Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Модулирующее влияние АТФ на нейронную активность области САЗ гиппокампа новорожденных крыс

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Модулирующее влияние АТФ на нейронную активность области САЗ гиппокампа новорожденных крыс"

На правах рукописи

Сафиулина Виктория Фаизовна

Модулирующее влияние АТФ на нейронную активность области САЗ гиппокампа новорожденных

крыс

Специальность 03.00.13 - физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических

наук

Москва-2004

Работа выполнена в Институте высшей нервной деятельности и нейрофизиологии

РАН

Научный руководитель: старший научный сотрудник,

доктор биологических наук Эзрохи В.Л.

Официальные оппоненты: старший научный сотрудник, кандидат

биологических наук Шаронова И.Н.; старший научный сотрудник, доктор биологических наук Базян А.С.

Ведущая организация: Казанский государственный медицинский

университет

Защита диссертации состоится ...ffif.ffc.Qttf........ 2004 года в 14-00 часов

на заседании диссертационного совета (Д-002.044.01) при Институте высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН (117485, Москва, ул. Бутлерова, д. 5а).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН.

Автореферат разослан .......2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук Коштоянц О.Х.

Г

вчзfy

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы

Изучение механизмов, лежащих в основе пластичности синаптической передачи в ЦНС, является одним из основных направлений исследований в современной нейробиологии. Нервная система новорожденных животных обладает рядом существенных функциональных особенностей. На раннем этапе развития нервной системы во многих отделах мозга, в том числе и в гиппокампе, регистрируется спонтанная активность в виде гигантских деполяризующих потенциалов (Ben-Ari et al., 1989). Считается, что существование гигантских деполяризующих потенциалов в этом возрасте связано с возбуждающей функцией ГАМК. Это предположение основывается на том факте, что гигантские потенциалы регистрируются в первую неделю после рождения и исчезают в старшем возрасте, когда ГАМК становится тормозным медиатором (Ben-Ari et al., 1989). Показано, что в распространении гигантских потенциалов принимают участие как глутаматергические, так и ГАМКергические связи большой группы нейронов (Khazipov et al., 1997). На сегодняшний момент существует как пейсмекерная, так и сетевая гипотезы генерации гигантских потенциалов. Согласно сетевой гипотезе гигантские деполяризующие потенциалы являются результатом положительной обратной связи между пирамидными клетками и интернейронами (Tabak et al., 2001). В то же время в других работах рассматривается способность интернейронов-пейсмекеров генерировать гигантские деполяризующие потенциалы в гиппокампальной сети (Strata et al., 1998). Таким образом, природа генеза гигантских деполяризующих потенциалов остается нераскрытой.

Считается, что гигантские потенциалы играют важную роль в росте аксональных волокон и синаптогенезе (Jakobson et al., 1991). Во время гигантских потенциалов происходит мощный вход кальция в клетку (Garaschuk et al., 1998), который может запускать внутриклеточные биохимические процессы, модулирующие работу генома, и тем самым влиять на клеточное развитие. Таким образом, гигантские потенциалы являются важным звеном в развитии и формировании нейронных связей на раннем этапе онтогенеза, определяя тем самым состояние

нейронных связей у взрослых животных и, следовательно, такие процессы как память.

Существование гигантских деполяризующих потенциалов свидетельствует о повышенной нейрональной активности в раннем постнатальном возрасте. Известно, что медиаторы могут находиться в синаптических пузырьках в виде комплекса с АТФ и кислыми полипептидами (Глебов, Крыжановский, 1978). В работах на взрослых животных было показано, что при повышенной нейронной активности во внеклеточное пространство из нервных терминалей выбрасывается АТФ (Глебов, Крыжановский, 1978; Wieraszko et al., 1989). В синаптической щели АТФ быстро гидролизуется до АДФ, АМФ и аденозина под действием АТФ-аз.

Иммунногистохимические исследования выявили наличие как пресинаптических, так и постсинаптических пуринорецепторов в гиппокампе новорожденных и взрослых животных (Khakh, 2000, Rubio and Soto, 2001). Показано, что через воздействие на пуринорецепторы может осуществляться модуляция синаптической активности. Было обнаружено, что во взрослом гиппокампе пресинаптически локализованные метаботропные АТФ рецепторы могут ингибировать выброс глутамата (Mendoza-Fernandes, 2000). Так как гигантские потенциалы являются феноменом, связанным с гипервозбудимостью нейронов, то можно предположить, что выброс АТФ во время гигантского потенциала во внеклеточное пространство играет модулирующую роль в работе сети и влияет на формирование нервной системы. Таким образом, исследование действия АТФ на нейронную активность новорожденного гиппокампа позволит получить экспериментальные данные о ее модулирующей роли в раннем онтогенезе.

Цель и задачи исследования

Целью исследования являлось выяснение роли АТФ в модуляции нейронной активности новорожденного гиппокампа. Такая работа предполагала решение следующих основных задач:

- исследование изменения частоты гигантских потенциалов и частоты спонтанных постсинаптических потенциалов в зависимости от концентрации апплицируемой АТФ.

- фармакологическое исследование вклада различных пуринорецепторов в наблюдаемые эффекты АТФ.

- модельное представление генерации и распространения гигантских потенциалов, включающее сравнение результатов модели с экспериментальными данными, полученными при регистрации активности пирамидных клеток области САЗ гиппокампа, и анализ на основе модели механизма действия АТФ на гигантские потенциалы.

Научная новизна

(1) Впервые показано, что АТФ способна модулировать частоту гигантских деполяризующих потенциалов.

(2) Выявлена зависимость частоты гигантских деполяризующих потенциалов и частоты спонтанной синаптической активности от концентрации АТФ. Показано, что АТФ снижает частоту гигантских деполяризующих потенциалов и увеличивает частоту спонтанной синаптической активности.

(3) Выявлено, что в феномене влияния АТФ на частоту гигантских деполяризующих потенциалов и на частоту спонтанной синаптической активности в гиппокампе новорожденных крыс принимают участие ионотропные пуринергические (Р2Х) и аденозиновые (AI) рецепторы.

(4) На основе предположения участия электрических связей между интернейронами в генерации гигантских деполяризующих потенциалов впервые создана модель, описывающая форму и длительность гигантских деполяризующих потенциалов в гиппокампе новорожденных крыс.

(5) На основе модели, описывающей определенные параметры и свойства гигантских деполяризующих потенциалов (форма, длительность, амплитуда, чувствительность к блокаторам синаптических связей), предложена гипотеза модуляции ритма этих потенциалов за счет воздействия АТФ через пуринорецепторы на гиперполяризационные токи в интернейронах.

Теоретическая и практическая значимость

Данное исследование представляет собой работу по экспериментальному и теоретическому исследованию влияния АТФ на спонтанную электрическую активность гиппокампа новорожденных крыс. Обнаружено ингибирующее действие АТФ на частоту гигантских деполяризующих потенциалов и возбуждающее действие на частоту спонтанных посгсинаптических потенциалов. Такое действие обусловлено комплексным эффектом АТФ и ее продукта гидролиза - аденозина. Показано участие пуринорецегтторов в модуляции сетевой активности новорожденного гиппокампа. Создана модель, описывающая гигантские деполяризующие потенциалы, на основе которой сделано предположение о влиянии АТФ на гиперполяризационные токи в интернейронах гиппокампа. Полученные новые данные расширяют представление о сетевых механизмах распространения возбуждения и о модулирующих свойствах АТФ в гиппокампе новорожденных крыс. Эти результаты позволили выявить роль АТФ как модулятора нейрональной активности в раннем периоде постнатзльного развития гиппокампа.

Апробация работы

Основные результаты были доложены на совместном заседании лабораторий нейробиологии обучения и нейроонтогенеза Института высшей нервной деятельности РАН (2003), на 3 - м Международном симпозиуме в Магдебурге "Neuroprotection and Neurorepair", на 7 - й Пущинской школе-конференции молодых ученых «БИОЛОГИЯ - НАУКА XXI ВЕКА » (2003), конференция "Важнейшие достижения ИВНД и НФ" (2003).

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, изложения результатов, обсуждения, выводов и списка литературы (132 ссылки). Работа изложена на 86 страницах, включает 3 таблицы, 20 рисунков.

Объект и методы исследования Методика эксперимента

Эксперименты проводили на переживающих срезах гиппокампа, приготовленных от молодых крыс линии Вистар (от 2 до 6 дней после рождения) согласно методу, описанному в литературе (Edwards et al, 1989; Sokolov et al, 1998; Volgushev et al, 1995). Животных декапитировали, предварительно анестезировав эфиром или внутрибрюшинной инъекцией уретана (2 г/кг), ножницами делали разрез кожи и теменной кости по сагитальному шву. Кости удаляли загнутым пинцетом. Мозг извлекали из черепной коробки и помещали в охлаждённую (4° С), оксигенированную карбогеном (95% Ог - 5 % С02) искусственную цереброспинальную жидкость (ИЦСЖ). Поперечные срезы толщиной 500 мкм приготовляли при помощи вибротома (Vibrating Microtom, 500-202, TSE). Срезы производили при полном погружении фиксированной цианокрилатом ткани в оксигенированный охлажденный раствор ИЦСЖ. Затем срезы по одному переносили в инкубационную камеру, содержащую оксигенированную ИЦСЖ при комнатной температуре (22-24° С). Оксигенированная ИЦСЖ (Vamamoto, 1979) имела следующий состав (в мМ): NaCI 130, KCI 3.5, NaH2 Р04 1.2, MgCI21.3, CaCI2 2, NaHC03 25, глюкоза 25, рН = 7,2 - 7.4. После 1 часа нахождения в инкубационной камере срезы по одному помещали в регистрационную камеру. Температуру в регистрационной камере поддерживали в пределах 32-33° С. В работе использовали проточную термостабилизированную камеру. Солевой раствор поступал в камеру вследствие перепада высот между емкостью, в которой он находился, и, собственно, регистрационной камерой, через которую протекала ИЦСЖ со скоростью 3-5 мл/ мин. Для стабилизации уровня раствора в регистрационной камере использовалась дополнительная камера по типу сообщающихся сосудов. Уровень раствора поддерживался на 1-2 мм выше поверхности среза (Alger, Nicoll, 1980). Это позволяло получать стабильные внутриклеточные записи и обеспечивать равномерную аппликацию фармакологических веществ. Используемая система перфузии позволяла переключать подачу растворов с заданной концентрацией в

регистрационную камеру. Полное замещение одного раствора другим в камере объемом 2 мл происходило в течение примерно 1 минуты.

Внутриклеточный регистрирующий электрод, изготовленный из боросиликатного стекла 2 мм в диаметре, имел сопротивление 4-5 МОм при заполнении внутриклеточным раствором. Внутриклеточный раствор имел следующий состав (мМ): KCI140, MgCI21, EGTA 1, Hepes 10, Mg ATP 2, pH 7,2-7,4 (титрование с КОН).

Используя методику „пэтч-кламп" (patch clamp) в конфигурации "целая клетка" (Blanton et al, 1989; Hamill et al, 1984), мы регистрировали спонтанные внутриклеточные гигантские деполяризующие потенциалы (ГДП) и спонтанные постсинаптические потенциалы (сПСП) в пирамидных нейронах области САЗ гиппокампа. Записи были сделаны в режиме фиксации токов при помощи стандартного усилителя (Axoclamp 2В, Axon Instruments, Foster City, CA, USA) после компенсации последовательного сопротивления и ёмкости. Последовательное (10-30 МОм) и мембранное входное сопротивление определялось с помощью анализа ступеньки потенциала (амплитуда 5 мВ и длительность 200 мс) или тока (амплитуда 5 пА и длительность 200 мс), пропускаемого через регистрирующий электрод.

От пирамидных клеток слоя САЗ регистрировались ГДП и сПСП при различных мембранных потенциалах, начиная с потенциала покоя. С помощью программы Clampex 7 (Axon Laboratory) производилась непрерывная запись потенциалов клеток. В качестве контроля бралась 5-10 минутная запись от начала регистрации при потенциале покоя мембраны клетки. Записи с нестабильным поведением потенциала покоя мембраны клетки (то есть сильная изменчивость потенциала клетки в течение записи, обусловленная недостаточно хорошим состоянием среза или клетки) исключались из дальнейшей обработки. После записи контроля производилась аппликация фармакологических веществ и далее записывался мембранный потенциал на фоне вещества. Обычно после переключения протока с контрольным раствором на раствор с исследуемым фармакологическим веществом считали, что через 1-2 минуты раствор с исследуемым веществом полностью заместил контрольный раствор, и с этого момента предполагали начало воздействия исследуемого вещества на клетки среза. После 15-30 минут записи регистрации с веществом начинали отмыв. Для отмыва использовали контрольный раствор. В тех экспериментах, где наблюдалось блокирование ГДП, считали, что вещество

отмылось, если происходило восстановление ГДП. В той части экспериментов, где ставилась задача нефармакологического исследования формы и длительности ГДП для последующего сравнения с результатами моделирования, регистрация производилась при различных мембранных потенциалах: -60 мВ, -100 мВ. Усиленные и отфильтрованные (1, 3 или 10 кГц) потенциалы оцифровывались с частотой 5-25 кГц и сохранялись на магнитном диске компьютера в виде файлов с разрешением 12 бит для последующего анализа.

Все эксперименты разбивали на серии в зависимости от того, действие каких веществ тестировалось. Проводя анализ изменения частоты ГДП в разных экспериментах, нативную запись разбивали на участки длительностью 1 минута и подсчитывали количество ГДП в каждом таком промежутке времени. Результаты усредняли в каждой серии экспериментов, Строились гистограммы изменения во времени частоты ГДП в зависимости от добавленных веществ. Сравнивали средние частоты ГДП в контроле, после аппликации веществ и после отмыва.

Изучая спонтанную активность, смотрели кумулятивные распределения временных интервалов между сПСП. Для каждой серии экспериментов сравнивали средние частоты сПСП в контроле, после аппликации веществ и после отмыва. Все статистические данные представлены как ± S.E.M. Различия оценивались с помощью t-критерия Стьюдента. Различия считались статистически значимыми при Р < 0,05.

Методика моделирования

В данной работе использовалась программа Neuroimitator 4.3 (Литвинов Е.Г., 2002). При описании отдельных нейронов учитывались следующие характеристики: потенциал покоя, порог возбуждения, абсолютная рефрактерность, амплитуда спайка и его форма. Соотношение количества интернейронов и пирамидных клеток бралось как 1:10 в соответствии с имеющимися экспериментальными данными (Buzsaki and Chrobak, 1995; Freund and Buzsaki, 1996). Модель содержит два типа возбудительных элементов: интернейроны (ВЭ1) и пирамидные клетки (ВЭ2). Сеть состоит из 22 элементов: 2 - ВЭ1 и 20 - ВЭ2. Связи моделировались амплитудой ПСП, временем релаксации (время спада ПСП) и синаптической задержкой (интервалом времени от момента генерации спайка в пресинапсе до начала развития

постсинаптического потенциала). Связи от ВЭ1 к ВЭ2 соответствовали ГАМКергическим связям и полагались возбудительными, причем каждый ВЭ1 был связан с каждым ВЭ2 (что соответствует имеющимся экспериментальным данным об интернейронах и пирамидных клетках гиппокампа (Sik et al, 1995; Li et al, 1994). Связи между элементами ВЭ2 соответствовали глутаматергическим связям, и каждый ВЭ2 был связан с двумя другими ВЭ2. При этом исключались случаи обратной связи между элементами ВЭ2. Синаптическая связь между ВЭ1 соответствовала ГАМКергическому входу и тоже являлась возбудительной. Кроме синаптической, между элементами ВЭ1 осуществлялась также электрическая связь. Электрические контакты были обнаружены в новорожденном гиппокампе только среди интернейронов ( Strata et al, 1997 ). Связи от ВЭ2 к ВЭ1 отсутствовали, что имитировало механизм гиперполяризации в интернейронах, который прекращал разряд интернейронов-пейсмекеров. Синаптическая и электрическая связи различались величинами синаптических задержек, что связано с разным механизмом прохождения сигнала через электрические и химические синапсы. В модели также задавался следовый потенциал 10 мс и католическая депрессия: уровень депрессии -40 мВ, уровень восстановления -30 мВ.

Исходя из предположения о наличии пейсмекерного механизма в интернейронах, в качестве входного параметра использовался внешний ритмический сигнал, подаваемый на один из ВЭ1. Частота этого ритмического сигнала варьировалась. Выходными параметрами модели являлись форма и длительность разряда ГДП произвольно выбранного ВЭ2.

Результаты исследования и их обсуждение

В первую неделю постнатального развития в пирамидных нейронах области САЗ гиппокампа регистрировали две формы спонтанной активности: спонтанные пачечные гигантские потенциалы (ГДП) с частотой 0,75± 0,02 Гц и спонтанные постсинаптические потенциалы (сПСП) с частотой 5+ 2 Гц (количество животных п=28).

Действие А ТФ на ГДП.

Известно, что частота ГДП может модулироваться посредством действия различных веществ (Веп-Ап et а1., 1989; Мадд1 е1 а1., 2001). В исследованиях по изучению влияния АТФ на ритм ГДП и на частоту спонтанной синаптической активности мы обнаружили, что аппликация АТФ уменьшала частоту ГДП и увеличивала частоту сПСП, причем изменение ритма ГДП и спонтанной синаптической активности зависело от концентрации АТФ. В исследовании мы протестировали влияние трех разных концентраций АТФ (0,5; 5,0 и 50 мкМ), которую добавляли в проточную ИЦОК. В течение 1-2 минут раствор с АТФ достигал клеток среза, и с этого момента мы считали, что АТФ начала воздействовать на нейроны. При воздействии АТФ в концентрации 0.5 мкМ мы не наблюдали статистически значимых изменений частоты ГДП и частоты спонтанной синаптической активности. Частота ГДП уменьшалась с контрольного значения 0,075 + 0,02 Гц до 0,045 ± 0,035 Гц (п=б, р>0,05).

При аппликации АТФ в концентрации 5 мкМ наблюдались статистически значимые изменения частоты ГДП. Частота ГДП уменьшалась с контрольного значения 0,075 ± 0,02 Гц до 0,022 > 0,008 Гц ((п=б, р<0,05) При приложении концентрации АТФ 50 мкМ частота ГДП уменьшалась с контрольного значения 0,075 ± 0,02 Гц до 0,018 + 0,003 Гц (п=1б, р<0,05). Таким образом, эффект был статистически значимым, начиная с концентрации АТФ 5 мкМ. Отчетливо наблюдалась закономерность в изменении частоты ГДП. Чем большую концентрацию АТФ мы апплицировали, тем более выражен был эффект снижения ритма ГДП. Эффект уменьшения частоты ГДП был обратимым. Отмыв АТФ восстанавливал частоту ГДП, причем время восстановления зависело от используемой концентрации АТФ. Чем большая концентрация АТФ апплицировалась, тем дольше происходил отмыв: после аппликации 5 мкМ АТФ частота восстанавливалась до контрольного уровня в течение 1 минуты, а после аппликации 50 мкм АТФ восстановление происходило в течение 3-4 мин после переключения протока на контрольный раствор.

Действие АТФ на спонтанную синаптичвскую активность.

Помимо описанного выше эффекта влияния АТФ на частоту ГДП, было обнаружено, что АТФ влияет на ритм спонтанной синаптической активности. Мы проанализировали, как и в случае с ГДП, влияние трех различных концентраций АТФ (0,5; 5,0 и 50 мкМ), которые добавляли в проточную ИЦСЖ. При аппликации 0.5 мкМ АТФ частота сПСП увеличивалась с контрольных 5,7 ± 0,6 Гц до б,б ± 0,4 Гц (п=б, р>0,05). При приложении АТФ в концентрации 5 мкМ происходило увеличение частоты сПСП с контрольных 5,7 ± 0,6 Гц до 7,9 ± 0,4 Гц (п=б, р>0,05). При аппликации АТФ с концентрацией 50 мкМ мы наблюдали увеличение частоты с контрольных 5,7 ± 0,6 Гц до 9,2 ± 0,3 Гц (п=1б, р<0,05). Наблюдаемый эффект увеличения частоты сПСП был статистически значимым только при аппликации АТФ 50 мкМ. Таким образом, было обнаружено, что АТФ обладает двойным действием на нейронную активность клеток гиппокампа: с одной стороны, при приложении больших концентраций АТФ наблюдался феномен ингибирования частоты ГДП, с другой - феномен усиления частоты сПСП.

Действие АТФ в присутствии DPCPX.

Основываясь на данных о быстром расщеплении АТФ на ее производные (аденозин и АДФ) во внеклеточном пространстве, мы предположили участие в уменьшении частоты ГДП аденозина, одного из продуктов распада АТФ. Для выявления вклада аденозина в наблюдаемый эффект ингибирования частоты ГДП мы использовали блокатор Al аденозиновых рецепторов DPCPX (100 мкМ). Добавление DPCPX в перфузионный раствор увеличивало частоту ГДП с контрольной 0,075 ± 0,02 Гц до 0,120 ± 0,05 Гц (п=11, р>0,05). На фоне DPCPX использовали аппликацию АТФ. Провели серии экспериментов с концентрациями АТФ 5 мкМ и 50 мкМ. Оказалось, что в этих экспериментах частота ГДП при концентрации АТФ 5 мМ на фоне DPCPX меняется следующим образом: 0,120 ± 0,05 Гц при DPCPX (100 мкМ); 0,95 i 0,03 Гц при АТФ (5мкМ) на фоне DPCPX (п=б, р > 0,05). В случае с аппликацией 50 мкМ АТФ частота ГДП меняется: 0,120 ± 0,05 Гц при DPCPX (100 мкМ); 0,01 ± 0,001 Гц при АТФ (50 мкМ) (п=5, р < 0,05). Статистическая обработка показала, что только при аппликации 50 мкМ АТФ на фоне DPCPX (100 мкМ) изменения в частоте следования ГДП являются статистически значимыми. Таким образом, при аппликации АТФ на фоне DPCPX эффект сдвинут в область больших

концентраций по сравнению с эффектом только АТФ. Такой сдвиг происходит только тогда, когда антагонист вытесняет агонист со специфических сайтов связывания, в данном случае, с аденозинового А1 рецептора. При меньших концентрациях АТФ, апплицируемых на фоне ОРСРХ, эффект уменьшения частоты ГДП был статистически незначимым,

В экспериментах с аппликацией АТФ 5 мкМ и 50 мкМ на фоне ОРСРХ не наблюдалось статистически значимых (п=11, р>0,05) изменений частоты сПСП (в контроле 5,3 + 1,0 Гц, при ОРСРХ 5,7± 1,5 Гц, при ОРСРХ+ АТФ 5 мкМ: 5,6 + 1,9 Гц, при ОРСРХ +АТФ 50 мкМ 5,4± 1,4 Гц). Этот результат интересен в сравнении с зависимостью, полученной при аппликации АТФ разных концентраций без использования блокаторов. В случае аппликации АТФ без блокаторов явно видна концентрационная зависимость частоты сПСП, тогда как в случае с ОРСРХ такой концентрационной зависимости для АТФ не наблюдалось. Данные экспериментов позволяют сделать вывод о том, что модуляция ритма сПСП осуществляется с участием А1 рецепторов.

Исследование влияния агонистов и антагонистов рецепторов А ТФ.

Чтобы выявить вклад различных АТФ рецепторов, мы провели исследования с использованием агонистов и антагонистов этих рецепторов. Аппликация агониста ионотропных Р2Х1, Р2ХЗ рецепторов ор-те-АТР (50 мкМ) не вызывала статистически значимых изменений ни частоты гигантских потенциалов (в контроле 0,082 + 0,004 Гц, после аппликации ор-те-АТР 0,081 ± 0,004 Гц, п=5, р>0,05), ни частоты спонтанных постсинаптических потенциалов (в контроле 5,2 ± 0,4 Гц, после аппликации аР-ше-АТР 5,1 ± 0,7 Гц, п=5, р>0,05). Аппликация агониста метаботропных Р2У2, Р2У4 рецепторов ЦТР (50 мкМ) не вызывала статистически значимых изменений ни частоты гигантских потенциалов (в контроле 0,080 ± 0,001 Гц, после аппликации ЦТР 0,083 ± 0,001 Гц, п=4, р>0,05), ни частоты спонтанных постсинаптических потенциалов (в контроле 5,6 ± 0,3 Гц, после аппликации ар-гпе-АТР 5,5 + 0,7 Гц (п=4, р>0,05)). Так как не существует специфических антагонистов конкретных подтипов пуринорецепторов, дальнейшее наше исследование было проведено с использованием смешанного антагониста подтипа Р2Х2 пуринорецепторов РРАОБ. Оказалось, что сам РРАОБ (50 мкМ) вызывает уменьшение частоты ГДП (в контроле 0,082 + 0,03 Гц, после аппликации РРАОБ 0,03 ± 0,01 Гц,

n=7, p < 0,05). Это позволило заключить, что в генерацию нормального ритма ГДП дают вклад Р2Х2 подтип пуринорецепторов. Однако последующая аппликация АТФ (50 мкМ) на фоне PPADS вызывала уменьшение частоты ГДП (при PPADS 0,03 + 0,01 Гц, при PPADS + АТФ 0,008 ± 0,001 Гц, п=7). Изменения были статистически значимыми р<0,05. Проявление эффекта уменьшения частоты ГДП при АТФ на фоне используемого блокатора PPADS говорит об участии, скорее всего определенного типа (ов) пуринорецепторов, которые не чувствительны к использованию PPADS. Такими рецепторами скорее всего являются Р2Х4 рецепторы, присутствующие в гиппокампе (Rubio and Soto, 2001). Аппликация PPADS (50 мМ) не вызывала статистически значимых изменений в частоте спонтанной синаптической активности р>0,05. По сравнению с контрольными 5,3 + 0,5 Гц частота сПСП составляла 5,0 + 0,4 Гц (п=7). После аппликации АТФ на фоне PPADS частота сПСП увеличилась с контрольных 5,3 ± 0,5 Гц до 6,8 ± 0,8 Гц (п=7, р<0,05). Можно сделать вывод, что PPADS сам по себе не влияет на частоту сПСП, в то же время не блокирует рецепторы, дающие вклад в эффект увеличения частоты сПСП при АТФ.

Таким образом, можно полагать, что эффекты уменьшения частоты ГДП при аппликации АТФ и увеличения частоты сПСП не устраняются PPADS, а, следовательно, скорее всего, обусловлены подклассами метаботропных P2Y рецепторов, не чувствительными ни к PPADS, ни к UTP. Тем не менее, уменьшение частоты ГДП при приложении PPADS указывает на участие в генерации ГДП определенных подтипов ионотропных и метаботропных рецепторов, чувствительных к PPADS.

Изучение действия А ТФ на фоне тетродотоксина.

Тетродотоксин (ТТХ) известен как блокатор натриевых каналов. Это вещество блокирует возникновение потенциалов действия. В наших экспериментах с добавлением ТТХ в концентрации 1 мкМ мы наблюдали полную блокаду ГДП. При аппликации на фоне тетродотоксина АТФ в концентрации 50 мкМ картина оставалось той же, что и после аппликации ТТХ. Аппликация АТФ на фоне ТТХ позволила рассмотреть влияние АТФ непосредственно на синаптические входы на регистрируемых нейронах, исключив сетевые эффекты, связанные с влиянием со стороны других клеток. После аппликации ТТХ регистрируемая частота сПСП уменьшалась с контрольной 4,1 ± 0,8 Гц до 2,8 + 0,4 Гц (п=3, р<0,05). Аппликация

АТФ в концентрации 50 мМ изменяла частоту сПСП с контрольной 2,8 ± 0,4 Гц до 2,5 + 0,5 Гц (п=3). Эти изменения были статистически не значимыми р > 0.05. Отсюда можно сделать вывод, что АТФ не действует непосредственно на частоту спонтанного выброса медиатора в синапсах на регистрируемых пирамидных нейронах области САЗ, а, скорее всего, влияет на работу других нейронов, действие которых мы исключили, применив ТТХ.

Таким образом, можно предположить, что наблюдаемый в пирамидных нейронах эффект уменьшения частоты ГДП и увеличение частоты сПСП при аппликации АТФ имеет сетевую природу и не связан непосредственно с прямым воздействием на рецепторы мембраны, формирующей синапс на регистрируемом нейроне области САЗ.

Исследование влияния АТФ на фоне пикротоксина и

Чтобы выяснить вклад ГАМКергических волокон в генерацию ГДП мы добавляли блокатор ГАМК - пикротоксин (ПТХ). После аппликации ПТХ концентрации 100 мкМ наблюдалось полное исчезновение ГДП. При добавлении на фоне ПТХ АТФ в концентрации 50 мкМ гигантские потенциалы также отсутствовали. При аппликации пикротоксина в концентрации 100 мкМ частота сПСП изменялась: в контроле 5,7 ± 1,2 Гц; при аппликации ПТХ 0,1± 0,03 Гц (п= 10, р<0,5). Результат соответствовал сведениям о хорошей развитости ГАМКергических синапсов в этом возрасте. При добавлении АТФ в концентрации 50 мкМ на фоне ПТХ частота сПСП изменялась от 0,1±0,03 Гц до 0,12± 0,03 Гц при аппликации АТФ на фоне пикротоксина (п=10, р>0,5).

й^Х известен блокирующим действием на АМПА рецепторы. Мы использовали в экспериментах ОМСЗХ в концентрации 40 мкМ. После включения протока, содержащего Э^Х, наблюдалось полное блокирование ГДП, что говорило о важной роли глутаматергических входов в распространении ГДП. Исследуемый эффект влияния 50 мкМ АТФ на частоту ГДП не мог быть воспроизведен в отсутствии ГДП при блокированных глутаматергических входах. На фоне аппликации ОМОХ (40 мкМ) мы наблюдали изменения частоты сПСП от контрольных 5,8 ± 1,0 Гц до 5,9 ± 0,8 Гц (п=3). Изменения носили статистически незначимый характер р > 0.05. После того, как на фоне 0№2Х была апплицирована АТФ (50 мкМ), частота сПСП изменилась от контрольных 5,9 + 0,8 Гц до 5,8 ± 1,3 Гц (п=3, р>0,05). Таким образом, при

блокировании глутаматергических входов исследуемый феномен влияния АТФ на частоту сПСП не воспроизводился.

Модельное представление генерации и распространения гигантских потенциалов.

Чтобы проанализировать механизм влияния АТФ на ритмическую активность гиппокампа, мы попытались смоделировать гигантский потенциал с помощью программы Нейроимитатор. Путем варьирования параметров ритма пейсмекера в модели в пределах от 0 до 250 Гц были получены результаты, соответствующие экспериментальным данным. Оказалось, что при варьировании ритма пейсмекера, частота, при которой воспроизводились ГДП в модели, была 200 - 250 Гц (пачка 5-8 импульсов). За счет наличия электрической связи между интернейронами в модели наблюдалось коротколатентное распространение сигнала между интернейронами, что имитировало синхронизацию работы интернейронов. При более редком или частом ритме разряда пейсмекера не проявлялась характерная форма ГДП. При более редком ритме разряда пейсмекера в модельных экспериментах ГДП по длительности и амплитуде была гораздо меньше экспериментальной. При более высоком ритме разряда пейсмекера модельный ГДП по форме отличался от экспериментального. При различных мембранных потенциалах модельной клетки (60 мВ; -100 мВ) построенная нейронная сеть воспроизводила экспериментальные ГДП, записанные в нейроне области САЗ. Примечательно, что при изменении мембранного потенциала регистрируемой клетки в сторону более низких потенциалов, как в экспериментах, так и в модели (изменяли порог в регистрируемом модельном пирамидном нейроне) мы видели, что на ГДП наблюдается гораздо меньше спайков, чем при более высоких потенциалах. Это связано с тем, что деполяризация регистрируемой клетки при снижении мембранного потенциала не доходила до уровня срабатывания натриевых каналов, и потенциал действия на фоне ГДП не возникал.

Как модельные, так и экспериментальные ГДП являются результатом одновременной активации множества входов, и их появление не зависит от изменения мембранного потенциала в регистрируемом нейроне. Для исследования феномена ГДП результат моделирования сравнивался с экспериментальными записями, полученными от пирамидных клеток поля САЗ гиппокампа новорожденных

крыс при блокировании ГАМКергических, глутаматергических и электрических связей. Экспериментам с пикротоксином (100 мкМ) (блокатор ГАМКергических связей) в модели соответствовало отключение возбужающих входов ВЭ1-ВЭ1 и ВЭ1-ВЭ2. Результат модельных экспериментов соответствовал экспериментальным данным, в которых показано, что при добавлении пикротоксина наблюдается полное исчезновение ГДП. Блокированию глутаматергических связей DNQX (40 мкМ) в модели соответствовало отключению связей ВЭ2-ВЭ2. При отключении глутаматергических входов в модели мы не наблюдали ГДП, что совпадало с результатами экспериментов. При этом экспериментальные данные демонстрируют, что при аппликации пикротоксина почти полностью исчезает спонтанная синаптическая активность, а при аппликации DNQX она не меняется статистически значимым образом. В модельных экспериментах при имитации блокирования ГАМКергических связей мы видели полное исчезновение какой-либо активности в регистрируемой клетке. Эти данные говорят о том, что ГАМКергические синаптические входы на пирамидные нейроны области САЗ новорожденного гиппокампа значительно более развиты, чем глутаматергические. Экспериментам с блокатором электрической связи октанолом (Strata et al., 1997, Рис. 8 А) соответствовало модельное представление с отключенной электрической связью ВЭ1-ВЭ1. Электрическая связь между интернейронами является важным звеном в генерации ГДП, обеспечивая синхронизацию разрядов интернейронов. В модели при отключении электрической связи ГДП распадался на две независимые пачки разрядов нейрона, возникающие за счет синаптической задержки между интернейронами. Данные модельных экспериментов согласуются с литературными экспериментальными данными, где при блокаде октанолом электрических синапсов исчезали ГДП.

Таким образом, как экспериментальные данные, так и результаты моделирования нейронной сети показывают, что наличие ГАМКергических, глутаматергических и электрических связей является необходимым условием для генерации ГДП.

Анализ механизма действия А ТФ на частоту ГДП на основе нейросетевой модели гиппокампа новорожденных крыс.

Из наших экспериментальных данных влияния АТФ на ГДП и на спонтанную синаптическую активность можно сделать вывод, что во всех экспериментах не наблюдается какое-либо изменение формы и длительности ГДП и амплитуды и длительности сПСП. Наблюдаются изменения только частоты ГДП и сПСП. Следовательно, исходя из нашей модели ГДП, мы можем предположить, что АТФ и аденозин не влияют на ритм внутри пачки разрядов пейсмекерного интернейрона и на параметры синаптических связей, определяющих форму и длительность ГДП, а, скорее всего, влияют на гиперполяризационные токи 1И пейсмекерных интернейронов, играющих роль механизма, определяющего периодичность ГДП.

Заключение

В экспериментах с аппликацией АТФ была выявлена способность АТФ модулировать ритм ГДП и спонтанной синаптической активности. Был обнаружен дуальный характер влияния АТФ. С одной стороны, при аппликации АТФ частота ГДП уменьшалась, при этом чем большую концентрацию АТФ апплицировали, тем эффект был более выражен. С другой стороны, при аппликации АТФ частота спонтанной синаптической активности увеличивалась, и эффект увеличения был тем больше, чем большую концентрацию АТФ использовали. В наших экспериментах была показана роль пуринорецепторов в описанных феноменах АТФ. Согласно существующей гипотезе генеза гигантских деполяризующих потенциалов, наличие обратных возбуждающих связей определяет активность нейронной сети гиппокампа новорожденных животных. Однако такое представление не может объяснить экспериментальных данных, полученных при блокировании электрических связей октанолом и механизм синхронизации в сети. Наша модель включает в себя помимо глутаматергических и ГАМКергических связей электрические связи между интернейронами. По нашему мнению, такие контакты обеспечивают синхронное срабатывание одновременно множества клеток, что приводит к появлению гигантских деполяризующих потенциалов. Исходя из предложенной модели генеза

ГДП, предположено влияние АТФ на гиперполяризационные токи в интернейронах, что и определяет модуляцию ритма ГДП и сПСП.

Выводы

1. АТФ способна модулировать работу нейронной сети гиппокампа новорожденных крыс. АТФ уменьшает частоту гигантских деполяризующих потенциалов в зависимости от приложенной концентрации. Угнетающий эффект выражен тем больше, чем большая концентрация АТФ апплицирована.

2. АТФ модулирует частоту спонтанной синаптической активности, регистрируемой в пирамидных клетках гиппокампа новорожденных крыс. АТФ увеличивает частоту спонтанных постсинзлтических потенциалов в зависимости от приложенной концентрации. Эффект увеличения частоты спонтанных постсинаптических потенциалов выражен тем сильнее, чем большая концентрация АТФ апплицирована.

3. Выявлено участие ионотропных Р2Х4 пуринорецепторов и Al аденозиновых рецепторов, исключено влияние Р2Х1, Р2ХЗ, P2Y2, P2Y3, P2Y4 в комплексном эффекте АТФ на пирамидных клетках новорожденного гиппокампа.

4. Создана модель, описывающая ряд характеристик гигантских деполяризующих потенциалов, регистрируемых в пирамидных нейронах области САЗ гиппокампа новорожденных крыс.

5. Исходя из предложенного в модели пейсмекерно-сетевого механизма генерации и распространения гигантских деполяризующих потенциалов, предположено модулирующее влияние АТФ и аденозина на ритм гигантских потенциалов и спонтанных постсинаптических потенциалов через воздействие на гиперполяризационные Ih токи в интернейронах.

Благодарности

Автор выражает благодарность своему научному руководителю Эзрохи Вадиму Львовичу, а также профессорам Гиниатуллину Рашиду Асхатовичу, Керубини Энрико

и Касьянову Александру Михайловичу за ценные советы, замечания и помощь в работе.

Список работ, подготовленных по теме диссертации

1. Сафиулина В.Ф., Касьянов A.M., Соколова Е.М., Мельник В.И., Эзрохи В.Л., Гиниатуллин Р.А. (2003) Модулирующие действие аденозинтрифосфата на осцилляторные свойства гиппокампальных нейронов в раннем онтогенезе. Ж. высш. нервн. деят., Т. 53, № 4, с. 446-450.

2. Сафиулина В.Ф., Касьянов А.М., Бикбулатова Л.И., Соколова Е.М., Эзрохи В.Л., Гиниатуллин Р.А. (2003) Влияние АТФ на спонтанную ГАМКэргическую активность в гиппокампе новорожденных крыс. ДАН, Т. 393, № 2, стр. 1-2.

3. Сафиулина В.Ф., Касьянов А.М., Дворжак А.Ю., Эзрохи В.Л., Гиниатуллин Р.А, (2003) Модулирующее влияние АТФ на осциллятивные свойства нейронов в новорожденном гиппокампе. Тезисы 7-й Пущинской школы-конференции молодых ученых «БИОЛОГИЯ - НАУКА XXI ВЕКА».

4. Safiulina V.F., Kasyanov А.М. (2003) Modulation network-driven activity in the neonatal hippocampus by purine receptors. "Neuroprotection and Neurorepair" 3rd International Symposium, Magdeburg, P. 35.

5. Dvorgak AY, Safiulina VF, Kasyanov AM. (2003) Modeling of spontaneous activity in the neonatal rat hippocampus. "Neuroprotection and Neurorepair" 3rd International Symposium, Magdeburg, P. 34.

6. Сафиулина В.Ф., Касьянов A.M., Мурзина Г.Б, Скоринкин А.И., Котов Н.В., Эзрохи В.Л., Гиниатуллин Р.А. (2003) Исследование механизма возникновения гигантских деполяризующих потенциалов в нейронах гиппокампа новорожденных крыс. Ж. высш. нервной деят. им. Павлова, (принята в печать).

7. Kasyanov А.М., Safiulina V.F., Voronin L.L., Cherubini E. (2003) GABA-mediated giant depolarizing potentials as coincidence detectors for enhancing synaptic efficacy in the developing hippocampus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (принята в печать).

Отпечатано в копицентре «Учебная полиграфия» Москва, Ленинские горы, МГУ, 1 Гуманитарный корпус, www stprint ru e-mail: zakaz@.bipnnt ru тел 939-3338 Заказ № 443, тираж 75 экз. Подписано в печать 21 01 2004 г

Для заметок

I

«

t

РНБ Русский фонд

2007-4 6434

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Сафиулина, Виктория Фаизовна

Глава 1. Введение.

Актуальность проблемы.

Цели и задачи исследования.

Научная новизна.

Теоретическая и практическая значимость.

Апробация.

Положения, выносимые на защиту.

Глава 2. Обзор литературы.

Сетевые свойства гиппокампа в раннем постнатальном периоде развития.

Сигнальная роль пуринов.

АТФ рецепторы.

Аденози новые рецепторы.

Глава 3. Материалы и методы.

Краткое описание структуры гиппокампа.

Приготовление срезов и электрофизиологическая регистрация ответов в переживающих срезах гиппокампа новорожденных крыс.

Протокол электрофизиологической регистрации.

Использование фармакологических веществ.

Обработка данных по ГДП и спонтанной постсинаптической активности.

Статистическая оценка данных.

Компьютерное моделирование сети гиппокампа новорожденного животного.

Глава 4. Результаты исследований.

Результаты экспериментального и теоретического исследования ГДП и спонтанной постсинаптической активности.

Действие АТФ на ГДП и на спонтанную постсинаптическую активность.

Исследование вклада А1 рецепторов в эффект влияния АТФ на

ГДП и спонтанную постсинаптическую активность.

Исследование роли АТФ рецепторов в эффекте модуляции частоты ГДП и частоты спонтанной постсинаптической активности.

Действие а гон истов.

Действие антагонистов.

Эксперименты с блокаторами глутаматергических и ГАМКергических входов.

Влияние тетродотоксина.

Модельное исследование гигантских деполяризующих потенциалов.

Анализ механизма действия АТФ на частоту ГДП на основе нейросетевой модели гиппокампа новорожденных крыс.

Глава 5. Обсуждение результатов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Модулирующее влияние АТФ на нейронную активность области САЗ гиппокампа новорожденных крыс"

Глава 1. Введение Актуальность проблемы

Изучение механизмов, лежащих в основе синаптической передачи, является одним из основных направлений исследований в современной нейробиологии. Нервная система новорожденных животных обладает рядом существенных функциональных особенностей. На раннем этапе развития нервной системы во многих отделах регистрируется спонтанная активность в виде гигантских деполяризующих потенциалов. Общепринятым является предположение, что такая согласованная работа нейронной сети новорожденных животных связана с наличием возвратного возбуждения в сети связанных нейронов и интернейронов. Однако некоторые авторы предполагают наличие пейсмекерного механизма работы сети, хотя работы в этом направлении, связанные с гиппокампом новорожденных животных, не обнаружили убедительных фактов существования пейсмекеров.

• Исследование природы генеза гигантских деполяризующих потенциалов необходимо для понимания клеточных и сетевых особенностей гиппокампа в раннем онтогенезе.

Наличие гигантских потенциалов в раннем возрасте считается необходимым условием для нормального развития нервной системы. Существование гигантских деполяризующих потенциалов свидетельствует о повышенной нейрональной активности в раннем постнатальном возрасте, что может приводить к увеличению концентрации внеклеточной АТФ. АТФ, в свою очередь, может модулировать сетевую активность гиппокампа и влиять на формирования связей и функциональные особенности мозга.

Можно полагать, АТФ и ее производные способны влиять на синаптическую передачу через пуринергические рецепторы. На гиппокампе взрослых животных было показано существование как постсинаптических, так и пресинаптических пуринергических рецепторов. Однако относительно гиппокампа новорожденных животных нет достаточных сведений о распределении и функциях пуринорецепторов. Исследование рецепторных механизмов влияния АТФ на нейрональную активность гиппокампа новорожденных животных важно для понимания нейромодуляторной роли АТФ в раннем онтогенезе.

Практической стороной рассматриваемого вопроса является изучение АТФ как средства, которое обладает нейропротекторными свойствами и используется при гипоксических и ишемических состояниях. Такое исследование позволило бы расширить представления о фармакологических особенностях АТФ.

Цель и задачи исследования

Целью нашей работы является экспериментальное исследование влияния АТФ на синаптическую активность в гиппокампе новорожденных крыс и создание модели, описывающей гигантские деполяризующие потенциалы и механизм влияния на них АТФ. Такая работа предполагает решение следующих основных задач: - исследование изменения частоты гигантских деполяризующих потенциалов и частоты спонтанных постсинаптических потенциалов в зависимости от концентрации апплицируемой АТФ. Фармакологическое исследование вклада пуриновых рецепторов в наблюдаемый эффект АТФ. модельное представление генерации и распространения гигантских деполяризующих потенциалов. Сравнение результатов модели с экспериментальными данными, полученными при регистрации активности пирамидных клеток области СА 3 гиппокампа.

С этой целью проводились электрофизиологические эксперименты на нейронах области СА 3 гиппокампа новорожденных крыс и модельные исследования нейронных сетей.

Научная новизна

1) Впервые показано, что АТФ способна модулировать частоту гигантских деполяризующих потенциалов.

2) Выявлена зависимость частоты гигантских деполяризующих потенциалов и частоты спонтанной синаптической активности от концентрации АТФ. Показано, что

АТФ снижает частоту гигантских деполяризующих потенциалов и увеличивает частоту спонтанной синаптической активности.

3) Выявлено, что в феномене влияния АТФ на частоту гигантских деполяризующих потенциалов и на частоту спонтанной синаптической активности в гиппокампе новорожденных крыс принимают участие ионотропные пуринергические (Р2Х) и аденозиновые (А1) рецепторы.

4) На основе предположения участия электрических связей между интернейронами в генерации гигантских деполяризующих потенциалов впервые создана модель, описывающая форму и длительность гигантских деполяризующих потенциалов в гиппокампе новорожденных крыс.

5) На основе модели, описывающей определенные параметры и свойства гигантских деполяризующих потенциалов (форма, длительность, амплитуда, чувствительность к блокаторам синаптических связей), предложена гипотеза модуляции ритма этих потенциалов за счет воздействия АТФ через пуринорецепторы на гиперполяризационные токи в интернейронах.

Теоретическая и практическая значимость

Данное исследование представляет собой работу по экспериментальному и теоретическому исследованию влияния АТФ на спонтанную электрическую активность гиппокампа новорожденных крыс. Обнаружено ингибирующее действие АТФ на частоту гигантских деполяризующих потенциалов и возбуждающее действие на частоту спонтанных постсинаптических потенциалов. Такое действие обусловлено комплексным эффектом АТФ и ее продукта гидролиза - аденозина. Показано участие пуринорецепторов в модуляции сетевой активности новорожденного гиппокампа. Создана модель, описывающая гигантские деполяризующие потенциалы, на основе которой сделано предположение о влиянии АТФ на гиперполяризационные токи в интернейронах гиппокампа. Полученные новые данные расширяют представление о сетевых механизмах распространения возбуждения и о модулирующих свойствах АТФ в гиппокампе новорожденных крыс. Эти результаты позволили выявить роль АТФ как модулятора нейрональной активности в раннем периоде постнатального развития гиппокампа.

Апробация работы

Основные результаты были доложены на совместном заседании лабораторий нейробиологии обучения и нейроонтогенеза Института высшей нервной деятельности РАН (2003), на 3 - м Международном симпозиуме в Магдебурге "Neuroprotection and Neurorepair", на 7 - й Пущинской школе-конференции молодых ученых «БИОЛОГИЯ - НАУКА XXI ВЕКА » (2003), конференция "Важнейшие достижения ИВНД и НФ" (2003).

Положения, выносимые на защиту

1. АТФ способна модулировать нейронную активность в гиппокампе неональных крыс. Модулирующее действие АТФ связано как с самой АТФ, так и с продуктом ее гидролиза - аденозином.

2. АТФ уменьшает частоту гигантских деполяризующих потенциалов и увеличивает частоту спонтанных постсинаптических потенциалов в зависимости от приложенной концентрации.

3. АТФ модулирует частоту гигатских деполяризующих потенциалов и частоту спонтанных постсинаптических потенциалов через действие на пуринергические (Р2Х) и аденозиновые (А1) пуринорецепторы.

4. Исходя из гипотезы пейсмекерного характера происхождения гигантских деполяризующих потенциалов создана модель, на основе которой предположено влияние АТФ на гиперполяризационные токи в интернейронах.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Сафиулина, Виктория Фаизовна, Москва

1. Галкин А.В., Пряжников Е.Г., Соколова Е.М., Гиниатуллин Р.А. (2001) Оценка тонического и фазного эффекторов эндогенного аденозина на секрецию трансмиттера в нервно-мышечном соединении. Росс. Физиол. Журн. им. И.М. Сеченова Т. 87. № 8. Стр. 1135-1143.

2. Гиниатуллин Р.А., Соколова Е.М. (1998) Модулирующая роль АТФ в нервно-мышечном синапсе. Росс, физиолог, журн. им. И.М. Сеченова. Т. 84. № 10. Стр. 1132-1138.

3. Глебов Р.Н., Крыжановский Г.Н. (1978) "Функциональная биохимия синапса". М: Медицина.

4. Литвинов Е.Г. (2002) Пакет программ "Нейроимитатор" для имитационного моделирования нейронных сетей биологических объектов. Нейрокомпьютеры. Разработка и'применение. № 1-2. Стр. 21-35.

5. Отмахов Н.А. (1993) Нейрональная сеть гиппокампа: морфологический анализ. Усп. Физиолог.Наук. Т.24. № 4. Стр. 79-98

6. Alger a. Nicoll. (1980) Spontaneous inhibitory post-synaptic potentials in hippocampus: mechanism for tonic inhibition. Brain. Res. V.200. № 1. P. 195-200.

7. Amaral D.G. and Witter M.P. (1989) The three-dimensional organization of the hippocampal formation: a review of anatomical data. Neuroscience. V.31. № 3. P.571-591.

8. Andersen P., Bliss V.P., Skrede K.K. (1971) Lamellar organization of hippocampal excitatory pathways. Exp. Brain. Res. V.13. P.222-238.

9. Andersen P. (1999) Neurobiology. A spine to remember. Nature. V.399. № 6731. P.19-21.

10. Armstrong J.N., Brust T.B., Lewis R.G. and MacVicar B.A. (2002) Activation of Presynaptic P2X7 -Like Receptors Depresses Mossy Fiber-САЗ Synaptic Transmission through p38 Mitogen-Activated Protein Kinase. J.Neuroscience. V.22. № 14. P.5938-5945

11. Barbin G, Pollard H, Gaiarsa JL, Ben Ari Y (1993) Involvement of GABAa receptors in the outgrowth of cultured hippocampal neurons. Neurosci. Lett. V.152. P.150-154.

12. Behar T.N., Schaffner A.E., Colton C.A., Somogyi R., Olah Z., Lehel C., Barker J.L. (1994) GABA-induced chemokinesis and NGF-induced chemotaxis of embryonic spinal cord neurons. J.Neurosci. V.14. P.29-38.

13. Ben-Ari Y. (2002) Excitatory actions of gaba during development: the nature of the nurture. Nat.Rev.Neurosci. V.3. №.9. P.728-739.

14. Ben-Ari Y., Cherubini E., Corradetti R. and Gaiarsa J.L. (1989) Giant synaptic potentials in immature rat CA3 hippocampal neurones. J. Physiol. V.416. P.303-325.

15. Bender R., Hoffmann M.C., Frotscher M., Nitsch C.(2001) Species-specific expression of parvalbumin in the entorhinal cortex of the Mongolian gerbil : dependence on local activity but not extrinsic afferents. Neuroscience. V.99. P.423-431.

16. Blanton M.G. et al.(1989) Whole cell recording from neurons in slices of reptilian and mammalian cerebral cortex. J. Neurosci. Methods. V.30. № 3. P.203-210.

17. Bradford H.F., Jones D.G., Ward H.K., Booher J.(1975) Biochemical and morphological studies of the short and long term survival of isolated nerve-endings. Brain Research. V.90. № 2. P.245-259.

18. Buell G., Collo G., Rassendren F. (1996) P2X receptors: an emerging channel family. Eur J Neurosci. V. 8. № 10. P.2221-2228.

19. Burnstock G. (1972). Purinergic nerves. Pharmacol. Rev. V.24. № 3. P.509-581

20. Buzsaki G. and Chrobak J J. (1995) Temporal structure in spatially organized neuronal ensembles: a role for interneuronal networks. Curr Opin Neurobiol. V.5. № 4. P.504-510.

21. Caciagli F., Ciccarelli R., Di Iorio P., Ballerini P., Tacconelli L. (1988) Cultures of glial cells release purines under field electrical stimulation: the possible ionic mechanisms. Pharmacol Res Commun. V.20. № 11. P.935-947.

22. Chen K., Aradi I., Thon N., Eghbal-Ahmadi M., Baram T.Z., Soltesz 1.(2001) Persistently modified h-channels after complex febrile seizures convert the seizure-induced enhancement of inhibition to excitability. Nat. Med. V.l. P.331-337.

23. Clapham D.E. (1998) Not so funny anymore: pacing channels are cloned. Neuron. V.21. P.5-7.

24. Clarke L.L. and Boucher R.C. (1992) Chloride secretory response to extracellular ATP in human normal and cystic fibrosis nasal epithelia. Am J Physiol. V.263. № 2. Ptl. P.348-356.

25. Cloues R., Jones S., Brown D.A. (1993) Zn2+ potentiates ATP-activated currents in rat sympathetic neurons. Pflugers Arch. V.424. № 2. P.152-158.

26. Cobb S.R., Buhl E.H., Halasy K., Paulsen 0. and Somogyi P. (1995) Synchronization of neuronal activity in hippocampus by individual GABAergic interneurons. Nature. V.378. № 6552. P.75-78.

27. Collo G., North R.A., Kawashima E., Merlo-Pich E., Neidhart S., Surprenant A.(1996) Cloning of P2X5 and P2X6 receptors and the distribution and properties of an extended family of ATP-gated ion channels. J. Neurosci. V.16. P.2495-2507

28. Cook S.P. and MacCleskey E.W. (1997) Desensitization, recovery and Ca(2+)-dependent modulation of ATP-gated P2X receptors in nociceptors. Neuropharmacology. V.36. №9. P. 1303-1308.

29. Connor J.A., Tseng H.Y., Hockberger P.E. (1987) Depolarization- and transmitter-induced changes in intracellular Ca2+ of rat cerebellar granule cells in explanted culture. J. Neurosci. V.7. P. 1384-1400 .

30. Delaney S.M. and Geiger J.D. (1996) Brain regional levels of adenosine and adenosine nucleotides in rats killed by high-energy focused microwave irradiation. J. Neurosci. Methods. V.64. № 2. P.151-156.

31. Deuchars S.A., Atkinson L., Brooke R.E. et al.(2001) Neuronal P2X7 receptors are targeted to presynaptic terminals in the central and peripheral nervous systems. J.Neurosci.V.21. № 18. P.7143-7152

32. DiFrancesco D. (1993). Pacemaker mechanisms in cardiac tissue. Annu. Rev. Physiol. V.55. P.455-472.

33. Dubyak G.R. and el-Moatassim C. (1993) Signal transduction via P2-purinergic receptors for extracellular ATP and other nucleotides.Am 3 Physiol. V.265. № 3. Pt 1. P.577-606.

34. Dunwiddie T.V., Diao L., Proctor W.R. (1997a) Adenine nucleotides undergo rapid, quantitative conversion to adenosine in the extracellular space in rat hippocampus. J Neurosci. V.17. № 20. P.7673-7682.

35. Dunwiddie T.V., Diao L., Kim H.O., Jiang J.L., Jacobson K.A. (19976) Activation of hippocampal adenosine A3 receptors produces a desensitization of A1 receptor-mediated responses in rat hippocampus. J. Neurosci. V.17. № 2. P.607-614.

36. Dunwiddie T.V. and Diao L. (1994) Extracellular adenosine concentrations in hippocampal brain slices and the tonic inhibitory modulation of evoked excitatory responses. J. Pharmacol. Exp. Ther. V.268. № 2. P.537-545.

37. Dunwiddie T.V. and Hoffer BJ. (1980) Adenine nucleotides and synaptic transmission in the in vitro rat hippocampus. Br J Pharmacol. V.69. № 1. P.59-68.

38. Dunwiddie T.V. and Masino S.A. (2001) The role and regulation of adenosine in the central nervous system. Annu. Rev. Neurosci. V.24. P.31-55.

39. Edwards F.A., Gibbs AJ. (1993) ATP—a fast neurotransmitter. FEBS Letters, V.325. № 1. P.86-89.

40. Feoktistov I. and Biaggioni I. (1997) Adenosine A2B receptors. Pharmacol Rev. V.49. № 4. P.381-402.

41. Finch D.M., Nowlin N.L. and Babb T.L. (1983) Demonstration of axonal projections of neurons in the rat hippocampus and subiculum by intracellular injection of HRP. Brain Res. V.271. P.201-216

42. Fredholm B.B. (1982) Adenosine actions and adenosine receptors after 1 week treatment with caffeine. Acta Physiol. Scand. Pharmacol. V.351. P.194-201.

43. Fredholm B.B., Jonzon B. and Lindgren E. (1984) Changes in noradrenaline release and in beta receptor number in rat hippocampus following long-term treatment with theophylline or L-phenylisopropyladenosine. Acta Physiol. Scand. V.122. P.55-59.

44. Fredholm B.B., Jzerman A.P., Jacobson K.A., Klotz K.N., Linden J. (2001) International Union of Pharmacology. XXV. Nomenclature and classification of adenosine receptors. Pharmacol. Rev. V.53. № 4. P.527-52.

45. Freund T.F. and Buzsaki G. (1996) Interneurons of the hippocampus. Hippocampus. V.6. № 4. P.347-470.

46. Galli L. and Maffei L. (1988) Spontaneous impulse activity of rat retinal ganglion cells in prenatal life. Science. V.242. № 4875. P.90-91.

47. Galarreta M. and Hestrin S. (2001) Electrical synapses between GABA-releasing interneurons. Nat. Rev. Neurosci. V.2. № 6. P.425-433.

48. Galkin A.V., Giniatullin R.A., Mukhtarov M.R. et al.(2001) ATP but not adenosine inhibits nonquantal acetylcholine release at the mouse neuromuscular junction. Eur. J. Neurosci. V.13. № 11. P.2047-2053.

49. Garaschuk O., Hanse E. and Konnerth A. (1998) Developmental profile and synaptic origin of early network oscillations in the CA1 region of rat neonatal hippocampus. J Physiol. V. 15. № 507. Pt.l. P.219-236.

50. Gasparini S., Saviane C., Voronin L.L., Cherubini E.(2000) Silent synapses in the developing hippocampus: Lack of functional AMPA receptors or low probability of glutamate release? Proc. Natl. Acad. Sci. USA. V.97. № 17. P.39741-39746.

51. Giniatullin R.A., Sokolova E.M.(1998) ATP and adenosine inhibit transmitter release at the frog neuromuscular junction through distinct presynaptic receptors. Br. J. Pharmacol. V.124. № 4. P.839-844

52. Greene R.W., Haas H.L. (1991) The electrophysiology of adenosine in the mammalian central nervous system. Prog. Neurobiol. V.36. № 4. P.329-341.

53. Gu X. and Spitzer N.C. (1995) Distinct aspects of neuronal differentiation encoded by frequency of spontaneous Ca2+ transients. Nature. V.375. № 6534. P.784-787.

54. Hamill O.P., Sakmann B. (1984) Multiple conductance states of single acetylcholine receptor channels in embryonic muscle cells. Nature. V.294. № 5840. P.462-464.

55. Harden T.K., Boyer J.L., Nicholas R.A. (1995) P2-purinergic receptors: subtype-associated signaling responses and structure. Annu Rev Pharmacol Toxicol. V.35. P.541-579.

56. Hinkle L., McCaig C.D., Robinson K.R. (1981) The direction of growth of differentiating neurones and myoblasts from frog embryos in an applied electric field. J Physiol. V.314. P.121-135.

57. Honore Е., Martin С., Mironneau С., Mironneau J. (1989) An ATP-sensitive conductance in cultured smooth muscle cells from pregnant rat myometrium. Am. J. Physiol. V.257. №2. Pt.l. P.297-305.

58. Humphrey P., Buell G., Kennedy I., Khakh B.S., Michel A.D., Surprenant A. and Trezise D.J. (1995) New insights on P 2X purinoceptors. Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. V.352. P.585-596.

59. Ikeuchi Y., Nishizaki Т., Mori M. and Okada Y. (1996) Adenosine activates conductance in К channel and enhances cytosolic Ca 21 release via a P purinoceptor in hippocampal neurons. Eur. J. Pharmacol. V.304. P.191-199.

60. Inoue K., Nakazawa K., Fujimori K., Watano T. and Takanaka A. (1992) Extracellular adenosine 59-triphosphate-evoked glutamate release in cultured hippocampal neurons. Neurosci Lett. V.134. P.215-218.

61. Ishii T.M., Takano M., Xie L.H., Noma A., Ohmori H. (1999). Molecular characterization of the hyperpolarization-activated cation channel in rabbit heart sinoatrial node. 3. Biol. Chem. V.274. P.12835-12839.

62. Ishizuka N., Weber J., Amaral D.G. (1990) Organization of intrahippocampal projections originating from CA3 pyramidal cells in the rat. J Comp Neurol V.295. P.580-623.

63. Jacobson M. (1991) Developmental neurobiology, 3rd Ed, P. 212-214. Press: New York: Plenum

64. Kawaguchi Y. and Kubota Y. (1993) Correlation of physiological subgroupings of nonpyramidal cells with parvalbumin- and calbindinD28k-immunoreactive neurons in layer V of rat frontal cortex. J. Neurophysiol. V.70. № 1. P.387-396.

65. Khazipov R., Leinekugel X., Khalilov I., Gaiarsa J.L. and Ben-Ari Y. (1997) Synchronization of GABAergic interneuronal network in CA3 subfield of neonatal rat hippocampal slices. J. Physiol. V.498. Pt.3. P.763-772.

66. Khazipov R., Esclapez M., Caillard O., Bernard C., Khalilov I., Tyzio R., Hirsch J., Dzhala V., Berger B. and Ben-Ari Y. (2001) Early development of neuronal activity in the primate hippocampus in utero. J. Neurosci. V.21. № 24. P.9770-9781.

67. Kennedy C. and Leff P. (1995) Painful connection for ATP. Nature. V.377. № 6548. P.385-386.

68. King B.F., Ziganshina L.E., Pintor J. and Burnstock G. (1996) Full sensitivity of P2X2 purinoceptor to ATP revealed by changing extracellular pH. BrJ. Pharmacol. V.117. P.1371-1373.

69. Kocsis J.D., Eng D.L., Bhisitkul R.B. (1984) Adenosine selectively blocks parallel-fiber-mediated synaptic potentials in rat cerebellar cortex. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A., V.81. № 20. P.6531-6534.

70. Li C., Peoples R.W. and Weight F.F. (1997) Mg 21 inhibition of ATP-activated current in rat nodose ganglion neurons: Evidence that Mg 21 decreases the agonist affinity of the receptor. J. Neurophysiol. V.77. P.3391-3395.

71. Li C., Peoples R.W. and Weight F.F. (1996) Proton potentiation of ATP-gated ion channel responses to ATP and Zn 21 in rat nodose ganglion neurons. J. Neurophysiol. V.76. P.3048-3058.

72. Lorente de No R.(1934) Studies on the structure of cerebral cortex. II. Continuation of the study of the ammonic system. 3. Psychol. Neurol. V.45. P.381-438.

73. Luthi A., McCormick D.A. (1998). H-current: properties of a neuronal and network pacemaker. Neuron. V.21. P.9-12.

74. Leinekugel X., Khazipov R., Cannon R., Hirase H., Ben-Arl Y. and Buzsaki G. (2002) Correlated bursts of activity in the neonatal hippocampus in vivo. Science. V.296. №.5575. P.2049-2052.

75. Maccaferri G. and McBain C.J. (1996) The hyperpolarization-activated current (Ih) and its contribution to pacemaker activity in rat CA1 hippocampal stratum oriens-alveus interneurones. J. Physiol. V.497. Pt 1. P. 119-130.

76. Maggi L., Sher E. and Cherubini E. (2001) Regulation of GABA release by nicotinic acetylcholine receptors in the neonatal rat hippocampus. J. Physiol. V.536. Pt 1. P.89-100.

77. Massengill J.L., Smith M.A., Son D.I., O'Dowd D.K. (1997) Differential Expression of K4-ap Currents and Kv3.1 Potassium Channel Transcripts in Cortical Neurons that Develop Distinct Firing Phenotypes . J. Neurosci. V.17. №.9. P.3136-3147

78. Meier E., Drejer J., Schousboe A. (1983) Trophic actions of GABA on the development of physiologically active GABA receptors. In: CNS-receptors from molecular pharmacology to behaviour (Mandel P, DeFeudis FV, eds). Press: New York, Raven.

79. Meister M., Wong R.O., Baylor D.A. and Shatz C.J. (1991) Synchronous bursts of action potentials in ganglion cells of the developing mammalian retina. Science. V.252. № 5008. P.939-943.

80. Mendoza-Fernandez V., Andrew R.D., Barajas-Lopez C. (2000) ATP inhibits glutamate synaptic release by acting at P2Y receptors in pyramidal neurons of hippocampal slices. Journal of Pharmacology and Experimental. Therapeutics. V.293. № 1 P. 172-179.

81. Menendez de la Prida L., Bolea S., Sanchez-Andres JV. (1996)Analytical characterization of spontaneous activity evolution during hippocampal development in the rabbit. Neurosci Lett. V.218. № 3. P. 185-187.

82. Menendez de la Prida L., Bolea S. and Sanchez-Andres J.V. (1998)Origin of the synchronized network activity in the rabbit developing hippocampus. Eur. J. Neurosci. V.10. № 3. P.899-906.

83. Messersmith E.K. and Redburn D.A. (1993) The role of GABA during development of the outer retina in the rabbit. Neurochem. Res. V.18. № 4. P.463-470.

84. Miles R. and Wong R.K. (1986) Excitatory synaptic interactions between CA3 neurones in the guinea-pig hippocampus. J. Physiol. V.373. P.397-418.

85. Monteggia L.M., Eisch A.J., Tang M.D., Kaczmarek L.K., Nestler E.J. (2000). Cloning and localization of the hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel family in rat brain. Mol. Brain Res. V.81. P.129-139.

86. Moosmang S., Biel M., Hofmann F., Ludwig A.(1999). Diierential distribution of four hyperpolarization-activated cation channels in mouse brain. Biol. Chem. V.380. P.975-980.

87. Nakazawa K., Fujimori K., Takanaka A. and Inoue K. (1990) An ATP-activated conductance in pheochromocytoma cells and its suppression by extracellular, calcium. J Physiol (Lond). V.428. P.257-272.

88. O'Donovan M.J. (1999) The origin of spontaneous activity in developing networks of the vertebrate nervous system. Curr. Opin. Neurobiol. V.9. № 1. P.94-104.

89. Ongini E., Adami M., Ferri C., Bertorelli R. (1997) Adenosine A2A receptors and neuroprotection. Ann. N Y Acad. Sci. V.825. P.30-48.

90. Pankratov Y., Castro E., Miras-Portugal M.T., Krishtal 0. (1998) A purinergic component of the excitatory post-synaptic current mediated by P2X receptors in the CA1 neurons of the rat hippocampus. Eur. J. Neurosci. V.10. P.3898 -3902.

91. Pankratov Y., Lalo U., and Krishtal O. (2002) Role for P2X Receptors in Long-Term Potentiation. J. Neurosci. V.22. № 19. P.8363-8369

92. Pintor J., Diaz-Hernandez M., Bustamante C., Gualix J., de Terreros F.J., MirasPortugal M.T. (1999) Presence of dinucleotide and ATP receptors in human cerebrocortical synaptic terminals. Eur. J. Pharmacol. V.366. № 2. P.159-165.

93. Purves D. and Lichtman J.W.(1985). Geometrical differences among homologous neurons in mammals. Science. V.228. № 4697. P.298-302.

94. Ralevic V. and Burnstock G.(1998) Receptors for purines and pyrimidines. Pharmacol Rev. 1998. V.50. № 3. P.413-492.

95. Reichling D.B., Kyrozis A., Wang J., MacDermott A.B. (1994) Mechanisms of GABA and glycine depolarization-induced calcium transients in rat dorsal horn neurons. J. Physiol. V.476. № 3. P.411-421.

96. Rivera Cv Voipio J., Payne J.A., Ruusuvuori E., Lahtinen H., Lamsa K., Pirvola U., Saarma M. and Kaila K. (1999) K+/CI- co-transporter KCC2 renders GABA hyperpolarizing during neuronal maturation. Nature. V.397. № 6716. P.251-255.

97. Rubio M.E. and Soto F. (2001) Distinct Localization of P2X Receptors at Excitatory Postsynaptic Specializations. J. Neurosci. V.21. P.641-653.

98. Santoro B., Liu D.T., Yao H., Bartsch D., Kandel E.R., Siegelbaum S.A., Tibbs G.R. (1998) Identification of a gene encoding a hyperpolarization-activated pacemaker channel of brain. Cell. V.93. № 5. P.717-729.

99. Santoro B., Chen S., Luthi A., Pavlidis P., Shumyatsky G.P., Tibbs G.R., Siegelbaum S.A. (2000) Molecular and functional heterogeneity of hyperpolarization-activated pacemaker channels in the mouse CNS. J. Neurosci. 2000. V.20. № 14. P.5264-5275.

100. Scanziani M., Capogna M., Gahwiler B.H., Thompson S.M. (1992) Presynaptic inhibition of miniature excitatory synaptic currents by baclofen and adenosine in the hippocampus. Neuron. V. 9. № 5. P.919-927.

101. Séguéla P., Haghighi A., Soghomonian JJ., Cooper E. (1996) A novel neuronal P2X ATP receptor channel with widespread distribution in the brain. J. Neurosci. V.16. P.448-455

102. Sik A., Penttonen M., Ylinen A. and Buzsaki G. (1995) Hippocampal CA1 interneurons: an in vivo intracellular labeling study. J. Neurosci. V.15. № 10. P.6651-6665.

103. Soto F., Garcia-Guzman M., Gomez-Hernandez J.M., Hollmann M.# Karschin C., Stuhmer W. (1996a) P2X4: and ATP-activated ionotropic receptor cloned from rat brain. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. V. 93. P.3684-3688.

104. Soto F., Garcia-Guzman M., Karschin C., Stuhmer W. (1996b) Cloning and tissue distribution of a novel P2X receptor from rat brain. Biochem. Biophys. Res. Commun. V.223. P.456-460.

105. Spitzer A.R. (1994) Spontaneous Ca2+ spikes and waves in embryonic neurons: signaling systems for differentiation. Trends Neurosci. V.17. № 3. P.115-118.

106. Stutts M J., Chinet T.C., Mason S.J., Fullton J.M., Clarke L.L., Boucher R.C. (1992) Regulation of CI- channels in normal and cystic fibrosis airway epithelial cells by extracellular ATP. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. V.89. № 5. P.1621-1625

107. Tabak J., Senn W., O'Donovan MJ. and Rinzel J. (2000) Modeling of spontaneous activity in developing spinal cord using activity-dependent depression in an excitatory network. J. Neurosci. V.20. № 8. P.3041-3056.

108. Traub R.D., Kopell N., Bibbig A., Buhl E.H., LeBeau F.E. and Whittington M.A. (2001) Gap junctions between interneuron dendrites can enhance synchrony of gamma oscillations in distributed networks. J.Neurosci. V.21. № 23. P.9478-9486.

109. Traub R.D., Bibbig A., Piechota A. (2001) Synaptic and nonsynaptic contributions to giant ipsps and ectopic spikes induced by 4-aminopyridine in the hippocampus in vitro. 3. Neurophysiol. V.85. № 3. P.1246-1256.

110. Troadec J.D., Thirion S., Nicaise G., Lemos J.R., Dayanithi G. (1998) ATP-evoked increases in Ca2+.i and peptide release from rat isolated neurohypophysial terminals via a P2X2 purinoceptor. J Physiol. V.511. Pt 1. P.89-103.

111. Trussell L.O., Jackson M.B. (1987) Dependence of an adenosine-activated potassium current on a GTP-binding protein in mammalian central neurons. J. Neurosci. V.7. № 10. P.3306-3316.

112. Turner D.A. and Schwartzkroin P.A. (1983) Electrical characteristics of dendrites and dendritic spines in intracellular^ stained CA3 and dentate hippocampal neurons. J Neurosci. V.3. № 11. P.2381-2394.

113. Vasilyev D.V and Barish M.E. (2002) Postnatal development of the hyperpolarization-activated excitatory current Ih in mouse hippocampal pyramidal neurons. J Neurosci. V.15. № 22. P.8992-9004.

114. Virginio C., North R.A., Surprenant A.(1998) Calcium permeability and block at homomeric and heteromeric P2X2 and P2X3 receptors, and P2X receptors in rat nodose neurones. J Physiol. V.510. Pt 1. P.27-35.

115. Volgushev M., Voronin L.L., Chistiakova M., Artola A., Singer W. (1995) All-or-none excitatory postsynaptic potentials in the rat visual cortex. Eur J. Neurosci. V.7. № 8. P.1751-1760.

116. Wieraszko A. and Seyfried T.N. (1989) Stimulation-dependent release of adenosine triphosphate from hippocampal slices. Brain Res. V.485. № 2. P.244-250.

117. Wu L.G., Saggau P.(1994) Adenosine inhibits evoked synaptic transmission primarily by reducing presynaptic calcium influx in area CA1 of hippocampus. Neuron. V.12. № 5. P.1139-1148.

118. Zhu PJ., Krnjevic K. (1993) Adenosine release is a major cause of failure of synaptic transmission during hypoglycaemia in rat hippocampal slices. Neurosci. Lett. V. 155. № 2. P.128-131.

119. Zhu P.J., Krnjevic K.(1997) Endogenous adenosine on membrane properties of CA1 neurons in rat hippocampal slices during normoxia and hypoxia. Neuropharmacology. V. 36. № 2. P. 169-176.

120. Yuste R., Katz L.C. (1991) Control of postsynaptic Ca2+ influx in developing neocortex by excitatory and inhibitory neurotransmitters. Neuron. V.6. P.333-344 .

121. Yuste R., Nelson D.A, Rubin W.W. and Katz L.C. (1995) Neuronal domains in developing neocortex: mechanisms of reactivation. Neuron. V.14. № 1. P.7-17.