Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярно-генетические основы болезни Паркинсона

ВАК РФ 03.01.07, Молекулярная генетика

Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-генетические основы болезни Паркинсона"

Шадрина Мария Игоревна

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА

03.01.07 - Молекулярная генетика

автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

МОСКВА-2011

2 9 СЕН 2011

4854965

Работа выполнена в Отделе молекулярных основ генетики человека Учреждения Российской академии наук Института молекулярной генетики РАН

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор

Петр Андреевич Сломинский

Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной генетики РАН

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Виктор Алексеевич Спицын

Учреждение Российской академии медицинских наук Медико-генетический научный центр РАМН

доктор биологических наук, профессор Ольга Олеговна Фаворова

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова Минздравсоцразвития России

доктор биологических наук, профессор Валерий Вячеславович Носиков Учреждение Российской академии наук Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН

Ведущая организация: Учреждение Российской академии наук Институт

биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН

Защита диссертации состоится « 2011 г. в ^^ часов

на заседании Диссертационного совета Д.002.37.01 при Учреждении Российской академии наук Институте биологии гена РАН по адресу: 119334, Россия, Москва, ул. Вавилова, д.34/5.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Учреждения Российской академии наук Института молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН по адресу: 119991, г. Москва, ул. Вавилова, д. 32.

Автореферат разослан «

-/£» 2011 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук чг^ч/Л ^Л.С^ Грабовская

Общая характеристика работ

Актуальность проблемы

Изучение структурно-функциональной организации генома человека -одна из центральных проблем в современной биологии. В рамках этой проблемы решаются важнейшие задачи, связанные с анализом процессов реализации генетической информации на всех уровнях биологической организации - от отдельной клетки до целостного организма. При этом будет выяснена функция отдельных генов, генных сообществ и генома в целом в жизнедеятельности организма на всех этапах онтогенеза. Для получения максимально полной информации требуется выяснение роли отдельных элементов генома как в норме, так и при развитии патологических процессов -как моногенных, так и сложных многофакторных заболеваний. Анализ патологических процессов позволит связать воедино генетические и эпигенетические факторы, влияющие на функционирование организма в различных условиях.

Одними из наиболее актуальных заболеваний являются болезни центральной нервной системы, так как они затрагивают функционирование основных регуляторных систем организма. Среди этих болезней отдельную большую группу составляют нейродегенеративные заболевания, которые характеризуются избирательной дегенерацией отдельных типов нейронов и структур мозга. Одним из таких заболеваний является болезнь Паркинсона -многофакторное заболевание с выраженным генетическим компонентом, для которого характерно существование как семейных, так и спорадических форм. Болезнь Паркинсона относится к числу самых частых нейродегенеративных заболеваний человека. По последним данным, болезнью Паркинсона по всему миру болеет около 6 млн. человек. Считается, что болезнь Паркинсона наблюдается у не менее 1-2% населения в возрасте старше 65 лет и не менее 45% в возрасте старше 85 лет. В последнее время наблюдается рост числа больных идиопатическим паркинсонизмом и снижение возраста начала заболевания.

Высказывается предположение, что с увеличением среднего возраста населения в ближайшие годы распространенность болезни Паркинсона в мире будет увеличиваться.

Изучение этого заболевания активно ведется уже на протяжении ста лет. Многолетние исследования позволили достаточно полно описать болезнь Паркинсона с клинической точки зрения. Выявлено большое количество форм и стадий болезни Паркинсона, которые указывают на то, что при заболевании задействованы разные отделы нервной системы и в его патогенез вовлечено большое число различных процессов, обеспечивающих нормальное функционирование нервных клеток. Достаточно полно охарактеризована болезнь Паркинсона с точки зрения нейропатологии. Показано, что нейродегенеративные изменения при болезни Паркинсона связаны с избирательной гибелью различных типов нейронов. В первую очередь наблюдается уменьшение числа дофаминергических нейронов в компактной части черной субстанции, базальных ядрах, покрышке среднего мозга. Установлено, что характерные для болезни Паркинсона клинические признаки проявляются при гибели приблизительно 60% дофаминергических нейронов компактной части черной субстанции и 80%-ном снижении уровня дофамина в полосатом теле. В то же время, несмотря на интенсивные молекулярно-биологические исследования, причины развития заболевания остаются до конца не выясненными. На сегодняшний день выявлено семь генов (БЫСА, РАЖ2, итК2, РМК1, ОЛ, иСНЫ, АТР13А2), вовлеченных в патогенез семейной формы болезни Паркинсона. Однако их вклад в развитие спорадической формы заболевания остается не известным. Кроме того, выявлен ряд потенциальных генов-кандидатов, связанных с развитием спорадической формы болезни Паркинсона.

Анализ кодируемых этими генами белков позволил предложить несколько механизмов, объясняющих причины селективной и прогрессирующей гибели дофаминергических нейронов. К ним в первую очередь относятся процессы,

связанные с митохондриальной дисфункцией, убиквитин-зависимой протеасомной дефадацией белков, дифференцировкой дофаминергических нейронов, функционированием синапсов и лизосом, обменом дофамина.

В целом же до сих пор нет единой картины этиопатогенеза данного заболевания. В связи с этим дальнейшее изучение болезни Паркинсона на различных уровнях крайне актуально. Необходимо проводить анализ заболевания с генетических позиций, выявляя новые гены, различные мутации и полиморфные варианты, приводящие к семейной и влияющие на риск развития спорадической форм заболевания. Важным направлением является изучение изменения транскриптома при болезни Паркинсона, в первую очередь, на ранних стадиях патологического процесса. Это позволит выявить механизмы, запускающие нейродегенеративные процессы. Моделирование болезни Паркинсона на животных также поможет лучше понять причины развития болезни Паркинсона. Проведение такого рода работ позволит в будущем выстроить целостную картину всех молекулярно-генетических процессов, задействованных в патогенезе заболевания, и, следовательно, лучше понять механизмы функционирования, как отдельных нейронов, так и всей нервной системы человека в целом.

Выявление механизмов и генов, вовлеченных в патогенез болезни Паркинсона на разных стадиях заболевания, поможет также разработать методы его доклинической диагностики. Это даст возможность начать разработку принципов и подходов к профилактическому лечению на ранних стадиях заболевания, когда процессы дегенерации дофаминергических нейронов затронули лишь ограниченное число клеток. Цель и задачи исследования

Основной целью данной работы было изучение роли генетических факторов в патогенезе спорадической формы болезни Паркинсона и выявление новых геномных и транскриптомных маркеров данного заболевания.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработка быстрого и эффективного метода анализа дозы отдельных экзонов гена PARK2 и гена SNCA на основе ПЦР в реальном времени.

2. Анализ мутаций с изменением копийности в генах PARK2 и SNCA у пациентов с болезнью Паркинсона.

3. Изучение роли точковых мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов в генах, вовлеченных в патогенез болезни Паркинсона, в развитии спорадической формы заболевания.

4. Поиск новых ДНК маркеров спорадической формы болезни Паркинсона.

5. Изучение изменения транскриптома в процессе развития токсической модели болезни Паркинсона, вызванной введением 6-гидроксидофамина.

6. Изучение изменения транскриптома в клетках периферической крови пациентов с болезнью Паркинсона, находящихся на ранних стадиях заболевания.

Научная новизна и практическая значимость работы

Разработан быстрый и эффективный метод выявления делеций и дупликаций экзонов 1-12 в гене PARK2 и мультипликаций гена SNCA на основе ПЦР в реальном времени и технологии TaqMan. Данный метод пригоден для массового скрининга больных на мутации с изменением копийности в генах PARK2 и SNCA.

При проведении анализа мутаций с изменением копийности в генах PARK2 и SNCA впервые было показано, что делеции и дупликации экзонов гена PARK2 вносят существенный вклад в развитие спорадической формы болезни Паркинсона в российской популяции. Обнаружено, что у людей, имеющих делеции и дупликации, риск развития заболевания повышен в 8,53 раза (95%ДИ=1,14-63,52; р=0,0095) Вероятность развития спорадической формы болезни Паркинсона в раннем возрасте у людей, имеющих мутации с изменением копийности экзонов гена PARK2, повышена в 13,95 раза (95%ДИ=1,85-105,96; р=0,0004). Получено подтверждение гипотезы о том, что

данный тип мутаций в гене PARK2 в гетерозиготном состоянии влияет на риск развития заболевания.

Впервые установлено, ген PARK2 отвечает за часть фенотипической вариабельности болезни Паркинсона в российской популяции. Показано, что наличие делеций и/или дупликаций экзонов в гене PARK2 способствует существенному снижению возраста клинического дебюта болезни Паркинсона (на 9 лет), развитию дистонии и симметричному протеканию заболевания.

Впервые обнаружено, что ген РОМС вовлечен в патогенез болезни Паркинсона. Показано, что наличие аллеля Т по полиморфизмам rs28930368 и rs2071345 гена РОМС повышает риск развития заболевания в 5,01 раза (95%ДИ=1,05-23,83; р=0,03) и приводит к развитию клинического фенотипа с преобладанием мышечной ригидности.

Впервые показано, что ген WFS1 вовлечен в патогенез болезни Паркинсона. Обнаружено, что наличие аллеля Т по полиморфизму rsl801211 гена WFSI повышает риск развития заболевания в 2,34 раза (95%ДИ=1,29-4,24; р=0,005).

Впервые выявлена ассоциация полиморфизма rs2736990 (С/Т), в гене SNCA с риском развития спорадической формы болезни Паркинсона для российской популяции. Показано, что носительство аллеля С по данному полиморфизму повышает риск развития болезни Паркинсона в 1,75 (95%ДИ= 1,19-2,58; р=0,004).

Выявленные нами мутации и однонуклеотидные полиморфизмы в генах PARK2, SNCA, РОМС и WFS1 в дальнейшем могут быть включены в панель маркеров для определения индивидуального риска развития болезни Паркинсона.

Впервые проведено изучение относительных уровней экспрессии генов GSK3B, SNCA, ST13 в периферической крови больных на ранних стадиях развития болезни Паркинсона и показано, что изменение уровня мРНК каждого гена в отдельности не является специфичным для этого заболевания. В то же

время совместный анализ относительных уровней экспрессии генов GSK3B, SNCA, ST13 выявил разные паттерны уровней их мРНК в периферической крови пациентов с болезнью Паркинсона, больных церебральным атеросклерозом и у группы пациентов с различными неврологическими заболеваниями. Это говорит о специфическом системном ответе организма на ранних стадиях патологического процесса при болезни Паркинсона. Кроме того, полученные данные указывают на то, что изменения экспрессии генов GSK3B, SNCA, ST13 по отдельности не могут служить биомаркерами для ранних стадий болезни Паркинсона. Однако эти данные позволяют предположить, что совместный анализ количества транскриптов генов GSK3B, SNCA, ST13, а также других генов, вовлечённых в патогенез БП, в дальнейшем могут стать основой для создания панели маркеров для диагностики этого заболевания на досимптоматической стадии. Публикации

По материалам диссертации опубликовано 36 печатных работ, из них 20 статей, 2 главы из книг, 1 патент и 13 сообщений в материалах тезисов научных конференций и симпозиумов. Апробация диссертации

Результаты, полученные в данной работе, были представлены на следующих конференциях и конгрессах: XV International Congress of Neuropathology (15-18 September 2003, Turin, Italy), IX International Symposium on Mutations in the Genome (23-27 September 2007, Xiamen, China), конференции Европейского Общества Генетики человека (ESHG) в 2006, 2007 и 2009 гг., IV съезд Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (11-15 мая 2008 г., Новосибирск, Россия), VII Международная конференция «Молекулярная генетика соматических клеток» (22-25 октября 2009г., Звенигород, Россия), VI Съезд Российского общества медицинских генетиков (14-18 мая 2010г., Ростов-на-Дону, Россия), XXI съезд физиологического общества им. И.П. Павлова (19-25 сентября 2010 г., Калуга, Россия), The Second

World Parkinson Congress (28 September - 1 October 2010, Glasgow, UK), II Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» (17-19 мая 2011 г., Курск, Россия), Седьмой Международный Междисциплинарный Конгресс «Нейронаука для медицины и психологии» (3-13 июня 2011 г., Судак, Крым, Украина). Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседании Ученого совета учреждения Российской академии наук Института молекулярной генетики РАН 30 мая 2011 г. и на совместном заседании межинститутского семинара "Хромосома" и экспертной комиссии Диссертационного совета Д002.037.01 при Учреждении Российской академии наук Институте биологии гена РАН (ИБГ РАН) 28 июня 2011 г Структура и объем диссертации

Диссертация включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты и обсуждение; заключение; выводы; библиографический указатель. Список литературы состоит из 595 источников, среди которых 23 источников отечественной и 572 источников зарубежной литературы. Материалы диссертации изложены на 288 страницах машинописного текста, содержат 31 таблицу и 27 рисунков.

Содержание работы.

Результаты исследования

Анализ вклада мутаций с изменением копийности в генах PARK2 и SNCA в патогенез болезни Паркинсона у больных из России.

Подбор праймеров и оптимизация метода анализа дозы отдельных экзонов генов PARK2 и SNCA.

Для определения дозы отдельных экзонов генов PARK2 и SNCA нами был выбран метод ПЦР в реальном времени с использованием TaqMan зондов. Использование TaqMan зондов позволяет проводить совместную амплификацию исследуемого и референсного генов, что значительно повышает точность и скорость анализа. Для проведения ПЦР анализа были подобраны

комбинации праймер-зонд для 1-12 экзонов гена PARK2 и 4-6 экзонов гена SNCA. Для определения числа копий экзонов генов PARK2 и SNCA использовались известные диапазоны значений коэффициента R, подтверждение которых было получено нами при анализе ДНК контроля и больных ювенильным паркинсонизмом с типированными ранее гетерозиготными делециями экзонов гена PARK2 [Illarioshkin et al., 2003].

Предложенный нами вариант быстрой диагностики делеций и дупликаций отдельных экзонов гена PARK2 и мультипликаций гена SNCA ранее описан не был. ПЦР в реальном времени на основе технологии TaqMan обладает целым рядом преимуществ перед другими имеющимися методами. Совместная амплификация отдельных экзонов гена PARK2/SNCA с геном НВВ, используемым в качестве референсного гена, и оценка количества ДНК с помощью метода второй производной, учитывающей эффективность реакции, значительно повышают точность анализа и обеспечивают хорошую воспроизводимость результатов. Быстрота исполнения, точность в определении числа копий экзонов, относительно невысокая стоимость и безопасность данного метода делают возможным его применение для массового анализа больных.

Анализ делеций и дупликаций экзонов гена PARK2 в выборке спорадических больных болезнью Паркинсоиа.

С использованием разработанного нами метода были проанализированы больные со спорадической формой БП из России на наличие делеций и дупликаций экзонов в гене PARK2.

При анализе 170 спорадических больных БП с ранним началом развития заболевания (<45 лет) был выявлен 21 больной с делециями и дупликациями экзонов гена PARK2. Распределение выявленных нами делеций и дупликаций экзонов гена PARK2 представлено на рисунке 1А. Из представленных данных видно, что в рассматриваемой группе больных встречаются как делеции в гомозиготном и гетерозиготном состоянии, так и дупликации в гетерозиготном

состоянии. При этом были обнаружены делеции как единичных экзонов, так и групп экзонов гена PARK2.

KZH

KZHjHZHZHZHZOH

деления в гетерозиготном состоянии делецияв гомозиготном состоянии дупликация

Рисунок 1. Распределение делецнй и дупликаций в гене PARK2 у спорадических больных БП из России с ранним (А) и поздним (Б) началом развития заболевания.

При анализе 183 больных БП с поздним началом развития заболевания (>45 лет) были выявлены только делеции гена PARK2 в гетерозиготном

11

состоянии у 7 больных. При этом были обнаружены делеции как отдельных экзонов, так и делеции групп экзонов гена PARK2. Распределение выявленных нами мутаций представлено на рисунке 1Б.

Необходимо отметить, что с помощью нашего метода на основе TaqMan ПЦР в реальном времени нельзя напрямую определить - являются ли делеции групп экзонов в гетерозиготном состоянии протяженными делениями, затрагивающими одну хромосому, или сложными компаундными делециями. Такая оценка с использованием разработанного нами метода возможна лишь при совместном анализе больных и их близких родственников.

К сожалению, в нашем случае ДНК близких родственников больных была недоступна. К тому же необходимо подчеркнуть, что в данном исследовании нас интересовала, в первую очередь, оценка частоты больных с делециями и дупликациями экзонов гена PARK2, а не точная характеристика мутаций в каждом конкретном случае.

На следующем этапе была проанализирована частота больных с делециями и/или дупликациями экзонов (мутаций с изменением копийности экзонов) гена PARK2 в выборке спорадических больных из России. Частота больных, носителей мутаций с изменением копийности экзонов гена PARK2, в общей выборке составила 7,9 % (28 больных из 353). Наиболее часто пациенты с такими мутациями встречались в группе спорадических больных с ранним началом развития заболевания. Частота больных, имеющих мутации с изменением копийности в гене PARK2, составила 12,4 % (21 больной из 170), что значительно превышает частоты таких больных в большинстве популяций мира. Так, частота спорадических больных с ранним началом развития БП с делециями и/или дупликациями экзонов гена PARK2 в популяциях из Европы составляет от 1,3% (Сербия) до 5,5% (Италия) и 6% (Германия).

В то же время нами было обнаружено, что частота пациентов, носителей мутаций с изменением копийности, в группе спорадических больных с поздним началом развития БП значительно ниже, чем в группе больных с ранним

началом развития заболевания, и составляет 3,8% (7 больных из 183). Это значение оказалось сравнимо со значением, полученным в другом исследовании нашей лаборатории [Сломинский и др., 2003]. В этом исследовании были проанализированы спорадические больные из Башкирии с поздним началом развития БП, частота больных с делециями в гетерозиготном состоянии составила 5,3%. Такая частота говорит о сопоставимости результатов исследования Сломинского и др. с нашими результатами. В мире мутации с изменением копийности в гене PARK2 при спорадической форме БП с поздним началом развития исследованы мало. В популяции из Индии делеций и дупликаций экзонов гена PARK2 при поздней спорадической форме БП обнаружено не было [Chaudhary et al., 2006]. В большинстве же популяций мира таких исследований не проводилось.

Далее нами был проведен более детальный анализ частоты делеций или дупликаций определенных экзонов. Более часто в выборке спорадических больных из России встречались делеции экзонов гена PARK2. Они были найдены у 25 пациентов (7%). При этом гетерозиготные делеции были выявлены у спорадических больных БП с ранним (15 пациентов) и поздним (7 пациентов) началом развития заболевания. Гомозиготные делеции были обнаружены только в группе спорадических больных БП с ранним началом развития заболевания у 2 пациентов. Дупликации экзонов гена PARK2 были обнаружены только в группе больных с ранним началом развития БП у 4 пациентов. В целом же частота спорадических больных БП, имеющих дупликации, в нашей выборке оказалась крайне низкой и составила 1%.

Среди мутаций с изменением копийности определенных экзонов в гене PARK2 у спорадических больных БП из России наиболее часто встречались изменения числа копий экзонов 3 и 4. В группе спорадических больных с ранним началом развития изменения копийности экзона 3 выявлены у 13 больных, экзона 4 - у 11 больных, делеции и дупликации других экзонов (экзоны 2, 5, 6, 7, 9, И, 12) найдены у 16 больных. В группе больных БП с

поздним началом развития заболевания изменения копийности экзона 3 выявлены у 2 больных, экзона 4 - у 3 больных, хотя явного преобладания частоты делеций какого-либо экзона гена PARK2 в данной группе больных не наблюдалось. Однако в целом у спорадических больных из России наиболее часто встречаются именно изменения копийности экзонов 3 и 4. Эти данные согласуются с данными Periquet и соавторов (2003), также показавших, что в гене PARK2 наиболее часто встречаются делеции экзонов 3 и 4 [Periquet et al., 2003].

Таким образом, полученные нами данные позволяют сделать вывод, что мутации с изменением копийности экзонов в гене PARK2 вносят существенный вклад в патогенез БП у спорадических больных из России, в особенности у больных с ранним началом развития заболевания. Наше исследование показало, что разработанный нами метод применим для быстрой и точной детекции экзонных перестроек в генах PARK2 и SNCA. Диагностику экзонных перестроек в гене PARK2 целесообразно начинать с анализа наиболее делетируемых экзонов, в первую очередь, с экзонов 3 и 4.

Анализ делеций и дупликаций экзонов гена PARK2 был также проведен у 100 индивидуумов из популяционной выборки. В результате у одного человека была выявлена гетерозиготная делеция экзона 7. Таким образом, частота лиц с мутациями с изменением копийности экзонов в гене PARK2 составила 1% (таблица 1).

Основываясь на данных, полученных в результате анализа выборки спорадических БП и популяционной выборки, были рассчитаны относительные шансы развития БП у людей с делециями и дупликациями экзонов гена PARK2 (таблица 1). Расчеты показали, что у людей, имеющих делеции и/или дупликации, риск развития БП повышен в 8,53 раза. В большинстве случае болезнь начнется в раннем возрасте (до 45 лет). У людей с делециями и/или дупликациями вероятность развития БП в раннем возрасте повышена в 13,95 раза (р=0,0004).

Таблица 1. Относительный шанс развития болезни Паркиисона у носителей делеций и

дупликаций экзонов гена PARK2 из России.

Наличие делеций и дупликаций (N(%)) Отсутствие делеций и дупликаций (N(%)) Отношение шансов (95% доверительный интервал (ДИ)) Р

Общая выборка спорадических больных 28 (7,9%) 325(92,1%) 8,53 (1,14-63,52) 0,0095

Группа больных с ранним началом развития 21 (12,4%) 149 (87,6%) 13,95 (1,85-105,96) 0,0004

Группа больных с поздним началом развития 7 (3,8%) 176 (96,2%) 3,94 (0,48-32,48) 0,27

Популяционная выборка 1 (1%) 99 (99%) - -

По результатам нашего исследования можно предположить, что делеции в гомозиготном и гетерозиготном состоянии в гене PARK2 приводят, преимущественно, к развитию ранней формы БП, в то время как к позднему развитию БП могут приводить только делеции в гетерозиготном состоянии. Эти результаты согласуются с предположением, выдвинутым Foroud и др. Оно заключается в том, что гомозиготность по мутациям в гене PARK2 приводит к развитию заболевания в раннем возрасте, тогда как гетерозиготность может приводить к развитию заболевания в позднем возрасте [Foroud et al.,2003].

Нами был проведен поиск корреляций между наличием делеций и/или дупликаций экзонов в гене PARK2 и клиническими характеристиками больных. Все спорадические больные из нашей выборки были оценены по следующим клиническим критериям: полу, возрасту клинического дебюта и клинической картине заболевания. Корреляционный анализ проводился с использованием ранговой корреляции по Спирмену. В выборке больных с ранним началом развития заболевания были выявлены корреляции между наличием делеций и/или дупликаций экзонов гена PARK2 и возрастом начала заболевания (R= -0,30; р<0,05) и развитием дистонии (R= -0,20; р<0,05). Более детальный анализ корреляции с возрастом начала БП показал, что средний возраст начала

15

заболевания у носителей делеций и/или дупликаций составляет 24±11 лет, в то время как средний возраст начала заболевания у людей с отсутствием мутаций подобного типа составляет 33±9 лет. Таким образом, показано, что носители делеций и/или дупликаций экзонов гена PARK2 заболевают в среднем на 9 лет раньше. Достоверность этой корреляции была подтверждена тестом по Манну-Уитни (р=0,000130). Кроме того, в выборке спорадических больных с ранней формой БП был проведен подробный анализ корреляции между наличием делеций/дупликаций экзонов гена PARK2 и развитием дистонии. Так, среди 21 больного, у которых были обнаружены делеции и дупликации в гене PARK2, было выявлено 8 больных с дистонией и 13 - без нее. Анализ 149 больных без делеций и дупликаций выявил 22 больных с наличием дистонии и 127 с ее отсутствием. В результате было показано, что наличие делеций и дупликаций способствует развитию дистонии (%2=7,79; р=0,0203).

Корреляционный анализ в выборке больных с поздним началом развития БП выявил только одну корреляцию между наличием делеций экзонов гена PARK2 и симметричным течением заболевания (R= -0,19; р<0,05). У всех 7 больных - носителей делеций в гене PARK2 наблюдалось симметричное течение заболевания, в то время как среди 176 больных без делеций в гене PARK2 было выявлено 89 больных с ассиметрией и 87 без нее. В результате было показано, что наличие делеций способствует симметричному развитию заболевания (%2=7,37; р=0,0251).

Таким образом, проведенный нами анализ показал, что делеции и дупликации экзонов гена PARK2 могут вносить существенный вклад в патогенез спорадической формы БП в российской популяции. Установлено, что ген PARK2 отвечает за часть фенотипической вариабельности БП в российской популяции.

Анализ дупликаций и трипликаций гена SNCA в выборке аутосомно-доминантных больных болезнью Паркинсона.

С использованием описанного нами метода ПЦР в реальном времени на основе технологии TaqMan проведен анализ 61 больного БП с аутосомно-

16

доминантным типом наследования, у которых наблюдались клинические

признаки, наиболее характерные для больных БП с мутациями в гене SNCA.

Для анализа дупликаций и трипликаций гена SNCA были проанализированы

экзоны 4, 5 и 6 на наличие изменения их копийности. При этом для всех трех

анализируемых экзонов получены значения коэффициента R, лежащие в

диапазоне от 0,7 до 1,3. Эти данные свидетельствуют об отсутствии

дупликаций и трипликаций в данных экзонах и, следовательно, отсутствии

дупликаций и трипликаций всего гена SNCA в исследуемой выборке. Наши

результаты согласуются с данными исследований, проведенных в США,

Германии и Португалии, не выявивших увеличения копий гена SNCA в семьях с

аутосомно-доминантной формой наследования БП [Bras et al., 2008; Gispert et

al., 2005; Johnson et al., 2004]. Более того, скрининг такого рода мутаций у

спорадических больных БП в различных популяциях также не выявил

носителей дупликаций и трипликаций гена SNCA [Bras et al., 2008; Johnson et

al., 2004; Hofer et al., 2005; Nishioka et al., 2006]. По всей видимости, мутации

такого типа чрезвычайно редки в нашей популяции, и можно предположить,

что дупликации и трипликации гена SNCA не вносят существенного вклада в

патогенез аутосомно-доминантной формы БП у больных из России. В связи с

этим, дальнейший анализ мультипликаций гена SNCA при спорадической

форме БП у больных из России не представляется целесообразным.

Анализ спектра точковых мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов в генах, вовлеченных в патогенез болезни Паркинсона, у больных из России. Анализ мутации G2019S в гене LRRK2 у больных болезнью Паркинсона.

Изучение спектра точковых мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов в генах, вовлеченных в патогенез БП, у больных из России был начат с анализа мутации G20I9S в гене LRRK2. Эта мутация является одной из восьми мутаций в гене LRRK2 с доказанной патогенетической значимостью. Кроме того, установлено, что мутация G2019S - самая часто встречающаяся мутация в гене LRRK2 и самая частая из всех точковых мутаций, описанных при БП. В связи с этим в первую очередь было интересно оценить вклад

именно этой мутации в патогенез БП у больных из России.

Исторически мутация С2019Б в гене ШШ2 была выявлена у больных с аутосомно-доминантной формой БП. Известно, что при семейных формах заболевания частота мутации 020198 может достигать 11,5%, в то время как у больных со спорадической формой заболевания ее частота не превышает 7% [Ропго й а1. 2005]. В связи с этим анализ частоты встречаемости данной мутаций у больных БП из России нами был начат с исследования группы больных с семейной формой заболевания.

Всего нами было проанализировано 13 больных с аутосомно-доминантной формой БП, у которых наблюдались клинические признаки, наиболее часто встречающиеся у больных БП с мутациями в гене 1ККК2. Был выявлен только один больной с анализируемой мутацией в гетерозиготном состоянии. Таким образом, частота мутации 020195 в гене И<ИК2 в данной группе больных с аутосомно-доминантной формой заболевания из России составляет 7,7%. Выявленная нами частота близка к частоте данной мутации у больных с семейной формой БП из популяций европейского происхождения, у которых её значение лежит в пределах от 2,8 до 11,6% [Ропго сХ а1. 2005; КасЬе^иБ е! а1., 2004]. Однако это значение может быть и несколько завышенным в виду очень небольшого числа проанализированных больных с семейной формой БП.

Далее был проведён анализ исследуемой мутации в выборке спорадических больных БП из России. В группе 170 спорадических больных с ранним началом развития было выявлено 2 (1,2%) пациента с мутацией 020198 в гетерозиготном состоянии. В группе 183 спорадических больных с поздним началом развития был обнаружен 1 (0,5%) пациент с мутацией 020198 в гетерозиготном состоянии. Таким образом, частота мутации 02019Б в общей выборке спорадических больных из России составляет 0,8%, и её значение соответствует частотам данной мутации в популяциях европейского

происхождения, значение которых находится в диапазоне от 0,6% до 4,6% [Berg et al„ 2005(b); Gilks et al., 2005].

Анализ точковых мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов в генах, вовлеченных в патогенез болезни Паркинсона, с помощью технологии ДНК-микрочипов.

Для более широкомасштабного анализа спектра точковых мутаций и полиморфизмов в генах, вовлеченных в патогенез БП, нами была использована ДНК чиповая технология (технология APEX). В результате были проанализированы 68 точковых мутаций и 29 однонуклеотидных полиморфизмов (ОНП) в генах PARK2, PARK7, LRRK2, PINK/, STH/Tau haplotype, МАРТ, UCHL1, NR4A2 (NURR1), PSEN1, SNCB. Необходимо отметить, что большинство мутаций и ОНП, представленных на чипе, располагается в генах PARK2 и LRRK2, что составляет соответственно более 58% и 19% от всех мутаций и ОНП на чипе. :

Данная часть работы проводилась на двух выборках пациентов с БП с ранним началом развития, поскольку считается, что именно у этой группы пациентов генетический фактор в развитии заболевания выражен сильнее. Именно поэтому в первую выборку вошёл 21 пациент с ювенильной- формой БП, наследуемой по аутосомно-рецессивному типу. Выбор этих пациентов для анализа точковых мутаций и ОНП объясняется большой представленностью на чипе точковых мутаций гене PARK2, которые приводят к развитию ювенильного паркинсонизма. Во вторую выборку вошёл 41 пациент со спорадической формой БП с ранним началом развития, поскольку предполагается, что мутации в гене PARK2 могут вносить большой вклад в патогенез заболевания у данных больных.

Из 68 изученных нами точковых мутаций мы обнаружили только три различных миссенс мутации в гетерозиготном состоянии в гене PARK2 у трёх различных пациентов со спорадической БП с ранним началом развития. Ранее было показано, что эти три миссенс мутации (MIL, A82G и C253Y) в гене PARK2 приводят в гомозиготном состоянии к развитию ювенильной формы БП

с наследованием по аутосомно-рецессивному типу [Hedrich et al., 2001; Oliveira et al., 2003; Rawal et al., 2003]. Частота проанализированных нами точковых мутаций в гене PARK2 у больных с БП из российской популяции составила 5%.

Согласно литературным данным, различные точковые мутации в гене PARK2 в разных популяциях (Польша, Италия, Турция, Бразилия, Куба, Северо-Западная Индия, Северная Америка, Австралия) приводят к развитию БП с ранним началом развития значительно реже, чем делеции и дупликации экзонов в этом гене. Кроме того, существует большое разнообразие точковых мутаций в гене PARK2, каждая из которых сама по себе встречается довольно редко [Abbas et al., 1999; Bertoli-Avella et al., 2005; Koziorowski et al., 2010; Sun et al., 2006; Vinish et al., 2010]. Таким образом, можно предположить, что для российской популяции характерна крайне высокая микрогетерогенность исследованных нами точковых мутаций, и для определения спектра мутаций в генах моногенных форм БП необходимо ресеквенирование экзонов генов моногенных форм БП и в первую очередь PARK2 и LRRK2. Подобная работа позволит установить характерный для российской популяции (или любой другой) профиль распределения точковых мутаций в генах моногенных форм БП у больных, как с семейной, так и со спорадической формой данного заболевания.

Нам также удалось выявить 12 ОНП (из 29 представленных на чипе) в генах PARK2, NR4A2, LRRK2 и PARK7. Для оценки возможного вклада выявленных нами ОНП в развитие БП мы провели сравнительный анализ распределения генотипов по этим ОНП в центрально-европейской популяции (данные по популяции CEU, central Europe, из проекта по картированию гаплотипов НарМар) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/) с полученными нами результатами, а также анализ с использованием более представительной выборки больных со спорадической формой БП и популяционного контроля. В результате ни для одного из выявленных нами ОНП не была обнаружена ассоциация с развитием БП в российской популяции.

Анализ дополнительных однонуклеотидных полиморфизмов в генах SNCA и МАРТ.

Согласно данным полногеномных исследований ассоциаций для двух генов - SNCA и МАРТ- были выявлены строгие ассоциации с БП практически во всех исследованиях [International Parkinson Disease Genomics Consortium, 2011]. В связи с этим, мы так же решили провести анализ ОНП расположенных в этих генах. Были выбраны по одному ОНП в гене SNCA и в гене WNT3, расположенном рядом с геном МАРТ, - rs2736990 и rs415430 соответственно [Simón-Sánchez et al., 2009]. Результаты, полученные нами в ходе этого этапа работы, представлены в таблице 2.

Таблица 2. Частоты аллелей и генотипов ОНП в генах SNCA н MAPTAVNT3.

Генотипы, % Отношение шансов (95% доверительный интервал (ди)) Р

.9а'с4 «2736990 сс СТ ТТ (СС+СТ)/ТТ

Спорадические больные с ранним началом развития БП 33,6% 44,3% 22,1% 1,77 (1,05-2,85) ... 0,03

Спорадические больные с поздним началом развития БП 20,8% 57,4% 21,8% 1,74(1,05-2,76) 0,01

Общая выборка спорадических больных БП 26,1% 51,9% 22,0% 1,75 (1,19-2,58) 0,004

Популяционная выборка 21,4% 45,6% 33,0% - -

МЛРТЛтТЗ гь 415430 АА AG GG (AA+AG)/GG

Спорадические больные с ранним началом развития БП 75,2% 24,1% 0,7% 0,19(0,008-4,87) 0,19

Спорадические больные с поздним началом развития БП 79,2% 19,7% 1,1% 0,16(0,008-3,39) 0,11

Общая выборка спорадических больных БП 77,5% 21,5% 1,0% 0,87(0,14-5,24) 0,87

Популяционная выборка 79,5% 20,5% 0% - -

Как видно из представленных данных, наличие аллеля С в ОНП ге2736990 в гене БМСА достоверно повышает риск развития БП. Таким образом, нам удалось показать чёткую ассоциацию полиморфизма гб2736990 в гене SNCA с риском развития спорадической формы БП в российской популяции. Мы получили соотношение шансов ОИ = 1,75 (ДИ95% = 1,19-2,58; р = 0,004), что отражает повышение риска развития БП у носителей аллеля С почти в два раза.

Наши данные также сопоставимы с результатами полногеномных исследований Simón-Sánchez и др. и Edwards и др. (OR = 1,29, р = 0,01; OR = 1,27, р = 6,17*10" 13 и OR= 1,23, р = 2,24x10"16), полученных на больших выборках пациентов с БП (более 2000 и 1700 человек, соответственно) [Edwards et al., 2010; 2009; Simón-Sánchez et al., 2009].

Поиск новых генов-кандидатов болезни Паркинсона с помощью технологии ДНК-микрочипов.

Как уже не раз говорилось выше, в большинстве случаев БП носит спорадический идиопатический характер. И одним из наиболее распространенных на сегодняшний день подходов для поиска новых генов и ДНК маркеров, влияющих на риск развития многофакторных заболеваний, является анализ ассоциаций с использованием чиповых технологий. При этом используются ДНК чипы, позволяющие анализировать, как полиморфные варианты в целом геноме, так полиморфные варианты в ограниченном числе генов, связанных с определенными метаболическими путями.

Для поиска новых генов-кандидатов и ДНК-маркеров, которые могут быть вовлечены в патогенез БП, нами был выбран чип, содержащий 50 ОНП в 19 генах, белки которых вовлечены в передачу нервного импульса (ССК, CCKAR, CCKBR, DRD1, DRD2, DRD3, DRD5, ТН, HTR1A, HTR1B, HTR2A, HTR2C, SLC6A4, ТРН1, OPRM1, OPRD1, РОМС, PENK, WFS1). Этот чип был выбран, так как для ряда генов, представленных на чипе, ранее была показана их возможная связь с БП [Bressman et al., 2003; Ritz et al., 2009; Ryoo et al., 1998].

Было проанализировано 97 пациентов со спорадической формой БП с поздним началом развития (средний возраст 60,1 ± 12,3 лет). В отобранную группу больных не включались больные с идентифицированными мутациями в генах PARK2 и LRRK2. Контрольную группу составили 100 индивидуумов из популяционной выборки, не страдающих неврологическими заболеваниями, соответствующих по полу, возрасту обследованной группе больных БП.

Распределение генотипов для всех исследованных полиморфизмов в популяционном контроле соответствовало равновесию Харди-Вайнберга. При анализе полученных результатов было обнаружено, что распределение генотипов и аллелей для 4 ОНП, расположенных в трех различных генах, отличается между выборкой спорадических больных БП и популяционным контролем (таблица 3).

Таблица 3. Частоты аллелей и генотипов ОНП в генах НТЯ2А, \VFSU РОМС

Генотипы, % Отношение шансов (95% доверительный интервал (ДИ)) Р

НТИ2А «6311 се вА АА СС/(СА+АА)

Спорадические больные с поздним началом развития БП 31,9% 52,6% 15,5% 1,81 (1,05-3.24) 0,04

Популяционная выборка 46,0% 43,0% 11,0%

(ГГ.?/ «1801211 сс ст ТТ СС/(СТ+ТТ)

Спорадические больные с поздним началом развития БП 53,6% 44,3% 2,1% 2,34 (1,29-4,24) 0,005

Популяционная выборка 73,0% 27,0% 0,0%

РОМС «28930368 СС СТ ТТ СС/(СТ+ТТ)

Спорадические больные с поздним началом развития БП 90,7% 4,1% 5,2% 5,01 (1,05-23,83) 0,03

Популяционная выборка 98,0% 1,0% 1,0%

РОМС «2071345 СС СТ ТТ СС/(СТ+ТТ)

Спорадические больные с поздним началом развития БП 90,7% 2,1% 7,2% 5,01 (1,05-23,83) 0,03

Популяционная выборка 98,0% 2,0% 0,0%

В гене проопиомеланокортина (РОМС) было проанализировано два ОНП - ге28930368 (С282Т), ^2071345 (С585Т), расположенные в кодирующей области экзона 3, и один ОНП - гб1042571 (С866Т), расположенный в 3'-нетранслируемой области. Для двух ОНП, расположенных в кодирующей области экзона 3 гена РОМС, была выявлена ассоциация с БП. Было установлено, что наличие аллеля Т по обоим ОНП повышает риск развития заболевания в 5 раз (011=5,01, ДИ95%=1,05-23,83, р=0,03) в российской популяции.

Был проведен поиск корреляций между генотипами по ОНП гб28930368 (С282Т) и ОНП ге2071345 (С585Т) в гене РОМС и различными клиническими характеристиками больных. Корреляционный анализ проводился с использованием ранговой корреляции по Спирмену, и для обоих ОНП в гене РОМС была выявлена одинаковая корреляция с одним клиническим признаком - формой заболевания (11=0,25, р<0,05).

С целью более детального анализа выявленной корреляции и оценки влияния «неблагоприятных» аллелей исследованных ОНП были произведены следующие модификации:

• все больные были подразделены на 2 подгруппы: 1) группа больных с преобладанием тремора (п=61), в которую вошли больные с дрожательной и дрожательно-ригидной формой БП; 2) группа больных с преобладанием мышечной ригидности (п=36), в которую вошли больные с акинетико-ригидной, ригидной и ригидно-дрожательной формой.

• гетерозиготы и гомозиготы по аллелям Т для обоих ОНП были объединены в единый (комбинированный) генотип.

Для обоих полиморфизмов были обнаружены идентичные корреляции между формой болезни и комбинированным генотипом (гамма-корреляция: Сатша=0,5787; г=2,8532; р=0,0043 для ге28930368 (С282Т) и Сатта=0,5893; г=2,8967; р=0,0038 для ге2071345 (С585Т)). При этом у больных с комбинированным генотипом СТ+ТТ преимущественно наблюдалось развитие клинических форм с преобладанием мышечной ригидности (78% против 22%), тогда как у пациентов с гомозиготным генотипом СС чаще развивался клинический фенотип с преобладанием тремора (68% против 32%). Наблюдаемые корреляции были идентичны для обоих ОНП.

Таким образом, можно утверждать, что два полиморфизма в кодирующей области гена РОМС ассоциированы с БП: носители редкого Т-аллеля по обоим ОНП имеют достоверно более высокий риск БП, а наличие этого аллеля у пациентов коррелирует с развитием более тяжелой ригидной

формы БП. Функциональная роль указанных полиморфизмов неясна. Эти ОНП приводят к синонимическим заменам 894Б (гз28930368 (С282Т)) и А195А (гб2071345 (С585Т)) и вряд ли могут влиять непосредственно на риск развития БП. Однако эти замены могут быть сцеплены с каким-либо другим функционально значимым вариантом, непосредственно влияющим на риск развития БП. Белок проопиомеланокортин является предшественником большого числа регуляторных пептидов, включая адренокортикотропный гормон (АКТГ) и а-меланотропин. Проведенные нами исследования показали, что пептидный препарат семакс, являющийся синтетическим аналогом АКТГ(4-10), может изменять экспрессию мРНК мозгового нейротрофического фактора (ЕШ№) как в первичных глиальных клетках мозга новорожденных крыс, так в нейронах гиппокампа и лобной коры. Кроме того, было установлено, что а-меланотропин может повышать экспрессию мРНК Мп/тл в нейронах среднего мозга крыс [Оо1оЮу й а1., 2003]. АКТГ и а-меланотропин кодируются последовательностью экзона 3, в которой расположены ассоциированные с БП полиморфизмы. Известно, что РОМС, как нейропептид, ответственен за пролиферацию, дифференцировку и выживание нейронов. Эти данные, возможно, частично объясняют выявленную ассоциацию между полиморфизмами гена РОМС и БП.

Суммируя полученные нами результаты, можно предположить, что ген

РОМС играет роль в патогенезе спорадической БП и является новым геном-

кандидатом данного заболевания. Можно также предположить, что ген РОМС

отвечает за часть фенотипической вариабельности БП в российской популяции.

Поиск новых генов-кандидатов болезни Паркинсона с использованием крыс с 6-гидроксидофаминовой моделью заболевания.

Для поиска новых генов, вовлеченных в патогенез БП, может быть использован подход, основанный на анализе транскриптома области черной субстанции в процессе развития данного заболевания на моделях грызунов (мыши и крысы). При этом возможны два варианта формирования паркинсон-

подобного фенотипа. Первый основан на использовании различных линий трансгенных животных (с нокаутом или повышенной экспрессией генов моногенных форм заболевания или введением в геном грызунов мутантных вариантов генов). Второй вариант, который был использован в данной работе, основан на токсическом повреждении дофаминергических нейронов черной субстанции при локальном или системном введении некоторых токсинов.

Для проведения работы в качестве нейротоксина был выбран 6-гидроксидофамин (6-ГДА), который обладает высоким сродством к транспортерам дофамина и норадреналина. 6-ГДА не способен проникать через гематоэнцефалический барьер, поэтому было использовано стереотаксическое одностороннее введение в стриатум, вызывающее продолжительную (1-3 недели) ретроградную дегенерацию в нигростриатной системе [Blandini et al., 2007; Sauer, Oertel 1994]. Согласно экспериментальным данным через две недели после введения 6-ГДА уровень дофамина снижается в черной субстанции на 30%, а в стриатуме - в области проекций аксонов на 75% [Дильмухаметова и др., 2009].

Был проведен анализ 2 опытных и 2 контрольных групп крыс (по 10 животных в каждой группе). Подробная схема эксперимента представлена на рисунке 2. Декапитация первой партии животных проводилась через 2 недели после введения токсина. В это время у животных проявились только первые симптомы паркинсонизма. Вторая партия животных была декапитирована через 4 недели после введения токсина, когда у крыс, которым был введен 6-ГДА, наблюдалось развитие ярко выраженной клинической симптоматики паркинсонизма.

В результате проведенного анализа были выявлены 131 и 698 генов, достоверно изменивших экспрессию в черной субстанции через 2 и 4 недели после введения токсина соответственно. При этом для 33 генов было обнаружено изменение экспрессии в обеих временных точках.

Для дальнейшего анализа панели дифференциально экспрессирующихся

Опыт

Контроль

Опыт

Контроль

6-гидроксидофамин

аскорбиновая кислии

Образцы черной субстанции из правого и левого полушария

6-гидроксидофамин

аскорбиновая кислота

через

Образцы черной субстанции из правого и левого полушария

ВОСЕМЬ ОБРАЗЦОВ ТКАНИ

«I

8 пулов мРНК

4

_ 8 образов иДНК

Микроматрица- 24500 генов

8 наборов уровней ллРНК

СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

Рисунок-2. Схеме эксперимента по моделир"В"чию паркинсонизма с и ^пользование 6-ГДА и пост едуюшего анализа изменения транскрип >ома » черной суб 1 акции у крыс с паркппсои подобным фенотипом

генов была использована база данных DAVID (http://david.abcc.ncifcrf.gov/).

Эта база данных позволяет проводить быстрое аннотирование любых интересующих исследователя генов и объединять их по функциональным группам. Такая функциональная кластеризация дает возможность выявить основные биологические процессы, изменяющиеся в ответ на те, или иные физиологические или фармакологические воздействия. При этом необходимо отметить, что при кластеризации проводили анализ всех генов, уровень экспрессии которых достоверно изменился. При этом не учитывались ни величина изменения уровня экспрессии, ни ее направление.

Для первой временной точки (2 недели) нам удалось выявить только один кластер с относительно высокой значимостью (Enrichment score - 4.51). В этот кластер вошли гены, белковые продукты которых принимают участие в модификации внеклеточного матрикса и передаче сигналов (в том числе - гены сигнальных пептидов). Таким образом, на ранних сроках (через 2 недели) в черной субстанции мозга крыс наблюдаются неспецифические эффекты, связанные с реакцией на оперативное вмешательство. Специфические эффекты на введение нейротоксина либо отсутствуют, либо выражены крайне слабо, что не позволяет их обнаружить при кластеризации. В то же время, нельзя исключить важной роли изменения межклеточных взаимодействий и структуры межклеточного матрикса в инициации гибели дофаминергических нейронов.

Через 4 недели после введения нейротоксина ситуация кардинальным образом изменяется и наблюдается специфичный ответ, связанный с поражением нервной ткани. Это подтверждается кластерным анализом диффренциально экспрессирующихся в этот временной период генов. Было выявлено два кластера, один из которых (наиболее значимый) представлен на рисунке 3. В эти кластеры вошли гены, белковые продукты которых вовлечены в процессы нейропротекции, нормального функционирования сомы и дендритов нейронов, синаптической передачи, передачи нервного импульса.

Kgase-fre fam»y, member 3; a^tjn related protein a/3 complex, siiwr* 4, 20№a trans«»* receptor ^eotial cation channel, subfamiy M, member 6

tJhydr jSpoarmde dehydrogenase piecxstrin

dvi.T xonemal^etoT(L-plestln)

^^SoilZj> ■■ ■ expressed, cfcvetapmentafly down-regulated 9

BAI1-associated protein 2

allograft inflammatory Factor 1

centrin, EF-hand protein, 2

'-1 for,, h.

ArfGAP with FG repeats 1

S^^ir-nohiJtyric •dd (GARA1■ "I «» .1, . I , £raln abundant , membrane attached signal prote*> 1 catenin^adherin-assoclated protein), alpha 2

kaptin (actin binding prot >) . , .

akSarnlc-oxatoacetic transaminase 1, soluble (aspartate aminotransferase 1) mltogen-actlvated protein kinase 8 Interacting protein 1

palmKoyHxotein thloesterase 1 neuromedin U , ,

"BfiafffiTT

mitogen-actlyateii protein l</nase 8 Interacting protein 3 actly*y-regwatea cytoskeleton-assoclated prot en Wolfram syniome 1 (wolfram in) melanoma antigen ramoy t, i

. ii' recw Mr, metabotroote 1 . ,

glutamate receptor, lonotropic, N-methyl D-aspartate 1 actmin, alpha 2

ermln, ERM-lfce protein

if^finS^pSw Ifhomolog (mouse); ZFP91-CNTF readthrougti transcript; ciiary neurotrophic factor

swI^SwnSi^cffage-gated, type I, alpha submt mtcrotubule-associated protein 2

. > ,r„, I, л Or i>; dishevelled, dsh homolog 1 (DrosopMaHte 1

rwohroSttSome overexpressed oene chotnergk: ^gfyjgp*. 1

mw-rotubule -associated protein IS tuberous sclerosis 2 , _

cholinergic receptor, nicotinic, alpha 5

тъ

ген, входящий в М метаболический путь ' ген. не молящий В

® S,

_ген, не входящим в

| метаболический путь

Г soma т seta «Т ■ 34 5.6Е-3 2.4Е-5

Е отмссм ей да И ■ 2С 4.0Е-6 №

г L. СОШ.СС FA1 ciffltcta и ■ 48 4Л-5 6.4Е-4

Г L. GOTBtU СС FAT todrit !! ■ а 3.7E-S 4.3Е-3

Рисунок 3. Функциональная кластеризация дифференциально экспрессирмощихся генов в черной субстанции через 2 недели (А) и 4 недели

(Б) после введения 6-ГДА.

При этом сильных неспецифических эффектов, наблюдаемых через две недели после введения 6-ГДА, на более позднем сроке обнаружено не было. Таким образом, происходит смена преимущественно неспецифической реакции нервной ткани на более специфичный ответ. Среди всех метаболических процессов и генов, выявленных нами в ходе анализа, более подробно были рассмотрены гены, имеющие отношение к нейропротекции. Именно этот метаболический получил самую высокую оценку статической достоверности при проведение кластерного анализа (р=0,000024). Анализ уровней экспрессии генов, вошедших в этот кластер, показал, что в основном наблюдается уменьшение относительных уровней мРНК генов, связанных с нейропротекцией, в черной субстанции мозга крыс, подвергшихся воздействию нейротоксина, по сравнению с контрольной группой животных. Наблюдаемые изменения, с одной стороны, могут быть следствием массовой гибели нейронов в изучаемой области мозга на четвертой неделе после введения 6-ГДА. С другой стороны, уменьшение экспрессии этих генов может приводить к развитию процессов деградации нейронов. Для ряда генов было выявлено увеличение относительных уровней их мРНК в черной субстанции мозга крыс, подвергшихся воздействию нейротоксина, по сравнению с контрольной группой животных. К таким генам относятся: ген нейромедина (NMU), ген каптенина альфа 2 (CTNNA2), ген эрмина (ERMN), ген глутамат декарбоксилазы 1 (GAD1), ген метаботропного рецептора глутамата 1 (GRUI), ген аспартат аминотрасферазы 1 (GOT1), ген антигена меланомы семейства Е (MAGEE1), ген тиоэстеразы 1 пальмитоилированных белков (РРТ1) и ген парвальбумина (PVALB). Активация экспрессии этих генов может быть связана с защитной реакцией нейронов на действие токсина и процессы нейродегенерации. По имеющимся на сегодняшний день данным, большинство из этих генов не связанны с процессами, которые могут приводить к деградации дофаминергических нейронов. Например, наибольшее увеличение экспрессии, почти в 3 раза было обнаружено для гена нейромедина (NMU), который

является нейропептидом. Однако точная функция этого белка до сих пор не известна. Установлено, что он может играть важную роль в энергетическом обмене, будучи вовлечен в процессы регуляции аппетита. Также имеются сведения об участие данного гена в патогенезе некоторых видов рака, таких рак легкого, рак мочевого пузыря, миелолейкоза [Mitchell et al., 2009]. В то же время нельзя исключить его участия и в патогенезе БП, так многие функции данного белка пока неизвестны, а нам удалось показать значительное увеличение уровня его мРНК в черной субстанции у крыс с паркинсон-подобным фенотипом.

Только для трех генов (РРТ1, GRM, PVALB), увеличивших свою экспрессию, можно предположить связь с процессами, приводящими к нейродегенерации при БП. Так, ген РРТ1 кодирует тиоэстеразу 1 пальмитоилированных белков, которая принимает непосредственное участие лизосомальной деградации белков [Ohno et al., 2010]. В настоящее время показано, что нарушение процессов лизосомальной деградации белков может быть вовлечено в патогенез БП.

Ген GRM1 кодирует рецептор глутамата, который является одним из участников глутаматэргической системы. Нарушение нормального функционирования этой системы приводит к развитию эксайтотоксичности. При этом происходит нарушение гомеостаза кальция [Захарова М.Н., 2001]. Ген PVALB кодирует парвальбумин, имеющий высокое сродство с кальций связывающими белками, такими как кальмодулин. Это сходство предполагает, его важную роль в гомеостазе кальция. Нарушение гомеостаза кальция и его накопление в клетке может привести развитию оксидантного стресса и митохондриальной дисфункции, являющихся основными процессами, приводящими к гибели дофаминергических нейронов. К тому же, при проведении иммуногистохимического анализа черной субстанции из аутопсийного материала от больных БП было показано увеличение количества парвальбумина в дофаминергических нейронах [Soos et al., 2004]. В нашей

работе мы также обнаружили достаточно значительное увеличение, в 2,57 раза, уровня мРНК гена РУАЬВ в черной субстанции мозга крыс, которым вводили нейротоксин.

Среди генов, уменьшивших свою экспрессию в черной субстанции крыс с нейротоксином и принимающих участие в нейропротекции, необходимо выделить ген вольфрамина (ИГО/). При проведение ассоциативных исследований с использованием ДНК-чиповых технологий нами было показано, что ОНП ^1801211 (С1645Т) в этом гене ассоциирован с риском развития БП в российской популяции. Белковый продукт гена, вольфрамин, является мембранным гликопротеином эндоплазматического ретикулума и предположительно участвует в формировании синаптических везикул [Такес!а й а1., 2001], что предполагает его важную роль в функционировании синапсов, а, следовательно, и в жизнедеятельности нейронов.

Таким образом, полученные нами данные позволяют предполагать, что ген \VFSl вовлечен в патогенез БП, и его можно считать новым геном-кандидатом для данного заболевания. Кроме того, по крайне мере, еще четыре гена - РУА1В, СЯМ/, РРТ1 и МЛ/ можно отнести к группе вероятных генов-кандидатов БП. Однако, для выяснения точной роли перечисленных выше генов в патогенезе БП необходимо проведение дальнейших исследований направленных, как на изучение экспрессии этих генов, в первую очередь в периферической крови больных БП, так и на поиск расположенных в них полиморфных маркеров, влияющих на риск развития БП.

В целом же, проведенный анализ транскриптома у крыс с 6-ГДА моделью БП показал, что при таком способе моделирования большинство генов дают неспецифический ответ, связанный в первую очередь с введением токсина непосредственно в область мозга. Вероятно, для изучения изменения экспрессии генов данная модель не является полностью адекватной. Возможно, изучение в дальнейшем других нейротоксических моделей и, в первую очередь, МФТП-моделей, воспроизводящих стадии досимптомной и ранней симптомной

стадий БП, позволит выявить гены и процессы, вовлеченные в патогенез БП на ранних стадиях, а также изучить компенсаторные механизмы, обеспечивающие длительную бессимптомную стадию заболевания.

Выявление вклада изменения экспрессии генов SLC6A3, GSK3B, МАРТ, PARK2, SNCA, ST13 в патогенез болезни Паркинсона в российской популяции.

Изучение изменения экспрессии генов при БП у человека проводится, главным образом, на аутопсийном материале. Однако полученные при этом данные об изменении экспрессии генов отражают самые поздние стадии БП. В настоящее время не менее актуален анализ изменения экспрессии генов у пациентов с БП in vivo в более доступных тканях организма, например, спинномозговой жидкости и крови.

Клетки крови, в частности лимфоциты, содержат отдельные характеристики, свойственные дофаминергическим нейронам: в них содержатся оба фермента синтеза дофамина, мембранный переносчик дофамина и экспрессируется ряд рецепторов дофамина [Barbanti et al., 1999; Buttarelli et al., 2008, Nagai et al., 1996]. Это позволяет предположить, что изменения, обнаруженные в периферической крови больных БП, могут отражать те процессы, которые протекают в дофаминергических нейронах черной субстанции.

Нами был проведён анализ относительной экспрессии генов-кандидатов GSK3B, SLC6A3, МАРТ, PARK2, SNCA, ST13 в периферической крови в двух группах пациентов с БП на ранних стадиях, получавших лечение и не получавших его, и в трёх группах сравнения (пациенты с церебральным атеросклерозом, с различными неврологическими заболеваниями и контрольная группа здоровых добровольцев). Подбор групп сравнения осуществлялся таким образом, чтобы патогенез заболевания у пациентов из группы сравнения принципиально отличался от такового при БП, но затрагивал в основном ЦНС.

Нам не удалось выявить стабильной и выраженной экспрессии генов SLC6A3, МАРТ, PARK2. В некоторых образцах мы наблюдали экспрессию этих генов, хотя пороговые циклы амплификации были больше 35, что свидетельствует об очень малом количестве кДНК и, соответственно, РНК в образце.

Ген GSK3B может быть вовлечён в патогенез БП и, следовательно, отражать ход её развития. Поэтому мы провели анализ изменения экспрессии гена GSK3B в периферической крови. Результаты исследования относительной экспрессии этого гена представлены на рисунке 4.

Из представленных данных видно, что во всех группах пациентов с БП в крови практически не наблюдается изменения количества транскриптов гена GSK3B по сравнению с группой здоровых добровольцев. В то же время в крови пациентов с ЦА было выявлено статистически значимое снижение относительной экспрессии гена GSK3B в три раза (0,33, р< 0,001). Ранее Armentero и др. показали увеличение количества белка GSK3b в лимфоцитах периферической крови у пациентов с БП [Armentero et al., 2010]. Мы не обнаружили никаких изменений в уровне экспрессии гена GSK3B у наших пациентов с БП. Это может быть объяснено тем, что мы исследовали пациентов, находящихся на более ранних стадиях заболевания. Большинство наших пациентов с БП находилось на Кой и 2-ой стадиях заболевания по шкале Хен и Яра. Изменения количества белка GSK3b, наблюдаемые Armentero с соавторами, могут появляться на более поздних стадиях (2,42 стадия по Хен и Яру) [Armentero et al., 2010]. Кроме того, изменения уровней экспрессии гена GSK3B могут носить неспецифический характер, так как мы обнаружили снижение экспрессии гена GSK3B у пациентов с церебральным атеросклерозом. Эти изменения можно объяснить повреждением и гибелью нейронов вследствие нарушения кровообращения в головном мозге.

Сейчас уже не вызывает сомнения тот факт, что альфа-синуклеин вовлечён в патогенез БП. В связи с этим, было интересно изучить экспрессию

ОЗКлЬ

Щ. БПнс чем Г.Ппсч

ХК"' \

Мсд1 ын.|

20 X 1< 1«

з Медиана ! У"«-"".

ЦА Ш ЬНлс печ БПлеч

ЙТВ

ЦА - пациенты с

церебральным атеросклерозом; НК - пациенты с

различными неврологическими

заболеваниями (неврологический контроль) БП(не леч) - пациенты с БП, не получавшие лечения; БП(леч) - пациенты с БП,

получавшие лечение; БП - все пациенты с БП; Я - относительный уровень экспрессии исследуемого гена. За единицу принят уровень экспрессии исследуемого гена в группе неврологически здоровых добровольцев.

[К|>.1С

р-яиин»

п Медианл П ^'»о.-«1,,

Н1 Ы1т »1 БШсч

Рисунок 4. Относительные уровни экспрессии гена О^'КЗВ, 57УС4, 5Т/5 у пациентов с БП, НК и ЦА по сравнению с контрольной группой.

гена ЗМСА на ранних стадиях заболевания. Результаты исследования относительной экспрессии гена БЫСА представлены на рисунке 4.

Из представленных данных видно, что в крови всех пациентов с БП наблюдается статистически значимое увеличение количества транскриптов гена БЫСА почти в три и более раз (для объединённой группы пациентов с БП медиана составила 5,57, для групп пациентов с БП, не подвергавшихся и подвергавшихся лечению, медианы составили 2,85 и 7,32 (р < 0,0005), соответственно, по сравнению с группой здоровых добровольцев). В то же время в крови пациентов с ЦА и НК также было выявлено статистически значимое увеличение относительной экспрессии гена 5'Л'СЛ по сравнению с контрольной группой (рисунок 4). Следовательно, наблюдаемое увеличение экспрессии гена SNCA в крови пациентов с БП не являются специфичными для БП.

Ген 5773 и, следовательно, белок БТП также может играть роль в патогенезе БП, так как было показано его косвенное участие в сборке альфа-синуклеина [БсИеггег е1 а1. ,2007]. Более того, в той же работе авторы показали уменьшение экспрессии гена 5Т13 в периферической крови пациентов с БП. В связи с этим, мы также исследовали изменения экспрессии гена БТ13 в периферической крови в двух группах пациентов с БП на ранних стадиях, получавших лечение и не получавших его, и в трёх группах сравнения. Результаты исследования относительной экспрессии гена 5773 представлены на рисунке 4. Из представленных данных видно, что в крови пациентов с БП как получавших, так и не получавших лечение, не наблюдается статистически значимых изменений количества транскриптов гена 5'773. В то же время в крови пациентов с ЦА и с различными неврологическими заболеваниями было выявлено статистически значимое уменьшение уровня мРНК гена 5773 (в 2,63 раза и почти в 2 раза соответственно). В отличие от предыдущих исследователей мы не обнаружили значимых изменений в экспрессии гена 5773 у наших пациентов с БП. Это можно объяснить тем фактом, что мы

исследовали кровь пациентов, находящихся на более ранних стадиях заболевания. У всех наших пациентов была 1-ая или 2-ая стадия БП по шкале Хен и Яра. Изменения же в экспрессии этого гена, наблюдаемые БсЬеггег й а1.,вероятно возникают на более поздних стадиях заболевания: 2,3 по шкале Хен и Яра [БсИеггег й а1., 2007]. К тому же, изменения количества транскриптов гена 5775 могут быть неспецифичными, так как мы обнаружили статистически значимое снижение экспрессии данного гена в группах пациентов с церебральным атеросклерозом и различными неврологическими заболеваниями. Эти изменения можно объяснить повреждением и смертью нейронов вследствие нарушения микроциркуляции.

Был проведен также совместный анализ относительных уровней экспрессии генов СБ КЗ В, 5ЛО, 5773, который позволил выявить разные паттерны уровней их мРНК у пациентов с БП и в группах сравнения, что

отражено в таблице 4.

Таблица 4. Направления изменения экспрессии генов С5АГЗВ, SNCA и 5775 у

Заболевание Изменение экспрессии гена

СШ8 ЗГ1СА 5773

Болезнь Паркинсона — тт —

Церебральный атеросклероз 11 И

Неврологические заболевания ~1 т 1

I уНСЛИЧСМИЬ 1*11 1111 114 ['■411. ^ ■ ■ " ■ — ] ----------—----J I--------"Г

I уменьшение количества мРНК по сравнению с уровнем мРНК у здоровых добровольцев. — отсутствие изменения количества мРНК по сравнению с уровнем мРНК у здоровых добровольцев.

Таким образом, наблюдается разная картина изменения экспрессии изученных генов при различных неврологических заболеваниях в периферической крови. Можно предположить, что изменения, наблюдаемые в крови больных БП, могут в какой-то степени отражать те специфические процессы, которые протекают в дофаминергических нейронах. Однако для получения более полной и точной информации о процессах, протекающих на ранних стадиях БП необходим анализ относительных уровней экспрессии большого числа генов. Кроме того, полученные нами данные указывают на то, что изменения экспрессии генов СБКЗВ, БИСА, 8Т13 по отдельности не могут

служить биомаркерами для ранних стадий БП. С другой стороны, эти данные позволяют предположить, что совместный анализ количества транскриптов генов GSK3B, SNCA, STI3, а также других генов, вовлечённых в патогенез БП, в дальнейшем послужит основой для создания панели маркеров для диагностики этого заболевания.

Заключение.

Как уже не раз говорилось, БП сложное многофакторное заболевание, затрагивающее разные отделы нервной системы. БП имеет богатую клиническую картину. Установлено, что нейродегенеративные изменения при БП связаны с избирательной гибелью различных типов нейронов. Это указывает на то, что в патогенез заболевания вовлечено большое число различных процессов, обеспечивающих нормальное функционирование нервных клеток. Однако, несмотря на многолетние и интенсивные исследования, причины развития заболевания остаются до конца не выясненными. В то же время получен ряд данных, указывающих на то, что в патогенезе БП могут играть важную роль генетические факторы. Об этом в первую очередь говорит наличие семейных форм заболевания и выявление семи генов (SNCA, PARK2, LRRK2, PINK1, DJ1, UCHL1, АТР13А2), мутации в которых приводят к их развитию. Однако в большинстве случаев (85%-90%) БП носит спорадический характер и обусловлено взаимодействием между генетической конституцией организма и факторами окружающей среды. В связи с этим в данной работе было проведено молекулярно-генетическое исследование патогенеза БП на примере изучения различных групп больных БП из России и 6-ГДА модели паркинсонизма. При этом использовалась стратегия из трех направлений: анализ мутаций в генах моногенных форм БП у спорадических больных, поиск новых генов-кандидатов заболевания и анализ изменения транскриптома на разных стадиях БП.

Генетический анализ различных групп больных БП показал, что определенные мутации в генах моногенных форм БП, а именно делеции и

дупликации экзонов гена PARK2, могут вносить существенный вклад в патогенез спорадической формы БП. Было показано, что у людей, имеющих делеции и дупликации, риск развития заболевания повышен в 8,53 раза (р=0,0095) и установлено, ген PARK2 отвечает за часть фенотипической вариабельности БП в российской популяции. Показано, что наличие делеций и/или дупликаций экзонов в гене PARK2 способствует существенному снижению возраста начала БП (на 9 лет), развитию дистонии и симметричному протеканию заболевания.

Были также впервые обнаружены ассоциации между полиморфными вариантами генов РОМС (rs28930368 и rs2071345), WFSl (rsl801211), SNCA (rs2736990) и риском развития спорадической формы болезни Паркинсона для российской популяции.

Выявленные нами мутации и однонуклеотидные полиморфизмы в генах PARK2, SNCA, РОМС и WFS1 в дальнейшем могут быть включены в панель маркеров для определения индивидуального риска развития БП. Выявление таких лиц из группы риска на досимптоматической стадии поможет вовремя принять профилактические меры, что если не предотвратит развитие БП, то отодвинет появление клинических признаков на более поздний срок и значительно снизит тяжесть протекания заболевания.

Кроме того, выявление таких новых генов кандидатов БП, как ген РОМС и ген WFSI указывает на то, что важную роль в дегенерации дофаминергических нейронов, помимо митохондриальной дисфункции и убиквитин-зависимого протеолиза, может играть нарушение процессов передачи нервного импульса. Можно предположить, что развитие клинических признаков заболевания может быть связано не только с гибелью нейронов, но и с нарушением их нормального взаимодействия.

Анализ изменения транскриптома в черной субстанции мозга крыс в процессе развития паркинсон-подобного фенотипа под воздействие 6-ГДА позволил выявить еще четыре новых гена — PVALB, GRM1, РРТ1и NMU,

которые можно отнести к группе вероятных генов кандидатов БП. С другой стороны, изучение транскриптома у крыс с 6-ГДА моделью БП показал, что при таком способе моделирования большинство генов дают неспецифический ответ, связанный в первую очередь с введением токсина непосредственно в область мозга. Вероятно, для изучения изменения экспрессии генов данная модель не является полностью адекватной.

Проведение работ по анализу изменения транскриптома в периферической крови больных БП позволило выявить характерный для ранней стадии заболевания паттерн экспрессии генов GSK3B, SNCA, ST13, что, по-видимому, указывает на наличие специфического системного ответа организма на ранних стадия патологического процесса при болезни Паркинсона.

В целом же, полученные нами данные расширяют наши представления о механизмах патогенеза БП. На данный момент мы с уверенность можем утверждать, что изменения первичной структуры ДНК играет главную роль не только в патогенезе семейной форм заболевания, но и вносят существенный вклад в развитие спорадической формы БП. С друтой стороны, показано, что важную роль в патогенезе заболевания может играть изменение транскриптома. Все это позволяет предложить следующую стратегию анализа БП, которая будет заключаться в сочетании геномного и транскриптомного анализа различных форм и стадий БП. При этом эти исследования будут включать в себя как анализ уже известных нам генов, так и поиск новых генов, вовлеченных в патогенез заболевания.

Выводы.

1. Разработан основанный на ПЦР в реальном времени метод анализа дозы отдельных экзонов гена PARK2 и гена SNCA, позволяющий проводить диагностику мутаций с изменением копийности при семейной и спорадической формах болезни Паркинсона.

2. Показано, что делеции и дупликации экзонов гена PARK2 играют важную роль в патогенезе болезни Паркинсона. Риск развития болезни Паркинсона

у лиц с мутациями с изменением копийности в гене PARK2 повышен в 8,53 раза (95% ДИ=1,14-63,52; р=0,0095). Выявлены корреляции между наличием мутаций с изменением копийности в гене PARK2, возрастом начала заболевания, наличием дистонии и симметричным течением заболевания.

3. Показано, что дупликации и трипликации гена SNCA не являются значимыми в патогенезе болезни Паркинсона у больных из России.

4. Впервые обнаружено, что ген РОМС вовлечен в патогенез болезни Паркинсона. Показано, что наличие аллеля Т по полиморфизмам rs28930368 и rs2071345 гена РОМС повышает риск развития заболевания в 5,01 раза (95%ДИ=1,05-23,83; р=0,03) и приводит к развитию клинического фенотипа с преобладанием мышечной ригидности.

5. Впервые показано, что ген WFS1 вовлечен в патогенез болезни Паркинсона. Обнаружено, что наличие аллеля Т по полиморфизму rsl801211 гена WFS1 повышает риск развития заболевания в 2,34 раза (95%ДИ=1,29-4,24; р=0,005). Показано снижение уровня мРНК гена WFS1 в 1,64 раза (р<0,05) в черной субстанции крыс с паркинсон-подобным фенотипом, вызванным 6-гидроксидофамином.

6. Показано, что известные точковые мутации в генах моногенных форм болезни Паркинсона вносят небольшой вклад в патогенез спорадической формы заболевания в России. В гене PARK2 выявлено три мутации (MIL, A82G и C253Y) в гетерозиготном состоянии у трёх различных пациентов. Мутация G2019S в гене LRRK2 обнаружена у трех больных, и ее частота составляет 0,8% при спорадической форме заболевания.

7. Впервые для российской популяции выявлена ассоциация полиморфизма rs2736990 (С/Т) в гене SNCA с риском развития спорадической формы болезни Паркинсона. Показано, что наличие аллеля С по данному полиморфизму повышает риск развития заболевания в 1,75 (95%ДИ=1,19-2,58; р=0,004).

8. Впервые показано, что изменение экспрессии генов GSK3B, SNCA, STI3 в периферической крови больных на ранних стадиях развития болезни Паркинсона по отдельности является не специфичным. Однако совместный анализ относительных уровней экспрессии данных генов выявил разные

паттерны уровней их мРНК в периферической крови при болезни Паркинсона и других неврологических заболеваниях, что говорит о специфическом системном ответе организма на ранних стадия патологического процесса при болезни Паркинсона.

Список публикаций по теме диссертации: Статьи

1. Shadrina M.I, Slominsky P.A, Limborska S.A. Molecular mechanisms of pathogenesis of Parkinson's disease // Int. Rev. Cell. Mol. Biol. -2010. -V. 281.-P. 229-66.

2. Shadrina MI, Filatova E.V., Karabanov A.V., Slominsky P.A., Illarioshkin S.N., Ivanova-Smolenskaya I.A., Limborska S.A. Expression analysis of suppression of tumorigenicity 13 gene in patients with Parkinson's disease // Neurosci. Lett. -2010. -V. 473. -N. 3. -P. 257-259.

3. Shadrina M.I., Semenova E.V., Slominsky P.A., Bagyeva G.H., Illarioshkin S.N., Ivanova-Smolenskaya I.A., Limborska S.A. Effective quantitative realtime polymerase chain reaction analysis of the parkin gene (PARK2) exon 112 dosage // BMC Med. Genet. -2007. -V. 8. -P. 6 (1-7).

4. Shadrina M., Nikopensius Т., Slominsky P., Illarioshkin S., Bagyeva G„ Markova E., Ivanova-Smolenskaya I., Kurg A., Limborska S., Metspalu A. Association study of sporadic Parkinson's disease genetic risk factors in patients from Russia by APEX technology // Neurosci. Lett. -2006. -V. 405. -P. 212-216.

5. Shadrina M.I., Dolotov O.V., Grivennikov I., Slominsky P.A., Andreeva L.A., Inosemtseva L.S., Limborska S.A., Myasoedov N.F. Rapid induction of neurotrophin mRNAs in rat glial cell cultures by Semax, an adrenocorticontropic hormone analog // Neuroscie. Lett. -2001. -V. 308. -P. 115-118.

6. Shadrina M., Kolomin Т., Agapova Т., Agniullin Y., Shram S, Slominsky P., Lymborska S., Myasoedov N. Comparison of the Temporary Dynamics of NGF and BDNF Gene Expression in Rat Hippocampus, Frontal Cortex, and Retina Under Semax Action // J. Mol. Neurosci. -2010. -V. 41. -P. 30-35.

7. Semenova E.V., Shadrina M.l, Slominsky P.A., Ivanova-Smolenskaya I.A., Bagyeva G.H., Limborska S.A., Illarioshkin S.N. Anaysis of PARK2 gene exon rearrangements in Russian patients with sporadic Parkinson's disease // Mov. Disord.-2011.-DOI: 10.1002/mds.23901.

8. Illarioshkin S.N., Shadrina M.I., Slominsky P.A., Bespalova E.V., Zagorovskaya T.B., Bagyeva G.Kh., Markova E.D., Limborska S.A., Ivanova-Smolenskaya I.A. A common leucine-rich repeat kinase 2 gene mutation in familial and sporadic Parkinson's disease in Russia // Eur. J. Neurol. -2007. -V. 14.-P. 413-417.

9. Шадрина М.И.. Сломинский П.А. Молекулярная генетика болезни Паркинсона // Генетика. -2006. -Т. 42. -№ 8. -С. 1045-1059.

Ю.Шадрина М.И., Семенова Е.В., Сломинский П.А., Иллариошкин С.Н., Багыева Г.Х., Маркова Е.Д., Иванова-Смоленская И.А., Лимборская С.А. Метод определения делений и дупликаций в гене паркина с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени // Мед. Генетика. -2006. -№. 2(Приложение). -С. 52-54.

П.Шадрина М.И.. Иллариошкин С.Н., Багыева Г.Х., Беспалова Е.В., Загоровская Т.Б., Сломинский П.А., Маркова Е.Д., Клюшников С.А., Лимборская С.А., Иванова-Смоленская И.А. PARKS-форма болезни Паркинсона: мутационный анализ гена LRRK2 в российской популяции // Журн. неврол. и психиатрии им. С.С.Корсакова. -2007. -№. 3. -С. 46-50.

12.Шадрина М.И.. Багыева Г.Х., Иллариошкин С.Н., Семенова Е.Л., Сломинский П.А., Загоровская Т.Б., Маркова Е.Д., Федорова Н.В., Проскокова Т.Н., Лимборская С.А., Иванова-Смоленская И.А. Структурные перестройки в гене паркина (PARK2) у больных с

паркинсонизмом молодого возраста // Мед. Генетика. -2006. -№. 12. -С. 22-26.

13-Шадрина М.И., Сломинский П. А. Значение митохондриальной дисфункции и окислительных повреждений в молекулярной патологии болезни Паркинсона // Молекулярная биология. -2008. -Т. 42. -№ 5. -С. 809-819.

14.Багыева Г.Х., Иллариошкин С.Н., Сломинский П.А., Шадрина М.И.. Загоровская Т.Б., Маркова Е.Д., Лимборская С.А., Иванова-Смоленская И.А. Сочетание мутаций в локусах PARK2 и PARK8 у пациентки с ранней формой болезни Паркинсона // Неврол. журн. -2007. -№ 2. -С. 15-18.

15.Иллариошкин С.Н., Иванова-Смолненская И.А., Маркова Е.Д., Шадрина М.И.. Клюшников С.А., Загоровская Т.Б., Миклина Н.И., Сломинский П.А., Лимборская С.А. Молекулярно-генетический анализ наследственных нейродегенеративных заболеваний // Генетика. -2004. -Т. 40.-№ 6.-С. 816-826.

16.Иллариошкин С.Н., Сломинский П.А., Шадрина М.И.. Багыева Г.Х., Загоровская Т.Б., Маркова Е.Д., Карабанов A.B., Полещук В.В., Полевая Е.В., Федорова Н.В., Лимборская С.А., Иванова-Смоленская И.А. Гетерогенность спорадической болезни Паркинсона: молекулярный подход к решению проблемы // Анн. клин, эксперим. неврол. -2007. -№. 1.-С. 23-31.

17-Семенова Е.В., Шадрина М.И., Сломинский П.А., Иллариошкин С.Н., Багыева Г.Х., Карабанов A.B., Иванова-Смоленская И.А., Лимборская С.А. Анализ дозы гена а-синуклеина при аутосомно-доминантной форме болезни Паркинсона // Генетика. -2009. -Т. 45. -№ 4. -С.1-3 18.Федотова Е.Ю., Чечеткин А.О., Шадрина М.И., Сломинский П.А., Иванова-Смоленская И.А., Иллариошкин С.Н. Транскраниальная

сонография при болезни Паркинсона // Журн. неврол. и психиатрии им. С.С.Корсакова. -2011. -№ 1. -С.49-55.

19.Филатова Е.В., Шадрина М.И, Федотова Е.Ю., Сломинский П.А., Иллариошкин С.Н., Иванова-Смоленская И.А., Лимборская С.А. Анализ однонуклеотидного полиморфизма rs415430 в гене WNT3 в российской популяции при болезни Паркинсона // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. -2011. -№ 2. -С. 3-4.

20.Филатова Е.В., Шадрина М.И.. Карабанов A.B., Сломинский П.А., Иллариошкин С.Н., Иванова-Смоленская И.А., Лимборская С.А. Экспрессия гена GSK3B в периферической крови пациентов с болезнью Паркинсона // Молекулярная биология. -2011. -Т. 45. -№ 3. -С. 461-465.

Главы из книг

21.Сломинский П.А., Шадрина М.И.. Иллариошкин С.Н., Иванова-Смоленская И.А., Лимборская С.А. Генетические факторы в патогенезе семейной и спорадической формы болезни Паркинсона: Нейродегенеративные заболевания. Фундаментальные и прикладные аспекты/ Отв.ред. Угрюмов М.В. -М., Наука, 2010. с. 137-153.

22.Иллариошкин С.Н., Сломинский П.А., Иванова-Смоленская И.А., Багыева Г.Х., Загоровская Т.Б., Полевая Е.В., Шадрина М.И.. Федорова Н.В, Лимборская С.А. Генетическая гетерогенность первичного паркинсонизма. В кн.: Болезнь Паркинсона и расстройства движений. Руководство для врачей (под ред. С.Н.Иллариошкина, H.H. Яхно). М., 2008: 60-64.

Патенты

23. Шадрина М.И., Семенова Е.В., Иллариошкин С.Н., Сломинский П.А., Лимборская С.А. «Ген PARK2 и способ диагностики его мутаций», решение о выдаче патента №2010122010/10(031225) от 01.04.2011.

Тезисы устных докладов

24.Shadrina M.I., Slominsky Р.А., Illarioshkin S.N., Khusnutdinova E.K., Zherbtsova A.L., Ivanova-Smolenskaya I.A., Limborska S.A. Mutation spectrum of Park2 gene in Parkinson's disease patients from Russia. XV International Congress of Neuropathology (15-18 September 2003, Turin, Italy), Brain Pathology, 2003, P. S33.

25.Shadrina M.. Semenova E., Bagyeva G., Partola M., Illarioshkin S., Nikopensius Т., Metspalu A., Limborska S. Genetic markers analysis of sporadic Parkinson's disease from Russia // IX International Symposium on Mutations in the Genome (23-27 September 2007, Xiamen, China), abstract book, P. 33.

26.Сломинский П.А., Шадрина М.И.. Иллариошкин C.H. Молекулярная патология болезни Паркинсона. IV съезд Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (11-15 мая 2008 г., Новосибирск, Россия), тезисы докладов, С. 249.

27. Шадрина М.И., Сломинский П.А. Клинико-генетические и экспериментальные исследования молекулярных механизмов болезни Паркинсона. VII Международная конференция «Молекулярная генетика соматических клеток» (22-25 октября 2009г., Звенигород, Россия), Программа и тезисы, С.54

28.Шадрина М.И., Сломинский П.А., Иллариошкин С.Н., Иванова-Смоленская И.А., Лимборская С.А. Болезнь Паркинсона: анализ и поиск генетических факторов. Материалы VI Съезда Российского общества медицинских генетиков (14-18 мая 2010г., Ростов-на-Дону, Россия), Медицинская генетика, 2010, С. 194.

29.Шадрина М.И., Сломинский П.А., Лимборская С.А. Геномные маркеры болезни Паркинсона. XXI съезд физиологического общества им. И.П. Павлова (19-25 сентября 2010 г., Калуга, Россия), тезисы докладов, С.738-739.

ЗО.Шадрина М.И., Семенова Е.В., Филатова Е.В., Карабанов А.В., Иллариошкин С.Н. Сломинский П.А. Генетические факторы риска развития спорадической формы болезни Паркинсона. И Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» (17-19 мая 2011 г., Курск, Россия), сборник материалов конференции, С.116/ 31-Шадрина М.И.. Филатова Е.В., Алиева А.Х., Карабанов А.В., Иллариошкин С.Н. Анализ транскриптома при болезни Паркинсона. Седьмой Международный Междисциплинарный Конгресс «Нейронаука для медицины и психологии» (3-13 июня 2011 г., Судак, Крым, Украина), тезисы докладов, Р.457

Тезисы стендовых сообщений 32.Semenova Е., Shadrina ¡УГ.. Bagyeva G., Moskovskaya S., Slominsky P., Ularioshkin S., Limborska S. Analysis of exon deletions and duplications in PARK2 gene by TaqMan Real-time PCR method in patients with early-onset Parkinson disease from Russia. The European Human Genetics Conference (69 May 2006, Amsterdam, Holland), European Journal of Human Genetics, 2006, V. 14, P. 269.

33.Semenova E., Shadrina M.. Bagyeva G., Farkhiulina M., Slominsky P., Ularioshkin S., Limborska S. Analysis of the parkin gene (PARK2) exon 1-12 dosage in patients with sporadic Parkinson's disease from Russia. The European Human Genetics Conference, (16-19 June 2007, Nice, France), European Journal of Human Genetics, 2007, V. 15, P. 219. 34.Semenova E., Shadrina M.. Slominsky P., Ularioshkin S., Bagyeva G., Karabanov A., Ivanova-Smolenskaia I., Limborska S. Analysis of the a-synuclein gene dosage in autosomal dominant Parkinson's disease. The European Human Genetics Conference (23-26 May 2009, Vena, Austria), European Journal of Human Genetics, 2009, V. 17, P. 393.

35.Filatova E.V., Shadrina МЛ.. Karabanov A.V., Slominsky P.A., Illarioshkin S.N., Limborska S.A. Analysis of point mutations and single nucleotide polymorphisms effects on risk of development of Parkinson's disease in Russia. The Second World Parkinson Congress (28 September - 1 October 2010, Glasgow, UK), Movement Disorders, 25(3), 2010, P. S616.

36.Филатова E.B., Шадрина М.И.. Карабанов A.B., Сломинский П.А., Иллариошкин С.Н., Лимборская С.А. «Анализ изменения экспрессии кандидатных генов в крови пациентов с болезнью Паркинсона». Материалы VI Съезда Российского общества медицинских генетиков (1418 мая 2010г., Ростов-на-Дону, Россия), Медицинская генетика, 2010, стр.

194.

Подписано в печать: 14.09.11

Объем: 2,5 усл.п.л. Тираж: 100 экз. Заказ № 484 Отпечатано в типографии «Реглет» 119526, г. Москва, Страстной бульвар, 6/1 (495) 978-43-34; www.reglet.ru

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Шадрина, Мария Игоревна

Список сокращений.^

ВВЕДЕНИЕ.Ю

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общая характеристика болезни Паркинсона.

1.1.1. Эпидемиология болезни Паркинсона.1 ^

1.1.2. Клиническая характеристика болезни Паркинсона.1 ^

1.1.3. Классификация болезни Паркинсона.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетические основы болезни Паркинсона"

Актуальность проблемы.

Изучение структурно-функциональной организации генома человека — одна из центральных, проблем в современной биологии. В рамках этой проблемы решаются важнейшие задачи, связанные с анализом процессов? реализации генетической информации на всех уровнях биологической организации - от отдельной клетки до целостного организма. При этом будет выясненагфункция, отдельных: генов, , генных- сообщества и; генома* в- целом; в жизнедеятельности организма на всех этапах, онтогенеза; Для получения максимально» полной» информации/ требуется? выяснение роли; отдельных; элементов генома как и норме, так и при развитии патологических процессов — как моногенных, так и сложных многофакторных заболеваний: Анализ, патологических процессов позволит связать воедино.; генетические и эпигенетические: факторы, влияющие на функционирование организма в различных условиях.

Одними из наиболее актуальных заболеваний; являются? болезни центральной нервной системы^ так как они затрагивают функционирование основных регуляториых систем организма. Среди этих болезней отдельную большую; группу составляют нейродегенеративные: заболевания, которые характеризуются избирательной дегенерацией отдельных типов нейронов и структур мозга. Одним из таких заболеваний является болезнь Паркинсона — многофакторное заболевание с выраженным генетическим компонентом, для которого характерно существование как семейных, так и спорадических; форм. Болезнь Паркинсона относится к числу самых частых нейродегенёративных заболеваний человека. По последним данным, болезньюПаркинсона по всему миру болеет около; 6 млн. человек. Считается, что болезнь Паркинсона наблюдается у не менее 1-2% населения .в возрасте старше 65 лет и не менее 45% в возрасте старше 85 лет. В последнее время наблюдается рост числа больных идиопатическим паркинсонизмом и снижение возраста начала заболевания.

Высказывается предположение, что с увеличением среднего возраста населения в ближайшие годы распространенность болезни Паркинсона в мире будет увеличиваться.

Изучение этого заболевания активно ведется' уже на протяжении ста лет. Многолетние исследования позволили достаточно полно описать болезнь Паркинсона с'клинической точки зрения. Выявлено большое количество форм и стадий болезни Паркинсона, которые указывают на то, что при, заболевании 1 задействованы разные отделы нервной системы и в его патогенез вовлечено большое число различных процессов, обеспечивающих нормальное функционирование нервных клеток. Достаточно; полно охарактеризована болезнь Паркинсона с точки зрения нейропатологии. Показано, что нейродегенеративные изменения- при болезни* Паркинсона связаны с избирательной гибелью различных типов нейронов. В первую очередь наблюдается уменьшение числа дофаминергических нейронов в компактной части черной- субстанции, базальных ядрах, покрышке среднего мозга. Установлено, что характерные для болезни Паркинсона клинические признаки

I I проявляются при гибели приблизительно 60% дофаминергических нейронов компактной части черной субстанции и 80%-ном снижении" уровня-дофамина в полосатом теле. В то же время, несмотря' на интенсивные молекулярноI биологические исследования, причины развития заболевания остаются до конца не выясненными. На сегодняшний день выявлено семь генов, (57ЧСА, РАЖ2, ЬШК2, РШК1, иСНЫ, АТР13А2), вовлеченных в патогенез семейной; формы болезни Паркинсона. Однако их вклад в развитие спорадической формы заболевания остается' не известным. Кроме того, выявлен ряд потенциальных генов-кандидатов, связанных с развитием спорадической формьг болезни Паркинсона.

Анализ кодируемых этими генами белков позволил предложить несколько механизмов, объясняющих причины селективной и прогрессирующей гибели дофаминергических нейронов. К ним в первую очередь относятся процессы, связанные с митохондриальной дисфункцией, убиквитин-зависимой протеасомной деградацией белков, дифференцировкой дофаминергических нейронов, функционированием синапсов и лизосом, обменом дофамина.

В целом же до сих пор нет единой картины этиопатогенеза данного заболевания. В связи с этим дальнейшее изучение болезни Паркинсона на различных уровнях крайне актуально. Необходимо проводить анализ заболевания с генетических позиций, выявляя новые гены, различные мутации и полиморфные варианты, приводящие к семейной и влияющие на риск развития спорадической форм заболеваниям Важным направлением является изучение изменения транскриптома при болезни Паркинсона, в» первую очередь, на ранних стадиях патологического процесса. Это позволит выявить механизмы, запускающие нейродегенеративные процессы. Моделирование болезни* Паркинсона на животных также поможет лучше понять причины развития болезни Паркинсона. Проведение такого рода работ позволит в будущем выстроить целостную картину всех молекулярно-генетических процессов, задействованных в патогенезе заболевания, и, следовательно, лучше понять механизмы функционирования, как отдельных нейронов, так и всей нервной системы человека в целом.

Выявление механизмов и генов, вовлеченных в патогенез болезни Паркинсона на разных стадиях заболевания, поможет также разработать методы его доклинической диагностики. Это даст возможность начать разработку принципов и подходов к профилактическому лечению на ранних стадиях заболевания, когда процессы дегенерации дофаминергических нейронов затронули лишь ограниченное число клеток.

Цель и задачи исследования.

Основной целью данной работы было изучение роли генетических факторов в патогенезе спорадической формы болезни Паркинсона и выявление новых геномных и транскриптомных маркеров данного заболевания.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработка быстрого и эффективного метода анализа дозы отдельных экзонов гена PARK2 и гена SNCA на основе ПЦР в реальном времени.

2. Анализ мутаций с изменением копийности в генах PARK2 и SNCA у пациентов с болезнью Паркинсона.

3. Изучение роли точковых мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов в генах, вовлеченных в патогенез болезни Паркинсона, в развитии спорадической формы заболевания.

4. Поиск новых ДНК маркеров спорадической формы болезни Паркинсона.

5. Изучение изменения, транскриптома в процессе развития токсической модели болезни Паркинсона; вызванной введением 6-гидроксидофамина.

6. Изучение изменения транскриптома в клетках периферической крови пациентов с болезнью Паркинсона, находящихся на ранних стадиях заболевания.

Научная новизна и практическая значимость исследования.

Разработан быстрый и эффективный метод выявления делеций и дупликаций экзонов 1-12 в гене PARK2 и мультипликаций гена SNCA на основе ПЦР в реальном времени и технологии TaqMan. Данный метод пригоден для массового скрининга больных на мутации с изменением копийности в генах PARK2 и SNCA.

При проведении анализа мутаций с изменением копийности в генах PARK2 и SNCA впервые было показано, что делеции и дупликации экзонов гена PARK2 вносят существенный вклад в развитие спорадической формы болезни Паркинсона в российской популяции. Обнаружено, что у людей, имеющих делеции и дупликации, риск развития заболевания повышен в 8,53 раза (95%ДИ=1,14-63,52; р=0,0095) Вероятность развития спорадической формы болезни Паркинсона в раннем возрасте у людей, имеющих мутации с изменением копийности экзонов гена PARK2, повышена в 13,95 раза

95%ДИ=1,85-105,96; р=0,0004). Получено подтверждение гипотезы о том, что данный тип; мутаций в гене PARK2 в гетерозиготном состоянии ^влияет на риск развития заболевания.

Впервые установлено, ген PARK2 отвечает за часть фенотипической вариабельности; болезни Паркинсона в, российской популяции. Показано, что наличие: делеций: и/или дупликаций экзонов в гене PARK2 способствует существенному снижению возраста клинического дебюта болезни Паркинсона (на 9 лет), развитию дистопии и симметричному про исканию заболевания.

Впервые: обнаружено, что* ген РОМС вовлечен' в патогенез болезни Паркинсона.Показано, что наличие аллеля Т по полиморфизмам rs28930368 и; rs2071345 гена РОМС повышает риск развития заболевания в 5,01 раза: (95%ДИ=1,05-23,83; р;=0;03)>иприводит. к,развитию клинического.фенотипам преобладанием: мышечной ригидности: ■

Впервые показано- что ген WFS1 вовлечен в патогенез болезни Паркинсона.: Обнаружено, что наличие аллеля Т по полиморфизму rs 1801211 гена WFS1 повышает : риск развития заболевания в 2,34 . раза (95%ДИ -1,29-4,24; р=0,005). ,

Впервые выявлена ассоциация полиморфизма rs2736990 (G/T) в • гене SNCA с риском развития спорадической формы- болезни* Паркинсона для. российской популяции. Показано, что носительство аллеля С по данному полиморфизму повышает риск развития, болезни Паркинсона в 1,75 (95%ДИ= 1,19-2,58; р-0,004). . .

Выявленные нами мутации и однонуклеотидные полиморфизмы в генах PA11K2, SNCA, РОМС и WFS1 в дальнейшем могут быть включены в панель маркеров для определения индивидуального ри ска развития болезни Паркинсона.

Впервые проведено изучение относительных уровней экспрессии генов, GSK3B, SNCA, ST13 в периферической крови больных на ранних стадиях развития болезни Паркинсона и показано, что изменение уровня мРНК каждого гена в отдельности не является специфичным для этого заболевания. В то же время совместный анализ относительных уровней экспрессии генов СЖЗД БИС А, БТ13 выявил разные паттерны уровней их мРНК в периферической крови пациентов с болезнью Паркинсона, больных церебральным атеросклерозом и у группы пациентов с различными неврологическими заболеваниями. Это говорит о специфическом системном ответе организма на ранних стадиях патологического процесса при болезни Паркинсона. Кроме того, полученные данные указывают на то, что изменения экспрессии генов ОБКЗВ, БЫСА, БТ13 по отдельности не могут служить биомаркерами для ранних стадий болезни Паркинсона. Однако эти данные позволяют предположить, что совместный анализ количества транскриптов генов ОБКЗВ, БИС А, БТ13, а также других генов, вовлечённых в патогенез БП, в дальнейшем могут стать основой для создания панели маркеров для диагностики этого заболевания на досимптоматической стадии.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная генетика", Шадрина, Мария Игоревна

выводы.

1. Разработан основанный на ПНР в реальном времени метод анализа дозы отдельных экзонов гена PARK2 и гена SNCA, позволяющий проводить диагностику мутаций с изменением копийности при семейной и спорадической формах болезни Паркинсона.

2. Показано, что делеции и дупликации экзонов гена PARK2 играют, важную роль в патогенезе болезни Паркинсона. Риск развития болезни Паркинсона у лиц с мутациями с изменением копийности в гене PARK2 повышен в 8,53 раза (95%ДИ=1,14-63,52; р=0,0095). Выявлены корреляции между наличием мутаций с изменением копийности в гене PARK2, возрастом начала заболевания, наличием дистонии и симметричным течением заболевания.

3. Показано, что дупликации и трипликации гена SNCA не являются-значимыми.в патогенезе болезни Паркинсона у больных из России.

4. Впервые обнаружено, что ген РОМС вовлечен в патогенез болезни Паркинсона. Показано, что наличие аллеля.Т по полиморфизмам rs28930368 и rs2071345 гена РОМС повышает риск развития, заболевания^ в 5,01 раза (95%ДИ=1,05-23,83; р=0,03) и приводит к развитию^ клинического фенотипа, с преобладанием мышечной ригидности.

5. Впервые показано, что ген WFS1 вовлечен в патогенез болезни

Паркинсона. Обнаружено, что наличие аллеля Т по полиморфизму rs 1801211 гена WFS1 повышает риск развития заболевания в 2,34 раза (95%ДИ=1,29-4,24; р=0,005). Показано снижение уровня мРНК гена WFS1 в 1,64 раза (р<0,05) в черной субстанции крыс с паркинсон-подобным фенотипом, вызванным 6г гидроксидофамином.

6. Показано, что известные точковые мутации в генах моногенных форм болезни Паркинсона вносят небольшой* вклад в патогенез спорадической формы заболевания в России. В гене PARK2 выявлено три мутации (М1Е, A82G и C253Y) в гетерозиготном состоянии у трёх различных пациентов. Мутация G2019S в гене LRRK2 обнаружена у трех больных, и ее частота составляет 0,8% при спорадической форме заболевания.

7. Впервые для российской популяции выявлена ассоциация полиморфизма гз2736990 (С/Т) в гене БЫСА с риском развития спорадической формы болезни Паркинсона. Показано, что наличие аллеля С по данному полиморфизму повышает риск развития заболевания в 1,75 (95%ДИ=1,19-2,58; р=0,004).

8. Впервые показано, что изменение экспрессии генов 57УСА, 8Т13 в периферической крови больных на ранних стадиях развития болезни Паркинсона по отдельности является не специфичным. Однако совместный анализ относительных уровней экспрессии данных генов выявил разные паттерны уровней их мРНК в периферической крови при болезни Паркинсона и других неврологических заболеваниях, что говорит о специфическом системном ответе организма на ранних стадия патологического процесса при болезни Паркинсона.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Как уже не раз говорилось, БП сложное многофакторное заболевание, затрагивающее разные отделы нервной системы. БП имеет богатую клиническую картину. Установлено, что нейродегенеративные изменения при БП связаны с избирательной гибелью различных типов нейронов. Это указывает на то, что в патогенез заболевания вовлечено большое число- различных процессов, обеспечивающих нормальное функционирование нервных клеток. Однако, несмотря на многолетние и интенсивные исследования, причины развития- заболевания остаются до конца не выясненными: Bt то лее время получен- ряд данных, указывающих на то, что в патогенезе БП могут играть важную роль генетические факторы. Об этом в* первую очередь говорит наличие семейных форм заболевания' и выявление семи, генов (SNCA, PARK2, LRRK2, PINK1, DJ1, UCHL1, АТР13А2), мутации в которых приводят к их развитию. Однако в большинстве случаев (85%-90%) БП носит спорадический характер и обусловлено взаимодействием между генетической' конституцией t организма* и факторами» окружающей среды. В связи с этим в данной* работе было- проведено молекулярно-генетическое исследование патогенеза» БП на примере изучения различных групп больных БП< из России и 6-ГДА модели паркинсонизма. При этом использовалась стратегия из трех направлений: анализ мутаций в генах моногенных форм БП у спорадических больных, поиск новых генов-кандидатов заболевания и анализ изменения транскриптома на разных стадиях БП.

Генетический анализ различных групп больных БП показал, что определенные мутации в генах моногенных форм БП, а именно делеции и дупликации экзонов гена PARK2, могут вносить существенный вклад в патогенез спорадической формы БП: Было показано, что у людей, имеющих делеции и дупликации, риск развития заболевания повышен в 8,53 раза (р=0,0095) и установлено, ген PARK2 отвечает за часть фенотипической вариабельности БП в российской популяции. Показано, что наличие делеций и/или дупликаций экзонов в гене PARK2 способствует существенному снижению возраста начала БП (на 9 лет), развитию дистонии и симметричному протеканию заболевания.

Были также впервые обнаружены ассоциации между полиморфными вариантами генов РОМС (rs28930368 и rs2071345), WFS1 (rsl801211), SNCA (rs2736990) И4 риском развития спорадической формы болезни Иаркинсона для российской популяции.

Выявленные нами мутации и однонуклеотидные полиморфизмы» в генах PARK2, SNCA, РОМС и WFS1 в дальнейшем могут быть.включены в панель, маркеров ^ дляг определения индивидуального риска развития БП. Выявление таких лиц из^ группы риска на досимптоматической стадии поможет вовремя принять профилактические меры, что если не предотвратит развитие БП; то отодвинет появление клинических признаков на более поздний срок' и» значительно снизит тяжесть протекания заболевания.

Кроме того, выявление таких новых генов кандидатов БП, как ген РОМС и ген WFS1 указывает на то, что важную роль в дегенерации дофаминергических нейронов, помимо митохондриальной дисфункции- и убиквитин-зависимого протеолиза, может играть нарушение процессов передачи нервного импульса. Можно'предположить, что развитие клинических j признаков заболевания может быть связано не только с гибелью нейронов, но и* с нарушением их нормального взаимодействия.

Анализ изменения транскриптома в черной субстанции- мозга крыс в процессе развития паркинсон-подобного фенотипа под воздействие-' 6-ГДА позволил выявить еще четыре новых гена - PVALB, GRM1, PPTIh NMU, которые можно отнести к группе вероятных генов кандидатов БП. С другой» стороны, изучение транскриптома у крыс с 6-ГДА моделью БП показал, что при таком способе моделирования большинство генов дают неспецифический ответ, связанный в первую очередь с введением токсина непосредственно в область мозга. Вероятно, для изучения изменения экспрессии генов данная модель не является полностью адекватной.

Проведение работ по анализу изменения транскриптома в периферической крови больных БП позволило выявить характерный для ранней стадии заболевания паттерн экспрессии генов ОБКЗВ, БИСА, БТ13, что, по-видимому, указывает на наличие специфического системного ответа организма на ранних стадия патологического процесса при болезни Паркинсона.

В целом же, полученные нами данные расширяют наши представления о механизмах патогенеза БП. На данный момент мы с уверенность можем утверждать, что изменения первичной структуры ДНК играет главную роль не только в патогенезе семейной форм заболевания, но и вносят существенный вклад в развитие спорадической формы БП. С другой стороны, показано, что важную роль в патогенезе заболевания может играть изменение транскриптома. Все это позволяет предложить следующую стратегию анализа БП, которая будет заключаться в сочетании геномного и транскриптомного анализа различных форм и стадий БП. При этом эти исследования будут включать в себя как анализ уже известных нам генов, так и поиск новых генов, вовлеченных в патогенез заболевания.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Шадрина, Мария Игоревна, Москва

1. Бочаров Е.В., Кучеряну B.F., Крыжановский Г.Н. и др. Влияниекомплексного фитоадаптогена на МФТП-индуцированный паркинсонический синдром у мышей // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -2006. -Т. 141. -С. 555-558.

2. Голубев В.Л:, Левин Я!И., Вейн А.М. Болезнь Паркинсоиа и: синдромпаркинсонизма. -М: «МЕДпресс-Информ», 2000.-416 с.

3. Горбунова В.Н., Савельева-Васильева' Е. А., Красилышков В.В.

4. Молекулярная неврология; Часть 1. Заболевания нервно-мышечной системы. -СПб: "Интермедика'', 2000 320 с.

5. Загоровская Т.Б., Иллариошкин С.Н., Сломинский П.А., и- др. Клиникогенетический анализ ювенильного; паркинсонизма в России // Журн. неврол. и психиатр. -2004. -Т. 104. -С. 66-72.

6. Зиязетдинова Г.З., Сапронова А.Я., Киясова В;А.,Г и; др: Компенсаторная^реакция при дегенерации дофамииергических нейронов аркуатного ядра у крыс // Журн. эволюц. биохимии и физиологии: -2008. -Т. 44. -С. 72-77.

7. Козина Е.А.,, Хаиндрава В.Г., Кудрин. B.C. и др. Экспериментальноемоделирование функци онал ы i ой недостаточности нигростриатной дофаминергической системы у мышей // Рос.физиол. журн. -2010; -Т. 96. С. 270-282.

8. Крыжановский Г.Н., Атаджанов М.А., Магаева C.B. и др. Изменения ЭЭГи явления паркинсонизма при интракаудатном введении антител кдофамину// Бюл. эксперим. биологии и медицины. -1989. —№ 1. -С. 13— 16.

9. Крыжановский Г.Н., Карабань И.Н., Магаева C.B. и др. Болезнь Паркинсона: Этиология, патогенез, клиника, лечение, профилактика. М.: Медицина, 2002. 336 с.

10. Крыжановский Г.Н., Кучеряну В.Г., Угрюмов М.В. Общие принципы моделирования паркинсонизма// В кн.: Нейродегенеративные заболевания: фундаментальные и прикладные аспекты / под. ред. М.В. Угрюмова. М. : Наука, 2010 - С.212-213.

11. Крыжановский Г.Н., Магаева C.B. Ацетилхолиновая модель паркинсонического синдрома // В кн.: Нейродегенеративные заболевания: фундаментальные и прикладные аспекты / под. ред. М.В. Угрюмова. — М. : Наука, 2010 С.221-222.

12. Кучеряну В.Г., Магаева C.B., Базян A.C. и др. Нейротоксические модели.// В кн.: Нейродегенеративные заболевания: фундаментальные и прикладные аспекты / под. ред. М.В. Угрюмова. — М. : Наука, 2010 — С.215-221.

13. Магаева C.B. Нейроиммунологические модели // В кн.: Нейродегенеративные заболевания: фундаментальные и прикладные аспекты / под. ред. М.В. Угрюмова. -М. : Наука, 2010 — С.222-223.

14. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Молекулярное клонирование. Москва: "Мир". 1984. Р.

15. Нуштаев И. А. Константин Николаевич Третьяков (1892-1956): биография отдельного лица // Неврологический журнал. —2003. — Т. 8. — С.51-53.

16. Сломинский П.А., Милосердова О.В., Попова С.Н. и др. Анализ делеционных, мутаций в гене PARK2 у больных идиопатической формой болезни Паркинеона//Генетика.-2003.-Т. 39.-С. 223-228.

17. Угрюмов М.В. Традиционные представления о нейродегенеративных заболеваниях // В кн.: Нейродегенеративные заболевания: фундаментальные и прикладные аспекты / под. ред. М.В. Угрюмова. — М. : Наука, 2010-С.8-35. •

18. Угрюмов М.В., Б.А. Козина. Модель досимптомной стадии . паркинсонизма« // В, кн.: ; Нейродегенеративные' заболевания:фундаментальные и прикладные аспекты У под. ред. М.В. Угрюмова. — ж: : Наука, 2010 С. 223-229. . ' ; ' ■ '

19. Федорова Н.В. Лечение: и реабилитация больных паркинсонизмом:

20. Автореферат дис.дтра мед. наук., М. 1996. \ , '

21. Хаиндрава В.Г., Козина Е.А., Кучеряну В.Г. и др. Моделированиедоклинической и ранней клинической стадий болезни Паркинеона; И Жури, неврологий; и психиатрии им. G.C. Корсакова. -2010. -Т. 110- С.41;-47:V V • ; ■ "

22. Хаиндрава В .Г., Кудрин, B.C., Кучеряну В.Г. и др. Экспериментальное моделирование клинической; и преклинической». .стадий»:: болезни^ Паркинеона // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -2010. -Т. 150. —С.494. ■ ■ " ' . ."'■■': :

23. Aarsland D., Andersen К., Larsen J.P. et al. Prevalence and characteristics of dementia in parkinson disease: An 8-year prospective study // Arch Neurol. -2003. -V. 60(3). -P. 387-392.

24. Abbas N., Lucking C.B., Ricarcl S. A wide variety of mutations in the parkin gene are responsible for autosomal recessive parkinsonism in< Europe // Hxim. Mol. Genet. -1999. -V. 8. P. -567-574.

25. Abbott R.D., Petrovitch H., White L.R. et al. Frequency of bowel movements and the future risk of Parkinson's disease // Neurology. -2001. -V. -57. P. 456-462.

26. Abe T., Isobe C., Murata T. et al. Alteration of 8-hydroxyguanosine concentrations in the cerebrospinal fluid and serum from patients with Parkinson's disease //Neurosci. Lett. -2003. -V. 336. -P. 105-108.

27. Aguiar P.d.C., Lessa P.S., Godeiro C.J. Genetic and environmental findings in early-onset Parkinson's disease Brazilian patients // Mov. Disord. -2008. -V. 23.-P. 1228-1233.

28. Ahmed S.S., Santosh W., Kumar S., Christlet H.T. Metabolic profiling of Parkinson's disease: evidence of biomarker from gene expression analysis and rapid neural network detection // J Biomed. Sci. -2009. -V. 16. -P. 63-75.

29. Ahn T.B., Kim S.Y., Kim J.Y. et al. alpha-Synuclein gene duplication is present in sporadic Parkinson disease // Neurology. -2008. -V. 70. -P. 43-49.

30. Alam M., Schmidt W.J.- Rotenone destroys dopaminergic neurons and induces parkinsonian symptoms in rats // Behav. Brain Res. -2002. -V. 136, N 1. -P. 317-324.

31. Applied Biosystems User Bulletin No 2: ABI Prism 7700 Sequence Detection System. 2001. P.

32. Armentero M.T., Sinforiani E., Ghezzi C. et al. Peripheral expression of key regulatory kinases in Alzheimer's disease and Parkinson's disease // Neurobiol. of Aging. -2010. -Epub ahead of print.

33. Au W.L., Adams J.R., Troiano A.R., Stoessl A.J. Parkinson's disease: In vivo assessment of disease progression using positron emission tomography // Brain Res. Mol. Brain Res. -2005. -V. 134. -P. 24-33.

34. Auluck P.K., Bonini N.M. Pharmacological prevention of Parkinson disease in Drosophila // Nat. Med. -2002. -V. 8. -P. 1185-1186. ■

35. Chcm. -2005. -V. 280: -P. 2873-2878.

36. Baghbaderani B.A., Mukliida K., Sen A. et al. Expansion of human neural precursor cells in large-scale bioreactors for the treatment of neurodegenerative disorders // Biotechnol. Prog; -2008.-V. 24. -PL 859-870.

37. Bailey P. Biological markers in Alzheimer's disease // Can. J. Neurol. Scr. -2007. -V. 34. -P. S72-76.

38. Bandopadhyay R., Kingsbury A.E., Cookson M:R. The expression of DJ-1 (PARK7) in normal human, CNS and;; idiopathic. Parkinson's disease: // Brain; -2004.-V. 127.-P. 420-430.

39. Bankiewicz K.S., Oldfi eld E.H., Chiueh C.C. et al. I-Iemiparkinsonism in monkeys after unilateral internal carotid artery infusion of l-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) // Life Sci. -1986. -V. 39: -P. 7-16. '

40. Barbanti P., Fabbrini G., Ricci A. Increased expression of dopamine receptors on lymphocytes in Parkinson's disease // Mov. Disord. -1999. -V. 14. -P. -764-771. V

41. Barbour, R., Kling, K., Anderson, J.P. et al. Red blood cells are the major source of alpha-synuclein in blood // Neurodegener Dis. -2008. -V. 5. -P. 5559. ■ ■ " . •

42. Benmoyal-Segal L.,. Soreq H. Gene-environment interactions, in! sporadic Parkinson's disease // J. Neurochem. -2006. -V. 97. -P. 1740-1755., V

43. Berendse H:W., Booiji Jt, Franco! C.M: et aL; Subclinical ' dopaminergic ; dysfunction in- asymptomatic; Parkinson's disease patients' relatives with a-decreased sense of smell // Ann. Neurol. 2001. V. 50. P. 34-41. . .

44. Berg D. Transcranial sonography in the early and differential diagnosis of Parkinson's disease // J. Neural. Transm. -2006. -V. 70. -P. 249-254.1 .

45. Berg D., Niwar M., Maass S. et al- Alpha-synuclein and Parkinson's disease: , implications from the screening of more than 1900 patients // Mov. Disord.-2005(a), -V. 20. -P. 1191-1194. = v'U

46. Berg D., Schweitzer K.J., Leitner P. et al. Type and frequency of mutations in the LRRK2 gene in familial and sporadic Parkinson's disease // Brain; -2005(b). -V. 128. -P. 3000-3011.

47. Bergman O.,. Hakansson A., Westberg L. et al. PITX3 polymorphism is associated with early onset Parkinson's disease // Neurobiol. Aging. -2010. -V. 31. -P. 114-117.,

48. Bemheimer Ii., Birkmayer W., Hornykiewicz O. et al. Brain dopamine and;the syndromes: of parkinson and huntington. Clinical; morphological and: neurochemical correlations // J. Neurol. Sei. —1973. V. 20. —P. 415-455.

49. Biswas A., Gùptaï A/, NaiyatTi et;al: Molecular pathogenesis; of-Parkinson's; ; disease: Identification of mutations in the parkin gene in Indian patients: //. Parkinsonism Relat. Disord. -2006; -V. 12. -P. 420-426.

50. Blackinton J., Ahmad R., Miller D.W. et al. Effects of DJ-1 mutations and , polymorphisms on protein stability and subcellular localization // Brain Res.

51. Mol. Brain Res.-2005.-V.-134.-P. 76-83.

52. Blandini F., Armentero M.T.,. Martignoni E. The 6-hydroxydopamine: model:: News from past// Parkinsonism Relat: Disord; -2008L-\i. l4. -Pi 124-129.

53. Boeve B.F., Silber M.H., Ferman T .J. et all Association of REM sleep behavior disorder and neurodegenerative disease may reflect an- underlying synucleinopathy // Mov. Disord. 2001.-V. 16. -P. 622-630;

54. Boeve B.F., Silber M.H., Saper C.B. et al. Pathophysiology of REM sleep behaviour disorder and relevance to neurodegenerative disease // Brain. -2007. -V. 130. -P. 2770-2788.

55. Boeve B.F., Silber, M.H., Ferman T.J. REM sleep behavior disorder in Parkinson's disease and dementia with Lewy bodies // J. Ger. Psychiat. Neurol. -2004. .V. 17.-P. 146-157.

56. Bogaerts V., Nuytemans K., Reumers J. et al. Genetic- variability in the mitochondrial serine protease HTRA2 contributes to risk for Parkinson disease // Hum. Mutat. -2008. -V. 29. -P. 832-840.

57. Bonifati V., Rizzu P., van Baren M.J. et al. Mutations in the DJ-1 gene associated with autosomal recessive early-onset parkinsonism // Science. -2003. -V. 299. -P. 256-259.

58. Bönsch D., Reulbach U., Bayerlein K. et al. Elevated alpha synuclein mRNA levels are associated with craving in patients with alcoholism // Biol. Psychiatry. -2004. -V. 56. -P. 984-986.

59. Borie C., Gasparini F., Verpillat P. et al. Association study between iron-related genes polymorphisms and Parkinson's disease // J. Neurol. -2002. —V. 249. -P. 801-804.

60. Bosler O., Calas A. Radioautographic investigation of monoaminergic neurons: an evaluation // Brain Res. Bull. -1982. -V. 9. -P. 151-169.

61. Bossers K., Meerhoff G., Balesar R. et al. Analysis of Gene Expression in Parkinson's Disease: Possible Involvement of Neurotrophic Support and Axon Guidance in Dopaminergic Cell'Death // Brain Pathology. -2009. -V. 19. -P. 91-107.

62. Bower J.H., Maraganore D.M., McDonnell S.K., Rocca W.A. Incidence and distribution of parkinsonism in Olmsted County, Minnesota, 1976-1990 // Neurology. -1999. -V. 52. -P. 1214-1220.

63. Braak H., Del Tredici K., Rüb U., et al. Staging of brain pathology related to sporadic parkinson's disease // Neurobiol. Aging. — 2003. -V. 24. —P. 197-211.

64. Braak H., Ghebremedhin E., Riib, U., et al. Stages in the development of Parkinson's disease-related pathology // Cell Tissue Res. -2004. -V. 318. 121-134.

65. Bras J., Guerreiro R., Ribeiro M. et al. Analysis of Parkinson disease patients from Portugal for mutations in SNCA, PRKN, PINK1 and LRRK2 // BMC Neurol. -2008. -V. 8. -P. 1-7.

66. Bressman S.B. Dystonia: phenotypes and genotypes // Rev. Neurol. (Paris). -2003. -V. 159. -P. 849-856.

67. Bronte-Stewart H.M., Minn Y., Rodrigues, R. et al. Postural instability in idiopathic Parkinson's disease: the role of medication and unilateral pallidotomy //Brain. -2002.-V. 125. -P. 2100-2114.

68. Brooks A.I., Chadwick C.A., Gelbard H.A. et al. Paraquat elicited neurobehavioral syndrome caused by dopaminergic neuron loss // Brain Res. -1999.-V. 823.-P. 1-10.

69. Brueggemann N., Odin P., Grunewald A., et al. Re: Alpha-synuclein geneiduplication is present in sporadic Parkinson disease // Neurology. -2008. —"V. 71.-P. 1294.

70. Buchanan D.D., Silburn P.A., Chalk J.B. et al. The Cys282Tyr polymorphism in the HFE gene in Australian Parkinson's disease patients // Neurosci. Lett. -2002.-V. 327. -P. 91-94.

71. Buhmann C., Arlt S., Kontush A. et al. Plasma and CSF markers of oxidative stress are increased in Parkinson's disease and influenced by antiparkinsoíúan medication //Neurobiol. Dis. -2004. -V. 15. -P. 160-170.

72. Burn DJ. Depression in Parkinson's disease // Europ. J. Neurol. —2002. —V- 9--p. 44-54.

73. Burn D.J., Mark M.H., Playford E.D. et al. Parkinson's disease in twin stU-<Ües with 18F-dopa and positron emission tomography //Neurology. -1992. -V- 42. -P. 1894-1900.

74. Buttarelli F.R., Capriotti G., Pellicano C. et al. Central and peripheral dopamine transporter reduction in Parkinson's disease // Neurol. Res. -2009. -V. 31.-P. 687-691.

75. Buttrick G.J., Wakefield J.G. PI3-K and GSK-3: Akt-ing together with microtubules // Cell Cycle. -2008. -V. 7. -P. 2621-2625.

76. Caffrey T.M., Joachim C., Paracchini S. et al. Haplotype-specific expression of exon 10 at the human MAPT locus // Hum. Mol. Genet. -2006. -V. 15>. -P.' 3529-3537.

77. Caldwell H.K., Lee H-J., Macbeth A.H., Young III W.S. Vasopressin: behavioral role of an "original" neuropeptide // Prog. Nerobiol. -2008. -V. 84. -P. 1-24.

78. Caronti B., Antonini G., Calderaro C. et al. Dopamine transporter immunoreactivity in peripheral blood lymphocytes in Parkinson's disease // J. Neural. Transm. -2001. -V. -108. -P. 803-807.

79. Carvey P.M., McRae A., Lint T.F. The potential use of a dopamine neuron antibody and a striatalderived neurotrophic factor as diagnostic markers in Parkinson's disease //Neurology. -1991. -V. 41. -P. 53-58.

80. Casarejos M.J., Menendez J., Solano R.M., et al. Susceptibility to rotenone is increased in neurons from parkin null mice and is reduced by minocycline // J. Neurochem. -2006. -V. 97. P. -934-946.

81. Chartier-Harlin M.C., Kachergus J., Roumier C., et al. Alpha-synuclein locus duplication as a cause of familial Parkinson's disease // Lancet. -2004. -V. 364. -P. 1167-1169.

82. Chaudhary S., Behari M., Dihana M., et al. Parkin mutations in familial and sporadic Parkinson's disease among Indians // Parkinsonism Relat. Disord. -2006 -V. 12. -P. 239-245.

83. Chen L., Cagniard B>, Mathews T. et al. Age-dependent motor deficits and dopaminergic dysfunction in DJ-1 null mice // J. Biol.Chemist. -2005. -V. 280. -P. 1418-21426.

84. Choi J.M., Woo M.S., Ma ILL, et al. Analysis of PARK genes in a Korean cohort of early-onset Parkinson disease // Neurogenetics. -2008. -V. 9i -P: 263-269: ' ■". . ■

85. Chung K.K., Thomas B., Li X., Pletnikova O., et al . S-nitrosylation of parkin? regulates ubiquitination and compromises parkin's protective function // Science. -2004. -V. 304. -P. 1328-1331. .

86. Ciechanover A., Brundin, P. The ubiquitin proteasome system in neurodegenerative diseases: sometimes the! chicken, sometimes the egg // Neuron. -2003. -V. 40. -P. 427-446:

87. Clark L.N., Haamer E., Mejia-Santana Hi et al. Construction and validation of a Parkinson's disease mutation genotyping array for the Parkin gene // Mov. Disord. -2007. -V. 22. -P. 932-937.

88. Clark I.E., Dodson M.W., Jiang C. et al. Drosophila pinkl is required for mitochondrial function and interacts genetically with parkin // Nature. 2006(a). V. 441. P. 1162-1166.

89. Clark L.N., Afridi S., Karlins E. et al. Case-control study of the parkin gene in early-onset Parkinson disease // Arch. Neurol.-2006(b). -V. 63. -P. 548552.

90. Clark L.N., Afridi S., Mejia-Santana H. et al. Analysis of an early-onset Parkinson's disease cohort for DJ-1 mutations // Mov. Disord. -2004. -V. 19. -P. 796-800.

91. Clements C.M., McNally R.S., Conti B.J., et al. DJ-1, a cancer and Parkinson's disease-associated protein, stabilizes the antioxidant transcriptional master regulator Nrf2 // Proc. Natl Acad. Sci. USA. -2006. -V. 103. -P. 15091-15096.

92. Cookson M.R. The role of leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) in Parkinson's disease // Nat Rev Neurosci. -2010. -V. 11. -P. 791-797.

93. Cookson M.R., Hardy J., Lewis P.A. Genetic neuropathology of parkinson's disease // Int. J. Clin. Exp. Pathol. -2008. -V. 1. -P. 217-231.

94. Cookson M.R., Xiromerisiou G., Singleton A. How genetics research in Parkinson's disease is enhancing understanding of the common idiopathic forms of the disease // Curr. Opin. Neurol. -2005. -V. 18. -P. 706-711.

95. Croisier E., Graeber M.B. Glial degeneration and reactive gliosis in alphasynucleinopathies: the emerging concept of primary gliodegeneration // Acta Neuropathol. -2006. -V. 112. -P. 517-530.

96. Cuervo A.M., Stefanis L., Fredenburg R., et al. Impaired degradation of mutant alpha-synuclein by chaperone-mediated autophagy // Science. -2004. -V. 305. -P. 1292-1295.

97. Cullen V., Lindfors M., Ng J., et al. Cathepsin D expression level affects alpha-synuclein processing, aggregation, and toxicity in vivo // Mol. Brain. -2009. -V. 2. -P. 5-22.

98. D?AmatoRlJ., Zweig R.M:, Whitehouse PJ. et al. Aminergic systems in Alzheimer's disease and Parkinson's disease // Ann. Neurol. -1987. -V. 22. -P. 229-236. ,

99. Dachsei J.C., Lincoln S.J., Gonzalez J. et al. The Ups and Downs of alphá-Synuclein mRNA Expression // Mov. Disord. -2007. -V. 22. -P. 293-295. :

100. Dagda R.K., Zhu J., Kulich S.M., Ghu C.T. Mitochondrial^ localized ERK2 regulates mitophagy and autophagic.cell stress: implications .for Parkinson's disease // Autophagy. -2008: -V. 4. -P. 770-782. ;; : ; ; ' : ' : ;

101. Dahlstrom A., Wigander A., Lundmark K. Investigations on ; auto-antibodies in; Alzheimer's:and- Parkinson's;diseases;- using; definedíneuronalí cultures:// J. Neurol. Transm. -1990: -V. 29. -P. 195-206.

102. Defebvre L., Lecouffe P., Destée A. et- al. Tomographic measurements of regional cerebral blood flow in progressive supranuclear palsy and parkinson's disease //Acta Neurol. Scand. -1995. -V. 92. -P. 235-24 L. .

103. DeKosky S.T., Marek K. Looking Backward to Move. Forward: Early Detection of Neurodegenerative Disorders-// Science. -2003. -V. 302. -P. 830'•' -834. ■ • ; ■ . :■•'•

104. Deng J:, Lewis P.A., Greggio E. et al. Structure of the ROC domain from the Parkinson's disease-associated leucine-rich repeat kinase 2^revealsi:a' dimeric GTPase // Proc Natl Acad Sei USA. -2008. -V. 105. -P. 1499-1504.

105. Di Fonzo A., Chien H.F., Socal M. et aí. ATP13A2 missense mutations. in juvenile parkinsonism and'young onset Parkinson disease //Neurology. -2007. -V. 68.-P. 1557-1562. . ,

106. Di Fonzo A., Dekker M.C., Montagna P. et al. FBX07 mutations cause autosomal recessive, early-onset parkinsonianpyramidal syndrome // Neurology. -2009. -V. 72. -P. 240-245.

107. Dil Kuazi A., Kito K., Abe Y. et al. NEDD8 protein is involved in ubiquitinated inclusion bodies // J. Pathol. -2003. -V. 199. -P. 259-266.

108. Djarmati A., Guzvic M., Grünewald A. et al. Rapid and reliable detection of exon rearrangements in various movement disorders genes by multiplex ligation-dependent probe amplification // Mov. Disord. -2007. -V. 22. -P. 1708-1714.

109. Dolotov O.V., Seredenina» T.S., Levitskaya N.G. et al. The heptapeptide SEMAX stimulates BDNF expression in different areas of the rat brain in vivo // Dokk Biol. Sei. -2003. -V. 391. -P. 292-297.

110. Donato R., Miljan E.A., Hines S J. et al. Differential development of neuronal physiological responsiveness in two human neural stem cell lines // BMC Neurosci. -2007. -V. 8. -P. 36-47.

111. Dong Q.-h., Zheng S., Hu Y. et al. Evaluation of ST13 gene expression in colorectal cancer patients // J. Zhejiang University SCIENCE B. -2005. -V. 6. -P. 1170-1175.

112. Doxakis E. Post-transcriptional Regulation of a-Synuclein Expression'by mir-7 and mir-153 // J. Biol. Chem. -2010. -V. 285. -P. 12726-12734.

113. Drgon, T., Lin, Z., Wang, G.-J. et al. Common' Human 5 Dopamine Transporter (SLC6A3) Haplotypes Yield Varying'Expression Levels In Vivo // Cel. Mol. Neurobiol. -2006. -V. 26. -P. 4-6.

114. Dudbridge F., Gusnanto, A. Estimation of significance thresholds for genomewide association scans // Genet. Epidemiol. -2008. -V. 32. —P. 227234.

115. Duke D.C., Moran L.B., Pearce R.K. et al. The medial and lateral substantia nigra in Parkinson's disease: mRNA profiles associated with higher brain tissue vulnerability //Neurogenetics -2007. -V. 8. -P. 83-94.

116. Dumanchin С., CamuzatA.,CampionD., Verpillat.P. etal. Segregation of a missense mutation in the microtubule-associated protein tau gene with familial frontotemporal dementia and parkinsonism // Hum. Molt .Genet. -1998. -V. 7. -P. 1825-1829: .

117. Duronio V. The life of a cell: apoptosis regulation by the PI3K/PKB pathway // Biochem. J. -2008. -V. 415. -P. 333-344. '

118. Edwards T.L., Scott W.K., Almonte C. et ali Genomerwiderassociatiomstudyi confL: rms SNPs im SNCA and the МАРТ region as; common risk factors« for: Parkinsomdisease // Ann: Hum^Geiiett -2010. -V.74:,-P:97-l 09;

119. Ekstrand. M.L, Terzioglu M., Galter D. et al. Progressive parkinsonism in . mice with respiratory-chain-deficient dopamine neurons // Proc. Nat. Acad. Sei.

120. USA. -2007. -V. 104. -P. 1325-1330. : .Г138. lil-Agnaf O.M., Irvine G.B. Aggregation and neurotoxicity of alpha-synuclein ' and related peptides// Biochem. Soc. Trans. -2002. -Y. 30. -P. 559-565.л

121. El-Agnaf O.M., Salem S.A.,. Paleologou K.E. et al: Alpha-synuclein. implicated? im Parkinson's disease is present iw extracellular biological!" flüids,. including human plasma // FASEB J. -2003. -V. 17.-P. 1945-1947.

122. El-Agnaf O.M., Salem S.A., Paleologou K.E. et al. Detection of oligomeric forms of alpha-synuclein protein in human plasma as a potential biomarker for Parkinson's disease // FASEB J. -2006. -V. 20l -Pi 419-425:.

123. EllerM., Williams, D.R. Biological fluid biomarkers in: neurodegenerative parkinsonism // Nat. Rev. Neurol. -2009. -V. 5. -P. 561-570.

124. Elstner M., Morris G.M., Heim K. ct al. Single-Cell Expression Profiling of Dopaminergic Neurons, Combined • with Association Analysis Identifies . PyridoxaBKinaseras Parkinson's Disease:Gene // Ann. Neurol. -2009. -V. 66. -P. 792-798.

125. Evangelou E., Maraganore D.M., Annesi G. et al. Non-Replication of Association for Six Polymorphisms From Meta-Analysis of Genome-Wide

126. Association Studies of Parkinson's Disease: Large-Scale Collaborative Study // Am. J. Med. Genet. Part B. -2010. -V. 153B. -P. 220-228.

127. Farrer M., Destée T., Becquet E. et al. Linkage exclusion in French families with probable Parkinson1 s disease // Mov. Disord. -2000. -V. 15. -P. 10751083.

128. Farrer M., Kachergus J., Forno L. et al. Comparison of kindreds- with parkinsonism and. alpha-synuclein genomic multiplications // Ann. Neurol. 2004. -V. 55. -P. 174-179.

129. Farrer M., Wavrant-De Vrieze F. 'et al. Low frequency of alpha-synucléinmutations ins familial'Parkinson's disease // Ann. Neurol: -1998. -V. 43. -P.i394.397.

130. Fernandes N.D., Sun Y., Price B.D. Activation of the kinase activity of ATM by retinoic acid is required for CREB-dependent differentiation of neuroblastoma cells // J. Biol. Chem. -2007: -V. 282. -P. 16577-16584. ■

131. Ferrari, C., Rampini, P., Benco, R. et al. Functional characterization ofhypothalamic hyperprolactinemia // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1982. V. 55. P.897.901.

132. Fiala O., Pospisilova L., Prochazkova J. et al. Parkin mutations and phenotypic features in Czech patients with early-onset. Parkinson's disease // Neuro. Endocrinol. Lett.-2010.-V. 31.-P. 187-192:

133. Fonzo I.D., Rohe C.F., Ferreira J. et al. A frequent LRRK2 gene mutation associated with autosomal dominant Parkinson's disease // Lancet. -2005. -V. 365.-P. 412-415.

134. Formichi P., Battisti C., Radi E., Federico A. Cerebrospinal fluid tau, A beta, and phosphorylated tau protein for the diagnosis of Alzheimer's disease // J. Cell Physiol. -2006. -V. 208. -P. 39-46.

135. Foroud T., Uniacke S.K., Liu L. et al. Heterozygosity for a mutation in the parkin gene leads to later onset Parkinson disease // Neurology. -2003. -V. 60. -P. 796-801.

136. Fortin D.L., Troyer M.D., Nakamura K. et al. Lipid rafts mediate the synaptic localization of alpha-synuclein // J Neurosci. -2004. -V. 24. -P. 6715-6723.

137. Fowler C.J. Update on the neurology of Parkinson's disease // Neurourol Urodyn. -2007. -V. 26. -P. 103-109.

138. Fox S.H., Brotchie J.M. The MPTP-lesioned non-human primate models of Parkinson's disease. Past, present, and future // Progress in Brain Research. -2010.-V. 184. -P.133-157

139. Frank-Cannon T.C., Tran T., Ruhn K.A. et al. Parkin deficiency increases vulnerability to inflammation-related nigral degeneration // J. Neurosci. -2008. -V. 28.-P. 10825-10834.

140. Frankhauser P., Grimmer Y., Bugert P. et al.Characterization of the neuronal dopamine transporter DAT in human blood platelets // Neurosci. Let. -2006. -V. 399. -P. 197-201.

141. Freed C., Revay R., Vaughan R.A. et al. Dopamine transporter immunoreactivity in rat brain // J.Comp. Neurol. -1995. -V. 359. -P. 340-349.

142. Fuchs J., Nilsson C., Kachergus J. et al. Phenotypic variation in a large Swedish pedigree due to SNCA duplication and triplication. Neurology. —2007. -V. 68. -P. 916-922.

143. Fujiwara II., Hasegawa M., Dohmae N. et al. alpha-Synuclein is phosphorylated in synucleinopathy lesions // Nat. Cell Biol. -2002. -V. 4. -P. 160-164.

144. Fuller P.M., Saper C.B., Lu J. The pontine REM switch: past and present // J. Physiol. -2007. -V. 584. -P. 735-741.

145. Funayama M., Hasegawa K., Kowa H. et al. Anew locus for Parkinson's disease (PARK8) maps to chromosome 12pll.2-ql3.1 // Ann. Neurol. -2002. -V. 51.-P. 296-301.

146. Fung H.C., Scholz S., Matarin, Mi et al. Genome-wide genotyping in Parkinson's disease and neurologically normal controls: first stage analysis and public release of data // Lancet Neurol. -2006. -V. 5. -P. 911-916.

147. Gagnon J.F., Bedard M.A., Fantini M.L. et al. REM sleep behavior disorder and REM sleep without atonia in Parkinson's disease // Neurology. -2002. —V. 59. -P. 585-589.

148. Gandhi S., Muqit M.M., Stanyer L., et al. PINK1 protein in normal-human brain and Parkinson's disease // Brain. -2006. -V. 129. -P. 1720-1731*.

149. Gandhi, S., Wood, N.W. Genome-wide association studies: the key to unlocking neurodegeneration? //Nat. Neurosci. -2010: -V. 13. -P.' 789-794.

150. Gao H.M., Jiang J., Wilson B., et al. Microglial-activation-mediated delayed and progressive degeneration of rat nigral dopaminergic neurons: relevance to Parkinson's disease // J. Neurochem. 2002. - V. 81. - P. 1285-1297.

151. Gao X., Martin E.R., Liu Y. et al. Genome-wide Linkage Screen in Familial Parkinson Disease Identifies Loci on Chromosomes 3 and 18 // Am. J. Hum. Genet. -2009. -V. 84. -P. 499-504.

152. Gasser T. Mendelian forms of Parkinson's disease // Biochim. Biophys. Acta. -2009. -V. 1792. -P. 587-596.

153. Gasser T., Muller-Myhsok B., Wszolek Z.K. et al. A susceptibility locus for Parkinson's disease maps to chromosome 2pl3 // Nat. Genet. -1998. -V. 18. -P. 262-265.

154. Gautier C.A., Kitada T., Shen J. Loss of PINKl causes mitochondrial functional, defects and increased sensitivity to oxidative stress // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. -2008. -V. 105. -P. 11364-11369.

155. Geisler S., Holmstrom K.M., Skujat D. et al. PINKl/Parkin-mediated mitophagy is dependent on VDAC1 and p62/SQSTMl // Nat. Gell Biol. -2010 (a). -V. 12; -P. 1:19-131. •

156. Goetz C.G., PoeweW., Rascol O. et al. Movement disorder society task force report on the hoehn and yahr staging scale: Status and recommendations // Mov. Disord. -2004. -V. 19. -P. 1020-1028.

157. Goldberg M.S., Pisani; A., Haburcak M. et al. Nigrostriatal dopaminergic deficits; and^ hypokinesia; caused by' inactivation of the familial Parkinsonismlinked gene DJ-1 // Neuron. -2005. -V. 45. -P: 489- 496.

158. Goldstein D.S., Holmes C., Bcntho O. et: ah Biomarkers to detect centralv dopamine deficiency and distinguish;Parkinson disease; from;multiple system atrophy // Parkinsonism Rclat. Disord: -2008. -V. 14.-P. 600-607.

159. Gong B-.,. Cao Z., Zheng' P. et al: Ubiquitin hydrolase Uch-L 1 rescues beta-amyloid-induced decreases in synaptic function and contextual memory// Cell. -2006. -V. 126. -P. 775 -788.

160. Gonzalez-Perez A., Gayan J., Marin J; et al. Whole-genome conditional two-locus analysis identifies novel candidate genes for lateronset Parkinson's disease//Neurogenetics.-2009:-V. 10.-P. 173-181.

161. Greene J.S., Whitworth A.J., Kuo I., et al. Mitochondrial pathology and apoptotic muscle degeneration in Drosophila parkin mutants // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. -2003. -V. 100. -P. 4078^4083.

162. Greschat S., Schira J, Kury P. et al. Unrestricted somatic stem cells from human umbilical cord blood can be differentiated into neurons with a dopaminergic phenotype // Stem. Cells Dev. -2008. -V. 17. -P. 221-232.

163. Guo J.F., Tang B.S., Li J., et al. Exon rearrangement analysis of parkin gene in patients with isolated early-onset parkinsonism using semi-quantitative PCR // Zhonghua Yi Xue Za Zhi. -2006. -V. 86. -P. 1447-1449.

164. Guo J.F., Zhang X.W., Nie L.L. et al. Mutation analysis of Parkin, PINO and DJ-1 genes in Chinese patients with sporadic early onset parkinsonism, // J'. Neurol. -2010. -V. 257. -P. 1170-1175.

165. Hague S.M., Rogaeva E., Hernandez D. et al. Early-onset Parkinson's disease caused by a compound heterozygous DJ-1 mutation // Ann. Neurol 2003. —V. 54. -P. 271-274.

166. Hakansson A., Melke J., Westberg L. et al. Lack of association between the BDNF Vail66 Met polymorphism and Parkinson's disease in Swedish population // Ann. Neurol. -2003. -V. 53. -P. 823.

167. Hatano Т., Kubo S., Imai S. et al. Leueinerich repeat kinase 2 associates with lipid rafts // Hum. Mol. Genet. -2007. -V. 16. -P. 678-690.

168. Haugarvoll K., Toft M., Skipper L. et al.Fine-mapping and candidate gene investigation'within the PARK10 locus // Eur. J: Hum. Genet. -2009. -V. 17. -P. 336-343.I

169. Hauser M.A., Li Y.J., Takeuchi S. et al. Genomic convergence: identifying' candidate genes for Parkinson's disease by combining.serial'analysis of gene1 expression and genetic linkage // Hum. Mol. Genet. -2003. -V. 12. -Pi 671677.

170. Hauser M.A., Li Y.-J., Xu*H: et al. Expression Profiling of Substantia^Nigra in Parkinson Disease, Progressive, Supranuclear Palsy, and Frontotemporal Dementia With Parkinsonism // Arch. Neurol. -2005. -V. 62. -P. 917-92 Г.

171. Hawkes C.H., Del Tredici K. and Braak H. A timeline for parkinson's disease // Parkinsonism and.Relat: Disord. -2009. -V. 16. -P. 79-84. .

172. Hawkes C.H., Del Tredici K., Braak* H. Parkinson's disease: A dual-hit! hypothesis //Neuropathol. Appl. Neurobiol. -2007. -V. 33. -P. 599-614.

173. Hawkes C.H., Shephard B.C., Daniel S.E. Is Parkinson's disease a primary olfactory disorder? // QJM. -1999. -V. 92. -P. 473-480.

174. Hawkes C.H., Shephard B.C., Daniel S.E. Olfactory dysfunction in-Parkinson's disease // J. Neuronal. Neurosurg. Psychiat. —1997. -V. 621 —P. 436-446. ' '

175. Hayesmoore J.B., Bray N.J., Cross W.C. et al. The effect of age and the Hlc МАРТ haplotype on МАРТ expression in human brain. // Neurobiol. Aging. -2009. V. 30. -P. 1652-1656.

176. Healy D.G., Abou-Sleiman P.M., Ahmadi K.R. et al. NR4A2 Genetic Variation in Sporadic Parkinson's Disease: A Genewide Approach // Mov. Disord. -2006. -V. 21. -P. 1960-2025.

177. Healy D.G., Abou-Sleiman P.M., Ozawa T. et al. A functional polymorphism regulating dopamine beta-hydroxylase influences against Parkinson's disease // Ann. Neurol. -2004. -V. 55. -P. 443-446.

178. Healy D.G., Falchi M., O'Sullivan S.S. et al:. Phenotype, genotype, and worldwide genetic penetrance of LRRK2-associated Parkinson's disease: a case-control study // Lancet Neurol. -2008. -V. 7. -P. 583-590.

179. Hedrich K., Djarmati A., Schäfer N. et al. DJ-1 (PARK7) mutations are less frequent than Parkin- (PARK2) mutations in early-onset- Parkinson disease // Neurology. -2004(a). -V. 62. -P. 389-394:

180. Hedrich K., Kann M., Lanthaler A.J., et al. The importance of gene dosage studies: mutational analysis of the parkin gene in- early-onset parkinsonism // Hum Mol Genet. -2001. -V. 10. -P. 1649-1656.

181. Hedrich K., Marder K., Harris J. et al. Evaluation of 50 probands with early-onset Parkinson's disease for parkin mutations // Neurology. —2002. -V. 58. -P. 1239-1246.

182. Henn I.H., Bouman L., Schlehe J.S. et al. Parkin mediates neuroprotection* through activation of IkappaB kinase/nuclear factor-kappaB signaling // J. Neurosci. -2007. -V. 27. -P. 1868-1878.

183. Herrera F.E., Zucchelli S., Jezierska A. et al. On the oligomeric state of DJ-1 protein and its mutants associated with Parkinson Disease. A combined-computational and in vitro study // J. Biol. Chem 2007. -V. 282. -P. 2490524914.

184. Herting B., Bietenbeck S., Scholz K. et al. Olfactory dysfunction in Parkinson's disease: its role as a new cardinal sign in early and differential diagnosis //Nervenarzt. -2008. -V. 79. -P. 175-184.

185. Hertz J.M., Ostergaard K., Juncker I. et al. Low frequency of Parkin, Tyrosine Hydroxylase, and GTP Cyclohydrolase I gene mutations in a Danish population of early-onset Parkinson's Disease // Eur. J: Neurol. -2006 . -V.13. -P. 385390.

186. Hoepken H.H., Gispert S., Azizov M. et al. Pärlähs6n:patienfefibroblästsisHoW; increasedi alpha-rsynuclein; expression: //Exp:Neurol!— 2008i —V. 212. -P. 307—

187. Hofer A., Berg D., Asmus F. et al." The role of' alpha-synuclein gene; multiplications in early-onset Parkinson's disease and dementia, with; Lewy bodies // J. Neural. Transm. -2005. -V. 112. -P. 1249-1254.

188. Hoglinger G.U., Feger J-, Prigent A. et al: Chronic systemic complex I inhibitions induces a hypokinetic* multisystem? degenerations in- rats^// 'J: Neurochem. -2003. -V. 84. -P. 491- 502. ' ' . .

189. Iloshi M., Takashima A., Noguchi K. et al. Regulation of mitochondrial pyruvate dehydrogenase activity by tau protein kinase I/glycogen synthase kinase 3beta in brain// Proc. Natl. Acad. Sei USA. -1996. -V. 93. -P. 27192723.

190. Ibänez P., Bonnet A.M., Débarges B. et ah Causal relation between alpha-, synuclein; gene duplication* and, familial; Parkinson's^ disease: // Lancet:. -2004i -V. 364.-P. 1169-1171. : ' ' •

191. Imai Y., Gehrke S., Wang H. Q. et al. Phosphorylation of 4E-BP by LRRK2 affects the maintenance of dopaminergic neurons in Drosophila// EMBO J.-2008. -V. 27. -P. 2432-2443.

192. International Parkinson Disease Genomics Consortium. Imputation of sequence variants for identification of genetic risks lor Parkinson's disease: a . meta-analysis: of genome-wide : association studies // Lancet: -2011. -V. 377. -P. 641-649. ' ' v ■ '

193. Ann. Neurol.-1998. -V. 44. -P.72-84.

194. Johnson J., Hague S.M., Hanson M. et al. SNGA multiplication is not a common cause of Parkinson disease or dementia^ with Lewy bodies //

195. Neurology. -2004. -V. 63. -P. 554-556.

196. Jope, R. S., Johnson, G.V.W. The glamour and';gloom of glycogen synthase kinase-3 // Tren. Biochem: Sciences. -2003. -V. 29. -P. 95-102.

197. Kachergus J., Mata I.F., ITulihan M. et al. Identification of a Novel LRRK2 Mutation Linked to Autosomal Dominant Parkinsonism: Evidence of a Common Founder across European Populations // Am. J: Hum. Genet.- 20051. -V. 76. -P. 672-680.

198. Kahle P.J.,.Haass G. Howdoesiparkih ligate^^ubiquitintto Parkinson's disease?, //EMBO Rep. -2004. -V. 5. -P. 681-685.

199. Kahns;S., Lykkebo S., Jakobsen L.D: et^^ ah Gaspase-mediatediparkin^cleavage; in apoptotic cell death //J. Biol. Chem. -2002. -V. 277. -P. 15303-15308.

200. Kalinderi K., Fidani L., Katsarou Z. et al. GSK3beta polymorphisms, MAPT HI haplotype and Parkinson's disease in atGreek cohort // Neurobiöll Aging. 2011.-V. 32.-P. 546-551. '

201. Kang S.J., Scott W.K., Li Y.J. et al. Family-based case-control study of MAO A and MAOB polymorphisms in Parkinson disease // Mov. Disord. -2006:-V. 21.-PI 2175-21801

202. Kann M., Jacobs FI., Mohrmann K. et al. Role of parkin mutations in 111 community-based patients with; early-onset parkinsonism // Ann. Neurol. —2002.-V. 51.-P. 621-625.

203. Karamohamed S., DeStefano A.L., Wilk J.B. et al. A haplotype at the PARK3 locus influences onset age for Parkinson's disease: the Gene PD study // Neurology. -2003. -V. 61. -P. 1557-1561.

204. Kawajiri S., Saiki S., Sato S. et al. PINK1 is recruited to mitochondria with parkin and associates with LC3 in mitophagy // FEB S Lett. -2010. —V. 584. -P. 1073—1079:

205. Kelada S.N., Stapleton P.L., Farin F.M. et al. Glutathione:S-transferase M1, Tl, and PI polymorphisms and Parkinson's disease // Neurosci. Lett. —2003.-v.30.-p.5-8. '■.•:. • ';.: '

206. Kester M., van der Vlies A.E., Blankenstein M.A. CSF biomarkers predict , rate of cognitive decline in; Alzheimer disease // Neurology. -2009! -V. 73i :-P:1353-1358,; ' ''■''.

207. Keyser R.J., Lombard D., Veikondis R. et al. Analysis of exon dosage using MLPA in; South African Parkinson's disease patients // Neurogenetics. -2009. -V. 11.-P. 305-312.

208. Khanim F., Kirk J:, Latif F;, Barrett; T.G: WES 1 Avolframim mutations' Wolfram syndrome, and;associated5 diseases // Hum^Mutat. -2001': -V. .17: —P. 357-367; ■ .■'" ,:'

209. Kikuchi A., Takeda A., Onodera H. et al. Systemic increase of-oxidative nucleic acid damage in Parkinson's disease and' multiple system atrophy // Neurobiol. Dis. -2002. -V. 9. -P. 244-248.

210. Kim T.D., Paik S.R., Yang C.H., Kim J. Structural changes in alpha-synuclein affect its chaperone-like activity in vitro // Protein Sei. -2000. -V. 9. -P. 24892496.

211. Kirik D., Rosenblad C., Burger C. et al. Parkinson-like neurodegeneration induced by targeted overexpression of alpha-synuclein in the nigrostriatal system // J. Neurosci. -2002. -V. 22. -P. 2780-2791.

212. Kitada T., Asakawa S., Hattori N. et al. Mutations in the parkin gene cause autosomal recessive juvenile parkinsonism //Nature. -1998. -V. 392. -P. 605608.

213. KitadaT., Tong Y., Gautier С. A., Shen J. Absence of nigral degeneration in aged parkin/DJ-1/PINKl triple knockout mice // J. Neurochem. -2009.' -V. 111.-P. 696-702.

214. Klevering'B.J., Yzer S., Rohrschneider К. et al. Microarray-based mutation analysis of the ABCA4 (ABCR) gene in autosomal ' recessive cone-rod dystrophy and retinitis pigmentosa // Eur. J. Hum; Genet. -2004. -V. 12. -P. 1024-1032.

215. Klivenyi P., Siwek D., Gardian G. et al. Mice lacking alpha-synuclein are resistant to mitochondrial toxins //Neurobiol. Dis. -2006. -V. 21. -P. 541-548.

216. Klucken J., Shin Y., Masliah E. et al. Hsp70 Reduces alpha-Synuclein Aggregation and Toxicity // J. Biol. Chem. -2004. -V. 279. -P. 25497-25502.

217. Kosik K.S. The neuronal microRNA system // Nat. Rev. Neurosci. -2006. -V. 7.-P. 911-920.

218. Koziorowski D., Hoffman-Zacharska D., Slawek J. et al. Low frequency of the PARK2 gene mutations in Polish patients with the early-onset form of Parkinson disease // Parkinsonism Relat. Disord. -2010. -V. 16. -P. 136-138.

219. Krichevsky A.M., King K.S., Donahue C.P. et al. A microRNA array reveals extensive regulation of microRNAs during brain development // RNA. -2003. -V. 9.-P. 1274-1281.

220. Krüger R. LRRK2 in Parkinson's disease drawing the curtain of penetrance: a commentary // BMC Med. -2008. -V. 6. -P. 33-37.

221. Krüger R., Fischer C., Schulte T. et al. Mutation analysis of the neurofilament M gene in Parkinson's disease //Neurosci. Lett. -2003. -V. 351. -P. 125-129.

222. Krüger R., Hardt C., Tschentscher F., Jackel S., et al. Genetic analysis of immunomodulating factors in sporadic Parkinson's disease // J'Neural Transm. -2002. -V. 107. -P. 553-562.

223. Krüger R., Kuhn W., Muller T. et al. Ala30Pro mutation in the gene encoding alpha-synuclein in Parkinson's disease // Nat. Genet. -1998. -V. 18. -P. 106— 108.

224. Kumari U., Tan E.K. LRRK2 in Parkinson's disease: genetic and clinical studies from patients // FEBS Journal. -2009. -V. 276. -P. 6455-6463.

225. Kuroda Y., Mitsui T., Kunishige M. et al'. Parkin enhances mitochondrial biogenesis in proliferating cells // Hum. Mol. Genet. -2006. -V>. 15. -P. 883895.

226. KuwaharaT., Koyama A., Gengyo-Ando K. et al. Familial Parkinson mutant alpha-synuclein causes dopamine neuron dysfunction in transgenic Caenorhabditis elegans //J. Biol. Chem. -2006. -V. 281. -P. 334-340.

227. Kwok J.B.J., Teber E.T., Loy C. et al. Tau Haplotypes Regulate Transcription and Are Associated with Parkinson's Disease // Ann. Neurol. -2004. -V. 55. -P. 329-334.

228. Lai Y.Y., Hsieh K.C., Nguyen D. et al. Neurotoxic lesions at the ventral mesopontine junction change sleep time and muscle activity during sleep: an animal model of motor disorders in sleep // Neuroscience. -2008. -V. 154. -P. 431-443.

229. Lakso M., Vartiainen S., Moilanen A.M. et al. Dopaminergic neuronal loss and motor deficits in Caenorhabditis elegans overexpressing human alpha-synuclein // J. Neurochem. -2003. -V.86. -P. 165-172.

230. Langston J.W., Ballard P., Tetrud J.W., Irwin I. Chronic Parkinsonism in humans due to a product of meperidine-analog synthesis // Science. -1983. -V. 219. -P. 979-980.

231. Langston J.W., Forno L.S., Tetrud J. et al. Evidence of active nerve cell degeneration in the substantia nigra of humans years after l-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine exposure // Ann. Neurol. -1999. -V. 46. -P. 598605.

232. Lashuel H. A., Hartley D., Petre B. M. et al. Neurodegenerative disease: amyloid pores from pathogenic mutations //Nature. -2002. -V. 418. -P. 291.

233. Latourelle J.C., Pankratz N., Dumitriu A. et al. Genomewide association study for onset age in Parkinson disease // BMC Med. Genet. -2009. -V. 10. -P. 98-112.

234. Lautier C., Goldwurm S., Durr A. et al. Mutations in the GIGYF2 (TNRC15) gene at the PARK11 locus in familial Parkinson disease // Am. J. Hum. Genet. -2008. -V. 82. -P. 822-833.

235. Lavedan C., Buchholtz S., Nussbaum R.L. et al. A mutation in the human neurofilamentMgene in. Parkinson's disease that suggests a role for the cytoskeleton in neuronal degeneration // Neurosci. Lett. -2002. -V. 322. —P. 57-61.

236. Le W.D., Xu P., Jankovic J., Jiang H. et al. Mutations- in NR4A2 associated with familial Parkinson disease //Nat. Genet. -2003. -V. 33. -P. 85-89.

237. Lee C.S., Sauer H., Bjorklund A. Dopaminergic neuronal degeneration and motor impairments following axon terminal lesion by intrastriatal 6-hydroxydopamine in the rat//Neuroscience. -1996. -V. 72. -P. 641-653.

238. Lee D.W., Andersen J.K., Kaur D. Iron dysregulation and neurodegeneration: The molecular connection // Mol. Interventions. -2006. -V. 6. -P. 89-97.

239. Lee F.J., Liu F. Genetic factors involved in the pathogenesis of Parkinson's disease // Brain Res Rev. -2008. -V. 58. -P. 354-364.

240. Leibson C.L., Long K.H., Maraganore D.M. et al*. Direct medical costsassociated with Parkinson's disease: a population-based study // Mov. Disord.-2006. -V. 21. -P. 1864-1871.

241. Leroy E., Anastasopoulos D., Konitsiotis S. et al. Deletions in the Parkin gene and genetic heterogeneity in a Greek family with early onset Parkinson's disease//Hum. Genet. -1998(a). -V. 103. -P. 424-427.

242. Leroy E., Boyer R., Auburger G. et al. The ubiquitin pathway' in* Parkinson's disease // Nature. -1998(b). -V. 395. -P. 451-452.

243. Lesage S., Brice A. Parkinson's disease: from monogenic forms to genetic susceptibility factors // Hum. Mol. Genet. -2009. -V. 18. -P. 48-59.

244. Lesage S., Durr A., Tazir M., et al. LRRK2 G2019S-as a cause of Parkinson's disease in North African Arabs // N. Engl. J. Med. -2006. -V. 354. -P. 422423.

245. Lesniclc T.G., Papapetropoulos S., Mash D.C. et al. A genomic pathway approach to a complex disease: axon guidance and Parkinson disease // PLoS Genet. -2007. -V. 3. -P. 98-110.

246. Levecque C., Elbaz A., Clavel J. et al. Association between Parkinson's disease and polymorphisms in the nNOS and Inos series in a community-based case-control study // Hum. Mol. Genet. -2003; -V. 12.-P. 79-86.

247. Li Y., Liu W., Oo T. F. et al. Mutant LRRK2 (R1441G) BAC transgenic mice; recapitulate cardinal features of Parkinson's disease // Nat: Ncurosci. 20091 V. 12. P. 826-828.

248. Li-'Y., Tomiyama Hi, Sato K. et al. Clinicogenetic study of PINK1 mutations in •autosomal recessiveearly-onset Parkinsonism^// Neurology. -2005. -V. .64: -P. 1955-1957. ''/■■':';'. |'•/ ' •

249. Liu B. Modulation^of microgliahpro-inflammatory andineurotoxic activity^ for; the treatment of Parkinsons disease// Aaps'JRi 2006. - V. 8.-P. 606-621.

250. Liu P., Wakamiya M., Shea M.J. et al. Requirement for Wnt3 in vertebrate axis formation // Nat. Gene. -1999: -V. 22. P. -361-365.

251. Liu Y., Fallon L., Lashuel H.A. et al. The UCH-L1 gene encodes two opposing enzymatic activities that affect alpha-synuclein degradation and Parkinson's disease susceptibility // Gelh-20021 -VI 1T1. -PI 209^-2181

252. Liu Z., Wang X., Yu Y. et al: A Drosophila model for LRRK2-linked parkinsonism//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2008. -V. 105. -P. 2693-2698.

253. Livak K.J. Comparative Ct method. ABI Prism 7700 Sequence Detection System. User Bulletin no. 2. PE Applied Biosystems. 1997.

254. Lo Bianco C., Ridet J.L., SchneiderB.L. et al. Alpha Synucleinopathy and selective dopaminergic neuron loss in a rat lentiviral-based model of Parkinson's disease // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2002. -V. 99. -P. 1081310818.

255. Lo H.S., Hogan E.L., Soong B.W. 5V-flanking region polymorphism of the neuronal nitric oxide synthase gene with Parkinson's disease in Taiwan?// J Neurol: Sci. -2002. -V. 194. -P. 11-13.

256. Lo Y.M., Tein M.S., Lau, T.K. et al. Quantitative analysis of fetal DNA in maternal plasma and* serum: implications for noninvasive prenatal diagnosis // Am. J. Hum. Genet. -1998. -V. 62; № 4. -P. 768-775.

257. Lohmann E., Periquet M., Bonifati V. et al. How much phenotypic variation can-be attributed to parkin genotype? // Ann. Neurol. -2003. -V. 54. -PI 176185.

258. Lonser R.R., Corthzsy M.E., Morrison P.F. et al. Convection-enhanced selective excitotoxic ablation of the neurons of the globus pallidus internus for treatment of parkinsonism in nonhuman primates // J. Neurosurg. -1999. —V. 91. P. 294-302.

259. Lu J., Bjorkum A.A., Xu M. et alt Selective activation of the extended ventrolateral preoptic nucleus during rapid-eye movement sleep // J. Neurosci. 2002. -V. -22. -P. 4568-4576.

260. Lu J., Sherman D., Devor M., Saper C. A putative flip-flop switch-for control of REM sleep //Nature. -2006. -V. 441. -P. 589-594.

261. Lucking C.B., Bonifati V., Periquet M. et al. Pseudo-dominant inheritance and exon 2 triplication in a family with parkin gene mutation // Neurology. —2001.-V. 57. -P. 924-927.

262. Lücking C.B., Chesneau V., Lohmann E. et al. Coding polymorphisms in the parkin gene and susceptibility to Parkinson disease // Arch. Neurol. -2003. -V. 60.-P. 1253-1256.

263. The state of the art // Progress in Brain Research. -2010. -V. 184.-P. 53-87. ^

264. Magerkurth C., Schnitzer R., Braune S. Symptoms of autonomic failure in Parkinson's disease: prevalence: and: impact on daily life 7/ Clin. Auton. Res. -2005.-V. 15.-P. 76-82.

265. Mandemakers W., Moráis V.A., De Strooper B. A cell, biological perspective on mitochondrial dysfunction in Parkinson disease and other neurodegenerative diseases//.!. Cell Sei. -2007. -V. 120. -P. 1707-1716. '

266. Maraganore D.M., de Andrade M., Lesnick T.G. et al. High-Resolution Whole-Genome Association Study of Parkinson Disease // Am. J. Hum. Genet. -2005. -V. 77. -P. 685-693.

267. Maraganore D.M., Farrer M.J., Hardy J.A. et al. Case-control study of the ubiquitin carboxy-terminal hydrolase LI gene in Parkinson's disease // Neurology. -1999. -V. 53. -P. 1858-1860.

268. Marazziti D., Mandillo S., Di Pietro C. et al. GPR37 associates with the dopamine transporter to modulate dopamine uptake and behavioral responsesto dopaminergic drugs // Proc: Natl. Acad. Sei. USA. -2007. -V. 104. -P. 98469851.

269. Markopoulou K., Larsen K.W., Wszolek E.K. et al. Olfactory dysfunction in familial parkinsonism //Neurology. -1997. -V. 49. -P: 1262-1267.

270. Maron E., NikopensiusT., Koks S. et al. Association study of 90-candidate gene polymorphisms in panic disorder // Psychiatr. Genet. -2005. -V. 15. -P. 17-24.

271. Marras C., Goldman S., Smith A. et al. Smell identification» ability in twin pairs discordant for Parkinson's disease // Mov. Disord. —2005. -V. 20. -P. 687-693.

272. Martella G., Platania P., Vita D. et al. Enhanced sensitivity to group II mGlu receptor activation at corticostriatal synapses in mice lacking the familial parkinsonism-linked genes PINK1 or Parkin // Exp. Neurol. -2009. —V. 215. -P. 388-396.

273. Martínez H.R., González-González H., Cantú-Martínez L. et al. PARKIN-coding polymorphisms are not1 associated with1 Parkinson's disease in a population from northeastern Mexico // Neurosci. Lett. -2010. -V. 468. -P. 264-266.

274. Martins L.M., Morrison A., Klupsch K. et al. Neuroprotective role of the reaper-related serine protease HtrA2/Omi revealed by targeted deletion in mice // Mol. Cell Biol. -2004. -V. 24. -P. 9848-9862.

275. Maruyama M., Ikeuchi T., Saito M. et al. Novel mutations, pseudo-dominant inheritance, and possible familial affects in patients with autosomal recessive juvenile parkinsonism // Ann. Neurol. -2000. -V. 48. -P. 245-250.

276. Mata I.F., Alvarez V., Garcia-Moreira V. et al. Single-nucleotide polymorphisms in the promoter region of the PARKIN gene and Parkinson's disease //Neurosci. Lett. -2002. -V. 329: -P. 149-152.

277. Matsuda N., Sato S., Shiba K. et al. PINK1 stabilized by mitochondrial depolarization recruits Parkin to damaged mitochondria and activates latent Parkin for mitophagy // J. Cell Biol. -2010. -V.189. -P. 211-221.

278. Matsumine H., Saito M., Shimoda-Matsubayashi S. et al. Lokalization* of a gene for an autosomal recessive form of juvenile Parkinsonism to chromosome 6q25.2-27 // Am. J. Hum. Genet. -1997. -V. 60. -P. 588-596.

279. Matsuoka Y., Vila M., Lincoln S et al. Lack of nigral pathology in transgenic mice expressing human alpha-synuclein driven by the tyrosine hydroxylase promoter//Neurobiol. Dis. -2001. -V. 8. -P. 535-539.

280. Mattila K.M., Rinne J.O., Lehtimaki T. et al. Association of an interleukin IB gene polymorphism (-511) with Parkinson's disease in Finnish patients // J. Med. Genet. -2002. -V. 39. -P. 400^102.

281. Mayeux R., Chen J., Mirabello E. et al. An estimate of the incidence of dementia in idiopathic parkinson's disease // Neurology. —1990: —V. 40. —P. 1513-1517.

282. McCann S.J., McManus M.E., Johnson A.G. et al. The serotonin-transporter gene and Parkinson's disease // Eur. Neurol. 2000. - V.44. - P.108-1T 1.

283. McCormack A.L., Di Monte D.A. Effects of L-dopa and other amino acids against paraquat-induced nigrostriatal degeneration // J. Neurochem. -2003. -V. 85. -P. 82-86.

284. McLean P.J., Hyman B.T. An alternatively spliced form of rodent alpha-synuclein forms intracellular inclusions in vitro: role of the carboxy-terminus in alpha-synuclein aggregation // Neurosci. Lett. -2002. -V. 323. -P. 219-223.

285. McNaught K.S., Belizaire R., Isacson O. et al. Altered' proteasomal function in sporadic Parkinson's disease // Exptl. Neurol. -2003. -V. 179. -P. 38-46.

286. McNaught K.S., Björklund L.M., Belizaire R. et al. Proteasome inhibition causesi nigral degeneration with inclusion bodies in rats // Neuroreport. —2002. -V. 13.-P. 1437-1441.

287. McNaught K.S., Perl D.P., Brownell A.L., Olanow C.W'. Systemic exposure to proteasome inhibitors causes a progressive model of Parkinson's disease // Ann. Neurol. 2004. - V. 56. - P. 149-162.

288. Mellick G.D., Buchanan D.D., McCann S.J. et al. Variations in the monoamine oxidase B (MAOB) gene are associated with Parkinson's disease // Mov. Disord. -1999. -V. 14. -P. 219-224.

289. Mellick G.D., Siebert G.A., Funayama M. et al. Screening PARK genes for mutations in early-onset Parkinson's disease patients from Queensland,

290. Australia // Parkinsonism Relat. Disord. -2009: -V. 15. -P. 105-109.j

291. Menzies F.M., Yenisetti S.C., Min K.T. Roles of Drosophila DJ-1 in survival of dopaminergic neurons and oxidative stress // Curr. Biol. -2005. -V. 15. -P. 1578-1582.

292. Meredith G.E., Totterdell S., Potashkint J.A.,. Sumeier D.J. Modeling PD pathogenesis in mise: advantages of a chronic MPTP protocol // Parkinsonism Relat. Disord. -2008. -V.14. -P. 112-115.

293. Messina D., Annesi G., Serra P. Association of the 5-HT6 receptor gene polymorphism C267T with Parkinson's disease // Neurology. 2002. - V.58.1. P. 828-829.

294. Meulener M., Whitworth A.J., Armstrong-Gold C.E. et al. Drosophila DJ-1 mutants are selectively sensitive to environmental toxins associated with Parkinson's disease // Curr. Biol. -2005. -V.15. -P. 1572-1577.

295. Michell A.W., Lewis S.J.G., Foltynie T., Barker, R.A. Biomarkers and Parkinson's disease // Brain. -2004. -V. -127. -P. 1693-1705.

296. Michell A.W., Luheshi L.M., Barker R.A. Skin and platelet alpha-synuclein as peripheral biomarkers of Parkinson's disease // Neurosci. Let. -2005. -V. 381.-P. 294-298.

297. Miller D.W., Hague S.M., Clarimon J. et al. Alpha-synuclein in blood and brain from familial Parkinson disease with SNCA locus triplication // Neurology. -2004. -V. 62. -P. 1835-1838.

298. Miller S.A., Dykes D.D., Polesky H.F. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells // Nucleic Acids Res. -1988. -V. 16.-P: 1215.

299. Miska E.A., Alvarez-Saavedra E., Townsend M. et al. Microarray analysis of microRNA expression in the developing mammalian brain // Genome Biol. -2004.-V. 5.-P. 68-81.

300. Mitchell J.D., Maguire J.J., Davenport A.P. Emerging pharmacology and physiology of neuromedin U and the structurally related peptide neuromedine S // British J. Pharmacol. -2009. -V. 158. -P. 87-103.

301. Mizuno, Y., Hattori, N., Mochizuki, H. et al. Etiology of Parkinson's disease in Movement Disorders. Neurological Principals & Practice, ed. by Watts, R.L. and Koller, W.C. (McGraw-Hill, New York, 2004), pp. 209-231.

302. Moore D. J. Parkin: a multifaceted ubiquitin ligase // Biochem. Soc. Trans.-2006.-V.34.-P. 749-753.

303. Moore D. J., West A. B., Dawson V. L., Dawson T. M. Molecular pathophysiology of Parkinson's disease // Annu. Rev. Neurosci. -2005. —V.28, -P. 57-87.

304. Moore D.J;,. Zhang L., Troncoso J. et al. Association of DJ-1 and parkin mediated; by pathogenic DJ-1 mutations and" oxidative stress // Hum. Mol. Genet. -2005. -V. 14. -P. 71-84.

305. Moran L.B., Duke D.C., Deprez M. et al. Whole genome expression profiling of the medial and lateral substantia nigra; in Parkinson's disease // Neurogenetics. -2006. -V. 7. -P. 1-11.

306. Morfini G., Szebcnyi G., Ellurii R. et al. Glycogen synthase kinase. 3 phosphorykites kinesin light chains and negatively regulates kinesin-based motility // HMBO J. -2002. -V. 21. -P. 281-293.

307. Mosharov E.V., Staal R.G., Bove J. et al. Alpha-synuclein overexpression increases cytosolic. catecholamine concentration // J: Neurosci: -2006. —V. 26. -P. 9304-9311. ; :

308. Muller A., Müngersdorf M., Reichmann H. et all Olfactory function in . parkinsonian syndromes // J Glin Neurosci. -2002. -V. 9. -P. 521-524.

309. Myhre R., Klungland H., Farrer M.J., Aasly J.O; Genetic association study of synphilin-1 in idiopathic Parkinson's disease // BMC Med. Genet. -2008. —V. 9. -P. 19-26. •

310. Myhre R., Steinkjer S., Stormyr A. et al. Significance of the parkin and PINK1 gene in Jordanian families with incidences of young-onset and juvenileparkinsonism // BMC Neurol. -2008. -V. 8. -P. 47.

311. Nadri S., Soleimani M:, Mobarra Z., Amini S. Expression of dopamine-associated genes on conjunctiva stromal-derived human mesenchymal stem cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. -2008. -V. 377. -P. 423-428.

312. Nagai Y., Ueno Si, Saeki Y. et al. Decrease of the D3 dopamine receptor mRNA expression in lymphocytes from patients , with Parkinson's disease // Neurology. -1996. -V. 46: -P. 791-795.

313. Nagakubo I);, Taira T., Kitaura H. et ah DJ-1, a novel oncogene which; transforms mouse NIH3T3 cells in cooperation with ras // Biochem. Biophys. Res: Commun: -1997. -V. 231. -P. 509 -513. '.'

314. Naoi M., Maruyama W., Dostert P:, Ilashizume Y. N-methyl7(R)salsolinol as a dopaminergic neurotoxin: from an- animal model to an early marker of Parkinson's disease // J. Neural. Transm. Suppl. -1997. -V. 50. -P. 89-105. '

315. Narendra D.P., Jin S.M., Tanaka A. et al. PINK1 is selectively stabilized on impaired mitochondria to activate Parkin II PLoS Biol: -2010. -V. 8: -P. el000298;

316. Nasedkina T.V., Fedorova O.E., Glotov A.S. et al; Rapid: genotyping of common; deficient thiopurine- S-methyltransferase alleles- using' theV DNAmicrochip -technique;// Eur. J. Hum. Genet. -2006. -V. 14. -P. 991-998.,

317. Nasedkina T.V., Guseva N.A., Gra O.A. et al. Diagnostic, microarrays in hematologic oncology: applications of high- and low-density arrays // Mol. Diagn. Ther. -2009. -V. 13, -P. 91-102. .

318. Nass R., Merchant K.M., Ryan 'I\ Gaenohabditis elegans in; Parkinson's disease drug discovery: addressing1 an« unmet medical; need // Mol; Interv. -2008.-V. 8.-P. 284-293. '

319. Ng C.H., Mok S.Z, Roh C. et al. Parkin protects against LRRK2 G2019S mutant-induced dopaminergic neurodegeneration in Drosophila // J; Neurosci. -2009. -V. 29. -P. 11257-11262. ; .

320. Ng N.K., Lee H.S., Wong P.T. Regulation of striatal dopamine release through 5-HT1 and 5-HT2 receptors //J. Neurosci. Res. -1999. -V. 55. -P. 600-607.

321. Nichols W.C., Marek D.K., Pauciulo M.W. et al. R1514Q substitution in Lrrk2 is not a pathogenic Parkinson's disease mutation // Mov. Disord: -2007. -V. 22. -P. 254-257. .

322. Nieto M., Gil-Bea F.J., Dalfo E. et al. Increased^ sensitivity to MPTP in human alpha-synuclein A3 OP transgenic mice // Neurobiol. Aging. -2006., -V.27. -P.• 848-856. ' ■'.■/■

323. Nishioka K., Uayashi S., Farrer M:J. et al. Clinical heterogeneity of alpha-synuclein gene duplication in Parkinson's disease // Ann. Neurol: -2006. -V. 59.-P. 298-309.

324. Noureddine M.A., Li Y.J., van der Walt J.M. et al. Genomic convergence to identify, candidate, genes for Parkinson disease: SAGE analysis of the substantia nigra // Mov. Disord. -2005. -V. 20. -P. 1299-1309.

325. Nussbaum R.L., Polymeropoulos M.Il. Genetics of Parkinson's disease // Hum. Mol. Genet.-1997. -V. 6.-P. 1687-1691. :

326. Ohno K., Saito SI, Sugawara K. et al. Structural? basis of neuronal ceroid lipofuscinosis 1// Brain Dev. -2010. -V. 32. -P. 524-530.

327. Oliveira S.A., Scott W.K., Martin E.R. et al: Parkin mutations and susceptibility alleles in late-onset Parkinson's disease // Ann. Neur. -2003. —V. 53: -P: 624-629.

328. Oit C.F., Rowe D.B., Halliday G.V. An inflammatory review of Parkinson's disease // Prog Neurobiol. -2002. -V. -68. -P. 325-340:266

329. Orsucci D., Caldarazzo Ienco E., Mancuso M., Siciliano G. POLGl-Related and other "Mitochondrial Parkinsonisms" an Overview // J. Mol. Neurosci. -2011.-V.44.-P. 17-24.

330. Ozelius L.J., Senthil G., Saunders-Pullman R. et al. LRRK2 G2019S as a cause of Parkinson's disease in Ashkenazi Jews //N. Engl. J. Med. -2006. -V.354.-P. 424-425.

331. Paisan-Ruiz C., Jain S., Evans E.W. et ah Cloning of the gene containing mutations that;cause PARK8-linked Parkinson's disease // Neuron. -2004. -V. 44. -P. 595-600. .

332. Palatino J. J;, Sagi D., Goldberg M.; S. et all Mitochondriale dysfunction , and oxidative damage;in parkin-deficient-mice//J: Biol: Chem; -2004. -V- 279: -P: 18614—18622.

333. Pan T., Kondo S., Le W., Jankovic J. The role. of autophagy-lysosome pathway in neurodegeneration associated with Parkinson's: disease // Brain. -2008.-V. 131.-P. 1969-1978.

334. Pan T., Rawal P., Wu Y. et al. Rapamycin protects against rotenonc-induced apoptosis through autophagy induction // Neuroscience: -2009: -V. ,164. -P. 541-551.

335. Panchision D:M., McKay R.D. The control of neural stem cells by morphogenic signals // Curr. Opin. Genet: Dev. -2002. -V. 12. -P. 478-487.405 . Pankratz N., Foroud T. Genetics of Parkinson disease // NeuroRx. -2004. -V. l.-P. 235-242.

336. Pankratz N., Nichols W.C., Uniacke S.K. et al. Genome screen to identify susceptibility genes for Parkinson disease in a sample without parkin mutations // Am. J. Hum. Genet. -2002. -V. 71. -P. 124-135.

337. Pankratz N., Nichols W.C., IJniacke S.K. et al. Significant linkage of Parkinson disease to chromosome 2q36-37 // Am. J; Hum. Genet. -2003. -V. 72. -P. 1053-1057.

338. Park J., Lee S.B., Lee S. et al. Chung, Mitochondrial dysfunction in Drosophila PINK1 mutants is complemented by parkin // Nature. -2006. -V.441.-P. .1157-1161; ' ■

339. Pastinen T., Raitio. Ml, Lindroos, K. et al. A System; for Specific, High-throughput Genotyping by Allele-specific Primer Extension on Microarrays // Genome Research. -2000. -V. 10. -P. 1031-1042.

340. Pastor P., Munoz E., Ezquerra M. et al. Analysis of the coding and the 5' flanking regions of the alpha-synuclein gene in patients with Parkinson's disease//Mov. Disord.-2001.-V. 16.-P. 1115-1119. . ;

341. Pavese N., Klian N. L., Scherflër C. et al. Nigrostriatal dysfunction in homozygous and heterozygous parkin gene carriers: An 18F-dopa PET progression study //.Mov. Disordi -2009; -¥. 24. -P. 2260-^2266: .

342. Paxinos G., Watson C.,. Pennisi M., Topple A. Bregma, lambda and the interaural midpoint in stereotaxic surgery with rats of different sex, strain and weight // J. Neurosci.Methods. -1985. -V. 13.-P. 139-143. '

343. Pe'er L, Yelensky R., Altshuler D: et al. Estimation, of the multiple testing burden for genomewide association studies of nearly all common variants // Genet. Epidemiol: -2008. -V. 32. -P. 381-385.

344. Peng R., Gou Y., Yuan Q. et al. Mutation screening and association analysis of the parkin gene in Parkinson's disease patients from South-West China // Eur. Neurol. -2003. -V. 49. -P. 85-89.

345. Perez E.A., Curtis W.R., Palmiter R.D. Parkin-deficient mice are not more sensitiveto 6-hydroxydopamine or methamphetamine neurotoxicity // BMC Neurosci. -2005. -V. 6. -P. 71.

346. Perez F.A., Palmiter R.D: Parkin-deficient mice are not a robust model of parkinsonism // Proc. Natl. Acad. Sci: USA. -2005*. -V. 102. -P: 2174-2179.

347. Periquet M., Corti O., Jacquier S., Brice A. Proteomic analysis of parkin knockout mice: Alterations in energy metabolism, protein handling and synaptic function // J. Neurochem. -2005. -V. 95. -P. 1259-1276.

348. Periquet M., Latouche M., Lohmann E. et al. Parkin mutations are frequent in patients with isolated early-onset parkinsonism // Brain. -2003. -V. 126. -P. 1271-1278.

349. Perrier A.L., Tabar V., Barberi T. et al. Derivation of midbrain dopamine • neurons from human embryonic stem cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2004.-V. 101.-P. 12543-12548.

350. Pesah Y., PhamT., Burgess H. et al. Drosophila parkin mutants have decreased mass and cell size and increased sensitivity to oxygen radical stress // Development. -2004. -V. 131. -P. 2183-2194.

351. Pham T.T., Giesert F., Rothig A. et al. DJ-1-deficient mice show less THpositiveneurons in the ventral tegmental area and exhibit non-motoric behavioural impairments // Genes Brain Behav. -2010. -V. 387. -P. 771-785.

352. Piccini P., Burn D.J:, Ceravolo R. et al". The role of inheritance in sporadic Parkinson's disease: evidence from a longitudinal study of dopaminergic function in twins // Ann. Neurol. -1999. -V. 45. -P. 577-582.

353. Piccoli C., Sardanelli A., Scrima R. et al. Mitochondrial Respiratory dysfunction in familiar Parkinsonism associated with PINK1 mutation // Neurochem. Res. -2008. -V. 33. -P. 2565-2574.

354. Pienaar I.S, Götz J., Feany M.B. Parkinson's disease: insights from non-traditional model organisms // Prog. Neurobiol. -2010. -V. 92. -P. 558-571.

355. Pigino G., Morfini G., Pelsman A. et al. Alzheimer's Presenilin 1 Mutations Impair Kinesin-Based Axonal Transport // J. Neurosci. -2003. -V. 23. -P. 4499-4508.

356. Plazzi G., Cortelli P., Montagna P. et al. REM sleep behaviour disorder differentiates pure autonomic failure from multiple system atrophy with autonomic failure // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. -1998. -V. 64. -P. 683685.

357. Polymeropoulos M.H., Higgins J.J., Golbe L.I. et al. Mapping of a gene for Parkinson's disease to chromosome 4q21-q23 // Science. -1996. -V. 274. -P. 1197-1199.

358. Polymeropoulos M.H., Lavedan C., Leroy E. et al. Mutation in the alpha-synuclein gene identified inifamilies with Parkinson's disease // Science. -1997. -V. 276. -P. 2045-2047.

359. Ponsen M.M., Stoffers D., Booij J. et al. Idiopathic hyposmia as a preclinical sign of Parkinson's disease //Ann. Neurol. -2004. -V. 56. -P. 173-181.

360. Ponsen M.M., Stoffers D:, Wolters E.C. et al. Olfactory testing combined' with dopamine transporter imaging as a method to detect prodromal Parkinson's disease // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. -2010. -V. 81. -P. 396-399.

361. Presgraves S.P., Ahmed T., Borwege S., Joyce J.N. Terminally differentiated SH-SY5Y cells provide a model system for studying neuroprotective effects of dopamine agonists //Neurotox. Res. -2004. -V. 5. -P. 579-598.

362. Przedborski S., Jackson-Lewis V., Djaldetti R. et al. The parkinsonian toxin MPTP: action and mechanism // Restor. Neurol. Neurosci. —2000. —V. 16. -P. 135-142.

363. Pyle A., Foltynie T., Tiangyou W. et al. Mitochondrial DNA haplogroup cluster UKJT reduces the risk of PD // Ann. Neurol. -2005. -V. 57. -P. 564270

364. Qin L., Wu X., Block M.L. et al. Systemic LPL causes chronic neuroinflammation and progressive neurodegeneration // Glia. — 2007. — V. 55. -P. 453-462.

365. Rajewsky N. MicroRNA target predictions in animals // Nat. Genetics. -2006. -V. 38.-P. 8-13.

366. Ramirez A., Heimbach A., Grundemann J. et al. Hereditary Parkinsonism with dementia is caused by mutations in ATP13A2, encoding a lysosomal type 5 P-type ATPase //Nat. Genet. -2006. -V. 38. -P. 1184-1191.

367. Rawal N., Periquet M., Lohman E. et al. New parkin mutations and atypical phenotypes in families with autosomal recessive parkinsonism // Neurology. -2003. -V. 60. -P. 1378-1381.

368. Reale-M., Iarlori C., Thomas A. et al. Peripheral cytokines profile in Parkinson's disease // Brain Behav. Immun. -2009. -V. 23. -P. 55-63.

369. Ritz B.R., Manthripragada A.D., Costello S. et al. Dopamine transporter genetic variants and pesticides in Parkinson's disease // Environ. Health. Perspect. -2009. -V. 117. -P. 964-969.

370. Rodriguez S., Gaunt T.R., Day I.N.M. Hardy-Weinberg Equilibrium Testing of Biological Ascertainment for Mendelian Randomization Studies // Am. J. Epidemiol. -2009. -169. -P. 505-514.

371. Rodríguez-Navarro J.A., Casarejos M.J., Menéndez J. et al. Mortality, oxidative stress and tau accumulation during ageing in parkin null mice // J. Neurochem. -2007. -V. 103. -P. 98-114.

372. Rosen K.M., Veereshwarayya V., Moussa C.E. et al. Parkin protects against mitochondrial toxins and ß-amyloid accumulation in skeletal muscle cells // J. Biol. Chem. -2006. -V. 28. -P. 12809-12816.

373. Ross G.W., Petrovitch H., Abbott R.D. et al. Association of. olfactory dysfunction with risk for future Parkinson's disease // Ann. Neurol; -2008(a). -V. 63. -P. 167-173. ;■■; . у ;

374. Sabatini U., Boulänouar K., Eabre N: et'al: Cortical motor reorganization/;in akinetic patients with parkinson's disease: A functional mri study // Brain. -2000. -V. 123. -P. 394-403 ; ^ -; : ; ■

375. Sandyk R., lacono R.P: Bamford C.R. The hypothalamus in Parkinson disease // Ital. J. Neurol. -1987. -V. 8. -P. 227-234.

376. Sang Т.К., Chang H.Y., Lawless G.M. et al. A Drosophila model of mutant human parkin-induced toxicity demonstrates selective loss of dopaminergicneurons and dependence on cellular dopamine // J. Neurosci. -2007. -V. 27. -P. 981-992.

377. Satake W., Nakabayashi Y., Mizuta I. et al. Genome-wide association study identifi es common variants at four loci as genetic risk factors for Parkinson's disease //Nat. Genet. -2009. -V. 41. -P. 1303-1307.

378. Satoh J., Kuroda Y. Association of codon 167 Ser/Asn heterozygosity in the parkin gene with sporadic Parkinson's disease // Neuroreport. -1999. -V. 103. -P: 2735-2739.

379. Schaefer A., O'Carroll D., Tan C.L. et al. Cerebellar neurodegeneration in the absence of microRNAs // JEM. -2007. -V. 204. -P. 1553-1558.

380. Schenck C., Mahowald M. REM sleep behavior disorder: Clinical, developmental, and neuroscience perspectives 16 years after its formal identification in sleep // Ibid. -2002. -V. 25. -P. 120-138.

381. Scherzer C.R., Eklund A.C., Morse L.J. et al. Molecular markers of early Parkinson's disease based on gene expression in blood // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2007. -V. 104. -P. 955-960.

382. Schiesling C., Kieper N., Seidel K., Kruger R. Review: Familial Parkinson's disease—genetics, clinical phenotype and neuropathology in relation to the common sporadic form of the disease // Neuropathol. Appl. Neurobiol. -2008. -V. 34.-P. 255-271.

383. Serri O., Chik C.L., Ur E., Ezzat S., Diagnosis and management of ; hyperprolactinemia // Cmaj. -2003. -V. 169. -P. 575-581.

384. Sethupathy P., Collins F.S. MicroRNA- target site polymorphisms and human disease//Trends in Genetics.-2008.-V. 24.-P. 489-497,

385. Shahabi H.N., Westberg L., Melke J. et al. Cytochrome P450 2E1 gene polymorphisms/haplotypes and Parkinson's disease in a Swedish population // J.Neural.Transm.-2009.-V. 116.-P. 67-73.

386. Shammas C., Papasavva T., Felekis X. et, al. ThalassoChip, an array mutation and single nucleotide polymorphism detection tool for the diagnosis of (3-thalassacmia // Clin Chem Lab Med. -2010. -V. 48. -P. 1713-1718.

387. Sharma M., Lichtner P., Kruger R. et al. Further delineation of the association signal on chromosome 5 from the first whole genome association study in Parkinson's disease //Neurobiol. Aging. -2009. -V. 30. -P. 1706-1709.

388. Sheng D., Qu D., Kwok K.H. et al. Deletion of the WD40 domain of LRRK2 in Zebrafish causes Parkinsonism-like loss of neurons and locomotive defect // PLoS Genet. -2010. -V. 6. -P. el000914.

389. Sherer T.B., Kim J.H., Betarbet R., Greenamyre J.T. Subcutaneous rotenone exposure causes highly selective dopaminergic degeneration and alpha-synuclein aggregation // Exp. Neurol. -2003. -V. 179t -P. 9-16.

390. Shi Z., Zhang,J., Zheng, S. What we know about ST13, a co-factor of heat shock protein, or a tumor suppressor? // J. Zhejiang University SCIENCE B. -2007. -V. 8. -P. 170-176.

391. Shih A.Y., Imbeault S., Barakauskas V. et al. Induction of the Nrf2-driven antioxidant response confers neuroprotection during mitochondrial stress in vivo // J. Biol. Chem. -2005. -V. 280. -P. 22925-22936.

392. Shimizu K., Ohtaki K., Matsubara K. et al. Carrier-mediated processes in blood brain barrier penetration and neural uptake of paraquat // Brain. Res. 2001. V. 906. P. 135-142.

393. Shimura H., Hattori N., Kubo S. et al. Familial Parkinson disease gene product, parkin, is a ubiquitin-protein ligase // Nat. Genet. -2002. —V. 25. -P. 302-305.

394. Shin N., Jeong H., Kwon J. et al. LRRK2 regulates synaptic vesicle endocytosis // Exp. Cell. Res. -2008. -V. 314. P. 2055-2065.

395. Shojaee.S., Sina F., Banihosseini S.S. et al. Genome-wide linkage analysis of a Parkinsonian-pyramidal' syndrome pedigree by 500 K SNP arrays // Am. J. Hum. Genet. -2008. -V. 82. -P. 1375-1384.

396. Shyu W.C., Lin S.Z., Chiang M.F. et al. Early-onset Parkinson's disease in a Chinese population: 99m Tc-TRODAT-1 SPECT, Parkin gene analysis and clinical study // Parkinsonism and Relat. Disord. -2005. -V. 11. -P. 173-180.

397. Sim C.H., Lio D.S., Mok S.S. et. al.C-terminal; truncation and Parkinson's disease-associated mutations down-regulate the protein serine/threonine kinase activity of PTEN-induced kinase-1 // Hum. Mol Genet. -2006. -V. 15. -P: 3251-3262

398. Simon-Sanchez J., Schulte C., Bras J.M. et all Genome-wide, association study reveals genetic risk underlying Parkinson's disease // Nat. Genet. -2009. -V. 41. -Pi 1308-1312.

399. Simon-Sanchez J;, vaniHilten: JQi, van^de:WarrenburgiBv et; ali Genome-wide: associations study confirms extant-PD risk loci among the Dutch // Eur; J: Hum. Genet. -2011. -DOI: 10:103 8/ejhg.2010.254 . '/

400. Simunovic F., Yi M., Wang; Y. et al. Evidence for Gender-Specific Transcriptional; Profiles-of Nigral!Dopamine Neurons^ im Parkinson; Disease // PLoS ONE. -2010. -V. 5. -P. 8856-8870.

401. Simunovic F., Yi M., Wang Y. et al. Gene; expression profiling; of substantia!: nigra dopamine neurons: further insights into Parkinson's disease pathology // Brain. -2009: V. 132. -P. 1795-1809.

402. Singh M.,. Khan A.J., Shah P.P. et al. Polymorphism in environment responsive genes and association with Parkinson disease // Mol. Cell. Biochem. -2008.-V. 312.-P. 131-138.

403. Sinha R., Racette B., Perlmutter J.S., Parsian. A. Prevalence of parkin gene mutations and variations in idiopathic Parkinson's disease // Parkinsonism Relat Disord. -2005. -V. 11. -P. 341-347.

404. Sironi F., Pri A., Tesei S., et al. Parkin analysis in early onset Parkinson's disease // Parkinsonism Relat. Disord. -2008. -V. 14. -P. 326-333.

405. Smeyne R.J., Jackson-Lewis V. The MPTP model of Parkinson's disease // Brain Res. Mol. Brain Res. 2005. -V. 134. -P. 57-66.

406. Smirnova L., Gräfe A., Seiler A. et al. Regulation of miRNA expression during neural cell specification // Eur. J: Neurosci. -2005. -V. 21. P. 14691477.

407. Smith W. W., Pei Z., Jiang H. et al. Leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) interacts with parkin, and mutant LRRK2 induces neuronal degeneration // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. -2005. -V. 102. -P. 18676-18681.

408. Soldner S., Hockemeyer D., Beard C. et al. Parkinson's disease patient-derived induced pluripotent stem cells free of viral reprogramming factors // Cell. -2009. -V. 136. -P. 964-977.

409. Soös J., Engelhardt J.I, Siklös L. et al. The expression of PARP, NF-kappa B and parvalbumin is increased in Parkinson disease. Neuroreport. -2004. -V. 15. -P. 1715-1718.

410. Srinivasan B.S., Doostzadeh J., Absalan F. et al. Whole Genome Survey of Coding SNPs Reveals a Reproducible Pathway Determinant of Parkinson Disease // Hum. Mutat. -2009. -V. -30. -P. 228-238.

411. St Martin J.L., Klucken J., Outeiro T.F. et al. Dopaminergic neuron loss and up-regulation of chaperone protein mRNA induced by targeted over-expression of alpha-synuclein in mouse substantia nigra // J. Neurochem. 2007. -V. 100. -P. 1449-1457.

412. Stichel C.C., Zhu X.R., Bader V. et al. Mono- and double-mutant mouse models of Parkinson's disease display severe mitochondrial damage // Hum. Mol. Genet. -2007. -V.26. -P. 2377-2393.

413. Strauss K.M., Martins L.M., Plun-Favreau H. et al. Loss of function mutations in the gene encoding Omi/HtrA2 in Parkinson's disease // Hum. Mol. Genet. -2005. -V. 14. -P. 2099-2111.

414. Sun M., Latourelle J.C., Wooten G.F. et al. Influence of heterozygosity for parkin mutation on onset age in familial Parkinson disease: the GenePD study // Arch. Neurol. -2006. -V. 63. -P. 826-832.

415. Sunada Y., Saito F., Matsumura, K., Shimizu T. Differential expression.of the parkin gene in the human brain and peripheral leukocytes // Neurosci. Lett. -1998.-V. 254. -P. 180-182.

416. Suslov O., Steindler D».A. PCR inhibition by reverse transcriptase leads to an . overestimatio n of amplification efficiency // Nucleic Acids Res. -2005. -V. 33. P. 181-193.

417. Swerdlow R.I L, Parks J.K., Miller S.W. et ah Origin and functional consequences of the complex I defect in Parkinson's disease // Ann. Neurol. -1996: r-V; 40i-P; 663 671.; T

418. Taira T., Saito Y., Niki T. et,aL DJ-L has ai role: in. antioxidative stress to^ prevent cell death // EMBO Rep. -2004. -V. 5. -P. 213-218. ' :

419. Takahashi K., Taira T., Niki T. et al. DJ-1 positively regulates the androgen receptor by impairing the binding of PIASx alpha to the: receptor // J: Bioh Ghem. -2001. -V. 276. -P. 37556-37563.

420. Takeda K., Inoue K., Tanizawa Y. et al. WFS1 (Wolfram syndrome 1) gene product: predominant subcellular localization to endoplasmic reticulum in cultured cells and neuronal expression in rat brain // I lum. Mol. Genet. 2001. - V. 10. — P.477-484.

421. Tan E.K, Skipper L.M. Pathogenic mutations in Parkinson disease // Hum: Mutat. -2007. -V. 28: -P. 641 653. « : .

422. Tan E.K. Identification of a common genetic risk variant(G2385A) in Parkinson's disease //Ann. Acad. Med. -2006. -V.35. -P. 840-842.

423. Tan E.K., Peng R., Teo Y.Y. et al. Multiple LRRK2 variants modulate risk of Parkinson disease: a Chinese multicenter study // Hum. Mutat. -2010(b). -V. 31. -P. 561-568.

424. Tan E.K., Schapira A.H. Summary of GIGYF2 studies in Parkinson's disease: the burden of proof// Eur. J. Neurol. -2010. -V. 17. -P. 175-176.

425. Tan E.K., Shen H., Tan J.M.M. et al. Differential expression of splice variant and'wild-type parkin in sporadic Parkinson's disease // Neurogenetics. —2005. -V. 6.-P. 179-184.

426. Tang B., Xiong H., Sun<P. et al. Association of PINK 1 and DJ-1 confers digenic inheritance of early-onset Parkinson's disease // Hum Mol Genet. -2006.-V. 11.-P. 1816-1825.

427. Tanji K., Mori F., Imaizumi T. et al. Upregulation of a-synuclein by lipopolysaccharide and interleukin-1 in human macrophages // Pathol. Int. -2002. -V. 52. -P. 572-577.

428. Tanner C.M. Advances in environmental epidemiology // Mov. Disord. -2010.-V. 25. -P.58-62.

429. Tatard V.M., D'Ippolito G., Diabira S. et al. Neurotrophindirected differentiation of human adult marrow stromal cells to dopaminergic like neurons //Bone. -2007. -V. 40. -P. 360-373.

430. Thiruchelvam M.J., Powers J.M., Coiy-Slechta D.A., Richfield E.K. Risk factors for dopaminergic neuron loss in human alpha-synuclein transgenic mice

431. Eur. J. Neurosci. 2004. -V. 19. -P. 845-854.

432. Thomas B., Beal M.F. Parkinson's disease // Hum. Mol. Genet. -2007. -V. 16. -P. 183-194.

433. Tillib S.V., Mirzabekov A.D. Advances in the analysis of DNA sequence variations using oligonucleotide microchip technology // Curr. Opin. Biotechnol. -2001. -V. 12. -P. 53-58.

434. Tippmann-Peikert M., Boeve B.F., Keegan B.M. REM sleep behavior disorder initiated by acute brainstem multiple sclerosis // Neurology. -2006. -V. 66. -P. 1277-1279:

435. Tobin J.E., Latourelle J.C., Lew M.F. et al. Haplotypes and gene expression implicate the MAPT region for Parkinson disease: the GenePD. Study // Neurology. -2008. -V. 71. -P. 28-34.

436. Toft M., Mata LF., Ross O.A. et al. Pathogenicity, of the Lrrk2 R1514Q substitution in Parkinson's disease // Mov. Disord. -2007. -V. 22. -P. 389-392.

437. Tokuda T., Salem S.A., Allsop D. et al. Decreased a-synuclehr in cerebrospinal fluid of aged individuals and subjects with Parkinson's disease // Biochem. Biophys. Res. Com. -2006. -V. 349. -P. 162-166.

438. Tong Y., Pisani A., Martella G. et al. R1441C mutation in LRRK2 impairs dopaminergic neurotransmission in mice // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. —2009. -V. 106. -P. 14622-14627.

439. Troiano A.R., Cazeneuve C., Le Ber I. et al. Re: Alpha-synuclein gene duplication is present in sporadic Parkinson disease // Neurology. -2008. -V. 71.-P. 1295.

440. Trzaska K.A., Rameshwar P. Current advances in the treatment of Parkinson's disease with stem cells // Curr. Neurovasc. Res. -2007. -V. 4. -P. 99-109.

441. Ugrumov M.V., in Handbook of Neurochemistry and Molecular Neurobiology, Neurotransmitter Systems, edited by Lajtha, A. and Vizi, S. (Springer, Heidelberg, 2008), pp. 21-73.

442. Ulusoy A., Decressac M., Kirik D., Björklun A. Viral vector-mediated overexpression of a-synucleim as a progressive model of Parkinson's disease // Progr. Brain Res. -2010. -V. 184. -P.89-111.

443. Valencia A., Reeves P.B., Sapp E. et al. Mutant huntingtin and glycogen synthase kinase 3- accumulate in neuronal lipid rafts of a presymptomatic knock-in mouse model of Huntington's disease // J. Neurosci. Res. -2009. -V. 88. -P. 179 190.

444. Valente E.M., Abou-Sleiman P.M., Caputo V., et all Hereditary earlyonset Parkinson's disease caused by mutations in PINK1 // Science. -2004. -V. 304. , -P. 1158-1160.i

445. Valente E.M., Bentivoglio A.R., Dixon P.H. et al. Localization' of a novel locus for autosomal recessive early-onset parkinsonism, PARK6, on human chromosome Ip35-p36 // Am. J Hum Genet. -2001. -V. 68. -P. 895-900.

446. Van der Putten H., Wiederhold K.H., Probst A., et al. Neuropathology in mice expressing human alpha-synuclein // J. Neurosci. -2000. -V. 20. -P. 60216029.

447. Van der Walt J.M., Nicodemus K.K. et al. Mitochondrial polymorphisms significantly reduce the risk of Parkinson disease // Ami. Hum. Genet. —2003. -V. 72.-P. 804-811.

448. Van Duijn C.M., DeIcker M.G. et al. Park7, a novel locus for autosomal recessive early-onset parkinsonism, on chromosome lp36 // Am. J. Hum. Genet.-2001.-V. 69.-P: 629-634.

449. Vazin T., Chen J., Lee C.T. et al. Assessment of stromal-derived inducing activity inrthe generation of dopaminergic neurons from human embryonic stem cells // Stem. Cells. -2008. V. 26. -P. 1517-1525.

450. Vernum P., Wiste HJ., Weigand S.D. et al. MRI and CSF biomarkers in normal, MCI; and AD subjects: diagnostic discrimination and cognitive correlations // Neurology. -2009. -V. 73. -P. 287-293.

451. Vercammen L., Van der Perren A., Vaudano E. et al: Parkin protects against neurotoxicity in the 6-hydroxydopamine rat model lor Parkinson's disease // Mol. Ther. -2006. -V. 14. -P. 716-723. •

452. Vinish M:, Prabhakar S., Khullar M. et al. Genetic screening reveals high frequency of PARK2 mutations and reduced Parkin expression conferring risk for Parkinsonism in North West India // J. Neurol* Neurosurg; Psychiatry. -2010.-V. 81.-P. 166-170.

453. Vives-Bauza C., Zhou'C., Huang Y. et al. PINK1-dependent recruitment of Parkin to mitochondria in mitophagy // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. -2010. -V. 107.-P. 378-383- :

454. Vlaar A.M., van Kroonenburgh M.J., Kessels A.G., Weber W.E. Metaanalysis of the literature on, diagnostic accuracy of SPECT in parkinsonian syndromes // BMC Neurol. -2007: V. 7. -P; 27.

455. Vo N., Klein M.E., Varlamova O., et al. A cAMP-response element binding protein-induced microRNA regulates neuronal1; morphogenesis // Proc. Natl. Acad. Sei. U S A.-2005.-V. 102. -P. 16426-16431. .

456. Von Coelln R., Thomas B., Savitt J.M. et al. Loss of locus coeruleus neurons • and reduced startle in parkin null mice // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. -2004.-V. 101.-P. 10744-10749.

457. Vreugdenhil E., Berezikov E. Fine-tuning the brain: microRNAs // Front. Neuroendocrinol. -2010. -V. 31. -P. 128-133.

458. Wahner A.D., Sinsheimer J.S., Bronstein J.M., Ritz B. Inflammatory cytokine gene polymorphisms and increased risk of Parkinson disease // Arch. Neurol. -2007. -V. 64. -P. 836-840.

459. Wakamatsu M., Ishii A., Iwata S. et al. Selective loss of nigral dopamine neurons induced by overexpression of truncated human alphasynuclein in mice //Neurobiol. Aging. -2008. -V. 29. -P. 574-585.

460. Wang H.Q., Imai Y., Inoue H. et al. Pael-R transgenic mice crossed with parkin deficient mice displayed progressive and selective catecholaminergicneuronal loss // J. Neurochem. -2008(b). -V. 107. -P. 171— 185.

461. Wang M., Hattori N., Matsumine H. et al. Polymorphismen the parkin gene in sporadic Parkinson's disease //Ann. Neurol. -1999. -V. 45. -P. 655-658.

462. Wang Y., Clark L.N., Louis E.D. et al. Risk of Parkinson disease in carriers of parkin mutations: estimation using the kin-cohort method // Arch. Neurol. -2008(c). -V. 65. -P. 467-474.

463. Warrington J.A., Nair A., Mahadevappa M., Tsyganskaya M. Comparison of human adult and fetal expression and identification of 535 housekeeping/maintenance genes // Physiol. Genomics. -2000. -V. 2. -P. 143— 147.

464. Weintraub D:, Cornelia C.L., Horn S. Parkinson's disease Part 1: Pathophysiology, symptoms, burden, diagnosis, and assessment // Am. J. Manag Care: -2008. -V. 14. -P. S40-S48.

465. Weissenbach J;, Gyapay G., Dib C. et al. A second-generation linkage map of the human genome // Nature. -1992. -V.359. -P.794-801.

466. West A., Periquet M., Lincoln S. et al. Complex relationship between.parkin, . mutations, and Parkinsom disease // Am. J; Med: Genet. -2002. -V. 114. -P.584.591. . ■ ■ , , . : ■ ■ ' " :•"•: '.':■■

467. Wilkinson K.D., Lee K.M., Deshpande S., et al. The neuron-specilic protein PGP 9.5 is a ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase // Science. -1989. -V. 246. -P.670-673.

468. Wolters E.G., Francot C., Bergmans P. et ah Preclinical (premotor) Parkinson's disease // J. Neurol. -2000. -V. 247. -P. 103-109.

469. Wood-Kaczmar A., Gandhi S., Yao Z; et al. PINK1 is necessary for long term survival and mitochondrial function in human dopaminergic neurons // PLoS ONE. -2008. -V. 3. P. e2455.

470. Wu R.M., Bounds R., Lincoln S. et al. Parkin mutations and early-onset parkinsonism in a Taiwanese cohort // Arch. Neurol. -2005. -V. 62. -P. 82-87.

471. Xiromerisiou G., Hadjigeorgiou G.M., Eerola J. et al. BDNF tagging polymorphisms and haplotype analysis in sporadic Parkinson's disease in diverse ethnic groups //Neurosci. Lett. -2007. -V. 415. -P. 59-63.

472. Xu J., Zhong N., Wang H. et al. The Parkinson's disease-associated DJ-1 protein is a transcriptional co-activator that protects against neuronal apoptosis //Hum. Mol. Genet. -2005. -V. 14. -P. 1231-1241. '

473. Xu; P.Y., Liang, R., Jankovic, J. et al. Association of homozygous 7048G7049 variant in the intron six of Nurrl gene with Parkinson's disease // Neurology. -20021 -V. 26. -P. 881- 884.

474. Yamada M., Mizuno Y., Mochizuki H. Parkin- gene therapy for alpha-synucleinopathy: a rat model of Parkinson's disease //Hum. Gene Ther. -2005. -V. 16. -P. 262-270.

475. Yang Y., Gehrke S., Haque M.E. et al. Inactivation of Drosophila DJ-1 leads to impairments of oxidative stress response and phosphatidylinositol 3-kinase/Akt signaling // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2005. -V. 102. -P. 13670-13675.

476. Yavich* L., Jakala P., Tanila< H. Abnormal compartmentalization of norepinephrine in mouse dentate gyrus in. alpha-synuclein knockout and A3 OP transgenic mice // J. Neurochem. -2006. -V. 99. -P. 724-732.

477. Yavich L., Tanila H., Vepsalainen S., Jakala P. Role of alpha-synuclein in presynaptic dopamine recruitment // J. Neurosci. -2004. -V. 24. —P. 1116511170.

478. Youle R.J., Narendra D.P. Mechanisms of mitophagy I I Nat Rev Mol Cell Biol. -201 l.-V. 12.-P. 9-14.

479. Zabetian C.P., Samii A., Mosley A.D. et al. A clinic-based study of the LRRK2 gene in Parkinson disease yields new mutations // Neurology. -2005. -V. 65. -P. 741-744.

480. Zarranz J J., Alegre J., Gomez-Esteban J.C. et al. The new mutation, E46K, of alpha-synuclein causes Parkinson and Lewy body dementia // Ann. Neurol. -2004. -V. 55.-P. 164-173.

481. Zeitz C., Labs S., Lorenz B. et al. Genotyping microarray for CSNB-associated genes // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. -2009. -V. 50. -P. 59195926.

482. Zeng X, Cai J., Chen J. et al. Dopaminergic differentiation of human embryonic stem cells // Stem Cells 2004. -V. 22. -P. 925-940.

483. Zhang L., Shimoji M., Thomas B. et al. Mitochondrial localization of the Parkinson's disease related protein DJ-1: implications for pathogenesis // Hum. Mol. Genet. -2005. -V. 14. -P. 2063-2073

484. Zhang Y., Dawson V.L., Dawson T.M. Oxidative stress and genetics in the pathogenesis of Parkinson's disease // Neurobiol. Dis. -2000. -V. 7. -P. 240250.

485. Zheng B., Liao Z., Locascio J.J. et al. PGC-la, a potential therapeutic target for early intervention in Parkinson's disease // Sci.Transl. Med. -2010. -V. 2. -P. 52ra73.

486. Zhou W., Zhu M., Wilson M.A. et al. The oxidation state of DJ-1 regulates its chaperone activity toward alpha-synuclein // J.Mol. Biol. -2006. -V. 356. -P. 1036-1048.

487. Zhu J., Chu C.T. Mitochondrial Dysfunction in Parkinson's Disease // J. Alzheimer's Dis. -2010. -V. 20. -P. 325-334.

488. Zhu J.H., Horbinski C., Guo F. et al. Regulation of autophagy by extracellular signal-regulated protein kinases during l-methyl-4-phenylpyridinium-induced cell death // Am.J. Pathol. -2007. -V. 170. -P. 75-86.

489. Zhu X. R., Maskri L., Herold C. et al. Non-motor behavioural impairments in parkin-deficient mice // Eur. J. Neurosci. -2007. -V. 26. -P. 1902-1911.

490. Zhu X., Siedlak S.L., Smith M.A. et al. LRRK2 protein is a component of Lewy bodies //Ann. Neurol. -2006. -V. 60. -P. 617-618.

491. Zimprich A., Biskup S., Leitner P., Lincoln S. et al. Mutations in LRRK2 cause autosomal-dominant parkinsonism with pleomorphic pathology H Neuron. -2004. -V. 44. -P. 601-607.

492. Zlokovic B.V. Neurovascular vechanisms of Alzheimer's neurodegeneration // Trends Neurosci. -2005. -V. 28. -P. 202-208.1. БЛАГОДАРНОСТИ

493. В заключении выражаю искреннюю благодарность моему научномуконсультанту заведующему Лабораторией молекулярной генетикинаследственных болезней ИМГ РАН д.б.н. профессору Петру Андреевичу

494. Сломинскому за неоценимую помощь в подготовке данной диссертационной работы.

495. Выражаю глубокую признательность заведующей Отделоммолекулярных основ генетики человека ИМГ РАН д.б.н. профессору Светлане

496. Андреевне Лимборской за постоянный интерес к работе, поддержку и ценные советы.

497. Хотелось бы выразить глубокую признательность коллегам из Научного

498. Центра неврологии РАМН, особенно д.м.н. профессору Сергею Николаевичу

499. Иллариошкину, за плодотворное сотрудничество, благодаря которому данная работа стала возможной.

500. Искренне благодарю всех сотрудников Отдела молекулярных основ генетики человека ИМГ РАН за доброжелательное отношение, теплую атмосферу в коллективе, ценные советы и помощь.