Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микроорганизмы с фосфатрастворяющими и фунгицидными свойствами как основа для создания комплексного препарата, альтернативного фосфорным удобрениям и химическим фунгицидам

ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микроорганизмы с фосфатрастворяющими и фунгицидными свойствами как основа для создания комплексного препарата, альтернативного фосфорным удобрениям и химическим фунгицидам"

Старшов Алексей Александрович

МИКРООРГАНИЗМЫ С ФОСФАТРАСТВОРЯЮЩИМИ И ФУНГИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ КАК ОСНОВА ДЛЯ СОЗДАНИЯ КОМПЛЕКСНОГО ПРЕПАРАТА, АЛЬТЕРНАТИВНОГО ФОСФОРНЫМ УДОБРЕНИЯМ И ХИМИЧЕСКИМ ФУНГИЦИДАМ

03.02.03— микробиология 03.01.06 — биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ь ФсВ 2314

Оболенск — 2013

005544701

Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации

Научные руководители: Коломбет Любовь Васильевна - доктор биологических наук

Дунайцев Игорь Анатольевич - кандидат биологических наук

Официальные оппоненты: Нугманова Татьяна Алексеевна — доктор технических наук, профессор, заведующая лабораторией ОАО «Биохиммаш», г. Москва

Соколов Михаил Сергеевич — академик Российской академии сельскохозяйственных наук, доктор биологических наук, профессор, научный консультант компании «МикроБио», г. Москва

Ведущая организация:

Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Российской академии сельскохозяйственных наук, г. Санкт-Петербург

Защита состоится «28» февраля 2014 года в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 350.002.01 при Федеральном бюджетном учреждении науки «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации по адресу: 142279, Московская обл., Серпуховский р-н, п. Оболенск, ФБУН ГНЦ ПМБ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии».

Автореферат разослан 2014 г.

Учёный секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

Фурсова Надежда Константиновна

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы:

Продовольственная безопасность любого государства находится в прямой зависимости от количества и качества производимой сельхозпродукции. Данная работа направлена на решение двух острых проблем в зерновом производстве: повышение почвенного плодородия и получение качественной продукции, свободной от мико-токсинов. Традиционное применение химических минеральных удобрений и пестицидов для решения этих проблем не всегда высокоэффективно и неэкологично.

Интенсивная эксплуатация сельскохозяйственных земель требует увеличения объема производства и применения минеральных удобрений, в том числе и фосфорных.

Фосфор, наряду с азотом и калием, является одним из основных макроэлементов питания растений, в том числе и зерновых культур. Высокие темпы исчерпания мировых запасов фосфорного сырья, дороговизна производства и транспортных расходов, нарушение экологии - далеко не весь перечень существующих проблем в этой отрасли (Heffer, Prudhomme, 2006). При этом не весь вносимый с химическими удобрениями фосфор усваивается растениями. Значительная часть фосфора связывается почвенно-поглощающим комплексом и переходит в недоступную для растений форму, а также вымывается из корнеобитаемого слоя (Sample et al., 1980). Увеличение норм внесения минеральных удобрений приводит к росту материальных затрат, нарушает экосистему почв и водоемов, а также баланс питания растений, тогда как недостаток этого элемента не только снижает урожайность, но и ухудшает товарные качества зернопродукции (Murrell, Fixen, 2006). Недостаточность и несбалансированность применения химических минеральных удобрений, наряду с другими факторами, приводят к снижению иммунитета растений к фитопатогенам, в том числе к возбудителям фузариоза зерновых культур (Соколов, Коломбет, 2007).

В последнее время одной из острейших проблем в странах с развитым зерновым производством является проблема фузариоза колоса (ФК), вызываемого грибами рода Fusarium. В зависимости от погодных условий прямые потери товарного зерна от фузариоза могут составлять от 20% до 50% (Новожилов, Левитин, 1990; Соколов, 1992). Однако наибольшей опасностью фузариозов является загрязнение зерна и сопутствующей продукции высокостабильными фузариотоксинами, такими как дезок-синиваленол (ДОН) и его производные. В случае поражения зерновых культур ФК фузариотоксины обнаруживаются не только в зерне, но и в муке, крупах, хлебобулочных и макаронных изделиях, пиве, квасе и т.д. (Miller et al., 2003). Применение химических фунгицидов для борьбы с ФК имеет ряд особенностей. Снижение норм расхода химических фунгицидов приводит к уменьшению эффективности и возникновению устойчивых популяций фитопатогенов, а увеличение норм расхода - к ухудшению экологической обстановки и опасности загрязнения продукции зерно-производства остаточным количеством фунгицидов. Возбудители ФК быстро приспосабливаются к современным фунгицидам и отвечают многократным увеличением накопления фузариотоксинов в зернопродукции (Монастырский, 1995; Гагкаева и др., 2011). При этом имеются сведения, что применение микробиологических фунгицидов вместо химических позволяет не только защитить урожай, но и значительно снизить содержание микотоксинов (Stockwell et al., 1997, 2000; Коломбет, 2006).

Таким образом, взаимосвязанность проблем несбалансированного минерального питания и защиты от фузариозов зерновых культур заставляет искать новые экологически безопасные пути в качестве альтернативы применению современным агрохимикатам и пестицидам. В настоящее время накоплен значительный опыт применения микробиологических методов для борьбы с заболеваниями сельскохозяйственных культур и улучшения почвенного плодородия. Однако возможность совместного применения, а также комплексные свойства микроорганизмов изучены недостаточно. При этом существующий потенциал эффективных и экологичных методов полностью не задействован.

Известно, что существуют микроорганизмы - антагонисты возбудителей фузариоза колоса, которые способны высвобождать доступные злаковым культурам фосфаты из фосфатных руд (Рой и др., 2004; Baño, Musarrat, 2004.). В то же время, некоторые микроорганизмы, способные к высвобождению фосфатов, проявляют антагонистические свойства к различным фитопатогенам. Например, грибы рода Trichoderma упоминаются в литературе не только как биоагенты для борьбы с болезнями растений, но и как микроорганизмы, способные высвобождать фосфаты из нерастворимого фосфатного сырья (Altomare et al., 1999; Yadav et al, 2011; Mahamuni et a!., 2012).

Предлагаемые исследования позволят изучить возможность комплексного использования микроорганизмов и их свойств в качестве альтернативы применению минеральных фосфорных удобрений и химических фунгицидов.

Цель исследования - изучить и оценить эффективность комплексного использования микроорганизмов в качестве альтернативы фосфорным удобрениям и химическим фунгицидам для повышения экологической безопасности при защите зерновых культур от фузариоза колоса и оптимизации их минерального питания.

Задачи исследования:

1. Изучить in vitro фосфатрастворяющие свойства микофильного гриба Trichoderma asperellum.

2. Выбрать наиболее активные фосфатрастворяющие бактериальные штаммы, совместимые с Т. asperellum.

3. Определить в лабораторном эксперименте возможность совместимости Т. asperellum и фосфатрастворяющих бактериальных микроорганизмов с пестицидами, применяемыми при возделывании зерновых культур.

4. Определить в вегетационном эксперименте эффективность сочетанного использования фосфатрастворяющих и антифузариозных свойств исследованных микроорганизмов, перспективных для улучшения фосфорного питания и снижения содержания фузариотоксинов в урожае зерновых злаковых культур.

5. Оценить в опытно-производственных условиях комплекс микробиологических приемов, обеспечивающих защиту яровой пшеницы от фузариоза колоса и улучшение ее фосфорного питания.

Научная новизна

Доказано наличие фосфатрастворяющих свойств у микофильного гриба Т. asperellum.

Показано, что для штамма №16 Т. asperellum GJS 03-35 одним из основных механизмов мобилизации фосфора из нерастворимого минерального сырья является продукция органических кислот.

Показана эффективность сочетанного использования микроорганизмов, обладающих фосфатрастворяющими и антифитопатогенными свойствами, на пшенице.

Показана возможность совместимости исследованных микроорганизмов с пестицидами, применяемыми при выращивании зерновых культур.

Практическая значимость и внедрение результатов

Два фосфатрастворяющих бактериальных штамма с фунгицидными свойствами депонированы в коллекцию ГНЦ ПМБ («ГКПМ-Оболенск») и защищены патентами на изобретение РФ: №№ 2451068 и 2451069.

Показана возможность совместного использования микроорганизмов в качестве альтернативы минеральным фосфорным удобрениям и химическим фунгицидам для борьбы с фузариозом колоса

Полученные результаты исследования послужат основой для разработки новых комплексных микробиологических почвоудобрительных и фунгицидных препаратов.

Положения, выносимые на защиту:

1. Микофильный гриб Т. asperellum обладает способностью к высвобождению растворимых фосфатов из различных типов минерального фосфорного сырья.

2. Одним из основных механизмов высвобождения фосфора из минерального сырья под действием штамма № 16 Г. asperellum GJS 03-35 является продукция им органических кислот.

3. Совместное применение микофильного гриба Т. asperellum и бактериального штамма Pseudomonas sp. 181а улучшает фосфорное питание и повышает эффективность защиты от фузариоза колоса пшеницы.

4. Возможно совместное применение штаммов № 16 Т. asperellum GJS 03-35 и Pseudomonas sp. 181а с химическими пестицидами.

Работа выполнена в отделе биологических технологий ФБУН ГНЦПМБ в рамках отраслевой программы 2006-2010 гг. «Разработка микробных препаратов для решения задач экологической и продовольственной безопасности», а также двух международных проектов МНТЦ: №2336п «Разработка технологии производства и применения микробиологической субстанции, на основе которой возможно создание препарата для защиты пшеницы и других зерновых культур от фузариоза колоса» (2003-2005гг.) и №3107 «Прямая микробиологическая мобилизация фосфатов из фосфатного сырья: использование для сельского хозяйства и нужд промышленности» (2006-2008гг).

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена лично автором. Экспериментальные результаты, представленные в отдельных главах, получены совместно с сотрудниками ФБУН ГНЦ ПМБ: д.б.н. Коломбет Л.В., к.б.н. Дунайце-вым И.А., к.х.н. Жиглецовой С.К., к.х.н. Ариповским A.B., Клыковой, М.В., Кондра-шенко Т.Н., Бойко A.C., Аитовым, P.C., Торгониной И.В., Лариной Н.С., сотрудницей ГНУ Рязанского НИИСХ к.с.-х.н. АнтошинойО.А

Апробация работы. Результаты работы доложены на двух Научно-практических школах-конференциях молодых ученых и специалистов научно-исследовательских организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека «Современные технологии обеспечения биологической безопасности», Оболенск, 2008 и 2011 гг., на 21-ом Международном

симпозиуме "Ecology and Safety" 8-12 июня 2012 г. в Болгарии и на 3-м Съезде микологов 10-12 октября 2012 г. в Москве.

Тема диссертации была утверждена на заседании Ученого совета ФБУН ГНЦ ПМБ 19 марта 2009 г., протокол Ученого совета № 2 (приказ № 51 от 03.04.2009 г.), с изменениями, утвержденными Ученым советом 27 ноября 2013 г., протокол № 10.

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 13 печатных работ, в том числе 2 статьи в рецензируемых журналах из перечня ВАК, 3 статьи в других рецензируемых журналах, 2 патента РФ и 6 тезисов в материалах конференций.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания использованных методов, результатов и обсуждений, заключения, выводов и списка литературы, включающего 80 работ отечественных и 158 работ зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 27 рисунками и 27 таблицами.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследования

Штаммы микроорганизмов. В работе использовали штамм № 16 Trichoderma asperellum GJS 03-35, обладающий гиперпаразитической активностью по отношению к широкому спектру фитопатогенов в том числе к грибам рода Fusarium, полученный из коллекции «ГКПМ-Оболенск» ФБУН ГНЦ ПМБ.

В качестве фосфатрастворяющих микроорганизмов (ФРМ) использовались изоляты из рабочей коллекции отдела биологических технологий ФБУН ГНЦ ПМБ, выделенные ранее из различных объектов окружающей среды, в том числе из ризосферы растений, в различных агро-климатических регионах. Часть изолягов идентифицировали с помощью стандартных микробиологических методов, а также биохимических тестов Enterotest, Nefermtest (Pliva-Lachema, Чехия), API 50 СН (BioMerieux, Франция).

При определении антагонистической активности ФРМ в качестве тест-объектов использовали три штамма грибов рода Fusarium: F. graminearum Schwabe 1838 (K-33), F. sporotrichioides, Bilai и F. culmorum (W.G.Smith 1884) Saccardo 1895, которые являются возбудителями опасных болезней зерновых культур и продуцируют микотоксины.

Микробиологические методы. Штамм № 16 Т. asperellum GJS 03-35 выращивали на картофельно-глюкозном агаре (КГА) в течение 7 суток при 28°С. Штаммы ФРМ культивировали на чашках Петри с ГРМ-агаром (ФБУН ГНЦ ПМБ, п. Обо-ленск, Россия) при температуре 28°С в течение двух суток.

Оценку фосфатрастворяющих (ФР) свойств штамма № 16 Т. asperellum GJS 0335 проводили по накоплению фосфата в растворе при инкубации в жидкой минеральной среде, содержащей в качестве источника фосфора только нерастворимый фосфат: трикальций фосфат - Са3(Р04)2 (ТКФ) или фосфатные руды. Исследовали доступность 9 образцов фосфатных руд различной структуры и генезиса: апатиты, фосфориты желваковые, морского генезиса (шельфовые), ракушечные, а также фосфориты континентальные остаточно-метасоматические.

Для оценки антагонистических свойств ФРМ использовали метод штриха, а также спот-тест.

Совместимость штаммов № 16 Г. asperellum GJS 03-35 и Pseudomonas sp. 181а с химическими пестицидами определяли, оценивая рост микроорганизмов на плотной питательной среде, содержащей пестицид, или при совместной обработке семян яровой пшеницы сорта Дарья. Было испытано 7 фунгицидов, в том числе 4 протравителя семян, а также 2 гербицида и 3 инсектицида Пестициды использовали в дозах, рекомендованных регламентом применения, а экспериментальные образцы препаратов на основе микроорганизмов — в двух нормах расхода Т. asperellum —1,0 и 2,0 кг/т, Pseudomonas sp. 181а— 1,5 и 3,0 кг/т семян.

Биотехнологические методы. Посевной материал готовили в колбах на термостатированных качалках Certomat BS-1 (В. Braun Biotech Int. Sartorius Group, Германия) и NBS (New Brunswick Scientific, США). Культивирование микроорганизмов проводили в ферментерах АНКУМ-25 объемом 25 л (Россия) и New Brunsweek Microferm (США) с рабочим объемом до 10 л. Разделение культуральной жидкости на клеточную массу и супернатант осуществляли на центрифуге J2-21 (Beckmann, США) и фильтрационной установке на полых волокнах (Россия). Для получения сухих экспериментальных образцов биопрепарата на основе штамма Pseudomonas sp. 181а использовали лиофилизатор Virtis BT-4k (США).

Биохимические методы. Определение метаболитов, обусловливающих фос-фатрастворяющую активность Т. asperellum, проводили с помощью газовой хроматографии. Хроматографирование пер-триметилсилильных эфиров определяемых веществ проводили на хроматографе НР5890 (Хьюлетт-Пакард, США) при использовании колонки с полидиметилсилоксановой фазой SPB-1 и пламенно-ионизационного детектора.

Содержание микотоксина ДОН определяли в зерне методом иммуноферментно-го анализа с помощью набора реактивов AgraQuants Deoxynivalenol Test Kit фирмы Romer Labs, США

Фитотоксичность ФРМ определяли после замачивания семян пшеницы сорта Иволга в суспензиях микроорганизмов в течение 2 ч. и проращивания в термостате при 28 °С в течение 4 суток. Измеряли длину всех корней и листьев.

Совместное действие штаммов № 16 Т. asperellum GJS 03-35 и Pseudomonas sp. 18 la на проростки пшеницы сорта Дарья изучали методом «рулонов» согласно ГОСТ 12044-93 (п. 10.3).

Биологические методы по оценке эффективности совместного применения микроорганизмов на урожайность и устойчивость к фузариозу колоса пшеницы включали в себя вегетационные и полевые эксперименты.

Вегетационные опыты проводили в лабораторных условиях с использованием почвы с низким содержанием фосфора (менее 50 мг Р205/кг почвы по Кирсанову). Во всех опытных вариантах в качестве дополнительного источника фосфора использовали измельченную фосфоритную руду, а в качестве положительного контроля — двойной суперфосфат. Растения выращивали в полиэтиленовых горшках объемом 1,5 л. Инокуляцию фитопатогеном проводили, обрабатывая семена и опрыскивая растения пшеницы в фазе полного цветения водной суспензией конидий гриба F. graminearum. Инфицирование растений проводили в камере-изоляторе из прозрачной полиэтиленовой пленки. Защитную предпосевную обработку семян проводили с помощью концентрированной биомассы штамма № 16 Т. asperellum GJS 03-35 (0,2 г на 100 г семян) и химическим протравителем виал TT (0,04 мл на 100 г семян) на

содержанием глюкозы 10 г/л никаких органических кислот не обнаружили, а при более высоких исходных концентрациях глюкозы обнаруживали только кетоглюконо-вую кислоту (рис. 3 а,б). Максимальное количество кетоглюконовой кислоты обнаружено при исходном содержании глюкозы в среде 30 г/л на третьи и шестые сутки опыта и составляло 0,2 г/л или 0,94 мМоль/л. При этом содержание растворенного фосфора составляло 600-790 мкг/мл (рис. 1), или 19,3-25,5 мМоль/л. Но по уравнению (4) 0,94 мМоль/л кетоглюконовой кислоты может обеспечить растворение только 0,47 мМоль/л фосфора, что примерно в 50 раз меньше количества, реально перешедшего в раствор. Таким образом, находившаяся в растворе органическая кислота не могла обеспечить зафиксированное в опыте высвобождение фосфора. Тем более, что при исходном содержании глюкозы в среде 10 г/л никаких органических кислот вообще не обнаружено.

Рисунок 3 - Изменение концентраций глюкозы и кетоглюконовой кислоты в процессе растворения ТКФ под действием штамма № 16 T. asperellum GJS 03-35 при исходном содержании глюкозы 20 г/л (а) и 30 г/л (б)

Полное отсутствие образования органических кислот при снижении рН в процессе высвобождения фосфора из нерастворимых минеральных фосфатов впервые было зафиксировано Illmer & Schinner в 1995 г. при изучении мобилизации фосфора из гидроксиапатита и брушита под действием Pénicillium aurantiogriseum и Pseudomonas sp. Для объяснения этого явления было выдвинуто предположение, что в отсутствии образования органических кислот высвобождение фосфора может быть обусловлено выбросом протонов, сопровождающим дыхание или ассимиляцию NH4+. Косвенно это было подтверждено и в наших исследованиях, поскольку замена аммонийной соли на нитрат приводило к резкому падению содержания фосфора в растворе (рис.1). Как следует из сравнения с литературными данными, количество растворявшегося из ТКФ фосфора под действием штамма № 16 Г. asperellum GJS 0335 составляет менее 50% от количества, переводимого в раствор наиболее активными бактериальными ФРМ.

В разделе 3.1 также представлены исследования доступности для штамма № 16 T. asperellum GJS 03-35 фосфатных руд различного состава и структуры. Для изуче-

Из рис. 8 видно, что исследуемые морфометрические показатели относительно контрольных значений, принятых за 100% (на рис. 8 это «0» по оси ординат) варьируют, отражая суммарно либо позитивный, либо негативный эффекты. Так, например, при обработке семян химическим протравителем максим экстрим (вариант №2) отмечалось снижение морфометрических показателей колеоптиля. Тем не менее, по сумме показателей все использовавшиеся обработки данного и других вариантов опыта не имели ингибирующего эффекта на проростки семян пшеницы. Несмотря на большой разброс данных, учитывающий ошибку измерений всех трех параметров, два варианта совместной обработки биопрепаратами (№ 8 и № 9) продемонстрировали достоверный суммарный ростстимулирующий эффект на проростки пшеницы. Таким образом, совместная обработка биопрепаратами, достоверно не обладает ин-гибирующим эффектом и может стимулировать рост растений в отличие от химического протравителя.

В разделе 3.3. приведены данные по оценке возможности применения биологических агентов в сочетании с химическими пестицидами. Поскольку комплексный биопрепарат на основе смеси грибной культуры с бактериальным штаммом может применяться как на стадии обработки семян, так и в период вегетации при цветении колосьев, исследовали совместимость штаммов № 16 Т. asperellum GJS 03-35 и Pseudomonas sp. 181а с протравителями семян, фунгицидами, гербицидами и инсектицидами, используемыми при выращивании пшеницы.

Из исследовавшихся пестицидов только гербицид линтур практически не оказывал действия на штамм № 16 Т. asperellum GJS 03-35. Инсектициды танрек, Шарлей и арриво не подавляли рост гриба, но задерживали его рост в первые сутки. Остальные пестициды значительно сдерживали рост гриба В отличие от грибного штамма № 16 Г. asperellum GJS 03-35, рост бактериального штамма Pseudomonas sp. 181а практически не зависел от присутствия пестицидов в агаре.

При обработке семян пшеницы комплексный биологический препарат на основе смеси штаммов № 16 Т. asperellum GJS 03-35 и Pseudomonas sp. 181а. оказался также плохо совместим с химическими протравителями максим и максим экстрим, как и один штамм № 16 Т. asperellum GJS 03-35. Однако комплексный биопрепарат оказался совместим с протравителями дивиденд стар и виал траст, при использовании больших концентраций биоагентов и при минимальных нормах расхода химических протравителей.

Проведенные исследования показали, что для комплексного биопрепарата могут быть подобраны совместимые с ним протравители семян, гербициды и инсектициды. Это дает возможность включения разрабатываемого комплексного биопрепарата в систему интегрированной защиты пшеницы от вредителей и болезней.

В разделе 3.4 приведены результаты вегетационных испытаний экспериментальных образцов биопрепаратов на пшенице. В этих испытаниях на яровой пшенице сорта Иволга подтверждено, что Т. asperellum является эффективным средством для борьбы с ФК пшеницы (рис. 9).

V.6, Part 2. - P. 100-108. - Режим доступа: www. scientific-publications.net/down load/eco logy-and-safety-2012-2.pdf. г) тезисы докладов на научных конференциях:

8. Старшов, A.A. Биологическая эффективность Trichoderma asperellum GJS 0335 против возбудителя фузариоза колоса пшеницы F. graminearum в вегетационном эксперименте при различных способах обработки / A.A. Старшов, JI.B. Коломбет. Иммунопатология, аллергология, инфектология: Труды междисциплинарного микологического форума, Москва, 2009. - №2. - С. 153

9. Жиглецова, С. К. Высвобождение фосфатов из нерастворимого минерального сырья грибами рода Trichoderma - антагонистами фитопатогенов / С. К. Жиглецова, A.A. Старшов, ИА Дунайцев, Т.Н. Кондратенко, М.В. Клыкова, A.B. Ариповский, JI.B. Коломбет. Иммунопатология, аллергология, инфектология: Труды междисциплинарного микологического форума, Москва, 2009. -№1. - С. 81-82.

10. Жиглецова, С. К. Определение механизма высвобождения фосфора из различных видов фосфатных руд под действием штамма №16 Trichoderma asperellum GJS 03-35 - антагониста фитопатогенов / С. К. Жиглецова, И.А. Дунайцев, Т.Н. Кондратенко, A.B. Ариповский, М.В. Клыкова, A.A. Старшов, JI.B. Коломбет. Иммунопатология, аллергология, инфектология: Труды междисциплинарного микологического форума, Москва, 2010. -№1. - С. 249.

11. Ларина, Н.С. Исследование ростсгимулирующей активности штаммов-антагонистов фитопатогенов, обладающих одновременно фосфатрастворяющими свойствами / Н.С. Ларина, А.И. Векшин, A.A. Старшов, М.В. Клыкова, И.А. Дунайцев, С. К. Жиглецова. Материалы III Научно-практической школы-конференции молодых ученых и специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, ФГУНГНЦПМБ, Оболенск, 2011 - С. 278281.

12. Старшов, A.A. Использование фосфатрастворяющих и фунгицидных свойств микроорганизмов для улучшения фосфорного питания и защиты зерновых культур от фузариоза колоса / A.A. Старшов, Л.В. Коломбет, ИА. Дунайцев, С. К Жиглецова, М.В. Клыкова, Т.Н. Кондратенко, O.A. Антошина, О.В. Гладышева. Современная микология в России. Материалы 3-го Съезда микологов России, Москва, 2012 — М.: Национальная академия микологии. — 2012. —Т.З. — С.354-355.

13. Клыкова, М.В. Поиск штаммов микроорганизмов потенциально активных в отношении бактериальных и грибных патогенов сельскохозяйственных культур / М.В. Клыкова, И.А. Дунайцев, С. К. Жиглецова, A.A. Старшов, Н.С. Ларина, Т.Н Кондратенко. Современная микология в России. Материалы 3-го Съезда микологов России, Москва, 2012. — М.: Национальная академия микологии. — 2012. — Т.З. — С.341.

Выражаю искреннюю благодарность:

моим руководителям - д.б.н. Коломбет JI.B. и к.б.н. Дунайцеву И.А. за оказанную помощь при выполнении диссертации;

сотрудникам отдела биологических технологий Жиглецовой С.К., Клыковой, М.В., Кондратенко Т.Н., Бойко A.C., Аитову, P.C., Торгониной И.В., Лариной Н.С., Сосне И.М., сотруднику отдела биофизики Ариповскому A.B. и сотруднику лаборатории инсектицидных биопрепаратов Быстровой Е.В. за помощь и содействие в работе;

Государственному научному центру прикладной микробиологии и биотехнологии, в лице директора чл.-корр. РАМН, д.м.н., проф. Дятлова И.А., за предоставленную возможность провести необходимые эксперименты и выполнить данную работу.

Глубоко признателен ведущей организации, официальным оппонентам и всем рецензентам настоящей работы за замечания, вопросы и поправки, которые были учтены при ее написании.

Отпечатано: типография «Пятый формат» — ИП Бецев С.Н.

Серпухов, ул. Водонапорная, д.36, офис 217 Тел.: 8(4967) 75-52^5; 8(916) 648-21-98; 8(925) 370-37-49 Формат А5, заказ № 7, 2014г. Тираж ШОэкз.