Молекулярная диагностика генетического полиморфизма основных молочных белков и их связь с технологическими свойствами молока

Костюнина, Ольга Васильевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Молекулярная диагностика генетического полиморфизма основных молочных белков и их связь с технологическими свойствами молока
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Молекулярная диагностика генетического полиморфизма основных молочных белков и их связь с технологическими свойствами молока"

На правах рукописи

КОСТЮНИНА Ольга Васильевна

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕНЕТИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФИЗМА ОСНОВНЫХ МОЛОЧНЫХ БЕЛКОВ И ИХ СВЯЗЬ С ТЕХНОЛОГИЧЕСКИМИ СВОЙСТВАМИ МОЛОКА

03.00.23.-Биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Дубровицы -2005

Работа выполнена в отделе биотехнологии Всероссийского государственного научно-исследовательского института животноводства.

Научные доктор биологических наук, профессор Наталия Анатольевна Зиновьева руководители: доктор биологических наук Николай Александрович Попов

Официальные доктор биологических наук, профессор Игорь Яковлевич Шихов оппоненты: доктор биологических наукЛюбовь Александровна Калашникова

Ведущее учреждение: Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева

Защита состоится февраля 2005 года, в 10 часов, на заседании диссертационного совета Д 006.013.01 во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте животноводства (ВИЖ).

Адрес института: 142132 Московская область, Подольский район,

пос. Дубровицы, ВИЖ. Факс: 8 (0967) 651101

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан «12» января 2005 года.

Ученый секретарь диссертационного со1 кандидат биологических наук

В.П. Губанова

2.00 Ь-Ц ZT 0Ъ

¿LW0M

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Согласно современной концепции развития животноводства дальнейшее увеличение производства сельскохозяйственной продукции связано с использованием научных разработок. Это позволит сделать отрасль более рентабельной и конкурентоспособной, а также обеспечит снабжение населения качественными продуктами животноводства (Данкверт CA, Дунин И.М., 2002).

В селекционной работе с крупным рогатым скотом характеристика молока проводится в основном по удою, жиру и общему содержанию белка. Однако полиморфизму белка не уделяется должного внимания. Вместе с тем, эти показатели являются основными при производстве сыров и творога. Установлена тесная связь между технологическими свойствами и биохимическим полиморфизмом белков молока (Иолчиев Б.С. и др., 1996; Попов H.A. и др., 2003).

Возросшие требования к качеству молочной продукции привели к использованию в селекции генетических маркеров и поиску их связи с молочной продуктивностью. В сложившейся ситуации возникла необходимость изменения методов оценки признаков селекции животных, новых подходов, основанных на достижениях генетики и биотехнологии. Одним из методов определения полиморфизма систем белков молока является ПЦР-ПДРФ анализ, который отличает высокая чувствительность, быстрота и точность в исполнении.

Цель и задачи исследования.

Цель исследований заключалась в усовершенствовании методов молекулярной диагностики генетического полиморфизма основных молочных белков крупного рогатого скота и изучении его связи с признаками молочной продуктивности и технологическими свойствами молока.

Для достижения цели работы были поставлены следующие задачи.

1. Разработать и усовершенствовать методики определения аллельного полиморфизма генов бета-казеина и альфа-лактальбумина.

2. Пополнить банк ДНК крупного рогатого скота различных пород и апробировать на нем модифицированные методики определения генетического полиморфизма белков альфа-лактальбумина и бета-казеина.

3. Определить частоты аллелей и генотипов крупного рогатого скота различных пород по генам каппа-казеина, бета-лактоглобулина, бета-казеина и альфа-лактальбумина и дать по ним генетическую структуру популяций отдельных пород.

4. Изучить молочную продуктивность коров с различными вариантами исследуемых генов.

5. Изучить технологические свойства молока коров различных генотипов черно-пестрой породы по генам каппа-казеина, бета-лактоглобулина, бета-казеина.

Практическая значимость работы.

В качестве ^возможных генетических маркеров, представляющих практический интерес для скотоводства, рассмотрены гены альфа-лактальбумина и бета-казеина, предложены усовершенствованные методики выявления их аллельных вариантов. Рассчитаны частоты встречаемости аллелей и генотипов бета-казеина, альфа-лактальбумина, каппа-казеина и бета-лакйглр^лр^гкрупног»рогатого скота отдель-

нальнан библиотека Cfleicpft OS

IWj »мО/

ных популяций. Изучена молочная продуктивность и технологические свойства молока коров с различными генотипами исследуемых генов.

Научная новизна работы.

Модифицирован метод ПЦР-ПДРФ для выявления аллелей и генотипов крупного рогатого скота по генам альфа-лакгальбумина и бета-казеина. Проведена апробация метода при определении частот их встречаемости среди поголовья отдельных популяций черно-пестрой, ярославской, симментальской, красной горбатовской, бестужевской, сычевской, костромской, айрширской, голштинекой черно-пестрой и швицкой пород.

Апробация работы.

Материалы диссертационной работы были заслушаны и обсуждены:

на конференциях аспирантов и молодых ученых, ВИЖ, 2002 г., 2003 г.;

на международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», ВИЖ, 2003 г.;

на отчетах НИР отдела биотехнологии ВИЖ, 2002 г., 2003 г., 2004 г.

в школе-практикуме «Методы исследований в биотехнологии сельскохозяйственных животных», ВИЖ, 2004г.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Усовершенствованные тест-системы анализа полиморфизма генов бета-казенна и альфа-лактальбумина.

2. Характеристика генетической структуры отдельных популяций крупного рогатого скота по генам каппа-казеина, бета-лактоглобулина, бета-казеина и альфа-лактальбумина.

3. Связи вариантов исследуемых генов с молочной продуктивностью коров и технологическими качествами молока.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ.

Струюура и объем работы.

Диссертационная работа написана на 127 страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы. Работа включает 39 таблиц и 13 рисунков. Список литературы включает 172 источников, втом числе 90 источников на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные исследования проводились в лаборатории молекулярной генетики и цитогенетики животных в 2000-2004 гг. в соответствии с планом НИР отдела биотехнологии ВИЖ по следующей схеме, (рис. 1).

В исследованиях были использованы животные следующих пород:

1. Красная горбатовская (п=79), ГУП ПНО «Зименки», Владимирская обл.

2. Черно-пестрая (1) (п*60), ОПХ «Дубровицы», Московская обл.

3. Черно-пестрая (2) (п=70), ГУП ПНО «Пойма», Московская обл.

4. Черно-пестрая (3) (п=48), «Носовичи», Гомельская обл., Республика Беларусь.

5. Симментальская (п=28), п/п «Воронежское», Воронежская обл.

6. Ярославская ч/п (п=50), ГТ13 «Михайловский», Ярославская обл.

7. Ярославская, Михайловский тип (п=50), ГПЗ «Михайловский», Ярославская обл.

Исследаемые популящи крупного рогатого скота

£ ?

¡с 1%

К *

л О

I *

5 $

Выделение ДНК КРС пород, разводимых в России и Беларуси (1483 образцов ДНК 10 пород из Чбпопуляций)

Молеку лярно-генвточеский анализ полиморфизма генов белков молока

Изучение технологических свойств молока и молочных продуктов откоров черно-пестрой породы с различными генотипами по белкам молока

Усовершенствование методик анализа полиморфизма генов

]

к-казеин

йГйГ®

В-казеин

а-лактальбумин | р-лактоглобулин |

Ы|—I Удой,кг ]

йй

[рЕвЗСр

Определение частот встречаемости аллелей и генотипов

Выявление связей мехяу генотипами исследуемых генсв _и признака»« молочной продуктивности коров_

—| Жир 1

Белок, %

]

{

Молоч ны й жлр, кг

| Молочный белок.кг

Рис. 1. Схема исследований.

8. Айрширская (п«61), совхоз-артель «Луч», Тихвинский р-н, Ленинградская обл.

9. Черно-пестрая голштинская (п-81), ГПЗ «Московский», Шуйский р-н, Ивановская обл.

Ю.Сычевская ч/п (п=25), ФГУП ПЗ «Рассвет», Смоленская обл.

П.Сычевская х голштинская (п-22), ФГУП ПЗ «Рассвет», Смоленская обл.

12.Швицкая (п=37), ГПЗ «Токарево», Смоленская обл.

13.Костромская (п=90), Колхоз "Арефинский", колхоз им. Арсения Шуйский р-н,

Ивановская область

14.Костромская х голштинская (п-210), колхоз "Арефинский", колхоз им. Арсения

Шуйский р-н, Ивановская область

15. Бестужевская (п-49), ГПЗ им. Максима Горького, Республика Башкортостан

16.Бестужевская х голштинская (п=48), ГПЗ им. Максима Горького, Республика

Башкортостан.

Пробы ткани коров ярославской, костромской, бестужевской, красной горба-товской, сычевской, швицкой, черно-пестрой и голштинской черно-пестрой пород были получены в рамках совместных исследований с отделом селекции молочного скота и лабораторией генетики ВИЖ.

Выделение ДНК проводили по методикам, описанным Зиновьевой H.A. с соавторами (1998) и Гладырь Е.А. с соавторами (2000). Определение полиморфизма генов белков молока проводили методом ПЦР-ПДРФ анализа. Для установления генотипов животных по каппа-казеину и бета-лактоглобулину использовали методики, разработанные в лаборатории молекулярной генетики и цитогенетики животных ВИЖ (Гладырь ЕА и др., 2001).

Генотипы животных по генам альфа-лактальбумина и бета-казеина определяли по методикам, разработанным в ходе выполнения собственных исследований (Гладырь Е.А., Коспонина О.В., Зиновьева H.A., 2002; Костюнина О.В. и др., 2003).

Данные по молочной продуктивности были взяты из племенных карточек коров форма 2-Мол.

Выработку продуктов и определение технологических свойств молока и молочных продуктов (творог, сливки) проводили в отделе селекции молочного скота в соответствии с технологической инструкцией по производству творога из пастеризованного молока, технологической инструкцией по приготовлению масла коровьего сладкосли-вочного, ГОСТ 13277-79 «Молоко пастеризованное», ТУ 9222-180-00419785-99 «Творог», ГОСТ 37-91 «Масло коровье. ТУ», молоко натуральное коровье сырое ГОСТ Р52054-2003. В лаборатории селекционного контроля качества молока ВИЖ была проведена дегустационная оценка молока и молочных продуктов согласно ГОСТ «Молоко, молочные продукты и молочные консервы», 1972.

Статистическую обработку данных проводили по стандартным методикам (Пло-хинский H.A., 1978; Меркурьева Е.К., Шангин-Березовский Г.И., 1983).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Разработка и усовершенствование методик диагностики полиморфизма генов альфа-лактальбумина и бета-казеина крупного рогатого скота.

Одной из задач настоящей диссертационной работы явилась разработка методик анализа полиморфизма генов белков молока - альфа-лактальбумина (LALBA) и бета-казеина (CSN2).

Предложенные нами методы (Гладырь Е.А., Костюнина О.В., Зиновьева Н.А., 2002; Костюнина О.В. и др., 2003) диагностики полиморфизма генов ЬАЬВА и СБN2 на основе анализа ПЦР-ПДРФ просты в исполнении, достоверны и отличаются хорошей воспроизводимостью результатов. Они могут с успехом использоваться для тестирования крупного рогатого скота.

3.1.1. Определение вариантов гена альфа-лакгальбумина.

Для определения аллельного полиморфизма гена 1_А1_ВА нами предложен метод ПЦР-ПДРФ анализа, позволяющий диагностировать два наиболее часто встречающихся его варианта - А и В. Диагностика основана на определении точковой мутации в позиции 263 (-1689) 5 -фланкирующего региона. Исходя из наличия и локализации мутации, нами были выбраны и апробированы два олигонуклеотидных праймера, ампли-фицирующие фрагмент гена длиной 440 п.о., включающий данную точковую мутацию (генный банк М90645): Аи-ШСИ (позиции 149-168) и А15-1АС2 (позиции 558-578).

Для объективной оценки результатов при постановке ПЦР использовались два контроля - положительный, в качестве которого выступала ДНК крупного рогатого скота с известным генотипом по 1_А1_ВА, и отрицательный, в качестве которого выступала реакционная смесь с добавлением вместо ДНК бидистилированной воды.

Генный банк М90645

149

/" Аллель А

Аллель В

АЛ АН ВВ

328 п.о. 211 п.о. 117 п.о. Ю2 п.о.

Рис.2. Схема ПЦР-ПДРФ анализа вариантов гена МША крупного рогатого енота.

По завершении ПЦР проводили гидролиз продуктов ПЦР (10 мкл) 1 Ед эндонук-леазы МЫ1 с последовательностью узнавания СОвСН^С Р=А, в, Т; а Н-А, С, Т). После рестрикции в зависимости от генотипа животного образуются фрагменты длиной 328, 211,117 и 102 п.о., при этом фрагмент длиной 328 п.о. соответствует аллелю А, а фрагменты длиной 211 и 117 п.о. соответствуют аллелю В (рис. 2).

Фрагмент длиной 102 п.о. является общим для обоих аллелей и не зависит от генотипа животных. Наличие данного фрагмента можно рассматривать в качестве контроля активности рестрикционного фермента и контроля степени рестрикции. Вследст-

вие незначительных различий в длине фрагменты длиной 117 и 102 п.о. на электрофо-реграмме зачастую идентифицируются в виде одного общего фрагмента.

3.1.2. Определение вариантов гена бета-казеина.

Нами разработана тест-система диагностики полиморфизма гена CSN2 на основе ПЦР-ПДРФ, позволяющая идентифицировать аллели А и В данного гена, а также выявлять аллель АЗ.

Аллель В отличается от других аллелей точковой мутацией С—>G в позиции 8267 в экзоне 7 (генный банк М55158), приводящей к аминокислотной замене Ser—^Arg в позиции 122 белковой последовательности. Поскольку данная нуклеотидная замена не приводит к образованию или, наоборот, исчезновению сайта рестрикции, при разработке системы нами был использован принцип искусственного введения в амплифици-руемый фрагмент одного из аллелей рестрикционного сайта с помощью праймера (рис. 3).

Аллель А. (А 1, А2, АЗ)

S' ~ TGAAAGCCAGAGC I 8267 ГПДР | ~ 3'

5' — TGAAGG^CAGAGr Пае III - 3'

Аллель JB

1 S' _■ ItlAAl.til - ~ TGAAAGGCAGAGC I 8267 ПНР \ ~ 3'

S* ~TGAAGGGCAGAGC ~ 3'

Рис. 3. Дизайн праймеров для диагностики аллелей А и В гена СЭ№ КРС. Для амплификации фрагмента экзона 7, содержащего данную мутацию, длиной 101 п.о. нами были подобраны олигонуклеотидные праймеры (генный банк М55158): ВС№ 5" (позиции 8242 до 8266) и ВС№ 3* (позиции 8321 до 8342).

Г О 4ÍK rvi «iS 1 SK 8267 ^тШ^ЛЯ,:-, 1 '■<,', V). у*Ж,\1 IV ">m Шт-'ШМУ1 82-4.2. Io1 " ° 8^-42 Аллель В 8 2в7

Лллел!. А (А1, 8267 ÍOI и «i А2, АЗ) 76 Г [ АВ[ ВН г - • - . 1 _ Ю1 п.о

Рис. 4. Схема ПЦР-ПДРФ анализа аллелей А и В гена CSN2 КРС.

При этом во 2-й позиции от 3' конца прямого праймера ВС№ 5", приходящегося на участок последовательности вблизи точковой мутации, нами была введена нук-

леотидная замена А~>С, приводящая к образованию сайта рестрикции 66|СС эндо-нуклеазы НаеШ в варианте В гена С5М2. По завершении проводили гидролиз продуктов реакции (10 мкл) 1 Ед эндонуклеазы НаеШ в течение 12 часов при 37°С. После рестрикции в зависимости от генотипа животного образуются фрагменты длиной 101, 76 и 25 п.о., при этом фрагменты длиной 76 и 25 п.о. соответствуют зллелю А, а фрагмент длиной 101 п.о. - аллелю В (рис. 4).

Аналогичная схема введения сайта рестрикции использовалась для выявления аллеля АЗ гена СБ^ (рис. 5).

Лллели /VI, А2, В 1 5' — 1ла11 1л1 " 1 82x9 ПЦР | 3'

5' ~ тааг,та^аааг,аа ~ Лха/ 3'

Лллель АЗ

1_ 5' —^—1 Л. .ал 1 1 1 * 1 8219 ПНР | 3'

5' ~ 1 адс(саааааоаа ~ 3'

Рис. 5. Дизайн праймеров для диагностики аллеля АЗ гена С5Ы2 КРС.

Для амплификации фрагмента экзона 7, содержащего мутацию С—>А в позиции 8219, длиной 201 п.о. нами подобраны олигонуклеотидные праймеры: ВС8М-А1 (позиция 8196 до 8218) и ВСБМ-!. (позиция 8376 до 8396). При этом во 2-й позиции от 3" конца прямого праймера ВС№-А1, приходящегося на участок последовательности вблизи точковой мутации, нами была введена нуклеотидная замена С—>Т, приводящая к образованию сайта рестрикции 6Т|АС эндонуклеазы Ява! во всех вариантах гена СБМ2 (А1, А2, В) за исключением АЗ.

1У15ЯЯИ

зу--^.-1-.

Лллс/11. АЗ

82 I У

ЛЛ АЗА НИ АЗ Г» АЗА1

20 1 п «»

1 -7?» г» «.

2 2 I» л.

Рис.6. Схема ПЦР-ПДРф анализа аллеля АЗ гена СБ№ крупного рогатого скота.

Реакции проводили аналогично определению вариантов А и В (Костюнина О.В. и др., 2003). В случае успешной амплификации осуществляли гидролиз 1 Ед эндо-нуклеазы Ли/в течение 12 часов при 37°С. После рестрикции в зависимости от генотипа животного образуются фрагменты длиной 201,179 и 22 п.о., при этом фрагменты длиной 179 и 22 п.о. соответствуют аллелям А1, А2 и В, а фрагмент длиной 201 п.о. -аллелю АЗ (рис. 6).

3.2. Генотипирование крупного рогатого скота по вариантам каппа-казеина

Результаты популяционно-генетических исследований коров по вариантам каппа-казеина представлены в таблице 1. Наибольшими частотами встречаемости аллеля В, который, как известно, связан с более высоким содержанием белка в молоке (Калашникова Л.А., 2003), повышенным выходом сыра, лучшими коагуляционными свойствами (Хаертдинов Р., Афанасьев М., 1997), характеризовались чистопородные коровы ярославской (31,0%) и красной горбатовской (26,6%) пород. У них же выявлена наибольшая гетерогенность.

Таблица 1

Частоты встречаемости аллелей и генотипов гена каппа-казеина у различных пород крупного рогатого скота._____

1 Частоты аллелей, % Частоты генотипов, %

<с т 1 ш и. О СЗ 3 СО < СО с3 т 1 < (9 о и_ < СЭ сэ о т т 1 О ш ш < | Ш 1 < о ш и. и 1 со

Черно-пестрая порода (1), «Дубровицы*

о со 00 ю 00 см ч-~ 1 1 П со" о 1П см «н 1 I I 1_

Черно-пестрая порода (2), «а Пойма*

ч- г— г— сч о" см чН см 1 со ю 1П ч-о" ч- со ч-" 1

Черно-пестрая порода (3),« Чосовичи»

<о э оо 00 ю со ч-1— 1-О) 1 о» Т с*

Ярослаь чжая, чистопородная

о Я* § «н СО о о го ю о о Ч-" ч- о |о I со ч-" см »-< о чс" о ¡о см | гм" 1 1 I ! СМ ' _1_____ о со

ославская, Михайловский тип

о ю о оо" со О 1 ю см о о ■гН о_ см" о о" ч- о | о" ю о | о ч-" | ч-" 1 о см" 1 : ! М ! 1 1 1

Бестужевская, ч/п

СП ■ч- со т—Г 00 ч- 00* «ч 1 1 •ч 1Л со Г-- см со о о! 1 _ ]__!_.....

Симиентальская

СО СМ 84,8 к — 15,2 со 00 г— п 1 г~-| оо ] 1 1 1

Красная горбатовская порода

СТ1 ч-_ со 26,6 8,8 1,3 1,9 о 00 со ч-ю со о 1П 1 со | *н ! со со" 1-1 о" Ч-» со со чН 1 чН 1 со .—Г

. — I " I_1___1_________I_!_I I_I__

Редкий аллель Е с частотой 8,8% и 2,1% был обнаружен у животных красной горбатовской и черно-пестрой пород (ГУП ПНО «Пойма»). Аллели С и Рбыли идентифицированы у коров ярославской (чистопородных и Михайловского типа) и красной горбатов-

ской пород, амель в - у коров ярославской и черно-пестрой («Носовичи», Республика Беларусь) пород. Наибольшая частота встречаемости генотипа ВВ гена СБМЗ у чистопородных коров ярославской породы (14,0%).

Анализ генетической структуры популяций показал, что во всех стадах коров черно-пестрой и бестужевской породы наблюдалось сохранение генного равновесия по генотипам С8№. Популяция симментальской породы характеризовалась отсутствием генного равновесия (Р<0,05). В популяциях ярославской породы и красной горба-товской породы наблюдается высокодостоверное смещение генного равновесия в сторону гомозиготного генотипа ВВ. У коров Михайловского типа генное равновесие смещено в сторону гетерозиготного генотипа АВ при Р<0,05.

3.3. Генотипирование крупного рогатого скота по вариантам бета-лактоглобулина.

В таблице 2 представлены данные о частотах встречаемости аллелей и генотипов гена Р1Х1 в стадах черно-пестрой породы.

Таблица 2

Частоты встречаемости аллелей и генотипов гена у крупного рогатого скота черно-пестрой породы отдельных популяций. _

N частоты аллелей частоты генотипов

А в АА | АВ ВВ

Популяция 1, «Дубровицы»

43 29 14

33,7 66,3 67,4 32,6

Популяция 2, «Пойма»

25 3 17 5

46,0 54,0 12,0 68,0 20,0

Популяция 3, «Носовичи»

48 | 36 12

37,5 62,5 75,0 25,0

Как следует из данных таблицы 2, во всех трех исследованных стадах черно-пестрой породы выявлены два из четырех диагностируемых аллелей гена рЮ - А и В. При этом частота аллеля В была выше по сравнению с А и варьировала по стадам от 54,0 до 66,3%. Аллели С и 0 в исследуемых группах животных не диагностировались. Анализ генетической струтуры стад показал сохранение генного равновесия по исследуемому локусу только у черно-пестрого скота ГУП ПНО «Пойма». В других стадах наблюдается смещение генного равновесия в сторону генотипа АВ (Р<0,05).

3.4. Генотипирование крупного рогатого скота по вариантам альфа-лактальбумина.

В таблице 3 представлены результаты анализа коров по аллелям и генотипам 1А1_ВА. Как показано в таблице 3, обнаружена наибольшая частота встречаемости аллеля А у животных бестужевской (82,6-93,8%), красной горбатовской (84,8%) и черно-пестрой (популяции 3,82,5%) пород. Наименьшей частотой встречаемости амеля А характеризовались животные швицкой (48,3-50,0%) и популяции 2 черно-пестрой породы (46,0%). Анализ частот встречаемости генотипов 1_А1_ВА показал в большинстве популяций наибольшую частоту встречаемости генотипа АА. Максимальная частота данного генотипа выявлена у помесных коров (89,6%) бестужевской породы, а наименьшая - у коров популяции 2 черно-пестрой (12,0%) и швицкой (10,3-15,8%) пород.

Таблица 3

Частоты встречаемости аллелей и генотипов гена 1А1.ВА у крупного рогатого скота различных популяций. _

Число голов, ! Частоты аллелей, % Частоты генотипов, %

п | А в АА 1 ав ; вв

Черно-пестрая (1), *Дубровицы»

59 ! 65,3 34,7 50,8 i 28,8 | 20,4

Черно-пестрая (2), »Пойма»

25 | 46,0 54,0 12,0 1 68,0 | 20,0

Черно-пестрая (3),«Носовичи*

20 | 82,5 17,5 65,0 I 35,0 | 0

Ярославская, чистопородная

50 | 75,0 25,0 60,0 1 30,0 | 10,0

Ярославская, Михайловский тип

50 | 73,0 27,0 58,0 ! 30,0 | 12,0

Бестужевская чистопородная

49 | 82,7 17,3 69,4 1 26,5 Г 4,1

Бестужевская хголштинская

48 93,8 6,2 89,6 1 8,3 | 2,1

Красная горбатовская

23 [ 84,8__[_ Т5,2 ] 78,3 | ТЗД

Айрширская_____ _~__

61 : 75,4 [ 24,6 1 50,8 ~ , 49,2

Костромская чистопородная

70 | 55,6" Г" "41,4 1 27,1 ] 62,9

Костромская хголштинская _' ___

212 I 66Д ] 34^) I 37,7 1 56,6 | 5,7

Голштинская черно-пестрая___~_____

"72 | 68,8 | 31,2 | 48,6 1 40,3" "Г ИД

Швицкая немецкой селекции_______

Л9 1 50,0 | 50,0 | ~15|8 | 68,4 [ 15,8 |

Швицкая отечественной селекции______ " 1

29 Г 48,3 51,7 | ЩТ | 75,9 '[ 13,8 1

Сычевская ___ __*___I

21 ] 7876 "7 21'4 ! 61.9 Г 33,3~ I 4,8 |

Сычевская хголштинская __"______^

14 | 67,9 ; 32,1 | 35,7 64,3_[ 0 ^

Анализ генетической структуры популяций показывает, что в 9 из 16 сохраняется генное равновесие по локусу ШША. В популяции 1 черно-пестрого скота, бестужевская х голштинская, красной горбатовской, айрширской, костромской чистопородной, костромская х голштинская и коров отечественной селекции швицкой породы отмечается смещение генного равновесия в сторону увеличения гетерозиготного генотипа АВ.

3.5. Генотипирование крупного рогатого скота по вариантам бета-казеина.

В таблице 4 представлены данные о частотах встречаемости вариантов гена СБМ2. Можно отметить, что во всех исследованных популяциях скота частота аллеля А была выше и варьировала от 56,8% у коров голштинской черно-пестрой породы до 98,4% у коров айрширской породы. Доля гомозиготных генотипов АА также превышала

8,7

10,0

генотип ВВ, при этом частота варьировала от 30% у коров швицкой породы немецкой селекции до 96,8% у коров айрширской породы.

Таблица 4

Частоты встречаемости аллелей и генотипов гена С8№ в исследованных популяциях крупного рогатого скота.______

Число го- Частоты аллелей Частоты генотипов

лов, п а I в АА I ав ; вв

Ярославская, чистопородная

50 64,0 | 36,0 46,0 1 36,0 | 18,0

Ярославская, Михайловский тип

50 71,0 1 29,0 50,0 42,0 8,0

Бестужевская чистопородная

49 85,7 | 14,3 79,6 12,2 ) 8,2

Бестужевская х голштинская

48 72,9 | 27,1 1 62,5 ! 20,8 1 16,7

Айрширская

61 98,4 1 1,6 96,7 1 3.3 I о

Костромская, чистопородная

80 66,9 | 33,1 45,0 1 43,7 I 11,3

Костромская х голштинская

196 87,5 ! 12,5 82,7 1 9,7 7,6

Голштинская черно-пестрая

81 56,8 | 43,2 48,1 ! 17,3 | 34,6

Швицкая ненецкой селекции

10 65,0 | 35,0 30,0 70,0 | 0

Швицкая отечественной селекции

27 61,1 ; 38,9 44,4 I 33,3 { 22,3

Сычевская чистопородная

25 76,0 \ 24,0 72,0 | 8,0 20,0

Сычевская х голштинская

22 68,2 | 31,8 68,2 1 0,0 | 31,8

В популяциях айрширской, костромской чистопородной, швицкой (немецкой и отечественной селекции), ярославской чистопородной и Михайловского типа ярославской породы наблюдается сохранение генного равновесия по локусу В популяциях сычевской, сычевской х голштинской, бестужевской чистопородной и бестужевской х голштинской, голштинской черно-пестрой породы наблюдается смещение генного равновесия в сторону увеличения генотипа ВВ, а в популяции костромской х голштинской • в сторону генотипа АА.

3.6. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по каппа-казеину.

Результаты анализа молочной продуктивности в группах коров по породам с различными генотипами по гену СБ^ приведены в таблице 5.

Анализ продуктивности животных показал наличие статистически достоверной разницы по содержанию жира АВ>АА и выходу молочного жира за лактацию ВВ>ВЕ у коров красной горбатовской породы, а по содержанию белка в молоке ВВ>АВ, ВВ>АА у животных ярославской породы.

Молочная продуктивность коров с различными генотипами по гену С5Ж?.

Генотип Число голов Удой, кг Содержание ! Выход мо-жира, % | лочного жира, кг Содержание ' Выход мо-белка, % I лочного бел-1 ка, кг

Красная горбатовская

АА 29 3347+142 4,06+0,04* | 136+5,6 - -

АВ 26 ~ 3132+138 4,18+0,04* | 131+6,2 1

ВВ 3 3408+440 4,42+0,18 151+15,8* 1

ВЕ 5 2616+167 4,24+0,13 111+6,3*

АЕ 7 3401+421 4,13+0,10 141+18,3 - |

Черно-пестрая (1), »Дубровицы*

АА 15 15935±125 4,23±0,07 1 250,8+7,1 3,03±0,04 179,5±3,5

АВ 11 |5998±157 4,30±0,09 257,7±6,8 3,06±0,03 183,3±21,6

Ярославская чистопородная

АА 22 5845±1921 4,76±0,08 278,3±7,4 3,38±0,04* 1 197,4±5,9

АВ 13 5594±207 4,62+0,13 258,4± 14,0 3,34±0,06* | 186,7±8,6

ВВ 7 5879±203 4,76±0,17 279,5±14,9 3,50±0,04* 205,8±9,0

ВР 3 5663±304 4,64±0Д7 262,6±9,7 3,40±0,07 | 192,4±7,8

Ярославская, Михайловский тип

АА 20 |7796±175 4,63±0,11 361±9,3 1 3,24±0,02 252,6±5,5

АВ 25 |7685±193 ь 4,66±0,08 358+9,1 1 3,28+0,03 252±6,5

* Р<0,05

Необходима последующая проверка аналогичных сравнений на большем поголовье в научно-производственном опыте.

3.7. Молочная продуктивность коров с разными генотипами по бета-лактоглобулину.

Продуктивность коров черно-пестрой породы в зависимости от группирования их по генотипам гена рьв представлена в таблице 6.

Таблица 6

Молочная продуктивность коров-первотелок черно-пестрой породы ОПХ «Дуб-

ровины» с разными генотипами ¡¡¡.в, 2003г.

Генотип Число голов, п Удой, кг I Содержание жира, % Молочный жир, кг Содержание белка,% Молочный белок, кг

ВВ 11 5900±201 4,16±0,08 245,3+11,0 2,99+0,04* 176,6±5,9

АВ 14 | 6193±160| 4,07+0,07 252,4±6,9 3,10±0,02* 192,2±5,3

*Р<0,05

Коровы с генотипом АВ незначительно превосходят сверстниц с генотипом ВВ по удою, содержанию белка, количеству молочного жира и белка, но уступают по содержанию жира в молоке. Наблюдалась статистически достоверная разница лишь по содержанию белка в молоке АВ>ВВ, однако в целом уровень белковомолочности в исследованных группах был низким.

3.8. Молочная продуктивность коров с разными генотипами по альфа-лакгальбумину.

Показатели молочной продуктивности у коров различных пород, дифференцированных по генотипам ЦМВА, представлены в таблице 7.

Следует отметить некоторое превосходство удоя у чистопородных коров ярославской породы, а также чистопородных и помесных коров ярославской породы. Среди коров Михайловского типа и швицкой породы отечественной и немецкой селекции, наоборот, отмечается тенденция превосходства у несущих в генотипе аллель В.

Генотип

Молочная продуктивность коров с различными генотипами по ММА I ЧислстГ

лов

Удой за 305 дн., кг

Содержание жира, %

Выход мюочного жира, кг

Содержание | Выходмо-белка, % | /очного бежа, кг

Ярославская чистопородная

¡~"Ярославская; Михайловский тип

7549±1§8 7880±18"6

4,57±0,08 344,9±9,0* 3,27±0,03~В47,1±5,5

4,73±0ДЗ" 373±9,3 3,2б+0фП257±7,3

ВВ

8204+288 4,70±0,11 1 Зв5±ТЗ,2* 3,29±0,03 270±10,3

Швицкая немецкая

Гаа 3 4522±58* 4,02±0,06 182±0,05 3,50±0,10 [158±2,04

АВ 13 4834±99* 4,02±0,02 194±3,7 3,42±0,02 165±3,2

ВВ 3 4753±160 3,95±0,04 188±4,9 3,37±0,04 160±4,0

АА

ВВ

22"

Сычевская

3018±233

Т444±78

3900+629

3,81±0,04 "3783+0,01*

115±9,9 ¡3,24±0,03 132+3,0 , 3,23+0,02" ЗЖВДГ^ 148±24,3 Г З,20±0,005

98±7,9

111±2,5 125+20,3 |

АА

АВ

2603+194

2496±229

Сычевская хюлипинская АА

3,88+0,03 4,01±б,08

101 ±7,2

"100±8Х

^9±0Ж 3,51±0,10

88*6,4 88±6,7

АВ

4135±464

3915±350

*Р<0,05, **КО,01,

3,93±0,09

3,85±0,б3

Г 163±16,4 Г"3,40+0,07 1ЯЩ1 "1151+12,5 I 3,37±0,07 |132±Т0Ж

*Р<0,001.

Если по удою коровы ярославской и сычевской (чистопородные и помесные) пород с генотипом АА гена !_А1_ВА превосходят с генотипом ВВ, то в Михайловском типе и швицкой породе (отечественной и немецкой селекции) наблюдается противоположная зависимость. Прослеживается неравнозначное влияние породы на проявление связи генотипа ЬАША с содержанием жира и белка в молоке.

Сравнение групп коров выявило наличие статистически достоверной разницы по удою в швицкой породе немецкой селекции АВ>АА, содержанию жира у чистопородных ярославских АА>АВ и в бурой швицкой породе отечественной селекции АВ>ВВ; содержанию белка ВВ>АА, ВВ>АВ в молоке чистопородных ярославских; выходу молочного жира АА>АВ у чистопородных ярославских и у коров Михайловского типа ВВ>АА. В остальных случаях выявленные преимущества можно рассматривать в качестве тенденции, а в целом дифференциация по генотипам 1А1.ВА в породах проявляется неоднозначно.

3.9. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по бета-казеину.

В таблице 8 представлены данные о молочной продуктивности коров исследованных пород в зависимости от их генотипа по СБ№.

Наблюдается некоторое превосходство по удою коров Михайловского типа ярославской породы, швицкой породы немецкой селекции, несущих генотип АА гена СБ^, и коров сычевской (чистопородные и помесные) и швицкой (отечественной селекции) пород, имеющих генотип ВВ. Однозначного заключения о влиянии генотипа

(£N2 на содержание жира и белка у коров исследованных пород сделать пока нельзя из-за недостаточного объема выборки животных.

Таблица 8

Молочная продуктивность коров с разными генотипами по CSN2.

Генотип Число голов Удой за Содержание 305 дн., жира, % кг Выход молочного жира, кг Содержание белка, % Выход молочного белка,кг

Ярославская чистопородная

АА ; 23 5693±159| 4,70*0,07 268*8,3 3,39*0,04 193*5,6

AB 1 18 5835*2051 4,66±0,11 272*9,4 3,34*0,05 195*7,1

ВВ 9 5733*l43| 4,91*0,12 281*10,8 3,46*0,05 198*6,1

Ярославская, Михайловский тип

АА i 25 7830±179) 4,61±0,10 361*9,5* 3,25*0,02 255*6,2

AB 1 21 7б68±216| 4,7110,08 362*10,0 3,30*0,03 253*6,3

Bß j 4 7474±23ц 4,39*0,06 328+7,5* 3,21*0,07 240*5,1

Швицкая немецкая

АА 3 ^ 5161+81*1 3,94*0,01* 204*3,2 3,35*0,02 173*2,7

AB 7 46dÖ±ieei 4,04*0,04* 189*6,1 3,44*0,04 161*5,3

Швицкая отечественная

АА 12 3304*1 l3j 3,83*0,02 | 127*4,8 3,25*0,03 107*4,1

AB 9 3465*123| 3,81*0,02 132*4,1 3,20*0,03 111*3,2

ВВ 6 3486*145) 3,82±0,02 133*6,4 3,18*0,03 111*5,2

Сычевская

АА 18 2777*210| 3,91+0,04* 109*7,6 1 3,42*0,04* 95*6,7 ~ 77*17,2

AB 2 2176*466j 4,02±0,02* 87*19,2 ( 3,53*0,03*

Bß 5 3363*708| 3,94±0,06 132*29,6 3,42*0,04 115*25,3

Сычевскаях толштииская

АА 14 4034±294) 3,82+0,02 | 154*10,5 3,37*0,05 136*8,5

ВВ 7 4113*263) 3,92*0,09 | 161*9,1 3,39*0,06 139*7,6

* КО, 05

Анализ молочной продуктивности коров выявил разность по удою АА>АВ 481 кг (Р<0,05), содержанию жира АВ>АА на 0,1% (Р£0,05) в швицкой породе немецкой селекции и по содержанию жира АВ>АА на 0,11% (PS0.05), белка АВ>АА на 0,11% (Р£0,05) в сычевской породе. Среди коров Михайловского типа обнаружена разница по выходу молочного жира АА>ВВ на 33,3 кг (Р50,05), а по количеству молочного белка в швицкой породе немецкой селекции и ярославской Михайловского типа различия АА>АВ и АА>ВВ близки к достоверным.

3.10. Комплексные генотипы по нескольким генам и молочная продуктивность коров.

В таблице 9 приведены данные о молочной продуктивности в зависимости от сочетаний отдельных генотипов у коров по молочным белкам.

У коров ярославской породы различий по уровню удоя между группами выявлено не было. Следует отметить значительное снижение содержания жира в молоке коров этой группы, несущих аллель В гена LALBA. В группах коров Михайловского типа прослеживается четкая ассоциация генотипа LALBA с удоем. Так, в группе коров, имеющих генотип АА-ВВ-ААудой на 942 кг (+12,2%) молока выше по сравнению с животными с генотипом АА-АА-АА. Здесь также более высокое содержание жира и белка в молоке.

Молочная продуктивность коров ярославской породы с общими генотипами по генам СБЫЗ, Ш.ВА и СЭМ.

Генотип сжиш-сж п Удой за 305 Содержание дн., кг жира, % Выход молочного жира, кг Содержание белка, % Выход молочного белка, кг

Ярославская чистопородная

АА-АА-АА 6 | 58811371 5,0210,10* 295116,8 1 3,4210,09 201113,0

АА-АА-АВ 6 ' 5743+293 4,8110,14 276112,0 | 3,34+0,07 192110,1

АА-АВ-АА 4 5732+518 4,5210,13* 259118,1 3,2910,11 189ИЗД

АВ-АА-АВ 4 4 5791±408 4,7310,30^ 274130,6 3,ЗОЮ,15 191+16,3

АВ-АВ-АА 5451±470 4,42±0,09 | 241123,0 3,3910,11 185И9,2

ВВ-АА-АА 3 5764±642 4,9510,10 | 285118,2 , 3,5110,11 , 202±18,8

Михайловский тип

АА-АА-АА 7 7668±373 I 4,50+0,20 | 345+15,2* 1 3,23±0,05 248+9,0

АА-АВ-АА 6 76041215 1 4,83±0,28 367+18,8 3,2310,02 24617,0

АА-ВВ-АА 3 8610±417 4,7210,10 407+12,3« 3,2910,04 284117,0

АВ-АА-АА 4 7314±184 4,6210,16 338117,5 3,25+0,10 238112,6

АВ-АА-АВ 10 75701391 4,6410,13 351118,2 3,2910,05 249111,0

АВ-АВ-АА 3 87621641 4,5810,29 401124,3 3,2810,08 287+28,0

АВ-АВ-АВ 3 | 74451216 | 5,05±0,17 37618,9 | 3,3210,03 247110,0

*Р*0,05

Анализ молочной продуктивности коров показал наличие достоверной разности по содержанию жира АА-АА-АА>АА-АВ-АА в ярославской породе, а так же по количеству молочного жира АА-ВВ-АА>АА-АА-АА в Михайловском типе.

Таблица 10

Молочная продуктивность коров исследуемых популяций по генам Ш£А и СШ. _

Генотип 1А1ВА-С5М2 п 1 Удой за 305 ДЩКГ Содержаше жиравмо«же,% Выход молочного жира, кг Содержаниебелка в молоке, % Выход мопочно- 1 гобепка,кг

Швицкая немецкой селекции

АВ-АВ 6|4715+170* 4,0610,04* 191,616,7 3,4610,04* 16315,8

АВАА 3! 5161181* 3,9410,01* 203,513,2 3,3510,02* 17312,7

Швицкая отечественной селекции

АВ-АВ 7 34951155 3,8010,03 132,715,1 3,1910,04 11213,9

АВАА 8 34241133 3,85±0,02 13215,6 3,2610,04 11215,0

АВ-ВВ 5 34971178 3,82+0,03 13417,8 3,1810,03 | 11116,3

АААА 3 30181233 3,81+0,04 114,919,9 3,2410,03 | 9817,9

Сычевская

АААА 8 25961219 3,8810,04 10118,2 1 3,3910,03 8817,3

АА-ВВ 3 31531459 3,9710,06 125+18,5 3,4810,07 110115,6

АВАА 6 24721350 4,0010,07 ! 99112,2 | 3,5010,08 87110,6

Сычевская х голштинская

АААА 3 40301999 3,8210,08 154135,0 3,3410,13 135128,0

АВАА 5 39281620 3,8310,05 151122,4 3,3910,11 133117,9

АВ-ВВ 4 3898±303 3,8610,05 150110,3 3,3410,07 13018,0

ААВВ 2 43361423 4,0710,24 17616,9 3,4610,13 15019,3

*Р*0,05

Сравнивая между собой продуктивность животных швицкой породы с генотипами АВ-АВ и АВ-АА по генам ЬАЬВА и соответственно, можно отметить, что у ко-

ров, имеющих генотип АВ гена CSN2, содержание жира и белка в молоке было выше, в то время как удой, наоборот, ниже (табл.10). При сравнении между собой помесей сы-чевской х голштинской породы, имеющих генотипы АА-ВВ по генам LALBA и CSN2, следует отметить их преимущество по удою над животными с генотипом АА-АА. С другой стороны, между группами генотипов АВ-АА и АВ-ВВ подобной тенденции не наблюдается. Следует отметить также превосходство по содержанию жира и белка у коров этой популяции с генотипом АА-ВВ над животными с генотипом АА-АА.

Анализ молочной продуктивности показал наличие достоверной разности по удою АВ-АА>АВ-АВ на 446 кг (Р<0,05), содержанию жира у коров АВ-АВ>АВ-АА на 0,12% (Р£0,05) и белка АВ-АВ>АВ-АА на 0,11% (Р<0,05) в группе коров швицкой породы немецкой селекции, где в первой позиции указан генотип по гену LALBA, во второй noreHyCSN2.

3.11. Технологические свойства молока коров разных генотипов по каппа-казеину и бета-лактоглобулину.

Проведены два опыта с целью выявления зависимости технологических свойств молока от генотипов по генам, контролирующим состав белков молока. Молоко отбиралось от коров черно-пестрой породы ОПХ «Дубровицы».

В ходе первого опыта были сформированы четыре группы коров с генотипами по CSN3 и PLG: 1 группа - АА, ВВ; 2 - АА, АВ; 3 - АВ, ВВ; 4 - АВ, АВ. От них было отобрано молоко с целью определения химического состава и показателей качества, а также технологических свойств молока и молочных продуктов.

По содержанию белка в молоке коровы четвертой группы превосходили аналогов из 1-, 2- и 3-й групп на 0,44,0,14 и 0,39%, соответственно. По содержанию сухого вещества и COMO в молоке лучшие показатели у коров второй группы. По технологическим свойствам молоко, полученное от животных 1-й группы, отличалось меньшим количеством соматических клеток, а по термостабильности было отнесено к 1 группе.

Органолептическая оценка выявила некоторые различия в выработанных продуктах. Цельное молоко 3-й группы получило самый низкий балл. Дегустация творога и сливочного масла выявила некоторые различия во вкусе, запахе и консистенции этих продуктов. Сливки, приготовленные из молока коров 1-й группы, получили наивысшую оценку, а низшую - сливки из молока 4-й группы. Творог от животных 1-й группы получил также высшую оценку и оказался предпочтительнее, чем по другим группам. Он отличался лучшей консистенцией, однако вкус и запах были лучше у творога из молока коров 3-й группы. Комиссия признала лучшим по вкусу и запаху масло, выработанное из молока коров 1-й группы. В то же время по консистенции получило более высокую оценку масло 3-й и 4-й групп.

На изготовление 1 кг творога из молока животных 4-й группы было израсходовано 8.41 кг молока, что меньше, чем в остальных группах. Молоко коров 4-й группы наиболее оптимально подходило для изготовления нежирного творога, так как в нем содержалось большее количество сухих веществ.

Максимальный выход сливок получен из молока коров 3-й группы, что превышает на 11,1, 7,5 и 4,9% вес продукции 1-, 2- и 4-й групп, соответственно. Содержание жира в сливках по 3-й группе составило всего 40%, что на 10% меньше, чем у коров 1-и 2-й фупп, но на 10% больше, чем у 4-й группы.

Время сбивания масла и количество пахты из сливок 3-й группы оказались наименьшими. Оно отличалось повышенной жирностью, а масляное зерно было крупным. В пахту по 3-й группе отошло меньшее количество жира, нежели в других группах. А наибольшие потери жира 1,9% отмечены во 2-й группе.

Наименьшим содержанием жира и большим количеством пахты, при выработке масла характеризовалось молоко 4-й группы, но из молока этой группы получили наибольшее количество творога нежирного. У коров черно-пестрой наиболее предпочтительным вариантом генотипов с точки зрения маслоделия оказался каппа-казеин АВ и бета-лактоглобулина ВВ третья группа, а для изготовления творога нежирного вариант каппа-казеин АВ и бета-лакгоглобулин АВ четвертая группа.

3.12. Технологические свойства молока коров с разными генотипами по каппа-казеину и бета-казеину.

В ходе второго опыта были сформированы пять групп животных с генотипами по генам СЭМЗ и СЭ^: 1 группа - АВ, АА; 2 - АВ, ВВ; 3 - АА, АА; 4 - АА, АВ; 5 - АА, ВВ. От этих животных было отобрано молоко с целью определения его химического состава и установления качества и технологических свойств, а также молочных продуктов, изготовленных из него.

Наиболее жирное молоко оказалось у животных 1-й и 5-й групп (генотипы АВ, АА и АА, ВВ по генам СБМЗ и СБ^, соответственно). Содержание жира в молоке коров этих групп превышало показатели других групп на 0,2-0,6%. По содержанию белка в молоке более высокие показатели на 0,1% в 4-ой и 5-ой группах по сравнению с другими. Наибольшее количество сухого вещества выделено из молока коров 5-й группы, наименьшее - в 4-й группе.

Органолептическая оценка выявила некоторые различия в выработанных продуктах. Молоко коров 3-й группы получило самый высокий балл. Дегустация творога и сливочного масла выявила некоторые различия во вкусе, запахе и консистенции этих продуктов. Сливки, приготовленные из молока 1-й и 3-й групп, получили наивысшую оценку, а сливки 4 группы получили самую низкую оценку. Творог, выработанный из молока животных 3-й группы, получил также оценку выше, чем творог других групп. Он отличался лучшей консистенцией, имел предпочтительные вкус и запах. Сливочное масло 4-й группы признано лучшим (19,75 баллов).

Наибольшее количество сливок получено из молока коров 5-й группы. В этой же группе количество обрата оказалось наименьшим. Наибольший отход жира в обрат отмечен в молоке коров 1- и 2-й групп - 0,1%, что на 0,05% превышает этот показатель в 4- и 5-й группах, и на 0,09% - 3-й группы. В 5-й группе на приготовление масла потребовалось 10 минут, что быстрее, чем при сбивании сливок из молока других групп. Необходимо также отметить, что в этой группе масляное зерно было крупнее чем по другим группам, а также самая высокая степень использования жира. В пахту по этой группе отошло меньше всего жира 1,2%, но и получено меньше сливочного масла по сравнению с другими группами. Наименьшее количество молока для приготовления 1 килограмма творога потребовалось из образцов третьей и пятой групп. Таким образом, выход творога в группах 3 и 5 оказался выше.

Найденные различия по органолептической оценке и технологическим свойствам молока и молочной продукции между группами, сформированными в зависимости

4. ВЫВОДЫ

1. Усовершенствована методика определения аллельного полиморфизма гена аль-фа-лактальбумина крупного рогатого скота, позволяющая диагностировать с помощью ПЦР-ПДРФ анализа наиболее часто встречающиеся варианты А и В. Усовершенствованная методика позволяет определять полиморфизм гена ЦМВА с использованием электрофореза в агарозном геле. Методика экспериментально апробирована на 1483 образцах ДНК крупного рогатого скота, отобранных в 16 популяциях 10 пород.

2. Разработана методика определения аллельного полиморфизма гена бета-казеина крупного рогатого скота, позволяющая диагностировать с помощью ПЦР-ПДРФ анализа варианты А, В и АЗ. При разработке методики были использованы замены в праймерах, дающие возможность образовывать сайты рестрикции и использовать электрофорез в агарозном геле. Методика была апробирована на 1483 образцах ДНК крупного рогатого скота 16 популяций 10 пород.

3. Определены генотипы крупного рогатого скота 5 пород по гену каппа-казеина. Наиболее полиморфными по гену СЭИЗ оказались популяции животных красной горба-товской, ярославской пород и Михайловского типа ярославской породы, в которых выявлено 5 из 6 диагностируемых аллелей и, соответственно, 9, 8 и 5 различных генотипов.

Коровы красной горбатовской породы с генотипом АВ превышали по содержанию жира сверстниц с генотипом АА на 0,12% (Р<0,05), а по выходу молочного жира имели превосходство коровы с генотипом ВВ на 40 кг (Р<0,05) над генотипом ВЕ. По содержанию белка коровы ярославской породы с ВВ превышали коров с АВ и АА соответственно на 0,16% и 0,12% (Р£0,05).

4. Определены генотипы коров по бета-лактоглобулину в 3 стадах черно-пестрой породы. Выявлено наличие двух из четырех диагностируемых аллелей гена бета-лактоглобулина А и В. Частота встречаемости аллеля А в зависимости от популяции варьировала от 33,7 до 46,0%. Разница между генотипами по содержанию белка АВ>ВВ на 0,11% (Р<0,05).

5. По вариантам 1А1.ВА наибольшая частота встречаемости аллеля А выявлена у животных бестужевской (82,6-93,8%), красной горбатовской (84,8%) и популяции 3 черно-пестрой (82,5%) пород. Наименьшей частотой встречаемости аллеля А характеризовались животные швицкой (48,3-50,0%) и популяции 2 черно-пестрой (46,0%) пород. В большинстве исследованных популяций доля гомозиготного генотипа АА была выше по сравнению с генотипом ВВ. Максимальная частота данного генотипа выявлена у помесных коров бестужевская X голштинская черно-пестрая порода (89,6%). Наименьшая доля генотипа АА выявлена у коров популяции 2 черно-пестрой (12,0%) и швицкой (10,3-15,8%) пород. У животных швицкой породы отечественной селекции была отмечена разница между генотипами АВ и ВВ по содержанию жира 0,03% (Р50,05), у чистопородных коров ярославской породы и коров Михайловского типа - по выходу молочного жира за лактацию между генотипами АА>АВ на 25,9 кг (Р£0,05), ВВ>АА на 40,1 кг (Р£0,05). Коровы ярославской породы с генотипом ВВ имели более высокое содержание белка в молоке по сравнению с коровами, имеющими генотипы АА на 0,13% (Р50,05) и АВ на 0,21% (Р50,05).

6. Исследование коров по показало, что частота аллеля А варьировала от 56,8% у коров голштинской черно-пестрой породы до 98,4% у коров айрширской породы. Доля гомозиготных генотипов АА во всех популяциях была выше по сравнению с

частотой встречаемости генотипа ВВ и варьировала от 30,0% в швицкой породе немецкой селекции до 96,8% в айрширской. Коровы швицкой породы немецкой селекции с генотипом АА превосходили животных с генотипом АВ по удою на 481 кг, (Р<0,05). По содержанию жира в молоке коровы швицкой немецкой селекции и сы-чевской пород, имеющие генотип АВ, превосходили своих сверстниц с генотипом АА, соответственно, на 0,1%, (Р£0,05) и 0,11%, (Р<0,05). По количеству молочного жира коровы Михайловского типа с генотипом АА превышали сверстниц с генотипом ВВ на 33,3 кг (Р<0,05). В сычевской породе коровы с генотипом АВ имели превосходство над генотипом АА по содержанию белка на 0,11%, (Р£0,05).

7. Анализ молочной продуктивности коров с генотипами по нескольким генам белков молока показал наличие разности по содержанию жира в группе чистопородных ярославских коров с генотипами по С5МЗ, 1_А1_ВА, С5№ АА-АА-АА>АА-АВ-АА на 0,5% (Р<0,05), а так же по количеству молочного жира АА-ВВ-АА>АА-АА-АА на 62,3 кг (Р£0,05) среди коров Михайловского типа. В стаде коров швицкой породы немецкой селекции выявлена статистически достоверная разница по удою по генам 1А1ВА, АВ-АА>АВ-АВ на 446 кг (Р£0,05), содержанию жира АВ-АВ>АВ-АА на 0,12% (Р<0,05) и белка АВ-АВ>АВ-АА на 0,11% (Р<0,05).

8. При изучении технологических свойств молока коров черно-пестрой породы с различными комплексными генотипами было выявлено, что у коров с генотипом АВ, АВ по и РЮ содержание белка в молоке и выход творога из него был выше, чем в других группах на 0,5-1%. Наибольший выход сливочного масла отмечался в группе животных с генотипом АА, ВВ, при этом по времени сбивания сливок, характеру масляного зерна и количеству пахты наиболее предпочтительным являлось молоко коров с генотипом АВ, ВВ. При изготовлении масла из молока коров с генотипом АА, ВВ по СБМЗ и требовалось меньшее время, а его выход был наибольшим у коров с генотипом АВ, ВВ. Молоко коров с генотипом АА, АА выходу творога наиболее выгодно при производстве данного продукта.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Аабораториям, занимающимся ДНК-диагностикой генетического полиморфизма рекомендуем использовать разработанные нами на основе ПЦР-ПДРФ анализа тест-системы для определения генотипов по генам белков молока альфа-лактальбумину и бета-казеину.

Головному и Региональному центрам по генетической экспертизе племенной продукции рекомендовать приступить к мониторингу региональных популяций молочных пород крупного рогатого скота по генам белков молока.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зиновьева Н.А., Гладырь ЕЛ, Фролкин Д.А., Арсиенко Р.Ю., Зыкунов Н.П., Шмаков Ю.И., Коспонина О.В., Карамчакова О.Н., Эрнст Л.К. Применение ДНК-диагностики для анализа генов-кандидатов локусов количественных признаков сельскохозяйственных животных / Научные труды ВИЖа. -Дубровицы. -2001. -Вып.61. -С.218-224.

2. Коспонина О.В., Гладырь ЕЛ, Зиновьева НЛ Полиморфизм генов белков молока у коров черно-пестрой породы / 2-я Междунар. науч. конф. «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных» // ВИЖ. -Дубровицы. - 2002.-С.140-141.

3. Гладырь Е.А., Костюнина О.В., Каграманова A.C. Диагностика полиморфизма гена альфа-лакгальбумина крупного рогатого скота / 2-я Междунар. науч. конф. «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных» // ВИЖ.- Дубровицы. -2002. -С.109-110.

4. костюнина О.В. Молекулярная диагностика генетического полиморфизма белков молока / Материалы междунар. научно-практич. конф. по проблеме: «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» // РАМЖ. -Быковка. -2002. - Вып. 8. -С.57-58.

5. Костюнина О.В., Филимонов А.Ю. Влияние полиморфизма генов молочных белков на технологические свойства молока / Материалы междунар. научно-лрактич. конф. по проблеме: «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» // РАМЖ - Быковка. -2003. -Вып. 9. -С.44-45,

6. Костюнина О.В., Гладырь Е.А. Зиновьева НА Разработка аналитической модели диагностики 4-ех аллельных вариантов гена бета-казеина КРС с использованием метода ПЦР-ПДРФ. Международная научная конференция «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных» ВИЖ 18-19 ноября. -Дубровицы. - 2003. - С.121-123.

7. Костюнина О.В., Максименко В.Ф., Стрекозов Н.И., Зиновьева H.A. Полиморфизм генов белков молока у чистопородных коров и коров Михайловского типа ярославской породы / Международная научно-практическая конференция «Прошлое, настоящее и будущее зоотехнической науки». -ВИЖ. - 2004. -С.165-169.

8. Костюнина О.В., Павлюченков В.М., Стрекозов Н.И., Зиновьева H.A. Генотипиро-вание коров швицкой и сычевской пород по альфа-лактальбумину и бета-казеину / Материалы 4-й Международной научная конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных». -ВИЖ. -Дубровицы. - 2004. -С.54-59.

9. КостюнинаО.В., Хрипякова E.H., Стрекозов Н.И., Зиновьева H.A. Технологические свойства молоха у коров разных генотипов по каппа-казеину, бета-лактоглобулину и альфа-лактальбумину / Материалы 4-й Междунар. науч. конф. «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных» ВИЖ. -Дубровицы. -2004. -С.60-67.

10. Зиновьева H.A., Гладырь Е.А., Костюнина О.В. ДНК-диагностика полиморфизма генов - белков молока крупного рогатого скота / Школа-практикум: «Методы исследований в биотехнологии сельскохозяйственных животных». -ВИЖ. -2004.-С.7-22.

Издательство РУЦ ЭЬТЖ 142132, Московская обл , Подольский р-н, п Дубровицы Тел (8-27)65-14-24 (8-27)65-14-07

Сдано в набор 5 01 05 Подписано в печать 6 01 05

Заказ № 1 Уч-шд л 1,1 Тираж 100 экз ___Формат 60x84/16__

РНБ Русский фонд

2006-4 I 2703

Э--757

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Костюнина, Ольга Васильевна

Краткий словарь

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11 Ф 1.1. Полиморфизм белков у животных и его генетическая природа

1.2. Состав и физико-химические свойства молока коров

1.3. Современная номенклатура и биологические функции белков молока. Молекулярно-биохимический полиморфизм белков молока

1.3.1. Казеиновая фракция

1.3.2. Сывороточные белки

1.4. Хозяйственно-полезные признаки и технологические свойства молока в зависимости от полиморфных систем белков молока

1.5. Селекция с использованием генетических маркеров

1.6. Метод ПЦР как основной метод анализа генетического полиморфизма белков молока

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 38 ^ 2.1. Материалы

2.1.1. Животные

2.1.2. Оборудование

2.1.3. Реактивы 40 2.2. Методика исследований

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Создание банка ДНК крупного рогатого скота различных пород.

3.2. Разработка и усовершенствование методик диагностики полиморфизма генов альфа-лактальбумина и бета-казеина крупного рогатого скота.

3.2.1. Определение вариантов гена альфа-лактальбумина

3.2.2. Определение вариантов гена бета-казеина

3.3. Популяционно-генетические исследования крупного рогатого скота различных пород по вариантам генов белков молока

3.3.1. Генотипирование животных по вариантам каппа-казеина

3.3.2. Генотипирование животных по вариантам бета-лактоглобулина

3.3.3. Генотипирование животных по вариантам альфа-лактальбумина

3.3.4. Генотипирование животных по вариантам бета-казеина

3.4. Исследование связи полиморфизма генов белков молока с молочной продуктивностью коров

3.4.1. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по каппа-казеину

3.4.2. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по бета-лактоглобулину

3.4.3. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по альфа-лактальбумину

3.4.4. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по бета-казеину

3.4.5. Комплексное влияние генотипов нескольких генов на молочную продуктивность

3.5. Качество, технологические свойства молока и молочных продуктов от коров черно-пестрой породы

3.5.1. Технологические свойства молока у коров разных генотипов по каппа-казеину и бета-лактоглобулину

3.5.2. Технологические свойства молока коров с разными генотипами по каппа-казеину и бета-казеину

4. ОБСУЖДЕНИЕ

5. ВЫВОДЫ

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ПРИЛОЖЕНИЯ

Краткий словарь Амплификатор - прибор, предназначенный для проведения ПЦР asCn - альфа- S казеин AL - альбумин сыворотки крови PLG - бета-лактоглобулин CSN1S1, asiCn - альфа S1-казеин ^ CSN2, рСп - бета-казеин

CSN3, кСп - каппа-казеин Ig - иммуноглобулин LALBA, aLA - альфа-лактальбумин Г/2 =0,2 — скорость центрифугирования ПЦР - полимеразная цепная реакция ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов п.о. - пар оснований

Праймеры - короткие последовательности нуклеотидов (чаще 20-25) комплементарные концевым участкам изучаемого гена kb - килобейтс

Рр - протеозопептонная фракция

SSCP - полиморфизм структуры одноцепочечной ДНК

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярная диагностика генетического полиморфизма основных молочных белков и их связь с технологическими свойствами молока"

Актуальность проблемы

В настоящее время основной целью подавляющего большинства отечественных научных разработок является поиск путей к обеспечению населения России животноводческими продуктами, не прибегая к их импорту.

В настоящее время повышение эффективности селекции животных все больше связывают с работами в области ДНК-технологий, при этом одним из основных направлений является поиск и анализ генов, позволяющих маркировать локусы количественных признаков и вести отбор с помощью маркеров («маркер-зависимая селекция»).

Как известно, на формирование продуктивности сельскохозяйственных животных оказывают влияние, как генетические, так и не генетические (внешние) факторы. В этой связи, при традиционном отборе животных по фенотипическому проявлению признаков оценка истинного генетического потенциала животных может быть занижена.

С древних времен люди используют молоко некоторых сельскохозяйственных животных в пищу. Его потребляют, как в натуральном виде, так и переработанном в различные продукты. Структура потребления молока и молочных продуктов связана с социальными, экономическими, географическими и другими параметрами. Увеличивается количество молока, перерабатываемое на молочные продукты, в том числе на белковомолочные (сыры и творог) (Данкверт С.А., Дунин И.М., 2002).

При производстве того или иного продукта молоко должно отвечать определенным технологическим требованиям. Так, при производстве сыров, особенно его твердых сортов, большое внимание уделяется составу молока. Содержание казеина в этом молоке должно быть не менее 75%, а таких фракций, как asCn, (альфа s-казеин), рСп (бета-казеин) и кСп (каппа-казеин) -91% от общего его количества. Молоко должно хорошо свертываться под действием сычужного фермента, быть термостабильным, обладать хорошими синергетическими свойствами и высоким выходом конечной продукции.

В селекционной работе с крупным рогатым скотом характеристика молока проводится в основном по удою, жиру и общему содержанию белка. Однако полиморфизму белков молока пока не уделяется должного внимания. Вместе с тем, состав молока является основным при производстве сыров и творога. Установлена тесная взаимосвязь между технологическими свойствами и биохимическим полиморфизмом белков молока (Иолчиев Б.С. и др., 1996; Попов Н.А. и др., 2003). Например, содержание общего белка в коровьем молоке, его свертываемость и синергетические свойства взаимосвязаны с генотипом животного по локусу каппа-казеина (Иолчиев Б.С. и др., 1996; Гладырь Е.А., Зиновьева Н.А., 2002; Калашникова JI.A., 2003).

В связи с возрастающими требованиями к качеству молока и молочной продукции, возникает необходимость использования в селекции генетических маркеров, связанных с признаками молочной продуктивности. В сложившейся ситуации требуется изменение в методах оценки признаков селекции животных. К классическим методам селекции животных необходимо добавить новые подходы, связанные с достижениями генетики и биотехнологии. Одним из методов определения полиморфизма систем белков молока является ПЦР-ПДРФ анализ, который отличает высокая чувствительность, быстрота, точность и легкость в исполнении.

Научная новизна.

Модифицирован метод ПЦР-ПДРФ для выявления аллелей и генотипов крупного рогатого скота по генам альфа-лактальбумина и бета-казеина. Проведена апробация метода при определении частот их встречаемости среди поголовья отдельных популяций черно-пестрой, ярославской, симментальской, красной горбатовской, бестужевской, сычевской, костромской, айрширской, голштинской черно-пестрой и швицкой пород.

Цели и задачи исследования.

Для достижения этой цели в наших исследованиях были поставлены следующие задачи.

Задачи работы:

2. Пополнить банк ДНК крупного рогатого скота различных пород и апробировать на нем модифицированные методики определения генетического полиморфизма беков альфа-лактальбумина и бета-казеина.

4. Изучить молочную продуктивность коров с различными вариантами исследуемых генов.

Практическая значимость работы.

В качестве возможных генетических маркеров, представляющих практический интерес для скотоводства, рассмотрены гены альфа-лактальбумина и бета-казеина, предложены усовершенствованные методики выявления их аллельных вариантов. Рассчитаны частоты встречаемости аллелей и генотипов бета-казеина, альфа-лактальбумина, каппа-казеина и бета-лактоглобулина у крупного рогатого скота отдельных популяций. Изучена молочная продуктивность и технологические свойства молока коров с различными генотипами исследуемых генов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Усовершенствованные тест-системы анализа полиморфизма генов бета-казеина и альфа-лактальбумина.

2. Характеристика генетической структуры популяций крупного рогатого скота по генам каппа-казеина, бета-лактоглобулина, бета-казеина и альфа-лактальбумина.

3. Связи вариантов исследуемых генов с признаками молочной продуктивности коров и технологическими качествами молока.

Апробация работы.

Результаты исследований были доложены:

• на конференциях аспирантов и молодых ученых, ВИЖ, 2002 г.; 2003 г.;

• на международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», ВИЖ, 2003 г.;

• на годовых научных отчетах отдела биотехнологии ВИЖ, 2002 г.; 2003 г.; 2004 г.

• в школе-практикуме «Методы исследований в биотехнологии сельскохозяйственных животных», ВИЖ, 2004г.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ.

Структура и объем работы.

Диссертационная работа изложена на 127 страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы. Работа включает 39 таблиц и 13 рисунков, 1 приложение. Список литературы включает 172 источника, в том числе 90 источников на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Костюнина, Ольга Васильевна

ВЫВОДЫ

1. Усовершенствована методика определения аллельного полиморфизма гена альфа-лактальбумина крупного рогатого скота, позволяющая диагностировать с помощью ПЦР-ПДРФ анализа наиболее часто встречающиеся варианты А и В. Усовершенствованная методика позволяет определять полиморфизм гена LALBA с использованием электрофореза в агарозном геле. Методика экспериментально апробирована на ДНК крупного рогатого скота \(Щ образца, отобранных от 16 популяций 10 пород.

2. Разработана методика определения аллельного полиморфизма гена бета-казеина крупного рогатого скота, позволяющая диагностировать с помощью ПЦР-ПДРФ анализа варианты А, В и A3. При разработке методики были использованы замены в праймерах, дающие возможность образовывать сайты рестрикции и использовать электрофорез в агарозном геле. Методика была апробирована на 10J образцах ДНК крупного рогатого скота 16 популяций 10 пород.

3. Определены генотипы крупного рогатого скота 5 пород по каппа-казеину. Наиболее полиморфными по гену CSN3 оказались популяции животных красной горбатовской, ярославской пород и Михайловского типа ярославской породы, в которых выявлено 5 из 6 диагностируемых аллелей и, соответственно, 9, 8 и 5 различных генотипов. Коровы красной горбатовской породы с генотипом АВ превышали по содержанию жира сверстниц с генотипом АА на 0,12% (Р<0,05), а по выходу молочного жира имели превосходство коровы с генотипом ВВ на 40 кг (Р<0,05) над генотипом BE. По содержанию белка коровы ярославской породы с ВВ превышали коров с АВ и АА соответственно на 0,16% и 0,12% (Р<0,05).

5. По вариантам гена LALBA наибольшая частота встречаемости аллеля А выявлена у животных бестужевской (82,6-93,8%), красной горбатовской (84,8%) пород и популяции 3 черно-пестрой (82,5%) пород. Наименьшей частотой встречаемости аллеля А характеризовались животные швицкой (48,3-50,0%) породы и популяции 2 черно-пестрой породы (46,0%). В большинстве исследованных пород доля гомозиготного генотипа АА была выше по сравнению с генотипом ВВ. Максимальная частота данного генотипа выявлена у помесных коров бестужевская X голштинская порода (89,6%). Наименьшая доля генотипа АА выявлена у коров популяции 2 черно-пестрой (12,0%) и швицкой (10,3-15,8%) пород. У животных швицкой породы отечественной селекции была отмечена статистически достоверная разница между генотипами АВ и ВВ по содержанию жира 0,03% (Р<0,05), у чистопородных коров ярославской породы и коров Михайловского типа - по выходу молочного жира за лактацию между генотипами АА>АВ на 25,9 кг (Р<0,05), ВВ>АА на 40,1 кг (Р<0,05). Коровы ярославской породы с генотипом ВВ имели более высокое содержание белка в молоке по сравнению с коровами, имеющими генотипы АА на 0,13% (Р<0,05) и АВ на 0,21% (Р<0,05).

6. Исследование коров по CSN2 показало, что частота аллеля А варьировала от 56,8% у коров голштинской черно-пестрой породы до 98,4% у коров айрширской породы. Доля гомозиготных генотипов АА во всех породах была выше по сравнению с частотой встречаемости генотипа ВВ и варьировала от 30,0% в швицкой породе немецкой селекции до 96,8% в айрширской. Коровы швицкой породы немецкой селекции с генотипом АА превосходили животных с генотипом АВ по удою на 481 кг (Р<0,05). По содержанию жира в молоке коровы швицкой немецкой селекции и сычевской пород, имеющие генотип АВ, превосходили своих сверстниц с генотипом АА, соответственно, на 0,1%, (Р<0,05) и 0,11%, (Р<0,05). По количеству молочного жира коровы Михайловского типа с генотипом АА превышали сверстниц с генотипом ВВ на 33,3 кг (Р<0,05). В сычевской породе коровы с генотипом АВ имели превосходство над генотипом АА по содержанию белка на 0,11%, (Р<0,05).

7. Анализ молочной продуктивности коров с генотипами по нескольким генам белков молока показал наличие разности по содержанию жира в группе чистопородных ярославских коров с генотипами по CSN3, LALBA, CSN2 АА-АА-АА>АА-АВ-АА на 0,5% (Р<0,05), а так же по количеству молочного жира АА-ВВ-АА>АА-АА-АА на 62,3 кг (Р<0,05) среди коров Михайловского типа. В стаде коров швицкой породы немецкой селекции выявлена статистически достоверная разница по удою по генам LALBA, CSN2 АВ-АА>АВ-АВ на 446 кг (Р<0,05), содержанию жира АВ-АВ>АВ~АА на 0,12% (Р<0,05) и белка АВ-АВ>АВ-АА на 0,11% (Р<0,05).

8. При изучении технологических свойств молока коров черно-пестрой породы с различными комплексными генотипами было выявлено, что у коров с генотипом АВ, АВ по CSN3 и (3LG содержание белка в молоке и выход творога из него был выше, чем в других группах на 0,5-1%. Наибольший выход сливочного масла отмечался в группе животных с генотипом АА, ВВ, при этом по времени сбивания сливок, характеру масляного зерна и количеству пахты наиболее предпочтительным являлось молоко коров с генотипом АВ, ВВ. При изготовлении масла из молока коров с генотипом АА, ВВ по CSN3 и CSN2 требовалось меньшее время, а его выход был наибольшим у коров с генотипом АВ, ВВ. Молоко коров с генотипом АА, АА по выходу творога наиболее выгодно при производстве данного продукта.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

• Лабораториям, занимающимся ДНК-диагностикой генетического полиморфизма рекомендуем использовать разработанные нами на основе ПЦР-ПДРФ анализа тест-системы для определения генотипов по генам белков молока альфа-лактальбумину и бета-казеину.

• Головному и Региональному центрам по генетической экспертизе племенной продукции рекомендовать приступить к мониторингу региональных популяций молочных пород крупного рогатого скота по генам белков молока.

Ill

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Костюнина, Ольга Васильевна, Дубровицы

1. Арзуманян Е.А., Бегучев А.П., Соловьев А.А., Фандеев Б.В. Скотоводство. -М.: Колос. 1978. -399 с.

2. Бойланд Г. Технология производства молочных продуктов.-М.: Тетра Пол АО, 2003.-440 с.

3. Вартапетян А.Б. Полимеразная цепная реакция // Молекулярная биология.-М.: 1991 .-Том 25.-№4.-С.926-936.

4. Брем Г., Кройслих X., Штранцингер Г. Экспериментальная генетика в животноводстве //М.-РАСХН.-1995.-326 с.

5. Генетика. // Меркурьева Е.К., Абрамова З.В., Бакай А.В., Кочиш И.И. -М.: Агропромиздат. -1991.-444с.

6. Ф 12. Генетика полиморфных белков животных: Сб. науч. тр./ Куйбыш.госуд. пед. ин-т. им. В.В. Куйбышева. Куйбышев.: КГПИ. -1977.-56 с.

7. Генетические, селекционные, биохимические и физиологические основы изучения белков молока и крови крупного рогатого скота: Библиограф, указ./ Ред. J1.C. Жебровский.- Л.: ЛГУ. -1975.-С.203.

8. Георгиевский В.И. Физиология сельскохозяйственных животных // М.: Агропромиздат.-1990.-510 с.

9. Гладырь Е.А. ДНК-диагностика вариантов генов каппа-казеина и бета-^ лактоглобулина у крупного рогатого скота // Автореф. дис. канд. биол.наук / Дубровицы. -2001. -20 с.

10. Гладырь Е.А., Зиновьева Н.А. Диагностика аллельного полиморфизма основных генов белков молока КРС (каппа-казеина, бета-лактоглобулина, альфа-лактальбумина) // Методы исследований в биотехнологии с/х животных.- ВИЖ., Дубровицы.-2002.-С. 18-25.

11. Гладырь Е.А., Костюнина О.В., Зиновьева Н.А. Диагностика полиморфизма гена альфа-лактальбумина крупного рогатого скота // Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных. -Дубровицы. -2002. -с. 109-110.

12. Голиков А.Н. Баранова Н.У., Кожебеков З.К. Физиология сельскохозяйственных животных // М.: Агропромиздат.-1991.-432 с.

13. Горбатова К.К. Химия и физика белков молока.- М .: Колос. -1993.-192с.

14. ГОСТ 37-91 «Масло коровье. ТУ»

15. ГОСТ 13277-79 «Молоко пастеризованное»

16. ГОСТ Р52054-2003 «Молоко натуральное коровье сырое»

17. ГОСТ 3622-68 «Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка их к испытанию».

18. ГОСТ 26809-86 «Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка их к испытанию».

19. Гроклод Ф. Полиморфизм белков молока, некоторые биохимические и генетические аспекты // Материалы XXVI Международной конференции по группам крови и биохимическому полиморфизму животных. -Л. -1979. -Т.1 -С.55-94.

20. Данкверт А.Г., Данкверт С.А. История племенного животноводства России. -М.: Арбат-информ. -2004. -328с.

21. Данкверт С.А., Дунин И.М. Производство и мировой рынок молока в начале XXI века. -М.: Лесные Поляны. -2002. -72с.

22. Диагностика различных аллельных вариантов ДНК «single tube» методом аллелеспецифической полимеразной цепной реакции // Зиновьева Н.А., Васичек Д., Айгнер Б., Попов А.Н., Брем Г. //Биотехнология.-1996.-№6- с. 45-49.

23. Ежегодник по племенной работе в молочном скотоводстве в хозяйствах Российской Федерации (2002 год). -М.: ГНУ ВНИИплем. -2003. -300с.

24. Жебровский Л.С. Селекционно-генетические основы белкового состава молока коров.- М .: Колос. -1973.- 248 с.

25. Жебровский Л.С., Бабуков А.В., Митютько В.Е. Связь полиморфных белков с продутивностью черно-пестрого скота // Животноводство. -1977. -№7. -С.25-27.

26. Журавель Е.В., Глазко В.И. О полиморфизме по локусу к-казеина молока У различных пород крупного рогатого скота //Сельскохозяйственная биология.-1999.- N2.-C. 120-124.

27. Зиновьева Н.А. Подготовка проб, выделение ДНК и оптимизация ПЦР // Методы исследований в биотехологии с/х животных. -ВИЖ.-2002.-С.33-45.

28. Иванченко Е.В., Глазко В.И. PCR-RFLP хозяйственно-ценных генов у крупного рогатого скота Украины и России // Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных. Материалы конференции. -Дубровицы. -2002. -133-134.

29. Инихов Г.С. Химия и физика белков молока. -М.: Пищепромиздат. -1941.-300 с.

30. Иолчиев Б.С. К методике качественного и количественного определения фракций белков // Новое в селекции сельскохозяйственных животных: Сб. научн. Трудов / ВИЖ. -Вып.56 -Дубровицы, 1993. -С.122-128.,

31. Иолчиев Б.С., Еремина М. А. Использование полиморфных систем белков молока в селекции //Молочное и мясное скотоводство.-1996.-N2.-C.20-22.

32. Иолчиев Б.С., Сельцов В.И. Взаимосвязь системы каппа-казеина смолочной продуктивностью коров // Зоотехния.- 1999.-N6.-C.4-5.

33. Исследование белков молока. Сб. науч. тр. / Ред. П.Ф. Дьяченко.- М.: Пищепромиздат, 1959.- 85 с.

34. Изучение полиморфизма гена каппа-казеина у некоторых пород крупного рогатого скота/Журавель Е.В., Кириленко С.Д., Костецкий И.Е. и др. // Молекуляр.-генет.маркеры животных.-Киев. -1996.-С.8.

35. Калашникова JI.A. Возможности использования ДНК-маркеровпродуктивных качеств животных в практической селекционной работе // Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных. -Дубровицы. -2003. С.33-39.

36. Кравченко Н.А. Разведение сельскохозяйственных животных. -М.: Колос, 1973. -486с.

37. Кривенцов Ю.М., Щербакова Г.В. Молочная продуктивность, физико-химический состав и технологическое свойство молока черно-пестрого скота различных генотипов // Вестник сельскохозяйственной науки.-1991.-С. 100-104.

38. Кугенев П.В., Барабанщиков Н.В. Практикум по молочному делу.-М.: Агропромиздат.-1998.-223 с.

39. Кузнецов В.М. Модификационный метод оценки быков по качеству #' потомства // Бюл. Науч. Тр. ВНИИРГЖ. 1982 Вып. 58. -С. 11 -13.

40. Кэмпбелл Д.Р., Маршалл Р.Т. Производство молока.-М.: Колос, 1980.670 с.

41. Маринчук Г.Е. Влияние отбора по молочной продуктивности на распределение типов бета-лактоглобулина в популяциях коров красной степной породы // Генетика, разведение и содержание с.-х. животных.1. Киев.-1978.-С.59-81.

42. Маркин Ю.В. Физиологическое обоснование методов повышения энергетической и протеиновой обеспеченности лактирующих коров и молодняка крупного рогатого скота // Автореф. дис. докт. биол. наук. -1997. -38с.

43. Марсия Э., Чимера Д. Идентификация личности: анализ полиморфизма длины амплифицированных фрагментов. // Методы. Молекулярная клиническая диагностика. -М.: Мир.- 1999.-С.508-531.

44. Меркурьева Е.К. Генетические основы селекции в скотоводстве.-М.: Колос, 1977.-238с.

45. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве / Н.А. Зиновьев., А.Н. Попов, JI.K. Эрнст и др. Дубровицы: ВИЖ,1998.-36 с.

46. Овчинников А.И., Горбатова К.К. Биохимия молока и молочных продуктов. -JI. -1974. -259 с.

47. Петухов В.Л., Эрнст Л.К., Гудилин И.И. Генетические основы селекции животных. -М.: Агропромиздат. -1989.- 448 с.

48. Плохинский Н.А. Биометрия. М.: Издательство Московского университета. -1970. -366 с.

49. Полиморфизм белков и его значение в генетике и селекции животных /

50. Х.Ф. Кушнер, Л.А. Зубарева, В.Е. Гинговт, И.Е. Новик.- М.-Агропромиздат, 1968.-128с.

51. Попов Н.А., Езерский В.А.„ Хрипякова Е.Н., Нетеча З.А. Полиморфизм белков, технологические и диетические качества молока коров черно-пестрой породы // Материалы научно-практической конференции.

52. Быково. -РАМЖ, 2003. с. 64-66.

53. Популяционно-генетический анализ белков молока у различных видов сельскохозяйственных животных // Иолчиев Б.Н., Стрекозов Н.И., Марзанов Н.С., Зиновьева Н.А. // Методические рекомендации, ВИЖ-2001.-c.28.

54. Сапунов А.Г., Подшибякин А.Е., Чеботарев И.И. и др. Биологическая ценность молозива и молока овцематок и жизнеспособность новорожденных ягнят // Ветеринария.-1986- №9.-С.65-66.

55. Сингер М., Берг П. Гены и геномы / В 2-х томах // М.: Мир.-1998. -794 с.

56. Скрипниченко Г.Г. Популяционный анализ генетической структуры стад молочного скота по полиморфным системам белков и ферментов крови, молока в связи с селекцией на повышение молочной продуктивности: Автореферат дис. канд. наук. -М. -1975. -20с.

57. Состав и свойства молока, как сырья для молочной промышленности / Н.Ю. Алексеева, В.П. Аристова, А.П. Патратий, А.С. Потапов,-М.: Агропромиздат, 1986.-238 с.

58. Сулимова Г.Е., Городецкий С.И.Полиморфизм длин рестрикционных фрагментов гена (3- казеина Bos Таигиз//Сельскохозяйственная биология .-1988.-N3 .-С. 31-34.

59. Сулимова Г.Е., Соколова С.С., Семикозов О.П. и др. Анализ полиморфизма ДНК кластерных генов у крупного рогатого скота: гены казеинов и гены главного комплекса гистосовместимости (BOLA) // Цитология и генетика. -1992. -№5. -С. 18-26.

60. Суяркулов Ш.Р. Белковомолочность черно-пестрого голандизированного скота и ее связь с технологическими свойствами молока: Автореф. Дис. . канд. с.-х. наук. -М., 1987.-12 с.

61. Теоретические основы разведения генетики и селекции сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр.// Всесоюзный науч.-иссследов. ин-т разведения и генетики сельскохоз. ж-х.- JL: ВНИИРГ; 1976.-129 с.

62. Тепел А. Химия и физика молока. -М.: «Пищевая промышленность». -1979. -624с.

63. Технологическая инструкция по производству творога из пастеризованного молока. -1999. ГУ ВНИМИ.

64. Технологическая инструкция по приготовлению масла коровьего сладкосливочного. -1999. ГУ ВНИМИ.

65. Томме А.А. Генетический полиморфизм (3LG и казеинов и возможности его использования в селекции пород крупного рогатого скота в Эстонской ССР: Автореферат, дис. канд. наук. -Тарту. -1972. -27с.

66. ТУ 9222-180-00419785-99 «Творог»

67. Хаертдинов Р.А. Влияние генотипа коров по каппа-казеину на количественное содержание молочных белков // Генетика. -1989. -Т.25. -№8. -С. 1462-1472.

68. Хаертдинов Р., Афанасьев М. Сыродельческие свойства молока в зависимости от генотипа коров по (З-казеину // Молочное и мясное скотоводство.- 1997.-N3.-C.30-34.

69. Шибата Д.К. Полимеразная цепная реакция и молекулярно-генетический анализ биоптатов. // Методы. Молекулярная клиническая диагностика.-М.: Мир.- 1999.-С.395-428.

70. Ясуи В., Ито X., Тахара Е. Анализ ДНК в архивных образцах и его применение для изучения патогенеза опухолей.// Методы. Молекулярная клиническая диагностика.- М.: Мир.-1999.-С.395-428.

71. Alais С. Science du lait Principes des techniques laitieres. Editions SEP. -1974. - Paris. - France. -P.212.

72. Aleanpri R., Buttazzoni L.O. and Scaneiden S.C. The effects of milk components and cheese producing ability // J.Dairi Sci.-1990. Vol. 73. -N 3. — P.241.

73. Alichanidis, A. Polychroniadou. Special features of dairy prod-uctSK-Cn from ewe and goat milk from the physicochemical and or-ganoleptic point of view // Production and utilization of ewe and goat milk. Crete . Greece. 1995.S.21-43.

74. Archibald A.L., McClenaghan M., et. al. High-level expression of biologically active human alpha 1-antitripsin in the milk of transgenic mise // Prok. Natl. Acad. Sci. USA.-1990.-P.5178-5182.

75. Aschaffenburg R., Drewry J. Occurrence of different beta-lactoglobulins in cow's milk. "Nature", -1955. -V.176. -P. 218-219.

76. Barroso A., Dunner S., Canon J. Technical Note: Use of PCR-Single-Strand Conformation Polymorphism Analysis for Detection of Bovine (3-casein Variants A1' A2, A3 and В.// Jornal Animal Sciens.-1999.-N77.-P.2629-2632.

77. Beckmann J.S., Soller M. Restriktion fragment length polymorphisms in genetic improvement: Methodologies mapping and costs // 1983 .-P.35-43

78. Ф 88. Bell K., McKenzie H.A., Shaw D.C. Amino acid composition and peptidemaps of (3-lactoglobulin variants // Biochim. Biophis. Acta. -1968 V.154 -P.284-294.

79. Beckmann J.S., Soller M. Restriktion fragment length polymorphisms in genetic improvement: Methodologies mapping and costs // 1983.-P.35-43.

80. Berg van der G., Escher J.T.M., Koning P.J. Bovenhuis H. Genetic1. A.polymorphism of kappa-casein and beta-lactoglobulin ib relation to milk composition and processing properties // Tetherlands Milk and Dairy J. -1992. -V.46. -P. 145-168.

81. Bleck G.T., Bremel R.D. Sequense and single-base polymorphisms of the bovine alpha-lactalbumin 5"-flanking region // Gene. -1993. -V.126. -P.213-218.

82. Blumberg B.C., Tombs M. P.Possible polimorphism of bovin P-lactalbumin //Nature.- 1958.-P.683.

83. Bonifacio C., Santos I.C., Belo C., Crawador A. Single-strand conformation polymorphism (SSCP) analysis of aSi-casein, (3-casein and к-casein genes in charnequeira Portuguese indigenous goat breed//Archivoc de zootechia.-2001.-N50.-P.105-111.

84. Braunschweig M., Stranzinger G., Puhan Z. A PvuII PCR-RFLP test for the bovine p-lactoglobulin D allele // Animal Genetics. 1999.- V.30. - P.76.

85. Brew K., Castellino F J., Vanaman T.C., Hill R.L. The complete aminoacid sequence of bovine a-lactalbumin. "Journal of Biological Chemistry". -1970. -V. -245. -P. 4570-4582.

86. Chemical composition and coagulation properties of reneted milks from different breeds and species of ruminant. // Stony J.E., Grandison A.S., Millard D., Owen A.-J, Frod G.D. // J. Dairy Res. -1983. -V.50. -P. 215-229.

87. Comparison of milk protein allele frequencies in Nordic cattle breeds// Lien S., Kantanen J., Olsaker I., Holm L-E., Eythorsdottir E., Sandberg K., DalsgardB., Adalsteinsson S. //Animal Genetics.-1999.~N30.-P.85-91.

88. Cow milk protein genotypes: guality and stability of raw milk, pasteurized and fermented milk// Vegarud G.E., Langstud Т., Brovold M J., Devoid T.G. // International Dairy Journal-1999.-N9.-P. 399-400.

89. Die Milchproteingene des Fleckvihbullen "Haxl" und dessen Einfuss auf die Allefrequenzen // Schlee P., Rottman O., Buchberger J., Graml R., Aumann J., Binser R., Pirchner F.// Zuchtungkunde. -1992. -V.64. -N5. -S. 312-322.

90. Ebner К., Schambacher F. // Lactation (Eds.: Larson В., Smith V.). -1974. -№2.-P. 77-113.

91. Ehrmann S. Milchproteine: Mit dem Muster auch die Leistung verbessern? // Der Tierzuchter. 1993. -№3.- S. 44-47.

92. Erlich H.A., Gelfand D. Recent advances in the polymerase chain reaction // Sc.-1989.-P.1643-1650.

93. Fesus L., Zoiolnai A. Bovine leukocyte adhesion deficiency in Hungarian Holstein-Friesian cattle // Hung. Agr. Res. -1995. -4. -№2 -P.27-29.

94. Frank G., Braunizer G., Milchwissenschaft. -1967. -V.20. -P. 361-365.

95. Freier R., Kletter В., Gery I., Lebenthal E., Geifman M. Intolerance to milk protein // J. Pediatr. -1969. -V.75. -P.623-631.

96. Forster M., Graml R. Die Milchproteingene des Rindes und ihre biotechnologischen Nutzungsmoglichkeiten // Bauer Landwirt. Jahrb. -1991. -68.-N2.-S. 255-265.

97. Genotipe anallyses on DNA of zootechnically intersting species breed in Italy // Sangalli S., Blasi M., Ianza A., Gregorio P. Di. / Anim. Genet. -1994. -25. -Suppl №2. -P.39.

98. Geoffrey R.P., Alastair K.H., Jeremy P.H. Influence of %-casein and p-lactoglobulin phenotype on the heat stability of milk/Anternational Dairy Journal.- 1999.-N9.-P.375-376.

99. Godovac-Zimmermann J. The structural motif (3 -lactoglobulin and retinolbinding protein: a basis framework for binding and transport f small hydrophobic molecules? // TIBS. -1988. -V.13. -P.64-66.

100. Grosclaude F., Mahe M.F., Ribadeau-Dumas B. Structure primaire de la caseine asl, et de la caseine bovine. "European Journal of Biochemistry". -1973. №40. -P.323-324.

101. Han S.K., Shin Y.C., Byun H.D. Biochemical, molecular and physiological characterization of a new (3-casein variant detected in Korean Cattle // Animal Genetics. -2000. -V.31. -P.49-51.

102. Hayes H., Popescu P., Dutrillaux B. Comparative gene mapping of lactoperoxidase, retinoblastoma and A-lactalbumin genes in cattle, sheep and goats // Mammalian Genome. -1993. -V.4. -P.593-597.

103. Hippell P., Waugh D. Casein: monomers and polymers // Amer. Schem. Soc.-1955.-V.77.-P. 4311.

104. Identification of a mutation in porsine ryanodin receptor associated with malignant hyperthermia // Fujii J., Otsu K., Zorzato F., Deleon S., Khanna V.K., Weiler J. E., O'Brien P.J., Maclennan D.H. // Sciencce. -1991. -V.253. -P.448-451.

105. Innis M.A., Gelfand D.H. Optimization of PCRs // Academic press, San Diego.-1990.-P.3-12.

106. Isolation and characterization of the bovine kappa-casein gene // Aleksander L.J., Stewart A.F., Mackinlay A.G., Kapelinskaya T.V., Tkach T.M., Gorodetsky S.I. // Molec. Reprod. Develop. -1993. -V.36. -P.291-296.

107. Kaminski S. Identifikation of SDUI polymorphism within 5' flanking region of bovine alpha-lactalbumin gene// Animal Science Papers and reports.-1999.-N17.-P.23-27.

108. Kehrly M.E., Shuster D.E., Ackermann M.R. Leukocyte adhesion deficiency among Holstein cattle // Cornell Vet. -1992. -V.82. -P.103-109.

109. Kuhn N.J. The biosynthesis of lactose In: Biochemistry of lactation // Elsevier. -1997. -Amsterdam. -P. 159-176.

110. Liberatoti J., p -lactoglobulins. Chemikal and structural studies // Folia Vet. Lat. -1977. V.7. P. 205-222.

111. Mackinlay A.G., Wake R.G. The heterogeneity of к-casein // Biochem. Biophys. Acta -1964. V.93. -P. 378.

112. Mariani P., Losi G., Morini D. II Contenuto di acido citrico nel latte di vacchne con genotipo diverso nel locus k-kaseina // Sci. tech. latt.-casear. -1979. -№30. -C.375-384.

113. Martin P., Grosclaude F. Improvement of milk protein quality by gene technology// Livestock Production Science.-1993.-N35.-P.95-115.

114. McLean D.M. Influence of milk protein genetic on composition, yield and cheesemaking properties // Animal Genet. -1987. -Suppl. 1. -P. 100-102.

115. McKenzie H.A., Wake R.G. An improved method for the isolation of к-casein // Biochem. Biophys. Acta -1961. V.47. -P. 1961.

116. Medrano J.F., Aguilar-Gordova E. Genotyping of bovine kappa-caseine folloving DNA sequense amplification // Biotechnology. -1990.-№8.-P.144-146.

117. Mellander O. Electrophoretische Untersuchungen von Casein. -Boichem. Z. 1939. -300 s.

118. Mercier J.C., Grosclaude F., Ribadeau-Dumas B. Structure primaire de la caseine asl bovine. Sequence complete // "European Journal of Biochemistry". -1971. -№ 23. -P. 41-51.

119. Mirck M.H., Bannisseht-Wijsmuller Th. Von, Timmermans-Besselink W.J.H. et al. Optimizations of the PCR test for the mutation causing bovine leucocyte adhesion deficiency // Cell and Mol.Biol. -1995. -41. -№5. -P.695-698.

120. Morini D., Losi G. Castacweti G.B. Properties of ripened cheese in cheesemaking experiments with milk characterized by k-casein variants A and В // Sciera e Technikca Lattiero-Casearia. -1979. -№30. -C.243-262

121. Mullis K.B., Faloona F.A. In: Methods in enzymology. -Academic Press. -1987. -V. 155. -P.335-350.

122. Ng-Kwai-Hang K.F., Haies J.F., Moxley J.E. Relationships between Milk Protein Polymorphizms and Major Milk Constituents in Holstein-Fresian Cows// Journal of Dairy Science.-1986.-V69.-N1.-P.22-26.

123. Ng-Kwai-Hang K.F. Genetic polymorphism of milk proteins: Relationships with production traits, milk composition and technological properties// Animal Science.-1998.-V78.-P. 131-145.

124. Nomenclature of the proteins of bovine milk / Jennes R., Larson В., McMeekin Т., Swanson Т., Whitnah C., Whitey R. // J. Dairy Sci. 1956.-V.39. —P.536.

125. Nomenclature of the proteins of bovine milk first revision / Brunner J., Ernstrom C., Hollis R., Larson В., Whitney R., Zittle CM J. Dairy Sci. -1960.-V.43.-P.901.

126. Nomenclature of the proteins of cow's milk second revision // Thompson M. P., Tarassuk N. P., Jennes R., Lillevik H. A., Ashworth U.S., Rose D. // J. Dairy Sci. - 1965. -V.48. -P.159.

127. Palmer A.H. The preparation of crystalline globulin from the albumin fraction of cow's milk // J. Biol. Chem. 1934. -V.104. -P. 359-373.

128. Parameters affecting the yield of DNA from human blood / Gustavson S., Proper J.A., Bowie E.J.W., Sommer S.S. //Anal. Biochem.- 1987.-P.294-296.

129. Per protocols a guide to methods and applications / Innis M.A., Gelfand D.H., Sninski JJ., White T.J. // Academic Press. -1990. -San Diego, California.

130. Pinder S.J., Perry B.N., Skidmore C.J. Analysis of polymorphism in the bovine casein genes by use of the polymerase chain reaction //Animal Genetics.-1991.-V22.-Nl.-P. 11-19.

131. Piredda G., Papoff C.M., Sanna S.R.& Campus R.L. Influenza del geno-tipo della aspcaseina ovina sulle carateteristiche chmico-fische e latto-dinamografiche del latte. Sci. Teen. Latt-Cas. 1993. V.44.P.135-143

132. Prinzenberg E.-M., Krause I., Erhardt G. SSCP analysis at the bovine CSN3 locus diskriminates six alleles corresponding to known protein variants ( A,B,C,E,F,G) and three new DNA polymorphisms (H, I, A.)// Animal Biotechnology.-1999.-N10.-P.49-62.

133. Proteolytic specificity of chymosin on caprine asrcasem A and f. Production and utilization of ewe and goat milk / Trujillo A.J., Miranda G. Bars D.Ie & Delacroix-Buchet A. // Crete. -Greece. -1995. -S.273.

134. Puyol p., Perez M.D., et al Interaction of bovine (3-lactoglobulins and other bovine and human whey proteins with retinal and fatty acids // Agric. Biol. Chem.-1991.-P.2515-2520.

135. Saici R.K., Scharf S., Faalona F., Mullis K.B., Horn G.T., Erlich H.A., ArnheimN. Science. -1985. -V.230. -P.1350.

136. Saici R.K., Gelfand D.,et. al. Primer-directed enzymanic amplification of with a thermostable DNA polymerase //Science.- 1988.-P.487-491.

137. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminatiog inhibitors // Proc. Nat. Acad. sci. USA. -1977. -V.74, N12. -P.5463-5467.

138. Saperstein D.A.Nieckerson J.M. Restriction fragment length polymorphism analysis using PCR coupled tomrestrictions digest // Bio. Techniques. -1991. -V.10.-P.488-489.

139. Schaar J. Studies on к -casein and p -lactoglobulin genetic polymorphism and on milk plasma: Thesis // Swedish University of Agricultural Sciences .Uppsala. 1986.-71 p.

140. Schaar J. Variation in Milk protein composition. Studies on k-casein and B-lactoglobulin genetic polymorphism and milk plasmin. Thesis. Uppsala. -1986. -71 p.

141. Schliebin S., Erhardt G., Senft В., Genotyping of bovine kappa-casein folloving DNA seqence amplification and direct sequenting of kappa Cn-E PCR product // Anim. Genet. -1991. -V.22. P.333-342.

142. Separation of y-casein / Hipp N., Groves M., Custer J., McMeekin T. // Amer. Schem. Soc. -1950. -V.72. -P. 4928.

143. Separation of a-, (3- and y-casein / Hipp N., Groves M., Custer J., McMeekin T. //Amer. Schem. Soc. -1952. -V.35. -P. 272.

144. Shuster D.E., Kehrli M.E., Ackermann M., Gilbert R.O. Identification and prevalence of a genetic defect that causes leukocyte adhesion deficiency in Holstein cattle // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1992. -V.89. -P.9225-9229.

145. Smith L.M., Fantozzi P., Greveling R.K. Study of tryglicerid-protein interaction using a microemulsion-filtration method // J. Am. Chem. Oil Soc. -1983. -V.60. -P.691-714.

146. Stasio L.Di., Merlin P., 1979

147. Studies on protein polymorphism in pigs, horses and cattle Blood groups of animals / Graetzer M.A., Hesselholt M., Moustgaard J., Thvmann M. // Proceedings 9th European animal blood group conference. -Prague. -1965. -P.279-293.

148. Swaisgood H.E., Brunner J.R. Characterisazion of к-casein obtained by fractionation with trichloracetic acid in a concentrated urea solution // J. Dairy Sci. -1962. V.45. -P. 1.

149. Swaisgood H.E., Brunner J.R. Characteristics of к-casein in the presence of various dissociation agents // Biochem. Biophys. Res. Commun -1963. -V.12.-P. 148.

150. The efficiency of casein in utilization in dairy cows // Fraser D.L., Orskov E.R., Whitelaw E.G., McLeod N.A. // Livestock Prod. Sci. -1990. -Y.25. -P.67-78.

151. The structure of J3-lactoglobulin and its similarity to plasma retinol-binding protein / Papiz M.Z., Sawyer L., Eliopoulos E.E., North A.C.T., Findlay J.B.C., Sivaprasadaro R., Jones T.A., Newcomer M.E., Kraulis P.J. // Na. -1986. -V.324. -P.383-385.

152. Thompson M.P., Kiddy C.A. Genetic polymorphism in caseins of cow's milk. III. Isolation and properties of asl-caseins А, В and С // J. Dairy Sci. -1964. -V.47.-P. 626.

153. Voelker G.R., Bleck G.T., Wheeler M.B. Single-base polymorphisms within the 5'-flanking region of the bovine a-lactalbumin gene. -1997.-Journal of Dairy Science. V. - 80. -P.194-197.

154. Wake R.G., Baldwin R.L. Analysis of casein fractions by zone electrophresis in concentrated urea // Biochem. Biophys. Acta. -1961. -V.47. —P.225.

155. Warner R.C. Separation of a- and P-casein // J. Amer. Schem. Soc. -1944. -V.66.-P. 1725.

156. Waugh D.F. Formation and structure of casein // In: Milk proteins chemistry and molecular biology (ed.: McKenzie H.A.). -Acad. Press. NY.-1971. -P. 3-85.

157. Waugh D. The interactions of asl-, P and к-casein in micelle formation // Disc. Faraday. Soc. -1958. -V.25. -P. 186.

158. Zittle C.A., Custer J.H. Perifikation and some properties of as-casein in к-casein // J. Dairy Sci. -1963. V.46. -P. 1183.

Информация о работе

Костюнина, Ольга Васильевна
кандидата биологических наук
Дубровицы, 2005
ВАК 03.00.23

Диссертация

Молекулярная диагностика генетического полиморфизма основных молочных белков и их связь с технологическими свойствами молока - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Молекулярная диагностика генетического полиморфизма основных молочных белков и их связь с технологическими свойствами молока - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы