Моделирование цитопротекторного действия 1-(2`-гидроксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазола и его влияние на связанную воду мембран и белков

Попыхова, Эра Борисовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Моделирование цитопротекторного действия 1-(2`-гидроксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазола и его влияние на связанную воду мембран и белков
ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Моделирование цитопротекторного действия 1-(2`-гидроксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазола и его влияние на связанную воду мембран и белков"

На правах рукопис

ПОПЫХОВА ЭРА БОРИСОВНА

МОДЕЛИРОВАНИЕ ЦИТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ 1-(2'-ГИДРОКСИЭТИЛ)-2-МЕТИЛ-5-НИТРОИМИДАЗОЛА И ЕГО ВЛИЯНИЕ НА СВЯЗАННУЮ ВОДУ МЕБРАН И БЕЛКОВ

03 00 02 - биофизика

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 4 май 2007

Воронеж - 2007

003060002

Работа выполнена в Саратовском государственном университете имени Н Г Чернышевского

Научный руководитель доктор химических наук, профессор

Кузнецов Павел Евгеньевич

Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор

Ковалева Тамара Андреевна

доктор биологических наук, профессор Карпов Владимир Львович

Ведущая организация Научно-исследовательский институт

биофизики клетки РАН

Защита состоится " ^У " 2007 г в _ часов на заседанш

диссертационного совета Д 212 038 03 при Воронежском государственного университете по адресу 394006, Россия, г Воронеж, Университетская площадь 1, ауд 59

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Воронежского государственного университета

Автореферат разослан " /1С'" ¿7 ( 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

Биохимики и биофизики проявляют повышенный интерес к молекулярным механизмам действия биорегуляторов, в частности - лекарственным соединениям Так, синтетический химиотералевтический препарат широкого спектра действия 1-(2'гидроксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазол (метронидазол, МЗ) давно привлекает внимание исследователей Дело в том, что кроме "основного" - противомикробного действия МЗ оказывает протекторный (защитный) эффект на клетки теплокровных при воздействии на них ксенобиотиков Поскольку, в современном мире резко возросло влияние физических (Григорьев, 1997, Бобраков и др, 2001, Шеин и др, 2003) и химических факторов на живые организмы поэтому является актуальным поиск клеточных протекторов С развитием технологий стало возможно исследовать "новые" возможности "старых лекарств" (Северина, 2005) Если механизм антибактериального действия МЗ хорошо изучен, то механизм его протекторного действия не исследован

Давно известно влияние на структуру воды некоторых низкомолекулярных соединений (Поллак, 2001) Некоторые из их них оказывают на воду структуроразрушающее действие (мочевина, многие неорганические анионы и т д ), другие — структуростабилизирующее (метанол, этанол, диоксан и др ) (Дерягин,1971, Антонченко,1983) Известно, что некоторые лекарственные соединения могут структурировать приповерхностную воду (Кунцевич и др , 1998) Не вызывает сомнений тот факт, что эти вещества могут влиять не только на объемную воду, но и на гидратные оболочки клеток и биополимеров и, как следствие, на конформацию и реакционную способность последних

Есть основания полагать, что протекторный эффект МЗ обусловлен стабилизирующим воздействием вещества на структуру сетки водородных связей воды в примембранной области или у поверхности биомакромолекул Результатом этого является прекращение доступа вещества к мембране, интегральному ферменту или рецептору Вероятно, с этим связано протекторное действие препарата на клетки теплокровных Представляет определенный интерес использование возможности МЗ структурировать примембранную воду не только для защиты клеток от воздействия химических и физических факторов (Кузнецов и др 2005), но и для регуляции биохимических процессов

Важно детально понять, каким образом реализуется протекторный эффект МЗ, поскольку это открывает путь к конструированию новых клеточных протекторов и веществ, способных регулировать биохимические реакции Поэтому, изучение протекторного действия данного соединения обусловливает актуальность темы настоящей работы

Цель и задачи диссертационной работы. Целью настоящей работы являлось изучение механизма протекторного действия метронидазола на клетки и их модели, находящиеся под воздействием детергента додецилсульфата натрия и электромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона

В связи с этим перед нами стояли следующие задачи

1 Определить протекторное действие метронидазола на клетки и их модели, находящиеся под воздействием детергента додецилсульфата натрия

2 Экспериментально и с помощью молекулярного моделирования изучить влияние метронидазола на состояние сетки водородных связей свободной и приповерхностной воды клеточных и модельных мембран

3 Исследовать влияние метронидазола на гемолитическую устойчивость эритроцитов, находящихся под воздействием электромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона, изучить изолированное влияние метронидазола на эритроциты и Paramecium caudatum

Научная новизна работы. Установлена способность МЗ в определенных концентрациях снижать коэффициент диффузии в примембранной водной среде Выдвинуто и обосновано предположение, что этим обусловлен протекторный эффект МЗ

Экспериментально и методами молекулярного моделирования установлено выполнение необходимых условий фазового ^-перехода в объемной водной среде и вблизи поверхности клеточных и модельных систем в присутствии МЗ Показано, что ^-переход является вероятной причиной образования мощной гидратной оболочки клеток и их моделей

Экспериментально установлено протекторное действие МЗ на эритроциты, подверженные действию резонансных частот электромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона (ЭМИ КВЧ)

Научно-практическая значимость. Установленное протекторное действие МЗ на клеточные и модельные мембраны за счет стабилизации их гидратного окружения может составить основу для поиска клеточных протекторов нового поколения и создания низкомолекулярных веществ, влияющих на протекание определенных биохимических процессов

В связи с тем, что МЗ является лекарственным препаратом широкого спектра действия и применяется при целом ряде инфекционных заболеваний, а также обнаруженная у него способность оказывать цитопротекторный эффект, делает исследование механизма его протекторного действия интересным для врачей-клиницистов

По материалам диссертационной работы написаны "Методические рекомендации к практикуму по молекулярной биологии - фолдинг белка и изучение влияния на него веществ, снижающих диффузионную подвижность воды" для проведения практических занятий со студентами, специализирующимися в области биохимии и молекулярной биологии, рекомендованные учебно-методической комиссией и одобренные Ученым советом биологического факультета СГУ (выписка из протокола №104 от 10 октября 2005 г )

Результаты диссертационной работы использованы при подготовке курсовых и дипломных работ студентами биологического факультета Саратовского государственного университета Апробация работы.

Основные результаты диссертации представлялись на следующих научных конференциях

Saratov Fall Meeting - International School for Young Scientists and Students on Optics, Laser Physics & Biophysics Workshop on Optical Technologies m Biophysics & Medicine (Saratov, Russia, 2003, 2004),1-ая и 2-ая Российские школы-конференции Молекулярное моделирование в химии, биологии и медицине (Саратов, Россия, 2002, 2004), The Human Proteome Organisation 2"' Annual & International Union Biochemistry and Molecular Biology XIX World Congress (Montreal, Canada, 2002), 42nd Congress of the European Societies of Toxicology (Poland, Cracow, 2005), 7-ая и 9-ая Международные Пущинские школы-конференции молодых ученых "Биология наука XXI века" (Пущино, Россия, 2003, 2005), Студенческие научные конференции биологического факультета СГУ Студенческие исследования в биологии (Саратов, Россия, 2003, 2004), 9-ая итоговая научно-практическая конференция студентов и молодых ученых с международным участием Молодежь и медицинская наука в XXI веке (Киров, Россия, 2005), 6-ой Международный конгресс Науки о человеке (Томск, Россия, 2005)

Публикации: По теме диссертации опубликовано 18 работ, в том числе 2 статьи в рецензируемых журналах и 2 работы в зарубежных изданиях

На защиту выносятся следующие положения:

1 Метронидазол проявляет свойства протектора клеточных и модельных мембран при воздействии на них детергента додецилсульфата натрия и под влиянием резонансных частот ЭМИ КВЧ

2 В присутствии метронидазола выполняются необходимые условия фазового Х-перехода в водной фазе

3 Метронидазол увеличивает гидратную оболочку и снижает коэффициент диффузии приповерхностной воды клеточных и модельных мембран

Структура и объем работы: Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, описывающей материалы и методы исследования, изложения полученных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы, содержащего 156 источников, в том числе 29 зарубежных Работа изложена на 120 страницах машинописного текста, содержит 27 рисунков и 4таблицы

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. Обзор литературы

В главе приведен аналитический обзор литературы по теме диссертации Дано общее представление об исследуемом веществе Обсуждаются свойства наиболее часто используемых в экспериментах клетках крови теплокровных -эритроцитов и их моделей (липосом и наночастиц УДА), позволяющих исследовать влияние физических факторов и химических веществ, в том числе лекарственных препаратов, на биомембраны и примембранную водную фазу Рассмотрена роль структуры воды в процессах жизнедеятельности клетки и ее участие в действии химических веществ и физических факторов на биообъекты

Глава 2. Объекты и методы исследования

В экспериментах использовались следующие реактивы и оборудование таблетированная лекарственная форма 1 -(2'гидроксиэтил)-2-мети 1-5 -нитроимидазола ("Трихопол") фирмы PolPharma SA (Польша), додецилсульфат натрия (ДСН) фирмы Merk (Германия), агароза тип 1 (универсальная) (ДиаЭМ) (Россия), фенол ХЧ (Экрос) (Россия), формалин ХЧ (Экрос) (Россия), петролейный эфир ХЧ (Экрос) (Россия), ацетон ХЧ (Экрос) (Россия) Флуоресцентные зонды флуоресцеин натрия Ч (Вектон) (Россия) и 4-диметиламинохалкон, синтезированный А К Рамазановым по методике (Яновская и др, 1971) на кафедре органической химии химического факультета СГУ В работе применялась дистиллированная вода, дополнительно обеспыленная и стерилизованная продавливанием через фильтры Millex-GS 0 22цт (Ирландия) с диаметром пор 0,2 мкм и затем деаэрированная с помощью форвакуумного насоса ВМ-416М (Россия) в течение 30 минут при температуре 50°С Для получения липосом использовали 10% спиртовой раствор яичного лецитина, выделенного по методике (Бергельсон и др , 1981)

Для определения гемолитической устойчивости эритроцитов к воздействию ДСН и ЭМИ КВЧ использовали эритроциты крови белых беспородных крыс, трижды отмытых в изотоническом 0,9% растворе NaCl (3000g, 15 мин) Исходная оптическая плотность при ?=670 нм равнялась 0,8 Для предотвращения оседания эритроцитов суспензию периодически встряхивали В качестве источника миллиметрового излучения использовался генератор Г4-142 (Россия) Биологические объекты облучались с помощью пирамидальной рупорной антенны длиной 12 см и апертурой 42x50 см2 Уровень мощности регулировался встроенным аттенюатором, измерялся термисторной головкой М5-50 и измерительным мостом М4-3 Плотность потока излучения в месте расположения биообъекта определялась расчетными методами и устанавливалась равной 120 мкВт/см2 Колориметрические измерения проводили на спектрофотометре Spekol 221 (Carl Zeiss, ГДР) и "Флуорат -Панорама 02" (Россия) Исследование токсического действия МЗ на биообъекты проводили на культуре Paramecium caudatum, предоставленной к б н Малининой Ю А из коллекции ГосНИОРХ Двигательную активность парамеций определяли инструментально с помощью импульсного фотометра "Биотестер-2" Эксперименты проводили в соответствии с методом, допущенным для целей государственного экологического контроля (ПНД Ф Т 14 1 2 3 4 2-98)

Достоверность всех данных оценивалась при уровне значимости 0,05 Обработка материала проведена при помощи компьютерных программ Excell и Statistica 6 0

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 3. Влияние метронидазола на гемолитическую устойчивость эритроцитов в присутствии додецилсульфата натрия

Для изучения неспецифического влияния МЗ на примембранную воду в качестве тест-объекта были выбраны эритроциты белых крыс Они имеют характерную и типичную для всех эукариотических клеток мембрану, которая не содержит специфических рецепторов Чтобы оценить влияние различных концентраций МЗ на клеточную мембрану и примембранную водную фазу целесообразно изучить его действие на структурно-функциональное состояние плазматической мембраны в целом

Влияние МЗ на структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов определяли по гемолитической устойчивости клеток к действию ДСН

Полученные результаты свидетельствуют о повышении гемолитической устойчивости эритроцитов в присутствии МЗ Значимые отличия наблюдались в интервале концентраций МЗ 5х Следует подчеркнуть, что

концентрация ДСН составляет 4,6x10"3%, т е при концентрациях М3<10"4% его концентрация намного меньше, чем концентрация ДСН и образованием комплекса МЗ с ДСН нельзя объяснить протекторное действие МЗ на эритроциты

Установлено, что в условиях проведения эксперимента скорость гемолиза эритроцитов хорошо описывалась кинетическими кривыми первого порядка с независящей от времени константой скорости к, о чем свидетельствует линейность приведенных на (рис 1) графиков Тогда для зависимости оптической плотности О от времени ? справедливы соотношения сЮш

-¿Г = -Юю (1)

вю=£>те~ь (2)

к=-1п(О(!)/П(0)) (3)

1е(0 /I) )

(4)

где ВКоптр - оптическая плотность суспензии эритроцитов в отсутствии МЗ,

Кти- относительная константа скорости гемолиза Эта константа в присутствии МЗ возрастает (рис 2) с уменьшением его концентрации в пробе, значимые отличия (р<0 05) от гемолиза в отсутствие МЗ наблюдались в интервале 5х10"1-5х10~9 % Поскольку скорость гемолиза в интервале концентраций МЗ 5х10"'-5х10"9% снижена по отношению к контролю (действие ДСН в отсутствие МЗ) можно утверждать что, в этом концентрационном интервале МЗ проявляет выраженное протекторное действие по отношению к эритроцитам

Можно предположить, что повышение гемолитической устойчивости эритроцитов, возможно, зависит от увеличения упорядоченности примембранной водной фазы, что снижает доступность к мембране гемолизирующих веществ, в данном случае ДСН

¿И 14 г

Рисунок 1 Зависимость оптической плотности суспензии эритроцитов от времени в присутствии ДСН и МЗ За 100% принята оптическая плотность суспензии эритроцитов в начальный момент времени А - контроль (отсутствие МЗ), В -5x109 % МЗ, С- 5x10"7 % МЗ, О - 0,5% МЗ

Рисунок 2 График зависимости относительной константы скорости гемолиз эритроцитов ДСН (кот„) от концентрации МЗ (С, %) За 1 принята константа скорости в отсутствие МЗ

Глава 4. Влияние метронидазола на скорость разрушения липосом ДСН

Для того чтобы оценить, является ли протекторное действие МЗ н; клеточную мембрану специфичным (например, обусловлено связыванием МЗ 1 каким-либо рецептором), мы использовали простейшую модель клетки -липосомы из яичного лецитина Эта модель построена из липидных бистоев ] лишена белковой и полинуклеотидной компоненты Следовательно, есл] присутствие МЗ будет оказывать сходное действие на липосомы, препягству; их разрушению ДСН, то можно будет обоснованно полагать, что протекторно^ действие МЗ является неспецифичным

Действительно, в присутствии МЗ разрушение липосом ДСН (рис 3 значительно замедляется Через 1 час инкубации значимые отличия оптическоГ плотности суспензии от контроля (р<0 05) наблюдались в интервал! концентрации МЗ 5х10~1-5х10"и% Однако, в интервале концентраций МЗ

бхЮ^-бхЮ"4 % мы не можем быть полностью уверенны в том, что МЗ н< оказывает влияние на липидный бислой липосом, а именно не встраивается ] него, поскольку концентрация липида составляет 2х10"3%, те сопоставима I концентрацией МЗ Вероятно, протекторное действие МЗ в концентрациях от 5x10'5 % до 5x10"14 % обусловлено непосредственным воздействием н; приповерхностную воду липосом Поскольку молекулы МЗ не обладают выраженной

амфифильностью, то в довольно низких концентрациях (до 5х10"14 %) они не могут существенно модифицировать структуру бислоя липосом за счет встраивания в него

Представляет интерес кинетика взаимодействия компонентов системы с МЗ При условии, что зависимость концентрации липосом, также как и концентрации эритроцитов, подчиняется кинетике первого порядка, динамика оптической плотность липосом описывается уравнением (1) Если при этом наблюдается зависимость оптической плотности от концентрации (С) МЗ, то £)=Дехр (-АхСх?) ^

где а — порядок процесса по МЗ

Если а=0 (процесс нулевого порядка), то это соответствует избытку МЗ (количество МЗ избыточно по отношению к необходимому для протекания процесса, т е большая часть МЗ в процессе не участвует)

Из графика видно, что при высоких концентрациях МЗ наблюдается незначительная

зависимость оптической плотности (О) от концентрации МЗ (а -незначимо отличается от нуля) Процесс идет в условиях избытка МЗ по отношению к необходимому его количеству При концентрациях МЗ (С)<10"9% порядок реакции значимо отличается от нуля 0,029±0,003

Таким образом, показано снижение разрушающего действия ДСН по отношению к не содержащим рецепторы липосомам в присутствие МЗ аналогично тому, как это происходит с эритроцитами Это позволяет полагать, что процесс протекторного действия МЗ не связан со специфическим воздействием на мембранные рецепторы

Если предположить, что причиной протекторного эффекта является снижение диффузионной подвижности примембранной воды клеток или их моделей, то в этом случае ДСН будет медленнее диффундировать через слой малоподвижной приповерхностной воды В пользу такого предположения говорит и тот факт, что некоторые химические соединения способны вызывать изменение параметров водородной сетки приповерхностной воды в низких концентрациях (Кунцевич и др , 1998, Кузнецов и др , 2002), не проявляя при этом выраженной поверхностной активности

Рисунок 3 Относительная оптическая плотность (О, %) суспензии липосом в присутствии различных концентраций МЗ За 100% принята оптическая плотность в отсутствие МЗ

Глава 5. Оценка влияния метронидазола на собственное водное микроокружение с помощью молекулярного моделирования

Известно, что некоторые высокоактивные БАВ обладают способностью структурировать приповерхностную воду. В объемной воде такие соединения могут вызывать состояния, предшествующие фазовому Я -переходу.

Для проверки этого положения были выполнены молекулярно-динамические расчеты в №/Т- ансамбле следующих систем: чистая вода (контроль), гидрозоль алмаза (частица алмаза содержала атомы углерода двух элементарных ячеек) в воде (инертные частицы), 1>глюкоза в коде (имеются клеточные рецепторы), МЗ в воде (лекарственный препарат).

В чистой воде среднее число водородных связей на молекулу воды существенно превышает псрколяционный предел (около 1,6) и составляет 3,2. Это соответствует наличию больших кластеров из нескольких десятков или сотен молекул. Вблизи фазового перехода типа "порядок-беспорядок" молекулы воды распределяются по размерам кластеров более равномерно, При этом увеличивается число молекул в малых кластерах и увеличивается число типов кластеров (по сравнению с набором типов кластеров для чистой воды).

Получены следующие средние значения стандартных отклонений. Для величины функции радиального распределения 5Ч = 0,01. Для положения экстремумов этой функции 5Инт = 0,01. Эта же величина с учетом ошибки шкалы (функции радиального распределения строились как гистограммы с

интервалом 0,1 А) составляет

8инт-0,0б А .Ошибка определения величины молекул в кластере 5с= 0,17. Ошибка среднего времени жизни составила 5Т= 0,01 пс, эта же величина с учетом ошибки шкалы (шаг по времени составил 0,05пс) равна 0,03 пс. Найденные величины позволяют судить о

достоверности возмущений, вносимых в структуру сетки водородных связей воды различными соединениями и модельными структурами.

Анализ результатов расчетов показывает, что сделанные предположения о ■ появлении кластеров с нехарактерным для чистой воды размером, являются правомерными. Так, из (рис. 4) видно, что МЗ вызывает появление кластеров с числом молекул более четырех и/или увеличение числа молекул в кластерах с малым числом молекул воды.

1 2 3 4 5 5 1 ¡5 Размер кластеров. км

■ >21.: д * гд»^ расрр К13

Рисунок 4, Результаты молекулярно-динамических расчетов поведения водных растворов УДА, Р-глюкозы и МЗ,

Глава 6. Флуоресцентная оценка подвижности приповерхностной воды липосом в присутствии метронидазола

Поскольку результаты молекулярного моделирования показали, что МЗ оказывает воздействие на подвижность молекул примембранной воды, необходимо было более детально исследовать его влияние на приповерхностную водную фазу Для проверки этого предположения мы использовали метод флуоресцентного зондирования В качестве

флуоресцентного зонда был выбран ДМХ Как известно, интенсивность флуоресценции данного зонда, локализующегося в приповерхностной воде липосом, напрямую связана с подвижностью окружающих

протонодонорных молекул (Владимиров, Добрецов, 1980) Снижение

интенсивности его флуоресценции наблюдается при увеличении

подвижности приповерхностной воды Как видно из (рис 5), интенсивность флуоресценции ДМХ в присутствии МЗ в концентрациях 5xl0~'-5xl0"9% превышает интенсивность в его отсутствие Это свидетельствует о снижении диффузионной подвижности воды при введении МЗ в примембранную область

Возможно, снижение подвижности приповерхностной воды связано с образованием "гигантских флуктуаций" ее плотности, возникающих в растворах в области фазового перехода второго рода типа "порядок-беспорядок" Этот эффект был открыт М Ф Вуксом в 1976 г для простых спиртов (Вукс, 1976) и позднее обнаружен для нескольких рядов соединений различной химической структуры - морфиноподобных соединений, диоксанов, производных барбитуровой кислоты и т д (Кунцевич и др , 1998, Кузнецов и ДР , 2002)

Эффект М.Ф Вукса связан с перестройкой сетки водородных связей воды вблизи молекулы растворенного вещества Можно предположить, что в нашем случае имеет место подобный эффект

Обнаруженное снижение подвижности воды в присутствии МЗ позволяет предположить, что его протекторное действие (в том числе - резистентность клеток и их моделей к воздействию детергента) связано с существованием приповерхностного слоя воды с пониженной диффузионной подвижностью Этот слой препятствует быстрой диффузии ДСН к клеткам и их разрушению

Рисунок 5 Интенсивность флуоресценции ДМХ (I от„, %) в примембранной области липосом в присутствии МЗ (звездочками помечены значимые отличия от 100 %, р<0,05) За 100% принята интенсивность флуоресценции в отсутствие МЗ

Более прямым методом проверки предположения о том, что присутствие МЗ в водной фазе приводит к эффекту М Ф Вукса является изучение молекулярного рассеяния света водными растворами исследуемого соединения Глава 7. Оценка флуктуаций плотности воды в присутствии метронидазола

Согласно теории упругого рассеяния света жидкостями, предполагается, что размеры оптических неоднородностей в среде малы по сравнению с длинной воины света Вблизи критических точек фазовых переходов интенсивность флуктуаций значительно возрастает и размеры областей неоднородностей становятся сравнимы с длиной волны света, что приводит к резкому увеличению рассеяния света средой (Фабелинский, 1965)

Эти эффекты описываются теорией Орнштейна-Цернике Физическая идея этой теории состоит в том, что вблизи критической точки сильное возрастание сжимаемости приводит к большим изменениям плотности среды даже под действием очень малых сил В таких условиях возникшая флуктуация плотности может оказать влияние на состояние среды на расстояниях, значительно превосходящих радиус молекулярного взаимодействия в обычных условиях (Фабелинский, 1965)

Измерение молекулярного рассеяния света позволяет зафиксировать увеличение радиуса корреляции воды в присутствии растворенного вещества Исследовать рассеяние света приповерхностной водой липосом невозможно, тк сами липосомы сильно рассеивают свет Поэтому нами исследовалось рассеяние света объемной водой в присутствии МЗ в концентрациях 5x10"—5хЮ"13%, которую можно рассматривать как модель приповерхностной воды (Вукс, Шурупов'а,1976)

Результаты проведенных исследований водных растворов МЗ свидетельствуют о способности последнего в определенных концентрациях значительно увеличивать

светорассеяние Концентрации МЗ, используемые в

эксперименте 5х10"1-5х10"13% достаточно низкие, поэтому увеличение светорассеяния не может быть связано с фчуктуациями концентрации во всем этом интервале

Следовательно, наблюдаемое увеличение интенсивности

светорассеяния, по крайней мере в области низких концентраций МЗ, следует связывать с существованием флуктуаций плотности растворителя в критической области

0-2-4-6 -8 -10 -12 -14

|д(с,%)

Рисунок 6 Интенсивность упругого светорассеяния (1отн, %) водных растворов МЗ За 100% принято рассеяние света чистой водой

Объяснить увеличение светорассеяния можно флуктуациями структуры и увеличением размера флуктуаций Как было сказано выше подобного рода флуктуации возникают вблизи критической точки фазового Х-перехода При образовании "гигантских флуктуаций" плотности воды, свет рассеивается более интенсивно (Вукс,1976), что и было нами обнаружено (рис 6) Значимые отличия в интенсивности рассеяния света водными растворами МЗ от рассеяния чистой водой наблюдаются в области концентраций 5х

Для фазового Х-перехода существуют аномалии термодинамических свойств Особенностью фазового ^-перехода является снижение, практически до ноля, коэффициента диффузии вещества в растворе Поэтому, нами для проверки предположения о том, что присутствие МЗ в водной фазе приводит к фазовому ¡V-переходу в структуре сетки водородных связей воды, проводилось измерение коэффициента диффузии флуоресцентного зонда в водных растворах МЗ в соответствующем интервале концентраций

Глава 8. Влияние метронндазола на свободную воду мембран и их

моделей

Поскольку, мы предположили, что протекторное действие МЗ на клетки вызвано снижением коэффициента диффузии водной среды, которое связано со способностью МЗ вызывать фазовый А.-переход, то было необходимо исследовать влияние МЗ на диффузионные характеристики раствора

Для оценки влияния МЗ на диффузионные свойства раствора удобно измерять коэффициент диффузии какого-либо флуоресцентного зонда Мы использовали в качестве зонда флуоресцин натрия (ФН) Обращение в ноль коэффициента диффузии зонда служило подтверждением гипотезы о способности МЗ вызывать фазовый /.-переход

Существует множество методов определения коэффициента диффузии, описанных, в частности, в работах (Вайсбергер, 1952, Фрайфельдер, 1980) Нами был выбран метод диффузии в геле, позволяющий получать воспроизводимые результаты с точностью около 26%, что достаточно для целей данного эксперимента

Коэффициент диффузии определялся с помощью собственной программы, написанной в Mathcad 8 О

Расчетные концентрации определялись из решения уравнения диффузии

2-т (6)>

где С, С0 - концентрации зонда в точках с координатами,

х и х=0 в момент времени t, D- коэффициент диффузии

Нами определялся коэффициент диффузии ФН в гелях с различной концентрацией агарозы (0,7-2%) и МЗ и проводилась экстраполяция к нулевой концентрации агарозы и т о мы получали оценку коэффициента диффузии

в водном растворе МЗ без агарозы (рис 7) При этом на основании экспериментальных данных учитывалось, что интенсивность флуоресценции ФН прямо пропорциональна его концентрации

Согласно уравнению Стокса-Эйнштейна коэффициент диффузии зависит от вязкости растворителя

const (Т )

D =

(7)

где D- коэффициент диффузии, 7] - вязкость,

const (Т) - параметр, зависящий от температуры

(8)

= const (Г)

ру.М

где М -средняя молекулярная масса геля,

р —плотность rj—cons(T)x р хМ (9)

Тогда, уравнение определения коэффициента диффузии можно написать в виде

const (Т)

D =

где

р х М

(10)

М=

Щоды

№

'водь&^акарозы "\оды

Тводы+ГПагарозь1_

Рисунок 7 Зависимость коэффицие нта диффузии (D, cmVc) ФН от концентрации агарозы в геле

Коды+1

воды

=Чы>ы+

агарозы

воды

=П1

агароз1

воды

К.

uxN„

■ масса воды,

N„

^агарозьР ™воды

число молекул воды на 1 молекулу агарозы,

ПОЗЫ

Р(массовая доля агарозы)

агар оз>

(п)

(12)

агарозы

N агарозы—ЧИСЛО МОЛекуЛ аГЭрОЗЫ РХтеоды

Тогда средняя молекулярная масса геля (М) есть м = «.„ы + т"",рты х р х т,оды = теоды х (1 -г р)

™ агарозы (13)

Если массовая доля агарозы (р) составляет 0,01 0,02, то средняя молекулярная масса геля (М) примерно равна массе воды (тводь1) То есть, если

in.

1) mB

2) mBI

Р*ЧодЫ

, то M = mBI

m„.

', то M =

Рхтводы

Исходя из изложенного выше уравнение (17) можно написать в следующем виде

const (Г) ^^

Dг

рх(1 + р)

Р ~ Р«Яы

где

Тогда уравнение (14) имеет вид D~Da + ™nSt{T)-

1 + р

D„ + constiT) х р

(15)

где 1)0~ коэффициент диффузии в воде, р«1

Полученное значение коэффициента диффузии ФН в чистой воде составило (5,3±1,1)х 10"6 см2/с Для оценки точности метода мы провели теоретический расчет коэффициента диффузии ФН в чистой воде с применением различных корреляций (Рид и др , 1982) После знака ± для расчетных значений приведена ошибка метода, для экспериментального - ошибка коэффициента регрессии

Результаты расчетов, а также экспериментальное значение, приведены в таблице 1

Таблица 1

Результаты расчетов и экспериментальное значение коэффициента

Метод эксперимент Вильке Гайдука Шайбеля

Значение, см2/с (5 3+1 1)х 10"6 (8 3+0 9)х 10"6 (8 4±0 9)х 10"6 (8 6+0 9)х 10 6

Как видно из таблицы точность определения

коэффициента диффузии флуоресцентного зонда

составляет около 30%, что вполне достаточно для оценки влияния МЗ на параметры диффузии

Затем проводилось

определение коэффициента диффузии ФН в геле с концентрацией агарозы 1 и 2% В ходе эксперимента нами было установлено, что коэффициент диффузии ФН изменяется под влиянием некоторых концентраций МЗ в 2,6-5,5 раз(рис 8)

Рисунок 8 График зависимости коэффициента диффузии ФН (Л, см2/с) в водной фазе от концентрации МЗ(С, %) Горизонтальная линия соответствует коэффициенту диффузии ФН в чистой воде Звездочками помечены точки, соответствующие значимым отличиям от контроля (р<0,05)

Столь значительное снижение коэффициента диффузии подтверждает гипотезу о том, что МЗ вызывает фазовый ^-переход типа порядок-беспорядок в структуре сетки водородных связей окружающей воды в концентрационном интервале 0,5% и 5х10"5%-5х10"7%

Интересно отметить, что именно в указанном интервале лежат фармакологические концентрации МЗ Известно, что в точке фазового X-перехода, как в критической точке, коэффициент диффузии обращается в ноль Поскольку в указанных интервалах концентраций МЗ отличия коэффициента диффузии от нуля не значимы (р<0 05), можно с большой долей уверенности утверждать, что МЗ действительно вызывает фазовый А,-переход

Глава 9. Вискознметрическое измерение величины гидратной оболочки наночастиц УДА (моделей белков и биочембран) в присутствии

метронидазола

Вероятно, протекторное действие МЗ на клетки связано со снижением коэффициента диффузии водной среды в связи со способностью МЗ вызывать фазовый ^.-переход и, следовательно, с возрастанием эффективного гидродинамического радиуса живых клеток или их моделей Результатом этого может быть прекращение доступа разрушающего вещества к мембране

Интересной моделью, позволяющей исследовать состояние приповерхностной воды являются наночастицы УДА (Чиганова, 1997) Изменение радиуса гидратной оболочки УДА в присутствии МЗ можно определить методом вискозиметрии

Для проверки предположения о том, что вблизи раздела фаз вода-гидрофобная среда действительно образуется слой воды с пониженной диффузионной подвижностью, вискозиметрическим методом определялся размер гидратной оболочки модельных объектов - наночастиц УДА При этом наночастицу для простоты считали шаром с радиусом г0 = 84 нм, эффективный (гидродинамический) радиус частицы г с учетом слоя связанной на поверхности гидратированной частицы воды (Чанг, 1980), тогда

[г]} = Юптгг3 /3 (16)

где [7]-удельная вязкость,

п - число частиц в единице объема, которые выражаются через объемную долю частиц ср по формуле

Здесь г0- радиус наночастицы алмаза, в данном случае 84 нм Из формул (16) и(17) следует

Здесь учтено, что удельная вязкость гидрозоля раствора зависит от присутствия в нем МЗ с концентрацией С Тогда изменение толщины гидратной оболочки Аг, обусловленное наличием МЗ, есть

Аг = г(С)-г(0):

(19)

Результаты, полученные по экспериментальным значениям вязкости, приведены на (рис 9) Наблюдаются значимые отличия удельной вязкости в присутствие МЗ от таковой в его отсутствие С применением формулы (19) и экспериментальных данных по вязкости получена зависимость толщины гидратной оболочки УДА от концентрации МЗ в гидрозоле Результаты приведены на (рис 10) Стандартные отклонения, приведенные на этом рисунке, оценивались по формуле

Я_Ё¡1

vi э 7? (с )

Г д&г и>7(0) '

2,5р

Г Ы£Ж1

1Л1 2,5^ J ;

(20)

Рисунок 9 Зависимость удельной вязкости УДА от концентрации метронидазола в гидрозоле Пунктирная линия - удельная вязкость УДА в отсутствие МЗ

Рисунок 10 Зависимость изменения толщины (нм) гидратной оболочки наночастиц УДА от концентрации МЗ (С, %) при инкубации 1 час Пунктирная линия соответствует толщине гидратной оболочки УДА в отсутствие МЗ (звездочками помечены точки, соответствующие значимым отличиям от контроля, р<0,05)

Значимое возрастание толщины гидратной оболочки наблюдается в интервале концентраций МЗ 5х10"4-5х10~8% Это говорит в пользу предположениям о способности МЗ вызывать фазовый А.-переход типа "порядок-беспорядок" в структуре сетки водородных связей окружающей воды, следствием чего и является увеличение гидратной оболочки УДА Вероятно, аналогичное увеличение может происходить и вблизи клеточных мембран, чем и объясняется протекторный эффект данного соединения в указанных концентрациях

Глава 9. Влияние метронидазола на гемолитическую устойчивость эритроцитов находящихся под воздействием ЭМИ КВЧ

Известно, что ЭМИ КВЧ - физический фактор, приводящий к значительным изменениям функционального статуса биообъектов различного уровня

сложности Эффекты ЭМИ резко проявляются на так называемых резонансных частотах, когда появляются "окна прозрачности" водной среды Это явление было обнаружено несколько лет назад Синициным Н И, Петросяном В И, Елкиным В А и названо СПЕ-эффектом (Петросян и др , 2000)

До настоящего времени нет полного объяснения действий слабых ЭМИ на биосистемы Одним из объяснений является воздействие ЭМИ на воду, содержащуюся в биологических объектах Считают, что ЭМИ на резонансных частотах раскачивают систему водородных связей приповерхностной воды мембран и белков В результате нарушаются их биохимические свойства

Для определения частот ЭМИ КВЧ, на которых происходит наиболее интенсивное воздействие на клетки млекопитающих (эритроциты белых лабораторных крыс), нами был проведен следующий эксперимент Плотность потока энергии фиксировалась на каждой из частот (54 — 72 ГГц, шаг 1 ГГц), проба помещалась на фиксированное время перед излучателем Затем измерялась оптическая плотность суспензии эритроцитов, частота излучения изменялась и процедура повторялась Результаты исследования приведены на (рис 11)

Полученные данные позволили установить различный характер зависимости оптической плотности суспензии эритроцитов от частоты при низкой — 5 мкВт/см2 и высокой - 120 мкВт/см2 плотности потока энергии (рис 11)

£Пц (ГП1

Рисунок 11 Вчияние ЭМИ КВЧ на эритроциты крыс с плотностью потока энергии а) 120 мкВт/см2 (время экспозиции на каждой частоте 20 мин), 6) 5 мкВт/см2 (время экспозиции на каждой частоте 20 мин) (звездочками помечены значимые отличия от нуля р<0,05) Так, известно о способности ЭМИ оказывать влияние на гемолитическую устойчивость, везикуляцию и агрегацию эритроцитов При этом гемолиз приводит к снижению оптической плотности, везикуляция и агрегация - к ее увеличению

Затем проводилось более подробное исследование влияния ЭМИ КВЧ различных частот на гемолитическую устойчивость эритроцитов при плотности потока энергии 120 мкВт/см2, соответствующей предельно допустимому уровню ЭМИ КВЧ диапазона Были выбраны частоты 55, 60, 65, 69 и 73 ГГц,

среди которых частота 55 расположена вблизи резонансной частоты, а 65 ГГц является резонансной Частоты 60, 69, 73 ГГц являются нерезонансными

Экспериментальные данные по определению гемолитической устойчивости эритроцитов при действии ЭМИ КВЧ показывают, что воздействие ЭМИ на всех выше перечисленных частотах при плотности потока энергии 120 мкВт/см2 вызывает значительное снижение числа эритроцитов по отношению к контрольной пробе (рис 12-14) Можно предположить, что отрицательный эффект ЭМИ КВЧ на всех исследованных частотах, в том числе и на нерезонансных, связан с взаимодействием электромагнитных волн с молекулами воды, что приводит к диссипации энергии, накопленной молекулами воды при облучении ЭМИ КВЧ диапазона В результате это вызывает повреждение эритроцитарных мембран и как следствие, снижение гемолитической устойчивости эритроцитов

Для оценки цитопротекторного эффекта МЗ под воздействием ЭМИ КВЧ в суспензию эритроцитов предварительно добавляли МЗ в концентрациях 5х10"3-5х10"п% Результаты эксперимента свидетельствуют о способности МЗ в концентрациях 5х10"7-5х10~"% значимо повышать гемолитическую устойчивость эритроцитов на резонансной частоте (65 ГГц) (рис 12) и частоте расположенной вблизи резонансной (55 ГГц) (рис 13)

а) б)

Рисунок 12 Зависимость оптической плотности суспензии эритроцитов от времени под воздействием ЭМИ КВЧ на частоте 65 ГГц в присутствии МЗ в концентрациях а) 5x109 %, б) 5x10"6 % За 100% принята оптическая плотность суспензии эритроцитов без воздействия ЭМИ КВЧ и без МЗ Примечания на графиках приняты следующие обозначения

Рисунок 13 Зависимость оптической плотности суспензии эритроцитов от времени под воздействием ЭМИ КВЧ на частоте 55 ГГц в присутствии МЗ в концентрациях а) 5x10"' %, б 5x10'6 % За 100% принята оптическая плотность суспензии эритроцитов без воздействия ЭМ

КВЧ и без МЗ

Примечания на графиках приняты следующие обозначения

ЗШ-4--|щрсП}-»-ЭШ<Ш-»-юнфС1гъсЛС

Анализ данных по влиянию МЗ в концентрационном интервале 5х10"3-5х10" 6% на изолированные эритроциты (не подверженные действию ЭМИ) указывает на уменьшение гемолитической устойчивости эритроцитов Однако, комбинированное действие ЭМИ КВЧ и МЗ в концентрациях от 5х10"Л% вызывают снижение скорости гемолиза на частотах 65 и 55 ГТц (рис 12-13)

Экспериментальные данные по определению цитопротекторного действия МЗ на частотах 60, 69 и 73 ГГц, которые не относятся к резонансным частотам, свидетельствуют об отсутствии значимого протекторного эффекта МЗ На рисунке 14 представлено влияние МЗ на гемолитическую устойчивость эритроцитов на не резонансной частоте 60 ГГц

Для подтверждения способности МЗ повышать гемолитическую устойчивость эритроцитов под воздействием резонансных частот ЭМИ КВЧ нами проводился прямой подсчет клеток в контрольных и опытных образцах с помощью камеры Горяева Полученные данные представленны в (табл 2) и свидетельствуют о большом количестве лизированных клеток под воздействием ЭМИ КВЧ и снижении их числа при введении в пробу МЗ

Таблица 2

Число негемолизированных эритроцитов (%), находящихся под влиянием ЭМИ КВЧ частотой 65 ГГц и МЗ Данные получены путем подсчета

контроль ЭМИ КВЧ эритро- ЭМИ эритро- ЭМИ КВЧ

(65 ГТц) циты -кмз КВЧ+МЗ циты +МЗ +МЗ

(5x10^ %) (5x10 6 %) (5x10"9 %) (5x10"9 %)

98,51±10,4 36,93+4,2 84,81±5,6 67,31+5,4 93,79+1,7 87,98±6,3

а)

12G -i

t, мин

SO 120 150

Рисунок 14 Зависимость оптической плотности суспензии эритроцитов от времени под воздействием ЭМИ КВЧ на частоте 60 ГГц в присутствии МЗ в концентрациях а) 5x10"9 %, б) 5х10"6 % За 100% принята оптическая плотность суспензии эритроцитов без воздействия ЭМИ КВЧ и без МЗ Примечания на графиках приняты следующие обозначения

- f-

Ш -+-1ШрС!Пэ-^ЭМ4+МЗ-^1шрогъсШ

Анализ полученных данных показывает, что как при воздействии резонансной частоты, так и частоты находящейся вблизи резонансной МЗ оказывает протекторный эффект на эритроцитарные мембраны и не проявляет свойства цитопротектора на нерезонансных частотах

Как известно, ЭМИ КВЧ на резонансных частотах разрушает водородные связи шдратной оболочки клеток С другой стороны, как показано в настоящей работе, МЗ способен стабилизировать структуру сетки водородных связей приповерхностной воды клеточных и модельных мембран Таким образом, можно предположить, что в случае воздействия ЭМИ КВЧ диапазона цитопротекторный эффект МЗ связан со стабилизацией примембранной воды эритроцитов, что приводит к меньшему разрушению клеток Вероятно, этим и обусловлен цитопротекторный эффект МЗ

Влняние метронидазола на двигательную активность Paramecium

caudatum

Для того, чтобы оценить оказывают ли используемые в наших исследованиях концентрации МЗ токсичное действие на клетки теплокровных (эритроциты белых крыс) нами был проведен эксперимент на Р caudatum (подцарство Protozoa) Для проведения этого исследования в качестве тест-объекта неслучайно были выбраны парамеции поскольку они обладают морфологическими признаками клетки и реагируют на внешнюю среду подобно многоклеточным организмам (Бакаева, 1998) Поэтому, Р caudatum является удобным объектом для тестирования химических факторов, экзо- и эндотоксикантов, а так же фармакологических агентов Часто в качестве

критерия неблагоприятности условий обитания Р саис1аШт используется их подвижность (Богачева и др , 2002)

Как показывают экспериментальные данные МЗ в концентрациях 5х10"б% и 5у10"9% соответственно, увеличивает и не изменяет подвижность парамеций (таб 3) Поскольку, изменение двигательной активности Р саис!аШт является показателем токсичности водной среды, мы считаем, что нами обнаружено отрицательное влияние МЗ в концентрации 5х10"6 % на организм простейших В более низких концентрациях (5х10"9%) МЗ не оказывает негативное влияние на двигательную активность Р ca.uda.tum

Таблица 3

Влияние метронидазола на подвижность Р саийаЫт_

контроль 1 конц МЗ 5x1с6 % конц МЗ 5x109 %

79,9±4,5 1 173,3±9,3 87,7±6,0

Т о , результаты этого эксперимента согласуются с данными, полученными при исследовании изолированного влияния МЗ на гемолитическую устойчивость эритроцитов, а именно в концентрации от 5х10"6 до 5х10"3 % МЗ оказывал заметное влияние на стабильность эритроцитов В более низких концентрациях МЗ подобного эффекта не наблюдалось

Заключение

Отрицательное влияние на организм и как следствие на его клетки различных химикатов, ЭМИ антропогенного происхождения и других опасных факторов неуклонно увеличивается Последствиями подобного воздействия на организм человека является увеличение риска возникновения патологических состояний В связи с этим на сегодняшний день является актуальной разработка и изучение механизмов защиты организма на клеточном уровне

Проведенные нами эксперименты по изучению цитопротекторного действия МЗ показало, что его протекторный эффект связан с влиянием на приповерхностную воду Так, методами молекулярного моделирования влияния МЗ на водное микроокружение было показано появление кластеров с нехарактерным для чистой воды размером Экспериментальные данные по изучению влияния МЗ на гемолитическую устойчивость эритроцитов крови белых крыс к ДСН свидетельствуют о значительном замедлении процесса гемолиза в присутствии определенных концентраций МЗ Аналогичный эксперимент, проведенный на липосомах из яичного лецитина, показал способность МЗ повышать их устойчивость к ДСН Исследование влияния МЗ на приповерхностную воду липосоч с помощью флуоресцентног зонда ДМХ, показало увеличение флуоресценции зонда в присутствии МЗ Поскольку интенсивность флуоресценции ДМХ связана с подвижностью протонодонорных молекул, то увеличение флуоресценции свидетельствует о снижении диффузионной подвижности воды в присутствие МЗ Экспериментальные данные по светорассеянию водных растворов МЗ свидетельствует о способности последнего в определенных концентрациях значительно его увеличивать Вероятно, этот эффект связан с флуктуациями плотности воды, возникающих в области фазового /(.-перехода Экспериментально была показана способность МЗ снижать коэффициент диффузии ФН, что послужило подтверждением нашей ппкпезы Вискозиметрически было получено значимое увеличение удельной вязкости УДА в присутствии МЗ от таковой при его отсутствии Определение гемолитической устойчивости эритроцитов крыс к воздействию резонансных и нерезонансных частот ЭМИ КВЧ показало способность МЗ оказывать протекторный эффект на эритроциты на резонансных частотах и отсутствие его протекторных свойств на нерезонансных частотах Исследование используемых нами в экспериментах концентраций МЗ на токсичность по отношению к биологическим объектам на примере Р саийаШт показало отсутствие токсического эффекта МЗ в концентрациях от 5х10"9% и ниже

Для защиты организма на клеточном уровне от воздействия ксенобиотиков и резонансных

частот ЭМИ КВЧ использование МЗ, как клеточного протектора может быть весьма

перспективным

Выводы:

1 Показана способность метронидазола снижать коэффициент диффузии приповерхностной воды клеток и их моделей Этот эффект вносит значительный вклад в формирование протекторного действия на клетки и их модели, находящиеся под воздействием детергента додецилсульфата натрия и электромагнитного излучения кряйне высокочастотного диапазона

2 Установлено, что метронидазол в концентрационном интервале 5х10"'-5хЮ"п % повышает гемолитическую устойчивость эритроцитов крови белых крыс, а также устойчивость липосом из яичного лецитина к детергенту додецилсульфату натрия Механизм повышения гемолитической устойчивости связан с увеличением упорядоченности примембранной водной фазы, что вызывает снижение скорости диффузии лизирующего агента к мембране

3 Экспериментально показано увеличение гидродинамического радиуса гидратной оболочки наночастиц алмаза, рассматриваемых как модель поверхности белков и биомембран

4 С помощью флуоресцентного зондирования установлена способность метронидазола снижать коэффициент диффузии водной среды вблизи модельных мембран (липосом) Результаты молекулярного моделирования свидетельствуют о способности метронидазола образовывать кластеры воды, отличающиеся от характерных для чистой воды

5 Показано, что метронидазол в концентрациях 5х10"*-5х10 "% повышает гемолитическую устойчивость эритроцитов крови белых крыс к действию резонансных частот этсктромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона, разрушающему водородные связи гидратной оболочки клеток Данный протекторный эффект метронидазола в низких концентрациях объясняется его способностью стабилизировать структуру сетки водородных связей приповерхностной воды клеток Установлено, что изолированное действие метронидазола в концентрациях 5х10"6% и выше вызывает снижение гемолитической устойчивости эритроцитов и подвижности простейших Р caudatum В более низких концентрациях подобный эффект не отмечался

Список опубликованных работ по теме диссертации

1 Влияние 1-(2'-гидроксиэтл)-2-метил-5-нитроичидазола на состояние водной фазы / Э Б Попыхова [и др ]//Вестн Саратов гос аграрн ун-та -2005 -№5 -С 16-21

2 Влияние 1-(2'-гидроксиэтит)-2-метил-5-нитроимидазола на состояние воды в примембранной области эритроцитов и их моделей / П Е Кузнецов, Э Б Попыхова [и др ] // Биомедицинская химия -2005 - Т 51, №6 - С 649-655

3 Возможный механизм действия метронидазола как клеточного протектора / Э Б Попыхова [и др ] // Экологические проблемы промышленных городов сб науч тр -Саратов, 2005 - С 151-153

4 Евлаков К И О влиянии производных нитроимидазола на диффузионную подвижность воды в примембранной области / К И Евлаков, Э Б Попыхова // Студенческие исследования в биологии сб науч тр - Саратов, 2003 - Вып 1 - С 67-69

5 Кузнецов ПЕ Фолдинг белка и изучение влияния на него веществ, снижающих диффузионную подвижность воды метод рекомендации для студентов старших курсов, специализирующихся в области биохимии и молекулярной биологии / ПЕ Кузнецов, Э Б Попыхова, 3 А Симонова - Саратов Изд-во Саратов гос ун-та, 2005 - 12 с

6 Метронидазол - протектор живых клеток при воздействии КВЧ излучения / П Е Кузнецов, Э Б Попыхова [и др ] // Ежегодник Российского Национального Комитета по защите от неионизирующих излучений сб тр-М , 2005 - С 15-18

7 Попыхова Э Б Влияние 1-(2'-гидроксиэтил)-2- метил-5-нитроимидазола на скорость фолдинга ферментов / Э Б Попыхова, А Ш Мавлюдова, П Е Кузнецов // Биология -наука XXI века 9-ая Междунар Пущинск школа-конф молодых ученых сб тез -Пущино,2005 -С 124

8 Попыхова Э Б Вчияние водных растворов метронидазола на коэффициент диффузии флуоресцина натрия и на величину гидратной оболочки наночастнц ультрадисперсного алмаза / Э Б Попыхова, Г И Тяпаева, П Е Кузнецов // Биология - наука XXI века 9-ая Междунар Пущинск школа-конф молодых ученых сб тез -Пущино, 2005 -С 126

9 Попыхова Э Б Влияние метронидазола на подвижность приповерхностной воды клеток и липосом / Э Б Попыхова // Молодежь и медицинская наука в XXI веке материалы 9-ой итоговой науч -практ конф студентов и молодых ученых с междунар участием -Киров, 2005 - С 72

10 Попыхова ЭБ Моделирование и экспериментальное исследование влияния 1-(2'-гидроксиэтил)-2- метил-5-нитроимидазола на кинетику фолдинга ферментов и на состояние сетки водородных связей воды / Э Б Попыхова, А Ш Мавлюдова // Молодежь и медицинская наука в XXI веке материалы 9-ой итоговой науч -практ конф студентов и молодых ученых с междунар участием - Киров, 2005 - С 70

11 Попыхова ЭБ Протекторное действие метронидазола при действии детергентов и электромагнитного излучения на живые клетки и их модели / Э Б Попыхова // Материалы 6-го международного конгресса молодых ученых и специалистов "Науки о человеке" - Томск, 2005 -С 81-82

12 Попыхова ЭБ Теоретическое исследование поведения 1-(2'-гидроксиэтил)-2- мегил-5-нитроимидазола в гомогенных и гетерогенных водных средах / Э Б Попыхова, П Е Кузнецов, Е П Меркулова // Молекулярное моделирование в химии, биологии, медицине

2-ая Рос школа-конф сб тез - Саратов, 2004 - С 38-39

13 Производные нитроимидазола снижают диффузионную подвижность воды в примембранной области / Э Б Попыхова [и др ] // Биология - наука XXI века 7-ая Междунар Путинская школа-конф молодых ученых сб тез - Пущино, 2003 - С 71

34 Симонова 3 А Полуконтинуальный метод клатратных оболочек для оценок распределения химических соединений в системе вода-липофильная среда /ЗА Симонова, Э Б Попыхова, И А Согуренко // Молекулярное моделирование в химии, биолопш, медицине 1-ая Рос школа-конф сб тез - Саратов, 2002 - С 66-67

15 Computer simulation of structure and mobility of water hydrogen bonds net in aqueous solutions of some chemical compounds / P E Kuznetsov, E В Popyhova fet al ] // SPIE proceed - Саратов, 2005 - Vol 5773 -P 188-194

16 Optical investigations of metromdazolum action on the cell membranes and proteins / EB Popyhova [et al ]// SPIE proceed - Саратов, 2004 - Vol 5474 -P 377-384

17 Protective effect of metronidazole low concentrations on the cell membranes / S Rogacheva, EB Popyhova [et al ] //Toxicology Letters -2005 - Vol 158, suppl 1 -P 57-58

18 The activity of Chaperon's low-molecular analogs / E В Popyhova [et al ] // Molecular and cellular Proteomics abstr HUPO 2nd Annulal & IUBMB XIX World Congress - Montreal, 2003 -P 787

Статьи №1,2 опубликованы в изданиях, соответствующих списку ВАК РФ

Подписано в печать 27 04 2007 Формат 60x84/16 Уел печл 1,5 Тираж 100 Заказ 257 Издательско-полиграфический центр Воронежского государственного университета 394006, г Воронеж, Университетская площадь, 1, ком 43, тел 208-853 Отпечатано в лаборатории оперативной печати ИПЦ ВГУ

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Попыхова, Эра Борисовна

Список сокращений и условных обозначений.

Введение.

ГЛАВА 1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Спектр фармакологического действия метронидазола.

1.2 Эритроциты - объект для исследования протекторного действия лекарственных препаратов.

1.3 Липосомы как простейшая модель эритроцитов.

1,4Ультрадисперсные алмазы как модель молекулярных и надмолекулярных структур.

1.5 Водный матрикс в живых системах.

1.5.1 Молекулярное строение воды.

1.5.2 Жидкая вода и массоперенос.

1.5.3 Фазовые переходы в водной среде.

1. 6 Воздействие электромагнитных излучений на живые организмы и поиск протекторов.

1.6.1 Электромагнитные излучения в современном обществе.

1.6.2 Механизм взаимодействия электромагнитных излучений крайне высоких частот с биологическими объектами.

1.6.3 Влияние резонансных частот крайне высокого диапазона на состояние сетки водородных связей воды.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Приборы и материалы.

2.2 Методы исследования.

2.2.1 Методика выделения метронидазола и приготовления его растворов.

2.2.2 Методика определения влияния метронидазола на гемолити-чес кую устойчивость эритроцитов к действию додецилсульфата натрия.

2.2.3 Выделение лецитина.

2.2.4 Методика приготовления липосом и определения их устойчивости к воздействию додецилсульфата натрия.

2.2.5 Методика молекулярного моделирования влияния метронидазола на водное микроокружение.

2.2.6 Методика определения влияния метронидазола на состояние примембранной воды липосом.

2.2.7 Методика измерения молекулярного рассеяния света водными растворами метронидазола.

2.2.8 Методика определения вязкости гидрозоля наночастиц УДА.

2.2.9 Методика синтеза не модифицированных резольных смол.

2.2.10 Методика определения коэффициента диффузии флуоресцина натрия в водной фазе.

2.2.11 Методика определения влияния метронидазола на гемолитическую устойчивость эритроцитов находящихся под воздействием ЭМИКВЧ.

2.2.12 Методика подсчета эритроцитов с помощью камеры Горяева.

2.2.13 Методика оценки токсичности метронидазола на культуру Paramecium caudatum.

2.2.14 Статистическая обработка результатов экспериментов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Глава 3. Влияние метронидазола на гемолитическую устойчивость эритроцитов в присутствии додецилсульфата натрия.

Глава 4. Влияние метронидазола на скорость разрушения липосом додецилсульфатом натрия.

Глава 5. Оценка влияния метронидазола на водное микроокружение с помощью молекулярного моделирования.

Глава 6. Флуоресцентная оценка подвижности приповерхностной воды липосом в присутствии метронидазола.

Глава 7. Оценка флуктуаций плотности воды в присутствии метронидазола.

Глава 8. Влияние метронидазола на свободную воду мембран и их моделей.

Глава 9. Вискозиметрическое измерение величины гидратной оболочки моделей белков и мембран (наночастиц УДА) в присутствии метронидазола.

Глава 10. Влияние метронидазола на гемолитическую устойчивость эритроцитов находящихся под воздействием ЭМИ КВЧ

Глава 11. Влияние метронидазола на двигательную активность

Paramecium caudatum.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Моделирование цитопротекторного действия 1-(2`-гидроксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазола и его влияние на связанную воду мембран и белков"

Актуальность темы. Биохимики и биоорганики проявляют повышенный интерес к молекулярным механизмам действия биорегуляторов, в частности - к лекарственным соединениям. Так, синтетический химиотерапевтический препарат широкого спектра действия 1-(2'гидроксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазол (метронидазол, МЗ) давно привлекает внимание исследователей. Дело в том, что кроме "основного" - противомикробного действия МЗ оказывает протекторный эффект на эукариотические клетки при воздействии на них ксенобиотиков.

Поскольку, в современном мире резко возросло влияние физических (П. Я. Григорьев, 1997; С.Н. Бобраков, А.Г. Каташев, 2001; А.Г. Шеин, Р.Н. Никулин, 2003) и химических факторов на живые организмы, является актуальным поиск клеточных протекторов. В последнее время особое внимание уделяется исследованию "новых" возможностей "старых лекарств" (И.С. Северина, 2005). Если механизм антибактериального действия МЗ хорошо изучен, то механизм его протекторного действия не исследован.

Давно известно влияние на структуру сетки водородных связей воды некоторых низкомолекулярных соединений (Дж. Поллак, 2001). Некоторые из них оказывают на воду структуроразрушающее действие (мочевина, многие неорганические анионы и т.д.), другие — структуростабилизирующее (метанол, этанол, диоксан и др.) (Б.В. Дерягин, Н.В. Чураев, 1971; В.Я. Антонченко, 1983). Известно, что некоторые лекарственные соединения могут структурировать приповерхностную воду (А.Д. Кунцевич с соавт., 1998). Не вызывает сомнений тот факт, что эти вещества могут влиять не только на объёмную воду, но и на гидратные оболочки клеток и биополимеров и, ка^ следствие, на конформацию и реакционную способность последних.

Есть основания полагать, что протекторный эффект МЗ обусловлен стабилизирующим воздействием вещества на структуру сетки водородных связей воды в примембранной области или у поверхности биомакромолекул. Результатом этого является прекращение доступа вещества к мембране, интегральному ферменту или рецептору. Вероятно, с этим связано протекторное действие препарата на клетки теплокровных. Представляет определенный интерес использование возможности МЗ структурировать примембранную воду не только для защиты клеток от воздействия химических и физических факторов (П.Е. Кузнецов с соавт., 2005), но и для регуляции биохимических процессов.

Важно детально понять, каким образом реализуется протекторный эффект МЗ, поскольку это открывает путь к конструированию новых клеточных протекторов и веществ, способных регулировать биохимические реакции. Поэтому, изучение протекторного действия данного соединения обусловливает актуальность темы настоящей работы.

Цель и задачи исследования. Цель настоящего исследования заключалась в изучении механизма протекторного действия метронидазола на клетки и их модели, находящиеся под воздействием детергента додецилсульфата натрия и электромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона. Для реализации указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить протекторное действие метронидазола на клетки и их модели, находящиеся под воздействием детергента додецилсульфата натрия.

2. Экспериментально и с помощью молекулярного моделирования изучить влияние метронидазола на состояние сетки водородных связей свободной и приповерхностной воды клеточных и модельных мембран.

3. Исследовать влияние метронидазола на гемолитическую устойчивость эритроцитов, находящихся под воздействием электромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона, изучить изолированное влияние метронидазола на эритроциты и Paramecium caudatum.

Научная новизна работы. Установлена способность МЗ в определенных концентрациях снижать коэффициент диффузии в примембранной водной среде. Выдвинуто и обосновано предположение, что этим обусловлен протекторный эффект МЗ.

Экспериментально и методами молекулярного моделирования установлено выполнение необходимых условий фазового ^-перехода в объемной водной среде и вблизи поверхности клеточных и модельных систем в присутствии МЗ. Показано, что Х-переход является вероятной причиной образования мощной гидратной оболочки клеток и их моделей.

В связи с тем, что МЗ является лекарственным препаратом широкого спектра действия и применяется при целом ряде инфекционных заболеваний, а также обнаруженная у него способность оказывать цитопротекторный эффект, делает исследование протекторного действия МЗ на молекулярном уровне интересным для врачей-клиницистов.

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены и обсуждались на первой и второй Российских школах-конференциях "Молекулярное моделирование в химии, биологии и медицине"(Саратов, 2002, 2004), на Международных конференциях "Saratov Fall Meeting" (Саратов, 2003,

2004), "The Human Proteome Organisation 2nd Annual & International Union Biochemistry and Molecular Biology XIX World Congress" (Canada, Montreal, 2002), 42nd Congress of the European Societies of Toxicology (Poland, Cracow,

2005), на 7-ой, 9-ой и 10-ой Пущинской школах-конференциях молодых ученых "Биология - наука XXI века" (Пущино, 2003,2005), на итоговой научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием "Молодежь и медицинская наука в XXI веке" (Киров, 2005), на VI Международном конгрессе молодых ученых и специалистов "Науки о человеке"(Томск, 2005), на студенческой научной конференции биологического факультета СГУ "Студенческие исследования в биологии" (Саратов, 2003, 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 18 работ в зарубежных и отечественных изданиях.

Работа выполнена на кафедре биохимии и биофизики биологического факультета Саратовского государственного университета в соответствии с плановой тематикой НИР "Воздействие антропогенных факторов на природные экосистемы", номер гос. регистрации 01.200.201974. Научный руководитель д.х.н, профессор Кузнецов П.Е.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Метронидазол проявляет свойства протектора клеточных и модельных мембран при воздействии на них детергента додецилсульфата натрия и под влиянием резонансных частот ЭМИ КВЧ.

2. В присутствии метронидазола выполняются необходимые условия фазового ^-перехода в водной фазе.

3. Метронидазол увеличивает гидратную оболочку и снижает коэффициент диффузии приповерхностной воды клеточных и модельных мембран.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, описывающей материалы и методы исследования, изложения полученных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы, содержащего 156 источников, в том числе 29 зарубежных. Работа изложена на 120 страницах машинописного текста, содержит 27 рисунков и 4 таблицы.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Попыхова, Эра Борисовна

104 ВЫВОДЫ

1. Показана способность метронидазола снижать коэффициент диффузии приповерхностной воды клеток и их моделей. Этот эффект вносит значительный вклад в формирование протекторного действия на клетки и их модели, находящиеся под воздействием детергента додецилсульфата натрия и электромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона.

2. Установлено, что метронидазол в концентрационном интервале 5x10"1 -5x10'14 % повышает гемолитическую устойчивость эритроцитов крови белых крыс, а также устойчивость липосом из яичного лецитина к детергенту додецилсульфату натрия. Механизм повышения гемолитической устойчивости связан с увеличением упорядоченности примембранной водной фазы, что вызывает снижение скорости диффузии лизирующего агента к мембране.

3. Экспериментально показано увеличение гидродинамического радиуса гидратной оболочки наночастиц алмаза, рассматриваемых как модель поверхности белков и биомембран.

4. С помощью флуоресцентного зондирования установлена способность метронидазола снижать коэффициент диффузии водной среды вблизи модельных мембран (липосом). Результаты молекулярного моделирования свидетельствуют о способности метронидазола образовывать кластеры воды, отличающиеся от характерных для чистой воды.

5. Показано, что метронидазол в концентрациях SxlO^xKT'Vo повышает гемолитическую устойчивость эритроцитов крови белых крыс к действию резонансных частот электромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона, разрушающему водородные связи гидратной оболочки клеток. Данный протекторный эффект метронидазола в низких концентрациях объясняется его способностью стабилизировать структуру сетки водородных связей приповерхностной воды клеток. Установлено, что изолированное действие метронидазола в концентрациях 5х10"6% и выше вызывает снижение гемолитической устойчивости эритроцитов и подвижности простейших P. caudatum. В более низких концентрациях подобный эффект не отмечался.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Отрицательное влияние на организм различных химикатов, ЭМИ антропогенного происхождения и других опасных факторов неуклонно увеличивается. Очевидными последствиями такого воздействия на организм человека являются снижение статуса иммунной системы, увеличение риска возникновения патологических состояний. На клеточном уровне эти отрицательные воздействия вызывают повреждение клеточной мембраны и органелл, оказывают повреждающее действие на различные структурно-метаболические комплексы, к числу которых относятся ферменты и ДНК. Нарушения в их функционировании приводят к существенным метаболическим сдвигам, мутациям и, в итоге, к гибели клеток. Опасность воздействия этих факторов природной среды стимулирует развитие исследований направленных на выявление механизмов действия опасных факторов на живой организм и защиты от их влияния.

В связи с вышесказанным на сегодняшний день является актуальной разработка и изучение механизмов защиты организма на клеточном уровне. В современной научной литературе имеется множество работ, посвященных исследованию защиты организма от повреждающего действия окислительного стресса, соединений различной химической природы и т.д. Особую актуальность представляет изучение механизма действия химических соединений, обладающих протекторными свойствами на клеточном уровне. Клеточные протекторы рассматриваются как средства, увеличивающие резистентность организма к воздействию опасных факторов. Одним из возможных цитопротекторов является МЗ.

Проведенные нами эксперименты по изучению цитопротекторного действия МЗ позволили предположить, что его протекторный эффект обусловлен влиянием на приповерхностную воду. Так, методами молекулярного моделирования влияния МЗ на водное микроокружение было показано появление кластеров с нехарактерным для чистой воды размером, а именно, МЗ вызывал появление кластеров с числом молекул более четырех и/или увеличение числа молекул в кластерах с малым числом молекул воды.

Экспериментальные данные по изучению влияния МЗ на гемолитическую устойчивость эритроцитов крови белых крыс к ДСН свидетельствуют о значительном замедлении процесса гемолиза в присутствии определенных концентраций МЗ. При этом увеличение независимой от времени константы скорости гемолиза к напрямую связано с уменьшением концентрации МЗ в опытных образцах.

Данные наших экспериментов показали, что МЗ также снижает скорость разрушения ДСН липосом из яичного лецитина. Через 1 час инкубации липосом значимые отличия оптической плотности суспензии от контроля (р<0,05) наблюдались в интервале концентраций МЗ 5х10^-5х10-14%. Поскольку мембраны липосом лишены каких-либо рецепторов, а концентрация МЗ достаточно низка, то можно полагать, что протекторное действие МЗ является неспецифичным, и, вероятнее всего, связано с его влиянием на диффузионную подвижность примембранной воды.

Исследование влияния МЗ на состояние сетки водородных связей приповерхностной воды липосом с помощью флуоресцентного зонда ДМХ, интенсивность флуоресценции которого связана с подвижностью окружающих протонодонорных молекул, показало, что интенсивность флуоресценции зонда в присутствии МЗ превышает интенсивность при его отсутствии. Это свидетельствует о снижении диффузионной подвижности воды при введении МЗ в примембранную область.

Исследование светорассеяния водными растворами МЗ свидетельствует о способности последнего в концентрациях 5x10^-5x10'10 % (р<0,05) значительно его увеличивать. Данные концентрации МЗ достаточно низки, поэтому увеличение светорассеяния не может быть связано с флуктуациями концентрации. Объяснить увеличение светорассеяния можно флуктуациями плотности воды. Подобного рода флуктуации возникают вблизи критической точки фазового Я-перехода (М.Ф. Вукс, JI.B. Шурупова, 1976).

Поскольку мы предположили, что МЗ в определенных концентрациях вызывает фазовый X -переход, то было необходимо исследовать его влияние на диффузионные характеристики раствора какого-либо вещества. Обращение в ноль коэффициента диффузии ФН служило подтверждением нашей гипотезы. Обнаруженное значительное снижение коэффициента диффузии подтвердило гипотезу о способности МЗ вызывать фазовый ^-переход типа порядок-беспорядок в структуре сетки водородных связей окружающей воды в концентрационном интервале 0,5% и 5xl0~5-5xl0'7%.

В экспериментах по вискозиметрическому измерению размера гидратной оболочки наночастиц УДА было получено значимое увеличение удельной вязкости в присутствии МЗ от таковой при его отсутствии. Была рассчитана зависимость толщины гидратной оболочки УДА от концентрации МЗ в гидрозоле. Показано ее увеличение практически в том же концентрационном интервале МЗ в котором, в предыдущем эксперименте наблюдалось значимое обращение в ноль коэффициента диффузии ФН.

Определение гемолитической устойчивости эритроцитов белых крыс в присутствии МЗ под действием ЭМИ КВЧ показало способность МЗ значительно снижать скорость гемолиза эритроцитов при воздействии на них как резонансных частот ЭМИ КВЧ, так и частот расположенных рядом с резонансными. Экспериментальные данные по определению гемолитической устойчивости эритроцитов при действии ЭМИ показывают, что воздействие резонансных частот ЭМИ КВЧ вызывает значительное снижение числа эритроцитов по отношению к контрольной пробе. При этом, предварительное введение в пробу МЗ значительно снижает скорость гемолиза. Анализ данных о упо влиянию МЗ в концентрациях от 5x10- % до от 5x10 % на эритроциты не подверженные действию ЭМИ КВЧ свидетельствует об его способности снижать гемолитическую устойчивость эритроцитов и отсутствие влияния МЗ на гемолиз в более низких концентрациях.

Исследование используемых нами в экспериментах концентраций МЗ на токсичность по отношению к биологическим объектам показало способность последнего в концентрациях от 5x10"^% и, вероятно, выше изменять подвижность одноклеточных простейших P. caudatum, что свидетельствует о токсичности МЗ. В более низких концентрациях 5х10"9% и, вероятно, ниже МЗ не оказывает заметного влияния на подвижность парамеций, а следовательно и не оказывает на них токсического влияния.

Для защиты организма на клеточном уровне от воздействия ксенобиотиков и резонансных частот ЭМИ КВЧ использование МЗ, как клеточного протектора может быть весьма перспективным. Выявленное протекторное действие МЗ может быть использовано для конструирования клеточных протекторов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Попыхова, Эра Борисовна, Саратов

1. Аксенов С.И. Вода и ее роль в регуляции биологических процессов / С.И. Аксенов. М.: Наука, 1990.- 170 с.

2. Акуличев В.А. Периодические фазовые превращения в жидкости / В.А. Акуличев, В.Н. Алексеев, В.А. Буланов. М.: Наука, 1986. - 279 с.

3. Альберте Б. Молекулярная биология клетки / Б. Альберте, Д. Брей, Дж. Льюис. М.: Мир, 1994. -517с.

4. Антонов В.Ф. Липидные мембраны при фазовых превращениях / В.Ф. Антонов, Е.Ю. Смирнова, Е.В. Шевченко. М.: Наука, 1992. - 125 с.

5. Антонченко В.Я. Микроскопическая теория воды в порах мембран / В.Я. Антонченко. Киев : Наукова думка, 1983. - 160 с.

6. Антонченко В.Я. Основы физики воды / В.Я. Антонченко, А.С. Давыдов, В.В. Ильин. Киев: Наукова думка, 1991.- 640 с.

7. Арифов С.С.Сравнительное изучение степени интоксикации у больных острым гнойным средним отитом / С.С. Арифов // Вестник оторингологии. -1998.-№3.- С. 23-24.

8. Бакаева Е.Н. Обоснование использования одноклеточных в биотестировании./ Е.Н. Бакаева // Инфузории в биотестировании : тез. докл. междунар. заоч. науч.-практ. конф, СПб., 1998. -С.26-27.

9. Балаян Л.О. Лечение больных с прогрессирующей мышечной дистрофией / Л.О. Балаян, Г.Н. Дунаевская, В.Ф. Ситников // Журнал невропатологии и психиатрии. 1975. - №9. - С.1317-1319.

10. Ю.Барсуков Л.И. Липосомы / Л.И. Барсуков // Соросовский образовательныйжурнал. 1998. - №10.- С.2-9. П.Березов Т.Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин. - М. :

11. Медицина, 1998. 680 с. 12.Бернал Д.Д. Роль воды в кристаллических веществах / Д.Д. Бернал // Успехи химии. - 1956.- Т.25, №5. - С.641-643.

12. Бецкий О.В. О механизмах взаимодействия миллиметровых волн низкой интенсивности с биологическими объектами / О.В. Бецкий // Известия ВУЗов. Радиофизика. 1994. - Т.37, №1. с. 30-41.

13. Бецкий О.В. Разработка основ миллиметровой терапии / О.В. Бецкий, Н.Д. Девятков // Биомедицинская радиоэлектроника. 2000. - №8. - С. 53-62.

14. Бецкий О.В. Лечение электромагнитными полями. Часть2 / О.В. Бецкий, Н.Д. Девятков, Н.Н. Лебедева // Биомедицинская радиоэлектроника. 2000. - №10. - С.3-13.

15. Бецкий О.В. Лечение электромагнитными полями. ЧастьЗ / О.В. Бецкий, Н.Д. Девятков, Н.Н. Лебедева // Биомедицинская радиоэлектроника. 2000. -№12. -С.11-19.

16. Бецкий О.В. Необычные свойства воды в слабых электромагнитных полях / О.В. Бецкий, Н.Н. Лебедева, Т.Н. Котровская // Биомедицинская радиоэлектроника. 2003. - №1. - С. 37-44.

17. Бецкий О.В. Биологические эффекты миллиметровых излучений низкой интенсивности / О.В. Бецкий, А.В. Плутвинский // Известия ВУЗов. Сер. Радиоэлектроника. Электронные приборы СВЧ. 1986. - Т.29, №10. - С.З-10.

18. Бобраков С.Н. Электромагнитная составляющая современной урбанизированной среды / С.Н. Бобраков, А.Г. Карташев // Радиационная биология. Радиоэкология. 2001.- Т.41, №6.- С. 706-711.

19. Богачева Н.В. Компьютерный метод оценки средней скорости движения инфузории-туфельки по пересечению луча света / Н.В. Богачева, А.И. Деев // Биофизика. 2002. - Т. 47, №1. - С. 94-99.

20. Большая медицинская энциклопедия. Т. 28. / под ред. Б.В. Петровского М. : Советская энциклопедия. - 3-е изд. -1986. - 543 с.

21. Большой Энциклопедический Словарь "Химия" / под ред. Л.И. Кунянц М. : Большая Российская энциклопедия. - 2-е изд. (репринт.). - 1998. - 790 с.

22. Буркерт У. Молекулярная механика / У. Буркет, Н. Эллинджер. М. : Мир, 1986.-364 с.

23. Вайсбергер А. Физические методы органической химии / А. Вайсбергер. -М.: Иностранная литература, 1952. Т. 2. - 500 с.

24. Васильева Е.М. Биохимические особенности эритроцита. Влияние патологии / Е.М. Васильева // Биомедицинская химия. 2005. - Т. 51, №2. -С. 118-126.

25. Везикуляция эритроцитов при их хранении и связь ее с другими процессами в клетке / Е.А. Черницкий и др. // Биофизика. 1994. - Т. 39, № 2. - С. 357-361.

26. Взаимодействие водородосодержащих сред с магнитными полями / В.И. Петросян и др. // Биомедицинская радиоэлектроника. 2000. - №2. - С. 1017.

27. Взаимодействие физических и биологических объектов с электромагнитным излучением КВЧ- диапазона / В.И. Петросян и др. // Радиотехника и электроника. 1995. -№ 1.- С.127-134.

28. Включение рифампицина в многослойные и однослойные везикулы (липосомы) разного фосфолипидного состава / А.С. Минина и др. // Биофизика. 2004,- Т.49, №4.- С. 674-679.

29. Владимиров Ю.А. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран / Ю.А. Владимиров, Г.Е. Добрецов М.: Наука, 1980. - 270 с.

30. Влияние микроволн нетепловой интенсивности на число аберрантных гепатоцитов у крыс / Е.Н. Антипенко, И.В. Ковешникова, О.И. Тимченко // Радиобиология. -1984. Т.24, №3. - С. 403-405.

31. Влияние этанола на гемолитическую устойчивость эритроцитов / О.В. Тюлина и др. // Биохимия. 2000. - Т. 65, № 2.- С. 218-224.

32. Вода, парадоксы и величие малых величин / В.И. Петросян и др. // Биомедицинская радиоэлектроника. 2000. - №2. - С. 4-9.

33. Воздействие электромагнитных полей миллиметрового диапазона на структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран / С.А. Баджинян и др. // Радиационная биология. Радиоэкология. 2002. - Т. 42, №5.-С. 551-555.

34. Вукс М.Ф. Добавочные максимумы светорассеяния у растворов третичного бутилового спирта в воде и тяжелой воде / М.Ф. Вукс, JI.B. Шурупова // Вестник Ленинградского университета. 1971. - Т. 40, № 6. - С. 146-147.

35. Вукс М.Ф. Рассеяние света и фазовые переходы в водных растворах простых спиртов / М.Ф. Вукс, JI.B. Шурупова // Оптика и спектроскопия. -1976. -Т.40, № 1. С. 154-159.

36. Габуда С.П. Связанная вода. Факты и гипотезы / С.П. Габуда. Новосибирск : Изд-во СО Наука, 1982. - 160 с.

37. Генерация оксида азота при гидролитических превращениях химиотерапевтического препарата "Нитазол" / В.И. Левина и др. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2002. -№4.-С. 6-10.

38. Геннис Р. Биомембраны: молекулярная структура и функции / Р. Геннис. -М.: Мир, 1997,- 510 с.

39. Гигиенические аспекты и биологическое действие модулированных электромагнитных полей диапазона радиочастот / Р.И. Ципигина и др.. -М.: НИИ гигиены труда им. Ф.Ф. Эрисмана, 1990.- 60 с.

40. Голант М.Б. Резонансное действие когерентных электромагнитных излучений миллиметрового диапазона волн на живые организмы / М.Б. Голант // Биофизика. 1989. - Т. 34, № 6. - С. 1004-1015.

41. Горизонтов П.Д. Система крови как основа резистентности и адаптации организма / П.Д. Горизонтов // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1981.- №2.- С. 323-325.

42. Грегориадис Г. Липосомы в биологических системах / Г. Грегориадис. М. : Медицина, 1983.-384с.

43. Григорьев Н.Б. Генерация оксида азота при химическом восстановлении антибактериальных препаратов нитрофуранового ряда / Н.Б. Григорьев, Г.В. Чечекин, А.П. Арзамасцев // Химия гетероциклических соединений. -1999,- Т.385, №7,- С. 902-906.

44. Григорьев П.Я. Медикаментозная терапия и профилактика обострений и осложнений язвенной болезни / П.Я. Григорьев // Русский медицинский журнал. 1997.- Т.5, №22. - С.30-35.

45. Григорьев Ю.Г. Человек в электромагнитном поле (существующая ситуация, ожидаемые биоэффекты и оценка опасности) / Ю.Г. Григорьев // Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. - Т. 37, № 4. - С. 690-702.

46. Гулевский А.К. Влияние низкотемпературного воздействия на проницаемость мембран эритроцитов, реконструированных в средах разного ионного состава / А.К. Гулевский // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1981.- Т. 91, № 5. - С. 551-552.

47. Дворкин В.М. Получение липосом методом обращенных фаз без ультразвуковой обработки / В.М. Дворкин // Биохимия. 1985.-Т.50, №5.-С.866-869.

48. Девятков Н.Д. Миллиметровые волны и их роль в процессах жизнедеятельности / Н.Д. Девятков, М.Б. Голант, О.В. Бецкий ; под ред. Н.Д. Девяткова. М.: Радио и связь, 1991. - 168 с.

49. Де Гроот С.П. Термодинамика необратимых процессов / С.П. Де Гроот. -М.: Техн-теор. лит, 1956. 280 с.

50. Дерягин Б.В. Новые свойства жидкостей. Сверхплотная вода / Б.В. Дерягин,

51. Н.В. Чураев. М.: Наука, 1971. - 176с.

52. Дерягин Б.В. Поверхностные силы / Б.В. Дерягин, Н.В. Чураев, В.М. Муллер. -М.: Наука, 1985 399 с.

53. Зацепина Н.Г. Физические свойства и структура воды / Н.Г. Зацепина. М. : Изд-во МГУ, 1987. - 170 с.

54. Зубова К.В. Кластерная структура жидких спиртов, воды, //-гексана / К.В. Зубова, А.В. Зубов, В.А. Зубов // Журнал прикладной спектроскопии. -2005,- Т. 72, №3. -С.305-312.

55. Ивенс И. Механика и термодинамика биологических мембран / И. Ивенс, Р. Скейтлак. М.: Мир, 1982. - 257 с.

56. Изменение свойств липидного бислоя под действием гипохлорита натрия / В.В. Черный и др. // Биологические мембраны. — 1992. Т. 9, №1. - С. 6065.

57. Исследование NO-донорной активности антимикробного препарата тинидазол / В.И. Левина // Химико-фармацевтический журнал. 2004. - Т.38, №1,-С. 15-18.

58. Кесслер Ю.М. Сольвофобные эффекты / Ю.М. Кесслер, А.Л. Зайцев. Л. : Химия, 1989.-312 с.

59. Киров М.В. Конформационная концепция протонной упорядоченности водных систем / М.В. Киров // Журнал структурной химии. 2001. - Т. 42, №5.-С. 958-965.

60. Кноп А. Фенольные смолы и материалы на их основе / А. Кноп, В. Шейб. -М. . Наука, 1983.-230 с.

61. Ковешникова И.В. Генетические эффекты микроволн в биологических системах различных уровней организации / И.В. Ковешникова, Е.Н. Антипенко // Успехи современной биологии. 1988.- Т. 105, № 3. - С. 363373.

62. Ковешникова И.В. Об участии тиреоидных гормонов в модификации мутагенного эффекта микроволн / И.В. Ковешникова, Е.Н. Антипенко // Радиобиология. 1991. - Т. 31, №1. - С. 147-149.

63. Козлов М.М. Мембранный скелет эритроцита. Теоретическая модель / М.М. Козлов, B.C. Маркин // Биологические мембраны. 1986. - Т. 3, №4. - С. 110-121.

64. Конопля Е.Ф. Воздействие электромагнитных излучений миллиметрового диапазона на геном соматических клеток / Е.Ф. Конопля, Л.Н. Николаевич, В.И. Шалатонин // Радиационная биология. Радиоэкология. 2004. - Т. 44, №4.-С. 432-437.

65. Крепе Е. М. Липиды клеточных мембран: эволюция липидов мозга. Адаптационная функция липидов / Е. М. Крепе. Л.: Наука, 1981. - 339 с.

66. Кузякова JI.M. Конструирование трансдермальных препаратов с заданными свойствами / Л.М. Кузякова // Веста. Моск. ун-та. Сер. 2, Химия. 2005. - Т. 46, №1.- С.74-79.

67. Кузнецов П.Е. Влияние некоторых опиатов на стабильность искусственных бислойных липидных мембран / П.Е. Кузнецов, А.Д. Кунцевич, Ю.А. Горбунов // Доклады АН. 1998. - Т. 358, № 1. - С. 125-126.

68. Кунцевич А.Д. Параметр подобия молекулярного электростатического потенциала / А.Д. Кунцевич, П.Е. Кузнецов, Ю.А. Горбунов // IX Всесоюз. конф. по химической информатике : тез. докл. Черноголовка, 1992. - Т.1. -С.5.

69. Кунцевич А.Д. Роль приповерхностной воды в проявлении биологического действия опиатов / А.Д. Кунцевич, П.Е. Кузнецов, Г.В. Назаров // Доклады АН. 1998. - Т. 363, № 4. - С. 552-553.

70. Кучеренко Н.Е. Липиды / Н.Е. Кучеренко, А.Н. Васильев ; под ред. Н.Е. Кучеренко. Киев : Выща школа, 1985. - 247 с.

71. Ландау Л.Д. Теоретическая физика : в 10-ти т. / Л.Д. Ландау, Е.М. Лившиц ; под ред. Л. П. Питаевского. М. : Наука, 1976. - Т. 5 : Статистическая физика. - 613 с.

72. Ленинджер А. Основы биохимии : в 3-х т. / А. Ленинджер ; перевод с англ.1. V»

73. В. В. Борисова ; под ред. В. А. Энгельгардта, Я. М. Варшавского. М. : Мир, 1985.-Т. 1.- 353 с.

74. Лобышев В.И. Компьютерный модульный дизайн параметрических структур воды / В.И. Лобышев, А.Б. Соловей, Н.А. Бульенков // Биофизика. 2003.- Т.48, №6. - С. 1011-1012.

75. Лоуренс Д.Р. Клиническая фармакология : в 2-х т. / Д.Р. Лоуренс, П.Н. Бенитт ; перевод с англ. А.Я. Ивлевой ; под ред. В.И. Метелицы. М. : Медицина, 1991.-Т. 2. - 704 с.

76. Лященко А.К. Комплиментарная организация структуры воды / А.К. Лященко, B.C. Дуняшев // Журнал структурной химии. 2003. - Т. 44, №5. -С. 906-915.

77. Маленков Г.Г. Геометрический аспект явления стабилизации структуры воды молекулами неэлектролитов / Г.Г. Маленков // Журнал структурной химии. 1966. - №7. - С. 331-336.

78. Маленков Г.Г. Физическая химия : современные проблемы / Г.Г. Маленков. -М.: Химия, 1984.-300 с.

79. Малый практикум по физиологии человека и животных / А.С. Батуев И.П. Никитина. СПб.: Изд-во С-Петербургского ун-та, 2001.- 341 с.

80. Марголис Л.Б. Липосомы и их взаимодействия с клетками / Л.Б. Марголис, Л.Д. Бергельсон. М.: Наука, 1986. - 240 с.

81. Машковский М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. М. : Новая волна, 2005.-1025 с.

82. Метронидазол протектор живых клеток при воздействии КВЧ излучения / П.Е. Кузнецов и др. // Ежегодник Российского Национального Комитета по защите от неионизирующих излучений : сб. тр. -М., 2005. - С.15-18.

83. Миргород Ю.А. Структура разбавленных растворов додецилсульфата натрия /Ю.А. Миргород //Журнал структурной химии. 1991,- Т.32, №6. -С. 93-96.

84. Морохов И.Д. Физические явления в ультрадисперсных средах / И.Д. Морохов, Л.И. Трусов. М.: Энергоатомиздат, 1984.- 324 с.

85. Некоторые вопросы методики и результаты экспериментального исследования воздействий СВЧ на микроорганизмы и животных / Э.Б. Базанова и др. // Успехи физических наук. 1973. - Т. 110, №3. - С. 455456.

86. Неспецифическое действие морфина на мембраны эритроцитов / П.Е. Кузнецов и др. // Биофизика. 2004. - Т. 49, № 4. - С. 680-684.

87. Ольшанская А.Я. Эритроциты в тканевом и имунном гомеостазе / А.Я. Ольшанская, В.А. Одинокова, Н.Н. Квитко // Современная медицина. -1984,-№11. -С. 43-48.

88. Особая роль системы "миллиметровые волны водная среда" в природе / Н.И. Синицин и др. // Биомедицинская радиоэлектроника. - 1998. - №1. -С.5-23.

89. Падейская Е.Н. Антимикробные препараты в ряду производных сульфаниламида, диаминопиримидина, 5-нитроимидазола, ди-N-оксихиноксалина / Е.Н. Падейская // Русский медицинский журнал. 1997. - Т.5, № 21,- С.20-30.

90. ПНД ФТ 14.1:2:3:4.2-98. Методика определения токсичности проб отходов экспресс-методом с помощью прибора «Биотестер». 1998. - Юс.; ФР. 1.39.2001.00283.

91. Поверхностные пленки воды в дисперсных структурах./ под ред. Е.Д. Щукина. М.: Изд-во МГУ, 1988. - 278 с.

92. Поддержание структуры водного матрикса важнейший механизм гомеостатической регуляции в живых системах / Г.Е. Бриль и др. // Биомедицинская радиоэлектроника. - 2000. - №2. - С. 18-23.

93. Поллак Дж. Клетки, гели и двигатели жизни : новый унифицирующий взгляд на клеточные функции / Дж. Поллак. М.: Новая волна, 2001. - 300 с.

94. Посте Д. Взаимодействие липидных везикул (липосом) с клетками в культуре и их использование как переносчиков лекарств и макромолекул / Д. Посте. М.: Медицина, 1983.- 107 с.

95. Препаративная биохимия липидов / Л.Д. Бергельсон и др. М.: Наука, 1981.-243 с.

96. Результаты воздействия облучения электромагнитными волнами миллиметрового диапазона на некоторые биологические объекты / Н.Д. Девятков и др. // Успехи физических наук. 1973. - Т. 110, № 3. - С. 456.

97. Рид Р. Свойства газов и жидкостей / Р. Рид, Дж. Праусниц, Т. Шервуд ; под ред. Б.И. Соколова. Л.: Химия. Ленингр. отд-ние, 1982. - 592 с.

98. Сакович Г.В. Агрегация алмазов полученных из взрывчатых веществ / Г.В. Сакович, В.Д. Губаревич, Ф.З. Бадаев // Доклады АН СССР. 1990. - Т. 310, №2.-С. 402-406.

99. Самойлов О.Я. Структура водных растворов / О .Я. Самойлов. М.: Изд-во АН СССР, 1957.- 182 с.

100. Северина И.С. NO: новый взгляд на механизм действия старых лекарств / И.С. Северина // Биомедицинская химия. 2005.- Т.51, №1. - С. 19-29.

101. Селезнев В.П. Гидратация липидов: факты в пользу дальних влияний на структуру водной фазы / В.П. Селезнев, В.П. Мартаков // Биофизика. -1981. -Т.26, №2. С. 254-256.

102. Сенькович О.А. О размерах пор, возникающих в эритроцитах под воздействием детергентов / О.А. Сенькович, Е.А. Черницкий // Биологические мембраны. 1997. - Т.14, №5. - С. 549-556.

103. Сергеев П.В. Биохимическая фармакология / П.В. Сергеев. М.: Высшая школа, 1982.-342 с.

104. Состояние воды в различных физико-химических условиях / под ред. М.Ф. Вукса, О.Ф. Безрукова. Л.: Изд-во ЛГУ, 1986. - 216 с.

105. Степанов А.Е. Физиологически активные липиды / А.Е. Степанов, Ю.М. Краснопольский, В.И. Швец. М.: Наука, 1991.-136 с.

106. Схема экспресс-методов интегральной оценки биологической активности индивидуальных веществ и комплексных препаратов на биологических объектах / А.Н. Кудрин и др. // Российский химический журнал. 1997.-Т.41,№5.-С. 114-119.

107. Уотерсон Дж. Г. Роль воды в функции клетки / Дж. Г. Уотерсон // Биофизика. 1991.- Т.36, №1. - С. 5-30.

108. Фабелинский И.Л. Молекулярное рассеяние света / И.Л. Фабелинский. -М.: Наука, 1965. -511с.

109. Физиология человека : в 2-х т. / под ред. В.М. Покровского, Г.Ф. Коротько. -М.: Медицина, 2001. Т. 1. - 442 с.

110. Физиология человека : в 4-х т. / под ред. Р. Шмидта, Г. Тевса. М. : Мир, 1986. Т.З : Кровь. Кровообращение. Дыхание. - 673 с.

111. Фрайфельдер Д. Физическая биохимия: применение физико-химических методов в биохимии и молекулярной биологии / Д. Фрайфельдер. М. : Мир, 1980.-582C.

112. Химические системы для индикации действия магнитного поля на воду / П.Е. Кузнецов и др. // Биомедицинская радиоэлектроника. 2003.- №1. -С. 45-48.

113. Чанг Р. Физическая химия с приложениями к биологическим системам / Р. Чанг ; перевод с англ. М.Г. Гольдфельда ; под ред. Ю.Ш. Мошковского. -М.: Мир.-1980.-646 с.

114. Чекман И.С. Справочник по клинической фармакологии / И.С. Чекман, А.П. Пелещук, О.А. Пятак. Киев : Здоров'я, 1986. - 220 с.

115. Черницкий Е.А. Структура и функции эритроцитарных мембран / Е.А. Черницкий, А.В. Воробей. Минск: Наука и техника, 1981.-215 с.

116. Черницкий Е.А. Параметры гемолиза додецилсульфатом натрия как индикатор структурного состояния мембран эритроцитов / Е.А. Черницкий,

117. О.А. Сенькович, Е.И. Слобожанина // Биофизика. 1999. - Т. 44, № 1.-С.66-69.

118. Черномордик А.Б. Справочник по применению антибиотиков и других химиотерапевтических препаратов / А.Б. Черномордик. Киев : Наукова думка, 1988.-318 с.

119. Чиганова Г.А. Исследование поверхностных свойств ультрадисперсных алмазов / Г.А. Чиганова // Коллоидный журнал. 1994. - Т. 56, № 2. - С. 266268.

120. Чиганова Г.А. Влияние гидратации частиц на агрегативную устойчивость гидрозолей ультрадисперсных алмазов / Г.А. Чиганова // Коллоидный журнал. 1997.- Т. 59, № 1. - С. 93-95.

121. Чиганова Г.А. Агрегирование частиц в гидрозолях ультрадисперсных алмазов / Г.А. Чиганова // Коллоидный журнал. 2000.- Т. 62, № 2. - С. 272277.

122. Широкова К.И. Применение метронидазола в лечении больных язвенной болезнью / К.И. Широкова, К.М. Филлимонов, А.В. Полякова // Клиническая медицина. -1981. №2. - С.48-50.

123. Эйзенберг Д. Структура и свойства воды / Д. Эйзенберг, В. Кауцман. JI. : Гидрометиздат, 1975. - 280 с.

124. Эткинс П. Физическая химия : в 2-х т. / П. Эткинс. М. : Мир, 1980. -Т.1. -570 с.

125. Ядерная (!Н) магнитная релаксационная спектроскопия гидрозолей ультрадисперсных алмазов / A.M. Апаркин и др. // Коллоидный журнал. -2003. Т. 65, №6. - С.725-728.

126. Яновская JI.A. Синтез винилогов халкона / JI.A. Яновская, Б. А. Умирзаков, И.П. Яковлев // Известия АН СССР. Сер. Химия. 1971. - № 11.-С. 24-27.

127. Banghem A. D. Negative staining of phospholipids and their structured modification by surface agents as observed in electron microscope / A. D. Banghem, R.W. Home // Mol. Biol.- 1964. V. 8,- P. 660-668.

128. Banghem A. D. Diffusion of univalent ions across the lamellae of swollen phospholipid / A. D. Banghem, M.M. Standish, J.S. Watkins // Mol. Biol.-1965.- V.13.-P. 238-252.

129. Chaplin M.F. Water, its importance to life / M.F. Chaplin // Biochem. Mol. Biol. Educ. 2001. - V.29, № 2.- P. 54-59.

130. Chaplin M.F. A proposal for structuring of water / M.F. Chaplin // Biophis. Chem. 2000.- V. 83, №3. - P. 211-221.

131. Clinical pharmacokinetics of metronidazole and other nitroimidazole antiinfectives / A. H. Lau et al. // Clin. Pharmacokinet. 1992. - № 23,- P. 328-334.

132. Computer simulation of structure and mobility of water hydrogen bonds net in aqueous solutions of some chemical compounds / P. E. Kuznetsov et al. // SPIE Proceedings. 2005. - V. 5773. - P. 188-194.

133. Dardelhon M. Determination of a thermal equivalent of millimeter microwaves in living cells / M. Dardelhon, D. Averbeck, A. Berteaud // Microwave power. -1979. №14. - P. 307-312.

134. Finney J. L. Water and aqueous solution / J. L. Finney. Bristol: Adam Higler, 1986.-349 p.

135. Generation of mltilamellar and unilamellar phospholipid vesicles / M. J. Hope et al. // Chem. phys. lipids. 1986. - V. 40. - P. 89-107.

136. Gregoriades G. Liposomes as drug carriers: resent trends and progress / G. Gregoriades. N. Y.: J. Wiley and sons, - 1988. - 385 p.

137. Griindler W. Sharp resonance in yeast growth prove nont-hermal sensitivity in microwaves / W. Griindler, F. Keilmann // Phys. Rev. Letters.- 1983. V. 51, № 13.- P. 307-312.

138. Influence of ant {-Helicobacter triple-therapy with metronidazole, omeprazole and clarithromycin on intestinal microflora / A. Buhling et al. // Alimentary Pharmacology & Therapeutics. 2001. - V. 15, № 9. - P. 1445-1452.

139. Inhibition of monoamine oxidase by metronidazole / O. Befani et al. // Inflam. Res. -2001. V. 50, №2. - P.136-137.

140. Kalinichev A.G. Hydrogen Bonding in Supercritical Water. Computer simulation / A.G. Kalinichev, J. D. Buss // Phys.Chem.-1997. V.101.- P.9720-9727.

141. Kalinichev A.G. Thermodynamics and structure of molecular clusters in supercritical water / A.G. Kalinichev, S.V. Churakov // Fluid Phase Equilibra. -2001.-V. 183-184.-P. 271-278.

142. Lasic D. D. Liposomes: from physics to applications / D. D. Lasic. -Amsterdam : Elsevier, 1993.- 180 p.

143. Ling A.M. The aqueous cytoplasm / A.M. Ling. N.Y.: Dakker, 1989. -230 P

144. Mechanism of free radical-induced hemolysis of human erithrosytes: hemolysis by water-soluble radical initiator / Y. Sato et al. // Biochemistry.-1995.- V. 34, №28.-P. 8940-8949.

145. Optical properties of aqueous morphine solutions / P.E. Kuznetsov et al. // SPIE Proceedings. 2003.- V. 5068.- P. 396-404.

146. Pekiner В. Oxidation of human red blood cells by a free radical initiator and effects of radical scavengers / B. Pekiner, J.F. Pennock // Biochem. Mol. Biol. Int.- 1994.-V. 33.- P. 1159-1167.

147. Radhakrishnan T.P. Conformational concept of proton ordering in aqueous systems / T.P. Radhakrishnan, В. C. Herndon // Phys. Chem. 1991. - V. 95, № 7.- P.10609-10617.

148. Ralph E.D. Clinical pharmacokinetics of metronidazole / E.D. Ralph // Clin. Pharmacokinet. 1983. - № 18.- P 43-62.

149. Sozoka F. Comparative properties and methods of preparation of lipid vesicles (liposomes) / F. Sozoka, D. Papahadjopoulos // Annu. rev. biophys. bioeng. -1980.- V.9.- P.467-508.

150. Stenhoff B. Slowing down of the kinetics of liquid/liquid phase separation along the binodal curve of a binary liquid mixture with a miscibility gap approaching critical point / B. Stenhoff, D. Woermann // Chem. Phis. 1995. - V.103, №20.- P.8985-8992.

151. Taylor M.G. Thermal analysis of phase transition behavior in liposomes / M.G. Taylor, R.M. Morris // Thermochemica acta.- 1995.- V. 248.- P. 289 -301.

152. The vascular and glandular organoprotective properties of metronidazole in the rodent stomach / J.K.S. Ко et al. // Alimentary Pharmacology & Therapeutics. 1997. - V. 11, № 4. -P. 811-819.

Информация о работе

Попыхова, Эра Борисовна
кандидата биологических наук
Саратов, 2007
ВАК 03.00.02

Диссертация

Моделирование цитопротекторного действия 1-(2`-гидроксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазола и его влияние на связанную воду мембран и белков - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Моделирование цитопротекторного действия 1-(2`-гидроксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазола и его влияние на связанную воду мембран и белков - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы