Микробиологические свойства потенциальных патогенов человека рода Leptotrichia

Стрельникова, Наталья Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Микробиологические свойства потенциальных патогенов человека рода Leptotrichia
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микробиологические свойства потенциальных патогенов человека рода Leptotrichia"

На правах рукописи

Стрельникова Наталья Викторовна

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ПАТОГЕНОВ ЧЕЛОВЕКА РОДА ЬЕРТОТШСША

03.02.03 — микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 /> ИЮН 2010

Владивосток - 2010

004608270

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высше] профессионального образования «Дальневосточный государственный медицина« университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитик (ГОУ ВПО «ДВГМУ Росздрава»)

Научный руководитель:

кандидат медицинских наук, доцент Кольцов Игорь Петрович

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Антонова Александра Анатольевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Тимченко Нелли Фёдоровна

руководитель лаборатории молекулярных основ патогенности бактерий ФГУН НИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН

кандидат медицинских наук, доцент Диго Раиса Наумовна

доцент кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВП «Владивостокский государственный медицинский университет Росздрава», главны бактериолог Приморского края, г. Владивосток

Ведущая организация: ФГУН «Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологи и микробиологии им. Пастера Роспотребнадзора»

Защита состоится « ¿У» июля 2010 года 10 ® часов на заседании диссертационног совета ДМ 208.007.02 при Государственном образовательном учреждении высшег профессионального образования «Владивостокский государственный медицински университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитт Российской Федерации» (ГОУ ВПО «ВГМУ Росздрава») по адресу 690002, г. Владивосток, ГСП, пр. Острякова, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «ВГМУ Росздрава по адресу: 690002, г. Владивосток, пр. Острякова, 2 (корпус 3). Автореферат разослан « » мая 2010 года.

Ученый секретарь диссертационного совет

доктор медицинских наук, доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Микрофлора полости рта является лсокочувствительной индикаторной системой и нарушение биологического шновесия между макроорганизмом и микроорганизмами нормальной микрофлоры ожет приводить к развитию патологических процессов. (Царёв В. Н., 2009; Ушаков . В., Царев В. Н., 2002; Кондрашова 3. Н., 1996; Борисов Л. Б., Фрейдлин И. С., )87). Одной из актуальных проблем современной стоматологии продолжают зтаваться воспалительные заболевания слизистых оболочек полости рта ¡оровский Е. В., 2001; ЕгщеШгк Р. О. с1 а1 1992). Этиологическими агентами этих роцессов являются условно-патогенные микроорганизмы, большинство которых -редставители нормальной микрофлоры организма человека (Воробьев А. А., 1994; очемасова 3. Н. и соавт. 1988 г.; Колесов А. П. и соавт., 1989). Микроорганизмы элости рта становятся источником потенциально патогенных возбудителей фиеса, гингивита, стоматита, острых воспалительных заболеваний слизистых олости рта (Царёв В. Н., 2007; Борисов Л. Б., Фрейдлин И. С., 1987). Патогенные и :ловно-патогенные микроорганизмы могут способствовать изменению защитных лл организма и приводить к возникновению воспалительных заболеваний полости га (Бухарин О.В. 2006; Кулагина Г. М. 2004; Бухарин О. В., 2002; Мороз А. Ф. 001).

Актуальность настоящей работы определяется распространием в регионе Хабаровского края РФ воспалительных заболеваний слизистых оболочек полости га /СОПР/, вызванных ЬерШпсЫа ЪиссаГт и недостаточной изученностью этих икроорганизмов. Рост числа больных, длительность заболевания, устойчивость к грапии, требуют детального изучения биологических особенностей бактерий рода ерЬйтсЫа, подтверждения их этиологической значимости в развитии ептотрихиозов как локальной ЬерШпсЫа-инфекцт. Анализ литературы показал, го отсутствуют данные о частоте выделения возбудителя лептотрихиоза, нет еткого критерия, указывающего на диагноз лептотрихиоз слизистых оболочек олости рта. В практических лабораториях края не ведутся бактериологические сследования лептотрихиозов в связи с отсутствием алгоритма диагностики 1болевания. Биологические особенности рода Ьер1оМсЫа в регионе изучены мало, анных о колонизации полости рта, факторах патогенности микроорганизмов, зучение чувствительности к антибиотикам и антисептикам не обнаружено.

Данные об иммунобиологических изменениях при лептотрихиозе слизистых болочек полости рта /ЛСОПР/ противоречивы.

Из вышесказанного следует, что исследование проблемы лептотрихиоза в нашем егионе, состояния иммунного статуса больных ЛСОПР, и, прежде всего, иологических характеристик ЬерШпсЫа ЬиссаШ, является высоко значимым и ктуальным. Поэтому мы сочли целесообразным исследовать штаммы ЬерШпсЫа иссаШ, циркулирующие в регионе Хабаровского края.

Цель исследования состояла в углублённом изучении биологических особенностей потенциальных патогенов рода ЬерЬй^сЫа, выявлении их этиологической значимости в патологии полости рта.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи. Задачи исследования:

1. Выявить роль представителей рода Ьер1о1псЫа в патологии полости рта с учётом их естественного ресурса и таксономии. Исследовать частоту встречаемости лептотрихиозов слизистых оболочек полости рта, выяснить взаимосвязь ЬерШпсЫа ЬиссаШ со степенью активности кариеса зубов у детей и патологией желудочно-кишечного такта.

2. Изучить этапы колонизации анаэробами слизистых оболочек полости рта у детей, распространённость ЬерШпсЫа ЬиссаНз среди населения региона, разработать способ культивирования Ьер^йпсЫа.

3. Исследовать роль иммунной системы в реализации механизмов колонизации и распространённости Ьер1о1псЫа в биотопе полости рта.

4. Определить фенотипический профиль ЬерШпсЫа ЬиссаЦх, факторы патогенности, персистентности, чувствительность к антимикробным химиопрепаратам.

Научная новизна работы

1. Впервые формально обосновано употребление термина «лептотрихиоз» слизистых оболочек полости рта для определения локальных ЬерШпсЫа-инфекций.

2. Исследованы этапы заселения ЬерШМсМа и другими анаэробами полости рта новорожденных и детей в регионе, впервые изучена и доказана всеобщая распространённость ЬерШпсЫа ЪиссаШ среди населения Хабаровского края.

3. Разработан новый способ культивирования ЬерШпсЫа ЪиссаИа на искусственной питательной среде «Уриселект».

4. Выделены региональные штаммы ЬерШпсЫа ЬиссаНя, изучены их факторы персистенции, адгезивный потенциал, исследована продукция ими /?-л актам аз. Определена региональная антибиотикограмма лептотрихий. Показано, что высокая биологическая пластичность микроорганизмов, колонизирующих слизистые оболочки, и высокая чувствительность слизистых к воздействию микроорганизмов позволяют использовать изменения в их состоянии как критерий оценки риска заболевания лептотрихиозом.

5. Выявлена взаимосвязь ЬерШпсЫа ЬиссаНя с риском развития суб/декомпенсированной степеней активности кариеса зубов у детей и повышением риска развития патологии желудочно-кишечного тракта: гастродуоденита, язвенной болезни желудка и 12-ти перстной кишки.

6. Проведено сравнительное изучение факторов патогенности (адгезивной, антилизоцимной, антикомплементарной, антиинтерфероновой активности) у штаммов ЬерШпсЫа ЪиссаШ, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, при исследовании микробиоценоза полости рта у больных ЛСОПР.

7. Выявленные изменения иммунного статуса у больных лептотрихиозами эзволяют оценить реализацию механизмов колонизации и распространённости ;птотрихий в биотопе полости рта, обосновать критерии развития лептотрихиоза, рогнозирования рецидивирующих форм заболевания.

Практическая значимость:

Результаты исследований позволили обосновать необходимость икробиологического исследования микрофлоры полости рта для выявления ранних фушений микробиоценоза организма в условиях развития лептотрихиоза. В ходе роведенных исследований от больных лептотрихиозами слизистых оболочек злости рта выделены региональные изоляты бактерий ЬерШпсМа ЪиссаШ, зучены их морфологические, культуральные, колонизационные свойства, дана денка чувствительности к антибактериальным химиопрепаратам.

- Доказана этиологическая роль бактерий ерШпсЫа ЬиссаНа как возбудителей экальных ЬерШпсЫа-ннфекцш - лептотрихиозов СОПР.

- Обосновано использование и внедрены в работу учреждений Министерства фавоохранения края термин ЬерШпсЫа ЬиссаШ у.б. ЬерШИгЬ. ЬиссаШ и термин нептотрихиоз» у.э. «лептотрихоз».

- Изучение биологических свойств ЬерШпсЫа ЬиссаШ можно использовать для энаружения ранних признаков изменения защитных сил организма, оценки степени шести поражения слизистых при лептотрихиозах, риска перехода ЛСОПР в роническую форму и коррекции выявленных нарушений у больных.

- Дана комплексная оценка изменения показателей иммунного статуса при стрых и хронических формах лептотрихиозов СОПР. Полученные результаты вляются основанием для включения иммунобиологических критериев в рогнозирование хронизации инфекционного процесса и/или развития гптотрихиозов у иммунокомпрометированных лиц.

- Разработаны методические рекомендации по оценке адгезивной активности ептотрихий, которые внедрены в работу ГУЗ Хабаровского края и помогают в иагностике лептотрихиозов СОПР.

- Зарегистрированы 2 заявки на изобретение в ФИПС: «Способ лечения ронических рецидивирующих воспалительных заболеваний, вызванных ептотрихиями», № 200913268/14 (045691) от 21.08.2009 г. и ««Способ ультивирования ЬерийпсЫа на искусственной питательной среде «Уриселект», 2 2010110394 (014610) от 18.03.2010 года, 7 рационализаторских предложений.

- Результаты научно-исследовательской работы внедрены в работу 8 эсударственных учреждений Министерства здравоохранения Хабаровского края, военного госпиталя МВД РФ г. Хабаровска, ХФ ДНЦ ФПД СО РАМН НИИ •храны материнства и детства.

- Результаты исследовательской работы внедрены в учебный процесс кафедр (икробиологии, вирусологии и иммунологии, стоматологии детского возраста, нфекционных болезней и эпидемиологии ДВГМУ, включены в программу

усовершенствования врачей-бактериологов ФПК и ППС ДВГМУ, ГУЗ Институт повышения квалификации специалистов здравоохранения Хабаровского края в качестве лекционного и дополнительного учебно-методического материала.

Апробация материалов диссертации. Материалы диссертации доложены на различных научных форумах международного, всероссийского, межрегионального уровня: 11-ом Международном симпозиуме фонда медицинского обмена Японии-России и стран Северо-восточной Азии (Ниигата, Япония, 2004), 12-ом Международном симпозиуме фонда медицинского обмена Японии-России (Красноярск, 2005), научно-практической конференции с международным участием, посвященной 70-летию НГМА «Медицина и образование в XXI веке» (Новосибирск, 2005), межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию стоматологической службы республики Саха (Якутия) «Актуальные проблемы и перспективы развития стоматологической службы» (Якутск, 2005), областной научно-практической конференции «Актуальные вопросы детской стоматологии в Амурской области» (Благовещенск, 2006), всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины», посвященной 55-летию Читинской гос. медицинской академии (Чита, 2008), межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 50-летию стоматологического факультета Кемеровской государственной медицинской академии, (Кемерово, 2009), научно-практической конференции «Актуальные проблемы стоматологии», посвященной 30-летию стоматологического факультета Дальневосточного государственного медицинского университета (Хабаровск, 2009), XI международном конгрессе МАКМАХ/Е8СМЮ по антимикробной терапии (Москва, 2009).

Результаты диссертационного исследования обсуждены на заседаниях общества бактериологов Хабаровского края 2005-2009 г.г., на расширенном межкафедральном заседании кафедр микробиологии, вирусологии и иммунологии, инфекционных болезней и эпидемиологии, детских инфекционных болезней, стоматологии детского возраста, нормальной физиологии, гистологии, патологической физиологии, ДВГМУ, ЦНИЛ ДВГМУ, ФГУН «Хабаровский НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора», ХФ ДНЦ ФПД СО РАМН НИИ Охраны материнства и детства, 12 мая 2010 года, протокол № 5.

Личный вклад автора. Автором осуществлена систематизация и анализ материалов по частоте выявляемое™ и структуре лептотрихиозов. Лично автором проведено выделение, идентификация и оценка чувствительности к антибиотикам штаммов лептотрихий. При непосредственном участии автора подготовлены и проведены иммунологические исследования, все методы статистической обработки выполнены автором лично. Подготовлены публикации, рационализаторские предложения и заявки на изобретения. Доля участия в накоплении материала составляет 85%, в обобщении материала-до 100%.

Протокол научно-плановой комиссии № 8 от 18 мая 2004 года.

Номер государственной регистрации темы: 01.2.007 00903.

Публикации:

По теме настоящей диссертации опубликовано 16 научных статей, в том числе статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ, и 2 методических пособия.

Объём и структура диссертации: иссертация изложена на 218 страницах машинописного текста, роиллюстрирована 23 таблицами и 18 рисунками. Она состоит из введения, обзора лтературы, трёх глав собственных исследований, заключения, общих выводов, гкомендаций для внедрения результатов работы в медицинскую науку и практику фавоохранения, учебный процесс и приложений. Список литературы содержит 53 источника, из которых 90 отечественных и 173 иностранных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. ЬерШпсЫа ЬиссаШ являются потенциальными патогенами человека, ызывающими лептотрихиозы слизистых оболочек полости рта. Заселение редставителями рода ЬерЬйпсЫа полости рта у детей в основном происходит в ериод после прорезывания зубов. ЬерЮШсЫа можно отнести к маркерным икроорганизмам для выявления риска развития суб/декомпенсированных форм ариеса зубов у детей и развития гастродуоденита и язвенной болезни желудка и 12-а перстной кишки.

2. ЬерШпсМа ЬиссаИ.ч из числа региональных изолятов обладают выраженным атогенным потенциалом: ведущими факторами персистенции, адгезивной и □адгезивной активностью. ЬеркЛпсЫа чувствительны к Р-лактамным нтибиотикам, цефалоспоринам, метронидазолу, проявляют устойчивость к миногликозидам, фторхинолонам, макролидам, продуцируют бета-лактамазы.

3. Частота встречаемости лептотрихиозов слизистых оболочек полости рта за ноголетний период увеличилась, возрастает число микст-инфекций и хронических орм. Возрастное распределение - лептотрихиозы СОПР характерны для лиц гарше 46 лет и детей 1-3 лет, сезонность весенне-летняя.

4. Иммунобиологические изменения показателей клеточного и гуморального аеньев иммунитета могут стать достоверными критериями прогноза развития ептотрихиоза и/или перехода заболевания в хроническую форму.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты, объём и методы исследования. Исследования выполнены в 2003009 г.г. на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО [ВГМУ Росздрава (при консультативной помощи руководителя клинико-иагностической лаборатории Хабаровского филиала ДНЦ ФПД Сибирского тделения РАМН НИИ Охраны материнства и детства, ведущего научного отрудника, к.м.н, Г. Н. Холодок). Все экспериментальные и клинические сследования проведены с разрешения комиссии по биомедицинской этике ГОУ 1ПО «ДВГМУ Росздрава» (протокол № 16 от 25.05.2004 г.)

Контингент обследованных был разделен на 4 группы по характеру выполняемой работы. В первую группу вошли 680 взрослых и 420 детей населения г. Хабаровска и Хабаровского края (жители города и села, русские и представители этнического населения - нанайцы) для исследования распространённости лептотрихий среди населения Хабаровского края. Вторую группу составили 99 детей от 14 дней до 3 лет (изучение этапов колонизации полости рта анаэробами), в третью группу вошли 96 детей 3, 6 и 12 лет по рекомендации ВОЗ для исследования кариеса зубов. Четвёртую группу составили пациенты острыми и хроническими формами лептотрихиозов слизистых оболочек полости рта, 116 человек. Среди осмотренных лиц преобладали женщины в возрасте от 46 до 69 лет - 67,5%. Подбор групп по возрасту, национальности осуществлен с учетом репрезентативности выборки. Углубленное стоматологическое обследование с использованием инструментальных, лабораторных методов исследований проведены совместно с профессором кафедры стоматологии детского возраста, д.м.н. Антоновой А.А.

Материалом для микробиологических исследований были соскобы с корня языка, содержимое десневого желобка, мазки со слизистой полости рта, слюна, ротовая жидкость. Изучение микрофлоры полости рта (в 1-й группе - 1080, 2-й группе - 99, вЗ-ей группе - 96 человек, в 4-й группе - 116 человек) проводилось качественными и количественными методами с использованием среды Уриселект, кровяного агара, желточно-солевого агара, среды Эндо, энтеро-бактагар (Лабинская А. С., 2004). Исследование микрофлоры полости рта проводилось в соответствии с приказом МЗ СССР №535 от 22.04.85г. «Об унификации микробиологических методов исследований, применяемых в клинико-диагностических лабораториях». Состояние микрофлоры полости рта оценивали качественными и количественными методами (Р.В. Эпштейн-Литвак, 1997).

Количество микроорганизмов определяли в 1 г исследуемого материала, выражали в десятичных логарифмах (lg КОЕ/г). Идентификацию микроорганизмов проводили по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам с применением тест-систем (Lachema, Чехия и ПБДЭ, ПБДС, Н. Новгород; Candi Select, Уриселект - фирмы «Biorad»). Для изучения факторов патогенности использованы по 28 штаммов бактерий Leptotrichia spp., Streptococcus spp., Staphylococcus aureus и дрожжеподобных грибов рода Candida spp., выделенных в виде монокультур и в ассоциации друг с другом.

Для выявления адгезивной способности штаммов лептотрихий, была изучена их гистадгезивная активность. Количественную оценку гистадгезивной активности и коадгезивной активности в естественных условиях проводили в соответствии с методами, разработанными авторским коллективом кафедры (Н.В. Стрельникова с соавт., 2009-10 г.г.) Для определения факторов, способствующих сохранению жизнеспособности лептотрихий, стафилококков, стрептококков и дрожжеподобных грибов рода Candida в полости рта, проводили изучение свойств персистенции: антилизоцимную (АЛА) и антикомплементарную активность (АКА), антиинтерфероновую (АИА) по методу «отсроченного антагонизма» (Бухарин О. В. и соавт., 1986 г., 1992 г., 1996 г.)

Статистическую обработку результатов осуществляли с применением пакета рикладных программ EXCELL в операционной системе Windows 2003. [спользовались методы параметрической статистики (средняя арифметическая и её гандартная ошибка). Достоверность различий между сравниваемыми средними щчениями в основной и контрольной группах устанавливали критерием Стьюдента Иедик В.А. с соавт., 2001). Основные направления, методы и объём исследования зложены в таблице 1.

Таблица 1

Направления, методы и объём исследования

№ п/п Направления исследований Методы исследований Объём исследованного материала

1 2 3 4

1. Анализ научных литературных источников Контент-анализ, сравнительный анализ 263 литературных источника: 90 отечественных 173 иностранных

2. Эпидемиологич. статистика Ретроспективный и оперативный эпидемиологический стат. анализ Все данные

3. Клинико-анамнестический анализ 1 .Анализ данных ККВД г. Хабаровска по заболеваемости лептотрихиозом. 2. Изучение амбулаторных карт пациентов ККВД, поликлиники ДВГМУ «Унистом», МУЗ Детской поликлиники № 17 3. Опрос и обследование больных ЛСОПР 4. Опрос и обследование детей на носительство Leptotrichia. 5. Опрос и обследование взрослых на носительство Leptotrichia Журналы лабораторного исследования 19992008 г.г. 224 карты 118 карт 243 карты 116 человек 420 детей 680 человек

4. Микробиологичес кие исследования 1. Взятие клинического материала (соскоб с корня языка) у всех обследуемых групп. 2.Микроскопия мазка с окраской м. Грама 3.Получение чистой культуры Leptotrichia 4.Метод идентификации анаэробов микротест-системами ANAEROtest 23 и в автоматическом режиме на баканализаторе АТВ с использованием тест-систем API 20А (производства компании «Био-Мерье», Франция) 4.Получение чистых культур Staphylococcus, Streptococcus, Candida, et.ctr. из микробных ассоциаций с Leptotrichia 5.Исследование микробного пейзажа корня языка, десневого желобка, слюны бактериологическим методом на стандартных средах 6. Экспресс-определение ß-лактамазы (пенициллиназы) йодометрическим методом у штаммов Leptotrichia 1080 проб 1080 проб 334 пробы, 28 чистых культур 28 проб 28 проб 334 пробы, 108 чистых культур из ассоциаций 334 пробы 28 проб Leptotrichia + 102 пробы ассоциант.

Продолжение таблицы 1

5. Оценка иммунобиологиче ского статуса 1. Определение уровня клеточного иммунитета - содержание лейкоцитов, лимфоцитов и их субпопуляций: CD3, CD4, CD8, CD 16, CD19, методом лазерной проточной цитометрии; оценка ИРИ, ЦИК 2. Количественное определение IgA, IgM, IgG сыворотки крови м. радиальной иммунодиффузии в агаровом геле по G. Manchini et al. 1963, с исп. наборов моноспецифических антисывороток к Ig 3. Определение уровня иммуноглобулинов IgA, slgA, IgM, IgG в слюне методом ИФА (микропланшетный фотометр Multiskan пр-ва Thermo Scientific) 4. Определение фагоцитарной активности (ФАН) с инертными частицами латекса размером 1,1ц (С.Г.Потапова и соавт. 1977), спонтанный/индуциров. зимозаном тест 5. Определения уровня лизоцима слюны нефелометрическим методом по Дорофейчук 1968 в модификации П.Г. Сторожук с соавт., 1980 78 человек / опыт 67 человек/контроль 99 проб 99 проб 99 проб 78 человек / опыт 67 человек/контроль

8. Исследование чувствительности к антибиотикам Диско - диффузионный метод, метод серийных разведений (определение МПК) по МУК 4.2.1890-04 Минздрава России, 2004 г. Автоматическое определение - тест-системы ANA32 на АТВ 28 проб

9. Определение резистентности ЬерМпсЫа к антисептическим растворам Определение бактерицидной активности антисептических растворов: 1. Хлоргесксидина биглюконата 0,05% 2. Мирамистина0,01 % 3. Коллоидного раствора серебра «Сильверия» 0,05 г/л 4. Стоматофит /Польша/, in vitro и in vivo по методике НИИЭМ им. Пастера, 2007 28 проб/ 90 пациентов

10. Статистическая обработка полученных данных Методы описательной и параметрической статистики на персональном компьютере с использованием программы Statistica 6.0 (средняя арифметическая М, ошибка т, доверительный коэффициент t, коэффициент Пирсона г, критерий %2). Все данные

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Колонизация полости рта анаэробами у детей начинается в раннем возрасте и в основном происходит после прорезывания резцов и моляров, окончательно формируя биотоп к 2,5 годам. Тесная корреляционная связь (г=0,9) обнаружена между заболеваниями ЖКТ у ближайших родственников, грудным вскармливанием (г=0,8) и ранней колонизацией лептотрихиями биотопа ротовой полости ребёнка. Распространённость лептотрихий среди населения региона всеобщая и составляет в

среднем 95%. Бактериальная плотность заселения лептотрихиями минимальная в возрасте 2-6 лет и увеличивается к 25 годам, достигая максимума в 46 лет -0,105±0,111 ^ КОЕ/ед. суб. и 3,833±0,042 ^ КОЕ/ед. суб., соответственно (р<0,01).

0-2год а 3-влвг 7-Млег №18|тег 19 2* года й-44 год а 45-54года 55-Мгадя

■В городское население ВВ сельское население

|-1 коренное население У77777Л русское население

Логарифмический (коренное население)

Рис. 1. Количество 1ер1о(г1сШа на поверхности корня языка в различных социально-демографических группах населения Хабаровского края КОЕ/ед.суб.).

Изучен фенотипический профиль лептотрихий. Выявлено 5 основных юрфологических вариантов бактерий и их встречаемость у больных острым и роническим лептотрихиозом, суб/декомпенсированными формами кариеса зубов, у ольных гастродуоденитом и язвенной болезнью с высокой степенью орреляционной связи для различных патологических состояний. В одном биотопе дновременно, как правило, содержатся от 2 до 4 морфологических вариантов ерШпсЫа, таких образцов 85%. Содержание различных морфоваров в чистой ультуре ограничено одним или двумя типами. Морфовары представлены в таблице

Таблица 2

Морфологические варианты Ьерк^псЫа

Характеристика морфоваров ЬерШпсЫа Длина микробной клетки, мкм

1.одиночные палочки до 8-10

2. классическая пара палочек 10-15

3. удлинённые палочки 20-25

4. филаментоидные палочки 30-50

5. нити/филаменты 50-100 и более

Изменение морфологии ЬерШгкЫа в зависимости от патологических роявлений отражено в таблице 3.

Таблица 3

Морфология Ьери^псЫа и некоторые патологические состояния

Патологические состояния Морфологические варианты ЬерШпсЫа

1 2 3 4 5

Лептотрихиоз СОПР, острое течение 13% 32% 46% 7% 3%

Легтготрихиоз СОПР, хроническое течение 42% 1% 41% 15% 2%

Патология желудочно-кишечного тракта 8% 13% 26% 43% 10%

Субкомпенсированная степень кариеса зубов 19% 16% 41% 14% 10%

Декомпенсированная степень кариеса зубов 12% 19% 47% 13% 9%

Таким образом, имеется зависимость между морфологией микроорганизмов и некоторыми заболеваниями человека, вероятно, обусловленная изменением биологических свойств ЬерШпсШа в процессе роста. При остром лептотрихиозе СОПР в 46% встречаются удлинённые палочки, при хроническом процессе преобладают одиночные палочки, до 42%, вероятно, по причине активного процесса размножения микроорганизмов в условиях снижения иммунной резистентности макроорганизма. Наряду с этим, количество удлинённых форм палочек не менее значительно и составляет 41%. Доля филаментов ЬерШпсЫа пятого морфовара при патологии ЖКТ и суб/декомпенсированной формах кариеса зубов составила 10%, 10% и 9% соответственно, что может доказывать взаимообусловленность патогенеза этих состояний и приобретение нитевидными формами ЬерШпсЫа свойств, которые способствуют развитию и усугублению процесса.

Изоляты от больных лептотрихиозом СОПР обладают выраженным персистентным потенциалом в сравнении с группами здоровых.

Таблица 4

Антилизоцимная активность (АЛА) микроорганизмов полости рта у здоровых

и больных лептотрихиозом СОПР

Микроорганизмы АЛА, мкг/мл

Корень языка Слюна**

здоровые больные здоровые больные

Легтготрихии 1,83±0,21 3,3±0,6* 1,0± 0,26 2,4± 0,22*

Стафилококки 0,93±0,73 3,98± 0,68* 1,8± 0,21 3,2± 0,28*

Стрептококки 2,14±0,22 3,05± 0,89 1,1±0,06 2,94±0,74*

Кандиды 1,03± 0,51 2,83± 0,46* - -

Примечания: * разность показателей достоверна (по сравнению с уровнем в группе здоровых), р<0,01; **данные АЛА симбионтов двух биотопов достоверно не отличались между собой.

Полученные данные свидетельствуют, что в группе больных лептотрихиозом СОПР преобладают микроорганизмы-симбионты с АЛА, выраженной примерно в одинаковой степени, от 2,83 до 3,98 мкг/мл, следовательно, происходит

селективный отбор штаммов, обладающих антилизоцимной активностью, необходимой для длительного переживания в изучаемой экологической нише. Обращает внимание, что в опытной группе в среднем 99,7% исследованных симбионтов обладают АЛА, что может свидетельствовать о возможном обмене генетической информацией между микроорганизмами и постоянном поддержании АЛА на высоком уровне в оромикробиоценозе.

При уровне АЛА у Ьер1хЛпсЫа 3,5 и более мкг/мл отмечается высокая корреляционная связь (г=0,83) с рецидивным процессом хронических форм лептотрихиоза СОПР. Следовательно, обострения ЛСОПР можно прогнозировать при антилизоцимной активности ЬсрШпсЫа выше, чем 3,5 мкг/мл. Таким образом, установленная высокая АЛА у микроорганизмов, выделенных с корня языка, свидетельствует о необходимости данного свойства для обеспечения персистенции в биотопе.

Наряду с активностью ЬерЮйтсЫа в процессе коадгезии с комменсалами орального биоценоза, оценивали индекс интенсивности коадгезии /ИИК по количеству прикрепившихся к поверхности палочек ЬерМпсЫа кокков и более мелких палочек. Как демонстрируют данные таблицы 5, ИИК приобретает важное прогностическое значение для всех обследованных нами категорий.

Таблица 5

Естественная коадгезивная активность ЬерМпсЫа-

ИИК у здоровых и больных при различных патологических состояниях (М±т)

Категории ИИК (ед.)

опыт сравнение контроль Р /группы опыт-контроль/

Лептотрихиозы СОПР 20±0,6 13,9±2,4** 3,1±0Д <0,001

Кариес твёрдых тканей зубов 39±3,4 28,4±2,4** 12,2±2Д <0,01

Язвенная болезнь желудка 18,9±1,1 17,6±1,7** 4,01 ±0,2 <0,001

Гастро дуодениты/гастриты 21,4±1.6 22,8±1,2** 3,9±0,5 <0,001

Примечания: * разность показателей достоверна (по сравнению с уровнем в группе «сравнение»), р<0,01; **разносгь показателей достоверна в группах «сравнение» (по сравнению с уровнем в группе «контроль»), р<0,01.

Наибольшее количество коадгезированных симбионтов полости рта зарегистрировано при декомпенсированной и субкомпенсированной форме кариеса зубов у детей, 39±3,4 и 28,4±2,4 соответственно, что соответствует очень высокому уровню интенсивности коадгезии.

Как видно из представленных результатов, для лептотрихиозов СОПР характерны средний и высокий ИИК: 13,9±2,4 ед. для острых форм инфекции и 20±0,6 ед. для рецидивирующих форм ЛСОПР. В сравнении с группой здоровых,

при лептотрихиозном поражении СОПР наблюдается увеличение ИИК в 6 раз (<0,001). Высокий уровень ИИК ЬерШпсЫа в полости рта зарегистрирован при язвенной болезни желудка, 18,9±1,1 ед. и 17,6±1,7 ед. соответственно. Для гастродуоденитов также характерен очень высокий уровень ИИК в группах с гастродуоденитом и гастритом - 21,4±1.6 ед. и 22,8±1,2 ед. соответственно. Рост интенсивности отмечен более чем в 5 раз (<0,001) в сравнении с группой контроля.

Исследовалась заболеваемость лептотрихиозами, выявлена весенне-летняя сезонность, возрастное распределение среди лиц старше 46 лет, и детей в возрасте от 1 до 3 лет. Сравнительная характеристика возрастных групп больных ЛСОПР представлена на рисунке 2.

СТГТИ998 ЕЕЭ2000 ВВ!001 вИ2О02 ЕПЭгога -Х-Ш —Ж—2005 —»-2006 -4—2007 200в

Рис. 2. Возрастное распределение показателя встречаемости лептотрихиозов СОПР среди населения г. Хабаровска, 1999-2008 г.г. (на 100 000 населения)

Исследуя основные закономерности развития лептотрихиозов слизистых оболочек полости рта, мы определили максимальный показатель выявляемое™ 61,35 на 100 тыс. населения, который зафиксирован методом активной регистрации в 2005 году. Минимальный показатель встречаемости зафиксирован в 1999 году на уровне 26,51 на 100 тыс. населения. В целом тенденцию можно охарактеризовать как повышение со среднегодовым темпом 2,55%. Динамика выявляемое™ имеет волнообразный характер, периоды с 1999 по 2003 г.г., 2004-2005 г.г. и с 2007 года по настоящее время можно описать как многолетние подъёмы заболеваемости, а 20032004 г.г. и 2005-2007 г.г. как периоды спада. Несмотря на временные понижения уровня показателей встречаемости, наблюдалась общая тенденция к росту показателей лептотрихиозов СОПР, увеличению числа хронических форм и микст-инфекций (лептотрихии+кандиды) за многолетний период.

Проведено комплексное исследование иммунного статуса больных лептотрихиозами, показателей общего и местного иммунитета, активности фагоцитоза и лизоцима слюны, количества ЦИК, оценка резерва фагоцитоза. Выявлены иммунобиологические изменения у больных хроническими и острыми формами ЛСОПР: снижение уровня субпопуляций лимфоцитов СЭЗ4, СЭ4+, СЭ19+, и повышение уровня СЭ8+, С01б+, что отражено в рисунке 3.

Рис. 3. Динамика показателей основных субпопуляций лимфоцитов крови у больных острыми и хроническими лептотрихиозами слизистых оболочек полости рта

Достоверно снижаются показатели уровня 1цА сыворотки и Б^А в ротовой жидкости, активность лизоцима слюны и увеличиваются показатели ЦИК, что может служить критериями прогноза и риска развития ХЛСОПР.

ВЫВОДЫ

1. Представители рода ЬерМпсЫа являются потенциальными патогенами человека, этиологическим фактором лептотрихиозов слизистых оболочек полости рта. Выявлена очень тесная взаимосвязь между обсеменённостью биотопа полости рта ЬерШпсЫа ЬиссаШ, а также высокой интенсивностью коадгезии, с развитием суб/декомпенсированных форм кариеса и патологии ЖКТ. Заселение полости рта Ьер<;ой1сЫа у детей начинается в период новорожденности, наиболее активная колонизация зарегистрирована после прорезывания первых зубов, к 2,5 годам биотоп полости рта колонизирован Ьер1о1псЫа.

2. Для региона характерно всеобщее - 95% распространение ЬерШпсЫа среди взрослого и детского населения, в городских и сельских условиях проживания, как у лиц русской национальности, так и среди этнического населения. Лептотрихиозы СОПР характеризуются постепенным увеличением частоты встречаемости, ростом микст-инфекций и хронических форм лептотрихиозов. Преимущественно болеют взрослые старше 46 лет и дети 1-3 лет. Характерна весенне-летняя сезонность с пиком в мае-июле. У больных лептотрихиозом СОПР зарегистрирован комплекс иммунобиологических изменений: снижение уровня лимфоцитов периферической крови СБЗ+, С04+, СП19+, повышение уровня С08+, СЭ16 лимфоцитов, снижение содержание ^А сыворотки и Б^А в

ротовой жидкости, снижение уровня активности лизоцима слюны, увеличение показателя ЦИК, снижение кислородного резерва нейтрофилов в сравнении с группой здоровых.

3. Leptotrichia buccalis имеют оригинальный морфологический профиль, который изменяется в зависимости от условий существования и культивирования. Выделено 5 морфологических вариантов Leptotrichia. Персистентный потенциал Leptotrichia определяется AJIA, АИА, АКА, активностью адгезии к тканям и в микробных ассоциациях. Leptotrichia имеют выраженную активность и интенсивность коадгезии. Предложен новый метод культивирования Leptotrichia buccalis на питательной среде «Уриселект».

4. Leptotrichia buccalis - прихотливые бактерии, в первой изоляции анаэробы или микроаэрофилы, при пересевах 85% изолятов Leptotrichia аэротолерантны, 15% сохраняют анаэробность. Лептотрихии проявляют чувствительность к большинству антимикробиотиков, действующих на клеточную стенку бактерий, резистентны к аминогликозидам, фторхинолонам, макролидам. Высокочувствительны к действию антисептических препаратов в эксперименте in vitro. In vivo эффективен коллоидный раствор серебра и «Стоматофит».

Практические рекомендации:

1. В связи с уточнением таксономического положения Leptotrichia предлагается ввести в медицинскую терминологию корректные термины Leptotrichia buccalis как этиологический фактор воспалительных процессов полости рта, вызванный лептотрихиями и «лептотрихиоз», отражающий наименование заболевания. Не использовать устаревшие термины Leptothrix buccalis и «лептотрихоз» как утратившие значение и в связи с отсутствием связи между патологией человека и свободноживущими видами лептотриксов.

2. Выявленные особенности возрастной колонизации, распространённости лептотрихиозов, особенности иммунного статуса, взаимосвязи с уровнем гигиены и степенью активности кариеса и заболеваний желудочно-кишечного тракта предлагаются использовать в муниципальных учреждениях здравоохранения ДВ региона для планирования коррекции оказания медицинской помощи.

3. Рекомендовать для широкого применения с целью микробиологической диагностики заболевания применение коммерческой среды «Уриселект», что способствует стандартизации условий культивирования в практических бактериологических лабораториях.

4. Информационное письмо и методические рекомендации по объёму, стандартам диагностики возбудителя будут способствовать повышению эффективности специализированной медицинской помощи населению Хабаровского края.

В практику здравоохранения:

Рекомендовать при подозрении на лептотрихиоз СОПР для бактериологического исследования биотопов полости рта использовать исследование соскобов с корня языка и/или отделяемого слизистых с посевом на пластинчатую среду «Уриселект» и созданием как анаэробных, так и микроаэрофильных условий культивирования для первичного посева, аэробных условий для пересевов.

Способ подтверждения диагноза острый лептотрихиоз СОПР с использованием микробиологических критериев: микроскопия мазка - не менее 15-20 филаментоидных форм ЬерШШсЫа во всех полях зрения, наличие большого количества слущенного эпителия, гистадгезивная активность (ИГА=3 и более ед.), коадгезивная активность (ИАК=40% и более, ИИК=7 и более ед.), выделение чистой культуры Ьер1о1псЫа на искусственной питательной среде с идентификацией и определением чувствительности к антибиотикам; лабораторный критерий -лейкоцитоз и лимфоцитоз в периферической крови.

Рекомендовать способ подтверждения диагноза хронический лептотрихиоз СОПР с использованием микробиологических критериев: микроскопия мазка - не менее 15-20 одиночных палочек и филаментоидных форм Ьер1оЦтсЫа во всех полях зрения, наличие слущенного эпителия, гистадгезивная активность (ИГА=6 и более ед.), коадгезивная активность (ИАК=80% и более, ИИК=15 и более ед.), выделение чистой культуры Ьер1оЦ1сЫа на искусственной питательной среде с идентификацией и определением чувствительности к антибиотикам; лабораторный критерий - лейкопения и лимфоцитоз в периферической крови.

В качестве этиотропной терапии как препарат выбора рекомендовать цефалоспорины III поколения. Использование ампициллина, метронидазола и препаратов этих групп следует подтверждать антибиотикограммой для исключения неэффективности терапии устойчивых штаммов.

Методические рекомендации: 1) методические рекомендации для специалистов здравоохранения «Оценка адгезивной и коадгезивной активности ЬерШпсМа» 2) информационное письмо для врачей, студентов, аспирантов «ЬерШпсЫа & ЬерШЬпх».

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Стрельникова, Н. В. Таксономическое положение ЬерШпсЫа и ЬерШИпх / Н. В. Стрельникова, И. П. Кольцов, Л. Я. Нестеренко // Дальневосточный мед. журнал. - (Хабаровск). - 2003. - № 2. - С. 56 - 58.

2. Стрельникова, Н. В. О ЬерШпсМа ЬиссаИх - комменсалах полости рта / Н. В. Стрельникова, И. П. Кольцов, А. А. Антонова // Дальневосточный мед. журнал. - (Хабаровск). - 2004. - № 4. - С. 99 -101.

3. Антонова, А. А. Иммунологические показатели полости рта у детей различных национальностей / А. А. Антонова, Н. В. Стрельникова // Дальневосточный мед. журнал. - (Хабаровск). - 2006. - № 3. - С. 104 - 106.

4. Strelnikova, N. V. То the problem of Leptotrichiosis of oral mucous membrane / N. V. Strelnikova, I. P. Koltsov, A. A. Antonova // 2004 JRME NIIGATA'04 The 11th International Symposium of the Japan-Russia Medical Exchange 2004: PROGRAM -Abstract (II) Suppl. - Niigata (Japan), 2004. - P. 76.

5. Strelnikova, N. V. Inflammatoiy process of pharynx and tonsils in children of 2-8 years old induced by Leptotrichia buccalis in association with other microorganisms / N. V. Strelnikova, S. S. Nosov, I. P. Koltsov // 2005 JRME KRASNOYARSK'05 The 12th International Symposium of the Japan-Russia Medical Exchange 2005: PROGRAM & Abstract. - Krasnoyarsk (Russia), 2005. - P. 325-326.

6. Стрельникова, H. В. Активность лизоцима слюны и его взаимосвязь с интенсивностью кариеса и гигиеническим состоянием полости рта у детей / Е. В. Боровских, Н. В. Стрельникова, К. И. Елистратов, Н. С. Шпак // Актуальные проблемы и перспективы развития стоматологической службы: сборник науч. статей межрегион, науч.-практич. конф., поев. 85-лет. стоматол. службы республики Саха (Якутия).-Якутск, 2005,- С.280-283.

7. Стрельникова, Н. В. К вопросу об эпидемиологической распространенности лептотрихий среди населения г. Хабаровска и Хабаровского района /Н. В. Стрельникова, И. П. Кольцов, А. А. Антонова, JI. Я. Нестеренко // Медицина и образование в XXI веке: тезисы докл. ежегодной науч.-практич. конф. с междунар. участием, посвящ. 70-летию НГМА. - Новосибирск, 2005. - С.359-362.

8. Стрельникова, Н. В. Активность лизоцима слюны у детей, его корреляция с активностью степени кариесопораженности и сравнительная характеристика методов исследования / Н. В. Стрельникова, И. П. Кольцов, С. П. Шпак // Современные стоматологические технологии: материалы 7-й науч.-практ. конф. -Барнаул, 2005. - С. 276-278.

9. Сувырина, М. Б. Воспалительные заболевания пародонта и Leptotrichia buccalis / М. Б. Сувырина, Н. В. Стрельникова, М. А. Уманская и др. // Актуальные вопросы детской стоматологии в Амурской области: материалы областной науч.-практич. конф,- Благовещенск, 2006. - С. 103.

10. Аршинский, М. И. Эпидемиологические особенности лептотрихиозных поражений слизистых оболочек полости рта и кожи в Хабаровском крае / М. И. Аршинский, Н. В. Стрельникова, Н. В. Милая // Актуальные вопросы дерматологии и венерологии: науч.-практич. конф. - Владивосток, 2006. - С. 46-47.

11. Стрельникова, Н. В. Leptotrichia buccalis как фактор риска развития воспалительных процессов в полости рта у детей / Н. В. Стрельникова, А. А. Антонова, Н. В. Милая// Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины: материалы Всерос. науч.-практич. конф., посвящ. 55-летию Читинской гос. мед. академии. - Чита, 2008. - С.100-101.

12. Антонова, А. А. Состояние полости рта и местный иммунитет у детей различных национальностей Хабаровского края / А. А. Антонова, Н. В. Стрельникова // Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины: материалы Всерос. науч.-практич. конф., посвящ. 55-летию ЧГМА. -Чита, 2008. -С.101-102.

13. Стрельникова, Н. В. К вопросу о таксономическом положении лептотрихий -возбудителей воспалительных процессов полости рта у детей / Н. В. Стрельникова // Актуальные проблемы стоматологической науки и практики: мат. межрегион, науч.-практич. конф. с междунар. участием.- Кемерово. : Медицина и Просвещение, 2009. - Медицина в Кузбассе. - Спец выпуск № 2. - С. 173-174.

14. Стрельникова, Н. В. Характеристика эпидемического процесса при лептотрихиозном поражении слизистых оболочек полости рта: тезисы XI междунар. конгресса MAKMAX/ESCMID по антимикробной терапии / Н. В. Стрельникова, М. И. Аршинский, И. П. Кольцов // Клиническая микробиология и антимикроб, химиотерапия. - 2009. - Том 11, - № 2,- Прил. № 1. - С. 34-35.

15. Стрельникова, Н. В. О роли условно-патогенной оральной аутофлоры в развитии воспалительных процессов полости рта у детей / Н. В. Стрельникова, А. А. Антонова, И. П. Кольцов [и др.] // Актуальные проблемы стоматологии: сб. трудов науч.-практич. конф. / под ред. A.A. Антоновой.- Хабаровск: Антар, 2009. -С. 253-255.

16. Чувствительность возбудителей лептотрихиозных и кандидозных стоматитов у детей к ионам серебра (Ag+) / Н. В. Стрельникова, А. А. Антонова, И. П. Кольцов, А. В. Чабан // Актуальные проблемы стоматологической науки и практики: материалы межрегион, науч.-практич. конф. с междунар. участием,-Кемерово: Медицина и Просвещение, 2009. - Медицина в Кузбассе. - Спец выпуск №2.-С. 174-175.

17. Стрельникова, Н. В. Leptotrichia и Leptothrix : информационное письмо / Н. В. Стрельникова, И. П. Кольцов, JI. Я. Нестеренко. - Хабаровск. : Изд-во ДВГМУ, 2010. - 23 с.

18. Стрельникова, Н. В. Оценка адгезивных и гистадгезивных свойств Leptotrichia: методические рекомендации для специалистов здравоохранения /

H. В. Стрельникова, И. П. Кольцов, А. А. Антонова. - Хабаровск.: Изд-во ГОУ ВПО ДВГМУ, 2010.-16 с.

Список рационализаторских предложений

I. Техника забора материала с поверхности языка стерильной фильтр-полоской площадью 1 см2 для выявления лептотрихий / Н.В. Стрельникова, Г.Н. Холодок, И.П. Кольцов, Л.Я. Нестеренко: Рационализаторское предложение (удостоверение №2639 ГОУ ВПО ДВГМУ Росздрава, г. Хабаровск от 13.10.09).

2. Оптимальный вариант транспортной среды для обеспечения сохранности анаэробных микроорганизмов лептотрихий / Н. В. Стрельникова, И. П. Кольцов, А. А. Антонова, С. С. Рокуш: Рационализаторское предложение (удостоверение №2640 ГОУ ВПО ДВГМУ Росздрава, г. Хабаровск от 13.10.09).

3. Усовершенствование способа определения АЛА у микроорганизмов с низкой /минимальной степенью активности / Н. В. Стрельникова, Г. Н. Холодок, И. П. Кольцов, А. А. Антонова, Е. П. Когут: Рационализаторское предложение (удостоверение №2641 ГОУ ВПО ДВГМУ Росздрава, г. Хабаровск от 15.10.09).

4. Усовершенствование способа разведения лизоцима в методе определения AJIA у микроорганизмов / Н. В. Стрельникова, Г. Н. Холодок, И. П. Кольцов,

A. А. Антонова // Рационализаторское предложение (удостоверение №2642 ГОУ ВПО ДВГМУ Росздрава, г. Хабаровск от 15.10.09).

5. Способ выявления бактерицидной активности лептотрихий и др. в отношении тест-штамма микрококка при определении АЛА у микроорганизмов / Н. В. Стрельникова, Г. Н. Холодок, И. П. Кольцов, А. А. Антонова, С. С. Рокуш, И. Н. Алексеева: Рационализаторское предложение (удостоверение №2643 ГОУ ВПО ДВГМУ Росздрава, г. Хабаровск от 15.10.09).

6. Способ определения коадгезивной активности Leptotrichia in vivo /Н. В. Стрельникова, И.П. Кольцов, Г.Н. Холодок, A.A. Антонова, И.Н. Алексеева, Е.Б. Половова: Рационализаторское предложение (удостоверение №2661 ГОУ ВПО ДВГМУ Росздрава, г. Хабаровск от 02.03.10).

7. Определение естественной гистадгезии Leptotrichia в оромикробиоценозе / Н. В. Стрельникова, И.П. Кольцов, A.A. Антонова, Е.Б. Половова, Г.Н. Холодок,

B.Ю. Хиврич, Е.В. Тукмаева: Рационализаторское предложение (удостоверение №2670 ГОУ ВПО ДВГМУ Росздрава, г. Хабаровск от 20.04.10).

Список использованных сокращений

АИА - антиинтерфероновая активность

АКА - антикомплементарная активность

АЛА - антилизоцимная активность

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

ИАК - индекс активности коадгезии

ИИК - индекс интенсивности коадгезии

ИРИ - иммунорегуляторный индекс (CD+4 /CD8+)

ЛСОПР - лептотрихиоз/ы слизистых оболочек полости рта

СОПР - слизистые оболочки полости рта

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

CD - рецепторы кластер дифференцировки лимфоцитов

Ig- иммуноглобулины

СТРЕЛЬНИКОВА Наталья Викторовна

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ПАТОГЕНОВ ЧЕЛОВЕКА РОДА ЬЕРТОТШСША

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уч. изд. л. 1,0 Формат 60x84/16

Тираж 100 экз. Заказ № 324

Отпечатано в типографии РПК МГУ им. адм. Г.И. Невельского 690059 г. Владивосток, ул. Верхнепортовая, 50а

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Стрельникова, Наталья Викторовна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. РОЛЬ ЛЕПТОТРИХИЙ В ОБЩЕЙ ПАТОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА.

1.1. Таксономическое положение ЬерШпсЫа и ЬерШкпх.

1.2. Биологические характеристики ЬерЮМсЫа.

1.3. Клиническое значение лептотрихий в патологии человека.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Направления исследования.

2.2. Материал и объект исследования.

2.3. Методы исследования.

2.3.1. Микробиологические методы.

2.3.2. Эпидемиологическая статистика.

2.3.3. Иммунологические методы.

2.3.4. Статистические методы.

ГЛАВА 3. КОЛОНИЗАЦИЯ БИОТОПА ПОЛОСТИ РТА БАКТЕРИЯМИ РОДА ЬЕРТОТТаСША.

3.1. Этапы заселения Ьер^МсЫа слизистых полости рта у детей.

3.2. Распространённость ЬерШпсЫа среди населения региона.

3.3. Роль иммунной системы в реализации механизмов колонизации полости рта ЬерШпсЫа.

3.3.1. Особенности клеточного звена иммунитета.

3.3.2. Особенности гуморального звена иммунитета.

3.3.3. Характеристика фагоцитарных реакций и оценка эффективности показателей фагоцитоза.

3.3.4. Состояние местного иммунитета полости рта.

ГЛАВА 4. ФЕНОТИПИЧЕСКИЙ ПРОФИЛЬ РЕГИОНАЛЬНЫХ ИЗОЛЯТОВ РОДА ЬЕРТОТШСША.

4.1. Морфологический профиль.

4.1.1. Типы морфоваров ЬерШМсЫа.

4.1.2. Морфология Ьер^МсЫа при лептотрихиозах СОПР и других патологических процессах.

4.2. Физиологический профиль.

4.2.1. Культивирование Ьер^МсЫа и температурный диапазон.

4.2.2. Типы дыхания Ьер^МсЫа.

4.3. Изучение факторов патогенности штаммов Leptotrichia.

4.3.1. Антилизоцимная активность

4.3.2. Антиинтерфероновая активность.

4.3.3. Антикомплементарная активность.

4.3.4. Естественная гистадгезивная и коадгезивная активность Leptotrichia.

4.4. Антибактериальная чувствительность Leptotrichia.

4.5. Бактерицидная активность антисептических растворов.

ГЛАВА 5. РОЛЬ LEPTOTRICHIA В ПАТОЛОГИИ ПОЛОСТИ РТА.

5.1. Лептотрихиоз - определение понятия, клинические проявления и критерии диагностики.

5.2. Динамика и структура лептотрихиозов и кандидозов СОПР.

5.3. Возрастное и сезонное распределение встречаемости ЛСОПР.

5.4. Leptotrichia как маркер поражённости кариесом зубов у детей.

5.5. Leptotrichia как маркер патологии желудочно-кишечного тракта.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Микробиологические свойства потенциальных патогенов человека рода Leptotrichia"

Актуальность исследования

Микрофлора полости рта является высокочувствительной индикаторной системой, реагирующей качественными и количественными сдвигами на изменение в состоянии различных органов и систем организма. Нарушение биологического равновесия между макроорганизмом и микроорганизмами нормальной микрофлоры может приводить к развитию патологических процессов. (Царёв В. Н., 2009; Ушаков Р. В., Царев В. Н., 2002; Кондрашова 3. Н., 1996; Борисов Л. Б., Фрейдлин И. С., 1987).

Одной из актуальных проблем современной медицины продолжают оставаться гнойно-воспалительные заболевания — ГВЗ (Воробьев A.A., 1994; Engelkirk P.G. et al., 1992; Миронов М.Ю. и соавт., 1990). Этиологическими агентами ГВЗ являются условно-патогенные микроорганизмы, большинство которых — представители нормальной микрофлоры организма человека.

Доминирующая роль среди них, по мнению Воробьева A.A., 1994, Колесова А.П. и соавт., 1989, принадлежит неспорообразующим анаэробным бактериям/НАБ [72].

Leptotrichia - грамотрицательные бактерии, обитающие на слизистых оболочках полости рта человека, представители НАБ [72]. Ариевич А. М., Степанищева 3. Г., 1964, установили, что бактерии, ранее считавшиеся сапрофитами, способны вызывать патологические изменения в тканях миндалин, корня языка, передней и задней дужек мягкого нёба, трахеи, слизистых оболочек полости рта [2].

Борисов JI. Б., Фрейдлин И. С., 1987, указывают, что микроорганизмы полости рта становятся источником потенциально патогенных возбудителей кариеса, гингивита, стоматита, острых воспалительных заболеваний слизистых полости рта, пародонта, тканей челюстно-лицевой области [10].

По данным литературы, в практической медицине для возбудителя лептотрихиоза традиционно используется устаревший термин «ЬерШкпх ЬиссаШ» [23, 32, 56, 87]. Микроорганизмы рода ЬерШкгЪс, действительно существуют в природе, однако являются обитателями водоемов, подвижными палочками, окруженными специфическим чехлом, который инкрустирован окислами марганца и железа [35, 58].

Для исключения путаницы в названии возбудителя лептотрихиоза необходимо пояснение современного таксономического положения ЬерШг1ск1а bu.cca.lis. Следует уточнить этиологическую роль эмергентных бактерий рода ЬерШ1г1сЫа в развитии воспалительных заболеваний слизистых полости рта человека и значение бактерий рода ЬерШкпх в природе.

В последнее десятилетие стали чаще регистрироваться воспалительные заболевания слизистых полости рта в регионе Хабаровского края. Рост числа пациентов, страдающих лептотрихиозами слизистых оболочек полости рта, хроническое, вялотекущее, рецидивирующее течение инфекции, устойчивость к классической терапии, длительность заболевания (месяцы и годы), требуют детального изучения биологических особенностей бактерий рода ЬерШМсЫа, подтверждения их этиологической значимости в развитии лептотрихиозов как локальных ЬерШгюЫа-инфекций.

Анализ литературы показал, что отсутствуют данные о частоте выделения возбудителя лептотрихиоза, нет четкого критерия, указывающего на диагноз лептотрихиоз слизистых оболочек полости рта. В практических лабораториях края не ведутся бактериологические исследования лептотрихиозов в связи с отсутствием алгоритма диагностики заболевания.

Биологические особенности рода ЬерШпсЫа в регионе исследованы мало, данных о колонизации полости рта, факторах патогенности, изучение чувствительности к антибиотикам и антисептикам не обнаружено.

Данные об иммунобиологических изменениях клеточного и гуморального звеньев иммунитета при лептотрихиозах слизистых оболочек полости рта /ЛСОПР/ противоречивы.

Из вышесказанного следует, что исследование проблемы лептотрихиоза в нашем регионе, состояния иммунного статуса больных ЛСОПР, и, прежде всего, биологических характеристик ЬерШпсЫа ЪиссаШ, является высоко значимым и актуальным. Поэтому мы сочли целесообразным исследовать штаммы ЬерШпсЫа ЪиссаШ, циркулирующие в регионе Хабаровского края.

Цель исследования состояла в углублённом изучении биологических особенностей потенциальных патогенов рода ЬерШМсЫа, выявлении их этиологической значимости в патологии полости рта.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи.

Задачи исследования:

1. Выявить роль представителей рода Ьер^МсЫа в патологии полости рта с учётом их естественного ресурса и таксономии. Исследовать частоту встречаемости лептотрихиозов слизистых оболочек полости рта, выяснить взаимосвязь ЬерШпсЫа ЪиссаШ со степенью активности кариеса зубов у детей и патологией желудочно-кишечного тракта.

2. Изучить этапы колонизации анаэробами слизистых оболочек полости рта у детей, распространённость Ьер^МсЫа ЪиссаШ среди населения региона, разработать способ культивирования Ьер1оМсЫа.

3. Исследовать роль иммунной системы в реализации механизмов колонизации и распространённости ЬерШпсЫа в биотопе полости рта.

4. Определить фенотипический профиль Ьер^МсЫа ЪиссаШ, факторы патогенности, персистентности, чувствительность к антимикробным химиопрепаратам.

Научная новизна исследования

Впервые формально обосновано употребление термина «лептотрихиоз» слизистых оболочек полости рта для определения локальных ЬерЮМсЫа-инфекций.

Исследованы этапы заселения Ьер^МсЫа и другими анаэробами полости рта новорожденных и детей в регионе, впервые изучена и доказана всеобщая распространённость ЬерШпсЫа ЬиссаШ среди населения Хабаровского края.

Разработан новый способ культивирования Ьер1оМсЫа ЪиссаШ на искусственной питательной среде «Уриселект».

Выделены региональные штаммы ЬерШМсЫа ЪиссаИя, изучены их факторы персистенции, адгезивный потенциал, исследована продукция ими /?-лактамаз. Определена региональная антибиотикограмма лептотрихий. Показано, что высокая биологическая пластичность микроорганизмов, колонизирующих слизистые оболочки, и высокая чувствительность слизистых к воздействию микроорганизмов позволяют использовать изменения в их состоянии как критерий оценки риска заболевания лептотрихиозом.

Выявлена взаимосвязь ЬерШпсЫа ЪиссаИз с риском развития суб- и декомпенсированной степеней активности кариеса зубов у детей и повышением риска развития патологии желудочно-кишечного тракта: гастродуоденита и язвенной болезни желудка и 12-ти перстной кишки.

Проведено сравнительное изучение факторов патогенности (антилизоцимной, антикомплементарной, антиинтерфероновой адгезивной активности) у штаммов ЬерШпсЫа ЬиссаШ, выделенных в виде монокультур и ассоциаций при исследовании микробиоценоза полости рта у больных лептотрихиозом слизистых оболочек полости рта.

Выявленные изменения иммунного статуса у пациентов слептотрихиозами позволяют оценить реализацию механизмов колонизации и распространённости лептотрихий в биотопе полости рта, обосновать критерии развития лептотрихиоза, прогнозирования рецидивирующих форм заболевания.

Практическая значимость работы

Результаты исследований позволили обосновать необходимость микробиологических исследований микрофлоры полости рта для выявления ранних нарушений микробиоценоза организма в условиях развития лептотрихиоза. В ходе проведенных исследований от больных лептотрихиозами слизистых оболочек полости рта выделены региональные изоляты бактерий Ьер^МсЫа ЬиссаНя, изучены их морфологические, культуральные, колонизационные свойства, дана оценка чувствительности к антибактериальным химиопрепаратам.

Доказана этиологическая роль бактерий ЬерШг'юк'ш ЪиссаИз как возбудителей локальных Хер/о/г/с/гш-инфекций - лептотрихиозов слизистых оболочек полости рта.

Обосновано использование и внедрены в работу учреждений Министерства здравоохранения края термины ЬерШпсЫа ЬиссаШ (у.э. ЬерШкгЬс ЬиссаНя) и «лептотрихиоз» (у.б. «лептотрихоз»).

Изучение биологических свойств Ьер^МсЫа ЪиссаИз можно использовать для обнаружения ранних признаков изменения защитных сил организма, оценки степени тяжести поражения слизистых при лептотрихиозах, риска перехода ЛСОПР в хроническую форму и коррекции выявленных нарушений у больных.

Дана комплексная оценка изменения показателей иммунного статуса при острых и хронических формах ЛСОПР. Полученные результаты являются основанием для включения иммунобиологических критериев в прогнозирование хронизации инфекционного процесса и/или развития лептотрихиозов у иммунокомпрометированных лиц.

Разработаны методические рекомендации по оценке адгезивной активности лептотрихий, которые внедрены в работу ГУЗ Хабаровского края и помогают в диагностике лептотрихиозов СОПР.

Вновь предложенные методики исследований изложены в 7 рационализаторских предложениях. Зарегистрированы 2 заявки на изобретения в ФИПС: «Способ лечения воспалительных рецидивирующих заболеваний, вызванных лептотрихиями», №200913268/14 (045691) от 21.08.2009 г. и «Способ культивирования ЬериЛпсЫа на искусственной питательной среде «Уриселект», № 2010110394 (014610) от 18.03.2010 года.

Результаты научно-исследовательской работы внедрены в работу государственных учреждений здравоохранения, подведомственных Министерству здравоохранения Хабаровского края: ГУЗ "Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями", ГУЗ «Стоматологическая поликлиника», ГУЗ "Краевой клинический центр онкологии", ГУЗ "Краевой кожно-венерологический диспансер", ГУЗ "Краевая клиническая больница № 1 имени профессора С.И.Сергеева", ГУЗ "Детская краевая клиническая больница", ГУЗ "Перинатальный центр", ГОУ ДПО "Институт повышения квалификации специалистов здравоохранения" МЗ ХК, а также Военного госпиталя ВВ МВД РФ, г. Хабаровска, стоматологической поликлиники ДВГМУ «Унистом», Хабаровского филиала ДНЦ ФПД Сибирского отделения РАМН НИИ Охраны материнства и детства.

Результаты представленной работы внедрены в учебный процесс кафедр микробиологии, вирусологии и иммунологии, стоматологии детского возраста, инфекционных болезней и эпидемиологии ДВГМУ.

Результаты исследовательской работы включены в программу усовершенствования врачей-бактериологов ФПК и ППС ДВГМУ, врачей-ординаторов, специалистов здравоохранения ГОУ ДПО "Институт повышения квалификации специалистов здравоохранения" МЗ Хабаровского края, в качестве лекционного и дополнительного учебно-методического материала.

По результатам исследований прочитан цикл лекций врачам-стоматологам ГУЗ Хабаровского края.

Апробация материалов диссертации

Материалы диссертации доложены на различных научных форумах международного, всероссийского, межрегионального уровня: 11-ом Международном симпозиуме фонда медицинского обмена Японии-России и стран Северо-восточной Азии (Ниигата, Япония, 2004), 12-ом Международном симпозиуме фонда медицинского обмена Японии-России (Красноярск, 2005), научно-практической конференции с международным участием, посвященной 70-летию НГМА «Медицина и образование в XXI веке» (Новосибирск, 2005), межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию стоматологической службы республики Саха (Якутия) «Актуальные проблемы и перспективы развития стоматологической службы» (Якутск, 2005), областной научно-практической конференции «Актуальные вопросы детской стоматологии в Амурской области» (Благовещенск, 2006), всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины», посвященной 55-летию Читинской гос. медицинской академии (Чита, 2008), межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 50-летию стоматологического факультета Кемеровской гос. медицинской академии, (Кемерово, 2009), научно-практической конференции «Актуальные проблемы стоматологии», посвящённой 30-летию стоматологического факультета Дальневосточного гос. медицинского университета (Хабаровск, 2009), XI международном конгрессе МАКМАХ/ЕБСМГО по антимикробной терапии (Москва, 2009).

Результаты диссертационного исследования обсуждены на заседаниях общества бактериологов Хабаровского края 2005-2009 г.г., на расширенном межкафедральном заседании кафедр микробиологии, вирусологии и иммунологии, инфекционных болезней и эпидемиологии, детских инфекционных болезней, стоматологии детского возраста, нормальной физиологии, гистологии, патологической физиологии, ДВГМУ, ЦНИИ ДВГМУ, ФГУН «Хабаровский НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора», ХФ ДНЦ ФПД СО РАМН НИИ Охраны материнства и детства 12 мая 2010 года, протокол заседания № 5.

Личный вклад автора. Автором осуществлена систематизация и анализ материалов по частоте выявляемости и структуре лептотрихиозов. Лично автором проведено выделение, идентификация и оценка чувствительности к антибиотикам штаммов лептотрихий. При непосредственном участии автора подготовлены и проведены иммунологические исследования, все методы статистической обработки выполнены автором лично. Подготовлены публикации, рационализаторские предложения и заявки на изобретения. Доля участия в накоплении материала составляет 85%, в обобщении материала - до 100%.

Протокол научно-плановой комиссии № 8 от 18 мая 2004 года.

Номер государственной регистрации темы: 01201057546.

Публикации

По теме настоящей диссертации опубликовано 16 научных статей, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ, и 2 методических пособия.

Объём и структура диссертации:

Диссертация изложена на 218 страницах текста, проиллюстрирована 23 таблицами и 18 рисунками и состоит из введения, обзора литературы, трёх глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций для внедрения результатов работы в медицинскую науку и практику здравоохранения, учебный процесс и приложений. Список литературы содержит 263 источника, из которых 90 отечественных и 173 иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Стрельникова, Наталья Викторовна

Выводы:

1. Представители рода ЬерЬоЫсЫа являются потенциальными патогенами человека, этиологическим фактором лептотрихиозов слизистых оболочек полости рта. Выявлена очень тесная взаимосвязь между обсеменённостью биотопа полости рта Ьер^МсЫа, а также высокой интенсивностью коадгезии, с развитием суб/декомпенсированных форм кариеса и патологии ЖКТ. Заселение полости рта ЬерЮМсЫа у детей начинается в период новорожденности, наиболее активная колонизация зарегистрирована после прорезывания первых зубов, к 2,5 годам биотоп полости рта колонизирован Ьер^МсЫа.

2. Для региона характерно всеобщее - 95% распространение ЬерШпсЫа среди взрослого и детского населения, в городских и сельских условиях проживания, как у лиц русской национальности, так и среди этнического населения. Лептотрихиозы СОПР характеризуются постепенным увеличением частоты встречаемости, ростом микст-инфекций и хронических форм лептотрихиозов. Преимущественно болеют взрослые старше 46 лет и дети 1-3 лет. Характерна весенне-летняя сезонность с пиком в мае-июле. У больных ЛСОПР зарегистрирован комплекс иммунных изменений: снижение лимфоцитов периферической крови CD3+, CD4+, CD19+, повышение уровня CD8+, CD16+ лимфоцитов, снижение содержание IgA сыворотки и SIgA в ротовой жидкости, снижение уровня активности лизоцима слюны, увеличение показателя ЦИК, снижение кислородного резерва нейтрофилов в сравнении с группой здоровых.

3. Leptotrichia buccalis имеют оригинальный морфологический профиль, который изменяется в зависимости от условий существования и культивирования. Выделено 5 морфологических вариантов Leptotrichia. Персистентный потенциал Leptotrichia определяется АЛА, АИА, АКА, активностью адгезии к тканям и в микробных ассоциациях. Leptotrichia имеют выраженную активность и интенсивность коадгезии. Предложен новый метод культивирования Leptotrichia buccalis на питательной среде «Уриселект».

4. Leptotrichia buccalis - прихотливые бактерии, в первой изоляции анаэробы или микроаэрофилы, при пересевах 85% изолятов Leptotrichia аэротолерантны, 15% сохраняют анаэробность. Чувствительны к большинству антимикробных химиопрепаратов, действующих на клеточную стенку бактерий, резистентны к аминогликозидам, фторхинолонам, макролидам. Высокочувствительны к действию антисептических препаратов в эксперименте in vitro. In vivo эффективны коллоидный раствор серебра и «Стоматофит».

Практические рекомендации;

2. Выявленные особенности возрастной колонизации, распространённости лептотрихиозов, особенности иммунного статуса, взаимосвязи с уровнем гигиены и степенью активности кариеса и заболеваний ЖКТ предлагаются преддагапотся к использованию в муниципальных учреждениях здравоохранения ДВ региона для планирования коррекции оказания медицинской помощи.

В практику здравоохранения:

Рекомендовать при подозрении на лептотрихиоз СОПР для бактериологического исследования биотопов полости рта использовать исследование соскобов с корня языка и отделяемого слизистых оболочек с посевом на пластинчатую среду «Уриселект» и созданием как анаэробных, так и микроаэрофильных условий культивирования в первичном посеве и аэробных условий для пересевов.

Способ подтверждения диагноза «острый лептотрихиоз СОПР» с использованием микробиологических критериев: при микроскопии мазка — обнаружение не менее 15-20 филаментоидных форм Leptotrichia во всех полях зрения, наличие большого количества с лущенного эпителия, гистадгезивная активность (ИГА=3 и более ед.), коадгезивная активность (ИАК=40% и более, ИИК=7 и более ед.), выделение чистой культуры Leptotrichia на искусственной питательной среде с идентификацией и определением чувствительности к антибиотикам; лабораторный критерий -лейкоцитоз и лимфоцитоз в периферической крови.

Рекомендовать способ подтверждения диагноза «хронический лептотрихиоз СОПР» с использованием микробиологических критериев: при микроскопии мазка - обнаружение не менее 15-20 молодых палочек и филаментоидных форм Leptotrichia во всех полях зрения, наличие слущенного эпителия, гистадгезивная активность (ИГА=6 и более ед.), коадгезивная активность (ИАК=80% и более, ИИК=15 и более ед.), выделение чистой культуры Leptotrichia на искусственной питательной среде с идентификацией и определением чувствительности к антибиотикам; лабораторный критерий - лейкопения и лимфоцитоз в периферической крови.

В качестве этиотропной терапии как препарат выбора рекомендовать цефалоспорины III поколения. Использование ампициллина, метронидазола и препаратов этих групп следует подтверждать антибиотикограммой выделенной культуры для исключения неэффективности терапии устойчивых штаммов.

Методические рекомендации: 1) методические рекомендации для специалистов здравоохранения «Оценка адгезивной и коадгезивной активности Leptotrichia» 2) информационное письмо для врачей, студентов, аспирантов «Leptotrichia & Leptothrix».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Стрельникова, Наталья Викторовна, Владивосток

1. Алёшин В. А. К диагностике, клинике и лечению лептотрихоза глотки: автореф. дис. канд. мед. наук. Ташкент, 1966. — 20 с.

2. Ариевич А. М., Степанищева 3. Г. О лептотрихозе миндалин // Вестник оториноларингологии. — 1964. № 5. — С.48-54.

3. Арустамов М. И. Къ морфологш и биологш Leptothricis // Врачъ: еженедельная газета / под ред. В. А. Манассеина. — СПб. : издание К. Л. Риккера. 1889. - Том X, №2. - С.21.

4. Арустамов М. И. Къ морфологш и биолопи Leptothricis // Врачъ: еженедельная газета / под ред. В. А. Манассеина. СПб. : издание К. Л. Риккера. - 1889. - Том X, №3. - С.63-65.

5. Арустамов М. И. Къ морфологш и биолопи Leptothricis // Врачъ: еженедельная газета / под ред. В. А. Манассеина. — СПб. : издание К. Л. Риккера. 1889. - Том X, №4. - С.96-99.

6. Абрамов В. Г. Колонизация полости рта и её влияние на лизоцим-антилизоцимные отношения в экосистеме при кариесе : автореф. дис. канд. мед. наук.- Волгоград, 2007.-23 с.

7. Ашмарин И. П., Воробьёв А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л. : Медгиз, 1962. - 180 с.

8. Боровский Е. В., В. К. Леонтьев В. К. Кариесорезистентность // Стоматология. 2002. - № 5. - С.26 -28.

9. Бухарин О. В., Усвяцов Б. Я. Бактерионосительство: медико-экологический аспект. — Екатеринбург: УрОРАН, 1996. — 206 с.

10. Бухарин О. В. Персистенция патогенных бактерий. — М. : Медицина; Екатеринбург: УрОРАН, 1999. 366 с.

11. Бухарин О. В. Персистенция бактериальных патогенов как результат отношений в системе паразит-хозяин // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1997.- № 4.-С. 3-9.

12. Бухарин О. В. Фотометрическое определение антилизоцимной активности микроорганизмов // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1997.- № 4.-С. 117-120.

13. Бухарин О. В., Брудастов Ю. А., Дерябин Д. Г. Изучение антикомплементарной активности стафилококков // Клин. лаб. диагностика. -1992.- № 11-12.- С. 68-72.

14. Бухарин О.В., Усвяцов Б. Я., Малышкин А. П. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.-1984.-№ 2.-С.27-29.

15. Гильмияров Э. М. Показатели гомеостаза полости рта у жителей экологически неблагополучных регионов : автореф. дис. канд. мед. наук. Уфа, 1997.-22 с.

16. Данилова-Перлей Л. Н. Лептотрихийный фарингомикоз, его своеобразие и патогенез : автореф. дис. канд. мед. наук. Л., 1970.-18 с.

17. Дифференциальная диагностика и лечение лептотрихиоза слизистой оболочки полости рта: метод, рекомендации / Е. В. Боровский, А. А. Чумаков, Л. Г. Миринова, А. Г. Рудакова. — М.: МГМСИ им. Н. А. Семашко, 1987. 6 с.

18. Ефименко М. В. Особенности иммунного статуса и иммуноэндокринных нарушений у детей и подростков среднего Приамурья : автореф. дис. .канд. мед. наук. -Хабаровск, 2002. — 22с.

19. Железникова Г.Ф. Типы иммунного ответа при острых инфекционных заболеваниях // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2003.- № 5 - С. 117-120.

20. Жуматов У. Ж. Влияние экологических факторов на иммунологические показатели полости рта у детей // Стоматология.-1996. №4.- С.ЗЗ -35.

21. Изучение микробиоценоза при хронических заболеваниях слизистой оболочки полости рта / В. В. Хазанова, И. М. Рабинович, Е. А. Земская и др. // Стоматология. 1996. - Т.75, № 2. - С.26

22. Кажлаева Т. С. Типирование микроорганизмов, выделенных при неосложненном кариесе зубов: автореф. дис. канд. мед. наук. -Ростов-на-Дону, 1999.— 25 с.

23. Кириллов С. В. Клинические особенности лептотрихоза и комплексная иммунокоррегирующая терапия // Вестн. профилактики ВИЧ/СПИД и сопутствующих заболеваний. Хабаровск, 1999. - №6. -С.21-23.

24. Климова Т. Н. Колонизация условно-патогенными бактериями различных биотопов полости рта пациентов, пользующихся съёмными пластинчатыми протезами из акриловых пластмасс: автореф. дис. канд. мед. наук. Волгоград, 2005. — 23 с.

25. Клиническая иммунология для врачей / В. П. Лесков, А. Н. Чередеев, Н. К. Горлина и др. М. : Медицина, 2005. - 144 с.

26. Козулин Е. А., Кириллов С. В. Лептотрихоз : практическое пособие. — Хабаровск : издательство ГОУ ВПО ДВГМУ, 2006. 24 с.

27. Кравцова Е. О. Колонизация микроорганизмами слизистой оболочки полости рта людей, проживающих в неблагоприятной экологической обстановке: автореф. дис. канд. мед. наук. Волгоград, 1995. — 22с.

28. Крамарь В. С., Крамарь В. О., Климова Т. Н. Колонизация стафилококков и факторы, способствующие персистенции их в полости рта людей, проживающих в г. Волгограде // Актуальные вопросы стоматологии: сборник статей. Волгоград, 2007. — С. 119-123.

29. Краткий определитель бактерий Берги / Дж. Хоулт, Н. Крит, П. Снит и др. Москва: Мир, 1980. - 496 с.

30. Кузьмина Э. М., Смирнова Т. А., Кузьмина И. Н. Основы индивидуальной гигиены полости рта. Методы и средства : учебное пособие. М.: Изд-во Московский гос. медико-стоматологич. университет, 2008.- 116 с.

31. Кунельская В. Я. Клиника и лечение лептотрихоза и кандидоза миндалин // Вестник оториноларингологии. — 1969. №5. — С.105-110.

32. Куркина О. Н. Колонизационная резистентность полости рта при аномалии зубов : автореф. дис. канд. мед. наук. Волгоград, 2003.-22 с.

33. Курякина Н. В. Стоматология детского возраста: учебник для вузов. — М. : МИА, 2007. 632 с.

34. Куторгин Г. Д. Динамика изменений ротовой жидкости при различной кариесогенной ситуации в полости рта : атореф. дис. канд. мед. наук. Новосибирск, 1998. - 26 с.

35. Лебедев К. А., Понякина И. Д. Иммунная недостаточность.-Н. Новгород: Изд-во НГМА, 2003. 443 с.

36. Леонтьев В. К., Петрович Ю. А., Круглова Л. Н. О характере воздействия некоторых химических веществ на активность микрофлоры зубного налета // Стоматология. 1997. - №3. - С.5 - 11.

37. Лукиных Л. М., Косюга С. Ю. Изменения количественного состава микробной флоры зубного налета при интенсификации гигиены полости рта // Стоматология. 1998. - №6. - С.7 - 8.

38. Мазницына Л. С. Гигиенические, экологические и социальные аспекты формирования стоматологического здоровья 15- 17 летних школьников : автореф. дис. канд. мед. наук. Волгоград, 2002.-23 с.

39. Мак-Дональд Р. Е., Эйвери Д. Р. Стоматология детей и подростков : перевод с англ. / под ред. Т. Ф. Виноградовой. М. : Мед. Информационное Агентство, 2003. - 765с.

40. Маянский А. Н. Лекции по иммунологии.- Н.Новгород : НГМА, 2005. -271 с.

41. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов / В. И. Бриллис, Т. А. Брилене, X. П. Ленцер и др. // Лабораторное дело. -1986. № 4.- С. 210-212.

42. Механизмы выживания бактерий / О. В. Бухарин, А. Л. Гинсбург, Ю. М. Романова и др. — М. : Медицина, 2005. — 367 с.

43. Микробиология, вирусология и иммунология : учебник для студентов медицинских вузов / под ред. В. Н. Царёва. — М. : Практическая медицина, 2009. — 581 с.

44. Микробиология и иммунология полости рта : метод, пособие / 3. Н. Кондрашева, В. Ф. Голиков, А. П. Козлов и др. Екатеринбург, 1996.- 60 с.

45. Микробный пейзаж полости рта у здоровых подростков и больных хроническим гастродуоденитом / О. А. Гаврилова, Ю. В. Червинец, В. М. Бондаренко и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии, иммунобиологии. 2008. - № 6. - С. 59-63.

46. Микрофлора полости рта: норма и патология: учебное пособие / Е. Г. Зеленова, М. И. Заславская, Е. В. Салина, С. П. Рассанов. — Н. Новгород: изд-во НГМА, 2004. 158 с.

47. Микрофлора ротовой полости у больных неспецифическим язвенным колитом и болезнью Крона / О. А. Кондракова, Е. А. Муляр, Е. А. Воропаева и др.// Журн. микробиологии, эпидемиологии, иммунобиологии. 2009. - № 1. - С. 71-76.

48. Модринская Ю. В. Прогнозирование кариеса зубов на основе определения кариесогенных микроорганизмов и буферной емкости слюны: автореф. дис. канд. мед. наук. Минск, 2002. - 20с.

49. Мотавкина Н. С., Бушуева Е. Н.Биоценоз условно-патогенных бактерий и возбудителей урогенитальных инфекций, передающихся половым путём в генезе гуморальных иммунодефицитов // Тихоокеанский медицинский журнал. 2006.- № 3. — С. 40-42.

50. Новый метод лечения лептотрихоза глотки / Н. Д. Челидзе, К. Н. Прозоровская, А. Н. Петровская, Е. Г. Завгородная // Вестник оториноларингологии. 2000. - № 5. —С.64-65.

51. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований : учебное пособие / под ред. А. С. Лабинской, Л. П. Блинковой, А. С. Ещиной. -М. : Медицина, 2004. 576 е.: ил.

52. Определитель бактерий Берджи : в 2-х т. / под. ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита. Москва: Мир, 1997. - 780 с.

53. Петри А., Сэбин К. Наглядная статистика в медицине : пер. с англ. -М. Мед : ГЭОТАР. 2003.- 144 с.

54. Петров Р. В., Хаитов Р. М. Оценка иммунного статуса человека при массовых обследованиях: метод, рекомендации для научных работников и врачей практического здравоохранения // Иммунология. 1993.-№1-С.51-62.

55. Пикуза О. И., Королева О. И., Шошина И. Г. Состояние бактерицидной системы оральных нейтрофилов и колонизационнойрезистентности полости рта при острых бронхитах у детей // Рос. педиатр, журнал. 2004. - № 5. - С.17-19.

56. Покровский В. И., Поздеев О. К. Медицинская микробиология. — М. : ГОЭТАР-МЕД, 1998. 1184с.

57. Политун А. М. Эпидемиология, особенности развития заболеваний пародонта и их профилактика в регионах, биогеохимических дефициту фтора и йоду : автореф. дис. д-ра мед. наук. Киев, 1996. -36 с.

58. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии / под ред. Л. С. Страчунского, Ю. Б. Белоусова, С. Н. Козлова. — Смоленск: МАКМАХ, 2007. 464 с.

59. Применение статистических методов в эпидемиологическом анализе / Е. Д. Савилов, Л. М. Мамонтова, В. А. Астафьев и др. М. : МЕД пресс-информ, 2004. - 112 с.

60. Руководство по статистике в медицине и биологии : Т.2. Прикладная статистика здоровья / В. А. Медик, М. С. Токмачёв, Б. Б. Фишман и др. М. : Медицина, 2001. - 352 с.

61. Садыкова Д. И. Колонизационная резистентность и состояние здоровья детей дошкольного возраста в условиях антропогенных влияний : автореф. дис. канд. мед. наук. Казань, 1998. — 23 с.

62. Сазыкин Ю. О. К 75-летию открытия лизоцима // Антибиотики и химиотерапия . 1997. - Т.42, № 5. - С.38-39.

63. Саморегуляция паразитарных систем / В. Д. Беляков, Д. Б. Голубев, Г. Д. Каминский и др.- М. : Медицина, 1987. — 59 с.

64. Смирнова В. С., Фрейдлин И. С. Иммунодефицитные состояния. -СПб.: Фолиант, 2000. 568 с.

65. Содержание иммуноглобулинов в слюне детей, проживающих в различных радиоэкологических условиях / Э. М. Мельниченко, А. Н. Кушнер, М. М. Зафранская и др. // Стоматология. 1999.- №2. -С.12-14.

66. Состояние проблемы инфекций, вызываемых неспорообразующими анаэробными бактериями / А. А. Воробьев, А. Ю. Миронов, Е. П. Пашков и др. // Вестник РАМН. 1996. - №2. - С.3-7.

67. Статистика в медицине и биологии : руководство. Т.1. Теоретическая статистика / В. А. Медик, М. С. Токмачев, Б. Б. Фишман и др. М. : Медицина, 2001.- 412 с.

68. Стоматологическая заболеваемость населения России : состояние твёрдых тканей зубов, распространённость зубо-челюстных аномалий, потребность в протезировании / под ред. Э. М. Кузьминой. М. : МГМСУ, 2009. - 236 с.

69. Стоматологическая профилактика у детей : руководство для врачей / В. Г. Сунцов, В. К. Леонтьев, В. А. Дистель и др. Омск, 2005.- 343 с.

70. Сторожук, П. Г. Определение активности лизоцима слюны / П. Г. Сторожук, И. В. Сафарова, В. В. Еричев и др. // Лабораторная диагностика. 2000. - № 6. - С. 13 - 15.

71. Терапевтическая стоматология : учебное пособие / под ред. Л.А. Дмитриевой. — М. : МЕД пресс-информ, 2003. 896 с.

72. Тец В. В. Роль микрофлоры человека в развитии заболеваний человека // Стоматология. — 2008. № 3.- С. 76-78.

73. Учайкин В. Ф. Решенные и нерешенные проблемы инфекционной патологии у детей // Педиатрия.- 2004. № 4.-С.7-11.

74. Ушаков Р. В., Царев В. Н. Этиология и этиотропная терапия неспецифических инфекций в стоматологии. — Иркутск, 1997.- 109 с.

75. Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Оценка иммунного статуса человека в норме и патологии // Иммунология. 2001. - № 4. - С.4-6.

76. Хасанова Е. Е. Риск развития грамположительной и грамотрицательной бактериолактии у матерей, вскармливающих грудных детей первого года жизни // Вестник педиатрич. фармакологии. — 2006. — Т. 3. № 6. — С.71-74.

77. Царёв В. Н., Дмитриева JI. А. Использование препарата микомакс при лептотрихозе и кандидозе полости рта // Стоматология. — 2003. №2. - С.63-64.

78. Цепов Л. М. Микрофлора полости рта и её роль в развитии воспалительных генерализованных заболеваний пародонта // Пародонтология. 2007. - № 4 (45). - С.3-12.

79. Черкасский Б. Л. Эпидемический процесс как социально-экологическая система-М., 1986.-С. 8-38.

80. Чуйкина О. В. Условно-патогенные микроорганизмы в микробиоценозе полости рта при дисбактериозе кишечника, их персистентные свойства : автореф. дис. канд. мед. наук. Волгоград, 2002.-23 с.

81. Ширинский В. С. Вторичные иммунодефициты — проблемы диагностики и лечения. Новосибирск: СО РАМН, 1997. - 111 с.

82. Яковлев А. А. Достижения отечественной эпидемиологии в 20 веке. Взгляд в будущее . — СПб., 2001.- 98 с.

83. Ященко С. В., Ярцев М. Н., Яковлева К. П. Иммунная недостаточность: клинико-лабораторная оценка иммунитета у детей // Иммунология . 2005. - №1. - С.36-44.

84. A 62-month retrospective epidemiological survey of anaerobic bacteremia in a university hospital / L. Blairon, Y. De Gheldre, B. Delaere et al. // Clin. Microbiol. Infect. 2006. - Vol.12. - P.527-532.

85. Acute appendicitis and Bacteroides fragilis / R. Pieper, L. Kager, A. A. Lindberg et al. // Scand. J. Infect. Dis. Suppl. 1979. - Vol.19. - P.92-97.

86. Anaerobic bacteremia in a cancer center / L. M. Noriega, P. Van der Auwera, M. Phan et al. // Support Care Cancer. 1993. - Vol.1. - P.250-255.

87. Aggregative behavior of bacteria isolated from canine dental plaque / David R. Elliott, Michael Wilson, Catherine M. F. Buckley, David A. Spratt //Appl. Environ. Microbiol. 2006. - Vol.72, №8. - P.5211-5217.

88. A molecular analysis of the bacteria present within oral squamous cell carcinoma / S J. Hooper, St-J. Crean, MJ. Fardy et al. // J. Med. Microbiol. 2007. - Vol.56. —P.1651-1659.

89. An anaerobic oral filamentous microorganism / S J. Hooper, E. Theilade, Marion N. Gilmour et al. // J. Bacteriol. -1961. Vol.81, № 4 -P.661-666.

90. Anonymous. Gram-negative, anaerobic, straight, curved, and helical bacteria : Bergey's manual of determinative bacteriology / J. G. Holt, N. R. Krieg, P. H. A. Sneath et al., eds. Baltimore, Md: Williams & Wilkins Co. - 1994. - P.291-334.

91. Bacterial diversity in aortic aneurysms determined by 16S ribosomal RNAgene analysis / R. Marques da Silva, D. A. Caugant, E. R. K. Eribe et al. //J. Vase. Surg. -2006. Vol.44. -P.1055-1060.

92. Bacterial profiles of root caries in elderly patients / D. Preza, I. Olsen, J0rn A. Aas et al. // J. Clin. Microbiol. 2008. - Vol.46, № 6. - P.2015-2021.

93. Bacteria of dental caries in primary and permanent teeth in children and young adults / Jörn A. Aas, Ann L. Griffen, Sara R. Dardis et al. // J. Clin. Microbiol. 2008. - Vol.46, № 4. - P. 1407-1417.

94. Bacterial vaginosis as a risk factor for preterm delivery: a meta-analysis / H. Leitich, B. Bodner-Adler, M. Brunbauer et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. -2003. Vol.189. - P. 139-147.

95. Bacteremia after tooth extractions studied with the aid of prereduced anaerobically sterilized culture media / J. J. Crawford, J. R. Sconyers, J. D. Moriarty et al. //West Appl. Microbiol. -1974. Vol.27, № 5. - P.927-932.

96. Bacteraemia with Leptotrichia buccalis: report of a case and review of the literature/ K.Vernelen, I. Mertens, J.Thomas et al. // Acta. Clin. Belg.-1996.-Vol.51.-P.265-270.

97. Bacteremia caused by a novel isolate resembling Leptotrichia species in a neutropenic patient / J. B. Patel, J. Clarridge, M. S. Schuster et al. // J. Clin. Microbiol. 1999. - Vol.37, № 6. -P.2064-2067.

98. Bacterial diversity in human subgingival plaque / B. J. Paster, S. K. Boches, J. L. Galvin et al. // J. Bacteriol.-2001.-Vol.183, №12. P.3770-3783.

99. H5.Bibby B. G., Berry G. P. A cultural study of filamentous bacteria obtained from the human mouth // J. Bacteriol. 1939. - Vol.38, №3. - P.263-274.

100. H6.Bloodstream infections due to anaerobic bacteria in cancer patients: epidemiology, etiology, risk factors, clinical presentation and outcome of anaerobic bacteremia / S. Spanik, J. Trupl, A. Kunova et al. // Neoplasma. 1996. - Vol.43. P.235—238.

101. H9.Capnophilic and anaerobic bacteria in a neutropenic patient: an oral source / F. Baquero, J. Fernandez, F. Dronda et al. // Rev. Infect. Dis. 1990. -Vol.12. - Suppl. 2. - P. 157-160.

102. Cavalier-Smith T. Rooting the tree of life by transition analyses // Biol. Direct. 2006. - Vol. 1. - P. 19.

103. Cavallaro J. J., Wiggs L. S., Miller J. M. Evaluation of the BBL Crystal anaerobe identification system // J. Clin. Microbiol. — 1997. — Vol.35, № 12.-P.3186-3191.

104. Characterization of vaginal microbial communities in adult healthy women using cultivation-independent methods / X. Zhou, S. J. Bent, M. G. Schneider et al. // Microbiology. 2004. - Vol. 150. - P.2565-2573.

105. Clarridge J. E. Impact of 16S rRNA gene sequence analysis for identification of bacteria on clinical microbiology and infectious diseases // HI Clin. Microbiol. Rev. 2004. - Vol.17, № 4. - P.840-862.

106. Clinical characteristics of bacterial vaginosis among women testing positive for fastidious bacteria / C. L. Haggerty, P. A. Totten, M. Ferris et al. // Sex. Transm. Infect. 2009. - Vol.85, № 4. - P.242-248.

107. Comparative bacteriology of juvenile periodontitis / W. E. Moore, L. V. Holdeman, E. P. Cato et al. // Infect. Immun. 1985. - Vol.48, №2. -P.507-519.

108. Comparison of oral and vaginal metronidazole for treatment of bacterial vaginosis in pregnancy: impact on fastidious bacteria / C. M. Mitchell, J. E. Hitti, K. J. Agnew et al. // BMC Infect. Dis. 2009. - Vol.9. - P.89-98.

109. Hase S., Hofstad T., Rietschel E. T. Chemical structure of the lipid A component of lipopolysaccharides from Fusobacterium nucleatum // J. Bacteriol. 1977. - Vol.129, №1. -P.9-14.

110. Kelley R. W., Kellogg S. T. Computer-assisted identification of anaerobic bacteria//Appl. Environ. Microbiol. 1978. - Vol.35, №3. -P.507-511.

111. Citron D. M., Murray P. R., Baron E. J. O. Algorithm for identification of anaerobic bacteria : Manual of clinical microbiology, 8th edn. -Washington, DC: ASM Press, 2003/ P.343-344.

112. Culture-independent identification of pathogenic bacteria and polymicrobial infections in the genitourinary tract of renal transplantrecipients / E. Domann, G. Hong, C. Imirzalioglu et al. // J. Clin. Microbiol. -2003. Vol.41. -P.5500-5510.

113. Defining the normal bacterial flora of the oral cavity / fern A. Aas, Bruce J. Paster, Lauren N. Stokes et al. //J. Clin. Microbiol. 2005. - Vol.43, № 11.-P.5721-5732.

114. Degradation of the human proteinase inhibitors alpha-1-antitrypsin and alpha-2-macroglobulin by Bacteroides gingivalis / J. Carlsson, B. F. Herrmann, J. F. Höfling et al. // Infect. Immun. 1984. - Vol.43, № 2. - P.644—648.

115. Detection of a fibroblast proliferation inhibitory factor from Capnocytophaga sputigena / R. H. Stevens, M. N. Sela, J. Shapira et al. // Infect. Immun. 1980. -Vol.27, № 1. -P.271-275.

116. Detection of novel organisms associated with salpingitis, by use of 16S rDNA polymerase chain reaction / J. K. Hebb, C. R. Cohen, S. G. Astete et al. // J. Infect. Dis. 2004. - Vol.190. -P.2109-2120.

117. Drasar B. S., Hill M. J. Human intestinal flora. London: Academic Press, 1974.-p. 263.

118. Duperval R., Beeland S., Marcoux J. A. Infective endocarditis due to Leptotrichia buccalis : a case report / // Can. Med. Assoc. J. — 1984. — Vol.130.-P.422-424.

119. Early microbial colonization of permucosal implants in edentulous patients / M. Nakou, F. H. M. Mikx, P. J. M. Oosterwaal et al. // J. Dent. Res.-1987.-Vol.66. -P.654-657.

120. Endocarditis caused by a Leptotrichia buccalis-Wke bacterium in a patient with a prosthetic aortic valve / R. Hammann, A. Iwand, J. Brachmann et al. //Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1993. - Vol.12. -P.280-282.

121. Mo.Eribe E. R. K., Hofstad T., Olsen I. Enzymatic/biochemical and cellular fatty acid analyses of Leptotrichia isolates // Microbiol. Ecol. Health Disease. 2002. - Vol.14. - P.137-148.

122. Eribe E. R. K., Olsen I. SDS-PAGE of whole-cell proteins and random amplified polymorphic DNA (RAPD) analyses of Leptotrichia isolates // Microbiol. Ecol. Health Disease. 2002. - Vol. 14. - P. 193-203.

123. Febrile neutropenia and Fusobacterium bacteremia: clinical experience with 13 cases / P. Fanourgiakis, M. Vekemans, A. Georgala et al. // Support Care Cancer. -2003. Vol. 11. -P.332-335.

124. Finegold S. M. / Anaerobic bacteria in human disease. — N. Y. : Academic Press, 1977.-p. 211.

125. Fredricks D. N., Schubert M. M., Myerson D. Molecular identification of an invasive gingival bacterial community // Clin. Infectious Diseases. — 2005.-Vol.41, № 1. — P.l-4.

126. Fusobacterium nucleatum: a rare cause of bacteremia in neutropenic patients with leukemia and lymphoma / A. Candoni, C. Fili, R. Trevisan et al. // Clinical Microbiology and Infection. -2003. Vol.9, №11. - P. 11121115.

127. Garrity G. M. The Proteobacteria. Part A : Bergey's manual of systematic bacteriology / ed. by G. M. Garrity. Berlin: Springer, 2005. - Introductory essays. - 2nd edp. - Vol.2. - P.219.

128. Genetic profiling of the oral microbiota associated with severe early-childhood caries / Y. Li, Y. Ge, D. Saxena et al. // J. Clin. Microbiol. -2007. Vol.45, № 1. -P.81-87.

129. Gilmour M. N., Hunter P. A. Isolation of an oral filamentous microorganism // J. Bacteriol. 1958. - Vol.76, № 3. - P.294-300.

130. Gingival crevice microbiota from Chinese patients with gingivitis or necrotizing ulcerative gingivitis / R. Gmur, C. Wyss, Y.Xue et al. // Eur. J. Oral. Sci. -2004. Vol.112. -P.33-41.

131. Goldstein E. J. Anaerobic bacteremia // Clin. Infect. Dis. 1996. —Vol.23. — suppl. 1. -P.97—101.

132. Goto M., Hitomi Sh., Ishii T. Bacterial arthritis caused by Leptotrichia amnionii II J. Clin. Microbiol. 2007. - Vol.45, № 6. - P.2082-2083.

133. Gundi V. A. K., Desbriere B. R., La Scola B. Leptotrichia amnionii and the female reproductive tract // Emerg. Infect. Dis. 2004. - Vol.10. -P.2056-2057.

134. Gupta H., Matlow A. Leptotrichia buccalis causing cellulitis and bacteremia in a neutropenic child: a case report // Clin. Microbiol. Newslett. 1998. - Vol.20. -P. 195-196.

135. Gustafson R. L., Kroeger A. V. Antigenic characteristics of leptotrichia buccalis (fusobacterium fusiforme) // J. Bacteriol. — 1962. — Vol.84, № 6. — P.1313-1320.

136. Harris K. A., Hartley J. C. Development of broad-range 16S rDNA PCR for use in the routine diagnostic clinical microbiology service // J. Med. Microbiol. 2003. - Vol.52. -P.685-691.

137. Harailton R. D., Zahler S. A. A study of Leptotrichia buccalis II J. Bacteriol. 1957. - Vol.73. - P.386-393.

138. Hardie J. M. Bowden G. H. The normal microbial flora of the mouth // The normal microbial flora of man / ed. by F. A. Skinner, J. G. Carr. -London: Academic Press, 1974. P.47-83.

139. Hillier S. L. The complexity of microbial diversity in bacterial vaginosis // N. Engl. J. Med. -2005.-Vol.353. -P.1886-1887.

140. Hirsh D. C., Biberstein E. L., Jang S. S. Obligate anaerobes in clinical veterinary practic II J. Clin. Microbiol. 1979. - Vol.10. - P. 188-191.

141. Hofstad T. Pathogenicity of anaerobic gram-negative rods: possible mechanisms I I Rev. Infect. Dis. 1984. - Vol.6. - P. 189-199.

142. Hofstad T. Fusobacterium and Leptotrichia II Topley and Wilson's microbiology and microbial infections / ed. by L. Collier, A. Balows, M. Sussman. 9th ed. - London: Arnold. United Kingdom, 1998. - Vol. 2. Systematic bacteriology. - P.1355-1364.

143. Hofstad T., Olsen I. Fusobacterium and Leptotrichia II Topley and Wilson's microbiology and microbial infections, bacteriology / ed. by Borrelier. 10th ed. - London: Arnold, 2005. - Vol. 2. - P. 1945-1956.

144. Hofstad T. Leptotrichia II Bergey's manual of systematic bacteriology / ed. by N. R. Krieg, J. G. Hold. Baltimore: Williams & Wilkins, 1984. -Vol. l.-P. 637-641.

145. Hofstad T. Serological properties of lipopolysaccharide from oral strains of Bacteroides melaninogenicus II J. Bacteriol. — 1969. —Vol.97, № 3. — P. 1078-1082.

146. In vitro susceptibilities of oral bacterial isolates to spiramycin / E. C. Chan, W. al-Joburi, S. L. Cheng et al. // Antimicrob. Agents Chemother. — 1989. Vol.33, № 11. — P.2016-2018.

147. Kilian M. Degradation of immunoglobulins Al, A2, and G by suspected principal periodontal pathogens // Infect. Immun. 1981. — Vol.34, № 3. — P.757—765.

148. Kitch T. T., Appelbaum P. C. Accuracy and reproducibility of the 4-hour ATB 32A method for anaerobe identification // J. Clin. Microbiol.- 1989. -Vol.27, №11. — P.2509-2513.

149. Lane D. J. 16S/23S rRNA sequencing // Nucleic acid techniques in bacterial systematics / ed. by E. Stackebraundt, M. Goodfellow. N. Y. : John Wiley & Sons Ltd., 1991. - P. 115-175.

150. Lemierre syndrome caused by Leptotrichia buccalis in a neutropenic patient / A. Hot, B. Coppere, A. Thiebault et al. // Int. J. Infect. Dis. -2007. November 1 Epub. ahead of print.

151. Leptotrichia amnionii, an emerging pathogen of the female urogenital tract / C. M. Thilesen, M. Nicolaidis, J. E. Lokebo et al. // J. Clin. Microbiol. -2007. Vol.45, № 7. - P.2344-2347.

152. Leptotrichia amnionii found in septic abortion in Denmark / M. Boennelycke, J. J. Christensen, M. Arpi et al. // Scand. J. Infect. Dis. — 2007. Vol.39. - P.382-383.

153. Leptotrichia buccalis bacteremia in neutropenic children / M. Reig, F. Baquero, M. Garcia-Campello et al. // J. Clin. Microbiol. — 1985. -Vol.22, № 2.-P.320-321.

154. Leptotrichia buccalis bacteremia in patients treated in a single bone marrow transplant unit / D. N. Schwartz, B. Schable, F. C. Tenover et al. // Clin. Infect. Dis. -1995. Vol.20. - P.762-767.

155. Leptotrichia buccalis bacteremia in patients with cancer: report of four cases and review / M. Weinberger, T. Wu, M. Rubin et al. // Rev. Infect. Dis. 1991. - Vol.13. -P.201-206.

156. Leptotrichia sanguinegens sp. nov., a new agent of postpartum and neonatal bacteremia / P. A. Hanff, J. Rosol-Donoghue, C. A. Spiegel et al. // Clin. Infect. Dis. 1995.-Vol.20. - Suppl. 2.-P.237-239.

157. Listgarten M. A., Lai C. H. Unusual cell wall ultrastructure of Leptotrichia buccalis II J. Bacteriol. 1975. - Vol.123.- P.747-749.

158. Loftin K. C., Brown L. R., Levy B. M.Comparison of the predominant cultivable microflora in the dental plaque of macaca mulatta (Rhesus) and macaca fascicularis (Cynomolgus) // J. Dent. Res. — 1980. — Vol.59. — P.1606-1612.

159. Lombardi D. P., Engleberg N. C. Anaerobic bacteremia: incidence, patient characteristics, and clinical significance // Am. J. Med. 1992. — Vol.92. — P.53-60.

160. Marcotte H., Lavoie M. C. Oral microbial ecology and the role of salivary immunoglobulin A // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. - Vol.62, № 1. — P.71-109.

161. Marsh P. D. Martin M. V. Oral microbiology. 3rd ed. - London: Chapman & Hall, 1992. - p. 190.

162. McCarthy, Ch.,. Snyder M. L Selective medium for fusobacteria and Leptotrichia II J. Bacteriol. 1963. - Vol.86, № 1. - P. 158-159.

163. McLellan P. G. Leptothricosis: pulmonary abscess and fatal pyemia // Ann. Surg. 1936. - Vol.103. -№ 3. -P.422-427.

164. Messiaen T., Lefebvre C., Geubel A. Hepatic abscess likely related to Leptotrichia buccalis in an immunocompetent patient // Liver. — 1996. — Vol.16.-P.342-343.

165. Microbial colonization of tumors in relation to the upper gastrointestinal tract in patients with gastric carcinoma / S. Sjöstedt, L. Kager, A. Heimdahl et al. //Ann. Surg. 1988. - Vol.207, № 3. -P.341-346.

166. Microbiological and serological investigations of oral lesions in Papillon-Lefevre syndrome / V. Clerehugh, D. B. Drucker, G. J. Seymour et al. // J. Clin. Pathol. 1996. - Vol.49, № 3. - P.255-257.

167. Microbiological findings in pregnant women with premature rupture of the membranes / G. Evaldson, G. Carlstrom, A. Lagrelius et al. // Med. Microbiol. Immunol. 1980. - Vol.168. - P. 283-297.

168. Microbial risk indicators of early childhood caries / P. M. Corby, J. LyonsWeiler, W. A. Bretz et al. // J. Clin. Microbiol. 2005. - Vol.43, №11.-P.5753—5759.

169. Molecular analysis of the bacterial microbiota in the human stomach / E. M. Bik, P. B. Eckburg, S. R. Gill et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. -2006. Vol.103, № 3. - P. 732-737.

170. Molecular analysis of bacterial species associated with childhood caries / M. R. Becker, B. J. Paster, E. J. Leys et al. // J. Clin. Microbiol. 2002. -Vol.40, № 3. - P. 1001-1009.

171. Molecular analysis of microbial diversity in advanced caries / Kim-Ly Chhour, A. M. Nadkarni, R. Byun et al. // J Clin Microbiol. 2005. -Vol.43, № 2. - P.843-849.

172. Molecular analysis of the microflora associated with dental caries / M. A. Munson, A. Banerjee, T. F. Watson et al. // J. Clin. Microbiol. — 2004. Vol.42, № 7. - P.3023-3029.

173. Molecular analysis of the subgingival microbiota in health and disease / Ruth G. Ledder, Peter Gilbert, Sharon A. Huws et al. // Appl. Environ Microbiol. 2007. - Vol.73, № 2. - P.516-523.

174. Moncla B. J., Braham P., Hillier S. L. Sialidase (neuraminidase) activity among gram-negative anaerobic and capnophilic bacteria // J. Clin. Microbiol. 1990. - Vol.28, № 3. - P.422-425.

175. Mycock G., Azadian B. S. Capnocytophaga ochracea: an unusual opportunistic pathogen // J. Clin. Pathol. 1985. - Vol.38, № 9. - P. 1081-1082.

176. National Committee for clinical laboratory standards. Methods for antimicrobial susceptibility testing of anaerobic bacteria. Approved standard Ml 1-A5. 5th edn. - Wayne, PA: NCCLS, 2001. - P.121

177. Ortiz E., Sande M. A. Routine use of anaerobic blood cultures: are they still indicated // Am. J. Med. 2000. - Vol.108. P.445-447.

178. Peripartum bacteremias due to Leptotrichia amnionii and Sneathia sanguinegens, rare causes of fever during and after delivery / S. J. De Martino, I. Mahoudeau, J. P. Brettes et al. // J. Clin. Microbiol. 2004. -Vol.42, № 12. - P.5940-5943.

179. Periurethral anaerobic microflora of healthy girls / I. Bollgren, G. Källenius, C. E. Nord et al. // J. Clin. Microbiol. 1979.- Vol.10. -P.419-424.

180. Purification and quantitative chemical analysis of cell wall peptidoglycans of Leptotrichia buccalis Text / H. Fukuhara, T. Umemoto, H. Sagawa et al. // Infect. Immun. 1983. - Vol.39, № 1. - P.132-136.

181. Possible role of the anaerobe in tonsillitis / S. Reilly, P. Timmis, A. G. Beeden et al. // J. Clin. Pathol. 1981. - Vol.34, № 5. - P.542-547.

182. Predominant microbiota associated with periodontal health in the aged / M. G. Newman, V. Grinenco, M. Weiner et al. // J. Periodontal. 1978. -Vol. 49. -P.553-559.

183. Prevalent bacterial species and novel phylotypes in advanced noma lesions /B.J. Paster, Jr. W. A. Falkler, C. O. Enwonwu et al. // J. Clin. Microbiol. 2002. -Vol.40. -P.2187-2191.

184. Rapid method that aids in distinguishing Gram-positive from Gramnegative anaerobic bacteria Text. / S. Halebian, B. Harris, S. M. Finegold [et al.] // J. Clin. Microbiol. 1981. - Vol.13, № 3. -P.444^48.

185. Reemergence of anaerobic bacteremia Text. / B. Lassmann, D. R. Gustafson, C. M. Wood [et al.] // Clin. Infect. Dis. 2007. - Vol.44, № 7. — P.895-900.

186. Risk factors for anaerobic bloodstream infections in bone marrow transplant recipients / R. L. Lark, S. A. McNeil, K. VanderHyde et al. // Clin. Infect. Dis. 2001. - Vol.33. -P.338-343.

187. Rolfe R. D., Finegold S. M. Comparative in vitro activity of new beta-lactam antibiotics against anaerobic bacteria // Antimicrob. Agents Chemother. 1981. - Vol.20, №5. - P.600-609.

188. Rosebury T. Microorganisms indigenous to man. New York: McGraw-Hill, 1962.-p. 435.

189. Rosenman J. R., Reynolds J. K., Kleiman M. B. Capnocytophaga canimorsus meningitis in a newborn: an avoidable infection // Pediatr. Infect. Dis. J. 2003. - Vol.22, № 2. - P.204-205.

190. Rosenblatt J. E., Gustafson D. R. Evaluation of the E-test for susceptibility testing of anaerobic bacteria // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. — 1995. — Vol.22. -P.279-284.

191. Russell C., Melville T. H. Bacteria in the human mouth // J. Appl. Bacterid. 1978. - Vol.44. - P. 163-181.

192. Saito T., Senda K., Takakura S. Anaerobic bacteremia: the yield of positive anaerobic blood cultures: patient characteristics and potential risk factors // Clin. Chem. Lab. Med. 2003. - Vol.41. - P.293-297.

193. Salonen J. H., Eerola E., Meurman O. Clinical significance and outcome of anaerobic bacteremia // Clin. Infect. Dis. 1998. - Vol.26. - P.1413-1417.

194. Septicemie a Leptotrichia buccalis chez un immunodeeprimee / J. L. Kohler, D. Raoult, H. Gallais et al. // Pathol. Biol. 1982. - Vol.30. -P.161-162.

195. Serious infection with Leptotrichia buccalis : report of a case and review of the literature / A. A. Morgenstein, D. M. Citron, B. Orisek et al. // Am. J. Med. 1980. - Vol.69, № 5. - P.782-785.

196. Severe pneumonia with Leptotrichia sp. detected predominantly in bronchoalveolar lavage fluid by use of 16S rRNA gene sequencing analysis / T. Kawanami, K. Fukuda, K. Yatera et al. // J. Clin. Microbiol. -2009. Vol.47, № 2. - P.496-498.

197. Stackebrandt E., Goebel B. M. Taxonomic note: a place for DNA-DNA reassociation and 16S rRNA sequence analysis in the present species definition in bacteriology // Int. J Syst. Bacterid. 1994. - Vol.44. -P.846-849.

198. Studies in the Nomenclature and Classification of the Bacteria: VIII. The Subgroups and Genera of the Actinomycetales / R. E. Buchanan et al. // J. Bacterid. 1918 July; 3(4): 403-406.

199. Targeted PCR for Detection of Vaginal Bacteria Associated with Bacterial Vaginosis / D. N. Fredricks, T. L. Fiedler, K. K. Thomas et al. // J. Clin. Microbiol. 2007. - Vol.45, № 10. - P.3270-3276.

200. The biological activity of Leptotrichia buccalis endotoxin / R. L. Gustafson, A. V. Kroeger, J. L. Gustafson et al. // Arch. Oral. Biol. -1966.-Vol.11.-P.l 149-1162.

201. The changing pattern of fusobacterium infections in humans: recent experience with fusobacterium bacteraemia / O. Epaulard, J. P. Brion, J. -P. Stahl et al. // Clin. Microbiol, and Infection. 2006. - Vol.12, № 2. -P.178-181.

202. The oral gram-negative anaerobic microflora in young children: longitudinal changes from edentulous to dentate mouth / E. Kônônen, S. Asikainen, M. Saarela et al. // Oral. Microbiol. Immunol.-1994.- Vol.9.-P.136-141.

203. The prevalence of Leptotrichia amnionii sp. nov. in pregnant women / A. Kwasniewska, R. Nawrot, M. Skoczynski et al. I I Ginekol. Pol. 2006. - Vol.77.-P.523-526.

204. The vaginal microflora in relation to gingivitis R. Persson, J. Hitti, R. Verhelst et al. // BMC Infect. Dis. 2009. - Vol.9, № 6. - p. 8.

205. Thompson J. Purification and some properties of phospho-beta-galactosidase from the Gram-negative oral bacterium Leptotrichia buccalis ATCC 14201 // FEMS Microbiology Letters. 2002. - Vol.214, № 2. -P.183-188.

206. Treister N. Sonis S. Mucositis: biology and management // Current Opinion in Otolaryngology & Head and Neck Surgery. -2007 — Vol.15 — Iss. 2.-P. 123-129.

207. Trevisan V. Prime linee d'introduzione alio studio dei Batteij italiani // Rend. Inst. Lomb. Sci. Lett. Ser. 2. 1879. - Vol.12. - P. 133-157.

208. Thyroid abscess due to a mixed anaerobic infection with fusobacterium mortiferum / Nikolaos P. Stavreas, Constantina D. Amanatidou, Emmanuel G. Hatzimanolis et al. //J. Clin. Microbiol. 2005. - Vol.43, № 12. -P.6202-6204.

209. Ulstrup A. K., Hartzen S. H. Leptotrichia buccalis: a rare cause of bacteraemia in non-neutropenic patients // Scand. J. Infect. Dis. — 2006. -Vol.38.-P. 712-716.

210. Uncultivated bacteria as etiologic agents of intra-amniotic inflammation leading to preterm birth / Yiping W. Han, Tao Shen, P. Chung et al. // J. Clin. Microbiol. 2009. - Vol.47, № 1. - P.38^17.

211. Use of chemotaxonomy as an aid to differentiate among Capnocytophaga species, CDC group DF-3, and aerotolerant strains of Leptotrichia buccalis

212. K. Bernard, C. Cooper, S. Tessier et al. // J. Clin. Microbiol. 1991. -Vol.29, № 10. - P.2263—2265.

213. Use of multiple-displacement amplification and checkerboard DNA-DNA hybridization to examine the microbiota of endodontic infections / L. C. N. Brito, F. R. Teles, R. P. Teles et al. // J. Clin. Microbiol. 2007. -Vol.45, № 9. - P.3039-3049.

214. Van de Peer, Y., De Wachte R. TREECON for Windows: a software package for the construction and drawing of evolutionaiy trees for the Microsoft Windows environment r // Comput. Appl. Biosci. 1994. -Vol.10.-P.569-570.

215. Van Houte J. Role of microorganisms in caries etiology // J. Dent. Res. -1994. Vol.73. - P.672-681.

216. Welch D. F. Applications of cellular fatty acid analysis // Clin. Microbiol. Rev. 1991. - Vol.4. -P.422-438.

217. Williams B. L., Pantalone R. M., Sherris J. C. Subgingival microflora and periodontitis // J. Peridontol. Res. 1976.-Vol.l 1. - P.l-18.

218. Wilson J. R., Limaye A. P. Risk factors for mortality in patients with anaerobic bacteremia // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. — 2004. -Vol.23.-P.310-316.

219. Список рационализаторских предложений

Информация о работе

Стрельникова, Наталья Викторовна
кандидата медицинских наук
Владивосток, 2010
ВАК 03.02.03

Диссертация

Микробиологические свойства потенциальных патогенов человека рода Leptotrichia - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно