999. V. 99. P. 355-366.

155. Sneath P.H., Sokal R.R. Numerical taxonomy. W.H. Freedman & Co. San Francisco. 1973. 573pp.

156. Sollid L. M. Coeliac disease: dissecting a complex inflammatory disorder. Nature Reviews Immunology // 2002. V. 2. P. 647-655.

157. Soltis P.S., Soltis D.E. The role of genetic and genomic attributes in the success of polyploids // Protc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. V. 97. P. 7051-7057.

158. Song W.-Y., Wang G.-L., Chen L.-L., Kim H.-S., Pi L.-Y. A receptor kinase-like protein encoded by the rice disease resistance gene, Xa21 II Science. 1995. V. 270. P. 1804-1806.

159. Stebbins G.L. Variation and evolution in plants. Columbia University Press, New York. 1950.

160. Stebbins G.L. Taxonomy and evolution of genera, with special reference to the family Gramineae И Evolution. 1956. V. 10. P. 235-245.

161. Stebbins G.L. 1971. Chromosomal evolution in higher plant. Edward Arnold (Publisher) Ltd., London.

162. Swofford D.L. PAUP*. Phylogenetic Analysis Using Parsimony (*and Other Methods). Version 4. Sinauer Associates, Sunderland, Massachusetts. 2000.

163. Talbert L.E., Smith L.Y., Blake N.K. More than one origin of hexaploid wheat is indicated by sequence comparison of low-copy DNA // Genome. 1998. V. 41. P. 402-407.

164. Tanaka M. A new amphiploid from the hybrid Ae. sharonensis x Ae. umbellulata II Wheat Inf. Serv. 1955. V. 2. P. 8-10.

165. Tatham A.S., and Shewry P.R. The S-poor prolamins of wheat, barley and rye // J. Cereal Sci. 1995. V. 22. P. 1-16.

166. Tatham A.S., Field J.M., Smith J.S., Shewry P.R. The conformation of wheat gluten proteins. II. Aggregated gliadins and low molecular weight subunits of glutenin // J. Cereal Sci. 1987. V. 5. P. 203-214.

167. Tatham A.S., Masson P., Popineau, Y. Conformational studies of peptides derived by enzymatic hydrolysis of alpha-type gliadin // J. Cereal Sci. 1990a. V. 11. P. 1-13.

168. Tatham A.S., Shewry P.R., Belton, P. S. Structural studies of cereal prolamins, including wheat gluten // In: Advances in Cereal Sciences and Technology. Vol. X. Y. Pomeranz, ed. Am. Assoc. Cereal Chern.: St Paul, MN. 1990b. P. 1-78.

169. Tikhonov A.P., SanMiguel P.J., Nakajima Y., Gorenstein N.M., Bennetzen J.L., Avramova Z. Colinearity and its exceptions in orthologous adh regions of maize and sorghum// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V. 96. № 13. P. 7409-7414.

170. Tsuchiya T. Hybrids between Aegilops triaristata (4x) and A. comosa, heldreichii and uniaristata II Wheat Information Service. 1956. V. 3. P. 22-23.

171. Vanichanon, N.K. Blake, J.D. Sherman, L.E. Talbert. Multiple origins of allopolyploid Aegilops triuncialis //Theor. Appl. Genet. 2003. V. 106. P. 804-810.

172. Vardi A. Introgression between different ploidy levels in the wheat group // Proc. 4th. Int. Wheat Genet. Symp. Columbia, Mo. 1973. P. 131-141.

173. Waines J.G., Barnhart D. Biosystematic research in Aegilops and Triticum II Hereditas. 1992. V. 116. P. 207-212.

174. Wang J.-B., Wang C., Shi S.-H. and Zhong Y. Evolution of parental ITS regions of nuclear rDNA in allopolyploid Aegilops (Poaceae) species // Hereditas. 2000. V.133. P.l-7.

175. Wendel J.F. Genome evolution in polyploids // Plant Mol. Biol. 2000. V. 42. P. 225-249.

176. Wheat Genetics Resource Center Kansas State University, http://www.ksu.edu/

177. Whitham S., Dinesh-Kumar S.P., Choi D., Hehl R., Corr., Baker B. The product of the tobacco mosaic virus resistance gene N: similaryti to Toll and the interleukin-1 receptor//Cell. 1994. V.78 (6). P. 1011-1015.

178. Williamson V. M. Plant nematode resistance genes // Curr. Opin. Plant Biol. 1999. V. 2. №4. P. 327-331.de Wit PJ, Joosten MH. Avirulence and resistance genes in the Cladosporium fulvum-tomato interaction // Curr. Opin. Microbiol. 1999. V. 2. P. 368-73.

179. Witcombe J.R. A guide to the species of Aegilops L.: their taxonomy, morphology, and distribution // International Board for Plant Genetic Resources (1PGRI), Rome, Italy. 1983.74 pp.

180. Wrigley C.W. Protein mapping by combined gel electrofocusing and electrophoresis: Application to the study of genotypic variations in wheat gliadins // Biochem. Genet. 1970. V. 4. P. 509-516.

181. Wrigley C.W., Shepherd K.W. Electrofocusing of grain proteins from wheat genotypes //Ann. New York Acad. Sci. 1973. V. 209. P. 154-162.

182. Wrigley C.W., Lawrence G.J., Shepherd K.W. Association of glutenin subunits with gliadin composition and grain quality in wheat // Aust. J. Plant Physiol. 1982. V. 9. P. 15-30.

183. Wrigley C.W., Bietz J.A. Proteins and amino acids // In Y. Pomeranz (ed.). Wheat: Chemistry and Technology. St. Paul, MN. 1988. V. 1. P. 159-275.

184. Wrigley C.W., Bushuk W., Gupta R. Nomenclature: establishing a common gluten language // In: Gluten 96. C. W. Wrigley, ed. RACI: Melbourne, Australia. 1996a. P. 403-407

185. Yoshimura S., Yamanouchi U., Katayose Y., Toki S., Wang Z.-X. Expression of Xal, a bacterial blightresistance gene in rice, is induced by bacterial inoculation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. V. 5. P. 1663-1668.

186. Young N.D. The genetic architecture of resistance // Curr. Opin. Plant Biol. 2000. V.3. P. 285-290.

187. Zang W., Qu L.-J., Gu H., Gao W., Liu M., Chen J., Chen Z. Studies on the origin and evolution of tetraploid wheats based on the internal transcribed spacer (ITS) sequences of nuclear ribosomal DNA // Theor. Appl. Genet. 2002. V. 104. P. 1099-1106.

188. Zhang H.-B., Dvorak J. Waines J.G. Diploid ancestry and evolution of Triticum kotschyi and T. peregrinum examined using variation in repeated nucleotide sequences // Genome. 1992. V. 35. P. 182-191.

189. Zhang H-B., J. Dvorak. The genome origin and evolution of hexaploid Triticum crassum and Triticum syriacum determined from variation in repeated nucleotide sequences// Genome. 1992. V.35. P.806-814.

190. Zohary D. and Feldman M. Hybridization between amphidiploids and the evolution of polyploids in the wheat (Aegilops-Triticum) group // Evolution. 1962. V. 16. P. 44-61.

191. Бадаева E. Д.,. Чикида II. H,. Филатенко А. А,. Зеленин А. В. Сравнительный анализ хромосом М-геномов Aegilops comosa и Ae. heldreichii методами C-дифференциального окрашивания и гибридизации in situ II Генетика. 1999. Т. 35. № 6. С. 791-799.

192. Бойко Е.В., Бадаев Н.С., Максимов Н.Г., Зеленин А.В. Закономерности становления и организации генома злаков. 1. Изменение количества ДНК при аллополиплоидии // Генетика. 1988. Т. 24. № 1. С. 89-97.

193. Вавилов Н.И. Центры происхождения культурных растений // Тр. по прикл. ботан. и селекции. 1926. Т. 16. Вып. 2.

194. Вавилов Н.И. Пять континентов. Ленинград Наука. 1987. 213 с.

195. Горюнова С.В., Кочиева Е.З., Чикида Н.Н, Пухальский В.А. 2004. RAPD анализ внутривидовой изменчивости и филогеиетических связей видов эгилопса {Aegilops L.), содержащих D геном // Генетика. Т. 40. С. 515-523.

196. Грант В. Видообразование у растений. 1984. Москва. "Мир". 528 с.

197. Дорохов Д.Б., Клоке Э. Быстрая и экономичная технология RAPD-анализа растительных геномов // Генетика. 1997. Т.ЗЗ. С.476-483.

198. Жуковский П. М. Критико-систематический обзор видов рода Aegilops L. // Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. Бюллетень прикладной ботаники, генетики и селекции растений. 1928. Т. 18 (1): 417-607.

199. Жуковский П.М. Культурные растения и их сородичи. Ленинград. Колос. 1971. С.122-130.

200. Кочиева Е.З., Горюнова С.В., Поморцев А.А. RAPD маркирование геномов представителей рода Hordeum II Генетика. 2001. Т.37. № 8. С. 1088-1094.

201. Кочиева Е.З., Супрунова Т.П., Семенова С.К. Использование RAPD -анализа для идентификации сортов баклажана {Solarium melongena) // Генетика. 1999. Т.35. №8. С.1165-1168.

202. Лукьянова М.В., Трофимовская А.Я., Гудкова Г.Н. и др. Культурная флора СССР. Т.2. 4.2. Ячмень. Л.:Агропромиздат, 1990

203. Оганисян А.С., Кочиева Е.З., Рысков А.П. Маркирование видов и сортов картофеля с помощью метода RAPD-PCR.// Генетика. 1996. Т.32. № 3. С. 448-451.

204. Осборн Т.Б. Растительные белки. М.-Л. Биохимгиз. 1935. 220 с.

205. Рыжова Н.Н., Горюнова С.В., Томилов А.А., Кочиева Е.З. 2002. Выявление двух типов внутренних транскрибируемых спейсеров (ITS) рДНК в геноме представителей рода Capsicum // Доклады Академии Наук. Т. 38. С. 282-285.

206. Саянова О.В. Нуклеотидная последовательность и структурная организация генов С-гордеинов ячменя. Дисс. канд. биол. наук. Москва. 1992.

207. Саянова О.В., Мехедов С.Л., Желнин Л.Г., Хохлова Т.А., Ананьев Е.В. Нуклеотидная последовательность гена С-гордеина ячменя // Генетика. 1993. Т. 29. №7. С. 1070-1079.

208. Сеитова A.M. Генетическая стабильность блоков компонентов глиадина и их использование для анализа сорта мягкой пшеницы Богарная 56. Дисс. канд. биол.наук. Москва. 1988.

209. Семнхов В. Ф. Роль проламннов в эволюции злаков // Ботанический журнал. 1980. №12, 1766-1771.

210. Семихов В.Ф. Белковые комплексы семян и филогенетическое положение трибы Andropogoneae // Биохимия и филогения растений. Москва. 1972.

211. Сеньянинова-Корчагина М.В. Карио-систематическое исследование рода Aegilops L. // Бюллетень прикладной ботаники, генетики и селекции растений. 1932. Сер. 2. Т. 1.С. 1-90.

212. Собко Т.А., Попереля Ф.А., Рыбалка А.И., Созинов А.А. Наследование и картирование генов, кодирующих синтез запасных белков в хромосоме IA мягкой пшеницы // Цит. и генетика. 1986. Т. 20. № 5. С. 372-376.

213. Созинов А.А. Полиморфизм белков и его значение для генетики и селекции // Вестник АН СССР. 1982. № 11. С. 18-29.

214. Созинов А.А. Попереля Ф.А. Полиморфизм проламинов и селекция // Вестн. с/х науки. 1979. № 10. С. 21-34.

215. Созинов А.А., Попереля Ф.А., Парфентьев М.Г. О наследовании некоторых фракций спирторастворимого белка при гибридизации пшениц // Научно-техн. бюлл. ВСГИ. 1970. Вып. 13. № 2. С. 4-38.

216. Созинов А.А., Попереля Ф.А., Стаканова А.И. Гибридологический анализ как метод изучения генетических закономерностей биосинтеза глиадина // Научно-техн. бюлл. ВСГИ. 1975. Вып. 42. № 24. С. 10-15.

217. Сорокина О.Н. О хромосомах видов Aegilops II Бюллетень прикладной ботаники, генетики и селекции растений. 1928. Т. 19. № 2. С. 523-532.

218. Упелниек В.П. Анализ спонтанной и индуцированной изменчивости компонентного состава запасных белков яровой мягкой пшеницы. Дисс. канд. биол. наук. Москва. 1994. 137 с.

219. Цвелев Н. Н. Система злаков (Poaceae) и их эволюция. Комаровские чтения, XXXVII. Л. Наука. 1987. 75с.

220. Цвелев Н.Н. Гибридизация как один из факторов увеличения биологического разнообразия и геномный критерий родов у высших растений // Биологическое разнообразие: подходы к сохранению. СПб. 1992. С. 193-201.

221. Цвелев Н.Н. О возможности деспециализации путем гибридогенеза на примере эволюции трибы Triticeae Dum. семейства злаков (Poaceae) II Журн. Общ. Биологии. 1975. Т. 36. №1. С. 90-99.

222. Цвелев Н.Н. О значении степени специализации таксонов для их дальнейшей эволюции // Бюл. МОИП. 1973. Т. 78. №> 2. С. 71-81.

223. Цвелев Н.Н. Об объеме и номенклатуре некоторых родов сосудистых растений Европейской России // Бот. Журн. 1999. Т. 84. № 7. С. 109-118.

224. Цвелев Н.Н. Злаки СССР. Л. Наука. 1976. 788с.trfrtrO'ly,p'S»'!f'* f S* • if i! m У or t i № v W tr

225. Ф ' О I- O r- » Ш- " Dj I ЧГ iffв > О « n » fl О О О I < • ' «о « О i • • < i « ri Л чт if> л ш л in bi Л 4 ji I ш га я J' I» л i й л J л> * » Г ¥ » » ► * f•u.w 'Ч'ич-О'И-и1 u^ t>io v о а*u' *4j р k ^ рн^грт^ ь ь f-t ». "ifc

226. J Ijjj ОО в .о В>Р. О* 0 0"СГ « о о tr.'o О ог г,z1. ГГ5Г s г г г у F J ,v • -щ*г гtp с «г IT tr rr erл ч • • - - ■ ■ ■ . * . . • г

227. ADnnf Й • > irt О О О • > > I О «-ЧО ■ I ■ I ■ I I» П Л 'i

228. ЗмчтийЯЛйвВЛЛ^пв в в л ^ » л ® л a А

229. И. • Hv , Н V■ И ь н, к Vliit^^i^^^^Eieи 1/и о; о О- u:i(j-0:utj-o-o tt.Or.u, U4WJ. o.'U О' o^trra^

230. U UUUkr<>-itfo tWo. йЖ^ШШШЩifttiiU!

Информация о работе

Горюнова, Светлана Валерьевна
кандидата биологических наук
Москва, 2005
ВАК 03.00.15

Диссертация

Молекулярно-генетический анализ полиморфизма рода Aegilops L. - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно